CN115745933B - 牛尾蒿倍半萜内酯a-n及其药物组合物和其制备方法与应用 - Google Patents

牛尾蒿倍半萜内酯a-n及其药物组合物和其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN115745933B
CN115745933B CN202211517276.8A CN202211517276A CN115745933B CN 115745933 B CN115745933 B CN 115745933B CN 202211517276 A CN202211517276 A CN 202211517276A CN 115745933 B CN115745933 B CN 115745933B
Authority
CN
China
Prior art keywords
column chromatography
methanol
gel column
chloroform
compounds
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202211517276.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN115745933A (zh
Inventor
陈纪军
高振
李天泽
马云保
耿长安
黄晓燕
胡敬
张雪梅
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kunming Institute of Botany of CAS
Original Assignee
Kunming Institute of Botany of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kunming Institute of Botany of CAS filed Critical Kunming Institute of Botany of CAS
Priority to CN202211517276.8A priority Critical patent/CN115745933B/zh
Publication of CN115745933A publication Critical patent/CN115745933A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN115745933B publication Critical patent/CN115745933B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)

Abstract

本发明提供结构式(I)所示的14个倍半萜内酯类化合物，牛尾蒿倍半萜内酯A−N(artemdubinoids A−N,1−14)，及其药物组合物和其制备方法与应用，属于药物技术领域。该类化合物对人肝癌细胞株HepG2、Huh7和SK‑Hep‑1具有细胞毒活性，能够与可药用载体组成药物组合物，能够用于制备抗肝癌药物。

Description

牛尾蒿倍半萜内酯A-N及其药物组合物和其制备方法与应用
技术领域：
本发明属于药物技术领域。具体地涉及化合物牛尾蒿倍半萜内酯A-N(artemdubinoids A-N,1-14),及其制备方法和应用，含其的药物组合物及其应用。
背景技术：
肝癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率和发病率呈逐年上升趋势，全球每年新增人数约84万，是全球癌症死亡的第四大病因，严重危害人类健康。其主要包括原发性肝癌和继发性肝癌，大约90％的原发性肝癌是肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)，它发病隐匿,癌变速度快,恶性程度高，主要由乙型病毒性肝炎(HBV)、丙型肝炎(HCV)、酒精性肝病和黄曲霉素等引起。目前，关于肝癌的治疗药物主要包括四个酪氨酸激酶抑制剂(索拉非尼、瑞格菲尼、乐伐替尼以及卡博替尼)，两个PD-1抑制剂(纳武单抗和帕姆单抗)和一个VEGFR-2 抑制剂(雷莫芦单抗)。虽然它们在临床应用广泛并已取得显著治疗效果，但易产生耐药性，也会出现恶心、呕吐、头痛等副作用。天然的小分子因其化学结构和药理作用的多样性，已成为新药发现的重要源泉，自1981-2019上市的185个小分子抗癌药物中约85％的与天然产物有关。因此，基于天然产物寻找结构新颖、具有不同作用机制的抗肝癌活性分子具有重要意义。
蒿属(Artemisia)是菊科(Asteraceae)中分布最广、种类最多的一个属之一，全世界共 380余种。我国有186种，其中82个为特有种，遍布于全国各地。蒿属植物多为民间和传统的常用药材，例如黄花蒿(A.annua)、艾蒿(A.argyi)、茵陈(A.capillaris)、猪毛蒿(A.scoparia)、奇蒿(A.anomala)等，用于治疗疟疾、肝炎、癌症、湿疹、腹泻、瘀伤、风湿病等多种疾病。迄今为止，国内外学者已对260余种蒿属植物进行了较深入的化学成分研究，其结构类型涉及单萜、倍半萜及其二聚体、二萜、三萜、黄酮、甾醇等。其中倍半萜内酯类是蒿属植物的主要特征成分，其结构类型复杂多样，具有广泛的生物活性。
牛尾蒿(Artemisia dubia)为菊科蒿属多年生草本植物，为中国特有种。生于低海拔至3500 米地区的山坡、草原、疏林及林缘等地。分布于内蒙古、甘肃、四川、云南、西藏等地。味苦、微辛,性凉。清热,凉血,解毒,杀虫。主治急性热病,肺热咳嗽,咽喉肿痛,鼻蛆,血风疮,烧虫病。在本发明的前期工作中，发现牛尾蒿干燥地上部分的乙醇提取物对三株肝癌细胞(HepG 2,Huh7,SK-Hep-1)具有较强的细胞毒活性，进一步从中分离得到14个对三株肝癌细胞株具有细胞毒活性的倍半萜类化合物，牛尾蒿倍半萜内酯A-N(artemdubinoids A-N,1-14)。迄今，现有技术中无牛尾蒿倍半萜内酯A-N(artemdubinoids A-N,1-14)的报道，也没有其作为有效成分的药物组合物的报道，也没有该类化合物及其药物组合物在制备或治疗肝癌药物中的应用报道。
