CN101125163A - 一种具有抗肿瘤功效的植物提取物及制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗肿瘤疗效显著、使用安全、副作用低的龙葵全草与/或果实或者茄科植物黄果茄或者澳洲茄鲜果提取物及其制剂及其制备方法。该澳洲茄碱提取物中,澳洲茄碱含量为90%以上。本发明的澳洲茄碱提取物药物制剂含有1%~99%的澳洲茄碱含量为90%~99%的澳洲茄碱提取物和99%~1%的药用赋形剂(包括其它配伍用的药物),优选含有25%~85%的澳洲茄碱含量为90%~99%的澳洲茄碱提取物和75%~15%的药用赋形剂(包括其它配伍用的药物),最好含有50%~65%的澳洲茄碱含量为90%~99%的澳洲茄碱提取物和35%~50%的药用赋形剂(包括其它配伍用的药物)。药理实验结果表明,该提取物具有较好的抑瘤作用,使用安全。本发明工艺先进,有效成分含量高,工业实用性强,成本相对较低。
Description
技术领域
本发明关于用于治疗肿瘤的龙葵全草与/或果实或者黄果茄或者澳洲茄鲜果的澳洲茄碱提取物及制剂,属于中药领域。
背景技术
现代社会癌症已成为威胁人类生命健康的主要问题之一,世界卫生组织(WHO)报告表明,根据目前癌症的发病趋势,2020年全世界癌症发病率将比现在增加50%,全球每年新增癌症患者人数将达到1500万人。医疗界迫切需求安全有效的癌症治疗药物。
澳洲茄碱在很多茄科茄属的植物里都有发现,传统上这一个属里的很多植物都被用来治疗癌症,如龙葵、白英,后来人们根据活性追踪的方法,发现该类植物中的甾族糖苷化合物具有很好的抗癌效果,而进一步的试验证明,其中澳洲茄碱(solasonine)具有十分显著的细胞毒性。
本发明所述的澳洲茄碱(Solasonine)是从茄科植物龙葵全草与/果实或者茄科植物黄果茄或者澳洲茄鲜果中提取分离纯化而获得。目前,尚未见澳洲茄碱应用于在抗肿瘤药物方面的报道,国内尚没有澳洲茄碱的制剂在SFDA注册,国内外专利(中国专利、日本专利、韩国专利、欧洲专利、美国专利等)均未出现与本发明相近的专利保护内容。
澳洲茄碱(Solasonine),结构式如下:
发明内容
本发明的一个目的是提供一种抗肿瘤疗效显著、使用安全、副作用低的龙葵全草与/果实或者茄科植物黄果茄或者澳洲茄鲜果提取物及其制剂。
本发明是通过如下技术方案实现的:
本发明中澳洲茄碱提取物中,澳洲茄碱含量为90.0%以上。
澳洲茄碱提取物提取步骤如下:
取龙葵全草与/或果实或者茄科植物黄果茄或者澳洲茄鲜果,加入50%~90%乙醇溶液提取2~3次,每次6~8倍量,回收乙醇,浓缩至相对密度1.25,浓缩液中加入2~4倍量的0.1mol/l酸性溶液,充分搅拌,冷藏,过滤,滤渣用盐酸溶液洗涤1~3次,合并滤液和洗涤液,以弱极性或中等极性树脂吸附。树脂吸附后先用水冲洗树脂柱/床至流出液近中性;再以0.1mol/l碱性溶液冲洗树脂柱/床至流出液近无色,再以含醇量30%~40%乙醇液冲洗树脂柱/床至流出液近无色。弃去。再以50~80%乙醇进行洗脱,至洗脱液显无色,收集洗脱液,回收乙醇至无醇味,以0.5~1.5mol/l的碱性溶液调PH值至8~10,静置,冷藏,收集沉淀。自然晾干,即可得龙葵总碱提取物。再通过下述两种方法均可得到澳洲茄碱含量在90%以上的澳洲茄碱提取物:
方法1:取沉淀干燥后,以20~25倍量无水乙醇溶解,加入层析硅胶,拌匀,蒸干,取拌样后的硅胶,柱层析分离。层析柱用有机溶剂湿法装柱,有机溶剂洗脱,分次收集洗脱液,薄层层析检测,合并薄层层析检测样品斑点位置一致的洗脱液,回收有机溶剂,蒸干,即得。
方法2:取沉淀干燥后,以20~25倍量无水乙醇溶解,离心,将上清液加入约3~6倍量弱极性有机溶剂,放置片刻后,离心,将上清液回收至干,重结晶2~3次,即得。
以上所述的碱性溶液选自氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾、氢氧化镁和氨水溶液;所述的酸性溶液选自醋酸、盐酸、硫酸和柠檬酸溶液;所述的方法1洗脱用有机溶剂为甲醇、无水乙醇、正丁醇、氯仿、苯的一项或者两项或者三项以任意比例形成的混合相;所述的方法2用有机溶剂为甲醇、无水乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、氯仿、苯的一项或者两项或者三项以任意比例形成的混合相。
本发明的药物制剂含有1%~99%的澳洲茄碱含量为90%~99%的澳洲茄碱提取物和99%~1%的药用赋形剂(包括其它配伍用的药物),优选含有25%~85%的澳洲茄碱含量为90%~99%的澳洲茄碱提取物和75%~15%的药用赋形剂(包括其它配伍用的药物),最好含有50%~65%的澳洲茄碱含量为90%~99%的澳洲茄碱提取物和35%~50%的药用赋形剂(包括其它配伍用的药物)。
本发明的人临床口服、直肠及胃肠道给药安全有效剂量:澳洲茄碱含量为90%~99%的澳洲茄碱提取物0.4~50mg/kg体重/天。
本发明的人临床注射安全有效剂量:澳洲茄碱含量为90%~99%的澳洲茄碱提取物0.04~5mg/kg体重/天。
按药剂学方法,可以将本发明的澳洲茄碱提取物制备成多种临床药物剂型作为抗肿瘤药物,包括口服制剂或非肠道给药的剂型。所述口服制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、混悬剂、口服液体制剂等;所述非肠道给药剂型为注射液、输液剂、冻干注射剂、注射乳剂、气雾剂、栓剂等。
本发明的抗肿瘤药物中的辅料是指常规的赋形剂,如:溶剂、崩解剂、矫味剂、粘合剂、着色剂、防腐剂等。本发明抗肿瘤药物中的其它配伍用的药物,指的是以有效剂量的澳洲茄碱提取物为一定的药物原料,再配伍其它已允许合用的中药或化学药品。
本发明的澳洲茄碱提取物药物制剂具有抗肿瘤作用且使用安全,是通过以下的药理药效学试验得到证实的。
实验例1 澳洲茄碱对S180肉瘤移植性肿瘤抑瘤率的影响
实验方法:无菌条件下抽取KM小鼠腹腔内生长8天的腹水癌细胞悬液,癌细胞悬液和灭菌生理盐水按1∶3稀释,取KM小鼠50只,接种稀释后的癌细胞悬液0.2ml于腋部皮下。24h后随机分为7组,即模型组、5-Fu组(25mg/kg)和澳洲茄碱1、2、3组(1mg/kg、4mg/kg、16mg/kg),每组10只,分别灌胃给予相应药物(模型组灌胃给予等容积蒸馏水),8天后处死小鼠,剥取肿瘤,称重,按下面公式计算抑瘤率。
实验结果:小鼠接种S180肿瘤后,3天皮下即可触到肿瘤,8天后解剖肿瘤平均重量均大于1g,澳洲茄碱5个剂量组小鼠肿瘤浸润范围均小于模型组,瘤体易剥离,肿瘤重量明显减轻(P<0.05,P<0.01)。结果见表1。
组别 | 剂量(mg/kg) | 瘤重(g) | 抑瘤率(%) |
模型组5-Fu组澳洲茄碱1组澳洲茄碱2组澳洲茄碱3组 | -251416 | 1.52±0.350.57±0.32**1.10±0.23**0.91±0.33*0.60±0.27** | - |
注:和模型组相比较,**P<0.01。
实验例2 澳洲茄碱对Hep肝癌移植性肿瘤抑瘤率的影响
实验方法:无菌条件下抽取KM小鼠腹腔内生长8天的腹水癌细胞悬液,癌细胞悬液和灭菌生理盐水按1∶3稀释,取KM小鼠50只,接种稀释后的癌细胞悬液0.2ml于腋部皮下。24h后随机分为5组,即模型组、5-Fu组(25mg/kg)和澳洲茄碱低、中、高剂量组(2mg/kg、4mg/kg、8mg/kg),分别灌胃给予相应药物(模型组灌胃给予等容积蒸馏水),8天后处死小鼠,剥取肿瘤,称重,按下面公式计算抑瘤率。
实验结果:小鼠接种Hep肝癌肿瘤后,四天时皮下即可触到肿瘤,8天后解剖肿瘤平均重量均大于1g,澳洲茄碱三个剂量组小鼠肿瘤浸润范围均小于模型组,瘤体易剥离,肿瘤重量明显减轻(P<0.05,0.01)。抑瘤率均大于30%。结果见表2。
