CN101157717B

CN101157717B - 虎舌红素b的制备方法与用途

Info

Publication number: CN101157717B
Application number: CN2006101419889A
Authority: CN
Inventors: 薛永新; 薛永江; 薛刚; 薛洪
Original assignee: 薛永新
Current assignee: Sichuan Enwei Pharmacy Co., Ltd.
Priority date: 2006-10-04
Filing date: 2006-10-04
Publication date: 2011-05-11
Anticipated expiration: 2026-10-04
Also published as: CN101157717A

Abstract

本发明属于医药技术领域中虎舌红素B的制备方法与用途，由虎舌红全株或枝叶或根茎为药材，用水、任意比例的甲醇水溶液、乙醇水溶液或有机溶媒提取，提取液过滤浓缩；浓缩物经大孔树脂、柱层析(氧化铝或硅胶)色谱法单独或联合分离后，再重结晶精制而成。本发明的优点是：提供了可用于抗肿瘤、抗炎、镇痛、抗病毒(如流感病毒、疱疹病毒、肝炎病毒、及包括HIV在内的反转录病毒等)的虎舌红素B的制备方法，其成本低，工艺稳定，收率为干燥药材的1％以上，可以得到除去大量杂质的高纯度的虎舌红素B，并且药理活性显著。

Description

虎舌红素B的制备方法与用途

技术领域：

本发明属于医药技术领域，具体涉及虎舌红素B的制备方法与用途。

背景技术：

虎舌红(Ardisia mamillata Hance)为紫金牛科紫金牛属植物，其枝叶和根茎全部入药。生长在海拔200～400米的背阴树林中，喜阴，群生。本属植物全世界有300多种，我国有68种，12个变种。广泛分布于长江以南广大地区，蕴藏量丰富。尤以云南和海南地区分布较为集中。虎舌红在中国传统医学中被认为具有清热利湿，活血化瘀的作用。根据《中药大辞典》中记载，该植物可用于治疗痢疾、肝炎、胆囊炎、风湿、跌打损伤、咳血、疮疖肿痛等疾病。

1984年首次从虎舌红中分离得到以Cyclamiritin A为苷元的皂苷，以后陆续报道从该植物中分离得到十余种皂苷化合物，其中绝大部分是以五环三萜Cyclamiritin A为苷元。虎舌红素B(Ardisiacrispin B)是虎舌红中含量最高的一种皂苷，但是其制备过程采用高效制备液相进行分离，成本高，在工业上难以进行大规模生产。

到目前为止，尚未见到虎舌红素B具有预防和治疗肿瘤、艾滋病、白血病、流感、疱疹的报道。

发明内容：

本发明的目的在于克服现有技术中虎舌红素B提取分离成本高以及应用范围较窄的不足，为人们提供一种低成本的虎舌红素B的制备方法，以及虎舌红素B作为预防和治疗肿瘤、艾滋病、白血病、流感、疱疹、肝炎、HIV在内的反转录病毒感染与致病性微生物所引起炎性反应的药品，及作为抗炎镇痛的药物。

本发明的目的是通过下述技术方案来实现的。

本发明所述的虎舌红素B的制备方法，由虎舌红全株或枝叶或根茎为药材，粉碎或不经粉碎，用20～30倍药材重量的水、任意比例的甲醇水溶液、乙醇水溶液或有机溶媒提取，提取液过滤浓缩；浓缩物经大孔树脂、柱层析(氧化铝或硅胶)色谱法单独或联合分离后，再重结晶精制而成；其工艺流程如下：

上述方案中，所述的虎舌红素B(Ardisiacrispin B)其结构如下：

上述方案中，所述药材为鲜品或干晶的虎舌红生药或饮片，粉碎目数为10目～60目。

上述方案中，提取所用有机溶媒包括但不限于卤代烷类如二氯甲烷、三氯甲烷，醇类如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、正丁醇、乙二醇、碳链小于32烷醇、碳链小于32烯醇，酯类如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯，醚类如石油醚、乙醚，或它们的混合物。

上述方案中，所用的提取方法包括但不限于加热回流、渗漉、超声提取；超声提取温度在20～80℃均可。

上述方案中，所述大孔树脂包括但不限于各种非极性、弱极性、中极性或极性的大孔吸附树脂，硅胶或氧化铝为100～400目。

上述方案中，大孔树脂洗脱所用的溶剂包括但不限于以体积计的4∶1、5∶1及任意比例的甲醇或乙醇水溶液，或不同比例的乙酸乙醋、氯仿、乙醇、甲醇、丙酮的混合物；柱色谱所用溶剂包括但不限于乙酸乙醋、氯仿、乙醇、甲醇、丙酮、或它们的混合物。

