CN101411779A - 一种治疗肝癌的中药有效部位组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗肝癌的中药有效部位组合物,该组合物含有由中药龙葵中提取的龙葵总生物碱和景天科红景天属多年生草本植物红景天中提取的红景天苷,该药物组合物对肝癌有显著的治疗作用,并有保肝护肝的功效。该有效部位组合中龙葵提取物的龙葵总生物碱含量大于50%、红景天提取物中红景天苷的含量大于50%。本发明的药物组合中含龙葵总生物碱含量大于50%的龙葵提取物2~6重量份、红景天苷含量大于50%的红景天提取物1~3重量份。其中优选比例为龙葵总碱含量大于50%的龙葵提取物2重量份、红景天苷含量大于50%的红景天提取物1重量份。本发明还公开了该药物组合的制备方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种治疗肝癌的中药有效部位组合物,该组合物含有由中药龙葵中提取的龙葵总生物碱和景天科红景天属多年生草本植物红景天中提取的红景天苷,该药物组合物对肝癌有显著的治疗作用,并有保肝护肝的功效。本发明还提供了该药物组合物的制备方法。属中药技术领域。
背景技术
原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,是我国位居第二的癌症,专家预测未来几年肝癌发病率将最高。目前,全世界每年死于肝癌的患者约26万人,其中我国占42.5%。
本发明所述的龙葵总生物碱来源于单味药材——龙葵。龙葵为茄科茄属植物,一至数年生草本植物,性寒,味苦,微甘,具有小毒,归肺、胃、膀胱经,有清热解毒、活血散瘀、利水消肿、止咳祛痰的功效。龙葵可全草入药,可内服及外用。作为传统中药的龙葵近年来得到了国内外学者的广泛关注,海内外药学家在原有的中医药理论的基础上对其单味药的化学成分进行了进一步提纯分析,进行了大量的研究,获得了较为客观的信息,尤其是在抗肿瘤方面的研究,无论是单味药还是其复方制剂在基础和临床医学方面作了大量的工作。龙葵全草含苷类甾体生物碱、龙葵多糖、矿物质、维生素、色素、氨基酸等,龙葵浆果中的提取物中还含有酯、羧基化合物、甾醇、酚性化合物(其主要成分为黄色不饱和酯),此外还含有皂苷。而对肿瘤治疗起关键作用的化学成分主要为龙葵总生物碱(包括澳洲茄碱、澳洲茄边碱等),其次为多糖。
本发明所述的红景天系景天科红景天属(RhodiolaL.)多年生草本植物,一般生长在高寒、干燥、缺氧、强紫外线照射、昼夜温差大的高海拔地带,具有极强的环境适应性和顽强的生命力。红景天以根及根茎,或以全草入药,至今已有1000多年的药用历史。红景天主要有效成分为毛柳苷(红景天苷,salidroside)及苷元酪醇(tyrosol)。红景天苷是一种重要的活性成分,常以它的含量来评价红景天属植物药用价值。具有抗病毒、抗肿瘤、抗肝纤维化、抗疲劳、增强免疫力等特殊作用。
我们结合文献资料,运用现代科学方法,在制备工艺、质量标准、药效、毒理及稳定性等方面进行了研究,以龙葵总生物碱和红景天苷为原料制成药物制剂,用于肝癌的治疗,同时具有保肝护肝的作用。目前,尚未见有关龙葵总生物碱及其与红景天苷配伍的复方制剂应用于治疗肝癌药物方面的报道,国内尚没有有关龙葵总生物碱的单方及复方制剂在SFDA注册,国内外专利(中国专利、日本专利、韩国专利、欧洲专利、美国专利等)均未出现与本发明相近的专利保护内容。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗肝癌疗效显著、毒副作用小、使用安全的药物组合及其制备方法。该药物组合以龙葵总生物碱含量大于50%的龙葵提取物与红景天苷含量大于50%的红景天提取物为原料。
本发明是通过如下技术方案实现的:
①本发明的龙葵提取物中,龙葵总生物碱含量为50.0%以上。
龙葵总生物碱的提取步骤如下:
取龙葵全草与/或果实,加入50%~90%乙醇溶液提取2~3次,每次6~8倍量,回收乙醇,浓缩至相对密度1.25,浓缩液中加入2~4倍量的0.1mol/l酸性溶液,充分搅拌,冷藏,过滤,滤渣用盐酸溶液洗涤1~3次,合并滤液和洗涤液,以弱极性或中等极性树脂吸附。树脂吸附后先用水冲洗树脂柱/床至流出液近中性;再以0.1mol/l碱性溶液冲洗树脂柱/床至流出液近无色,再以含醇量30%~40%乙醇液冲洗树脂柱/床至流出液近无色。弃去。再以50~90%乙醇进行洗脱,至洗脱液显无色,收集洗脱液,回收乙醇至无醇味,以0.5~1.5mol/l的碱性溶液调PH值至8~10,静置,冷藏,收集沉淀。自然晾干,即可得龙葵总碱含量大于50%的龙葵提取物。
