CN100393326C - 中华补血草用于制备抗肿瘤药物的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及天然药物领域，公开了中华补血草的医药新用途，即用于制备抗肿瘤药物的用途。

Description

中华补血草用于制备抗肿瘤药物的用途

技术领域

本发明涉及天然药物领域，公开了一种中华补血草的医药新用途，即用于制备抗肿瘤药物的用途。

背景技术

中华补血草(Limonium sinense(Girard)Kuntze)，又名匙叶草、盐云草、海菠菜、海赤芍等，为补血草属(Limonium Mill.)多年生泌盐草本植物，喜生于沿海盐渍化的低洼湿地上，分布于东北、华北、西北及西藏和沿海各省区，在江苏主要分布在苏北连云港、灌云、射阳、东台、如东、南通等沿海地区的滩涂及盐碱湿地上(陈兴龙，安树青，李国旗，等.中国海岸带耐盐经济植物资源.南京林业大学学报，1999，23(4)：81-84；郭巧生，苏筱娟.江苏省沿海滩涂野生药用植物生物多样性及其保护.中国野生植物资源，1999，18(3)：28-30)。除具有较高观赏价值、环境保护等作用外，民间流传使用其治疗一些疾病。

已有研究发现，该植物化学成分十分丰富，含有氨基酸、无机元素、维生素、黄酮类、鞣质、多糖、生物碱、有机酸等多种成分(Lin LC，Chou CJ.Flavonoids and phenolics fromLimonium sinense.Planta Med.2000；66(4)：382-3；郭洪祝，袁久荣.中华补血草化学成分的研究.中草药，1994，(8)：398-400)。具有补血、止血、抗菌消炎、散瘀、调经、益脾、健胃等多种药理功效，临床上主要用于治疗功能性子宫出血症。目前学者们对其药理作用的研究主要集中在其抗菌、抗病毒、补血止血方面(Lin LC，Kuo YC，Chou CJ.Anti-herpes simplex virustype-1 flavonoids and a new flavanone from the root of Limonium sinense.Planta Med.2000，66(4)：333-336；甘露，赵玉英.补血草素类化合物研究概况.西北药学杂志.1997 12(3).135-140)。但关于中华补血草抗肿瘤作用的研究尚未见报道。

发明内容

本发明公开了一种中华补血草的医药新用途，即其可以用于制备治疗抗肿瘤药物的用途。本发明的中华补血草主要采用其全根提取物，更优选的是其全根水提物。

本发明的中华补血草水提物由以下方法制备得到：将中华补血草全根干燥，粉碎，用蒸馏水提取1～3次，合并提取液，浓缩、干燥，即得(简称LSE)。本发明的中华补血草全根提取物中总多糖类含量不低于8.5％。

离体细胞试验研究显示，中华补血草全根提取物能显著抑制肝癌细胞HepG₂体外增殖；动物试验研究进一步表明，中华补血草对移植性黑色素瘤B16-F10小鼠实体瘤生长具有显著抑制作用；同时，最大耐受量试验结果显示该提取物毒性较低，且在一定程度上可改善小鼠免疫机能。本研究首次发现中华补血草全根提取物具有毒性低，同时具有较强的抑瘤作用及一定的免疫增强功能，为筛选新的癌症防治(或辅助治疗)药物开辟了新的资源。

本发明的提取物可将其直接用于临床，也可通过加入药用辅料制备成片剂、胶囊、软胶囊、注射剂、乳剂等剂型使用。一般临床用药量为100-600mg/kg/日。

附图说明

图1是中华补血草全根提取物对体外培养的HepG₂肿瘤细胞增殖的影响(^**P＜0.01vs Control组)

图2是中华补血草全根提取物对移植性黑色素瘤小鼠实体瘤生长的影响(LSE_低、LSE_中、LSE_高分别为200mg/kg、400mg/kg和800mg/kg LSE剂量组；CTX(20mg/kg)为阳性对照组)

具体实施方式

实施例1

中华补血草全根提取物的制备：

干燥中华补血草根100g粉碎，加入蒸馏水400ml回流提取2小时，过滤；滤渣依次用200ml、200ml蒸馏水回流提取各2小时；合并三次滤液、减压浓缩、干燥，得提取物棕色干粉32.9g。

实施例2

中华补血草全根提取物的制备：

干燥中华补血草根100g粉碎，加入蒸馏水300ml回流提取1.5小时，过滤；滤渣依次用300ml、200ml蒸馏水回流提取1、0.5小时；合并三次滤液、减压浓缩、干燥，得提取物棕色干粉29.3g。

实施例3

中华补血草全根提取物的制备：

干燥中华补血草根100g粉碎，加入蒸馏水300ml回流提取1.5小时，过滤；滤渣依次用200ml、200ml蒸馏水回流提取1、0.5小时；合并三次滤液、减压浓缩、干燥，得提取物棕色干粉2g.3g。

