发明内容
本发明旨在提供一种主要成分明确且含量高的乌骨藤皂苷提取物及其制备方法,及其在抗肿瘤方面的用途。
本发明提供了一种含乌骨藤皂苷提取物的药物组合物及其在抗肿瘤方面的用途。
本发明还提供了乌骨藤皂苷的活性成分乌骨藤皂苷A、B、D或H单体的制备及分析检测方法。
本发明另外提供了一种乌骨藤皂苷提取物,其中乌骨藤皂苷A、B、D或H中的一种或几种为主要成分,其中按重量百分含量计,乌骨藤皂苷A、B、D或H的一种或几种的总含量为50-100%。
本发明提供的乌骨藤皂苷提取物,按重量百分含量计,乌骨藤皂苷A和H的比例约为1∶0.2~5,优选地约为1∶0.5~4,更优选地约为1∶1.6~2.5。进一步地,本发明的乌骨藤皂苷提取物,按重量百分含量计,其中A∶B∶D∶H约为1∶0.1~2∶0.2~5∶0.2~5,优选地A∶B∶D∶H约为1∶0.25~1.5∶0.5~4∶0.5~4;更优选地A∶B∶D∶H约为1∶0.8~1.2∶1.5~2.5∶ 1.6~2.5,最优选地A∶B∶D∶H约为1∶1∶2∶2。
本发明提供的制备上述乌骨藤皂苷提取物的方法,包括以下步骤:
(1)取乌骨藤药材,加入溶剂提取1~4次,每次1~3小时,合并提取液,浓缩至一定体积;
(2)取浓缩液,加入有机溶剂进行多次液-液萃取,使乌骨藤皂苷充分转移至有机层中,合并有机层,浓缩至稠膏状;
(3)将上述稠膏状粗提物加有机溶剂溶解,过滤,滤液过氧化铝层析柱,并加有机溶剂洗脱,薄层监测,收集、合并含乌骨藤皂苷的流份,浓缩至干,即得乌骨藤皂苷粗品(a);
(4)将乌骨藤皂苷粗品(a)溶于水中,过滤,滤液过由聚酰胺-大孔树脂串联的层析柱,水充分洗脱后,加有机溶剂解析大孔树脂上富集的皂苷类成分,浓缩,干燥,即得乌骨藤皂苷粗品(b);
(5)将乌骨藤皂苷粗品(b)溶于有机溶剂中,过硅胶层析柱并加有机溶剂洗脱,收集皂苷部分,浓缩,干燥,即得乌骨藤皂苷精制品(c);
(6)将上述乌骨藤皂苷精制品(c)加入到适量溶剂中,加热使溶解,过滤,静置,结晶,过滤,干燥,得到以乌骨藤皂苷A、B、D或H中一种或几种为主成分的乌骨藤皂苷提取物(d)。
上述步骤(1)中,所述的提取溶剂可以选自水、甲醇、丙酮或1%-95%的乙醇中的一种或几种,优选为60%-80%的乙醇,最优选为75%乙醇,对皂苷的提取率较高,确保了药材资源的充分利用;步骤(2)中,萃取所用的溶剂可以为乙酸乙酯、正丁醇、氯仿等,优选为正丁醇、乙酸乙酯;步骤(3)中,所述的有机溶剂为乙酸乙酯、甲醇、丙酮、乙醇、石油醚,优选为乙酸乙酯。所用的氧化铝可以为中性氧化铝、酸性氧化铝或碱性氧化铝,优选为中性氧化铝。
步骤(4)中,聚酰胺的作用在于选择性好,研究表明聚酰胺虽然不吸附乌骨藤的活性皂苷成分,但却能选择吸附其中的其它有机酸、色素杂质,利用这一特征对本品进行纯化,可使含量进一步提高,尤其在脱色除杂方面,起到显著的作用。同时,此步骤串联使用的大孔树脂又能选择性吸附住有效皂苷类成分,同时对多糖等杂质不吸附,可再利用这一特征,通过水洗脱去除多糖等大极性杂质,对本品进行了进一步的纯化除杂。在此步骤中,选择了两种不同性质的层析材料并巧妙的采用串联方法使用,达到了乌骨藤活性皂苷类成分的进一步富集和纯化,为本品制备工序中的核心部分。
步骤(4)中所用的聚酰胺可以为多种不同的目数,如10~30目、60~100目、200~300目等,优选为60~100目的聚酰胺。其中所用的大孔树脂型号可为HPD100、HPD400、HPD600、 AB-8、D101、D1300,优选树脂型号为HPD-100大孔树脂。有机溶剂可为甲醇、乙醇、丙酮或水中的一种或几种,优选5%-95%的乙醇。