发明内容：
本发明的目的在于提供一类新的具有药用价值的式(I)所示的牛尾蒿倍半萜内酯A-N (artemdubinoids A-N,1-14)，及其制备方法和应用，含牛尾蒿倍半萜内酯A-N的药物组合物及其应用，该类化合物对肝癌细胞株具有明显的细胞毒活性，能够用于制备抗肝癌药物。
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
本发明提供了一系列倍半萜类化合物，牛尾蒿倍半萜内酯A-N(artemdubinoidsA-N, 1-14)，具有如下式(I)所示结构：
本发明提供了上述化合物1-14的制备方法，取牛尾蒿干燥地上部分粉碎，用10倍量的 90％乙醇冷浸提取两次，合并乙醇提取液并减压浓缩至无醇味，得到乙醇提取物，将提取物分散于水中，用乙酸乙酯萃取3次，得到乙酸乙酯萃取部分，乙酸乙酯萃取部分经硅胶柱层析，用丙酮-石油醚(2:98,5:95,10:90,20:80,30:70,50:50v/v)以及丙酮进行梯度洗脱得到7 个流分Fr.AD-1～Fr.AD-7；Fr.AD-2经经中压MCI CHP 20P柱层析，用水-甲醇(70:30, 50:50,30:70,10:90)梯度洗脱，得到4个组分Fr.AD-2-1-Fr.AD-2-4.Fr.AD-2-3经硅胶柱层析(乙酸乙酯-氯仿,10:90至30:70)得到3个流分Fr.AD-2-3-1～Fr.AD-2-3-3；Fr.AD-2-3-1 经Sephadex LH-20凝胶柱层析(甲醇-氯仿,50:50)和半制备HPLC(水-乙腈,55:45)纯化，得到化合物12和13；Fr.AD-2-3-2经Sephadex LH-20凝胶柱层析(甲醇-氯仿,50:50)和半制备HPLC(水-乙腈,35:65)纯化，得到化合物3和14；Fr.AD-2-3-3经SephadexLH-20凝胶柱层析(甲醇-氯仿,50:50)和半制备HPLC纯化，得到化合物6,7，10和11。
Fr.AD-3经经中压C18柱层析，用水-甲醇(50:50,30:70,10:90)梯度洗脱，得到3个组分Fr.AD-3-1-Fr.AD-3-3.Fr.AD-3-1经硅胶柱层析(丙酮-石油醚,10:90至30:70)得到4个流分Fr.AD-3-1-1～Fr.AD-3-1-4；Fr.AD-3-1-1经硅胶柱层析(乙酸乙酯-氯仿,10:90至20:80)得到化合物8和9.Fr.AD-3-1-2经Sephadex LH-20凝胶柱层析(甲醇-氯仿,50:50)和半制备HPLC纯化，得到化合物1,2,4和5。
本发明提供了上述化合物1-14任其一种或其任意组合在制备抗肝癌药物中的应用。本发明对所述应用的方法没有特殊的限定，选用本领域熟知的方法即可。
本发明同时还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括上述的式(I)化合物1-14的任其一种或其任意组合和药学上可接受的载体或赋型剂。
并此，还提供了所述的药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用。
当所述化合物1-14中的任其一种或其任意组合用于制备抗肝癌药物时，本发明优选将所述化合物1-14直接使用，或以药物组合物的形式使用。
本发明提供的药物组合物，包括上述化合物1-14中的任其一种或其任意组合和药学上可接受的载体。在本发明中，所述药学上可接受的载体优选为固体、半固体或液体稀释剂，填料以及药物制品辅剂。本发明对所述药学上可接受的载体没有特殊的限定，选用本领域熟知的、对人和动物无毒且惰性的药学上可接受的载体即可。
本发明对所述药物组合物的制备方法没有特殊的限定，直接将化合物1-14中的任其一种或其任意组合与药学上可接受的载体混合即可，本发明对所述混合的过程没有特殊的限定，选用本领域熟知的过程能够得到药物组合物即可。
本发明提供了上述技术方案所述药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用。本发明对所述应用的方法没有特殊的限定，选用本领域熟知的方法即可。
在本发明中，当所述药物组合物用于制备抗肝癌药物时，所述组合物在药物中的含量优选为0.1～99％；在所述药物组合物中，所述化合物1-14中的任其一种或其任意组合在药物组合物中的含量优选为0.5～90％。本发明的药物组合物优选以单位体重服用量的形式使用。在本发明中，所制备的药物优选可经注射(静注、肌注)和口服两种形式给药。
与现有技术相比，本发明具备如下的优益性：
1.本发明提供了一系列新的倍半萜类化合物，牛尾蒿倍半萜内酯A-N(artemdubinoids A-N,1-14)。
2.本发明提供了制备新化合物1-14的新的方法，该方法原料易得，易于操作，适于工业化生成。
3.本发明提供了新化合物1-14作为有效成分的药物组合物，为新的抗肝癌药物提供了具有较好药用作用的新的药物。
4.本发明的化合物1-14对三株肝癌细胞(HepG2,SK-HEP-1和Huh7)的细胞毒活性如表4所示，对于HepG2细胞,化合物3,9,10,13和14具有较强的细胞毒活性其IC50值分别为25.4,21.7,19.5,14.5和21.7μM,与阳性药物索拉非尼活性相当；对于Huh7细胞, 化合物3,6,7,10和13具有较强的细胞毒活性，其IC50值分别为29.8,27.0,25.7,18.2和 7.5μM；对于SK-Hep-1细胞,化合物6,7,10,13和14具有较强的细胞毒活性，其IC50值分别为34.7,36.2,14.5,8.9,和19.2μM。
