CN106046098B - 一种乙酰基人参皂苷Rd及其制备方法 - Google Patents

一种乙酰基人参皂苷Rd及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种乙酰基人参皂苷Rd及其制备方法，方法包括以下步骤：1)提取：取人参花蕾，粉碎，用甲醇溶液进行提取，减压浓缩；2)萃取：取浓缩浸膏加蒸馏水溶解，依次用环己烷、乙酸乙酯萃取，将余下的浸膏减压回收溶剂，3)富集：将上述得到的萃取液加入到大孔吸附树脂柱上吸附，先水洗，再以60％甲醇洗脱得到含乙酰基人参皂苷Rd的富集液；4)中压MCI GEL柱层析：将上述所得富集液经MCI GEL柱层析除去部分色素和杂质，5)制备：将上述洗脱液经旋转蒸发仪减压浓缩后上高效制备液相，以甲醇水进行洗脱。该方法具有分离工艺简单、快速、经济、高效的特点。

Description

一种乙酰基人参皂苷Rd及其制备方法
技术领域
本发明公开一种从人参花蕾中提取和分离乙酰基人参皂苷Rd(Ac-Rd)的制备方法，属于中药单体提取技术领域。
背景技术
人参皂苷是人参的主要活性成分，在人参的根、茎、叶、花和果实中均含有人参皂苷，但各个部位中人参皂苷的种类和含量不同。人参地上部分是不可忽视的宝贵资源，其中人参花蕾是人参含苞待放的花，人参花中的总皂苷含量最高(约5～7％)，部分单体皂苷的含量超过人参根中的十倍(如人参皂苷Re)。研究发现，人参地上部分皂苷成分的药理活性与人参根总皂苷相似，因此人参地上部分尤其是人参花具有很好的药物开发利用前景。迄今为止已从人参各部位分离鉴定的单体人参皂苷已有200余种，其中乙酰基人参皂苷是在葡萄糖基的6位链接一个乙酰基，使得该人参皂苷的极性变小，亲水性变弱。但分子中的乙酰基不稳定，易发生水解反应。
现已分离得到的乙酰基人参皂苷主要有Ac-Rg1，20(S)-Ac-Rg2，20(R)-Ac-Rg2，已有通过乙酰化反应的手段得到乙酰基人参皂苷Rd，但尚未有从天然植物中分离得到其单体。
发明内容
本发明提供了一种乙酰基人参皂苷Rd及其制备方法，能够简单、高效、快速提纯乙酰基人参皂苷Rd。
本发明所述的一种乙酰基人参皂苷Rd，具有以下结构式：
白色粉末；分子式：C50H84O19；分子量：988；mp 125-127℃。
名称：3β,12β,20S-三羟基-达玛-24-烯3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-6”-乙酰基-20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，即乙酰基人参皂苷Rd。
本发明所述的一种乙酰基人参皂苷Rd的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1)提取：取新鲜干燥后的人参花蕾，粉碎，用98％-100％甲醇溶液进行提取，减压浓缩制成相对密度为1.1的浸膏；
2)萃取：取浓缩浸膏加蒸馏水溶解，依次用环己烷、乙酸乙酯萃取，待被两种溶剂萃取完全后，将余下的浸膏减压回收溶剂，即得到含人参皂苷类化合物的水层萃取液；
3)富集：将上述得到的萃取液加入到大孔吸附树脂柱上吸附，先以水洗脱掉提取液中的糖和无机盐类，再以60％甲醇洗脱得到含乙酰基人参皂苷Rd的富集液；
4)中压MCI GEL柱层析：将上述所得富集液经MCI GEL柱层析除去部分色素和杂质，用甲醇水进行洗脱，根据TLC检查合并乙酰基人参皂苷Rd洗脱液；
5)制备：将上述洗脱液经旋转蒸发仪减压浓缩后上高效制备液相，以甲醇水进行洗脱，根据紫外检测器谱图接收目标组分，洗脱液用旋转蒸发仪旋干，冷冻干燥后即得乙酰基人参皂苷Rd。
作为本发明的优选方案，所述步骤5)中，色谱柱为C18反相硅胶色谱柱，其填料粒径3-5μm，色谱柱内径25-30mm，柱子长度250-300mm。
作为本发明的优选方案，所述步骤1中的甲醇用量为人参花蕾重量的3-5倍，所述提取方法为加热回流提取，提取时间为每次2h，提取次数为3-5次，浓缩温度控制在40-50℃。
作为本发明的优选方案，所述步骤2中溶解浸膏所用的水的量是浸膏重量的0.2-0.5倍。
作为本发明的优选方案，所述步骤3中所用的大孔吸附树脂为Diaion HP-20、D101或HPD100等非极性树脂，所用的洗脱溶剂为60％甲醇。
作为本发明的优选方案，所述步骤4中所用中压MCI GEL柱层析所用的填料为MCIGEL F型，粒度50-70u，洗脱剂甲醇水的比例依次是60％、80％，流速为5-8mL/min。
作为本发明的优选方案，所述步骤5中采用以70％甲醇水溶液进行恒梯度洗脱。
目前尚未见到有关乙酰基人参皂苷Rd的提取方法的报道，该化合物属于新天然产物，属于在天然植物中首次分离制备得到。
发明有益效果
提供了一种乙酰基人参皂苷Rd分离方法，将鲜人参花蕾提取液经大孔吸附树脂层析、中压MCI GEL柱层析和高效液相制备分离纯化得到了高纯度的乙酰基人参皂苷Rd，提取纯化中的浓缩温度控制在50℃以下，最后制备得到的洗脱液用旋转蒸发仪旋干，温度在40℃，保证乙酰基人参皂苷Rd不发生降解；提供了一种一步富集、两步纯化得到单体乙酰基人参皂苷Rd纯度在97％以上的工艺方法，提取工艺简化，操作步骤缩短，保证乙酰基人参皂苷Rd不因纯化时间太长而大量损失，适合放大进行工业化生产。具有分离工艺简单、快速、经济、高效的特点，为进一步探索乙酰基人参皂苷Rd的药理活性奠定了基础。
附图说明
图1本发明所得到的乙酰基人参皂苷Rd(Ac-Rd)质谱图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。实施方式中所用的实验方法，如无特殊说明，均为中药化学领域技术人员熟知的常规实验方法。
下述实施例中，高效制备液相为北京创新通恒科技有限公司LC-3000型高效液相色制备谱仪，包括P3050二元泵、UV-3000紫外检测器、7125i手动进样器、5mL定量环；色谱柱Daisogel C-18(5μm,25mm i.d.×250mm)。
实施例1
称取4Kg新鲜干燥后的人参花蕾，粉碎，加入12L的纯甲醇溶液，加热回流提取5次，每次2h，离心过滤，去除残渣，得滤液，滤液在50℃下回收甲醇，减压浓缩制成相对密度为1.1的浸膏，往浸膏中加入0.2倍量的水分散溶解，依次用环己烷、乙酸乙酯萃取后，回收水层萃取液，将得到的萃取液加入到大孔吸附树脂Diaion HP-20上进行吸附，先以水洗脱掉提取液中糖类和无机盐类，再以60％甲醇洗脱富集乙酰基人参皂苷Rd，所得富集液经中压MCI GEL柱层析除去部分色素和杂质，用甲醇水(60％，80％)进行洗脱，流速为5mL/min，根据TLC检查合并含乙酰基人参皂苷Rd的洗脱液，洗脱液在40℃下用旋转蒸发仪旋干后上高效制备液相，以70％甲醇水进行恒梯度洗脱，根据液相色谱图接收目标组分，洗脱液在40℃下用旋转蒸发仪旋干，冷冻干燥后即得乙酰基人参皂苷Rd，纯度为98％，其质谱图见图1。
实施例2
称取4Kg新鲜干燥后的人参花蕾，粉碎，加入16L的纯甲醇溶液，加热回流提取4次，每次2h，离心过滤，去除残渣，得滤液，滤液在50℃下回收甲醇，减压浓缩制成相对密度为1.1的浸膏，往浸膏中加入0.3倍量的水分散溶解，依次用环己烷、乙酸乙酯萃取后，回收水层萃取液，将得到的萃取液加入到大孔吸附树脂D101上进行吸附，先以水洗脱掉提取液中糖类和无机盐类，再以60％甲醇洗脱富集乙酰基人参皂苷Rd，所得富集液经中压MCI GEL柱层析除去部分色素和杂质，用甲醇水(60％，80％)进行洗脱，流速为6mL/min，根据TLC检查合并含乙酰基人参皂苷Rd的洗脱液，洗脱液在40℃下用旋转蒸发仪旋干后上高效制备液相，以70％甲醇水进行恒梯度洗脱，根据液相色谱图接收目标组分，洗脱液在40℃下用旋转蒸发仪旋干，冷冻干燥后即得乙酰基人参皂苷Rd，纯度为98％，其质谱图见图1。
实施例3
称取4Kg新鲜干燥后的人参花蕾，粉碎，加入20L的纯甲醇溶液，加热回流提取3次，每次2h，离心过滤，去除残渣，得滤液，滤液在50℃下回收甲醇，减压浓缩制成相对密度为1.1的浸膏，往浸膏中加入0.5倍量的水分散溶解，依次用环己烷、乙酸乙酯萃取后，回收水层萃取液，将得到的萃取液加入到大孔吸附树脂HPD100上进行吸附，先以水洗脱掉提取液中糖类和无机盐类，再以60％甲醇洗脱富集乙酰基人参皂苷Rd，所得富集液经中压MCI GEL柱层析除去部分色素和杂质，用甲醇水(60％，80％)进行洗脱，流速为8mL/min，根据TLC检查合并含乙酰基人参皂苷Rd的洗脱液，洗脱液在40℃下用旋转蒸发仪旋干后上高效制备液相，以70％甲醇水进行恒梯度洗脱，根据液相色谱图接收目标组分，洗脱液在40℃下用旋转蒸发仪旋干，冷冻干燥后即得乙酰基人参皂苷Rd，纯度为96％，其质谱图见图1。
表征
将上述实施实例中得到的乙酰基人参皂苷Rd单体，测定其质谱，见图1，数据表征为HR-ESI-MS：分子量1027.5266[M+K]+为准分子离子峰(计算值1027.5244，C50H84O19K)，847.4830[M–Glc–H2O+K]+。

Claims (3)

1.一种乙酰基人参皂苷Rd的制备方法，乙酰基人参皂苷Rd具有以下结构式：
其特征在于包括如下步骤：
1) 提取：称取新鲜干燥后的人参花蕾，粉碎，加入3-5倍重量的98%-100%甲醇溶液，加热回流提取3-5次，每次2 h，离心过滤，去除残渣，得滤液，滤液在50℃以下回收甲醇，减压浓缩制成相对密度为1.1的浸膏；
2) 萃取：往步骤1）得到的浸膏中加入蒸馏水分散溶解，依次用环己烷、乙酸乙酯萃取，待被两种溶剂萃取完全后，将余下的浸膏减压回收溶剂，即得到含人参皂苷类化合物的水层萃取液；
3) 富集：将步骤2）得到的水层萃取液加入到非极性大孔吸附树脂柱上吸附，先以水洗脱掉提取液中的糖和无机盐类，再以60%甲醇洗脱富集乙酰基人参皂苷Rd；
4) 中压MCI GEL柱层析：将步骤3）所得富集液经MCI GEL柱层析除去部分色素和杂质，依次用60%甲醇、80%甲醇进行梯度洗脱，流速为5-8 mL/min，根据TLC检查合并含乙酰基人参皂苷Rd洗脱液；
5) 制备：将步骤4）得到的洗脱液经旋转蒸发仪减压浓缩后上高效液相制备色谱，以70%甲醇水进行恒梯度洗脱，根据液相色谱图接收目标组分，洗脱液在40℃下旋转蒸发仪旋干，冷冻干燥后即得乙酰基人参皂苷Rd；
所述步骤3）中，所用的非极性大孔吸附树脂选自Diaion HP-20、D101或HPD100树脂；
所用的MCI GEL柱层析所用的填料为MCI GEL F型，粒度50-70u；
步骤5）中，高效液相制备色谱的色谱柱为C18反相硅胶色谱柱，其填料粒径3-5 μm，色谱柱内径25-30 mm，柱子长度250-300 mm。
2.根据权利要求1所述的提取制备乙酰基人参皂苷Rd的方法，其特征在于所述步骤2）中，浸膏中加入水量为浸膏重量的0.2-0.5倍。
3.根据权利要求1所述的提取制备乙酰基人参皂苷Rd的方法，其特征在于所述步骤1）中，浓缩温度控制在40-50℃。
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