CN106963853B - 一种川射干总黄酮苷元提取物及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种川射干总黄酮苷元提取物，总黄酮苷元含量>50％w/w，射干苷元含量>18％w/w；其中射干苷的含量不超过2％w/w。本发明还提供了该提取物的制备方法。本发明川射干总黄酮苷元提取物制备工艺简单，制备的苷元提取物纯度高，药效试验证明，本发明川射干总黄酮苷元提取物有明显抗炎、镇痛作用，效果优于川射干总黄酮提取物。

Description

一种川射干总黄酮苷元提取物及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及一种川射干总黄酮苷元提取物，属药物领域。
背景技术
川射干为鸢尾科植物鸢尾Iris tectorum Maxim.的干燥根茎，为药典收载品种，具有清热解毒，祛痰，利咽。用于热毒痰火郁结，咽喉肿痛，痰涎壅盛，咳嗽气喘，其主要药效成分为其中的异黄酮成分。近年来，有报道川射干中异黄酮有抗病毒作用，如申请号为20051002635.9的专利申请公开了川射干总黄酮提取物在细胞水平下具有抗病毒的作用，并具有抗炎、解热、镇痛、止咳等作用。以川射干总黄酮提取物制备的川射干黄酮胶囊已获新药证书(国药证字Z 20140006)，功能主治为清热解毒，消肿利咽。用于治疗轻中度急性单纯性咽炎及轻度急性单纯性喉炎所致的咽喉肿痛、声音嘶哑、咳嗽等。川射干总黄酮提取物为川射干经乙醇提取，上D101大孔吸附树脂，乙醇洗脱而得到的川射干总黄酮部分，其总黄酮含量以射干苷(C22H22O11)计为55.0～65.0％，射干苷含量以干燥品计算，含射干苷(C22H22O11)不得少于20％。
射干苷元为射干苷的苷元，比射干苷更具广泛的药理作用。现代药理研究表明，射干苷元具有清除自由基、抗脂质过氧化损伤和降低血脂、防治动脉粥样硬化以及防治血管内皮细胞损伤作用，亦有对心肌梗死小鼠心肌有保护作用，还有抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、雌激素样作用等。
文献“川射干总异黄酮苷元有效部位的制备工艺研究”中对川射干的总黄酮苷元制备方法作了一些研究，其中基本流程为：取川射干饮片，加水20倍(第一次22倍)水煮提取3次，每次1h，合并滤液作为树脂上柱液。采用AB-8大孔吸附树脂富集总异黄酮，上柱吸附后依次用30％、40％、95％的乙醇溶液进行洗脱，合并30％、40％的乙醇洗脱液，调整乙醇浓度为40％，加浓盐酸成2％盐酸溶液，水浴回流水解10～12h，回收乙醇，上AB-8大孔吸附树脂除酸，其水解物与95％乙醇苷元洗脱物合并，回收乙醇，浓缩，减压真空干燥，即得。按上述的生产工艺制备川射干总异黄酮有效部位，各样品经TLC色谱鉴定，各样品均以苷元为主，仅40％乙醇洗脱物回收乙醇后的析出物中含有的苷稍多，但由于其总量并不大，因此不影响总异黄酮苷元的含量。其产品得率为3.59％，且本工艺最终所得产品不易干燥。其产品并非总黄酮苷元(还含有苷)，产品收率低(最大原因是饮片水煮，未提尽射干苷等成分)，产品不易干燥，且工艺非常复杂。
发明内容
本发明的技术方案是提供了一种川射干总黄酮苷元提取物。本发明的另一技术方案是提供了该提取物的制备方法和用途。
本发明提供了一种川射干总黄酮苷元提取物，总黄酮苷元含量>50％w/w，射干苷元含量>18％w/w；其中射干苷的含量不超过2％w/w。
进一步优选，所述的总黄酮苷元含量>60％w/w，射干苷元含量>25％w/w。
其中，提取物中含有射干苷元、鸢尾甲黄素B、鸢尾甲黄素A，其重量比为：射干苷元:鸢尾甲黄素B:鸢尾甲黄素A为10:0.8～1.2:1.6～2.5。
进一步优选地，所述的射干苷元、鸢尾甲黄素B、鸢尾甲黄素A的重量比为：10:1:2。
本发明还提供了一种制备所述的提取物的制备工艺，它包括下述步骤：
a、取川射干原生药粗粉，在强酸pH<1条件下，通过自然发酵或加热水解得到总黄酮苷元；
b、将a步骤制备的总黄酮苷元加入稀醇，醇浓度<50％；沉淀析出，即得本发明的川射干总黄酮苷元提取物。
本发明还提供了所述的提取物的制备工艺，它包括如下步骤：
a、取川射干原生药粗粉用50～80％乙醇提取，提取物进行酸水解；
b、将水解后的提取物溶于热的50％乙醇，冷却后析出总黄酮苷元沉淀，即得本发明川射干总黄酮苷元提取物。
本发明还提供了所述的提取物的制备工艺，它包括如下步骤：
a、取川射干原生药粗粉用50～80％乙醇提取，提取物进行酸水解；酸水解的pH值<1；