5.从牛尾蒿中分离得到的化合物倍半萜牛尾蒿倍半萜内酯A-N可作为药物用于治疗肝癌相关的疾病。
附图说明：
图1为本发明化合物牛尾蒿倍半萜内酯A-N(artemdubinoids A-N,1-14)的结构式示意图；
图2化合物1的X-单晶衍射结构示意图；
图3化合物4的X-单晶衍射结构示意图；
图4化合物6的X-单晶衍射结构示意图；
图5化合物8的X-单晶衍射结构示意图。
具体实施方式：
为了更好地理解本发明的实质，下面结合附图，用本发明的试验例和实施例来进一步说明本发明倍半萜类化合物，牛尾蒿倍半萜内酯A-N(artemdubinoids A-N,1-14)及其制备方法、结构鉴定、药理作用，但不以此试验例和实施例来限定本发明。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
牛尾蒿倍半萜内酯A-N(artemdubinoids A-N)即化合物1-14的制备：
取牛尾蒿干燥地上部分20kg粉碎，用10倍量的90％乙醇冷浸提取两次，合并乙醇提取液并减压浓缩至无醇味，得到乙醇提取物，将提取物分散于水中，用乙酸乙酯萃取3次，得到乙酸乙酯萃取部分，乙酸乙酯萃取部分经硅胶柱层析，用丙酮-石油醚(2:98,5:95,10:90, 20:80,30:70,50:50v/v)以及丙酮进行梯度洗脱得到7个流分Fr.AD-1～Fr.AD-7；Fr.AD-2经经中压MCI CHP 20P柱层析，用水-甲醇(70:30,50:50,30:70,10:90)梯度洗脱，得到4个组分Fr.AD-2-1-Fr.AD-2-4.Fr.AD-2-3经硅胶柱层析(乙酸乙酯-氯仿,10:90至30:70)得到 3个流分Fr.AD-2-3-1～Fr.AD-2-3-3；Fr.AD-2-3-1经Sephadex LH-20凝胶柱层析(甲醇-氯仿,50:50)和半制备HPLC(水-乙腈,55:45)纯化，得到化合物12(13mg)和13(20mg)；Fr. AD-2-3-2经Sephadex LH-20凝胶柱层析(甲醇-氯仿,50:50)和半制备HPLC(水-乙腈, 35:65)纯化，得到化合物3(50mg)和14(11mg)；Fr.AD-2-3-3经Sephadex LH-20凝胶柱层析(甲醇-氯仿,50:50)和半制备HPLC纯化，得到化合物6(17mg),7(11mg),10(6mg)和 11(15mg)。
Fr.AD-3经经中压C18柱层析，用水-甲醇(50:50,30:70,10:90)梯度洗脱，得到3个组分Fr.AD-3-1-Fr.AD-3-3.Fr.AD-3-1经硅胶柱层析(丙酮-石油醚,10:90至30:70)得到4个流分Fr.AD-3-1-1～Fr.AD-3-1-4；Fr.AD-3-1-1经硅胶柱层析(乙酸乙酯-氯仿,10:90至20:80)得到化合物8(14mg)和9(3mg).Fr.AD-3-1-2经Sephadex LH-20凝胶柱层析(甲醇 -氯仿,50:50)和半制备HPLC纯化，得到化合物1(30mg),2(12mg),4(25mg)和5(13mg)。
化合物1-14的结构数据：
核磁共振图谱使用Avance III 600(Bruker,Switzerland)或AvanceIII HD 400 (Bruker,Bremerhaven,Germany)超导核磁共振仪测定，TMS(四甲基硅烷)作为内标。高分辨质谱分析采用岛津LC-MS-IT-TOF(Shimadzu,Kyoto,Japan)测定。红外光谱(IR)经KBr压片方法，通过NICOLET iS10型红外光谱仪(Thermo Fisher/>Madison,USA)测定。 ECD谱采用Chirascan型仪器(Applied Photophysics,Surrey,UK)测定。旋光经Autopol VI 旋光仪(Rudolph Research Analytical,Hackettstown,USA)测定。熔点用X-4B显微熔点仪来测定，该熔点仪购自上海精密科学仪器有限公司。薄层层析硅胶板HSGF254是烟台江友硅胶开发有限公司产品；柱层析硅胶(200～300目)为临沂市海祥化工有限公司生产；柱层析葡聚糖凝胶LH-20购自GE Healthcare Bio-Sciences AB公司。高效液相色谱仪为岛津公司生产，控制器型号是CBM-20A，泵型号是LC-20AR，检测器型号为SPD-M20A，柱温箱型号为AT-350，使用的色谱柱型号为Agilent-Eclipse XDB-C20(5μm,9.4×250mm)。色谱纯乙腈购自迈瑞达公司，去离子通道水通过MingCheTM-D 24UV MerkMillipore系统纯化而得。中压液相(Dr Flash-Ⅱ)为上海利穗公司产品，MCI柱日本三菱公司，型号为CHP-20P(75～150 μm)。分析纯甲醇和乙腈购自天津大茂化学试剂厂。显色剂为10％H2SO4-EtOH溶液。
牛尾蒿倍半萜内酯A (artemidubolide A，1)
分子式：C17H24O4
分子量：292.36
性状：斜方晶体
熔点：131～132℃
旋光：(c 0.104,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值m/z 293.1744[M+H]+,计算值m/z 293.1747[M+H]+。
IR(KBr)νmax:3436,1743,1715,1625,1373,1283,1179,1048cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):205(+0.19),226(+2.00)nm。
