CN115785041B - 白叶蒿内酯a-l及其药物组合物和其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供白叶蒿内酯A–L（artemleucolides A‒L，1–12）及其药物组合物和其制备方法与应用，属于药物技术领域。本发明的结构式（I）所示12个桉烷型倍半萜，白叶蒿内酯A–L对人肝癌细胞株HepG2、Huh7和SK‑Hep‑1具有细胞毒活性，能够与可药用载体组成药物组合物，可用于制备抗肝癌药物。
Description
技术领域：
本发明属于药物技术领域。具体地，涉及12个新结构的桉烷型倍半萜，白叶蒿内酯A–L(artemleucolides A-L，1–12)，及其制备方法和应用，以及以化合物1–12为有效成分的药物组合物及其在制备抗肝癌的药物中的应用。
背景技术：
根据国家癌症中心发布的全国癌症报告的统计数据,肝癌是我国发病率第四的肿瘤疾病,但死亡率很高(13.94％),仅次于肺癌。对于早期肝癌,患者可选择肝切除、肝移植及射频消融等根治性治疗方法,以延长生存期。然而,因肝细胞癌起病隐匿、进展迅速及早期诊断较困难,大多数患者在确诊时已达局部晚期或有转移,不适合上述局部治疗方法,只能通过药物治疗。
菊科蒿属(Artemisia)约有380种，分布在世界各地，我国分布有186种44变。其中，一些植物是著名的民间和传统中药，如茵陈、艾、黄花蒿等，用于治疗疟疾、肝炎、癌症、湿疹、腹泻、瘀伤和风湿病等各种疾病。植物化学研究发现，倍半萜是蒿属植物中最主要的化学成分之一，常见的有桉烷型、愈创木烷型、吉玛烷型、杜松烷型等。文献报道，其中的一些倍半萜具有显著的抗肿瘤、抗炎、抗病毒、免疫调节等作用。
白叶蒿(A.leucophylla)是菊科蒿属的一种多年生草本植物，全国各地多有分布。在我国部分地区，白叶蒿可作“艾”(家艾)的代用品,有温气血、逐寒湿、止血、消炎的作用。但是一直以来对白叶蒿的研究较少，从中主要分离得到了6个黄酮及黄酮苷、2个香豆素、2个脂肪酸和1个三萜。迄今未见白叶蒿中倍半萜成分以及抗肝癌活性报道。
延续前期研究，本发明从白叶蒿中分离得到了12个新的桉烷型倍半萜，白叶蒿内酯A–L(artemleucolides A-L，1–12)。迄今为止，现有技术中无白叶蒿内酯A–L(artemleucolides A-L，1–12)的报道，也没有其作为有效成分的药物组合物的报道，也没有化合物及其药物组合物在制备或治疗肝癌药物中的应用报道。
发明内容：
本发明的目的在于提供一类新的具有药用价值如式(I)所示的白叶蒿内酯A–L(artemleucolides A-L，1–12)及其制备方法、药物组合物及其应用。本发明从白叶蒿中分离鉴定了12个新结构的桉烷型倍半萜，白叶蒿内酯A–L(artemleucolides A-L，1–12)。该类化合物对人肝癌细胞株HepG2、Huh7和SK-Hep-1具有明显的细胞毒活性，能够用于制备抗肝癌药物。
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
本发明提供了一系列桉烷型倍半萜化合物，白叶蒿内酯A–L(artemleucolides A-L，1–12)，结构如下式(I)所示：
本发明另外提供了制备式I所示的化合物1–12的方法，
取干燥的白叶蒿地上部分，粉碎，用3倍量的90％乙醇提取两次，合并提取液减压浓缩后得到的粗浸膏分散于水中，用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取部分；随后，将乙酸乙酯萃取部分过硅胶柱层析，并用丙酮-石油醚体积比0:100、5:95、10:90、20:80、40:60和100:0梯度洗脱得到六个流分Frs.A-F；流分Fr.C经过硅胶柱层析(乙酸乙酯-石油醚，5:95,10:90和20:80)得到三个流分Fr.C1-Fr.C3。