步骤(5)中,所述的有机溶剂选自丙酮、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、石油醚中的一种或多种,优选为单一溶剂,最优选为乙酸乙酯。选用单一溶剂进行洗脱,而不是采用混合溶剂的梯度洗脱,不但为实现工业化生产提供了保证,而且同样取得了很好的效果,在洗脱过程中,少量的非皂苷类成分可被先行洗脱,从而有效分离,而样品中的残存少量色素类成分基本都被死吸附在硅胶上,无法洗脱,从而达到有效分离;所选用的硅胶目数可以为100~200目和200~300目,优选100~200目,不但分离速度快,效率高,而且纯化效果也较好。
步骤(6)中,结晶溶剂优选为乙醇-水(1∶1)的混合溶剂。本步骤中通过结晶,可以进一步纯化乌骨藤皂苷,从而得到成为组分明确,比例适当的乌骨藤皂苷提取物。
本发明提供的制备乌骨藤皂苷A、B、D或H单体的制备方法,包括以下步骤:
将步骤(5)中的乌骨藤皂苷精制品加入到异丙醚-丙酮(5∶1)的混合溶剂中,加热使溶解,过滤,静置,结晶,过滤结晶,干燥,继续通过ODS硅胶柱,60%乙醇洗脱,可以得到含量为98%~99.8%的乌骨藤皂苷A。
将步骤(5)中的乌骨藤皂苷精制品加入到异丙醚-乙醇(2∶1)的混合溶剂中,加热使溶解,过滤,静置,结晶,过滤结晶,干燥,继续通过ODS硅胶柱,40%乙醇洗脱,可以得到含量为98%~99.5%的乌骨藤皂苷B。
将步骤(5)中的乌骨藤皂苷精制品加入到异丙醚-乙醇(1∶2)的混合溶剂中,加热使溶解,过滤,静置,结晶,过滤结晶,干燥,继续通过ODS硅胶柱,40%乙醇洗脱,可以得到含量为98%~99.5%的乌骨藤皂苷D。
将步骤(5)中的乌骨藤皂苷精制品加入到甲醇-水(3∶1)的混合溶剂中,加热使溶解,过滤,静置,结晶,过滤结晶,干燥,继续通过ODS硅胶柱,50%乙醇洗脱,可以得到含量为98%~99.5%的乌骨藤皂苷H。
对于本领域的技术人员而言,要获得本发明所述的乌骨藤皂苷提取物,可通过上述六个步骤得到;也可以将乌骨藤皂苷提取物加适量的A、B、D或H的单体混合得到;也可以直接按比例将相应单体混合得到。
本发明所述的乌骨藤皂苷A(Tenacissoside A)结构式为C48H74O19;乌骨藤皂苷B(Tenacissoside B)的结构式为C51H78O19;乌骨藤皂苷D(Tenacissoside D)的结构式为 C51H80O19;乌骨藤皂苷H(Marsdenoside H)的结构式为C48H76O19;其中,文献“phytochemistry,25(12),2861-2865,1986”中公开了乌骨藤皂苷A、B、D的光谱数据,文献“phytochemistry,66(9),1040-1051,2005”中公开了乌骨藤皂苷H的光谱数据。乌骨藤皂苷A、B、D、H分别具有如下的结构式:
乌骨藤皂苷A(Tenacissoside A)的结构式
乌骨藤皂苷B(Tenacissoside B)的结构式
乌骨藤皂苷D(Tenacissoside D)的结构式
乌骨藤皂苷H(Marsdenoside H)的结构式
本发明还提供了一种含乌骨藤皂苷提取物的药物组合物。它包含治疗有效量的乌骨藤皂苷提取物和一种或多种药学上可接受的载体或赋型剂。可采用本领域公知的方法来制备本发明的药物组合物,合适的药物组合物包括片剂、胶囊、软胶囊、糖浆、颗粒、口服液、咀嚼片、滴丸、粉针或注射液等,优选注射液、片剂、胶囊。本发明的乌骨藤皂苷提取物的有效剂量范围为约0.05-500mg/kg/天。为了说明本发明乌骨藤皂苷提取物的抗肿瘤活性,选择了来源于上皮组织的肺癌和肝癌以及来源于间叶组织的肉瘤,对其进行了抗肿瘤活性的研究,实验结果表明本发明提供的乌骨藤皂苷提取物具有确切的抗肿瘤活性。
