CN101099753A - 救必应总皂苷的制备方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及治疗冠心病，心绞痛，中风，脑梗死等心脑血管系统疾病的救必应总皂苷、含救必应总皂苷的药物组合物及其提取分离方法；救必应用乙醇提取，提取物加水，离心，上清液浓缩，离心，沉淀物水洗，干燥，制得的救必应总皂苷含量可达50％以上；将救必应总皂苷和口服制剂辅料或注射剂辅料混合，可制得各种口服制剂和注射剂。

Description

救必应总皂苷的制备方法及应用
技术领域
本发明涉及一种治疗心脑血管系统疾病的药物和保健食品及其制备方法，具体地说是中药救必应的有效部位救必应总皂苷、含救必应总皂苷的药物和保健食品的组合物及其相应的制备方法。
背景技术
救必应为冬青科植物冬青科冬青属植物铁冬青Ilex rotunda Thunb.的树皮，主产于广西、广东省，具有清热解毒，消肿止痛等功效。用于感冒，扁桃体炎，咽喉肿痛，急性胃肠炎，风湿骨痛；外用治跌打损伤，痈疖疮疡，外伤出血，烧烫伤。化学成分主要含三萜皂苷、黄酮苷、酚类、鞣质等，其皂苷类成分含量较高，约为7-8％。文东旭等[1](中草药，1991；22(6)，246-248)从中分离出皂苷类成分铁冬青酸、具栖冬青苷、铁冬青酸异丙叉酮缩醇、3-乙酰齐墩果酸等。近年来，文献[2，3](中药药理与临床，1998；14(4)，22-24、中药材，1 997；20(6)，303-305)报道救必应醇提取物具有抗心律失常和保护缺血缺氧心肌作用。但由于救必应醇提物属粗制剂，现有技术尚不清楚其确切的有效部位。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：研制治疗心律失常、心肌缺血、脑缺血等心脑血管系统疾病的有效部位救必应总皂苷，以及含救必应总皂苷的药物组合物。本发明还包括一种适合大批量工业化生产的救必应总皂苷制备方法。
一种治疗心脑血管系统疾病的救必应总皂苷，可用下述方法制备：
取救必应粗粉，用乙醇回流提取，合并提取液，浓缩至浸膏状，加水，加热，搅拌，静置过夜，离心，上清液浓缩，放冷至室温，离心，沉淀物用适量水洗，干燥得总皂苷。
所述的救必应总皂苷，其制备方法为：取救必应粗粉，用2-10倍的50-95％乙醇回流提取三次，每次1-3小时，合并提取液，浓缩至浸膏状，加3-10倍的水，加热，搅拌，静置过夜，离心，上清液浓缩至1/2-2倍体积，放冷至室温，离心，沉淀物用适量水洗三次，干燥得总皂苷。
上述救必应总皂苷制备方法，其特征在于：用2-10倍的50-95％乙醇回流提取，提取液，浓缩至浸膏，加水，离心，上清液浓缩，离心，得沉淀物。救必应总皂苷原料药中总皂苷含量大于50％。
用于治疗心脑血管系统疾病的药物组合物，其中含有治疗有效量的前述任一项的救必应总皂苷和药学上可接受的载体。
所述的药物组合物，其特征在于：基本上由救必应总皂苷和口服制剂辅料和注射剂辅料组成；是滴丸剂、口服液、注射液、滴注剂、冻干粉、微囊剂、胶囊剂、片剂或各种缓释或速释片剂。
前述药物组合物的制备方法，可用如下步骤制得：
取聚乙二醇6000和/或聚乙二醇4000于90-100℃，混合熔融，加入救必应总皂苷混合，常规制成滴丸。其特征在于：按重量比计，取聚乙二醇6000和/或聚乙二醇40001-4份，于90-100℃混合熔融后，加入救必应总皂苷原料1-2份混合，常规制成滴丸。
前述药物组合物的制备方法，可用如下步骤制得：
取救必应总皂苷，加入5-25％聚乙二醇溶液，水浴加热使溶解，放冷，用5-25％聚乙二醇(400)溶液稀释，配成注射液。其特征在于：取救必应总皂苷240mg，加入5-25％聚乙二醇溶液500ml稀释，与80℃水浴加热使溶解，放冷，过滤，加入5-25％聚乙二醇(400)溶液，配成2000ml注射液。
为了更好的理解本发明的实质，下面将用救必应总皂苷的药理试验及结果来说明其在制药领域中的应用。
一、小鼠急性毒性实验
1.试验方法
将适应喂养3天的20只小鼠(雌雄各半)禁食12小时，不禁水，受试物用蒸馏水配成小鼠能耐受的最大浓度，以小鼠能耐受的最大体积(0.4ml/10g)给小鼠一次灌胃，连续观察14天，记录动物的反应情况，以不产生死亡的最大剂量为最大耐受量。计算出总给药量，推算出相当于临床用量的倍数。
