CN103463244A - 一种从月季花中提取降糖物质的方法及其应用 - Google Patents

一种从月季花中提取降糖物质的方法及其应用 Download PDF

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苗明三
王灿
乔静怡
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Abstract

本发明涉及从月季花中提取降糖物质的方法及其应用,有效解决从月季花中提取降糖物质,并用于制备降糖药物的问题,方法是,将月季花粉碎成粗粉,用石油醚回流萃取1h脱脂,脱脂后,挥去石油醚至干燥,再加乙醇浸泡0.5h,回流提取2次,得提取液,过滤,减压回收乙醇至无醇味,浓缩,浓缩液加蒸馏水分散,分散液上AB-8型大孔吸附树脂,先用2倍柱体积蒸馏水洗脱,弃去水液;用3倍柱体积的体积浓度为10%的乙醇洗脱,弃去洗脱液;再用5倍柱体积的体积浓度为80%的乙醇洗脱,收集洗脱液,减压回收乙醇,浓缩至干粉,得月季花总黄酮,本发明原料丰富,方法简单,其提取物月季花总黄酮有效用于制备降糖药物,实现月季花提取物在制备降糖药物中的应用。

Description

一种从月季花中提取降糖物质的方法及其应用
技术领域
[0001] 本发明涉及医药,特别是一种从月季花中提取降糖物质的方法及其应用。
背景技术
[0002] 高血糖是指,当空腹(8小时内无糖及任何含糖食物摄入)血糖高于正常范围,称为高血糖,空腹血糖正常值4.0-6.lmmol/L,餐后两小时血糖高于正常范围7.8mmol/L,也可以称为高血糖,高血糖不是一种疾病的诊断,只是一种血糖监测结果的判定,血糖监测是一时性的结果,高血糖不完全等于糖尿病,但易发展为糖尿病,高血糖严重影响着人们的身体健康,因此,如何治疗高血糖也是人们一直关心的技术问题。
[0003]月季,被称为花中皇后又称“月月红”,蔷薇科。常绿或半常绿低矮灌木,四季开花,多红色,偶有白色,可作为观赏植物,可作为药用植物,也称月季花。自然花期5至11月,花大型,有香气,广泛用于园艺栽培和切花。月季花种类主要有切花月季、食用玫瑰、藤本月季、地被月季等。中国是月季的原产地之一,具有活血调经、消肿止痛之功效,有效用于月经不调、胸腹胀痛、子宫出血、骨折损伤、痈肿疔毒。
[0004]月季花不仅是花期绵长、芬芳色艳的观赏花卉,而且是一味妇科良药。中医认为,月季味甘、性温,入肝经,有活血调经、消肿解毒之功效。由于月季花的祛瘀、行气、止痛作用明显,故常被用于治疗月经不调、痛经等病症。
[0005] 临床报道,妇女出现闭经或月经稀薄、色淡而量少、小腹痛,兼有精神不畅和大便燥结等,或在月经期出现上述症状,用胜春汤治疗效果好。
[0006]月季花与代代花合用,更是治疗气血不和引起月经病的良方。月季花重活血,代代花偏于行气。二药为伍,一气一血,气血双调,其调经活血、行气止痛之功甚好。主治妇女肝气不舒、气血失调、经脉瘀阻不畅,以致月经不调、胸腹疼痛、食欲不振甚或恶心、呕吐等症。
[0007] 对妇科常见病,民间用月季花单方、验方也很有效。比如:鲜月季花开水泡服,可治月经不调或经来腹痛;月经过多、白带多,用月季花(或根)水煎服或炖猪肉食;月季花、大枣同煎,汤成后加适量蜂蜜服用,此方又香又甜,不像是药,对经期潮热很有效。此外,女性常用月季花瓣泡水当茶饮,或加入其他健美茶中冲饮,还可活血美容,使人青春长驻。但至今未见有月季花提取物用于治疗高血糖的公开报导。
发明内容