Fr.C2过MCI gel CHP 20P柱层析，用甲醇-水40:60、50:50、60:40、70:30和100:0洗脱得到了五个亚流分Frs.C2.1-C2.5；Fr.C2.1再用Rp-C18柱层析，以甲醇-水40:60、60:40、70:30、90:10和100:0处理，得到五个流分Fr.C2.1.1-C2.1.5；Fr.C2.1.1再经制备高效液相，甲醇-水50:50洗脱，得到四个流分Fr.C2.1.1.1-C2.1.1.4；Fr.C2.1.1.1最后经半制备高效液相HPLC在安捷伦XDB-C18柱上以35:65的乙腈-水洗脱纯化得到化合物6和8；Fr.C2.1.1.2最后经半制备高效液相HPLC在安捷伦XDB-C18柱上以52:48的甲醇-水洗脱纯化得到化合物7；Fr.C2.1.1.3最后经半制备高效液相HPLC在安捷伦XDB-C18柱上以30:70的乙腈-水洗脱纯化得到化合物9和10；Fr.C2.2再用Rp-C18柱层析，以甲醇-水40:60、50:50、60:40、70:30和100:0处理，得到五个流分Fr.C2.2.1-C2.2.5；Fr.C2.2.1再经制备高效液相，乙腈-水40:60洗脱，得到个流分Fr.C2.2.1.1-C2.2.1.4；Fr.C2.2.1.1最后经半制备高效液相HPLC在安捷伦XDB-C18柱上以29:71的乙腈-水洗脱纯化得到化合物3和4；Fr.C2.2.1.2最后经半制备高效液相HPLC在安捷伦XDB-C18柱上以48:52的乙腈-水洗脱纯化得到化合物5和11；Fr.C2.2.1.3最后经半制备高效液相HPLC在安捷伦XDB-C18柱上以58:42的甲醇-水洗脱纯化得到化合物1和2；Fr.C2.3再用Rp-C18柱层析，以甲醇-水40:60、50:50、60:40、70:30和100:0处理，得到五个流分Fr.C2.3.1-C2.3.5；Fr.C2.3.1再经硅胶柱层析，乙酸乙酯-石油醚5:95、10:90、20:80、70:30洗脱，得到四个流分Fr.C2.3.1.1-C2.3.1.4。Fr.C2.3.1.3最后经半制备高效液相HPLC在安捷伦XDB-C18柱上以50:50的乙腈-水洗脱纯化得到化合物12。
本发明提供了式I所示的化合物1–12任其一种或其任意组合在制备抗肝癌药物中的应用。本发明对所述应用的方法没有特殊的限定，选用本领域熟知的方法即可。
本发明同时提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括式(I)所示的化合物1-12中的任其一种或其任意组合和药学上可接受的载体。
并此，还提供了所述的药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用。并同时提供了所述的药物组合物的制备方法：采用上述制备化合物的方法制备得到本发明化合物1-12，然后加入可药用载体。
当所述化合物1-12中的任其一种或其任意组合用于制备抗肝癌药物时，本发明优选将所述化合物1-12直接使用，或以药物组合物的形式使用。
本发明提供的药物组合物，包括上述化合物1-12中的任其一种或其任意组合和药学上可接受的载体。在本发明中，所述药学上可接受的载体优选为固体、半固体或液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。本发明对所述药学上可接受的载体没有特殊的限定，选用本领域熟知的、对人和动物无毒且惰性的药学上可接受的载体即可。
本发明对所述药物组合物的制备方法没有特殊的限定，直接将化合物1-12中的任其一种或其任意组合与药学上可接受的载体混合即可，本发明对所述混合的过程没有特殊的限定，选用本领域熟知的过程能够得到药物组合物即可。
本发明提供了上述技术方案所述药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用，对所述应用的方法没有特殊的限定，选用本领域熟知的方法即可。
在本发明中，当所述药物组合物用于制备抗肝癌药物时，所述组合物在药物中的含量优选为0.1～99％；在所述药物组合物中，所述化合物1-12中的任其一种或其任意组合在药物组合物中的含量优选为0.5～90％。本发明的药物组合物优选以单位体重服用量的形式使用。在本发明中，所制备的药物优选可经注射(静注、肌注)和口服两种形式给药。
与现有技术相比，本发明具备如下的优益性：
