CN101190253B - 瓜蒌和三七的药用组合物 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，公开了瓜蒌或其提取物与三七或其提取物的药物组合物及其制备方法，在制备治疗心脑血管疾病的药物中的应用和含有该药物组合物的制剂。按照重量组份计算，制成它所含药效成分的原料药的组成为：瓜蒌200～5000份、三七100～5000份，或者为：瓜蒌提取物4～400份、三七提取物4～250份。可制成任一临床上或药学上可接受的剂型，优选口服制剂或注射剂。本发明药物组合物中两药具有协同增效作用，共同发挥抗心肌缺血，抗血小板聚集，减小心肌梗塞面积，减慢心率等作用，比单用瓜蒌或其提取物与三七或其提取物的治疗效果大大提高。

Description

瓜蒌和三七的药用组合物 

[技术领域]

本发明涉及瓜蒌或其提取物与三七或其提取物的药物组合物及其制备方法，在制备治疗心脑血管疾病的药物中的应用和含有该药物组合物的制剂，属于医药技术领域。 

[背景技术]

心脑血管疾病包括冠心病、心绞痛、心肌梗塞、瘀血型肺心病、缺血性脑病、脑血栓、高血压、高血脂等。这些疾病的主要发病原因是动脉硬化造成管腔狭窄、管道阻塞，从而导致心脑供血不足，引起头沉、头晕、头痛、胸闷等症状，严重者可导致脑中风及心肌梗塞的发生。心脑缺血后影响能量代谢，继发乳酸堆积、钙超载、自由基损伤等多种变化。一直以来心脑血管疾病都是威胁人类健康的大敌，每年夺走1200多万人的生命，接近人口总死亡的1/4。随着我国逐渐进入老年社会，且随着经济的发展和生活方式、饮食习惯的改变，心脑血管疾病的患病率和死亡率正逐年上升，根据世界卫生组织预测，至2020年，非传染性疾病将占我国死亡原因的79％，其中心脑血管疾病将占首位。因此，如何有效防治心脑血管疾病也就引起人们的高度重视。目前，心脑血管疾病的诊断和防治是世界性研究热点，也是中医药理论和临床研究的重要内容。 

瓜蒌是葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim.或双边栝楼Trichosanthes rosthorniiHarms的干燥成熟果实。味甘、微苦，性寒，归肺、胃、大肠经。有清热涤痰、宽胸散结、润燥滑肠之功效。用于肺热咳嗽，痰浊黄稠，胸痹心痛，结胸痞满，乳痈，肺痈，肠痈肿痛，大便秘结。 

瓜蒌主要含油脂和有机酸，以栝楼酸(Trichosanic acid C₁₈H₃₃O₂)为主，其次为三萜、少量黄酮以及多种氨基酸。药理研究表明，瓜萎及其活性成分在心血管方面，具有抗心律失常、保护心肌缺血性损伤、减小心肌梗塞、抑制血小板聚集、扩张血管及增加冠脉血流量等，在心脑血管疾病方面有广阔前景。 

三七为五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根及根茎。味甘、微苦。性温。归肝、胃经。有散瘀止痛，消肿定痛之功效。用于咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外伤出血，胸腹刺痛，跌扑肿痛。传统用于止血化瘀，消肿止痛。三七提取物的主要有效成分三七总皂苷已收载入《卫生部药品标准中药成方制剂》和《国家中成药标准汇编内科心系分册》的国家标准中。《卫生部药品标准中药成方制剂》的血栓通注射液项下的三七总皂苷的质量标准中的三七总皂苷是从三七主根中提取出的，其中规定含人参皂苷R_g1(C₄₂H₇₂O₁₄) 不得少于30.0％；含人参皂苷R_b1(C₅₄H₉₂O₂₃)应不得少于20.0％。《国家中成药标准汇编内科心系分册》的注射用血塞通项下的三七总皂苷的质量标准中的三七总皂苷是从三七的芦头中提制的，其中规定含人参皂苷R_g1(C₄₂H₇₂O₁₄)应为标示量的25.0％～45.0％；含人参皂苷R_b1(C₅₄H₉₂O₂₃)应为标示量的30.0％～40.0％；含三七皂苷R₁(C₄₇H₈₀O₁₈)应为标示量的5.0％～15.0％；含三七皂苷R₁、人参皂苷R_g1及人参皂苷R_b1的总含量应不得少于65.0％。经文献检索，三七总皂苷能增加心脑血流量，改善微循环，抑制血小板聚集，降低血液粘稠度，扩张血管，降低血压，增加冠状动脉血流量，降低心肌耗氧量，被广泛用于心脑缺血性心脑血管疾病和心肌梗塞的治疗，是心脑血管疾病的常用药物。 

目前利用瓜蒌或瓜蒌提取物与三七或三七提取物的相互作用，配伍组方，制备治疗心脑血管疾病等方面的药物，尚未见报道。 

[发明内容]

为了满足临床需要，更好的治疗心脑血管疾病等，提高人民健康水平，本发明提供了瓜蒌或其提取物与三七或其提取物的药物组合物及其制备方法，在制备治疗心脑血管疾病中的应用和含有该药物组合物的制剂。 

