HU222501B1 - MPA-t vagy MGA-t tartalmazó nyújtott hatóanyag-felszabadulású gyógyászati készítmény és eljárás előállítására - Google Patents

MPA-t vagy MGA-t tartalmazó nyújtott hatóanyag-felszabadulású gyógyászati készítmény és eljárás előállítására Download PDF

Info

Publication number
HU222501B1
HU222501B1 HU9303716A HU9303716A HU222501B1 HU 222501 B1 HU222501 B1 HU 222501B1 HU 9303716 A HU9303716 A HU 9303716A HU 9303716 A HU9303716 A HU 9303716A HU 222501 B1 HU222501 B1 HU 222501B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
mpa
androgen
microspheres
composition
mga
Prior art date
Application number
HU9303716A
Other languages
English (en)
Other versions
HU9303716D0 (en
HUT66859A (en
Inventor
Fernand Labrie
Martin Lepage
Original Assignee
Endorecherche Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Endorecherche Inc. filed Critical Endorecherche Inc.
Publication of HU9303716D0 publication Critical patent/HU9303716D0/hu
Publication of HUT66859A publication Critical patent/HUT66859A/hu
Publication of HU222501B1 publication Critical patent/HU222501B1/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
    • A61K31/568—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol substituted in positions 10 and 13 by a chain having at least one carbon atom, e.g. androstanes, e.g. testosterone
    • A61K31/569—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol substituted in positions 10 and 13 by a chain having at least one carbon atom, e.g. androstanes, e.g. testosterone substituted in position 17 alpha, e.g. ethisterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1641—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, poloxamers
    • A61K9/1647—Polyesters, e.g. poly(lactide-co-glycolide)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1682—Processes
    • A61K9/1694—Processes resulting in granules or microspheres of the matrix type containing more than 5% of excipient
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/18—Feminine contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T428/00—Stock material or miscellaneous articles
    • Y10T428/29—Coated or structually defined flake, particle, cell, strand, strand portion, rod, filament, macroscopic fiber or mass thereof
    • Y10T428/2982—Particulate matter [e.g., sphere, flake, etc.]

Abstract

A találmány tárgya hatóanyagként MPA-t vagy MGA-t tartalmazó,emlőkarcinóma, osteoporosis, endometriumkarci- nóma vagy endometriosiskezelésére vagy megelőzésére alkalmas elnyújtott felszabadulásúgyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy a készítménygrammonként 200–700 mg MPA- vagy MGA-hatóanyagot tartalmaz, és akészítmény grammonként és naponta 4–25 mg hatóanyagot ad le. Atalálmány tárgyát képezi továbbá a fenti készítmény előállításáraszolgáló eljárás is. ŕ