晶体数据：C15H20O4,M＝264.31,α＝ 90°,β＝112.2970(10)°,γ＝90°,/>T＝100.(2)K,space group P1211,Z＝2,μ(Cu Kα)＝0.727mm-1,晶体数据采用D8 QUEST型晶体衍射仪(铜靶)进行测定，总衍射次数为 14833,观测到4897次(Rint＝0.0319),(I>2σ(I)).wR(F2)＝0.0675(I>2σ(I)),R1＝0.0259,wR(F2) ＝0.0676,F2＝1.075.Flack parameter＝0.06(4).化合物1的晶体参数已存入剑桥晶体数据中心，提取号:CCDC 2142238.化合物1的X-单晶衍射结构见图2.
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和3。
牛尾蒿倍半萜内酯B(artemidubolide B,2)
分子式：C16H22O4
分子量：278.15
性状：白色粉末旋光：(c 0.11,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值279.1596[M+H]+,计算值C16H23O4,279.1591[M+H]+。 ECD(甲醇)λmax(Δε):205(–3.96),229(+11.65)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和3。
牛尾蒿倍半萜内酯C(artemidubolide C,3)
分子式：C23H32O4
分子量：372.23
性状：无色油状物旋光：(c 0.10,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值417.2287[M+HCOO]-,计算值417.2283[M+HCOO]-。 IR(KBr)νmax:3439,1758,1706,1266,1218,1099cm-1。
ECD(甲醇)λmax 216(+1.89)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和3。
牛尾蒿倍半萜内酯D(artemidubolide D,4)
分子式：C15H20O4
分子量：264.14
性状：斜方晶体
旋光：(c 0.11,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值287.1242[M+H]+,计算值287.1254[M+H]+。
IR(KBr)νmax:1771,1699,1648,1383,1260,1211,1079cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):243(+0.36)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和3。
晶体数据：C15H20O4,M＝264.31,α＝ 90°,β＝112.2970(10)°,γ＝90°,/>T＝100.(2)K,space group P1211,Z＝2,μ(Cu Kα)＝0.727mm-1,晶体数据采用D8 QUEST型晶体衍射仪(铜靶)进行测定，总衍射次数为 14833,观测到4897次(Rint＝0.0319),(I>2σ(I)).wR(F2)＝0.0675(I>2σ(I)),R1＝0.0259,wR(F2) ＝0.0676,F2＝1.075.Flack parameter＝0.06(4).化合物4的晶体参数已存入剑桥晶体数据中心，提取号:CCDC 2142238.
牛尾蒿倍半萜内酯E(artemidubolide E,5)
分子式：C15H20O5
分子量：280.13
性状：白色无定型粉末
旋光：(c 0.10,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值325.1284[M+HCOO]-,计算值325.1293[M+HCOO]-。
IRνmax:3433,1770,1707,1651,1383,1262,1210,1052cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):210(+5.99)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和3。
牛尾蒿倍半萜内酯F(artemidubolide F,6)
分子式：C15H19O4Cl
分子量：298.10
性状：斜方晶体
旋光：(c 0.12,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值m/z 321.0852[M+Na]+,计算值m/z 321.0864[M+Na]+。
IRνmax:3346,1763,1634,1381,1288,1196,1072cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):195(–369)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和3。
晶体数据：C15H19O4Cl,M＝298.75,α＝ 90°,β＝90°,γ＝90°,/>T＝101.(2)K,晶体尺寸P212121,Z＝4,μ(Cu Kα)＝ 2.390mm-1,晶体数据采用D8 QUEST型晶体衍射仪(铜靶)进行测定，总衍射次数为13784, 观测到2886次(Rint＝0.0358),(I>2σ(I)).wR(F2)＝0.0681(I>2σ(I)),R1＝0.0269(all data). wR(F2)＝0.0684,F2＝1.057.Flack parameter＝0.054(6).化合物6的晶体参数已存入剑桥晶体数据中心，提取号:CCDC 2142233.化合物6的X-单晶衍射结构见图5.
