CN105017345A - 从夏枯草中同时提取四种化合物的方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及中草药的提取领域，特别涉及一种从夏枯草中同时提取四种化合物的方法及应用。本发明利用粗分和细分相结合的方法，能够从夏枯草中同时提取出异迷迭香酸苷、迷迭香酸、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸甲酯四种化合物。本发明提供的方法样品在粗分时，分离快，所用时间短，成分交叉少且又不拖尾；在细分时，能减少分离步骤，同时能得到高产量和高纯度的目标化合物。本发明还提供了利用上述四种化合物混合后得到的夏枯草提取物混合物及其在抗肿瘤药物中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及中草药的提取领域，特别涉及一种夏枯草从夏枯草中同时提取四种化合物的方法及应用。
背景技术
夏枯草属为唇形科多年生草本植物，全球约有l5种，广泛分布于欧亚的温带地区及热带山区、非洲西北部及北美洲。自20世纪50年代起，日本、前苏联及中国学者就对夏枯草属植物的化学成分进行了深入研究，迄今为止，从中分离得到的化合物主要为三萜及其皂苷、酚酸、甾醇及其苷、黄酮、香豆素、有机酸、挥发油及糖类等。
夏枯草P.vulgaris L.入药，一般是在夏季采取半干燥果穗入药，由于此草夏至后即枯，故有此名。中医理论认为夏枯草味苦、辛，性寒，具有清火、明目、消肿、散结等功效，常用于治疗目赤肿痛、目珠夜育，头痛眩晕，瘰疬，瘿瘤，乳痈肿痛等。中国药典收载的以夏枯草水煎剂而制成的中成药是夏枯草膏和夏枯草口服液，但目前以夏枯草膏改良的剂型有夏枯草颗粒、夏枯草片、夏枯草胶囊等，均广泛用于中医临床，常用于治疗甲状腺肿大、淋巴结核、乳腺增生、肺结核、急性黄疸型传染性肝炎、高血压等疾症。
现代研究表明，夏枯草具有抗病毒、抗菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、降压和降糖等活性。近年来，以夏枯草为原料的中成药及保健产品相继问世，如夏桑菊颗粒、夏桑菊凉茶、王老吉及加多宝等。
尽管夏枯草作为药物使用已有悠久历史，在作用功效中明确有抗癌作用，但未见报道从夏枯草中分离出来的天然产物：异迷迭香酸(trans-salviaflaside)、迷迭香酸(rosmarinic acid)和它们的衍生物去用做抗乳腺癌治疗药物；同时也未见报道从夏枯草中大量快速富集以及纯化异迷迭香酸(trans-salviaflaside)、迷迭香酸(rosmarinic acid)和它们的衍生物的方法。
其中，异迷迭香酸苷、迷迭香酸、异迷迭香酸苷甲酯和迷迭香酸甲酯的结构分别如下：
发明内容
本发明的第一目的是提供一种从夏枯草中同时提取四种化合物(异迷迭香酸苷、迷迭香酸、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸甲酯)的方法。
本发明的第二目的是提供一种通过混合异迷迭香酸苷、迷迭香酸、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸甲酯得到的夏枯草提取物混合物。
本发明的第三目的是提供夏枯草提取物混合物在抗肿瘤药物中的应用。
为达到上述目的，具体采用如下的技术方案：
一种从夏枯草中同时提取异迷迭香酸苷、迷迭香酸、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸甲酯的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)、夏枯草经粉碎机粉碎，过筛，用甲醇回流提取，浓缩，得浓缩液1；
(2)将浓缩液1与硅胶1拌匀，得混合物1，混合物1用硅胶柱分离，流动相1采用体积比均为10:1-20:1的乙酸乙酯-甲醇、二氯甲烷-甲醇或三氯甲烷-甲醇，得到两个部位的洗脱液，部位1为乙酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲烷洗脱液，部位2为甲醇洗脱液；部位1用所述流动相1洗脱到用TLC检测(浓硫酸－香兰素显色剂)没有明显的斑点为止；部位2用甲醇洗脱到用TLC检测(浓硫酸－香兰素显色剂)没有明显的斑点为止；