Description

Jelen találmány tárgya hatóanyagként MPA-t vagy MGA-t tartalmazó, emlőkarcinóma, osteoporosis, endometriumkarcinóma vagy endometriosis kezelésére vagy megelőzésére alkalmas gyógyászati készítmény és eljárás előállítására.
Új, elhúzódó felszabadulású készítményeket és ezek előállítására szolgáló eljárásokat ismertetünk az alábbiakban. A medroxi-progeszteron-acetát (MPA) és megestrol-acetát (MGA) injektálható új kiszerelési formáinak előnyös képviselői azok, amelyek az aktív résztvevő előre meghatározott keringési szintjét biztosítják elhúzódó ideig. Biológiai úton lebontható mikrorészecskéket alkalmazunk, amelyek medroxi-progeszteron-acetátot és megestrol-acetátot szabadítanak fel egy közel állandó alacsony arányban, ha meleg vérű állatba vagy emberbe injektáljuk őket. A megbetegedések megelőzésére és kezelésére csakúgy alkalmas, mint a fogamzóképesség szabályozására.
Számos kutató tanulmányozza a hormonterápiát emlő- és endometriumkarcinóma kezelésére csakúgy, mint csontritkulás megelőzésére és kezelésére és endometriosis kezelésére. A már kifejlődött emlőrák esetén a kezelés fő megközelítési módjai az ösztrogénhatás gátlásával és/vagy képzésének gátlásával állnak összefüggésben. Az ösztrogének szerepe az ösztrogénérzékeny emlőrák növekedésének előmozdításában jól ismert [Lippman, Sémin. Oncol. 10 (suppl. 4): 11-19, 1983; Sledge and McGuire, Cancer Rés. 38: 61-75, 1984; Wittliff, Cancer 53: 630-643, 1984; Poulin and Labrie, Cancer Rés. 46: 4933-4937,1986],
Az ösztrogénekről ismert az is, hogy elősegítik a normál endometrium (méhnyálkahártya) proliferációját. A krónikus ösztrogénexpozíció, amellyel nem áll szemben progeszteronhatás, endometrium hyperplasiához vezethet, ami az endometriumkarcinóma predisponáló tényezője (Lucas, Obstet. Gynecol. Surv. 29: 507-528, 1974). Az endometriumkarcinóma incidenciája megnő menopausa után, különösen olyan nőknél, akik ösztrogénterápiában részesültek szimultán progeszteronkezelés nélkül (Smith és munkatársai, N. Engl. J. Med. 293: 1164-1167,1975; Mack és munkatársai, N. Engl. J. Med. 294 : 1262-1267,1976).
Különböző kutatók vizsgálták a hormondependens emlő- és endometriumkarcinómát. Az endokrin terápia ismert formája menopausa előtti nőknél a kasztrálás, ami legáltalánosabban sebészi úton vagy besugárzással történik, ami két irreverzíbilis kasztrálást jelentő eljárás. Újabban a kasztrálás reverzibilis módja vált elérhetővé luteinizáló hormon felszabadító hormon agonisták (LHRH-agonisták) felhasználásával, amelyek - miután gátolják a bioaktív luteinizáló hormonok (LH) szekrécióját a hipofízisben - lecsökkentik a szérumösztrogéneket a kasztrálásnak megfelelő szintre (Nicholson és munkatársai, Brit. J. Cancer 39: 268-273,1979).
Néhány tanulmányban bemutatták, hogy a menopausa előtt álló mellrákos betegek LHRH-agonistákkal való kezelése a kasztrálás más módjaival kezeitekénél elért eredményekhez hasonlítható válaszokat indukált (Klijn és munkatársai, J. Steroid Biochem. 20: 1381, 1984; Manni és munkatársai, Endocr. Rév. 7, 89-94,
1986). Az LHRH-agonistákkal történő kezelés jó hatását megfigyelték menopausa után álló nőknél is (Nicholson és munkatársai, J. Steroid Biochem. 23; 843-848,1985).
A 4 071 622 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás tárgya bizonyos LHRH-agonisták felhasználása DMBA indukálta emlőkarcinóma ellen patkányban.
A 4 775 660 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás tárgya a női emlőkarcinóma kezelése egy olyan kombinált terápiával, ami egy antiandrogén és egy antiösztrogén adagolását alkalmazza nőknél, miután a petefészek hormontermelését kémiai vagy sebészi úton leállították.
A 4 775 661 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás tárgya a női emlőkarcinóma kezelése egy olyan terápia alkalmazásával, melynek során, miután a petefészkek hormontermelését kémiai vagy sebészi úton leállították, egy antiandrogént és nem kötelezően egyes szexszteroid bioszintézisgátlókat alkalmaztak.
A 4 760 053 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás bizonyos szexszteroid-dependens rákok kezelését íija le, amelybe az LHRH-agonisták, antiandrogének, antiösztrogének és egyes szexszteroid bioszintézisgátlók közül kiválasztott vegyületek különböző speciális kombinációinak alkalmazása tartozott.
A 4 472 382 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás tárgya a prosztata-adenokarcinóma, a benignus prosztata hypertrophia és a hormonfuggő emlőtumorok kezelése speciális gyógyszerekkel, illetve azok kombinációival. Különböző LHRH-agonistákat és antiandrogéneket említenek.
A WO 92 105763 számon publikált nemzetközi bejelentés egyes 16,16-kétszeresen szubsztituált androsztén szteroidvegyületeket említ hajnövesztőnek és bőrelváltozásokra. A PCT/W086/01105 számú nemzetközi bejelentés a meleg vérű állatok egy szexszteroidfüggő rákjainak kezelésére egy olyan eljárást ismertet, amely speciális gyógyszerek és kombinációik adagolását tartalmazza. Antiandrogéneket, antiösztrogéneket, a szexszteroid bioszintézis egyes gátlóit és a hormontermelés leállítását említik.
A feltalálók ezzel összefüggő 1989. március 10-én benyújtott 07/321926 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésének tárgya eljárás emlő- és endometriumkarcinóma kezelésére az arra hajlamos meleg vérű állatokban, amely tartalmazhatja, mint egy kombinált terápia részét, a petefészkek hormontermelésének gátlását sebészi (ovariectomia) vagy kémiai (LHRH-agonista felhasználása, például [D-Trp6, desGly-NH2 10]LHRH-etil-amid, vagy agonistái) úton; továbbá antiösztrogéneket, androgéneket, progesztineket, szexszteroidképzés-gátlókat (különösen a szexszteroidok 17p-hidroxi-szteroid-dehidrogenáz vagy aromatáz katalizálta termelését gátlókat), a prolaktinszekréció, a növekedésihormon-szekréció és ACTH-szekréció gátlókat ismertetünk.
Androgénreceptorok jelenlétét mutatták ki normál [Witliff, In: Bush, H. (Ed), Methods in Cancer Rés.,
HU 222 501 Bl
Vol. 11, Acad. Press, New York, 1975, 298-304; Allegra és munkatársai, Cancer Rés. 39: 1447-1454, 1979] és daganatos (Allegra és munkatársai, Cancer Rés. 39: 1147-1454, 1979, Engelsman és munkatársai, Brit. J. Cancer 30: 177-181, 1975, Mossa és munkatársai, J. Ster. Biochem. 6: 743-749,1975: Miller és munkatársai, Eur. J. Cancer Clin. Oncol. 2: 539-542, 1985; Lippman és munkatársai, Cancer 38: 868-874, 1976; Allegra és munkatársai, Cancer Rés. 39: 1447-1454, 1979; Miller és munkatársai, Eur. J. Clin. Oncol. 21; 539-542, 1985, Lea és munkatársai, Cancer Rés. 49: 7162-7167, 1989), valamint néhány mesterségesen fenntartott emlőrák sejtvonalában (Lippman és munkatársai, Cancer Rés. 36: 4610-4618, 1976; Horwitz és munkatársai, Cancer Rés. 38: 2434-2439, 1978; Poulin és munkatársai, Breast Cancer Rés. Treatm. 12: 213-225,1988). Androgénreceptorok vannak jelen a dimetil-benzantracén (DMBA) indukálta emlőtumorokban is patkányban (Asselin és munkatársai, Cancer Rés. 40: 1612-1622,1980).
Androgénreceptorokat írtak le humán endometriumban is (MacLaughlin és Richardson, J. Steroid Biochem. 10: 371-377, 1979; Muechler és Kohler, Gynecol. Invest. 8: 104, 1988). Leírták az androgén metil-triénolon (R 1881) endometriumkarcinómanövekedést gátló hatásait in vitro (Centola, Cancer Rés. 45: 6264-6267,1985).
Újabb beszámolók szerint androgénreceptorok hozzájárulhatnak az ösztrogénreceptorok szelektivitásához, vagy éppen háttérbe szoríthatják az ösztrogénreceptorokat; ez fordul elő a leggyakrabban az endokrin terápiában (Teulings és munkatársai, Cancer Rés. 40: 2557-2561, 1980, Bryan és munkatársai, Cancer Rés. 54 : 2436-2440,1984).
Az első sikeresen alkalmazott androgén előrehaladott emlőkarcinóma kezelésére a tesztoszteron-propionát (Nathanson, Rec. Prog. Horm. Rés. 1: 261-291, 1947). Ezután sok vizsgálat megerősítette az androgének pozitív hatását az emlőkarcinómára (Alán és Herrman, Ann. Surg. 123: 1023-1035; Adair, Surg. Gynecol. Obstet. 84: 719-722,1947; Adair és munkatársai, JAMA 140: 1193-2000, 1949). Ezek a kezdeti eredmények kooperatív vizsgálatok elvégzésére késztettek a tesztoszteron-propionát és a DES hatásaira vonatkozóan, melyek közül mindkettőt hatékonynak találták objektív javulások elérésében [az USA Orvosi Szövetsége (Am. Med. Association) Kémiai és Gyógyszerészeti Tanácsának Kutatási Bizottságának a szteroidokkal és rákkal foglalkozó alcsoportja és az NCI Rák Kemoterápia Nemzeti Szolgáltató Központjának kooperatív mellrákkal foglalkozó csoportjának kutatásai alapján azt találták, hogy a tesztoszteron-propionát jobb javulási arányt és időtartamot, életvitelt és túlélést biztosít (Cooperative Breast Cancer Group, JAMA 188, 1069-1072,1964)].
A reagálási arányt 48%-nak találták (27 betegből 13) menopausa után levő nőkben, akik hosszú hatású androgént, a metanolon-enantátot kapták (Kennedy és munkatársai, Cancer 21: 197-201, 1967). A túlélési idő középértéke négyszer hosszabb volt a reagálók esetében a nem reagáló csoporthoz hasonlítva (27, illetve 7, 5 hónap). Nagyszámú vizsgálat igazolta, hogy az androgének a metasztázisos mellrákos nők 30-40%ában javulást indukáltak (Kennedy, Hormoné Therapy in Cancer, Geriatrics 25: 106-112, 1970; Goldenberg és munkatársai, JAMA 223: 1267-1268,1973).
Újabban 39%-os reagálási arányt figyeltek meg 11 hónapos átlagos időtartammal 33 menopausa utáni nőből álló csoportban Fenoximeszteron- (Halostatin, 10 mg, kétszer naponta) kezelésre, akik korábban nem jól vagy egyáltalán nem reagáltak Tamoxifenre (Manni és munkatársai, Cancer 48: 2507-2509,1981).
Ezen nők közül 17 hypophysectomián is átesett. Nem volt eltérés a Fluoximeszteronra való reagálási arányban azon páciensek között, akik korábban reagáltak Tamoxifenre, és azok között, akik nem. A 17 beteg közül, akik sem a Tamoxifenre, sem a hypophysectomiára nem reagáltak, 7 reagált a Fluoximeszteronra 10 hónap átlagos időtartamig. Ezek közül kettő nem reagált vagy a Tamoxifenre, vagy a hypophysectomára.
A Fluoximeszteron és Tamoxifen kombinációja hatékonyabbnak bizonyult, mint a Tamoxifen egyedül. Valójában teljes reakciót (CR) csak a kombinált alkalmazásnál láttunk, míg 32% mutatott részleges reakciót (PR) kombinált kezelés esetén a mindössze 15%-kal szemben a monoterápia esetén. Továbbá kombinált terápia esetén a nem reagálók aránya csak 25% volt, míg ez 50% a csak TAM-mal kezelt betegek esetén. (Tormey és munkatársai, Ann. Int. Med. 98: 139-144, 1983). Továbbmenve, a terápia kezdetétől a kezelés elégtelenségéig eltelt középidő hosszabb volt Fluoximeszteron+Tamoxifen adásakor (180 nap), mint csak Tamoxifen alkalmazása esetén (64 nap). A túlélési növekedési tendenciája volt megfigyelhető kombinált terápiára (380 nap 330 nappal szemben).
Egy antiösztrogénnel kombinált androgén független pozitív hatására utal az a beszámoló, amely szerint azok a betegek, akik nem reagálnak Tamoxifenre, reagálhatnak Fenoximeszteronra, és fordítva. Továbbmenve, a Tamoxifennel kezelt betegek, akiknél később Fluoxiifleszteronra váltottak, hosszabb túlélésűek voltak, mint akiket fordított sorrendben kezeltek (Tormey és munkatársai, Ann. Int. Med. 98: 139-144,1983).
Minthogy a tesztoszteron-propionát pozitív hatású mind menopausa előtt, mind menopausa után levő nőknél (Adair és munkatársai, J. Am. Med. Áss. 15: 1193-1200, 1949), ez arra utal, hogy az androgén a gonadotropinszekréció-gátláson túl androgén direkt gátló hatást fejt ki a tumomövekedésre.
Új in vitro vizsgálatok leíqák egy androgén relatív antiproliferatív hatását a ZR-75-1 ösztrogénérzékeny humán emlőkarcinóma-sejtvonal növekedésére (Poulin és munkatársai, „Androgens inhibit basal and estrogeninduced cell proliferation in the ZR-75-1 humán breast cancer cell line”, Breast Cancer Rés. Treatm. 12: 213-225, 1989). Amint a fentiekben megjegyeztük, Poulin és munkatársai (Breast Cancer Rés. Treatm. 12: 213-225, 1989) találták azt, hogy a ZR-75-1 humán emlőkarcinóma-sejtek növekedését gátolják az androgének, az androgének gátló hatása hozzáadódik
HU 222 501 Bl az antiösztrogénekéhez. Az androgének gátló hatását a ZR-75-1 humán emlőkarcinóma-sejtek növekedésére in vivő is megfigyelték csupasz egereken (Dauvois és Labrie, Cancer Rés. 51: 3131-3151,1991).
Az androgén emlőkarcinómára kifejtett hatásának egy lehetséges mechanizmusaként ismertették azt nemrégiben, hogy az androgének erősen lecsökkentik az ösztrogén- (ER) és progeszteron- (PgR) receptorok mennyiségét a ZR-75-1 humán emlőkarcinóma-sejtekben, amint ez radioligand kötés és anti-ER monoklonális antitestek mérésével megállapítható. Hasonló gátló hatásokat figyeltek meg az ER mRNS-szintjeire, amit ribonukleázvédési vizsgálattal mértek. Az androgén hatást a nem aromatizálható androgén, az 5a-dihidrotesztoszteron nanomol/1 alatti koncentrációinál mérték függetlenül az ösztrogének jelenlététől, és kompetitíve visszafordították az antiandrogén hidroxi-flutamiddal (Poulin és munkatársai, Endocrinology 125: 392-399, 1989). Ezek az ösztrogénreceptor-kifejeződésre vonatkozó adatok legalább részben egy értelmezést nyújtanak az androgének emlőráksejtek növekedésére kifejtett antiösztrogén hatásaira, és arra mutatnak továbbá, hogy az androgén terápia specifikus gátló hatásai hozzájárulhatnak az ösztrogéneknek antiösztrogénekkel való blokkolására korlátozódó standard kezeléshez.
Dauvois és munkatársai (Breast Cancer Rés. Treatm. 14: 299-306,1989) kimutatták, hogy az 5a-dihidrotesztoszteron (DHT) androgén állandó felszabadulása ovariectomizált patkányokban, akik DMBA indukálta emlókarcinómában szenvedtek, a 17P-ösztradiol (E2) indukálta tumomövekedés jelentős gátlását eredményezte. Azt, hogy a DTH az androgénreceptorral való interakció révén hat, alátámasztja az a megfigyelés, hogy szimultán kezelés az antiandrogén Flutamiddal teljesen kiküszöbölte a DTH hatását. Különösen illusztratív az androgén DTH tumomövekedésre kifejtett effektív gátló hatására az, hogy a DTH által az E2-vel kezelt állatoknál a progresszív tumorok száma 69,2%ról 29,2%-ra csökkent, és az androgén révén a komplett reakciók száma (tapintható tumorok eltűnése) 11,5%ról 33,3%-ra nőtt az állatok ugyanazon csoportjánál. Az újonnan megjelenő tumorok száma a 28 napos megfigyelési idő alatt 1,5 ±0,3-ról 0,7±0,2-re csökkent patkányonként az E2-vel kezelt állatoknál az androgén DTH adagolása alatt, ami olyan hatás, amit az antiandrogén Flutamid ugyancsak visszafordít. Ezek az adatok először demonstrálják, hogy az androgének hatékony gátlói a DMBA indukálta emlőkarcinóma-növekedésnek olyan hatásmechanizmus révén, amely független a gonadotropinszekréció-gátlástól, és olyan hatásra utal, ami közvetlenül a tumor szintjén valósul meg, így alátámasztja továbbá a humán ZR-75-1 emlőkarcinómasejtekkel in vitro nyert adatokat (Poulin és munkatársai, Breast Cancer Rés. Treatm. 12: 213-225, 1988).
A tesztoszteron (TESTO) és dihidrotesztoszteron (DHT) természetes androgének az androsztén-dionnak 17b-hidroxi-szteroid-dehidrogenáz segítségével TESTOvá, majd a TESTO-nak 5a-reduktáz enzim segítségével DHT-vá alakulásával képződnek. A mellékvesében levő prekurzor, az 5-androszt-5-én-33,16p-diolból is keletkezhet TESTO a 3p-hidroxi-szteroid dehidrogenáz/A5A4 izomeráz (3p-HSD) enzim hatására.
Minthogy a TESTO és DHT természetes androgének erősen maszkulinizáló hatásúak, a TESTO-nak csakúgy, mint a progeszteronnak számos származékát szintetizálták, hogy olyan használható vegyületeket nyerjenek, amelyek kevesebb nemkívánatos maszkulinizáló mellékhatást okoznak (testszőrzet növekedése, hajhullás, akne, seborrhoea és mély hang).
A medroxi-progeszteron-acetát egyike a legszélesebb körben alkalmazott vegyületeknek az előrehaladott emlőrák endokrin kezelésére nőkben (Mattsson, Breast Cancer Rés. Treatm. 3: 231-235, 1983; Blumenschein, Sémin. Oncol. 10: 7-10,1983; Hortobágyi és munkatársai, Breast Cancer Rés. Treatm. 5: 321-326, 1985; Haller és Glick, Sémin. Oncol. 13: 2-8,1986; Horwitz, J. Steroid Biochem. 27: 447-457,1987). Általában a klinikai reakció aránya ezen szintetikus progesztin nagy dózisainál átlagosan 40% válogatatlan emlőrákos betegeknél (Horwitz, J. Steroid Biochem. 27 : 447-457, 1987), ami a nem szteroid antiösztrogén tamoxifen hatásához hasonlítható [Lippman, Sémin. Oncol. 10 (Suppl.): 11-19, 1983]. Általánosabb felhasználása azonban az emlőrák relapsusát célozza más endokrin terápiás módszert követően. A medroxi-progeszteron-acetát (MPA) maximális gátló hatását a humán emlőkarcinóma-sejtek növekedésére in vitro 1 nmol/l-es, igen alacsony koncentrációval érhetjük el, míg gyakran kb. 1000-szer magasabb dózis szükséges a glukokortikoid-hatás eléréséhez (Poulin és munkatársai, Breast Cancer Rés. Treatm. 13: 161-172,1989).
Mostanáig az MPA tumorellenes hatása alapját képező mechanizmusok kevéssé voltak világosak, és azokat a progeszteronreceptorokkal való interakciónak tulajdonították. Ez a szteroid azonban nagy affinitást mutat a progeszteron- (PgR), valamint az androgén- (AR) és glukokortikoid-receptorokhoz (GR) is különböző állati szövetekben (Perez-Palacios és munkatársai, J. Steroid Biochem. 19: 1729-1735,1983; Janne és Bardin, Pharmacol. Rév. 36: 35S-42S, 1984; Pridjian és munkatársai, J. Steroid Biochem. 26:313-319, 1987; Ojasso és munkatársai, J. Steroid Biochem. 27: 255-269, 1987), valamint humán emlőtumorokban (Young és munkatársai, Am. J. Obstet, Gynecol. 137: 284-292, 1980), és ez a tulajdonság jellemző más szintetikus progeszteronszármazékokra is (Bullock és munkatársai, Endocrinology 103: 1768-1782, 1978; Janne és Bardin, Pharmacol. Rév. 36: 35S-42S, 1984; Ojasso és munkatársai, J. Steroid Biochem. 27: 255-269, 1987). Ismert, hogy a progeszteronreceptorokon (PgR) túlmenően a legtöbb szintetikus progesztagén szer szignifikáns affinitással kötődik az androgénreceptorokhoz (AR) és a glukokortikoid-receptorokhoz (GR), és olyan biológiai hatásokat váltanak ki, amelyeket ezek az individuális receptorrendszerek specifikusan meghatároznak [Labrie és munkatársai, Fertil. Steril 28; 1104-1112, 1977; Engel és munkatársai, Cancer Rés. 38: 3352-3364, 1978; Raynaud és munkatársai, In Mechanism of Steroid Action (G. P. Lewis, M. Grisburg szerkesztők), MacMiland Press, London, 145-158., 1981; Rochefort and Chal4
HU 222 501 Β1 bős, Mól. Cell. Endocrinol. 36: 3-10, 1984; Jánne es Bardin, Pharmacol. Rév. 36: 35S-42S, 1984; Poyet és Labrie, Mól. Cell. Endocrinol 42: 283-288, 1985; Poulin és munkatársai, Breast Cancer Rés. Treatm. 13: 161-172,1989]. Ennek megfelelően a progeszteronétól különböző néhány mellékhatást észleltek az MP A-val kezelt betegeknél.
Az MPA a gonadotropinszekrécióra érthetően gátló hatást gyakorol a patkány és az emberi hipofízis AR-aival való közvetlen interakció révén (Labrie és munkatársai, Fertil. Steril. 28: 1104-1112, 1977; Perez-Palacios és munkatársai,!. SteroidBiochem. 19: 1729-1735, 1983, Perez-Palacios és munkatársai, J. Steroid Biochem. 15: 125-130, 1981). Továbbá az MPA gátolja az androgénaktivitást egérvesében (Jánne és Bardin, Pharmacol. Rév. 36: 35S-42S, 1984) és patkány neutrális prosztatájában (Labrie C. és munkatársai, J. Steroid Biochem. 28: 379-384, 1984; Labrie C. és munkatársai, Mól. Cell. Endocrinol. 68: 169-179, 1990). Az AR-hoz való nagy affinitása ellenére az MPA ritkán okoz szignifikáns virilizációs tüneteket (akne, hirsutismus stb., Haller és Glick, Sémin. Oncol. 13,2-8,1986).
Az MPA legkönnyebben magyarázható káros mellékhatásai a glukokortikoidszerű hatáshoz kötődnek, így a Cushingoid-szindróma, eufória és szubjektív fájdalomcsökkenés (Mattsson, Breast Cancer Rés. Treatm. 3: 231-235, 1983; Blossey és munkatársai, Cancer 54: 1208-1215, 1984; Hortobágyi és munkatársai, Breat Cancer Rés. Treatm. 5: 321-326,1985; Van Veelen és munkatársai, Cancer Chemother. Pharmacol. 15: 167-170,1985). A PMA mellékvese-működést gátló hatását mind az ACTH-szekrécióra kifejtett gátló hatásával hipofizisszmten, mind a szteroidképzés direkt gátlásával mellékveseszinten magyarázzuk (Blossey és munkatársai, Cancer 54: 1208-1215,1984; Van Veelen és munkatársai, Cancer Chemother. Pharmacol. 15: 167-170, 1985; Van Veelen és munkatársai, Cancer Treat. Rep. 69: 977-983,1985).
Az AR-hoz való nagy affinitása ellenére az MPA ritkán okoz szignifikáns virilációs tüneteket (akne, hirsutismus stb., Haller és Glick, Sémin. Oncol. 13: 2-8, 1986). Ezenfelül az MPA a gonadotropinkiválasztásra kifejtett gátló hatását egyértelműen visszavezették a hipofízis AR-ral való kölcsönhatására patkányban (Labrie és munkatársai, Fertil. Steril. 28: 1104-1112, 1977; Perez-Palacios és munkatársai, J. Steroid Biochem. 19: 1729-1735,1983) és emberben (Perez-Palacios és munkatársai, J. Steroid Biochem. 15: 125-130, 1981). Továbbá az MPA gátolja az androgénaktivitást egérvesében (Jánne és Bardin, Pharmacol. Rév. 36: 35S-42S, 1984) és patkány ventrális prosztatájában (Labrie, C. és munkatársai, J. Steroid Biochem. 28: 379-384, 1987; Labrie C. és munkatársai, Mól. Cell. Endocrinol. 68: 169-179,1990).
Poulin és munkatársai ,Λ sejtproliferáció androgénés glukokortikoid-receptor közvetítette gátlása medroxiprogeszteron-acetáttal ZR-75-1 humán emlőkarcinóma-sejtekben” (Breast Cancer Rés. Treatm. 13: 161-172, 1989) című munkájukban újabban azt találták, hogy a medroxi-progeszteron-acetát (MPA) gátló hatása a ZR-75-1 humán emlőkarcinóma-sejtekre főképpen a vegyület androgén tulajdonságainak tulajdonítható. Az MPA androgén tulajdonságait más rendszerekben már bemutatták (Labrie C. és munkatársai, J. Steroid Biochem. 28: 379-384,1987; Luthy és munkatársai, J. Steroid Biochem 31: 845-852,1988, Plante és munkatársai, J. Steroid Biochem. 31: 61-64, 1988, Labrie C. és munkatársai, Mól. Cell. Endocrinol. 58: 169-179, 1990). Egyéb szintetikus progesztinekről is megmutatkozott, hogy a progeszteronszerű hatásukon túl különböző mértékben androgén hatással is rendelkeznek (Labrie és munkatársai, Fertil. Steril. 31: 29-34, 1979, Poyet és Labrie, The Prostate 9 : 237-246, 1986; Labrie C. és munkatársai, J. Steroid Biochem. 28: 379-384, 1987; Luthy és munkatársai, J. Steroid Biochem. 31: 845-852, 1988; Plante és munkatársai, J. Steroid Biochem. 31: 61-64,1989).
Nagy dózisú progesztineket, különösen medroxiprogeszteron-acetátot és megestro-acetátot sikeresen alkalmaztak endometriumkarcinóma kezelésére is (Tatman és munkatársai, Eur. J. Cancer Clin. Oncol. 25: 1619-1621, 1989; Podratz és munkatársai, Obstet. Gynecol. 66: 106-110, 1985; Ehrlich és munkatársai, Am. J. Obstet, Gynecol. 158: 797-807,1988). Az androgén metil-tesztoszteron enyhíti az endometriosis tüneteit (Hamblen, South Med. J. 50: 743, 1987; Preston, Obstet. Gynecol 2: 152, 1965). Az androgén és maszkulinizáló mellékhatások (amelyek időnként irreverzíbilisek) azonban lényegesek az olyan hatékony androgénvegyületeknél, mint a tesztoszteron és származékai.
A nagy dózisú MPA - az emlőkarcinóma első kezelésére alkalmazva - a Tamoxifenhez hasonló hatást fejtett ki (Van Veelen és munkatársai, Cancer 58: 7-13, 1986). A nagy dózisú progesztineket, különösen a medroxi-progeszteron-acetátot és megestrol-acetátot sikeresen alkalmazzák endometriumkarcinóma kezelésére is (Tatman és munkatársai, Eur. J. Cancer Clin. Oncol. 25: 1619-1621, 1989; Podratz és munkatársai, Obstet, Gynecol. 66: 106-110, 1985: Ehrlich és munkatársai, Am J. Obstet. Gynecol. 158: 797-807,1988). Nagy dózisú MPA-t a Tamoxifenéhez hasonló sikerrel alkalmaztak endometriumkarcinóma kezelésére (Rendina és munkatársai, Europ. J. Obstet. Gynecol. Repród. Bioi. 17: 285-291,1984).
Egy randomizált klinikai kipróbálásnál a 6 hónapig alkalmazott nagy dózisú MPA a betegség visszafejlődését indukálta a betegek 50%-ánál és részleges visszafejlődését váltotta ki 13%-nál, míg azoknál a betegeknél, akik placebót kaptak, ezek az értékek 12%, illetve 6% voltak (Telimaa és munkatársai, Gynecol. Endocrinol. 1: 13,1987).
Az androgén metil-tesztoszteron az endometriosis tüneteit szüntette meg (Hambleen, South Med. J. 50: 743,1987; Preston, Obstet, Gynecol. 2: 152,1965). Az androgén és maszkulinizáló mellékhatások (időnként irreverzíbilisek) azonban lényegesek az olyan hatékony androgénvegyületeknél, mint a tesztoszteron.
Az ösztrogénreceptorok androgén indukálta csökkenéséhez hasonlóan a ZR-75-1 humán emlőráksejtekben (Poulin és munkatársai, Endocrinology 125: 392-399,
HU 222 501 Bl
1989) az MPA orális adagolása nőknél a follikuláris fázisban az ösztrogénkötés szintjének csökkenését okozta az endometriumban (Tseng és Gurpide, J. Clin. Endocrinol. Metab. 41,402-404,1975).
Állatokon végzett vizsgálatok kimutatták, hogy az androgénhiány osteopeniához vezet, míg a tesztoszteronadás növeli a csontok átlagos mennyiségét (Silberberg és Silberberg, 1971; lásd Finkelstein és munkatársai, Ann. Int. Med. 106: 354-361, 1987). Orchiectomia (hereeltávolítás) patkányokon észlelhető osteoporosist okozhat 2 hónapon belül (Winks and Félts, Calcif. Tissue Rés. 32: 77-82, 1980; Verhas és munkatársai, Calif. Tissue Rés. 39: 74-77,1986).
Bár a hirsutismusos oligomenorrhoeás és amenorrhoeás nők keringő E2-szintje alacsony, és azt várnánk, hogy a csonttömegük csökkent, ezek a nők magas androgén- (de alacsony ösztrogén-) szinttel kevésbé hajlamosak osteoporosisra (Dixon és munkatársai, Clinical Endocrinology 30: 271-277,1989).
A mellékvese androgénszintjeit csökkentnek találták osteoporosisban (Nordin és munkatársai, J. Clin. Endocr. Metab. 60: 651,1985). Továbbá a megnövekedett androgénszint menopausa után levő nőkben védőhatásúnak bizonyult a gyors csontállományvesztéssel szemben (Deutsch és munkatársai, Int. J. Gynecol. Obstet. 25: 217-222, 1987; Aloia és munkatársai, Arch. Int. Med. 143: 1700-1704, 1983). Az androgének ilyen szerepének megfelelően az androgén metabolitok szintje a vizeletben alacsonyabb postmenopausalis symptomás menopausában, mint a megfelelő kontroliokban és a konjugált dehidroepiandroszteron (DHEA) szignifikáns csökkenését találtak osteoporosisos betegek plazmájában (Holló és Fehér, Acta Med. Hung. 20: 133, 1964; Urist és Vincent, J. Clin Orthop. 18: 199,1961; Holló és munkatársai, Acta Med. Hung. 27: 155, 1970). Ez arra utal, hogy a postmenopausalis osteoporosist a hypoösztrogenizmus és hypoandrogenizmus együtt okozza (Holló és munkatársai, Láncét: 1357,1976).