1.本发明提供了12个新结构的桉烷型倍半萜化合物，白叶蒿内酯A–L(artemleucolides A-L，1–12)。
2.本发明提供了制备新化合物1–12的新的方法，该方法原料易得，易于操作。
3.本发明提供了新化合物1–12作为有效成分的药物组合物，为新的抗肝癌药物提供了具有较好药用作用的新的药物。
4.本发明的化合物1–12在100μM对三株肝癌细胞HepG2、Huh7、SK-Hep-1具有细胞毒活性。其中，化合物7对Huh7细胞具有适中的细胞毒活性，其IC50值为35.1μM；对HepG2细胞具有适中的细胞毒活性，其IC50为35.0μM；对SK-Hep-1细胞具有适中的细胞毒活性，其IC50为32.7μM。以上结果表明白叶蒿中分离得到的化合物1-12可作为药物用于治疗肝癌相关的疾病。
附图说明：
图1为本发明化合物1-12的结构式；
图2为是化合物1的X-ray单晶结构示意图。
具体实施方式：
为了更好地理解本发明的实质，下面结合附图，用本发明的试验例和实施例来进一步说明本发明白叶蒿内酯A–L(artemleucolides A-L，1–12)制备方法、结构鉴定、药理作用，以及本发明的制备方法及药物组成，但不以此试验例和实施例来限定本发明。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
本发明桉烷型倍半萜，白叶蒿内酯A–L(artemleucolides A-L，1–12)的制备：
取干燥的白叶蒿地上部分27.5kg，粉碎，用3倍量的90％乙醇提取两次，合并提取液减压浓缩后得到的粗浸膏分散于水中，用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取部分(1.15kg)；随后，将乙酸乙酯萃取部分过硅胶柱层析，并用丙酮-石油醚体积比0:100、5:95、10:90、20:80、40:60和100:0梯度洗脱得到六个流分Frs.A-F；流分Fr.C(154g)经过硅胶柱层析(乙酸乙酯-石油醚，5:95,10:90和20:80)得到三个流分Fr.C1-Fr.C3；Fr.C2(55g)过MCI gel CHP 20P柱层析，用甲醇-水40:60、50:50、60:40、70:30和100:0洗脱得到了五个亚流分Frs.C2.1-C2.4；15g Fr.C2.1再用Rp-C18柱层析，以甲醇-水40:60、60:40、70:30、90:10和100:0处理，得到五个流分Fr.C2.1.1-C2.1.5；Fr.C2.1.1(3.2g)再经制备高效液相，甲醇-水50:50洗脱，得到四个流分Fr.C2.1.1.1-C2.1.1.4；Fr.C2.1.1.1(340mg)最后经半制备高效液相HPLC在安捷伦XDB-C18柱上以35:65的乙腈-水洗脱纯化得到化合物6(76mg)和8(78mg)；Fr.C2.1.1.2(815mg)最后经半制备高效液相HPLC在安捷伦XDB-C18柱上以52:48的甲醇-水洗脱纯化得到化合物7(6mg)；Fr.C2.1.1.3(740mg)最后经半制备高效液相HPLC在安捷伦XDB-C18柱上以30:70的乙腈-水洗脱纯化得到化合物9(67mg)和10(5.8mg)；Fr.C2.2(12g)再用Rp-C18柱层析，以甲醇-水40:60、50:50、60:40、70:30和100:0处理，得到五个流分Fr.C2.2.1-C2.2.5；Fr.C2.2.1(2.8g)再经制备高效液相，乙腈-水40:60洗脱，得到四个流分Fr.C2.2.1.1-C2.2.1.4；Fr.C2.2.1.1(978mg)最后经半制备高效液相HPLC在安捷伦XDB-C18柱上以29:71的乙腈-水洗脱纯化得到化合物3(12mg)和4(76mg)；Fr.C2.2.1.2(640mg)最后经半制备高效液相HPLC在安捷伦XDB-C18柱上以48:52的乙腈-水洗脱纯化得到化合物5(13mg)和11(4.7mg)；Fr.C2.2.1.3(728mg)最后经半制备高效液相HPLC在安捷伦XDB-C18柱上以58:42的甲醇-水洗脱纯化得到化合物1(3mg)和2(17mg)；Fr.C2.3(5g)再用Rp-C18柱层析，以甲醇-水40:60、50:50、60:40、70:30和100:0处理，得到五个流分Fr.C2.3.1-C2.3.5；Fr.C2.3.1(456mg)再经硅胶柱层析，乙酸乙酯-石油醚5:95、10:90、20:80、70:30洗脱，得到四个流分Fr.C2.3.1.1-C2.3.1.4；Fr.C2.3.1.3(86mg)最后经半制备高效液相HPLC在安捷伦XDB-C18柱上以50:50的乙腈-水洗脱纯化得到化合物12(22mg)。
化合物1-12的结构数据：
旋光由Autopol VI旋光仪(Rudolph Research Analytical,Hackettstown,USA)测定；红外光谱(IR)采用KBr压片法，由Bio-Rad FTS-135型红外光谱仪(Hercules,California,USA)测定；紫外光谱由UV-2401PC型紫外光谱仪(Shimadzu,Kyoto,Japan)测定；ECD谱由Applied Photophysics圆二色谱仪(Agilent,Santa Clara,United States)测定；核磁共振谱(1D和2D NMR)用Avance III-600型超导核磁共振仪(Bruker,Bremerhaven,Germany)测定，以氘代氯仿作为溶剂；高分辨质谱(HRESIMS)用岛津LCMS-IT-TOF型质谱仪(Shimadzu,Kyoto,Japan)测定；薄层层析硅胶板HSGF254是烟台江友硅胶开发有限公司产品；柱层析硅胶(200～300目)为临沂市海祥化工有限公司生产；葡聚糖凝胶LH-20(Sephadex LH-20)购自GE Healthcare Bio-Sciences AB公司；高效液相色谱仪为岛津公司生产，控制器型号是CBM-20A，泵型号是LC-20AR，检测器型号为SPD-M20A，柱温箱型号为AT-350，使用的色谱柱型号为Agilent-Eclipse XDB-C18(5μm,9.4×250mm)；色谱纯乙腈购自迈瑞达公司；MCI gel CHP20P(75～150μm)购自Mitsubishi Chemical Corporation(Tokyo,Japan)；显色剂为10％ H2SO4-EtOH溶液。
白叶蒿内酯A(Artemleucolide A，1)
分子式：C14H18O4
分子量：250
性状：单斜晶体；
(+)-HRESIMS m/z 251.1276[M+H]+(calcd for C14H19O4,251.1278).
IR(KBr)vmax 1762,1711,1676,1384,1174cm-1
UV(MeOH)λmax(logε):239(2.34)；
ECD(MeOH)λmax(Δε)219(+2.19),244(+2.26),281(-2.31)nm；
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和3。
化合物1的晶体数据:C14H18O4,M＝250.28, α＝90°,β＝90°,γ＝90°,/>T＝100.(2)K,space groupP212121,Z＝4,μ(Cu Kα)＝0.813mm-1,21650measured reflections,2411independentreflections(Rint＝0.0331).The final R1 values were 0.0254(I>2σ(I)).The finalwR(F2)values were 0.0655(I>2σ(I)).The final R1 values were 0.0256(all data).The final wR(F2)values were 0.0657(all data).The goodness of fit on F2 was1.068.Flack parameter＝0.00(3).
白叶蒿内酯B(Artemleucolide B，2)
分子式：C14H20O3
分子量：236
性状：无色油状物；
(+)-HRESIMS m/z 237.1487[M+H]+(calcd for C14H21O3,237.1485).
IR(KBr)vmax 1766,1711,1675,1453,1384,1353,1171cm-1
ECD(MeOH)λmax(Δε)210(+22.3),284(-13.5)nm；
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和3。
白叶蒿内酯C(Artemleucolide C，3)
分子式：C16H22O5
分子量：294
性状：无色油状物；
(+)-HRESIMS m/z 295.1533[M+H]+(calcd for C16H23O5,295.1540).IR(KBr)vmax1776,1738,1712,1456,1371,1238,1175cm-1ECD(MeOH)λmax(Δε)207(+9.80),284(-4.89)nm；
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和3。
白叶蒿内酯D(Artemleucolide D，4)
分子式：C16H22O5
分子量：294
性状：无色油状物；
(+)-HRESIMS m/z 295.1544[M+H]+(calcd for C16H23O5,295.1540).IR(KBr)vmax1776,1738,1710,1456,1369,1237,1175cm-1ECD(MeOH)λmax(Δε)202(+0.98),218(+3.22),288(+4.57)nm；
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和3。
白叶蒿内酯E(Artemleucolide E，5)
分子式：C19H26O5
分子量：334
性状：无色油状物；
(+)-HRESIMS m/z 357.1668[M+Na]+(calcd for C19H26O5Na,357.1672).IR(KBr)vmax 1777,1711,1651,1455,1384,1259,1172,1138cm-1ECD(MeOH)λmax(Δε)215(+19.6),284(-6.30)nm；
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和3。
白叶蒿内酯F(Artemleucolide F，6)
分子式：C18H26O5
分子量：322
性状：无色油状物；
(+)-HRESIMS m/z 323.1860[M+H]+(calcd for C18H27O5,323.1853)IR(KBr)vmax3487,1778,1742,1452,1379,1244,1176,1122cm-1ECD(MeOH)λmax(Δε)200(+13.19),209(-0.31),223(+3.29)nm；
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和3。
白叶蒿内酯G(Artemleucolide G，7)
分子式：C23H28O5
分子量：384
性状：无色油状物；
(+)-HRESIMS m/z 385.2014[M+H]+(calcd for C23H29O5,385.2010).IR(KBr)vmax3444,1778,1734,1622,1497,1454,1258,1226,1120cm-1ECD(MeOH)λmax(Δε)200(+2.81),208(+1.13),221(+2.30)nm；
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和3。
白叶蒿内酯H(Artemleucolide H，8)
分子式：C19H28O5
分子量：336
性状：白色粉末；
(+)-HRESIMS m/z 337.2013[M+H]+(calcd for C19H29O5,337.2010)IR(KBr)vmax3458,1778,1730,1455,1386,1161,1122cm-1
ECD(MeOH)λmax(Δε)218(+0.75)nm；
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和3。
白叶蒿内酯I(Artemleucolide I，9)
分子式：C20H28O5
分子量：348
性状：白色粉末；
(+)-HRESIMS m/z 349.1996[M+H]+(calcd for C20H29O5,349.2010).IR(KBr)vmax3450,1777,1705,1650,1452,1383,1267,1122cm-1ECD(MeOH)λmax(Δε)213(+4.46)nm；
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和3。
白叶蒿内酯J(Artemleucolide J，10)
分子式：C20H28O5
分子量：348
性状：无色油状物；
(+)-HRESIMS m/z 349.2002[M+H]+(calcd for C20H29O5,349.2010).IR(KBr)vmax3446,1781,1705,1649,1455,1382,1265,1142cm-1ECD(MeOH)λmax(Δε)200(+3.87),211(-0.79),227(+0.48)nm；
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和3。
白叶蒿内酯K(Artemleucolide K，11)
分子式：C22H30O6
分子量：390
性状：白色粉末；
(+)-HRESIMS m/z 391.2122[M+H]+(calcd for C22H31O6,391.2115).
IR(KBr)vmax 1761,1697,1653,1385,1213,1173cm-1
UV(MeOH)λmax(logε):215(3.04)；
ECD(MeOH)λmax(Δε)200(+21.00),233(-13.64)nm
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和3。
白叶蒿内酯J(Artemleucolide J，12)
分子式：C17H22O6
分子量：322
性状：白色粉末；
(+)-HRESIMS m/z m/z 345.1306[M+Na]+(calcd for C17H22O6Na,345.1309).IR(KBr)vmax 1783,1752,1676,1455,1378,1257,1181,1127,1045cm-1
UV(MeOH)λmax(logε):216(2.88)；
ECD(MeOH)λmax(Δε)206(-7.42),235(+28.09),334(-5.07)nm；
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和3。
表1化合物1-5的1HNMR核磁共振数据(CDCl3,600MHz)
a“ol”表示信号重叠，峰型和耦合常数无法读取。
/>
实施例2：
化合物1-12对三株肝癌细胞株的细胞毒活性。
1.材料和方法
1.1材料
HepG2，SK-Hep-1和Huh7细胞株购自上海纪宁生物科技有限公司；培养基(Dulbecco's Modified Eagle Medium,DMEM)购自Thermo Fisher Scientific(苏州，中国)；血清(fetal bovine serum,FBS)购自Life Technologies(NY,USA)；RPMI-1640购自ThermoFisher Biochemical Products(北京，中国)。
1.2仪器
Flex Station 3台式多功能酶标仪(Bio-RAD 680,美国)；分析天平(AG135,Metler Toledo，中国)；恒温箱(DHP-9082,上海)。
1.3实验过程
1).取对数期生长的肝癌细胞，弃去旧培养基，用PBS清洗两遍，弃去PBS；
2).用0.25％的胰蛋白酶消化细胞，在显微镜下观察到细胞轮廓加深并有变圆趋势时，迅速吸去胰蛋白酶；
3)用含10％ FBS的DMEM完全培养基终止消化并重悬细胞，取10μL细胞悬液，用细胞计数仪计数，并用培养基调整细胞浓度至1×104/mL，接种在96孔板上，每孔加入100μL细胞悬液，在37℃，5％ CO2的培养箱中孵育24h，使细胞贴壁；
4).吸去培养基，将稀释好的样品加入板中，每孔加入100μL，每个浓度设置3个复孔，培养箱中继续孵育48h；
5).吸去培养基，加入配好的MTT溶液(1mg/mL)，每孔加入100μL，培养箱中孵育4h；
6).吸去MTT溶液，加入DMSO，每孔加入100μL，培养箱中孵育10min；
7).使用酶标仪在490nm波长下测量吸光度值，通过公式抑制率＝(阴性－实验组)/(阴性－空白组)×100％计算细胞抑制率，并用统计软件GraphPad prism 5计算IC50，实验重复3次。
表4化合物7肝癌细胞毒活性半抑制浓度
表5化合物1–12肝癌细胞毒活性
2.结果
对所有分离得到的进行了抗肝癌细胞毒活性评价，实验结果如表4和所示：化合物1–12对三株肝癌细胞HepG2、Huh7、SK-Hep-1具有细胞毒活性，其中，化合物7对HepG2细胞具有适中的细胞毒活性，其IC50为35.1μM；化合物7对Huh7细胞具有适中的细胞毒活性，其IC50为35.0μM；化合物7对SK-Hep-1细胞具有适中的细胞毒活性，其IC50为32.7μM。其余化合物在200μM时对三株肝癌细胞均有一定的抑制活性。综上所示，化合物7对三株肝癌细胞HepG2、Huh7和SK-Hep-1的细胞毒活性最好，其IC50分别为35.1,35.0和32.7μM。
3.结论
实验结果显示，化合物1–12对三株肝癌细胞HepG2、Huh7、SK-Hep-1具有细胞毒活性，其中，化合物7对HepG2细胞具有适中的细胞毒活性，其IC50值为35.1μM；化合物7对Huh7细胞具有适中的细胞毒活性，其IC50值为35.0μM；化合物7对SK-Hep-1细胞具有适中的细胞毒活性，其IC50值为32.7μM。其余化合物在200μM时对三株肝癌细胞均有一定的抑制活性。综上所示，化合物7对三株肝癌细胞HepG2、Huh7和SK-Hep-1的细胞毒活性最好，其IC50分别为35.1,35.0和32.7μM。以上结果表明白叶蒿中分离得到的化合物1-12可作为药物用于治疗肝癌相关的疾病。
制剂实施例
在以下制剂实施例中，选择常规试剂，并按照现有常规方法进行制剂制备，本制剂实施例仅体现本发明所述化合物1-12中的任其一种或其任意组合能够制备成不同的制剂，对具体试剂和操作不作具体限定：
1.将本发明化合物1-12中的任其一种或其任意组合，用少量的DMSO溶解后，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液，所述注射液的浓度为0.5～5mg/mL。
2.将本发明化合物1-12中的任其一种或其任意组合，用少量的DMSO溶解后，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶解，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封，得粉针剂。
3.将本发明化合物1-12中的任其一种或其任意组合，按其与赋形剂重量比为9:1的比例加入赋形剂，制成粉剂。
4.将本发明化合物1-12中的任其一种或其任意组合，按其与赋形剂重量比为5:1的比例加入赋形剂，制粒压片。
5.将本发明化合物1-12中的任其一种或其任意组合，按常规口服液制法制成口服液。
6.将本发明化合物1-12中的任其一种或其任意组合，按其与赋形剂重量比为5:1的比例加入赋形剂，制成胶囊。
7.将本发明化合物1-12中的任其一种或其任意组合，按其与赋形剂重量比为5:1的比例加入赋形剂，制成颗粒剂。
由以上实施例可知，本发明提供了一种白叶蒿中化合物及其制备方法和应用，药物组合物及其应用。本发明提供的白叶蒿内酯，主要包括12个新结构的桉烷型倍半萜，这些化合物对肝癌细胞具有不同程度的细胞毒活性，能够与可药用载体或赋型剂组成药物组合物，能够用于制备抗肝癌药物。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.如下结构式所示的白叶蒿内酯化合物7，
2.权利要求1所述的白叶蒿内酯化合物7的制备方法，其特征在于该方法包括下述步骤：取干燥的白叶蒿地上部分，粉碎，用3倍量的90％乙醇提取两次，合并提取液减压浓缩后得到的粗浸膏分散于水中，用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取部分；随后，将乙酸乙酯萃取部分过硅胶柱层析，并用丙酮-石油醚体积比0:100、5:95、10:90、20:80、40:60和100:0梯度洗脱得到六个流分Frs.A-F；流分Fr.C经过硅胶柱层析，用乙酸乙酯-石油醚，5:95,10:90和20:80洗脱，得到三个流分Fr.C1-Fr.C3；Fr.C2过MCI gel CHP 20P柱层析，用甲醇-水40:60、50:50、60:40、70:30和100:0洗脱，得到五个亚流分Frs.C2.1-C2.5；Fr.C2.1再用Rp-C18柱层析，以甲醇-水40:60、60:40、70:30、90:10和100:0处理，得到五个流分Fr.C2.1.1-C2.1.5；Fr.C2.1.1再经制备高效液相，甲醇-水50:50洗脱，得到四个流分Fr.C2.1.1.1-C2.1.1.4；Fr.C2.1.1.2最后经半制备高效液相HPLC在安捷伦XDB-C18柱上以52:48的甲醇-水洗脱纯化得到白叶蒿内酯化合物7。
3.权利要求1所述的白叶蒿内酯化合物7在制备抗肝癌药物中的应用。
4.包括权利要求1所述的白叶蒿内酯化合物7和可药用载体的药物组合物。
5.权利要求4所述的药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用。
6.权利要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法包括下述步骤：取干燥的白叶蒿地上部分，粉碎，用3倍量的90％乙醇提取两次，合并提取液减压浓缩后得到的粗浸膏分散于水中，用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取部分；随后，将乙酸乙酯萃取部分过硅胶柱层析，并用丙酮-石油醚体积比0:100、5:95、10:90、20:80、40:60和100:0梯度洗脱得到六个流分Frs.A-F；流分Fr.C经过硅胶柱层析，用乙酸乙酯-石油醚，5:95,10:90和20:80洗脱，得到三个流分Fr.C1-Fr.C3；Fr.C2过MCI gel CHP 20P柱层析，用甲醇-水40:60、50:50、60:40、70:30和100:0洗脱，得到五个亚流分Frs.C2.1-C2.5；Fr.C2.1再用Rp-C18柱层析，以甲醇-水40:60、60:40、70:30、90:10和100:0处理，得到五个流分Fr.C2.1.1-C2.1.5；Fr.C2.1.1再经制备高效液相，甲醇-水50:50洗脱，得到四个流分Fr.C2.1.1.1-C2.1.1.4；Fr.C2.1.1.2最后经半制备高效液相HPLC在安捷伦XDB-C18柱上以52:48的甲醇-水洗脱纯化得到白叶蒿内酯化合物7，然后取化合物7，加入可药用载体。
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| Isolation and Structural Elucidation of Heliangolidin, a New Sesquiterpene Lactone from Artemisia Canariensis;J.L. BRETON 等;Tetrahedron;第41卷;3141-3146 * |
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| The Structure and Chemistry of Hallerin, a Mixture of Anomeric Sesquiterpenoids from Laserpitium Halleri Crantz subsp. halleri;Giovanni Appendino;J.CHEM.SOC.PERKIN TRANS.;第I卷;2017-2026 * |
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