b、水解液上D101大孔吸附树脂柱或聚酰胺树脂柱，通过柱层析吸附川射干总黄酮苷元，然后乙醇洗脱得到总黄酮苷元提取物。
本发明还提供了所述的提取物的制备工艺，它包括如下步骤：
a、将川射干原生药粗粉用50～80％乙醇提取，提取液上D101大孔吸附树脂柱或聚酰胺树脂柱，通过柱层析吸附川射干总黄酮成分，然后乙醇洗脱得到总黄酮提取物；
b、提取物用含5％盐酸的50％乙醇酸水解，放置析出川射干总黄酮苷元，过滤，水洗至中性，干燥，得总黄酮苷元提取物。
本发明还提供了所述的提取物的制备工艺，它包括如下步骤：
a、将川射干总黄酮提取物用含5％HCl的50％乙醇进行酸水解，水解液放冷后析出川射干总黄酮苷元，过滤，水洗至中性，干燥，得总黄酮苷元提取物。
本发明还提供了川射干总黄酮苷元提取物在制备抗炎、镇痛的药物中的用途。
本发明川射干总黄酮苷元提取物制备工艺简单，制备的苷元提取物纯度高，药效试验证明，本发明川射干总黄酮苷元提取物有明显抗炎、镇痛作用，效果优于川射干总黄酮提取物。
附图说明
图1本发明川射干总黄酮苷元提取物紫外图
图2川射干总黄酮苷元提取物色谱图
具体实施方式
实施例1本发明川射干总黄酮苷元提取物的制备
取川射干原生药粗粉10kg，加入5％HCl水溶液10L，拌匀，密封，室温放置15天，置于100L搪瓷反应釜中，用95％乙醇40L加热回流提取2次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至10L，放置过夜，析出沉淀，过滤，水洗至中性。沉淀加热回流溶于5L95％乙醇中，冲入5L沸水中，放置过夜，析出沉淀，过滤，60℃减压干燥，得棕黄色干燥疏松粉末，即川射干总黄酮苷元提取物，收率6％，射干苷元含量20.56％，总黄酮苷元含量51.42％。
实施例2本发明川射干总黄酮苷元提取物的制备
取川射干原生药粗粉10kg，加入5％HCl水溶液10L，拌匀，密封，45℃条件下放置5天，置于100L搪瓷反应釜中，用95％乙醇40L加热回流提取2次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至10L，放置过夜，析出沉淀，过滤，水洗至中性。沉淀加热回流溶于5L95％乙醇中，冲入5L沸水中，放置过夜，析出沉淀，过滤，60℃减压干燥，得棕黄色干燥疏松粉末，即川射干总黄酮苷元提取物，收率7％，射干苷元含量21.25％，总黄酮苷元含量57.91％。
实施例3本发明川射干总黄酮苷元提取物的制备
取川射干原生药粗粉10kg，置于100L搪瓷反应釜中，加入5％HCl水溶液40L，加热回流水解10小时，过滤，药渣用95％乙醇40L加热回流提取2次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩至10L，放置过夜，析出沉淀，过滤，水洗至中性。沉淀加热回流溶于5L95％乙醇中，冲入5L沸水中，放置过夜，析出沉淀，过滤，60℃减压干燥，得棕黄色干燥疏松粉末，即川射干总黄酮苷元提取物，收率7.5％，射干苷元含量22.12％，总黄酮苷元含量53.38％。
实施例4本发明川射干总黄酮苷元提取物的制备
取川射干原生药粗粉10kg，置于100L搪瓷反应釜中，加入含5％HCl的80％乙醇40L，加热回流水解6小时，过滤，滤液减压浓缩至10L，放置过夜，析出沉淀，过滤，水洗至中性。沉淀加热回流溶于5L95％乙醇中，冲入5L沸水中，放置过夜，析出沉淀，过滤，60℃减压干燥，得棕黄色干燥疏松粉末，即川射干总黄酮苷元提取物，收率8％，射干苷元含量22.51％，总黄酮苷元含量54.78％。
实施例5本发明川射干总黄酮苷元提取物的制备
取川射干原生药粗粉10kg，用50～80％乙醇加热回流提取3次，每次1.5小时，每次溶媒用量为40L，过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏。将浸膏置于搪瓷反应釜中，用含5％HCl的50％乙醇20L，加热回流水解6小时，趁热过滤，放置过夜，析出沉淀，过滤，水洗至中性，60℃减压干燥，得棕黄色干燥疏松粉末，即川射干总黄酮苷元提取物，收率9.5％，射干苷元含量24.34％，总黄酮苷元含量55.12％。
实施例6本发明川射干总黄酮苷元提取物的制备
