CN102858359A

CN102858359A - 一种含有醇溶性且非水溶性甘草提取物的药物组合物,及其药物制剂、制药用途、治疗方法和制备方法

Info

Publication number: CN102858359A
Application number: CN2011800076325A
Authority: CN
Inventors: 周·詹姆斯; 陈东
Original assignee: James Zhou
Current assignee: BEIJING HUIBAOYUAN BIOTECHNOLOGY CO., LTD.
Priority date: 2010-02-06
Filing date: 2011-01-26
Publication date: 2013-01-02
Anticipated expiration: 2031-01-26
Also published as: US9943560B2; US20130149393A1; WO2011095095A1; CN102858359B

Abstract

一种药物组合物包含醇溶性且非水溶性的甘草提取物，和至少一种抗肿瘤药或降糖降脂的药物。该组合物在抗肿瘤或降糖降脂方面具有协同增效作用。另外，本发明提供了与该药物组合物相关的药物制剂、制药用途、治疗方法和制备方法。

Description

一种含有醇溶性且非水溶性甘草提取物的药物组合物，及其药物制

剂、制药用途、治疗方法和制备方法技术领域

本发明属于医药技术领域，具体而言，本发明涉及具有协同增效作用的药物组合物，其包含醇溶性且非水溶性的甘草提取物，和至少一种抗肿瘤或降糖降脂药物，可用于抗肿瘤或降糖降脂。另外，本发明还涉及与该药物组合物相关的药物制剂、制药应用、治疗方法和制备方法等。背景技术

在中国，中药植物的药物利用历史悠久，通过用水、酒等来煎煮中药植物以提取出中药，在历史上得到了广泛的使用并挽救了大量人的生命。现代研究发现，有许多中药植物通过其中的黄酮类化合物来起作用，并分离出单一组分制备成现代药物，例如，中国专利申请 CN1113909A、 CN1371372A等。但是，由于中药中成分众多，药用机理难以完全揭示，尤其是不同成分之间或者其中成分与其他药物之间的协同作用的机制十分复杂，没有为现代医学所揭示，即使是研究较多的甘草（Radix Glycyrrhizae ) (又名美草、蜜甘、蜜草、蔣草、粉草、甜草、甜根子、棒草），其提取物中的成分包括甘草酸、甘草黄酮 ( l icoflavone)、甘草素 ( l iquiritigenin)、甘草苷（ l iquiritin)、光甘草定（glabridin) 及查尔酮等，成分之间的疗效协同性以及与其他药物之间的疗效协同性和疗效稳定性被研究的很少。因此，中药植物的提取制备的药物通常仅限于中国、印度、日本等国家医药产品中使用。

中医常用一些中药配方或中药制剂治疗，但疗效均不稳定。原因在于难以了解中药配方及药剂的中药成份与适应症的相关性，而且中药成份与提取方法、提取原料以及原料标准都有重大联系，起始原料差之毫厘，导致最终药物疗效失之千里。因此，尽管中药天然的概念也逐渐为欧美患者所接受，用于治疗或保健，但是其疗效的稳定性限制了在这些地区的推广应用。

本发明人在长期研究后，令人惊讶地得出一种全新的思路，以简化的制备流程提取甘草提取物，保留了一种或多种有效成分，即使使用不同甘草原料，使得提取物中有效成分之间相差很大（如，提取物中可以不含查尔酮 A，也优选含查尔酮 A)，但是都具有抗肿瘤或降糖降脂的疗效，尤其是与其他抗肿瘤或降糖降脂药物联合使用时，还能协同增加疗效，相应地可以降低药物活性成分（尤其是毒副作用较大的成分）的剂量，大大增强了用药安全性。发明概述

本发明的目的在于提供醇溶性且非水溶性的甘草提取物，其可以单独使用，也可以与抗肿瘤或降糖降脂药物联合使用。另外，本发明还提供了相关的药物组合物、药物制剂、应用和方法等。在第一方面，本发明提供了协同增效的药物组合物，其包含醇溶性且非水溶性的甘草提取物，和至少一种抗肿瘤或降糖降脂药物。优选其中，醇溶性且非水溶性的甘草提取物，和至少一种抗肿瘤或降糖降脂药物，是全部药物活性成分。更优选其中，是由醇溶性且非水溶性的甘草提取物和一种抗肿瘤或降糖降脂药物组成的。优选本发明第一方面的药物组合物中，甘草是乌拉尔甘草或胀果甘草或它们的混合物。优选甘草是乌拉尔甘草和胀果甘草的混合物，例如，优选其中胀果甘草含量不低于 5%，也优选其中乌拉尔甘草含量不低于 5%。因此，也优选本发明第一方面的药物组合物中，甘草提取物是乌拉尔甘草提取物或胀果甘草提取物或它们的混合物。优选甘草提取物是乌拉尔甘草提取物和胀果甘草提取物的混合物，例如，优选其中胀果甘草提取物含量不低于 5%，如其中查尔酮 A含量不低于 5%。甘草提取物的混合物可以先混合不同的干草再提取来制备，也可以先提取出甘草提取物再混合来制备。

优选本发明第一方面的药物组合物中，醇溶性且非水溶性的甘草提取物通过包括如下步骤的方法制备：

( 1 ) 用水浸提甘草后，保留固体部分。

( 2 )用高浓度（浓度大于 85% (V/V)，优选大于 90% (V/V)，更优选大于 93% ( (V/V))，如 95% (V/V) ) 醇浸提步骤（1 ) 得到的固体部分，保留液体部分并加以干燥。优选其中还包括进一步提取查尔酮 A的步骤。这样，醇溶性且非水溶性的甘草提取物是提取自甘草的查尔酮 A。优选本发明第一方面的药物组合物中，醇溶性且非水溶性的甘草提取物中甘草黄酮含量大于 15%，如 20%，其中可以含查尔酮 A，也可以不含查尔酮 A; 但优选含查尔酮 A，或者，醇溶性且非水溶性的甘草提取物中查尔酮 A含量大于 5%，如 15%。优选本发明第一方面的药物组合物中，抗肿瘤或降糖降脂药物是具有抗肿瘤或降糖降脂作用的药物，可以是另一种本发明的醇溶性且非水溶性的甘草提取物，也可以是现有疗效确切的药物，优选选自 5-氟尿嘧啶、吲哚二甲烷或其衍生物（如，吲哚三甲醇）、顺铂、和枸杞中的一种或多种。在第二方面，本发明提供了抗肿瘤或降糖降脂的药物制剂，其包括本发明第一方面的药物组合物和药学上可接受的辅剂。优选其中本发明第一方面的药物组合物的剂量是安全且有效的。由于本发明的醇溶性且非水溶性的甘草提取物能够与多种常用的抗肿瘤或降糖降脂药物协同增效，因此本发明第一方面的药物组合物中所含抗肿瘤或降糖降脂药物的剂量优选低于单独使用这些常用的抗肿瘤或降糖降脂药物所起相同疗效的剂量。在第三方面，本发明提供了醇溶性且非水溶性的甘草提取物和至少一种（优选一种）抗肿瘤或降糖降脂药物联合作为全部药物活性成分在制备抗肿瘤或降糖降脂药品中的应用。这样能够增强给药的有效性及安全性。优选本发明第三方面的应用中，所述醇溶性且非水溶性的甘草提取物如本发明第一方面所优选的。优选本发明第三方面的应用中，所述抗肿瘤或降糖降脂药物如本发明第一方面所优选的。在第四方面，本发明提供了抗肿瘤或降糖降脂的方法，其包括向个体给药有效量的醇溶性且非水溶性的甘草提取物和有效量的至少一种（优选一种）抗肿瘤或降糖降脂药物。优选本发明第四方面的方法中，所述醇溶性且非水溶性的甘草提取物如本发明第一方面所优选的。优选本发明第四方面的方法中，所述抗肿瘤或降糖降脂药物如本发明第一方面所优选的。优选本发明第四方面的方法中，剂量如本发明第三方面所优选的。在第五方面，本发明提供了醇溶性且非水溶性的甘草提取物的制备方法，其包括：

( 1 ) 水浸提甘草后，保留固体部分；

( 2)用高浓度（浓度大于 85% (V/V)，优选大于 90% (V/V)，更优选大于 93% ( (V/V))，如 95% (V/V)) 醇浸提步骤（1 ) 得到的固体部分，保留液体部分并加以干燥；

( 3) 任选进一步提取查尔酮 A，如用用高速逆流色谱法提取查尔酮 A。

优选上述方法由下列步骤组成；

( 1 ) 水浸提甘草后，保留固体部分；

发明详述

本发明的提供了醇溶性且非水溶性的甘草提取物，其可以单独使用，也可以与抗肿瘤或降糖降脂药物联合使用。该甘草提取物可以通过包括如下步骤的方法制备：

( 1 ) 用水浸提甘草后，保留固体部分； ( 2 )用高浓度（浓度大于 85% (V/V)，优选大于 90% (V/V)，更优选大于 93% ( (V/V))，如 95% (V/V) ) 醇浸提步骤（1 ) 得到的固体部分，保留液体部分并加以干燥。优选其中还包括进一步提取查尔酮 A的步骤。其中，保留固体或液体部分的手段是公知的，如通过过滤或其它固液分离的手段。如果需要保留固体，为了进一步分离掉固体上残留的液体，还可以进行干燥。其中，醇可以是甲醇、乙醇等，但最优选为乙醇。这样进一步保证了产物的安全性。其中，用水浸提的步骤可以重复多次，如 1-5次；用醇浸提的步骤可以重复多次，如 1-5次。这样可以提高甘草提取物的醇溶性和非水溶性以及收率。优选上述方法包括：粉碎甘草全草，向其加入水浸没，于 65-95°C水浴 1-15小时；然后，过滤保留甘草渣固体，对其用水洗涤后，以 20-65°C干燥 1-48小时；取干燥后的甘草渣固体加入 95% (V/V) 乙醇，加热（如， 65-95°C ) 回流 0. 5-8小时，然后滤出液体，干燥去除液体，得甘草提取物。

优选上述方法还可以进一步包括提取查尔酮 A 的步骤，如可以根据 Qiao-E. Wang 等（Journal of Chromatography A， 1048 (2004) 51 - 57 )报道的高速逆流色谱法（HSCCC) 来分离甘草查耳酮 A, 所用的溶剂系统为： n-hexane - chloroform - methanol - water。在本发明的具体实施方式中，这样的方法适用于乌拉尔甘草，也适用于胀果甘草。本发明的醇溶性且非水溶性的甘草提取物可以不含查尔酮 A，也可以含查尔酮 A，优选含查尔酮 A。在本发明的具体实施方式中，本发明的醇溶性且非水溶性的甘草提取物都能在与抗肿瘤或降糖降脂药物联用时起协同增效的作用。优选本发明的醇溶性且非水溶性的甘草提取物中甘草黄酮含量大于 15%，如 20%，其中可以含查尔酮 A，也可以不含查尔酮 A; 或者，醇溶性且非水溶性的甘草提取物中查尔酮 A含量大于 5%，优选大于 10%，如 15%。这可以作为质量指标，进一步稳定其药效。本发明的醇溶性且非水溶性的甘草提取物可以用于药用，如用于抗癌、降血脂、或降血糖等。在本文中，术语"药物"不但包括本领域常规理解的药品，还包括能起药用效果的保健品和食品。本发明的醇溶性且非水溶性的甘草提取物可以通过与药学上可接受的辅剂混合，而配制成药物制剂。在本文中，术语 "药学上可接受的辅剂"包括药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂等，它们与活性成分相容。运用药学上可接受的辅剂制备药物制剂对本领域普通技术人员来说是公知的。本发明的药物制剂包含一种或多种本发明第一个方面所述的药物组合物作为活性成分，将该药物组合物和药学上可接受的辅剂（如本领域普通技术人员所熟知的载体、赋形剂、稀释剂等）组合在一起，配制成各种制剂，优选为固体制剂和液体制剂。本发明的制剂可以为单位剂量形式，如片剂、丸剂、胶囊 (包括持续释放或延迟释释放形式）、粉剂、混悬剂、颗粒剂、酊剂、糖浆剂、乳液剂、悬浮液、针剂等剂型以及各种缓释剂型，从而适合各种给药形式，例如口服、非肠道注射、粘膜、肌肉、静脉内、皮下、眼内、皮内或经过皮肤等的给药形式。其中载体、赋形剂、稀释剂是药学上可接受的并与活性成分相容。特别地，本发明的醇溶性且非水溶性的甘草提取物由于水溶性不佳，干燥后不易分散，因此优选可以包括在制剂配制过程中加入的分散剂，如纳米化分散剂，如纳米淀粉、纳米糊精、纳米 Si0₂、纳米 CaC0₃、纳米 Ti0₂、纳米氧化锌、纳米铟、纳米银、纳米氢氧化铝、纳米氧化铁、纳米氯化铁、纳米碳、纳米硒、纳米氧化铝、纳米氧化镁。也可优选制剂配制过程中通过其它物理法（如，机械破碎）分散成制剂颗粒。其他合适的辅剂包括聚乙二醇类、聚维酮类水溶性载体，如 PEG2000-20000 或 PVP K15-K90或 PVA或 PVP-PVA或 CPD等。这样的辅剂能与本发明药物组合物中的活性成分形成空隙固溶体，用以进一步提高药物溶出速率和生物利用度。本发明提供了醇溶性且非水溶性的甘草提取物和至少一种（优选一种）抗肿瘤或降糖降脂药物联合作为全部药物活性成分在制备抗肿瘤或降糖降脂药品中的应用。术语 "联合 "表明醇溶性且非水溶性的甘草提取物和抗肿瘤或降糖降脂药物可以被配制在同一个药物剂型中；也可以配制在不同的药物剂型中，但是不同的药物剂型需要通过组合的包装包括在同一个药品中同时、顺序或依次使用，例如，含醇溶性且非水溶性的甘草提取物的药物剂型可以是口服制剂，而含抗肿瘤或降糖降脂药物（如， 5-氟尿嘧啶）的药物剂型可以是注射制剂，这两种药物制剂包括在同一个抗肿瘤或降糖降脂药品包装中，联合使用。为了体现出协同增效的优势，与本发明的醇溶性且非水溶性的甘草提取物联合使用的抗肿瘤或降糖降脂药物优选是本身毒副作用较大或者疗效较弱甚至容易产生抗药性的药物，在本发明的具体实施方式中，抗肿瘤或降糖降脂的药物可以是 5-氟尿嘧啶、吲哚二甲烷或其衍生物（如，吲哚三甲醇）、顺铂、和 /或枸杞。 5-氟尿嘧啶和顺铂单独使用时副作用较大，且临床上常产生抗药性；吲哚三甲醇及其衍生物吲哚二甲烷虽有一定的抗癌效果，但大剂量使用才能表现临床效果，而大剂量长期使用可产生副作用；枸杞通常作为一种药食同用的中药，常用量的降血糖、降血脂、抗癌等效果难以在临床上达到满意。