2.试验结果
以小鼠能耐受的最大浓度(33％)，以小鼠能耐受的最大体积(0.4ml/10g)给小鼠2次/1日灌胃，连续观察14天，结果无一例死亡。
小鼠一次灌胃给予救必应总皂苷的最大耐受量为13.2g/kg(相当于生药量660g/kg)，为拟用临床剂量10mg/kg的1320倍。
二、大鼠长期毒性试验
1.方法大鼠灌胃给予救必应总皂苷600mg/kg、300mg/kg、150mg/kg(相当于临床人用剂量的60倍、30倍、15倍)，每天给药一次，每周给药6天，连续给药13周，对照组给予同体积溶媒(20ml/kg)。结果各给药组大鼠给药期间粪便呈灰褐色，毛色光泽正常。血液学、血清生化学检查显示各剂量组同对照组比较无差异。大剂量(600mg/kg)为临床人用量的60倍。
2.结果
2.1对血液学指标的影响(表1)
大鼠口服给予救必应总皂苷，各组动物血液学指标(Hb，RBC，Ret，PT，TT，PLT)检查均在正常范围内，与对照组比较无差异。
2.2对血清各生化指标的影响(表2)
所测血清生化指标(包括AST，ALT，ALP，TP，ALB，BUN，T·CHO，GLU，Crea，T·BIL，TG，CK，NA，CL，K)，各组动物指标均在正常范围内，与对照组比较无差异。
表1-1救必应总皂苷给药期对雄性大鼠血液学指标的影响(X±SD)
Figure A20061001698900061
各组与空白组比较均无差异
表1-2救必应总皂苷给药期对雌性大鼠血液学指标的影响(X±SD)
Figure A20061001698900071
各组与空白组比较均无差异
表1-3救必应总皂苷恢复期对雄性大鼠血液学指标的影响(X±SD)
Figure A20061001698900081
各组与空白组比较均无差异
表1-4救必应总皂苷恢复期对雌性大鼠血液学指标的影响(X±SD)
Figure A20061001698900091
各组与空白组比较均无差异
表2-1救必应总皂苷给药期对雄性大鼠血液生化学的影响(X±SD)
Figure A20061001698900101
各组与空白组比较均无差异
表2-2救必应总皂苷给药期对雌性大鼠血液生化学的影响(X±SD)
Figure A20061001698900111
各组与空白组比较均无差异
表2-3救必应总皂苷恢复期对雄性大鼠血液生化学的影响(X±SD)
  指标组别 K NA CL ALT AST AST/ALT ALP CK TP ALB GLO A/G TBIL GLU BUN GRE TC TG
  空白组高剂量组中剂量组低剂量组    5.66±0.435.68±0.245.88±0.295.57±0.41   141.26±2.07140.12±2.01141.68±2.66139.52±1.40   100.02±1.57101.12±1.7898.62±2.3699.62±2.69   59.80±9.6556.00±12.8676.80±11.6591.20±20.44   180.60±51.04230.40±26.33296.40±70.79302.20±64.78     3.00±0.654.21±0.623.93±1.113.44±1.18   203．80±112.88124.00±64.41164.80±89.67195.00±72.10   1217.40±391.641618.60±189.721728.67±181.161789.40±194.05   64.52±6.3363.24±1.7367.48±4.9165.68±3.91   26.96±2.2123.54±6.1926.50±2.4327.44±2.54   37.56±4.2037.50±3.1340.98±5.4438.24±2.61   0.72±0.030.69±0.100.66±0.110.72±0.08   4.64±1.264.72±1.765.16±1.385.98±1.52  6.27±2.445.16±1.935.97±2.276.35±1.90   7.30±0.307.52±0.237.48±0.187.42±0.37   74.18±11.6376.98±9.9272.18±7.7771.86±16.18   1.55±0.151.45±0.161.25±0.121.20±0.45   1.06±0.261.09±0.140.84±0.331.27±0.32
