JP6389958B2 - 瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物抗腫瘍の薬物用途 - Google Patents

瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物抗腫瘍の薬物用途 Download PDF

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Description

本発明は、瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物の新用途に関連し、具体的にいうと、該当化合物は、抗腫瘍薬物製薬の用途を言及され、医薬領域に属する。
悪性腫瘍は従来から医学業界において征服が期待される疾病であり、当面の抗腫瘍薬物及び不良反応がますます重視されている。副作用が少なく、抗腫瘍作用の強い薬物を求めるのは昔から腫瘍研究のホットスポット・重点になっている。植物由来の薬物は当面において相変わらず最も理想的な抗腫瘍薬物選別の宝庫であり、例えばパクリタキセル、カンプトテシン、人参サポニン等沢山の強い抗腫瘍活性を備える天然化合物が選び出されて、良好的な応用前景を持っている。わが国は植物由来薬物の使用大国であり、悠久的な応用の歴史があり、疾病と戦う中で段々と独特な漢方薬理論体系が形成されている。漢方薬理論より指導の中に数多くの植物薬が応用され、腫瘍等を含む難病の治療過程に重要な作用が働いている。この他、わが国において自然薬草の資源は豊かで、民族、民間薬草の薬用は幅広く、抗腫瘍薬物の選別に手がかりを提供し、上述の有利な条件は、民族民間薬用から副作用が少なく、抗腫瘍作用の強い薬物の選別に良好的な基礎を打ち立てている。本研究チームは、抗腫瘍薬物の選別過程中に、初めてミャオ族薬物瓦草の中に含まれている５環性トリテルペンサポニン類化合物が強い抗腫瘍活性を持つことを発見し、それは特に離体培養の人源腫瘍細胞及び実体腫瘍（ヌードマウス）に対しても強い抑制および消滅作用を持っている。
瓦草とはセキチク科（Ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌａｃｅａｅ）マンテマ属の植物シレネ（Ｓｉｌｅｎｅ ｖｉｓｃｉｄｕｌａ Ｆｒａｎｃｈ．）の乾燥根である。鎮痛、止血、解熱、利尿の効果があり、主に打撲傷、リウマチや骨痛、気管支炎、尿路感染等の治療に使用されている。当面、瓦草の研究は主に化学成分研究の方面に集中しており、薬理方面の研究報告は少なくなっている。瓦草の主要な化学成分は、サポニン類、蛋白質類、有機酸類、多糖類、環状ペプチド類、エクジステロン類等であり、出願人は瓦草の中より分離、鈍化し、且つ複数の５環性トリテルペンサポニン類化合物を確定しており、抗腫瘍活性成分の選別及び評価に基礎を置いている。
本発明の目的は、式Ｉの化合物若しくはその塩又は式Ｉの化合物若しくはその塩を含む組成物を抗腫瘍薬物の調製において提供する用途にある。
また本発明の他の目的は、腫瘍を治療する薬物組成物及び治療腫瘍薬物調製において提供する用途にある。
更に本発明の他の目的は、瓦草抽出物を抗腫瘍薬物の調製において提供する用途にある。
本発明の目的は、下記技術方案を通して実現する。
式Ｉの化合物若しくはその塩又は式Ｉの化合物若しくはその塩が含まれる組成物の抗腫瘍薬物の調製における用途において、
上記式において、
Ｒ１はＨ、Ａｃ、Ｇｌｃ（ｇｌｕｃｏｓｅ、ブドウ糖基）のうちの一種、
Ｒ２は（Ｅ）−ＭＣ、（Ｚ）−ＭＣ、Ａｃのうちの一種、
Ｒ３はＨ、Ｘｙｌ（Ｘｙｌｏｓｅ、キシロース基）のうちの一種、
Ｒ４はＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３のうちの一種である。
上述のＡｃの構造式は以下の通りである。
上述の（Ｅ）−ＭＣの構造式は以下の通りである。
上述の（Ｚ）−ＭＣの構造式は以下の通りである。
。
更に、上述の塩とは、式Ｉの化合物及びアルカリ又はソロネッツ金属により形成される塩を指し、更に、上述のアルカリは、水酸化ナトリウム、水素カリウム、水素酸化カルシウム、水素酸化マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、塩化アンモニウム又はアンモニアを含んでいる。上述のソロネッツ金属は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミ、銅、亜鉛又はマグネシウムを含んでいる。
更に、上述の化合物の構造式は、以下の通りである。
更に、上述の化合物の構造式は、以下の通りである。
更に、上述の化合物の構造式は、以下の通りである。
更に、上述の化合物の構造式は、以下の通りである。
更に、上述の化合物の構造式は、以下の通りである。
更に、上述の化合物の構造式は、以下の通りである。
更に、上述の化合物の構造式は、以下の通りである。
更に、上述の化合物の構造式は、以下の通りである。
本発明は更に、上述の式Ｉ及び化合物１−８が肝臓癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌又は黒色素腫瘍を治療する薬物の調製における用途を提供する。
また、上述の式Ｉ及び化合物１−８の用量範囲は、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ動物体重であり、常識によりヒトへの用量に換算できる。
更に、上述の式Ｉ及び化合物１−８は、補助料と併せて臨床上使用される注射剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、気剤、食品又は飲料に調製され得る。
更に一歩進んで、上述の注射剤は、静脈注射、筋肉内注射、皮下注射、皮内注射及び腔内注射等の多種類の注射方法を含んでいる。
また本発明は、腫瘍を治療する医薬組成物の一種を提供し、該医薬組成物中の活性成分は、式Ｉの化合物又はその塩及び通常の抗がん剤の何れかの一種により構成される。
上述の通常の抗がん剤は、シクロホスファミド、５−フルオロウラシル、パクリタキセル、アドリアマイシン、エトポシド、イリノテカン、オキサリプラチン、シスプラチン又はゲムシタビン等、臨床的によく使われる一線、二線抗腫瘍薬物である。
本発明は、瓦草抽出物が肝臓癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌又は黒色素腫瘍を治療する薬物の調製の用途を提供する。上記の瓦草抽出物は、瓦草からメタノール、エタノール又は他の通常の有機溶剤によって取得された式Ｉの化合物を含む抽出物である。
更に、上記の瓦草抽出物は、瓦草を有機溶剤によって抽出後、次に精製、鈍化工程の調製を通して取得した有効成分の瓦草総サポニンであり、上記の精製、鈍化工程は抜粋、シリカゲルカラム、マクロ多孔性樹脂柱、ゲル柱、反相柱等通常柱のクロマトグラフィー工程を含んでいる。
更に、上記の瓦草抽出物中の瓦草総合サポニンの含有量は、５０％以上である。更に一歩進んで、上記の瓦草抽出物中の瓦草総サポニンの含有量は、６０％以上である。
更に、上記の瓦草抽出物は、以下の方法に基づき調製される。瓦草を５０−９５％のエタノール溶液で抽出し、抽出液の濃縮後にマクロ多孔性樹脂柱を通して７０％−９０エタノールで溶離すると取得できる。
本発明はまた、組成物の腫瘍治療調製における用途の一種を提供し、該組成物は式Ｉの化合物及び他の抗がん剤又は補助抗がん剤より構成される。
本発明に記述される式Ｉの構造の化合物は主に植物瓦草より抽出されるが、他の植物からの抽出、化学合成、半合成又は生物転換の方法を通して取得される該構造を有する化合物及びその類似体も、本発明の保護範囲内に含まれる。
