CN101011520A - 含有延龄草提取物的药物制备方法及其应用 - Google Patents

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CN101011520A CNA2007100514804A CN200710051480A CN101011520A CN 101011520 A CN101011520 A CN 101011520A CN A2007100514804 A CNA2007100514804 A CN A2007100514804A CN 200710051480 A CN200710051480 A CN 200710051480A CN 101011520 A CN101011520 A CN 101011520A
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汪鋆植
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杨进
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Abstract

本发明公开了一种含有延龄草提取物的药物制备方法及其应用。本发明通过水提取或醇提取得到延龄草的水提物或醇提物，并将提取物制成片剂或胶囊剂。通过本发明提供方法得到的延龄草药物，有效地利用了延龄草中的有效成份，对抵制肿瘤有良好的功效。

Description

含有延龄草提取物的药物制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及一种含有延龄草提取物的药物制备方法，本发明还涉及含有延龄草提取物的药物在抗肿瘤药物中的应用。
背景技术
延龄草来源于百合科植物Trillium tschonoskii Maxim的根茎，味甘，性平；有小毒，是传统的名贵中药，含有多种甾体皂苷，黄酮和萜类成分。具有镇静安神、祛风活血、延年益寿的功效。主治头晕目眩、失眠、跌打损伤、外伤出血、神经衰弱、高血压、脑震荡后遗症等疾病等，是土家族四大名药之一。利用延龄草的水提物或醇提物制备成抗肿瘤药物方面未见相关报道。
发明内容
本发明的目的是要提供一种含有延龄草提取物的药物制备方法及其在抗肿瘤药物中的应用。
本发明的目的是这样实现的：
一种含有延龄草提取物的药物制备方法，
醇提物的制备：延龄草根茎50℃干燥过夜，药物粉碎机粉碎后过60目筛，以乙醇或水为溶剂，回流提取2-4次，每次0.5-2小时，提取液过滤减压浓缩，干燥得深棕色浸膏，分别为醇提物或水提物。
以乙醇为溶剂时，回流提取控制温度在30-85℃；以水为溶剂时，回流提取控制温度在30-100℃。
取提取物(醇提物或水提物)1000份，加入辅料，压片，使每片含皂苷5-10mg，得到含有延龄草提取物的片剂药物。
制备片剂所用的辅料可以是微晶纤维素、改性淀粉、硬脂酸镁、乙基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等片剂药物常用的辅料中的一种或几种。
取提取物(醇提物或水提物)1000份，加入辅料，制粒，整粒，装胶囊，每粒胶囊中含有皂苷5-10mg，得到含有延龄草提取物的胶囊剂药物。
制备胶囊剂所用的辅料可以是微晶纤维素、改性淀粉、硬脂酸镁、乙基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等胶囊剂常用的辅料中的一种或几种。
取提取物(醇提物或水提物)1000份，加入辅料，制粒，整粒，装袋，每袋中含有皂苷5-10mg，得到含有延龄草提取物的颗粒剂药物。
制备颗粒剂所用的辅料可以是蔗糖、糊精、改性淀粉、乳糖、甘露醇、木糖醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、微晶纤维素等颗粒剂常用的辅料中的一种或几种。
延龄草提取物HPLC指纹图谱由4个特征峰组成，其中色谱条件为：色谱柱Waters PrepNova-Pak HR C-18 7.8×300mm ODS-AQ，S-5μm，120，250mm×4.6mm I.D.；流动相为乙腈-水，洗脱条件为0min～10min，15％～20％乙睛；10min～15min，20％～30％乙睛；15min～35min，30％～40％乙睛；35min～45min，40％～45％乙睛；45min～50min，45％～50％乙睛；50min～60min，50％～56％乙睛；60min～75min，56％～67％乙睛；75min～80min，67％～70％乙睛；流速为1.0ml/min；柱温为35℃；检测波长为203nm。
4个特征峰的保留时间RT值分别为：1号峰(TTB4)：17.9min±0.66；2号峰(TTB1)：42.2min±0.92；3号峰(TTB2)：42.9min±0.80；4号峰(TTB3)：44.9min±0.86。
延龄草提取物在抗肿瘤药物中的应用。
通过本发明提供方法得到的含有延龄草提取物的药物，将延龄草提取物制成片剂或胶囊剂，服用方便；所制成的含有延龄草提取物的药物，充分利用了延龄草的活性成份，具有明显的体内外抗肿瘤作用。
附图说明
图1是延龄草提取流程图。
图2是延龄草正丁醇萃取部分HPLC分析图。