上述方案中，所用的重结晶溶剂包括但不限于丙酮、乙醇、甲醇、水、乙酸乙酯、乙醚、石油醚或它们的混合物。

本发明所制备的虎舌红素B的医药用途，其特征在于：虎舌红素B可用于制备治疗和预防肿瘤、艾滋病、流感、疱疹、肝炎及致病性微生物所引起的炎性反应的药品，或在与这些疾病相关的产品中应用。

本发明的优点是：提供了可用于抗肿瘤、抗炎、镇痛、抗病毒(如流感病毒、疱疹病毒、肝炎病毒、及包括HIV在内的反转录病毒等)的虎舌红素B的制备方法，其成本低，工艺稳定，收率为干燥药材的1％以上，可以得到除去大量杂质的高纯度的虎舌红素B，并且药理活性显著。

下面通过实施例进一步说明本发明，本发明不仅限于所述实施例。

具体实施方式：

实施例一

虎舌红素B的制备：取虎舌红生药(干品)1kg粉碎成20目粗粉，加10倍药材重量的80％(重量)乙醇水溶液，加热回流提取3次，每次2小时，滤过，合并提取液，减压回收溶剂浓缩至1g生药/mL，D101大孔树脂吸附，经水洗后，再用80％(重量)乙醇水溶液洗脱，乙醇洗脱液浓缩至浸膏得到有效部位39g，将有效部位以等重量硅胶拌样，30倍(重量)浸膏量硅胶装柱，乙酸乙酯∶甲醇＝8∶3(重量)洗脱，收集两倍柱体积后的馏分，浓缩析晶，得虎舌红素B浅白色粉末21g。

实施例二

虎舌红素B的制备：取虎舌红药材(鲜品)1kg粉碎为60目，加10倍药材重量的75％(重量)乙醇水溶液，超声提取3次，每次20min，滤过，合并提取液，减压回收溶剂浓缩至1g生药/mL，D141大孔树脂吸附，经水洗，用75％(重量)的乙醇水溶液洗脱，浓缩至浸膏得到有效部位23g，将有效部位以等重量硅胶拌样，30倍(重量)浸膏量硅胶装柱，乙酸乙酯∶甲醇＝8∶3(重量)洗脱，收集两倍柱体积后的馏分，浓缩至浸膏，乙醇超声溶解后析晶，过滤，沉淀用乙醇重结晶，得虎舌红素B浅白色粉末12g。

实施例三

虎舌红素B的制备：取虎舌红饮片1kg粉碎为60目，以20倍药材重量的75％(重量)乙醇水溶液渗漉提取，提取液滤过，减压回收溶剂浓缩至1g生药/mL，AB-8大孔树脂吸附，经水洗，用75％(重量)的乙醇水溶液洗脱，浓缩至浸膏得到有效部位30g，将有效部位以等重量硅胶拌样，30倍(重量)浸膏量硅胶装柱，乙酸乙酯∶甲醇＝8∶3(重量)洗脱，收集两倍柱体积后的馏分，浓缩至浸膏，丙酮∶甲醇＝1∶1(重量)超声溶解后析晶，过滤，沉淀用丙酮∶甲醇＝1∶1(重量)重结晶，得虎舌红素B浅白色粉末14g。

实施例四

虎舌红素B的制备：取虎舌红生药(干品)1kg粉碎成20目粗粉，加10倍药材重量的水，加热回流提取3次，每次2小时，滤过，合并提取液，减压回收溶剂浓缩至稠浸膏，将浸膏以等重量硅胶拌样，30倍(重量)浸膏量硅胶装柱，乙酸乙酯∶甲醇＝8∶3(重量)洗脱，收集两倍柱体积后的馏分，浓缩至浸膏，甲醇超声溶解，重结晶，得虎舌红素B浅白色粉末17g。

实施例五

虎舌红素B的制备：取虎舌红生药(干品)1kg粉碎为60目，加10倍药材重量的甲醇，超声提取3次，每次20min，滤过，合并提取液，减压回收溶剂浓缩至稠浸膏，将浸膏以等重量氧化铝拌样，30倍(重量)浸膏量氧化铝装柱，乙酸乙酯∶甲醇＝1∶1(重量)洗脱，收集两倍柱体积后的馏分，浓缩至浸膏，甲醇超声溶解析晶，过滤，沉淀用甲醇重结晶，得虎舌红素B浅白色粉末15g。

