CN114874170A - 多花蒿内酯a-j及其药物组合物与其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供结构式(I)所示10个新化合物，多花蒿内酯A−J(artemyrianosin A−J,1−10)及其药物组合物与其制备方法和应用，属于药物技术领域。该类化合物对人肝癌细胞株HepG2、Huh7和Sk‑Hep‑1具有显著的细胞毒活性，能够与可药用载体组成药物组合物，能够用于制备抗肝癌药物。

Description

多花蒿内酯A-J及其药物组合物与其制备方法和应用
技术领域：
本发明属于药物技术领域。具体地，涉及多花蒿内酯A-J(artemyrianosin A-J,1-10),其 药物组合物，及其制备方法和应用、药物组合物及其应用。
背景技术：
肝细胞癌(HCC)是最严重和最常见的肝癌类型之一，其发病因素主要由HBV或HCV感染和大量的酒精摄入引起。在2020年,肝癌导致全世界近83万人死亡，据估计，到2025 年将有超过100万人会受到影响。到目前为止,只有七个国家批准的药物,包括四个合成药物(索拉非尼，瑞格非尼，乐伐替尼和卡博替尼)以及三个单克隆抗体药物(尼鲁单抗，帕姆单抗和雷莫芦单抗)这些药物虽然取得了显著的成果，但也存在一些弊端，例如客观缓解率低、 不良反应发生率高、耐药性等。因此，迫切需要研发高效低毒的靶向治疗肝癌的药物。
蒿属(Artemisia)是菊科(Asteraceae)中种类最多的属之一，在全球范围内有近380余种， 其中186种分布在中国。植物化学研究表明，蒿属植物中含有丰富的倍半萜类化合物，具有 抗疟、抗炎、抗肿瘤、细胞毒、抗菌和抗寄生虫等作用。例如，青蒿素是由中国科学家屠呦呦 在1972年从黄花蒿中获得的倍半萜内酯，其具有显著的抗疟、抗癌和抗炎活性。青蒿素一系 列衍生物如双氢青蒿素、蒿甲醚和青蒿琥酯具有抗疟疾、抗病毒、抗真菌、抗癌和抗炎症的药 理活性。阿格拉宾是从蒿属植物亮绿蒿(Artemisia glabella)中分离得到的愈创木烷型倍半萜内 酯，其作用机制通过抑制法尼斯基转移酶进而对胰腺癌、结肠癌和腺癌细胞具有良好的肿瘤活 性。其二甲胺盐酸盐在哈萨克斯坦已成功开发成一种抗癌药物，用于肺癌和肝癌、结肠癌、卵 巢癌和乳腺癌的治疗。从艾蒿中分离得到的倍半萜内酯A-D是一种潜在的法尼斯蛋白转移酶 (FPTase)抑制剂，其体外IC50值小于1.0μM；arteminolide C可在不引起裸鼠体重下降的情况下 防止肺肿瘤和人结肠移植瘤的突发。
在本申请人从蒿属植物中发现具有生物活性倍半萜类化合物的工作中，从蒿属植物艾中分 离得到了26个愈创木烷倍半萜二聚体，其聚合方式通过4+2Diels-Alder环加成形成，六个 rotundane-愈创木烷倍半萜二聚体；两个愈创木烷-rotundane-愈创木烷三聚体，聚合方式通过分 子内D-A反应形成的新颖的笼状倍半萜以及16个愈创木烷倍半萜类新化合物。其中，四个 愈创木烷-愈创木烷倍半萜二聚体(lavandiolide H andartematrolides A,J and K)对HepG2, SMMC-7721和Huh7细胞具有很好的活性，其IC50值在3.8到9.6μM范围内，lavandiolide H可以通过上调C-PARP-1和下调BCL-2，PARP-1的表达水平把HepG2细胞 阻滞在G2/M期。此外，artematrolide A可激活子宫颈癌细胞的ROS/ERK/mTOR信号通路， 促进代谢转移。通过Diels-Alder反应合成了愈创木烷内酯二聚体(artematrolide F and lavandiolides H,I,and K)和系列类似物。
多花蒿常用于治疗月经过多及炎症性疾病。其植物化学成分研究表明，该植物含有倍半萜、 黄酮类和挥发油等化合物。其中，部分倍半萜对人结肠癌HCT-8细胞、人胃癌BGC-823细 胞和人肝癌Bel-7402细胞具有细胞毒性。在本申请人先前的研究中，从多花蒿中报道了23 个倍半萜，其类型主要有吉马烷型，愈创木烷型，桉烷型。并评价了其对HepG2,SMMC-7721 和Huh7的细胞毒活性，其中artemyrianolide H展现出了较好的细胞毒活性，对三株细胞的 IC50值分别为4.9,3.1和4.3μM。
迄今为止，现有技术无化合物多花蒿内酯A-J(artemyrianosin A-J,1-10)的报道，也没 有其药用活性的报道，更没有化合物1-10及其药物组合物作为抗肝癌作用的报道。
发明内容：
本发明的目的在于提供一类新的具有药用价值的式(I)所示的多花蒿内酯A-J(artemyrianosin A-J,1-10)，及其制备方法和应用，药物组合物及其应用，该类化合物对肝癌 细胞株具有明显的细胞毒活性，能够用于制备抗肝癌药物中。在本申请人对多花蒿的进一步研 究中，发现了10个先前未报道的化合物，因此，本发明提供了对它们的分离方法、结构鉴定 和细胞毒性、药用前景等方面的工作。
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
本发明提供了一系列吉马烷型倍半萜类化合物，多花蒿内酯A-J(artemyrianosinA-J, 1-10)，具有如下式(I)所示的结构：
Figure BDA0003545861320000031
本发明提供了上述化合物1-10的制备方法，取多花蒿乙酸乙酯部位经硅胶柱层析后的 Fr.E流分，经硅胶柱层析，用甲醇-氯仿以v/v计,2:98至10:90进行梯度洗脱得到四个组分Fr. E1～Fr.E4；Fr.E2经中压MCI CHP 20P层析,用水-甲醇50:50,70:30 30:70,0:100梯度洗脱 得到4个亚流分Fr.E2.1～Fr.E2.4；Fr.E2.2经硅胶柱层析，用乙酸乙酯-氯仿10:90,20:80, 30:70梯度洗脱，得到Fr.E2.2.1～Fr.E2.2.4四个组分；Fr.E.2.2.2通过高效液相色谱法分离 得到流分Fr.E2.2.2.1～Fr.E2.2.2.3；用半制备型高效液相色谱纯化Fr.E2.2.2.1得到化合物1、 2和3；Fr.E2.2.3反复经过硅胶层析，乙酸乙酯-氯仿10:90-30:70进行洗脱和半制备高效液 相色谱法制备后得到化合物4和8；Fr.E3通过中压MCI CHP20P柱层析，用水-甲醇80:20, 60:40,40:60,0:100进行梯度洗脱得到四个流分Fr.E3.1～Fr.E3.4；Fr.E3.2经硅胶柱层析，乙 酸乙酯-氯仿,10:90至30:70得到三个流分Fr.E3.2.1～Fr.E3.2.3，Fr.E3.2.2进一步通过 Sephadex LH-20凝胶柱层析使用甲醇-氯仿,50:50和半制备高效液相色谱法得到了化合物7， 9和10；Fr.E3.3经硅胶柱层析，乙酸乙酯-氯仿10:90,20:80和30:70得到Fr. E3.3.1～E3.3.4四个组分；Fr.E3.3.2流分经制备型HPLC和半制备型HPLC进行纯化后得到 化合物5和6。
本发明提供了上述化合物1-10在制备抗肝癌药物中的应用。本发明对所述应用的方法没 有特殊的限定，选用本领域熟知的方法即可。
本发明同时还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括上述的式(I)化合物1-10的 至少一种和药学上可接受的载体或赋型剂。
并此，还提供了所述的药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用。
本发明还进一步提供了所述药物组合物的制备方法，先用上述的制备方法得到化合物1-10， 再以化合物1-10的至少一种或其任意组合为原料加入一定比例的药学上可接受的载体。
当所述化合物1-10中的至少一种用于制备抗肝癌药物时，本发明优选将所述化合物 1-10直接使用，或以药物组合物的形式使用。
本发明提供的药物组合物，包括上述化合物1-10中的至少一种和药学上可接受的载体或 赋型剂。在本发明中，所述药学上可接受的载体或赋型剂优选为固体、半固体或液体稀释剂， 填料以及药物制品辅剂。本发明对所述药学上可接受的载体或赋型剂没有特殊的限定，选用本 领域熟知的、对人和动物无毒且惰性的药学上可接受的载体和/或赋型剂即可。
本发明对所述药物组合物的制备方法没有特殊的限定，直接将化合物1-10中的至少一种 与药学上可接受的载体或赋型剂混合即可，本发明对所述混合的过程没有特殊的限定，选用本 领域熟知的过程能够得到药物组合物即可。
本发明提供了上述技术方案所述药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用。本发明对所述应 用的方法没有特殊的限定，选用本领域熟知的方法即可。
在本发明中，当所述药物组合物用于制备抗肝癌药物时，所述组合物在药物中的含量优选 为0.1～99％；在所述药物组合物中，所述化合物1-10中的至少一种在药物组合物中的含量 优选为0.5～90％。本发明的药物组合物优选以单位体重服用量的形式使用。在本发明中，所 制备的药物优选可经注射(静注、肌注)和口服两种形式给药。
与现有技术相比，本发明具备如下的优益性：
1.本发明提供了一系列新的倍半萜类化合物，多花蒿内酯A-J(artemyriantha A-J,1-10)。 为首次报道的新化合物。
2.本发明提供了制备新化合物1-10的新的方法，该方法原料易得，易于操作，适于工 业化生成。
3.本发明提供了新化合物1-10作为有效成分的药物组合物，为新的抗肝癌药物提供了 具有较好药用作用的新的药物。
4.本发明的化合物1-10对三株肝癌细胞(HepG2,SK-Hep-1和Huh7)的细胞毒活性均 具有较强活性，化合物1-3对HepG2细胞具有细胞毒性，IC50值为43.7至46.5μM；化合 物1-3和7对Huh7细胞株具有细胞毒性，IC50值为44.3至48.9μM；只有化合物3对 SK-Hep-1细胞具有细胞毒性，IC50值为44.9μM。化合物3对3株人肝癌细胞株具有细胞 毒性，IC50值分别为43.7(HepG2)、47.9(Huh7)和44.9(SK-Hep-1)μM。