制成本发明药物组合物所含药效组分的原料药为瓜蒌、三七。本药物组合物可以对抗脑缺血能力；可显著对抗血小板聚集作用；显著减慢心率，显著增加冠脉血流量，保护缺血心脏；显著降低心肌酶的释放量、缩小心肌梗死范围，保护缺血心肌；显著延长小鼠在常压缺氧状态下的生存时间，在治疗缺氧性心脑血管疾病及其它缺氧性疾病方面将有显著疗效。产生了意想不到的效果。 

经过发明人大量的筛选实验证明，按照重量组份计算，瓜蒌200～5000份、三七100～5000份范围内具有显著协同增效作用；优选为：瓜蒌500～3000份、三七200～2000份；进一步优选为：瓜蒌1000～1500份、三七300～1000份。 

上述药物组合物中的瓜蒌和三七可以用适宜的溶剂分别或混合经过提取加工得到其提取物，总提取物再和药用辅料混合加工制成制剂，所得总提取物的主要有效成分为甾体类化合物和皂苷类化合物。所述的溶剂是指药学上常用的溶剂，优选水或醇，提取方法可以用药学上常规的方法进行提取，如煎煮法、渗漉法、回流提取法、连续提取法等。 

上述药物组合物中的瓜蒌可以通过下述优选工艺提取制备，但不仅限于下述工艺： 

取瓜蒌药材，烘干，粉碎成粗粉，加入水回流提取二次，每次加入10倍量水，回流提取2小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃)的浓缩液，加入乙醇至含量达80％，放置过夜，取上清夜，回收乙醇至无醇味，减压浓缩至稠膏状，真空干燥，即得。 通过上述工艺制备的瓜蒌提取物得率为6～8％，甾体类化合物含量不低于10％。 

为了使本发明药物组合物达到更好的疗效，还可将上述瓜蒌提取物进一步精制：将上述瓜蒌提取物用适量水溶解后，用等量石油醚振摇提取2次，水液用等量水饱和正丁醇振摇提取3次，合并正丁醇提取液，浓缩至干，残渣加少量水使溶解，上大孔树脂柱，分别用水、15％乙醇、70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏状，喷雾干燥，即得瓜蒌精提取物。通过上述工艺制备的瓜蒌提取物得率为2～4％，甾体类化合物含量不低于30％。 

上述药物组合物中的三七可以通过下述工艺提取制备，但不仅限于下述工艺： 

取三七药材，粉碎成粗粉，加乙醇回流提取三次，每次3小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加水至适量(每1ml相当于2g原药材)，冷藏24小时，滤过，滤液加于已处理好的弱极性大孔树脂柱上，先用2倍柱体积的水洗脱，再用4～5倍的80％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并真空干燥，即得。通过上述工艺制备的三七提取物得率为4～5％，其中三七皂苷R₁不低于2.0％，人参皂苷Rg₁不低于28.0％，人参皂苷Rb₁不低于25.0％，三七总皂苷含量不低于60.0％。 

上述药物组合物中，其中的瓜蒌和三七均可由相应重量份的提取物直接投料制成，按照瓜蒌提取物相对于药材的得率为2～8％，三七提取物相对于药材的得率为4～5％分别计算，制成该药物组合物所含药效组分的原料药的组成还可以为：瓜蒌提取物4～400份、三七提取物4～250份；优选为：瓜蒌提取物10～240份、三七提取物8～100份；进一步优选为：瓜蒌提取物20～120份、三七提取物12～50份。上述药物组合物中，瓜蒌提取物中甾体类化合物的含量不低于10％，最好不低于30％；三七提取物中三七皂苷R₁不低于2.0％，人参皂苷Rg₁不低于28.0％，人参皂苷Rb₁不低于25.0％，三七总皂苷含量不低于60.0％。 

上述药物组合物中，药物组分的用量是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量在上述重量份范围内都具有较好疗效。上述组成，若以克为单位，可以制成100～10000次用量的制剂，如作为片剂，可制成100～10000片，每次服用1～10片，一天1～5次；如作为胶囊剂，可制成100～10000粒，每次服用1～10粒，一天1～5次；如作为注射剂可以制成100～10000ml，每次用量1～10ml，一天1～5次。上述组成是按重量份作为配比的，如大规模生产可以千克为单位，或者以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位。上述重量份数对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100％。 

本发明药物组合物可用于制备治疗心脑血管疾病的药物。药理药效实验研究表明，本药物组合物可用于制备治疗心脑血管疾病的药物。本药物组合物可以使缺血再灌注损伤大鼠脑组织中NO含量显著降低，ChAT含量显著升高，具有较好的对抗脑缺血能力；可显著对抗 ADP诱导的血小板聚集作用；显著减慢心率，显著增加冠脉血流量，保护缺血心脏；显著降低AST、CK-MB、LDH、CK及HBDH等心肌酶的释放量、缩小心肌梗死范围，对缺血心肌有显著保护作用；显著延长小鼠在常压缺氧状态下的生存时间，在治疗缺氧性心脑血管疾病及其它缺氧性疾病方面将有显著疗效。 

本发明药物组合物，可以与药学上可接受的辅料混合制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型，优选口服制剂或注射剂，以口服或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。 

用于口服给药时，可将其制成常规的固体制剂，包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂和口服溶液剂等。片剂系指药物与适宜的辅料混匀压制而成的圆片状或异形片状的固体制剂；片剂以口服普通片为主，另有含片、舌下片、口腔贴片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡腾片、缓释片、控释片与肠溶片等。胶囊剂系指药物或加有辅料充填于空心胶囊或密封于软质囊材中的固体制剂；胶囊剂依据其溶解与释放特性，可分为硬胶囊(通称为胶囊)、软胶囊(胶丸)、缓释胶囊、控释胶囊和肠溶胶囊。颗粒剂系指药物与适宜的辅料制成具有一定粒度的干燥颗粒状制剂；颗粒剂可分为可溶颗粒(通称为颗粒)、混悬颗粒、泡腾颗粒、肠溶颗粒、缓释颗粒和控释颗粒等。丸剂系指药物与适宜的辅料均匀混合，以适当方法制成的球状或类球状固体制剂；丸剂包括滴丸、糖丸、小丸等。口服溶液剂系指药物溶解于适宜溶剂中制成供口服的澄清液体制剂。肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、注射用水或油悬浮剂、吸入剂等。优选剂型为口服制剂如片、胶囊、软胶囊、颗粒、滴丸、口服液等。 

用于肠胃外给药时，可制成注射剂。注射剂系指药物制成的供注入体内的溶液、乳液或混悬液及供临用前配制或稀释成溶液或混悬液的粉末或浓溶液的无菌制剂，注射剂可分为注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。注射液系指药物制成的供注射入体内用的无菌溶液型注射液、乳液型注射液或混悬型注射液，可用于肌内注射、静脉注射、静脉滴注等；其规格有1ml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、100ml、200ml、250ml、500ml等，其中供静脉滴注用的大体积(一般不小于100ml)注射液也称静脉输液。注射用无菌粉末系指药物制成的供临用前用适宜的无菌溶液配制成澄清溶液或均匀混悬液的无菌粉末或无菌块状物，可用适宜的注射用溶剂配制后注射，也可用静脉输液配制后静脉滴注；无菌粉末用溶媒结晶法、喷雾干燥法或冷冻干燥法等制得。注射用浓溶液系指药物制成的供临用前稀释供静脉滴注用的无菌浓溶液。 

本发明药物组合物的优点在于： 

(1)首次提供了瓜蒌或其提取物和三七或其提取物用于制备治疗心脑血管疾病药物的组合物，并通过药理实验证实两者有协同增效的作用，优于两者单独用药。 

(2)药理药效实验研究表明，本药物组合物可用于制备治疗心脑血管疾病的药物。本药 物组合物可以使缺血再灌注损伤大鼠脑组织中NO含量显著降低，ChAT含量显著升高，具有较好的对抗脑缺血能力；可显著对抗ADP诱导的血小板聚集作用；显著减慢心率，显著增加冠脉血流量，保护缺血心脏；显著降低AST、CK-MB、LDH、CK及HBDH等心肌酶的释放量、缩小心肌梗死范围，对缺血心肌有显著保护作用；显著延长小鼠在常压缺氧状态下的生存时间，在治疗缺氧性心脑血管疾病及其它缺氧性疾病方面将有显著疗效。其结果是本技术领域的普通人员所意想不到的。 

(3)本发明药物组合物的有效成分明确、含量高，制剂稳定性好，便于控制产品质量，可以保证临床用药安全。 

(4)对瓜蒌提取物和三七提取物的质量进行控制，并提供了优选的制备工艺，简便易行，且质量较好，适用于工业化大生产。 

以下通过实验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些实验例包括本发明药物组合物的药效学实验，瓜蒌或其提取物和三七或其提取物制备而成的药物组合物以下简称GHS。以下实验例中所用的瓜蒌提取物均取自于实施例1，三七提取物均取自实施例2。 

实验1：GHS组合物对大鼠脑缺血灌注损伤的保护作用

实验动物：Wistar大鼠200只，雄性，体重250g±10g。 

供试品：瓜蒌颗粒：自制(相当于原药材2.5g)；三七颗粒：自制(相当于原药材1.5g)；GHS颗粒：自制(瓜蒌和三七原药材的不同重量配比，见表1)。 

实验方法：将大鼠随机分成20组，每组10只。假手术(SAM)组：假手术后5d处死；缺血再灌注(IR)组：缺血30min后再灌注5d处死；各给药组的药物均用生理盐水配制成混悬液，缺血30min再灌注30min后灌胃给药，一日一次，连续给予5d，末次给药2h后处死。冰上迅速取脑，置液氮中冻存待测。 

动物模型：Wistar大鼠麻醉，制备全脑缺血再灌注损伤动物模型，通过用动脉夹夹闭两侧颈总动脉控制大鼠脑缺血的再灌注时间。指标检测：乙酰胆碱(Ach)测定脑组织中Ach变化以胆碱乙酰化酶(ChAT)活性来表示，ChAT活性采用放射化学法进行，组织中蛋白质含量按Lowry法进行，单位为μmol/(h.mgPr)。 

一氧化氮(NO)测定：大鼠脑组织匀浆，4000转/min离心5min，取上清2ml加1ml醋酸钠和1ml对氨基苯磺酰胺。检测pH范围在6.25～6.35，加锌粉10～15mg，涡振15min，过滤，取上清4ml，加2.0ml显色剂，调pH至1.75～1.85，加NaCl 2.0g、正丁醇3.0ml，涡振，3000转/min离心5min，取上清，540nm处测样品吸光度。双缩脲法测样品蛋白含量，计算样品中NO含量，单位为nmol/mgPr。 

表1GHS组合物对大鼠缺血再灌注损伤的影响(x±s，n＝10) 