本发明与现有技术相比,具有以下显著的效果:
(1)本发明提供的乌骨藤皂苷提取物成分明确,以乌骨藤皂苷A、B、D、H其中一种或几种为主要活性成分,从而明确建立了乌骨藤皂苷提取物的科学而客观的指标,使其质量稳定、可控。药效实验证明,本发明制得的乌骨藤皂苷提取物药效确切,在抗肿瘤方面具有显著活性,而且毒副作用较小。因此开发本发明提供的乌骨藤皂苷提取物具有非常高的价值。
(2)本发明提供的乌骨藤皂苷提取物的制备方法,解决了乌骨藤皂苷成分难以分离的缺憾,制得的皂苷提取物中杂质少,皂苷含量高,主要成分结构明确,水溶性好。且本发明的制备工艺经多批生产验证,证明其重复性、稳定性好,乌骨藤药材的资源利用率高,提取物的得率高,适合工业化生产。
(3)本发明提供的制备乌骨藤皂苷单体的方法不但为质量控制和结构分析提供了保证,采用HPLC对有效成分的进行含量测定从而更好地控制产品的内在质量。而且也克服了乌骨藤皂苷单体只能在实验室微量制备的缺点,从根本上解决了乌骨藤皂苷单体大规模产业化生产的问题。
具体实施方式
通过下述实施例将有助于理解本发明,但并不限制本发明的内容。
实施例中,所用的水为纯化水,所用乙醇为药用级,其他溶媒均为分析纯,分离材料为层析用级别。乌骨藤药材产地为云南和贵州;提取物中乌骨藤皂苷的含量测定采用高效液相色谱(HPLC)法,乌骨藤皂苷A、B、D、H对照品均为自制品,纯度大于98%;液相条件为:
流动相:乙腈∶水=36∶64
检测器:蒸发光散射检测器
流速:0.8毫升/分钟
色谱柱:C18柱,250cm×4.6mm,粒径5μm
柱温:30℃
乌骨藤皂苷提取物中乌骨藤皂苷A、B、D、H的含量测定方法:
供试品溶液的制备:精密称取乌骨藤皂苷提取物20.0mg,以甲醇溶解转移至100mL容量瓶并定容至刻度,作为供试品溶液。
对照品溶液的制备:分别取乌骨藤皂苷A、B、D、H各20.0mg,精密称定,加甲醇制成每1ml含200μg的溶液,即得。
分别精密吸取20μL对照品和供试品溶液,注入高效液相色谱仪,测定。
实施例一
取乌骨藤药材100kg,粉碎切成粗粉,装入热回流提取罐,加8倍量的75%乙醇,加热回流提取3次,每次2h,放出提取液,合并,过滤,滤液浓缩至20L,分别加入等体积乙酸乙酯萃取3次,合并乙酸乙酯液,浓缩至稠膏状再加入乙酸乙酯50L加热使溶解,过滤,滤液过中性氧化铝柱,并加50L乙酸乙酯洗脱,薄层监测,收集乌骨藤皂苷部分,并浓缩至干,得乌骨藤皂苷粗品(a)3.2kg。
取粗品(a),加水100L,搅拌使溶解,板框过滤,滤液过由聚酰胺(100~200目,20L)-大孔树脂(HPD-100,100L)串联的层析柱,水充分洗脱后,解除串联,加70%乙醇解析大孔树脂上富集的皂苷类成分,收集乙醇洗脱液,浓缩,干燥,即得乌骨藤皂苷粗品(b)1.9kg。
将乌骨藤皂苷粗品(b)溶于20L乙酸乙酯中,过滤,滤液过硅胶层析柱,加乙酸乙酯20L洗脱,收集皂苷部分,浓缩,干燥,即得乌骨藤皂苷精制品(c)1.4kg。
将上述乌骨藤皂苷(c)加入到7L乙醇-水(1∶1)的混合溶剂中,加热至回流使溶解, 过滤,滤液静置,结晶,过滤结晶,干燥,得到以乌骨藤皂苷A、B、D、H为主成分高纯度的乌骨藤皂苷提取物(d)1.1kg。
经高效液相色谱法含量测定,本品中乌骨藤皂苷A、B、D、H的含量分别为16.5%、15.8%、32.1%、31.2%。
实施例二
取乌骨藤药材100kg,粉碎切成粗粉,装入提取罐中,加10倍量的水加热回流提取3次,每次2.5h,放出提取液,合并,过滤,滤液浓缩至50L,分别加入等体积乙酸乙酯萃取3次,合并乙酸乙酯液,浓缩至稠膏状再加入乙酸乙酯50L加热使溶解,过滤,滤液过中性氧化铝柱,并加50L乙酸乙酯洗脱,薄层监测,收集乌骨藤皂苷部分,并浓缩至干,得乌骨藤皂苷粗品(a)2.6kg。