5.多花蒿中分离得到的化合物倍半萜多花蒿内酯A-J可作为药物用于治疗肝癌相关的疾 病。
附图说明：
图1为本发明化合物1-10的结构式；
图2化合物1的X-单晶衍射结构；
图3化合物7的X-单晶衍射结构；
图4化合物8的X-单晶衍射结构；
图5化合物9的X-单晶衍射结构。
具体实施方式：
为了更好地理解本发明的实质，下面结合附图，用本发明的试验例和实施例来进一步说明 本发明倍半萜类化合物，多花蒿内酯A-J(artemyrianosin A-J,1-10)及其制备方法、结构鉴定、 药理作用，但不以此试验例和实施例来限定本发明。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所 描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本 领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护 的范围。
实施例1：
多花蒿内酯A-J(artemyrianosin A-J)，即化合物1-10的制备：
取多花蒿乙酸乙酯部位经硅胶柱层析后的Fr.E流分，经硅胶柱层析，用甲醇-氯仿以v/v 计,2:98至10:90进行梯度洗脱得到四个组分Fr.E1～Fr.E4；Fr.E2经中压MCI CHP20P层 析,用水-甲醇50:50,70:30 30:70,0:100梯度洗脱得到4个亚流分Fr.E2.1～Fr.E2.4；Fr.E2.2 经硅胶柱层析，用乙酸乙酯-氯仿10:90,20:80,30:70梯度洗脱，得到Fr.E2.2.1～Fr.E2.2.4四 个组分；Fr.E.2.2.2通过高效液相色谱法分离得到流分Fr.E2.2.2.1～Fr.E2.2.2.3；用半制备型 高效液相色谱纯化Fr.E2.2.2.1得到化合物1、2和3；Fr.E2.2.3反复经过硅胶层析，乙酸乙 酯-氯仿10:90-30:70进行洗脱和半制备高效液相色谱法制备后得到化合物4和8；Fr.E3 通过中压MCI CHP 20P柱层析，用水-甲醇80:20,60:40,40:60,0:100进行梯度洗脱得到四个 流分Fr.E3.1～Fr.E3.4；Fr.E3.2经硅胶柱层析，乙酸乙酯-氯仿,10:90至30:70得到三个流 分Fr.E3.2.1～Fr.E3.2.3，Fr.E3.2.2进一步通过Sephadex LH-20凝胶柱层析使用甲醇-氯仿, 50:50和半制备高效液相色谱法得到了化合物7，9和10；Fr.E3.3经硅胶柱层析，乙酸乙酯 -氯仿10:90,20:80和30:70得到Fr.E3.3.1～E3.3.4四个组分；Fr.E3.3.2流分经制备型 HPLC和半制备型HPLC进行纯化后得到化合物5和6。
化合物1-10的结构数据：
核磁共振图谱使用Avance III 600(Bruker,
Figure BDA0003545861320000061
Switzerland)或AvanceIII HD 400 (Bruker,Bremerhaven,Germany)超导核磁共振仪测定，TMS(四甲基硅烷)作为内标。高分辨 质谱分析采用岛津LC-MS-IT-TOF(Shimadzu,Kyoto,Japan)测定。红外光谱(IR)经KBr压 片方法，通过NICOLET iS10型红外光谱仪(Thermo Fisher Scientific,Madison,USA)测定。 ECD谱采用Chirascan型仪器(Applied Photophysics,Surrey,UK)测定。旋光经Autopol VI 旋光仪(Rudolph Research Analytical,Hackettstown,USA)测定。熔点用
Figure BDA0003545861320000062
X-4B显微熔点 仪来测定，该熔点仪购自上海精密科学仪器有限公司。薄层层析硅胶板HSGF254是烟台江友 硅胶开发有限公司产品；柱层析硅胶(200～300目)为临沂市海祥化工有限公司生产；柱层析 葡聚糖凝胶LH-20购自GE Healthcare Bio-Sciences AB公司。高效液相色谱仪为岛津公司生 产，控制器型号是CBM-20A，泵型号是LC-20AR，检测器型号为SPD-M20A，柱温箱型号 为AT-350，使用的色谱柱型号为Agilent-Eclipse XDB-C18(5μm,9.4×250mm)。色谱纯乙腈 购自迈瑞达公司，去离子通道水通过MingCheTM-D 24UVMerk Millipore系统纯化而得。中 压液相(Dr Flash-Ⅱ)为上海利穗公司产品，MCI柱日本三菱公司，型号为CHP-20P(75～150 μm)。分析纯甲醇和乙腈购自天津大茂化学试剂厂。显色剂为10％H2SO4-EtOH溶液。
Figure BDA0003545861320000063
多花蒿内酯A(1)
分子式：C15H20O4
分子量：264.12
性状：棱状晶体
熔点：154～155℃
旋光：
Figure BDA0003545861320000071