图3是延龄草正丁醇萃取部分分离流程图。
图4是延龄草水相萃取部分分离流程图。
具体实施方式
本发明涉及的药物的制备方法如下：
一、原料
延龄草地珠于2005年9月采自湖北西部神农架林区，经三峡大学生物技术研究中心陈发菊副教授鉴定为延龄草地珠(Trillium tschonoskii Maxim.)，其标本保存于三峡大学化学与生命科学学院植物标本室(编号：TT200509SNJ)。
二、药物的制备
本发明延龄草提取物的制备：
提取方式1：延龄草根茎50℃干燥过夜，药物粉碎机粉碎后过60目筛，以乙醇为溶剂，回流提取2-4次，每次0.5-2小时，提取液过滤减压浓缩，干燥得深棕色浸膏。即醇提物。
提取方式2：延龄草根茎50℃干燥过夜，药物粉碎机粉碎后过60目筛，以水为溶剂，加热提取2-4次，每次0.5-2小时，提取液过滤减压浓缩，干燥得深棕色浸膏。即水提物。
在提取过程中温度的控制见表1：
表1延龄草提取过程中的温度控制
    提取方式     温度参数(℃)
    水     30-100℃
    0-100％乙醇水溶液     30-85℃
    超声助溶萃取     室温
    提取液浓缩温度范围     室温-65℃
    药材干燥温度范围     室温-65℃
本发明药物片剂的制备：
取提取物，可以是醇提物或水提物1000份，加入辅料淀粉和1％硬脂酸镁，压片，使每片含皂苷5-10mg。
所用的辅料可以是微晶纤维素、改性淀粉、乙基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等片剂常用的辅料中的一种或几种。
本发明药物胶囊剂的制备
取提取物，可以是醇提物或水提物1000份，加入辅料淀粉，制粒，整粒，装胶囊，每粒胶囊中含有皂苷5-10mg。
所用的辅料可以是微晶纤维素、改性淀粉、乙基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等胶囊剂常用的辅料中的一种或几种。
本发明颗粒剂的制备
取提取物(醇提物或水提物)1000份，加入辅料，制粒，整粒，装袋，每袋中含有皂苷5-10mg，得到含有延龄草提取物的颗粒剂药物。
制备颗粒剂所用的辅料可以是蔗糖、糊精、改性淀粉、乳糖、甘露醇、木糖醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、微晶纤维素等颗粒剂常用的辅料中的一种或几种。
三、延龄草化学成分分析
3.1提取
延龄草地珠于50℃恒温烘箱中干燥，用药物粉碎机粉碎后过60目筛，得到6.40kg原药材粉末。用纯甲醇浸泡原药材粉末数小时后，以甲醇为溶剂，利用多用强制渗漉罐(常压，65℃)提取，每2小时提取一次，反复多次，直到提取液几乎没有颜色和浓缩时没有浸膏出现。浓缩甲醇提取液，最终得到粗提物浸膏共2427.50g。
3.2萃取
向粗提物浸膏中加适量水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，减压浓缩(0.1MPa，50℃)得得到各萃取部位浸膏，见图1。
3.3分离
3.3.1HPLC分析
分别用HPLC分析延龄草醇提物、正丁醇萃取物、水相部分。色谱柱Waters PrepNova-Pak HR C-18 7.8×300mm ODS-AQ，S-5μm，120，250mm×4.6mmI.D.；流动相为乙腈-水，流速为1.0mL/min；柱温为35℃；检测波长为203nm。其中正丁醇萃取物的洗脱条件为：0min～10min，15％～20％乙睛；10min～15min，20％～30％乙睛；15min～35min，30％～40％乙睛；35min～45min，40％～45％乙睛；45min～50min，45％～50％乙睛；50min～60min，50％～56％乙睛；60min～75min，56％～67％乙睛；75min～80min，67％～70％乙睛。
3.3.2正丁醇萃取部分
将1500gAB-8型大孔吸附树脂湿法装柱，将延龄草正丁醇萃取部分部分浸膏用少量水溶解，湿法上样，用甲醇-水梯度洗脱，250ml/装收集各流分，HPLC检测并合并相同流分，减压浓缩后经真空冷冻干燥干燥得到各洗脱流分。其中60％甲醇洗脱物经过反复反相硅胶柱层析分离和Sephadex LH-20柱层析分离，最终得到1个单体化合物；其中80％甲醇洗脱物经过反复反相硅胶柱层析和半制备HPLC制备分离，最终得到3个单体化合物。具体流程见图3。得到水354.50g、30％MeOH9.28g、60％MeOH46.82g、80％MeOH4.56g 100％MeOH0.30g，再分别经反相硅胶(MeCN-H2O)Sephadex LH-20(H2O)；反相硅胶(MeCN-H2O)半制备HPLC(H2O)得到TTB4 15.0mg；TTB1 TTB2 TTB3分别为41.4mg、109.4mg、72.8mg。
3.3.3水相萃取部分
将1500gAB-8型大孔吸附树脂湿法装柱，将延龄草水相萃取部分全部浸膏用少量水溶解，湿法上样，用甲醇-水梯度洗脱，250ml/装收集各流分，HPLC检测并合并相同流分，减压浓缩后经真空冷冻干燥干燥得到各洗脱流分。其中30％甲醇洗脱物经过反复反相硅胶柱层析和Sephadex LH-20柱层析分离，最终得到3个单体化合物，TTW1、TTW2、TTW3分别为21.7mg、16.1mg、9.4mg；其中60％甲醇洗脱物经过反复反相硅胶柱层析分离最终得到1个单体化合物，TTW 4o为0.82mg。具体流程见图4。