(3)部位1所得洗脱液浓缩得浓缩液2，将浓缩液2与硅胶2拌匀，蒸干，得混合物2；混合物2用硅胶柱分离，流动相采用体积比为10:1-20:1的二氯甲烷-甲醇，得到含迷迭香酸与迷迭香酸甲酯部；
(4)含迷迭香酸和迷迭香酸甲酯部用反相C18柱分离，当流动相采用体积比为3:10-2:5的甲醇-水时得迷迭香酸，当流动相采用体积比为2:5-3:5的甲醇-水时得迷迭香酸甲酯；
(5)部位2所得洗脱液浓缩得浓缩液3，将浓缩液3与硅胶3拌匀，蒸干，得混合物3；混合物3用硅胶柱分离，流动相采用体积比为15：1：1-15：2：1的乙酸乙酯：甲醇：水系统，得到含异迷迭香酸苷与异迷迭香酸苷甲酯部；
(6)含异迷迭香酸苷和异迷迭香酸苷甲酯部用反相C18柱分离，当流动相采用体积比为1:5-2:5的甲醇-水时得异迷迭香酸，当流动相采用体积比为2:5-3:5的甲醇-水时得异迷迭香酸甲酯。
在夏枯草提取物的制备方法中所述浓缩液指每10ml浓缩液中含样品量为3-5g。
具体的，步骤(1)中夏枯草经粉碎机粉碎，过筛，用甲醇回流提取45-60min，夏枯草与甲醇的用量比为1：10－1：8g/ml，优选地，夏枯草与甲醇的用量比为1：10g/ml。
具体的，夏枯草经粉碎机粉粹，过20-60目筛，优选地，过40目筛。
具体的，所述步骤(2)按1:1-1:3的重量比将浓缩液1与硅胶1拌匀，得混合物1；步骤(3)按1:1-1:3的重量比将浓缩液2与硅胶2拌匀，在60-80℃的条件下蒸干，得混合物2；步骤(5)按1:1-1:3的重量比将浓缩液3与硅胶3拌匀，在60-80℃的条件下蒸干，得混合物3。
优选地，步骤(2)中混合物1用硅胶柱分离，流动相采用体积比均为10:1-15:1的乙酸乙酯-甲醇、二氯甲烷-甲醇或三氯甲烷-甲醇；更优选地，步骤(2)中混合物1用硅胶柱分离，流动相采用体积比均为11:1的乙酸乙酯-甲醇、二氯甲烷-甲醇或三氯甲烷-甲醇。
优选地，步骤(3)中混合物2用硅胶柱分离，流动相采用体积比为10:1-15:1的二氯甲烷-甲醇。
步骤(3)的一种具体实施方式为：部位1所得洗脱液浓缩得浓缩液2，将浓缩液2与硅胶2拌匀，蒸干，得混合物2；混合物2用硅胶柱分离，流动相采用体积比为11:1的二氯甲烷-甲醇，得到含迷迭香酸与迷迭香酸甲酯部。
步骤(4)的一种具体实施方式为：含迷迭香酸和迷迭香酸甲酯部用反相C18柱分离，当流动相采用体积比为2:5的甲醇-水时得迷迭香酸，当流动相采用体积比为3:5的甲醇-水时得迷迭香酸甲酯。
步骤(5)的一种具体实施方式为：部位2所得洗脱液浓缩得浓缩液3，将浓缩液3与硅胶3拌匀，蒸干，得混合物3；混合物3用硅胶柱分离，流动相采用体积比为15：1：1的乙酸乙酯：甲醇：水系统，得到含异迷迭香酸苷与异迷迭香酸苷甲酯部。
步骤(6)的一种具体实施方式为：含异迷迭香酸苷和异迷迭香酸苷甲酯部用反相C18柱分离，当流动相采用体积比为1:5的甲醇-水时得异迷迭香酸，当流动相采用体积比为3:5的甲醇-水时得异迷迭香酸甲酯。
在本发明的技术方案中，步骤(2)中所述硅胶1和硅胶柱中的硅胶为60-100目；步骤(3)所述硅胶2和步骤(5)所述硅胶3为100-200目，步骤(3)和步骤(5)中所述硅胶柱中的硅胶为200-300目。
本发明的提供的分离纯化方法，并且能从大批量的夏枯草中大量快速富集纯化四种目标产物，具有步骤少、产率高、易操作的优点。本发明的提供的分离纯化过程包括粗分与细分，样品在粗分时，分离快，所用时间短，成分交叉少且又不拖尾；在细分时，能减少分离步骤，同时能得到高产量和高纯度的目标化合物。
利用本发明的方法制备得到的异迷迭香酸苷、迷迭香酸、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸甲酯具有产量大、纯度高(大于80％)，具有可工业化大量分离纯化特点。
利用本发明的方法制备得到的异迷迭香酸苷、迷迭香酸、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸甲酯还可以以甲醇-0.5％冰乙酸水为流动相，利用反相C-18色谱柱进一步提纯，使其纯度在95％以上。具体的提纯步骤为：将异迷迭香酸苷、迷迭香酸、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸甲酯用甲醇溶解，分别制成浓度在0.6g/ml的样品。样品用半制备高效液相色谱仪制备。反相C-18色谱柱250×21.2mm。每次进样量0.8ml/针，流动相采用甲醇-0.5％冰乙酸水，流速10ml/min，检测波长254nm。梯度洗脱，0-5min，38％的甲醇：62％的0.5％冰乙酸水；5-20min，42％的甲醇：58％的0.5％冰乙酸水；20-30min，52％的甲醇：48％的0.5％冰乙酸水；目标化合物：异迷迭香酸苷出峰为14.6min，迷迭香酸为17.5min，异迷迭香酸苷甲酯为21.2min，迷迭香酸甲酯为25min。不同情况不同条件，但是更大的制备液相以及更大的色谱柱会使工作效率大为提高。
本发明的技术方案还包括利用本发明的方法得到的异迷迭香酸苷、迷迭香酸、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸甲酯混合得到夏枯草提取物混合物。
优选地，将异迷迭香酸苷、迷迭香酸、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸甲酯按重量比2：1：1：1混合得到夏枯草提取物混合物。
经药效学实验研究表明，用本发明方法制得的夏枯草提取物混合物可以用于抗肿瘤的药物中，特别是在抗乳腺癌药物中的应用具有良好的效果。
附图说明
图1(包括图1-1和图1-2)为异迷迭香酸苷的H谱；
图2为异迷迭香酸苷的C谱；
图3为异迷迭香酸苷甲酯的H谱；
图4为异迷迭香酸苷甲酯的C谱；
图5为迷迭香酸的H谱；
图6为迷迭香酸的C谱；
图7为迷迭香酸甲酯的H谱；
图8为迷迭香酸甲酯的C谱。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
本实施例为从夏枯草中同时提取异迷迭香酸苷、迷迭香酸、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸甲酯的方法，具体包括以下步骤：
(1)夏枯草经粉碎机粉碎，过40目筛，经甲醇回流提取，甲醇与夏枯草的用量比为1：10g/ml，浓缩，得浓缩液1(每10ml浓缩液中含样品量为3-5g)；
(2)将浓缩液1与硅胶1(60-100目)按1:1-1:3的重量比拌匀，得混合物1，混合物1用硅胶柱(60-100目)分离，样品与分离所用硅胶用量之比为1：1-1：2，流动相1采用体积比均为10:1-20:1乙酸乙酯-甲醇(或二氯甲烷-甲醇或三氯甲烷-甲醇)，得到两个部位的洗脱液，部位1为乙酸乙酯(或二氯甲烷或三氯甲烷)洗脱液，部位2为甲醇洗脱液；部位1用所述流动相1洗脱到用TLC检测(浓硫酸-香兰素显色剂)没有明显的斑点为止；部位2用甲醇洗脱到用TLC检测(浓硫酸-香兰素显色剂)没有明显的斑点为止；
(3)部位1所得洗脱液浓缩得浓缩液2，将浓缩液2与硅胶2按1:1-1:3的重量比拌匀，在60-80℃的条件下蒸干，得混合物2；混合物2用硅胶柱分离，流动相采用体积比为11:1的二氯甲烷-甲醇，得到含迷迭香酸与迷迭香酸甲酯部；
(4)含迷迭香酸和迷迭香酸甲酯部用反相C18柱分离，当流动相采用体积比为2：5的甲醇-水，流速为1-30ml/min时得迷迭香酸(表征见图5和图6)，当流动相采用体积比为3:5的甲醇-水，流速为1-30ml/min时得迷迭香酸甲酯(表征见图7和图8)。
(5)部位2所得洗脱液浓缩得浓缩液3，将浓缩液3与硅胶3按1:1-1:3的重量比拌匀拌匀，在60-80℃的条件下蒸干，得混合物3；混合物3用硅胶柱分离，流动相采用体积比为15:1:1的乙酸乙酯：甲醇：水系统，得到含异迷迭香酸苷与异迷迭香酸苷甲酯部；
(6)含异迷迭香酸苷和异迷迭香酸苷甲酯部用反相C18柱分离，当流动相采用体积比为1:5的甲醇-水，流速为1-30ml/min时得异迷迭香酸苷(表征见图1和图2)，当流动相采用体积比为3:5的甲醇-水，流速为1－30ml/min时得异迷迭香酸甲酯(表征见图3和图4)。
利用本实施例得到的异迷迭香酸苷、迷迭香酸、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸甲酯的产率及纯度如下表所示：
| 名称 | 提取药材量 | 药材中含量 | 理论得量 | 实际粗品量 | 粗品产率 | 粗品纯度 |
| 异迷迭香酸苷 | 80.2kg | 0.275‰ | 22.055g | 15.523g | 70.383％ | 85.45％ |
| 异迷迭香酸苷甲酯 | 80.2kg | xx | xx | 3.287g | 90.21％ | |
| 迷迭香酸 | 80.2kg | 2.137％ | 1713.874g | 723.152g | 42.194％ | 89.32％ |
| 迷迭香酸甲酯 | 80.2kg | xx | xx | 3.516g | 87.59％ |
异迷迭香酸苷与迷迭香酸在夏枯草中的含量是根据文献所获得的平均值，异迷迭香酸甲酯与迷迭香酸甲酯在药材夏枯草中的含量没有相关文献报导过。
实施例2：
本实施例为从夏枯草中同时提取异迷迭香酸苷、迷迭香酸、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸甲酯的方法，具体包括以下步骤：
(1)夏枯草经粉碎机粉碎，过20目筛，经甲醇回流提取，甲醇与夏枯草的用量比为1：8g/ml，浓缩，得浓缩液1(每10ml浓缩液中含样品量为3-5g)；
(2)将浓缩液1与硅胶1(60-100目)按1:1的重量比拌匀，得混合物1，混合物1用硅胶柱(60-100目)分离，样品与分离所用硅胶用量之比为1：1，流动相1采用体积比均为10:1乙酸乙酯-甲醇(或二氯甲烷-甲醇或三氯甲烷-甲醇)，得到两个部位的洗脱液，部位1为乙酸乙酯(或二氯甲烷或三氯甲烷)洗脱液，部位2为甲醇洗脱液；部位1用所述流动相1洗脱到用TLC检测(浓硫酸-香兰素显色剂)没有明显的斑点为止；部位2用甲醇洗脱到用TLC检测(浓硫酸-香兰素显色剂)没有明显的斑点为止；
(3)部位1所得洗脱液浓缩得浓缩液2，将浓缩液2与硅胶2按1:1的重量比拌匀，在60-80℃的条件下蒸干，得混合物2；混合物2用硅胶柱分离，流动相采用体积比为10:1的二氯甲烷-甲醇，得到含迷迭香酸与迷迭香酸甲酯部；
(4)含迷迭香酸和迷迭香酸甲酯部用反相C18柱分离，当流动相采用体积比为3:10的甲醇-水，流速为1-30ml/min时得迷迭香酸，当流动相采用体积比为2:5的甲醇-水，流速为1-30ml/min时得迷迭香酸甲酯。
(5)部位2所得洗脱液浓缩得浓缩液3，将浓缩液3与硅胶3按1:1的重量比拌匀拌匀，在60-80℃的条件下蒸干，得混合物3；混合物3用硅胶柱分离，流动相采用体积比为15：1：1的乙酸乙酯：甲醇：水系统，得到含异迷迭香酸苷与异迷迭香酸苷甲酯部；
(6)含异迷迭香酸苷和异迷迭香酸苷甲酯部用反相C18柱分离，当流动相采用体积比为1:5的甲醇-水，流速为1-30ml/min时得异迷迭香酸苷，当流动相采用体积比为2:5的甲醇-水，流速为1-30ml/min时得异迷迭香酸甲酯。
利用本实施例得到的异迷迭香酸苷、迷迭香酸、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸甲酯的产率及纯度如下表所示：
| 名称 | 提取药材量 | 药材中含量 | 理论得量 | 实际粗品量 | 粗品产率 | 粗品纯度 |
| 异迷迭香酸苷 | 80.2kg | 0.275‰ | 22.055g | 13.785g | 62.502％ | 86.36％ |
| 异迷迭香酸苷甲酯 | 80.2kg | xx | xx | 2.587g | xx | 89.65％ |
| 迷迭香酸 | 80.2kg | 2.137％ | 1713.874g | 683.651g | 39.889％ | 90.54％ |
| 迷迭香酸甲酯 | 80.2kg | xx | xx | 3.016g | xx | 85.12％ |
实施例3：
本实施例为从夏枯草中同时提取异迷迭香酸苷、迷迭香酸、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸甲酯的方法，具体包括以下步骤：
(1)夏枯草经粉碎机粉碎，过60目筛，经甲醇回流提取，甲醇与夏枯草的用量比为1：10g/ml，浓缩，得浓缩液1(每10ml浓缩液中含样品量为3-5g)；
(2)将浓缩液1与硅胶1(60-100目)按1:3的重量比拌匀，得混合物1，混合物1用硅胶柱(60-100目)分离，样品与分离所用硅胶用量之比为1：2，流动相1采用体积比均为20:1乙酸乙酯-甲醇(或二氯甲烷-甲醇或三氯甲烷-甲醇)，得到两个部位的洗脱液，部位1为乙酸乙酯(或二氯甲烷或三氯甲烷)洗脱液，部位2为甲醇洗脱液；部位1用所述流动相1洗脱到用TLC检测(浓硫酸-香兰素显色剂)没有明显的斑点为止；部位2用甲醇洗脱到用TLC检测(浓硫酸-香兰素显色剂)没有明显的斑点为止；
(3)部位1所得洗脱液浓缩得浓缩液2，将浓缩液2与硅胶2按1:3的重量比拌匀，在60-80℃的条件下蒸干，得混合物2；混合物2用硅胶柱分离，流动相采用体积比为20:1的二氯甲烷-甲醇，得到含迷迭香酸部与迷迭香酸甲酯；
(4)含迷迭香酸和迷迭香酸甲酯部用反相C18柱分离，当流动相采用体积比为2:5的甲醇-水，流速为1-30ml/min时得迷迭香酸，当流动相采用体积比为3:5的甲醇-水，流速为1-30ml/min时得迷迭香酸甲酯。
(5)部位2所得洗脱液浓缩得浓缩液3，将浓缩液3与硅胶3按1:3的重量比拌匀拌匀，在60-80℃的条件下蒸干，得混合物3；混合物3用硅胶柱分离，流动相采用体积比为15：2：1的乙酸乙酯：甲醇：水系统，得到含异迷迭香酸苷与异迷迭香酸苷甲酯部；
(6)含异迷迭香酸苷和异迷迭香酸苷甲酯部用反相C18柱分离，当流动相采用体积比为2:5的甲醇-水，流速为1-30ml/min时得异迷迭香酸苷，当流动相采用体积比为3:5的甲醇-水，流速为1-30ml/min时得异迷迭香酸甲酯。
利用本实施例得到的异迷迭香酸苷、迷迭香酸、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸甲酯的产率及纯度如下表所示：
| 名称 | 提取药材量 | 药材中含量 | 理论得量 | 实际粗品量 | 粗品产率 | 粗品纯度 |
| 异迷迭香酸苷 | 80.2kg | 0.275‰ | 22.055g | 13.923g | 63.128％ | 84.98％ |
| 异迷迭香酸苷甲酯 | 80.2kg | xx | xx | 2.087g | xx | 91.09％ |
| 迷迭香酸 | 80.2kg | 2.137％ | 1713.874g | 653.062g | 38.104％ | 88.87％ |
| 迷迭香酸甲酯 | 80.2kg | xx | xx | 2.816g | xx | 89.12％ |
实施例4：
本实施例为将按照实施例1所述的方法制备得到的异迷迭香酸苷、迷迭香酸、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸甲酯分别以甲醇-0.5％冰乙酸水为流动相，利用反相C-18色谱柱提纯至纯度在95％以上后，分别按重量比1：1：1：1；2：1：1：1；1：2：1：1；1：1：2：1；1：1：1：2混合得到5种不同的夏枯草提取物混合物。
试验例：
1、试验准备
细胞：人乳腺癌细胞(MCF-7，MDA-MB-231)，人正常乳腺细胞MCF-10A,由中科院海洋所海洋药物实验室提供。
药品及试剂：采用实施例1制备得到的异迷迭香酸苷、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸、迷迭香酸甲酯的混合物为待试验药品，淡黄色粉末；
5-氟脲嘧啶(5-FU)为江苏南通精华制药有限公司产品，批号为100402；
MTT(SIGMA，USA)；DMSO(SIGMA，USA)；胰蛋白酶(SIGMA，USA)；RPMI1640(GIBCO，Invitragen Co.，USA)；DMEM(GIBCO，Invitragen Co.，USA)；优级胎牛血清(GIBCO，Invitragen Co.，USA)；特级胎牛血清Fetal Bovine Serum(Hyclone)。
仪器：超低温冰箱(Nature，USA)，细胞培养箱(SANYO，Japan)，倒置显微镜(NIKON，Japan)，酶标仪(Bio-Tek Instruments，Inooski，VT，USA)，PH计(Thermo orion，USA)，超净工作台(FLC-哈尔滨东联仪器厂)
2、实验方法
MTT法：将肿瘤细胞株按照常规方法培养传代，收集对数生长期细胞，调节细胞悬液浓度5×104个/ml左右。将细胞悬液加入96孔培养板中，每个孔加入180μl。置于37℃恒温培养箱中培养24h后，各实验组加入不同比例的四种酚酸混合物(异迷迭香酸苷、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸、迷迭香酸甲酯)，同时以顺铂作为阳性对照组，每组同比例混合样品设7个不同浓度，每组各设3个平行孔，并设空白孔(只加入溶解药用的溶剂)以调零。在培养箱37℃，培养48h后，用移液枪将96孔板中液体洗净后每孔加入MTT(1mg/ml)30μl，置CO2培养箱37℃培养4h，弃去上清，每孔加入DMSO 150μl，置摇床摇匀30min，用酶标仪在492nm下检测，利用SPSS统计软件，计算细胞死亡率，求取IC50及不同浓度下的抑制率。
表1顺铂作用于MCF-7
表2混合样品作用于MCF-7
表3顺铂及混合样品作用于MCF-7的IC50
| 样品 | IC50(μM) |
| 顺铂 | 1.008 |
| 1：1：1：1 | 26.558 |
| 2：1：1：1 | 37.046 |
| 1：2：1：1 | 29.522 |
| 1：1：2：1 | 12.445 |
| 1：1：1：2 | 20.221 |
表4顺铂作用于MDA-MB-231
表5样品作用于MDA-MB-231
表6顺铂及混合样品作用于MDA-MB-231的IC50
| 样品 | IC50(μM) |
| 顺铂 | 2.147 |
| 1：1：1：1 | 34.177 |
| 2：1：1：1 | 39.596 |
| 1：2：1：1 | 39.791 |
| 1：1：2：1 | 17.527 |
| 1：1：1：2 | 15.213 |
通过上述数据可以发现，异迷迭香酸苷、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸、迷迭香酸甲酯的四种不同比例的混合物对乳腺癌细胞有明显的抑制作用。用上述样品从低到高配成7个不同浓度的溶液作用于乳腺癌细胞及正常细胞，且每个浓度平行做3次。阳性对照药顺铂作用于MCF-7细胞的IC50为1.008μM、MDA-MB-231细胞的IC50为2.147μM；四种混合物为1：1：1：1作用于MCF-7细胞的IC50为26.558μM、MDA-MB-231细胞的IC50为34.177μM；四种混合物为2：1：1：1作用于MCF-7细胞的IC50为37.046μM、MDA-MB-231细胞的IC50为39.596μM；四种混合物为1：2：1：1作用于MCF-7细胞的IC50为29.522μM、MDA-MB-231细胞的IC50为39.791μM；四种混合物为1：1：2：1作用于MCF-7细胞的IC50为12.445μM、MDA-MB-231细胞的IC50为17.527μM；四种混合物为1：1：1：2作用于MCF-7细胞的IC50为20.221μM、MDA-MB-231细胞的IC50为15.213μM。本实验结果提示，异迷迭香酸、迷迭香酸和它们的衍生物的混合物有抗乳腺癌活性。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种从夏枯草中同时提取异迷迭香酸苷、迷迭香酸、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸甲酯的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)夏枯草经粉碎机粉碎，过筛，用甲醇回流提取，浓缩，得浓缩液1；
(2)将浓缩液1与硅胶1拌匀，得混合物1，混合物1用硅胶柱分离，流动相1采用体积比均为10:1-20:1的乙酸乙酯-甲醇、二氯甲烷-甲醇或三氯甲烷-甲醇，得到两个部位的洗脱液，部位1为乙酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲烷洗脱液，部位2为甲醇洗脱液；部位1用所述流动相1洗脱到用TLC检测没有明显的斑点为止；部位2用甲醇洗脱到用TLC检测没有明显的斑点为止；
(3)部位1所得洗脱液浓缩得浓缩液2，将浓缩液2与硅胶2拌匀，蒸干，得混合物2；混合物2用硅胶柱分离，流动相采用体积比为10:1-20:1的二氯甲烷-甲醇，得到含迷迭香酸与迷迭香酸甲酯部；
(4)含迷迭香酸和迷迭香酸甲酯部用反相C18柱分离，当流动相采用体积比为3:10-2:5的甲醇-水时得迷迭香酸，当流动相采用体积比为2:5-3:5的甲醇-水时得迷迭香酸甲酯；
