TWI258369B - Pharmaceutical compositions of a selective estrogen receptor modulator in combination with sex steroid precursors - Google Patents

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1258369 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（丨） 之技術領域 本發明係有關-種在包括人類之易羅病的溫血動物身 上使用的新穎併用療法，以治療骨質疏 m _ 肢 孔知、咼血 膽口醇、高血脂或動脈粥樣硬化，或—種降低此等之羅患 可能性的方法。更詳細地，該併用療法包括投予選擇性雖 2素受體調節劑(SERM)及提高病人的性類固醇前驅物之 濃度，該前驅物係選自去氫異雄酮（DHEA)、去氫異雄酮 硫酸鹽(DHEA-S)及雄错_5_烯，，導二醇(5-二醇）:、二發 明亦有關用以實施前述併用療法之套組與藥學組成物。 相關技藝之背景說明 人類與一些其他靈長類係相當獨特，其腎上腺可分泌 大里類固醇前驅物去氫異雄g同硫酸鹽（DHEA-S)與去氫異 雄酮（DHEA)，該等前驅物轉換成雄留烯二嗣（4_二酮）及進 而在周邊組織轉換成雄激素及/或雌激素（Labrie等人於，，腫 瘤學之重要進展”乙文，V.T. deVita，S. Heilman，S.A. Rosenberg，J.B· Lippincott編輯，費城出版公司於1985年 出版之第 193-217 頁；Labrie於Mol· Cell. Endocrinol.第 78 期第C113-C118頁，1991年；Labrie等人於’’睪丸細胞中之 訊號轉導”乙文，Ernst Schering研究基金會研習會，v. Hansson，F.O. Levy，Κ· Tasken 編輯，柏林-紐約之

Springer-Verlag公司出版，（第 2附刊）第 185-218 頁，1996 年；Labrie 等人於 Steroids，第 62期第 148-158 頁，1997年） 。在一個最近的研究中（Labrie等人於J. Clin· Endocrinol. Metabo.第82期第2403-2409頁，1997年），吾等曾述及顯 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

I258369 A7 ~__B7__ 五、發明說明（2 ) 著降低20至80歲間男性與女性之去氫異雄酮（DHEA)、去 虱異雄酿1硫酸鹽（DHEA_S)、雄错-5_烯_3M7p_二醇（5_二 西亨、《上 J、；)-二醇-S、5-二醇脂肪酸酯及雄留烯二酮之循環濃度 〇 雖然女性在老化過程中内生性雄激素顯著的降低，但 雄激素在停經女性中之應用相當有限，主要係因為早期的 研究顯示雄激素造成不利的脂質分佈，而擔心雄激素之使 用會增加心血管疾病的風險。然而，最近的研究顯示，相 較於單獨使用雌激素，雌激素與雄激素之併用療法對血清 中之膽固醇、三酸甘油酯、HDL、LDL濃度及HDL/LDL比 例並無顯著的影響（sherwin等人於Am j 〇bstet. Gynec〇1 第156期第414-419頁，1987年）。與該等觀察結果相符， 吾等晋顯示主要具有雄激素效應之化合物DHE A，對血清 脂質分佈顯然並無不利的影響（Diam〇nd等人於j. End〇Crinol•第bo期第S43_S5〇頁，挪時）。類似地，相 較於單獨使用雌激素之治療，在雌留二醇與睪留酮植入治 療6個月後，並未觀察到膽固醇、其子部份或三酸甘油酯 濃度的變化（Burger等人於Br. Med j Clin Res Ed·第294 期第936-937頁’ 1987年）。應提及一個對於男性的研究中 顯示，血清DHEA-S與低密度脂蛋白呈逆相關（Parker等人 於Science第208期第512-514頁，1980年）。新近，發現低 血清睪错酮與DHEA以及内臟脂肪增加間之關連性 (Tchernof 等人於 Metabolism 第 44 期第 513-519 頁，1995 年） ’内臟脂肪為代表較高心血管風險的一種來數。 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公餐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) _an a·— 1_ —Bi ϋ a^i 1 ·1 11 1 1 ϋ - 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 6 !258369 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（3 ) 5-二醇係經由還原性17β_羥基類固醇去氫酶（17p_HSD) 之作用，而自DHEA生物合成的一種化合物，及為一種弱 的雌激素。在大鼠前腦下腺胞液中，其對雌激素受體的親 和力比17β-雖甾一醇（Ε2)低85倍（Simard與Labrie於J.

Steroid Biochem第 26期第 539-546頁，1987年），進一步確 認在人類子宮肌層與乳癌組織就相同參數所得之數據 (Kreitmann與 Bayard於 J· Steroid 則〇〇116111第11 期第 1589_ 1595 頁 ’ 1979 年，Adams 等人於 Cancer Res·第 41 期第 4720-4926 頁 ’ 1981 年；pouHn與 Labrie於 Cancer Res·第 46 期第4933-4937頁，1986年）。然而，在位於成年婦女之血 漿5-二醇濃度範圍内之濃度，5_二醇可增進人類乳房腫瘤 ZR-75-1細胞之細胞增生作用與黃體酮濃度（Poulin與

Labrie 於 Cancer Res·第 46 期第 4933-4937 頁，1986年），及 增加MCF-7細胞中需雌激素存在之52 kDa醣蛋白的合成作 用（Adams 等人於 Cancer Res.第 41 期第 4720-4926 頁，1981 年）。 如上所提及，已知血清DHEA、DHEA-S及5-二醇之 濃度隨年齡而降低，亦已知在周邊標的組織中雄激素與雌 激素之合成顯著地隨年齡而降低。DHEA-S與DHEA分泌 之改變，造成藉由性類固醇刺激的生化與細胞官能之顯著 降低。因此，最近DHEA與DHEA-S曾用於治療與性類固 醇之降低及/或不平衡有關之病況。 骨質疏鬆症係一種同時影響男性與女性的病況，其與 雄激素與雌激素之降低有關。曾顯示雌激素可降低骨之分 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 7 ------------••裝------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂-丨-------^9— 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 !258369 A7 B7 _ 1、發明說明（4 ) 解速率，而雄激素可增加骨質。然而，一般用於骨質疏鬆 症之雌激素復置治療，需要添加孕酮，以中和雌激素所誘 發之子宮内膜增生作用與引發子宮内膜癌之風險。更進一 步，因雄激素與孕酮皆被認為會增加乳癌之風險（Bardon 等人於 J. Clin. Endocrinol. Metab·第 60 期第 692-697 頁’ 1985 年；Colditz 等人於 N· Engl· J· Med·第 332 期第 1589-1593頁，1995年），通常僅少數的女性接受雄激素-孕酮復 置治療，並且施用期間過短。 數個研究顯示，骨質疏鬆症係男性中雄激素缺乏之臨 床表現（Baran 等人於 Calcif. Tissue Res.第 26 期第 103-106 頁 ，1978年；Ordell與 Swerdloff等人於 West J. Med·第 124期 第 446-475 頁，1976年；Smith與 Walker於 Calcif. Tissue Res· 第22期（附刊）第225-228頁，1976年）。曾發現以雄激素之 治療，如以癸酸語龍（nandrolone)所觀察得者，增加停經 女性之脊椎骨擴物質密度（Need等人於Arch. Intern. Med. 第149期第57-60頁，1989年）。以諾龍治療停經女性，可 增加其皮質骨礦物質含量（Need等人於Clin. Orthop.第225 期第273-278頁’ 1987年）。然而，在5〇%之病人中會產生 雄激素的副作用。該數據係有用的，因為目前幾乎所有的 療法皆侷限於降低骨之損失，合成代謝類固醇諾龍之使用 則發現可增加骨質。在一個生殖腺官能不足之男性案例中 ，曾提出雄激素對骨之生成的類似刺激作用（Baran等人於

Calcif· Tissue Res·第 26期第 1〇3_1〇6 頁，1978年）。Labrie 等人（J· Clin· Endocrinol·第 82期第 3498-3505 頁，1997年) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1258369 A7 B7 五、發明說明（5 ) 報導停經女性經DHEA治療12個月後，可刺激骨之生成作 用。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) DHEA(450毫克/公斤體重，每週三次）顯著地延遲C3H 小鼠中乳癌之顯現，該C3H小鼠係經基因育種以發生乳癌 (Schwartz於 Cancer Res.第 39 期第 1129-1132 頁，1979 年） 。更進一步，具有低血清DHEA濃度之男性，其發生膀胱 癌之風險增加（Gordon等人於Cancer Res.第51期第1366-1369頁，1991年）。 美國專利申請第5,550，107號係有關在易罹病的溫血 動物中，一種治療乳癌與子宮内膜癌的方法，其包括以手 術方法（卵巢切除術）或化學方法（使用LHRH激動劑如[D-色胺酸6，去·甘胺酸-NH21G]LHRH乙醯胺，或拮抗劑）抑制 卵巢荷爾蒙之分泌，以作為併用療法之一部份。亦論及抗 雌激素、雄激素、孕S同、性類固醇形成作用（特別是經17β-羥基類固醇去氫酶或芳香酶催化之性類固醇的生產）之抑 制劑、激乳素分泌作用、生長荷爾蒙分泌作用及ACTH分 泌作用之抑制劑。其對等部份發表於國際公報第W0 90/10462號。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 此外，心血管疾病與血清DHEA及DHEA-S濃度之降 低有關，曾提示DHEA及DHEA-S皆可預防或治療該等病 況（Barrett-Conno 等人於New Engl. J· Med·第 315期第 1519-1524頁，1986年）。 在老化的斯普拉格-道利（Sprague-Dawley)大鼠中， Schwartz(於 Kent，Geriatrics 第 37期第 157-160 頁，1982 年) 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1258369 A7 B7 五、發明說明（6 ) 觀察到在未影響進食之下，DHEA將體重自600克降至550 克。Schwartz(Cancer 第 39 期第 1129-1132 頁，1979 年）觀察 到：相較於對照組動物，投予DHEA之C3H小鼠（450毫克/ 公斤體重，每週三次）所增加之體重顯著較少，活得較久 ，體脂肪較少及較活躍。係在未喪失食慾或未限制食物之 下，達成體重之減少。更進一步，DHEA可防止動物育種 之體重增加，而避免在成年期變得肥胖（於Kent，Geriatrics 第 37期第 157-160頁，1982年）。 對精痩的祖克（Zucher)大鼠投予DHEA，儘管其食物 之攝取增加’所增加的體重仍較少。經治療的動物具有較 小的頰脂體，因此總體而言，顯示DHEA可增加食物的新 陳代謝，造成所增加的體重與所累積的脂肪較少（Svec等 人，Proc· 2nd Int. Conf. Cortisol and Anti-Cortisols，Las Vagas ’ Nevada ’ USA，第 56 頁摘要，1997年）。 發現可改良愛威（Avy)突變型小鼠（Yen等人，Lipids第 12期第 409-413 頁，1977年）與祖克大鼠（Cleary與 Zisk，Fed. Proc.第42期第536頁’ 1983年）之肥胖情況。相較於對照 組，以DHEA治療的C3H小鼠的外表較年輕（Schwartz， Cancer Res·第 39期第 1129-1132頁，1979年）。 在餵食膽固醇的兔子中，DHEA降低其動脈粥樣硬化 的發病率（Gordon等人於J· Clin· Invest·第82期第712-720頁 ，1988 年；Arad 等人於 Arteriosclerosis 第 9期第 159-166 頁 ，1989年）。更進一步，曾報導高的血清〇1^八-8濃度，可 保護男性免於死於心血管疾病（Barrett-Connor等人於New 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

10 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1258369 A7 ____B7___ 五、發明說明（7 )

Engl· J_ Med·第 315 期第 1519-1524 頁，1986年）。發現 DHEA 與DHEA-S的循環濃度，與因心血管疾病之死亡率呈逆相 關（Barrett-Connor 等人於 New Engl· J. Med·第 315 期第 15 19-1 524頁，1986年），及與減弱的免疫能力平行地降低 (Thomas 與 Weigle 於 Adv· Immunol.第 46 期第 221-222 頁， 1989年）。一個對人類的研究顯示，胎兒血清DHEA-S漢度 與低密度脂蛋白（LDL)濃度間之逆相關性（Parker等人於 Science第 208期第 512頁，1980年）。 國際專利公報WO 94/16709討論DHEA之用途以及雄 激素與雌激素治療之益處。 據信在習知技藝中所觀察到的相關性，並非表示該等 /σ療或預防方法如在此揭露之併用療法一般地有效與全無 不利的副作用。 發明之概尊說明 因此’本發明之目標係提供一種治療骨質疏鬆症、高 血膽固醇、高血脂、動脈粥樣硬化乳癌、子宮内膜癌、印 巢癌及子宮癌，同時將不利的副作用被降至最低之有效方 法。 另一個目標係提供方法，以降低罹患上述疾病之風險 Ο 另一個目標係提供適用於上述方法之套組與藥學組成 物。 在一個具體實例中，本發明係有關治療骨質疏鬆症或 降低其罹病風險之方法，其包括增加一需要該治療或風險 ------------裝 i --- (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 訂---------

11 1258369 A7 五、發明說明（ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 降低之病人體内之—選自下列群中的性類固醇前驅物之濃 度：去氫異雄酮（DHEA)、去氫異雄_硫酸鹽（dhea_s)及 隹田5烯-3β,17β-一醇（5-二醇），及進一步包括對該病人 投予一治療有效量之選擇性雌激素受體調節劑（serm)， 以作為併用療法之一部份。 、在另-個具體實例中，本發明係有關治療高血膽固醇 或降低其罹病風險之方法，其包括增加—需要該治療或風 險降低之病人體内之—選自增加性類固醇前驅物之濃度： 氣 >、雄顚I去鼠異雄_硫酸鹽及雄甾_5_稀_3β，1 7β-二醇 及進步包括對該病人投予一治療有效量之選擇性雌激 素受體調節劑，以作為併用療法之一部份。 在另-個具體實例中，本發明係有關治療高金脂或降 低其罹病風險之方法，其包括增加一需要該治療或風險降 低之病人體内之一選自下列群中的性類固醇前驅物的濃度 •去氫異雄酮、去氫異雄酮硫酸鹽及雄甾_5_烯_3β，ΐ7卜二 醇之，及進一步包括對該病人投予一治療有效量之選擇性 雌激素受體調節劑，以作為併用療法之一部份。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在另一個具體實例中，本發明係有關治療動脈粥樣硬 化或降低其罹病驗之方法，其包括增加—需要該治療或 風險降低之病人體内之一選自下列群中的性類固醇前驅物 的/辰度·去氫異雄酮、去氫異雄酮硫酸鹽及雄错_5_烯_ 3β，17β-二醇，及進一步包括對該病人投予一治療有效量 之選擇性雌激素受體調節劑，以作為併用療法之一部份。 在另個具體貫例中，本發明係有關治療乳癌或降低 I X 297公釐） 12 1258369 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（9 ) 1病風險之方法，其包括增加一需要該治療或風險降低 之病人中體内之一選自下列群中的性類固醇前驅物的濃度 •去氫異雄酮、去氫異雄酮硫酸鹽及雄甾烯_3(5，17卜二 酉予，及進一步包括對該病人投予一治療有效量之選擇性雌 激素受體調節劑，以作為併用療法之一部份。 在另一個具體實例中，本發明在係有關治療子宮内膜 癌或降低其罹病風險之方法，其包括增加一需要該治療或 風險降低之病人體内之一選自下列群中的性類固醇前驅物 之/辰度·去氫異雄gig、去氫異雄酮硫酸鹽及雄错_5_烯_ 3β，17β-二醇，及進一步包括對該病人投予一治療有效量 之遥擇性雌激素受體調節劑，以作為併用療法之一部份。 在另一個具體實例中，本發明係有關治療子宮癌或降 低其罹病風險之方法，其包括增加一需要該治療或風險降 低之病人體内之一選自下列群中之性類固醇前驅物的濃度 •去氫異雄酮、去氫異雄酮硫酸鹽及雄甾_5_烯_3卩，17卜二 醇及進步包括對該病人投予一治療有效量之選擇性雌 激素受體調節劑，以作為併用療法之一部份。 在另一個具體實例中，本發明係有關治療卵巢癌或降 低其罹病風險之方法，其包括增加一需要該治療或風險降 低之病人體内之一選自下列群中之性類固醇前驅物的濃度 •去氫異雄酮、去氫異雄酮硫酸鹽及雄甾_5_烯卜二 醇及進一步包括對該病人投予一治療有效量之選擇性雌 激素受體調節劑，以作為併用療法之一部份。 在另一個具體實例中，本發明提供一個套組，其包括 本紙張尺度適財家標準（CNS)A4規297公釐)-------^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 I ϋ tmmf I 一：口 t I i-ϋ ϋ. 11 ί mtmmm ϋ· I · 13 五 發明說明（10 ) 1固第 列群中之:二其内含H療有效量的至少-種選自下 鹽及雄“·稀:二物二氯異雄酮、去氣異_硫酸 述前驅物之前驅率.及:::何在活體内可被轉換成前 右—、、u 名，及進一步包括一個第二容器，其内含 放里的至少-種選擇性雌激素受體調節劑。 其勺括另= 固具體實例中，本發明提供-個藥學組成物， .a —種藥學上可接受之賦形劑、稀釋劑或載劑； β療有效量的至少—種選自下列群中之性類固醇前驅 氣’、雄_、去氫異雄酮硫酸鹽及雄留-5-烯-3β Ι7β_ 二^在一種活體内可被轉換成前述前驅物之前驅藥’；及 治療有效量的至少—種選擇性雌激素受體調節劑。 在另一個具體實例中，本發明提供一種降低.罹患乳癌 的風險之方法’其包括對需要降低該風險之病人投予預防 有效量的一種選擇性雌激素受體調節劑。 在一個降低罹患乳癌可能性的具體實例中，較佳係合 I并選擇性雌激素受體調節劑之投藥與性類固醇前驅物之= 藥。然而，如第1與2圖中所示，本發明亦包括選擇性雌激 素受體調節劑之單獨投藥，其即使在所投予之前驅物不存 在之下，亦提供顯著的預防效應。用於該目的之較佳選擇 性雌激素受體調節劑，與此述其他用途所論及者相同。較 佳之劑量與投藥方法亦相同。 如用於此，選擇性雌激素受體調節劑（SErm)係一種 化合物，其直接或經由其活性新陳代謝產物而在乳房組織 作用為雌激素受體拮抗劑（”抗雌激素”），同時在骨組織與 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 14 1258369 A7

1258369 經濟部智慧財產局員工消費合作社印.製 A7 B7 五、發明說明（12) 體调卽劑有利地在乳房中作用為抗雌激素，同時在骨與血 液（有利地影響其脂質與膽固醇濃度）中意外及有利地作用 為雌激素（或提供類似雌激素之活性）。對膽固醇與脂質之 有利效應，可轉化成對動脈粥樣硬化之有利效應，已知膽 固醇與脂質之不當濃度，對動脈粥樣硬化造成不利的影響 〇 如在此所論及所有以本發明治療的疾病，對雄激素之 反應良好。應用者使用诸如DHEA、DHEA-S、5 -二醇之 性類固醇前驅物或可轉變成任一該等性類固醇前驅物之前 驅藥，而非使用雄激素本身。在活體内，DHEA_S轉變成 DHEA，DHEA進一步轉變成5-二醇。據信若一組織對其 中一者反應良好，則可能對其他者皆有良好的反應。活性 新陳代δ射產物之則驅樂型式’係技藝中所熟知者。如見η

Bundgaard 之’’Design and Application of Prodmgs”（於”A Textbook of Drug Design and Development” 乙書中，h. Bundgaard與 Ρ· Krogsgaard-Larsen編輯；Harwook Academic

Publishers GMfH，Chur Switzerland，1991 年），其内容在 此併入本案以為參考資料。詳細地，見第15‘155頁述及 活性新陳代謝產物之各種官能基，以及在活體内轉變成各 S月&基之對應前驅藥基。如本發明提高病人之性類固醇前 驅物濃度，其一般藉由投予該前驅物或投予該前驅物之前 驅藥而達成。藉由使用前驅物而非雄激素，可降低在標的 以外之組織中產生不利的雄激素活性。組織僅經由天然或 調節性較高之方法，始將諸如DHEA之前驅物轉換成雄激 衣為汰义度適用中國國冢標準（CNS)A4規格公釐） ------------裝--------訂------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 線Φ-· 16 13 1258369 Α7 五、發明說明（ 素。相當高比例的雄激素係在周邊組織中製造，該比例依 組織之不同而異。 如本發明所治療之癌症，對雌激素活性具有不利的反 "反之月貝疏鬆症、高血膽固醇、高血脂及動脈粥樣 更化對雌激素或類似雌激素活性具有良好的反應。如本發 使用遥擇丨生雌激素受體調節劑，可在標的組織中提供有 盈的效應，在特定的其他組織則不會造成不利的效應。例 女达擇^雌激素受體調節劑對骨（或對脂質或膽固醇）誘 發有利的雌激素效應，同時可避免對乳房產生之不利的雌 激素效應。 因此，前驅物與選擇性雌激素受體調節劑皆在標的組 織中提供有益的效應，同時將特定的其他組織中之不利效 應降至最低。更進一步，如本發明將該二者併用，可產生 實質的協同效果。例如，雌激素與雄激素藉由不同的機制 (雌激素降低骨的耗損，雄激素有助於骨的形成）而提供對 抗骨質疏鬆症之有利效應。本發明之併用組合，經由選擇 性雌激素受體調節劑之活性而對骨提供有利的雌激素或類 似雌激素之效應，同時經由骨中將前驅物轉變成雄激素之 局部作用而提供有利的雄激素效應。據信前驅物亦提供雌 激素。有關控制脂質或膽固醇方面（適用於治療或預防動 脈粥樣硬化），此亦為真。在對抗乳癌、子宮内膜癌、印 巢癌或子宮癌方面，亦提供類似的協同效果，其中選擇性 雌激素受體调郎劑提供有利的抗雌激素效應，而前驅物提 仏有利的雄激素效應（由抗雖激素減緩任何偶發的前驅物 ϋ格⑵0 X 297 公餐 ------------裝 i --- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂-*1I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 17 1258369 A7 B7 14 五、發明說明（ 至雌激素之轉變作用）。本發明亦藉由其併用，而以協同 方式將不利的效應減緩。就此論及的所有疾病而言，任何 可能因前驅物(當前驅物如本發明用以促進雄激素效應時) 所產生之雌激素而在乳房組織中誘發的其他效應，係以選 擇性雌激素受體調節劑於乳房組織中之抗雖激素效應而加 以減緩。 在一些具體實例中，添加孕綱以進一步提供雄激素效 應。孕_能以技藝中已知之低劑量使用，而不致於不利地 影響雄激素受體（如糖皮質激素受體）以外的受體。其亦較 不具有不利的雄激制作用（如女性病人之臉毛）。 在此娜及之較佳選擇性雌激素受體調節劑，係有關於 ⑴易感又本發明之所有H· (2)治療與預防應用；及⑺ 較佳的藥學組成物與套組。 在一個具體實例中，該前驅物為DHEA。 在一個具體實例中，該前驅物為DHEA_S。 在一個具體實例中，該前驅物為5_二醇。 /一個需要治㈣降低-特定疾病之發病風險的病人， 係診斷已罹患該疾病者或易罹患該疾病者。 除非另外说明，本發明用於治療與預防目的之活性化 。物的較佳劑！（投藥濃度與模式）相同。毋論所治療之疾 病（或將其發病可能性降低之疾病）為何，此所論及之各化 合物的劑量相同。 一除非另外註明或自内容中清楚可見，雖然如在此所述 之貫例所示，該等附加的組成成物係屬有利，此述之劑量 ------------·裝---- f請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂----I--- 經濟部智慧財產局員工消費合作社£,製 18 1258369 B7 五、發明說明（ 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 係指未受藥學賦形劍錘經兩丨 ^稀釋劏載劑或其他成份影響的活 性化合物重量。藥學界一般所用的任何劑型（膠囊、鍵劑 、注射等）’皆適用於此，及’，賦形劑”、，，稀釋劑，，或，，載劑 ，’相’係、包括料中典型地與活性成份共同涵蓋於該劑 型之非活性成份。例如，可包括典型的膠囊、丸劑、腸外 膜、固態或液態稀釋劑或賦形劑、香味劑、防腐劑等。 可將所有用於此所論及之療法中的活性成份配方成藥 學組成物’其亦可包括—或多種其他活性成份。另類地， 其能同時地個別投藥，使得病人終究可提高血中濃度或同 時享有各活性成份（或策略）之益處。在本發明的—些較佳 具體實例中’例如’將—或多種活性成份配方成單一藥學 組成物。本發明的其他具體實例提供一個套組，其包括至 少二個分開的容器，其中就其内所含之活性成份而言，至 少-個容器之内容物與至少一個其他容器之内容物完全或 部份不同。 在此所論及的併用療法，亦包括在製造用以治療疾病 (或降低風險）的藥物中使用一種（組合物之）活性成份， 中該治療或風險之降低，進—步包括如本發明組合物中 其 之 另一種活性成份。例如在一個具體實例中，本發明在藥 製備中併用一種選擇性雌激素受體調節劑與一種選 DHEA、DHEA-S、5-二醇之性類固醇前驅物及在活體 可轉變成前述任一性類固醇前驅物之前驅藥，以用於治療 據信本併用療法對其有效的疾病（如乳癌、子宮内膜癌、 子宮癌、卵巢癌、質疏鬆症、高血膽固醇、高血脂與動脈 物 中 ------------裝--------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 刺中國國冢標準（C.NSM4規格⑵〇 X烈；^：餐） -II — . 1258369

A7 K 五、發明說明（ 16 粥樣硬化或）。在另一個具體實例中，本發明在藥物製備 中併用種遥自DHEA、DHEA-S、5-二醇之性類固醇前 驅物及在活體中可轉變成前述任一性類固醇前驅物之前驅 藥與一種選擇性雌激素受體調節劑，以用於治療該等相同 的疾病。 在本發明之一個具體實例中，DHEA&非用作前驅物 在另一個具體實例中，EM_8〇〇並非用作選擇性雌激素 受體調節劑。在另一個具體實例中，並未將DHEA與隐800 併用。 在一個較佳具體實例中，將DHEA與EM_i538併用。 第1圖顯示在279天之觀察期間，單獨使用DHEA(每曰 人、1皮投藥10毫克）、EM-8〇〇(每日一次口服投藥微克） 或f用治療9個月，對大鼠中DMBA所誘發之乳癌發生 之影響。數據以各組動物總數之百分比表示。 、第2圖顯示在279天之觀察期間，單獨使用DHEA(每— 一次經皮投藥10亳克）、鮮_(每日-次口服投藥75微克） 或併用治療9個月，對每個罹患癌症動物中之平均腫瘤 目（Α)與每個羅患癌症大藏中之平均腫瘤尺寸⑻之影 。數據以平均值+平均標準誤差表示。 第3圖顯示單獨使用DHEA(每日—次經皮投藥崎克 ”〇(每日一次口服投藥75微克）或併用治療9個月· :大鼠血清中之三酸甘油醋漠度㈧與膽固醇濃度⑻之 曰。數據以平均值土平均標準誤差表示。p<0.01， 率 線 曰 數 響 影 實 本紙張尺度適用中國國家標準 (cNS)A4規格⑵0 X 297公釐 20 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1258369 A7 五、發明說明（17 ) 驗組相對於對應的對照組。 第4圖顯示：A)在補充雌甾酮之經切除卵巢（OVX)的 裸鼠中，增加以每日二次經皮投藥之DHEA劑量（0.3毫克 、1·〇亳克或3.0毫克）對平均ZR-75-1腫瘤尺寸之影響。以 僅獲得賦形藥之對照組OVX鼠作為附加的對照組。以最 初的腫瘤尺寸當作100%。DHEA以50%乙醇-50%丙二醇之 0.02亳升溶液，經皮（p.c.)投藥於背側皮膚。⑴在補充雌 甾酮之經切除卵巢（OVX)的裸鼠中，單獨使用DHEA或 EM-800(每日一次口服投藥75微克）或併用治療9·5個月， 對平均ZR-75-1腫瘤重量之影響。:治療組相對於補充 雌甾酮之對照組OVX鼠ρ < 0.01。 第5圖顯示在補充雌甾酮之經切除卵巢（qvx)的裸鼠 中，增加抗雌激素ΕΜ-800之口服劑量（15微克、50微克或 100微克）(Α)，或將經皮投予DHEA之增加劑量（〇·3亳克、 1.0毫克或3.0毫克）與EM-800併用（15微克）或EM-800單獨 使用9·5個月，對平均ZR-75-1腫瘤尺寸之影響。以最初的 腫瘤尺寸當作100%。雌甾酮以每曰〇·5微克之劑量以皮下 方式投予，而DHEA則溶於50%乙醇-50%丙二醇及以〇〇2 愛升之體積母日投樂於背側皮膚二次。亦與僅獲得賦形藥 之ΟVX動物比較。 第6圖顯示在經切除卵巢的大鼠中，單獨使用去氮異 雄酮（DHEA)或與氟硝丁醯胺或EM_800併用治療12個月， 對骨小樑體積之影響。以完整的動物作為附加的對照組。 數據以平均值土平均標準誤差呈現。** :相對於〇νχ對照 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝--------訂---------線隊 21 1258369

A 五、發明說明（） 18 組P < 0.01。 第7圖顯示在經切除卵巢的大鼠中，單獨使用去氫異 雄酮（DHEA)或與氟硝丁醯胺或EM-800併用治療12個月， 對小樑數目之影響。以完整的動物作為附加的對照組。數 據以平均值土平均標準誤差呈現。:相對於對照組 p < 0.01。 第8圖顯示在完整對照組（A)、經切除卵巢的對照組⑺) 、及以單獨使用DHEA(C)或與氟硝丁醯胺或em_8〇〇(e) 併用治療之經切除卵巢的大鼠中之近側脛骨幹骺端。在經 切除卵巢的對照組（B)動物中注意到骨小樑（τ)量之降低， 及在投予DHEA(C)後骨小樑體積之顯著增加。在dhEA中 添加與氟硝丁醯胺則部份地封阻DHEA對骨小樑體積之效 應（D)，而DHEA與EM-800(E)之併用則對與卵巢切除有關 之骨損失提供完整的保護作用。改良的三色Mass〇n_ Goldner，放大80倍。τ :小樑，Gp :生長面。 第9圖顯示在經切除卵巢的大鼠中，每日口服投予 EM-800、ΕΜ-1538及羅拉新芬（ΕΜ-1105)之增加劑量（〇 〇1 、〇·〇3、0.1、0.3及1毫克/公斤）4天後，對膽固醇濃度之 影響。 第10圖顯示在經切除卵巢的大鼠中，單獨使用去氫異 雄酮（DHEA)或與ΕΜ- i 53 8(ΕΜ_652·氯化氫）併用治療“週 ’對腰椎的骨礦物質密度（BMD)之影響。增加完整的動物 ，以作為附加的對照組。數據以平均值土平均標準誤差呈 現。** ··相對於OVX對照組p < 〇.〇1。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2]() x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -----訂---------旅 0 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 22 1258369 JAi B7 五、發明說明（ 19 第11圖顯示選擇性雌激素受體調節劑（EM_652)與 DHEA對停經參數之結合效應。並未預期負面的之效應。 第12圖顯示雄性大鼠在單一口服吸收本發明之較佳性 類固醇前驅物（150毫莫耳/大鼠）後，以時間（乂軸）為函數之 血漿DHEA濃度（毫微克/毫升）(Y軸）。在框中，報導該等 化合物所誘發之DHEA的AUC 24小時。

ΕΜ-760 ΕΜ-900 ΕΜ-1304 EM-1305-CS ΕΜ-1397 甲酸鹽 ΕΜ-1400 ΕΜ-1410 ΕΜ - 1474-D 去氫異雄酮雄甾-5-烯-3β，17β-二醇 雄甾-5-稀-3 β，17 β-二醇3-乙酸鹽 雄甾-5-稀-3β，17β-二醇二乙酸鹽雄甾-5·稀-3β，17β-二醇3-乙酸鹽ι7- 笨 ------------•裝------ (請先閱讀背面之注咅心事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 雄甾-5-婦-3β，17β-二醇二苯甲酸鹽 雄甾-5-婦·3β，17β-二醇二丙酸鹽 雄甾-5-烯-3β，17β-二醇二半琥珀酸鹽 第13圖顯示雄性大鼠在單一口服吸收本發明之性類固 醇前驅物（150毫莫耳/大鼠）後，以時間（χ軸）為函數之血漿 雄甾-5-烯-3β，17β-二醇濃度（毫微克/毫升）(¥軸）。在框中 ’報導該等化合物所誘發之DHEA的AUC 24小時。 EM-760 去氫異雄酮 EM-900 雄甾-5-稀-3β，17β-二醇 EM-1304 雄甾-5-烯-3β，17β-二醇3-乙酸鹽 雄甾-5-烯-3β，17β-二醇二乙酸鹽 雄甾-5-烯-3β，17β-二醇3-乙酸鹽17 一笨 EM-1305-CS ΕΜ-1397 訂---------線. 本取成過用中國國家標準（CNS)A4規格（2】〇 ； 297 公 f ) 1258369 A7 Π7 五、發明說明（2Q) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 甲酸鹽 ΕΜ-1400 ΕΜ-1410 EM-1474-D 發明之詳細說明 已熟知雌激素可刺激乳房上皮細胞之增生作用，而細 胞增生作用本身被認為可藉由累積細胞增生中可能發生之 隨機遺傳錯誤而增加癌症的風險（Prest〇n Martin等人， Cancer Res·第50期第7415-21頁，1990年）。基於該觀念， 曾採用抗雌激素以預防乳癌，以期降低因雌激素刺激而起 之細胞分裂速率。 發現雌性斯普拉格-道利大鼠在1〇個月大之後所喪失 之卵巢週期性，伴隨血清雌激素與催乳激素濃度之增加與 血清雄激素與黃體酮濃度之降低（Liu等人於内分泌學會第 61屆年會第106頁（第134號摘要）；Tang等人於則〇1 .Reprod. 苐 31 J 第 399-413 頁，1984年；Russo等人於Monographs on Pathology of Laboratory Animals: Integument and Mammary Glands 弟 252-266 頁 ’ 1989 年；Wise於 Endocrinology 第 124 』苐 90 96 頁 ’ 1989 年，Cardy 於 Vet· Pathology 第 28 期第 13 9-145頁，1991年）。在老化的雌性大鼠中同時發生的該 等何爾蒙變化，與多病灶增生作用、腺胞/蜂巢狀組織 泌活性之增加、乳腺管之舒張作用以及囊腫之形成有 (B〇〇rman 等人於 433 頁，1990 年；Cardy 等人於 Vet Pathology第28期第139 145頁，。應提及大氣乳腺 雄甾-5-烯-3β，17β-二醇二苯甲酸鹽 雄甾-5-烯-3β，17β-二醇二丙酸鹽 雄甾-5-烯-3β，17β-二醇二半琥珀酸鹽 分關 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) |裝--------訂------ 的7公釐） 24 1258369 一———. 五、發明說明（2i ) 之增生性或腫瘤性改變，通常伴隨著雌激素與催乳激素濃 度之增加（Meites 於 J· Neural· Transm.第 48 期第 25-42 頁， 1980年）。以本發明的一種選擇性雌激素受體調節劑em_ 8〇〇之治療，誘發乳腺萎縮症，其特徵在於小葉組織尺寸 與數目之減少，及未有證據顯示泌乳之活性，顯示 對乳腺具有強力的抗雌激素活性（Luo等人於End〇crin〇1〇gy 第 138期第 4435-4444頁，1997年）。 以本發明的一種性類固醇前驅物DHEA之治療，導致 血清中DHEA與5-二醇之升高，同時‘二酮、睪留酮、二 氫睪错酮及雌错二醇之濃度僅中度地增加或更常地維持不 變，因此確認該前驅物類固醇在周邊組織中之細胞間生物 轉變作用（Labrie 於 Mol· Cell· Endocrinol·第 78 期第 C113- C118頁，1991年）。然而，口服投予DHEA同時對血清雄 激素，諸如睪留酮與二氫睪留酮，所產生之影響範圍，遠 大於對血清雌激素之影響，因此提示在該等動物中〇11£八 主要轉變成雄激素。該觀察與在女性中所得之數據相符， 在女性中自DHEA形成雄激素的途徑，比自DHEA轉變成 雌激素的途徑重要（Morales等人於j· clin· End〇crinol· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 線

Metab·，第 78期第 1360-1367頁，1994年；Labde等人於Ann. Ν· Υ· Acad· Sci· ’ 第 774期第 16-28 頁，19957年；Labrie等 人於 Steroids，第 62 期第 148-158 頁，1997年）。 瞭解乳腺萎縮症所產生之上述強力的抗雌激素活性及 DHEA對乳腺所產生之顯著的雄激素效應，以選擇性雌激 素受體調節劑與一種性類固醇前驅物併用治療的動物中 本紙張尺度過用中國國家標準.（CNS)A4規格（2]〇χ 297公f ) 25 1258369 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（22) 見之組織型態改變，最佳由大鼠乳腺之DHEA未遭受對抗 的雄激素作用而加以解釋。 更重要地’曾在試管中觀察到雄激素對ZR-75-1人類 乳癌細胞展現直接的抗增生作用活性，而雄激素之該抑制 效應係與抗雌激素之效應相加成（p〇ulirl^ LabrieK以加以

Res· ’ 第 46期第 4933-4937頁，1986年；Poulin等人於Breast Cancer Res· Treat.，第 12 期第 213-225 頁，1988年）。曾在 裸鼠之ZR-75-1異種移植中，在活體中觀察到類似的抑制 效應（Dauvois 等人於 Cancer Res·，第 51期第 3131-3135 頁 ’ 1991年）。亦曾顯示在大鼠中雄激素可抑制dMBA誘發 的乳癌之生長，該抑制作用可由同時投予純的抗雄激素氟 硝丁醯胺而加以逆轉（Dauvois等人於Cancer Res·，第14期 第299-306頁，1989年）。綜而言之，本發明之數據顯示雄 激素受體涉及DHEA對乳癌之抑制作用。 因抗雌激素與性類固醇前驅物係經由不同的機制展現 對乳癌的抑制效應，本發明顯示一種選擇性雌激素受體調 節劑（EM-800)與一種性類固醇前驅物（DheA)之併用，對 DMB A誘發之大鼠乳癌之發展以及如第1與2圖所示地展現 強於各化合物單獨使用時之抑制效應。事實上，實驗終結 時’在同時接受DHEA與EM-800之動物中未發現DMBA誘 發之腫瘤。 本發明述及一種性類固醇前驅物（DHEA)與一種選擇 性雌激素受體調節劑（EM-800)之併用，其維持DHEA對骨 形成作用之刺激效應，及強化選擇性雌激素受體調節劑 本纸張羯时丨雜標卿細議刚公f) 裝· --- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 一5, « — — — — — I, .線0_ 1258369 A7' 五、發明說明（23 ) (EM-800)本身對骨之代換與吸除作用之抑制效應，如該二 種化合物併用時進一步降低尿中羥基脯胺酸與鈣的排出作 用所示。 吾等已顯示DHEA有益於雌性大鼠（Luo等人於 Endocrinology 第 138 期第 4435-4444 頁，1997 年）與停經女 性（Labrie 等人於 J. Clin. Endocrinol.第 82 期第 3498-3505 頁，1997年）之骨骼。因此，在完整的雌性大鼠中，以DHEA 之治療增加整體骨骼、腰椎與股骨之骨礦物質密度 (BMD)(Luo 等人於 Endocrinology 第 138 期第 4435-4444 頁， 1997年）。 另一方面，雖然在經切除卵巢的大鼠中觀察到EM-800 治療之強力刺激效應，其對完整動物中之BMD並無顯著 的影響（Martel等人未發表之數據）。因EM-800對經切除卵 巢的大鼠之整體骨骼、腰椎與股骨之BMD展現刺激效應 ，EM-800在完整動物中之缺乏顯著刺激效應，可能歸因 於存於完整雌性大鼠中之性類固醇對BMD展現其最大效 應（Luo 等人於 Endocrinology 第 138 期第 4435-4444 頁，1997 年）。類似地，在業已領受DHEA之經切除卵巢的大鼠中 ，EM-800之缺乏顯著效應，可能歸因於骨細胞中自外生 性DHEA合成之雄激素（及可能為雌激素）所展現的最大刺 激效應。 已知雌激素可降低血清膽固醇，但卻增加血清三酸甘 油酉旨或對其並無影響（Love等人於Ann. Intern. Med·第115 期第 860-864頁，1991 年；Walsh等人於New Engl. J· Med. 本紙張尺度過用中國國家標準（:CNS)A4規格（2Κ)χ 297公f ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ---訂---------線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 27 1258369 _^__B7 五、發明說明（24 ) 第 325期第 1196-1204頁，1991 年；Barrett_c〇nn〇等人於Am· J. Med.第95(附刊5A)期第4〇s_43S頁，1993年；尺腦…等 人於Antheroscl⑽sis$ 1〇〇期第 n3-122f，1993年；Black 等人於 J· Clin. Invest·第 93期第 63-69頁，1994年；Dipippo 等人於Endocrinology 第 ι36期第 ι〇2〇_1〇33 頁，1995年；Ke 等人於 Endocrinology 第 ι36 期第 2435_2411 頁，Η%年）。 第3圖顯示EM-800在大鼠中具有低血膽固醇與低血三酸甘 油酯之效應，因此顯示其對血清脂質分布之特殊作用，該 作用顯然不同於坦莫新芬（Tamoxifen)(Bruning等人於Br. J. Cancer 第 58期第 497-499 頁，1988年；Love等人於 J. Natl· Cancer Inst.第 82期第 1327-1332 頁，1990年；Dipippo等人 於 Endocrinology 第 136 期第 1020-1033 頁，1995 年；Ke 等 人於Endocrinology 第 136 期第 2435-2411 頁，1995 年）、卓 羅新芬（Droloxifene)(Ke 等人於 Endocrinology 第 136 期第 2435-2411頁，1995 年）及羅拉新芬（Raloxifene) (Black 等人 於 J. Clin· Invest·第 93 期第 63-69 頁，1994 年）°DHEA 與 EM-800之併用，保留了 EM-800之低血膽固醇與低血三酸 甘油酯效應，因此提示該併用對血清脂質展現有益的效應 〇 應提及大鼠與人類中之血清脂質分布顯著地不同。然 而，因雌激素受體調節機制涉及雌激素與抗雌激素之低血 膽固醇效應（Lundeen等人於Endocrinology第138期第1552-1558頁，1997年），對研究人類中雌激素與”抗雌激素”之 降低膽固醇效應而言，大鼠仍為一個適用的模式。 本紙張尺度過用中國國家標準（CNS)A4規格（2]〇χ 297公f ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) |裝--------訂---------線一 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 28 1258369

五 經濟部智慧財產局員工消費合作社印：製 發明說明（Λ ) 25 簡而言之，上述之數據清楚地顯示一種選擇性雌激素 受體調節劑（EM-800)與一種性類固醇前驅物（DHEA)之併 用對DMB A所誘發的乳癌之影響，以及該併用對骨質與血 清脂質之保護性效應。該數據提示於治療與預防骨質疏鬆 症之際’該併用同時具有改良脂質分布之附加的有利效應 〇 吾等曾藉由合併投予新的抗雌激素（EM-800)與性類固 醇前驅物（DHEA)，而研究該二種藥物對裸鼠中之人類 75-1乳癌異種移植生長之抑制效應間的潛在相互作用。第 4與第5圖顯示，DHEA本身在所投予之劑量，造成腫瘤生 長之50至80%的抑制作用，而以低劑量抗雌激素所達成腫 瘤生長之完全抑制作用，並未受到DHEA之影響。

骨礦物質密度（BMD)測量之限制，係為人所熟知。例 如，在經類固醇型抗雌激素ICI 18278〇治療之大鼠中BMD 測量顯示並無改變，然而組織型態測量卻顯示抑制性的改 k (Gallagher等人於Endocrin〇1〇gy 第 133 期第 2787 2791 頁 1993年）。在使用坦莫新芬（Tamoxifen)時，亦曾報導類 似的差異（Jordan等人於Breast Cancer Res 丁⑺以第1〇期第 31-35 頁 ’ 1987年；Sibonga等人於BreastCancerRes Treat 第41期第71-79頁，1996年）。 應指出骨礦物質密度之降低，並非唯一與骨骼強度降 低有關的異常現象。（美國藥物管理署新陳代謝與内分泌 ^部門於1"4年5月所公布有關用於預防或治療停經後 骨質疏鬆症的藥物之臨證前與臨床評估指 因此，分 本紙依尺㈣㈣關純4MCNS)A4規格（ χ视公餐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

----訂---------線I 29 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1258369 iB7 ____ 五、發明說明（26 ) 析各種化合物與治療所引發之骨骼新陳代謝的生化參數係 屬重要，使能更加暸解其作用。 更重要地係指出DHEA與EM-800之併用，對骨骼新陳 代謝的重要生化參數具有未預期之有利效應。事實上， DHEA本身並未影響尿中羥基脯胺酸/肌酸内醯胺比例，該 比例為骨吸除作用之標記。更進一步，並未偵測到DHE A 對每日尿中#5或石粦的排出之影響（Luo等人於Endocrinology 第138期第4435-4444頁，1997年）。另一方面，雖然類似 於DHEA，並未觀察到EM-800對每日尿中參5或磷的排出之 影響，EM-800降低尿中羥基脯胺酸/肌酸内醯胺比例達48% 。更進一步，EM-800並未影響血清驗性填酸酶之活性， 該活性為骨骼形成作用之標記，而DHEA增加該參數之數 值約達 75%(Luo等人於Endocrinology 第 138期第 4435-4444 頁，1997年）。 有關尿中羥基脯胺酸/肌酸内醯胺比例，該比例為骨 吸除作用之標記，DHEA與EM-800併用之一個未預期的有 利效應，係降低該比例達69%，該數值在統計上與單獨使 用EM_800時所達成之48%抑制作用顯著不同（ρ<〇.〇ι)，而 單獨使用DHEA並未展現任何效應。因此，在EM-800中添 加DHEA，可增加EM-800對骨吸除作用之抑制效應達50〇/〇 。最重要地，在EM-800中添加DHEA之另一個未預期的效 應，係分別將尿中的鈣降低84%(自23.17土1.55至3.71 土 0.75 微莫耳/24小時/100克（ρ<〇·〇1)與將尿中的磷降低55%(自 132.72土6.08 至 59.06土4.76 微莫耳 /24 小時 /100 克 本紙張尺度過用中國國家標準（CNS)A4規格（210x297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝---- 訂---------線 -30 - 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1258369 A7 _B7_ 五、發明說明（27 ) (p<0.01)(Luo 等人於 Endocrinology 第 138 期第 4435-4444 頁 ，1997年）。 第1表 組別 尿 血清 鈣 (微莫耳/24小時 /100 克） 磷 (微莫耳/24小時 /100 克） 羥基脯胺酸/ 肌酸内醯胺 (微莫耳/毫莫耳） tALP (IU/升） 對照組 23.17+1.55 132.72+6.08 13.04+2.19 114.25+14.04 DHEA(10 毫克） 25.87+3.54 151.41+14.57 14.02+1.59 198.38+30.76* EM-800(75微克) 17.44+4.5 102.03土 25.13 6.81+0.84** 114.11+11.26 DHEA+EM-800 3.71+0.75** 59.06+4.76** 4.06+0.28** 204.38土 14.20** 亦應瞭解同時以DHEA之治療，並未損及EM-800對血 清膽固醇之抑制性效應（Luo等人於Endocrinology第138期 第 4435-4444頁，1997年）° 雖然羅拉新芬與類似的化合物可阻止骨之損失與降低 血清膽固醇（如同雌激素），應提及相較於馬雌激素對於骨 礦物質密度之效應，羅拉新芬對於骨礦物質密度之效應弱 於馬雌激素（美國藥物管理署於1997年11月20日星期四召 開之内分泌與新陳代謝藥物指導委員會第68次會議之會議 紀錄）。 本發明於大鼠中所得之結果，清楚地顯示DHEA可提 供有益的效應，該等效應係為單獨使用諸如EM-800、羅 拉新芬等之選擇性雌激素受體調節劑（SERM)所缺乏者。 雖然一種選擇性雌激素受體調節劑之效應係限制在骨吸除 -31 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) _ A I · a·— in I I— l_i n 一 一口， mm w w mm mb μη μη _ ϋ ϋ ·ϋ ϋ ϋ ·ϋ ^1 ^1 «_ϋ ϋ ϋ 1>· n n i_i I ϋ .^1 ϋ ϋ ϋ ι 1258369 經濟部智慧財產局員工消費合作社印.製 A7 B7 五、發明說明（） 28 7 作=之抑制，據信DHEA、5·二醇、DHEA_S之添加可刺 激骨的形成作用（以-種選擇性雌激素受體調節劑或一種 雌激素所發現之效應），及以優於EM_刪所達成效應之程 度而進一步降低骨的吸除作用。 重要地，在經切除卵巢的大鼠中&em_8〇〇與DHEA併 用/口療12個月’在骨形態測定方面具有有益的效應。就骨 的強度與預防骨折而言，骨小樑之體積特別重要。因此， 在上所提及之研究中，在經切除卵巢的大鼠中，DEHA本 身使脛骨之骨小樑體積自4.1 土0·7%增加至11.9土〇·6%(ρ< 0.01)，而在DHEA中添加EM-800則使骨小樑體積進一步 增加至14.7土1.4%，該數值與完整對照組中所得者相近（第 6圖）。 相較於經切除卵巢的對照組，DHEA之治療使經切除 印巢的大鼠中之骨小樑數目，自每亳米〇·57 土 〇〇8之數值 增加137%。該DHEA之刺激效應達到1.27土0.1，而相較於 單獨使用DHEA所達成者，EM-800與DHEA之併用治療在 骨小樑數目方面增加額外的28%(ρ<0·01)(第7圖）。類似地 ’相較於單獨使用DHEA所達成者，在DHEA治療中添加 EM-800在骨小樑分離方面進一步減少15%(ρ<0·05),而得 無異於完整對照組中所見之數值。 與第6與第7圖所呈現之數據互補，第8圖顯示相較於 經切除卵巢的對照組（Β)，DHEA在經切除卵巢的經治療 動物（C)中所引發的近側脛骨幹骺端骨小樑體積之增加， 以及在DHEA治療中添加氟硝丁醯胺（D)之後，對DHEA刺 本紙張&度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2]ϋ X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

|裝--------訂---------線I 32 1258369 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 i、發明說明（29) 激性效應之部分抑制作用。另一方面，DHEA與EM_800之 合併投藥完全阻止卵巢切除所引發之osteopenia(E)，而骨 小樑體積與完整對照組（A)中所見者相當。 在停經女性中所觀察到之骨質流失，據信與之骨吸除 作用速率之增加有關，而次級的骨形成作用並未完全彌補 該吸除作用。事實上，在骨質疏鬆症中骨形成作用與骨吸 除作用之參數皆增加，骨的吸除作用與形成作用皆為雌激 素複置療法所抑制。雌激素複置對骨形成作用之抑制效應 ，因此據信係產生自骨吸除作用與骨形成作用間之偶合機 制，雌激素對骨吸除作用引發之一級降低作用，導致骨形 成作用之降低（Parfitt於 Calcified Tissue international 第 36 期附刊第1卷第S37-S45頁，1984年）。 骨海綿質強度與後續對骨折之抗力，並非僅依骨海綿 質總量而定，亦依如以小樑之數目、尺寸與分布所測定之 小樑微構造而定。在停經女性中卵巢功能之喪失，尚伴隨 骨小樑總體積之顯著降低（；Melsen等人於Acta Pathologica &Microbiologica Scandinavia第 86期第 70-81 頁，1978年； Vakamatsou 等人於 Calcified Tissue international 第 37期第 594-597頁，1985年），其主要為數目之降低，及較小的程 度為小樑寬度之降低（Weinstein與Huston於Bone第8期第 137-142頁，1987年）。 在本研究中，幾乎在所研究之所有骨組織形態測定參 數上，皆觀察到DHEA之雄激素型刺激效應。DHEA因此 造成骨小樑體積及小樑數目之顯著增加，同時降低小樑間 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) |裝--------訂---------線 1^^"· 33 1258369 A7 ______ .. B7 五、發明說明（ 30 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 之區域。 為促進本發明所述之任何併用療法，本發明規劃藥學 組成物，其於單一組成物中同時包括選擇性雌激素受體調 節劑或雙膦酸鹽化合物與性類固醇前驅物（dhea、 DHEA-S、5-二醇），以利同時投藥。該組成物能以任何傳 統方式投藥，包括但不限於口服投藥、皮下注射、肌内注 射或經皮投藥。在一個具體實例中，提供一個套組，其中 該套組在分開的或在一個容器中包括一或多種選擇性雌激 素受體調節劑或雙膦酸鹽及性類固醇前驅物。該套組可包 括用於口服投藥之適宜物質，如錠劑、膠囊、糖聚等， 用於經皮投藥之適宜物質，如軟膏、乳液、凝膠、乳霜 持續釋出型貼布等。 申凊者相#選擇性雌激素受體調節劑與性類固醇前 物之投藥，具有治療及/或抑制骨質疏鬆症、乳癌、高 膽固醇、高血脂或動脈粥樣硬化之發展的用途。本發明 活性成份（不論是選擇性雌激素受體調節劑或性類固醇前 驅物或雙膦酸鹽或他者），能以各種方式配方或投藥。 用於經皮或經黏膜投藥之活性成份，較佳以藥學組成 物總重之0.5%至20%存在，更佳介於2與1〇%之間。用 經皮投藥之DHEA或5-二醇，其濃度應至少為7%。另類 ，可將活性成份置於其構造為技藝中所知之皮膚貼布， 如歐洲專利第0279982號所公開之構造。 當配方成軟膏、乳液、凝膠或乳霜等時，活性化合物 與相容於人類皮膚或黏膜之適宜載劑摻合，其可增進化合 及 驅 血 之 於 地 例 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

|裝--------訂---------線I 34 經濟部智慧財產局員工消費合作祍印製 1258369 A7 ___ B7 五、發明說明（3i ) 物經由皮膚或黏膜之穿透作用。適宜載劑係技藝中所知， 其包括但不限於克魯塞爾HF(Klucel HF)與格瑞塞爾 (Glaxal)載劑。部份能以商品取得，如格瑞塞爾（Giaxai)載 劑可自Glaxal加拿大有限公司取得。其他適宜的賦形藥見 於Koller與 Buri於 S.T.P.Pharma第 3(2)其第 115-124 頁，1987 年乙文。載劑較佳為活性成份在環境溫度以及在活性成份 所用之濃度可溶者。載劑之黏度應足以將抑制劑侷限於組 成物所施用之皮膚或黏膜局部區域，而在一段時間内不致 於散失或条發，該段時間容許前驅物實質穿透皮膚或黏膜 的局部區域而進入其可造成所需的臨床效應的血流之中。 載劑一般為數種組成成份如藥學上可接受之溶劑與增稠劑 之混合物。有機或無機溶劑之混合物，有助於親水性與親 脂性之溶解度，如水與諸如乙醇之醇類。 車父佳的性類固醇前驅物如去氫異雄酮（DHEA)(可自美 國伊利諾州芝加哥Diosynth公司取得）、其前驅藥（可自美 國新罕布夏爾州威爾頓Steral〇idds公司取得）、5-雄错烯-3β，17β-二醇及其前驅藥EM_1304與EM·01474_D(可自美國 新罕布夏爾州威爾頓Steraloidds公司取得）。 本紙國家標準(CNl)A4規格⑵〇 χ 29 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線； 35 1258369 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（32 ) EM-1304

較佳性類固醇前驅物係配方成一種醇類凝膠，其含有 2.0至10%辛酸-癸酸三酸甘油酯（Ne〇bee M_5) ; 1〇至2〇%己 二醇；2.0至10%二乙二醇單甲基醚（Transut〇1) ; 2 〇至 10%cyclomethicone(Dow Corning 345) ; 1·〇至2%节基醇及 1.0至5.0%經丙基纖維素（克魯塞爾hf)。 載劑亦可包括一般用於軟膏與乳液中且為化妝品與醫 藥技藝所熟知之各種添加物。例如香料、抗氧化劑、香精 、膠凝劑、增稠劑諸如羧甲基纖維素、表面活性劑、安定 劑、潤滑劑、著色劑或其他類似之試劑皆可存在。當用以 治療系統疾病時’應變換皮膚之施用位置，以避免局部過 高之活性成份濃度’及避免性類固醇前驅物之雄激素新陳 代謝產物過度刺激皮膚與皮脂腺。

在用以口服投藥之藥學組成物中，DHEA與其他前驅 物較佳以介於組成物總重之5至98%之間的濃度存在，更 佳介於50至98%之間，特佳介於80至98%之間。諸如DHEA 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210x297公釐） ------------裝--------訂---------線_ (請先閱讀背面之注意事t再填寫本頁) 36 M濟部智慧財產局員工消費合作社印¾ 1258369 五、發明說明（） 33 之單一前驅物可為唯一的活性成份’或另類地，可使用多 種前驅物及/或其類似物（如DHEA、DHEA-S、5-二醇之組 合’或二或多種在活體内會轉變成DHEA、DHEA-S、5-二醇之化合物之組合，或DHEA或5-二醇及其一或多種在 活體内會轉變成DHE A或5 -二醇之類似物之組合等）。血中 DHEA濃度係足夠劑量之最終標準，其納入個人在吸收與 新陳代謝方面之差異。 主治醫師較佳觀察病人的整體反應與金清DHEA濃度（ 及與上所論及之較佳血清濃度相比較），特別是在開始治 療之初，及觀察病人對治療之整體反應，當病人之新陳代 謝與對治療之反應異常時，視需要調整劑量。

如本發明的治療之期間，適合無限地延長。預期DHEA 及/或5-二醇之治療，僅僅將DHEA濃度維持於自然存在於 钐！别女性中之相仿範圍（血清濃度介於每公升4至1 〇微克) ，或自然存在於成年男性中之相仿範圍。 亦可藉由口服路徑投予選擇性雌激素受體調節劑化合 物或雙膦酸鹽及/或性類固醇前驅物，及可與傳統賦形劑 如噴霧乾燥之乳糖、微結晶纖維素及硬脂酸鎮共同配方， 以用於口服投藥。 可藉由與固體、粉狀載劑物質諸如摔檬酸鈉、碳酸約 或磷酸二轉、及與黏著劑諸如聚乙烯基料烧酮、明膠或 纖維素衍生物混合，亦可添加潤滑劑諸如硬月旨酸鎮、硫酸 十二烧基鈉、，，聚二醇，，或乙二醇，而將活性物質製成錠劑 或糖衣錠核心。當然，在口服投藥劑型之情況下，亦可添 --------------------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 37 經濟部智慧財產局員Η消費合作社印製 1258369 五、發明說明（） 34 } 加增進口感之物質。 a月b以硬明膠以及包括一種軟化劑或塑化劑如丙三醇的 软月膠之填塞膠囊，作為另—種形式。填塞膠囊包含較佳 :顆粒形式之活性物質，及與填充劑諸如乳糖、嚴糖、甘 路糖醇、如馬鈐薯殿粉或域殿粉之殿粉、纖維素衍生物 或：度分散型矽酸混合。在軟明膠型膠囊中，活性物質較 佳溶於或懸浮於適宜的液體，諸如植物油或液態乙二醇。 應將乳液、軟膏、凝膠與乳霜完全地揉入皮膚中，使 得見不到過里之情況，及在大部份的經皮膚之穿透作用發 生之前不應清洗該區域，較佳至少4小時，更佳至少6小時 〇 可依已知技術使用皮膚貼布遞送前驅物。一般施用一 叙較長的時期，如1至4天，但典型地使活性成份接觸一塊 較小的表面積，以容許緩慢與持續地釋出活性成份。 業已開發完成及目前使用中之數種經皮藥物遞送系統 ，適用以遞送本發明之活性成份。一般以基質擴散作用， 或藉由活性成份通過一個控制膜，而控制釋出之速率。 技藝中熟知經皮裝置之機械部份，及說明於例如美國 專利第 5，162,037、5，154,922、5，135,480、4,666,441、 4,624,665、3,742,951、3,797,444、4,568,343、5,064,654 、5,071，644、5,071，657號中，其揭露内容在此併入本案 以為參考資料。歐洲專利第0279982號與英國專利申請第 2185187號提供附加的背景資料。 該裝置可為技藝中所知之任一種一般類型，包括黏著 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------^---------線^^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 38 ] [258369 A7 B7 五、 發明說明（ 35 性基質與儲槽類型之經皮遞送裝置。該裝置可包括含藥基 貝，其納入吸收活性成份及/或載藥之纖維。在儲槽類型 之裝置中，该儲槽以載劑與活性成份可滲透之聚合物膜為 界。 在經皮裝置中，裝置本身使活性成份與所需的局部皮 膚表面接觸。相較於乳霜或凝膠，在該裝置中之載劑黏性 對活性成份之關切性較低。用於經皮裝置中之溶劑系統， 可包括如油酸、直鏈醇乳酸鹽及二丙二醇，或技藝中所知 之其他溶劑系統。活性成份可溶於或懸浮於載劑中。 就黏貼於皮膚而言，可將皮膚貼布置於在其中央打孔 之手術用黏性膠帶上。該黏性膠帶較佳以分離襯裡覆蓋， 以利使用前之保護。適用於分離襯裡之物質包括聚乙烯與 經聚乙烯塗覆之紙張，及較佳為經矽酮塗覆者，以利移除 之方便。就施用該裝置而言，簡單地撕開分離襯裡及將黏 性膠帶黏貼至病患之皮膚即可。在美國專利第5，135,4如 號中，其揭露内容在此併入本案以為參考資料， 等人述及一種另類裝置，其具有一種非黏性構件，以將該 裝置固定於皮膚之上。 本發明之經皮或經黏膜的遞送系統亦可作為一種新的 與改良的遞m以詩預防及/或治療”疏鬆症或 其他對雄激素及/或雌激素之治療反應良好之疾病。 本發明之選擇性雌激素受體調節劑的分子式，具有 列之特性：a)二個以域2個居間的碳原子所隔開^芳: 環’該二個環係未經取代或贿基或是—在活體内會被^ 用中國國冢標準（CNS)A4規格⑵Ο X 297公f (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂---------線I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 39 1258369 A/' B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 發明說明（ 36 變為羥基之基團所取代；及b)—個支鏈，其具有一個芳族 環及一個三級胺官能或其鹽類。 一個本發明較佳之選擇性雌激素受體調節劑，係報導 於 PCT/CA96/00097(WO 96/26201)之 EM-800。EM-800 之 分子結構為：

0 0 另一個本發明較佳之選擇性雌激素受體調節劑為EM-01538 ：

EM-153 8(亦稱作EM-652·氯化氫）係比EM-800強力之 抗雌激素EM-652之氯化氫鹽，EM-1538係較簡單與較容 易合成之鹽類。其亦容易分離、純化、結晶，及展現良好 的固態安定性。在投予EM-800或EM-1538時，據信在活 體内將產生相的活性化合物。 本發明較佳之其他選擇性雌激素受體調節劑包括坦莫 新芬（Tamoxifen)((Z)-2-[4_(l，2-二苯基-1-丁烯基）]_N，N-二 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝--------訂---------線. 40 1258369

hP 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 發明說明（„) 37 甲基乙胺）（可自英國之Zeneca公司取得）、托瑞密芬 (Toremifene)(可自芬蘭之〇ri〇n-Farmos藥學公司或 Schering-Plough公司取得）、卓羅新芬（Droloxifene)與 CP-336，156(順式-1R_[4，-吡咯烷酮-乙氧苯基]-2S-苯基-6-羥基 -1，2,3,4-四氫萘）（可自美國之pfizer公司取得）、羅拉新芬 (Raloxifene)(可自美國之Eli Lilly公司取得）、LY 335563 與LY 353381(可自美國之Eli Lilly公司取得）、愛多新芬 (Iodoxifene)(可自美國之SmithKline Beecham公司取得）、 揭露於 Shalmi 等人之 WO 97/25034、WO 97/25035、WO 97/25037、WO 97/25038 及 Korsgaard 等人之 WO 97/25036 、GW5638(述於 Wilson 等人於 Endocrinology 第 138(9)期第 3901-3911頁，1997年乙文）之里福麥羅新芬 (Levormeloxifene)(3,4-反式-2,2-二曱基-3-苯基-4-[4-(2-(2-(口比咯烷-1-基）乙氧基）苯基）]-7-甲氧苯並二氫吼喃）（可自丹 麥之Novo Nordisk A/S公司取得）、及吲嘌衍生物（揭露於 Miller等人之歐洲專利第0802183A1號）及Wyeth Ayers公司 (美國）所開發出及揭露於日本專利第10036347號（授予美 國家用產品公司）之TSE 424、及述於WO 97/32837之非類 固醇型雌激素。 可使用如製造廠商所建議就功效而言需使用之任何選 擇性雌激素受體調節劑。適宜的劑量為技藝中所知。可依 本發明使用商業上可取得之任何非類固醇型抗雌激素。可 使用任何具有類似於選擇性雌激素受體調節劑活性之化合 物（例如：羅拉新芬）。 本纸張尺度過用中國國家標準規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

|裝％-------訂---------線I 41 1258369 A7 B7 五、發明說明（38 ) 如本發明投予的選擇性雌激素受體調節劑，當口服投 藥時’對一個平均體重的人而言，其較佳以介於每 日 0.01 至10毫克/公斤體重（較佳〇.〇5至1.0毫克/公斤體重）之劑量 範圍投予，較佳以均分的二個劑量每日投予5毫克，特佳 每曰投予10毫克，或當以非經腸方式（如肌内、皮下或經 皮投藥）投藥時，對一個平均體重的人而言，其較佳以介 於每曰0.003至3.0毫克/公斤體重（較佳〇.〇15至〇3毫克/公 斤體重）之劑量範圍投予，較佳以均分的二個劑量每曰投 予1.5毫克，特佳每日投予3.0亳克。選擇性雌激素受體調 節劑較佳與後述之一種藥學上可接受的稀釋劑或載劑一起 投藥。 本發明較佳之雙膦酸鹽包括可自Merck與Dohme公司 以商品名福沙麥斯（Fosamax)取得之Alendronate[(4-胺基-1-羥丁二烯）雙膦酸，二鈉鹽，水合物]、可自Pr〇cter與 Gamble公司以商品名迪卓克爾（Didrocal)與迪卓耐爾 (Didronel)取得之羥乙雙膦酸鹽[(1·羥乙二烯）雙膦酸，2,2、 亞胺基雙乙醇]、可自Rhone-Poulenc Rorer公司以商品名 波納福斯（Bonefos)取得或可自Boehringer Mannheim公司 以商品名奥斯塔克（Ostac)取得之Clodronate[(二氣亞曱基) 雙膦酸，二鈉鹽]、及可自Geigy公司以商品名愛瑞迪亞 (Aredia)取得之Pamidronate(3-胺基-1-經丙二烯）雙膦酸， 二鈉鹽）。Risedronate(l-經基-2-(3-°比。定基）乙二稀雙膦酸 單鈉鹽）目前處於臨床發展階段。可依製造廠商所建議之 劑量，如本發明使用任何商業上可取得之其他雙膦酸鹽類 衣紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝----

訂---------線I 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 42 1258369 A7 β7 39 五、發明說明（ 。相同地，可依習知技藝所建議之劑量，使用性類固醇前 驅物，較佳该劑量可將循環濃度回復至2〇至3〇歲之健康男 性或停經前成年女性之濃度。 有關在此所建議之所有劑量，主治醫師應觀察病人的 反應，並據以調整劑量。 實例 第1例 材料與方法 動物 自Charles River Canada公司（加拿大魁北克省St Constant)取得鼠齡44至46天的雌性斯普拉格_道利 (Spr*ague-Dawley)大鼠，每蘢2隻飼養於控制光（12小時光 照/日，光照自07:15開始）及溫度（22土2 °C)之環境。動物隨 思地取食標林納（Purina)鼠類飼料與自來水。動物研究在 加拿大動•物照顧委員會（CCAC)所認可之一家機構中進行 ，及符合CCAC有關實驗動物之照顧與使用規範。 以DMBA議發齓瘊 在鼠齡50至52天之鼠中，單一投予1毫升玉米油中之2〇 晕;克DMB A(美國密蘇里州聖路易之Sigma化學公司）於胃 内，而誘發乳癌。2個月後，每2週進行腫瘤之測量。以測 徑器記錄各腫瘤的2個最大的垂直直徑，以如所述地估計 腫瘤的尺寸（Asselin等人於Endocrinology第101期第666· 671頁，1977年）。記錄腫瘤之位置、尺寸及數目。 治療 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2]〇χ 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 43 1258369 五 ___II 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7

BT 發明說明（40 ) 將動物隨機分成各具有20隻大鼠之組別，對照組例外 地具有40隻動物。動物如下地治療282天：（1)DHEA與 EM-800之對照載劑；（2)於〇·5亳升之4%乙醇、4%聚乙二 醇-6〇〇、1〇/〇明膠、Ο·9〇/〇氣化鈉懸浮液中之EM-800((+)-7-特戊酿氧基-3-(4’-特戊醯氧苯基）-4_曱基_2_(4，，_(2，，_旅啶乙 氧基）苯基）-2H-苯並σ比喃）(每曰口服投予75微克一次）；（3) 於〇·5亳升之50%乙醇、50%丙二醇中之DHEA(每日口經皮 投予10亳克一次）；及（4) ΕΜ-800與DHEA併用。在口服投 予DMBA之3天前，開始治療。ΕΜ-800於吾等實驗室之醫 藥化學部門合成，而DHEA係購自美國新罕布夏爾州威爾 頓 Steraloidds 公司。 在投予DMBA六個月後，因腫瘤業已過大，在異氟烷 麻醉之下，以斷頸方式犧牲許多對照組中的動物與部份經 EM-800或DHEA治療的動物。使用該等動物在犧牲時之腫 瘤尺寸與數目數值，連同存活動物在後續期間所測得之數 值，分析腫瘤發生率、各罹患腫瘤動物之平均腫瘤數目及 各罹患腫瘤動物之平均腫瘤尺寸。剩餘之動物（對照組9隻 大鼠，其他個組13至19隻）再持續接受治療3個月，以觀察 單獨使用DHEA與EM-800或併用之長程預防效力。在投予 DMBA達279天後，犧牲大鼠。立即移除子宮、陰道及卵 巢，除去其上的結締與脂肪組織後，將之稱重。 i式樣之收集與處理 在實驗終結時，在轉移至代謝籠（美國紐澤西州 Allentown之Allentown籠具設備公司）中之後，收集各組前 &度過用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝---- 111111· 44 1258369 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A/ B7 發明說明（41 ) 9隻大鼠之24小時尿液試樣。在不同天收集及分析各動物 的2個尿液試樣，以將每日差異性減至最小。因此，所示 之各數值代表在不同2天進行的2個測量之平均值。在尿液 收集管中添加〇·5毫升甲苯，以防止尿液揮發與細菌生長 ，記錄尿液之體積。在犧牲動物時收集大血管之血，讓其 在4 °C凝結過夜，然後於3000 rpm離心30分鐘。 屁液輿血清生化參數之分析 使用新鮮之試樣以分析尿中之肌酸内醯胺、鈣及磷， 以及血清總鹼性磷酸酶（tALP)活性、膽固醇及三酸甘油酯 。該等生化參數在良好的實驗室操作下，以Monarch 2000 化學系統（美國麻州 Lexington之Instrumentation Laboratory 公司）自動測量。如所述地（podenPhant等人於Clinica Chimica Acta第142期必145至148頁，1984年）測量尿中之 經基脯胺酸。 骨質之測量 藉由於腹膜内注射劑量分別為50與4毫克/公斤體重之 克他命（ketamine)氣化氫與苯甲二氮箪，而將大鼠麻醉。 以配備有區域高解析軟體之雙能量X光吸光測定法（美國 麻州 Waltham之Hologic公司之DEXA QDR 2000-7.10C)， 掃瞄整個骨架與右股骨。掃瞄區域之尺寸為28.110 X 17.805 公分與 5.0 X 1.902 公分，解析度為 0.1511 X 0.0761 公分與0.0254 X 0.0127公分，而整個骨架與右股骨之掃瞄 速度分別為0.3608與0.0956毫米/秒。在整個骨架與右股骨 之掃瞄影像上測量整個骨架、腰椎與右股骨之骨礦物質含 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ---- 訂---------線. 45 ___________ —_ [)7 _ 1258369 A7 五、發明說明（42 ) 量（BMC)與骨礦物質密度（BMD)。 統計分析 依 Duncan-Kramer(Biometrics 第 12 期第 307-3 10 頁， 1956年）之多重範圍測試，測量統計顯著性。以Fisher之精 確測試（Convex*之實用非參數統計學第二版第153-170頁， 1980年），進行乳癌發生率之分析。數據以平均值4：平均標 準誤差表示。 結果 對DMB A所誘發的乳癌發展之效應 如第1圖所示，在投予DMBA達279天之後，95%之對 照組動物發生可觸知之乳癌。以DHEA或EM-800之治療， 可部份預防DMBA誘發的乳癌之發展，因此發生率分別降 至57%(ρ<0·01)與38%(ρ<0·01)。有趣地，相較於單獨使用 各化合物所達成者，該二化合物之併用導致顯著較高之抑 制效應（ρ<〇·〇1相對於單獨使用DHEA或ΕΜ-800)。事實上 ，在以該二化合物治療之動物組中所發生的二個腫瘤，在 實驗結束前即消失。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ------------裝------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 線 以DHEA或ΕΜ-800之治療，將每個罹患腫瘤動物之平 均腫瘤數目自對照組之4.7 土 0.5個腫瘤，分別降至3.4土0.7( 非顯著）與1.4+0.3(p<0.01)腫瘤/動物，在實驗終結時在同 時接受二種藥物之動物中未發現腫瘤（相對於單獨使用 DHEA或EM-800，ρ<0·01)(第2A圖）。後來消失之該二個 腫瘤中之一個，存在於投予DMBA後之第79至第201天， 而另一個腫瘤自第176至第257天為可觸知者。在第2B圖 本紙張尺度過用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 46 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1258369 ——__________________ ___________________________________________________________________________________ R7 五、發明說明（μ ) 43 中可見，在貫驗終結時，DHEA*EM_8〇〇2單獨使用分別 將每個罹患腫瘤動物之平均腫瘤面積自12·8+1·3平方公分 降至10.2土2.1平方公分（非顯著）與7·7+1·8平方公分（非顯著) ，而併用之治療產生〇之數值（p<〇〇1相對於其他三組）。 在以DHEA與EM-800治療之動物組中所發生的二個腫瘤， 並未生長超過1平方公分。應提及在對照組中每個罹患腫 瘤動物之平均腫瘤面積以及平均腫瘤數目之真正數值，應 尚於第2圖中所呈現者，因許多動物在實驗終結前業已因 腫瘤過大而被犧牲。因此將在犧牲時所測得之數值，照樣 納入在稍後時期所作之計算以將對照組之偏差降至最小， 其無論如何仍顯著優於其他組。 對骨之效應 長期對雌性大鼠經皮投予DHEA，引發整個骨架、腰 椎及股骨之骨礦物質密度（BMD)分別增加6·9%(ρ<0.01)、 10.6%(ρ<0·01)及 8·2%(ρ<〇·〇ι)(第 2表）。另一方面，在以 ΕΜ-800治療的動物中，未發現顯著的變化。更進一步， 當同時投予二種化合物時，所得之數值與單獨使用DHEA 所達成者相當。 DHEA之治療增加血清總鹼性磷酸酶（tALP)活性達 74%(p<0.05)，但對每日尿中鈣與磷之排出以及對尿中羥 基脯胺酸/肌酸内醯胺比例並無影響（第3表）。另一方面， EM-800之治療降低尿中羥基脯胺酸/肌酸内醯胺比例達 48%(ρ<0·01) ’但對每日尿中鈣與石粦之排出以及對血清總 鹼性磷酸酶活性之影響並不具統計顯著性。DHEA與ΕΜ- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 公爱)-- 。 -47 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

77 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1258369 Α7 B7__— —__ 發明說明（） v 44 8〇〇之併用，導致血清總驗性構酸酶活性之增加（p<0 01) ’其相近於單獨使用DHEA所達成者，及降低尿中經基脯 胺酸/肌醆内醢胺比例達69%，該數值顯著（p<〇·〇 1)低於單 獨使用EM-800所達成者。此外，該二藥物之併用，分別 顯著降低每日尿中鈣與磷之排出達84%(ρ<〇·〇ι)與 56%(ρ<〇·〇ι)，而單獨使用各藥物時並未觀察到顯著的變 化。 選清脂質濃度之效應 長期以ΕΜ-800治療，分別降低血清三酸甘油酯與膽 固醇濃度達72%(ρ<0·01)與45%(ρ<〇·〇1)，而DHEA之長期 投藥降低血清三酸甘油酯達60%(ρ<〇·〇1)，但對血清膽固 醇濃度並無影響。更進一步，在以DHEA與ΕΜ-800併用治 療之動物中，血清三酸甘油酯與膽固醇濃度降低 42%(ρ<〇·〇1)與 52%(ρ<〇·〇1)(第 3 圖）。 第2圖。以單獨使用DHEA(每曰一次經皮投藥10毫克） 或EM-800(每日一次口服投藥75微克）或併用治療9個月， 對雌性大鼠中之股骨、腰椎、及整個骨架之骨礦物質密度 (BMD)之效應。在每組9隻大鼠上進行測量。* : ρ<0·05， : ρ<0·01，實驗組相對於對照組。 組別 BMD(克/平方公分） 整個骨架 腰椎 股骨 對照組 0.13Ή± 0.0025 0.1956 ±0.0067 0.3151 ±0.0063 DHEA(10 毫克） 0.1465 土 0.0010** 0.2163 土 0.0049* 0.3408 ± 0.0038** EM-800(75微克） 0.1356 + 0.0017 0.1888 ±0.0045 0.3097 ±0.0047 DHEA+ΕΜ-800 0.1498 + 0.0019** 0.2108 ±0.0061 0.3412 + 0.0056** 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

48 1258369 A/ 五、發明說明（45 ) 第3圖。以單獨使用DHEA(每日一次經皮投藥10毫克） 或EM-800(每日一次口服投藥75微克）或併用治療9個月， 對大鼠中之骨新陳代謝參數之效應：每日尿中鈣與磷之排 出、尿中羥基脯胺酸/肌酸内醯胺比例（HP/Cr)、及血清總 鹼性磷酸酶活性（tALP)。在每組9隻大鼠上進行測量。* : ρ<0·05，** : ρ<0·01，實驗組相對於對照組。 組別 尿 血清 (微莫耳/24小時 /100 克） 填 (微莫耳/24小時 /100 克） HP/Cr (微莫耳/ 毫莫耳） tALP (IU/升） 對照組 23.17+1.55 132.72+6.08 13.04+2.19 114.25+14.04 DHEA(10 毫克） 25.87+3.54 151.41+14.57 14.02 土 1.59 198.38+30.76* EM-800(75微克） 17.44+4.5 102.03+25.13 6.81+0.84** 114.11+11.26 DHEA+ EM-800 3.71+0.75** 59.06+4.76** 4.06+0.28** 204.38+14.20** 第2例 摘要 在乳腺中，雄激素自前驅物類固醇去氫異雄酮（DHEA) 形成。臨床證據顯示，雄激素具有抑制乳癌之效應。反之 ，雌激素則刺激乳癌之發展與生長。吾等研究單獨使用 DHEA或與甫述及之純的抗雌激素ΕΜ-800併用，對人類乳 癌細胞系ZR-75-1在經切除卵巢的裸鼠中所形成之腫瘤異 種移植的生長之效應。 在切除卵巢之後，小鼠立即接受每曰0.5微克雌甾酮（ 一種雌激素型荷爾蒙）之皮下注射。ΕΜ-800(15、50或100 微克）係每曰口服1次。DHEA(總劑量0.3、1.0或3.0毫克) 則每曰單獨施用至背側皮膚2次，或與每曰15微克口服劑 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) i衣--------訂---------線| 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 49 1258369 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明說明（46) 量之EM-800併用。相較於第一天所作之測量，定期評估 因治療所造成之腫瘤尺寸的變化。在實驗終結時，解剖腫 瘤及加以稱重。 在9 · 5個月中，相較於未領受雌留_之小鼠，在僅領 受雌甾酮之經切除卵巢的小鼠中觀察到腫瘤尺寸增加9.4 倍。在補充雌甾酮之經切除卵巢的小鼠中，投予15、50或 100微克之£]\1-800，分別抑制腫瘤尺寸達88%、93%與94% 。另一方面，0.3、1 ·0或3.0毫克劑量之DHEA，分別抑制 最終腫瘤重量達67%、82%與85%。每日15微克口服劑量 之ΕΜ-800與或不與不同的DHEA經皮劑量併用，在腫瘤尺 寸方面獲得相當的抑制效應。 DHEA與ΕΜ-800各自獨立地抑制裸鼠中雌甾酮所刺激 之ZR-75-1小鼠腫瘤異種移植之生長。在所界定劑量投予 DHEA，並不改變ΕΜ-800之抑制效應。 材料與方法 ZR-75-1 細胞 ZR-75-1人類乳癌細胞係得自American Type Culture Collection(美國馬里蘭州Rockville)，及例行地在補充2 mM L·榖胺醯胺、1 mM丙酮酸鹽、1〇〇 IU盤尼西林/毫升、100 微克鏈黴素/亳升及10%胎牛血清之RPMI 1640培養基中， 在37 〇C 95%空氣/5%二氧化碳之增濕環境中，如所述地 (Poulin與Labrie於Cancer Res.第 46期第 4933-4937 頁，1986 年；Poulin 等人於 Breast Cancer Res. Treat·，第 12 期第 213425頁，1988年）培養成單分子層。細胞每週以0·05% 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（2.10 X 297公釐） -----------裝--------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 50 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1258369 五、發明說明（） 47 胰蛋白酶：〇.2%EDTA(重量/體積）之處理傳代。用於此述 實驗中之細胞培養，係衍生自細胞系ZR-75-1之第93傳代 〇 動物 自HSD(美國印第安那州In(jianap〇iis)取得雌性同種接 合之哈 k斯普拉格-道利（Harien Sprague-Dawley)(nu/nu)無 胸腺小鼠（28至42天大）。將小鼠飼養於在層式通風櫥中具 有二氣過渡器之頂部及維持於有限病原之條件下之乙稀基 籠中。在使用前，將籠、襯墊及食物高壓殺菌。將水高壓 殺菌及酸化至pH值2.8，供隨意取用。 細胞之接藉 在接種腫瘤細胞前一周，藉由在腹膜内注射〇·25毫升 /動物之阿弗丁（Avertin)(戊醇：〇.8克/100亳升〇·9%氯化鈉 :三溴乙醇：2克/100亳升0.9%氯化鈉）而將小鼠麻醉，切 除雙邊的卵巢（OVX)。以〇·〇5%胰蛋白酶·· 〇.2〇/〇eDTA(重 量/體積）處理單分子層後，採收位於對數生長階段之ZR_ 75-1細胞1·5 X 106個，懸浮於〇」毫升含有25%Matrigel2 培養基質中，及如前述（Dauvois等人於Cancer Res.，第51 期第3131-3135頁，1991年）以1英吋長2〇號口徑之針頭皮 下接種至動物的二側脅腹。為促進腫瘤之生長，各動物每 曰接受皮下注射在〇·9%氯化鈉、5%乙醇與1 %明膠所組成 載劑中之10微克雕甾一醇（ED達5週。在可觸知之ZR-75-1 腫瘤出現後’以測徑器測量腫瘤之直徑，及選擇腫瘤之直 徑介於0.2與0·7公分之間之小鼠供本研究之用。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ▼裝--------訂---------線| 51 1258369 五 _—————_ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 發明說明（） 48 荷爾蒙治瘙 除了 OVX對照組之外’所有動物每日接受皮下注射 於0.2毫升之0.9%氯化氫、5%乙醇與1%明膠中的0·5微克 雌甾酮（Ε!)。在所指之組別中，以〇·3、ι·〇或3 〇毫克/動物 之劑量，以0.02毫升的體積每日二次地投予〇ΗΕΑ於腫瘤 生長區域外侧之背部皮膚。將DHEA溶於50%乙醇與50% 丙二醇中。如前述地（Gauthier等人於J· Med. Chem·第40期 苐2117-2122頁，1997年）於CHUL研究中心之分子内分泌 實驗室之醫藥化學部門合成EM-800，（(+)-7-特戊醯氧基-3-(4’-特戊醯氧苯基）-4-甲基_2-(4”-(2”-旅唆乙氧基）苯基）-2H-苯並咕喃）。將EM-800溶於4%(體積/體積）乙醇、4%( 體積/體積）聚乙二醇（PEG)-600、1%(重量/體積）明膠及 0.9%(重量/體積）氯化鈉中。在所指組別之動物，每曰單 獨接受15微克、50微克或100微克口服劑量之EM-800或與 DHEA併用，而OVX組之動物僅接受載劑（〇·2毫升之4%乙 醇、4%PEG-600、1%明膠、0.9%氯化鈉）。以凡尼爾測徑 器每週測量腫瘤一次。以公分為單位記錄二個垂直的直徑 (L與W)，以公式L/2 X W/2 X π計算腫瘤面積（公分平方 )(Dauvois 等人於 Cancer Res·，第 51 期第 3131-3135 頁，1991 年）。以治療第一天所測得之面積當作100%，而腫瘤尺寸 之改變，以最初腫瘤面積之百分比表達。就一般皮下腫瘤 的情況而言，不可能正確地評估腫瘤的三維體積，因此， 僅測量腫瘤面積。在治療291天（或9.5個月）後，犧牲動物 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格m〇 X 297公釐） -11.1¾ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線- 52 1258369 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

B7 五、發明說明(49 ) 如所述地評估反應的類型（Dauv〇is等人於Breast CanCerReS.Treat•，第 14期第 299-306 頁，1989年；Dauvois 專人於Εηι· J· Cancer Clin· Oncol·，第 25期第 891-897頁， 1989年，Labne等人於Breast Cancer Res. Treat·，第 33期 第237-244頁，1995年）。簡言之，部份退化係對應於退化 之腫瘤相當於或大於其原始尺寸之5〇% ;安定的反應係指 退化之腫瘤小於其原始尺寸之5〇% ;而完全的退化係指在 貫驗終結時，並未谓測到該等腫瘤。遞增係指腫瘤進展為 其原始尺寸之50%以上。在實驗終結時，所有動物以斷首 方式犧牲。立即移除子宮、陰道及印巢，除去其上之結締 與脂肪組織後，將之稱重。 統計分析 以評估歸因於DHEA、EM_800及時間之影響的一種變 度分析(ANOVA) ’而評估治療對腫瘤尺寸之效應的統計 顯著性，在實驗開始與結束時在同—動物上進行重複測量 (在組別因子内之標的）。在時間〇與治療95個月後之重複 測量，構成動物之隨機集團。因此時間係以身為集團内之 效應而加以分析，而二種治療係以身為集團間之效應而加 以分析。主要效應狀所有相互作用，㈣人模式中。以 組内之標的作為誤差項’而分析治療因子之顯著性血盆相 互作用。將數據進行對數轉換。AN〇VA之前提係假^偏 差之正態分佈與變度之同質性。 以Fisher最小顯著差異之測試，進行後天成對比較。 使用標準雙向ANOVA與相互作用，分析治療對體重與器 --------^--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公f 1258369 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（5Q ) 官重篁之主要效應及相互作用。所有ANOVA皆以§AS(美 國北卡羅萊納州Cary之S AS Institute)程式進行。以總體程 度為5%之雙尾測試，斷定差異之顯著性。 以用於依序之類別反應變數（完全反應、部份反應、 安定反應及腫瘤之退化）之Kruskall-Wallis測試，分析類別 數據。在全面評估治療之效應後，調整對多重比較而言關 鍵之P數值，及分析呈現於第4表之次組的結果。使用 StatXact(美國麻州Cambridge之Cytel公司）程式計算嫁實之 p數值。 數據以各組12至15小鼠之平均值土平均標準誤差（sem) 表示。 結果 如第4圖所示，在291天（9.5個月）之期間，在每曰以皮 下投予0 · 5微克劑量之雌甾g同治療的經切除印巢的裸鼠中 ，人類ZR-75-1腫瘤增加9.4倍，而在僅領受載劑之對照組 OVX鼠中，腫瘤尺寸在整個研究期間減少為最初數值之 36.9%。 DHEA經皮劑量之增加，造成對匕所刺激zr_75-1· 瘤生長的抑制作用之遞增。以〇·3、1·〇或3·〇毫克/動物之 每曰DHEA劑量治療9.5個月後，分別達成5〇 4%、76 8% 與80.0〇/〇之抑制作用（第4Α圖）。與總腫瘤負荷之降低相符 ，以DHEA之治療，造成在實驗終結時剩餘腫瘤之平均重 量的顯著降低。事實上，平均腫瘤重量自補充仏之經切除 卵巢裸鼠對照組之1.12土0.26克，分別降至每曰接受〇 3、1〇 ^用中國國家標準（CNS)A4規格⑵0 X 297公f )_ "-- --------7---裝--------訂---------線0- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 54 1258369 經濟部智慧財產局員工消費合作社印.製 Α7 Β7 五、發明說明（51 ) 或3·〇晕；克DHEA劑量的動物組別中之〇.37土0.12克（p= 0.005)、〇.20土〇.〇6克（ρ=〇·〇〇ΐ)、及〇.17土〇.〇6克（p= 0.0009)( 第4B圖）。 相較於9.5個月時對照組之腫瘤尺寸，每日劑量15微 克、50微克或1〇〇微克之抗雌激素em-800分別抑制雌激素 所刺激之腫瘤尺寸達 87·5%(ρ<0.0001)、93.5%(ρ<0·0001) 及94·0%(ρ=〇·〇〇〇3)(第5Α圖）。以三種EM-800劑量所達成 腫瘤尺寸之降低，彼此間並無顯著地差異。如第4Β圖所 示，在9.5個月之研究終結時，腫瘤重量自補充El的ovχ 對照組中之1.12土0.26克，分別降至每日以15微克、50微 克或100微克ΕΜ-800劑量治療的動物中之0.08土0.03克、 0.03土0.01克、及〇.〇4土〇.〇3克（於所有ΕΜ-800劑量相對於補 充 EM OVX對照組ρ<〇.〇〇〇1)。 如上所提及，在9.5個月測量時，每日口服劑量15微 克之抗雌激素EM-800，抑制87.5%之雌甾酮所刺激的腫瘤 生長。以三種所用之劑量添加DHEA，對每日口服劑量15 微克之抗雌激素EM-800所達成腫瘤尺寸的顯著抑制作用 ，並無顯著的影響（第5B圖）。因此，平均腫瘤重量自補充 雌甾酮之對照組小鼠中之1.12土0.26克，分別顯著地降至 單獨接受每曰劑量15微克之抗雌激素或與3、1 ·〇或3·〇毫 克DHEA劑量併用的動物中之〇.〇8土〇.〇3克（ρ<〇·〇〇〇ι)、 0.11 土0·04 克（ρ=〇·〇〇〇2)、0.13土0.07 克（ρ=〇·〇〇〇4)、及 0.08 土 0.05克（ρ<0·0001)(在四組間並未發現顯著的差異第 4Β 圖）0 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝---- 一*0, ·111!11. 55 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1258369 一_. B7__ 五、發明說明（） 52 檢視上所提及之治療所達成的反應類別，亦屬有益。 因此’雖非統計上顯著之程度（p=〇〇88)，治療中DhEA劑 量之增加’使得進展型腫瘤的數目自補充雌留_之對照組 〇vx動物中之87·5%，降至以DHEA每曰劑量〇·3、1〇或3〇 宅克治療的動物中之50 0%、53 3%及66.7%等數值（第4表） 。另一方面’完全反應自補充雌甾酮的小鼠中之〇%，增 加至以DHEA每曰經皮劑量〇·3、i.o或3·〇亳克治療的動物 中之28.6%、26.7%及20.0%。另一方面，在對照組補充^ 的小鼠中以及在接受上述DHEA劑量之三組動物中之安定 反應，測得分別為12.5%、21.4%、20.0%及13.3%。在對 照組經切除卵巢之小鼠中，測得完全反應、部份反應及安 定反應率分別為68.8%、6.2%及18.8%，而退化作用僅在 6.2%之腫瘤中可見。 在單獨接受抗雌激素ΕΜ-800(ρ=0·0006)(15微克）或與 3、1 ·〇或3.0宅克DHEA劑量併用的動物中，分別在29.4% 、33.3%、26.7%及35.3%的腫瘤中達成完全反應或腫瘤之 消失（第4圖）。另一方面，在相同組別之動物中，分別在 35.3%、44.4%、53.3%及17.6%的腫瘤中觀察到腫瘤之遞 增。在以EM-800治療之組別間，不論係單獨使用或與dhea 併用，並無顯著的差異。 對於修正腫瘤重量後之體重，未觀察到DHEA或EM-800治療之顯著影響。以雌甾酮治療OVX小鼠，使子宮重 量自OVX對照組小鼠中之28土5毫克，增加至132+8毫克 (ρ<0·01)，而DHEA劑量之增加，造成對雌甾酮刺激效應 本紙適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ' " -- -56 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1¾衣--------訂---------線I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1258369 A7 - —一.. F《7— 五、發明說明（53 ) 之遞增性但幅度相當小的抑制作用，該抑制作用在所用的 最高DHEA劑量達到26%(p=〇.〇〇〇8)。在同一圖中可見，雖 留酮刺激之子宮重量自對照組補充雌㈣的小鼠中之 132 土8毫克，分別降至每日EM_8〇〇 口服劑量^微克、咒微 克或100微克組別中之49±3毫克、36±2毫克、32±1毫克( 在所有劑里相對於對照組P<〇〇〇〇1)。15微克EM_8〇〇與每 曰劑里0.3、1.0或3.0毫克DHEA併用時，測得子宮重量分 別為46土3亳克、59土5毫克、69土3亳克。 另一方面，以雌甾_之治療，使陰道重量自〇νχ動 物中之14 土2亳克，增加至31土2毫克（ρ<〇 〇1)，而DHEA2 添加並無顯著效應。在每日以15微克、5〇微克或1〇〇微克 劑量之EM-800治療後，陰道重量降至23±1毫克、15±1毫 克及11土1毫克（在所有劑量相對於對照組總體與成對的p值 小於0.0001)。EM-800與每日劑量〇·3、i 0或3 〇毫克dhea 併用時，測得陰道重量分別為^土丨亳克、25土2毫克及23y 毫克（所有組相對於15微克EM-800而言，並非顯著）。應提 及在所用之最高劑量，即每日1〇〇微克，在補充雌甾酮的 OVX動物中’ EM-800將子宮重量降至無異於〇νχ對照組 之數值，同時將陰道重量降至低於〇VX對照組所測得之 數值（p<0.05)。可能因為DHEA之雄激素型效應，在子宮 重量與陰道重量方面，DHEA消弭部份的EM-800之效應。 第4圖。單獨地經皮投予DHEA或口服投予EM-800或 將其併用9.5個月後，對裸鼠中人類ZR-75-1乳癌異種移植 的反應（完全、部份、安定與遞增）之影響。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公f ) . 裳--------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 57 54 動物 總數 反應類別 組別 完全 部份 安定 遞增 數目及(％) OVX 16 11 (68.6) 1 (6.2) 3 (18.8) 1 (6.2) OVX+E/0.5 微克） 16 0⑼ 0 (0) 2(12.5) 14(87.5) OVX+E/0.5 微克)+DHEA 0.3 毫克 14 4(28.6) 〇 (〇) 3(21.4) 7(50.0) 1.0毫克 15 4(26.7) 0 (0) 3 (20.0) 8(53.3) 3.0毫克 15 3 (20.0) 0 (0) 2(13.3) 10 (66,7) OVX+E/O.S 微克)+EM-800 15微克 17 5 (29.4) 1 (5.9) 5 (29.4) 6(35.3) 50微克 16 4(25.0) 3 (18.8) 5(31.2) 4(25.0) 100微克 16 8(50.0) 〇⑼ 3 (18.8) 5(31.2) OVX+E/0.5微克)+EM-800 0.3毫克 18 6(33.3) 0⑼ 4(22.2) 8 (44.4) + DHEA 1.0 毫克 15 4(26.7) 0⑼ 3 (20.0) 8(53.3) 3.0毫克 17 6(35.3) 0⑼ 8(47.1) 3 (17.6) 氏=雌甾酮；DHEA=去氫異雄酮；〇VX=切除卵巢 第3例 1258369 五、發明說明（ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本發明之較佳化合物對經切除卵巢 雌性大鼠中的膽固醇濃度之效應 動物與治療 使用50至60天大、在切除卵巢時約重190克之斯普拉 格-道利（Sprague-Dawley)大鼠（Crl:CD(SD)Br)(加拿大魁北 克省 St. Constant之Charles River Canada公司）。在手術前 讓動物適應環境條件（溫度：22上3 °C ;濕度：50土20% ; 12 小時光照-12小時黑暗循環；光照自〇7:15開始）1週。每籠 飼養3隻動物，讓動物隨意地取得自來水與經認可的丸狀 鼠類飼料（美國密蘇里州聖路易Ralston Purina公司之Lab Diet #5002)。動物研究在加拿大動物照顧委員會（CCAC) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） 58 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1258369 A7 广-—_ B7 五、發明說明（％ ) 所認可之一家機構中進行，及符合CCAC有關實驗動物之 照顧與使用規範。 在研究的第0天，在異氟烷麻醉之下切除136隻雌鼠之 卵巢，及隨機分為17組動物，以進行概述如下之研究： 第1組：OVX對照組 第2組：OVX + EM-800(0.01毫克/公斤，口服，出） 第 3組：OVX + ΕΜ-800(0·03毫克 / 公斤，口服，m) 第 4組：OVX + EM-800(0.1 毫克/公斤，口服，ID) 第 5組：OVX + EM-800(0.3 毫克/公斤，口服，m) 第6組：OVX + EM-800(1毫克/公斤，口服，ID) 第 7組：OVX + EM-01538 (0.01 毫克/公斤，口服，m) 第 8組：OVX + EM-01538 (0.03 毫克/公斤，口服，m) 第 9組：OVX + EM-01538(0.1 毫克/公斤，口服，id) 第 10 組·· OVX + EM-01538 (0.3 毫克/公斤，口服，ID) 第 11 組·· OVX + EM-01 538(1 毫克/公斤，口服，id) 第12組：OVX +羅拉新芬（EM-1105) (0.01亳克/公斤 ，口 服，ID) 第13組：OVX +羅拉新芬（ΕΜ-1105)(0·03毫克/公斤， 口服，ID) 第14組：OVX +羅拉新芬（ΕΜ·1105)(0·1毫克/公斤， 口服，ID) 第15組·· OVX +羅拉新芬（ΕΜ-1105)(0·3亳克/公斤， 口服，ID) 第16組：OVX +羅拉新芬（ΕΜ·1105)( 1毫克/公斤，口 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 訂-------- .線

消 1258369 五、發明說明（ 56 服，ID) 第17組：完整對照組 在研究第10天開始投予治療，每日以口灌食一次直至 研究第13天。在0.4%甲基纖維素中製備劑量懸浮液，及 依研究第】0天所記錄之組別平均體重調整濃度，對每隻大 鼠投予劑量懸浮液0·5亳升。在投予最後劑量約24小時之 後，經禁食過夜的大鼠在異氟烷麻醉之下，藉由在腹主動 脈放血而犧牲，處理血液試樣以製備血清。將子宮移除， 清除其上剩餘的脂肪，及加以稱重。 血清膽固醇及三酸甘油醋之分析 以Boehringer Mannhein實驗室用診斷系統測量總血清 膽固醇及三酸甘油醋濃度。 第4例 雄甾-5-烯-3β，17β-二醇（5-二醇）具有本質的雌激素活 性。此外，身為一種性類固醇前驅物，其在周邊内分泌組 織中可轉變成活性雄激素及/或其他雌激素。為評估5—二 醇對骨質之作用中’雄激素與雌激素成份之相對重要性， 將21週大的大鼠切除卵巢，及每日一次以經皮之方式單獨 以2、5或12.5毫克5-二醇，或與抗雄激素氟硝丁醯胺併用 (FLU，10毫克，皮下，每曰一次），及/或與抗雌激素ΕΜ_ 800( 100微克，皮下，每日一次）併用治療12個月。在治療 11個月後，測量骨礦物質密度（BMD)。卵巢之切除造成股 骨BMD降低12·8%(ρ<0·01)，而以5·二醇最高劑量之治療 ’在卵巢切除後11個月期間將所喪失之股骨Bmd回復 頁 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格 (210 x 297 公釐） 60 !258369

五、發明說明（） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

34.3% (p< 0.01)。同時投予氟硝丁醯胺，則完全阻止5_二 醇對股骨BMD之刺激效應，而相較於單獨使用^二醇， 添加EM-800造成該刺激效應增加28.4%。同時投予5_二醇 、氟硝丁醯胺與EM-800，則僅展現ΕΜ·8〇〇之效應 ，因5-二醇的效應完全被氟硝丁醯胺封阻。在腰椎 方面獲得相近的結果，然接受12·5毫克5-二醇本身、12·5 亳克5-二醇+ ΕΜ·綱或12.5毫克5二醇+氣石肖丁醯胺+εμ_ 800之經切除卵巢大鼠中，其腰椎BMD係回復到與完整對 照組間並無顯著差異的一個數值。組織型態測定分析顯示 ，5-一醇對骨質、骨小樑數目之刺激效應以及對近侧脛骨 幹骺端骨二級骨海綿質的小樑分離作用之抑制效應，皆為 氟硝丁醯胺所消弭，但卻由EM-800進一步增進。以5_二 醇治療後，所得對血清鹼性磷酸酶活性之顯著刺激作用中 之57%(Ρ<0·01相對於單獨使用12·5亳克5_二醇），被同時投 予之氟硝丁醯胺所消弭。以5-二醇之治療，對尿中羥基脯 胺酸/肌酸内醯胺比例並無統計上顯著的抑制效應。孓二 醇之最高劑量造成血清膽固醇顯著降低23%(p<〇〇1)，而 EM-800之添加降低血清膽固醇達62%(ρ<〇 〇ι)。本數據清 楚地顯不5-二醇對骨形成作用之刺激效應，及提示雖然5_ 二醇係一種弱的雌激素，其對骨形成作用之刺激效應主要 疋由雄激素所居間調節。更進一步，EM-800與5-二醇對 月貝之附加的刺激效應，顯示抗雌激素em-800在大鼠中 之護骨效應。5-二醇與EM-800二者降低膽固醇之效應， 在預防新血管疾病方面具有用途。 本^格⑵〇: 297公釐 -----------裝--------訂-------- (請先閱讀背面之注意事&再填寫本頁) •線 1258369

I]7 五、發明說明（„ ) JO <ΝΌ + ο·ι ΙΌ+Ι8Ό ΙΌ+ΙΟΟΌ ΙΌ+Ι6Ό ΙΌ+ΙΟΟΌ ΙΌ+12 ΙΌ+ΙΓΙ Γο+Ι寸·ϊ Ϊ60Ό + £9ΌsroH-ls *9ΙΌ+ιοοζ/Ι 9ιό+ι1717·(ν sro+ls.rsl 寸 ΙΌ+Ιςςτ 9IO+IS <ΝΙ·ο+ιοοΓ(Ν ^«VNH^ ΗΊ SAo+se *ζ/ο+ις·Ι 寸**ζ/ο+ις·寸 ε**z/o+lm *〇〇·0+!寸 ό 寸tz;o+ls 6Ό+Ι0Ή7 S 卜 Ό+ιζ/cne (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) >裝 if派 tQT**<Nr?len **S.?ISOtzz.?lssl *s寸 O+lziT*os+l3oso+lssrn seo.?l60o s^s **0.1+寸_9 Γι+Ις·寸 i *ο·Ι+ιΓ 卜 * 卜 Ό+187. 6Ό+ΙΓ6 ΓΙ+ιηΙ <N.I+IZ;II te.I+1寸 _ςι -1 n ϋ Βϋ ϋ 一：口、 · 經濟部智慧財產局員工消費合作社印— ss$i ϊ//ηι **卜I +1 008-§ + V3Ha + ΧΛΟfol+lsl ihi +<wffip+^>0 ϊ?(Ν+ι0Ι(ΝνωΗα + ΧΛΟ ς+ι9ιηΗΗα+ΧΛΟ ς+ιΙ 寸tlr+XAO 寸+ILS vcdm + xao 寸+IIS^®#ΧΛΟ $e+lornΉΓέϊ^^^ lrs^XAO^^-sI°.ovPH**isdvd* 古ψ»/β^«Ι0.0: ：cn 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 62 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1258369 A? B7 _ 五、發明說明（％ ) 第6例 本發明較佳化合物之合成實例。 (S)-(+)-7-特戊醯氧基-3-(4’-特戊醯氧苯基）-4-曱基-2-(4”-(2”_哌啶乙氧基）苯基）-2H-苯並处喃氫氯化物EM-01538(ΕΜ-652·氯化氫）之合成。 第1流程圖

ΰΜ-0153Β 第Α步驟:BF，Et20，甲苯；100 °C ; 1小時。 第C步驟:3,4-二氫吡喃、對-甲苯磺酸單水合物、乙 酸乙酯；25 QC在氮氣下，16小時，然後在異丙烷中結晶 〇 第D、E及F步驟： (1)吡啶、甲苯、迪恩與史塔克（Dean & Stark)裝置， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------养 63 1258369 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 B7 五、發明說明（^ )

oU 在氮氣下迴流； (2) 1?8-.一 氣雜雙 ％ [5,4,0] ^ _7-婦、DMF、迴流 3 小 時； (3) CH3MgCl、THF ’ -20至0 °C ，然後在室溫中24小 時。 差G、Η步驟：(lS)-(+)-10-樟腦續酸、丙酮、水、甲 苯，在室溫中48小時。 盖HH步驟：95%乙醇，70〇C ，然後在室溫中3天。 j|HHR步E驟:回收第HH步驟之母液與清洗液、（s)_ 10-樟腦石黃酸，迴流；36小時，然後在室溫中16小時。 第I步驟： (1) 含水DMF、重碳酸鈉、乙酸乙酯； (2) 乙醇、稀釋之氫氯酸； (3) 水。 2-四氫0比喃基氧-4-羥基-2’-(4”-四氫。比喃基氧苯基）乙 醯苯（4)之合成。在約25 QC，以對-甲苯磺酸單水合物（〇 〇3 克’ 0.158毫莫耳）處理2,4-二羥基-2，-(4，，-羥基苯基）乙醯 苯（3)(97.6克，0.4莫耳）（可自美國堪薩斯州Lenexa2 Chemsyn Science Laboratories取得）於3,4-二氫吡喃中之懸 浮液（218毫升，3.39莫耳）與乙酸乙酯（520亳升）。在無外 部加熱之下’在氮氣下擾拌反應混合物約16小時。然後以 重碳酸鈉（1克）與氯化鈉（5克）於水中之溶液（1〇〇毫升）清洗 該混合物。分層，及以鹽水（20毫升）清洗有機層。以5〇毫 升乙酸乙S旨逆卒取各次的清洗液。結合所有的有機層，及 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) π裝---- 訂---------养

64 經濟部智慧財產局員工消費合作社印.製 65 1258369 A7 — —一…_·.·ι ^— Η7 五、發明說明（） 61 過濾通過硫酸納。 在大氣壓力下蒸顧除去溶劑⑽_毫升），及添加显 !_毫升)。在大氣慶力下蒸餾除去附加的溶劑(約300 宅升），及添加異丙醇（250毫升）。在大氣壓力了蒸潑除去 附加的溶劑（約275毫升），及添加異丙醇（250毫升）。在擾 拌下將溶液冷卻至25〇C，約12小時後，過滤結晶固體， 以異丙醇清洗及加以乾燥（116·5克，7〇%)。 尸心羥基_4_甲基_2_(4，_[2，，-哌啶]_乙氧基）苯基_3_0，，，_ 四風呢喃基氧基）苯基_7_四&口比喃基氧基-色原烧（ι〇)之合 成2-四氫咣喃基氧-4-羥基-2，·(4，，-四氫响喃基氧苯基）乙 醯苯（4)(1公斤，2.42莫耳）、心[2_(1-哌啶）乙氧基]苯甲醛（5) (594克’ 2·55莫耳）（可自美國堪薩斯州Lenexa之Chemsyn

Science Laboratories取得）及哌啶（82.4克，0.97莫耳）（可自 美國威斯康辛州密爾瓦基之Aldrich化學公司取得）於甲苯 (8 a升）中之溶液，在氮氣下以迪恩與史塔克（Dean & stark) 裝置迴流，直至收集到1當量的水（44毫升）。。 在大氣壓力下將曱苯（6·5公升）自溶液中蒸餾除去。添 加二甲基甲醯胺（6.5公升）與1，8-二氮雜雙環[5,4,0]十一-7-稀（110.5克’ 0.726莫耳）。在室溫中將溶液攪拌約8小時， 以將查耳酮8異構為二氫色原酮9，然後添加至水與冰（8公 升）與曱笨（4公升）的混合物中。分層，及以水（5公升）清洗 曱笨層。以（3 X 4公升）甲苯萃取結合的含水清洗液。最後 以鹽水（3 X 4公升）清洗結合的甲苯萃取物，在大氣壓力下 濃縮為5·5公升，然後冷卻至-10QC。 ^氏張尺度適^^家標準（CNS^^⑵〇 x 297公餐； „ --------^--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1258369 A7 —__B7 五、發明說明（c ) 62 在持續地提供外部冷卻與在氮氣下攪拌之下，添加氣 化曱基鎂於THF(2.5公升，7.5莫耳）（可自美國威斯康辛州 密爾瓦基之Aldrich化學公司取得）中之3M溶液，將溫度維 持於0 QC以下。在添加所有的格林納試劑之後，除去外部 的冷卻，讓混合物回溫至室溫。在該溫度攪拌混合物24小 時。 再度將混合物冷卻至約-20 °C ，在外部冷卻與擾掉 之下，緩慢地添加飽和的氯化銨溶液（200毫升），將溫度 維持於20 °C以下。將混合物擾拌2小時，然後添加飽和的 氯化銨溶液（2公升）與曱苯（2公升），及攪拌5分鐘。分層， 及以甲苯（2 X 4公升）萃取水層。以稀釋的氫氯酸清洗結合 的甲苯萃取物，直到溶液變為均一性，然後以鹽水（3 χ 4 公升）清洗。最後在大氣壓力下將甲苯溶液濃縮為2公升。 該溶液直接用於下一步驟。 (2R，S)-7-羥基-3-(4’-羥苯基）-4-甲基-2-(4，，-[2，，，-哌唆 基]乙氧基）苯基）-2Η-1-苯並响喃（1S)_10-樟腦磺酸鹽（土 12) 之合成。在4-羥基-4-甲基-2-(4，-[2，，-哌啶]-乙氧基）苯基一3一 (4’’’-四氫处喃基氧基）苯基_7_四氫响喃基氧基-色原烷（1〇) 之甲苯溶液中，添加丙酮（6公升）、水（〇·3公升）及（s)_1〇_ 樟腦磺酸（561克，2·42莫耳）（可自美國威斯康辛州密爾瓦 基之Aldrich化學公司取得）。在氮氣下攪拌混合物48小時 ，之後過濾（2R，S)-7-羥基-3-(4，-羥苯基）-4-甲基 旅 啶基] 乙氧基） 苯基）_2H-1-苯並 吼喃 （1S)-10-樟腦磺 酸鹽（12)，以丙酮清洗及加以乾燥（883克）。該物質毋需進 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 χ 297公餐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

裝--------訂---------線L 66 1258369 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 B7 五、發明說明（π ) 63 一步純化，即用於下一步驟（第HH步驟）。 (2S)-7-經基-3-(4，-羥苯基）_4_ 甲基-2-(4，，-[2，，，-哌啶基] 乙氧基）苯基）-2Η-1-苯並σ比喃（ls)_1〇-樟腦磺酸鹽（13 , (+)_ EM-352(1S)-CSA 鹽）之合成。將（2R，S)_7_ 羥基 _3_(4、羥苯 基）-4-甲基-2-(4’’-[2，，，-哌啶基]乙氧基）苯基）_211_1_苯並0比 喃（1 S)_ 10-樟腦磺酸鹽（土丨2)於95%中之懸浮液加熱與攪拌 至約70 QC，直至固體溶解為止。在攪拌下，讓溶液冷卻 至室溫，然後植入一些（2S)-7-羥基-3-(4，-羥苯基）-4-甲基_ 2-(4’’-[2’’’-哌啶基]乙氧基）苯基）·2Η小苯並吡喃（ls)_1〇_ 樟腦磺酸鹽（13)之晶種。在室溫中攪拌溶液共約3天。過 滤結晶，以95%乙醇清洗及加以乾燥（291克，76%)。產物 之de為94.2%，純度為98.8%。 (S)-(+)-7-羥基-3-(4’-羥苯基）-4-甲基-2-(4，，-(2，，，-旅唆 基乙氧基）本基）-2Η-1-苯並σ比喃氫氣化物EM-01 538(EM-652·氣化氫）之合成。以〇·5Μ碳酸鈉水溶液（7〇毫升，36 毫莫耳）處理化合物13(EM-652-(+)-CSA鹽，500毫克，〇·726 毫莫耳）於二甲基甲醯胺（11微升，〇·15毫莫耳）中之懸浮液 ’及擾拌15分鐘。該懸浮液以乙酸乙酯（7·〇毫升）處理， 及攪拌4小時。然後以飽和的碳酸鈉水溶液（2 χ 5毫升）及（i X 5毫升）鹽水清洗有機層，以硫酸鎂乾燥，及加以濃縮。 所產生粉紅色泡珠體（EM-652)於乙醇（2亳升）中之溶液， 以2N氫氯酸（400微升，0.80亳莫耳）處理，攪拌1小時，以 蒸顧水處理（5毫升），及擾拌30分鐘。將所產生之懸浮液 過濾，以蒸餾水清洗（5毫升），在空器中及在高真空（65〇c) 本紙張尺度適闬中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-裝--------訂---------線I 67 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1258369 Π7___ 五、發明說明（) 64

中乾燥而得乳色粉末（276毫克，77%):細粒白色粉末；掃 瞄式量熱法：熔化尖峰開始於219 QC，ΔΗ=83焦耳/克；在 曱醇 1〇 毫克 / 毫升中[a]24D=1540 ; 4 NMR(300 MHz， CD3OD)3(ppm)i.6(寬，2H，Η·4，，，），1.85(寬，4H，H-3，，，， 及 5’’’’），2.03(s，3H，CH3)，3.0 與 3.45(寬，4H，H-2，，，， 及 6’’’’）’ 3.47(t，J=4.9Hz，2H，H-3，，，），4.26(t，J=4.9Hz ’ 2H ’ ，5.82(s，1H，H-2)，6.10(d，J=2.3Hz，1H ’ H-8) ’ 6.35(dd，J=8.4，2·43Ηζ，1H，H-6)，6.70(d，J=8.6Hz ’ 2H ’ H-3’及H-5’），6.83(d，J=8.7Hz，2H，H-3”及H_5，，） ’ 7.〇l(d，J=8.5Hz，2H，H-2,及 H-6，），7.12(d，J=8.4Hz ’ 1H，H-5)，7.24(d，J=8.6Hz，2H，H-2，，及 H-6，，），13C RMN(CD3〇D，75ΜΗζ)δ ppm 14.84，22.50，23.99，54.78 ’ 57.03 ’ 62.97，81.22，104.38，109.11，115.35，116.01 ’ 118.68, 125.78, 126.33, 130.26, 130.27, 131.29, 131.59 ’ 134.26，154.42，157.56，158.92，159.33。元素組成： 破、氫、氮、氯；理論值為：7〇·51%、6 53〇/0、2.84%、7.18% ;實測發現為：70.31%、6.75%、2.65%、6.89%。 第7例 在活體内分析雄错-5-烯-3β，17β-二醇 的前驅藥之生物有效度 1)原理 性類固醇前驅物的前驅藥之生物有效度分析，係在雄 性斯普拉格-道利（Sprague-Dawley)大鼠中，在單一 口服投 予該化合物之後，測量血漿中之化合物濃度。 本紙用中國國家標準（CNS)A4規格⑵〇 x 297公餐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝--------訂---------線| 68 1258369 A7 B7 五、發明說明（ 65 經濟部智慧財產局員工消費合作社印：製 a)動物輿治+ 自Charles-River Canada公司取得重量275 35〇克的雄 性斯普柾格-道利大鼠，在適應期間每籠2隻飼養，在實驗 期間則個別飼養。動物飼養於12小時光照：12小時黑暗之 %燒（光照自08:00開始）。動物隨意地取得經認可的丸狀 鼠類飼料（Lab Diet #5002)與自來水。大鼠在給藥前之傍 晚即開始禁食（僅可喝水）。 待測試的各化合物，以於〇 4%甲基纖維素中之懸浮 液，以150微毫克/鼠之劑量口服灌食至3隻動物。在灌食 後之第1、2、3、4及7小時，在異氟烷麻醉之下，自大鼠 頸靜脈採取0.7亳升的血液試樣。立即將血液試樣轉至含 有EDTA之經冷凍的Micr〇tainer，在以3〇〇〇^m離心1〇分鐘 之前置於冰水浴中。在採樣血液之後，迅速地（在50分鐘 之内）進行血漿分離。然後將一個〇·25亳升部份之血漿轉 置入硼矽酸鹽試管（13 χ 1〇〇)中，及迅速地在乾冰上冷凍 。在以GC-MS測量血漿性類固醇或性類固醇前驅物濃度 之前，將血漿試樣保存於-8〇〇c。 結果 口服吸收作用與AUC示於第12與第13圖。 藶學組成物膏你丨 下列係數個非限制性的藥學組成物實例，其使用較佳 的活性選擇性雌激素受體調節劑EM-800或EM-1538及較 佳的活性性類固醇前驅物DHEA、ΕΜ·! 3〇4或EM_〇 i 474_d 。可使用本發明的其他化合物或其組合，以取代添加 ------------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線

本紙張&度適用中關緖^ (CNS)A4規格⑵〇 :297公釐 經濟部智慧財產局員工消費合作社印.製 1258369 五、發明說明（^ ) 〇〇

至）EM-800 或 EM-1538、DHEA、EM-1304 或 EM-01474-D 。如在此所論及，活性成份的濃度差異頗大。其他可包含 之成份的量與種類，係技藝中所熟知。 第A例 錠劑 成份 重量％ (以組成物之總重為基礎） EM-800 5.0 DHEA 15.0 明膠 5.0 乳糖 58.5 澱粉 16.5 第B例 明膠膠囊 成份 重量％ (以組成物之總重為基礎） EM-800 5.0 DHEA 15.0 乳糖水合物 65.0 澱粉 4.8 纖維素微結晶 9.8 硬脂酸鎂 0.4 套組實例 下列係數個非限制性的套組實例，其使用較佳的活性 選擇性雌激素受體調節劑EM-800或EM-1538及較佳的活 性性類固醇前驅物DHEA、EM-1304或EM-01474-D。可使 用本發明的其他化合物或其組合，以取代（或添加至）EM-800 或 EM-1538、DHEA、EM-1304 或 EM-01474-D。如在 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------^------------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 70 1258369 ___________ B7五、發明說明（0 ) 67 此所論及，活性成份的濃度差異頗大。其他可包含之成份 的量與種類，係技藝中所熟知。 第A例 口服投予選擇性雌激素受體調節劑 及經皮投予性類固醇前驅物 用於口服投藥（膠囊）的選擇性雌激素受體 調節劑組成物 成份 重量％ (以組成物之總重為基礎） EM-800 5.0 乳糖水合物 80.0 澱粉 4.8 纖維素微結晶 9.8 硬脂酸鎂 0.4 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ¾衣---- 訂---------線| 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 71 1258369 A7 R7 五、發明說明（α) 〇〇 用於局部投藥（凝膠)之性類固醇前驅物組成物 成份 重量％ (以組成物之總重為基礎） DHEA 10.0 辛酸-癸酸三酸甘油酯 (Neobee M-5) 5.0 己二醇 15.0 Transcutol (二乙二醇單甲基醚） 5.0 T基醇 2.0 cyclomethicone (Dow Coming 345) 5.0 乙醇(無水） 56.0 羥丙基纖維（1500 cps) (KLUCEL) 2.0 第B例口服投予選擇性雌激素受體調節劑與性類固醇前驅物 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 口服投予(膠囊)非類固醇型抗雌激素組成物 成份 重量％ (以組成物之總重為基礎） EM-800 5.0 乳糖水合物 80.0 澱粉 4.8 纖維素微結晶 9.8 硬脂酸鎂 0.4 --------,—--------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度過用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） 72 1258369 H7 五、發明說明（ 69 口服投予（明膠膠囊）非性類固醇前驅物組成物 成份 重量％ (以組成物之總重為基礎）

DHEA 15.0 乳糖水合物 70.0 澱粉 4.8 纖維素微結晶 硬脂酸鎂 9.8 0.4 在上述之配方物中，亦能以其他選擇性雌激素受體調 節劑取代EM-800或EM_01538，以及能以其他性類固醇前 驅物取代DHEA、EM-1304或EM-01474-D。亦可使用一種 以上的選擇性雌激素受體調節劑或一種以上的性類固醇前 驅物，在該情況下，加總的重量百分比較佳為上述實例中 單一前驅物或單一選擇性雌激素受體調節劑之重量百分比 〇 本發明之敘述係參照較佳實施例與實例，但非因此而 ^限。f知技藝者應可即刻認知本發明之廣泛應用性與範 脅’其僅受限於此述之申請專利範圍。 經濟部智慧財產局員工消費合作、社印.製 中國國家標準（cns)a4規格⑵ 公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

73

Claims (1)

1258369 丨公 Cl c補充 l 4：f 第881〇9824號專利再審錢申料 1· 修正日期· 95年4月 一種用以治療一選自於由動脈粥樣硬化、子宮内膜癌 子宮癌與彡卩巢癌所構成之錢或降低其罹患風險㈣ 學組成物，該藥學組成物包含—治療有效量之—選自於 下列群中的性類固醇前驅物：去氫異軸、去氫異雄網 硫酸鹽、雄留-5-晞部，導二醇及心雄留稀_3，17_二西同 以及任何在活體内可被㈣成前述任—個性類固醇前 驅物之前驅藥，該藥學組成物進—步包含一治療有效量 的-種選擇性雌激素受體調節劑，以作為併用療法的: 部份； 其中該選擇性雌激素受體調節劑係選自於由下列 所構成之群組中： (Α)—個具有下列化學式之苯並噻吩衍生物：

其中心與尺2係各獨立地選自下列群中：氫、羥基石 在活體内可被轉變成經基之部分；

其中R3與〜係各獨立地選自：CpC4烧基，或者r 、R4與其等所鍵結之氮_起形成任_選自下列群中之為 構：口比洛烧基、二甲基小呢略烧基、甲基^•啦略烧遵 、哌啶基、六亞甲基亞胺及嗎啉代基； -74- 1258369 其中A係選自下列群中：_c〇…·ch〇h及 其中B係選自下列群中：苯撐、吡啶亞基及-環 c4h2n2-； (B)—具有下列化學式之化合物：

其中Rl與R2係各獨立地選自下列群中：氫、羥基及 一在活體内可被轉變成羥基之部分； 其中Z為一個二價閉合部分； 其中R100為一個以4至10個居間原子將L·與B環隔開 之二價部分； 其中L為選自下列群中之二價或三價極性部分： _SO_、_CON_、-N<及-SON< ; 其中G丨係選自下列群中：氫、Ci_C5烴或是一個將 〇2與L連接成一個5至7個原子雜環的二價部分及鹵基 或前述之不飽和衍生物； 其中係不存在或係選自下列群中··氫、c】_c5烴或 疋個將與L連接成一個5至7個原子雜環的二價部 分’及_基或前述之不飽和衍生物； 其中係選自下列群中：氫、甲基與乙基。 2· 一種用以治療動脈粥樣硬化或降低其罹患風險的藥學 組成物，其包含·· 、予 -75- !258369 a) —種藥學上可垃心 妾叉之崠形劑、稀釋劑或載劑； b) —治療有效量之 、， 至乂 —種選自下列群中的性_ 固醇W驅物：去氫異雄 素氫異雄酉同硫酸鹽、雄银^ 烯-3β，17β-二醇、4 产4〈“ 0 田一 ^ , "田烯·3，17-二酮及任何在活體内^ 被轉換成前述任_個枝上 口〖生類固醇前驅物之前驅藥；及 c) 一治療有效量之 至^ 一種選擇性雌激素受體I 節劑，其中該選擇性 准激素欠體調節劑係選自於由下歹

所構成之群組中： (Α)-個具有下列化學式之苯並嚷吩衍生物：

其中R!與R2係各獨立地選自Τ列群中：Α、經基及 一在活體内可被轉變成羥基之部分；

其中R3與R4係各獨立地選自·· C「C4烷基，或者& 、R4與其等所鍵結之氮一起形成任一選自下列群中之結 構·吡咯烷基、二甲基吡咯烷基、甲基p吡咯烷基 、嗓σ疋基、六亞甲基亞胺及嗎琳代基； 其中Α係選自下列群中：_c〇·、_ch〇h及-CH2-; 其中B係選自下列群中：笨撐、吡啶亞基及、環 c4h2n2-； (B)—具有下列化學式之化合物： -76 !258369

其中Rl與R2係各獨立地選自下列群巾· h fγ•虱、羥基及 一在活體内可被轉變成羥基之部分； 其中Ζ為一個二價閉合部分；

其中R100為一個以4至10個居間原子將乙與Β環隔開 之二價部分； 同幵 其中L為選自下列群中之二價或三價極性部分 -SO-、-CON-、-NU〇N< ; 其中G】係選自下列群中：氣、^5煙或是—個> G2與L連接成一個5至7個原子雜環的二價部分，及鹵』 或鈾述之不飽和衍生物； 其中〇2係不存在或係選自下列群中：氣、

是一個將ML連接成—個5至7個原子雜環的二價^ 分，及鹵基或前述之不飽和衍生物； 其中CM系選自下列群中：氣、甲基與乙基。。 一種用以治療一選自於由 内膜癌、子宮癌與卵巢癌 構成之病況或降低其罹患風險的藥學組成物，其包含 a) —種藥學上可桩a 接又之賦形劑、稀釋劑或載劑； b) —治療有效量之 固醇別驅物··去氫異雄 ^ 一種選自下列群中的性類 -同去氣異雄3同硫酸鹽、雄留 -77- a^58369 烯、3β,ΐ7β 被轉換成] 卜二醇、4-雄留烯-3,17-二酮及任何在活體内可 如述任一個性類固醇前驅物之前驅藥；及 c) 一治療有效量之至少一種選擇性雌激素受體調

所構成之群組中： (A) —個具有下列化學式之苯並σ塞吩衍生物： N.

其中Ri與R2係各獨立地選自下列群中：氫、羥基及 一在活體内可被轉變成羥基之部分； 其中R3與R4係各獨立地選自：Cl-c4烷基，或者R3 、R4與其等所鍵結之氮一起形成任一選自下列群中之結 構· 17比17各烧基、二甲基_ 1 - u比洛烧基、甲基_ 1 - σ比洛烧基 、哌啶基、六亞甲基亞胺及嗎啉代基； 其中Α係選自下列群中·· _C0_、_ch〇h及-CH2-; 其中B係選自下列群中：苯撐、吡啶亞基及-環 c4h2n2-; (B)—具有下列化學式之化合物：

-78 1258369 其中尺〗與112係各獨立地選自下列 k f y ·氣、輕基 一在活體内可被轉變成經基之部分； 其中Z為一個二價閉合部分； 間原子將…環隔開 其中R100為一個以4至10個居 之二價部分； 價極性部分： 其中L為選自下列群中之二價或 -SO-、_CON_、_N<dSON< ;

其中係選自下列群中：氫、。心烴或是—個將 與L連接成一個5至7個原子雜環的二價部分，及鹵美 或别述之不飽和衍生物； 其中G2係不存在或係選自下列群中：氫、Ci-q烴或 是一個將4與1^連接成一個5至7個原子雜環的二 分’及_基或前述之不飽和衍生物； 其中h係選自下列群中：氫、甲基與乙基。 4·如申請專利範圍第丨項之藥學組成物，其進一步包含一 治療有效量之孕酮。

5. 如申請專利範圍第丨至4項中任一項之藥學組成物，其中 該前驅物不為4-雄留烯-3，17-二酮。 6. 如申請專利範圍第丨至3項任一項之藥學組成物，其中該 選擇性雌激素受體調節劑係選自羅拉新芬（Raloxifene) 、LY 353381與LY 335563 。 7. 如申請專利範圍第丨項之藥學組成物，其中z係選自下列 群中：-0NH_、-s·及-CH2。 8·如申請專利範圍第7項之藥學組成物，其中該化合物係 -79 1258369 具有下列通式結構之苯並吼喃衍生物：

其中D為-OCH2CH2N(R3)R4 (心與心係各獨立地發 自下列群中：Cl-㈣，或R3、R4與其等所鍵結之# -起形成-個選自T賴巾之環結構··咐㈣基、二予 基_1令各院基、Τ基小,比嘻统基、贫”定基、六亞甲羞 亞胺及嗎啉代基）； 其中Ri與R2係各獨立地選自下列群中··氫、羥基及 一在活體内可被轉變成羥基之部分。 9·如申請專利範圍第8項之藥學組成物，其中該苯並t南衍 生物係為一個於第2個碳上具有'絕對構型§之光學活

性化合物或其藥學上可接受之鹽類，該化合物具有下列 之分子結構：

”中R]與R2係各獨立地選自下列群中 活體内可被轉變成羥基之部分； 备基及一在 -80- 1258369 其中113係為一個選自下列群中之物種：飽和、不飽 和或經取代之°比σ各烧基，飽和、不飽和或經取代之°底°定 基，飽和、不飽和或經取代之氮雜環己基，飽和、不飽 和或經取代之嗎啉代基，含氮環狀部分，含氮多環部分 及NraRb (Ra與Rb為直鏈或支鏈烷基、直鏈或支鏈 C2-C6烯基及直鏈或支鏈C2-C6炔基）。

10. 如申請專利範圍第9項之藥學組成物，其中該化合物或 鹽類實質缺乏（2R)對映體異構物。 11. 如申請專利範圍第8項之藥學組成物，其中該選擇性雌 激素受體調節劑係選自下列群中： EM-800

EM-01520

EM-01533 1258369

EM-01518

12·如申請專利範圍第8項之藥學組成物，其中該苯並咄喃 衍生物係一種酸之鹽類，其中該酸係選自下列群中：乙 酸、己二酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、反 式丁知一酸、氫破酸、氫溴酸、氫氯酸二氫氯噻、經基 萘酸、乳酸、順式丁烯二酸、曱磺酸、甲基硫酸、1，5-萘基二續酸、破酸、十六烧酸、特戊酸、鱗酸、丙酸、 琥珀酸、硫酸、酒石酸、對苯二酸、對-甲苯磺酸及戊酸 〇 13 ·如申請專利範圍第12項之藥學組成物，其中該酸為氫 氣酸。 14·如申請專利範圍第1至4項中任一項之藥學組成物，其 中該選擇性雌激素受體調節劑為： ΕΜ-1538 -82 1258369

及數里之-選自下列群中的性類固醇前驅物:去氫異 雄8同、去氫異雄_硫酸鹽H5•稀_3H_二醇。 15·如申請專利範圍第⑴項中任一項之藥學組成物，其 中歧11 X員固醇前驅物為去氫異雄酮。 申哨專利範圍第2或3項之藥學組成物，其中該在活 體内可被轉變成性類固醇前驅物之該化合物具有下列通 式化學式：

其中X係選自下列群中：氫、R〇c·、R〇C2CHRa_ 及RbS(V [R係選自下列群中：氫、直鏈或支鏈（Cl-Cl8) 烷基、直鏈或支鏈（CrC〗8)烯基、直鏈或支鏈（c2_Ci8) 炔基、芳基、呋喃基、直鏈或支鏈氧烷基、芳 氧基、呋喃氧基及前述之鹵素基或羧基類似物；以為 氫或（C】-C6)烷基；及Rb係選自下列群中：羥基（或其鹽 類）、甲基、苯基與對-甲苯醯基]; 其中γ為羰基氧或γ代表一個β_οχ (χ具有如上之 相同意義）與oc-H。 -83- 1258369 17.如申請專利範圍第2或3項之藥學組成物，其中該在活體 内可被轉變成性類固醇前驅物之該化合物係選自下列 群中： EM-1304 〇

EM-01474-D

18.—種用以治療動脈粥樣硬化、子宮内膜癌、子宮癌與卵 巢癌或降低罹患風險的藥學組成物，其包含一種藥學上可 接受之賦形劑、稀釋劑或載劑、一治療有效量之 EM-1358

及一治療有效量之去氫異雄酮。 19. 一種套組，其包括一個第一容器，其中含有一治療有效 -84 1258369 量之至少 種遥自下列群中的性類固醇前驅物： :去氫異

少一種選擇性雌激素受 體調節劑，其中該選擇性雌激素受體調節劑係選自於: 下歹彳所構成之群組中·· (A)—個具有下列化學式之苯並噻吩衍生物：

其中Ri與R2係各獨立地選自下列群中：氫、羥基及 一在活體内可被轉變成經基之部分； 其中R3與R4係各獨立地選自：Cl-c4烷基，或者r3 、R4與其等所鍵結之氮一起形成任一選自下列群中之結 構.吡咯烷基、二甲基-1 -吡咯烷基、甲基_ i _吡咯烷基 、哌啶基、六亞曱基亞胺及嗎啉代基； 其中A係選自下列群中：_c〇…-⑶⑽及·€η2_ ; 其中Β係選自下列群中：苯撐、吡啶亞基及-環 c4h2n2-； (B)—具有下列化學式之化合物： 1258369

其中1與1係各獨立地選自下列群中：氫、羥基及 一在活體内可被轉變成羥基之部分； 其中Z為一個二價閉合部分； 其中R100為一個以4至10個居間原子將L·與B環隔開 之二價部分； 其中L為選自下列群中之二價或三價極性部分： -SO-、_CON_、-NUON< ; 其中◦“系選自下列群中：氫、Ci_C5烴或是一個將 G2與L連接成一個5至7個原子雜環的二價部分，及鹵基 或鈾述之不飽和衍生物； 其中G2係不存在或係選自下列群中：氫、烴或 是一個將G〗與L連接成一個5至7個原子雜環的二價部 分’及i基或前述之不飽和衍生物； 其中G3係選自下列群中：氫、甲基與乙基。 20·如申請專利範圍第19項之套組，其中該前驅物為心雄甾 稀-3,17一二酉同。 21 ·如申請專利範圍第19項之套組，其中該選擇性雌激素受 體調節劑係選自羅拉新芬（Raloxifene)、LY 335563 。 ~ 22·如申凊專利範圍第19項之套組，其中Z係選自下列群中 -86 ^8369 ’其中該化合物係具有下 • -〇-、-IVH-、及-CH2-。 •如申請專利範圍第22項之套組 列通式結構之苯並咄喃衍生物

D

其中 D為-OCH2CH2N(r )R 自下列群巾·〇: m “ · 1 4烷基’或1、〜與其等所鍵結之氮 一起形成-個選自下列群中之環結H錢基、二甲 基-1 - °比17各燒基、甲基_ L ^ρ 比各烷基' 哌啶基、六亞甲基 亞胺及嗎琳代基）； ”中1與〜係各獨立地選自下列群中：氫、經基及 一在活體内可被轉變成羥基之部分。 係為一個於第2個碳上 合物或其藥學上可接受 子結構·

24.如申請專利範圍第23項之套組，其中該笨心喃衍生物 具有一絕對構型s之光學活性化 之鹽類，該化合物具有下列之分

-87- 1258369 其中R〗與I係各獨立地選自下列群中··經基及一在 活體内可被轉變成羥基之部分； 其中R3係為一個選自下列群中之物種：飽和、不飽 和或經取代之吡咯烷基，飽和、不飽和或經取代之哌啶 基，飽和、不飽和或經取代之氮雜環己基，飽和、不飽 和或經取代之嗎啉代基，含氮環狀部分，含氮多環部分 及NraRb (Ra與Rb為直鏈或支鏈C]_C6烷基、直鏈或支鏈 C2_C：6烯基及直鏈或支鏈c2_c6炔基）。 25. 26

如申請專利範圍第24項之套組，其中該化合物或鹽類實 質缺乏（2R)對映體異構物。 K 如申請專利範圍第23項之套組，其中該選擇性雌激素為 體調節劑係選自下列群中： ' ΕΜ-800

EM-01520

EM-01533 -88 1258369

27 ·如申請專利範圍第23項之套組，其中該苯並吡喃衍生物 係一種酸之鹽類，其中該酸係選自下列群中：乙酸、己 二酸、笨磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、擰檬酸、反式丁烯 一酸、氫碘酸、氫溴酸、氫氯酸二氫氯噻、羥基萘酸、 乳酸、順式丁烯二酸、甲磺酸、甲基硫酸、丨，5_萘基二 ^ ^硝酸、十六烧酸、特戊酸、填酸、丙酸、琥珀酸 、硫酸、酒石酸、對苯二酸、對-甲苯磺酸及戊酸。

28·如申請專利範圍第”項之套組，其中該酸為氫氯酸。 29·如申請專利範圍第19項之套組，其中該選擇性雌激素受 體調節劑為： ’、又 EM -1538 1258369

3相、去氫異雄酮硫酸鹽、雄留-54-3β，ΐ7β-二醇。 申π專㈣圍第19項之套組’其中該性類固醇前驅物 為去氫異雄酮。 :申明專利範圍第19項之套組，其中該在活體内可被轉 夂成ϋ類固g?所驅物之該化合物具有下列通式化學式：

其中X係選自下列群中：氫、ROC…R〇C2CHRa_ 及Rbscv[R係選自下列群中：氫、直鏈或支鍵 烷基、直鏈或支鏈（CrC^8)烯基、直鏈或支鏈（C2_Ci8) 炔基、芳基、吱喃基、直鏈或支鏈（Cl-C18)氧烷基、芳 氧基、呋喃氧基及前述之i!素基或羧基類似物；以為 風或（C^C：6)烷基；及Rb係選自下列群中：羥基（或其鹽 類）、甲基、苯基與對-曱苯醯基]; 其中Y為羰基氧或Y代表一個β_οχ (χ具有如上之 相同意義）與α-Η。 32.如申請專利範圍第19項之套組，其中該在活體内可被轉 -90 1258369 變成性類固醇前驅物之該化合物係選自下列群中： EM-1304

EM-01474-D

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