取川射干原生药粗粉10kg，用50～80％乙醇加热回流提取3次，每次1.5小时，每次溶媒用量为40L，过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏。将浸膏置于100L搪瓷反应釜中，用含5％HCl的50％乙醇20L，加热回流水解6小时，趁热过滤，滤液冲入80L沸水中，搅匀，用1mol/LNaOH水溶液调节pH值7～8，待水溶液温度降至约50℃时，上已处理好的D101型大孔吸附树脂柱(树脂用量为15kg)，先用水洗至中性，再用80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收得浸膏，60℃减压干燥，得棕黄色干燥疏松粉末，即川射干总黄酮苷元提取物，收率10％，射干苷元含量25.15％，总黄酮苷元含量62.51％。实施例7本发明川射干总黄酮苷元提取物的制备
取川射干原生药粗粉10kg，用50～80％乙醇加热回流提取3次，每次1.5小时，每次溶媒用量为40L，过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏。将浸膏置于100L搪瓷反应釜中，用含5％HCl的50％乙醇20L，加热回流水解6小时，趁热过滤，滤液冲入80L沸水中，搅匀，用1mol/LNaOH水溶液调节pH值7～8，待水溶液温度降至约50℃时，上已处理好的聚酰胺树脂柱(60～100目，树脂用量为15kg)，先用水洗至中性，再用80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收得浸膏，60℃减压干燥，得棕黄色干燥疏松粉末，即川射干总黄酮苷元提取物，收率9.5％，射干苷元含量24.78％，总黄酮苷元含量61.56％。实施例8本发明川射干总黄酮苷元提取物的制备
取川射干原生药粗粉10kg，用50～80％乙醇加热回流提取3次，每次1.5小时，每次溶媒用量为40L，过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏。用200L沸水溶解浸膏，待水溶液温度降至约50℃时，上已处理好的D101型大孔吸附树脂柱(树脂用量为30kg)，用70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收得浸膏。将浸膏置于100L搪瓷反应釜中，用含5％HCl的50％乙醇20L，加热回流水解6小时，趁热过滤，放置过夜，析出沉淀，过滤，水洗至中性，60℃减压干燥，得棕黄色干燥疏松粉末，即川射干总黄酮苷元提取物，收率10.5％，射干苷元含量25.48％，总黄酮苷元含量63.45％。
实施例9本发明川射干总黄酮苷元提取物的制备
取川射干原生药粗粉10kg，用50～80％乙醇加热回流提取3次，每次1.5小时，每次溶媒用量为40L，过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏。用200L沸水溶解浸膏，待水溶液温度降至约50℃时，上已处理好的聚酰胺树脂柱(60～100目，树脂用量为30kg)，用70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收得浸膏。将浸膏置于100L搪瓷反应釜中，用含5％HCl的50％乙醇20L，加热回流水解6小时，趁热过滤，放置过夜，析出沉淀，过滤，水洗至中性，60℃减压干燥，得棕黄色干燥疏松粉末，即川射干总黄酮苷元提取物，收率10％，射干苷元含量25.37％，总黄酮苷元含量62.60％。
实施例10本发明川射干总黄酮苷元提取物的制备
取川射干总黄酮提取物1.5kg，用含5％HCl的50％乙醇20L，加热回流水解6小时，趁热过滤，放置过夜，析出沉淀，过滤，水洗至中性，60℃减压干燥，得棕黄色干燥疏松粉末，即川射干总黄酮苷元提取物，收率55％，射干苷元含量25.57％，总黄酮苷元含量63.17％。
其中，所述的川射干总黄酮提取物的制备方法为：取川射干饮片最粗粉300kg，用4倍于药材量的70％乙醇加热回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.2(50℃)的浸膏，以20倍于药材量的沸水溶解浸膏，待其水温降至约50℃时，通过已处理好的D101型大孔吸附树脂柱，用水洗涤大孔树脂柱至糖检查为负反应，再用4倍于树脂量的80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液至黄酮检查为负反应，滤过，60℃减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.2(50℃)的浸膏，60℃减压干燥，粉碎，过60目筛，即得川射干总黄酮(约36～45kg)提取物。