表2 澳洲茄碱对Hep移植性实体瘤抑瘤率的影响
组别 | 剂量(mg/kg) | 动物数(n) | 瘤重(g) | 抑瘤率(%) |
模型组5-Fu组澳洲茄碱低剂量组澳洲茄碱中剂量组澳洲茄碱高剂量组 | -25248 | 1010101010 | 1.27±0.250.58±0.25**0.84±0.32**0.73±0.29**0.56±0.24** | - |
注:和模型组相比较,*P<0.05,**P<0.01。
实验例3 澳洲茄碱急性毒性实验
经急性毒性试验:澳洲茄碱一次灌胃给药的小鼠LD50为1.500g/kg,该剂量为临床成人一日口服剂量的3750倍(临床成人一日口服剂量为0.4mg/kg/日)。其LD1剂量为1.03g/kg,折合到人为103mg/kg。
实验例4 注射液澳洲茄碱对S180肉瘤移植性肿瘤抑瘤率的影响
实验方法:无菌条件下抽取KM小鼠腹腔内生长8天的腹水癌细胞悬液,癌细胞悬液和灭菌生理盐水按1∶3稀释,取KM小鼠50只,接种稀释后的癌细胞悬液0.2ml于腋部皮下。24h后随机分为7组,即模型组、5-Fu组(25mg/kg)和澳洲茄碱1、2、3组(0.05mg/kg、0.2mg/kg、0.8mg/kg),每组10只,分别静脉注射给予相应药物(模型组注射给予等容积生理盐水),8天后处死小鼠,剥取肿瘤,称重,按下面公式计算抑瘤率。
实验结果:小鼠接种S180肿瘤后,3天皮下即可触到肿瘤,8天后解剖肿瘤平均重量均大于1g,澳洲茄碱5个剂量组小鼠肿瘤浸润范围均小于模型组,瘤体易剥离,肿瘤重量明显减轻(P<0.01)。结果见表1。
组别 | 剂量(mg/kg) | 瘤重(g) | 抑瘤率(%) |
模型组5-Fu组澳洲茄碱1组澳洲茄碱2组澳洲茄碱3组 | -250.050.20.8 | 1.42±0.360.63±0.51**0.96±0.38**0.82±0.29**0.66±0.33** | - |
注:和模型组相比较,*P<0.05,**P<0.01。
实验例5 注射用澳洲茄碱对Hep肝癌移植性肿瘤抑瘤率的影响
实验方法:无菌条件下抽取KM小鼠腹腔内生长8天的腹水癌细胞悬液,癌细胞悬液和灭菌生理盐水按1∶3稀释,取KM小鼠50只,接种稀释后的癌细胞悬液0.2ml于腋部皮下。24h后随机分为5组,即模型组、5-Fu组(25mg/kg)和澳洲茄碱低、中、高剂量组(0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.4mg/kg),分别静脉注射给予相应药物(模型组注射给予等容积生理盐水),8天后处死小鼠,剥取肿瘤,称重,按下面公式计算抑瘤率。
实验结果:小鼠接种Hep肝癌肿瘤后,四天时皮下即可触到肿瘤,8天后解剖肿瘤平均重量均大于1g,澳洲茄碱三个剂量组小鼠肿瘤浸润范围均小于模型组,瘤体易剥离,肿瘤重量明显减轻(P<0.05,0.01)。抑瘤率均大于30%。
结果见表2。
组别 | 剂量(mg/kg) | 动物数(n) | 瘤重(g) | 抑瘤率(%) |
模型组 | - | 10 | 1.47±0.33 | - |
5-Fu组澳洲茄碱低剂量组澳洲茄碱中剂量组澳洲茄碱高剂量组 | 250.10.20.4 | 10101010 | 0.72±0.38**0.94±0.28**0.84±0.23**0.69±0.25** |
注:和模型组相比较,*P<0.05,**P<0.01。
实验例6注射用澳洲茄碱急性毒性试验
经急性毒性试验:注射用澳洲茄碱一次静脉注射给药的小鼠LD50为142.5mg/kg,该剂量为临床成人一日剂量的7125倍(临床成人一日静脉注射剂量为0.04mg/kg/日)。其LD1剂量为90mg/kg,折合到人为9mg/kg。
具体实施方式
实施例1 澳洲茄碱提取物制备方法