Az ösztrogének és androgének fentiekben feltételezett osteoporosisban játszott szerepének mechanizmusa alapulhat ösztrogén- (Komort és munkatársai, Science 241: 81-84, 1988; Eriksen és munkatársai, Science 241: 84-86,1988) és androgén- (Colyard és munkatársai, Proc. Natl. Acad. Sci 86: 854-857) receptorok osteoblastokban való jelenlétén, ami megmagyarázná az ösztrogén- és androgéncsökkenés után megfigyelt megnövekedett csontfelszívódást.
Fiúkban normál pubertás alatt a szérumtesztoszteron-szint növekedése az alkalikusfoszfát-aktivitás (az osteoblast-aktivitás jelzője) növekedését idézi elő, ami viszont a csont sűrűségének növekedését okozza (Krabbe és munkatársai, Arch. Dis. Child. 54: 950-953, 1979; Krabbe és munkatársai, Arch. Pediat. Scand. 73: 750-755, 1984; Riis és munkatársai, Calif. Tissue Rés. 37: 213-217,1985).
Míg nőknél gyors csontfogyatkozás kezdődik a menopausával, férfiaknál a csontállomány-veszteség kb. 65 éves korban észlelhető (Riggs és munkatársai, J. Clin. Invest. 67: 328-335,1987). Szignifikáns csontritkulást kb. 80 éves korban látunk a férfiaknál a csípő-, gerinc- és csuklótörések következményes előfordulásával. Számos vizsgálat kimutatta, hogy az osteoporosis az androgénhiány klinikai megnyilvánulása férfiakban [Baran és munkatársai, Calif. Tissue Rés. 26: 103-106, 1978; Odell és Swerdloff, West. J. Med. 124: 446-475, 1976; Smith és Walker, Calif. Tissue Rés. 22 (Suppl.): 225-228,1976], Ha kevesebbszer is, mint nőknél, az osteoporosis szignifikáns megbetegedést okozhat férfiaknál is (Seeman és munkatársai, Am. J. Med. 75: 977-983, 1983). Valójában az androgénhiány nagy kockázatot jelent csigolya-összeroppanás szempontjából férfiakban (Seeman és munkatársai, Am. J. Med. 75: 977-983,1983). Az orsócsont és a csigolyacsontok keménységének csökkenése a hyperprolaktinaemiával (Greespan és munkatársai, Ann. Int. Med. 104 : 777-782, 1986) vagy anorexia nervosával (Rigotti és munkatársai, JAMA 256: 385-288, 1986) összefüggésben álló hypogonadizmus következménye. Ezekben az esetekben azonban a hyperprolaktinaemia és a súlyvesztés szerepe vitatható.
A hypogonadizmus férfiaknál jól ismert oka a csontritkulásos töréseknek (Albright és Reinfenst, 1948; Saville, Clin. End. Metab. 2: 177-185,1973). A csontok sűrűsége valójában mind elsődleges, mind másodlagos hypogonadizmus esetén csökken (Velentzas és Karras. Nouv. Presse Médicale 10 : 2520,1981).
Súlyos osteopeniát írtak le 23 csökkent gonadotrop hormonú hypogonadizmusban szenvedő férfinél, ahol a csont kortikális és trabekuláris állományának sűrűsége is csökkent (Finkelstein és munkatársai, Ann. Int. Med. 106: 354-361, 1987; Foresta és munkatársai, Horm. Metab. Rés. 15: 56-57, 1983). Osteopeniát írtak le Klinefelter-syndromás férfiaknál is (Foresta és munkatársai, Horm. Metab. Rés. 15: 206-207, 1983; Foresta és munkatársai, Horm. Metab. Rés. 15: 56-57,1983; Smith és Walker, Calif. Tissue Rés. 22: 225-228,1977).
Patkányokban kasztrációt követően androgénre reverzibilisen csökkent érzékenységet írtak le kalcitonínra (Ogata és munkatársai, Endocrinology 87: 421, 1970: Holló és munkatársai, Láncét 1: 1205, 1971; Holló és munkatársai, Láncét 1: 1357,1976). Továbbá szérumkalcitoninszint-csökkenést írtak le hypogonadizmusban szenvedő férfiaknál (Foresta és munkatársai, Horm. Metab. Rés. 15: 206-207, 1983), és kasztrált patkányok tesztoszteronkezelése megnövelte a kalcitonin hypocalcaemiás hatását (McDermatt és Kidd, End. Rév. 8: 377-390,1987).
Albright és Ruferstein (1948) feltételezték először, hogy az androgének növelik a csontállomány építését. Az androgénekről azt is kimutatták, hogy növelik az osteoid szintézist és mineralizációt csirkében (Puche és Rosmano, Calif. Tissue Rés. 4: 39-47, 1969). Az androgénkezelés a hypogonadizmusban szenvedő férfiaknál előmozdítja a csontok növekedését és fejlődését (Webster és Hogkins, Proc. Soc. Exp. Bioi. Med. 45: 72-75, 1940). Továbbá a tesztoszteronkezelés férfiaknál pozitív nitrogén-, kalcium- és foszfátegyensúlyhoz vezet (Albright F., Reifenstein, E. G. In: The parathyroid glands and metabolic boné disease, Williams and Williams Co.: Baltimore, 145-204. oldalak,
HU 222 501 Bl
1948). Csonthystomorphometriával vizsgálva a tesztoszteronkezelés hypogonadizmusban szenvedő férfiaknál a relatív osteoid térfogat, a teljes osteoid felszín, a csontok hosszanti képződése és a csontmineralizáció növekedését eredményezte (Barau és munkatársai, Calcif. Tissue Rés. 26: 103-106,1978).
A tesztoszteronnal való kezelés növelte az osteoid felszíneket és a csontgerendák szélességét változatlan vagy csökkentett rárakódási arány mellett, és ez a teljes csontmineralizáció arányának növekedését jelzi (Peackock és munkatársai, Boné 7: 261-268, 1986). A plazmafoszfátszint is csökkent volt, ami valószínűleg a foszfátok renális tubuláris visszaszívódására kifejtett hatásnak köszönhető (Selby és munkatársai, Clin. Sci. 69: 265-271,1985).
A kortikális csont sűrűsége nő hyperprolactinaemás hypogonadizmusos férfiaknál, ha a here működése normalizálódik (Greenspan és munkatársai, Ann. Int. Med. 104: 777-782; Greenspan és munkatársai, Ann. Int. Med. 110: 526-531,1989). A tesztoszteronkezelés növeli a csontképzést primer hypogonadizmusban szenvedő férfiaknál (Báron és munkatársai, Calcif. Tissue Rés. 26: 103-106,1978; Francis és munkatársai, Boné 7: 261-268,1986).
GnRH hiányos hypogonadizmusos férfinál a szérumtesztoszteron több mint 12 hónapos normalizálása megnövelte a csontok sűrűségét (Kinkelstein és munkatársai, J. Clin. Endocr. Metab. 69: 776-783, 1989). A már csontfejlődésüket befejezett férfiaknál (azt epiphysisek záródása után) azonban a kortikális csontsűrűség szignifikásan növekedett, míg a csontgerendák sűrűségében nem volt szignifikáns változás tapasztalható, így ez alátámasztja a kortikális és trabekuláris csontállomány előzőekben feltételezett eltérő érzékenységét a szteroid terápiára.
Anabolikus szteroidokkal kisszámú betegen végzett előzetes vizsgálatok pozitív hatásokat mutattak a csontra (Lafferty és munkatársai, Ann. J. Med. 36: 514-528, 1964; Riggs és munkatársai, J. Clin. Invest. 51: 2659-2663,1972; Hamson és munkatársai, Metabolism 20: 1107-1118,1971). Újabban teljes testkalcium, mint paraméter, neutronaktiválásos mérésének segítségével a metandrosztenolon anabolikus szteroid pozitív és relatív hosszú ideig tartó (24-26 hónap) hatását mutatták ki egy kettős vakvizsgálatban postmenopausalis osteoporosis esetében (Chessnut munkatársai, Metabolism 26: 267-277, 1977; Aloia és munkatársai, Metabolism 30: 1076-1079,1981).
A nandrolon-dekanoát anabolikus szteroid csökkentette a csontfelszívódást osteoporosisos nőkben [Dequeker és Geusens, Acta Endocrinol. 271 (Suppl.): 45-52,1985] hasonlóan az ösztrogénterápia során megfigyelt eredményekhez (Dequeker és Ferin, 1976, lásd Dequeker és Geusens). Ezek az adatok megerősítik a kutyákkal és nyulakkal végzett kísérletek eredményeit, ahol a nandrolon-dekanoát csökkentette a csontfelszívódást (Ohem és munkatársai, Curr. Med. Rés. Opin. 6: 606-613, 1980). Továbbmenve, osteoporosisos nőkben [Dequeker és Geusens, Acta Endocrinol. (Suppl.) 271: 45-52, 1985] az anabolikus szteroid nemcsak csökkentette a csontveszteséget, hanem növelte is a csonttömeget. Másrészt a D-vitamin-kezelés csak a csontfelszívódást csökkentette.
Postmenopausalis nők nandrolonkezelése növelte a kortikális csont ásványianyag-tartalmát (Clin. Orthop. 225: 273-277). Az androgén mellékhatásokat azonban a betegek 50%-ánál észlelték. Ezek az adatok azért érdekesek, mert a legtöbb kezelés a csontvesztés megállítására korlátozódik, a csonttömeg növekedése a nandrolon anabolikus szteroid alkalmazása esetén figyelhető meg. Az androgének csontképzésre való hasonló stimuláló hatását vetették fel egy hypogonadizmusban szenvedő férfi esetén (Baran és munkatársai, Calcif. Tissue Rés. 26: 103, 1978). Azokkal a diétákkal, amelyeknél a csontfelszívódást kalciummal, calcitriollal vagy hormonokkal akadályozzuk meg, az a probléma, hogy majdnem biztosan a csontképzés csökkenéséhez vezetnek (Need és munkatársai, Mineral. Electrolyte Metabolism 11: 35, 1985). Noha Albright és Reiferstein (1948) (lásd Need, Clin. Orthop. 225: 273,1987) felvetik, hogy az osteoporosis a csontképzés csökkenésével áll összefüggésben, és reagálnia keli a tesztoszteronkezelésre, az androgének virilizáló hatása alkalmatlanná teszi őket menopausa után álló nők kezelésére. Azután kifejlesztették az anabolikus szteroidokat, melyek olyan vegyületek, amelyek kevésbé virilizáló hatásúak. Noha egyesek minimális hatásról számolnak be (Wilson és Griffin, Metabolism 28: 1278, 1980), többen írnak le pozitív eredményeket [Chessnut és munkatársai, Metabolism 32: 571-580, 1983, Chessnut és munkatársai, Metabolism 26: 267, 1988; Dequeker és Geusens, Acta Endocrinol. (Suppl. 110) 271: 452, 1985], Egy menopausa után álló nőknél végzett randomizált vizsgálat szerint a teljes csonttömeg növekedett a stanazolol anabolikus szteroid terápia alatt, noha mellékhatásokat észleltek a betegek többségénél.
A fentiekben említettek szerint az emlőkarcinóma standard terápiájában használatos progesztindózisok (például medroxi-progeszteron-acetát) következtében nemkívánatos lényeges mellékhatások lépnek fel, különösen azok, amelyek a szteroidnak a glukokortikoid-receptorral való interakciójával állnak összefüggésben, például Cushing-szindróma, eufória (Mattsson, Breast Cancer Rés. Treatm. 3: 231-235, 1983; Blossey és munkatársai, Cancer 54: 1208-1215, 1984; Hortobágyi és munkatársai, Breast Cancer Rés. Treatm. 5: 321-326, 1985; Von Veelen és munkatársai, Cancer Chemother. Pharmacol. 15: 167-170,1985).
A progesztin kifejezés a progeszteron és tesztoszteron származékainak megjelölésére szolgál. Ilyen progesztineket egy időben azért szintetizáltak, hogy a progeszteronreceptorokra progeszteronanalógként ható vegyületeket fejlesszenek ki különösen fogamzásgátlás céljára. Az új és precízebb vizsgálatok révén azonban nyilvánvalóvá vált, hogy ezek a vegyületek, amelyeket kizárólag a progeszteronreceptorokkal kölcsönhatásba lépőnek szántak, interakcióba lépnek, gyakran nagy affinitással az androgénreceptorokkal (Labrie és munkatársai, Fertil. Steril. 28: 1104-1112,1977; Labrie és munkatársai, Fertil. Steril. 31: 29-34, 1979; Labrie, C. és
HU 222 501 BI munkatársai, J. Steroid Biochem. 28: 379-384, 1987; Labrie C. és munkatársai, Mól. Cell. Endocrinol. 68: 169-179, 1990). Időnként ezen vegyületek androgén hatása, különösen alacsony koncentrációknál, lényegesebbé válik, mint maga a progesztinaktivitás. Ez az eset fordul elő például medroxi-progeszteron-acetátnál (Poulin és munkatársai, Breast Cancer Rés. Treatm. 13: 161-172,1989).
Az emlő- és endometriumkarcinóma szintetikus progesztinekkel történő elsődleges kezelésénél az ezen terápiánál megfigyelt mellékhatások okoznak problémát. Az ösztrogének blokádja, egy másik szokásos módja az emlőkarcinóma kezelésének, nemkívánatos káros mellékhatást fejt ki a csontállományra nőkben. Hasonló módon, az ösztrogének blokádja, ami endometriosisban szokásos kezelés, hasonló nemkívánatos káros hatásokat gyakorol a csontállományra nőkben.
Az olyan fogamzásgátló készítményeket, amelyek huzamosabb időtartamra nyújtanak védelmet, az utóbbi 25 év során fejlesztették ki. Ide hosszú hatású injekciós szteroidkészítmények tartoznak (például Depoprovera vagy gyakrabban külső fogamzásgátló szisztémák használatán keresztül, például beültetés, mikrogyöngyök, vaginális gyűrűk, I. U. D. stb). Manapság az MPA és novetiszteron (NET)-enantát használatosak a családtervező programokban. 1985-ös becslések szerint 4 millió nő szedett MPA-t és csaknem 1 millió NET-enantátot (Hall, P. E., Long-acting injectable preparations. Fertility Regulation, Today and Tomorrow, Diczfalusy, E., Bydeman, M. szerkesztők, Raven Press: New York, 119-141. oldalak, 1987). Megbecsülték továbbá, hogy Latin-Amerikában 0,5 millió és Kínában 1 millió nő védekezik egy progesztogén- és egy ösztrogéntartalmú különböző havi injektálást igénylő készítménnyel (Hall, 1987, ugyanaz a referencia, mint fent). A hosszú hatású kontraceptív készítményeket az utóbbi 25 évben fejlesztették ki.
Két hosszú hatású kontraceptív szteroid áttekintését tartalmazza a Contraception (1977. május, 15. kötet, 5. szám. 513-533. oldalak).
A Depoproverát (25 mg) 5 mg ösztradiol-cipionáttal kombinálva adták havonta egyszer injekcióban fogamzásgátlásra (WHO, Said és munkatársai, Contraception, 37: 1-20, 1988). Az 50 mg noretiszteronenantátot és 5 mg ösztradiol-valerátot tartalmaz havi egyszeri injekcióval összehasonlítva kis eltérést találtak hatékonyságban és a mellékhatásokban. Több mint 10 000 női hónapot (ciklust) vizsgáltak minden csoportban. Az MPA-E2-cipionát igen hatékony kontraceptívumnak bizonyult, minthogy nem észleltek terhességet 10 969 ciklus alatt. Az abbahagyás aránya a havi egyszeri injekciót alkalmazó nőknél relatíve magas volt, 35% egy év alatt (WHO, Said és munkatársai, Contraception, 37: 11-20, 1988), míg a vérzési rendellenességei csak kb. 6,1 %-ban és amenorrhoea 2,1%-ban fordult elő a nőknél. Az injekcióról való lekésés, személyes okok és a követés megszakadása eredményezte a kezelésmegszakítások 18,6%-át. Ezek az adatok arra utalnak, hogy könnyebben akceptálható alkalmazási módra van szükség.
A DepoMPA (azaz Depoprovera) egyedül alkalmazva (150 mg, im. 3 havonta) 20 498 ciklusban vizsgálva 0,1 ±0,1% teherbeesési arányt, 15,0±l,0% vérzési rendellenességet, és 11,9 ±1,0% incidenciájú amenorrhoeát idézett elő (WHO, Said és munkatársai, Contraception, 37: 1-20, 1988). Egy kisebb vizsgálatban (5434 ciklus) a DepoMPA ugyanezen dózisa esetén a kezelésmegszakítás aránya 40,7 ±2,0% volt, míg vérzési rendellenesség és amenorrhoea a betegek 14,7±l,5%-ánál fordult elő.
Korábban az MPA felhasználása orális adagolás vagy intramusculáris injekció (Depoprovera) formájában történt. Az orális alkalmazást korlátozzák az együttműködéssel kapcsolatos problémák és a fluktuáló vérszint, míg az MPA felszabadulása a Depoproverainjekcióból eleinte gyors, majd igen változó mértékben csökken a későbbi időintervallumokban. így szükség van olyan szabályozott felszabadulású készítményre, amely a szteroid konstans mennyiségét szolgáltatja előre meghatározott időtartamra, ami így biztosított a beteg gyakori együttműködése nélkül is, és megnövekedett hatékonyságot biztosít azáltal, hogy a szer konstans vérszintjét biztosítja a kezelendő szövet(ek)ben. Hasonló szempontok vonatkoznak az MGA-ra. A mikrokapszulákból felszabaduló gyógyszerrendszereket az utóbbi harminc évben fejlesztették ki széles körben a terápiás szerek szabályozott felszabadulása érdekében, különösen gyakori az aktív szerek biológiailag lebontódó olyan poliészterekbe való töltése, mint például a poli(kaprolakton), poli (ε-kaprolakton-CO-DL-tejsav), poli(DL-tejsav), poli(DL-tejsav-CO-glikolsav) és poli(ekaprolakton-CO-glikolsav). Lásd példák és referenciák R. W. Bakernél (R. W. Baker, Controlled release of biologically active agents, John Wiley and Sons Ed., N. Y., 1987), F. Limnél (F. Lim. Biomedical Application of Microencapsulation, Franklin Lim. Ed. CRC Press, BocaRaton, 1984).
A 3 773 919 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban G. A. Boswell és R. M. Schribner egy polilaktid-gyógyszerkeverék használatát írják le különösen olyan szteroidokkal, mint a medroxi-progeszteron-acetát, a szerek lassú és hosszan tartó felszabadulása céljából.
A DE 3 503 679 számú szabadalmi leírásban Carli medroxi-progeszteron-acetát-készítményeknek vízben nem oldódó, de vízben megduzzadó polimerrel való kombinálását ismerteti.
A WO 8807816 számú nemzetközi bejelentésben R. J. Leonard fuzionált átkristályosított szteroidhatóanyag-pelleteket ismertet, ami hosszan tartó felszabadulást biztosító implantátumként használható.
A 4 818 542 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban DeLuca és munkatársai porózus mikrogyöngyök készítését és használatát írják le gyógyszerhatóanyag-hordozóként.
A DE 2010115 számú szabadalmi leírásban a Farbenfabriken Bayer AG egy szilárd permetezhető mikrogranulátumkészítményt ismertet gyógyszerek retardált felszabadulására.
A 4 166 800 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban F. W. Fong mikrogyöngyök előál8
HU 222 501 Β1 lítását írja le alacsony hőmérsékleten fázisszeparáló szer hozzáadásával.
A 4 897 268 számú amerikai egyesült államokbeli bejelentésben Tice és munkatársai egy kapszulázásra használatos poli(DL-laktid-CO-glikolid)-ot tartalmazó gyógyszerhatóanyag-hordozó rendszert imák le.
A 4 107 071 számú amerikai egyesült államokbeli bejelentésben R. G. Bayless etilén- és vinil-acetát részben hidrolizált kopolimerjéből álló mikrokapszulák előállítását ismerteti.
A DE 2 051 580 számú szabadalmi leírásban a DuPont cég szabályozott felszabadulást biztosító parenterális golyócskák előállítását ismerteti.
A 4 622 244 számú amerikai egyesült államokbeli bejelentésben Lapka és munkatársai a részecskék vagy anyagok fázisreparációval és a mikrokapszulák alacsony hőmérsékleten történő elválasztásával végzett kapszulázását, és a mikrokapszulák alacsony hőmérsékleten végzett izolálását írják le.
A 4 987 268 számú amerikai egyesült államokbeli bejelentésben E. S. Nuwayser és W. A. Nucefora kompozit magvas mikrorészecskék előállítását ismerteti.
Wise és munkatársai (D. L. Wise Lactic/Glycolic Acid Polymers, Biology & Medicine, G. Gregotiadis szerkesztő, New York Academic Press, 237-270. oldalak, 1979) a tej/glikolsav (ko)polimerek alkalmazását ismertetik a gyógyászatban. Lásd Lewis „Controlled Release of Bioactive Agents from Lactide/Glycolide Polymers” (lásd Lewis, „Controlled Release of Bioactive Agents from Lactide/Glycolide Polymers”, Drug and Pharmaceutical Sciences, 45. kötet, 1-41. oldalak, 1990).
Egy noretiszteront mint kontraceptív szteroidot tartalmazó injektálható tartós felszabadulást biztosító készítménynél egyenletes felszabadulás mutatkozott 2 hónapig patkányban (Anderson és munkatársai, Contraception 13: 375-384, 1976). A hűtéssel darabolt 90-180 pm-es részecskék 20% noretiszteront tartalmaztak egy olyan biológiai úton lebomló polimer mátrixban, amit L(+)-tejsavból szintetizáltak 200 000 molekulatömegig. A készítmény (90-180 pm részecskenagyságú por) 20% noretiszteront tartalmazott egy polimerben, ami tömeg szerint 90 rész L-laktidból és 10 rész maximálisan 200 000 molekulatömegű glikolidból állt; a vegyület kb. 2 hónapig szabadult fel páviánban (Gresser és munkatársai, Contraception 17: 253-266,1978). Azonban a patkányoknál talált 0-d fokú felszabadulást a főemlősökön végzett ezen vizsgálat nem erősítette meg (Beck és Tice, Long acting steroid contraception, D. R. Mishell szerkesztő, Raven Press: New York, 175-199, 1983). Az injektálható DL-PLA NET mikrokapszularendszer az egyetlen olyan forma, amit részletesen vizsgáltak in vivő körülmények között (Review by Beck and Tice, Long acting steroid contraception, D. R. Mishell szerkesztő, Raven Press: New York, 175-199,1983).
A legtöbb mikrorészecskék előállítására szolgáló technikához szükséges olyan szerves oldószerek használata, amelyek jelentékeny mértékben visszamaradnak, és helyi vagy szisztémás nemkívánatos toxikus hatásokat okozhatnak. Más korábbi technikákhoz magas hőmérséklet alkalmazása volt szükséges, ami a szteroid és/vagy polimer potenciális nemkívánatos hőbomlásával járt együtt.
Az emlő- és endometriumkarcinóma korábbi MPA és megestrol-acetát kezelésével kapcsolatos problémát az ezen kezelések alatt fellépő mellékhatások jelentik. A 19-nortesztoszteronok (mint a norgesztrel, noretiszteron és noretindron) használatával az a probléma, hogy ezek a vegyületek ösztrogénhatást fejtenek ki (Vilchis és munkatársai, J. Ster Biochem. 24: 525-531, 1986; Larrea és munkatársai, J. Ster. Biochem, 27: 657-663, 1987; Poulin és munkatársai, Breast Cancer Rés. Treatm, 17: 197-210,1990). Az ilyen ösztrogénaktivitás negatív hatású az emlókarcinóma incidenciájára hosszú távú alkalmazás esetén.
Ezek szerint szükség van az ösztrogénfuggő megbetegedések (csakúgy, mint a csontritkulás és a fogamzásgátlás területén) egy injektálható, a medroxi-progeszteron-acetát és a megestrol-acetát tartós felszabadulását biztosító rendszerre, amely képes ezen szteroidok keringő koncentrációját hosszú időn át alacsony szinten tartani (például 1 hónapra vagy tovább), és amely a toxikus maradék oldószer és/vagy termikus bomlástermékek, (amelyek a terápiás készítmény magas hőkezelése során képződtek) jelentéktelen mennyiségét tartalmazza.
Különösen a preventív célú készítmények esetén az elhanyagolható maszkulinizáló hatású, MPA-t, MGA-t vagy más androgén vegyületeket tartalmazó tartós felszabadulást biztosító rendszerek bizonyára pozitív hatást gyakorolnak az egészségügyi ellátás költségeire.
Itt jegyezzük meg, hogy az EP 58481 és a DE 4 036 425 számú szabadalmi iratokban olyan, az MP A-tól és az MGA-tól eltérő szerkezetű vegyületeket ismertetnek, melyek ösztrogén- és progesztinreceptorokra hatnak, illetve leírják a vegyületeket tartalmazó elnyújtott felszabadulású készítményeket. Azonban semmiféle kitanítás nem található ezen leírásokban arra nézve, hogy egyéb szteroidok (előnyösen az MPA és az MGA) alacsony koncentrációban szelektíven hatnának androgénreceptorokra.
A találmány tárgya tehát hatóanyagként MPA-t vagy MGA-t tartalmazó, emlőkarcinóma, osteoporosis, endometriumkarcinóma vagy endometriosis kezelésére vagy megelőzésére alkalmas elnyújtott felszabadulású gyógyászati készítmény, melyre jellemző, hogy a készítmény grammonként 200-700 mg MPA- vagy MGAhatóanyagot tartalmaz, és a készítmény grammonként és naponta 4-25 mg hatóanyagot ad le.
így a gyógyszerkészítményt olyan formában szolgáltatjuk, mely a hatóanyag keringési szérumszintjét 1,0 és 50,0 nmol/1 között tartja fent az alkalmazást követően 48 órával kezdődő és az alkalmazást követő legalább 28 napig terjedő periódusban.
A találmány szerinti készítmény előnyösen mikrogyöngyök vagy mikrorészecskék formájában van kiszerelve, melyekben a hordozó előnyösen tejsav/glikolsav alapú kopolimer, amely meleg vérű állatokban és emberben a hatóanyag szérumkoncentrációját a fenti alacsony szinten tartja fent hosszabb időtartamra.
A készítmény előnyösen szubkután vagy intramuszkuláris adagolásra alkalmas módon van kiszerelve.
HU 222 501 Bl
További előnyös megvalósítás során a készítmény grammonként 300-600 mg MPA- vagy MGA-hatöanyagot tartalmaz és grammonként és naponta 6-22 mg hatóanyagot ad le.
A találmány tárgya továbbá eljárás hatóanyagként MPA-t vagy MGA-t tartalmazó, emlőkarcinóma, osteoporosis, endometriumkarcinóma vagy endometriosis kezelésére vagy megelőzésére alkalmas elnyújtott felszabadulású gyógyászati készítmény előállítására, oly módon, hogy az MPA- vagy MGA-hatóanyagot a készítmény grammjaira számolva 200-700 mg mennyiségben alkalmazzuk, és így olyan készítményt alakítunk ki, amely grammonként és naponta 4-25 mg hatóanyagot ad le.
A találmány fent említett és egyéb tárgyait az itt ismertetett eljárások gyakorlati alkalmazásával és/vagy az itt ismertetett gyógyászati vegyületek, készítmények és kiszerelések felhasználásával valósítjuk meg.
Az egyik alkalmazási lehetőség szerint a készítmény androgénreceptorok aktiválását biztosítja meleg vérű állatokban vagy emberben azáltal, hogy az állatnak legalább egy androgén szteroidot adagolunk, amelynek Ki-értéke kisebb, mint 2 χ 10*8 mol/1 az androgénreceptorra, és amely androgénreceptor közvetítette gátló hatást gyakorol a ZR-75-1 humán emlőkarcinóma-sejtek növekedésére, ami maximális értékének felét 3,0 nmol/1 koncentráció alatt éri el, és nincs látható maszkulinizáló hatása 50 nmol/1 vérszérum-koncentráció alatt. Vagyis tehát a készítmény alkalmazásával az androgén szteroidot elég alacsony dózisban adagoljuk ahhoz, hogy a kumulatív (összegződő) szérumkoncentrációt 50 nmol/1 alatt tartsuk.
Az itt ismertetett készítmények különösen alkalmasak emberi emlőkarcinóma, endometriumkarcinóma, osteoporosis és endometriosis kezelésére. A készítményeket alkalmasnak tartjuk olyan egyéb célokra is, amelyek androgének adagolásával vagy az androgénreceptorok egyéb módon történő aktiválásával érhetők el. A találmány szerinti készítményeket alkalmasnak tartjuk mind megelőzés, mind kezelés céljára.
A találmány szerint tartós (retard) felszabadulást biztosító részecskéket nyújtunk, amelyek egy, a találmány szerinti androgén szteroidot tartalmaznak, ahol az androgén szteroid egy olyan tartós felszabadulást biztosító kötőanyagban van diszpergálva, amely biokompatibilis a humán szövetekkel, és amely biológiai úton biokompatibilis metabolikus termékekké bomlik le a szervezetben, oly módon, hogy az említett részecskék standard körülmények között képesek az androgén szteroid felszabadítására a fenti kötőanyag biológiai úton történő lebomlása során és következtében olyan arányban és időtartamra, amely az androgén szteroid keringő szérumszintjét 1,0 és 50,0 nmol/1 között határozza meg olyan időtartamban, ami beadás után 48 órával kezdődik, és az alkalmazást követően legalább 28 napig tart.
A standard körülményeket a felszabadulási arány mérésére az alább következő részletes leírásban ismertetjük. A felszabadulási arány a tartós felszabadulást biztosító részecskék jellemző tulajdonsága meghatározott körülmények között, és nem korlátozza az ilyen részecskék alkalmazási módjait. Például, a részecskék felszabadulási arányát egy bizonyos dózisnál meghatározzuk. Az így jellemzett részecskéket azonban tág határok közötti dozírozással alkalmazhatjuk, amint azt részletesen ismertetjük a továbbiakban, és amelyet az ellátó orvos megfelelőnek ítél. Az egyéb változók, mint a részecskék adagolási módja, a tartós felszabadulás időtartama és hasonlók ugyancsak széles körben változhatnak, amint azt alább ismertetjük. Gyógyászatilag alkalmas oldószert vagy vivőanyagot is alkalmazhatunk.
A találmány szerinti készítményeket előnyösen előállíthatjuk a következő módon:
(A) tartós felszabadulást biztosító részecskéket állítunk elő, amelyek átlagos mérete 5 pm és 40 pm közötti, ahol a részecskék az aktív vegyületet egy tartós felszabadulást biztosító kötőanyagban diszpergálva tartalmazzák, és nemkívánatos maradék szerves oldószert is tartalmaznak;
(B) a fenti részecskéket erős vákuumhatásnak tesszük ki, ahol a nyomás kisebb, mint 140 Pa és a hőmérséklet 7 és 15 °C közötti, ami kevesebb, mint a fenti kötőanyag üvegesedési hőmérséklete, olyan időtartamra, ami elegendő ahhoz, hogy a mikrogyöngyökben a maradék szerves oldószer 0,1% koncentráció alá kerüljön (tömeg%, a részecskék teljes tömegére viszonyítva).
A találmánnyal például egy olyan gyógyászati készítményt nyújtunk, amely egy szabadon választható gyógyászatilag alkalmas oldószert vagy vivőanyagot tartalmaz, és amelyben több tartós felszabadulást biztosító mikrogyöngy van, melyek átlagos mérete 5 pm és 40 pm közötti, és amelyekben az aktív szer egy olyan tartós felszabadulást biztosító kötőanyagban van diszpergálva, amely biokompatibilis a humán szövetekkel, és amely biológiai úton bontódik le a szervezetben biokompatibilis metabolikus termékekké. A fenti mikrogyöngyök standard körülmények között képesek az aktív szer felszabadítására az említett kötőanyag biológiai úton történő lebontása közben és következtében egy legalább 28 napig tartó periódusban, miközben a mikrogyöngyök nem tartalmaznak 0,1%-nál (tömeg%; a mikrogyöngyök teljes tömegére viszonyítva) több szerves oldószert.
A felhasznált androgének speciális tulajdonsága az, hogy hatékony androgénaktivitást fejtenek ki alacsony vérkoncentrációnál (például kevesebb mint 50 nmol/1), míg igen kis glukokortikoidreceptor-aktivitást mutatnak ezeknél a koncentrációknál. Ugyancsak jellemző rájuk a nőknél jelentkező fizikális maszkulinizáló hatás hiánya a használt koncentrációintervallumban. Ez megkülönbözteti őket az ivarmirigyekben vagy perifériás szövetekben termelődő természetes androgénektől, mint a tesztoszteron vagy dihidrotesztoszteron, amelyek tekintélyes maszkulinizáló hatásúak még alacsony vérkoncentráció esetén is. A szintetikus progesztinek, például a progeszteronszármazékok használatosak ebben a találmányban.
A találmány szerinti készítményben alkalmazott androgének általában nem okozzák a maszkulinizáló hatások fizikálisán észlelhető növekedését, mint például a nőknél fokozott szómövekedést, aknét, seborrhoeát vagy
HU 222 501 Β1 hajhullást. Ezeket a maszkulinizáló hatásokat már értékelték a irodalomban. Lásd például Ferriman és Gallwey, J. P. Clin. Endocrinol. Metab. 21: 1440-1447, 1961 (hajnövekedésre vonatkozóan); Cremoncini és munkatársai, Acta. Eur. Fertil. 7: 248-314, 1976 (akne, 5 seborrhoea és hajhullás). Lásd még Cusan és munkatársai, J. Am. Acad. Deimatol 23: 462-469,1990.
Az 1. és 2. táblázatokban a későbbiekben említett kvantitatív eredmények értékelési szempontjait ismertetjük.
1. táblázat
A szőmövekedés meghatározása 11 helyen vizsgálva (A 0 érték mindenütt a szőr hiányát jelzi)
Hely Fokozat Meghatározás
1. Felső ajak 1 2 3 4 Néhány szőr a külső szélen Kis bajusz a külső szélen A külső széltől félútig teijedő bajusz A középvonalig teijedő bajusz
2. Áll 1 2 3-4 Elszórtan néhány szőrszál Kis sűrűségű elszórt szőrszálak Teljesen fedett, gyenge, illetve erős szőrrel
3. Mellkas 1 2 3 4 A bimbóudvar körüli szőrszálak A fenti és középvonali szőrszálak Ezen területeken összefüggően 3/4 részben fedett Teljesen fedett
1 4. Hát 1 2 3-4 Néhány elszórt szőrszál Jóval több, de még elszórt Teljesen fedett, gyenge, illetve erős szőrzet
5. Ágyék 1 2 3 4 Szakrális szőrös terület Oldalirányú kiteijedéssel 3/4 részben fedett Teljesen fedett
6. Has felső része 1 2 3-4 Néhány középvonali szőrszál Jóval több, de még középvonali Félig, illetve teljesen fedett
7. Alhas 1 2 3 4 Néhány középvonali szőrszál Középvonali szőrcsik Középvonali szőrsáv Fordított V alakú szőmövekedés
8. Kar 1 2 3-4 Elszórt szőmövés, a végtag felszínének negyedénél többet nem érint Az előzőnél kiteijedtebb, de nem fedi teljesen Teljesen fedi, gyenge és erős
9. Alkar 1,2, 3,4 A dorzális felszín teljesen fedett; 2 fokozat szolgál a gyenge, és 2 az erős szőmövekedés jelzésére
10. Comb 1,2, 3,4 Lásd a karnál
11. Lábszár 1,2, 3,4 Lásd a karnál
HU 222 501 Bl
2. táblázat
Az akne, seborrhoea és hajhullás értékelésére
Akne
1. Izolált pattanások, maximum 10 db
2. Több mint 10 izolált pattanás
3. Csoportos pattanások
4. Összefolyó pattanások
Seborrhoea
1. Mérsékelt
2. Közepes
3. Súlyos
Hajhullás
1. Mérsékelt
2. Szembeszökő megvékonyodás
3. Igen feltűnő megvékonyodás
4. Kopaszság
A találmányban felhasznált előnyös vegyületek közé tartoznak olyan szteroidvegyületek, amelyek androgénreceptorra vonatkozó Ki-értéke kisebb 2xl0~8 mol/l-nél, és androgénreceptor által közvetített gátló hatást fejtenek ki a ZR-75-1 humán emlőkarcinóma-sejtek növekedésére úgy, hogy a maximális érték felét 3,0 nanomol/1 koncentráció alatt érik el, és nem rendelkeznek a fentiekben ismertetett maszkulinizáló hatással. Előnyösen a találmány szerinti androgének nem okozzák az átlagos maszkulinizáló hatás szignifikáns növekedését (például a fenti 1. vagy 2. táblázatban feltüntetett számértékek egyike sem mutat szignifikáns növekedést) nőpáciensekben vizsgálva a három hónapos kezelést követően, ahol az androgén vérkoncentrációit az igényelt koncentrációsáv (v. határok) maximumán tartottuk (például 50 nmol/1). A legtöbb nőpáciensnél, akiknél a kezelés előtt vagy nem volt maszkulinizáló hatás észlelhető vagy az összpontértékük 10 vagy annál kevesebb volt az 1. táblázatban feltüntetett mind a 11 helyet figyelembe véve, a jelen találmány szerinti kezelés alatt általában nem változott ugyanazon pontértékük. Eszerint a három hónapos kezelés után nem lenne észlelhető maszkulinizáló hatás. Azoknál a nőpácienseknél, akiknél már a kezelés előtt mutatkozik maszkulinizáló hatás, várható, hogy ezek a hatások ne erősödjenek a kezelés által.
Annak vizsgálatára, hogy a Ki-értékek 2 χ 10-8 mól alatt vannak-e, a Ki-értékeket a következő módon határozhatjuk meg, miközben a különböző vegyületeknek androgénreceptorhoz való affinitását mérjük.
Prosztataszövet preparációja:
200-260 g-os Sprague-Dawley-patkányokból (Crl: CD(SD)Br) (Charles River, St-Constant, Quebec) származó rentális prosztatákat használtunk fel. Az állatokat leölésük előtt 24 órával kasztráltuk. A prosztatákat eltávolításuk után azonnal jégen tároltuk, és az androgénkötő vizsgálathoz használtuk fel.
A citoszol előállítása:
A prosztataszöveteket ollóval finomra vagdaltuk (friss szövet esetén) vagy egy Thermovac rendszerrel porítottuk (fagyasztott szövet esetén), mielőtt A pufferban (Tris, 0,025 mol/1; monotioglicerol, 2 mmol/1; glicerol 10 térf%.; EDTA, 1,5 mmol/1 és nátriummolibdát, 10 mmol/1, pH=7,4) 1:5 tömeg/térfogat arányban homogenizáltuk egy PT-szulfonát-10 homogenizátor segítségével. Ezeket és az összes ezután következő eljárásokat 0-4 °C-on hajtjuk végre. A homogenizátumot 105 000 g-vel 1 órán keresztül centrifugáljuk, hogy a felülúszóban a citoszolfrakciót létrehozzuk.
Citoszol androgénreceptor-vizsgálat:
100 μΐ-es mennyiségeket inkubáltunk 0-4 °C-on 18 órán keresztül 100 pl 3 mmol/l-es [3H]T-vel vagy [3H]R1881-gyei a vizsgálandó, jelöletlen androgénvegyület növekedő koncentrációinak jelenlétében, vagy annak hiányában. Az inkubálás végén a szabad és kötött T-t vagy R1881-et 200 μΐ dextránnal bevont csontszénnel (1% csontszén, 0,1% dextrán T-70; 0,1% zselatin; 1,5 mmol/1 EDTA és 50 mmol Tris (pH=7,4) választottuk szét 15 percig, a 2300 g-vel végzett további 15 perces 0-4 °C-on történő centrifugálás előtt. A felülúszó egyenlő mennyiségeit (350 μΐ) áttettük szcintillációs üvegekbe 10 ml vizes számlálófolyadékkal (Formula 963, New England Nuclear), mielőtt Beckman LS 330 számlálóval (30%-os hatékonyság tríciumra) megszámláltuk.
A Ki-érték kiszámolása:
A látható gátlási konstans (apparent inhibition constant) „Κί’’-értékeket a Ki=IC50/(l+S/K) egyenlet szerint számoljuk ki (Cheng és Prusoff, Biochem. Pharmacol. 22: 3099-3108, 1973). Ebben az egyenletben az S a [3H]T vagy [3H]R1881 koncentrációját jelenti, a K a T vagy R1881 disszociációs állandója (KD), és az IC50 a jelöletlen vegyület azon koncentrációja, amely a T- vagy R1881-kötés 50%-os gátlását okozza. Számos vegyületre vonatkozó Ki-érték ismertetett az irodalomban. Lásd például Ojasso és munkatársai, J. Ster. Biochem. 27: 255-269,1987; Asselin és munkatársai, Cancer Rés. 40: 1612-1622,1980; Tóth és Zakar J. Steroid Biochem. 17: 653-668, 1982. Hasonló eredményt adott a következőkben leírt eljárás: Poulin és munkatársai, Breast Cancer. Rés. Treatm. 12: 213-225,1988.
Az adott vegyület azon koncentrációjának meghatározása céljából, amelynél a humán ZR-75-1 emlőkarcinóma-sejtek növekedésére az androgénreceptor közvetítette gátló hatás maximumának felét éri el, a következő eljárás használatos, amint azt Poulin és munkatársai részletesen ismertetik a Breat Cancer Rés. Treatmentben(12: 213-225,1988).
A sejtkultúrák fenntartása:
A ZR-75-1 humán emlőkarcinóma-sejtvonal az American Type Culture Collectionből (Rockville, MD) szerezhető be. A sejteket szokásos módon fenolvörösmentes RPMI-1640 közegben tenyésztjük, amelyet 10 nmol/1 E2, 15 mmol/1 Hepes, 2 mmol/1 L-glutamin, 1 mmol/1 nátrium-piruvát, 100 NE (nemzetközi egység) penicillin/ml, 100 pg streptomicin-szulfát/ml és 10 térfogat% fötális marhaszérum (FBS) egészít ki egy vízgőzzel telített 95% levegő-, 5% CO2-atmoszférában 37 °C-on.
A sejtkultúrákat a logaritmikus növekedési fázisukban gyűjtöttük össze 0,05% tripszin/0,02% EDTA-val (tömeg/térfogat%) Hanks-féle kiegyensúlyozott sóoldatban és olyan E2-es fenolvörösmentes RPMI-1640 közegben reszuszpendáltuk, amely 5 térfogat% dextránnal
HU 222 501 Bl bevont csontszénnel kezelt FBS-t és 500 pg/ml marhainzulint tartalmazott, vagy másképpen kiegészített a fent leírtak szerint a sejtkultúra fenntartására. A sejteket 24 lyukú Linbro-kultúra-tányérokra (Flow Laboratories) tettük 0,5-4,0χ 104 sejt/lyuk végső sűrűségig.
Negyvennyolc órával a tányérokra juttatást követően a szteroidok megfelelő koncentrációit tartalmazó friss SD közeget adtunk hozzájuk. A tesztvegyületek hozzáadásához használatos etanol végső koncentrációja nem haladta meg a 0,12 térfogat%-ot, és nem volt szignifikáns hatása a sejtnövekedésre és -morfológiára. Az inkubációs közeget minden másnap felújítottuk, és a sejteket 12 napi kezelés után tripszinizációval gyűjtöttük össze, ha másképp nem jelöltük. A sejtszám Coulter-számlálóval határozható meg.
Számítások és statisztikai analízisek:
A meglévő ID50-értékeket egy ismétlődő legkisebb négyzetek módszerén alapuló regresszió segítségével (Rodbard, Endocrinology 94: 1427-1437, 1974), míg a látható gátlási állandót (a Ki-értékeket) Cheng és Prusoff szerint (Biochem. Pharmacol. 22: 3099-3108, 1973) számítottuk ki.
Az ábrák rövid leírása
Az 1. ábra összehasonlító grafikon, olyan patkánycsoportban megfigyelt tumorok számát ábrázolja az idő függvényében, amely patkánycsoport tagjait egy, a találmány szerinti eljárással védtünk, azaz 30 mg Depoproverát adagoltunk 1 héttel a dimetil-benz[a]antracén- (DMBA) adagolással végzett tumorindukció előtt, és ezt hasonlítottuk össze egy védelemben nem részesített kontrollcsoporttal.
A 2. ábra összehasonlító grafikon, az ösztradiol stimulálta tumomövekedést mutatja az idő függvényében ovariectomizált patkányokban, összevetve a kezeletlen kontrollcsoporttal. A tumorokat dimetilbenzfajantracén felhasználásával indukáltuk. Ösztradiolt alkalmaztunk a tumomövekedés serkentésére mind a kezelt, mind a kontroll patkánycsoportnál. A kezelt csoportban minden állat a Depoprovera egyszeri, 30 mg-os szubkután adagját kapta. Az eredményeket a teljes tumoros terület százalékos változása adja mindegyik csoportnál.
A 3. ábra a CDCl3-ban oldott találmány szerinti mikrorészecskék 'H-mágnesesmagrezonancia-spektruma egy Bruckner AC-F300 FT NMR-spektrométerrel mérve. A keretben a csúcsok alatti területet - δ=0,65 ppm-nél az MPA esetén és δ=5,20 ppm-nél a laktid esetén - a részecskén belüli koncentrációmeghatározásra használjuk az alábbi képlet segítségével:
% MPA (koncentráció)=
0,28391+0,98720 χ [% terület (δ=0,65 ppm)], ahol a %-os terület meghatározása:
% terület (δ=0,65 ppm)= (δ=0,65 ppm) terület/[(a=5,20 ppm) terület+(6=0,65 ppm) terület],
A 4. ábra egy standard görbe, a 3. ábrához hasonlóan az NMR adataiból származó koncentrációmeghatározásra a polimer és MPA ismert keverékeinél.
Az 5. ábra a szterikus kizáráson alapuló kromatográfiával (SEC) elkülönített tartós felszabadulást biztosító MPA-mikrogyöngyök kromatogramja koncentrációmeghatározásra.
A 12. percnél (retenciós idő) jelentkező csúcs a tartós felszabadulást biztosító kötőanyagra, míg a 15,6 percnél (retenciós idő) jelentkező csúcs az MPA-ra vonatkozik. Az 5. ábrában látható kisebb ábra egy kalibrációs görbe, melyet PLG/MPA keverék standard koncentrációinál vettünk fel. Az MPA-csúcs alatti területet ábrázoltuk az ismert elegyek és 50:50 arányú poli(DL-laktid-koglikolid) keverékében mért százalékos MPAtartalom logaritmusának függvényében.
A 6. ábra egy scanning elektronmikroszkópos (SEM) felvétel az MPA-mikrogyöngyökről 350-szeres nagyításnál (6A. ábra), illetve 2000-szeres nagyítás mellett (6B. ábra).
A 7. ábra egy scanning elektronmikroszkópos (SEM) felvétel az MPA-mikrogyöngyök transzverz (átvezető) részéről 1500szeres nagyításnál (7A. ábra), illetve 5000-szeres nagyítás mellett (7B. ábra).
A 8. ábra mutatja be az MPA-részecskék scanning elektronmikroszkópos módszerrel meghatározott méreteloszlását. A mikrorészecskék mérettartományokkénti százalékos értékét ábrázoltuk a mérethatárok függvényében.
A 9. ábra egy differenciál scanning kalorimetriás (DSC) görbét ábrázol, ahol a hőáram a hőmérséklet függvényében kerül ábrázolásra (a hőáram a minta és a referencia energiája közti különbség egy adott hőmérsékleten; a hőáram egyenesen arányos a minta kalorikus kapacitásával). A görbe megmutatja egy olyan termék üvegesedési hőmérsékletét (TG), amelyben az MPA 65:35 arányú poli(DL-laktid-koglikolid) mikrorészecskékbe van beépítve, úgy, hogy a részecskékben az MPA-koncentráció 33%.
A 10. ábra felső részén 50:50 arányú poli(DLlaktid-koglikolid) molekulatömegének különféle jellemző paramétereinek [M(n-1), Mn, Mw, Mz, M(z+1)] különböző mértékű gamma-sugárzás hatására bekövetkező változását mutatjuk be. Az
HU 222 501 Bl ábra alsó részén a polidenzitás (Mw/Mn) változását a gamma-sugárzás függvényében (Mrad) ábrázoljuk.
All. ábra az MPA szérumszintjét adja meg az idő függvényében 50:50 arányú poli(DLlaktid-koglikolid) mikrorészecskékbe beépített 50 mg MPA egyszeri szubkután injektálását követően.
A 12. ábra az MPA szérumszintjét adja meg petefészek-eltávolított nőstény Sprague-Dawley-patkányoknak megadott mennyiségű, 50:50 arányú poli(DL-laktid-koglikolid) mikrorészecskékbe beépített MPA (1 nmol/l=0,386 ng/ml) egyszeri szubkután injektálását követően.
A 13. ábra megadja a dimetil-benz[a]antracén (DMBA) indukált emlőkarcinómában szenvedő patkányok százalékos számát az idő függvényében, ahol a patkányokat a DMBA adagolását megelőzően MPA-tartalmú mikrorészecskékkel (30 és 100 mg MPA) vagy csak hordozóval kezeltük.
A szintetikus progesztinek sokrétű endokrin aktivitásának jobb megértése nemcsak azért kívánatos, hogy racionálisabban használhassuk fel az emlő- és endometriumkarcinóma, valamint az endometriosis és csontritkulás megelőzésére és kezelésére, hanem hogy elkerüljük azokat a mellékhatásokat, amelyeket a szteroidreceptorokkal való interakció okoz, és amelyek szükségtelenek a kívánt pozitív hatáshoz.
A többféle szteroidreceptorhoz affinitást mutató szintetikus progesztinek biológiai hatásainak precíz analízise ideális lenne olyan in vitro modellek kiválasztásával, amelyek rendelkeznek minden nagy szteroidcsoport funkcionális receptoraival. E célból mi a ZR-75-1 humán emlőkarcinóma-sejtvonalat választottuk, ami rendelkezik funkcionális ösztrogén-, androgén-, progeszteron- és glukokortikoid-receptorokkal (Vignon és munkatársai, Endocrinol. Metab. 56: 1124-1130) azért, hogy összehasonlítsuk a különböző szteroidreceptorrendszerek relatív közreműködését a sejtproliferáció szintetikus progesztinek általi gátlásában. Míg az ösztrogének erősen mitogén hatásúak a ZR-75-1 sejtekre (Poulin and Labrie, Cancer Rés. 46 : 4933-4937, 1986), és specifikusan szabályozzák néhány fehérje expresszióját és/vagy szekrécióját (Dickson and Lippman, Endocr. Rév. 8: 29-43, 1987), az androgének (Poulin és munkatársai, Breast Cancer Rés. Treatm. 12: 213-225, 1988), a glukokortikoidok (Hatton, A. C., Labrie, F., publikálatlan eredmények) csakúgy, mint a progesztinek (Poulin és munkatársai, Breast Cancer Rés. Treatm. 13: 161-172, 1989) gátolják a proliferációjukat a megfelelő receptorokkal való specifikus interakciókon keresztül.
A receptorok azonosítása (ösztrogén, androgén, progeszteron és glukokortikoid), amelyek felelősek a vegyületek hatásáért, azért szükséges, hogy felbecsüljük ezen vegyületek lehetséges hatásait, beleértve az ellentétes hatásokat is. így különösen fontos, hogy felbecsüljük a specifikus kölcsönhatásokat az androgénreceptorokkal alacsony koncentrációk mellett, mivel alacsony koncentrációknál nem lépnek interakcióba a glukokortikoid-receptorokkal, így elkerülhetők, illetve minimalizálhatók a másodlagos mellékhatások.
Az emlő- és endometriumsejtek növekedésének gátlására egy módszer az androgénreceptorok aktiválása egy olyan hatékony vegyülettel, amelynek olyan az affinitása a receptorhelyhez, hogy az androgénreceptorhoz alacsony koncentrációban kötődik, míg a lehetséges mellékhatásokkal összefüggésben lévő más csoportba tartozó szteroidreceptorokat nem aktiválja szignifikánsan. Olyan vegyületek kiválasztása szükséges, amelyek maximális affinitást mutatnak az androgénreceptorokhoz, és amelyek nem mutatnak, vagy csak minimális mértékben virilizáló hatást nőkben. Azért, hogy minimálisra csökkentsük ezen vegyületeknek a glukokortikoid- és ösztrogénreceptorokkal való kölcsönhatását, szükséges, hogy a vegyületeket alacsony dózisban alkalmazzuk. Ugyancsak lényeges, hogy olyan szteroidokat válasszunk, amelyek alacsony koncentrációban mutatnak androgén hatást, és nem metabolizálódnak ösztrogénekké in vivő körülmények között, és amelyek az alkalmazott alacsony koncentrációban nem vezetnek az androgénreceptortól eltérő receptorok szignifikáns aktiválásához.
A találmányban használatos vegyületek nagymértékben eltérően viselkednek különféle koncentrációiknál a különböző csoportba tartozó szteroidreceptor-aktiváló képességükre nézve. Gondosan ellenőrzött koncentrációval - a találmány szerint - lehetséges a kívánt receptorok szelektív aktiválása, míg azon receptoroknál, amelyek aktivizálása nem kívánatos, nem okozunk szignifikáns aktiválást. Például, az itt előírt alacsony koncentrációknál az MPA felhasználható az androgénreceptorok kívánt aktiválására, míg a glukokortikoid-aktiválással kapcsolatos mellékhatásokat elkerüljük, ami a korábbi típusú kezeléseknél észlelhető volt.
Ilyenformán a jelen találmány egy új készítményt nyújt az emlő- és endometriumkarcinóma, valamint egyéb, androgénreceptor-aktiválásra reagáló megbetegedések, például csontritkulás és endometriosis megelőzésére és kezelésére. A jelen találmányban az alkalmazott androgénvegyületek mennyisége jóval kisebb, mint a korábbiakban alkalmazott módszereknél az emlő- és endometriumkarcinóma kezelésére.
A találmány szerinti androgének vérkoncentrációjának mérését az alábbiakban ismertetjük.
Azért, hogy a kezelés lehetséges hatásainak meghatározását elősegítsük, mérhetjük a vegyület vérkoncentrációit. Például a plazma medroxi-progeszteron-acetát(MPA) szintjeinek mérését radioimmunovizsgálattal végezhetjük az alábbiak szerint végzett exrakciót követően.
Antitest-előállítás
144A antitestet termeltettünk nyulakban a 17-hidroxiprogeszteron-3-O-karboxi-metil-oxim-BSA ellen. A radioimmunovizsgálathoz (RIA) használt jelölt szteroid a metil-17α-hidroxi-progeszteron-acetát, 6α[1,2-3H(N)]
HU 222 501 Bl volt, amit a NEN-ből szereztünk be (CAT No. NET 480), míg a referenciakészítmény a medroxi-progeszteron-acetát (MPA) volt a Steraloidostól. A felhasznált vizsgálati puffer 0,1% zselatin volt 0,1 mol/l-es nátrium-foszfát, 0,15 mol/l-es nátrium-klorid és 0,1% nátrium-azid pH 7,2-es keverékében. Az extrakciós oldószerkeverék etihéter-aceton (9:1 térfogatarány) [EEA] volt, míg az LH-20 kromatográfiás oldószerkeverék izooktán: toluol : metanol (90:5:5 térfogatarány) [IOTH] volt.
Az extrakció végrehajtása
Egy ml plazmát kétszer extraháltunk 5 ml EEA-val. Az extraktumokat nitrogénnel szárazra párologtattuk, és a maradékot 1 ml IOTH-ban oldottuk. Az extraktumokat ezután LH-20 kromatográfiának vetettük alá 2 g LH-20 (Pharmacia)-szal töltött 10 χ 30 cm-es oszlopokon (Corning CAT No. 05 722A). A gélt 30 ml IOTH-val mostuk, mielőtt a minta 1 ml-ét hozzáadtuk és IOTH-val eluáltuk volna. Az első 6 ml-t eldobtuk. A következő 10,16,5 és 27,5 ml-nyi frakciót a sorrendben az I (progeszteron), II (MPA) és III (17-LH-progeszteron) frakciót képezték. AII frakciót párologtatással leszárítottuk, és 1,5 ml vizsgálati pufferban újraoldottuk.
Radioimmunovizsgálat
Minden egyes 12 χ 75 mm-es boroszilikátcsőhöz a következőket adtuk: 0,2 ml 25 000 DPM-et tartalmazó tríciummal jelzett szteroid, 0,5 ml 5-5000 pg referenciakészítmény csövenként vagy 0,5 ml extrahált II frakcióminta, 0,2 ml 1:5000 arányban hígított 144A antiszérum vagy 0,2 ml vizsgálati puffer a nemspecifikus kötődés mérésére. A csöveket ezután egy éjszakán át 4 °C-on inkubáltuk. Ezután 0(2 ml 2%-os csontszenes Norit-A-t és vízben oldott 2%-os Dextrán Τ-70-et adtunk hozzá. A csöveket óvatosan összeráztuk, és 10 perc elteltével 2000 g-vel 10 percig centrifugáltuk. A felülúszót 8 ml Formula 989-cel (NEN:NEF-989) kevertük össze, és a radioaktivitást β-számlálóval számoltuk meg.
Az MPA detektálhatóságának alsó és felső határa 10, illetve 10 000 pg/ml, míg az esés (slope) (LOGITLOG) -2,2 és az ED50-érték 315 pg/ml. A nemspecifikus és a nettó kötődés 1,5, illetve 45%. A 144A antitest erősen specifikus az MPA-ra, míg a keresztreakció kevesebb mint 0,1% progeszteron, 20a-OH-Prog, pregnenolon, 17-OH-pregnenolon, DHT, androszténdion, tesztoszteron, 3a-diol, ösztron, ösztradiol és kortizol esetén.
Számítások és statisztikai adatok
A RIA adatait a Roadbard és Lewald II modelljén alapuló program felhasználásával elemeztük (2. Karolinska Symposium Genfi 1970,79-103. old). A plazma MPA-szintjeit általában az egyes minták kétszeri mérésének átlagaiSEM (az átlag standard hibája) értékeként mutatjuk be. A statisztikai szignifikanciát DuncanKramer (Kramer, C. Y., Biometrics 12: 307-310, 1956) többintervallumos tesztje szerint méljük.
A tesztvegyület relatív hatása a különböző receptorokra
A lehetséges vegyületeknek a különböző szteroidreceptorokra kifejtett hatásának meghatározására a szintetikus progesztinek és anabolikus szteroidok androgén-, glukokortikoid-, progeszteron- és ösztrogénreceptor közvetítette hatását mérhetjük a ZR-75-1 humán emlőkarcinóma-sejteken a sejtnövekedést, illetve a GCDFP-15 és GCDFP-24 válaszokat használva a válasz paramétereiként (Poulin és Labrie, Cancer Rés. 46 : 4933-4937, 1986; Poulin és munkatársai, Breast Cancer Rés. Treatm. 12: 213-225, 1988, Poulin és munkatársai, Breast Cancer Rés. Treatm. 13: 161-172, 1989; Poulin és munkatársai, Breast Cancer Rés. Treatm. 13: 265-276, 1989; Simard és munkatársai, Mol. Endocrinol. 3 : 694-702, 1989; Simard és munkatársai, Endocrinology 126: 3223-3231,1990).
A következő jellemzők teszik lehetővé a progeszteronreceptor- (PgR) aktivitás mérését :
1. Inzulin hozzáadása teljesen felfüggeszti a progesztin R 5020 és a PgR kölcsönhatásán alapuló gátlást a ZR-75-1 sejtekben.
2. Az R 5020 antiproliferatív hatása csak Ergyel stimulált körülmények között figyelhető meg.
A ZR-75-1 sejtek növekedésének ezen két tulajdonsága teszi lehetővé annak vizsgálatát, hogy meddig terjednek a vizsgált vegyület hatásai a ZR-75-1 sejtekre, ami a PgR-rel való kölcsönhatásainak tulajdonítható, azáltal, hogy felbecsüljük az inzulin- és/vagy ösztrogénhozzáadás hatását a növekedésre, amit a ZR-75-1 sejtek tesztvegyületekkel történő 15 napos inkubálásának végén mérünk.
Másrészt az ösztrogénreceptor (ER) részvételét direkt módon is mérhetjük úgy, hogy a ZR-75-1 sejteket megfelelő közegben ösztrogén jelenlétében vagy hiányában inkubáljuk.
Azért, hogy elemezzük a szintetikus progesztinek vagy az anabolikus szteroidok androgénreceptorral (AR) és glukokortikoid-receptorral (GR) való kölcsönhatásait a sejtnövekedést gátló hatásukra vonatkozóan, előnyt jelent az androgének és glukokortikoidok antiproliferatív hatásainak összeadódása ebben a sejtvonalban (Poulin és munkatársai, Breast Cancer Rés. Treatm. 12: 213-225,1988; Hatten és Labrfie, F., nem publikált adatok). így az AR-t lehet például telíteni 5adihidrotesztoszteronnal (DHT), és ezután mérni egy vélt glukokortikoid-sejtproliferációra tett hatását.
Másrészt egy vélt androgén hatását hasonló módon mérhetjük a GR-ok dexamethasonnal (DEX) történt telítését követően. Az ily módon a tesztvegyülettel mért növekedést gátló aktivitás specificitása ugyancsak megbecsülhető a vegyület reverzibilitása révén a megfelelő antagonista (azaz antiglukokortikoid vagy antiandrogén) használatával.
így az androgénfelesleg (1 pmol DHT), valamint E2 és inzulin jelenlétében a glukokortikoid-hatásokat mérhetjük fel pontosan és más receptorokkal való interakció nélkül. Ugyanez vonatkozik az AR szerepének vizsgálatára, amikor is a sejteket glukokortikoid-felesleg (3 pmol/l DEX), valamint E2 és inzulin jelenlétében inkubáljuk. Amint a részletes kinetikai vizsgálatok mutatják, 1 pmol/l DHT és 3 pmol/l DEX fejt ki maximális gátló hatást az AR-ra, illetve a GR-ra.
Továbbá a progesztinek lehetséges antagonista hatásait, melyeket az AR-on és GR-on keresztül fejtene ki,
HU 222 501 BI meghatározhatjuk mindkét receptorrendszemek DTHval és DEX-szel való telítésével úgy, hogy az egyik ligand jóval nagyobb feleslegben van, mint a másik.
Az összes kísérletet olyan ZR-75-1 sejtekkel végeztük, amelyek inzulint tartalmazó E2-vel kiegészített közegben növekedtek, hogy megelőzzük a progesztinek PgR-en keresztül kifejtett hatását a sejtnövekedésre.
Az előzőekben ismertetett technikák felhasználásával azt találtuk, hogy számos androgénvegyület, amelyek más receptorokat is aktiválnak (például glukokortikoid- vagy progeszteronreceptorokat), a koncentrációtól függően változó relatív hatást fejtenek ki a különböző receptorokra. Az itt közölt koncentrációtartományban maradva a találmány szerinti vegyületek jó hatást fejthetnek ki az androgénreceptorokra anélkül, hogy lényeges nemkívánatos hatást okoznának más receptorokon keresztül.
Az itt ismertetett eljárásokkal gyógyítható betegek kiválasztása
Az emlőkarcinóma jelenlétét általában magának az emlőnek a vizsgálatával és/vagy mammográfiával állapítják meg. Másrészt az endometriumkarcinómát általában endometriumbiopsziával diagnosztizálják. Mindkét karcinóma diagnosztizálható és értékelhető a témában tájékozottak számára jól ismert standard fizikai eljárásokkal például csontscan, mellkasröntgen, a csontrendszer vizsgálata, máj-ultrahangvizsgálat, másfajta scan (ha szükséges, CAT scan, MRI) és fizikális vizsgálat. Az endometriosis diagnosztizálható a nőknél a menstruációval kapcsolatosan fellépő fájdalom vagy egyéb tünetek fellépésének követésével, míg végleges diagnózishoz laparoszkópiával és időnként biopsziával juthatunk.
Másrészt a csontsűrűség a szakmában járatosak számára jól ismert standard eljárásokkal mérhető, alkalmazható például QDR (Kvantitatív Digitális Radiográfia), kettős foton-abszorpciometria és komputertomográfia. Továbbá plazma és vizelet kalcium- és foszfátszint, plazma alkalikusfoszfatáz-, kalcitonin- és parathormon-koncentráció, valamint vizelet hidroxi-prolin és kalcium/kreatinin arány.
Emlő- vagy endometriumkarcinóma, osteoporosis vagy egyéb módon elégtelen csonttömeg és más, androgénreceptor-aktiválással kezelhető betegségek kezelhetők a jelen találmány szerinti készítményekkel, illetve azokkal profilaktikusan megelőzhetők az itt ismertetettek szerint.
A jellemzően megfelelő androgénvegyületek közé tartozik a 6a-metil,17a-acetoxi-progeszteron vagy medroxi-progeszteron-acetát, ami Upjohn és Farmitalia Carlo Erba S. p. A.-tól szerezhető be. Provera, Depoprovera vagy Fartutal gyári neveken MPA kezdőbetűkből alkotott néven.
Egyéb jellemzően alkalmas androgénvegyület a megestrol-acetát (17a-acetoxi-6-metil-pregna-4,6-dién3,20-dion), ami Mead Johnson & Co., Evanswille, Ind.től szerezhető be Megace gyári néven.
Az androgénvegyület előnyösen gyógyászati készítményként helyileg, parenterálisan vagy szájon keresztül alkalmazandó. A vegyületet alkalmazhatjuk parenterálisan, azaz intramuszkuláris vagy szubkután injekcióban, vagy bejuttathatjuk orrcsepp, kúp formájában, vagy ahol alkalmas, intravaginálisan vagy bőrön keresztül gél vagy tapasz alkalmazásával, vagy más megfelelő módon. Az androgénvegyület elhelyezhető mikrokapszulában vagy köthető egy biokompatibilis, biológiai úton lebontódó polimerhez, például poli(D,L-laktid-koglikolid), és szubkután vagy intramuszkulárisan injektálható egy úgynevezett szubkután vagy intramuszkuláris depótechnikával, hogy a vegyület állandó lassú felszabadulása biztosított legyen 30 napos vagy még hosszabb periódusra. Az orális úton túl előnyös módja a vegyület adagolásának a szubkután depóinjekció. A Depoprovera relatíve állandó arányban szabadulhat fel kb. három hónapig a vizes diszpergátum intramuszkuláris beadását követően.
Mindegyik alkalmazott vegyület mennyiségét a kezelőorvos határozza meg figyelembe véve a páciens állapotát és korát, továbbá mindegyik résztvevő hatását és egyéb tényezőket. Az emlő- és endometriumkarcinóma, valamint a csontritkulás megelőzésére jelen találmány szerint a következő dózisintervallumok alkalmazhatók.
Az androgénkészítmény előnyösen napi dózisban adagolandó, amiből kevesebb mint 25 mg aktív androgén szteroid szabadul fel 50 testsúlykilogrammonként. 1-10 mg/50 testsúly-kg adagolás kívánatos, különösen 3-7 mg (például 5 mg). A választott dózis előnyösen a szérumkoncentrációt 50 nanomol/1 alatt tartja, előnyösen 1 nanomol/1 és 10, 15 vagy 25 nanomol/1 között a páciens reakciójától függően. Az ezen szintek fenntartásához szükséges dózisok páciensről páciensre változóak lehetnek. Ajánlatos, hogy a kezelőorvos ellenőrizze a szinteket az itt ismertetett eljárásokkal, és ennek megfelelően optimalizálja az adagolást. Profilaktikus célra az androgén adagolását előnyös a menopausa körüli időszakban kezdeni az emlő- és endometriumkarcinóma és a csontritkulás megelőzésére egészséges nőknél. Az androgén alkalmazható megfelelő mennyiségű ösztrogénnel együtt, ami a menopausa egyéb jeleinek és tüneteinek megelőzésére szolgál. Azon nőknél, akiknél az ösztrogénképzést és/vagy -hatást blokkoljuk endometriosis, leiomyoma, emlőkarcinóma, méhrák, petefészekrák vagy egyéb ösztrogénérzékeny megbetegedés kezelése céljából, az androgén adagolása bármely időpontban kezdődhet, előnyösen az ösztrogének blokkolásával egy időben.
Az androgéneket intramuszkuláris vagy szubkután depóinjekció céljára mikrokapszulában állíthatjuk elő egy biokompatibilis, biológiai úton lebomló polimerben, például: poli(D,L-laktid-koglikolid)-ban, egyebek között egy fázisszeparációs eljárással vagy pellet vagy rudacska formájában. A mikrogyöngyöket azután szuszpendálhatjuk egy vivőanyagban, hogy egy injektálható készítményt kapjunk, vagy a depó injektálható pellet vagy rudacska formájában. Lásd az EPA 58481 számú európai szabadalmi bejelentést is, amit 1982. augusztus 25-én publikáltak, és amelynek témája szilárd készítmények szubdermális injekció vagy beültetés céljára, illetve folyékony készítmények intramuszkuláris vagy szubkután injekciók céljára, amelyek biokompatibilis, biológiai úton lebomló polimereket tartalmaznak, mint pél16
HU 222 501 Bl dául laktid-glikolid-kopolimer és aktív vegyületek. Ezek a készítmények a vegyület szabályozott felszabadulását teszik lehetővé.
A jelen találmányban használatos androgéneket általában a konvencionális gyógyászati adalék anyagokkal állíthatjuk elő, mint például permetezve szárított laktóz- és magnézium-sztearát-tablettákhoz vagy -kapszulákhoz, orális adagolás céljára.
Az aktív vegyület feldolgozható tablettákká vagy drazsévá szilárd, porított vivőanyagokkal összekeverve, mint például nátrium-citrát, kalcium-karbonát vagy dikalcium-foszfát, és ragasztóanyagokkal, mint például poli(vinil-pirrolidon), zselatin vagy cellulózszármazékok, lehetőleg kenőanyagok hozzáadásával, mint például magnézium-sztearát, nátrium-lauril-szulfát, „Carbowax” vagy polietilénglikol. Természetesen ízjavító anyagok is hozzáadhatok az orális adagolású készítmények esetében.
További készítményként alkalmazhatók plug kapszulák, például keményzselatinból csakúgy, mint lágyzselatinból, ami egy lágyítót vagy plaszticitást biztosító anyagot, például glicerint tartalmaz. A plug kapszulák az aktív anyagot előnyösen granulátum formájában tartalmazzák például töltőanyagokkal, mint például laktóz, szacharóz, mannit, keményítőkkel, mint például burgonyakeményítő vagy amilopektin, cellulózszármazékokkal vagy erősen diszpergáló kovasavakkal keverve. A lágyzselatin-kapszulákban az aktív anyag előnyösen megfelelő folyadékban oldott vagy diszpergált, mint például növényi olajokban vagy folyékony polietilénglikolokban.
Orális adagolás helyett az aktív vegyületet alkalmazhatjuk parenterálisan. Ilyen esetben az aktív anyag oldatát használhatjuk például szezámolajban vagy olívaolajban. Az aktív anyagot előállíthatjuk mikrokapszulában vagy egy biokompatibilis, biológiai úton lebomló polimerhez kötve, ami lehet például poli(D,L-laktidkoglikolid) és szubkután vagy intramuszkulárisan injektálható egy szubkután vagy intramuszkuláris depónak nevezett technikával, ami a vegyület(ek) állandó, lassú felszabadulását biztosítja kéthetes vagy annál hosszabb időtartamra.
Tekintettel arra, hogy leggyakrabban olyan elnyújtott felszabadulású gyógyászati készítményt célszerű előállítani, amely 28 nap alatt adja le a hatóanyagot, egy ilyen előnyös készítmény grammonként 200-700 mg, előnyösebb 300-600 mg MPA- vagy MGA-hatóanyagot tartalmaz (és a készítmény grammonként és naponta kb. 4-25 mg, előnyösen 6-22 mg hatóanyagot ad le, ezzel biztosítva a kívánt szérumkoncentrációt).
A fenti terápiát követően az ismertetett utasításokat betartva az emlő- és endometriumkarcinóma növekedése csakúgy, mint a csontritkulás és az endometriosis megállítható, míg a nemkívánatos mellékhatások minimálisak maradnak. Az ismertetett utasítások alkalmazása ugyanezen megbetegedések kifejlődését is megelőzheti.
A találmánynak megfelelő felhasználásra alkalmas szabályozott felszabadulású kötőanyagok közé tartozik bármely biokompatibilis szabályozott felszabadulású anyag, amely közömbös az aktív résztvevőre, és amely képes beépíteni az aktív anyagot. A területen számos ilyen anyag ismert. Előnyös szabályozott felszabadulású kötőanyagok azok az anyagok, amelyek lassan metabolizálódnak fiziológiai körülmények között, miután emlősökbe szubkután vagy intramuszkulárisan injektáltuk őket (azaz az ott jelen lévő testfolyadékok jelenlétében). A kötőanyag lehet például olyan, amelynek a biológiai lebomlási ideje elég lassú ahhoz, hogy a kötőanyag tiszta mikrogyöngyei (azaz szteroid vagy más aktív résztvevő nélkül), amelyeknek átlagos átmérője 20 mikron fölött van, nem bomlanak le teljesen legalább egy hónapig a szubkután vagy intramuszkuláris injektálást követően. Az alkalmas kötőanyagok közé tartoznak (de nem korlátozódnak ezekre) az e területen korábbiakban elnyújtott felszabadulású készítményekben alkalmazott biokompatibilis polimerek és kopolimerek. Ezek a biokompatibilis vegyületek nem toxikusak, és közömbösek a környező szövetekre a szubkután vagy intramuszkuláris injekciót követően, és nem váltanak ki szignifikáns nemkívánatos hatásokat, mint immunválasz, gyulladás és hasonlók. Olyan metabolikus termékekké bomlanak le, amelyek ugyancsak biokompatibilisak és könnyen eliminálódnak a szervezetből.
Például hidrolizálható észterkapcsolást tartalmazó kopolimerből és homopolimerből származó polimer anyag használható. Számos ilyen anyag ismert a területen, amelyek biológiai úton bomlanak, és bomlástermékeik nem vagy kevéssé toxikusak. Általában ilyen előnyös polimerek a poliglikolsavak (PGA) és politejsavak (PLA), poli(DL-tejsav-koglikolsav), (DL PLGA), poli(D-tejsav-koglikolsav) (DPLGA) és poli(L-tejsavkoglikolsav) (LPLGA). A tejsav- és glikolsavpolimerek előnyös aránya a poli(tejsav-koglikolsav)-ban 100:0 (azaz tiszta polilaktid) és 50:50 szélső értékek között van. További használható biológiai lebomlású vagy biológiai úton károsodó polimerek közé tartoznak (de nem korlátozódnak ezekre) az alábbi polimerek: poli(a-kaprolakton), poli (ε-kaprolakton-CO-tejsav), poli(e-kaprolakton-CO-glikolsav), poli(3-hidroxi-vaj savsav), poli(alkil-2-ciano-akrilát), hidrogélek, mint poli(hidroxi-etil-metakrilát), poliamidok, poliaminosavak (azaz α-leucin, glutaminsav, α-aszparaginsav és hasonlók), poli(észter-karbamid), poli(2-hidroxi-etil-DLaszpartamid), poliacetálpolimerek, poli(orto-észter)-ek, polikarbonát, polimaleamidok, poliszacharidok és ezek kopolimetjei. Számos alkalmas anyag kapható a kereskedelemben például poli(tejsav-koglikolid) (beszerezhető a Birmingham Polymer Inc.-től, Birmingham Al. vagy a Dupont Companytól, Washington DC.).
A találmány szerinti prolongált felszabadulású részecskék aktív résztvevőjének felszabadulásának mértéke úgy van megállapítva, hogy alapvetően állandó szérumkoncentrációt biztosítson. Ha a találmány szerinti alacsony dózisú androgént alkalmazzuk, az androgén a kötőanyag révén olyan mértékben szabadul fel, ami az említett androgén szérumszintjeit 1 és 50 nanomol/1 között tartja fenn, általában 1 és 25 között, előnyösen 1 és 15 között, és legelőnyösebben 1 és 10 nanomol/1 között, amennyiben az alábbiakban ismertetésre kerülő
HU 222 501 Bl standard körülmények között alkalmazzuk. A standard körülmények meghatározása (csak az itt ismertetett prolongált felszabadulásu részecskék jellemző felszabadulási mértékének mérésére korlátozódó célból):
mg részecske (20 mg gyógyászati készítmény formájában, ahol a részecskék tömegének aránya a 2 tömeg%-os vizes karboxi-metil-cellulóz-vivőanyag tömegéhez 1:1) perkután injektálunk fiatal nőstény Sprague-Dawley-patkányok hátába. Ezután az androgén széiumkoncentrációját a patkányokból periodikusan vett szérumminták alapján mérjük; a mintavételt a beadás után 48 órával kezdjük, és a beadás után 28 nappal végezzük utoljára, hogy meggyőződjünk róla, hogy a szérumszintek ezen időtartam alatt a kívánt sávban maradnak fenn.
A prolongált felszabadulású részecskék felszabadulásának mértékét megváltoztathatjuk a szakterületen ismert számos paraméter egyikének (vagy a paraméterek kombinációjának) megváltoztatásával, hogy a felszabadulás mértékét módosítsuk. Ezen paraméterek közé tartoznak (de nem korlátozódnak ezekre) a prolongált felszabadulású kötőanyag összetétele, a részecske mérete és aktív vegyület tartama. Például ismert, hogy a polilaktid-kötőanyag lassabban hidrolizálódik, és ennélfogva (azonos paraméterek mellett) az aktív résztvevőt lassabban szabadítja fel, mint a tejsav és a glikolsav kopolimeqei. Az ilyen kopolimereknél a felszabadulás mértéke nő a glikolid mólarányának növelésével. Egyenlő tömegű részecske esetén a felszabadulás mértéke nő a részecske méretének csökkenésével, mert nagyobb összfelszínt (összeadódik az összes részecskéé) képeznek a kisebb részecskék. Hasonlóan, az aktív vegyület százalékos arányának növelése a részecskében megnöveli a felszabadulás mértékét. Ezeket a paramétereket ismert módokon meg is változtathatjuk, hogy ellenőrizzük a felszabadulás időtartamát. A prolongált felszabadulású gyógyászati készítmények előállításának részletes ismertetését nyújtja F. Lim (F. Lim, Biomedical Application of Microencapsulation, Franklin Lim, ed., CRC Press, Boca Raton, 1984); itt a teljes leírásra referenciaként hivatkozunk.
A fentiekben ismertetett standard körülmények és mérések csak a részecskékre jellemző felszabadulás mértékére vonatkoznak, és csak definíciószerűek. Az alkalmas felszabadulási mértékű részecskék, amint itt részletesen ismertettük, különféle formában állíthatók elő, és különböző módokon alkalmazhatjuk őket. Felhasználásuk különböző lehet, és széles dózissávban alkalmazhatók (lásd alább). A részecskék biztosíthatják az aktív résztvevő felszabadulását rövid időtartamra, mint például 28 nap vagy akár lényegesen hosszabb periódusra, például 2 hónap, 3 hónap, 6 hónap vagy még tovább. Más szóval, míg a részecskéknek fenn kell tartaniuk a vérszintet 28 napig, de előnyösen úgy alakítjuk, hogy ezeket a vérszinteket lényegesen hosszabb ideig biztosítsák.
A dozírozás változó lehet, amit a kezelőorvos állapít meg, hogy a szérumszinteket a kívánt szinten tartsuk, például az androgén esetében 1 és 50 nanomol/1 közötti értéken. Szükséges, hogy a humán dózis hasonló keringő szérumszintet biztosítson, mint amilyet a patkányoknál biztosít standard körülmények között, így körülbelül a patkánydózis 30-szorosára van szükség, bár ez változó a páciensek egyéni metabolizmusa miatt, így például azok a prolongált felszabadulású MPArészecskék, amelyek 30 nanomólos szérumkoncentrációt tartanak fenn 10 mg injekciót követően patkányban standard körülmények között, várhatóan körülbelül 30 nanomól koncentrációt fognak biztosítani emberben 300 mg-os injekció után, 20 nanomólos koncentrációt 200 mg-os injekció után, 15 nanomólos koncentrációt 150 mg injekció után stb. Az előző dózisok a prolongált felszabadulású részecskék tömegét jelentik, és nem tartalmaznak vivőanyagot. A kész gyógyászati készítmény dózisait a vivőanyag figyelembevételével kell megállapítani. Például, ahol 100 mg dózis kell a részecskékből, egy olyan készítményt, ami 1:1 arányban tartalmazza a részecskéket és a vivőanyagot, 200 mgos dózisban kell alkalmazni. Hasonló módon, a dózist módosítani kell a prolongált felszabadulású részecskék felszabadulási mértékétől függően standard körülmények között. Azért, hogy ugyanazt a szérumkoncentráció-szintet biztosítsuk, az 5 nanomól felszabadulási mértékű részecskéket (standard körülmények között) például körülbelül kétszeres mennyiségben kell alkalmazni, mint a 10 nanomól felszabadulási mértékű részecskéket (standard körülmények között).
Általában a kezelőorvos olyan dózissal kezdi a kezelést, ami várhatóan az aktív résztvevő szérumszintjét 1 és 10 nanomól, például 3-7 nanomól között tartja fenn. A páciens reakciójától függően a dózis ezután emelhető vagy csökkenthető. Előnyös, ha rövid hatástartalmú részecskéket (például kb. 28 nap) használunk, amíg az optimális dózist megállapítjuk. Ezután hosszabb hatástartalmú prolongált felszabadulású részecskéket adagolhatunk olyan dózisban, amely az optimális vérszintet tartja fenn. A dózis természetesen módosítandó a fentieknek megfelelően a standard felszabadulási mértékek különbsége szerint, ami a rövidebb, illetve hosszabb hatástartalmú részecskék között van.
Az androgének közül választott előnyös aktív vegyület a medroxi-progeszteron-acetát (6a-metil,17a-acetoxi-progeszteron) vagy „MPA”, ami egyebek között Upjohn és Farmitalia Carlo Erbatol, S. p. A. szerezhető be Provera, Depoprovera vagy Farlutal gyári neveken; és a megestrol-acetát (17a-acetoxi-6-metil-pregna-4,6dién-3,20-dion) vagy „MGA”, ami többek között a Mead & Co.-tól szerezhető be Megace gyári néven.
Előnyös, ha a prolongált felszabadulású részecskék nagyjából gömb alakúak. Ezt úgy érhetjük el például, hogy az aktív résztvevőt és a prolongált felszabadulású kötőanyagot szerves oldószerben oldjuk, majd az oldatot rázás közben vízbe juttatjuk. A kötőanyag kis mikrogyöngyei, amelyek az aktív résztvevőt magukban diszpergálva tartalmazzák, azáltal képződnek - lévén a mikrogyöngyök vízben nem oldódnak -, ha vízfelesleget alkalmazunk. A mikrogyöngyök nem tartalmaznak szignifikáns mennyiséget a szerves oldószerből, mindaddig, amíg a szerves anyag vízzel keverhető. Felületaktív anyagot adhatunk hozzá, hogy elősegítsük a mikro18
HU 222 501 Β1 gyöngyök elkülönülését az oldószertől a vízben való mikrogyöngyképződés ideje alatt. Az átlagos mikrogyöngyméret növelhető a rázás erősségének csökkentésével, és csökkenthető erősebb rázással.
A páciensnek való adagolásnál a könnyebb injektálhatóság kedvéért, valamint hogy azután a nemkívánatos fennmaradó szerves oldószer eltávolítását elősegítsük, kisebb mikrogyöngyök kívánatosak. Általában a mikrogyöngyök átlagos mérete 5 és 40 pm között van, előnyösen 9 és 28 pm között.
Egy előnyös megjelenési formában az MPA rögzítését úgy érjük el, hogy metilén-kloridba kevert MPA-t és polimert tartalmazó mikrocseppecskék vizes szuszpenzióját állítjuk elő. A polimer lehet például tejsav és glikolsav 50:50 arányú kopolimeqe. A mikrogyöngyök képződését egy felületaktív anyag szabályozza, mint például a poli(vinil-alkohol). A cseppecskéket megszilárdítjuk a metilén-klorid eltávolításával, amit nagy mennyiségű vízzel extrahálunk; ez a cseppeknekjobb formát biztosít, mint az általában alkalmazott vákuumpárologtatásos módszer. A mikrogyöngyök méretét a felületaktív anyag mennyiségével szabályozzuk, és a szuszpenziókeverék rázási sebességével.
A részecskeméret szélsőérték-megoszlása változó lehet, de egy szűk és egységesebb sáv kívánatos. Előnyösen a részecskéknek legalább 90%-a 1 és 10 pm között van. Legelőnyösebb, ha legalább 90% 9 és 28 pm között van. Ez úgy értelmezendő, hogy a mikrogyöngyök mérete az egyes mikrogyöngyök átmérőjét jelenti, még ha nemkívánatos agglomerátum képződne is más mikrogyöngyökkel. Szabálytalan alakú részecskék mérete alatt a részecske (bármely) két pontja között húzható leghosszabb egyenes átmérőt értjük. A méret a részecskék egy reprezentatív mintájának elektronmikroszkópos vizsgálatával mérhető.
Megfelelő szerves oldószerek a mikrogyöngyök előállítására (de nem kizárólagosan) az alábbiak: metilénklorid, etil-acetát, aceton, dietil-éter, tetrahidrofurán, hexafluor-aceton, hexafluor-izopropanol, acetonitril és az oldószerek keverékei. Megfelelő felületaktív anyagok, amelyeket a mikrogyöngyök előállításának első lépcsőjénél használunk az aktív anyagnak oldószerkivonással való mikrorészecskébe juttatásához összhangban a 3. példában leírtakkal, a következők (de nem kizárólagosan): poli(vinil-alkohol), poli(vinil-pirrolidon), karboxi-metil-cellulóz, zselatin, keményítő, talkum, magnézium-szulfát, kalcium-karbonát és ionos szerek. A felületaktív anyagot előnyösen 1 és 10 térfogat% körüli mennyiségben adagoljuk vízben.
Minthogy a víz:oldószer (beleértve az oldott kötőanyagot is) arány változó lehet, nagy mennyiségű víz (például a víz:oldószer arány 5-20 térfogat% vagy több) alkalmazása előnyös.
A kötőanyagot az oldószerhez előnyösen kb. 1-20 térfogat% koncentrációban adjuk hozzá az oldékonyságtól függően. Előnyösen az oldószer mennyisége a körül a minimum körül mozog, ami ahhoz szükséges, hogy a kötőanyag és az aktív résztvevő teljesen oldódjanak. Ha az oldódás nem teljes, adalék oldószert adhatunk hozzá. Az aktív résztvevő és a kötőanyag arányát a részecske által hordozott aktív résztvevő kívánt mennyiségi aránya határozza meg, ami előnyösen 1:4 és 7:3 (tömeg/tömeg) között változik, még előnyösebben 3:7 és 3:2 között. A hordozott aktív résztvevő mennyiségi arányát úgy választhatjuk meg, hogy befolyásoljuk a prolongált felszabadulású készítmény felszabadulási sebességét, vagy a felszabadulás tartamát vagy a területen ismert más paramétert.
A mikrogyöngyök előállításánál, amikor a 3. példában ismertetett oldószer-extrakciós mikrokapszulálást alkalmazzuk, az előnyös oldószer a medroxi-progeszteron-acetát és a polimer vagy kopolimer oldására a metilén-klorid, de más olyan oldószer, amely részben vízzel keverhető és kismértékű humán toxicitással rendelkezik, ugyancsak alkalmas (például etil-acetát, aceton, dietil-éter, tetrahidrofurán, hexafluor-aceton, hexafluorizopropanol, acetonitril és ezen oldószerek keverékei). Továbbá az oldószer toxicitása nem szignifikáns faktor, ha az oldószert alaposan eltávolítjuk az itt ismertetett oldószer-eltávolító technikákkal. Az előnyös felületaktív anyag a poli(vinil-alkohol), de más felületaktív anyag is megfelelő: polimerizált diszpergálószerek [azaz poli(vinil-pirrolidon), karboxi-metil-cellulóz, zselatin, keményítő], talkum, magnézium-szulfát, kalcium-karbonát és ionos szerek.
A mikrorészecskéket előállíthatjuk öntéses eljárással is, ahol az MPA és polimer vagy kopolimer oldatát egy alkalmas oldószerbe (például a fent ismertetett oldószerek egyikébe) öntjük. Ezután az oldószert 105 Pa nyomáson elpárologtatjuk. Az így nyert filmet melegítjük, és egy dróthálón keresztülpréseljük. A kapott rudacskákat és részecskéket mikrorészecskékké őröljük. A mikrorészecskéket mérethatárok szerint szétválaszthatjuk egy megfelelő molekuláris szűrőn keresztül. Az átlagos méret általában 1 és 250 pm között van, előnyösen 5 és 100 pm között, és még előnyösebben 9 és 28 pm között. Az oldószer eltávolítását csakúgy, mint az injektálás egyszerűségét elősegíti a kisebb részecskék alkalmazása, előnyösen abban az esetben, ha az átlagos méret (és a részecskék 90%-a) kisebb, mint 40 pm.
A jelen találmánynak megfelelően az előnyös gyógyászati készítményben a mikrorészecske által hordozott aktív résztvevő aránya 20 és 70% MPA vagy MGA között van, még pontosabban 30 és 60% között. Az aktív résztvevő és a kötőanyag aránya előnyösen 1:4-től 7:3-ig terjed, például 3:7-3:2.
Más vegyületeket tartalmazó szabályozott felszabadulású készítmények előállításához használatos általános eljárásokról találhatók információk a következő művekben: Kitchell és Wise In Methods in Enzymology, Academic Press, 112. kötet, 436-448; Beck és Tice, In Long Acting Steroid Contraception (D. R. Mishell Jr., ed), Raven Press: New York, 175-199. oldalak, 1983 és Wise és társai, In Biology and Medicine (G. Gregotiadis, ed), Academic Press: New York, 237-270. oldalak, 1979; a fenti műveket azonban jelen leírásunkban is ismertetjük.
A szteroidot előnyösen olyan napi dózisban alkalmazzuk, ami nem éri el a 25 mg aktív MPA vagy MGA mennyiségét 50 kg-onként, előnyösen 1-10 mg, legelő19
HU 222 501 Bl nyösebben 3-7 mg-ot (például 5 mg) alkalmazunk. Az előnyösen választott dózis a szérumkoncentrációkat 50 nanomol/1 alatt tartja, előnyösen 1,0 nanomol/1 és 10, 15 vagy 20 nanomol/1 között, a páciens válaszkészségétől függően.
A jelen találmánynak megfelelően egy parenterális injekció előnyösen kevesebb mint 2,0 g aktív résztvevőt (például medroxi-progeszteron-acetátot vagy megestrol-acetátot) tartalmaz, még előnyösebben 0,15 és 1,0 g közötti mennyiséget.
Erősen kívánatos, hogy a prolongált felszabadulású részecskékből annyi fennmaradó szerves oldószert távolítsunk el, amennyit csak lehetséges. Valójában néhány szerves oldószer annyira toxikus, hogy nem használhatók anélkül a prolongált felszabadulású részecskék előállításához, hogy ne találnánk módot hatékony eltávolításukra. A be nem épült szerves oldószer, amit nem tart fogva a részecske fizikai szerkezete, például csak a felszínével van kontaktusban, könnyen eltávolítható a konvencionális eljárásokkal (például többszöri átmosás vízzel, levegőátáramoltatás stb.). A fizikai szerkezetbe beépült szerves oldószer problematikusabb, és az alábbiakban egy új eljárást ismertetünk az oldószer eltávolítására.
Az oldószer eltávolítását elősegíti, ha kisméretű részecskéket állítunk elő. Előnyösen a részecskék átlagos mérete kisebb 40 μ-nál, például 5 és 40 μ közötti, még előnyösebben 9 és 28 μ között van. Legelőnyösebben a méretmegoszlás olyan, hogy a részecskék 90%-a a fent felállított mérethatárokon belül van.
Előnyös megjelenési formákban a részecskék képződését követően a be nem épült oldószert a szokványos eljárásokkal eltávolítjuk, mint például a többszöri vízzel való átmosással és/vagy levegővel szárítással.
Az oldószer eltávolítása ezután előnyösen a részecskék mérsékelt vákuumba helyezésével történik, ahol a nyomás nem kevesebb 6,6 · 103 Pa-nál, és a hőmérséklet nem több mint 30 °C-kal (A esetben), illetve 7 °Ckal (B esetben), a részecskék üvegesedési hőmérséklete alatti érték.
A részecskékből alaposan eltávolítjuk a maradék oldószert, beleértve a fizikailag a részecskékbe beépült oldószert is, azáltal, hogy a részecskéket erős vákuumhatásnak tesszük ki (kevesebb mint 133 Pa, és előnyösen kevesebb mint 66,5 Pa) olyan hőmérsékleten, ami 7 és 20 °C-kal a részecskék üvegesedési hőmérséklete (Tg) alatt van, előnyösen 7 és 15 °C-kal a Tg alatt, és még előnyösebben 7 és 12 °C-kal a Tg alatt. Ezt az erős vákuumhatást elegendő ideig tartjuk fenn ahhoz, hogy a részecskékben a maradék szerves oldószert 0,1% (tömeg% a részecske teljes tömegéhez képest) alatti koncentrációra csökkentsük. Előnyösen a maradék oldószer 0,05% alá csökken, még előnyösebben 0,02% alá.
Az üvegesedési hőmérséklet a szakmában ismert számos módszerrel mérhető vagy számolható, többek között (de nem kizárólag) a folyékonyságnak a hőmérséklet függvényében standard eljárással való mérésével és ábrázolásával, amint azt a 9. ábra mutatja. A maximális hevítési hőmérséklet előnyösen nem lehet magasabb, mint a görbe lineáris szakaszának vége az üvegesedési hőmérséklet alatt (ugyancsak a 9. ábrán szemléltetve). Magasabb hőmérsékletek a részecskék nemkívánatos agglomerációját okozhatják, vagy hődegradációs termékek keletkezését.
A jelen találmány szerinti határok között fenntartott hőmérséklet esetén a részecskék szabad folyással rendelkeznek, és nem keletkeznek hődegradációs termékek. A találmány szerinti mérsékelt hőmérséklet alkalmazása azonban lényegesen elősegíti a szerves oldószer eltávolítását.
Az előnyös megjelenési formákban egy mérsékelt vákuumkezelés vagy más eljárás vagy a maradék oldószer 5% alá csökkentése, előnyösen 2% (tömeg% a részecske teljes tömegére vonatkoztatva) alá csökkentése előzi meg az erős vákuumkezelést. Magasabb oldószerszintek nemkívánatos módon a részecskék repedéséhez vezethetnek az erős vákuumkezelés alatt. Az ilyen repedések nemkívánatos módon befolyásolhatják a részecskék felszabadulási mértékének jellemzőit.
Az előzőekben említett mérsékelt vákuumkezelés során a szokásos időtartam általában 1-10 nap, előnyösen
1- 5 nap, még előnyösebben 2-4 nap. Az erős vákuumkezelés szokásos időtartama 1-20 nap, előnyösen
2- 15 nap, még előnyösebben 3-10 nap. Az erős vákuumkezelés időtartamának azonban addig kell tartania, amíg a maradék szerves oldószer a kívánt szint alá csökken. A maradék oldószer szintjét ismert eljárásokkal határozhatjuk meg, például úgy, ahogyan azt az alább következő 6. példa szemlélteti. A találmány szerinti eljárást sikeresen alkalmazhatjuk az oldószer 0,02 tömeg% alá csökkentésére, ami a legkisebb mérhető mennyiség G analízis alkalmazásával, lásd a 6. példa.
A találmány szerint előállított prolongált felszabadulású részecskék végső felhasználási formáját különböző ismert módokon állíthatjuk elő. Előnyösen ismert eljárásokkal sterilizáljuk őket (például a 10. példában ismertetett módon). Kombinálhatok továbbá gyógyászatilag alkalmazható oldószerekkel vagy vivőanyagokkal. Ismert tartósítószereket is adhatunk hozzájuk. Előnyösen a prolongált felszabadulású részecskék koncentrációja (tömeg% a készítmény teljes tömegéhez képest) kb. 10 és 70% között van. A vivőanyag előnyösen olyan, amelyben a részecske kötőanyaga lényegében oldhatatlan, például karboxi-metil-cellulóz vízben, desztillált vízben vagy fiziológiás sóoldatban.
A jelen találmány szerint az előnyös mikrogyöngyökre jellemző a hőbomlásból származó szennyeződések hiánya. Ezt a mikrogyöngyök szárítása során alkalmazott alacsony hőmérséklettel és erős vákuummal érjük el.
A találmány szerinti előnyös vivőanyag a mikrorészecskék parenterális injektálására a következő csoportból választható: fiziológiás sóoldat, karboxi-metil-cellulóz vizes oldata, glikol vagy glicerin vizes oldata, víz vagy etanol vizes oldata. Pontosabban az előnyös vivőanyag a karboxi-metil-cellulóz 2-5%-os vizes oldata.
A találmány szerinti prolongált felszabadulású készítmények alkalmazására előnyös eljárások közé tar20
HU 222 501 Bl toznak (de nem kizárólag) a szubkután vagy intramuszkuláris injekció és az orális adagolás.
A találmány szerint alkalmazott alacsony dózisok miatt a mellékhatások kielégítően visszaszorulnak, így a találmány szerinti eljárások profilaktikus használata sokkal praktikusabb, és valószínűbb, hogy széles körben akceptálható, mint a nagyobb dózisokat alkalmazó eljárások. Minthogy a kezelési dózis is már alacsony, a preventív kezelés hatékonyságát nem kell kisebb adagok alkalmazásával veszélyeztetni.
1. példa
Dimetil-benz[a]antracénnal (DMBA) indukált emlőkarcinóma megelőzése patkányban alacsony dózisú medroxi-progeszteron-acetáttal (MPA)
A jelen találmány emlőkarcinóma incidenciájára kifejtett hatékonyságának ábrázolására az 1. ábra bemutatja egy egyszeri szubkután Depoprovera- [medroxiprogeszteron-acetát (MPA)=30 mg] injekció hatását egy héttel a dimetil-benz[a]antracénnal történő karcinómaindukció előtt alkalmazva. Az 1. ábra a DMBA beadását követő 30-85 nap időtartamot mutatja. Az egyik görbe az 1. ábrán a Depoproverával kezelt állatcsoportban a tumorok átlagos számát mutatja a csoport állatainak számára vonatkoztatva, a másik görbe pedig a nem előkezelt állatcsoportban mutatja az egy állatra eső tumorok átlagos számát. Becslések szerint a Depoprovera 30 mg-os injekciójából kb. 0,17 mg aktív medroxi-progeszteron-acetát szabadulna fel naponta hat hónapos időtartamig.
Amint az 1. ábrán a két görbe összehasonlításából látható, a Depoproverával kezelt csoport sokkal nagyobb ellenállást mutatott a tumorok kifejlődésével szemben, mint a nem kezelt csoport. 85 nap múlva átlagosan 1,89 tumort figyeltünk meg a nem kezelt csoportnál patkányonként, míg mindössze 0,30 tumort észleltünk patkányonként a Depoproverával kezelt csoportban. A tumorok számát és mérőkörzővel mért méretét hetente határoztuk meg.
2. példa
Dimetil-benz[a]antracénnel indukált emlőkarcinóma kezelése patkányban alacsony dózisú medroxi-progeszteron-acetáttal
A 2. ábra az emlőkarcinóma-növekedés gátlását mutatja be, ami a találmány szerinti eljárásokkal érhető el. A tumorokat ovariectomizált (petefészekirtott) patkányoknál dimetil-benz[a]antracén felhasználásával indukáltuk. Ösztradiolt használtunk a növekedés serkentésére a patkányoknál, mind a kezelt, mind a kontrollcsoportban. A kezelt csoportban minden patkány egy egyszeri szubkután injekcióban 30 mg Depoproverát kapott (amely becslések alapján kb. 0,17 mg aktív medroxi-progeszteron-acetát felszabadulását biztosítja kb. hat hónapos időtartamra). Ez az ábra bemutatja az átlagos ösztradiol stimulálta változást a teljes tumorterületen minden csoportban a kezelést követően. Amint a 2. ábrán látható, a Depoproverával kezelt csoport szignifikánsan kisebb tumomövekedést mutatott, mint a kezeletlen csoport.
3. példa
Medroxi-progeszteron-acetát-tartalmúmikrogyöngyök előállítása oldószer-extrakciós módszerrel
A polimer anyag 50:50 poli(DL-laktid-koglikolid) (PLG) (szállítja a Birmingham Polymer Inc., Birmingham, Al) teljes oldódását az oldószerben egy éjszakán át tartó rázással/keveréssel érjük el KS-10 keverőedényben (a BEA Enprotech Corp.-tól) 150-200 fordulat per perc sebességre beállítva. A használt oldószer a metilénklorid (CH2C12), amit BDH-tól szereztünk be, és közvetlenül használat előtt egyszer desztilláltunk. A polimert (1,50 g) egy üvegedénybejuttatjuk, ami már tartalmazza a CH2Cl2-t (15,00 g), állandó keverés mellett. Ezután hozzáadjuk a medroxi-progeszteron-acetátot (0,75 g) állandó keverés mellett, hogy egy PLG-MPA-CH2Cl2-oldatot kapjunk.
Elkülönítve egy 250 ml-es gyantaedényben (a Kontes cégtől beszerezve) összekeverünk 90 ml vizet és 6 ml felületaktív anyagot [poli(vinil-alkohol)] (PVA) (Airvol™ 205, beszerezve az Air Products Chemicalstől), és állandó keverés alatt tartjuk őket egy teflon turbinaszerű keverővei egy laboratóriumi nagy teljesítményű keverőben. Ezután 1,16 ml metilén-kloridot adunk a felületaktív anyag oldatához, hogy telítsük a vizes oldatot, és hogy elkerüljük a metilén-klorid extrahálódását ebben a stádiumban. Ehhez egy 2 ml-es üvegpipettát vezetünk be a gyantaedény felső részén található négy nyílás egyikén. A keverést 5 percen át 850 fordulat/percen végezzük. A mikrogyöngyöket ezután úgy állítjuk elő, hogy az előzőleg előállított PLG-MPACH2Cl2-oldatot a keverés alatt álló CH2Cl2-vel telített PVA-oldathoz adjuk egy 16-os méretű 15 cm hosszú tűvel ellátott polipropilénfecskendő segítségével. Az MPA-oldat hozzáadása után a keverést további ötperces időtartamig folytatjuk.
A mikrogyöngyök megszilárdítása
A megszilárdítás folyamatának lépései a következők:
1. A gyantaedény tartalmát gyorsan egy megszilárdításra alkalmas fürdőbe öntjük, és a gyantaedényt desztillált vízzel átmosva annak tartalmát szintén a fürdőbe öntjük. A megszilárdulást szolgáló fürdő egy nagy rozsdamentes acélkádból (7 1) áll, ami 5 1 desztillált vizet tartalmaz. A keverést nagy sebességgel (850 fordulat/perc) 20 percig végezzük egy 6,25 cm-es SS keverőlapáttal felszerelt laboratóriumi nagy teljesítményű keverővei.
2. Ezután a mikrogyöngyöket elválasztjuk a mosóközegtől Millipore 142 mm-es szűrőrendszerrel. Megszilárdulás után a fürdő tartalmát a 20 1-es Millipore nyomással szeparálóedénybe juttatjuk. Ekkor ügyelni kell arra, hogy a megszilárdulást szolgáló SS kád alapos öblítését biztosítsuk, hogy hatékonyan visszanyeljük a keverés szünetelésekor leülepedett mikrogyöngyöket. Azután a mikrogyöngyöket egy 142 mm-es membránon (pórusméret : 8 pm) gyűjtjük össze úgy, hogy a szeparálóedény tartalmát kompresszált levegővel (6,9-104 Pa) keresztülnyomjuk a membránon.
3. Ezután a membránt desztillált vízzel átmossuk, és ezzel egyidejűleg a mikrogyöngyöket lemossuk a
HU 222 501 Bl membránról egy második megszilárdulást szolgáló fürdőbe, ami megegyezik az elsővel. A mikrogyöngyök összegyűjtése a 142 mm-es membránon ezután másodízben a fent ismertetettek szerint zajlik.
4. A mikrogyöngyök végső átmosása és szárítása a Millipore 142 mm-es szűrőrendszeren történik. A szárítás első lépése 6,9 · 104 Pa nyomású levegő átáramoltatásával történik 1 órán keresztül. Ezután a mikrogyöngyöket a membránról egy deszikkátorba helyezzük át, ami kb. 2,5 cm Drierite-et tartalmaz, és 2-3 napos időtartamra mérsékelt vákuumot (9,33 · 102 Pa) biztosítunk. A végső szárítást vákuumszárítóban végezzük 35-40 °C-on 53 Pa nyomáson, amíg az oldószer gázkromatográfiával kimutathatatlanná válik, aminek az érzékenysége CH2Cl2-re nézve 0,02% (tömeg% a mikrorészecskék teljes tömegére nézve). így ezzel a technikával eltávolítjuk alapjában véve az összes maradék szerves oldószert, kevesebb mint 0,02% marad vissza.
4. példa
60% medroxi-progeszteron-acetátot (MPA), 40% Medisorb™ 85:15 DL-poli(laktid-koglikol)-savat (PLGA) tartalmazó mikrorészecskék előállítása öntéses módszerrel
A medroxi-progeszteron-acetátot a Steraloidstól beszerzett formában használtuk. Felhasználás előtt UVspektroszkópiával vizsgáltuk, és meghatároztuk az olvadáspontját. A Medisorb™ 85:15 DL-poli(laktid-koglikol)-sav a DuPont-tól származott és ugyancsak azonos állapotban került felhasználásra. A metilén-kloridot (az elérhető legkoncentráltabbat) a Fisher Scientifíctől szereztük be. A polimert (6,0022 g) 24 ml metilén-kloridban oldottuk, így 25%-os oldatot (0,25 g PLGA/ml metilén-klorid) kaptunk. Medroxi-progeszteron-acetátot (9,0022 g) adtunk a polimer oldathoz, és a keverést addig folytattuk, amíg a teljes keveredést elértük. Ezután az oldatot egy tiszta, sima üveglapra öntöttük egy Boston Bradley szabályozható lapát segítségével, hogy egyenletes vastagságot érjünk el. Az öntött filmet hagytuk száradni egy párologtatóedényben néhány órán keresztül. Az oldószer nagy részének elpárolgása után a fennmaradt filmet levakartuk az üveglapról és vákuummal szárítottuk szobahőmérsékleten négy napig.
Az öntéses folyamat alatt képződött film nagyon kis sűrűségű volt, minthogy az oldószer eltávolítása igen nagy üres térfogatot hagy vissza. Az üres térfogatot csökkentettük kompresszió alkalmazásával, hogy csökkentsük a folyadéknak mikrorészecskékbe való bejutását, ehhez hőt és hidraulikus nyomást használtunk fel. Ezután a filmet rudacskákká alakítottuk át Pasadena Hydraulics Inc. Press felhasználásával kb. 125 °C-on. Az extrudált pálcikákat kis részecskékké őröltük egy lehűtött őrlőtérrel rendelkező közönséges őrlővel. Az őrlést követően a port keresztülnyomtuk egy US Standard (szérián) szűrősorozaton, hogy a mikrorészecskéket 38-125 pm, 125-180 pm és 180-250 pm szélső értékek közötti sávok szerint gyűjtsük össze. A megszűrt mikrorészecskéket összegyűjtöttük.
5. példa
A fennmaradt oldószer elpárologtatósa
a) A szárításhoz egy Abderhalden készüléket (Aldrich Chemicals Co.-tól beszerezve) használtunk fel. Ennek az üvegárunak a legfontosabb tulajdonsága, hogy megengedi erős vákuum és melegítés együttes alkalmazását azzal a lehetőséggel kombinálva, hogy tárolja is a szárítandó mintát egy szárítószer jelenlétében (3 angströmös molekuláris szűrő). A mi vizsgálatunk esetén az erős vákuumot (kb. 1,3 Pa) egy E2M5 Edwards vákuumpumpával állítottuk elő. Szárítás céljára a minta melegítését egy CH2C12+aceton keverék refluxáltatásával végeztük MPA-MBA minta esetén, hogy 45 °C-os hőmérsékletet tartsunk fenn.
b) MPA-MB-VII, MPA-MB-XI, MPA-MFI-73, MPA-MLV-31, MPA-MLV-32, MPA-MLV-34, MPA-MLV-35, MPA-MLV-39 és MPA-MLV-40 mintákat úgy szárítottuk, hogy mindegyik csoportnál vákuumszárítót használtunk, hogy a mikrogyöngyök további szárítását éljük el. A kezdeti gyengébb vákuum (7000 Pa) után az erős vákuumot (53 Pa) egy E2M5 Edwards vákuumpumpával biztosítottuk. A hőmérsékletet szabályoztuk (44-46 °C), és az összes mintát egyszerre szárítottuk a rendszerben.
6. példa
A fennmaradó metilén-klorid meghatározása
A mikrogyöngyökben a fennmaradó metilén-klorid-koncentrációt G analízissel határoztuk meg egy Varian 3700 gázkromatográf használatával, ami egy DB-1 kapilláris csővel és egy FID detektorral van felszerelve. A hőmérsékleti program: 7 percig 40 °C, mielőtt a 10 °C/perc melegítés beindulna 200 °C (1 percig) eléréséig. Az injektált mennyiségek 1,0 pl-ek. A G analízis céljára a mikrogyöngyöket (kb. 25 mg) 1 ml CHCl3-ban oldjuk (HPLC minőség), majd 5 ml izooktánnal hígítjuk. A metilén-klorid pontos koncentrációját egy kalibrációs görbe felhasználásával határozzuk meg, ami öt standardtól származik. Ezeket a standardokat tiszta metilén-kloridból (CH2C12) és kloroformból (CHC13) állítjuk elő 0,1-1,0 tömeg% szélső koncentrációértékek között.
A következő táblázat mutatja a visszamaradt metilén-klorid-analízissel nyert eredményeket :
% CH2C12 (tömeg/tömeg)
Öntéses módszer: minták a 4. példa szerint előállítva 0,3
Mikrogyöngy 50:50 DL-PLG <0,02
7. példa
Az MPA-hatóanyag-tartalom meghatározása
a) Mágneses magrezonancia
Ezt a meghatározást NMR-spektroszkópiával végeztük az MPA 19-metilcsoportjának csúcsa alatti terület (8=0,65 pm-nél) és a polimer hidrogénatomjainak csúcsa alatti terület (multiplet, 8=5,20-nál és Ő=4,8-nál) elemzésével. Bruker AC-F 300 FT NMR-spektromé22
HU 222 501 Bl tért használtunk. Lásd a 3. ábrát példaként az NMRspektrumra, és a 4. ábrát, ami ezen meghatározásokhoz a standard görbékre példa, ami az MPA és a polimer ismert keverékeinek NMR-spektrumaiból származik.
b) Szterikus kizárásos kromatográfia
Az MPA-tartalom szterikus exclusion kromatográfiás (SEC) mérése Perkin-Elmer 250ISO/LC-30 SEC rendszerrel történt PL-gél 50 angströmös 5 pm-es oszloppal és egy PL-gél kevert oszloppal HPLC tisztaságú kloroform, mint eluens felhasználásával. Az 5. ábrán például 50:50 PLG-mikrogyöngy méréseit végeztük 40 °C-on, és ezen körülmények között az MPA és DL-PLG jól elkülönültek. Egy minta hatóanyag-tartalmát az MPA-csúcs alatti területnek a PLG/MPA keverékek standard koncentrációból készült kalibrációs görbéhez való viszonyításával állapítottuk meg (insert).
8. példa
A mikrogyöngyök scanning elektronmikroszkóppal (SEM) meghatározott jellemzői
Felszíni morfológiájuk elemzése céljából a mikrogyöngyöket elektron scanning mikroszkóppal (SEM) vizsgáltuk JEOL JSM T330A készülék alkalmazásával. A mintákat a mikrogyöngyöknek egy kétfelszínű szalagra juttatásával állítottuk elő, mielőtt egy 5-6-10-8 m vastagságú aranyréteggel vontuk be őket. Ezeket a vizsgálatokat a mikrogyöngyök átlagos átmérőjének meghatározására is felhasználtuk. Ezek a meghatározások a gyenge mágneses térben (350X) rögzített képen látható összes mikrogyöngy kézi számlálásával és mérésével történtek (6A. ábra). Erősebb mágnesezés, 2000 x-ig, a mikrogyöngyök felszínének még részletesebb elemzését teszik lehetővé.
Például az MPA-MB-V minta MPA-mikrogyöngyei méretbeli megoszlásának precíz meghatározását a SEM fényképeken a mikrogyöngyök átmérőjének direkt mérésével végeztük. Amint a 8. ábrán látható, az így megszámlált 680 mikrogyöngy több mint 95%-a kisebb méretű 40 pm-nél, átlagos átmérőjük 18,6+9,7 (S. D.) pm. A mikrogyöngyök ilyen kis mérete elősegíti az anyag injektálását, és megrövidíti a felszabadulás időtartamát. A 7. ábrán a mikrogyöngyök keresztmetszetén látható, hogy az MPA szétszórt szigetekben koncentrálódik a polimerben.
9. példa
A mikrogyöngyök jellemzése differenciál scanning kalorimetriával (DSC)
A minták hőanalízisét Perkin-Elmer DSC-7-tel végeztük. A készüléket indiummal kalibráltuk, és 10 °C/min vizsgálati sebességgel működtettük.
A 9. ábrán az MPA-mikrogyöngyök DSC-görbéje szerint a maximális szárító hőmérséklet könnyen meghatározható.
10. példa
A mikrogyöngyök sterilizálása
Injektálás előtt a mikrogyöngyöket 2,2 megárad gamma-sugárzásnak tettük ki, ami egy kobalt-60 forrásból származott (Gammacell 200). Az MPA stabilitását szterikus kizárásos kromatográfiával (SEC) ellenőriztük, míg a polimer stabilitását SEC-kel a kalibráláshoz polisztirén standardok segítségével elemeztük, és a relatív viszkozitásváltozás mérésére Ubbelohde kapillárisviszkométert használtunk.
A gamma-sugárzás (2,2 megárad) nem károsítja az MPA-t, de a mikrogyöngyök csökkent specifikus viszkozitása CH2Cl2-folyadékban 0,301 ±0,008-ról 0,262+0,003 dL/g-ra esett, ezzel jelezve, hogy a polimer láncok egy része felszakadt.
Az MPA-MB-V csoport mintáit különböző erősségű gamma-sugárzásnak tettük ki (0,1,1; 2,2 megárad), és mértük a molekulatömeg-megoszlási értékeket [M(n-1), Mn, Mw, Mz, M(z+1)] (lásd 10A. ábra), valamint polidiszperzitásukat (Mw/Mn) (10B. ábra).
Ezek az adatok azt mutatják, hogy a domináns folyamat a polimer láncok random szétszakadása. így a besugárzott mikrogyöngyök biológiai lebontása gyorsabb lesz, mint a nem besugárzott mikrogyöngyöké, és a besugárzás hatásait számításba kell venni a mikrogyöngyök előállításánál, például a besugárzás előtti felszabadulási mérték némileg alacsonyabbnak mondható a végterméktől megkívántnál.
11. példa
MPA-tartalmú mikrogyöngyök szubkután injekcióját követő szérum-MPA-szintek nyúlban
Új-zélandi fehér nyulakat (kb. 2,7 kg) tartottunk ketrecenként egyet - 10 órás sötétség és 14 órás világosság váltakoztatásával (fénybekapcsolás 07,00-kor), elláttuk őket 16%-os nyulaknak való tablettával, amit Moulées Kilplustól (Quebec, Kanada) szereztünk be, és tetszés szerint csapvízzel.
2%-os karboxi-metil-cellulóz és 1% Tween 80 oldatában szuszpendált 50 mg MPA-tartalmú mikrogyöngyöt (MPA-MB-U minta) injektáltunk szubkután egy 10 nyúlból álló csoportba. A vérmintákat különböző időintervallumokban vettük, és az MPA-koncentrációkat RIA-val mértük. Az MPA szérumszintjeit a 11. ábra mutatja.
12. példa
Szérum-MPA-szintek patkányban a találmány szerinti MPA-tartalmú mikrogyöngyök szubkután injekciója után
Fiatal nőstény Sprague-Dawley-patkányokat [Crl: CD(SD)Br] szereztünk be a Charles River Canada Inc.-től (St-Constant, Quebec) és ketrecenként kettőt tartottunk 14 órás fény és 10 óra sötétség váltakoztatásával (fénybekapcsolás 05,00-kor). Az állatok patkányeledelt és tetszés szerinti mennyiségű csapvizet kaptak.
2% karboxi-metil-cellulóz és 1% Tween 80 oldatában szuszpendálva az MPA-tartalmú mikrogyöngyök növekvő adagjait (5,10 és 20 mg) injektáltuk bőr alá egy 10 nőstény (Sprague-Dawley) patkányból álló csoportnak. A vérmintákat különböző intervallumokban vettük le, és az MPA-koncentrációkat RIA-val mértük. Az eredményeket a 12. ábra mutatja.
HU 222 501 Bl
75. példa
Dimetil-benz[a]antracénnal (DMBA) indukált emlőkarcinóma prevenciója patkányban alacsony dózisú MP A-val (mikrogyöngyökkel)
Anyagok és módszerek
Állatok és az emlőkarcinóma kiváltása
Emlőkarcinómát idéztünk elő nőstény Sprague-Dawley (Crl: CD(SD)Br) 50-52 napos patkányokban (Charles River Canada Inc.-től beszerezve /St-Constant, Quebec/) 20 mg dimetil-benz[a]antracén (DMBA) (Sigma Chemicals, Co., St. Louis, Mo) egyszeri, gyomorba történő adásával 1 ml kukoricaolajban.
Kezelés
Egy héttel a DMBA alkalmazása előtt az állatokat három csoportba osztottuk (kezeletlen, kezeletlen+30 mg MPA és kezeletlen+100 mg MPA), és ennek megfelelően 30 mg, illetve 100 mg MPA-tartalmú mikrogyöngyöt kaptak egyszer, szubkután alkalmazva.
Eredmények
Amint a 13. ábrán látható, 85 nappal a DMBA alkalmazása után a kezeletlen állatok 63%-ában fordult elő észlelhető emlőtumor, míg a 30 mg MP A-val (mikrogyönggyel) előkezelt állatoknak csak 7,4%-ában, a 100 mg-mal kezeltek 6,3%-ában volt észlelhető emlődaganat. Ezek az adatok világosan mutatják, hogy az előkezelés MPA-mikrogyöngyökkel meggátolja a DMBA-val indukált emlőkarcinóma kifejlődését patkányban, így felvetődik az MPA-mikrokapszulák felhasználásának lehetősége humán emlőkarcinóma megelőzésére nőkben.
14. példa
Az MGA hatása patkányokban a csont-ásványianyagsűrűségre
Céline MARTEL, Femand LABRIE
Anyagok és módszerek
Az állatok és a kezelés
Felnőtt nőstény Sprague-Dawley-patkányokat [Crl: CD(SD)Br, Charles River Laboratory, St-Constant, Kanada] alkalmaztunk a vizsgálatokban, melyek tömege 220-265 g volt az adagolás megkezdésekor, mikor is az állatok kb. 9-12 hetesek voltak. A patkányokat a kísérletek megkezdése előtt egy hétig szoktattuk a környezethez (hőmérséklet: 21+3 °C, 12 órás nappal és 12 órás éjjel ciklikusan váltakozva, megvilágítás 7 óra 15 perctől). Az állatokat hármas csoportokba különítettük el. Csapvizet tetszés szerint fogyaszthattak és Láb Diet rágcsálóeledellel etettük őket (# 5002 jelű tabletták). A kísérleteket a Canadian Council on Animál Care által jóváhagyott berendezésben, a kísérleti állatok kezelésére és felhasználására vonatkozó CCAC-előírásoknak megfelelően hajtottuk végre.
patkányt véletlenszerűen 6 db 12 állatot tartalmazó csoportra osztottuk, és a következőképpen kezeltük: 1. semmiféle kezelés, intakt kontrollcsoport; 2. eltávolított ováriumú állatok (OVX) kontrollcsoportja; OVX+MGA, 1 mg/kg; 4. OVX+MGA, 3 mg/kg; 5.
OVX+MGA, 10 mg/kg; 6. OVX+MGA, 30 mg/kg. A kísérlet 0. napján az állatok megfelelő csoportjaiban az ováriumot teljes mértékben (bilaterálisán) eltávolítottuk (OVX) isoflurane-indukált altatás mellett. A megestrol-acetáttal (MGA) végzett kezelést a kísérlet 1. napján indítottuk. Az MGA-t naponta kétszer adagoltuk gyomorszonda segítségével 4% etanolt, 4% Polyethylene Glicol-600-at, 1% zselatint és 0,9% NaCl-oldatot tartalmazó elegyben. Az adagolás következtében a szérumszintek a találmány szerinti 1-50 nmol/1 sávon mozogtak. A kontrollállatok a hordozót kapták.
A csont ásványianyag-tartalmának és -sűrűségének mérése hetes kezelést követően csoportonként 10 patkányt izofluránnal altattunk, majd az állatok jobb combcsontját (femur) kettős energiájú röntgen-abszorpciometriával szkenneltük (DEXA; QDR 2000-7.10C, Hologic, Waltham, MA); az eredményeket Régiónál High Resolution Scan szoftverrel értékeltük ki. A combcsont vizsgált részének mérete 5,080 χ 1,902 cm, a felbontás 0,0254x0,0127 cm és a szkennelés sebessége 0,0956 mm/másodperc volt. így meghatároztuk a combcsont ásványianyag-tartalmát és -sűrűségét.
Statisztikai analízis
A 10 állatból kapott eredményeket átlag+standard hiba adatokkal határoztuk meg. A statisztikai szignifikanciát Duncan-Kramer (1956)-féle többtartományos teszttel határoztuk meg.
Eredmények
Az ovárium eltávolítását követő 6 héttel combcsonti ásványianyag-tartalom és a combcsonti ásványianyagsűrűség 7,7% (nem szignifikáns), illetve 7,9% (p<0,01) növekedett (lásd 14. és 15. ábra). Az 1,3,10 és 30 mg/kg MGA-val végzett kezelések után kapott combcsonti ásványianyag-tartalom és -sűrűség nem különbözött az intakt kontrollcsoport állataiban mért értékektől, vagyis nem jelentkezett az ováriumeltávolítás káros hatása.
A 14. és 15. ábrán alkalmazott jelölések jelentése a következő:
* p<0,05;
** p<0,01 az OVX kontrollcsoporttal szemben.
Az itt alkalmazott feltételek (viszonyok) és leírások előnyös alkalmazási módok, amelyek csak illusztrációként szolgálnak, és nem célozzák annak a számos variációnak a korlátozását, ami a témában járatosak számára felismerhetően lehetséges a jelen találmány gyakorlati alkalmazásában, amit a szabadalmi igénypontokban meghatározunk.

Claims (10)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Hatóanyagként MPA-t vagy MGA-t tartalmazó, emlőkarcinóma, osteoporosis, endometriumkarcinóma vagy endometriosis kezelésére vagy megelőzésére alkalmas elnyújtott felszabadulású gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy a készítmény grammonként 200-700 mg MPA- vagy MGA-hatóanyagot tartalmaz, és a készítmény grammonként és naponta 4-25 mg hatóanyagot ad le.
    HU 222 501 Β1
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a készítmény tejsav/glikolsav kopolimer alapú hordozót tartalmaz.
  3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a készítmény mikrogyöngyök formájában van kiszerelve.
  4. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a készítmény szubkután vagy intramuszkuláris adagolásra alkalmas módon van kiszerelve.
  5. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a készítmény grammonként 300-600 mg MPA- vagy MGA-hatóanyagot tartalmaz, és grammonként és naponta 6-22 mg hatóanyagot ad le.
  6. 6. Eljárás hatóanyagként MPA-t vagy MGA-t tartalmazó, emlőkarcinóma, osteoporosis, endometriumkarcinóma vagy endometriosis kezelésére vagy megelőzésére alkalmas elnyújtott felszabadulású gyógyászati készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az MPAvagy MGA-hatóanyagot a készítmény grammjaira számolva 200-700 mg mennyiségben alkalmazzuk, és így olyan készítményt alakítunk ki, amely grammonként és naponta 4-25 mg hatóanyagot ad le.
  7. 7. A 6. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a készítményben tejsav/glikolsav kopolimer alapú hordozót alkalmazunk.
  8. 8. A 6. vagy 7. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a készítményt mikrogyöngyök formájában szereljük ki.
  9. 9. A 6-8. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a készítményt szubkután vagy intramuszkuláris adagolásra alkalmas módon szereljük ki.
  10. 10. A 6-9. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a készítményben grammonként 300-600 mg MPA- vagy MGA-hatóanyagot alkalmazunk, és így olyan készítményt alakítunk ki, amely grammonként és naponta 4-22 mg hatóanyagot ad le.
HU9303716A 1991-06-28 1992-02-26 MPA-t vagy MGA-t tartalmazó nyújtott hatóanyag-felszabadulású gyógyászati készítmény és eljárás előállítására HU222501B1 (hu)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US72453291A 1991-06-28 1991-06-28
US07/900,817 US5434146A (en) 1991-06-28 1992-06-24 Controlled release systems and low dose androgens
PCT/CA1992/000275 WO1993000070A1 (en) 1991-06-28 1992-06-26 Controlled release systems and low dose androgens

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9303716D0 HU9303716D0 (en) 1994-04-28
HUT66859A HUT66859A (en) 1995-01-30
HU222501B1 true HU222501B1 (hu) 2003-07-28

Family

ID=27110991

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9303716A HU222501B1 (hu) 1991-06-28 1992-02-26 MPA-t vagy MGA-t tartalmazó nyújtott hatóanyag-felszabadulású gyógyászati készítmény és eljárás előállítására

Country Status (18)

Country Link
US (5) US5434146A (hu)
EP (1) EP0591311B1 (hu)
JP (1) JPH06508624A (hu)
AT (1) ATE161173T1 (hu)
AU (2) AU672750B2 (hu)
CA (1) CA2112393A1 (hu)
CZ (1) CZ285972B6 (hu)
DE (1) DE69223620T2 (hu)
FI (1) FI935893A (hu)
HU (1) HU222501B1 (hu)
IE (1) IE922123A1 (hu)
IL (3) IL102447A (hu)
MY (1) MY131099A (hu)
NO (1) NO307283B1 (hu)
NZ (4) NZ264279A (hu)
RU (1) RU2142276C1 (hu)
SK (1) SK280697B6 (hu)
WO (1) WO1993000070A1 (hu)

Families Citing this family (168)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ZA924811B (en) * 1991-06-28 1993-12-29 Endorecherche Inc Controlled release systems and low dose androgens
HU222501B1 (hu) * 1991-06-28 2003-07-28 Endorecherche Inc. MPA-t vagy MGA-t tartalmazó nyújtott hatóanyag-felszabadulású gyógyászati készítmény és eljárás előállítására
US20020091155A1 (en) * 1995-06-22 2002-07-11 Btg Pharmaceutical Corp. Method for ameliorating muscle weakness/wasting in a patient infected with human immunodeficiency virus-type 1
US5776923A (en) * 1993-01-19 1998-07-07 Endorecherche, Inc. Method of treating or preventing osteoporosis by adminstering dehydropiandrosterone
ATE275957T1 (de) * 1993-01-19 2004-10-15 Endorech Inc Therapeutische verwendungen und verabreichungsysteme von dehydroepiandrosteron
US6407082B1 (en) * 1996-09-13 2002-06-18 New Life Pharmaceuticals Inc. Prevention of ovarian cancer by administration of a vitamin D compound
US5626862A (en) 1994-08-02 1997-05-06 Massachusetts Institute Of Technology Controlled local delivery of chemotherapeutic agents for treating solid tumors
US5574011A (en) * 1995-04-04 1996-11-12 Tien; Henry C. Compositions and methods for the treatment of male-pattern baldness
US5910492A (en) * 1995-06-05 1999-06-08 Takeda Chemical Industries, Ltd. Osteogenic promoting pharmaceutical composition
WO1997004752A1 (en) * 1995-07-26 1997-02-13 Duramed Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions of conjugated estrogens and methods for their use
US5792477A (en) 1996-05-07 1998-08-11 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Ii Preparation of extended shelf-life biodegradable, biocompatible microparticles containing a biologically active agent
US6765002B2 (en) 2000-03-21 2004-07-20 Gustavo Rodriguez Prevention of ovarian cancer by administration of products that induce transforming growth factor-β and/or apoptosis in the ovarian epithelium
US6034074A (en) 1996-09-13 2000-03-07 New Life Pharmaceuticals Inc. Prevention of ovarian cancer by administration of a Vitamin D compound
US6028064A (en) 1996-09-13 2000-02-22 New Life Pharmaceuticals Inc. Prevention of ovarian cancer by administration of progestin products
US6511970B1 (en) 1996-09-13 2003-01-28 New Life Pharmaceuticals Inc. Prevention of ovarian cancer by administration of products that induce transforming growth factor-beta and/or apoptosis in the ovarian epithelium
US6576659B1 (en) * 1996-12-05 2003-06-10 Bio-Technology General Corp. Use of oxandrolone in the treatment of burns an other wounds
US5855920A (en) * 1996-12-13 1999-01-05 Chein; Edmund Y. M. Total hormone replacement therapy
US6416778B1 (en) 1997-01-24 2002-07-09 Femmepharma Pharmaceutical preparations and methods for their regional administration
US6028057A (en) * 1998-02-19 2000-02-22 Thorn Bioscience, Llc Regulation of estrus and ovulation in gilts
AU2707999A (en) 1998-03-11 1999-09-27 Endorecherche Inc. Inhibitors of type 5 and type 3 17beta-hydroxysteroid dehydrogenase and methods for their use
KR100293504B1 (ko) 1998-06-05 2001-07-12 김윤 서방형전립선염치료제조성물
US7005428B1 (en) 1998-06-11 2006-02-28 Endorecherche, Inc. Medical uses of a selective estrogen receptor modulator in combination with sex steroid precursors
US6465445B1 (en) 1998-06-11 2002-10-15 Endorecherche, Inc. Medical uses of a selective estrogen receptor modulator in combination with sex steroid precursors
US6294188B1 (en) 1998-07-09 2001-09-25 Aviana Biopharm Inc. Methods involving changing the constitutive and stimulated secretions of the local reproductive system of women
WO2000003678A2 (en) * 1998-07-17 2000-01-27 Pharmacia & Upjohn Company Subcutaneous medroxyprogesterone acetate for contraception
WO2000021511A2 (en) * 1998-10-09 2000-04-20 Pharmacia & Upjohn Company Subcutaneous medroxyprogesterone acetate for treatment of menopause and endometriosis
US6194006B1 (en) * 1998-12-30 2001-02-27 Alkermes Controlled Therapeutics Inc. Ii Preparation of microparticles having a selected release profile
US6498153B1 (en) 1998-12-31 2002-12-24 Akzo Nobel N.V. Extended release growth promoting two component composition
US7018654B2 (en) * 1999-03-05 2006-03-28 New River Pharmaceuticals Inc. Pharmaceutical composition containing an active agent in an amino acid copolymer structure
US6716452B1 (en) 2000-08-22 2004-04-06 New River Pharmaceuticals Inc. Active agent delivery systems and methods for protecting and administering active agents
US6613758B1 (en) 1999-04-02 2003-09-02 Barr Laboratories, Inc. Method for treating osteoporosis in castrated prostatic cancer patients
EP1173151B1 (en) * 1999-04-16 2003-07-09 Novo Nordisk A/S Dry, mouldable drug formulation
US6287588B1 (en) 1999-04-29 2001-09-11 Macromed, Inc. Agent delivering system comprised of microparticle and biodegradable gel with an improved releasing profile and methods of use thereof
ATE301129T1 (de) * 1999-05-04 2005-08-15 Strakan Int Ltd Androgen glykoside und die androgenische aktivität davon
US6187750B1 (en) 1999-08-25 2001-02-13 Everyoung Technologies, Inc. Method of hormone treatment for patients with symptoms consistent with multiple sclerosis
US6846496B1 (en) * 1999-10-15 2005-01-25 Orion Corporation Treatment of osteoporosis
US6705757B2 (en) * 1999-11-12 2004-03-16 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Ii Method and apparatus for preparing microparticles using in-line solvent extraction
US6331317B1 (en) * 1999-11-12 2001-12-18 Alkermes Controlled Therapeutics Ii Inc. Apparatus and method for preparing microparticles
US6495166B1 (en) 1999-11-12 2002-12-17 Alkermes Controlled Therapeutics Inc. Apparatus and method for preparing microparticles using in-line solvent extraction
US6682754B2 (en) * 1999-11-24 2004-01-27 Willmar Poultry Company, Inc. Ovo delivery of an immunogen containing implant
WO2001047495A1 (en) 1999-12-23 2001-07-05 Pfizer Products Inc. Pharmaceutical compositions providing enhanced drug concentrations
US6562790B2 (en) 2000-02-05 2003-05-13 Chein Edmund Y M Hormone therapy methods and hormone products for abating coronary artery blockage
WO2001062259A1 (en) 2000-02-25 2001-08-30 Hollis Eden Pharmaceuticals Method of treatment of prostate cancer
US7989436B2 (en) 2003-07-23 2011-08-02 Duramed Pharmaceuticals, Inc. Estrogenic compounds and pharmaceutical formulations comprising the same
US6855703B1 (en) 2000-03-10 2005-02-15 Endeavor Pharmaceuticals Pharmaceutical compositions of conjugated estrogens and methods of analyzing mixtures containing estrogenic compounds
US7459445B2 (en) * 2000-03-10 2008-12-02 Duramed Pharmaceuticals, Inc. Estrogenic compounds and topical pharmaceutical formulations of the same
US6660726B2 (en) 2000-03-10 2003-12-09 Endeavor Pharmaceuticals Estrogenic compounds, pharmaceutical compositions thereof, and methods of using same
US20010044431A1 (en) * 2000-03-21 2001-11-22 Rodriguez Gustavo C. Prevention of ovarian cancer by administration of products that induce biologic effects in the ovarian epithelium
US7018645B1 (en) * 2000-04-27 2006-03-28 Macromed, Inc. Mixtures of various triblock polyester polyethylene glycol copolymers having improved gel properties
US6589549B2 (en) 2000-04-27 2003-07-08 Macromed, Incorporated Bioactive agent delivering system comprised of microparticles within a biodegradable to improve release profiles
US6264987B1 (en) 2000-05-19 2001-07-24 Alkermes Controlled Therapeutics Inc. Ii Method for preparing microparticles having a selected polymer molecular weight
US6495164B1 (en) 2000-05-25 2002-12-17 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. I Preparation of injectable suspensions having improved injectability
FR2811218B1 (fr) 2000-07-05 2003-02-28 Patrice Suslian Dispositif implantable destine a corriger l'incontinence urinaire
WO2002005744A1 (en) * 2000-07-14 2002-01-24 Novo Nordisk A/S Method of moulding a pharmaceutical composition in a packaging material
US20060177416A1 (en) 2003-10-14 2006-08-10 Medivas, Llc Polymer particle delivery compositions and methods of use
ATE377048T1 (de) * 2000-09-06 2007-11-15 Ap Pharma Inc Abbaubare polyacetal-polymere
US6824822B2 (en) * 2001-08-31 2004-11-30 Alkermes Controlled Therapeutics Inc. Ii Residual solvent extraction method and microparticles produced thereby
US6471995B1 (en) * 2000-09-27 2002-10-29 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Ii Apparatus and method for preparing microparticles using liquid-liquid extraction
GB0025068D0 (en) 2000-10-12 2000-11-29 Browning Healthcare Ltd Apparatus and method for treating female urinary incontinence
US20060205995A1 (en) 2000-10-12 2006-09-14 Gyne Ideas Limited Apparatus and method for treating female urinary incontinence
US8167785B2 (en) * 2000-10-12 2012-05-01 Coloplast A/S Urethral support system
US8394813B2 (en) 2000-11-14 2013-03-12 Shire Llc Active agent delivery systems and methods for protecting and administering active agents
US20020114843A1 (en) * 2000-12-27 2002-08-22 Ramstack J. Michael Preparation of microparticles having improved flowability
GB0108088D0 (en) 2001-03-30 2001-05-23 Browning Healthcare Ltd Surgical implant
US20060014697A1 (en) * 2001-08-22 2006-01-19 Travis Mickle Pharmaceutical compositions for prevention of overdose or abuse
US7169752B2 (en) * 2003-09-30 2007-01-30 New River Pharmaceuticals Inc. Compounds and compositions for prevention of overdose of oxycodone
US8454997B2 (en) 2001-12-18 2013-06-04 Novo Nordisk A/S Solid dose micro implant
EP1455697A4 (en) 2001-12-20 2009-08-05 Femmepharma Holding Co Inc VAGINAL DRUG DELIVERY
AU2003222273A1 (en) * 2002-03-11 2003-09-29 Janssen Pharmaceutica N.V. Sulfatase inhibiting progestogen-only contraceptive regimens
GB2402343B (en) * 2002-04-11 2006-03-15 Gyne Ideas Ltd Apparatus for treating female urinary incontinence
WO2003092585A2 (en) * 2002-05-02 2003-11-13 Pr Pharmaceuticals, Inc. Controlled release compositions of estradiol metabolites
EP1829529A1 (en) * 2002-05-03 2007-09-05 PR Pharmaceuticals, Inc. Controlled release compositions of estradiol metabolites
EP1545285B1 (en) 2002-08-02 2010-11-10 C.R. Bard, Inc. Self anchoring sling and introducer system
JP2006515026A (ja) * 2003-01-02 2006-05-18 フェムファーマ ホールディング カンパニー， インコーポレイテッド 乳房の疾患および障害の処置のための薬学的調製物
US9173836B2 (en) 2003-01-02 2015-11-03 FemmeParma Holding Company, Inc. Pharmaceutical preparations for treatments of diseases and disorders of the breast
GB0307082D0 (en) * 2003-03-27 2003-04-30 Gyne Ideas Ltd Drug delivery device and method
US6992075B2 (en) 2003-04-04 2006-01-31 Barr Laboratories, Inc. C(14) estrogenic compounds
EP1622623A4 (en) * 2003-04-11 2009-03-18 Barr Lab Inc METHOD FOR THE ADMINISTRATION OF ESTROGENIC AND TESTED
US7056591B1 (en) * 2003-07-30 2006-06-06 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Hydrophobic biologically absorbable coatings for drug delivery devices and methods for fabricating the same
AU2004267956B2 (en) * 2003-09-03 2010-09-16 Miscon Trading S.A. Methods for the treatment of endometriosis
DK1684782T3 (en) 2003-10-03 2015-11-02 Thorn Bioscience Llc PROCEDURE FOR SYNCHRONIZING OVULATION FOR TEMPORARY REGULATED BREEDING WITHOUT BROWN DETECTION
WO2006088647A1 (en) * 2005-02-17 2006-08-24 Medivas, Llc Polymer particle delivery compositions and methods of use
US9114198B2 (en) * 2003-11-19 2015-08-25 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Biologically beneficial coatings for implantable devices containing fluorinated polymers and methods for fabricating the same
US7220816B2 (en) * 2003-12-16 2007-05-22 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Biologically absorbable coatings for implantable devices based on poly(ester amides) and methods for fabricating the same
US7435788B2 (en) * 2003-12-19 2008-10-14 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Biobeneficial polyamide/polyethylene glycol polymers for use with drug eluting stents
JP2007517550A (ja) * 2004-01-02 2007-07-05 アドヴァンスド カーディオヴァスキュラー システムズ， インコーポレイテッド 高比重リポ蛋白をコーティングした医療デバイス
US8685431B2 (en) * 2004-03-16 2014-04-01 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Biologically absorbable coatings for implantable devices based on copolymers having ester bonds and methods for fabricating the same
US8778014B1 (en) 2004-03-31 2014-07-15 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Coatings for preventing balloon damage to polymer coated stents
SI2409707T1 (sl) 2004-04-15 2015-07-31 Alkermes Pharma Ireland Limited Naprava s podaljšanim sproščanjem na osnovi polimerov
US7334330B2 (en) * 2004-04-28 2008-02-26 Siemens Power Generation, Inc. Thermally insulating layer incorporating a distinguishing agent and method for inspecting the same
US7820732B2 (en) * 2004-04-30 2010-10-26 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Methods for modulating thermal and mechanical properties of coatings on implantable devices
US20050288481A1 (en) * 2004-04-30 2005-12-29 Desnoyer Jessica R Design of poly(ester amides) for the control of agent-release from polymeric compositions
GB0411360D0 (en) 2004-05-21 2004-06-23 Mpathy Medical Devices Ltd Implant
US20050271700A1 (en) * 2004-06-03 2005-12-08 Desnoyer Jessica R Poly(ester amide) coating composition for implantable devices
US20050287184A1 (en) * 2004-06-29 2005-12-29 Hossainy Syed F A Drug-delivery stent formulations for restenosis and vulnerable plaque
US7311980B1 (en) 2004-08-02 2007-12-25 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Polyactive/polylactic acid coatings for an implantable device
WO2006078320A2 (en) 2004-08-04 2006-07-27 Brookwood Pharmaceuticals, Inc. Methods for manufacturing delivery devices and devices thereof
US7166680B2 (en) * 2004-10-06 2007-01-23 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Blends of poly(ester amide) polymers
DK1802312T3 (en) 2004-10-20 2015-12-14 Endorech Inc Kønssteroidudgangsstof in combination with a selective estrogen receptor modulator for the prevention and treatment of vaginal atrophy in post-menopausal women
US20060089485A1 (en) * 2004-10-27 2006-04-27 Desnoyer Jessica R End-capped poly(ester amide) copolymers
US8603634B2 (en) 2004-10-27 2013-12-10 Abbott Cardiovascular Systems Inc. End-capped poly(ester amide) copolymers
US7390497B2 (en) * 2004-10-29 2008-06-24 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Poly(ester amide) filler blends for modulation of coating properties
US8609123B2 (en) * 2004-11-29 2013-12-17 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Derivatized poly(ester amide) as a biobeneficial coating
US7419504B2 (en) * 2004-12-27 2008-09-02 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Poly(ester amide) block copolymers
US8007775B2 (en) * 2004-12-30 2011-08-30 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Polymers containing poly(hydroxyalkanoates) and agents for use with medical articles and methods of fabricating the same
US8128952B2 (en) * 2005-01-12 2012-03-06 Clemson University Research Foundation Ligand-mediated controlled drug delivery
US7202325B2 (en) * 2005-01-14 2007-04-10 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Poly(hydroxyalkanoate-co-ester amides) and agents for use with medical articles
CA2601773A1 (en) * 2005-02-03 2006-08-10 Duramed Pharmaceuticals, Inc. Compositions of unconjugated estrogens and methods for their use
US11246913B2 (en) 2005-02-03 2022-02-15 Intarcia Therapeutics, Inc. Suspension formulation comprising an insulinotropic peptide
US20070020312A1 (en) * 2005-07-20 2007-01-25 Desnoyer Jessica R Method of fabricating a bioactive agent-releasing implantable medical device
US8377462B2 (en) * 2005-07-29 2013-02-19 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. PEA-TEMPO/PEA-BZ coatings for controlled delivery of drug from implantable medical devices
WO2007038246A2 (en) * 2005-09-22 2007-04-05 Medivas, Llc Solid polymer delivery compositions and methods for use thereof
US8445007B2 (en) 2005-09-22 2013-05-21 Medivas, Llc Bis-(α-amino)-diol-diester-containing poly (ester amide) and poly (ester urethane) compositions and methods of use
US20070077269A1 (en) * 2005-10-04 2007-04-05 Woodward John R Method of birth control and hormone regulation
WO2007045027A1 (en) * 2005-10-19 2007-04-26 Chavah Pty Ltd Reduction of side effects from aromatase inhibitors used for treating breast cancer
JP2009524584A (ja) * 2005-12-07 2009-07-02 メディバス エルエルシー ポリマー−生物製剤送達組成物を構築するための方法
US20070135909A1 (en) * 2005-12-08 2007-06-14 Desnoyer Jessica R Adhesion polymers to improve stent retention
US20070197435A1 (en) * 2006-02-17 2007-08-23 Webel Stephen K Process for the synchronization of ovulation for timed breeding without heat detection
US7910152B2 (en) * 2006-02-28 2011-03-22 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Poly(ester amide)-based drug delivery systems with controlled release rate and morphology
EP2019645A4 (en) * 2006-05-02 2013-03-06 Medivas Llc RELEASE OF OPHTHALMOLOGICAL ACTIVITIES OUTSIDE OR WITHIN THE EYE
WO2007133616A2 (en) * 2006-05-09 2007-11-22 Medivas, Llc Biodegradable water soluble polymers
US20090258028A1 (en) * 2006-06-05 2009-10-15 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Methods Of Forming Coatings For Implantable Medical Devices For Controlled Release Of A Peptide And A Hydrophobic Drug
US8323676B2 (en) * 2008-06-30 2012-12-04 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Poly(ester-amide) and poly(amide) coatings for implantable medical devices for controlled release of a protein or peptide and a hydrophobic drug
US7771739B2 (en) * 2006-06-30 2010-08-10 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Implantable medical devices comprising semi-crystalline poly(ester-amide)
US9028859B2 (en) * 2006-07-07 2015-05-12 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Phase-separated block copolymer coatings for implantable medical devices
US8030436B2 (en) * 2006-07-13 2011-10-04 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Poly(ester-amide) elastomers and their use with implantable medical devices
US7731987B2 (en) * 2006-07-13 2010-06-08 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Implantable medical device comprising a pro-healing poly(ester-amide)
US20090181063A1 (en) * 2006-07-13 2009-07-16 Michael Huy Ngo Implantable medical device comprising a pro-healing poly(ester-amide)
US20080014245A1 (en) * 2006-07-14 2008-01-17 Stephen Pacetti Drug-eluting implantable medical device with free radical scavenger for protecting drugs during sterilization and related method
DK2359808T3 (da) 2006-08-09 2013-08-05 Intarcia Therapeutics Inc Osmotiske leveringssystemer og stempelaggregater
WO2008083158A2 (en) * 2006-12-26 2008-07-10 Femmepharma Holding Company, Inc. Topical administration of danazol
US20080175882A1 (en) * 2007-01-23 2008-07-24 Trollsas Mikael O Polymers of aliphatic thioester
AU2008231093A1 (en) * 2007-03-22 2008-10-02 Alkermes, Inc. Coacervation process
MX2009011123A (es) 2007-04-23 2009-11-02 Intarcia Therapeutics Inc Formulaciones de suspensiones de peptidos insulinotropicos y sus usos.
US8252361B2 (en) * 2007-06-05 2012-08-28 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Implantable medical devices for local and regional treatment
US20080306584A1 (en) * 2007-06-05 2008-12-11 Pamela Kramer-Brown Implantable medical devices for local and regional treatment
US20080317865A1 (en) * 2007-06-20 2008-12-25 Alkermes, Inc. Quench liquids and washing systems for production of microparticles
US9737638B2 (en) 2007-06-20 2017-08-22 Abbott Cardiovascular Systems, Inc. Polyester amide copolymers having free carboxylic acid pendant groups
US7927621B2 (en) * 2007-06-25 2011-04-19 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Thioester-ester-amide copolymers
EP2178944A1 (en) * 2007-07-24 2010-04-28 Medivas, LLC Biodegradable cationic polymer gene transfer compositions and methods of use
US8268806B2 (en) 2007-08-10 2012-09-18 Endorecherche, Inc. Pharmaceutical compositions
US8728528B2 (en) 2007-12-20 2014-05-20 Evonik Corporation Process for preparing microparticles having a low residual solvent volume
CA2726861C (en) 2008-02-13 2014-05-27 Intarcia Therapeutics, Inc. Devices, formulations, and methods for delivery of multiple beneficial agents
US8889172B1 (en) 2008-04-30 2014-11-18 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Amorphous or semi-crystalline poly(ester amide) polymer with a high glass transition temperature
US8765162B2 (en) * 2008-06-30 2014-07-01 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Poly(amide) and poly(ester-amide) polymers and drug delivery particles and coatings containing same
WO2010019716A1 (en) * 2008-08-13 2010-02-18 Medivas, Llc Aabb-poly(depsipeptide) biodegradable polymers and methods of use
US20100047319A1 (en) * 2008-08-21 2010-02-25 Michael Huy Ngo Biodegradable Poly(Ester-Amide) And Poly(Amide) Coatings For Implantable Medical Devices With Enhanced Bioabsorption Times
WO2010094623A1 (en) 2009-02-18 2010-08-26 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Formulation comprising drospirenone for subcutaneous or intramuscular administration
WO2010094624A1 (en) 2009-02-18 2010-08-26 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Particles comprising drospirenone encapsulated in a polymer
PL2421545T3 (pl) 2009-04-23 2018-05-30 Jbs United Animal Health Ii Llc Sposób i kompozycja do synchronizacji czasu inseminacji
US20110003000A1 (en) * 2009-07-06 2011-01-06 Femmepharma Holding Company, Inc. Transvaginal Delivery of Drugs
ES2650667T3 (es) 2009-09-28 2018-01-19 Intarcia Therapeutics, Inc Rápido establecimiento y/o terminación de la administración sustancial de fármaco en estado estacionario
US20120208755A1 (en) 2011-02-16 2012-08-16 Intarcia Therapeutics, Inc. Compositions, Devices and Methods of Use Thereof for the Treatment of Cancers
US9873765B2 (en) 2011-06-23 2018-01-23 Dsm Ip Assets, B.V. Biodegradable polyesteramide copolymers for drug delivery
EP3159368A1 (en) 2011-06-23 2017-04-26 DSM IP Assets B.V. New biodegradable polyesteramide copolymers for drug delivery
IN2014DN11063A (hu) * 2012-06-27 2015-09-25 Medincell
ES2808409T3 (es) 2012-11-28 2021-02-26 United Ah Ii Llc Método para sincronizar el tiempo de inseminación en cerdas primerizas
US9889085B1 (en) 2014-09-30 2018-02-13 Intarcia Therapeutics, Inc. Therapeutic methods for the treatment of diabetes and related conditions for patients with high baseline HbA1c
EP3209301B1 (en) 2014-10-22 2023-06-07 Havah Therapeutics Pty Ltd Methods of reducing mammographic breast density and/or breast cancer risk
US10434071B2 (en) 2014-12-18 2019-10-08 Dsm Ip Assets, B.V. Drug delivery system for delivery of acid sensitivity drugs
MA44390A (fr) 2015-06-03 2019-01-23 Intarcia Therapeutics Inc Systèmes de mise en place et de retrait d'implant
CA3002562A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Havah Therapeutics Pty Ltd Methods of reducing mammographic breast density and/or breast cancer risk
ES2964696T3 (es) 2015-11-16 2024-04-09 Medincell S A Un método para morselizar y/o dirigir principios farmacéuticamente activos al tejido sinovial
WO2017200943A1 (en) 2016-05-16 2017-11-23 Intarcia Therapeutics, Inc. Glucagon-receptor selective polypeptides and methods of use thereof
USD840030S1 (en) 2016-06-02 2019-02-05 Intarcia Therapeutics, Inc. Implant placement guide
USD860451S1 (en) 2016-06-02 2019-09-17 Intarcia Therapeutics, Inc. Implant removal tool
US10835580B2 (en) 2017-01-03 2020-11-17 Intarcia Therapeutics, Inc. Methods comprising continuous administration of a GLP-1 receptor agonist and co-administration of a drug
JP2022535827A (ja) 2019-06-03 2022-08-10 ハバ セラピューティクス ピーティワイ エルティディ アンドロゲン剤およびアロマターゼ阻害剤の送達のための医薬製剤およびシステム、ならびに使用のための方法

Family Cites Families (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) * 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
DE2010115A1 (de) * 1970-03-04 1971-09-16 Farbenfabriken Bayer Ag, 5090 Leverkusen Verfahren zur Herstellung von Mikrogranulaten
CA1076480A (en) * 1975-04-28 1980-04-29 John S. Kent Inert core implant pellet
US4071622A (en) * 1976-02-11 1978-01-31 Abbott Laboratories Treatment of a mammary or DMBA inducible tumor
US4107071A (en) * 1977-02-16 1978-08-15 Capsulated Systems, Inc. Method of producing microcapsules and resulting product
US4166800A (en) * 1977-08-25 1979-09-04 Sandoz, Inc. Processes for preparation of microspheres
FR2465486A1 (fr) * 1979-09-21 1981-03-27 Roussel Uclaf Nouvelle application utilisant la lh-rh ou des agonistes
IE52535B1 (en) * 1981-02-16 1987-12-09 Ici Plc Continuous release pharmaceutical compositions
US4522831A (en) * 1983-05-02 1985-06-11 Northwestern University Method of totally suppressing ovarian follicular development
US4826831A (en) * 1983-08-05 1989-05-02 Pre Jay Holdings Limited Method of hormonal treatment for menopausal or post-menopausal disorders involving continuous administration of progestogens and estrogens
US4818542A (en) * 1983-11-14 1989-04-04 The University Of Kentucky Research Foundation Porous microspheres for drug delivery and methods for making same
US4736849A (en) * 1983-12-19 1988-04-12 Leonard Walter G Calendar-oriented pill dispenser
GB8403360D0 (en) * 1984-02-08 1984-03-14 Erba Farmitalia Pharmaceutical compositions
US4760053A (en) * 1984-08-02 1988-07-26 Fernand Labrie Combination therapy for selected sex steroid dependent cancers
US4666885A (en) * 1985-02-08 1987-05-19 Fernand Labrie Combination therapy for treatment of female breast cancer
JPH0680016B2 (ja) * 1984-08-02 1994-10-12 ラブリ−，フエルナンド ホルモン依存性がんの併用治療のための医薬組成物
US4775660A (en) * 1984-08-02 1988-10-04 Fernand Labrie Treatment of breast cancer by combination therapy
US4659695A (en) * 1985-02-08 1987-04-21 Fernand Labrie Method of treatment of prostate cancer
AU4674385A (en) * 1984-08-08 1986-03-07 Survival Technology Inc. Absorption enhancing agents
US4863744A (en) * 1984-09-17 1989-09-05 Alza Corporation Intestine drug delivery
US4624665A (en) * 1984-10-01 1986-11-25 Biotek, Inc. Method of transdermal drug delivery
US4816258A (en) * 1987-02-26 1989-03-28 Alza Corporation Transdermal contraceptive formulations
EP0357644B1 (en) * 1987-04-06 1994-08-17 Aberlyn Capital Management Limited Partnership Flash flow fused medicinal implants
AU2810189A (en) * 1987-10-30 1989-05-23 Stolle Research & Development Corporation Low residual solvent microspheres and microencapsulation process
US5023080A (en) * 1988-06-17 1991-06-11 Basic Bio Systems, Inc. Time release protein
ZA901847B (en) * 1989-03-10 1991-10-30 Endorecherche Inc Combination therapy for the treatment of estrogen sensitive diseases
DE3908792A1 (de) * 1989-03-17 1990-09-20 Huels Chemische Werke Ag Verfahren zur herstellung unsymmetrischer, endstaendig einfach ungesaettigter glykolether
US5043331A (en) * 1989-06-15 1991-08-27 Orion-Yhtyma Oy Treatment of postmenopausal disorders
FR2654337B1 (fr) * 1989-11-15 1994-08-05 Roussel Uclaf Nouvelles microspheres injectables biodegradables procede de preparation et suspensions injectables les renfermant.
HU222501B1 (hu) * 1991-06-28 2003-07-28 Endorecherche Inc. MPA-t vagy MGA-t tartalmazó nyújtott hatóanyag-felszabadulású gyógyászati készítmény és eljárás előállítására
ZA924811B (en) * 1991-06-28 1993-12-29 Endorecherche Inc Controlled release systems and low dose androgens

Also Published As

Publication number Publication date
US5629303A (en) 1997-05-13
DE69223620T2 (de) 1998-04-23
NZ314568A (en) 2000-09-29
FI935893A0 (fi) 1993-12-28
SK147893A3 (en) 1994-09-07
EP0591311B1 (en) 1997-12-17
IL120025A0 (en) 1997-04-15
IL102402A0 (en) 1993-01-14
IE922123A1 (en) 1992-12-30
JPH06508624A (ja) 1994-09-29
NO934742D0 (no) 1993-12-21
IL102447A (en) 1998-03-10
US5434146A (en) 1995-07-18
CZ290893A3 (en) 1994-10-19
NO307283B1 (no) 2000-03-13
NZ243370A (en) 1996-02-27
NO934742L (no) 1993-12-21
IL102447A0 (en) 1993-01-14
HU9303716D0 (en) 1994-04-28
SK280697B6 (sk) 2000-06-12
CZ285972B6 (cs) 1999-12-15
WO1993000070A1 (en) 1993-01-07
NZ264279A (en) 1996-05-28
NZ272633A (en) 1997-06-24
RU2142276C1 (ru) 1999-12-10
HUT66859A (en) 1995-01-30
MY131099A (en) 2007-07-31
US5861387A (en) 1999-01-19
AU672750B2 (en) 1996-10-17
ATE161173T1 (de) 1998-01-15
DE69223620D1 (de) 1998-01-29
AU6587996A (en) 1996-12-19
FI935893A (fi) 1993-12-28
AU2182092A (en) 1993-01-25
EP0591311A1 (en) 1994-04-13
CA2112393A1 (en) 1993-01-07
US5541172A (en) 1996-07-30
AU707401B2 (en) 1999-07-08
US5814340A (en) 1998-09-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5541172A (en) Controlled release systems and low dose androgens
US5753639A (en) Low dose androgenic compounds for prevention and treatment of endometriosis
DE60216630T2 (de) Verwendung von östrogen in kombination mit progestogen für die hormonsubstitutiionstherapie
Fruzzetti et al. Treatment of hirsutism: comparisons between different antiandrogens with central and peripheral effects
US6225298B1 (en) Compositions and methods for contraception and for treatment of benign gynecological disorders
KR100679735B1 (ko) 안드로스트-5-엔-3β,17β-디올을 포함하는 약학 조성물및 그 용도
SK287719B6 (en) Drospirenone for hormone replacement therapy
JP2006525306A (ja) ゴナドトロピン・ホルモン放出ホルモンを使用する方法及び組成物
US20010016578A1 (en) Compositions and methods for contraception and for treatment of benign gynecological disorders
Labrie et al. Controlled release low dose medroxyprogesterone acetate (MPA) inhibits the development of mammary tumors induced by dimethyl-benz (a) anthracene in the rat
PL175946B1 (pl) Środek farmaceutyczny, cząstka o przedłużonym uwalnianiu i sposób wytwarzania cząstki o przedłużonym uwalnianiu
Li et al. Growth inhibition of 7, 12-dimethylbenz (a) anthracene-induced rat mammary tumors by controlled-release low-dose medroxyprogesterone acetate
Sakiyama Approach to patients with hirsutism.
US6613758B1 (en) Method for treating osteoporosis in castrated prostatic cancer patients

Legal Events

Date Code Title Description
HFG4 Patent granted, date of granting

Effective date: 20030508

HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee