CN114524825A - 牛尾蒿内酯a-t及其药物组合物和其制备方法与应用 - Google Patents
牛尾蒿内酯a-t及其药物组合物和其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114524825A CN114524825A CN202210213957.9A CN202210213957A CN114524825A CN 114524825 A CN114524825 A CN 114524825A CN 202210213957 A CN202210213957 A CN 202210213957A CN 114524825 A CN114524825 A CN 114524825A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- column chromatography
- gel column
- compounds
- semi
- preparative hplc
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 26
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 title description 13
- 235000012273 Artemisia sphaerocephala Nutrition 0.000 title description 10
- 241000584211 Artemisia sphaerocephala Species 0.000 title description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 97
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 28
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims abstract description 27
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 23
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract description 11
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 31
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 claims description 28
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 21
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 17
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 13
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 11
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 235000015784 Artemisia rupestris Nutrition 0.000 claims description 8
- 241001670235 Artemisia rupestris Species 0.000 claims description 8
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 8
- SKCNIGRBPJIUBQ-UHFFFAOYSA-N chloroform;ethyl acetate Chemical compound ClC(Cl)Cl.CCOC(C)=O SKCNIGRBPJIUBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 4
- 235000003092 Artemisia dracunculus Nutrition 0.000 claims 1
- 240000001851 Artemisia dracunculus Species 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 abstract description 22
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 19
- 101000600434 Homo sapiens Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Proteins 0.000 abstract description 9
- 102100037401 Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Human genes 0.000 abstract description 9
- 239000003560 cancer drug Substances 0.000 abstract description 9
- 229930003839 sesquiterpene dimer Natural products 0.000 abstract description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 125
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 59
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 21
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 20
- XILIYVSXLSWUAI-UHFFFAOYSA-N 2-(diethylamino)ethyl n'-phenylcarbamimidothioate;dihydrobromide Chemical compound Br.Br.CCN(CC)CCSC(N)=NC1=CC=CC=C1 XILIYVSXLSWUAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 238000002114 high-resolution electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 20
- 235000003261 Artemisia vulgaris Nutrition 0.000 description 16
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 16
- 235000003826 Artemisia Nutrition 0.000 description 15
- 244000030166 artemisia Species 0.000 description 15
- 235000009052 artemisia Nutrition 0.000 description 15
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 15
- MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N BAY-43-9006 Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=CC(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 MLDQJTXFUGDVEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000005511 L01XE05 - Sorafenib Substances 0.000 description 14
- 229960003787 sorafenib Drugs 0.000 description 14
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 12
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 8
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- IGRCWJPBLWGNPX-UHFFFAOYSA-N 3-(2-chlorophenyl)-n-(4-chlorophenyl)-n,5-dimethyl-1,2-oxazole-4-carboxamide Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1N(C)C(=O)C1=C(C)ON=C1C1=CC=CC=C1Cl IGRCWJPBLWGNPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 5
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 5
- 235000014290 Artemisia anomala Nutrition 0.000 description 4
- 241000123844 Artemisia anomala Species 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 4
- GLGNXYJARSMNGJ-VKTIVEEGSA-N (1s,2s,3r,4r)-3-[[5-chloro-2-[(1-ethyl-6-methoxy-2-oxo-4,5-dihydro-3h-1-benzazepin-7-yl)amino]pyrimidin-4-yl]amino]bicyclo[2.2.1]hept-5-ene-2-carboxamide Chemical compound CCN1C(=O)CCCC2=C(OC)C(NC=3N=C(C(=CN=3)Cl)N[C@H]3[C@H]([C@@]4([H])C[C@@]3(C=C4)[H])C(N)=O)=CC=C21 GLGNXYJARSMNGJ-VKTIVEEGSA-N 0.000 description 3
- QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[5-[(3aS,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-[1-bis(4-chlorophenoxy)phosphorylbutylamino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CCCC(NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCC1SC[C@@H]2NC(=O)N[C@H]12)C(C)C)P(=O)(Oc1ccc(Cl)cc1)Oc1ccc(Cl)cc1 QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N 0.000 description 3
- 241000208838 Asteraceae Species 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- LNUFLCYMSVYYNW-ZPJMAFJPSA-N [(2r,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[[(3s,5s,8r,9s,10s,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl]oxy]-4,5-disulfo Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1C[C@@H]2CC[C@H]3[C@@H]4CC[C@@H]([C@]4(CC[C@@H]3[C@@]2(C)CC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H]1O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]1OS(O)(=O)=O LNUFLCYMSVYYNW-ZPJMAFJPSA-N 0.000 description 3
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 229940125758 compound 15 Drugs 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000002138 L01XE21 - Regorafenib Substances 0.000 description 2
- 239000002176 L01XE26 - Cabozantinib Substances 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 229960001292 cabozantinib Drugs 0.000 description 2
- ONIQOQHATWINJY-UHFFFAOYSA-N cabozantinib Chemical compound C=12C=C(OC)C(OC)=CC2=NC=CC=1OC(C=C1)=CC=C1NC(=O)C1(C(=O)NC=2C=CC(F)=CC=2)CC1 ONIQOQHATWINJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 2
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000005034 decoration Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 2
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 2
- 229960002633 ramucirumab Drugs 0.000 description 2
- 229960004836 regorafenib Drugs 0.000 description 2
- FNHKPVJBJVTLMP-UHFFFAOYSA-N regorafenib Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=C(F)C(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 FNHKPVJBJVTLMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N tetramethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)C CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- XXDIJWSZFWZBRM-WSKGJZFTSA-N (3z,5e,9e,11z,17e,19e)-8,14,16-trihydroxy-24-methyl-1-oxacyclotetracosa-3,5,9,11,17,19-hexaen-2-one Chemical compound CC1CCC\C=C\C=C\C(O)CC(O)C\C=C/C=C/C(O)C\C=C\C=C/C(=O)O1 XXDIJWSZFWZBRM-WSKGJZFTSA-N 0.000 description 1
- 235000006570 Artemisia dubia Nutrition 0.000 description 1
- 241000269837 Artemisia dubia Species 0.000 description 1
- 240000006891 Artemisia vulgaris Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 208000015220 Febrile disease Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010068319 Oropharyngeal pain Diseases 0.000 description 1
- 201000007100 Pharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 230000003467 diminishing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002212 electronic circular dichroism spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- ROAYSRAUMPWBQX-UHFFFAOYSA-N ethanol;sulfuric acid Chemical compound CCO.OS(O)(=O)=O ROAYSRAUMPWBQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000005182 global health Effects 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 229960003784 lenvatinib Drugs 0.000 description 1
- WOSKHXYHFSIKNG-UHFFFAOYSA-N lenvatinib Chemical compound C=12C=C(C(N)=O)C(OC)=CC2=NC=CC=1OC(C=C1Cl)=CC=C1NC(=O)NC1CC1 WOSKHXYHFSIKNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 235000019633 pungent taste Nutrition 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/12—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains three hetero rings
- C07D493/20—Spiro-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