以上所述的碱性溶液选自氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾、氢氧化镁和氨水溶液;所述的酸性溶液选自醋酸、盐酸、硫酸和柠檬酸溶液;所述的洗脱用有机溶剂为甲醇、乙醇、正丁醇、氯仿、苯的一项或者两项或者三项以任意比例形成的混合相。
②本发明的红景天提取物中,红景天苷的含量大于50%。
红景天苷的制备:
将红景天原料适度粉碎,用5~20倍量的50~80%乙醇溶液作溶剂,热回流(50~90℃)1~3次,每次1~3小时,回收乙醇;提取液加适量纯化水稀释,静置,合并提取液,滤过,适当浓缩;浓缩液通过大孔吸附树脂吸附,用蒸馏水洗至流出液无色,稀乙醇洗脱,收集洗脱液,减压回收乙醇至无醇味;收集洗脱液,浓缩,干燥,得红景天提取物,其中红景天苷含量不低于10%,再经两次大孔树脂吸附处理,可获得红景天苷含量不低于50%的红景天提取物。
③将上述龙葵提取物与红景天提取物以规定比例混合均匀,加入适当辅料,即得本发明所述药物组合。
本发明的药物组合中含龙葵总生物碱含量大于50%的龙葵提取物2~6重量份、红景天苷含量大于50%的红景天提取物1~2重量份。其中优选比例为龙葵总生物碱含量大于50%的龙葵提取物2重量份、红景天苷含量大于50%的红景天提取物1重量份。
按药剂学方法,可以将本发明的龙葵总生物碱含量大于50%的龙葵提取物与红景天苷含量大于50%的红景天提取物加入适当辅料制备成多种临床药物剂型作为抗肝癌药物,包括口服制剂或非肠道给药的剂型。所述口服制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、混悬剂、口服液体制剂等;所述非肠道给药剂型为注射液、输液剂、冻干注射剂等。
本发明的抗肝癌药物组合制剂中的辅料是指常规的赋形剂,如:溶剂、崩解剂、矫味剂、粘合剂、填充剂、助悬剂、着色剂、防腐剂等。
本发明的龙葵总生物碱含量大于50%的龙葵提取物与红景天苷含量大于50%的红景天提取物药物组合及其药物制剂具有治疗肝癌的作用,是通过以下的药效学实验得到证实的。以下试验例中药物组合物中含龙葵总生物碱含量大于50%的龙葵提取物2重量份、红景天苷含量大于50%的红景天提取物1重量份。
实验例1 龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合对Hep肝癌移植性肿瘤的影响
实验方法:无菌条件下抽取ICR小鼠腹腔内生长8天的腹水癌细胞悬液,癌细胞悬液和灭菌生理盐水按1:3稀释,取ICR小鼠70只,♀♂各半,体重18~22g,接种稀释后的癌细胞悬液0.2ml于腋部皮下。24h后随机分为7组,即模型组、5-Fu组(25mg/kg)、华蟾素组(3g/kg)和注射用龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合小、中、大剂量组(1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg)及口服组(2mg/kg),每组10只,分别静脉注射给予相应药物(模型组注射等容积生理盐水,口服组灌胃给药),给药容积均为10ml/kg。给药8天后处死小鼠,剥取肿瘤,称重,按下面公式计算抑瘤率。实验重复2次。
实验结果:小鼠接种Hep肝癌肿瘤后,4天皮下即可触到肿瘤,8天后解剖肿瘤平均重量均大于1g,注射用龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合三个剂量组小鼠肿瘤浸润范围均小于模型组,瘤体易剥离,肿瘤重量明显减轻(P<0.01)。注射用龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合对小鼠体重增长率、胸腺指数、脾指数无明显影响。注射用龙葵总碱静脉注射三个剂量组的抑瘤率均大于口服组。结果见表1~5。
表1 注射用龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合对Hep肝癌移植性实体瘤抑瘤率的影响(x±S,n=10)
注:和模型组相比较,*P<0.05,**P<0.01。
表2 对Hep肝癌移植性实体瘤小鼠体重增长率的影响(第一次实验)(x±S,n=10)
注:和模型组相比较,**P<0.01。
表3 对Hep肝癌移植性实体瘤小鼠胸腺指数、脾指数的影响(第一次实验)(x±S)