实施例11各种剂型药物的制备
1、川射干总黄酮苷元注射液的制备
川射干总黄酮苷元在水中溶解度极小，故不能只用水作为溶媒，应添加增溶剂、助溶剂。通过比较聚乙二醇200、聚乙二醇400、甘油、丙二醇、吐温80、司盘等溶媒，优选聚乙二醇400作为助溶剂，通过试验，聚乙二醇400的体积浓度为50％。
注射液：称取川射干总黄酮苷元25g，加入500ml聚乙二醇400，加热溶解，待溶解完全后加入注射用水至1000ml，用G4垂熔玻沙漏斗过滤后，滤液以常规方式封装于安瓿中(2ml/支)，并按常规方式作灭菌处理。所得注射液为黄色的澄明液体。
2、川射干总黄酮苷元冻干粉针的制备
川射干总黄酮苷元冻干粉针的制备：应优选良好的增溶剂、助溶剂及填充剂。通过比较聚乙二醇1000、聚乙二醇1500、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、甘露醇、山梨醇，优选甘露醇、山梨醇作为助溶剂和填充剂，甘露醇、山梨醇的重量浓度各为25％。
冻干粉针：称取川射干总黄酮苷元25g、甘露醇12.5g、山梨醇12.5g，加热溶于注射用水800ml中，待溶解完全后，放冷至室温，加注射用水至1000ml，用G4垂熔玻沙漏斗过滤后，滤液以常规方式分装于安瓿中，低温冷冻干燥约26小时后无菌熔封即得。
3、口服制剂的制备
包括:片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、滴丸和微丸、各种溶液剂等。
散剂的制备：作为固体口服制剂散剂是各种剂型的基础，称取川射干总黄酮苷元，粉碎成细粉(指全部能通过五号筛，含有能通过六号筛不少于95％的粉末)，过筛，加入适量辅料如硬脂酸镁等增加其流动性，分装，即得。
颗粒剂的制备：把药物与辅料粉碎后进行充分的混合，然后加入适当的粘合剂进行制粒，干燥，整粒，分装，即可。
胶囊剂的制备：胶囊剂分为软胶囊和硬胶囊，硬胶囊是采用药物的粉末或者是颗粒进行装胶囊制得，软胶囊是把药液密封于球形或软质胶囊材料中。采用合适的材料干明胶：甘油：水＝＝1:0.4:1混合均匀，调配好作为软胶囊的囊壁，川射干总黄酮苷元加聚乙二醇400和聚乙二醇4000各适量，加热熔化，搅拌均匀，然后采用滴制法或压制法制备软胶囊。另外，可以制成肠溶胶囊。另外，按照常规制剂的程序，选用不同的辅料如：乙烯-醋酸乙烯共聚物(EVA)、聚丙烯等，作为缓控释可以制成缓释、控释的制剂骨架。如将川射干总黄酮苷元制成微囊，然后装入普通空胶囊中，可以成为按照需要进行药物释放的产品。
滴丸、含化滴丸、微丸：滴丸的优点是发挥药效迅速，生物利用度高，副作用小，增加药物稳定性，生产设备简单，操作容易，重量差异小，成本低无粉尘，根据需要可以制成内服、外用、缓释、控释或局部治疗等多种类型的滴丸剂。取药物基质，如：聚乙二醇类、硬脂酸加热后，将药物与基质混合均匀，置于滴丸机中保温，然后滴制到适当的冷凝剂中盛碗，洗除冷凝剂干燥整理，经过质检后包装。
片剂：包括普通压制片、咀嚼片、泡腾片、多层片、缓释片、控释片，包衣片(糖衣片、薄膜衣片、肠溶衣片)、分散片、口含片、舌下片等。
川射干总黄酮苷元50g，淀粉、糖粉950g，将以上原辅料进行粉碎、过筛、混合均匀，加入适量的粘合剂形成软材，过筛，成为颗粒，干燥整粒，加入崩解剂、润滑剂充分混合，然后压片，包衣，质检，包装。
缓释片控释片：将川射干总黄酮苷元50g，加入骨架剂聚乙烯、聚丙烯混合均匀，压片，按照普通的制剂方法，制成缓释片1000片。药物缓缓释放，在药物释放完后，骨架随着粪便排出体外。
口服溶液：称取川射干总黄酮苷元、聚乙二醇400、水、糖精钠各适量，加热溶解，过滤，分装于10ml口服液瓶中，封盖，灭菌，即得
4、外用制剂的制备：
包括有：外用散剂、喷雾剂、滴鼻剂、滴耳剂、软膏剂、搽剂、凝胶剂、栓剂等。
外用散剂的原辅料粉碎成最细粉(指全部能通过六号筛，含有能通过七号筛不少于95％的粉末)。
喷雾剂、滴鼻剂、滴耳剂：将川射干总黄酮苷元20g，聚乙二醇400、水各适量，加热溶解，过滤，将滤液灭菌后无菌操作分装入瓶即可。喷雾剂按常规制备方法制备。
软膏剂、搽剂：把川射干总黄酮苷元40g粉碎成最细粉，采用水溶性基质聚乙二醇600和聚乙二醇2000为基质960g(配比为4:6)加热混合均匀后，质检分装，可以得到有一定稠度的半固体外用制剂。
凝胶剂：把川射干总黄酮苷元40g粉碎，溶解在水中，把水溶性基质卡波姆制成水凝胶基质，然后与药物混合加水到1000mI，质检分装，可以得到透明或半透明的凝胶剂。