(5)部位2所得洗脱液浓缩得浓缩液3，将浓缩液3与硅胶3拌匀，蒸干，得混合物3；混合物3用硅胶柱分离，流动相采用体积比为15：1：1-15：2：1的乙酸乙酯：甲醇：水系统，得到含异迷迭香酸苷与异迷迭香酸苷甲酯部；
(6)含异迷迭香酸苷和异迷迭香酸苷甲酯部用反相C18柱分离，当流动相采用体积比为1:5-2:5的甲醇-水时得异迷迭香酸，当流动相采用体积比为2:5-3:5的甲醇-水时得异迷迭香酸甲酯。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中夏枯草经粉碎机粉碎，过筛，用甲醇回流提取45-60min，夏枯草与甲醇的用量比为1：10－1：8g/ml，优选地，夏枯草与甲醇的用量比为1：10g/ml。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中混合物1用硅胶柱分离，流动相采用体积比均为11:1的乙酸乙酯-甲醇、二氯甲烷-甲醇或三氯甲烷-甲醇。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)为：部位1所得洗脱液浓缩得浓缩液2，将浓缩液2与硅胶2拌匀，蒸干，得混合物2；混合物2用硅胶柱分离，流动相采用体积比为11:1的二氯甲烷-甲醇，得到含迷迭香酸与迷迭香酸甲酯部。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)为：含迷迭香酸和迷迭香酸甲酯部用反相C18柱分离，当流动相采用体积比为2:5的甲醇-水时得迷迭香酸，当流动相采用体积比为3:5的甲醇-水时得迷迭香酸甲酯。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(5)为：部位2所得洗脱液浓缩得浓缩液3，将浓缩液3与硅胶3拌匀，蒸干，得混合物3；混合物3用硅胶柱分离，流动相采用体积比为15：1：1的乙酸乙酯：甲醇：水系统，得到含异迷迭香酸苷与异迷迭香酸苷甲酯部。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(6)为：含异迷迭香酸苷和异迷迭香酸苷甲酯部用反相C18柱分离，当流动相采用体积比为1:5的甲醇-水时得异迷迭香酸，当流动相采用体积比为3:5的甲醇-水时得异迷迭香酸甲酯。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述硅胶1和硅胶柱中的硅胶为60-100目；步骤(3)所述硅胶2和步骤(5)所述硅胶3为100-200目，步骤(3)和步骤(5)中所述硅胶柱中的硅胶为200-300目。
9.将权利要求1-8任一项所述的方法制备得到的异迷迭香酸苷、迷迭香酸、异迷迭香酸苷甲酯、迷迭香酸甲酯混合得到夏枯草提取物混合物。
10.权利要求9所述的夏枯草提取物混合物在抗肿瘤药物中的应 用。
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Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107628954A (zh) * | 2017-10-12 | 2018-01-26 | 南京财经大学 | 一种从薰衣草花茶中分离纯化多酚物质的方法 |
| CN111349125A (zh) * | 2020-03-11 | 2020-06-30 | 成都瑞芬思德丹生物科技有限公司 | 一种异迷迭香酸苷和迷迭香酸的制备方法 |
| CN111358833A (zh) * | 2020-04-22 | 2020-07-03 | 贵阳新天药业股份有限公司 | 夏枯草提取物及其在制备治疗甲状腺疾病药物中的应用 |
| CN113185405A (zh) * | 2021-04-23 | 2021-07-30 | 北京中医药大学 | 改善睡眠的夏枯草有效成分的制备方法及药物制剂 |
| CN113624876A (zh) * | 2021-08-09 | 2021-11-09 | 海南葫芦娃药业集团股份有限公司 | 一种夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量测定方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101020637A (zh) * | 2007-02-15 | 2007-08-22 | 连晓媛 | 迷迭香酸的制备方法和应用 |
| CN102018759A (zh) * | 2009-09-17 | 2011-04-20 | 上海中医药大学附属曙光医院 | 迷迭香酸、含迷迭香酸的夏枯草有效组分及其制备方法和其在防治癌症术后转移方面的应用 |
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2015
- 2015-04-13 CN CN201510172051.7A patent/CN105017345B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101020637A (zh) * | 2007-02-15 | 2007-08-22 | 连晓媛 | 迷迭香酸的制备方法和应用 |
| CN102018759A (zh) * | 2009-09-17 | 2011-04-20 | 上海中医药大学附属曙光医院 | 迷迭香酸、含迷迭香酸的夏枯草有效组分及其制备方法和其在防治癌症术后转移方面的应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| GUO-CAI WANG ET AL.: "Five new phenolic glycosides from Hedyotis scandens", 《BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS》 * |
| LI MIN ZHAO ET AL.: "Salviaflaside and salviaflaside methyl ester two new depsidic glycosides from Salvia flava", 《CHINESE CHEMICAL LETTERS》 * |
| ZHU JU WANG ET AL.: "Depsides from Prunella vulgaris", 《CHINESE CHEMICAL LETTERS》 * |
| 林丽美 等: "夏枯草中异迷迭香酸苷和迷迭香酸的含量测定", 《中国药学杂志》 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107628954A (zh) * | 2017-10-12 | 2018-01-26 | 南京财经大学 | 一种从薰衣草花茶中分离纯化多酚物质的方法 |
| CN111349125A (zh) * | 2020-03-11 | 2020-06-30 | 成都瑞芬思德丹生物科技有限公司 | 一种异迷迭香酸苷和迷迭香酸的制备方法 |
| CN111349125B (zh) * | 2020-03-11 | 2022-02-08 | 成都瑞芬思德丹生物科技有限公司 | 一种异迷迭香酸苷和迷迭香酸的制备方法 |
| CN111358833A (zh) * | 2020-04-22 | 2020-07-03 | 贵阳新天药业股份有限公司 | 夏枯草提取物及其在制备治疗甲状腺疾病药物中的应用 |
| CN113185405A (zh) * | 2021-04-23 | 2021-07-30 | 北京中医药大学 | 改善睡眠的夏枯草有效成分的制备方法及药物制剂 |
| CN113624876A (zh) * | 2021-08-09 | 2021-11-09 | 海南葫芦娃药业集团股份有限公司 | 一种夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量测定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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| CN105017345B (zh) | 2017-12-15 |
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