牛尾蒿倍半萜内酯G(artemidubolide G,7)
分子式：C15H19O4Cl
分子量：298.10
性状：白色无定型粉末
旋光：(c 0.08,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值321.0853[M+Na]+,计算值321.0864[M+Na]+。
IR(KBr)νmax:3426,1758,1634,1384,1263,1202,1072cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε)195(+12.89)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表1和3。
牛尾蒿倍半萜内酯H(artemidubolide H,8)
分子式：C15H21O3Cl
分子量：284.12
性状：单斜晶体
旋光：(c 0.09,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值m/z 285.1272[M+H]+,计算值285.1252[M+H]+。
IRνmax:3495,1753,1378,1261,1219,1042cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):204(+12.46),222(+16.49)nm。
晶体数据：C15H21O3Cl,M＝284.77,α＝90°,β＝90°,γ＝90°,/>T＝100.(2)K,晶体尺寸P212121,Z＝4,μ(Cu Kα)＝ 2.401mm-1,晶体数据采用D8 QUEST型晶体衍射仪(铜靶)进行测定，总衍射次数为11866, 观测到2761次(Rint＝0.0475,(I>2σ(I)).wR(F2)＝0.0803(I>2σ(I)).R1＝0.0323.wR(F2)＝ 0.0805,F2＝1.096.Flack parameter＝0.089(7).化合物8的晶体参数已存入剑桥晶体数据中心，提取号:CCDC 2142712.化合物8的X-单晶衍射结构见图5.
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和3。
牛尾蒿倍半萜内酯I(artemidubolide I,9)
分子式：C15H19O3Cl
分子量：282.10
性状：白色无定型粉末
旋光：(c 0.10,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值m/z 283.1121[M+H]+,计算值m/z 283.1095[M+H]+。
IRνmax:3435,1764,1640,1384,1261,1227,1057cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):224(+0.74)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和3。
牛尾蒿倍半萜内酯J(artemidubolide J,10)
分子式：C15H19O4Cl
分子量：298.10
性状：白色无定型粉末
旋光：(c 0.11,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值299.1057[M+H]+,计算值299.1045[M+H]+。
IRνmax:3432,1759,1635,1379,1259,1218,1082cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):224(+0.79)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和3。
牛尾蒿倍半萜内酯K(artemidubolide K,11)
分子式：C15H19O4Cl
分子量：298.10
性状：白色粉末
旋光：(c 0.10,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值m/z 299.1060[M+H]+,计算值m/z 299.1045[M+H]+。 IR(KBr)νmax:3424,1759,1633,1382,1261,1203,1082cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):224(+0.74)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和3。
牛尾蒿倍半萜内酯L(artemidubolide L,12)
分子式：C16H20O3
分子量：260.14
性状：白色无定型粉末
旋光：(c 0.10,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值m/z 261.1110[M+H]+,计算值m/z 261.1121[M+H]+。 IR(KBr)νmax:1765,1667,1648,1281,1246,1073cm-1。
ECD(甲醇)λmax 234(–12.25)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和3。
牛尾蒿倍半萜内酯M(artemidubolide M,13)
分子式：C16H20O3
分子量：260.14
性状：白色无定型粉末
旋光：(c 0.09,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值m/z 261.1409[M+H]+,计算值m/z 261.1407[M+H]+。 IR(KBr)νmax:1767,1648,1437,1254,1224,1066cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):229(+13.15)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和3。