在本文中，本发明提供了抗肿瘤或降糖降脂的方法，其包括向个体给药有效量的醇溶性且非水溶性的甘草提取物和有效量的至少一种（优选一种）抗肿瘤或降糖降脂药物在本文中，个体指的是需要接受治疗的哺乳动物，优选是人。在本发明的一些具体实施方式中，肿瘤选自结肠癌、宫颈内膜癌、乳腺癌、前列腺癌，和胃癌。给药的剂量（有效量）和形式一般由医师根据患者的具体情况（如年龄、体重、性别、患病时间、身体状况等）确定。一般而言，以药物组合物中的本发明醇溶性且非水溶性的甘草提取物计，给药的剂量为广 1000mg/kg患者体重，优选为 l(Tl00mg/kg。需要特别指出的是，尽管在本发明的具体实施方式中给出了一定的给药剂量，但是本发明所涵盖的剂量并不受此限制，由于患者具体情况会发生变化，因此给药的剂量也会发生变化，选取合适的量是在临床医师的能力范围内的。给药形式根据药物组合物的剂型来确定，适合的给药形式有口服、非肠道注射、粘膜、肌肉、静脉内、皮下、眼内、皮内或经过皮肤等给药形式，优选口服的给药形式。在本发明的一个具体实施方式中，通过人体试验直接给出了优选的人用剂量。在本发明的另一个具体实施方式中，通过试验动物（鼠）试验给出了优选的剂量，根据人与试验动物的等效剂量关系，也可以换算出人用剂量。本发明引用了现有公开文献，这些文献是为了更清楚地描述本发明，它们的全文内容均纳入本文之中，就好像它们的全文已经在本文中重复叙述过一样。

为了便于理解，以下将通过具体的实施例对本发明进行描述。需要特别指出的是，这些描述仅仅是示例性的描述，并不构成对本发明范围的限制。利用本发明实施例所述的方法，也可以获得本发明其他的技术方案。依据本说明书的论述，本发明的许多变化、改变对所属领域技术人员来说都是显而易见了。具体实施方式