[0008] 针对上述情况,为克服现有技术之缺陷,本发明之目的就是提供一种从月季花中提取降糖物质的方法及其应用,可有效解决从月季花中提取降糖物质,并用于制备降糖药物的问题。
[0009] 本发明解决的技术方案是,从月季花提取降糖物质的方法是,将月季花粉碎成粗粉,用石油醚回流萃取Ih脱脂,脱脂后,挥去石油醚至干燥,再加乙醇浸泡0.5h,回流提取2次,每次lh,得提取液,过滤,减压回收乙醇至无醇味,浓缩,浓缩液加蒸馏水分散,分散液上AB-8型大孔吸附树脂,先用2倍柱体积蒸馏水洗脱,弃去水液;用3倍柱体积的体积浓度为10%的乙醇洗脱,弃去洗脱液;再用5倍柱体积的体积浓度为80%的乙醇洗脱,收集体积浓度为80%的乙醇洗脱液,减压回收乙醇,浓缩至干粉,得月季花总黄酮,该提取物有效用于制备降糖药物。
[0010] 本发明原料丰富,方法简单,其提取物月季花总黄酮有效用于制备降糖药物,实现月季花提取物在制备降糖药物中的应用,开拓了月季花的药用价值(新用途),是中药上的创新。
具体实施方式 [0011] 以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。
[0012] 本发明在具体实施中,是由以下方法实现的:将月季花粉碎过60-80目筛成粗粉,用10倍粗粉重量的石油醚,回流萃取Ih脱脂,脱脂后,挥去石油醚至干燥,再加10倍粗粉重量的体积浓度为80%的乙醇浸泡0.5h,回流提取2次,每次lh,得提取液,过滤,减压回收乙醇至无醇味,浓缩,浓缩液加蒸馏水分散至相当于含生药量0.3g/ml的分散液(样品液),分散液上AB-8型大孔吸附树脂,先用2倍柱体积蒸馏水洗脱,弃去水液;用3倍柱体积的体积浓度为10%的乙醇洗脱,弃去洗脱液;再用5倍柱体积的体积浓度为80%的乙醇洗脱,收集体积浓度为80%的乙醇洗脱液,减压回收乙醇,浓缩至干粉,得月季花总黄酮,该提取物有效用于制备降糖药物,实现月季花提取物总黄酮在制备降糖药物中的应用,并经实验取得了满意的有益技术效果,有关实验资料如下:
对肾上腺素所致小鼠高血糖模型的影响
1.实验材料
1.1药物试剂
本发明月季花提取物,即月季花总黄酮。
[0013] 盐酸二甲双胍片,深圳海王药业有限公司,批号110523 ;盐酸肾上腺素,天津金耀氨基酸有限公司生产,批号20120308 ;四氧嘧啶,sigma公司;葡萄糖试剂盒,南京建成生物工程研究所,批号20111227 ;肝糖元试剂盒,南京建成生物工程研究所,批号20110901 ;硫酸,分析纯AR,上海振企化学试剂有限公司,批号20111025 ;氯化钠注射液,河南华利制药股份有限公司,10120404 ;甲醛溶液,分析纯AR,烟台市双双化工有限公司,20100721。
[0014] 1.2实验仪器
离心机,北京医疗仪器修理厂;可调式移液器,上海雷勃分析仪器有限公司;WFZUV2000型紫外可见分光光度计,尤尼卡(上海)仪器有限公司生产;FA(N)/JA(N)系列电子天平,上海民桥精密仪器有限公司生产;数显恒温水浴锅HH-4,金坛市杰瑞尔电器有限公司。
[0015] 1.3实验动物
昆明种小鼠,雄性,体重18~22g,河北省实验动物中心提供,合格证号:1102097 ;实验室合格证号SYXK (豫)2010-001。
[0016] 统计方法:数据分析用SPSS 17.0 for windows医用统计包进行数据资料的统计学处理,计量资料用平均数土标准差(x 土s)表示,各组间比较采用单因素方差分析,方差检验齐者用最小显著差数(LSD)法,方差不齐者用Games-Howell法检验,等级资料米用Ridit检验。
[0017] 2.实验方法与结果
取18-21g雄性小鼠50只,随机均分为5组,I组为空白组,其余4组均造肾上腺素高血糖模型;造模4组分别灌服大、小剂量月季花总黄酮(300mg/kg, 150mg/kg,配成浓度为15mg/ml, 7.5mg/ml,灌胃体积均为 0.2ml/10g), 二甲双胍(80mg/kg,用 0.5% CMC 配成 4mg/ml,0.2ml/10g)及同体积0.5% CMC,空白组给予同体积0.5% CMC ;每天给药I次,连续给药7天。于第7天给药Ih (禁食8h)后,各组均断尾取血测空腹血糖;然后除正常组外,其他11组小鼠均腹腔注射盐酸肾上腺素(0.2mg/kg),正常组腹腔注射同体积的生理盐水;分于给肾上腺素后30min、60min断尾取血,测血糖;血糖测定方法采用葡萄糖氧化酶法。然后处死小鼠,解剖,取同一部位肝组织测定肝糖原含量
表1对肾上腺素所致小鼠高血糖模型血糖值和肝糖原含量的影响(x 土 s,N=IO)
Figure CN103463244AD00051
**与模型组比p〈0.01
从上表可看出,各组小鼠空腹血糖水平无明显差异,说明分组均匀;与空白组比,模型组30min、60min血糖水平显著升高(P〈0.01 )、肝糖原含量显著降低(P〈0.01),说明造模成功;与模型组比,二甲双胍组可使小鼠30min血糖水平明显降低(P〈0.05),使小鼠60min血糖水平显著降低(P〈0.01);大剂量月季花总黄酮组可使小鼠30min血糖明显降低(P〈0.05)、60min血糖水平显著降低(P〈0.01),小剂量月季花总黄酮组可使小鼠60min血糖水平显著降低(P〈0.01),大、小剂量月季花总黄酮可使小鼠肝糖原含量明显升高(P〈0.05)。
[0018] 对四氧嘧啶致小鼠高血糖模型的影响 I材料与方法
1.1试剂
本发明月季花提取物,即月季花总黄酮。
[0019] 盐酸二甲双胍片,深圳海王药业有限公司,批号110523 ;盐酸肾上腺素,天津金耀氨基酸有限公司生产,批号20120308 ;四氧嘧啶,sigma公司;葡萄糖试剂盒,南京建成生物工程研究所,批号20111227 ;肝糖元试剂盒,南京建成生物工程研究所,批号20110901 ;硫酸,分析纯AR,上海振企化学试剂有限公司,批号20111025 ;氯化钠注射液,河南华利制药股份有限公司,10120404 ;甲醛溶液,分析纯AR,烟台市双双化工有限公司,20100721。[0020] 1.2 仪器
离心机,北京医疗仪器修理厂;可调式移液器,上海雷勃分析仪器有限公司;WFZUV2000型紫外可见分光光度计,尤尼卡(上海)仪器有限公司生产;FA(N)/JA(N)系列电子天平,上海民桥精密仪器有限公司生产;数显恒温水浴锅HH-4,金坛市杰瑞尔电器有限公司。
[0021] 1.3 动物
昆明种小鼠,雄性,体重18~22g,河北省实验动物中心提供,合格证号:1102098 ;实验室合格证号SYXK (豫)2010-001。
[0022] 统计方法:数据分析用SPSS 17.0 for windows医用统计包进行数据资料的统计
学处理,计量资料用平均数土标准差(x 土s)表示,各组间比较采用单因素方差分析,方
差检验齐者用最小显著差数(LSD)法,方差不齐者用Games-Howell法检验,等级资料米用Ridit检验。
[0023] 2实验方法与结果
取19-22 g雄性小鼠50只,随机分为5组,每组10只,其中I组为空白对照组,其余4组造四氧嘧啶高血糖模型。造模型4组小鼠分别灌服大、小剂量的月季花总黄酮(300mg/kg, 150mg/kg,配成浓度为15mg/ml, 7.5mg/ml,灌胃体积均为0.2ml/10g), 二甲双胍溶液(80mg/kg,用0.5% CMC配成4mg/ml,0.2ml/10g)及同体积0.5% CMC ;空白组灌服相同体积的0.5% CMC。每天给药I次,连续给药10天。最后一次于禁食8h灌药,灌药90min后,除空白组外,每组小鼠尾静脉注射(60mg/kg ;7.5mg/ml ; 0.08ml/10g)新配制的四氧卩密唳生理盐水溶液。注射72h后,摘眼球取血,分离血清,测血糖值。处死小鼠后,称取肝脏75mg,(按试剂盒说明)测各管OD值 。取胰腺,10%福尔马林液固定,作病理切片。结果见表2、3。
Figure CN103463244AD00061
从上表可看出,与空白对照组比,模型组血糖水平显著升高(Ρ〈0.01 )、肝糖原水平显著降低(Ρ〈0.01),说明造四氧嘧啶糖尿病模型成功。与模型组比,二甲双胍可显著降低模型小鼠空腹血糖水平(Ρ〈0.01),显著升高肝糖原水平(Ρ〈0.01);大、小剂量月季花总黄酮可显著降低模型小鼠空腹血糖水平(ρ〈0.01 ),显著升高肝糖原水平(Ρ〈0.01 )。
[0025] 对四氧嘧啶致小鼠高血糖模型胰腺病理的影响:空白组小鼠胰岛细胞体积大,胞浆丰富,细胞核稀疏;闰管细胞和胞心细胞正常。与空白组比,模型组小鼠胰岛细胞明显萎缩,胞浆减少,细胞核密集;闰管细胞和胞心细胞正常。与模型组小鼠比,二甲双胍组小鼠胰岛细胞体积有所增大,胞浆较丰富,但细胞核仍较密集;闰管细胞和胞心细胞正常。大剂量月季花总黄酮组小鼠胰岛细胞体积明显增大,胞浆丰富,细胞核较稀疏;闰管细胞和胞心细胞基本正常。小剂量月季花总黄酮组小鼠胰岛细胞体积明显增大,胞浆丰富,细胞核较稀疏;闰管细胞和胞心细胞正常。
[0026] 表3月季花总黄酮对四氧嘧啶致小鼠糖尿病模型胰脏组织的影响
Figure CN103463244AD00071
“-”:胰岛细胞体积大,胞浆丰富,细胞核稀疏正常胰岛细胞轻度萎缩,胞浆有所减少,细胞核较稀疏;“++”:胰岛细胞部分萎缩,胞浆减少,部分细胞核较密集;“+++” 胰岛细胞明显萎缩,胞浆明显减少,细胞核密集。
[0027] 从上表可看出,经Ridit检验,与空白对照组比模型组出现显著胰脏损伤(P〈0.01),说明四氧嘧啶造小鼠糖尿病模型成功;与模型组比,二甲双胍和大、小剂量月季花总黄酮均可显著减轻四氧嘧啶所致小鼠胰脏损伤的程度(P〈0.01)。
[0028] 对地塞米松所致小鼠糖耐量降低模型的影响 I实验材料
1.1试剂药品
本发明月季花提取物,即月季花总黄酮。
[0029] 盐酸二甲双胍片,深圳海王药业有限公司,批号110523 ;地塞米松磷酸钠注射液(dexamethasone, DX),广州市桥制药厂生产,批号120115 ;葡萄糖试剂盒,南京建成生物工程研究所,批号20111227 ;肝糖元试剂盒,南京建成生物工程研究所,批号20110901 ;硫酸,分析纯AR,上海振企化学试剂有限公司,批号20111025 ;氯化钠注射液,河南华利制药股份有限公司,10120404 ;甲醛溶液,分析纯AR,烟台市双双化工有限公司,20100721 ;
1.2仪器
离心机,北京医疗仪器修理厂;可调式移液器,上海雷勃分析仪器有限公司;WFZUV2000型紫外可见分光光度计,尤尼卡(上海)仪器有限公司生产;FA(N)/JA(N)系列电子天平,上海民桥精密仪器有限公司生产;数显恒温水浴锅HH-4,金坛市杰瑞尔电器有限公司。
[0030] 1.3 动物
昆明种小鼠,雄性,体重18~22g,河北省实验动物中心提供,合格证号:1102098 ;实验室合格证号SYXK (豫)2010-001。
[0031] 统计方法:数据分析用SPSS 17.0 for windows医用统计包进行数据资料的统计
学处理,计量资料用平均数土标准差C 土s)表示,各组间比较采用单因素方差分析,方
差检验齐者用最小显著差数(LSD)法,方差不齐者用Games-Howell法检验,等级资料米用Ridit检验。
[0032] 2.实验方法与结果
取体重20~22g小鼠50只,雌雄各半,随机均匀分为5组,其中I组为空白组,其余4组小鼠每天禁食12h后每鼠肌肉注射地塞米松生理盐水液2mg/kg造糖耐量降低模型,并于造模同时灌服大、小剂量月季花总黄酮(300mg/kg, 150mg/kg,配成浓度为15mg/ml, 7.5mg/ml,灌胃体积均为0.2ml/10g), 二甲双胍片混悬液(80mg/kg,用0.5 % CMC配成4mg/ml,0.2ml/10g)及同体积0.5% CMC ;空白对照组给同体积0.5% CMC ;每天给药I次,连续给药7天,于禁食后12h (末次注射地塞米松30min,灌药后lh),尾部取血测空腹血糖值(FBG),然后灌胃葡萄糖水溶液5g/kg,分别于灌糖水后30min、60min、120min尾部取血,测血清血糖水平,结果见表4。
[0033] 表4月季花总黄酮对地塞`米松所致糖耐量降低的影响(土s,N=10)
Figure CN103463244AD00091
从上表可以看出,各组空腹血糖无明显差异,说明分组均匀。与空白组比,模型组在30min、60min、120min血糖显著升高(P〈0.01),说明地塞米松造糖耐量降低模型成功。与模型组比,二甲双胍组可使模型小鼠30min、60min血糖水平显著降低(P〈0.01);大剂量月季花总黄酮可使模型小鼠30min、60min、120min血糖水平显著降低(P〈0.01),小剂量月季花总黄酮可使模型小鼠60min血糖水平明显降低(P〈0.05)。
[0034] 由上述实验资料清楚的表明,从月季花中提取的月季花总黄酮具有很好的降糖作用,有效用于制备降糖药物,实现月季花提取物总黄酮在制备降糖药物中的应用,实验中未发现有毒副作用,表明用药安全,开拓了月季花的药用价值以及月季花总黄酮的新用途,是降糖药物上的创新,有实际的应 用价值,经济和社会效益显著。

Claims (2)

1.一种从月季花中提取降糖物质的方法,其特征在于,将月季花粉碎过60-80目筛成粗粉,用10倍粗粉重量的石油醚,回流萃取Ih脱脂,脱脂后,挥去石油醚至干燥,再加10倍粗粉重量的体积浓度为80%的乙醇浸泡0.5h,回流提取2次,每次lh,得提取液,过滤,减压回收乙醇至无醇味,浓缩,浓缩液加蒸馏水分散至相当于含生药量0.3g/ml的分散液(样品液),分散液上AB-8型大孔吸附树脂,先用2倍柱体积蒸馏水洗脱,弃去水液;用3倍柱体积的体积浓度为10%的乙醇洗脱,弃去洗脱液;再用5倍柱体积的体积浓度为80%的乙醇洗脱,收集体积浓度为80%的乙醇洗脱液,减压回收乙醇,浓缩至干粉,得月季花总黄酮。
2.权利要求1所述方法制备的月季花总黄酮在制备降糖药物中的应用。
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