取粗品(a),加水200L,搅拌使溶解,板框过滤,滤液过由聚酰胺(100~200目,40L)-大孔树脂(HPD-600,150L)串联的层析柱,水充分洗脱后,解除串联,加95%乙醇解析大孔树脂上富集的皂苷类成分,收集乙醇洗脱液,浓缩,干燥,即得乌骨藤皂苷粗品(b)1.4kg。
将乌骨藤皂苷粗品(b)溶于15L乙酸乙酯中,过滤,滤液过硅胶层析柱,加乙酸乙酯15L洗脱,收集皂苷部分,浓缩,干燥,即得乌骨藤皂苷精制品(c)1.1kg。
将上述乌骨藤皂苷精制品(c)加入到5L乙酸乙酯-乙醇(3∶1)的混合溶剂中,加热至回流使溶解,过滤,滤液静置,结晶,过滤结晶,干燥,得到以乌骨藤皂苷A、B、D、H为主成分高纯度的乌骨藤皂苷提取物(d)0.7kg。
经高效液相色谱法含量测定,本品中乌骨藤皂苷A、B、D、H的含量分别为12.5%、11.8%、36.9%、35.2%。
实施例三
取乌骨藤药材200kg,粉碎切成粗粉,装入提取罐中,加6倍量的95%乙醇加热回流提取3次,每次1.5h,放出提取液,合并,过滤,滤液浓缩至100L,分别加入等体积正丁醇萃取3次,合并正丁醇液,浓缩至稠膏状再加入无水乙醇50L加热使溶解,过滤,滤液过中性氧化铝柱,并加50L无水乙醇洗脱,薄层监测,收集乌骨藤皂苷部分,并浓缩至干,得乌骨藤皂苷粗品(a)6.6kg。
取粗品(a),加水300L,搅拌使溶解,板框过滤,滤液过由聚酰胺(100~200目,100L)-大孔树脂(HPD-100,100L)串联的层析柱,水充分洗脱后,解除串联,加50%乙醇解析大孔树脂上富集的皂苷类成分,收集乙醇洗脱液,浓缩,干燥,即得乌骨藤皂苷粗品(b)3.8kg。
将乌骨藤皂苷粗品(b)溶于40L乙酸乙酯-乙醇(1∶1)的混合溶剂中,过滤,滤液过硅胶层析柱,加乙酸乙酯-乙醇(1∶1)40L洗脱,收集皂苷部分,浓缩,干燥,即得乌骨藤皂苷精制品(c)2.2kg。
将上述乌骨藤皂苷精制品(c)加入到11L甲醇-水(2∶1)的混合溶剂中,加热至回流使溶解,过滤,滤液静置,结晶,过滤结晶,干燥,得到以乌骨藤皂苷A、B、D、H为主成分高纯度的乌骨藤皂苷提取物(d)1.7kg。
经含量测定,本品中乌骨藤皂苷A、B、D、H的含量分别为10.5%、14.4%、23.0%、27.9%。
实施例四
取乌骨藤药材100kg,粉碎切成粗粉,装入热回流提取罐,加7倍量的95%乙醇,加热回流提取3次,每次1.5h,放出提取液,合并,过滤,滤液浓缩至20L,分别加入等体积乙酸乙酯萃取4次,合并乙酸乙酯液,浓缩至稠膏状再加入乙酸乙酯60L加热使溶解,过滤,滤液过中性氧化铝柱,并加60L乙酸乙酯洗脱,薄层监测,收集乌骨藤皂苷部分,并浓缩至干,得乌骨藤皂苷粗品(a)3.5kg。
取粗品(a),加水100L,搅拌使溶解,板框过滤,滤液过由聚酰胺(60~100目,40L)-大孔树脂(HPD-400,100L)串联的层析柱,水充分洗脱后,解除串联,加75%乙醇解析大孔树脂上富集的皂苷类成分,收集乙醇洗脱液,浓缩,干燥,即得乌骨藤皂苷粗品(b)2.2kg。
将乌骨藤皂苷粗品(b)溶于30L乙酸乙酯中,过滤,滤液过硅胶层析柱,加乙酸乙酯30L洗脱,收集皂苷部分,浓缩,干燥,即得乌骨藤皂苷精制品(c)1.5kg。
取上述乌骨藤皂苷精制品(c)300g,加入1.5L的异丙醚-丙酮(5∶1)的混合溶剂中,加热使溶解,过滤,静置,结晶,过滤结晶,干燥,得到乌骨藤皂苷A27.4g(高效液相测定其含量为88.4%)。取上述乌骨藤皂苷A,加60%乙醇200ml,溶解,过滤,滤液过反相ODS硅胶柱,并加60%乙醇洗脱,薄层检测,收集乌骨藤皂苷A流分,减压浓缩,干燥,得到乌骨藤皂苷A纯品16.4g(高效液相测定含量99.6%),MS:m/z=977[M+Na]+。