牛尾蒿倍半萜内酯N(artemidubolide N,14)
分子式：C15H20O3
分子量：248.14
性状：白色无定型粉末
旋光：(c 0.10,甲醇)
HRESIMS(+)m/z:实验值m/z 249.1494[M+H]+,计算值m/z 249.1485[M+H]+。 IR(KBr)νmax:3436,1758,1664,1376,1264,1228,1110cm-1。
ECD(甲醇)λmax(Δε):195(+8.86)nm。
1H NMR和13C NMR(DEPT)数据见表2和3。
/>
/>
实施例2：
化合物1-14对三株肝癌细胞株的细胞毒活性。
1.材料和方法
1.1材料
HepG2细胞株由中国科学院昆明植物研究所活性筛选中心赠予，SK-Hep-1和Huh7细胞株购自上海纪宁生物科技有限公司；培养基(Dulbecco's Modified Eagle Medium,DMEM)购自 Thermo Fisher Scientific(苏州，中国)；血清(fetal bovine serum,FBS)购自Life Technologies(NY,USA)；RPMI-1640购自ThermoFisher Biochemical Products(北京，中国)。
1.2仪器
Flex Station 3台式多功能酶标仪(Bio-RAD 680,美国)；分析天平(AG135,Metler Toledo，中国)；恒温箱(DHP-9082,上海)。
1.3实验过程
1).取对数期生长的肝癌细胞，弃去旧培养基，用PBS清洗两遍，弃去PBS；
2).用0.25％的胰蛋白酶消化细胞，在显微镜下观察到细胞轮廓加深并有变圆趋势时，迅速吸去胰蛋白酶；
3)用含10％FBS的DMEM完全培养基终止消化并重悬细胞，取10μL细胞悬液，用细胞计数仪计数，并用培养基调整细胞浓度至1×104/mL，接种在96孔板上，每孔加入100μL细胞悬液，在37℃，5％CO2的培养箱中孵育24h，使细胞贴壁；
4).吸去培养基，将稀释好的样品加入板中，每孔加入100μL，每个浓度设置3个复孔，培养箱中继续孵育48h；
5).吸去培养基，加入配好的MTT溶液(1mg/mL)，每孔加入100μL，培养箱中孵育4h；
6).吸去MTT溶液，加入DMSO，每孔加入100μL，培养箱中孵育10min；
7).使用酶标仪在490nm波长下测量吸光度值，通过公式：抑制率＝(阴性－实验组)/(阴性－空白组)×100％计算细胞抑制率，并用统计软件GraphPad prism 5计算IC50，实验重复3次。
2.结果
化合物1-14对三株肝癌细胞(HepG2,SK-HEP-1和Huh7)的细胞毒活性如表4所示，对于HepG2细胞,化合物3,9,10,13和14具有较强的细胞毒活性其IC50值分别为25.4, 21.7,19.5,14.5和21.7μM,与阳性药物索拉非尼活性相当。
对于Huh7细胞,化合物3,6,7,10和13具有较强的细胞毒活性，其IC50值分别为29.8,27.0,25.7,18.2和7.5μM。
对于SK-Hep-1细胞,化合物6,7,10,13和14具有较强的细胞毒活性，其IC50值分别为34.7,36.2,14.5,8.9,和19.2μM。
表4.化合物1-14对三株肝癌细胞的细胞毒活性结果
a数值表示为IC50±SD
3.结论
实验结果显示，化合物1-14对三株肝癌细胞(HepG2,SK-HEP-1和Huh7)的细胞毒活性如表4所示，化合物1-14对三株肝癌细胞(HepG2,SK-HEP-1和Huh7)的细胞毒活性如表4所示，对于HepG2细胞,化合物3,9,10,13和14具有较强的细胞毒活性其IC50值分别为25.4,21.7,19.5,14.5和21.7μM,与阳性药物索拉非尼活性相当。对于Huh7细胞, 化合物3,6,7,10和13具有较强的细胞毒活性，其IC50值分别为29.8,27.0,25.7,18.2和 7.5μM。对于SK-Hep-1细胞,化合物6,7,10,13和14具有较强的细胞毒活性，其IC50值分别为34.7,36.2,14.5,8.9,和19.2μM。以上结果表明牛尾蒿中分离得到的化合物1-14可作为药物用于肝癌相关的疾病。
制剂实施例：
在以下制剂实施例中，选择常规试剂，并按照现有常规方法进行制剂制备，本制剂实施例仅体现本发明所述化合物1-14中的至少一种能够制备成不同的制剂，对具体试剂和操作不作具体限定：
1.片剂：化合物1-14中的至少一种10mg，乳糖180mg，淀粉55mg，硬脂酸镁5mg。
制备方法：将化合物1-14中的至少一种、乳糖和淀粉混和，用水均匀湿润、把湿润后的混合物过筛并干燥，再过筛，加入硬脂酸镁，然后将混合物压片，每片重250mg，化合物含量为10mg。
2.安瓿剂：化合物1-14中的至少一种，氯化钠10mg。
制备方法：将化合物1-14中的至少一种和氯化钠溶解于适量的注射用水中，过滤所得溶液，在无菌条件下装入安瓿瓶中。
3.注射用冻干剂：化合物1-14中的至少一种10mg，碳酸氢钠2mg，甘露醇252mg。
制备方法：将碳酸氢钠、甘露醇，加注射用水溶解，加活性碳吸附30min除热原，过滤除去活性碳，在滤液中加入化合物1-14中的至少一种，超声处理使溶解，用1N盐酸调节pH为5.0-7.0，微孔滤膜滤过，加注射用水，分装，冷冻干燥，上塞，轧盖，即得。
4.胶囊剂：化合物1-14中的至少一种10mg，乳糖187mg，硬脂酸镁3mg。
制备方法：将化合物1-14中的至少一种与助溶剂混和，过筛，均匀混合，把得到的混合物装入硬明胶胶囊，每个胶囊重200mg，活性成分含量为10mg。
5.将本发明化合物1-14中的至少一种，用DMSO溶解后，按常规方法加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液，所述注射液的浓度为0.5～5mg/mL。
6.将本发明化合物1-14中的至少一种，用DMSO溶解后，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使其溶解，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封，得粉针剂。