实施例4

中华补血草全根提取物最大耐受量试验

全雄标准体重ICR小鼠(南京医科大学动物中心，动物生产合格证号：SCXK(苏)2002-0031)20只，分为Normal组及LSE组，每组10只。实施例1制得的LSE提取物用生理盐水配制成1g/mL LSE液，LSE组每只小鼠按0.25mL/10g体重以上述LSE液灌胃给药(相当于25g提取物/kg体重)，Normal组每只小鼠以同样体积生理盐水灌胃，给药后连续观察14天。14天中两组动物均无死亡。LSE组小鼠外观正常，皮肤光滑，色泽光亮，心指数、肝指数、脾指数、肺指数等均处正常范围，但胸腺指数显著增加。

表1中华补血草提取物最大耐受量试验

^*P＜0.05，与Normal组相比。

由表1可见，LSE组小鼠与Normal组小鼠体重以及心指数、肝指数、脾指数、肺指数等均无显著差异，表明中华补血草全根提取物对小鼠基本无毒性作用；胸腺指数显著增大，显示LSE具有一定免疫增强作用。

实施例5

中华补血草全根提取物对HepG₂细胞增殖的抑制作用

1.肿瘤细胞培养及分组

将对数生长期HepG₂细胞用含10％胎牛血清的DMEM培养基制备成5×10⁴个/mL的细胞悬液，按每孔100μL接种于96孔板，37℃，5％CO₂温育24h后，分组给药(实施例3制得)。给药终浓度为50μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、600μg/mL、800μg/mL的LSE。

2.MTT法检测HepG₂细胞存活率

将培养48h的HepG₂肿瘤细胞，弃去上清，加入无血清培养基100μL、MTT(5.0mg/mL)20μL，37℃孵育4h，弃去上清，每孔加入100μL DMSO，振荡数分钟，在Bio-RAD 680全自动酶标仪上读取570nm处吸光度值(OD_570nm)。以OD_570nm值表示细胞的存活率。结果见图1。

由图1可见，LSE可以剂量依赖方式抑制肝癌细胞HepG₂的增殖，即有明显体外抗肿瘤的作用。

实施例6

中华补血草全根提取物对移植性黑色素瘤小鼠实体瘤生长的影响

1.移植性黑色素瘤小鼠实体瘤模型的建立及分组

取C57小鼠40只，按无菌操作程序，于每只小鼠右侧腋窝皮下接种B16-F10黑色素瘤细胞悬液0.1ml(5×10⁵个细胞)。随机分成模型(Control)组、环磷酰胺(CTX，20mg/kg)组、实施例1制得的LSE_低(200mg/kg)组、LSE_中(400mg/kg)组、LSE_高(800mg/kg)组，每组各8只。分别用生理盐水、相应剂量CTX和LSE灌胃，每天一次，连续灌胃14天。

2.中华补血草全根提取物对移植性黑色素瘤小鼠实体的影响

上述各组小鼠，于末次给药后24 h处死，剥取瘤块，用滤纸吸干后，测量瘤的体积，并计算抑瘤率。同时称量脾脏和胸腺重量，并计算脾脏指数和胸腺指数。

表2中华补血草全根提取物对移植性黑色素瘤小鼠瘤体积、脾指数及胸腺指数的影响(

n＝8)

^*P＜0.05vs Control组；^**P＜0.01vs Control组；

^#P＜0.05vs CTX组；^##P＜0.0vs CTX组

由表2可见，LSE各组小鼠瘤体积明显减少。计算各组小鼠抑瘤率，可发现各剂量LSE对瘤块的抑制率分别为18.6％、40.7％及49.0％。其中LSE中、高剂量组的抑瘤率和阳性对照环磷酰胺组无显著差异(见图2)，即LSE可以剂量依赖性抑制黑色素瘤细胞在体内的增殖，表明LSE具有显著抑制动物肿瘤生长的作用。

测量各组动物脾指数和胸腺指数发现，与Control组小鼠相比，LSE各剂量组小鼠脾指数均显著增加，并且高剂量组小鼠脾指数高于低、中剂量组；LSE中、高剂量组小鼠胸腺指数高于Control组小鼠，其中高剂量组小鼠脾指数高于中剂量组(表2)。进一步分析发现，LSE各剂量组小鼠脾指数和胸腺指数明显高于环磷酰胺组，提示LSE具有一定刺激脾和胸腺增殖、增进免疫器官功能的作用。

Claims (5)

1.中华补血草用于制备抗肿瘤药物的用途。

2.中华补血草水提物用于制备抗肿瘤药物的用途。

3.权利要求1或2的用途，其中中华补血草是中华补血草全根。

4.权利要求1或2的用途，其中的肿瘤是黑色素瘤。

5.权利要求1或2的用途，其中的肿瘤是肝癌。

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