CN102935104B - 朝鲜槐总黄酮提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种朝鲜槐总黄酮提取物及其制备方法和应用，它可以通过这样的方法制得，该方法包括以下步骤：用提取溶媒提取朝鲜槐的心材、根皮、茎皮、枝皮、叶、叶梗、花、果实和种子；过滤该提取液并浓缩；浓缩液通过大孔吸附树脂，以不同浓度的甲醇或乙醇水溶液洗脱；收集洗脱液并浓缩至干，获得朝鲜槐总黄酮提取物。按此方法获得的朝鲜槐总黄酮提取物的总异黄酮含量为15%～90%，且含1～15%的鸢尾苷和6～57%的Saikoisoflavonoside A。该朝鲜槐总黄酮提取物具有雌激素样作用，可用于制备雌激素类药物或保健食品，用来预防或治疗乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、骨质疏松、更年期综合症。

Description

朝鲜槐总黄酮提取物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于医药技术领域。涉及朝鲜槐总黄酮的制备方法及其应用，具体涉及朝鲜槐总黄酮的制备方法和在制备雌激素类药物或保健食品中的应用。

背景技术

朝鲜槐（Maackia amurensis Rupr. et Maxim.）又名山槐、高丽槐、怀槐，为豆科马鞍树属植物。朝鲜槐全株含多种黄酮类成分化合物芒柄花黄素（formoononetin）、染料木素（genistein）、阿夫罗摩辛（afromosin）、大豆黄素（afromosin）、鸢尾苷元、葛花亭等及其苷类，是少数几种含4种异黄酮（植物雌激素）的植物之一。

流行病学研究发现，女性乳腺癌发生率与其膳食中植物雌激素成分的含量相关。亚洲地区居民习惯食用含异黄酮较多的豆腐等大豆食品（富含异黄酮类成分），这些地区的乳腺癌发生率较低。而当植物雌激素高摄入地区的日本居民移居到低摄入地区的美国后，随着他们在东道国居住时间延长，其乳腺癌发生率也逐渐增加，可见异黄酮类植物雌激素对改善女性健康状况，提高生活质量具有非常重要的作用。研究发现，异黄酮具有弱雌激素活性，可与雌激素受体结合，发挥雌激素样或抗雌激素活性，表现出对人体雌激素水平的双向调节作用。尽管异黄酮类植物雌激素比内源性或合成性激素作用小，但在适量浓度下可仅与常见于前列腺、骨和血管组织的β-雌激素受体结合，产生有益作用，而不与主要分布于乳腺、子宫和卵巢中的α-雌激素受体结合，因此对乳腺和卵巢几无不良影响。

现代研究证实，朝鲜槐中提取得到的异黄酮类化合物具有弱雌激素样作用，对于预防和治疗乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、改善骨质疏松和改善妇女更年期症状等均有一定的作用。虽有报道，主要起生理活性的是植物中的异黄酮苷元，而异黄酮苷则需要在肠道菌群的作用下，脱掉糖苷而成为具有异黄酮苷元后，再经过不同的活化代谢途径，来发挥雌激素或抗雌激素样作用。但朝鲜槐主要含有异黄酮苷类（约占药材重量的7%），而异黄酮苷元不足1%，因此发明人比较了朝鲜槐总黄酮提取物及其水解后所得苷元提取物的雌激素样作用，结果发现二者的雌激素样作用无显著性差异（图1）。

鉴于目前还未见有市售的朝鲜槐总黄酮提取物，因此开发一种简单可行的方法获得朝鲜槐总黄酮提取物，用于制备雌激素性药物或保健食品，可以填补本领域关于朝鲜槐总黄酮提取及应用方面的空白。

发明内容

本发明的目的是提供一种朝鲜槐总黄酮提取物，其中包含以提取物干品的重量计15～90%的总异黄酮，并且在总黄酮提取物中含有以提取物干品的重量计1～15%的鸢尾苷和6～57%的Saikoisoflavonoside A，其结构式为：

                                                      

本发明所述的朝鲜槐总黄酮提取物，含有对药理活性起作用的主要化合物，具体是染料木苷、鸢尾苷、Saikoisoflavonoside A、怀槐异黄酮苷、芒柄花黄素、染料木素、阿夫罗摩辛、大豆黄素等，它可以通过如下方法制得，该方法包括下列步骤：

（1）      用提取溶媒提取上述原料中的至少一种，收集提取液；

（2）      滤过该提取液并浓缩至无醇味；

（3）      浓缩液以蒸馏水溶解，滤过，滤液连续通过大孔吸附树脂层析柱进行吸附分离，使目标成分吸附于树脂中；

（4）用水淋洗，再用不同体积浓度的甲醇或乙醇水溶液洗脱，收集合并洗脱液，浓缩至干，获得朝鲜槐总黄酮提取物。

实现本发明的方法是用甲醇或乙醇进行第一次提取（步骤（1）），所用甲醇或乙醇浓度在5%到95%范围内，优选浓度为50~70%，药材与溶剂的质量体积比在1：1到1：50的范围内，优选为1：10到1：20的范围内，温度在室温到溶剂的回流范围内，优选在50~100°C，提取方式为闪式提取、超声振荡提取、回流提取、浸渍提取、微波提取，优选回流提取。

用于步骤（1）的药材为朝鲜槐的心材、根皮、茎皮、枝皮、枝、叶、花、果实和种子中的至少一种，优选为茎皮。

用于步骤（3）的大孔吸附树脂为非极性苯乙烯型共聚体，优选D101或AB－8。

用于步骤（4）的淋洗水体积用量为所述大孔吸附树脂柱床体积的4～25倍，洗脱剂体积用量为所述大孔吸附树脂柱床体积的4～25倍，所用洗脱剂为体积浓度为10～95%的甲醇或乙醇水溶液。优选洗脱程序为4～5倍柱床体积水淋洗，然后用体积浓度10～20%乙醇以4～10倍柱床体积洗脱除杂，再用体积浓度50～70%乙醇以5～10倍柱床体积洗脱。收集体积浓度50～70%乙醇洗脱液，浓缩至干，即得朝鲜槐总黄酮提取物。

影响本提取工艺的因素有原料的质量及加工过程中的实际操作情况，原料的质量差异取决于收集该植物材料的时间及处理干燥的方式。

按上述方法所得的朝鲜槐总黄酮提取物中含总异黄酮的含量在15~90%，该提取物以总异黄酮计在1～25mg/kg剂量下于药理活性初步实验中均显示出高活性，并且不需要进一步的特殊处理，且随时间的推移活性保持稳定。

本发明所述朝鲜槐总黄酮提取物可用于制备补充雌激素的药物或保健食品，用于预防或治疗乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、骨质疏松、更年期综合症。

附图说明

本发明所述实施例5中药理活性实验结果可由下述图例描述：

图1. 朝鲜槐总黄酮提取物对3周龄雌性幼鼠子宫的作用。（平均值+SD，n=10，*=p<0.01 vs.阴性对照组）

具体实施方式

实施例1

称取干燥朝鲜槐茎皮粉末（过24目筛）约1.0kg，加入30L 60%乙醇浸泡30分钟后，回流提取3次，每次1小时。合并提取液，滤过，减压浓缩。浓缩液以水溶解，滤过，过D－101大孔吸附树脂，5倍柱床体积水淋洗，4倍柱床体积10%乙醇洗脱除杂，6倍柱床体积60%乙醇洗脱，合并60%乙醇洗脱液，浓缩至干，即得。以其中的主要成分Saikoisoflavonoside A为对照品，用紫外分光光度法进行定量，计算提取所得浸膏中总黄酮的含量为53%，HPLC法检测提取物中鸢尾苷和Saikoisoflavonoside A的含量分别为提取物的4.5%和24.2%。

实施例2

称取干燥朝鲜槐茎皮粉末（过50目筛）约1.0kg，加入15L 50%乙醇浸泡30分钟后，回流提取4次，每次1.5小时。合并提取液，过滤，减压浓缩。浓缩液以水溶解，滤过，过ADS－7大孔吸附树脂，10倍柱床体积水淋洗，8倍柱床体积50%乙醇洗脱，合并50%乙醇洗脱液，浓缩至干，即得。以其中的主要成分Saikoisoflavonoside A为对照品，用紫外分光光度法进行定量，计算提取所得浸膏中总黄酮的含量为38%，HPLC法检测提取物中鸢尾苷和Saikoisoflavonoside A的含量分别为提取物的3.4%和16.7%。

实施例3

称取干燥朝鲜槐茎皮粉末（过65目筛）约1.0kg，加入20L 70%乙醇浸泡30分钟后，回流提取3次，每次1.5小时。合并提取液，过滤，减压浓缩。浓缩液以水溶解，滤过，加入到AB-8大孔树脂柱中进行饱和吸附，5倍柱床体积水淋洗，然后用4倍柱床体20%乙醇洗脱除去杂质，再用5倍柱床体的70%乙醇洗脱，合并70%乙醇洗脱液，浓缩至干，即得。以其中的主要成分Saikoisoflavonoside A为对照品，用紫外分光光度法进行定量，计算所得浸膏中总黄酮的含量为82%，HPLC法检测提取物中鸢尾苷和Saikoisoflavonoside A的含量分别为提取物的9.4%和54.5%。

实施例4

称取干燥朝鲜槐茎皮粉末（过16目筛）约1.0kg，置闪式提取罐内，加入20L 50%乙醇，电压120v，打开闪式提取器提取3次，每次10分钟。合并提取液，滤过，减压浓缩。浓缩液以水溶解，滤过，加入到AB-8大孔树脂柱中进行饱和吸附，先用5倍柱床体积水淋洗，5倍柱床体20%乙醇洗脱除去杂质，再用10倍柱床体的70%乙醇洗脱，合并70%乙醇洗脱液，浓缩至干，即得。以其中的主要成分Saikoisoflavonoside A为对照品，用紫外分光光度法进行定量，计算提取所得浸膏中总黄酮的含量为67%，HPLC法检测提取物中鸢尾苷和Saikoisoflavonoside A的含量分别为提取物的6.5%和37.3%。

实施例5

本发明通过体内实验初步验证了朝鲜槐总黄酮作为雌激素类药物的药理活性。具体实施方式如下：

取出生21天左右的雌性幼鼠，分为阴性对照组，阳性（雌激素）对照组，朝鲜槐总黄酮25mg/kg剂量组、5mg/kg剂量组、1mg/kg剂量组，朝鲜槐总黄酮苷元25mg/kg剂量组、5mg/kg剂量组、1mg/kg剂量组，饲养5日后，早晚给药（阳性药物剂量为35mg/kg），连续四天。末次给药后，于第二天早上脱颈处死，取其子宫称重并按下列公式计算子宫系数。子宫系数=子宫湿重/体重×100%。

实验结果见图1。

连续给予朝鲜槐总黄酮提取物四天后，与阳性对照组相比，高剂量朝鲜槐总黄酮能够显著促进雌性幼鼠子宫的生长，同时中、低剂量朝鲜槐总黄酮均显示一定的促子宫发育的趋势。这些发现表明，朝鲜槐总黄酮具有较强的雌激素样作用，且其活性要优于雌激素。根据文献报道，大多数情况下异黄酮苷元的雌激素活性优于异黄酮苷，而在本实验中，总黄酮组的雌激素活性与总黄酮苷元组基本相当，且在朝鲜槐中异黄酮苷与异黄酮苷元的比例约为7:1，提示朝鲜槐总黄酮提取物无需水解成苷元即可用于制备补充雌激素的药物或保健食品。

下面以实施例说明该发明的应用，但不应理解为对本发明的限制。

实施例6（朝鲜槐总黄酮片剂）

朝鲜槐总黄酮	9g
		淀粉	12g
微粉硅胶	350mg
		羧甲基淀粉钠	280mg
90%乙醇	适量

将以上成分等量递增法混匀，用乙醇制软材，20目尼龙筛制粒, 60℃干燥，20~80目尼龙筛整粒，压片，即得朝鲜槐总黄酮片剂。

实施例7（朝鲜槐总黄酮缓释片）

将以上成分充分过80目筛混匀，直接压片，即得朝鲜槐总黄酮缓释片。

按上述方法制得的朝鲜槐总黄酮缓释片在24 h释放量达90%以上,没有时滞、突释等现象。

实施例8（朝鲜槐总黄酮软胶囊）

取蜂蜡置大豆油中，加热至熔融，放冷至室温后，加入朝鲜槐总黄酮，用胶体磨搅匀，得内容物；另取明胶、甘油、水，置适宜容器中加热至80℃溶解，滤过，滤液加入泥泊金甲酯和泥泊金丙酯，混匀，于60℃保温，得胶皮溶液；取上述内容物和胶皮溶液，用软胶囊生产设备压制成型，干燥后即得朝鲜槐总黄酮软胶囊。

实施例9 （朝鲜槐总黄酮口服液）

朝鲜槐总黄酮	10g
		苯甲酸钠	1.5g
阿斯巴甜	0.8g
		安赛蜜	0.8g
葡萄香精	0.45g
		纯化水	约1000ml

在配制罐中加纯化水，加热至100℃，煮沸10分钟。向其中加入朝鲜槐总黄酮，加热煮沸15分钟使其溶解。再加入阿斯巴甜和安赛蜜，加热煮沸30分钟使其完全溶解。冷却至50℃以下，加入葡萄香精，搅拌20分钟使其溶解，0.22μm滤膜滤过，灌封，灭菌即得。

制得的片剂、软胶囊剂、口服液主要用于补充雌激素、防治乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、改善骨质疏松和改善妇女更年期症状。

上述配比中朝鲜槐总黄酮提取物按照发明内容的制备方法制备，其中含朝鲜槐总黄酮15%~90%，微粉硅胶、淀粉、羧甲基淀粉钠、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、泥泊金甲酯、泥泊金丙酯等为本领域专业人员所熟知的制药辅料，主要用作填充剂、膨胀剂、崩解剂、粘合剂、防腐剂和软胶囊胶皮制备等。

Claims (9)

1.朝鲜槐总黄酮提取物的制备方法，其特征在于，以朝鲜槐的心材、根皮、茎皮、枝皮、枝、叶、花、果实和种子中的至少一种为原料获得的富含异黄酮苷的提取物；该提取物是由包括以下步骤的方法得到的：

（1）  用提取溶媒提取上述原料中的至少一种，收集提取液；

（2）  滤过该提取液并浓缩至无醇味；

（3）  浓缩液以蒸馏水溶解，滤过，滤液连续通过大孔吸附树脂层析柱进行吸附分离，使目标成分吸附于树脂中；

（4）用水淋洗，再用不同体积浓度的甲醇或乙醇水溶液洗脱，收集合并洗脱液，浓缩至干，获得朝鲜槐总黄酮提取物；

步骤（1）所述提取溶媒为甲醇或乙醇或它们的体积浓度为50～70%的水溶液，药材与甲醇或乙醇或它们的水溶液的质量体积比为1：1～1：50，温度在室温到溶剂的回流温度范围内；

步骤（3）中所用大孔吸附树脂为非极性苯乙烯型共聚体，所用的大孔吸附树脂为D101或AB－8；

步骤（4）中淋洗水体积用量为所述大孔吸附树脂柱床体积的4～25倍，洗脱剂体积用量为所述大孔吸附树脂柱床体积的4～25倍，所用洗脱剂为体积浓度为10～95%的甲醇或乙醇水溶液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述提取方式为闪式提取、超声振荡提取、回流提取、浸渍提取或微波提取。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，药材与甲醇或乙醇或它们的水溶液的质量体积比为1：10～1：20；温度为50~100°C。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于提取方式为回流提取。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所制备的朝鲜槐总黄酮提取物的总异黄酮含量为15~90%，并且在总黄酮提取物中含有1～15%的鸢尾苷和6～57%的Saikoisoflavonoside A。

6.权利要求1所述方法制备的朝鲜槐总黄酮提取物在制备补充雌激素药物或保健食品中的应用。

7.权利要求1所述的方法制备的朝鲜槐总黄酮提取物在制备预防或治疗乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、骨质疏松、更年期综合症药物中的应用。

8.一种药物制剂，其特征在于，包含权利要求1所述方法制备的朝鲜槐总黄酮提取物与药学上可接受的载体。

9.根据权利要求8所述的药物制剂，其特征在于，所述的药物制剂为片剂、软胶囊或口服液。