(c 0.11,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值287.1254[M+Na]+,计算值287.1254[M+Na]+。
IR(KBr)νmax:3476,1767,1744,1629,1404,1257,1121,1031cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε)199(–4.0),218(+3.4),250(+1.3)nm。
晶体数据：C15H20O4,M＝264.31,
Figure BDA0003545861320000072
α＝90°, β＝95.6520(10)°,γ＝90°,
Figure BDA0003545861320000073
T＝100.(2)K,晶格尺寸P1211,Z＝4,μ(Cu Kα) ＝0.774mm-1,晶体数据采用D8 QUEST型晶体衍射仪(铜靶)进行测定，总衍射次数为 33394次,其中观测到5199次(Rint＝0.0763),I>2σ(I),R1＝0.0447,wR(F2)＝0.1207,F2＝ 1.115,Flack parameter＝-0.11(6)。化合物1的晶体参数已存入剑桥晶体数据中心，提取号： CDCC 2142473。网址：https://www.ccdc.cam.ac.uk。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和2。
Figure BDA0003545861320000074
多花蒿内酯B(2)
分子式：C15H20O4
分子量：264.14
性状：白色无定型粉末
旋光：
Figure BDA0003545861320000075
(c 0.11,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值265.1427[M+H]+,计算值265.1434[M+H]+。
IR(KBr)νmax:3430,1742,1644,1449,1384,1276,1160,1001,908cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε)196(–0.8),220(+4.6)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和2。
Figure BDA0003545861320000081
多花蒿内酯C(3)
分子式：C15H20O4
分子量：264.14
性状：白色无定型粉末
旋光：
Figure BDA0003545861320000082
(c 0.11,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值265.1431[M+H]+,计算值265.1434[M+H]+。
IR(KBr)νmax:3424,3388,1767,1648,1632,1426,1384,1323,1286,1116,989cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):197(+1.4),212(+3.4)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和2。
Figure BDA0003545861320000083
多花蒿内酯D(4)
分子式：C15H22O4
分子量：266.16
性状：白色无定型粉末
旋光：
Figure BDA0003545861320000084
(c 0.11,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值267.1579[M+H]+,计算值267.1591[M+H]+。
IR(KBr)νmax:3427,1759,1634,1459,1384,1346,1186,1039,991,908cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):201(–3.6),244(+0.2)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和2。
Figure BDA0003545861320000091
多花蒿内酯E(5)
分子式：C18H26O6
分子量：338.18
性状：无色油状物
旋光：
Figure BDA0003545861320000092
(c 0.10,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值339.1792[M+H]+,计算值339.1802[M+H]+。
IRνmax:3428,1718,1631,1439,1384,1245,1150,1020,909cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):197(–5.7),224(+1.0)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和2。
Figure BDA0003545861320000093
多花蒿内酯F(6)
分子式：C18H26O6
分子量：338.18
性状：无色油状物
旋光：
Figure BDA0003545861320000094
(c 0.12,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值339.1785[M+H]+,计算值339.1802[M+H]+。
IRνmax:3423,1719,1629,1439,1382,1246,1152,1027,908cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):202(–10.3),224(+1.7)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和3。
Figure BDA0003545861320000101
多花蒿内酯G(7)
分子式：C15H20O4
分子量：264.14
性状：无色棱状晶体
熔点：154～156℃
旋光：
Figure BDA0003545861320000102
(c 0.14,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值265.1423[M+H]+,计算值265.1434[M+H]+。
IRνmax:3467,3435,1749,1664,1643,1632,1445,1410,1381,1314,1263,1129,1027cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):203(+8.5),220(+3.2)nm。
晶体数据：C15H20O4,M＝264.31,
Figure BDA0003545861320000103
α＝90°, 93.2180(10)°,γ＝90°,
Figure BDA0003545861320000104
T＝100.(2)K,晶格尺寸P1211,Z＝2,μ(Cu Kα)＝ 0.762mm-1,晶体数据采用D8 QUEST型晶体衍射仪(铜靶)进行测定，总衍射次数为14454 次,其中观测到2570次(Rint＝0.0451),I>2σ(I),R1＝0.0379,wR(F2)＝0.0984,F2＝1.070, Flack parameter＝0.04(8)。化合物7的晶体参数已存入剑桥晶体数据中心，提取号：CDCC 2142472。网址：https://www.ccdc.cam.ac.uk。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和3。
Figure BDA0003545861320000105
多花蒿内酯H(8)
分子式：C15H22O4
分子量：492.25
性状：无色棱状晶体
熔点：151～153℃
旋光：
Figure BDA0003545861320000111
(c 0.13,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值267.1585[M+H]+,计算值267.1591[M+H]+。
IR(KBr)νmax:3500,3367,1751,1667,1650,1452,1384,1195,1184,1021,1010cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):202(–27.1),227(+0.5)nm。
晶体数据：C15H22O4·2(H2O),M＝302.36,
Figure BDA0003545861320000112
α＝90°,β＝96.4640(10)°,γ＝90°,
Figure BDA0003545861320000113
T＝100.(2)K,晶体数据采用D8QUEST型晶体衍射仪(铜靶)进行测定，总衍射次数为13564次,其中观测到3137次(Rint＝0.0336),I>2σ(I),R1＝0.0292,wR(F2)＝0.0752,F2＝1.081,Flack parameter＝0.06(4)。化合物 11的晶体参数已存入剑桥晶体数据中心，提取号：CDCC 2142471。网址： https://www.ccdc.cam.ac.uk。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和3。
Figure BDA0003545861320000114
多花蒿内酯I(9)
分子式：C15H22O4
分子量：266.16
性状：无色棱状晶体
熔点：151～152℃
旋光：
Figure BDA0003545861320000115
(c 0.12,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值267.1576[M+H]+,计算值267.1591[M+H]+。