- C07D307/77—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D307/93—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with a ring other than six-membered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D493/10—Spiro-condensed systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
- C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
本发明提供结构式(I)所示20个倍半萜二聚体类化合物,牛尾蒿内酯A−T(artemidubolides A−T,1−20),及其制备方法和应用、其药物组合物及其应用,属于药物技术领域。该类化合物对人肝癌细胞株HepG2、Huh7和SK‑Hep‑1具有细胞毒活性,能够与可药用载体或赋型剂组成药物组合物,能够用于制备抗肝癌药物。
Description
技术领域:
本发明属于药物技术领域。具体地涉及化合物牛尾蒿内酯A-T(artemidubolidesA-T,1-20),及其制备方法和应用,含其的药物组合物及其应用。
背景技术:
肝癌是全球居第七的常见恶性肿瘤,大多数肝癌即肝细胞癌(HCC),HCC是一个全球性健康问题,其发病隐匿、进展快、预后差,从而导致死亡率高居全球所有癌症死亡率第三位。2018年全球肝癌新发人数超过84万,因肝癌导致的死亡人数约为78万。其中,约一半的肝癌新发病例发生在我国,四分之三的HCC归因于慢性HBV和HCV感染。目前,临床上用于治疗肝癌患者的药物有七个:索拉非尼(sorafenib)、瑞格菲尼(regorafenib)、乐伐替尼(lenvatinib)、卡博替尼(cabozantinib)、纳武单抗(nivolumab)、帕姆单抗(pembrolizumab)、雷莫卢单抗(ramucirumab),但易产生耐药性和毒副作用。因此,迫切需要开发新型有效抗肝癌药物。
蒿属(Artemisia L.)隶属于菊科(Asteraceae)春黄菊族(Anthemideae L.),是菊科中分布最广、种类最多的一个属。蒿属为一、二年生或多年生草本植物,半灌木或小灌木,全世界共380余种,广布于非洲地区和北半球,我国有186种(其中82个特有种),44变种,遍布于全国各地,在温热带地区分布最多。该属植物多具有清热解毒、抗菌消炎、祛风除湿、通经活络、活血和止血等功效,如青蒿、茵陈蒿、艾、牡蒿、奇蒿等,为常用药材。
牛尾蒿(Artemisia dubia)为菊科蒿属多年生草本植物,为中国特有种。生于低海拔至3500米地区的山坡、草原、疏林及林缘等地。分布于内蒙古、甘肃、四川、云南、西藏等地。味苦、微辛,性凉。清热,凉血,解毒,杀虫。主治急性热病,肺热咳嗽,咽喉肿痛,鼻蛆,血风疮,烧虫病。
在本发明的前期工作中,发现牛尾蒿干燥地上部分的乙醇提取物对三株肝癌细胞(HepG 2,Huh7,SK-Hep-1)具有较强的细胞毒活性,进一步从中分离得到20个对三株肝癌细胞株具有细胞毒活性的倍半萜二聚体类化合物,牛尾蒿内酯A-T(artemidubolides A-T,1-20)。迄今,现有技术中无牛尾蒿内酯A-T(artemidubolides A-T,1-20)的报道,也没有其作为有效成分的药物组合物的报道,也没有其药物组合物在制备或治疗肝癌药物中的应用报道。
发明内容:
本发明的目的在于提供一类新的具有药用价值的式(I)所示的牛尾蒿内酯A-T(artemidubolides A-T,1-20),及其制备方法和应用,含牛尾蒿内酯A-T的药物组合物及其应用,该类化合物对肝癌细胞株具有明显的细胞毒活性,能够用于制备抗肝癌药物。
为了实现本发明的上述目的,本发明提供了如下的技术方案:
本发明提供了一系列倍半萜二聚体类化合物,牛尾蒿内酯A-T(artemidubolidesA-T,1-20),具有如下式(I)所示结构:
本发明提供了上述化合物牛尾蒿内酯A-T(artemidubolides A-T,1-20)的制备方法,取牛尾蒿干燥地上部分粉碎,用10倍量的90%乙醇冷浸提取两次,合并乙醇提取液并减压浓缩至无醇味,得到乙醇提取物,随后用乙酸乙酯萃取3次,得到乙酸乙酯萃取部分,乙酸乙酯萃取部分经硅胶柱层析,用丙酮-石油醚以v/v计,2:98,5:95,10:90,20:80,30:70,50:50进行梯度洗脱得到7个流分Fr.AD-1~Fr.AD-7;Fr.AD-4经经中压MCI CHP 20P柱层析,用水-甲醇70:30,50:50,30:70,10:90梯度洗脱,得到4个组分Fr.AD-4-1-Fr.AD-4-4.Fr.AD-4-3经硅胶柱层析,乙酸乙酯-氯仿5:95至25:75梯度洗脱得到3个流分Fr.AD-4-3-1~Fr.AD-4-3-3;Fr.AD-4-3-1经Sephadex LH-20凝胶柱层析和半制备HPLC,得到化合物1和2;Fr.AD-4-3-2经Sephadex LH-20和半制备HPLC,得到化合物3和6;Fr.AD-4-3-3经SephadexLH-20凝胶柱层析和半制备HPLC纯化,得到化合物4,5,7和8;
Fr.AD-5经经中压C18柱层析,用水-甲醇50:50,30:70,10:90梯度洗脱,得到3个组分Fr.AD-5-1-Fr.AD-5-3.Fr.AD-5-1经硅胶柱层析,丙酮-石油醚10:90至30:70洗脱得到4个流分Fr.AD-5-1-1~Fr.AD-5-1-4;Fr.AD-5-1-1经硅胶柱层析得到化合物9和11;Fr.AD-5-1-2经Sephadex LH-20凝胶柱层析和半制备HPLC纯化,得到化合物10,12,和14;Fr.AD-5-1-3经Sephadex LH-20凝胶柱层析和半制备HPLC,得到化合物13,15,和18;Fr.AD-5-1-4经硅胶柱层析和半制备HPLC纯化,得到化合物16和17;Fr.AD-5-2经Sephadex LH-20凝胶柱层析和半制备HPLC纯化,得到化合物19和20。
本发明提供了上述化合物1-20在制备抗肝癌药物中的应用。本发明对所述应用的方法没有特殊的限定,选用本领域熟知的方法即可。
本发明同时还提供了一种药物组合物,所述药物组合物包括上述的式(I)化合物牛尾蒿内酯A-T(artemidubolides A-T,1-20)的至少一种和药学上可接受的载体或赋型剂。并提供了该药物组合物的制备方法。该方法按上述制备牛尾蒿内酯A-T(artemidubolides A-T,1-20)的方法,先制得化合物1-20,再加入可药用载体或赋形剂。
并此,还提供了所述的药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用。
当所述化合物牛尾蒿内酯A-T(artemidubolides A-T,1-20)中的至少一种用于制备抗肝癌药物时,本发明优选将所述化合物1-20直接使用,或以药物组合物的形式使用。
本发明提供的药物组合物,包括上述化合物牛尾蒿内酯A-T(artemidubolides A-T,1-20)中的至少一种和药学上可接受的载体或赋型剂。在本发明中,所述药学上可接受的载体或赋型剂优选为固体、半固体或液体稀释剂,填料以及药物制品辅剂。本发明对所述药学上可接受的载体或赋型剂没有特殊的限定,选用本领域熟知的、对人和动物无毒且惰性的药学上可接受的载体和/或赋型剂即可。
本发明对所述药物组合物的制备方法没有特殊的限定,直接将化合物牛尾蒿内酯A-T(artemidubolides A-T,1-20)中的至少一种与药学上可接受的载体或赋型剂混合即可,本发明对所述混合的过程没有特殊的限定,选用本领域熟知的过程能够得到药物组合物即可。
本发明提供了上述技术方案所述药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用。本发明对所述应用的方法没有特殊的限定,选用本领域熟知的方法即可。
在本发明中,当所述药物组合物用于制备抗肝癌药物时,所述组合物在药物中的含量优选为0.1~99%;在所述药物组合物中,所述化合物牛尾蒿内酯A-T(artemidubolides A-T,1-20)中的至少一种在药物组合物中的含量优选为0.5~90%。本发明的药物组合物优选以单位体重服用量的形式使用。在本发明中,所制备的药物优选可经注射(静注、肌注)和口服两种形式给药。
与现有技术相比,本发明具备如下的优益性:
1.本发明提供了一系列新的倍半萜二聚体类化合物,牛尾蒿内酯A-T(artemidubolides A-T,1-20)。填补了现有技术的空白。
2.本发明提供了制备新化合物1-20的新的方法,该方法原料易得,工艺简单,易于操作。
3.本发明提供了新化合物1-20作为有效成分的药物组合物,为新的抗肝癌药物提供了具有较好药用作用的新的药物。
4.本发明的新化合物1-20对三株肝癌细胞(HepG2,SK-HEP-1和Huh7)的细胞毒活性均具有较强活性,对于HepG2细胞,化合物2,4,5,13,16和17具有较强的细胞毒活性其IC50值分别为5.4,5.7,14.5,14.5,9.7和13.7μM,较阳性药物索拉非尼更优;化合物3和6-8亦表现出一定的细胞毒活性,其IC50值分别为14.9,14.8,19.4和14.9μM,与阳性药物索拉非尼相当。对于Huh7细胞,化合物2,4,11和13具有较强的细胞毒活性,其IC50值分别为8.2,4.3,13.1和12.2μM,与阳性药物索拉非尼相当。对于SK-Hep-1细胞,化合物2,3,4,和5具有较强的细胞毒活性,其IC50值分别为13.4,17.2,8.4,和13.6μM,优于阳性药物索拉非尼。
5.牛尾蒿中分离得到的新化合物倍半萜二聚体牛尾蒿内酯A-T(化合物1-20)可作为药物用于治疗肝癌相关的疾病。
附图说明:
图1为本发明化合物牛尾蒿内酯A-T(artemidubolides A-T,1-20)的结构式示意图;
图2为本发明化合物1的X-单晶衍射结构示意图;
图3化合物2的X-单晶衍射结构示意图;
图4化合物4的X-单晶衍射结构示意图;