3.4结果
目前已经从延龄草正丁醇萃取部位和水相部位共分离得到8个单体化合物，其中6个已经鉴定出结构。TTB1：mp216-218℃，为偏诺皂苷元3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-吡喃葡糖苷；TTB2：mp290-292℃，为偏诺皂苷元3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)]-O-β-D-吡喃葡糖苷；TTB3：mp270-272℃，为偏诺皂苷元3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡糖苷，这三个化合物均为首次从本种植物中发现。TTW4为延龄草皂苷A；TTW1和TTW2均为新化合物，其结构式为：
Figure A20071005148000081
R＝S1 TTB1
R＝S2 TTB2
R＝S3 TTB3
TTW1
Figure A20071005148000092
TTW2
Figure A20071005148000101
TTW4
四、延龄草提取物抗肿瘤应用
采用MTT法，探讨延龄草粗提物、正丁醇萃取物、乙酸乙酯萃取物以及各个单体化合物对鼻烟癌细胞(CNE)、宫颈癌细胞(Hela)、肝癌细胞(HEPG2)和白血病细胞(HL60)的抗肿瘤活性。
4.1、体外抗肿瘤实验
4.1.1、实验方法
将处于对数生长期的细胞消化下来后用PBS溶液洗一次，作细胞计数，用含10％新生小牛血清1640培养基调整细胞浓度至105cell/ml，将细胞接种于96孔培养板中，每孔100ul，培养24h，再加药。分空白调零组(只有1640)、阴性对照组(不加药)、阳性对照组(丝裂霉素)和给药组，前两组加100ul含10％小牛血清的1640，给药组加不同浓度梯度的药100ul，每个浓度做4个复孔，再继续培养24h。用翻板法弃上清，加0.5mg/ml的MTT溶液100ul/孔，培养4h，用全自动酶联免疫检测仪于492nm波长处测定吸光度(OD)值。
所有结果均采用ssps11.5软件包进行方差分析。用Origin软件，抑制率(％)＝[1-(实验组OD-空白组OD均值)/(对照组OD均值-空白组OD均值)]×100％。
4.1.2、实验结果
实验结果见表2
表2：对鼻烟癌细胞(CNE1)的抑制作用(n＝6)
        组别  浓度(μg/ml)          OD值    抑制率(％)
    模型组     -     0.2230±0.027     -
延龄草醇提取物     180     0.1070±0.008**     73.89
    90     0.0860±0.003**     87.26
    45     0.0720±0.004**     96.18
    22.5     0.0841±0.008**     88.47
    11.25     0.1074±0.013**     73.63
    延龄草正丁醇部分     180     0.2000±0.007*     14.65
    90     0.1954±0.028**     17.58
    45     0.1296±0.045**     40.51
    22.5     0.0871±0.005**     86.56
    11.25     0.0877±0.016**     13.82
延龄草乙酸乙酯部分     180     0.1064±0.017**     74.27
    90     0.1544±0.006**     43.69
    45     0.1670±0.019**     35.67
    22.5     0.1727±0.018**     32.04
    11.25     0.1743±0.014**     31.02
丝裂霉素     160     0.0911±0.010**     84.01
    80     0.0786±0.006**     91.97
注：与模型组对比*P＜0.05，**P＜0.01
    组别  浓度(μg/ml)       OD值(培养24h)    抑制率(％)
    模型组     -     0.5828±0.2232     -
TTB1     320     0.0793±0.0061**     86.40
    160     0.2083±0.0404**     64.25
    80     0.2641±0.0323**     54.69
    40     0.4863±0.0819     16.56
TTB2     320     0.0834±0.0054**     85.69
    160     0.0802±0.00535**     86.24
    80     0.0839±0.0071**     85.61
    40     0.2039±0.0390**     65.02
TTB3     320     0.0794±0.0021**     46.66
    160     0.0831±0.0022**     85.75
    80     0.1807±0.0253**     69.00
    40     0.3109±0.0384**     86.37
TTW4     320     0.1396±0.0077**     64.61
    160     0.1180±0.0014**     70.08
    80     0.1131±0.0054**     71.31
    40     0.1332±0.0058**     66.22
TTW1     320     0.1320±0.0096**     66.52
    160     0.1523±0.0349**     61.37
    80     0.1759±0.0206**     55.38
    40     0.2992±0.0321**     24.11
TTW2     320     0.1310±0.0083**     66.77
    160     0.1281±0.0067**     67.51
    80     0.1584±0.0097**     59.83
    40     0.2695±0.0202**     31.65
注：与模型组对比*P＜0.05，**P＜0.01
实验结果表明：延龄草醇提物、延龄草正丁醇部位、延龄草乙酸乙酯部位、单体化合物TTB1、TTB2、TTB3、TTW1、TTW2、TTW4均显示有明显的抑抑制CNE1细胞生长活性。
表3：对宫颈癌细胞(Hela)的抑制作用(n＝6)
         组别   浓度(μg/ml)      OD值(培养24h)    抑制率(％)
    模型组     -     0.2543±0.0335     -
延龄草粗醇提取物     180     0.1627±0.0017**     36.02
    90     0.1170±0.0183**     54.00
    45     0.0972±0.0156**     61.78
    22.5     0.0850±0.0083**     66.57
延龄草正丁醇部分     180     0.3313±0.0344**     -30.28
    90     0.2074±0.0381**     18.44
    45     0.1522±0.0298**     40.15
    22.5     0.1375±0.0259**     45.93
延龄草乙酸乙酯部分     180     0.0931±0.0070**     63.40
    90     0.1736±0.0106**     31.73
    45     0.2158±0.0217*     15.14
    22.5     0.2113±0.0514*     16.91
丝裂霉素     160     0.0946±0.0185**     62.80
    80     0.0958±0.0049**     66.33
注：与模型组对比*P＜0.05，**P＜0.01
    组别  浓度(μg/l)      OD值(培养24h)     抑制率(％)
  模型组     -     0.5792±0.1644     -
TTB1     320     0.0821±0.0103**     85.82
    160     0.0888±0.0060**     84.66
    80     0.4931±0.5800**     14.87
    40     0.3023±0.0597**     47.80
TTB2     320     0.0781±0.0013**     86.52
    160     0.0750±0.0041**     87.05
    80     0.0763±0.0089**     86.82
    40     0.0953±0.0181**     83.52
TTB3     320     0.0825±0.0055**     85.76
    160     0.0767±0.0063**     86.77
    80     0.1088±0.0136**     81.21
    40     0.2766±.0234**     52.25
TTW4     320     0.0814±0.0081**     77.88
    160     0.0921±0.0091**     74.98
    80     0.0827±0.0025**     77.55
    40     0.1033±0.0087**     71.94
TTW1     320     0.0914±0.0102**     75.17
    160     0.0867±0.0075**     76.45
    80     0.1480±0.01196**     59.81
    40     0.2494±0.03893**     32.25