实施例六

虎舌红素B体外抗癌活性：按本发明制备的虎舌红素B在体外具有较强的抗癌活性，其对K562较为敏感。在10μg.mL^-1浓度时，抑制率达50％，与阳性对照药的抑制率相当。按本发明制备的虎舌红素B对三种肿瘤细胞的IC₅₀分别为36.3μg.mL^-1(Kato-III)、7.4μg.mL^-1(K562)40.8μg.mL^-1(OVCA2780)。

实施例七

虎舌红素B体内抗癌活性：分别在小鼠体内种植S180实体瘤、lewis肺癌实体瘤、HCA腹水瘤和S180腹水瘤。发现按本发明制备的虎舌红素B 50mg/kg和100xmg/kg均有抑制肿瘤生长的作用、并且有剂量依赖关系，虎舌红素B组与对照组比较有明显差异，高剂量组与阳性药5-Fu 20mg/kg抗肿瘤作用相当，能明显延长腹水瘤小鼠的活存时间。

实施例八

虎舌红素B的镇痛活性评价：昆明种小鼠，雌雄兼用，体重18-22g。给药后30min，ip 1％冰醋酸0.4ml，记录15min内每鼠扭体数。按本发明制备的虎舌红素B在小鼠醋酸扭体模型上的镇痛作用与延胡索乙素在100mg.kg^-1相似，强于阿斯匹林和扑热息痛，而且按本发明制备的虎舌红素B在低于50mg.kg^-1仍显示较好的镇痛活性。

实施例九

虎舌红素B对二甲苯诱发小鼠耳部水肿的影响：小鼠70只，随机分为7组，溶媒组和按本发明制备的虎舌红素B六个组(3.125、6.25、12.5、25、50、100mg.kg^-1)，各组于致炎前1小时ig受试药物和等量溶媒，致炎后30分钟取两侧耳片，求得肿胀度。结果显示，按本发明制备的虎舌红素B对二甲苯致小鼠耳部水肿有一定抑制作用，其中25mg.kg^-1作用最为显著，抑制率达83.5％。

实施例十

虎舌红素B对角叉菜胶诱发大鼠足爪肿胀的抑制作用：大鼠40只，随机分为4组：溶媒组和按本发明制备的虎舌红素B组(12.5、25、50mg.kg^-1)，各组均于致炎前1h给大鼠ig受试药物或等量溶媒，致炎后分别于1-7h，24h测得大鼠的足爪肿胀度。结果表明，按本发明制备的虎舌红素B三个剂量组均可显著抑制角叉菜胶诱导的大鼠足肿胀。

实施例十一

虎舌红素B的体外杀灭HIV的活性：

虎舌红素B直接体外杀灭HIV的试验表明，按本发明制备的虎舌红素B在浓度为0.10mg/ml时，对HIV病毒的直接杀灭率达到了85％以上。

实施例十二

虎舌红素B体外抑制HIV-1的反转录酶的活性：

虎舌红素B体外抑制HIV-1的反转录酶活性的试验表明，按本发明制备的虎舌红素B对HIV-1的反转录酶有抑制作用，在浓度为1∶2000时，对HIV-1的反转录酶的抑制作用达到了70％以上。

实施例十三

虎舌红素B对受HIV感染的细胞的保护作用：

用HIV病毒感染MT4细胞，在细胞悬液中加入按本发明制备的虎舌红素B，继续培养，四天后，用XTT法测定细胞的数量，与不加虎舌红素B的HIV感染的MT4细胞对比，从而计算出虎舌红素B对受HIV感染的细胞的保护作用。按本发明制备的虎舌红素B在浓度为0.10mg/ml时，对细胞的保护率达到了74.03％。

实施例十四

虎舌红素B的体外抗乙肝的活性：

用表达乙肝病毒抗原的2.2.1.5细胞，在细胞悬液中加入按本发明制备的虎舌红素B，继续培养，四天后，换培养液，继续培养两天，然后用乙肝表面抗原和e抗原测定试剂盒测定抗原的表达情况。结果发现，按本发明制备的虎舌红素B在250μg/ml时，对2.2.1.5细胞的表面抗原的表达抑制率为52.12％，对2.2.1.5细胞的e抗原的表达抑制率为53.89％，在这个药物浓度下，2.2.1.5细胞的MTT结果为0.787，而正常2.2.1.5细胞的MTT结果为1.047，细胞存活率达到75.12％，细胞毒作用不大。按本发明制备的虎舌红素B可以抑制2.2.1.5细胞的表面抗原和e抗原的表达。

Claims

1.虎舌红素B的用途，其特征在于虎舌红素B用于制备治疗和预防肿瘤K562瘤株、艾滋病、肝炎及致病性微生物所引起的炎性反应的药品。