CN105380968A - 唐古特白刺总生物碱提取物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种唐古特白刺总生物碱提取物及其制备方法，该方法包括制备提取液、浓缩、酸化、碱化、干燥、粉碎步骤。本发明还涉及该提取物在制备预防和/或治疗肿瘤药物、保健品或医疗食品中的应用。本发明的唐古特白刺总生物碱提取物的制备方法具有工艺简便、成本低廉、安全高效、有机溶剂残留低等显著优点；药理实验证明本发明唐古特白刺提取物具有较好的抗肿瘤作用，因而可将其用于制备抗肿瘤的药物、保健品或医疗食品。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体地说，是一种唐古特白刺总生物碱提取物及其制备方法，以及将该提取物用于制备抗肿瘤的药物及食品中的用途。
背景技术
目前，包括肺癌、胃癌、肝癌在内的恶性肿瘤作为常见病、多发病，严重危害人类的健康。世界卫生组织(WHO)和美国临床肿瘤学会(ASCO)统计数据表明，1990年全世界肿瘤所致死亡数占总死亡数的12.3％，预计2015年达到14.6％。根据美国国立癌症研究院(NationalCancerInstitute)数据：1998～2002年恶性肿瘤发病率为469.7/10万，家庭、国家及社会为此付出的代价沉重。在恶性肿瘤的多种治疗方法中，化疗在临床上发挥着重要的作用。目前，从中药、天然药物中开发抗肿瘤药物已经成为抗肿瘤新药研发的重要方向。
唐古特白刺(NitrariatangutorumBobr.)又名白刺、酸胖、白茨,蒙古语称哈尔黄格,是地中海-中亚荒漠区系灌木层片中的优势种和建群种之一,也是我国特有种，其分布于西藏东北部、甘肃、青海、新疆、内蒙古西部、宁夏西部、陕西北部的湖盆地区和风沙沿线，具有抗旱、抗寒、抗风沙、耐盐碱、抗热、耐贫瘠等生态适应特性，对于稳定沙漠、保护绿洲起到重要作用。目前对唐古特白刺的研究集中在其果实和种子方面，证实其含有氨基酸、维生素、黄酮、生物碱、矿物质元素等成分。
中国专利文献201310042545.4公开了一种唐古特白刺总酚提取物及其提取方法和应用，总酚提取物由以下方法制得：干燥唐古特白刺，酒精回流提取得乙醇提取液和滤渣，回收乙醇得第一粗提物；滤渣用水回流提取数次，得水提液，浓缩，加酒精，减压蒸馏得第二粗提物；分开水溶第一、二粗提物，过大孔吸附树脂柱，进行水洗脱糖后，用酒精洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂得第三、四粗提物；再继续对第三、四粗提物进行提取，最终分别获得二氯甲烷部位提取物、乙酸乙酯部位提取物、正丁醇部位提取物、水部位提取物和甲醇部位提取物。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种唐古特白刺总生物碱提取物。
本发明的再一的目的是，提供上述唐古特白刺总生物碱提取物的用途。
本发明的另一的目的是，提供一种上述唐古特白刺总生物碱提取物的制备方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
一种唐古特白刺总生物碱提取物，其特征在于，所述的唐古特白刺总生物碱提取物由如下方法制备：
a)取唐古特白刺地上部分用提取溶剂提取，得提取液；所述的提取溶剂为水、乙醇水溶液或甲醇水溶液；
b)将上述提取液减压浓缩回收至无醇味，得浓缩液；
c)将上述浓缩液进行酸化，过滤，得滤液；
d)将上述滤液碱化，以氯仿萃取，得萃取液；
e)浓缩干燥萃取液，得目标提取物。
优选地，所述提取溶剂选用体积分数为70％-95％的乙醇水溶液。
更优地，所述提取溶剂选用体积分数为80％的乙醇水溶液。
优选地，所述步骤c中酸化选用质量分数为1-10％的盐酸水溶液。
更优地，所述步骤c中酸化选用质量分数为2％的盐酸水溶液。
优选地，所述步骤d中的碱化选用质量分数为5％的碳酸氢钠水溶液。
优选地，所述浓缩方式可以采用40-100℃减压浓缩、烘干浓缩以及其他药学上可接受的浓缩方式。当然顾忌过高的温度可能对提取物中化学成分稳定性造成影响，选用50-75℃温度浓缩更为可行。
优选地，所述干燥方式可以采用50-100℃常压烘干、真空干燥及其他可接受的干燥方式。粉碎方式可以采用球磨机、冲击式粉碎机、流能磨粉碎以及其他可接受的粉碎方式。如将喷雾干燥、冷冻干燥技术用于本步骤，可同时实现烘干、粉碎，应用更为方便。
为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：
如上任一所述唐古特白刺总生物碱提取物在制备抗肿瘤药物、保健品或医疗食品中的应用。
优选地，所述肿瘤为肺癌细胞、结肠或肝癌。
一种抗肿瘤的药物组合物，包括：权利要求1-7任一所述的唐古特白刺总生物碱提取物、及药学上可接受的赋形剂；所述的赋形剂选自：粘合剂、填料、涂膜聚合物、增塑剂、助流剂、崩解剂或润滑剂中的一种或多种。
为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：
如上所述唐古特白刺总生物碱提取物的制备方法，包括如下步骤：
a)取唐古特白刺地上部分用体积分数为80％的乙醇水溶液提取，得提取液；
b)将上述提取液减压回收至无醇味，得浓缩液；
c)将上述浓缩液用质量分数为2％的盐酸水溶液酸化，过滤，得滤液；
d)将上述滤液用质量分数为5％的碳酸氢钠水溶液碱化，以氯仿萃取，得萃取液；
e)浓缩干燥萃取液，得目标提取物。
根据本发明的另一方面，本发明还提供了一种药物组合物。根据本发明的实施例，该药物包含：唐古特白刺总生物碱提取物；以及药学上可接受的赋形剂。发明人惊奇地发现，本发明的唐古特白刺总生物碱提取物具有显著的细胞毒作用，可以有效有抑制肿瘤细胞的生长。
根据发明的另一方面，所述赋形剂的种类不受特别限制，只要能够使药物形成容易进行给药的剂型即可。根据本发明的一些具体示例，所述赋形剂为选自粘合剂、填料、涂膜聚合物、增塑剂、助流剂、崩解剂和润滑剂的至少一种。所述药物呈选自胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂、口服液体、内服膏剂、气雾剂以及喷雾剂的至少一种的形式。根据本发明的一些优选实施例，所述药物呈胶囊剂的形式。由此，易于进行给药。
该赋形剂可以是例如乳化剂(鲸蜡硬脂醇、鲸蜡硬脂基葡糖苷、氢化蓖麻油)、流变添加剂、抗氧化剂(如维生素类、生育酚类、或本领域已知的其他抗氧化剂)。
乳化剂可以是表面活性剂，通过降低界面张力而降低体系的自由能；可选地，也可以使用非表面活性物质，例如阿拉伯树胶、明胶、亲水胶体或精细地细分的粉末(例如滑石)。在一个实施例中，赋形剂可以以3重量％至8重量％的总浓度存在，该浓度当然是参考性的，考虑到无论如何本领域技术人员也会知道怎样根据技术人员意欲进行的实施例调节必要的赋形剂的浓度，而不需要加入创造性劳动。
本发明的组合物可以处于以下形式：胶囊、片剂、锭剂、硬明胶、软明胶、颗粒剂、粉剂、糖浆、酏剂、悬浮剂、乳剂。为了口服给药，组合物可以以每日单位剂量或者每日单位剂量的级分(例如，根据主治医生的判断，一天可以服用2、3、4、5、6或更多个胶囊、片剂、锭剂、颗粒剂或粉剂单剂量，或者明胶)制备，且可以含有常规的赋形剂，包括，例如，粘合剂，如阿拉伯树胶、明胶、山梨糖醇、黄蓍树胶、和/或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂，如乳糖、糖、玉米淀粉、米淀粉、磷酸钙、山梨糖醇和/或甘氨酸；压片润滑剂，如硬脂酸镁、滑石、聚乙二醇和/或硅石；崩解剂，例如土豆淀粉；和润湿剂，如硫酸月桂酸钠。片剂可以根据标准药物实践中公知的方法涂布。
组合物还可以以液体或半液体形式(如悬浮剂、乳剂、溶液)制备，用于口服给药，且可以任选地含有给予组合物可口味道的天然芳化试剂。
粉剂或颗粒剂形式的组合物可以在适当的容器中预先测量且准备使用，通过摄入本身或再悬浮在适当的液体(例如水、茶等)中。同样，在这种情况下，组合物可以含有给予组合物可口味道的天然芳化试剂。
明显地，所有以上指出的赋形剂可以以药学上可接受的等级使用。
以上所述的组合物可以处于药物组合物的形式，即包括药物级成分，或者组合物可以是特殊用途食品或被引入特殊用途食品或医疗设备。本发明的药物的给药剂量不受特别限制，实际应用中，可以根据给药对象的健康状况灵活选择。
本发明优点在于：
本发明的唐古特白刺总生物碱提取物的制备方法具有工艺简便、成本低廉、安全高效、有机溶剂残留低等显著优点。经药理实验证明本发明唐古特白刺提取物具有较好的抗肿瘤作用，因而可将其用于制备抗肿瘤的药物及食品。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明公开的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1提取物的制备(一)
唐古特白刺地上部分药材清洗、切片、风干，粉碎后过80目筛；取过筛后的粗粉500kg，分别以12倍、10倍、10倍的80％乙醇水溶液作为溶剂，回流提取3次，提取时间分别为1.5小时、1小时、1小时，趁热过滤合并提取液，减压旋蒸回收溶剂至无醇味，蒸馏水调节浓度为2g(生药)/ml，加入等体积2％盐酸水溶液，静置抽滤，滤液加入等体积5％碳酸氢钠水溶液碱化，静置，以等体积氯仿萃取3次，合并萃取液，减压浓缩，干燥，得总生物碱提取物32.8g。
实施例2提取物的制备(二)
唐古特白刺地上部分药材清洗、切片、风干，粉碎后过80目筛；取过筛后的粗粉500kg，分别以12倍、10倍、10倍的80％乙醇水溶液作为溶剂，回流提取3次，提取时间分别为1.5小时、1小时、1小时，趁热过滤合并提取液，减压旋蒸回收溶剂至无醇味，蒸馏水调节浓度为2g(生药)/ml，加入等体积10％盐酸水溶液，静置抽滤，滤液加入等体积5％碳酸氢钠水溶液碱化，静置，以等体积氯仿萃取3次，合并萃取液，减压浓缩，干燥，得总生物碱提取物35.2g。
实施例3提取物的制备(三)
唐古特白刺地上部分药材清洗、切片、风干，粉碎后过80目筛；取过筛后的粗粉500kg，分别以12倍、10倍、10倍的80％乙醇水溶液作为溶剂，回流提取3次，提取时间分别为1.5小时、1小时、1小时，趁热过滤合并提取液，减压旋蒸回收溶剂至无醇味，蒸馏水调节浓度为2g(生药)/ml，加入等体积5％盐酸水溶液，静置抽滤，滤液加入等体积10％碳酸氢钠水溶液碱化，静置，以等体积氯仿萃取3次，合并萃取液，减压浓缩，干燥，得总生物碱提取物31.5g。
实施例4提取物的制备(四)
唐古特白刺地上部分药材清洗、切片、风干，粉碎后过80目筛；取过筛后的粗粉500kg，分别以12倍、10倍、10倍的80％乙醇水溶液作为溶剂，回流提取3次，提取时间分别为1.5小时、1小时、1小时，趁热过滤合并提取液，减压旋蒸回收溶剂至无醇味，干燥，得总生物碱提取物36.2g。
实施例5提取物的制备(五)
唐古特白刺地上部分药材清洗、切片、风干，粉碎后过80目筛；取过筛后的粗粉500kg，分别以12倍、10倍、10倍的95％乙醇水溶液作为溶剂，回流提取3次，提取时间分别为1.5小时、1小时、1小时，趁热过滤合并提取液，减压旋蒸回收溶剂至无醇味，蒸馏水调节浓度为2g(生药)/ml，加入等体积2％盐酸水溶液，静置抽滤，滤液加入等体积5％碳酸氢钠水溶液碱化，静置，以等体积氯仿萃取3次，合并萃取液，减压浓缩，干燥，得总生物碱提取物32.8g。
实施例6提取物的制备(六)
唐古特白刺地上部分药材清洗、切片、风干，粉碎后过80目筛；取过筛后的粗粉500kg，分别以12倍、10倍、10倍的60％乙醇水溶液作为溶剂，回流提取3次，提取时间分别为1.5小时、1小时、1小时，趁热过滤合并提取液，减压旋蒸回收溶剂至无醇味，蒸馏水调节浓度为2g(生药)/ml，加入等体积2％盐酸水溶液，静置抽滤，滤液加入等体积5％碳酸氢钠水溶液碱化，静置，以等体积氯仿萃取3次，合并萃取液，减压浓缩，干燥，得总生物碱提取物32.8g。
实施例7提取物的制备(七)
唐古特白刺地上部分药材清洗、切片、风干，粉碎后过80目筛；取过筛后的粗粉500kg，分别以12倍、10倍、10倍的70％乙醇水溶液作为溶剂，回流提取3次，提取时间分别为1.5小时、1小时、1小时，趁热过滤合并提取液，减压旋蒸回收溶剂至无醇味，蒸馏水调节浓度为2g(生药)/ml，加入等体积2％盐酸水溶液，静置抽滤，滤液加入等体积5％碳酸氢钠水溶液碱化，静置，以等体积氯仿萃取3次，合并萃取液，减压浓缩，干燥，得总生物碱提取物32.8g。
实施例8提取物的制备(八)
唐古特白刺地上部分药材清洗、切片、风干，粉碎后过80目筛；取过筛后的粗粉500kg，分别以12倍、10倍、10倍的90％乙醇水溶液作为溶剂，回流提取3次，提取时间分别为1.5小时、1小时、1小时，趁热过滤合并提取液，减压旋蒸回收溶剂至无醇味，蒸馏水调节浓度为2g(生药)/ml，加入等体积2％盐酸水溶液，静置抽滤，滤液加入等体积5％碳酸氢钠水溶液碱化，静置，以等体积氯仿萃取3次，合并萃取液，减压浓缩，干燥，得总生物碱提取物32.8g。
实施例9提取物的制备(九)
唐古特白刺地上部分药材清洗、切片、风干，粉碎后过80目筛；取过筛后的粗粉500kg，分别以12倍、10倍、10倍的75％乙醇水溶液作为溶剂，回流提取3次，提取时间分别为1.5小时、1小时、1小时，趁热过滤合并提取液，减压旋蒸回收溶剂至无醇味，蒸馏水调节浓度为2g(生药)/ml，加入等体积2％盐酸水溶液，静置抽滤，滤液加入等体积5％碳酸氢钠水溶液碱化，静置，以等体积氯仿萃取3次，合并萃取液，减压浓缩，干燥，得总生物碱提取物32.8g。
实施例9本发明的提取物体外抗肿瘤实验(MTT测试)
1、受试样品
唐古特白刺提取物1、2、3、4分别由实施例1、2、3、4制备，用DMSO溶解，配置成相同浓度的样品液。
2、细胞株
A549(肺癌细胞)、HCT116(人结肠癌细胞)、BEL7404(人肝癌细胞)。
3、实验方法
采用MTT检测上述实施例制备的唐古特白刺提取物对4种肿瘤细胞生长抑制率。于96孔板每孔加入浓度为为4-5×104个/ml的细胞悬液100μL，置于37℃、浓度为5％CO2培养箱内；24h后，加入样品液10μL/孔，设双复孔，于37℃、5％CO2作用72h；每孔加入5mg/ml的MTT溶液20μl，作用4h后加入DMSO溶解液，100μl/孔，置培养箱内，溶解后用全波长多功能酶标仪测570nmOD值。肿瘤细胞生长抑制率(％)＝(1-实验组OD/对照组OD值)×100％。
4、实验结果
对制备的唐古特白刺提取物进行了细胞株体外抑制作用的测试，以阿霉素作为对照，求出令半数细胞死亡的抑制浓度即IC50值(μg/ml)，具体实验数据见表1。
表1唐古特白刺MTT测试结果
结果如表1所示，表明本发明提取物具有显著的细胞毒作用，具有潜在的抗肿瘤药用价值。
本发明唐古特白刺提取物的制备方法具有工艺简便，成本低廉，安全有效，无有机溶剂残留等显著优点，完全可以作为标准提取物的制备工艺。鉴于在现代社会中，恶性肿瘤发病率的急剧上升，缺乏理想、有效的治疗药物，因而此提取物具有广阔的应用前景，蕴藏着巨大的社会效益和经济效益。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种唐古特白刺总生物碱提取物，其特征在于，所述的唐古特白刺总生物碱提取物由如下方法制备：
a)取唐古特白刺地上部分用提取溶剂提取，得提取液；所述的提取溶剂为水、乙醇水溶液或甲醇水溶液；
b)将上述提取液减压回收至无醇味，得浓缩液；
c)将上述浓缩液进行酸化，过滤，得滤液；
d)将上述滤液碱化，以氯仿萃取，得萃取液；
e)浓缩干燥萃取液，得目标提取物。
2.根据权利要求1所述的唐古特白刺总生物碱提取物，其特征在于，所述的提取溶剂为乙醇水溶液。
3.根据权利要求1所述的唐古特白刺总生物碱提取物，其特征在于，所述的提取溶剂选用体积分数为70％-95％的乙醇水溶液。
4.根据权利要求3所述的唐古特白刺总生物碱提取物，其特征在于，所述的提取溶剂选用体积分数为80％的乙醇水溶液。
5.根据权利要求1所述的唐古特白刺总生物碱提取物，其特征在于，所述的步骤c中酸化选用质量分数为1-10％的盐酸水溶液。
6.根据权利要求5所述的唐古特白刺总生物碱提取物，其特征在于，所述的步骤c中酸化选用质量分数为2％的盐酸水溶液。
7.根据权利要求1所述的唐古特白刺总生物碱提取物，其特征在于，所述的步骤d中的碱化选用质量分数为5％的碳酸氢钠水溶液。
8.权利要求1-7任一所述唐古特白刺总生物碱提取物在制备预防和/或治疗肿瘤药物、保健品或医疗食品中的应用；所述的肿瘤为肺癌细胞、结肠或肝癌。
9.一种抗肿瘤组合物，其特征在于，包括：权利要求1-7任一所述的唐古特白刺总生物碱提取物、及药学上可接受的赋形剂；所述的赋形剂选自：粘合剂、填料、涂膜聚合物、增塑剂、助流剂、崩解剂或润滑剂中的一种或多种。
10.权利要求1-7任一所述唐古特白刺总生物碱提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
a)取唐古特白刺地上部分用体积分数为80％的乙醇水溶液提取，得提取液；
b)将上述提取液减压回收至无醇味，得浓缩液；
c)将上述浓缩液用质量分数为2％的盐酸水溶液酸化，过滤，得滤液；
d)将上述滤液用质量分数为5％的碳酸氢钠水溶液碱化，以氯仿萃取，得萃取液；
e)浓缩干燥萃取液，得目标提取物。
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