栓剂：把川射干总黄酮苷元40g粉碎成最细粉，采用水溶性基质聚乙二醇400和聚乙二醇4000为基质960g(配比为4:6)加热混合均匀后，倒入涂有液体石蜡的模具中，冷却成型，质检包装，可以得到符合规定的融变时限的固体外用制剂。
实施例12本发明川射干总黄酮苷元提取物质量标准
【性状】本品为棕黄色至棕褐色粉末；气微辛，味苦。
本品溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷，不溶于水。
【鉴别】(1)取本品约20mg，置于50ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为A液。精密吸取A液1ml于50ml容量瓶中，用无水乙醇稀释并定容至刻度摇匀，作为B液。B液照紫外-可见分光光度法(中国药典2015版四部0401)，以无水乙醇为空白，在200～400nm波长范围内扫描，记录光谱图，在267±2nm波长处应有最大吸收。
(2)取(1)项下的A液，另取射干苷元对照品，加乙醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层层析法(中国药典2015版四部0502)试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(沸程60～90℃)—丙酮(2：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【检查】炽灼残渣取本品1g，依法检查(中国药典2015版四部0841)，炽灼残渣不得过2％。
重金属取炽灼残渣项下遗留残渣，依法检查(中国药典2015版四部0821)，含重金属不得过百万分之二十。
射干苷取本品适量，加无水乙醇制成每1ml含10mg的溶液，作为供试品溶液。另取射干苷对照品适量，加70％乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2015版四部0502)试验，吸取上述两种溶液各5μl,，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷—甲醇—甲酸(10：1：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，不显相同颜色的斑点。
【干燥失重】取本品，在105℃干燥至恒重，减少重量不得超过2％(中国药典2015版四部0831)。
【含量测定】总黄酮苷元
对照品溶液的制备：精密称定在105℃干燥至恒重的射干苷元对照品12.5mg，置于50ml容量瓶中，加无水乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。每1ml含射干苷元0.25mg。
供试品溶液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的本品约20mg，置于50ml容量瓶中，加入无水乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。每1ml含本品0.4mg。
测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液1ml，分别置于50ml容量瓶中，用无水乙醇稀释并定容至刻度，摇匀。按紫外-可见分光光度法(中国药典2015版四部0401)，在267nm波长处，以无水乙醇为空白，分别测定对照品与供试品溶液的吸收度，计算，即得。
本品按干燥品计算含总黄酮苷元以射干苷元(C16H12O6)计算，不得少于50％。见图1
射干苷元照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2mol/l磷酸二氢钠水溶液(42:58)为流动相；检测波长为265nm。理论板数按射干苷元峰计算，应不低于3000。
对照品溶液的制备取在105℃干燥至恒重的射干苷元对照品适量，加70％甲醇制成每1ml含0.025mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加无水乙醇适量，超声处理(功率250W，频率50kHz)10分钟，放冷，加入无水乙醇至刻度，摇匀，精密量取1ml溶液于10ml容量瓶中，加70％的甲醇溶液至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算含射干苷元(C16H12O6)不得少于18％。见图2，图2为供试品1(川射干总黄酮苷元提取物)的色谱图，目的是测定样品中射干苷元含量，并未对鸢尾甲黄素B、鸢尾甲黄素A含量单独进行测定(上述专利内容中涉及射干苷元、鸢尾甲黄素B、鸢尾甲黄素A三者量的比值是由面积归一化法，按峰面积计算得到)。
【贮藏】密封，置干燥阴凉处。
以下通过具体药效试验证明本发明的有益效果。
试验例1本发明药物抗炎作用——对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响
取小鼠80只，随机分为8组，分别灌胃本发明药物(由实施例9制备)0.125、0.25、0.5g/kg，川射干黄酮提取物0.25g、0.5、1.0g/kg，醋酸泼尼松0.02g/kg及空白对照组灌胃等体积的1％西黄蓍胶溶液，以上各组均在给药1小时后，分别给每只小鼠尾静脉iv1％伊文思蓝溶液0.1ml/10g·bow，同时ip0.5％冰醋酸0.4ml/只，20分钟后处死动物，剪开腹部皮肤肌肉，用5ml生理盐水冲洗腹腔，收集洗脱液，加生理盐水至10ml。以生理盐水为空白，在580nm处测定吸收度，结果见表1。
表1本发明药物对小鼠腹腔通透性的影响(
Figure BDA0001267416680000091
n＝10)
Figure BDA0001267416680000092
实验结果显示：本发明药物对腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高有非常显著的抑制作用，与对照组相比较有极显著统计学差异(P＜0.001)，表明本发明药物有非常显著的抑制此种炎症的作用，其作用比川射干总黄酮提取物强。
试验例2本发明药物抗炎作用——对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响
取小鼠80只，随机分为8组，分别灌胃给本发明药物0.125、0.25、0.5g/kg，川射干黄酮提取物0.25g、0.5、1.0g/kg，醋酸泼尼松0.02g/kg及空白对照组灌胃等体积的1％西黄蓍胶溶液，以上各组均在给药30分钟后，每只鼠左耳涂布二甲苯0.05ml致炎剂，隔4小时后，将小鼠处死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径8mm打孔器分别在同一部位打下圆形耳片，称重，以每鼠左耳片减去右耳片重量为肿胀度，结果见表2。
表2本发明药物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(
Figure BDA0001267416680000101
n＝10)
Figure BDA0001267416680000102
实验结果显示：本发明药物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有显著的抑制作用，与对照组比较有显著差异(P＜0.01)，表明有显著的抗炎消肿作用，其作用明显强于川射干总黄酮提取物。
试例3本发明药物抗炎作用——对角叉菜胶致大鼠脚肿胀的影响
取雄性大鼠80只，随机分为8组，测定每鼠右后足体积作为基数，分别灌胃给本发明药物0.0625、0.125、0.25g/kg，川射干黄酮提取物0.125g、0.25、0.5g/kg，醋酸泼尼松0.02g/kg及等体积生理盐水，以上各组均在给药60分钟后，每只大鼠右后足sc1％角叉菜胶溶液0.2ml，分别于1、2、4、6小时测定各大鼠右后足体积1次，计算鼠足肿胀百分率[(给药后值-给药前值)/给药前值]。结果见表3。
表3本发明药物对大鼠脚肿胀的影响(
Figure BDA0001267416680000111
n＝10)
Figure BDA0001267416680000112
注：*：P＜0.05**：P＜0.01***：P＜0.001与对照组比较
从表3中可以看出本发明药物对角叉菜胶致大鼠脚肿胀有抑制作用，与对照组比较有显著差异(P＜0.01)，表明有显著的抗炎消肿作用，其作用比川射干总黄酮提取物强。
试例4本发明药物抗炎作用——对小鼠棉球肉芽组织增生的影响
取小鼠80只，随机分为8组，在消毒情况下，在每鼠胸部切一小口，将5mg高压灭菌棉球从切口处植入皮下腋窝部，随即缝合皮肤。从手术当日开始给药，8个给药组分别ig本发明药物0.125、0.25、0.5g/kg，川射干黄酮提取物0.25g、0.5、1.0g/kg，醋酸泼尼松0.02g/kg及等体积生理盐水，每日给药一次，连续给药6天，第7天试验结束处死动物，剥离肉芽组织，用滤纸吸干，放入小瓶中，置干燥箱干燥后称重。所得结果以埋入前棉球重量为基准，以实验结束后干燥棉球重量的增加来表示(mg/10g·bw计算)。结果如表4。
表4本发明药物对小鼠棉球肉芽肿的影响(
Figure BDA0001267416680000121
n＝10)
Figure BDA0001267416680000122
注：*：P＜0.05，**：P＜0.01，***：P＜0.001与对照组比较
从表4中可以看出本发明药物对小鼠棉球肉芽肿有抑制作用，与对照组比较有显著差异(P＜0.01)，表明有显著的抗炎消肿作用，其作用比川射干总黄酮提取物强。
试例5本发明药物镇痛作用——对醋酸致小鼠扭体反应
取雄性大鼠80只，随机分为8组，分别灌胃给本发明药物0.125、0.25、0.5g/kg，川射干黄酮提取物0.25g、0.5、1.0g/kg，醋酸泼尼松0.02g/kg及等体积生理盐水，给药60分钟后每鼠ip 0.5％HAc 0.2ml/只，记录10分钟内扭体次数。将结果进行比较统计。结果如表5。
表5本发明药物对小鼠的镇痛作用(扭体法，
Figure BDA0001267416680000123
n＝10)
Figure BDA0001267416680000124
注：*：P＜0.05**：P＜0.01***：P＜0.001(与对照组相比较)
从表5中可以看出本发明药物对醋酸致小鼠疼痛的扭体次数有抑制作用，与对照组比较有显著差异(P＜0.01)，表明有显著的镇痛作用。其作用比川射干总黄酮提取物强。
试例6本发明药物镇痛作用——对热板致小鼠疼痛作用
取小鼠80只，随机分为8组。分别灌胃给本发明药物0.125、0.25、0.5g/kg，川射干黄酮提取物0.25g、0.5、1.0g/kg，醋酸泼尼松0.02g/kg及等体积生理盐水，给药30分钟后将小鼠放入预先加热至55℃的金属板上，记录自小鼠投入热板至出现舔后足的反应时间作为痛阈值，结果见表6
表6本发明药物对小鼠的镇痛作用(热板法，
Figure BDA0001267416680000131
n＝10)
Figure BDA0001267416680000132
从表6中可以看出本发明药物对热板法致小鼠疼痛的痛阈值均有提高与对照组比较有显著差异(P＜0.01)，表明有显著的镇痛作用，其作用比川射干总黄酮提取物强。

Claims (5)

1.一种川射干总黄酮苷元提取物的制备工艺，它的步骤如下：
a、取川射干原生药粗粉10kg，用50~80%乙醇加热回流提取3次，每次1.5小时，每次溶媒用量为40L，过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏；用200L沸水溶解浸膏，待水溶液温度降至50℃时，上已处理好的树脂用量为30kg 的D101型大孔吸附树脂柱或者上已处理好的60~100目、树脂用量为30kg的聚酰胺树脂柱；用70%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收得浸膏；
b、将浸膏置于100L搪瓷反应釜中，用含5%HCl的50%乙醇20L，加热回流水解6小时，趁热过滤，放置过夜，析出沉淀，过滤，水洗至中性，60℃减压干燥，得棕黄色干燥疏松粉末，即川射干总黄酮苷元提取物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述总黄酮苷元提取物中，总黄酮苷元含量>50%w/w，射干苷元含量>18% w/w；其中射干苷的含量不超过2% w/w。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述总黄酮苷元提取物中，总黄酮苷元含量>60%w/w，射干苷元含量>25% w/w。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述总黄酮苷元提取物中含有射干苷元、鸢尾甲黄素B、鸢尾甲黄素A，其重量比为：射干苷元:鸢尾甲黄素B:鸢尾甲黄素A为10:0.8～1.2:1.6～2.5。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述的射干苷元、鸢尾甲黄素B、鸢尾甲黄素A的重量比为：10:1:2。
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