注:和模型组相比较,**P<0.01。
表4 对Hep肝癌移植性实体瘤小鼠体重增长率的影响(第二次实验)(x±S,n=10)
注:和模型组相比较,**P<0.01。
表5 对Hep肝癌移植性实体瘤小鼠胸腺指数、脾指数的影响(第二次实验)(x±S)
注:和模型组相比较,**P<0.01。
实验例2 龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合对Walker-256移植性鼠肝癌的影响
实验方法:将模型大鼠随机分为5组,每组10只。即模型组、华蟾素组(25mg/kg)和注射用龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合小、中、大剂量组(1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg)。各组大鼠分别给予相应受试药物,给药容积为10ml/kg,连续给药10天。给药10日后,脱颈椎处死大鼠,记录重量大小,按照下面公式计算肿瘤体积。
实验结果:注射用龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合中、大剂量组的肿瘤体积和模型组相比,显著缩小,具有统计学意义(P<0.05)。结果见表6。
表6 对Walker-256移植性鼠肝癌肿瘤体积的影响(x±S)
注:和模型组相比较,**P<0.01。
实验例3 龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合对荷Hep肝癌小鼠白细胞、血小板的影响
实验方法:无菌条件下抽取ICR小鼠腹腔内生长8天的腹水癌细胞悬液,癌细胞悬液和灭菌生理盐水按1:3稀释,取ICR小鼠70只,接种稀释后的癌细胞悬液0.2ml于腋部皮下。24h后随机分为7组,即模型组、5-Fu组(25mg/kg)、华蟾素组(3g/kg)和注射用龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合小、中、大剂量组(1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg)及口服组(2mg/kg),每组10只,分别静脉注射给予相应药物(模型组注射等容积生理盐水,口服组灌胃给药),给药容积均为10ml/kg。给药8天后处死小鼠,剥取肿瘤,称重,按下面公式计算抑瘤率。
实验结果:小鼠接种Hep肝癌肿瘤后,4天皮下即可触到肿瘤,8天后解剖肿瘤平均重量均大于1g,注射用龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合三个剂量组小鼠肿瘤浸润范围均小于模型组,瘤体易剥离,肿瘤重量明显减轻(P<0.01)。注射用龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合对小鼠白细胞、血小板、体重增长率、胸腺指数、脾指数无明显影响。注射用龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合静脉注射三个剂量组的抑瘤率均大于口服组。结果见表7~10。
表7 注射用龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合对Hep肝癌移植性实体瘤抑瘤率的影响(x±S,n=10)
注:和模型组相比较,*P<0.05,**P<0.01。
表8 对Hep肝癌移植性实体瘤小鼠体重增长率的影响(第一次实验)(x±S,n=10)
注:和模型组相比较,**P<0.01。
表9 对Hep肝癌移植性实体瘤小鼠胸腺指数、脾指数的影响(第一次实验)(x±S)
注:和模型组相比较,**P<0.01。
表10 对Hep肝癌移植性实体瘤小鼠白细胞、血小板计数的影响(x±S)
注:和模型组相比较,**P<0.01。
具体实施方式
实施例1 龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合的制备方法
方法(1):
①龙葵总生物碱的提取:
取龙葵全草与/或果实加入80%乙醇溶液提取3次,每次8倍量,回收乙醇,浓缩至相对密度1.25,浓缩液中加入3倍量的0.1mol/l盐酸溶液,充分搅拌,冷藏,过滤,滤渣用盐酸溶液洗涤2次,合并滤液和洗涤液,以弱极性或中等极性树脂吸附。树脂吸附后先用水冲洗树脂柱/床至流出液近中性;再以0.1mol/l氨水溶液冲洗树脂柱/床至流出液近无色,再以含醇量20%乙醇液冲洗树脂柱/床至流出液近无色。弃去。再以70%乙醇进行洗脱,至洗脱液显无色,收集洗脱液,回收乙醇至无醇味,以1.0mol/l的氢氧化钠溶液调PH值至9,静置,冷藏,收集沉淀。自然晾干,即可得龙葵总生物碱含量大于50%的龙葵提取物提取物。
以上所述的碱性溶液选自氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾、氢氧化镁和氨水溶液;所述的酸性溶液选自醋酸、盐酸、硫酸和柠檬酸溶液;所述的洗脱用有机溶剂为甲醇、乙醇、正丁醇、氯仿、苯的一项或者两项或者三项以任意比例形成的混合相。
②红景天苷的制备:
将红景天原料适度粉碎,用10倍量的70%乙醇溶液作溶剂,热回流(50~90℃)2次,每次2小时,回收乙醇;提取液加适量纯化水稀释,静置,合并提取液,滤过,适当浓缩;浓缩液通过大孔吸附树脂吸附,用蒸馏水洗至流出液无色,稀乙醇洗脱,收集洗脱液,减压回收乙醇至无醇味;收集洗脱液,浓缩,干燥,得红景天提取物,其中红景天苷含量不低于10%,再经两次大孔树脂吸附处理,可获得红景天苷含量不低于50%的红景天提取物。
③将上述龙葵提取物与红景天提取物以2:1比例混合均匀,加入适当辅料,即得本发明所述有效部位药物组合(1)。
方法(2):
①龙葵总生物碱的提取:
取龙葵全草与/或果实加入70%乙醇溶液提取3次,每次7倍量,回收乙醇,浓缩至相对密度1.15,浓缩液中加入2.5倍量的0.1mol/l盐酸溶液,充分搅拌,冷藏,过滤,滤渣用盐酸溶液洗涤3次,合并滤液和洗涤液,以弱极性或中等极性树脂吸附。树脂吸附后先用水冲洗树脂柱/床至流出液近中性;再以0.1mol/l氢氧化钠溶液冲洗树脂柱/床至流出液近无色,再以含醇量30%乙醇液冲洗树脂柱/床至流出液近无色。弃去。再以75%乙醇进行洗脱,至洗脱液显无色,收集洗脱液,回收乙醇至无醇味,以1.0mol/l的氢氧化钠溶液调PH值至9,静置,冷藏,收集沉淀。自然晾干,即可得龙葵总生物碱含量大于50%的龙葵提取物提取物。
以上所述的碱性溶液选自氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾、氢氧化镁和氨水溶液;所述的酸性溶液选自醋酸、盐酸、硫酸和柠檬酸溶液;所述的洗脱用有机溶剂为甲醇、乙醇、正丁醇、氯仿、苯的一项或者两项或者三项以任意比例形成的混合相。
②红景天苷的制备:
将红景天原料适度粉碎,用15倍量的75%乙醇溶液作溶剂,热回流(50~90℃)3次,每次3小时,回收乙醇;提取液加适量纯化水稀释,静置,合并提取液,滤过,适当浓缩;浓缩液通过大孔吸附树脂吸附,用蒸馏水洗至流出液无色,稀乙醇洗脱,收集洗脱液,减压回收乙醇至无醇味;收集洗脱液,浓缩,干燥,得红景天提取物,其中红景天苷含量不低于10%,再经两次大孔树脂吸附处理,可获得红景天苷含量不低于50%的红景天提取物。
③将上述龙葵提取物与红景天提取物以3:1比例混合均匀,加入适当辅料,即得本发明所述有效部位药物组合(2)。
实施例2 注射剂的制备
①水针剂的制备:龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合的制备同实施例1,称取药物组合物,加入适量的注射用水溶解,用稀盐酸调节PH值至6~7,充分搅拌,加入一定活性炭,继续搅拌半个小时,过滤,过0.22μm滤膜后,灌装即可。
②冻干粉针剂的制备:龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合的制备同实施例 1,称取药物组合物,加注射用水80℃~90℃保温搅拌,完全溶解后,加入适量的甘露醇,搅拌使溶解;调节pH值至6~7,无菌精滤,定量分装于管制玻璃瓶中,冷冻干燥,即得。
③输液剂的制备:龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合的制备同实施例1,称取药物组合物,用适量生理盐水溶解后,以稀盐酸调节PH值至6~7,充分搅拌,加入一定量活性炭,继续搅拌均匀,过滤,过0.22μm滤膜后,加入适量足量生理盐水,搅拌灌装得输液剂。
实施例3 固体制剂的制备
①片剂的制备:龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合的制备同实施例1,称取药物组合物,适量药用淀粉及其他辅料,混合均匀,用淀粉浆制粒,干燥、整粒后,压片,即得。