IR(KBr)νmax:3391,3308,1751,1632,1564,1384,1064cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):202(–3.9),229(+0.2)nm。
晶体数据：C15H22O4,M＝266.32,
Figure BDA0003545861320000116
α＝90°, β＝90°,γ＝90°,
Figure BDA0003545861320000117
T＝100.(2)K,晶体数据采用D8QUEST型晶体衍射仪(铜 靶)进行测定，总衍射次数为44745次,其中观测到2766次(Rint＝0.0520),I>2σ(I),R1＝ 0.0273,wR(F2)＝0.0705,F2＝1.091,Flack parameter＝0.05(2)。化合物9的晶体参数已存入 剑桥晶体数据中心，提取号：CDCC 2142474。网址：https://www.ccdc.cam.ac.uk。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和3。
Figure BDA0003545861320000121
多花蒿内酯J(10)
分子式：C15H20O4
分子量：264.14
性状：白色无定型粉末
旋光：
Figure BDA0003545861320000122
(c 0.13,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值265.1423[M+H]+,计算值265.1434[M+H]+。
IR(KBr)νmax:3391,1754,1631,1594,1567,1384,1073cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):201(+4.0),222(+0.8)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和3。
Figure BDA0003545861320000131
Figure BDA0003545861320000141
Figure BDA0003545861320000151
实施例2：
化合物1-10对三株肝癌细胞株的细胞毒活性。
1.材料和方法
1.1材料
HepG2细胞株由中国科学院昆明植物研究所活性筛选中心赠予，Huh7和SK-Hep-1细 胞株购自上海纪宁生物科技有限公司；培养基(Dulbecco's Modified Eagle Medium,DMEM)购 自Thermo Fisher Scientific(苏州，中国)；血清(fetal bovine serum,FBS)购自Life Technologies (NY,USA)；RPMI-1640购自ThermoFisher Biochemical Products(北京，中国)。
1.2仪器
Flex Station 3台式多功能酶标仪(Bio-RAD 680,美国)；分析天平(AG135,Metler Toledo， 中国)；恒温箱(DHP-9082,上海)。
1.3实验过程
1).取对数期生长的肝癌细胞，弃去旧培养基，用PBS清洗两遍，弃去PBS；
2).用0.25％的胰蛋白酶消化细胞，在显微镜下观察到细胞轮廓加深并有变圆趋势时，迅速 吸去胰蛋白酶；
3)用含10％FBS的DMEM完全培养基终止消化并重悬细胞，取10μL细胞悬液，用细胞计数仪计数，并用培养基调整细胞浓度至1×104/mL，接种在96孔板上，每孔加入100μL细胞悬液，在37℃，5％CO2的培养箱中孵育24h，使细胞贴壁；
4).吸去培养基，将稀释好的样品加入板中，每孔加入100μL，每个浓度设置3个复孔，培 养箱中继续孵育48h；
5).吸去培养基，加入配好的MTT溶液(1mg/mL)，每孔加入100μL，培养箱中孵育4h；
6).吸去MTT溶液，加入DMSO，每孔加入100μL，培养箱中孵育10min；
7).使用酶标仪在490nm波长下测量吸光度值，通过公式：抑制率＝(阴性－实验组)/(阴 性－空白组)×100％计算细胞抑制率，并用统计软件GraphPad prism 5计算IC50，实验重 复3次。
2.结果
以sorafenib作为阳性对照，采用MTT法在浓度为100μM的条件下对3株人肝癌细胞株(HepG2,Huh7和SK-Hep-1)进行细胞毒性评价(表4)。如表4所示，化合物4-6,8,9在 100μM下，对三株细胞的具有一定的抑制活性；化合物1-3,7,10对HepG2,Huh7,SK-Hep-1 具有明显的抑制作用，抑制率均大于50％。进一步研究活性化合物的剂量-效应关系，得到它 们各自的IC50值(表5)。对于HepG2细胞株，化合物1-3表现出明显的细胞毒性，IC50值 在43.7-46.5μM之间，化合物7和10具有中等的细胞毒性，IC50值分别为55.1和66.1 μM。化合物1-3和7对Huh7细胞表现出中等细胞毒性，IC50值为44.3-48.9μM；化合物 10的IC50值为71.0μM。化合物3对SK-Hep-1细胞具有中等毒性，其IC50值为44.9μM； 化合物1,2,7和10具有较差细胞毒性，IC50值为71.7-89.3μM。
表4多花蒿中化合物1-10在100μM下对三株肝癌细胞的抑制率
Figure BDA0003545861320000171
表5多花蒿中化合物1-3,7,10的细胞毒活性
Figure BDA0003545861320000172
a数值是两次独立试验的平均值；b数值表示为IC50±SD，IC50来源于三次独立重复试验
3.结论
化合物1-3对HepG2细胞具有明显的细胞毒活性，其IC50值为43.7-46.5μM；化合物1-3和7对Huh7细胞株具有一定的细胞毒活性，IC50值为44.3-48.9μM。只有化合物3对 SK-Hep-1细胞具有细胞毒性，IC50值为44.9μM。有趣的是，化合物3对3株人肝癌细胞 株具有细胞毒性，IC50值分别为43.7(HepG2)、47.9(Huh7)和44.9(SK-Hep-1)μM。本研究 为多花蒿抗肝癌活性成分提供了有价值的信息。以上结果表明多花蒿中分离得到的化合物1-10可作为药物用于肝癌相关的疾病。
制剂实施例：
在以下制剂实施例中，选择常规试剂，并按照现有常规方法进行制剂制备，本应用例仅体 现本发明所述化合物1-10中的至少一种能够制备成不同的制剂，对具体试剂和操作不作具体 限定：
1.将化合物1-10中的至少一种，用DMSO溶解后，按常规方法加注射用水，精滤， 灌封灭菌制成注射液，所述注射液的浓度为0.5～5mg/mL。
2.将化合物1-10中的至少一种，用DMSO溶解后，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使其溶解，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封，得粉针剂。
3.将化合物1-10中的至少一种，按其与赋形剂质量比为9:1的比例加入赋形剂，制成 粉剂。
4.将化合物1-10中的至少一种，按其与赋形剂质量比为5:1的比例加入赋形剂，制粒 压片。
5.将化合物1-10中的至少一种，按常规口服液制备方法制成口服液。
6.将化合物1-10中的至少一种，按其与赋形剂质量比为5:1的比例加入赋形剂，制成 胶囊。
7.将化合物1-10中的至少一种，按其与赋形剂质量比为5:1的比例加入赋形剂，制成 颗粒剂。
由以上实施例可知，本发明提供了一种多花蒿中化合物及其制备方法和应用，药物组合物 及其应用。本发明提供的多花蒿内酯，主要包括10种新颖结构的化合物，这些化合物对肝癌 细胞具有不同程度的细胞毒活性，能够与可药用载体或赋型剂组成药物组合物，能够用于制备 抗肝癌药物。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说， 在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明 的保护范围。

Claims (6)

1.结构式(I)所示的化合物多花蒿内酯A-J(1-10)，
Figure FDA0003545861310000011
2.权利要求1所述的结构式(I)所示的化合物多花蒿内酯A-J(1-10)的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：取多花蒿乙酸乙酯部位经硅胶柱层析后的Fr.E流分，经硅胶柱层析，用甲醇-氯仿以v/v计,2:98至10:90进行梯度洗脱得到四个组分Fr.E1～Fr.E4；Fr.E2经中压MCI CHP 20P层析,用水-甲醇50:50,70:30 30:70,0:100梯度洗脱得到4个亚流分Fr.E2.1～Fr.E2.4；Fr.E2.2经硅胶柱层析，用乙酸乙酯-氯仿10:90,20:80,30:70梯度洗脱，得到Fr.E2.2.1～Fr.E2.2.4四个组分；Fr.E.2.2.2通过高效液相色谱法分离得到流分Fr.E2.2.2.1～Fr.E2.2.2.3；用半制备型高效液相色谱纯化Fr.E2.2.2.1得到化合物1、2和3；Fr.E2.2.3反复经过硅胶层析，乙酸乙酯-氯仿10:90-30:70进行洗脱和半制备高效液相色谱法制备后得到化合物4和8；Fr.E3通过中压MCI CHP 20P柱层析，用水-甲醇80:20,60:40,40:60,0:100进行梯度洗脱得到四个流分Fr.E3.1～Fr.E3.4；Fr.E3.2经硅胶柱层析，乙酸乙酯-氯仿,10:90至30:70得到三个流分Fr.E3.2.1～Fr.E3.2.3，Fr.E3.2.2进一步通过Sephadex LH-20凝胶柱层析使用甲醇-氯仿,50:50和半制备高效液相色谱法得到了化合物7，9和10；Fr.E3.3经硅胶柱层析，乙酸乙酯-氯仿10:90,20:80和30:70得到Fr.E3.3.1～E3.3.4四个组分；Fr.E3.3.2流分经制备型HPLC和半制备型HPLC进行纯化后得到化合物5和6。
3.权利要求1所述的结构式(I)所示的化合物多花蒿内酯A-J(1-10)在制备抗肝癌药物中的应用。
4.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求1所述的结构式(I)所示的化合物多花蒿内酯A-J(1-10)中的至少一种和药学上可接受的载体。
5.权利要求4所述的药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用。
6.权利要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：取多花蒿乙酸乙酯部位经硅胶柱层析后的Fr.E流分，经硅胶柱层析，用甲醇-氯仿以v/v计,2:98至10:90进行梯度洗脱得到四个组分Fr.E1～Fr.E4；Fr.E2经中压MCI CHP 20P层析,用水-甲醇50:50,70:30 30:70,0:100梯度洗脱得到4个亚流分Fr.E2.1～Fr.E2.4；Fr.E2.2经硅胶柱层析，用乙酸乙酯-氯仿10:90,20:80,30:70梯度洗脱，得到Fr.E2.2.1～Fr.E2.2.4四个组分；Fr.E.2.2.2通过高效液相色谱法分离得到流分Fr.E2.2.2.1～Fr.E2.2.2.3；用半制备型高效液相色谱纯化Fr.E2.2.2.1得到化合物1、2和3；Fr.E2.2.3反复经过硅胶层析，乙酸乙酯-氯仿10:90-30:70进行洗脱和半制备高效液相色谱法制备后得到化合物4和8；Fr.E3通过中压MCI CHP 20P柱层析，用水-甲醇80:20,60:40,40:60,0:100进行梯度洗脱得到四个流分Fr.E3.1～Fr.E3.4；Fr.E3.2经硅胶柱层析，乙酸乙酯-氯仿,10:90至30:70得到三个流分Fr.E3.2.1～Fr.E3.2.3，Fr.E3.2.2进一步通过Sephadex LH-20凝胶柱层析使用甲醇-氯仿,50:50和半制备高效液相色谱法得到了化合物7，9和10；Fr.E3.3经硅胶柱层析，乙酸乙酯-氯仿10:90,20:80和30:70得到Fr.E3.3.1～E3.3.4四个组分；Fr.E3.3.2流分经制备型HPLC和半制备型HPLC进行纯化后得到化合物5和；再以化合物1–10的至少一种或其任意组合为原料加入一定比例的药学上可接受的载体。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116082284A (zh) * 2023-02-02 2023-05-09 中国科学院昆明植物研究所 多花蒿内酯h衍生物及其药物组合物和其制备方法与应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111704594A (zh) * 2020-06-17 2020-09-25 中国科学院昆明植物研究所 多花蒿烯内酯a-s和多花蒿素a-g及其药物组合物和应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111704594A (zh) * 2020-06-17 2020-09-25 中国科学院昆明植物研究所 多花蒿烯内酯a-s和多花蒿素a-g及其药物组合物和应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MARIA-ELENI GRAFAKOU, ET AL.: "Cajamolides A-N: Cytotoxic and anti-inflammatory sesquiterpene lactones from Calea jamaicensis", 《BIOORGANIC CHEMISTRY》, vol. 116, pages 105351 - 81 *
SHUANG TANG, ET AL.: "Artemyrianolides A-S, Cytotoxic Sesquiterpenoids from Artemisia myriantha", 《JOURNAL OF NATURAL PRODUCTS》, vol. 83, no. 9, pages 2618 - 2630 *
XIANG-RONG CHENG, ET AL.: "Bioactive eudesmane and germacrane derivatives from Inula wissmanniana Hand.-Mazz.", 《PHYTOCHEMISTRY》, vol. 96, pages 214 - 222 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116082284A (zh) * 2023-02-02 2023-05-09 中国科学院昆明植物研究所 多花蒿内酯h衍生物及其药物组合物和其制备方法与应用
CN116082284B (zh) * 2023-02-02 2023-11-17 中国科学院昆明植物研究所 多花蒿内酯h衍生物及其药物组合物和其制备方法与应用

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