TTW2     320     0.0905±0.0030**     75.41
    160     0.0976±0.0059**     73.50
    80     0.1829±0.0269**     50.32
    40     0.2030±0.0123**     44.83
注：与模型组对比*P＜0.05，**P＜0.01
实验结果表明：延龄草醇提物、延龄草正丁醇部位和延龄草乙酸乙酯部位均显示有明显的抗Hela细胞活性，最佳抑制浓度分别为22.5μg/ml、22.5μg/ml、180μg/ml。TTB1、TTB2、TTB3、TTW1、TTW2和TTW4对Hela细胞有明显的抑制作用。
表4：对肝癌细胞(HEPG2)的抑抑制作用(n＝6)
         组别  浓度(μg/ml)      OD值(培养24h)    抑制率(％)
    模型组     -     0.2536±0.0021     -
延龄草粗醇提取物     180     0.1989±0.1081     21.57
    90     0.0791±0.0058**     68.81
45 0.0690±0.0046** 72.79
    22.5     0.0690±0.0118**     72.79
延龄草正丁醇部分     180     0.0649±0.0016**     74.41
    90     0.0603±0.0041**     76.22
    45     0.0715±0.0089**     71.81
    22.5     0.0652±0.0031**     74.29
延龄草乙酸乙酯部分     180     0.0787±0.0026**     68.97
    90     0.1193±0.0161**     52.96
    45     0.1688±0.0208*     33.44
    22.5     0.1158±0.0249**     54.34
丝裂霉素     160     0.0745±0.0058**     70.62
    80     0.0795±0.0080**     68.65
注：
与模型组对比*P＜0.05，**P＜0.01
    组别   浓度(μg/mL)      OD值(培养24h)    抑制率(％)
    模型组     -     0.71605±0.4020     -
TTB1     320     0.0811±.0108**     88.67
    160     0.0876±.0032**     87.77
    80     0.0932±.0061**     86.98
    40     0.2714±.0301**     62.10
TTB2     320     0.0771±.0044**     89.23
    160     0.0920±.0115**     87.15
    80     0.0851±.0029**     88.12
    40     0.1052±.0025**     85.31
TTB3     320     0.0893±.0056**     87.53
    160     0.0876±.0131**     87.77
    80     0.1073±.0123**     85.02
    40     0.2140±.0571**     70.12
TTW4     320     0.0843±0.0178**     85.69
    160     0.1293±0.0301**     78.05
    80     0.1747±0.0405**     70.34
    40     0.3823±0.1381*     35.10
TTW1     320     0.0843±0.0178**     85.45
    160     0.1293±0.0301**     77.68
    80     0.1747±0.0405**     69.84
    40     0.2847±0.1870*     50.85
TTW2     320     0.1016±0.0250**     75.48
    160     0.1207±0.0129**     70.87
    80     0.1553±0.0243**     62.52
    40     0.2062±0.0153*     50.23
注：与模型组对比*P＜0.05，**P＜0.01
实验结果表明：延龄草醇提物、延龄草正丁醇部位和延龄草乙酸乙酯部位TTB1、TTB2、TTB3、TTW1、TTW2和TTW4对HEPG2细胞有明显的抑制作用。
表5：对白血病细胞(HL60)的抑制作用(n＝6)
         组别  浓度(μg/ml)       OD值(培养24h)    抑制率(％)
    模型组     -     0.4214±0.0033     -
延龄草粗醇提取物     180     0.1744±0.0217**     58.61
    90     0.1916±0.0090**     54.53
    45     0.2174±0.0181*     48.41
    22.5     0.2386±0.0419*     43.38
延龄草正丁醇部分     180     0.1158±0.0249**     73.03
    90     0.1914±0.0838*     55.79
    45     0.2706±0.0446     37.49
    22.5     0.2926±0.0702     32.41
延龄草乙酸乙酯部分     180     0.1272±0.0152**     68.64
    90     0.1471±0.0201**     63.73
    45     0.1820±0.0686*     55.13
    22.5     0.2088±.1188     48.52
丝裂霉素     160     0.1245±0.0058**     69.30
    80     0.1295±0.0080**     68.07
注：与模型组对比*P＜0.05，**P＜0.01
    组别   浓度(μg/mL)       OD值(培养24h)     抑制率(％)
    模型组     -     0.4925±0.0102     -
TTB1     320     0.0982±0.0074**     80.06
    160     0.1050±0.0119**     78.68
    80     0.1283±0.0195**     73.94
    40     0.1854±0.0596**     62.35
TTB2     320     0.1035±0.0211**     77.89
    160     0.1386±0.0259**     70.39
    80     0.1719±0.0228**     63.28
    40     0.1987±0.0174*     57.55
TTB3     320     0.1544±.0244**     74.47
    160     0.2035±.0210**     68.98
    80     0.2474±.1306**     62.29
    40     0.3168±.0894**     51.71
TTW4     320     0.1379±0.0136**     78.41
    160     0.1493±0.0387**     76.62
    80     0.1899±0.0196**     70.26
    40     0.2133±0.0087**     66.60
TTW1     320     0.1321±0.0016**     72.91
    160     0.1525±0.0042**     68.72
    80     0.1934±0.0036**     60.34
    40     0.2142±0.0030*     56.05
TTW2     320     0.0853±.0058**     76.66
    160     0.1226±.0225**     66.46
    80     0.1478±.0103**     59.56
    40     0.1705±.0127**     53.35
注：与模型组对比*P＜0.05，**P＜0.01
实验结果表明：延龄草醇提物、延龄草正丁醇部位和延龄草乙酸乙酯部位TTB1、TTB2、TTB3、TTW1、TTW2和TTW4对HL60细胞有明显的抑制作用。
4.2体内抗肿瘤实验
4.2.1、实验方法
试剂的配制：
取延龄草醇提取物配成0.057g/ml水溶液
动物：
KM雄性小白鼠70只，体重18-22g，随机分成6组，每组10只。由三峡大学实验动物中心提供。
小鼠腹水型肝癌细胞H22细胞体内传代：
从细胞库中取出H22复苏。传代三次。第三次传代5天后，无菌操作取腹水，作细胞计数，调节细胞数为2.0×106个/mL，分别注入0.2ml于小鼠体内。
接种后的小白鼠随机分为6组，其中包括阴性对照组也叫模型对照组(灌生理盐水)、阳性对照组(灌环磷酰胺)、30％低剂量组和高剂量组、70％低剂量组和高剂量组，另外还有空白组即没有接种H22(灌生理盐水)。每组10只，按0.2mL/10g分别每天灌胃给药一次，连续10天，于第10天停药。观察小鼠的活跃情况，每天至少观察三次，记录小鼠死亡情况及生存时间。
注入腹水型肝癌细胞H22前称小鼠体重，以后每两天称一次，共称体五次。
4.2.2、实验结果
表6：延龄草醇提物对荷瘤小鼠生命延长期的影响
         组别  只数(只)  剂量(mg/g)     生命延长期(h)
    模型组     10     -     232.9±47.3
    丝裂酶素     10     0.90     405.2±81.7**
    延龄草醇提物低剂量     10     0.57     467.9±73.8**
    延龄草醇提物高剂量     10     1.14     494.4±64.6**