7.将本发明化合物1-14中的至少一种，按其与赋形剂质量比为9:1的比例加入赋形剂，制成粉剂。
8.将本发明化合物1-14中的至少一种，按其与赋形剂质量比为5:1的比例加入赋形剂，制粒压片。
9.将本发明化合物1-14中的至少一种，按常规口服液制备方法制成口服液。
10.将本发明化合物1-14中的至少一种，按其与赋形剂质量比为5:1的比例加入赋形剂，制成胶囊。
11.将本发明化合物1-14中的至少一种，按其与赋形剂质量比为5:1的比例加入赋形剂，制成颗粒剂。
由以上实施例可知，本发明提供了一种牛尾蒿中化合物及其制备方法和应用，药物组合物及其应用。本发明提供的牛尾蒿倍半萜内酯，主要包括14种新颖结构的化合物，这些化合物对肝癌细胞具有不同程度的细胞毒活性，能够与可药用载体组成药物组合物，能够用于制备抗肝癌药物。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.结构式(I)所示的牛尾蒿倍半萜内酯化合物1、3-11、13、14，
2.权利要求1所述的式(I)牛尾蒿倍半萜内酯化合物1、3-11、13、14的制备方法，该方法包括以下步骤：取牛尾蒿干燥地上部分粉碎，用10倍量的90％乙醇冷浸提取两次，合并乙醇提取液并减压浓缩至无醇味，得到乙醇提取物，将提取物分散于水中，用乙酸乙酯萃取3次，得到乙酸乙酯萃取部分，乙酸乙酯萃取部分经硅胶柱层析，用丙酮-石油醚2:98,5:95,10:90,20:80,30:70,50:50v/v以及丙酮进行梯度洗脱得到7个流分Fr.AD-1～Fr.AD-7；Fr.AD-2经中压MCI CHP 20P柱层析，用水-甲醇70:30,50:50,30:70,10:90梯度洗脱，得到4个组分Fr.AD-2-1-Fr.AD-2-4.Fr.AD-2-3经硅胶柱层析，乙酸乙酯-氯仿10:90至30:70洗脱得到3个流分Fr.AD-2-3-1～Fr.AD-2-3-3；Fr.AD-2-3-1经Sephadex LH-20凝胶柱层析，甲醇-氯仿50:50和半制备HPLC，水-乙腈55:45纯化，得到化合物13；Fr.AD-2-3-2经Sephadex LH-20凝胶柱层析，甲醇-氯仿50:50和半制备HPLC，水-乙腈35:65纯化，得到化合物3和14；Fr.AD-2-3-3经Sephadex LH-20凝胶柱层析，甲醇-氯仿50:50和半制备HPLC纯化，得到化合物6,7,10和11；Fr.AD-3经经中压C18柱层析，用水-甲醇50:50,30:70,10:90梯度洗脱，得到3个组分Fr.AD-3-1-Fr.AD-3-3.Fr.AD-3-1经硅胶柱层析，丙酮-石油醚10:90至30:70洗脱得到4个流分Fr.AD-3-1-1～Fr.AD-3-1-4；Fr.AD-3-1-1经硅胶柱层析，乙酸乙酯-氯仿10:90至20:80得到化合物8和9.Fr.AD-3-1-2经Sephadex LH-20凝胶柱层析，甲醇-氯仿50:50和半制备HPLC纯化，得到化合物1,4和5。
3.权利要求1所述的式(I)牛尾蒿倍半萜内酯化合物1、3-11、13、14任其一种或其任意组合在制备抗肝癌药物中的应用。
4.包括权利要求1所述的式(I)牛尾蒿倍半萜内酯化合物1、3-11、13、14的任其一种或其任意组合和可药用载体的药物组合物。
5.权利要求4所述的药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用。
6.权利要求4所述的药物组合物的制备方法，该方法包括以下步骤：取牛尾蒿干燥地上部分粉碎，用10倍量的90％乙醇冷浸提取两次，合并乙醇提取液并减压浓缩至无醇味，得到乙醇提取物，将提取物分散于水中，用乙酸乙酯萃取3次，得到乙酸乙酯萃取部分，乙酸乙酯萃取部分经硅胶柱层析，用丙酮-石油醚2:98,5:95,10:90,20:80,30:70,50:50v/v以及丙酮进行梯度洗脱得到7个流分Fr.AD-1～Fr.AD-7；Fr.AD-2经中压MCI CHP 20P柱层析，用水-甲醇70:30,50:50,30:70,10:90梯度洗脱，得到4个组分Fr.AD-2-1-Fr.AD-2-4.Fr.AD-2-3经硅胶柱层析，乙酸乙酯-氯仿10:90至30:70洗脱得到3个流分Fr.AD-2-3-1～Fr.AD-2-3-3；Fr.AD-2-3-1经Sephadex LH-20凝胶柱层析，甲醇-氯仿50:50和半制备HPLC，水-乙腈55:45纯化，得到化合物13；Fr.AD-2-3-2经Sephadex LH-20凝胶柱层析，甲醇-氯仿50:50和半制备HPLC，水-乙腈35:65纯化，得到化合物3和14；Fr.AD-2-3-3经Sephadex LH-20凝胶柱层析，甲醇-氯仿50:50和半制备HPLC纯化，得到化合物6,7,10和11；Fr.AD-3经经中压C18柱层析，用水-甲醇50:50,30:70,10:90梯度洗脱，得到3个组分Fr.AD-3-1-Fr.AD-3-3.Fr.AD-3-1经硅胶柱层析，丙酮-石油醚10:90至30:70洗脱得到4个流分Fr.AD-3-1-1～Fr.AD-3-1-4；Fr.AD-3-1-1经硅胶柱层析，乙酸乙酯-氯仿10:90至20:80得到化合物8和9.Fr.AD-3-1-2经Sephadex LH-20凝胶柱层析，甲醇-氯仿50:50和半制备HPLC纯化，得到化合物1,4和5，然后取化合物1、3-11、13、14任意一种或其任意组合，加入可药用载体。
CN202211517276.8A 2022-11-30 2022-11-30 牛尾蒿倍半萜内酯a-n及其药物组合物和其制备方法与应用 Active CN115745933B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211517276.8A CN115745933B (zh) 2022-11-30 2022-11-30 牛尾蒿倍半萜内酯a-n及其药物组合物和其制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211517276.8A CN115745933B (zh) 2022-11-30 2022-11-30 牛尾蒿倍半萜内酯a-n及其药物组合物和其制备方法与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN115745933A CN115745933A (zh) 2023-03-07