各组与空白组比较均无差异
表2-4救必应总皂苷恢复期对雌性大鼠血液生化学的影响(X±SD)
各组与空白组比较均无差异
三、药效学实验
1.救必应总皂苷对心律失常的影响
1.1方法
取体重200±20克的大白鼠40只，随机分组，每组10只，雌雄各半，分为生理盐水组、救必应总皂苷大剂量组(200mg/kg)、救必应总皂苷中剂量组(100mg/kg)、救必应总皂苷小剂量组(50mg/kg)、利多卡因组(5mg/kg)。用10％水合氯醛麻醉，用心电图机描记用药前后的心电图变化。用氯化钡静脉注射(4mg/kg)诱发大鼠心律失常模型后，分别静脉注射药物或等量生理盐水，记录出现室性停搏数。结果见表3。
1.2结果
救必应总皂苷高、低剂量均能使氯化钡诱导大鼠心律失常恢复正常，与生理盐水组比较P＜0.01。
表3救必应总皂苷对大鼠心律失常的影响
药物     剂量(mg/kg)     动物数(只)     室性停搏数(只)     室性停搏率(％)
N.S救必应总皂苷救必应总皂苷救必应总皂苷利多卡因 501002005     1010101010     105221     1005020*20*10*
*与生理盐水组比较P＜0.01
2、救必应总皂苷抗心肌缺血作用
2.1方法
2.1.1犬实验性心肌缺血模型制备
取成年健康杂种犬，体重10-15kg，静脉注射3％戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉，气管插管连接呼吸机，开胸暴露心脏，分离并结扎冠状动脉前降支根部，放置心外膜电极，经生物电放大器记录于八导生理记录仪，股动脉插管经压力换能器连接于八导生理记录仪。
2.1.2实验分组
实验分5组，每组6只犬，经十二指肠分别给予蒸馏水、救必应总皂苷大剂量60mg/kg、救必应总皂苷中剂量30mg/kg、救必应总皂苷小剂量15mg/kg、阳性药地奥心血康100mg/kg，给药体积为0.5ml/kg，手术完毕记录正常值后给药，记录给药后15、30、60、90、120、180分钟的各项参数，以各时间点心外膜心电图ST段升高值的总和(∑ST)作为心肌缺血程度指标，将心外膜心电图ST段升高值超过2mv的点定为缺血点，计算总缺血点数(NST)，作为心肌缺血范围指标，同时记录HR及MBP，以血压和心率的乘积开方代表心肌耗氧量。结果见表4
2.2结果
2.2.1救必应总皂苷对犬心外膜心电图的影响
十二指肠给予救必应总皂苷，30min后使抬高的ST段明显下降，与给药前比较P＜0.05，空白对照组的ST段虽有下降，但与给药前比较无显著性差异，见表2。十二指肠给予救必应总皂苷，90min后NST明显减少，与给药前比较P＜0.05，空白对照组的NST虽有波动，但与给药前比较无显著性差异，见表5。
表4救必应总皂苷对犬心外膜心电图∑ST的影响  (单位：mv)
测定时间(min)   模型对照组   救必应总皂苷   阳性药100mg/kg
  15mg/kg   30mg/kg   60mg/kg
正常值给药前给药后15306090120180   15±8235±85230±86236±110236±100240±123250±130210±93   14±9243±70240±52205±65△200±70△192±50△190±35△198±40△   16±15250±90220±92160±95*152±50*152±40*130±30*90±22*   14±13250±60198±51176±70*150±65*126±30*120±25*100±21*   13±10232±60150±70132±41*153±51*143±70*142±75*110±85*
*与给药前比较P＜0.01  △与给药前比较P＜0.05
表5救必应总皂苷对犬心外膜心电图NST的影响
测定时间(min)   模型对照组   救必应总皂苷   阳性药100mg/kg
  15mg/kg     30mg/kg   60mg/kg