具体实施例中的植物原料和化学试剂均为从市场渠道购买的常规材料。

实施例 1 实验药物的制备

( 1 ) 甘草提取物 G007的制备

取乌拉尔甘草 Glycyrrhiza uralemis Fisch) 全草 100g，粉碎，向其加入水 800ml 浸没，于 85 °C水浴 7小时。然后，过滤保留甘草渣（固体），对其用 60 °C温水洗涤 3次，其中每次洗涤时用水 800ml浸泡甘草渣 5分钟后过滤去除水。将洗涤过的甘草渣置于烘箱中以 60 °C干燥 17小时。取干燥后的甘草渣加入 95% ( V/V) 乙醇 500ml，于 85 °C水浴回流 2. 5小时，然后滤出液体，旋转蒸发，浓缩，并置于烘箱中以 60 °C干燥 20小时，得甘草提取物 4. 5克，被命名为 G007。

( 2 ) 甘草提取物 ZG007的制备

基本与 G007的制备相同：取胀果甘草 Glycyrrhiza inflata Batalir ) 全草 100g，粉碎，向其加入水 800ml浸没，于 85 °C水浴 7小时。然后，过滤保留甘草渣（固体），对其用 60 °C温水洗涤 3次，其中每次洗涤时用水 800ml浸泡甘草渣 5分钟后过滤去除水。将洗涤过的甘草渣置于烘箱中以 60 °C干燥 17小时。取干燥后的甘草渣加入 95% ( V/V) 乙醇 500ml，于851水浴回流2. 5小时，然后滤出液体，旋转蒸发，浓缩，并置于烘箱中以 60°C干燥 20小时，得甘草提取物 5. 3克，被命名为 ZG007。

(3) 查尔酮 A的制备取上述步骤（2)制备的 ZG007, 根据 Qiao-E. Wang等（Journal of Chromatography A, 1048 (2004)： 51 - 57)报道的方法，利用高速逆流色谱法 (HSCCC)从 7000mg ZG007 中分离得到 800mg 甘草查耳酮 A (99%) ，所用的溶剂系统为： n-hexane - chloroform - methanol - water。

(4) AG007-16的制备

将 84克上述步骤（1 )制备的 G007与 16克上述步骤（3)制备的查尔酮 A溶入 95% (V/V) 乙醇，混合均匀后干燥除去乙醇制得。

通过 HPLC对各成分峰的计算，各甘草提取物中所含的指标成份（总黄酮、查尔酮 A) 占提取物的重量百分比如表 I所示：

表 I 各甘草提取物的指标成份含量

(5) A枸杞粉的制备

将 20g 枸杞子生药粉碎成粉末后，与上述步骤（3) 制备的或其它来源的查尔酮 A lOOmg 混合均匀制得。

(6) G007枸杞粉的制备

将 20g 枸杞子生药粉碎成粉末后，与 0. 625克上述步骤（1 ) 制备的 G007混合均匀制得。

( 7) 其他药物及编号

HBD09 为 99%化学纯吲哚二甲烷；

顺铂（cisplantin) ，纯度为 99%;

I3C为 99%化学纯吲哚三甲醇。

以上药物均直接购买。

(8) HBD09A的制备

6克 HBD09与 2克上述步骤（3) 制备的或其它来源的查尔酮 A充分混匀制得。实施例 2 实施例 1中各药物抑制肿瘤细胞生长的药效研究

一，实验方法

1，体外杀伤 Colon38细胞实验来源：

Colon38细胞，是小鼠结肠癌细胞，购自 D印 t. of Pharmacology, Yale Medical School, 为贴壁细胞。

培养基：

90% 1640培养液 + 10%新生牛血清（NCS) ，共 100ml, 加入 lml 1%青霉素 1%链霉素混合液。

培养条件：

在 5% C0₂ 的 37°C培养箱中培养。每 3天传代一次， 2-3 次传代后细胞进入对数生长期的时候开始试验。

实验步骤：

(1) 取对数生长期培养细胞，吹散均匀，制备单细胞悬液；

(2) 以含 10%FBS 的 RPMI1640 培养液调整细胞浓度为 2 X 10⁵/mL，于 96 孔细胞培养板接种，每孔 100 L，置于 37°C、 5%C0₂ 培养箱培养 24h;