②胶囊剂的制备:龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合的制备同实施例1,称取药物组合物,适量药用淀粉及其他辅料,混合均匀,装入胶囊,即得。
③散剂的制备:龙葵总生物碱与红景天苷有效部位组合的制备同实施例1,称取药物组合物及适当辅料,混合均匀,分装,即得。
Claims (10)
1、一种药物组合,其特征在于由龙葵提取物与红景天提取物组成。
2、根据权利要求1所述的药物组合物,是一种药物有效部位的组合物,即龙葵提取物中的龙葵总生物碱和红景天提取物中的红景天苷。
3、根据权利要求1所述的药物组合物,龙葵提取物中龙葵总生物碱的含量大于50%、红景天提取物中的红景天苷含量大于50%。
4、根据权利要求1所述的药物组合物,其制备方法如下
①龙葵总生物碱的提取步骤如下:
取龙葵全草与/或果实,加入50%~90%乙醇溶液提取2~3次,每次6~8倍量,回收乙醇,浓缩至相对密度1.25,浓缩液中加入2~4倍量的0.1mol/l酸性溶液,充分搅拌,冷藏,过滤,滤渣用盐酸溶液洗涤1~3次,合并滤液和洗涤液,以弱极性或中等极性树脂吸附。树脂吸附后先用水冲洗树脂柱/床至流出液近中性;再以0.1mol/l碱性溶液冲洗树脂柱/床至流出液近无色,再以含醇量10%~40%乙醇液冲洗树脂柱/床至流出液近无色。弃去。再以50~90%乙醇进行洗脱,至洗脱液显无色,收集洗脱液,回收乙醇至无醇味,以0.5~1.5mol/l的碱性溶液调PH值至8~10,静置,冷藏,收集沉淀。自然晾干,即可得龙葵总碱含量大于50%的龙葵提取物。
②红景天苷的制备:
将红景天原料适度粉碎,用5~20倍量的50~80%乙醇溶液作溶剂,热回流(50~90℃)1~3次,每次1~3小时,回收乙醇;提取液加适量纯化水稀释,静置,合并提取液,滤过,适当浓缩;浓缩液通过大孔吸附树脂吸附,用蒸馏水洗至流出液无色,稀乙醇洗脱,收集洗脱液,减压回收乙醇至无醇味;收集洗脱液,浓缩,干燥,得红景天提取物,其中红景天苷含量不低于10%,再经两次大孔树脂吸附处理,可获得红景天苷含量不低于50%的红景天提取物。
③将上述龙葵提取物与红景天提取物以规定比例混合均匀,加入适当辅料,即得本发明所述药物组合。
以上所述的碱性溶液选自氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾、氢氧化镁和氨水溶液;所述的酸性溶液选自醋酸、盐酸、硫酸和柠檬酸溶液;所述的洗脱用有机溶剂为甲醇、乙醇、正丁醇、氯仿、苯的一项或者两项或者三项以任意比例形成的混合相。
5、根据权利要求1所述的药物组合物,其特征在于含龙葵总生物碱含量大于50%的龙葵提取物2~6重量份、红景天苷含量大于50%的红景天提取物1~3重量份。
6、根据权利要求1所述的药物组合物,其特征在于优选比例为龙葵总碱含量大于50%的龙葵提取物2重量份、红景天苷含量大于50%的红景天提取物1重量份。
7、根据权利要求1和4所述的药物组合,其特征在于该药物组合和一种或几种药用赋形剂,或可与该药物组合组方的其他药物制备成抗肿瘤的口服药物制剂或非肠道药物制剂。
8、根据权利要求7所述的药物制剂,其特征在于含有1%~99%的龙葵总生物碱含量大于50%的龙葵提取物与红景天苷含量大于50%的红景天提取物混合物和99%~1%的药用赋形剂(包括其它配伍用的药物),优选含有45%~95%的龙葵总生物碱含量大于50%的龙葵提取物与红景天苷含量大于50%的红景天提取物混合物和55%~5%的药用赋形剂(包括其它配伍用的药物),最好含有75%~90%的龙葵总生物碱含量大于50%的龙葵提取物与红景天苷含量大于50%的红景天提取物混合物和25%~10%的药用赋形剂(包括其它配伍用的药物)。
9、根据权利要求4所述的药物组合物,其特征在于所述口服药物制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、混悬剂、口服液体制剂等;所述非肠道给药剂型为注射液、输液剂、冻干注射剂等;所述药用赋形剂为溶剂、崩解剂、矫味剂、粘合剂、着色剂、防腐剂等;所述的其它配伍用的药物,指的是以有效剂量的含龙葵总生物碱不少于50%的龙葵提取物与红景天苷含量大于50%的红景天提取物药物组合为一定的药物原料,再配伍其它已允许合用的中药或化学药品。
10、根据权利要求1所述的药物组合物,用于肝癌的治疗,及保肝护肝的使用。
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