取龙葵全草与/或果实或者茄科植物黄果茄或者澳洲茄鲜果,加入50%~90%乙醇溶液提取2~3次,每次6~8倍量,回收乙醇,浓缩至相对密度1.25,浓缩液中加入2~4倍量的0.1mol/l酸性溶液,充分搅拌,冷藏,过滤,滤渣用盐酸溶液洗涤1~3次,合并滤液和洗涤液,以弱极性或中等极性树脂吸附。树脂吸附后先用水冲洗树脂柱/床至流出液近中性;再以0.1mol/l碱性溶液冲洗树脂柱/床至流出液近无色,再以含醇量30%~40%乙醇液冲洗树脂柱/床至流出液近无色。弃去。再以50~80%乙醇进行洗脱,至洗脱液显无色,收集洗脱液,回收乙醇至无醇味,以0.5~1.5mol/l的碱性溶液调PH值至8~10,静置,冷藏,收集沉淀。自然晾干,即可得龙葵总碱提取物。再通过下述两种方法均可得到澳洲茄碱含量在90%以上的澳洲茄碱提取物:
方法1:取沉淀干燥后,以20~25倍量无水乙醇溶解,加入层析硅胶,拌匀,蒸干,取拌样后的硅胶,柱层析分离。层析柱用有机溶剂湿法装柱,有机溶剂洗脱,分次收集洗脱液,薄层层析检测,合并薄层层析检测样品斑点位置一致的洗脱液,回收有机溶剂,蒸干,即得。
方法2:取沉淀干燥后,以20~25倍量无水乙醇溶解,离心,将上清液加入约3~6倍量弱极性有机溶剂,放置片刻后,离心,将上清液回收至干,重结晶2~3次,即得。
以上所述的碱性溶液选自氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾、氢氧化镁和氨水溶液;所述的酸性溶液选自醋酸、盐酸、硫酸和柠檬酸溶液;所述的柱层析洗脱用有机溶剂为甲醇、无水乙醇、正丁醇、氯仿、苯的一项或者两项或者三项以任意比例形成的混合相。
实施例2 片剂的制备
称取澳洲茄碱含量在90%以上的澳洲茄碱提取物1000g,药用淀粉1000g,混合均匀,用淀粉浆制粒,干燥、整粒后,压片,每片含澳洲茄碱100mg。
实施例3 胶囊剂的制备
称取澳洲茄碱含量在90%以上的澳洲茄碱提取物1000g,药用淀粉1000g,混合均匀,装入2号胶囊,每粒含澳洲茄碱100mg。
实施例4 颗粒剂的制备
称取澳洲茄碱含量在90%以上的澳洲茄碱提取物1000g,淀粉1000g,糖粉500g,混合均匀,用适量乙醇制粒,干燥,整粒,分装,即得。
实施例5 散剂的制备
称取澳洲茄碱含量在90%以上的澳洲茄碱提取物1000g,淀粉1000g,混合均匀,分装,即得。
实施例6 丸剂的制备
称取400g聚乙二醇4000,溶化,加入澳洲茄碱含量在90%以上的澳洲茄碱提取物100g,搅拌均匀,倾入保温管中,恒温,使药液在80~90℃下滴入冷却过的液体石蜡中,滴完后,将药丸倒在滤纸上吸干石蜡油,即得。
实施例7 注射剂的制备
称取澳洲茄碱含量在90%以上的澳洲茄碱提取物10g,加入至10000ml注射用水中用0.1mol/l的盐酸调节PH值至6~7,搅拌30分钟,加入一定活性炭,继续搅拌半个小时,过滤,过0.22μm滤膜后,灌装即可。
实施例8 输液剂的制备
称取澳洲茄碱含量在90%以上的澳洲茄碱提取物10g,用适量生理盐水溶解后,以0.1mol/l的盐酸调节PH值至6~7,搅拌30分钟,加入一定活性炭,继续搅拌半个小时,过滤,过0.22μm滤膜后,加入适量生理盐水至50L,搅拌灌装即得每50ml含澳洲茄碱提取物10mg得输液剂。
实施例9 冻干注射剂的制备
称取澳洲茄碱含量在90%以上的澳洲茄碱提取物10g,加1000ml注射用水,80℃~90℃保温搅拌,完全溶解后,加入100g的甘露醇,搅拌使溶解;调节pH值至6~7,无菌精滤,定量分装于管制玻璃瓶中,冷冻干燥,即得。
Claims (10)
1.一种澳洲茄碱提取物,其特征在于由龙葵全草与/或果实或者黄果茄或者澳洲茄鲜果中提取、分离、纯化而得,其步骤如下:
取龙葵全草与/或果实或者茄科植物黄果茄或者澳洲茄鲜果,加入50%~90%乙醇溶液提取2~3次,每次6~8倍量,回收乙醇,浓缩至相对密度1.25,浓缩液中加入2~4倍量的0.1mol/l酸性溶液,充分搅拌,冷藏,过滤,滤渣用盐酸溶液洗涤1~3次,合并滤液和洗涤液,以弱极性或中等极性树脂吸附。树脂吸附后先用水冲洗树脂柱/床至流出液近中性;再以0.1mol/l碱性溶液冲洗树脂柱/床至流出液近无色,再以含醇量30%~40%乙醇液冲洗树脂柱/床至流出液近无色。弃去。再以50~80%乙醇进行洗脱,至洗脱液显无色,收集洗脱液,回收乙醇至无醇味,以0.5~1.5mol/l的碱性溶液调PH值至8~10,静置,冷藏,收集沉淀。自然晾干,即可得龙葵总碱提取物。再通过下述两种方法均可得到澳洲茄碱含量在90%以上的澳洲茄碱提取物:
方法1:取沉淀干燥后,以20~25倍量无水乙醇溶解,加入层析硅胶,拌匀,蒸干,取拌样后的硅胶,柱层析分离。层析柱用有机溶剂湿法装柱,有机溶剂洗脱,分次收集洗脱液,薄层层析检测,合并薄层层析检测样品斑点位置一致的洗脱液,回收有机溶剂,蒸干,即得。
方法2:取沉淀干燥后,以20~25倍量无水乙醇溶解,离心,将上清液加入约3~6倍量弱极性有机溶剂,放置片刻后,离心,将上清液回收至干,重结晶2~3次,即得。
以上所述的碱性溶液选自氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾、氢氧化镁和氨水溶液;所述的酸性溶液选自醋酸、盐酸、硫酸和柠檬酸溶液;所述的柱层析洗脱用有机溶剂为甲醇、无水乙醇、正丁醇、氯仿、苯的一项或者两项或者三项以任意比例形成的混合相。
2.根据权利要求1所述的一种澳洲茄碱提取物,其特征在于该提取物中澳洲茄碱含量为90.0%以上。
3.根据权利要求1和2所述的一种澳洲茄碱提取物,其特征在于该提取物和一种或几种药用赋形剂,或可与澳洲茄碱提取物组方的其他药物制备成抗肿瘤的口服药物制剂或非肠道药物制剂。
4.根据权利要求3所述的药物制剂,其特征在于含有1%~99%的澳洲茄碱含量为90%~99%的澳洲茄碱提取物和99%~1%的药用赋形剂(包括其它配伍用的药物)。
5.根据权利要求4所述的药物制剂,其特征在于含有25%~85%的澳洲茄碱含量为90%~99%的澳洲茄碱提取物和75%~15%的药用赋形剂(包括其它配伍用的药物)。
6.根据权利要求5所述的药物制剂,其特征在于含有50%~65%的澳洲茄碱含量为90%~99%的澳洲茄碱提取物和35%~50%的药用赋形剂(包括其它配伍用的药物)。
7.根据权利要求3所述的药物组合物,其特征在于所述口服药物制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、混悬剂、口服液体制剂等;所述非肠道给药剂型为注射液、输液剂、冻干注射剂、注射乳剂、气雾剂、栓剂等;所述药用赋形剂为溶剂、崩解剂、矫味剂、粘合剂、着色剂、防腐剂等;所述的其它配伍用的药物,指的是以有效剂量的澳洲茄碱提取物为一定的药物原料,再配伍其它已允许合用的中药或化学药品。
8.本发明用于抗肿瘤药物的制备。
9.根据权利要求8的用途,其特征在于澳洲茄碱含量为90%~99%的澳洲茄碱提取物对人临床口服、直肠及胃肠外给药安全有效剂量为0.4~50mg/kg体重/天;根据权利要求8的用途,其特征在于澳洲茄碱含量为90%~99%的澳洲茄碱提取物对人临床注射给药安全有效剂量为0.04~5mg/kg体重/天。
10.根据权利要求8的用途,其特征在于所述的肿瘤细胞是指人小细胞肺癌、人乳腺癌细胞、人胃癌细胞、人肝癌细胞、人结肠癌细胞、人直肠癌细胞、人宫颈癌细胞、人黑色素瘤细胞、早幼粒白血病细胞、肉瘤180、肝癌腹水型、小鼠宫颈癌-14或艾氏腹水癌。
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2006
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20080220 |