注：与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01
结果表明：与模型组相比延龄草中皂苷对小白鼠H22细胞有抑制作用。与模型组比差异有显著性。
表7：延龄草醇提物对荷瘤小鼠体重变化的影响
Figure A20071005148000151
组别 体重增长率1   体重增长率2     体重增长率3     体重增长率4
空白 7.46±2.39**   6.43±4.05**     5.97±4.40**     6.22±4.622**
模型组 19.78±8.52   25.27±8.67     33.59±10.29     44.30±10.89
丝裂酶素 17.74±5.48   18.27±6.07*     17.52±8.66*     25.00±9.84*
延龄草醇提物低剂量 9.11±6.76**   6.84±9.85**     4.31±12.70**     4.81±13.782**
延龄草醇提物高剂量 14.98±7.83   16.60±11.45*     13.17±12.70**     16.96±17.12**
注：与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01
1.本专利申请对延龄草(Trillium tschonoskii Maxim)的正丁醇部位和水部位的部分样品进行了分离，共得到了8个单体化合物，其中6个已经进行了结构鉴定，其中有两个为新化合物(TTW1、TTW2)，有3个化合物(TTB1、TTB2、TTB3)为首次从本植物中得到。
2.研究表明延龄草的醇提物，水溶性成分，脂溶性成分均有明显的体内外抗肿瘤活性。
3.单体化合物TTB1、TTB2、TTB3、TTW1、TTW2、TTW4均有明显的体内外抗肿瘤活性。
4.延龄草的醇提物，水溶性成分，脂溶性成分，单体化合物TTB1、TTB2、TTB3、TTW1、TTW2、TTW4对消化系统、呼吸系统、泌尿生殖系统、血液系统等多系统肿瘤具有抑制作用。
5、延龄草的醇提物，水溶性成分，脂溶性成分，单体化合物TTB1、TTB2、TTB3、TTW1、TTW2、TTW4对CNE1细胞、Hela细胞、HPGE2细胞、HL60细胞、H22细胞均有很强的抑制作用。
6、延龄草抗肿瘤有效成分主要为皂苷类成分。

Claims (11)

1、一种含有延龄草提取物的药物制备方法，其特征在于：
提取物的制备：延龄草根茎50℃干燥过夜，药物粉碎机粉碎后过60目筛，以乙醇或水为溶剂，回流提取2-4次，每次0.5-2小时，提取液过滤减压浓缩，干燥得深棕色浸膏，分别为醇提物或水提物。
2、根据权利要求1所述的含有延龄草提取物的药物制备方法，其特征在于：以乙醇为溶剂时，回流提取控制温度在30-85℃；以水为溶剂时，回流提取控制温度在30-100℃。
3、根据权利要求1或2所述的含有延龄草提取物的药物制备方法，其特征在于：取提取物(醇提物或水提物)1000份，加入辅料，压片，使每片含皂苷5-10mg，得到含有延龄草提取物的片剂药物。
4、根据权利要求3所述的含有延龄草提取物的药物制备方法，其特征在于：所用的辅料可以是微晶纤维素、改性淀粉、硬脂酸镁、乙基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等片剂药物常用的辅料中的一种或几种。
5、根据权利要求1或2所述的含有延龄草提取物的药物制备方法，其特征在于：
取提取物(醇提物或水提物)1000份，加入辅料，制粒，整粒，装胶囊，每粒胶囊中含有皂苷5-10mg，得到含有延龄草提取物的胶囊剂药物。
6、根据权利要求5所述的所用的辅料可以是微晶纤维素、改性淀粉、硬脂酸镁、乙基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等胶囊剂常用的辅料中的一种或几种。
7、根据权利要求1或2所述的含有延龄草提取物的药物制备方法，其特征在于：取提取物(醇提物或水提物)1000份，加入辅料，制粒，整粒，装袋，每袋中含有皂苷5-10mg，得到含有延龄草提取物的颗粒剂药物。
8、根据权利要求7所述的含有延龄草提取物的药物制备方法，其特征在于：所用的辅料可以是蔗糖、糊精、改性淀粉、乳糖、甘露醇、木糖醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、微晶纤维素等颗粒剂常用的辅料中的一种或几种。
9、根据权利要求1或2所述的含有延龄草提取物的药物制备方法，其特征在于：延龄草提取物HPLC指纹图谱由4个特征峰组成，其中色谱条件为：色谱柱Waters PrepNova-Pak HR C-18 7.8×300mm ODS-AQ，S-5μm，120，250mm×4.6mm I.D.；流动相为乙腈-水，洗脱条件为0min～10min，15％～20％乙睛；10min～15min，20％～30％乙睛；15min～35min，30％～40％乙睛；35min～45min，40％～45％乙睛；45min～50min，45％～50％乙睛；50min～60min，50％～56％乙睛；60min～75min，56％～67％乙睛；75min～80min，67％～70％乙睛；流速为1.0ml/min；柱温为35℃；检测波长为203nm。
10、根据权利要求9所述的含有延龄草提取物的药物制备方法，其特征在于：所述的4个特征峰的保留时间RT值分别为：1号峰(TTB4)：17.9min±0.66；2号峰(TTB1)：42.2min±0.92；3号峰(TTB2)：42.9min±0.80；4号峰(TTB3)：44.9min±0.86。
11、延龄草提取物在抗肿瘤药物中的应用。
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Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105168235A (zh) * 2015-10-22 2015-12-23 江西中医药大学 延龄草皂苷类物质及其制剂的制备方法与其在制备治疗老年痴呆及阿尔茨海默病药物中应用
CN106902129A (zh) * 2017-02-16 2017-06-30 张忠立 延龄草属或重楼属药材中甾体皂苷类化合物在制备护肝或保肝药物中的应用
CN108354859A (zh) * 2018-04-28 2018-08-03 云南省药物研究所 一种含延龄草提取物的祛痘日化品的制备方法与应用
CN110604736A (zh) * 2019-08-22 2019-12-24 西南医科大学 一种延龄草皂苷在制备保护神经药物中的应用
CN112022767A (zh) * 2020-09-17 2020-12-04 云南省药物研究所 一种抗炎抑菌增强免疫祛痘组合物及其应用
CN112903844A (zh) * 2021-01-19 2021-06-04 皖西学院 一种蕨菜中原蕨苷含量的检测方法
CN115887570A (zh) * 2021-09-30 2023-04-04 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 延龄草提取物在制备肠黏膜损伤后的再生和修复的产品中的应用
CN115887569A (zh) * 2021-09-30 2023-04-04 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 延龄草提取物的制备方法及其在抗辐射损伤中的应用

Cited By (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107648430A (zh) * 2015-10-22 2018-02-02 江西中医药大学 一种含延龄草甾体皂苷类有效成分胶囊制剂的制备方法及其在制备各类药物中的应用
CN107890470A (zh) * 2015-10-22 2018-04-10 江西中医药大学 一种含延龄草甾体皂苷类有效成分片剂的制备方法及其在制备各类药物中的应用
CN105168235A (zh) * 2015-10-22 2015-12-23 江西中医药大学 延龄草皂苷类物质及其制剂的制备方法与其在制备治疗老年痴呆及阿尔茨海默病药物中应用
CN106902129B (zh) * 2017-02-16 2021-12-07 张忠立 延龄草属药材有效成分在制备护肝或保肝药物中的应用
CN106902129A (zh) * 2017-02-16 2017-06-30 张忠立 延龄草属或重楼属药材中甾体皂苷类化合物在制备护肝或保肝药物中的应用
CN108354859A (zh) * 2018-04-28 2018-08-03 云南省药物研究所 一种含延龄草提取物的祛痘日化品的制备方法与应用
CN110604736A (zh) * 2019-08-22 2019-12-24 西南医科大学 一种延龄草皂苷在制备保护神经药物中的应用
CN112022767A (zh) * 2020-09-17 2020-12-04 云南省药物研究所 一种抗炎抑菌增强免疫祛痘组合物及其应用
CN112022767B (zh) * 2020-09-17 2023-04-07 云南省药物研究所 一种抗炎抑菌增强免疫祛痘组合物及其应用
CN112903844A (zh) * 2021-01-19 2021-06-04 皖西学院 一种蕨菜中原蕨苷含量的检测方法
CN112903844B (zh) * 2021-01-19 2022-12-16 皖西学院 一种蕨菜中原蕨苷含量的检测方法
CN115887570A (zh) * 2021-09-30 2023-04-04 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 延龄草提取物在制备肠黏膜损伤后的再生和修复的产品中的应用
CN115887569A (zh) * 2021-09-30 2023-04-04 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 延龄草提取物的制备方法及其在抗辐射损伤中的应用
CN115887570B (zh) * 2021-09-30 2024-02-13 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 延龄草提取物在制备肠黏膜损伤后的再生和修复的产品中的应用

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