正常值给药前给药后15306090120180   1±127±328±426±427±427±528±326±4   1±126±426±525±625±724±724±824±6     1±126±524±623±423±624±5*22±5*22±4*   1±127±323±621±721±620±3*19±6*19±7*   1±128±322±425±525±5*21±7*21±7*19±8*
*与给药前比较P＜0.01
2.2.2救必应总皂苷对心肌耗氧指数的影响
给予心肌缺血的犬蒸馏水后，心肌耗氧指数增加(P＜0.05)，表明在急性心肌缺血状态下，心肌耗氧量增加，但十二指肠给予救必应总皂苷后，心肌耗氧指数增加未见增加，表明救必应总皂苷能明显抑制由于心肌缺血而造成的耗氧量的增加。见表6。
表6救必应总皂苷对心肌缺血犬心肌耗氧指数的影响
测定时间(min)   模型对照组   救必应总皂苷   阳性药100mg/kg
  15mg/kg     30mg/kg   60mg/kg
正常值给药前给药后15306090120180   125±12122±13125±8126±7127±6125±11125±6124±10   125±10124±9122±8122±10123±8124±6120±7122±5     125±12123±5120±7119±4122±6123±5124±9123±4   124±12122±6115±6114±7112±6113±13*115±11*117±7   125±10124±3119±4119±5118±5*110±7*112±7*112±8*
*与给约前比较P＜0.01
3.救必应总皂苷对大鼠局灶性脑缺血的影响
3.1方法
3.1.1模型制备
取体重220-240g大白鼠，用10％水合氯醛麻醉，分离颈内动脉，将消毒胶线插入颈内动脉，缝合切口，3h后拔出线栓，待大鼠苏醒后给药。
3.1.2动物分组和给药
取造模成功大鼠80只，随机分组，每组20只，雌雄各半，分为生理盐水组、救必应总皂苷高剂量组(200mg/kg)、救必应总皂苷低剂量组(100mg/kg)、尼莫地平组(1mg/kg)。灌胃给药，连续7d，给药结束后检测脑组织含水量及脑梗死面积。
3.2结果
3.2.1救必应总皂苷对脑组织含水量的影响
对照组手术侧脑含水量明显高于其它组(P＜0.05)，而救必应总皂苷组和尼莫地平组脑两侧含水量差异无显著性。见表7。
表7救必应总皂苷对大鼠脑组织含水量的影响
模型对照组  救必应总皂苷 尼莫地平
 15mg/kg  30mg/kg  60mg/kg
脑含水量(％) 85.5±0.50  83.5±0.20  81.3±0.20  79.0±0.40* 80.0±0.20*
*与对照组比较P＜0.05
3.2.2救必应总皂苷对脑梗死面积的影响
各组动物均出现梗死灶，但救必应总皂苷组和尼莫地平组脑梗死面积显著降低，与对照组比较有显著差异(P＜0.01)。见表8。
表8救必应总皂苷对大鼠脑梗死面积的影响
模型对照组  救必应总皂苷 尼莫地平
 15mg/kg  30mg/kg  60mg/kg
脑含水量(％) 18.2±1.52  16.2±1.52  13.2±1.21  12.0±1.01* 10.0±1.41*
*与对照组比较P＜0.01
四、结论
本研究结果表明，救必应总皂苷毒性较低，可明显减轻犬冠脉前降支导致的心肌缺血程度和范围，降低心肌耗氧指数，并能明显对抗氯化钡诱导的大鼠抗心律失常，还可减少局灶性脑缺血大鼠的脑梗死面积，提示救必应总皂苷对脑缺血及心肌缺血具有一定的保护作用，本研究为临床应用提供了理论依据。
基于以上结果可以得出本发明的优点在于：
1.本发明救必应总皂苷的制备方法，工艺简单，适合工业化生产，不需使用有毒的有机溶剂，总皂苷的提取率高。
2.本发明对救必应发掘了新的医药用途，开拓了一个新的应用领域。
3.本发明的救必应总皂苷安全无毒，药理作用强，药效好，预示着有很好的药用前景。
4.本发明的产品制备工艺简单，未见毒副作用。既可做成口服制剂如片剂、滴丸、胶囊剂等口服制剂；也可做成注射制剂如粉针剂、滴注剂等。
5.本发明的产品制成的药物可明显减轻犬冠脉前降支导致的心肌缺血程度和范围，降低心肌耗氧指数，并能明显对抗氯化钡诱导的大鼠抗心律失常，还可减少局灶性脑缺血大鼠的脑梗死面积，这些作用表明了其抗心律失常、心肌缺血、脑缺血作用显著。临床上用于预防和治疗冠心病，心绞痛以及淤血内阻之胸痹、眩晕、气短、心悸、胸闷或痛；中风、脑梗死等。
具体实施方式
以下将描述本发明的几个实施例，但本发明的内容完全不局限于此。
实施例1：取救必应粗粉2000g，用6倍的80％乙醇回流提取三次，分别提取2、1、1小时，过滤，滤液合并，浓缩至浸膏状，加水6000ml，水浴加热，搅拌，静置过夜，滤过，滤液浓缩至1000ml，放冷至室温，滤过，沉淀物用适量水洗三次，干燥得总皂苷40g，依法测定总皂苷含量85％。
实施例2：
取实施例1的方法制备的救必应总皂苷，采取本技术领域公知的输液剂制备方法，制备成救必应总皂苷氯化钠注射液和救必应总皂苷葡萄糖注射液：救必应总皂苷60mg，氯化钠2.25g，制成救必应总皂苷氯化钠注射液，其规格为500ml，静脉注射，每次1瓶，每日一次；救必应总皂苷60mg，葡萄糖12.5g，制成救必应总皂苷葡萄糖注射液，其规格为500ml，静脉注射，每次1瓶，每日一次。
实施例3：取按实施例1的方法制备的救必应总皂苷30g，加适量的注射用水，用碳酸钠调PH值至7，搅拌溶解，再加相当于救必应总皂苷10-15％量注射用的甘露醇，除菌滤过，测定含量，分装1000支，30mg/支，封口，即得。静脉注射，每次60mg，每日一次。
实施例4：
取实施例1方法制备的救必应总皂苷300g、10％羟丙甲基纤维素32ml。采取本技术领域公知的胶囊制备方法，制成1000粒胶囊，每粒含救必应总皂苷300mg。口服，每次1粒，每日2次。
实施例5：取实施例1方法制备的救必应总皂苷300g、乳糖68g、淀粉60g、滑石粉20g。采取本技术领域公知的片剂制备方法，在适宜容器中混合所有组分，制成颗粒，再加入硬脂酸镁2g，混匀，用9/32时标准凹冲压片，制成1000片，(每片含救必应总皂苷300mg)。口服，每次1片，每日2次。

Claims (9)

1.一种治疗心脑血管系统疾病的救必应总皂苷，可用下述方法制备：
取救必应粗粉，用乙醇回流提取，合并提取液，浓缩至浸膏状，加水，加热，搅拌，静置过夜，离心，上清液浓缩，放冷至室温，离心，沉淀物用适量水洗，干燥得总皂苷。
2.根据权利要求1所述的救必应总皂苷，其特征在于：取救必应粗粉，用2-10倍的50-95％乙醇回流提取三次，每次1-3小时，合并提取液，浓缩至浸膏状，加3-10倍的水，加热，搅拌，静置过夜，离心，上清液浓缩至1/2-2倍体积，放冷至室温，离心，沉淀物用适量水洗三次，干燥得总皂苷。
3..根据权利要求2所述的救必应总皂苷，其特征在于：用2-10倍的50-95％乙醇回流提取，提取液浓缩至浸膏，加水，离心，上清液浓缩，离心，得沉淀物。救必应总皂苷原料药中总皂苷含量大于50％。
4.用于治疗心脑血管系统疾病的药物组合物，为含有治疗有效量的权力要求1-3任一项的救必应总皂苷和药学上可接受的载体。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于：基本上由救必应总皂苷和口服制剂辅料和注射剂辅料组成；是滴丸剂、口服液、注射液、滴注剂、冻干粉、微囊剂、胶囊剂、片剂或各种缓释或速释片剂。
6.根据权利要求5所述的药物组合物的制备方法，用如下步骤制得：取聚乙二醇6000和/或聚乙二醇4000于90-100℃，混合熔融，加入救必应总皂苷混合，常规制成滴丸。
7.根据权利要求6所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：按重量比计，取聚乙二醇6000和/或聚乙二醇4000 1-4份，于90-100℃混合熔融后，加入救必应总皂苷原料1-2份混合，常规制成滴丸。
8.根据权利要求5所述的药物组合物的制备方法，用如下步骤制得：取救必应总皂苷，加入5-25％聚乙二醇溶液，水浴加热使溶解，放冷，用5-25％聚乙二醇(400)溶液稀释，配成注射液。
9.根据权利要求8所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：取救必应总皂苷240mg，加入5-25％聚乙二醇溶液500ml稀释，与80℃水浴加热使溶解，放冷，过滤，加入5-25％聚乙二醇(400)溶液，配成2000ml注射液。
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