CN102988525A - 山楂核中总木脂素的制备方法及新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种植物山楂的核中总木脂素的制备方法，是将山楂核原料粉碎，用一定浓度的乙醇-水提取，减压浓缩得到粗体物后用水混悬，水相直接上大孔树脂以醇水系统洗脱得到总木脂素类提取物，也是山楂核中具有药理活性的有效部位。本发明提供的山楂核中的总木脂素具有明显的抗肿瘤活性，且山楂为药食同源类植物，无毒、副作用，可以开发成一种新的抗肿瘤药物。山楂核中的总木脂素可以制成各种口服制剂。本发明方法设计合理，具有工艺过程简单、成本低、能耗低和生产过程污染低的特点。
Description
技术领域
本发明涉及植物医药技术领域，尤其涉及植物山楂核中总木脂素的制备方法及在制备抗肿瘤药物中的新应用。
背景技术
恶性肿瘤是危害人类健康和生命的主要疾病。据估计全世界每年约有500万人死于恶性肿瘤，是继心血管疾病之后的第二大致死病因。因此，全球每年投入大量的人力物力用于研究和开发防治癌症的新药物。近年来，药物学专家除了研究西药外，也对中药进行了深入的研究，迄今为止至少评估了4万余种高等植物的抗肿瘤活性。据国外资料介绍，全世界已经开发了几百种抗癌新药，其中很多属于天然植物提取物。
山楂 (Crataegus)为蔷薇科 (Rosaceae)山楂属植物，落叶稀半常绿灌木或小乔木，全世界大约有280种，也有文献报道在1000种以上。主要分布于北温带大约在北纬30度到50度之间的东亚、欧洲和北美洲等地，据中国植物志记载山楂在我国约有 17种，2变种，其中山里红 Crataegus pinnatifida Bge var. Major N. E. Br.山楂 Crataegus pinnatif Bge.及野山楂 Crataegus cuneata Sieb.& Zucc.最为常见。山楂性温 ，味酸、甘微温，归脾、胃、肝经，具有消食化积、活血化瘀的功效，临床主要用于食滞不化及产后瘀阻腹痛，以及高血压、冠心病、高血脂的治疗。郭法长[郭法长，焦风云，张茂林等.山楂抗癌有效成分的研究[J].河南医科大学学报.1992，27（4）：312-314.]等研究证实山楂中提取的多酚类化合物是较强的抗癌有效成分，可以消除亚硝酸盐，其消除率为86.4%，能抑制人淋巴细胞程序外DNA损伤，其抑制率为71.5%，可以使接种艾氏腹水癌的昆明小鼠的生命延长18d，其生命延长率为180%。但在本发明前，还未有见到山楂核有效部位抗肿瘤活性的报道。
山楂核的化学成分与山楂果实、叶有较大区别，主要成分有简单苯丙素类、木脂素类、倍半木脂素等。其中含量较大的化合物如下所示：
有文献报道该类型化合物具有较强的抑制肿瘤细胞活性，同时由于山楂属于药食同源类植物，无毒、副作用。从其中开发出来的抗肿瘤药物具有低毒高效的特点，有十分宽广的市场前景。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种植物山楂核的总木脂素的制备方法，该方法是将取山楂核原料粉碎成粗粉，用甲醇或乙醇提取，减压浓缩得到粗提物后用水混悬，再上大孔树脂以水醇系统洗脱得到总木脂素。该方法采用大孔树脂层析一步即可获得有效部位，该方法具有操作简单、成本较低、获得的总木脂素纯度高的优点。具体通过以下步骤实现：
1. 取山楂核原料粉碎成粗粉，用5~10倍体积量的甲醇或乙醇提取2~4次，甲醇或乙醇的体积浓度为50%~100%，提取采用加热回流或超声提取；
2. 将提取液合并后减压浓缩，除去甲醇或乙醇，减压浓缩干燥既得浸膏，得率约为2%~5%；
3. 浸膏加水混悬后，上大孔树脂，10%~20%乙醇-水系统洗脱2~6个柱体积后再用体积浓度30%~50%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，喷雾干燥得到干燥粉末，总得率约为2%~5%。采用的大孔树脂为DM301、NKA-9、AB-8、D101、DM130、DM-18、D312型弱极性或中极性大孔树脂。所得的总木脂素利用FeCl3颜色反应呈阳性，且HCl-Mg反应呈阴性，排除了黄酮类化合物的影响，利用HPLC分析，色谱图中的最大色谱峰为(+)-balanophonin，确定所得提取物为总木脂素。利用可见分光光度法，以(+)-balanophonin （自制，纯度97%）为对照品，0.6%FeCl3-0.9%K3[Fe(CN)6] (1:0.9)混合溶液为显色剂，检测波长720nm，检测结果显示所得提取物总木脂素含量在60%~90%。
本发明的目的之二是提供山楂核中总木脂素在制备抗肿瘤药物中的新用途。所述的植物山楂核中总木脂素加入药剂学允许的赋型制剂制备成药物制剂，制剂形式为口服制剂，所述口服制剂包括片剂、胶囊剂、丸剂或颗粒剂。
本发明的有益之处是：（1）本发明采用的原料为食品药品生产中的工业废料，成本低廉，也是对传统中药进行的二次开发。（2）对原药材中的有效部位进行了充分的提纯，浓缩，得到总木脂素为（其有效部位），利用分光光度法测定总木脂素含量，其含量达到60%~90%，优于其粗提物直接入药，且便于制成各种制剂。（3）用本方法获得的有效部位，具有显著的药理作用，可抑制OPM、SGC-7901、SMMC-7721、RPMI-8226和S180肿瘤细胞的增殖。（4）获得的总木脂素可以制成口服制剂，给药简单，药物利用度高。（5）本发明方法设计合理，具有工艺简单、成本低、能耗低和生产过程污染低的特点。
具体实施方式
本发明结合具体实施例作进一步的说明。
实施例1 山楂核总木脂素的制备
取山楂核200g左右粉碎，加1600ml 70%乙醇-水，回流提取2小时，过滤后滤渣再加1000ml 70%乙醇-水回流提取1小时，合并两次滤液，减压回收乙醇，得到浸膏。将此浸膏用200ml水混悬后上D101大孔树脂，水洗脱3个体积后再用40%乙醇-水洗脱至流出液近无色，收集此部分洗脱液，减压回收乙醇，喷雾干燥得到干燥粉末，得到6.6g总木脂素，总得率约为3.3%。所得的提取物利用FeCl3颜色反应呈阳性，且HCl-Mg反应呈阴性，排除了黄酮类化合物的影响，利用HPLC分析，色谱图中的最大色谱峰为(+)-balanophonin，确定所得提取物为总木脂素。利用可见分光光度法，以(+)-balanophonin （自制，纯度97%）为对照品，0.6%FeCl3-0.9%K3[Fe(CN)6] (1:0.9)混合溶液为显色剂，检测波长720nm，检测结果显示所得提取物其木脂素含量为83%。
实施例2 山楂核总木脂素的制备
取山楂核200g左右粉碎，加1600ml 90%乙醇-水，回流提取2小时，过滤后滤渣再加1000ml 90%乙醇-水回流提取1小时，合并两次滤液，减压回收乙醇，得到浸膏。将此浸膏用200ml水混悬后上D312大孔树脂，水洗脱3个体积后再用50%乙醇-水洗脱至流出液近无色，收集此部分洗脱液，减压回收乙醇，喷雾干燥得到干燥粉末，得到8g总木脂素，总得率约为4%。所得的提取物利用FeCl3颜色反应呈阳性，且HCl-Mg反应呈阴性，排除了黄酮类化合物的影响，利用HPLC分析，色谱图中的最大色谱峰为(+)-balanophonin，确定所得提取物为总木脂素。利用可见分光光度法，以(+)-balanophonin （自制，纯度97%）为对照品，0.6%FeCl3-0.9%K3[Fe(CN)6] (1:0.9)混合溶液为显色剂，检测波长720nm，检测结果显示所得提取物其木脂素含量为80%。
实施例3 山楂核总木脂素的制备
取山楂核1000g左右粉碎，加8000ml 60%乙醇-水，回流提取2小时，过滤后滤渣再加3000ml 60%乙醇-水回流提取1小时，合并两次滤液，减压回收乙醇，得到浸膏。将此浸膏用1000ml水混悬后上AB-8大孔树脂，水洗脱3个体积后再用30%乙醇-水洗脱至流出液近无色，收集此部分洗脱液，减压回收乙醇，喷雾干燥得到干燥粉末，得到30g总木脂素，总得率约为3%。所得的提取物利用FeCl3颜色反应呈阳性，且HCl-Mg反应呈阴性，排除了黄酮类化合物的影响，利用HPLC分析，色谱图中的最大色谱峰为(+)-balanophonin，确定所得提取物为总木脂素。利用可见分光光度法，以(+)-balanophonin （自制，纯度97%）为对照品，0.6%FeCl3-0.9%K3[Fe(CN)6] (1:0.9)混合溶液为显色剂，检测波长720nm，检测结果显示所得提取物其木脂素含量为85%。
实施例4 山楂核总木脂素的制备
取山楂核1000g左右粉碎，加8000ml 80%乙醇-水，回流提取2小时，过滤后滤渣再加3000ml 80%乙醇-水回流提取1小时，合并两次滤液，减压回收乙醇，得到浸膏。将此浸膏用1000ml水混悬后上DM301大孔树脂，水洗脱3个体积后再用50%乙醇-水洗脱至流出液近无色，收集此部分洗脱液，减压回收乙醇，喷雾干燥得到干燥粉末，得到45g总木脂素，总得率约为4.5%。所得的提取物利用FeCl3颜色反应呈阳性，且HCl-Mg反应呈阴性，排除了黄酮类化合物的影响，利用HPLC分析，色谱图中的最大色谱峰为(+)-balanophonin，确定所得提取物为总木脂素。利用可见分光光度法，以(+)-balanophonin （自制，纯度97%）为对照品，0.6%FeCl3-0.9%K3[Fe(CN)6] (1:0.9)混合溶液为显色剂，检测波长720nm，检测结果显示所得提取物其木脂素含量为81%。
实施例5 片剂制备
取上述1~4任一实施例方法获得的山楂核总木脂素50g，粉碎后过80目筛，与淀粉100g混匀，加10%淀粉浆10g制成软材加入硬脂酸镁1g，干淀粉10g混匀后制成1000片，既得。每片含山楂核总木脂素50mg。
实施例6 胶囊剂制备
取上述1~4任一实施例方法获得的山楂核总木脂素50g，粉碎后过80目筛，与淀粉100g混匀，加10%淀粉浆10g制成软材，用14目筛制粒后，置60℃~70℃干燥后于12目筛整粒，套入1号空心胶囊中。共装1000粒，每粒胶囊含山楂核总木脂素50mg。
实施例7 丸剂制备
取上述1~4任一实施例方法获得的山楂核总木脂素50g，粉碎后过80目筛，适量蜂蜜作黏合剂制成丸。
实施例8 颗粒剂制备
取上述1~4任一实施例方法获得的山楂核总木脂素50g，粉碎后过80目筛，加10%淀粉浆制成软材，用14目筛制粒后，置60℃~70℃干燥后于12目筛整粒，分装，密封，包装既得。
实施例9
用实施例1制备得到的山楂核总木脂素，对人肿瘤细胞OPM、SGC-7901、SMMC-7721和RPMI-8226的增殖有明显的抑制作用。
采用改良MTT法：将融合为单层的OPM、SGC-7901、SMMC-7721和RPMI-8226肿瘤细胞消化为单细胞悬浮液，加入 96孔培养板中，90 μL/孔。在37℃、5% CO2培养箱中孵育24 h后，加入一定浓度的受试样品，10 μL/孔。受试样品组设置3个复孔。阴性对照为等体积的PBS，阳性对照为顺铂（DDP），继续孵育48小时后，每孔加入10 μl的MTT溶液5 mg/ml，10 μL/孔，避光37℃孵育2-4 h；每孔加入100 μl的MTT溶解buffer（20% SDS，1M HCl），37℃孵育至结晶完全溶解；利用全自动酶标仪读取570 nm及490 nm处的吸光度，计算OD（570）-OD（490）的数值作为每孔的OD值；根据以下公式计算计算相对抑制率：细胞相对抑制率（%）=100 %-（实验组OD值 / 对照组平均OD值）× 100 %。用SPSS12.0软件计算各样品的IC50值，结果见表1。
表1 是本发明提取物对人肿瘤细胞增殖的抑制作用
表1
实施例10
用实施例1制备得到的山楂核总木脂素抑制肉瘤S180裸鼠移植瘤增殖试验
采用裸鼠移植瘤模型：取50只BALB/c裸鼠（6周大，18-20g）称重后，用含5×109个/L SGC-7901细胞的单细胞悬浮液在裸鼠右侧腋部皮下注射，0.1ml/只。待移植肿瘤体积生长至0.5cm3时，将裸鼠随机分为5组，每组10只，分别为本发明总木脂素小。中、大剂量组（100，500，1000mg/kg），阴性对照组用灭菌生理盐水，阳性对照为环磷酰胺组（30mg/kg）。每天固定时间灌胃给药，实验周期为2周，停药次日，称体重，剥取肿瘤称重，按下列方法计算抑瘤率，结果见表2。
抑瘤率=（1-实验组瘤重均数/对照组瘤重均数）×100%
表2是总木脂素对肉瘤S180裸鼠移植瘤增殖的抑制作用
表2
Claims (8)
1.一种植物山楂核中总木脂素的制备方法，其特征是将取山楂核原料粉碎成粗粉，用甲醇或乙醇提取，减压浓缩得到粗提物后用水混悬，再上大孔树脂以水醇系统洗脱得到总木脂素。
2.一种植物山楂核中总木脂素的制备方法，其特征是通过以下步骤实现：
(1)取山楂核原料粉碎成粗粉，用5~10倍体积量的甲醇或乙醇提取2~4次，甲醇或乙醇的体积浓度为50%~100%，提取采用加热回流或超声提取；
(2)将提取液合并后减压浓缩，除去甲醇或乙醇，减压浓缩干燥既得浸膏；
(3)浸膏加水混悬后，上大孔树脂，低浓度乙醇-水系统洗脱2~6个体积后再用30%~50%乙醇洗脱至流出液无色，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，喷雾干燥即得。
3.根据权利要求1或2所述的一种植物山楂核中总木脂素的制备方法，其特征是所述的大孔树脂为DM301、NKA-9型、AB-8、D101、DM130、DM-18、D312型弱极性或中极性大孔树脂。
4.根据权利要求2所述的一种植物山楂核中总木脂素的制备方法，其特征是：步骤（3）所述的低浓度的乙醇-水系统为体积浓度10%~20%的乙醇-水系统。
5.根据权利要求1或2方法制备得到的植物山楂核中的总木脂素在制备抗肿瘤药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其中所述的肿瘤包括人骨髓瘤、肉瘤、胃癌和肝癌。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征是所述的植物山楂核中总木脂素加入药剂学允许的赋型制剂制备成药物制剂，制剂形式为口服制剂。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征是所述口服制剂包括片剂、胶囊剂、丸剂或颗粒剂。
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
| CN105012201A (zh) * | 2015-08-17 | 2015-11-04 | 杭州华胄科技有限公司 | 含山楂核醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的口腔护理产品 |
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Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 李殿明等: "山楂核化学成分的分离与鉴定I", 《沈阳药科大学学报》 * |
| 汪秋安等: "仿生氧化偶联合成苯并二氢呋喃新木脂素Balanophonin", 《湖南大学学报(自然科学版)》 * |
| 王雪松等: "山楂核化学成分研究 ", 《中国中药杂志》 * |
| 王雪松等: "山楂核化学成分研究", 《中国中药杂志》, vol. 24, no. 12, 31 December 1999 (1999-12-31) * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105012201A (zh) * | 2015-08-17 | 2015-11-04 | 杭州华胄科技有限公司 | 含山楂核醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的口腔护理产品 |
| CN105012201B (zh) * | 2015-08-17 | 2018-10-26 | 杭州华胄科技有限公司 | 含山楂核醇提物的具有抗幽门螺杆菌功效的口腔护理产品 |
| CN110302221A (zh) * | 2019-03-15 | 2019-10-08 | 沈阳药科大学 | 臭椿根皮总生物碱及制备方法和应用 |
| CN110302221B (zh) * | 2019-03-15 | 2021-07-09 | 沈阳药科大学 | 臭椿根皮总生物碱及制备方法和应用 |
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