(3) 将实施例 1中各药物分别稀释至浓度为： I g/ml、 3 g/ml、 9 g/ml、 27 g/ml、 8l g/ml。

(4) 24h后分组加药；

(5) 继续培养 72小时；

(6) 用 PBS洗板，每孔加入 20ul MTS溶液并加 lOOul 10%FBS 的 RPMI1640, 继续培养 2小时；

(7)用酶标仪 A570nm比色，测定 0D值，将给药孔与对照孔 0D 值比较，计算 50%抑制浓度（IC50) 和 /或 80%抑制浓度（IC80)。

2，体外杀伤 SGC-7901细胞实验

来源：

SGC-7901细胞，是人胃癌细胞，购自中国科学院细胞库 /中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，为贴壁细胞。

培养基：

培养条件：

在 5%C0₂ 的 37°C培养箱中培养。每 3天传代一次， 2-3 次传代后细胞进入对数生长期的时候开始试验。

实验步骤：

(1) 取对数生长期培养细胞，吹散均匀，制备单细胞悬液；

( 3) 将实施例 1中各药物分别稀释至浓度为： g/ml、 3 g/ml、 9 g/ml、 274g/ml、

8l g/ml。

(4) 24h后分组加药；

( 5) 继续培养 72小时；

(6) 用 PBS洗板，每孔加入 20ulMTS溶液并加 100ul l0%FBS 的 RPMI 1640，继续培养 2 小时；

( 7)用酶标仪 A570nm比色，测定 0D值，给药孔与对照孔 0D 值比较，计算 50%抑制浓度（IC50) 和 /或 80%抑制浓度（IC80)。

3，体外杀伤 MCF-7细胞实验

来源：

MCF-7细胞，是人乳腺癌细胞，由美国 ATCC购得，为贴壁细胞。

培养基：

90% 1640培养液 + 10%小牛血清 +30mmol/L Hepes+64g/ml胰岛素。

培养条件和实验步骤均与上述方法 1相同。

4，体外杀伤 PC-3细胞实验

来源：

PC-3细胞，是前列腺癌细胞，为贴壁细胞，由美国 ATCC购得。

培养基、培养条件和实验歩骤均与上述方法 1相同。二，实验结果

是研究过如以下表 II所示，各甘草提取物对肿瘤细胞均具有较强的肿瘤抑制效果，抑制能力虽然弱于顺铂，但是均强于 I3C。

表 II 甘草提取物对肿瘤细胞的抑制效果

实施例 3 实施例 1中各药物联用抑制肿瘤细胞生长的药效研究

两种药物联用产生的协同作用采用 Chou 和 Talalay (Chou TC， Talalay P. Adv. Enzyme regul. 1984 ; 22 : 27-55 )发表的公式所计算的 combination Index (CI)值来表示。 CK1时表示相互协同增效， CI=1表示效果简单叠加， CI>1时表示相互对冲减效。

根据实施例 2所用细胞及实验方法，不同点在于给药浓度有如下方式确定：当两种药物联用时，选用其中一种药物接近而小于 IC50的浓度，而选用另一种药物以梯度稀释的浓度，进行一系列实验，当检测得到 50%肿瘤细胞被抑制时，将当时的各药物浓度记为各自的 IC50值，用上述文献的公式计算这两种药物的 CI值。

结果如表 III所示，查尔酮 A对不含查尔酮 A的甘草黄酮提取物 G007、吲哚三甲醇及其衍生物二吲哚甲烷均有协同增效作用。 AG007-16或 ZG007-16对吲哚三甲醇及其衍生物二吲哚甲烷均有协同增效作用。令人惊讶的是，不含查尔酮 A的甘草黄酮提取物 G007也对吲哚三甲醇及其衍生物二吲哚甲烷和常用的抗癌化药顺铂都有协同增效作用。由此可见，查尔酮 A及含和不含查尔酮 A的甘草提取物（如 G007、 ZG007 )对吲哚三甲醇及其衍生物、顺铂等抗癌化药均有协同增效作用。另外，查尔酮 A与不含查尔酮 A的甘草提取物 G007联用，也有协同增效作用，这表明，混合提取含有查尔酮 A 和不含查尔酮 A的甘草以获得甘草提取物，或者将含有查尔酮 A和不含查尔酮 A的不同甘草提取物提取后再混合，是更优选的。表 I I I 药物联用对肿瘤细胞的抑制效果

查尔酮 A + G007 2. 1 (查尔酮 A) 11. 0 (G007 ) 0. 86 查尔酮 A + HBD09 1. 97 (查尔酮 A) 9 (HBD09 ) 0. 68 查尔酮 A + I3C

5. 7 (查尔酮 A) 9 (I3C) 0. 74

AG007-16 + HBD09 5. 6 (AG007-16 ) 9 (HBD09 ) 0. 88

HBD09 + G007 9 (HBD09 ) 7. 57 (G007 ) 0. 89

I3C + G007

6. 8 (I3C) 9 (G007) 0. 78

G007 +顺铂 9 (G007 ) 1. 1 (顺铂） 0. 77 药物 \细胞 SGC-7901 CI

IC 50 ( g /ml ) 查尔酮 A + HBD09 1. 82 (查尔酮 A) 9 (HBD09 ) 0. 73

G007 + HBD09 5. 15 (G007 ) 9 (HBD09 ) 0. 57

G007 +顺铂 9 (G007 ) 2. 6 (顺铂） 0. 63

实施例 4 实施例 1中各药物对高血糖病人餐后血糖控制的药效临床观察。

胰岛素不敏感的 2型糖尿病人的餐后血糖是糖代谢异常的重要指标，可用于检测药物降糖的效果。根据国家食品药品管理局的临床实验标准执行，对不同组的病人（年龄在 45-56岁，三人一组，其空腹血糖 7. 5mM/L以上，餐后 10mM/L以上）分别口服给药实施例 1制备的查尔酮 A， G007, AG007-16, A枸杞粉， G007枸杞粉，枸杞粉，和黄豆粉（作为阴性对照），每次餐前分别给药 56 mg， 350mg, 350mg, 15克， 15克， 15 克， 15克。病人进食 300克水煮玉米后 2小时，化验血糖，结果如下表 IV所示。结果表明，查尔酮 A， G007, AG007-16, A枸杞粉， G007枸杞粉，枸杞粉对血糖高病人餐后血糖均有显著的控制作用，明显超过普通食品（黄豆）的效果，其中 A枸杞粉和 G007枸杞粉等联用药物的效果最好。用药 /不用药的餐前 /后血糖比较

G007 枸 10-10 F 65 7. 5 11. 9 7. 3 6. 1 杞粉 10-11 M 59 8. 2 13. 5 8. 4 5. 2.

10-12 F 65 7. 8 11. 8 7. 5 6. 8 平均 12. 4 6. 0 降糖比率 52% 枸杞粉 10-10 F 65 7. 7 13. 8 7. 5 8. 0

10-11 M 59 8. 2 12. 5 8. 1 8. 5

10-12 F 65 7. 9 11. 8 8. 0 8. 9 平均 12. 7 8. 5 降糖比率 33% 黄豆粉 10-10 F 65 7. 8 12. 5 7. 5 11. 6

10-11 M 59 8. 4 11. 9 8. 3 10. 8

10-12 F 65 8. 1 12. 5 8. 5 12. 6 平均 12. 3 11. 7 降糖比率 5%

实施例 5 实施例 1中各药物对高血脂高血糖（即 "双高"）病人的药效临床观察

根据国家食品药品管理局的临床实验标准执行，对不同组的病人（年龄在 45-56岁，十人一组，男女各半，其空腹血糖 7. 5mM/L以上，血清胆固醇 300mg/100ml以上）分别口服给药枸杞粉， A枸杞粉，和 G007枸杞粉，各 15g，每日早餐前一次，进行四周。四周后抽血化验血糖、血脂，结果如下表 V所示。

结果表明，作为联用药物的 A枸杞粉和 G007枸杞粉对 "双高"病人的血糖平均降低约 30%，血清胆固醇平均降低约 45%，远远优于对照枸杞粉降血糖不到 15%、降血脂不到 5%的效果。用药前后的空腹血糖、血脂比较

实施例 6 药组合物与化疗药物联用时对动物模型的抗肿瘤效果根据《中药药理研究方法学》（中国中医药出版社)所述的方法，检测实施例 1所制备的查尔酮 A，G007， AG007-16等药物与化疗药物（5-氟尿嘧啶）及 HBD09对人癌异种移植瘤动物模型的抗肿瘤效果。 5-氟尿嘧啶（简称 fu) 是广谱抗瘤药，主要用于治疗消化道肿瘤，常见不良反应有恶心、食欲减退或呕吐，腹部不适或腹泻。试验方法简而言之，用人结肠癌细胞株 _C0l₀n38接种在体重 18-23克重的小鼠皮下，接种约 14天后，对每组动物分别灌胃单独给药实施例 1制备的查尔酮 A， G007, AG007-16, ZG007-16, HBD09, A枸杞粉等药物，或者在灌胃给药 0. 5_1小时后，腹腔内注射给药 5-氟尿嘧啶（fu) 等化疗药物；阴性对照组（CK) 给药生理盐水，阳性对照组（CK1 ) 给药 fu。给药剂量如为表 VI所示；每周灌胃和 /或注射给药 1次，共进行 4次。四周后的结果如表 VI所示，其中用死亡的动物数（死亡数）表示给药所引起的副作用。结果表明，尽管查尔酮 A， G007, AG007-16等药物的抑制肿瘤的效果不如 5-氟尿嘧啶，但是当与 5-氟尿嘧啶联用时，查尔酮 A，G007， AG007-16等甘草提取物都能降低 5- 氟尿嘧啶给药所引起的副作用，而且查尔酮 A，G007， AG007-16等甘草提取物还都能协同增强抑制肿瘤的效果。更令人惊讶的是， A枸杞粉这一可以作为食品或保健品使用的克服制剂，其抑瘤效果非常好。表 VI 肿瘤生长抑制效果

*抑瘤率（％) = ( CK组平均瘤重一实验组平均瘤重） /CK平均瘤重 Χ 100%

Claims

权利要求书

1.协同增效的药物组合物，其包含醇溶性且非水溶性的甘草提取物，和至少一种抗肿瘤或降糖降脂药物，优选其由醇溶性且非水溶性的甘草提取物和一种抗肿瘤或降糖降脂药物组成。

2.权利要求 1所述的药物组合物，其中甘草是乌拉尔甘草或胀果甘草或它们的混合物，优选是它们的混合物，更优选混合物中胀果甘草的比例不低于 5%。

3.权利要求 1或 2所述的药物组合物，其中醇溶性且非水溶性的甘草提取物通过包括如下步骤的方法制备：

( 1 ) 用水浸提甘草后，保留固体部分；

( 2 )用高浓度（浓度大于 85% (V/V)，优选大于 90% (V/V)，更优选大于 93% ( (V/V))，如 95% (V/V) ) 醇浸提步骤（1 ) 得到的固体部分，保留液体部分并加以干燥。

4.权利要求 3所述的药物组合物，其中所述方法还包括进一步提取查尔酮 A的步骤。

5.权利要求 1或 2所述的药物组合物，其中醇溶性且非水溶性的甘草提取物中甘草黄酮含量大于 15%，或者查尔酮 A含量大于 5%。

6.权利要求 1所述的药物组合物，其中抗肿瘤或降糖降脂药物选自 5-氟尿嘧啶、吲哚二甲烷或其衍生物（如，吲哚三甲醇）、顺铂、和枸杞中的一种或多种。

7.抗肿瘤或降糖降脂的药物制剂，其包括权利要求 1-6之任一所述的药物组合物和药学上可接受的辅剂，优选其中权利要求 1-6之任一所述的药物组合物的剂量是安全且有效的。

8.醇溶性且非水溶性的甘草提取物和至少一种（优选一种）抗肿瘤或降糖降脂药物联合作为全部药物活性成分在制备抗肿瘤或降糖降脂药品中的应用，优选其中所述醇溶性且非水溶性的甘草提取物如权利要求 2-5之任一所定义，也优选其中所述抗肿瘤或降糖降脂药物如权利要求 6所定义。

9.抗肿瘤或降糖降脂的方法，其包括向个体给药有效量的醇溶性且非水溶性的甘草提取物和有效量的至少一种（优选一种）抗肿瘤或降糖降脂药物，优选其中所述醇溶性且非水溶性的甘草提取物如权利要求 2-5之任一所定义，也优选其中所述抗肿瘤或降糖降脂药物如权利要求 6所定义。

10.醇溶性且非水溶性的甘草提取物的制备方法，其包括：

(1) 水浸提甘草后，保留固体部分；

(2)用高浓度（浓度大于 85%(V/V)，优选大于 90%(V/V)，更优选大于 93%((V/V))，如 95% (V/V)) 醇浸提步骤（1) 得到的固体部分，保留液体部分并加以干燥；

(3) 任选进一步提取查尔酮 A，如用用高速逆流色谱法提取查尔酮 A。