取上述乌骨藤皂苷精制品(c)300g,加到2.1L的甲醇-水(3∶1)的混合溶剂中,加热使溶解,过滤,静置,结晶,过滤结晶,干燥,得到乌骨藤皂苷H51.4g(高效液相测定其含量为82.5%)。取上述乌骨藤皂苷H,加50%乙醇100ml溶解,过滤,滤液过反相ODS硅胶柱继续通过ODS硅胶柱,并加50%乙醇洗脱,薄层检测,收集乌骨藤皂苷H流分,减压浓缩,干燥,得到乌骨藤皂苷H纯品33.1g(含量99.5%),MS:m/z=979[M+Na]+。
取上述乌骨藤皂苷精制品(c)300g,加入1.5L的异丙醚-乙醇(2∶1)的混合溶剂中,加热使溶解,过滤,静置,结晶,过滤结晶,干燥,得到乌骨藤皂苷B26.6g(高效液相测定 其含量为78.3%)。取上述乌骨藤皂苷B,加40%乙醇200ml,溶解,过滤,滤液过反相ODS硅胶柱,并加40%乙醇适量洗脱,薄层检测,收集乌骨藤皂苷B流分,减压浓缩,干燥,得到乌骨藤皂苷B纯品16.5g(高效液相含量98.8%),MS:m/z=1017[M+Na]+。
取上述乌骨藤皂苷精制品(c)300g,加到1.8L的异丙醚-乙醇(1∶2)的混合溶剂中,加热使溶解,过滤,静置,结晶,过滤结晶,干燥,得到乌骨藤皂苷D55.6g(高效液相测定其含量为75.5%)。取上述乌骨藤皂苷D,加40%乙醇100ml溶解,过滤,滤液过反相ODS硅胶柱,并加适量40%乙醇洗脱,薄层检测,收集乌骨藤皂苷D流分,减压浓缩,干燥,得到乌骨藤皂苷D纯品32.1g(含量99.1%),MS:m/z=1019[M+Na]+。
实施例五
分别取实施例四中的乌骨藤皂苷A、B、D、H纯品各3g、3g、6g、6g,混和均匀,得到组分明确、且乌骨藤皂苷A、B、D、H的比例为1∶1∶2∶2的乌骨藤皂苷提取物。
实施例六
乌骨藤皂苷提取物注射液
取实施例一中的乌骨藤皂苷提取物10g,加适量注射用水溶解后,再加入活性碳0.02g,加热煮沸30分钟,滤过,加水至900ml,用0.1%的碳酸氢钠溶液调pH至7.0,静置2h,滤过,滤液加注射用水至1000ml,灌封(10ml/支,10mg/ml),灭菌,即得。
实施例七
乌骨藤皂苷单体混合物注射液的制备
取实施例五中的乌骨藤皂苷提取物,加适量注射用水溶解后,再加入活性碳0.01g,加热煮沸30分钟,滤过,加水至1700ml,用0.1%的碳酸钠溶液调pH至6.8,静置1h,滤过,滤液加注射用水至1800ml,灌封(10ml/支,10mg/ml),灭菌,即得。
实施例八
乌骨藤皂苷提取物的胶囊的制备
取上述实施例二中的乌骨藤皂苷提取物50g,淀粉50g,β-环糊精100g混匀,制粒,过60目筛,干燥后装成1000粒胶囊(50mg/粒),即得。
实施例九
乌骨藤皂苷提取物片剂的制备
取上述实施例三中的乌骨藤皂苷提取物50g,淀粉50g,β-环糊精100g混匀,制粒,过60目筛,干燥后,加入硬脂酸镁5g,混匀,压制成1000片,包糖衣,即得。
实施例十对H22荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用的研究
1.实验目的:
测试对H22荷瘤小鼠的肿瘤生长抑制作用。
2.实验材料:
2.1动物:
ICR小鼠,18-22g,由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供。
2.2瘤种:小鼠H22肝癌由南京中医药大学药理毒理研究室提供。
3.给药方法及疗程:
选用18-22g雌性ICR小鼠及生长良好的7-11天的H22瘤种,接种于小鼠右侧腋部皮下,约4.5-5×106个细胞/只,接种后随机分笼,24hr后,5-FU(5-氟尿嘧啶)、提取物1、2、3、4分别溶解于适量0.9%氯化钠注射液中,静脉给药,连续8天。第9天处死动物,称体重、瘤重,计算各组平均瘤重,按如下公式求出肿瘤抑制率并进行T检验。这里提取物1、2、3、4分别指实施例一、二、三、五中最终得到的乌骨藤皂苷提取物,表中所述剂量mg/kg是指每千克体重的小鼠给予的5-FU或提取物的质量。
4.结果:
表1对荷瘤小鼠H22肿瘤生长抑制作用-(x±s)
与模型组比较*P<0.05 **P<0.01
结果表明,乌骨藤皂苷提取物对H22荷瘤小鼠肿瘤生长有显著的抑制作用。
实施例十一 对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用的研究
1.实验目的:
测试对Lewis肺癌荷瘤小鼠的肿瘤生长抑制作用。
2.实验材料:
2.1动物:C57小鼠,18-22g,由上海斯莱克实验动物中心提供。
2.2瘤种:
小鼠Lewis肺癌由南京中医药大学药理毒理研究室提供。
3.给药方法及疗程:
将Lewis肺癌种鼠断颈处死后,在无菌条件下分离出生长良好的肿瘤组织,用0.9%生理盐水洗净血性物后,用天平称重。剪碎后按1g肿瘤组织加入4ml生理盐水比例配制,经砚磨成均浆后制成肿瘤细胞数为2.8×106/ml的悬液。按肿瘤细胞悬液0.2ml/只接种到健康C57小鼠右侧肋部皮下。待肿瘤长到直径15×15mm大小时,随机分组,5-FU(5-氟尿嘧啶)、提取物1、2、3、4分别溶解于适量0.9%氯化钠注射液中,腹腔给药,连续8天。第9天处死动物,称体重、瘤重,计算各组平均瘤重,按下公式求出肿瘤抑制率并进行T检验。这里提取物1、2、3、4分别指实施例一、二、三、五中最终得到的乌骨藤皂苷提取物,表中所述剂量mg/kg是指每千克体重的小鼠给予的5-FU或提取物的质量。
4.结果:
表2对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用(x±s)
与模型组比较*P<0.05 **P<0.01
结果表明,乌骨藤皂苷提取物对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长具有显著的抑制作用。
实施例十二 对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用
1.实验目的:
测试对小鼠肉瘤S-180的抑制作用
2.实验材料:
2.1动物:ICR小鼠,18-22g,由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供。
2.2瘤种:小鼠S-180肉瘤由南京中医药大学药理毒理研究室提供。
3.给药方法及疗程:
选用18-22g雌性ICR小鼠及生长良好的7-11天的S-180瘤种,接种于小鼠右侧腋部皮下,约4.5-5×106个细胞/只,接种后随机分笼,5-FU(5-氟尿嘧啶)、提取物1、2、3、4分别溶解于适量0.9%氯化钠注射液中,24hr后静脉给药,连续8天。第9天处死动物,称体重、瘤重,计算各组平均瘤重,按下公式求出肿瘤抑制率并进行T检验。这里提取物1、2、3、4分别指实施例一、二、三、五中最终得到的乌骨藤皂苷提取物,表中所述剂量mg/kg是指每千克体重的小鼠给予的5-FU或提取物的质量。
4.结果:
表3对S180的抑制作用(x±s)
与模型组比较*P<0.05 **P<0.01
结果表明,乌骨藤皂苷提取物对小鼠肉瘤S-180具有显著的抑制作用。