CN115745933B true CN115745933B (zh) 2024-01-12

Family

ID=85340924

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211517276.8A Active CN115745933B (zh) 2022-11-30 2022-11-30 牛尾蒿倍半萜内酯a-n及其药物组合物和其制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115745933B (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114524825A (zh) * 2022-03-04 2022-05-24 中国科学院昆明植物研究所 牛尾蒿内酯a-t及其药物组合物和其制备方法与应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114524825A (zh) * 2022-03-04 2022-05-24 中国科学院昆明植物研究所 牛尾蒿内酯a-t及其药物组合物和其制备方法与应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Liu, Weilong,et al.A-Total Syntheses of Paraconic Acids and 1,10-seco-Guaianolides via a Barbier Allylation/Translactonization Cascade of 3-(Bromomethyl)-2(5H)-furanone.《Organic Letters》.2021,第23卷(第3期),第969-973页. *
New guaiane-type sesquiterpenoid dimers from Artemisia atrovirens and their antihepatoma activity;Su, Lihua, et al;《Acta Pharmaceutica Sinica B》;第11卷(第6期);第1648-1666页 *
Polyol Monoterpenes and Sesquiterpene Lactones from the Pacific Northwest Plant Artemisia suksdorfii;Ahmed, Ahmed A., et al;《Journal of Natural Products》;第67卷(第10期);第1705-1710页 *
Sesquiterpenes from Artemisia argyi: absolute configurations and biological activities;Wang, Shu，et al;《European Journal of Organic Chemistry》;第5卷;第973-983页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN115745933A (zh) 2023-03-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112225746B (zh) 暗绿蒿内酯a-r及其药物组合物和应用
CN114524825B (zh) 牛尾蒿内酯a-t及其药物组合物和其制备方法与应用
CN111635380B (zh) 野艾蒿中倍半萜及其药物组合物与其制备方法和应用
CN113527324B (zh) 暗绿蒿烯内酯a-l及其药物组合物和其应用
CN105943532A (zh) 一种二萜类化合物在制备治疗肝癌的药物中的应用
CN104370871B (zh) 从紫红獐牙菜中分离的口山酮类及抑制乙型肝炎病毒的应用
CN115010720B (zh) 中甸艾中倍半萜二聚体及其药物组合物与其制备方法和应用
CN106008543A (zh) 一种新的二萜类化合物及其制备方法
CN115785041B (zh) 白叶蒿内酯a-l及其药物组合物和其制备方法与应用
CN101612183B (zh) 一种乌骨藤皂苷提取物、药物组合物、制备方法及其应用
CN115894418B (zh) 蒙古蒿内酯a-f及其药物组合物和其制备方法与应用
CN115745933B (zh) 牛尾蒿倍半萜内酯a-n及其药物组合物和其制备方法与应用
CN114957190B (zh) 南牡蒿素及其药物组合物和其制备方法与应用
CN114874170B (zh) 多花蒿内酯a-j及其药物组合物与其制备方法和应用
CN112062738B (zh) 暗绿蒿醇a-b及其药物组合物和其制备方法与应用
CN113185562B (zh) 暗绿蒿素a-p及其药物组合物与其制备方法和应用
CN117209462B (zh) 白莲蒿内酯a-u及其药物组合物和其制备方法与应用
CN116589474B (zh) 魁蒿烯内酯a-f及其药物组合物和其制备方法与应用
CN116874544B (zh) 化合物Artemeriosides A-F及其药物组合物和其制备方法
CN116478176B (zh) 蒙古蒿素a–k及其药物组合物和其制备方法与应用
CN116621800B (zh) 黄花蒿醇a-c及其药物组合物和其制备方法与应用
CN115490660B (zh) 南牡蒿内酯a-d及其药物组合物和其应用
CN105106254A (zh) 一种抗流感病毒的珍珠菜提取物
CN116284036A (zh) 魁蒿内酯a,b,d−p及其药物组合物和其制备方法与应用
CN114507265B (zh) 一种植物药百两金中的新单萜苷化合物及其提取分离方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant