CN104529968B - 一种抗肿瘤二萜类化合物，其药物组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及从黑骨藤中分离得到的一种新的抗肿瘤二萜类化合物Ⅰ，其药物组合物及其制备方法和医药用途。该化合物是一种新颖的二萜类化合物，体外试验具有显著的抗肿瘤作用，可以用来制备抗肿瘤药物。

Description

一种抗肿瘤二萜类化合物，其药物组合物及其制备方法和 用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及从黑骨藤中分离得到的一种新的抗肿瘤二萜类化合物Ⅰ，其药物组合物及其制备方法和医药用途。
背景技术
萝孽科（Asclepiadaceae），约180属2200种，分布于世界热带、亚热带、温带地区。我国产44属245种33变种，各省区均有分布，但主要分布在西南和华南地区。该科植物绝大多数为草本或木质藤本，少数为直立灌木，几乎都含乳汁，通常有毒，乳汁及根部毒性较大，该科植物均可药用。杠柳属植物属萝孽科，数量稀少，全世界共约12种，分布于亚洲温带地区、欧洲南部和非洲热带地区。我国产4种，分别为杠柳、黑骨藤、青蛇藤、多花青蛇藤。该属植物具有多种药理作用，如抗炎、强心、抗癌等活性；另外还具有杀虫活性。
其中黑骨藤为萝藦科杠柳属植物黑龙骨Periploca forrestii Schltr. 的干燥根或全株。黑骨藤全株入药，具有通经、活血、解毒、祛风的功效，主治风湿关节痛、跌打损伤、月经不调等症，是民间广泛应用于治疗闭合性软组织损伤、风湿与类风湿等疾病的民族药。目前以黑骨藤为主的复方制剂已广泛用于临床。
植物来源抗肿瘤药物乃当今抗肿瘤药物市场上的主角。随着科学技术的不断发展和分子生物学的兴起，对已发现的植物来源抗肿瘤药物的作用机制的认识也日渐深入。为满足抗肿瘤药物市场的需要，通过化学结构的修饰与改造，获得了毒性低而抗肿瘤作用显著的新衍生物；而通过药用植物生物技术与生化工程，大规模生产植物来源抗肿瘤药物亦取得突飞猛进的发展。
发明人在对黑骨藤化学成分研究过程中，分离得到了一种新的二萜化合物Ⅰ，目前并未有文献报道，更未有该化合物的活性报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种从黑骨藤中分离得到的一种新的抗肿瘤二萜类化合物Ⅰ，其药物组合物及其制备方法和医药用途。
本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
具有下述结构式的二萜化合物Ⅰ，
药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物Ⅰ和药学上可接受的载体。
化合物Ⅰ的制备方法：黑骨藤干燥药材粉碎，95%乙醇回流提取3次，每次3h，减压浓缩得浸膏。浸膏用水混悬，乙酸乙酯萃取3次，减压浓缩得乙酸乙酯提取物。乙酸乙酯提取物以硅胶柱色谱法分离，石油醚-醋酸乙酯-甲醇梯度洗脱（9:1:1，8:1:2，7:1:3，6:1:4，5:1:5）得到5个组分。组分3以硅胶柱色谱法分离，二氯甲烷-丙酮梯度洗脱（10:1，6:1，4:1）得到3个组分。组分3经制备HPLC纯化制备，甲醇-水等度洗脱（55:45）得到纯的化合物Ⅰ。
化合物Ⅰ在制备抗结肠癌、非小细胞肺癌和乳腺癌药物中的应用。
上述药物组合物在制备抗结肠癌、非小细胞肺癌和乳腺癌药物中的应用。
本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。 该药物组合物含有0.1-99.0％，优选为0.5-90.0％的本发明化合物，其余为药物学上可接受的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经口服和注射两种形式给药。
口服可用其固体或液体制剂，如粉剂、片剂、糖衣片剂、胶囊、酊剂、糖浆、滴丸剂等。
注射可用其固体或液体制剂，如粉针剂、溶液形注射剂。
附图说明
图1：化合物Ⅰ结构示意图
图2：化合物Ⅰ计算ECD和实验ECD图。
具体实施方式
实施例1：
黑骨藤干燥药材（10kg）粉碎，95%乙醇回流提取3次（3×30L），每次3h，减压浓缩得浸膏（560g）。浸膏用水（3L）混悬，乙酸乙酯萃取3次（3×3L），减压浓缩得乙酸乙酯提取物（210g）。乙酸乙酯提取物以硅胶柱色谱法分离，石油醚-醋酸乙酯-甲醇梯度洗脱（9:1:1，8:1:2，7:1:3，6:1:4，5:1:5）得到5个组分。组分3（37g）以硅胶柱色谱法分离，二氯甲烷-丙酮梯度洗脱（10:1，6:1，4:1）得到3个组分。组分3（9g）经制备HPLC纯化制备，甲醇-水等度洗脱（55:45）得到纯的化合物Ⅰ（19mg）。
化合物Ⅰ结构确证：淡黄色粉末；HR-ESIMS显示[M+H]+为m/z 301.2218，综合核磁碳谱和氢谱可得分子式为C20H28O2，不饱和度为7；红外IR显示羟基(3429 cm-1)、羰基(1716cm-1)和碳碳双键(1654, 1613 cm-1)存在；1H-NMR (CDCl3, δppm, 600 MHz)和13C-NMR(CDCl3, δppm, 150 MHz)数据见表1。通过上述信息可初步确定化合物Ⅰ平面结构，该结构与二维谱（HSQC和HMBC）吻合；进一步通过ROESY谱确定其相对构型。绝对构型通过ECD确证（图2）。
表1 1H NMR和13C NMR信号归属
实施例2：
体外抗人结肠癌细胞（HCT-8）、非小细胞肺癌（A549）、乳腺癌细胞（MCF-7）和人脐静脉内皮细胞（VEC）的活性测定：
平板打孔法测定KB 和细胞株抑制活性，试验方法如下：取对数生长期细胞培养于96 孔培养板内，每孔100µL ( 含1200-1400 个肿瘤细胞)，次日，给药组加入含有不同浓度化合物，每药设4 个剂量组，每组设3 个平行板。对照组加入与化合物等体积的溶剂，置5％CO2温箱中于37℃培养，4d 后弃去培养液，每孔加入200µL 0.2％MTT 溶液，37℃保温4h，弃去上清液，每孔加入DMSO 150µL ，轻度震荡后，用酶标仪检测波长570nm 条件下（参考波长450nm）测定光密度（OD）。以溶剂对照处理的细胞株为对照组，以紫杉醇作为阳性对照药品。测量结果用以下公式计算药物对肿瘤细胞和正常细胞的抑制率：
抑制率=（对照组OD值-给药组OD值）/对照组OD值×100%
由所得细胞抑制率使用LOGIT 法进而计算化合物IC50 数值。结果见表2。
试验结果表明，本发明化合物I对结肠癌细胞（HCT-8）、非小细胞肺癌（A549）和乳腺癌细胞（MCF-7）具有很强的抑制作用，抑制作用强于阳性药。化合物I对正常细胞（人脐静脉内皮细胞VEC）的抑制作用要弱于阳性药，表明本发明化合物I对正常细胞细胞毒作用较弱。综合说明，化合物I可以选择性的抑制结肠癌细胞、非小细胞肺癌细胞和乳腺癌细胞。
表2 化合物I对肿瘤细胞和正常细胞的抑制作用(IC50(μM))
实施例3：
按实施例1方法制得化合物Ⅰ，将其与药剂学意义上的填充剂、崩解剂组成的常规片剂或胶囊剂；或者是将其与填充剂和羟丙甲基纤维素组成的缓释片剂或胶囊剂；其中填充剂可选乳糖、微晶纤维素、糊精、淀粉、磷酸钙；崩解剂可选用羟丙纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚维酮，交联羧甲基纤维素钠；亦可选加粘合剂、润滑剂或湿润剂。
例如按照重量比，本发明中的化合物1份，乳糖或微晶纤维素0.05～0.2，羟丙纤维素或羧甲基淀粉钠0.05～0.2；或者，本发明中的化合物1份，乳糖或微晶纤维素0.03～0.08，羟丙甲基纤维素K4M 0.15～0.4。 所述药物更为理想的配方为：按照重量比，本发明中的化合物1份，乳糖或微晶纤维素0.08～0.12，羟丙纤维素或羧甲基淀粉钠0.08～0.12；或者，本发明中的化合物1份，乳糖或微晶纤维素0. 05～0.07，羟丙甲基纤维素 K4M 0.2～0.3。
实施例4：
按实施例1方法制得化合物Ⅰ，将其按常规口服液制法制成口服液。
实施例5：
按实施例1方法制得化合物Ⅰ，将其与20％聚氧乙烯醚蓖麻油混合，溶解到含磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、尼泊金酯和羧甲基纤维素钠的水中，制成的混悬型注射剂。也可将实施例1的方法制得的化合物各用少量的DMSO溶解后，按常规加注射用水，精滤，灌封、灭菌制成注射液。
实施例6：
按实施例1方法制得化合物Ⅰ，将其用少量的DMSO溶解后， 将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶解，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装与安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封的粉针剂。

Claims (3)

1.一种具有下列结构式的二萜化合物I
的制备方法，其特征在于：黑骨藤干燥药材粉碎，95%乙 醇回流提取3次，每次3h，减压浓缩得浸膏，浸膏用水混悬，乙酸乙酯萃取3次，减压浓缩得 乙酸乙酯提取物，乙酸乙酯提取物以硅胶柱色谱法分离，石油醚-醋酸乙酯-甲醇梯度洗脱，梯度洗脱比例为9:1:1，8:1:2，7:1:3，6:1:4，5:1:5得到5个组分，组分3以硅胶柱色谱法分离，二氯甲烷-丙酮梯度洗脱，梯度洗脱比例为10:1，6:1，4:1得到3个组分，组分3经制备HPLC纯化制备，甲醇-水等度洗脱，等度洗脱比例为55:45，得到纯的化合物I。
2.根据权利要求1所述的化合物I在制备抗结肠癌、非小细胞肺癌和乳腺癌药物中的应用。
3.含有治疗有效量的根据权利要求1所述的二萜化合物I和药学上可接受的载体的药物组合物在制备抗结肠癌、非小细胞肺癌和乳腺癌药物中的应用。
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