CN111349125A - 一种异迷迭香酸苷和迷迭香酸的制备方法 - Google Patents

一种异迷迭香酸苷和迷迭香酸的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种异迷迭香酸苷和迷迭香酸的制备方法，包括:(1)提取浓缩:醇提、浓缩；(2)分离富集：稀释、上反相柱吸附、洗脱、解析；(3)再富集：浓缩、上反相柱、解析、浓缩；(4)纯化：通过制备型高效液相进行纯化；(5)富集干燥：上反相柱吸附、洗脱、解析、浓缩、干燥，得到异迷迭香酸苷纯品和迷迭香酸纯品，所述制备方法得到的异迷迭香酸苷纯品和迷迭香酸纯品纯度高，所述制备方法收率高，工艺简单，成本低。

Description

一种异迷迭香酸苷和迷迭香酸的制备方法
技术领域
本发明涉及中药成分提取技术领域，具体涉及一种异迷迭香酸苷和迷迭香酸的制备方法。
背景技术
夏枯草为唇形科植物夏枯草(Prunella.vulgarisL.)的干燥果穗，具有清火，明目，散结，消肿之功效。现代药理学研究发现夏枯草具有降压、降血糖、细胞毒、抗病毒、抗菌、抗氧化、抗过敏、免疫活性和抗炎活性等多种作用。临床上以单味夏枯草制得的夏枯草注射液用以治疗肺癌胸水、白血病、中晚期胃、大肠癌等疗效显著。
夏枯草直接作用药用原料，虽然成本低而且应用简便，但存在由于采收季节和产地不同都会造成有效成分含量的波动，同时，药用植物提取物直接应用，有效成分及其含量不清楚，给药品的质量控制造成困难的缺陷。另一方面，现有技术中，迷迭香酸提取方法存在提取的迷迭香酸的纯度不高的缺点。
发明内容
有鉴于此，本申请提供一种异迷迭香酸苷和迷迭香酸的制备方法，所述制备方法得到的异迷迭香酸苷纯品和迷迭香酸纯品纯度高，所述制备方法收率高，工艺简单，成本低。
为解决以上技术问题，本申请提供的技术方案是一种异迷迭香酸苷和迷迭香酸的制备方法，包括:
(1)提取浓缩：
取夏枯草药材为原料，粉碎后，经醇提，得到提取液A；所述提取液A减压浓缩至无醇，收集得浓缩液B；
(2)分离富集：
取所述浓缩液B稀释后上反相柱I进行吸附，用水洗脱后，用醇溶液C解析，收集解析液D，再用醇溶液E解析，收集解析液F；
(3)再富集:
所述解析液D减压浓缩，上反相柱II进行吸附后，用醇溶液G解析，收集解析液H，解析液H减压浓缩，得浓缩液I；
所述解析液F减压浓缩，上反相柱III再吸附后，用醇溶液G解析，收集解析液J，解析液J减压浓缩，得浓缩液K；
(4)纯化：
所述浓缩液I和所述浓缩液K分别通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到异迷迭香酸苷纯品溶液L和迷迭香酸纯品溶液M；
(5)富集干燥：
所述异迷迭香酸苷纯品溶液L，上反相柱IV进行吸附，吸附完成后，用水洗脱后，用醇溶液N解析，收集解析液O；将所述解析液O减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得异迷迭香酸苷纯品；
所述迷迭香酸纯品溶液M，上反相柱V进行吸附，吸附完成后，用水洗脱后，用醇溶液N解析，收集解析液P；将所述解析液P减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得迷迭香酸纯品。
优选的，所述步骤(1)醇提过程，采用体积百分比为50％-100％的甲醇溶液或乙醇溶液进行提取。
优选的，所述步骤(1)醇提过程，采用的提取方法选自回流提取、超声提取和渗漉提取中任一种。
优选的，所述步骤(1)具体包括：提取浓缩：取夏枯草药材为原料，经醇提，提取次数3-6次，每次提取1-2小时，合并所有的提取液，得到提取液A；所述提取液A50-70℃减压浓缩至无醇，收集得浓缩液B。
优选的，所述步骤(2)中所述醇溶液C为甲醇或乙醇溶液，所述醇溶液C中甲醇或乙醇的体积百分比为20％-30％；
所述醇溶液E为甲醇或乙醇溶液，所述醇溶液E中甲醇或乙醇的体积百分比为30％-50％。
优选的，所述步骤(2)具体包括：分离富集：取所述浓缩液B用水稀释1倍后上反相柱I进行吸附，用1～2倍柱体积的水进行洗脱后，用3～5倍柱体积的醇溶液C进行解析，收集解析液D，再用3～5倍柱体积的醇溶液E进行解析，收集解析液F。
优选的，所述步骤(3)中所述醇溶液G为甲醇或乙醇溶液，所述醇溶液G中甲醇或乙醇的体积百分比为90％-100％。
优选的，所述高效液相色谱的色谱条件为：以乙腈为流动相A，以体积百分比为0.1％的酸溶液为流动相B，等度洗脱。
优选的，所述高效液相色谱的色谱条件为：以乙腈为流动相A，以体积百分比为0.1％的酸溶液为流动相B，等度洗脱；流速1.0ml/min；柱温25℃；检测波长为320nm。
优选的，所述酸溶液为乙酸水溶液。
优选的，所述步骤(4)具体包括：纯化：
所述浓缩液I通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到异迷迭香酸苷纯品溶液L；
所述浓缩液K通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到异迷迭香酸苷纯品溶液L和迷迭香酸纯品溶液M。
优选的，所述步骤(5)中所述醇溶液N解析为甲醇或乙醇溶液，所述醇溶液N中甲醇或乙醇的体积百分比为95％-100％。
优选的，所述反相柱I、所述反相柱II、所述反相柱III、所述反相柱IV和所述反相柱V的反相柱填料选自大孔树脂、聚酰胺和反相色谱填料中任意一种。
优选的，所述反相色谱填料为NM100-反相聚合物色谱填料。
优选的，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂、D101型大孔吸附树脂。
优选的，所述制备方法还包括：核磁共振、制备型高相液相检测、薄层层析检测所述步骤(5)得到的异迷迭香酸苷纯品和迷迭香酸纯品。
本申请与现有技术相比，其详细说明如下：
异迷迭香酸苷为酚酸苷类化合物，酚酸苷类为酚酸类化合物。本发明技术方案提供了以夏枯草药材为原料分离并纯化异迷迭香酸苷和迷迭香酸的方法，包括：提取浓缩、分离富集、再富集、纯化和富集干燥步骤，得到的异迷迭香酸苷和迷迭香酸纯品纯度高。其中，先进行醇提操作，有利于后续步骤的进行，同时提高产品纯度。分离富集过程，取所述浓缩液B稀释后上反相柱I进行吸附，用水洗脱后，水洗去除掉糖类，鞣脂类等杂质，用醇溶液C解析，收集解析液D，收集到的解析液D主要为异迷迭香酸苷，再用醇溶液E解析，收集解析液F，收集到的解析液F主要为迷迭香酸。
解析液D和解析液F分别进行再富集操作，分离异迷迭香酸苷、迷迭香酸，有效富集异迷迭香酸苷、迷迭香酸，保证异迷迭香酸苷、迷迭香酸产品收率与纯度高。
进一步的，纯化过程通过制备型高效液相进行纯化，进一步提高纯度得到异迷迭香酸苷纯品溶液和迷迭香酸的纯品溶液，纯品溶液：分别上反相柱进行吸附，吸附完成后，用水洗脱后，用醇溶液解析，收集解析液；将解析液减压浓缩至干，再进行真空干燥，进一步提高纯度，得到异迷迭香酸苷纯品和迷迭香酸纯品。
经实验验证，本发明提供的制备方法，得到的异迷迭香酸苷纯品纯度能达到HPLC99％以上和迷迭香酸纯品纯度能达到HPLC99％以上，异迷迭香酸苷纯品收率能达到85％以上和迷迭香酸纯品收率能达到75％以上。该制备方法工艺简单，使用的化学试剂简单易得，成本低，可得到同时得到异迷迭香酸苷和迷迭香酸，且产品收率与纯度较高，产值高，可应用于工业化生产。
进一步的，本发明制备方法还包括：核磁共振、制备型高相液相检测、薄层层析检测得到的异迷迭香酸苷纯品和迷迭香酸纯品，有效保证产品质量的稳定性和可控性。
附图说明
图1为本发明制备的异迷迭香酸苷核磁氢谱；
图2为本发明制备的异迷迭香酸苷HPLC图谱；图3为本发明制备的迷迭香酸核磁氢谱；
图4为本发明制备的迷迭香酸HPLC图谱；
图5为本发明制备的异迷迭香酸苷和迷迭香酸TLC图谱。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1
一种异迷迭香酸苷和迷迭香酸的制备方法，包括:
(1)提取浓缩：取夏枯草药材为原料，经醇提，提取方法为回流提取，提取次数3-6次，每次提取1-2小时，合并所有的提取液，得到提取液A；所述提取液A50-70℃减压浓缩至无醇，收集得浓缩液B；
(2)分离富集：
取所述浓缩液B用水稀释1倍后上反相柱I进行吸附，用1倍柱体积的水进行洗脱后，水洗液弃去，用3倍柱体积的醇溶液C(体积百分比20％的乙醇溶液)进行解析，收集解析液D，再用3倍柱体积的醇溶液E(体积百分比30％的乙醇溶液)进行解析，收集解析液F；再用95％甲醇或乙醇进行洗脱，洗脱液回收利用；
(3)再富集:
解析液D减压浓缩，上反相柱II进行吸附后，用醇溶液G(体积百分比90％的乙醇溶液)解析，收集解析液H，解析液H减压浓缩，得浓缩液I；
所述解析液F减压浓缩，上反相柱III再吸附后，用醇溶液G(体积百分比90％的乙醇溶液)解析，收集解析液J，解析液J减压浓缩，得浓缩液K；
(4)纯化：
所述浓缩液I通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到异迷迭香酸苷纯品溶液L；
所述浓缩液K通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到异迷迭香酸苷纯品溶液L和迷迭香酸纯品溶液M；
(5)富集干燥：
所述异迷迭香酸苷纯品溶液L，上反相柱IV进行吸附，吸附完成后，用水洗脱后，用95-100％甲醇溶液解析，收集解析液O；将所述解析液O减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得异迷迭香酸苷纯品；
所述迷迭香酸纯品溶液M，上反相柱V进行吸附，吸附完成后，用水洗脱后，用95-100％甲醇溶液解析，收集解析液P；将所述解析液P减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得迷迭香酸纯品；
其中，所述反相柱I、所述反相柱II、所述反相柱III、所述反相柱IV和所述反相柱V的反相柱填料为NM100-反相聚合物色谱填料；
所述高效液相色谱的色谱条件为：以乙腈为流动相A，以体积百分比为0.1％的乙酸水溶液为流动相B，等度洗脱；流速1.0ml/min；柱温25℃；检测波长为320nm；其中，等度洗脱程序为：洗脱时间30min，乙腈和体积百分比为0.1％的乙酸水溶液体积比为23:77。
分组：按步骤(1)中醇提过程中提取溶剂的不同，将实验分为6组，1～3组提取溶剂分别为体积百分比为30％(对照)、50％、100％的甲醇，4～6组提取溶剂分别为体积百分比为30％(对照)、50％、100％的乙醇。
通过HPLC法检测每组异迷迭香酸苷纯品和迷迭香酸纯品纯度和收率，结果见表1。
并通过薄层色谱定性鉴别异迷迭香酸苷纯品和迷迭香酸纯品，用体积比为氯仿：甲醇：甲酸＝7:3:0.5作为展开剂，上行展开，紫外灯下(254nm)下检视可见斑点，以1wt％硫酸香草醛溶液作为显色剂，120℃加热至斑点出现，显粉色。
组2异迷迭香酸苷的核磁氢图谱见图1，迷迭香酸的核磁氢图谱见图2。异迷迭香酸苷的HPLC图谱见图3，迷迭香酸的HPLC图谱见图4，特征峰数据见表2～3。异迷迭香酸苷的和迷迭香酸的TLC图谱见图5，图中左侧斑点为迷迭香酸，右侧斑点为异迷迭香酸苷。
表1
Figure BDA0002407386400000071
表2制备的异迷迭香酸苷的色谱数据
Figure BDA0002407386400000081
表3制备的迷迭香酸的色谱数据
Figure BDA0002407386400000082
上述实验结果表明，步骤(1)醇提过程，采用体积百分比为50％-100％的甲醇溶液或乙醇溶液进行提取为优选方案。
实施例2
一种异迷迭香酸苷和迷迭香酸的制备方法，包括:
(1)提取浓缩：取夏枯草药材为原料，经体积百分比为50％的乙醇溶液进行提取，提取方法为回流提取、超声提取和渗漉提取中任一种，提取次数3-6次，每次提取1-2小时，合并所有的提取液，得到提取液A；所述提取液A50-70℃减压浓缩至无醇，收集得浓缩液B；
(2)分离富集：
取所述浓缩液B用水稀释1倍后上反相柱I进行吸附，用1倍柱体积的水进行洗脱后，水洗液弃去，用3倍柱体积的醇溶液C(体积百分比20％的乙醇溶液)进行解析，收集解析液D，再用3倍柱体积的醇溶液E(体积百分比30％的乙醇溶液)进行解析，收集解析液F；再用95％甲醇或乙醇进行洗脱，洗脱液回收利用；
(3)再富集:
所述解析液D减压浓缩，上反相柱II进行吸附后，用醇溶液G(体积百分比90％的乙醇溶液)解析，收集解析液H，解析液H减压浓缩，得浓缩液I；
所述解析液F减压浓缩，上反相柱III再吸附后，用醇溶液G(体积百分比90％的乙醇溶液)解析，收集解析液J，解析液J减压浓缩，得浓缩液K；
(4)纯化：
所述浓缩液I通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到异迷迭香酸苷纯品溶液L；
所述浓缩液K通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到异迷迭香酸苷纯品溶液L和迷迭香酸纯品溶液M；
(5)富集干燥：
所述异迷迭香酸苷纯品溶液L，上反相柱IV进行吸附，吸附完成后，用水洗脱后，用95-100％甲醇溶液解析，收集解析液O；将所述解析液O减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得异迷迭香酸苷纯品；
所述迷迭香酸纯品溶液M，上反相柱V进行吸附，吸附完成后，用水洗脱后，用95-100％甲醇溶液解析，收集解析液P；将所述解析液P减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得迷迭香酸纯品；
其中，所述反相柱I、所述反相柱II、所述反相柱III、所述反相柱IV和所述反相柱V的反相柱填料为NM100-反相聚合物色谱填料。
所述高效液相色谱的色谱条件为：以乙腈为流动相A，以体积百分比为0.1％的乙酸水溶液为流动相B，等度洗脱；流速1.0ml/min；柱温25℃；检测波长为320nm；其中，等度洗脱程序为：洗脱时间30min，乙腈和体积百分比为0.1％的乙酸水溶液体积比为23:77。
分组：按步骤(3)中提取方法的不同，将实验分为3组，5、7～8组提取方法依次为回流提取、超声提取、渗漉提取。
通过HPLC法检测每异迷迭香酸苷纯品和迷迭香酸纯品纯度和收率，5组结果见表1，7～8组结果见表4。
表4
Figure BDA0002407386400000101
上述实验结果表明，步骤(1)中采用回流提取、超声提取、渗漉提取可作为本发明提取方法。
实施例3
一种异迷迭香酸苷和迷迭香酸的制备方法，包括:
(1)提取浓缩：取夏枯草药材为原料，经体积百分比为50％的乙醇溶液进行提取，提取方法为回流提取，提取次数3-6次，每次提取1-2小时，合并所有的提取液，得到提取液A；所述提取液A50-70℃减压浓缩至无醇，收集得浓缩液B；
(2)分离富集：
取所述浓缩液B用水稀释1倍后上反相柱I进行吸附，用1倍柱体积的水进行洗脱后，水洗液弃去，用3倍柱体积的醇溶液C进行解析，收集解析液D，再用3倍柱体积的醇溶液E进行解析，收集解析液F；再用95％甲醇或乙醇进行洗脱，洗脱液回收利用；
(3)再富集:
所述解析液D减压浓缩，上反相柱II进行吸附后，用醇溶液G(体积百分比90％的乙醇溶液)解析，收集解析液H，解析液H减压浓缩，得浓缩液I；
所述解析液F减压浓缩，上反相柱III再吸附后，用醇溶液G(体积百分比90％的乙醇溶液)解析，收集解析液J，解析液J减压浓缩，得浓缩液K；
(4)纯化：
所述浓缩液I通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到异迷迭香酸苷纯品溶液L；
所述浓缩液K通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到异迷迭香酸苷纯品溶液L和迷迭香酸纯品溶液M；
(5)富集干燥：
所述异迷迭香酸苷纯品溶液L，上反相柱IV进行吸附，吸附完成后，用水洗脱后，用95-100％甲醇溶液解析，收集解析液O；将所述解析液O减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得异迷迭香酸苷纯品；
所述迷迭香酸纯品溶液M，上反相柱V进行吸附，吸附完成后，用水洗脱后，用95-100％甲醇溶液解析，收集解析液P；将所述解析液P减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得迷迭香酸纯品；
其中，所述反相柱I、所述反相柱II、所述反相柱III、所述反相柱IV和所述反相柱V的反相柱填料为NM100-反相聚合物色谱填料。
所述高效液相色谱的色谱条件为：以乙腈为流动相A，以体积百分比为0.1％的乙酸水溶液为流动相B，等度洗脱；流速1.0ml/min；柱温25℃；检测波长为320nm；其中，等度洗脱程序为：洗脱时间30min，乙腈和体积百分比为0.1％的乙酸水溶液体积比为23:77。
分组：按步骤(2)中醇溶液C、醇溶液E的不同，将实验分为：
组5:C：体积百分比20％乙醇溶液、E：体积百分比30％乙醇溶液；
组9:C：体积百分比30％乙醇溶液、E：体积百分比50％乙醇溶液；
组10:C：体积百分比20％甲醇溶液、E：体积百分比30％甲醇溶液；
组11:C：体积百分比30％甲醇溶液、E：体积百分比50％甲醇溶液；
组12:C：体积百分比40％甲醇溶液、E：体积百分比60％甲醇溶液(对照)。
通过HPLC法检测每异迷迭香酸苷纯品和迷迭香酸纯品纯度和收率，5组结果见表1，9～12组结果见表5
表5
Figure BDA0002407386400000121
上述实验结果表明，所述步骤(2)中醇溶液C为甲醇或乙醇溶液，醇溶液C中甲醇或乙醇的体积百分比为20％-30％；醇溶液E为甲醇或乙醇溶液，醇溶液E中甲醇或乙醇的体积百分比为30％-50％为本发明优选方案。
实施例4
一种异迷迭香酸苷和迷迭香酸的制备方法，包括:
(1)提取浓缩：取夏枯草药材为原料，经体积百分比为50％的乙醇溶液进行提取，提取方法为回流提取，提取次数3-6次，每次提取1-2小时，合并所有的提取液，得到提取液A；所述提取液A50-70℃减压浓缩至无醇，收集得浓缩液B；
(2)分离富集：
取所述浓缩液B用水稀释1倍后上反相柱I进行吸附，用1倍柱体积的水进行洗脱后，水洗液弃去，用3倍柱体积的醇溶液C(体积百分比30％的乙醇溶液)进行解析，收集解析液D(体积百分比30％的乙醇溶液)，再用3倍柱体积的醇溶液E进行解析，收集解析液F；再用95％甲醇或乙醇进行洗脱，洗脱液回收利用；
提取浓缩：取夏枯草药材为原料，经体积百分比为50％的乙醇溶液进行提取，提取方法为回流提取，提取次数3-6次，每次提取1-2小时，合并所有的提取液，得到提取液A；所述提取液A50-70℃减压浓缩至无醇，收集得浓缩液B；
(3)再富集:
所述解析液D减压浓缩，上反相柱II进行吸附后，用醇溶液G解析，收集解析液H，解析液H减压浓缩，得浓缩液I；
所述解析液F减压浓缩，上反相柱III再吸附后，用醇溶液G解析，收集解析液J，解析液J减压浓缩，得浓缩液K；
(4)纯化：
所述浓缩液I通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到异迷迭香酸苷纯品溶液L；
所述浓缩液K通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到异迷迭香酸苷纯品溶液L和迷迭香酸纯品溶液M；
(5)富集干燥：
所述异迷迭香酸苷纯品溶液L，上反相柱IV进行吸附，吸附完成后，用水洗脱后，用95-100％甲醇溶液解析，收集解析液O；将所述解析液O减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得异迷迭香酸苷纯品；
所述迷迭香酸纯品溶液M，上反相柱V进行吸附，吸附完成后，用水洗脱后，用95-100％甲醇溶液解析，收集解析液P；将所述解析液P减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得迷迭香酸纯品；
其中，所述反相柱I、所述反相柱II、所述反相柱III、所述反相柱IV和所述反相柱V的反相柱填料为NM100-反相聚合物色谱填料。
所述高效液相色谱的色谱条件为：以乙腈为流动相A，以体积百分比为0.1％的乙酸水溶液为流动相B，等度洗脱；流速1.0ml/min；柱温25℃；检测波长为320nm；其中，等度洗脱程序为：洗脱时间为30min，乙腈和体积百分比为0.1％的乙酸水溶液体积比为23:77。
分组：按步骤(3)中醇溶液G的不同，将实验分为12组。
19组～21组、22、5组、23组：所述醇溶液G分别为体积百分比100％的甲醇溶液、体积百分比90％的甲醇溶液、体积百分比80％的甲醇溶液(对照)、体积百分比100％的乙醇溶液、体积百分比90％的乙醇溶液、体积百分比80％的乙醇溶液(对照)；
通过HPLC法检测每异迷迭香酸苷纯品和迷迭香酸纯品纯度和收率，5组结果见表1，19～23组结果见表6。
表6
Figure BDA0002407386400000141
Figure BDA0002407386400000151
上述实验结果表明，所述步骤(2)中醇溶液G为甲醇或乙醇溶液，醇溶液G中甲醇或乙醇的体积百分比为90％-100％为本发明优选方案。
实施例5
一种异迷迭香酸苷和迷迭香酸的制备方法，包括:
(1)提取浓缩：取夏枯草药材为原料，经体积百分比为50％的乙醇溶液进行提取，提取方法为回流提取，提取次数3-6次，每次提取1-2小时，合并所有的提取液，得到提取液A；所述提取液A50-70℃减压浓缩至无醇，收集得浓缩液B；
(2)分离富集：
取所述浓缩液B用水稀释1倍后上反相柱I进行吸附，用1倍柱体积的水进行洗脱后，水洗液弃去，用3倍柱体积的醇溶液C(体积百分比20％的乙醇溶液)进行解析，收集解析液D，再用3倍柱体积的醇溶液E(体积百分比30％的乙醇溶液)进行解析，收集解析液F；再用95％甲醇或乙醇进行洗脱，洗脱液回收利用；
(3)再富集:
解析液D减压浓缩，上反相柱II进行吸附后，用醇溶液G(体积百分比90％的乙醇溶液)解析，收集解析液H，解析液H减压浓缩，得浓缩液I；
所述解析液F减压浓缩，上反相柱III再吸附后，用醇溶液G(体积百分比90％的乙醇溶液)解析，收集解析液J，解析液J减压浓缩，得浓缩液K；
(4)纯化：
所述浓缩液I通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到异迷迭香酸苷纯品溶液L；
所述浓缩液K通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到异迷迭香酸苷纯品溶液L和迷迭香酸纯品溶液M；
(5)富集干燥：
所述异迷迭香酸苷纯品溶液L，上反相柱IV进行吸附，吸附完成后，用水洗脱后，用95-100％甲醇溶液解析，收集解析液O；将所述解析液O减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得异迷迭香酸苷纯品；
所述迷迭香酸纯品溶液M，上反相柱V进行吸附，吸附完成后，用水洗脱后，用95-100％甲醇溶液解析，收集解析液P；将所述解析液P减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得迷迭香酸纯品；
其中，所述高效液相色谱的色谱条件为：以乙腈为流动相A，以体积百分比为0.1％的乙酸水溶液为流动相B，等度洗脱；流速1.0ml/min；柱温25℃；检测波长为320nm；其中，等度洗脱程序为：洗脱时间为30min，乙腈和体积百分比为0.1％的乙酸水溶液体积比为23:77。
分组：按反相柱填料填料的不同，将实验分为5组：
5组：所述反相柱I、所述反相柱II、所述反相柱III、所述反相柱IV和所述反相柱V的反相柱填料为NM100-反相聚合物色谱填料；
24组：所述反相柱I、所述反相柱II、所述反相柱III、所述反相柱IV和所述反相柱V的反相柱填料为聚酰胺；
25组：所述反相柱I、所述反相柱II、所述反相柱III、所述反相柱IV和所述反相柱V的反相柱填料为AB-8型大孔吸附树脂；
26组：所述反相柱I、所述反相柱II、所述反相柱III、所述反相柱IV和所述反相柱V的反相柱填料为D101型大孔吸附树脂。
通过HPLC法检测每异迷迭香酸苷纯品和迷迭香酸纯品纯度和收率，5组结果见表1，24～26组结果见表7。
表7
Figure BDA0002407386400000171
上述实验结果表明，本发明反相柱I、所述反相柱II、所述反相柱III、所述反相柱IV和所述反相柱V的反相柱填料选自大孔树脂、聚酰胺和反相色谱填料中任意一种。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种异迷迭香酸苷和迷迭香酸的制备方法，其特征在于，包括:
(1)提取浓缩：
取夏枯草药材为原料，粉碎后，经醇提，得到提取液A；所述提取液A减压浓缩至无醇，收集得浓缩液B；
(2)分离富集：
取所述浓缩液B稀释后上反相柱I进行吸附，用水洗脱后，用醇溶液C解析，收集解析液D，再用醇溶液E解析，收集解析液F；
(3)再富集:
所述解析液D减压浓缩，上反相柱II进行吸附后，用醇溶液G解析，收集解析液H，解析液H减压浓缩，得浓缩液I；
所述解析液F减压浓缩，上反相柱III再吸附后，用醇溶液G解析，收集解析液J，解析液J减压浓缩，得浓缩液K；
(4)纯化：
所述浓缩液I和所述浓缩液K分别通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到异迷迭香酸苷纯品溶液L和迷迭香酸纯品溶液M；
(5)富集干燥：
所述异迷迭香酸苷纯品溶液L，上反相柱IV进行吸附，吸附完成后，用水洗脱后，用醇溶液N解析，收集解析液O；将所述解析液O减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得异迷迭香酸苷纯品；
所述迷迭香酸纯品溶液M，上反相柱V进行吸附，吸附完成后，用水洗脱后，用醇溶液N解析，收集解析液P；将所述解析液P减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得迷迭香酸纯品。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)醇提过程，采用体积百分比为50％-100％的甲醇溶液或乙醇溶液进行提取。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)醇提过程，采用的提取方法选自回流提取、超声提取和渗漉提取中任一种。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)具体包括：提取浓缩：取夏枯草药材为原料，经醇提，提取次数3-6次，每次提取1-2小时，合并所有的提取液，得到提取液A；所述提取液A50-70℃减压浓缩至无醇，收集得浓缩液B。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中所述醇溶液C为甲醇或乙醇溶液，所述醇溶液C中甲醇或乙醇的体积百分比为20％-30％；
所述醇溶液E为甲醇或乙醇溶液，所述醇溶液E中甲醇或乙醇的体积百分比为30％-50％。
6.据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)具体包括：分离富集：取所述浓缩液B稀释后上反相柱I进行吸附，用1～2倍柱体积的水进行洗脱后，用3～5倍柱体积的醇溶液C进行解析，收集解析液D，再用3～5倍柱体积的醇溶液E进行解析，收集解析液F。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中所述醇溶液G为甲醇或乙醇溶液，所述醇溶液G中甲醇或乙醇的体积百分比为90％-100％。
8.所述高效液相色谱的色谱条件为：以乙腈为流动相A，以体积百分比为0.1％的酸溶液为流动相B，等度洗脱。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中所述醇溶液N解析为甲醇或乙醇溶液，所述醇溶液N中甲醇或乙醇的体积百分比为95％-100％。
10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述反相柱I、所述反相柱II、所述反相柱III、所述反相柱IV和所述反相柱V的反相柱填料选自大孔树脂、聚酰胺和反相色谱填料中任意一种。
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