本発明の研究によると、瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物がヒト肝臓癌細胞株、ヒト胃癌細胞、ヒト大腸癌細胞、ヒト乳腺癌細胞及び黒色素腫瘍細胞株の増長に対して全て強い抑制効果があり、この中でも肝臓癌細胞に対して最も鋭敏であり、同様の投与濃度の下での肝臓癌細胞に対する抑制効果は、陽性対照薬であるシスプラチンおよびシクロホスファミドより優れていることが分かる。且つ本発明の研究によると、瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物は、ヌードマウスの腫瘍に対する成長状態、体重の影響が有効的に改善でき、西洋薬化学療法薬物と比べると副作用が少なくなっていることが分かる。
（実験例１）異なる瓦草サポニン化合物の体外培養される腫瘍細胞に対する抑制作用
１ 実験方法
１．１ 腫瘍細胞株及びその培養
ヒト肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２）、ヒト胃癌細胞（ＢＧＣ８２３）、ヒト大腸癌細胞（ＨＴ２９）、ヒト乳腺癌細胞（ＭＣＦ−７）、黒色素腫瘍細胞株（Ａ８７５）は全て、中国医学科学院腫瘍病院より提供される。１０％（Ｖ／Ｖ）ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び１％（Ｖ／Ｖ）双抗（１００Ｕ／ｍＬペニシリン及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン）を含むＲＰＭＩ−１６４０培地に、３７℃、５％ ＣＯ２の飽和湿度の培養箱の中で培養し、２−３日に１回別の培地に接種してから培養し、対数成長期の細胞を取って実験研究に使用する。
１．２実験設計
ＨｅｐＧ２、ＢＧＣ８２３、ＭＣＦ−７、ＨＴ２９、Ａ８７５細胞株を３７℃、５％ＣＯ２の培養箱の中で培養し、２〜３日に溶液を交換し、１回別の培地に接種してから培養する。成長状態の良い細胞を収集し、細胞濃度を２×１０４個／ｍＬに調整し、９６孔プレート毎に細胞懸濁液１００μＬ（孔毎に２０００個細胞ぐらい）を加えて、ＣＯ２培養箱の中で２４時間培養し、空白グループに１００μＬ細胞が含まれていない培地を添加する。
瓦草サポニン化合物１、２、３、４、７、８（実施例２の方法により調製する）の各々をＤＭＳＯに溶解し、１６４０完全培地で希釈し、各化合物の濃度を４００μｇ／ｍＬ溶液、ＤＭＳＯの濃度が０．５％になるようにする。陽性薬のシスプラチンを濃度が４００μｇ／ｍＬの溶液に調製する。実験は空白グループ、モデル対照グループ、化合物１、２、３、４、７、８グループおよび陽性薬シスプラチングループとして分けて、グループ毎に六つの孔がある。
投与前に細胞培養プレートの上にある清澄液を除去し、新鮮な完全１６４０培地を１８０μＬ／孔で添加し、各薬物サンプルは以下の通りである。瓦草サポニン化合物グループに瓦草サポニンの各化合物を添加し、孔毎に２０μＬ（最終濃度は４０μｇ／ｍＬになる）を添加する。陽性対照グループにシスプラチン溶液２０μＬ（最終濃度は４０μｇ／ｍＬになる）を添加する。空白グループ、モデル対照グループの孔毎にＤＭＳＯ濃度が０．５％である培地２０μＬを添加する。薬物の加入後にＣＯ２培養箱の中で４８時間培養する。培養の終了後に孔毎にＭＴＴ溶液２０μＬを添加し、継続的に４時間発育してから培養を終了し、注意深く上清を吸い捨て、孔毎に１５０μＬのＤＭＳＯを加入し、１０分間振とうして、４９０ｎｍ波長で各孔の吸光度を測定し、且つ抑制率を計算する。
１．３ 抑制率計算
抑制率＝［（モデルグループＯＤ−空白グループＯＤ）−（実験グループＯＤ−空白グループＯＤ）］／（モデルグループＯＤ−空白グループＯＤ）×１００％。
上述ＭＴＴ試験に計３ロットの実験を繰り返す。
２ データ集計
ＳＰＳＳ １０．０ソフトウェアを採用して、データ処理分析を行い、全ての指標を均数±標準差（±ｓ）で表示し、グループ間の比較に分散分析を採用する。
３ 結果
ＭＴＴ試験結果によると、異なる瓦草サポニン化合物１、２、３、４、７、８は全て、それぞれ４０μｇ／ｍＬの投与濃度によって、腫瘍細胞ＨｅｐＧ２、ＭＣＦ−７、ＢＧＣ８２３、ＨＴ２９、Ａ８７５に対して良好な抑制効果が現れることが分かる。形態学的な観察において、正常の腫瘍細胞と比べると投与グループでは明らかな細胞の縮小、破砕、壁に付かない現象が発見されている。この中で、瓦草サポニン化合物１、化合物２のヒト肝臓癌ＨｅｐＧ２、ヒト胃癌ＢＧＣ８２３、ヒト大腸癌ＨＴ２９細胞に対する抑制率は全て９０％を超えており、この中でも肝臓癌細胞に対して最も鋭敏であり、抑制率は９９％に達している。化合物３、４は、５種の腫瘍細胞に対しても強い抑制効果がある。それに対して化合物７、８は、腫瘍細胞に対する抑制作用は弱くなっている。結果は表１に示される。
本実験の結果によると瓦草サポニン化合物１、２は全て、腫瘍細胞の増長に対して強い抑制効果があり、このうち化合物２の抑制効果が一番強く、薬物効果が最も良好であることが分かる。５種の被験腫瘍細胞株の中でも肝臓癌細胞に対して最も鋭敏であり、肝臓癌細胞に対する抑制効果は同様の投与濃度の下での陽性対照薬シスプラチンより優れており、本試験は後述する動物実験全てに対して実験根拠及び参考を提供する。
（実験例２）異なる干渉時間における瓦草サポニン化合物２のヒト肝臓癌細胞ＨｅｐＧ２に対する抑制率及びＩＣ５０の影響
１ 実験方法
１．１ ヒト肝臓癌細胞ＨｅｐＧ２の培養
ＨｅｐＧ２は、中国医学科学院腫瘍病院より提供される。１０％（Ｖ／Ｖ）ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ−１６４０培地において、３７℃、５％ ＣＯ２の培養箱の中で培養し、２−３日に１回別の培地に接種してから培養し、対数成長期の細胞を取り実験研究に使用する。
１．２ 実験設計
成長状態が良好なＨｅｐＧ２細胞を収集し、細胞濃度を２×１０４個／ｍＬとなるように調製し、９６孔プレートの孔毎に細胞懸濁液１００μＬ（孔毎に２０００個細胞程度）を添加し、ＣＯ２培養箱の中で２４時間培養し、空白グループに１００μＬの細胞を含まない培地を添加する。
瓦草サポニン化合物２（実施例２の方法により調製する）をＤＭＳＯで溶解し、１６４０完全培地により異なる濃度勾配の化合物２溶液に希釈し、ＤＭＳＯの濃度を０．５％とした。実験では、空白グループ、モデル対照グループ、化合物２の異なる濃度（最終濃度は８０μｇ／ｍＬ、４０μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬである）グループ及び陽性薬シスプラチングループとして分けられ、グループ毎に六つの複合孔があり、それぞれ六つの平行プレートが設けられ、異なる時間での培養に使用される。
投与前に細胞培養プレートの上にある清澄液を除去し、新鮮な完全１６４０培地１８０μＬ／孔を添加し、薬物サンプルを以下の通り用いる。瓦草サポニン化合物２グループに異なる濃度勾配の化合物２溶液を添加し、孔毎に２０μＬとし、最終濃度をそれぞれ８０μｇ／ｍＬ、４０μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ及び５μｇ／ｍＬになるようする。陽性対照グループに、シスプラチン溶液２０μＬ（最終濃度は４０μｇ／ｍＬである）を添加する。空白グループ、モデル対照グループの孔毎にＤＭＳＯ濃度が０．５％である培地２０μＬを添加する。添加後にＣＯ２培養箱の中においてそれぞれ２４時間、４８時間培養する。
培養の終了後に孔毎にＭＴＴ溶液２０μＬを加入し、継続的に４時間培養した後、培養を終了させ、注意深く上清を吸い捨て、孔毎に１５０μＬのＤＭＳＯを添加し、１０分間振とうして、４９０ｎｍ波長で各孔の吸光度を測定し、且つ抑制率及びＩＣ５０を計算する。
抑制率＝［（モデルグループＯＤ−空白グループＯＤ）−（実験グループＯＤ−空白グループＯＤ）］／（モデルグループＯＤ−空白グループＯＤ）×１００％。
ＩＣ５０をＢｌｉｓｓ法で計算する。
本実験を３回繰り返す。
２ データ集計Ｓ
ＳＰＳＳ １０．０ソフトウェアデータを採用して処理分析を行い、全ての指標も均数±標準差（

（以下、ｘ（エックスバー）と記載する場合あり）±ｓ）で表示とし、グループ間の比較に分散分析を採用する。
３ 結果
表２データによると、瓦草サポニン化合物２は濃度２０〜８０μｇ／ｍＬ間において、ヒト肝臓癌細胞ＨｅｐＧ２に対して明らかな抑制効果があり、抑制率が最大時に９９％以上に達していることが示される。形態上では投与細胞が正常腫瘍細胞に比べて、明らかな細胞縮小、破砕、壁に付かない現象が現れることが発見された。薬物濃度が１０μｇ／ｍＬである場合のヒト肝臓癌細胞ＨｅｐＧ２への処理後２４時間、４８時間では、その腫瘍細胞抑制率は全て８０％を超えている。
計算を通して、瓦草サポニン化合物２のヒト肝臓癌細胞ＨｅｐＧ２に対する２４時間、４８時間でのＩＣ５０はそれぞれ、５．２５ｎｍｏｌ／ｍＬ、４．５６ｎｍｏｌ／ｍＬであり、一定の時間関連性が現れている。
（実験例３）瓦草サポニンのヒト肝臓癌細胞のアポトーシスに対する誘導作用及びその作用機序の研究
１ 実験方法
１．１ヒト肝臓癌細胞ＨｅｐＧ２の培養
ＨｅｐＧ２は中国医学科学院の腫瘍病院より提供される。１０％（Ｖ／Ｖ）ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ−１６４０培地において３７℃、５％ ＣＯ２の培養箱の中で培養し、２−３日に１回別の培地に接種してから培養し、対数成長期の細胞を取り実験研究に使用する。
１．２ 実験設計
１．２．１ 細胞アポトーシス実験
対数成長期の細胞を培養瓶に培養し、壁に付けて２４時間培養後に細胞分を三つのグループに分けて、それぞれモデル対照グループ、瓦草サポニン化合物２グループ（最終濃度は８０μｇ／ｍＬである）及び陽性対照薬シスプラチングループ（最終濃度は４０μｇ／ｍＬである）とし、グループ毎に３瓶とし、薬物での２４時間処理後に収集し、その後、測定待ちの細胞濃度を５×１０５−１×１０６個／ｍＬになるように調整し、１ｍＬ細胞を取り、１０００ｒｐｍ、４℃で１０分間遠心し、上清を除去してから１ｍＬの冷ＰＢＳを添加し、軽く振とうしながら細胞を懸濁させ、１０００ｒｐｍ、１０分間遠心し、上清を除去してから、細胞を２００μｌのＢｉｎｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ中に再懸濁させ、その後、１０μｌのＡｎｎｅｘｉｎ Ｖ−ＦＩＴＣ及び５μｌのＰＩを添加し、軽く混合させ、避光して室温で１５分間反応させ、３００μｌのＢｉｎｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒを添加し、流式細胞計で即時に検出する。
１．２．２ 細胞周期の検出
対数成長期の細胞を培養瓶の中で培養し、細胞を四つのグループに分けて、それぞれ、モデル対照グループ及び瓦草サポニン化合物２の異なる濃度（最終濃度は２０μｇ／ｍＬ、４０μｇ／ｍＬ、８０μｇ／ｍＬである）グループとし、グループ毎に３瓶とし、薬物で２４時間処理後に、測定待ちの細胞を単細胞懸濁液に調製し、ＰＢＳで２回洗い、ペプシンで消化する。培地を加えて消化を終了させ、均一に攪拌し、１０００ｒｐｍで、５分間遠心し、上清を除去し、４℃のＰＢＳ（１−２ｍＬ）で細胞を２回洗い、１０００ｒｐｍ、５分間遠心し、上清を除去し、−２０℃の７０％アルコール（１−２ｍＬ）を加えて、均一に攪拌し、３０分間以上固定する。１０００ｒｐｍで、５分間遠心し、アルコールを除去し、４℃のＰＢＳ（１−２ ｍＬ）で洗い、１０００ｒｐｍで、５分間遠心し、上清を除去する。４℃のＰＢＳ（１−２ ｍＬ）で洗い、細胞を均一化し、１００目ガーゼで流式検出管にてろ過し、１０００ｒｐｍで５分間遠心し、上清を除去し、ＰＩ染液染色（濃度は５０μｇ／ｍＬである）を添加して振とう器で均一に振とうさせ、避光して染色を最低３０分間行った後、流式細胞計で検出する。
２ データ集計
ＳＰＳＳ １０．０ソフトウェアを採用してデータ処理分析を行い、全ての指標も均数±標準差（ｘ（エックスバー）±ｓ）で表示し、グループ間の比較に分散分析を採用する。
３ 結果
３．１ 細胞アポトーシス早期信号の検出結果
検出結果によると、対照グループと比べると瓦草サポニンの作用後に早期アポトーシス信号細胞数が１．５％から８．５％へと明らかに上昇し、差異に顕著性（ｐ＜０．０１）があることが分かる。壊死細胞数は対照グループと比べて明らかに増加し、２．０％から６．６％に上昇している。薬物の腫瘍細胞への作用に異なるルートが存在することが説明され、一方で細胞アポトーシスが促進できるが、もう一方で他のルートが存在して細胞壊死を起こしている。
３．２ 細胞周期の検出結果
空白対照グループ及び薬物グループの細胞は殆どＧ０／Ｇ１期にある。瓦草サポニン化合物２（４０μｇ／ｍＬ）で４８時間処理すると、Ｇ０／Ｇ期細胞の比率は対照グループの（５６．３９±０．６９）％より（５５．０８±５．７５）％に下降する。瓦草サポニン化合物２（８０μｇ／ｍＬ）で４８時間処理後では、Ｇ０／Ｇ期細胞の比率は対照グループの（５６．３９±０．６９）％より（４７．２８±１３．０７％）に下降し、且つ５０％以上の細胞がＳ期及びＧ２／Ｍ期に入る。この中でも瓦草サポニン化合物２の濃度上昇、作用時間の延長に従ってＧ０／Ｇ１期に位置する細胞は段々と減少し、特にＳ期にある細胞は段々と増加し、例えば瓦草サポニン化合物２（８０μｇ／ｍＬ）の処理後２４時間、４８時間、７２時間では、Ｓ期細胞の比率は同時期対照グループの（１６．６３±１．３２）％、（２３．６８±１．６）％、（２６．０９±０．２６）％よりそれぞれ（２０．３９±２．５６）％、（３０．９５±５．８４）％、（４０．３４±１２．３２）％に増加する。瓦草サポニン化合物２が主に腫瘍細胞をＳ期にブロックし、抑制細胞がＧ０／Ｇ１期への進入によって腫瘍細胞の増長を抑制し、且つ明らかな用量効果関係が現れたことが説明される。結果は表３に示される。
（実験例４）瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物の抗ヒトＨｅｐＧ２肝臓癌薬効学の研究
抗癌効果の最も強い化合物１、化合物２を代表として、瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物の抗肝臓癌効果を考察する。
１ 実験方法
１．１ 動物及び飼育管理
清潔なヌードマウス７０匹（オス、体重１８−２０ｇ）は、中国食品薬品検定研究所より提供され、合格証明番号はＳＣＸＫ（京）２００９−００１７である。適応飼育１週間後に薬効学実験を実施する。
実験動物の飼育条件は以下の通りである。
動物をパットのあるＩＶＣプラスチック飼育箱の中で飼育し、清潔なヌードマウス専用の維持飼料（北京科澳協力飼料有限会社）で飼育し、自由に水を飲ませる。
１．２ ＨｅｐＧ２肝臓癌細胞の培養
ＨｅｐＧ２細胞を通常培養し、１０％（Ｖ／Ｖ）ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び１％（Ｖ／Ｖ）（１００Ｕ／ｍＬペニシリンと１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン）を含むＲＰＭＩ−１６４０培地に３７℃、５％ＣＯ２の飽和湿度培養箱の中に培養し、２−３日に１回別の培地に接種してから培養し、対数成長期の細胞を実験対象とする。
１．３ 実験設計
７０匹のヌードマウスを適応性飼育１週間後、体外培養成長が良好なＨｅｐＧ２細胞の懸濁液をヌードマウスの背部皮下に１×１０７個細胞／匹で接種する。接種終了後、体重によりランダムに７グループに分けて、それぞれはモデル対照グループ、瓦草総サポニングループ（実施例１の方法により調製される）、化合物１グループ、化合物２グループ、化合物１＋シクロホスファミド（ＣＹ）グループ、化合物２＋ＣＹグループ及び陽性薬ＣＹグループであり、グループ毎に１０匹とする。３日間接種後に投与を開始し、連続３週間とする。
毎週１回、体重及び腫瘍の大きさを測定し、且つ腫瘍体積を計算し、計算式は以下の通りである。
腫瘍体積：Ｖ＝π／６×ａ×ｂ２（ａ、ｂは腫瘍の横軸、縦軸の長さ）
最終投与終了後に、ヌードマウスを８時間禁食してから、空腹の体重を測定し、眼球を外して血を取り、血清を遠心分離し、腫瘍組織を分離し、体重を量り、且つ腫瘍指数及び腫瘍抑制率を計算し、計算式は以下の通りである。
腫瘍指数＝腫瘍重量（ｍｇ）／動物体重（ｇ）
腫瘍抑制率（％）＝（対照グループの平均腫瘍重量−投与グループの平均腫瘍重量）／対照グループの平均腫瘍重量×１００％
１．３．１ 組分け状況は以下の通りである。
１．３．２ 投与方法
瓦草総サポニン、化合物１、化合物２、ＣＹをそれぞれ無菌注射用水の中に溶解し、ろ過除菌する。化合物１＋ＣＹ、化合物２＋ＣＹをそれぞれ１：３９の比率で混合液を調製し、ろ過除菌する。各投与グループにそれぞれ対応薬物を皮下注射し（１０ｍｌ／ｋｇ ＢＷ）、モデル対照グループに同容量の注射用水のみを皮下注射する（１０ｍｌ／ｋｇ ＢＷ）。毎日午前９時に投与し、計３週間継続する。
１．３．３ 実験方案
体重の測定：毎週１回ヌードマウス体重を測定する。
腫瘍の測定：毎週１回ヌードマウス横直径及び縦直径を含む腫瘍の大きさを測定する。
実験の終了：投与３週間（２１日）後に該当実験研究を終了する。
２ データ集計：ＳＰＳＳ １０．０ソフトウェアでデータ処理分析を行い、全ての値を均数±標準差（ｘ（エックスバー）±ｓ）で表示し、グループ間の比較に分散分析を採用する。
３ 結果
３．１ 異なる瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物のＨｅｐＧ２腫瘍負荷ヌードマウスの体重への影響
投与前に各グループの動物体重は同じであり、グループ間に統計学的差異が無い。腫瘍接種後、モデルグループ、化合物１、２グループの体重は毎週増加し、この中でも化合物２グループの増加は速く、モデルグループの増加は遅くなっている。陽性薬グループ動物の体重は投与開始後増加しておらず、反対に下降傾向（モデルグループと比べると全てｐ＜０．０１である）を示している。
この結果は瓦草総サポニン、瓦草５環性トリテルペンサポニン化合物１、２が腫瘍ヌードマウスの成長状態−体重に対して有効な改善の影響をもたらし得、化学療法薬物であるＣＹ等による抗癌作用における体重の急激な減少の副作用を回避したことを示している。化合物１、２とＣＹを併用すると明らかにＣＹによる動物の体重への影響を弱めることができ、データによると、薬を併用しているヌードマウスの体重の緩やかな増加が現れており、化合物１、２によって明らかにＣＹの副作用が減らせることが示されている。表６に示される。
３．２ 瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物のＨｅｐＧ２腫瘍負荷ヌードマウスの腫瘍体積への影響
実験期間中、各グループの動物の腫瘍体積は経時的に増加しており、この内、モデルグループの腫瘍体積は顕著にに増加し、被験薬及びＣＹグループの腫瘍体積は緩やかに増加している。
異なる時間に投与すると、各薬物グループの動物の腫瘍は全て、モデルグループの腫瘍と比べて明らかに減少（全てはｐ＜０．０１になる）し、各薬物を単独で使用する場合、化合物２グループの腫瘍は最も小さく、その次に化合物１であり、２グループの腫瘍体積も明らかに陽性薬ＣＹグループより小さく、瓦草類サポニン化合物１、２が腫瘍増長抑制において陽性対照薬ＣＹより優れていることを説明する。瓦草総サポニンの腫瘍抑制効果も著しいが、ＣＹと比べると効果はやや弱くなっている。
化合物１、２とＣＹを併用すると、腫瘍成長はより明らかに抑制され、各単独投与グループと比較すると、併用グループの腫瘍体積は明らかに減少し、化合物１、２とＣＹを併用すると、より良い協同効果があることが示される。表７に示される。
３．３ 異なる瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物のＨｅｐＧ２腫瘍負荷ヌードマウスの腫瘍重量、腫瘍指数及び腫瘍抑制率への影響
瓦草総サポニン、化合物１、２グループ動物の腫瘍重量、腫瘍指数はモデルグループと比べて明らかに減少（モデルグループと比較すると、全てｐ＜０．０１である）し、単独使用の場合、化合物２の腫瘍成長抑制効果が最も著しく、化合物１、２グループの腫瘍重量、腫瘍指数は全て陽性薬ＣＹグループより低くなっている。瓦草総サポニンは以上の指標の改善に対して効果が著しいが、効果はＣＹより弱くなっている。腫瘍抑制率から見ると、化合物１、２皮下注射投与の腫瘍抑制率はそれぞれ８０．０５％と８７．４２％であり、陽性薬ＣＹ抑制率（７０．４６％）より高くなっており、良好な抗腫瘍効果を示し、且つ抗腫瘍作用強度はＣＹより優れている。
化合物１、２をそれぞれＣＹと併用する場合、腫瘍重量は各薬物の単独使用より明らかに低減し、腫瘍指数は明らかに減少し、腫瘍抑制率も増加し、化合物１、２がＣＹと抗腫瘍治療において併用すると良好的な協同効果があることを表明している。表８に示される。
４ 結論
瓦草総サポニン、化合物１及び化合物２は明らかにヒト肝臓癌ＨｅｐＧ２腫瘍負荷ヌードマウスの体重を増加させ、腫瘍体積を減少させ、腫瘍重量及び腫瘍指数を低減させることが可能で、この中でも化合物１、化合物２は陽性薬ＣＹより優れる腫瘍抑制率を示し、瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物が強い抗腫瘍活性を有することが示される。同時に化合物１及び化合物２は、腫瘍負荷ヌードマウスの体重（モデルグループ、ＣＹグループと比較するとｐ＜０．０１或いはｐ＜０．０１である）を明らかに増加させることが可能で、その副作用はＣＹより低いことが示され、効果が高く、低毒性の抗腫瘍活性成分の一種である。化合物１、２をそれぞれＣＹと併用する場合、マウスの体重は増加し、腫瘍抑制率も向上しており、化合物１、２は陽性薬ＣＹと併用すると良好に副作用が低減され、効果が増強されることが示される。
（実験例５）瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物の抗ヒトＢＧＣ８２３胃腺癌薬効学の研究
１ 実験方法
１．１ 動物及び飼養管理
清潔なヌードマウス７０匹（オス、体重１９−２２ｇ）は、中国食品薬品検定研究所より提供され、合格証明番号：ＳＣＸＫ（京）２００９−００１７である。適応性飼育１週間後に薬効学実験を実施する。
実験動物飼育条件は実験例４と同様である。
１．２ ＢＧＣ８２３胃癌細胞の培養
ＢＧＣ８２３細胞の体外培養方法は実験例４と同様である。
１．３ 実験設計
７０匹のヌードマウスを適応性飼育１週間後、体外培養成長が良好なＢＧＣ８２３細胞の懸濁液をヌードマウスの背部皮下に１．２×１０７個細胞／匹で接種する。接種終了後、体重に基づきランダムに七つのグループに分け、それぞれはモデル対照グループ、瓦草総サポニングループ（実施例１方法に基づき調製される）、化合物１グループ、化合物２グループ、化合物１＋５−ＦＵ、化合物２＋５−ＦＵグループ及び陽性薬５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）グループであり、グループ毎に１０匹とする。３日接種後に投与を開始し、３週間継続する。
毎週１回、体重及び腫瘍の大きさを測定し、且つ腫瘍の体積を計算し、計算式は以下の通りである。
腫瘍体積：Ｖ＝π／６×ａ×ｂ２（ａ、ｂは腫瘍の横軸、縦軸の長さである）
最終投与終了後に、ヌードマウスを８時間禁食し、空腹の体重を測定し、眼球を外し血を取り、血清を遠心分離し、腫瘍組織を分離し、重量を量り、且つ腫瘍指数及び腫瘍抑制率を計算し、計算式は以下の通りである。
腫瘍指数＝腫瘍重量（ｍｇ）／動物体重（ｇ）
腫瘍抑制率（％）＝（対照グループ平均腫瘍重量−投与グループ平均腫瘍重量）／対照グループ平均腫瘍重量×１００％
１．３．１ 組分け状況は以下の通りである。
１．３．２ 投与方法
瓦草総サポニン、化合物１、化合物２、５−ＦＵをそれぞれ無菌注射用水の中に溶解させ、ろ過除菌する。化合物１＋５−ＦＵ、化合物２＋５−ＦＵをそれぞれ１：１９の比率で混合液を調製し、ろ過除菌する。各投与グループにそれぞれ対応薬物を皮下注射し（１０ｍｌ／ｋｇ ＢＷ）、モデル対照グループに同じ容量の注射用水のみを皮下注射し（１０ｍｌ／ｋｇ ＢＷ）、毎日午前９時に投与し、計３週間継続する。
１．３．３ 実験方案
体重の測定：毎週１回、ヌードマウスの体重を測定する。
腫瘍の測定：毎週１回、ヌードマウスの横直径及び縦直径を含む腫瘍の大きさを測定する。
実験終了：投与３週間（２１日）後に該当実験研究を終了する。
データ集計：ＳＰＳＳ １０．０ソフトウェアでデータ処理分析を行い、すべての指標は均数±標準差（ｘ（エックスバー）±ｓ）で表示し、グループ間の比較に分散分析を採用する。
２ 結果
２．１ 異なる瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物のＢＧＣ８２３腫瘍負荷ヌードマウス体重への影響
投与前に各グループの動物の体重は同じであり、グループ間に統計学的差異は無い。腫瘍接種後に、モデルグループ動物の体重は緩やかに増加し、接種して三週目より体重は明らかに減少する。瓦草総サポニン、化合物１、２グループの動物の体重は毎週増加しており、三者間で体重増加に明らかな差異はない。陽性薬グループの動物の体重は投与開始から増加していないにも関わらず、反対に明らかに減少（モデルグループと比較すると全てはｐ＜０．０１である）する。化合物１、２を５−ＦＵと併用すると、５−ＦＵによって動物の体重は明らか低減し得、データによると、薬併用グループのマウスの体重は毎週増加し、化合物１、２により明らかに５−ＦＵの副作用が低減できることが示される。表１０に示される。
２．２ 瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物のＢＧＣ８２３腫瘍負荷ヌードマウスの腫瘍体積への影響
１週間投与時、各薬物干渉グループの動物の腫瘍は明らかにモデルグループ腫瘍より縮小している（全てｐ＜０．０１である）。２、３週間投与時、化合物１、２グループの腫瘍はモデルグループの腫瘍に比してより明らかに縮小し（全てｐ＜０．０１）、且つ陽性薬５−ＦＵグループの腫瘍体積はより明らかに縮小している。瓦草総サポニンも明らかな抗ＢＧＣ８２３腫瘍効果を有するが、効果は５−ＦＵより少し弱くなっている。
化合物１、２を５−ＦＵと併用すると、腫瘍成長はより明らかに抑制され、各単独投与グループと比較すると、薬併用グループでは腫瘍体積が明らかに減少し、良好な協同効果が示される。表１１に示される。
２．３ 異なる瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物のＢＧＣ８２３腫瘍負荷ヌードマウスの腫瘍重量、腫瘍指数及び腫瘍抑制率への影響
瓦草総サポニン、化合物１、２グループの動物の腫瘍重量、腫瘍指数は明らかにモデルグループ（モデルグループと比較すると、全てｐ＜０．０１である）より小さく、このうち、化合物２の腫瘍成長抑制効果は化合物１、瓦草総サポニンより強く、化合物１、２の皮下注射投与の腫瘍抑制率はそれぞれ６４．５４％と７９．６３％であり、陽性薬５−ＦＵの腫瘍成長抑制効果より強く、三種の薬物も良好な抗胃癌活性を示している。
化合物１、２をそれぞれ５−ＦＵと併用する場合、腫瘍重量は上述の三種の薬物の単独使用グループより明らかに低減され、腫瘍指数は明らかに減少し、腫瘍抑制率も向上しており、化合物１、２を５−ＦＵと抗腫瘍治療において併用すると、良好な協同効果があることが示される。表１２に示される。
３ 結論
瓦草総サポニン、化合物１、化合物２は明らかにヒト胃癌ＢＧＣ８２３腫瘍負荷ヌードマウスの体重を増加させ、腫瘍体積を低減させ、腫瘍重量及び腫瘍指数を低減させることが可能で、瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物が強い抗胃癌活性を有することを示している。同時に化合物１と化合物２は明らかに腫瘍負荷ヌードマウスの体重を増加させる（投与モデルグループ、５−ＦＵグループと比較すると、ｐ＜０．０１又はｐ＜０．０１である）ため、その薬効は５−ＦＵより優れており、副作用は５−ＦＵより低いことが証明され、効果が高く、低毒性である抗腫瘍活性成分の一種である。化合物１、２をそれぞれ５−ＦＵと併用する場合、マウスの体重は増加し、腫瘍指数は明らかに下降し、腫瘍抑制率も向上しており、化合物１、２と５−ＦＵ併用すると良好に副作用減少、効果増強作用がもたらされることが示される。
（実験例６）瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物の抗ヒトＨＴ２９大腸癌薬効学の研究
１ 実験方法
１．１動物及び飼養管理
清潔なヌードマウス７０匹（オス、体重１９−２２ｇ）は中国食品薬品検定研究所より提供され、合格証明番号：ＳＣＸＫ（京）２００９−００１７である。適応性飼育１週間後に薬効学実験を実施する。
実験動物の飼育条件は実験例４と同様である。
１．２ ＨＴ２９大腸癌細胞の培養
ＨＴ２９細胞の体外培養方法は実験例４と同様である。
１．３ 実験設計
７０匹のヌードマウスを適応性飼育１週間後に、体外培養成長が良好なＨｅｐＧ２細胞懸濁液をヌードマウス背部皮下に接種する。１×１０７個細胞／匹とする。接種終了後、体重に基づきランダムに七つのグループに分け、それぞれ、モデル対照グループ、瓦草総サポニングループ（実施例１方法に基づき調製される）、化合物１グループ、化合物２グループ、化合物１＋パクリタキセルグループ（ＰＴＸ）、化合物２＋ＰＴＸグループ及び陽性薬ＰＴＸグループであり、グループ毎に１０匹とする。３日接種後に投与を開始し、３週間継続する。
毎週１回、体重及び腫瘍の大きさを測定し、且つ腫瘍体積を計算し、計算式は以下の通りである。
腫瘍体積：Ｖ＝π／６×ａ×ｂ２（ａ、ｂは腫瘍の横軸、縦軸の長さである）
最終投与後に、ヌードマウスを８時間禁食し、空腹の体重を測定し、眼球を外し血を取り、血清を遠心分離し、腫瘍組織を分離し、重量を量り、且つ腫瘍指数及び腫瘍抑制率を計算し、計算式は以下の通りである。
腫瘍指数＝腫瘍重量（ｍｇ）／動物体重（ｇ）
腫瘍抑制率（％）＝（対照グループ平均腫瘍重量−投与グループ平均腫瘍重量）／対照グループ平均腫瘍重量×１００％
１．３．１ 組分け状況は以下の通りである。
１．３．２ 投与方法
瓦草総サポニン、化合物１、化合物２、ＰＴＸをそれぞれ無菌注射用水の中に溶解し、ろ過除菌する。化合物１＋ＰＴＸ、化合物２＋ＰＴＸをそれぞれ１：１９の比率で混合液を調製し、ろ過除菌する。各投与グループにそれぞれ対応薬物を皮下注射し（１０ｍｌ／ｋｇ ＢＷ）、モデル対照グループに同じ容量の注射用水のみを皮下注射し（１０ｍｌ／ｋｇ ＢＷ）、毎日午前９時に投与し、計３週間継続する。
１．３．３ 実験方案
体重の測定：毎週１回、ヌードマウスの体重を測定する。
腫瘍の測定：毎週１回、ヌードマウス横直径及び縦直径を含む腫瘍の大きさを測定する。
実験終了：投与３週間（２１日）後に該当実験研究を終了する。
データ集計：ＳＰＳＳ １０．０ソフトウェアでデータ処理分析を行い、全ての指標は均数±標準偏差（ｘ（エックスバー）±ｓ）で表示し、グループ間の比較に分散分析を採用する。
２ 結果
２．１ 異なる瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物のＨＴ２９腫瘍負荷ヌードマウス体重への影響
投与前、各グループの動物の体重は同じであり、グループ間に統計学的差異が無い。腫瘍接種１週間時、ＰＴＸグループ以外の動物の体重はやや下降しているほか、他の各グループの動物の体重は全て増加している。２週間接種時、瓦草総サポニン、化合物１、２グループの動物の体重はまだ増加しており、それに対してモデルグループ、ＰＴＸグループの体重は下降を始める。３週間接種時、化合物１グループの動物の体重はまだ増加している一方で、他の各グループの体重は下降しており、このうち、モデルグループ、ＰＴＸグループの体重下降は著しくなっている。
化合物１、２をＰＴＸと併用すると、明らかにＰＴＸによって動物の体重への影響が低減され得、データから見ると、薬併用グループのマウスの体重は毎週増加しており、化合物１、２がＰＴＸの副作用を有効に低減できることを示している。表１４に示される。
２．２ 瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物のＨＴ２９腫瘍負荷ヌードマウスの腫瘍体積への影響
１週間投与時、各薬物干渉グループの動物の腫瘍はモデルグループの腫瘍より小さいが、瓦草総サポニン、化合物１グループの腫瘍は緩やかな増長の傾向を示しており、モデルグループと比較すると、統計学的差異が現れていない。２、３週間投与時、化合物２、ＰＴＸグループの腫瘍体積は先に上昇してから後に下降し、それに対して化合物１グループの腫瘍は継続して下降傾向を示しているが、増長速度は明らかにモデルグループ（ｐ＜０．０５或いはｐ＜０．０１）より低くなっている。
化合物１、２をＰＴＸと併用すると腫瘍の成長はより明らかに抑制され、各単独投与グループと比較すると薬併用グループの腫瘍体積は明らかに減少し、良好な協同効果を示している。表１５に示される。
２．３ 異なる瓦草５環性トリテルペンサポニン類化合物のＨＴ２９腫瘍負荷ヌードマウスの腫瘍重量、腫瘍指数及び腫瘍抑制率への影響
瓦草総サポニン、化合物１、２グループの動物の腫瘍重量、腫瘍指数は明らかにモデルグループより低く（モデルグループと比較すると、均有ｐ＜０．０１）、このうち、化合物１、２のＨＴ２９腫瘍成長抑制強度はＰＴＸと近似しており、腫瘍抑制率はそれぞれ５０．４４％と５４．８７％になっている。瓦草総サポニンの腫瘍抑制率は化合物１、２より低く、４６．７６％であり、三種の薬物も良好な抗大腸癌効果を示している。
化合物１、２をそれぞれＰＴＸと併用した場合、腫瘍重量は上述の三種の薬物単独使用グループより明らかに低減され、腫瘍指数は明らかに減少し、腫瘍抑制率は増加しており、化合物１、２とＰＴＸを抗腫瘍治療に併用する場合、良好な協同効果を有することを示している。表１６に示される。
３ 結論
瓦草総サポニン、化合物１及び化合物２は明らかにヒト大腸癌ＨＴ２９腫瘍負荷ヌードマウスの体重を増加させ、腫瘍体積を低減させ、腫瘍重量及び腫瘍指数を減少させることが可能で、良好な抗大腸癌薬効学活性を示している。同時に化合物１、２をそれぞれＰＴＸと併用した場合、明らかにマウス体重が増加し、腫瘍指数が低減され、且つ腫瘍抑制率を増加させることが可能で、ＰＴＸと併用した場合に、良好な効果増強、副作用低減作用が示される。
具体的な実施例は以下の通りである。
以下は本発明の原理及び特徴に対して説明され、列挙された実施例は本説明の解釈のみに扱うものとし、本発明の範囲を限定するものではない。
（実施例１）瓦草総サポニンの調製
瓦草２１ｋｇを取り、粉砕後に１７０Ｌの９５％エタノールと７０％エタノールで別々に３回抽出し、濃縮してからエキス７ｋｇを取得し、エキスを水で希釈後にＤ１０１マクロ多孔性樹脂を通してそれぞれ水、１０％エタノール、７０％エタノール、９０％エタノール勾配で溶離、この中に９０％溶離部分から直接的に瓦草総サポニンが調製され、該当総サポニンの含有量は分光光度法で測定され、総サポニンの含有量は６１．２％に達する。
（実施例２）瓦草５環性トリテルペン類化合物の調製
瓦草２１ｋｇを取り、粉砕後に１７０Ｌの９５％エタノール及び７０％エタノール別々に３回抽出し、濃縮してからエキス７ｋｇを取得し、エキスを大量の水で希釈後にＤ１０１マクロ多孔性樹脂を通してそれぞれ水、１０％エタノール、７０％エタノール、９０％エタノール勾配で溶離し、この中に９０％溶離部分から総重量５ｋｇのエキスが取得される。９０％の部分はＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０柱を通して分離してからＭＣＩカラムに通して、順番に、水、３０％、５０％、６０％、７０％、９０％、９５％、１００％メタノールで溶離し、それからｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０を繰り返して、それぞれ大分子化合物１（ｓｉｎｏｃｒａｓｓｕｌｏｓｉｄｅＶＩ）、化合物２（ｓｉｎｏｃｒａｓｓｕｌｏｓｉｄｅ ＶＩＩ）、化合物３（ｓｉｎｏｃｒａｓｓｕｌｏｓｉｄｅ ＶＩＩＩ）、化合物４（ｓｉｎｏｃｒａｓｓｕｌｏｓｉｄｅ ＩＸ）、化合物７（ｓｉｎｏｃｒａｓｓｕｌｏｓｉｄｅ ＸＩＩ）、化合物８（ｓｉｎｏｃｒａｓｓｕｌｏｓｉｄｅ ＸＩＩＩ）を取得し、この内に、化合物１と化合物２、化合物３と化合物４、化合物７と化合物８は３対のシス型異性体である。
化学構造の鑑定データは以下の通りである。
化合物１と化合物２（ｓｉｎｏｃｒａｓｓｕｌｏｓｉｄｅＶＩとｓｉｎｏｃｒａｓｓｕｌｏｓｉｄｅＶＩＩ）：白色粉末、分子式は：Ｃ７１Ｈ１０２Ｏ３１である。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１４７３．２［Ｍ＋Ｎａ］＋、１４４９．７［Ｍ−Ｈ］−。１Ｈ−ＮＭＲと１３Ｃ−ＮＭＲの具体的なデータは表１７を参照のこと。
化合物３と化合物４（ｓｉｎｏｃｒａｓｓｕｌｏｓｉｄｅＶＩＩＩとｓｉｎｏｃｒａｓｓｕｌｏｓｉｄｅ ＩＸ）：白色粉末、分子式は：Ｃ７２Ｈ１０４Ｏ３１である。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１４８７．２［Ｍ＋Ｎａ］＋、１４９９．７［Ｍ＋Ｃｌ］−、１４６３．８［Ｍ−Ｈ］−。１Ｈ−ＮＭＲと１３Ｃ−ＮＭＲの具体的なデータは表１７を参照のこと。
化合物７と化合物８（ｓｉｎｏｃｒａｓｓｕｌｏｓｉｄｅとｓｉｎｏｃｒａｓｓｕｌｏｓｉｄｅＸＩＩＩ）：白色粉末、分子式は：Ｃ７５Ｈ１１０Ｏ３１である。ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１５２９．３［Ｍ＋Ｎａ］＋、１５４１．８［Ｍ＋Ｃｌ］−、１５０５．６［Ｍ−Ｈ］−。１Ｈ−ＮＭＲと１３Ｃ−ＮＭＲの具体的なデータは表１７を参照のこと。
化学構造式の鑑定結果は以下の通りである。
化合物３と化合物４：白色粉末、分子式は：Ｃ７２Ｈ１０４Ｏ３１である。化学構造式は以下の通りである。
化合物７と化合物８：白色粉末、分子式は：Ｃ７５Ｈ１１０Ｏ３１である。化学構造式は以下の通りである。
（実施例３）錠剤の調製
化合物１、２をそれぞれ３３ｇ取り、加薬用デンプン２１７ｇを加えて均一に混合し、適量のデンプンペーストを接着剤制粒とし、乾燥してから顆粒製造機で顆粒を作り、成形し、一錠毎に２５０ｍｇとし、経口で毎回１錠、毎日２回服用する。
（実施例３）カプセル剤の調製
化合物１、２をそれぞれ３３ｇ取り、加薬用デンプン２１７ｇを加えて均一に混合して、適量のデンプンペーストを接着剤制粒とし、乾燥してから顆粒製造機で顆粒を作り、カプセルに充填し、１粒毎に２５０ｍｇとし、経口で毎回１粒、毎日２回服用する。
（実施例４）注射剤の調製
注射用水３０００ｍＬで化合物１、２各３３ｇを溶解させ、それぞれ活性炭（１０５ ℃活化１時間）３０ｇを加えて、それを０．０１％になるように調製し、２０分間加熱し、ｐＨ値を５．５−６．５に調整し、塩化ナトリウムを加えて等浸透溶液に調整し、加熱しながらろ過、封入、殺菌することで取得できる。１本当りに３ｍＬで筋肉に注射し、毎回３ｍＬ、一日２回に服用する。
（実施例５）粉末注射剤の調製
化合物１、２それぞれ３３ｇを細かい粉末状に凍結乾燥するか、又は注射液１０００ｍＬ毎に６２．５ｇマンニトールおよび６２．５ｇ麦芽糖を加えて支持剤を作り、溶解後に凍結乾燥し、密封、殺菌すると取得できる。
（実施例６）脂質体の調製
処方量の化合物１、２をそれぞれ３．３ｇ量り、大豆レシチン４０ｇ及びコレステロール１０ｇを用いてクロロホルム及びメタノール（２：１）に溶解させ、４０℃の恒温水浴中で回転蒸発器の減圧蒸留を通して有機溶剤を除去し、瓶壁に均一な類脂フィルムが形成され、適切な濃度のマンニトール及びブドウ糖の水溶液１０００ｍＬを添加して、軽く振とうさせ、フィルムを溶解させて脂質体初懸濁液と水合成し、ディスクター式超音を半透明のコロイド溶液に置き、マイクロ孔ろ過フィルムでろ過し、ろ過液を分けてから凍結乾燥する。
（実施例７）気剤の調製
化合物１、２をそれぞれ１６．５ｇ取り、３３ｇのポリグリコール４０００を加え、加熱熔化した後に８０℃の状態で２０滴／分間の速度で液体パラフィン凝縮剤（凝縮剤上部の温度を５〜１５℃に管理する）の中に点滴し、成形後に取出して凝縮剤を除去し乾燥すると本品１０００錠が取得できる。錠剤の重量が０．０４９５ｇ／錠剤となるように管理する。
（実施例８）凝結遅緩剤の調製
（１）骨格錠：化合物１、２をそれぞれ６６ｇ取り、ＨＰＭＣ Ｋ１００Ｍ４０ｇ、乳糖１２０ｇ、デンプン４０ｇに溶解させる。混合した後に適量の５％ＰＶＰの９５％エタノール溶液を接着剤制粒とし、乾燥させてから顆粒製造機で顆粒を作り、錠剤を押して、１錠当りに２６６ｍｇとし、経口で毎回１錠、毎日１回服用する。
（２）マイクロ孔浸透ポンプ、コーディング：１錠当り２７３ｍｇで経口、毎回に１錠、毎日１回服用する。
錠心：化合物１、２をそれぞれ６６ｇ取り、それぞれ糖１４０ｇ、デンプン５０ｇ、塩化ナトリウム３ｇ、タルカムパウダー１ｇを添加し、適量の５％ＰＶＰの９５％エタノール溶液を接着剤制粒とし、乾燥させてから顆粒製造機で顆粒を作り、錠剤を押して、１錠当り２６０ｍｇとする。
コーディング液：酢酸セルロースをアセトン及びイソプロピル・アルコールの混合溶液に溶解させ、濃度を２％（ｇ／１００ｍＬ）とし、ジブチルフタレート２５％を可塑剤として添加し、致孔剤としてＰＥＧ４００を加え、錠心コーディングとし、コーディングを５％の重量に増加させる。
（実施例９）乳剤の調製
化合物１、２をそれぞれ０．５ｇ、ジメチルスルホキシド１４ｍＬ、トリエタノールアミン１．６ｇ、グリセリン４．０ｇ、蒸留水５４ｍＬ、ラノリン２．０ｇ、白ワセリン１０ｇ、硬脂酸１６ｇを取り、混合する。
（実施例１０）口腔付着錠の調製
化合物１、２をそれぞれ３３ｇ取り、それぞれＨＰＭＣ Ｋ４Ｍ５０ｇ、ＨＰＭＣ Ｋ１５Ｍ２５ｇ、乳糖８５ｇ、硬脂酸マグネシウム１．５ｇ、アスパルテーム５．５ｇを添加してから混合し、別々に１００目ふるいにて粉枠し、粉末で直接的に錠剤を調製し、１錠あたり２００ｍｇとし、経口で毎回１錠、毎日２回服用する。
（実施例１１）口崩片の調製
化合物１、２をそれぞれ３３ｇ取り、ヒドロキシプロピルセルロース１４６．６５ｇ、微結晶セルロース７５ｇ、アスパルテーム８．１ｇ、メントール５．４ｇ、乳糖３５．５ｇ、硬脂酸マグネシウム１．３５ｇを混合し、経口で毎回１錠、毎日２回服用する。
（実施例１２）顆粒剤の調製
化合物１、２をそれぞれ３３ｇ取り、乳糖１１６７ｇ、デキストリン２８００ｇを混合してから、適量の９５％エタノールを接着剤制粒として、乾燥後、顆粒製造機で顆粒を作り、包装機で包装し、経口で毎回１袋、毎日２回服用する。
以上は本発明における比較的良い実施例のみであり、本発明に限らないものとし、本発明の精神及び原則内において何れかの修正、同等代替、改善等も全て本発明の保護範囲内に含まれている。
（付記）
（付記１）
式Ｉの化合物
又はその塩の抗腫瘍薬物の調製における使用。
（式中、Ｒ１は、Ｈ、Ａｃ及びＧｌｃ（ブドウ糖）のうちの一種であり、
Ｒ２は、（Ｅ）−ＭＣ、（Ｚ）−ＭＣ、Ａｃのうちの一種であり、
Ｒ３は、Ｈ、Ｘｙｌ（キシロース）のうちの一種であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３のうちの一種であり、
Ａｃの構造式は、以下の通りであり、
（Ｅ）−ＭＣの構造式は、以下の通りであり、
（Ｚ）−ＭＣの構造式は、以下の通りである。）
（付記２）
前記化合物は、
、
、
、
、
又は
である、
ことを特徴とする付記１に記載の使用。
（付記３）
前記化合物は、肝臓癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌又は黒色素腫瘍を治療する薬物の調製において使用される、
ことを特徴とする付記１又は２に記載の使用。
（付記４）
前記塩は、式Ｉの化合物及びアルカリ又はソロネッツ金属より形成される塩である、
ことを特徴とする付記１に記載の使用。
（付記５）
前記アルカリは、水酸化ナトリウム、水素カリウム、水素酸化カルシウム、水素酸化マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、塩化アンモニウム又はアンモニアを含み、前記ソロネッツ金属は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミ、銅、亜鉛又はマグネシウムを含む、
ことを特徴とする付記４に記載の使用。
（付記６）
式Ｉの化合物は、化学合成、半合成又は生物転化される、
ことを特徴とする付記１、２、４又は５に記載の使用。
（付記７）
式Ｉの化合物は、化学合成、半合成又は生物転化される、
ことを特徴とする付記３に記載の使用。
（付記８）
式Ｉの化合物
又はその塩と、通常の抗がん剤のいずれかの一種と、を活性成分として含む、
ことを特徴とする腫瘍を治療するための医薬組成物。
（式中、Ｒ１は、Ｈ、Ａｃ、Ｇｌｃ（ブドウ糖）のうちの一種であり、
Ｒ２は、（Ｅ）−ＭＣ、（Ｚ）−ＭＣ、Ａｃのうちの一種であり、
Ｒ３は、Ｈ、Ｘｙｌ（キシロース）のうちの一種であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３のうちの一種であり、
Ａｃの構造式は、以下の通りであり、
（Ｅ）−ＭＣの構造式は、以下の通りであり、
（Ｚ）−ＭＣの構造式は、以下の通りである。）
（付記９）
前記通常の抗がん剤は、シクロホスファミド又は５−フルオロウラシルである、
ことを特徴とする付記８に記載の医薬組成物。
（付記１０）
腫瘍治療薬物の調製において使用される、
ことを特徴とする付記８又は９の医薬組成物。
（付記１１）
前記腫瘍は、肝臓癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌又は黒色素腫瘍である、
ことを特徴とする付記１０に記載の医薬組成物。
（付記１２）
式Ｉの化合物
又はその塩を含む組成物の抗腫瘍薬物の調製における使用。
（式中、Ｒ１は、Ｈ、Ａｃ、Ｇｌｃ（ブドウ糖）のうちの一種であり、
Ｒ２は、（Ｅ）−ＭＣ、（Ｚ）−ＭＣ、Ａｃのうちの一種であり、
Ｒ３は、Ｈ、Ｘｙｌ（キシロース）のうちの一種であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３のうちの一種であり、
Ａｃの構造式は、以下の通りであり、
（Ｅ）−ＭＣの構造式は、以下の通りであり、
（Ｚ）−ＭＣの構造式は、以下の通りである。）
（付記１３）
前記化合物は、
、
、
、
、
又は
である、
ことを特徴とする付記１２に記載の使用。
（付記１４）
前記化合物は、肝臓癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌又は黒色素腫瘍を治療する薬物の調製において使用される、
ことを特徴とする付記１２又は１３に記載の使用。
（付記１５）
前記塩は、式Ｉの化合物及びアルカリ又はソロネッツ金属より形成される塩である、
ことを特徴とする付記１４に記載の使用。
（付記１６）
前記アルカリは、水酸化ナトリウム、水素カリウム、水素酸化カルシウム、水素酸化マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、塩化アンモニウム又はアンモニアを含み、前記ソロネッツ金属は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミ、銅、亜鉛又はマグネシウムを含む、
ことを特徴とする付記１４に記載の使用。
（付記１７）
前記式Ｉの化合物は、化学合成、半合成又は生物転化される、
ことを特徴とする付記１２、１３、１５又は１６に記載の使用。
（付記１８）
前記式Ｉの化合物は、化学合成、半合成又は生物転化される、
ことを特徴とする付記１４に記載の使用。
（付記１９）
式Ｉの化合物
又はその塩と、補助材料と、から作られることを特徴とする製剤の抗腫瘍薬物の調製における使用。
（式中、Ｒ１は、Ｈ、Ａｃ、Ｇｌｃ（ブドウ糖）のうちの一種であり、
Ｒ２は、（Ｅ）−ＭＣ、（Ｚ）−ＭＣ、Ａｃのうちの一種であり、
Ｒ３は、Ｈ、Ｘｙｌ（キシロース）のうちの一種であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３のうちの一種であり、
Ａｃの構造式は、以下の通りであり、
（Ｅ）−ＭＣの構造式は、以下の通りであり、
（Ｚ）−ＭＣの構造式は、以下の通りである。）
（付記２０）
前記化合物は、
、
、
、
、
又は
である、
ことを特徴とする付記１９に記載の使用。
（付記２１）
前記化合物は、肝臓癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌又は黒色素腫瘍を治療する薬物の調製において使用される、
ことを特徴とする付記１９又は２０に記載の使用。
（付記２２）
前記塩は、式Ｉの化合物及びアルカリ又はソロネッツ金属より形成される塩である、
ことを特徴とする付記１９に記載の使用。
（付記２３）
前記アルカリは、水酸化ナトリウム、水素カリウム、水素酸化カルシウム、水素酸化マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、塩化アンモニウム又はアンモニアを含み、前記ソロネッツ金属は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミ、銅、亜鉛又はマグネシウムを含む、
ことを特徴とする付記２２に記載の使用。
（付記２４）
前記式Ｉの化合物は、化学合成、半合成又は生物転化される、
ことを特徴とする付記１９、２０、２２又は２３に記載の使用。
（付記２５）
前記式Ｉの化合物は、化学合成、半合成又は生物転化される、
ことを特徴とする付記２１に記載の使用。
（付記２６）
前記製剤は、臨床上で使用される注射剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤又は気剤である、
ことを特徴とする付記２１に記載の使用。
（付記２７）
肝臓癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌又は黒色素腫瘍の治療薬物の調製における瓦草抽出物の使用。
（付記２８）
前記瓦草抽出物において、瓦草総サポニンの含有量は、５０％以上である、
ことを特徴とする付記２７に記載の使用。

Claims (20)

  1. 化合物
    若しくはその塩、
    化合物
    若しくはその塩、
    化合物
    若しくはその塩又は
    化合物
    若しくはその塩の抗腫瘍薬物の調製における使用。
  2. 前記化合物は、肝臓癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌又は黒色素腫瘍を治療する薬物の調製において使用される、
    ことを特徴とする請求項１に記載の使用。
  3. 前記塩は、前記化合物及びアルカリ又はソロネッツ金属より形成される塩である、
    ことを特徴とする請求項１に記載の使用。
  4. 前記アルカリは、水酸化ナトリウム、水素カリウム、水素酸化カルシウム、水素酸化マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、塩化アンモニウム又はアンモニアを含み、前記ソロネッツ金属は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミ、銅、亜鉛又はマグネシウムを含む、
    ことを特徴とする請求項３に記載の使用。
  5. 前記化合物は、化学合成、半合成又は生物転化される、
    ことを特徴とする請求項１乃至４のいずれか１項に記載の使用。
  6. 化合物
    若しくはその塩、
    化合物
    若しくはその塩、
    化合物
    若しくはその塩又は
    化合物
    若しくはその塩と、通常の抗がん剤のいずれかの一種と、を活性成分として含む、
    ことを特徴とする腫瘍を治療するための医薬組成物。
  7. 前記通常の抗がん剤は、シクロホスファミド又は５−フルオロウラシルである、
    ことを特徴とする請求項６に記載の医薬組成物。
  8. 腫瘍治療薬物の調製において使用される、
    ことを特徴とする請求項６又は７に記載の医薬組成物。
  9. 前記腫瘍は、肝臓癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌又は黒色素腫瘍である、
    ことを特徴とする請求項８に記載の医薬組成物。
  10. 化合物
    若しくはその塩、
    化合物
    若しくはその塩、
    化合物
    若しくはその塩又は
    化合物
    若しくはその塩を含む組成物の抗腫瘍薬物の調製における使用。
  11. 前記化合物は、肝臓癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌又は黒色素腫瘍を治療する薬物の調製において使用される、
    ことを特徴とする請求項１０に記載の使用。
  12. 前記塩は、前記化合物及びアルカリ又はソロネッツ金属より形成される塩である、
    ことを特徴とする請求項１０に記載の使用。
  13. 前記アルカリは、水酸化ナトリウム、水素カリウム、水素酸化カルシウム、水素酸化マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、塩化アンモニウム又はアンモニアを含み、前記ソロネッツ金属は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミ、銅、亜鉛又はマグネシウムを含む、
    ことを特徴とする請求項１２に記載の使用。
  14. 前記化合物は、化学合成、半合成又は生物転化される、
    ことを特徴とする請求項１０乃至１３のいずれか１項に記載の使用。
  15. 化合物
    若しくはその塩、
    化合物
    若しくはその塩、
    化合物
    若しくはその塩又は
    化合物
    若しくはその塩と、補助材料と、から作られることを特徴とする製剤の抗腫瘍薬物の調製における使用。
  16. 前記化合物は、肝臓癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌又は黒色素腫瘍を治療する薬物の調製において使用される、
    ことを特徴とする請求項１５に記載の使用。
  17. 前記塩は、前記化合物及びアルカリ又はソロネッツ金属より形成される塩である、
    ことを特徴とする請求項１５に記載の使用。
  18. 前記アルカリは、水酸化ナトリウム、水素カリウム、水素酸化カルシウム、水素酸化マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、塩化アンモニウム又はアンモニアを含み、前記ソロネッツ金属は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミ、銅、亜鉛又はマグネシウムを含む、
    ことを特徴とする請求項１７に記載の使用。
  19. 前記化合物は、化学合成、半合成又は生物転化される、
    ことを特徴とする請求項１５乃至１８のいずれか１項に記載の使用。
  20. 前記製剤は、臨床上で使用される注射剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤又は気剤である、
    ことを特徴とする請求項１５に記載の使用。
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