图5化合物6的X-单晶衍射结构示意图;
图6化合物11的X-单晶衍射结构示意图;
图7化合物15的X-单晶衍射结构示意图;
图8化合物18的X-单晶衍射结构示意图。
具体实施方式:
为了更好地理解本发明的实质,下面结合附图,用本发明的试验例和实施例来进一步说明本发明倍半萜二聚体类化合物,牛尾蒿内酯A-T(artemidubolides A-T,1-20)及其制备方法、结构鉴定、药理作用,但不以此试验例和实施例来限定本发明。
下面将结合本发明中的实施例,对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然,所描述的实施例仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1:
牛尾蒿内酯A-T(artemidubolides A-T)即化合物1-20的制备:
取牛尾蒿干燥地上部分粉碎,用10倍量的90%乙醇冷浸提取两次,合并乙醇提取液并减压浓缩至无醇味,得到乙醇提取物,将提取物分散于水中,用乙酸乙酯萃取3次,得到乙酸乙酯萃取部分,乙酸乙酯萃取部分经硅胶柱层析,用丙酮-石油醚(2:98,5:95,10:90,20:80,30:70,50:50v/v)以及丙酮进行梯度洗脱得到7个流分Fr.AD-1~Fr.AD-7;Fr.AD-4经经中压MCI CHP 20P柱层析,用水-甲醇(70:30,50:50,30:70,10:90)梯度洗脱,得到4个组分Fr.AD-4-1-Fr.AD-4-4.Fr.AD-4-3经硅胶柱层析(乙酸乙酯-氯仿,5:95至25:75)得到3个流分Fr.AD-4-3-1~Fr.AD-4-3-3;Fr.AD-4-3-1经Sephadex LH-20凝胶柱层析(甲醇-氯仿,50:50)和半制备HPLC(水-乙腈,55:45)纯化,得到化合物1和2;Fr.AD-4-3-2经SephadexLH-20凝胶柱层析(甲醇-氯仿,50:50)和半制备HPLC(水-乙腈,35:65)纯化,得到化合物3和6;Fr.AD-4-3-3经Sephadex LH-20凝胶柱层析(甲醇-氯仿,50:50)和半制备HPLC纯化,得到化合物4,5,7和8。
Fr.AD-5经经中压C18柱层析,用水-甲醇(50:50,30:70,10:90)梯度洗脱,得到3个组分Fr.AD-5-1-Fr.AD-5-3.Fr.AD-5-1经硅胶柱层析(丙酮-石油醚,10:90至30:70)得到4个流分Fr.AD-5-1-1~Fr.AD-5-1-4;Fr.AD-5-1-1经硅胶柱层析(乙酸乙酯-氯仿,10:90至20:80)得到化合物9和11。Fr.AD-5-1-2经Sephadex LH-20凝胶柱层析(甲醇-氯仿,50:50)和半制备HPLC纯化,得到化合物10,12,和14。Fr.AD-5-1-3经Sephadex LH-20凝胶柱层析(甲醇-氯仿,50:50)和半制备HPLC(水-甲醇,40:60)纯化,得到化合物13,15,和18。Fr.AD-5-1-4经硅胶柱层析(乙酸乙酯-氯仿,25:75)和半制备HPLC(水-甲醇,45:55)纯化,得到化合物16和17。Fr.AD-5-2经Sephadex LH-20凝胶柱层析(甲醇-氯仿,50:50)和半制备HPLC(水-乙腈,50:50)纯化,得到化合物19和20。
化合物1-20的结构数据:
核磁共振图谱使用Avance III 600(Bruker,Switzerland)或AvanceIII HD 400(Bruker,Bremerhaven,Germany)超导核磁共振仪测定,TMS(四甲基硅烷)作为内标。高分辨质谱分析采用岛津LC-MS-IT-TOF(Shimadzu,Kyoto,Japan)测定。红外光谱(IR)经KBr压片方法,通过NICOLET iS10型红外光谱仪(Thermo Fisher Scientific,Madison,USA)测定。ECD谱采用Chirascan型仪器(Applied Photophysics,Surrey,UK)测定。旋光经Autopol VI旋光仪(Rudolph Research Analytical,Hackettstown,USA)测定。熔点用X-4B显微熔点仪来测定,该熔点仪购自上海精密科学仪器有限公司。薄层层析硅胶板HSGF254是烟台江友硅胶开发有限公司产品;柱层析硅胶(200~300目)为临沂市海祥化工有限公司生产;柱层析葡聚糖凝胶LH-20购自GE Healthcare Bio-Sciences AB公司。高效液相色谱仪为岛津公司生产,控制器型号是CBM-20A,泵型号是LC-20AR,检测器型号为SPD-M20A,柱温箱型号为AT-350,使用的色谱柱型号为Agilent-Eclipse XDB-C20(5μm,9.4×250mm)。色谱纯乙腈购自迈瑞达公司,去离子通道水通过MingCheTM-D 24UV MerkMillipore系统纯化而得。中压液相(Dr Flash-Ⅱ)为上海利穗公司产品,MCI柱日本三菱公司,型号为CHP-20P(75~150μm)。分析纯甲醇和乙腈购自天津大茂化学试剂厂。显色剂为10%H2SO4-EtOH溶液。
牛尾蒿内酯A(artemidubolide A,1)
分子式:C30H36O6
分子量:492.23
性状:斜方晶体
熔点:239~240℃
HRESIMS(+)m/z:实验值515.2396[M+Na]+,计算值515.2404[M+Na]+。
IR(KBr)νmax:3498,1762,1723,1666,1376,1254,1222,1074cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):200(–9.80),218(+10.91)nm。
晶体数据:C30H36O6,M=492.59,α=90°,β=122.6550(10)°,γ=90°,T=100.(2)K,晶体尺寸C121,Z=4,μ(Cu Kα)=0.734mm-1,晶体数据采用D8 QUEST型晶体衍射仪(铜靶)进行测定,总衍射次数为24126,观测到4852次(Rint=0.0321),I>2σ(I),wR(F2)=0.0725(I>2σ(I)),R1=0.0273,wR(F2)=0.0726,F2=1.098.Flack parameter=-0.08(3).化合物1的晶体参数已存入剑桥晶体数据中心,提取号:CCDC 2142229。网址:https://www.ccdc.cam.ac.uk。晶体结构示意图见图3。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和4。
牛尾蒿内酯B(artemidubolide B,2)
分子式:C30H36O6
分子量:492
性状:斜方晶体
HRESIMS(+)m/z:实验值515.2404[M+Na]+,计算值515.2404[M+Na]+。
IRνmax:3446,1769,1752,1665,1378,1254,1211,1078cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):201(–19.76),217(+16.55)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和4。
晶体数据:C30H36O6,M=492.59,α=90°,β=90°,γ=90°,T=100.(2)K,晶体尺寸P212121,Z=4,μ(Cu Kα)=0.733mm-1,晶体数据采用D8 QUEST型晶体衍射仪(铜靶)进行测定,总衍射次数为57961,观测到4897次(Rint=0.0272),I>2σ(I),wR(F2)=0.0707(I>2σ(I)),R1=0.0274,wR(F2)=0.0709,F2=1.098.Flack parameter=0.07(3).化合物2的晶体参数已存入剑桥晶体数据中心,提取号:CCDC 2142230.
牛尾蒿内酯C(artemidubolide C,3)
分子式:C30H36O6
分子量:492.38
性状:白色无定型粉末
HRESIMS(+)m/z:实验值493.2591[M+H]+,计算值493.2585[M+H]+。
IR(KBr)νmax:3450,1765,1632,1448,1382,1229,1150,1059cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):212(+11.83)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和4。
牛尾蒿内酯D(artemidubolide D,4)
分子式:C30H36O6
分子量:492.35
性状:斜方晶体
HRESIMS(+)m/z:实验值493.2566[M+H]+,计算值493.2585[M+H]+。
IR(KBr)νmax:3448,1770,1732,1660,1448,1380,1256,1115,1007cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):217(18.27)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和4。
晶体数据:C30H36O6,M=492.59,α=90°,β=90°,γ=90°,T=100.(2)K,晶体尺寸P212121,Z=4,μ(Cu Kα)=0.733mm-1,晶体数据采用D8 QUEST型晶体衍射仪(铜靶)进行测定,总衍射次数为57961,观测到4897次(Rint=0.0514),I>2σ(I),wR(F2)=0.0272(I>2σ(I)),R1=0.0274,wR(F2)=0.0707,F2=1.098.Flack parameter=0.07(3).化合物4的晶体参数已存入剑桥晶体数据中心,提取号:CCDC 2142231.晶体结构示意图见图4.