注：^##p＜0.01，与SAM组相比；^*p＜0.05，^**p＜0.01，与IR组相比；^ap＜0.05，与瓜蒌组相比； ^bp＜0.05，与三七组相比。 

实验结果及结论：大鼠缺血再灌注后脑组织NO、Ach含量变化，见表1。 

缺血再灌注组与假手术组相比，大鼠脑组织中NO含量升高，ChAT含量降低，且差异极显著(p＜0.01)，说明造模成功。瓜蒌组和三七组与缺血再灌注组比较，大鼠脑组织中NO含量显著降低，ChAT含量显著升高(p＜0.05)。GHS组合物各重量配比组与缺血再灌注组比较，大鼠脑组织中NO含量极显著降低，ChAT含量极显著升高(p＜0.01)，与瓜蒌或者三七相比，GHS组合物各重量配比组使大鼠脑组织中NO含量显著降低，ChAT含量显著升高(p＜0.05)。表明瓜蒌和三七配伍能使缺血再灌注损伤大鼠脑组织中NO含量降低，ChAT含量升高，具有较好的对抗脑缺血能力，具有协同增效作用。 

实验例2GHS抗血小板聚集的作用

受试动物：Wistar大鼠，雌雄各半，体重250～300克，120只。 

供试品：生理盐水：市购；瓜蒌片：自制，(相当于原药材2.5g)；三七片：自制，(含相当于原药材1.5g)；GHS片：自制(瓜蒌和三七原药材的重量配比，见表2)。 

实验方法：将大鼠随机分为20个组，每组6只。各药物分别用生理盐水配制成所需浓度供试液后灌胃给药，对照组给予等体积的生理盐水，一日一次，连续七天。大鼠血瘀模型制备：除对照组外，其余各组分别于最后一天给药1h后，皮下注射0.1％盐酸肾上腺素0.08ml/100g，共2次，两次间隔4小时，给药之间(前后各间隔2小时)，将大鼠浸入冰水5分钟，处置后停食。检测指标：停食次晨，各组分别用20％乌拉坦(1g/kg)麻醉，3.8％枸橼酸钠溶液抗凝(1∶9，V/V)，自腹主动脉取血，1000转/min，离心10min，取上清液，制备富含小板血浆(PRP)；余4000转/min，离心10min，取上清液为贫血小板血浆(PPP)。用ADP(1mg/1ml，加入16μl)为诱导剂，以比浊法在LBY-NJ血液凝聚仪测定血小板最大聚集率。血小板聚集抑制率(％)＝(模型对照组血小板最大聚集率-给药组血小板最大聚集率)/模型对照组血小板最大聚集率。 

表2 GHS抗血小板聚集的作用(x±s，n＝6) 

注：^$$p＜0.01，与生理盐水组相比；^*p＜0.05，^**p＜0.01，与模型组相比；^ap＜0.05，^aap＜0.01，与瓜蒌组相比；^bp＜0.05，与三七组相比。 

实验结果及结论：实验结果见表2。 

(1)与生理盐水对照组相比，模型组的血小板最大聚集率极显著增加(p＜0.01)，说明造模成功。(2)与模型组相比，瓜蒌组血小板最大聚集率显著减小(p＜0.05)；三七组血小板 最大聚集率显著减小(p＜0.05)；GHS各重量配比组血小板最大聚集率极显著减小(p＜0.01)。(3)与瓜蒌组相比，GHS各重量配比组血小板最大聚集率显著减小(p＜0.05)，抑制血小板聚集率极显著增大(p＜0.01)；与三七组相比，GHS各重量配比组血小板最大聚集率显著减小(p＜0.05)，抑制血小板聚集率显著增大(p＜0.05)。GHS可极显著对抗ADP诱导的血小板聚集作用，效果优于单用瓜蒌和三七，提示瓜蒌与三七配伍有协同抑制血小板聚集的作用。 

实验例3GHS对缺血心脏功能的保护作用

受试动物：比格犬70只(心电图合格)，体重12.56kg±1.67kg，雌雄各半。 

供试品：生理盐水：市购；注射用瓜蒌提取物：自制，85mg(相当于原药材2.5g)；注射用三七提取物：自制，42mg(相当于原药材1g)；注射用GHS：72mg，自制(含瓜蒌提取物51mg相当于原药材1.5g、含三七提取物21mg相当于原药材0.5g)。 

实验方法：将比格犬随机分为7个组，每组10只，见表3。除假结扎组和模型对照组给予相同量的生理盐水外，各给药组按照表3股静脉注射给药，一日一次，连续七天。 

犬心肌缺血模型制备：给药期满的各组犬静脉注射戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉固定，监测肢体II导联心电图；建立股静脉通道，0.5％肝素钠体内抗凝；分离股动脉，肝素化后股动脉插管连续监测BP；分离左侧颈总动脉，将心导管插入左心室，描测左室收缩压、左室舒张末压、左室最大变化速率曲线；分离气管并插管，行人工呼吸机正压呼吸(频率16～18次/min，吸气∶呼气比1∶1.5，潮气量350～550ml)；开胸暴露心脏，分离左冠状动脉左旋支，连接血流量计，测定冠脉血流量；分离左冠脉前降支第一分支下方2mm，除假结扎组只穿线不结扎外，其余各组均穿入两条1号丝线，一期结扎前5min，按每公斤体重2mg，静脉滴入利多卡因。第一条丝线结扎时将一根处理过直径为1mm的9号针头置于结扎线和血管之间，结扎后将针头抽出，进行血管狭窄的一期结扎，30min后，再将第二条丝线结扎，进行血流阻断的二期结扎，完成心肌缺血模型的制备。 

表3GHS对犬平均心率及冠脉血流量的影响(x±s，n＝10) 

注：^##p＜0.01，与假结扎组相比；^*p＜0.05，^**p＜0.01，与模型组相比。 

实验结果及结论：实验结果见表3。 

(1)冠脉结扎120min后，与假结扎组相比，模型组平均心率极显著加快、冠脉血流量极显著降低(p＜0.01)，说明造模成功。 

(2)与模型组相比，注射用瓜蒌提取物组和注射用三七提取物组在冠脉结扎120min后，平均心率显著减慢(p＜0.05)，冠脉血流量显著增大(p＜0.05)；注射用GHS个剂量组在冠脉结扎120min后，可以极显著减慢平均心率、增加冠脉血流量(p＜0.01)。 

注射用GHS各剂量组的效果均优于单用瓜蒌提取物和三七提取物，对缺血心脏功能有极显著的保护作用。提示丹参和桂枝配伍有协同减慢心率、增加冠脉血流量的作用。 

实验例4GHS减犬心肌缺血的作用

受试动物：比格犬42只(心电图合格)，体重12.68kg±1.87kg，雌雄各半。 

供试品：瓜蒌颗粒：自制(相当于原药材2.5g)；三七颗粒：自制(相当于原药材1.5g)；GHS颗粒：自制(含瓜蒌原药材1.5g，含三七原药材0.5g)。 

实验方法：将42只比格犬，随机分为7组，每组6只。除假结扎组和模型对照组只喂食、水外，各给药组的药物均用生理盐水配制成混悬液后灌胃给药，一日一次，连续5天。犬心肌缺血模型制备：给药期满的各组犬静脉注射戊巴比妥钠(30mg·kg^-1)麻醉固定，监测肢体II导联心电图；建立股静脉通道，0.5％肝素钠体内抗凝；分离股动脉，肝素化后股动脉插管连续监测BP；分离气管并插管，行人工呼吸机正压呼吸(频率16～18次/min，吸气∶呼气比1∶1.5，潮气量350～550ml)；开胸暴露心脏，分离左冠状动脉左旋支，连接血流量计，测定冠脉血流量；分离左冠脉前降支第一分支下方2mm，除假结扎组只穿线不结扎外，其余各组均穿入两条1号丝线，一期结扎前5min，按每公斤体重2mg，静脉滴入利多卡因。第一条丝线结扎时将一根处理过直径为1mm的9号针头置于结扎线和血管之间，结扎后将针头抽出，进行血管狭窄的一期结扎，30min后，再将第二条丝线结扎，进行血流阻断的二期结扎，完成心肌缺血模型的制备。 

心肌酶谱测定：二期结扎120min，于心室内取血3ml，测定谷草转氨酶(AST)、肌酸磷酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、羟丁酸脱氢酸酶(HBDH)、肌酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)的酶学变化。 

梗死范围测定：二期结扎后120分钟后，取心脏用冰生理盐水(4℃)冲洗并剪去心房和右室游离壁，滤纸吸干水分，称全心重后，-20℃保存。取冷冻心脏标本，沿左室长轴切成0.5-1.0em厚切片，置于1％TTC溶液中37℃孵育20min，然后用10％甲醛溶液固定。红色心肌为非缺血心肌组织，苍白色为缺血坏死心肌组织。吸干水分后用解剖刀剔除不同颜色心肌 组织，分别称重，计算心肌梗死范围。 

表4GHS对犬心肌酶的影响(x±s，n＝6) 

注：与假结扎组比^##p＜0.01；与模型比^*p＜0.05，^**p＜0.01。 

表5GHS对犬心肌梗死范围的影响(x±s，n＝6) 

注：与假结扎组比^##p＜0.01；与模型比^*p＜0.05，^**p＜0.01。 

实验结果及结论：对犬心肌酶和心肌梗死范围的影响见表4、表5。 

(1)心肌酶测定：模型组与假结扎组相比心肌酶中肌酸磷酸激酶(CK)和特异性肌酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)活性均极显著升高(p＜0.01)；说明造模成功。瓜蒌组与三七组的AST、CK-MB、LDH、CK及HBDH五项酶活性均显著或极显著低于模型组(p＜0.05，p＜0.01)；GHS各剂量的AST、CK-MB、LDH、CK及HBDH五项酶活性均极显著低于模型组(p＜0.01)，并且效果优于单用瓜蒌和三七。见表4。 

(2)梗死范围测定：与模型组相比，瓜蒌组、三七组与GHS低剂量组心肌梗塞范围均显著减小(p＜0.05)；GHS中剂量组和高剂量组心肌梗塞范围均极显著减小(p＜0.01)，效果优于单用瓜蒌和三七。见表5。 

GHS在犬冠脉左前降支结扎阻断血流后，均可显著降低心肌酶的释放量、缩小心肌梗死范围，对缺血心肌有显著保护作用。 

实验例5GHS对小鼠常压耐缺氧能力的影响

受试动物：小鼠，140只，体重20～25g，雌雄各半。 

供试品：生理盐水，市购；瓜蒌提取物颗粒：自制，178mg，相当于原药材2.5g；三七提取物颗粒：自制，63mg，相当于原药材1.5g；GHS颗粒：自制：(瓜蒌提取物与三七提取物的重量配比)见表6。 

实验方法：将小鼠随机分为7个组，每组20只。各给药组均为用生理盐水配制成混悬液后灌胃给药，空白对照组灌胃给予同体积的生理盐水，每天1次，连续5天，给药剂量见表6。末次给药1h后，分别置于经容量标定125ml的广口瓶中，瓶内置10g钠石灰以吸收CO₂和水份，瓶盖涂以凡士林密封，记录小鼠的死亡时间。 

表6GHS对小鼠常压耐缺氧能力的影响(x±s，n＝20) 

注：^*p＜0.05，^**p＜0.01，与对照组相比；^ap＜0.05，与瓜蒌组相比；^bp＜0.05，与三七组相比。 

实验结果及结论：实验结果见表6。 

与对照组相比较，在常压缺氧情况下，瓜蒌可显著延长小鼠存活时间，(p＜0.05)；三七可显著延长小鼠存活时间，(p＜0.05)；GHS各重量配比组可极显著延长小鼠的存活时间(p＜0.01)；与单用瓜蒌提取物或者三七提取物相比，GHS各重量配比组可显著延长小鼠的存活时间，(p＜0.05)。 

GHS各重量配比组中小鼠的存活时间均长于瓜蒌提取物组或者三七提取物组，提示瓜蒌和三七合并用药有协同增效作用，可显著延长小鼠在常压缺氧状态下的生存时间，在治疗缺氧性心脑血管疾病及其它缺氧性疾病方面将有显著疗效。 

[具体实施方式]

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型的辅料可以用药学上可接受的辅料代替，或者减少、增加。 

实施例1瓜蒌提取物的制备

1、瓜蒌提取物的制备方法 

瓜蒌提取物的制备： 

取瓜蒌药材，烘干，粉碎成粗粉，加入水回流提取二次，每次加入10倍量水，回流提取2小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃)的浓缩液，加入乙醇至含量 达80％，放置过夜，取上清夜，回收乙醇至无醇味，减压浓缩至稠膏状，真空干燥，即得瓜蒌粗提物。 

将上述瓜蒌提取物用适量水溶解后，用等量石油醚振摇提取2次，水液用等量水饱和正丁醇振摇提取3次，合并正丁醇提取液，浓缩至干，残渣加少量水使溶解，上大孔树脂柱，分别用水、15％乙醇、70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏状，喷雾干燥，即得瓜蒌精提物。 

2、瓜蒌提取物含量测定： 

标准曲线的制备分别精确移取人参皂苷标准品Rg1(浓度为2.2mg/ml)5、10、30、50、70、90、110于10ml具塞试管中制成系列标准溶液，水浴挥干甲醇，加0.7ml8％的香草醛冰乙酸溶液，再加人5ml高氯酸，摇匀，于60℃水浴15min，取出立刻用自来水冲至室温，以不加样品的平行样作空白，于560nm测定吸光度，以吸光度(A)对人参皂苷含量(M，单位：μm)作回归曲线，得回归方程：M＝213.13A+4.7576，R＝0.997。 

香草醛-冰乙酸试液的配制：准确称取4g香草醛，加50ml冰乙酸，置于棕色瓶中，混合摇匀至完全溶解，置于冰箱中(现配现用)。 

瓜蒌提取液的含量测定：准确移取样品溶液30μl，置于10ml具塞试管中，水浴挥干甲醇，加0.5mL 8％的香草醛冰乙酸溶液，再加人5ml高氯酸，摇匀，于60℃水浴15min，取出立刻用流动自来水迅速冷至室温，以不加样品的平行样作空白，于560nm测定吸光度A。 

按照上述方法制得的瓜蒌提取物，其中甾体类化合物含量测定结果见表7。从结果可以看出，通过本工艺制得的瓜蒌粗提物的得率为6～8％，甾体类化合物含量不低于10％；瓜蒌粗提物的得率为2～4％，甾体类化合物含量不低于30％。 

表7瓜蒌提取物的含量测定结果和得率 

实施例2三七提取物的制备

1、三七提取物的制备方法 

取三七药材，粉碎成粗粉，加乙醇回流提取三次，每次3小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加水至适量(每1ml相当于2g原药材)，冷藏24小时，滤过，滤液加于已处理好的弱极性大孔树脂柱上，先用2倍柱体积的水洗脱，再用4～5倍的80％乙醇洗脱，收集洗脱 液，回收乙醇并真空干燥，即得。 

2、三七提取物的含量测定 

照高效液相色谱法(附录VI D)测定 

色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长203nm。理论踏板数按三七皂苷R₁峰计算应不低于4000。 

对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg₁对照品、人参皂苷Rb₁对照品和三七皂苷R₁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg₁0.4mg、人参皂苷Rb₁0.4mg、三七皂苷R₁0.1mg的混合溶液，即得。 

供试品溶液的制备：取三七提取物粉末，精密称定，研细，取约0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，防置过夜，置80℃水浴上回流2小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 

测定法：分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 

按照上述工艺分别制得三批三七提取物，含量测定结果见表8。 

表8三七提取物的含量测定结果 

实施例3GHS片剂的制备

处方一： 

瓜蒌提取物        71g(相当于原药材1000g) 

三七提取物        8.4g(相当于原药材200g) 

预胶化淀粉        120g 

微晶纤维素        40g 

低取代羟丙纤维素  40g 

2％HPMC水溶液     适量 

硬脂酸镁          6g 

羧甲淀粉钠        12g 

共制备            1000片 

处方二： 

瓜蒌提取物             71g(相当于原药材1000g) 

三七提取物1            2.6g(相当于原药材300g) 

预胶化淀粉             120g 

微晶纤维素             40g 

低取代羟丙纤维素       40g 

2％HPMC水溶液          适量 

硬脂酸镁               6g 

羧甲淀粉钠             12g 

共制备                 1000片 

处方三： 

瓜蒌提取物            35.5g(相当于原药材500g) 

三七提取物            42g(相当于原药材1000g) 

预胶化淀粉            120g 

微晶纤维素            40g 

低取代羟丙纤维素      40g 

2％HPMC水溶液         适量 

硬脂酸镁              6g 

羧甲淀粉钠            12g 

共制备                1000片 

处方四： 

瓜蒌提取物            106.5g(相当于原药材1500g) 

三七提取物            8.4g(相当于原药材200g) 

预胶化淀粉            120g 

微晶纤维素            40g 

低取代羟丙纤维素      40g 

2％HPMC水溶液         适量 

硬脂酸镁              6g 

羧甲淀粉钠            12g 

共制备                1000片 

制备工艺： 

原料中的瓜蒌参照实施例1瓜蒌粗提物的制备方法，三七参照实施例2中的制备方法制成提取物。 

(1)将瓜蒌提取物和三七提取物粉碎过100目筛备用。 

(2)按照处方量称取原料和辅料。 

(3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。 

(4)将三七提取物、瓜蒌提取物、预胶化淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙纤维素混合均匀，加2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。 

(5)过20目筛制颗粒。 

(6)颗粒在60℃的条件下烘干。 

(7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀。 

(8)取样，半成品化验。 

(9)按照化验确定的片重压片。 

(10)成品全检，包装入库。 

实施例4GHS胶囊剂的制备

处方一： 

瓜蒌提取物        106.5g(相当于原药材1500g) 

三七提取物        12.6g(相当于原药材300g) 

预胶化淀粉        120g 

微晶纤维素        50g 

低取代羟丙纤维素  30g 

2％HPMC水溶液     适量 

硬脂酸镁          6g 

共制备            1000粒 

处方二： 

瓜蒌提取物        71g(相当于原药材1000g) 

三七提取物        42g(相当于原药材1000g) 

预胶化淀粉        120g 

微晶纤维素        50g 

低取代羟丙纤维素  30g 

2％HPMC水溶液     适量 

硬脂酸镁          6g 

共制备            1000粒 

处方三： 

瓜蒌提取物        35.5g(相当于原药材500g) 

三七提取物        84g(相当于原药材2000g) 

预胶化淀粉        120g 

微晶纤维素        50g 

低取代羟丙纤维素  30g 

2％HPMC水溶液     适量 

硬脂酸镁          6g 

共制备            1000粒 

处方四： 

瓜蒌提取物        106.5g(相当于原药材1500g) 

三七提取物        42g(相当于原药材1000g) 

预胶化淀粉        120g 

微晶纤维素        50g 

低取代羟丙纤维素  30g 

2％HPMC水溶液     适量 

硬脂酸镁          6g 

共制备            1000粒 

制备工艺： 

原料中的瓜蒌参照实施例1瓜蒌粗提物的制备方法，三七参照实施例2中的制备方法制成提取物。 

(1)将瓜蒌提取物和三七提取物粉碎过100目筛备用。 

(2)按照处方量称取原料和辅料。 

(3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。 

(4)将三七提取物、瓜蒌提取物、预胶化淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。 

(5)过20目筛制颗粒。 

(6)颗粒在60℃的条件下烘干。 

(7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀。 

(8)取样，半成品化验。 

(9)按照化验确定的装量装入胶囊。 

(10)成品全检，包装入库。 

实施例5GHS颗粒剂的制备

处方一： 

瓜蒌提取物            106.5g(相当于原药材1.5kg) 

三七提取物            84g(相当于原药材2kg) 

糖粉                  450g 

糊精                  200g 

甜菊素                15g 

柠檬香精              适量 

2％HPMC50％乙醇溶液   适量 

共制备                1000g 

处方二： 

瓜蒌提取物            213g(相当于原药材3000g) 

三七提取物            12.6g(相当于原药材300g) 

糖粉                  450g 

糊精                  200g 

甜菊素                15g 

柠檬香精              适量 

2％HPMC50％乙醇溶液   适量 

共制备                1000g 

处方三： 

瓜蒌提取物            213g(相当于原药材3kg) 

三七提取物            42g(相当于原药材1kg) 

糖粉                  450g 

糊精                  200g 

甜菊素                15g 

柠檬香精              适量 

2％HPMC50％乙醇溶液   适量 

共制备                1000g 

处方四： 

瓜蒌提取物            213g(相当于原药材3kg) 

三七提取物            84g(相当于原药材2kg) 

糖粉                  450g 

糊精                  200g 

甜菊素                15g 

柠檬香精              适量 

2％HPMC50％乙醇溶液   适量 

共制备                1000g 

制备工艺： 

原料中的瓜蒌参照实施例1瓜蒌粗提物的制备方法，三七参照实施例2中的制备方法制成提取物。 

(1)将蔗糖粉碎过80目筛备用；将瓜蒌提取物和三七提取物粉碎过100目筛备用。 

(2)按照处方量称取原料和辅料。 

(3)将瓜蒌提取物、三七提取物与糖粉、糊精、甜菊素以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材， 

(4)过20目筛制颗粒。 

(5)颗粒在60℃的条件下烘干。 

(6)干颗粒过18目筛整粒，喷入适量柠檬香精。 

(7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量。 

(8)包装，成品全检，包装入库。 

实施例6GHS口服液的制备

处方一： 

瓜蒌提取物        71g(相当于原药材1kg) 

三七提取物        84g(相当于原药材2kg) 

丙二醇            100ml 

苯甲酸钠          15g 

甜菊甙            10g 

纯化水            加至1000ml 

共制备            1000ml 

处方二： 

瓜蒌提取物        213g(相当于原药材3000g) 

三七提取物        8.4g(相当于原药材200g) 

丙二醇            100ml 

苯甲酸钠          15g 

甜菊甙            10g 

纯化水            加至1000ml 

共制备            1000ml 

制备工艺： 

原料中的瓜蒌参照实施例1瓜蒌粗提物的制备方法，三七参照实施例2中的制备方法制成提取物。 

(1)将瓜蒌提取物和三七提取物加入配液量50％的纯化水中加热搅拌溶解完全；再加入丙二醇搅拌溶解完全。 

(2)将苯甲酸钠和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全。 

(3)合并上述溶液，补加纯化水至全量。 

(4)过0.8μm的微孔滤膜过滤。 

(5)半成品化验。 

(6)灌装，成品全检，包装入库。 

实施例7GHS软胶囊的制备

处方： 

瓜蒌提取物        35.5g(相当于原药材500g) 

三七提取物        12.6g(相当于原药材300g) 

大豆油            100g 

大豆磷脂          8g 

蜂蜡              3g 

共制备            1000粒 

具体步骤： 

原料中的瓜蒌参照实施例1瓜蒌粗提物的制备方法，三七参照实施例2中的制备方法制成提取物。 

1)处方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蜡加热熔融，混匀，放冷； 

2)加入瓜蒌提取物和三七提取物混匀，过胶体磨； 

3)取样，半成品化验； 

4)压制成软胶囊； 

成品全检，包装入库。 

实施例8GHS滴丸的制备

处方： 

瓜蒌提取物        35.5g(相当于原药材500g) 

三七提取物        8.4g(相当于原药材200g) 

聚乙二醇6000      10g 

共制备            1000粒 

具体步骤： 

原料中的瓜蒌参照实施例1瓜蒌粗提物的制备方法，三七参照实施例2中的制备方法制成提取物。 

1)聚乙二醇6000在水浴中加热熔融； 

2)聚乙二醇6000全部熔融后加入瓜蒌提取物和三七提取物，搅拌溶解； 

3)过60目筛过滤； 

4)保持60℃滴入冷至10℃以下的液体石蜡中制成丸； 

5)成品全检，包装入库。 

实施例9GHS注射液的制备

处方一： 

瓜蒌提取物        34g(相当于原药材1000g) 

三七提取物        12.6g(相当于原药材300g) 

聚山梨酯80        50g 

注射用水          加至1000ml 

共制备            1000ml 

处方二： 

瓜蒌提取物        34g(相当于原药材1kg) 

三七提取物        42g(相当于原药材1kg) 

聚山梨酯80        50g 

注射用水          加至1000ml 

共制备            1000ml 

处方三： 

瓜蒌提取物        51g(相当于原药材1500g) 

三七提取物        12.6g(相当于原药材300g) 

聚山梨酯80        50g 

注射用水          加至1000ml 

共制备            1000ml 

处方四： 

瓜蒌提取物        51g(相当于原药材1kg) 

三七提取物        42g(相当于原药材1kg) 

聚山梨酯80        50g 

注射用水          加至1000ml 

共制备            1000ml 

具体步骤： 

原料中的瓜蒌参照实施例1中瓜蒌精提物的制备方法，三七参照实施例2中的制备方法制成提取物。 

(1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗； 

(2)将聚山梨酯80制成20％的水溶液，加入处方量的瓜蒌提取物和三七提取物，加热搅拌溶解完全； 

(3)补加注射用水至全量； 

(4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟； 

(5)经砂滤棒过滤脱炭，测定并调节溶液的pH值； 

(6)经0.45μm的微孔滤膜精滤； 

(7)检查溶液的澄明度，半成品化验； 

(8)将溶液熔封于玻璃安瓿中； 

(9)100℃流通蒸汽灭菌30分钟； 

(10)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏； 

(11)灯检，成品全检，包装入库。 

Claims (6)

1.一种用于心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于，按照重量组份计算，制成该药物组合物原料药的组成为：瓜蒌提取物4～400份、三七提取物4～250份。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，按照重量组份计算，制成该药物组合物原料药的组成为：瓜蒌提取物10～240份、三七提取物8～100份。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，按照重量组份计算，制成该药物组合物原料药的组成为：瓜蒌提取物20～120份、三七提取物12～50份。

4.根据权利要求1～3所述的任一药物组合物，其特征在于，所述的瓜蒌提取物中甾体类化合物的含量不低于10％；三七提取物中三七皂苷R₁不低于2.0％，人参皂苷Rg₁不低于28.0％，人参皂苷Rb₁不低于25.0％，三七总皂苷含量不低于60％。

5.根据权利要求1～3所述的任一药物组合物，其特征在于，该药物组合物与任一药学上可接受的辅料混合制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述的剂型为口服制剂或注射剂。