牛尾蒿内酯E(artemidubolide E,5)
分子式:C30H36O6
分子量:492.87
性状:白色无定型粉末
HRESIMS(+)m/z:实验值493.2581[M+H]+,计算值493.2585[M+H]+。
IRνmax:3448,1770,1732,1660,1448,1380,1256,1115,1007cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):217(18.27)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和4。
牛尾蒿内酯F(artemidubolide F,6)
分子式:C30H38O6
分子量:494.26
性状:斜方晶体
HRESIMS(+)m/z:实验值495.2751[M+H]+,计算值495.2741[M+H]+。
IRνmax:3469,1780,1732,1635,1448,1305,1292,1200,1078cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):217(+11.85)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和4。
晶体数据:C30H38O6·H2O,M=512.62,α=90°,β=90°,γ=90°,T=100.(2)K,晶体尺寸P212121,Z=4,μ(CuKα)=0.745mm-1,晶体数据采用D8 QUEST型晶体衍射仪(铜靶)进行测定,总衍射次数为46609,观测到4962次(Rint=0.0582),I>2σ(I),wR(F2)=0.0495(I>2σ(I)),R1=0.0509,wR(F2)=0.1386,F2=1.061.Flack parameter=0.00(5).化合物6的晶体参数已存入剑桥晶体数据中心,提取号:CCDC 2142234.化合物6的X-单晶衍射结构见图5.
牛尾蒿内酯G(artemidubolide G,7)
分子式:C30H36O6
分子量:492.17
性状:白色无定型粉末
HRESIMS(+)m/z:实验值493.2568[M+H]+,计算值493.2585[M+H]+。
IR(KBr)νmax:3486,1755,1638,1451,1384,1223,1078cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε)201(–7.92),216(+12.25)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和4。
牛尾蒿内酯H(artemidubolideH,8)
分子式:C30H38O7
分子量:510.19
性状:白色无定型粉末
HRESIMS(–)m/z:实验值555.2599[M+HCOO]–,计算值555.2600[M+HCOO]–。
IRνmax:3542,1762,1665,1389,1313,1141,1109cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):204(+12.46),222(+16.49)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和4。
牛尾蒿内酯I(artemidubolide I,9)
分子式:C30H38O7
分子量:510.76
性状:白色无定型粉末
HRESIMS(–)m/z:实验值555.2548[M+HCOO]–,计算值555.2600[M+HCOO]–。
IRνmax:3433,1757,1635,1444,1384,1256,1152cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):216(+14.37)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和4。
牛尾蒿内酯J(artemidubolide J,10)
分子式:C31H36O6
分子量:504.62
性状:白色无定型粉末
HRESIMS(+)m/z:实验值505.2573[M+H]+,计算值505.2585[M+H]+。
IRνmax:1770,1687,1618,1444,1259,1146,1013cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):197(+7.78),263(–18.27)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和4。
牛尾蒿内酯K(artemidubolide K,11)
分子式:C30H36O6
分子量:492.45
性状:斜方晶体
HRESIMS(+)m/z:实验值493.2571[M+H]+,计算值493.2585[M+H]+。
IR(KBr)νmax:3459,1766,1744,1626,1458,1257,1132,1019cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):198(+9.89)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和5。
晶体数据:C30H36O6·CH4O,M=524.63,α=90°,β=112.6240(10)°,γ=90°,T=100.(2)K,晶体尺寸P212121,Z=4,μ(Cu Kα)=0.752mm-1,晶体数据采用D8 QUEST型晶体衍射仪(铜靶)进行测定,总衍射次数为32139,观测到4927次(Rint=0.0323),I>2σ(I),wR(F2)=0.0649(I>2σ(I)),R1=0.0263,wR(F2)=0.0649,F2=1.061.Flack parameter=0.00(5).化合物11的晶体参数已存入剑桥晶体数据中心,提取号:CCDC 2142234.化合物11的X-单晶衍射结构见图6.
牛尾蒿内酯L(artemidubolide L,12)
分子式:C30H36O6
分子量:492.34
性状:白色无定型粉末
HRESIMS(–)m/z:实验值537.2475[M+HCOO]–,计算值537.2494[M+HCOO]–。
IR(KBr)νmax:3501,1766,1638,1321,1264,1232,1152cm-1。
ECD(甲醇)λmax 226(–3.78)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和5。
牛尾蒿内酯M(artemidubolide M,13)
分子式:C30H36O6
分子量:492.76
性状:白色无定型粉末
HRESIMS(+)m/z:实验值493.2591[M+H]+,计算值493.2585[M+H]+。
IR(KBr)νmax:3459,1759,1665,1320,1266,1246,1196cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):212(–13.09)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和5。
牛尾蒿内酯N(artemidubolide N,14)
分子式:C30H38O7
分子量:510.31
性状:白色无定型粉末
HRESIMS(+)m/z:实验值493.2591[M+H]+,计算值493.2585[M+H]+。
IR(KBr)νmax:3459,1759,1665,1320,1266,1246,1196cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):212(–13.09)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和5。
牛尾蒿内酯O(artemidubolide O,15)
分子式:C30H34O6
分子量:490.23
性状:斜方晶体
熔点:195~196℃
HRESIMS(+)m/z:实验值491.2436[M+H]+,计算值491.2428[M+H]+。
IR(KBr)νmax:3487,1774,1683,1320,1264,1238,1200cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):217(–5.92),243(+2.43),272(–2.06)nm。
晶体数据:3(C30H34O6)·CH4O,M=1503.75, α=90°,β=90°,γ=90°,T=100.(2)K,晶体尺寸P212121,Z=4,μ(CuKα)=0.752mm-1,晶体数据采用D8 QUEST型晶体衍射仪(铜靶)进行测定,总衍射次数为92865,观测到15494次(Rint=0.0511),I>2σ(I),wR(F2)=0.0830(I>2σ(I)),R1=0.0325,wR(F2)=0.0830,F2=1.011.Flack parameter=0.00(3).化合物15的晶体参数已存入剑桥晶体数据中心,提取号:CCDC 2142236.化合物15的X-单晶衍射结构示意图见图7.
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表3和5。
牛尾蒿内酯P(artemidubolide P,16)
分子式:C30H34O6
分子量:490.34
性状:白色无定型粉末
HRESIMS(+)m/z:实验值491.2410[M+H]+,计算值491.2428[M+H]+。
IR(KBr)νmax:3477,1762,1634,1405,1232,1068cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):212(–15.89)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表3和5。
牛尾蒿内酯Q(artemidubolide Q,17)
分子式:C30H34O6
分子量:490.22
性状:白色无定型粉末
HRESIMS(+)m/z:实验值491.2410[M+H]+,计算值491.2428[M+H]+。
IR(KBr)νmax:33477,1762,1634,1405,1232,1068cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):212(–15.89)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表3和5。
牛尾蒿内酯R(artemidubolide R 18)
分子式:C30H44O8
分子量:532.67
性状:斜方晶体
熔点:195~196℃
HRESIMS(–)m/z:实验值577.3024[M+HCOO]–,计算值577.3018[M+HCOO]–。
IR(KBr)νmax:3461,1760,1702,1631,1223,1153cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):210(–32.78)nm。
晶体数据:2(C30H44O8)·H2O,M=1083.31, α=90°,β=114.315(2)°,γ=90°,T=100.(2)K,晶体尺寸P212121,Z=4,μ(Cu Kα)=0.752mm-1,晶体数据采用D8 QUEST型晶体衍射仪(铜靶)进行测定,总衍射次数为25339,观测到5513次(Rint=0.0667),I>2σ(I),wR(F2)=0.0979(I>2σ(I)),R1=0.0388,wR(F2)=0.1043,F2=1.075.Flack parameter=0.03(8).化合物18的晶体参数已存入剑桥晶体数据中心,提取号:CCDC 2142233.化合物18的X-单晶衍射结构示意图见图8.
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表3和5。
牛尾蒿内酯S(artemidubolide S,19)
分子式:C30H40O8
分子量:528.21
性状:白色无定型粉末
HRESIMS(+)m/z:实验值551.2624[M+Na]+,计算值551.2615[M+Na]+。
IR(KBr)νmax:3427,1757,1711,1669,1625,1382,1258,1156cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):205(–5.51)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表3和5。
牛尾蒿内酯T(artemidubolide T,20)
分子式:C30H40O8
分子量:528.10
性状:白色无定型粉末
HRESIMS(+)m/z:实验值551.2616[M+Na]+,计算值551.2615[M+Na]+。
IR(KBr)νmax:3429,1760,1710,1639,1378,1262,1041cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):209(–12.12)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表3和5。
实施例2:
化合物1-20对三株肝癌细胞株的细胞毒活性。
1.材料和方法
1.1材料
HepG2细胞株由中国科学院昆明植物研究所活性筛选中心赠予,SK-Hep-1和Huh7细胞株购自上海纪宁生物科技有限公司;培养基(Dulbecco's Modified Eagle Medium,DMEM)购自Thermo Fisher Scientific(苏州,中国);血清(fetal bovine serum,FBS)购自Life Technologies(NY,USA);RPMI-1640购自ThermoFisher Biochemical Products(北京,中国)。
1.2仪器
Flex Station 3台式多功能酶标仪(Bio-RAD 680,美国);分析天平(AG135,Metler Toledo,中国);恒温箱(DHP-9082,上海)。
1.3实验过程
1).取对数期生长的肝癌细胞,弃去旧培养基,用PBS清洗两遍,弃去PBS;
2).用0.25%的胰蛋白酶消化细胞,在显微镜下观察到细胞轮廓加深并有变圆趋势时,迅速吸去胰蛋白酶;
3)用含10%FBS的DMEM完全培养基终止消化并重悬细胞,取10μL细胞悬液,用细胞计数仪计数,并用培养基调整细胞浓度至1×104/mL,接种在96孔板上,每孔加入100μL细胞悬液,在37℃,5%CO2的培养箱中孵育24h,使细胞贴壁;
4).吸去培养基,将稀释好的样品加入板中,每孔加入100μL,每个浓度设置3个复孔,培养箱中继续孵育48h;
5).吸去培养基,加入配好的MTT溶液(1mg/mL),每孔加入100μL,培养箱中孵育4h;
6).吸去MTT溶液,加入DMSO,每孔加入100μL,培养箱中孵育10min;
7).使用酶标仪在490nm波长下测量吸光度值,通过公式:抑制率=(阴性-实验组)/(阴性-空白组)×100%计算细胞抑制率,并用统计软件GraphPad prism 5计算IC50,实验重复3次。
2.结果
化合物1-20对三株肝癌细胞(HepG2,SK-HEP-1和Huh7)的细胞毒活性如表6所示,对于HepG2细胞,化合物2,4,5,13,16和17具有较强的细胞毒活性其IC50值分别为5.4,5.7,14.5,14.5,9.7和13.7μM,较阳性药物索拉非尼更优;化合物3和6-8亦表现出一定的细胞毒活性,其IC50值分别为14.9,14.8,19.4和14.9μM,与阳性药物索拉非尼相当。
对于Huh7细胞,化合物2,4,11和13具有较强的细胞毒活性,其IC50值分别为8.2,4.3,13.1和12.2μM,与阳性药物索拉非尼相当。
对于SK-Hep-1细胞,化合物2,3,4,和5具有较强的细胞毒活性,其IC50值分别为13.4,17.2,8.4,和13.6μM,优于阳性药物索拉非尼。
表6.化合物1-20对三株肝癌细胞的细胞毒活性结果
a数值表示为IC50±SD
3.结论
实验结果显示,化合物1-20对三株肝癌细胞(HepG2,SK-HEP-1和Huh7)的细胞毒活性如表6所示,对于HepG2细胞,化合物2,4,5,13,16和17具有较强的细胞毒活性其IC50值分别为5.4,5.7,14.5,14.5,9.7和13.7μM,较阳性药物索拉非尼更优;化合物3和6-8亦表现出一定的细胞毒活性,其IC50值分别为14.9,14.8,19.4和14.9μM,与阳性药物索拉非尼相当。对于Huh7细胞,化合物2,4,11和13具有较强的细胞毒活性,其IC50值分别为8.2,4.3,13.1和12.2μM,与阳性药物索拉非尼相当。对于SK-Hep-1细胞,化合物2,3,4,和5具有较强的细胞毒活性,其IC50值分别为13.4,17.2,8.4,和13.6μM,优于阳性药物索拉非尼。以上结果表明牛尾蒿中分离得到的化合物1-20可作为药物用于肝癌相关的疾病。
制剂实施例:
在以下制剂实施例中,选择常规试剂,并按照现有常规方法进行制剂制备,本制剂实施例仅体现本发明所述化合物1-20中的至少一种能够制备成不同的制剂,对具体试剂和操作不作具体限定:
1.将本发明化合物1-20中的至少一种,用DMSO溶解后,按常规方法加注射用水,精滤,灌封灭菌制成注射液,所述注射液的浓度为0.5~5mg/mL。
2.将本发明化合物1-20中的至少一种,用DMSO溶解后,将其溶于无菌注射用水中,搅拌使其溶解,用无菌抽滤漏斗过滤,再无菌精滤,分装于安瓿中,低温冷冻干燥后无菌熔封,得粉针剂。
3.将本发明化合物1-20中的至少一种,按其与赋形剂质量比为9:1的比例加入赋形剂,制成粉剂。
4.将本发明化合物1-20中的至少一种,按其与赋形剂质量比为5:1的比例加入赋形剂,制粒压片。
5.将本发明化合物1-20中的至少一种,按常规口服液制备方法制成口服液。
6.将本发明化合物1-20中的至少一种,按其与赋形剂质量比为5:1的比例加入赋形剂,制成胶囊。
7.将本发明化合物1-20中的至少一种,按其与赋形剂质量比为5:1的比例加入赋形剂,制成颗粒剂。
由以上实施例可知,本发明提供了一种牛尾蒿中化合物及其制备方法和应用,药物组合物及其应用。本发明提供的牛尾蒿内酯,主要包括20种新颖结构的化合物,这些化合物对肝癌细胞具有不同程度的细胞毒活性,能够与可药用载体或赋型剂组成药物组合物,能够用于制备抗肝癌药物。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
2.权利要求1所述的式(I)化合物牛尾蒿内酯A-T(1-20)的制备方法,该方法包括以下步骤:取牛尾蒿干燥地上部分粉碎,用10倍量的90%乙醇冷浸提取两次,合并乙醇提取液并减压浓缩至无醇味,得到乙醇提取物,随后用乙酸乙酯萃取3次,得到乙酸乙酯萃取部分,乙酸乙酯萃取部分经硅胶柱层析,用丙酮-石油醚以v/v计,2:98,5:95,10:90,20:80,30:70,50:50进行梯度洗脱得到7个流分Fr.AD-1~Fr.AD-7;Fr.AD-4经经中压MCI CHP 20P柱层析,用水-甲醇70:30,50:50,30:70,10:90梯度洗脱,得到4个组分Fr.AD-4-1-Fr.AD-4-4.Fr.AD-4-3经硅胶柱层析,乙酸乙酯-氯仿5:95至25:75梯度洗脱得到3个流分Fr.AD-4-3-1~Fr.AD-4-3-3;Fr.AD-4-3-1经Sephadex LH-20凝胶柱层析和半制备HPLC,得到化合物1和2;Fr.AD-4-3-2经Sephadex LH-20和半制备HPLC,得到化合物3和6;Fr.AD-4-3-3经Sephadex LH-20凝胶柱层析和半制备HPLC纯化,得到化合物4,5,7和8;
Fr.AD-5经经中压C18柱层析,用水-甲醇50:50,30:70,10:90梯度洗脱,得到3个组分Fr.AD-5-1-Fr.AD-5-3.Fr.AD-5-1经硅胶柱层析,丙酮-石油醚10:90至30:70洗脱得到4个流分Fr.AD-5-1-1~Fr.AD-5-1-4;Fr.AD-5-1-1经硅胶柱层析得到化合物9和11;Fr.AD-5-1-2经Sephadex LH-20凝胶柱层析和半制备HPLC纯化,得到化合物10,12,和14;Fr.AD-5-1-3经Sephadex LH-20凝胶柱层析和半制备HPLC,得到化合物13,15,和18;Fr.AD-5-1-4经硅胶柱层析和半制备HPLC纯化,得到化合物16和17;Fr.AD-5-2经Sephadex LH-20凝胶柱层析和半制备HPLC纯化,得到化合物19和20。
3.权利要求1所述的式(I)化合物牛尾蒿内酯A-T(1-20)在制备抗肝癌药物中的应用。
4.包括权利要求1所述的式(I)化合物牛尾蒿内酯A-T(1-20)的至少一种和药学上可接受的载体或赋型剂的药物组合物。
5.权利要求4所述的药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用。
6.权利要求4所述的药物组合物的制备方法,其特征在于该方法包括下述步骤:
先制备式(I)化合物牛尾蒿内酯A-T(1-20):取牛尾蒿干燥地上部分粉碎,用10倍量的90%乙醇冷浸提取两次,合并乙醇提取液并减压浓缩至无醇味,得到乙醇提取物,随后用乙酸乙酯萃取3次,得到乙酸乙酯萃取部分,乙酸乙酯萃取部分经硅胶柱层析,用丙酮-石油醚以v/v计,2:98,5:95,10:90,20:80,30:70,50:50进行梯度洗脱得到7个流分Fr.AD-1~Fr.AD-7;Fr.AD-4经经中压MCI CHP 20P柱层析,用水-甲醇70:30,50:50,30:70,10:90梯度洗脱,得到4个组分Fr.AD-4-1-Fr.AD-4-4.Fr.AD-4-3经硅胶柱层析,乙酸乙酯-氯仿5:95至25:75梯度洗脱得到3个流分Fr.AD-4-3-1~Fr.AD-4-3-3;Fr.AD-4-3-1经Sephadex LH-20凝胶柱层析和半制备HPLC,得到化合物1和2;Fr.AD-4-3-2经Sephadex LH-20和半制备HPLC,得到化合物3和6;Fr.AD-4-3-3经Sephadex LH-20凝胶柱层析和半制备HPLC纯化,得到化合物4,5,7和8;Fr.AD-5经经中压C18柱层析,用水-甲醇50:50,30:70,10:90梯度洗脱,得到3个组分Fr.AD-5-1-Fr.AD-5-3.Fr.AD-5-1经硅胶柱层析,丙酮-石油醚10:90至30:70洗脱得到4个流分Fr.AD-5-1-1~Fr.AD-5-1-4;Fr.AD-5-1-1经硅胶柱层析得到化合物9和11;Fr.AD-5-1-2经Sephadex LH-20凝胶柱层析和半制备HPLC纯化,得到化合物10,12,和14;Fr.AD-5-1-3经Sephadex LH-20凝胶柱层析和半制备HPLC,得到化合物13,15,和18;Fr.AD-5-1-4经硅胶柱层析和半制备HPLC纯化,得到化合物16和17;Fr.AD-5-2经SephadexLH-20凝胶柱层析和半制备HPLC纯化,得到化合物19和20;
然后,将上述化合物1-20至少一种,加入药学上可接受的载体或赋型剂。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210213957.9A CN114524825B (zh) | 2022-03-04 | 2022-03-04 | 牛尾蒿内酯a-t及其药物组合物和其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210213957.9A CN114524825B (zh) | 2022-03-04 | 2022-03-04 | 牛尾蒿内酯a-t及其药物组合物和其制备方法与应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114524825A true CN114524825A (zh) | 2022-05-24 |
CN114524825B CN114524825B (zh) | 2024-01-12 |
Family
ID=81627233
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210213957.9A Active CN114524825B (zh) | 2022-03-04 | 2022-03-04 | 牛尾蒿内酯a-t及其药物组合物和其制备方法与应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114524825B (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115745933A (zh) * | 2022-11-30 | 2023-03-07 | 中国科学院昆明植物研究所 | 牛尾蒿倍半萜内酯a-n及其药物组合物和其制备方法与应用 |
CN115894418A (zh) * | 2022-12-01 | 2023-04-04 | 中国科学院昆明植物研究所 | 蒙古蒿内酯a-f及其药物组合物和其制备方法与应用 |
CN116589474A (zh) * | 2023-05-05 | 2023-08-15 | 中国科学院昆明植物研究所 | 魁蒿烯内酯a-f及其药物组合物和其制备方法与应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112225746A (zh) * | 2020-11-15 | 2021-01-15 | 中国科学院昆明植物研究所 | 暗绿蒿内酯a-r及其药物组合物和应用 |
-
2022
- 2022-03-04 CN CN202210213957.9A patent/CN114524825B/zh active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112225746A (zh) * | 2020-11-15 | 2021-01-15 | 中国科学院昆明植物研究所 | 暗绿蒿内酯a-r及其药物组合物和应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
FERDINAND BOHLMANN, ET AL.: "Dimeric guaianolides from Artemisia sieversiana", 《PHYTOCHEMISTRY》, vol. 24, no. 5, pages 1009 - 1015 * |
KE ZAN, ET AL.: "Artanomadimers A-F: six new dimeric guaianolides from Artemisia anomala", 《TETRAHEDRON》, vol. 68, no. 25, pages 5060 - 5065 * |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115745933A (zh) * | 2022-11-30 | 2023-03-07 | 中国科学院昆明植物研究所 | 牛尾蒿倍半萜内酯a-n及其药物组合物和其制备方法与应用 |
CN115745933B (zh) * | 2022-11-30 | 2024-01-12 | 中国科学院昆明植物研究所 | 牛尾蒿倍半萜内酯a-n及其药物组合物和其制备方法与应用 |
CN115894418A (zh) * | 2022-12-01 | 2023-04-04 | 中国科学院昆明植物研究所 | 蒙古蒿内酯a-f及其药物组合物和其制备方法与应用 |
CN115894418B (zh) * | 2022-12-01 | 2024-03-29 | 中国科学院昆明植物研究所 | 蒙古蒿内酯a-f及其药物组合物和其制备方法与应用 |
CN116589474A (zh) * | 2023-05-05 | 2023-08-15 | 中国科学院昆明植物研究所 | 魁蒿烯内酯a-f及其药物组合物和其制备方法与应用 |
CN116589474B (zh) * | 2023-05-05 | 2024-05-31 | 中国科学院昆明植物研究所 | 魁蒿烯内酯a-f及其药物组合物和其制备方法与应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN114524825B (zh) | 2024-01-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN114524825A (zh) | 牛尾蒿内酯a-t及其药物组合物和其制备方法与应用 | |
CN112225746B (zh) | 暗绿蒿内酯a-r及其药物组合物和应用 | |
CN111635380B (zh) | 野艾蒿中倍半萜及其药物组合物与其制备方法和应用 | |
CN111704594B (zh) | 多花蒿烯内酯a-s和多花蒿素a-g及其药物组合物和应用 | |
CN105943532A (zh) | 一种二萜类化合物在制备治疗肝癌的药物中的应用 | |
CN104370871B (zh) | 从紫红獐牙菜中分离的口山酮类及抑制乙型肝炎病毒的应用 | |
CN105218489A (zh) | 一种新的杂萜化合物及其制备方法和医药用途 | |
CN113527324B (zh) | 暗绿蒿烯内酯a-l及其药物组合物和其应用 | |
CN101824014B (zh) | 从银线草中分离出的具抗肿瘤活性的化合物及其用途 | |
CN106008543A (zh) | 一种新的二萜类化合物及其制备方法 | |
CN115785041B (zh) | 白叶蒿内酯a-l及其药物组合物和其制备方法与应用 | |
CN112062738B (zh) | 暗绿蒿醇a-b及其药物组合物和其制备方法与应用 | |
CN114957190B (zh) | 南牡蒿素及其药物组合物和其制备方法与应用 | |
CN115894418A (zh) | 蒙古蒿内酯a-f及其药物组合物和其制备方法与应用 | |
CN100584345C (zh) | 具抗病毒作用的小紫金牛提取物及其提取方法和应用 | |
CN114874170A (zh) | 多花蒿内酯a-j及其药物组合物与其制备方法和应用 | |
CN1261143C (zh) | 抗流感病毒的药物有效部位及活性成分的分离制备方法 | |
CN115745933B (zh) | 牛尾蒿倍半萜内酯a-n及其药物组合物和其制备方法与应用 | |
CN113185562B (zh) | 暗绿蒿素a-p及其药物组合物与其制备方法和应用 | |
CN117209462B (zh) | 白莲蒿内酯a-u及其药物组合物和其制备方法与应用 | |
CN101816702B (zh) | 取自夏枯草的防治肺癌组合物及其在制备防治肺癌药物中的应用 | |
CN116478176B (zh) | 蒙古蒿素a–k及其药物组合物和其制备方法与应用 | |
CN116589474B (zh) | 魁蒿烯内酯a-f及其药物组合物和其制备方法与应用 | |
CN106924330B (zh) | 一种艾迪制剂在制备抗恶性胸膜间皮瘤药品中的应用 | |
CN116874544B (zh) | 化合物Artemeriosides A-F及其药物组合物和其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |