TWI245801B

TWI245801B - Preparation of optically active beta-aminoalcohols

Info

Publication number: TWI245801B
Application number: TW090104939A
Authority: TW
Inventors: Keiji Sakamoto; Shinji Kita; Kazuya Tsuzaki; Tadanori Morikawa; Sakayu Shimizu
Original assignee: Daiichi Fine Chem Co Ltd
Priority date: 2000-03-28
Filing date: 2001-03-02
Publication date: 2005-12-21
Also published as: ES2284620T3; EP1273665B1; DE60128461D1; EP1273665A4; CA2404668A1; CN1282746C; AU3605701A; DE60128461T2; CN1420935A; WO2001073100A1; US20040091981A1; KR20030022103A; CZ20023202A3; ATE362543T1; EP1273665A1; KR100739361B1; US6835559B2; AU2001236057B2

Description

1245801 五、發明説明（1 ) 技術領域本發明是有關光學活性/3 _胺基醇的製造方法，更詳細的是有關醫藥或以其中間體有用的光學活性p _胺基醇的製造方法。技術背景麻黃鹼自古以來就用於發汗、解熱、鎭咳等的作用，其中d-僞麻黃鹼有抗炎作用是眾所知悉的，又麻黃鹼對血管收縮作用，血壓上升作用或發汗等的藥理作用更是被知悉的，作爲交感神經興奮劑在醫療上使用。又，丨_麻黃驗在支氣管氣喘的治療也有使用，即含有光學活性麻黃鹼之光學活性A -胺基醇的製造方法，在製造醫藥或其中間體的過程是有用的，故有效率的製造方法是可期望的。歷來’就所欲之具有光學活性/3 -胺基醇的製造方法來 g兌’得到外消旋體的/5 -胺基醇之後，使用光學離析或不對稱合成等特定之光學活性體的方法來製造。但是’ /3 -胺基醇的外消旋體因爲在其分子內有2個不對稱碳原子，爲了要得到特定的光學活性體，不得不經過煩雜的工程’例如依1 957年8月27日東德1 3 683，當/? _ 胺基醇之一種爲光學活性麻黃鹼時，由苯甲醛利用酵母發酵得到光學活性之苯乙醯甲醇，以甲胺還原縮合爲赤-甲胺基-1-苯基丙醇即能製造出1-麻黃鹼。還有爲了要得到僞麻黃驗由前述1957年8月27日東德 1 3 683之記載方法等所製造的1-麻黃鹼，以乙酸酐生成嗯唑啉之後加水分解，蘇體（threo)即可能在由於d-僞麻黃驗 1245801 五、發明説明（2 ) 的反轉之下製造，其係記載於美國特許第423 73 04號。若如上記般由2-甲胺基-1-苯基-1-丙酮製造所期待之具有光學活性僞麻黃鹼時，一旦得到光學活性的赤體的麻黃鹼之後，蘇體（threo)之反轉工程是必要的。故工程數成爲長而煩雜，收獲率也有降低的問題。又基於前述僞麻黃鹼的製造，在酮體原料的還原時，副加產生相當量的非對映異構物，非對映異構物的回收困難，也有經濟上的不利。另一方面，特開平8-98697號公報記載使用特定的微生物從分子內具有一個不對稱碳原子之2-氨基-1-苯基乙醇化合物製造光學活性的2-氨基-1-苯基乙醇衍生物。關於有2個不對稱碳原子的Θ -胺基醇現在尙無有效率的製造方法。發明槪要有鑑於上記情事，本發明係充分防止從α -胺基酮化合物或其鹽之對掌異構物的混合物，產生非對映異構物副產品，而達盼望之具有光學活性的Θ -胺基醇成爲高收獲率又高選擇，且以簡易的工程就能製造之目的。本發明者是爲了要解決上記課題，重複精心硏究的結果，利用特定的微生物。將α -胺基酮化合物或其鹽之對掌異構物混合物的單方面鏡象異構體的產物還原，對應於 /3 -胺基醇的4種異構體之中，盼望見到能製造一種高選性又高收獲率之產物，以達到完成本發明。本發明之光學活性/5 -胺基醇的製造方法，是一般式（I ) -4- 1245801 五、發明説明（3 ) 0

(式中X是相同或不同之至少一種選自鹵素原子，低級烷基，經保護基保護之羥基、硝基及磺醯基，η是0〜3之整數，R1是低級烷基，R2、R3爲相同或不同之至少一種選自氫原子及低級烷基，*表示不對稱碳原子）所示α -胺基酮化合物或其鹽之對掌異構物混合物，經由至少一種選自摩根氏菌屬（M〇rganella)、微菌屬 (Microbacterium)、鞘氨醇菌屬（Sphingobacterium)、類諾卡氏菌屬（Nocardioides)、妙卡菌屬（Mucor)、阿塞迪菌屬 (Absidia)、麴菌屬（Aspergillus)、青黴菌屬（Penicillium)、奇果菌屬（Grifola)、曲黴菌屬（Eurotium)、靈芝菌屬 (Ganoderma)、肉座菌屬（Hypocrea)、螺旋枝黴菌屬 (Helicostylum)、輪枝孢菌屬（Verticillium)、鐮刀菌屬 (Fusarium)、三泰拉青菌屬（Tritirachium)、被孢黴菌屬 (Mortierella)、假蜜環菌屬（Armillariella)、柱盤孢菌屬 (Cylindrocarpon)、克雷氏菌屬（Klebsiella)、金色菌屬 (Aureobacterium)、黃單胞菌屬（Xanthomonas)、假單胞菌屬（Pseudomonas)、分支桿菌屬（Mycobacterium)、躑孢酵母菌屬（Sporobolomyces)、鎖擲孢酵母菌屬（Sporidiobolus) 、擬無枝酸菌屬（Amycolatopsis)、可普來內氏菌屬 (Coprinus)、沙雷氏菌屬（Serratia)、紅球菌屬 1245801 五、發明説明（4 ) (Rhodococcus)、紅酵母菌屬（Rhodotorula)等之微生物作用而生成一般式（II)

/ \ (式中X，η，R1，R2，R3及*與前述相同）所示之光學活性^ -胺基醇化合物，係爲所期待之生產具有光學活性特徵之光學活性/3 -胺基醇的製造方法。又，至於本發明之上述微生物，以至少一種選自摩根尼摩根氏菌（Morganella morganii)、樹狀微菌（Microbacterium arborescens)、多食革肖氨酉享菌（Sphingobacterium multivorum) 、單純類諾卡氏菌屬（Nocar dioides simplex)、分歧妙卡菌 (Mucor ambiguus)、爪哇妙卡菌（Mucorjavanicus)、易碎妙卡菌（Mucor fragilis)、衣戚司密阿塞迪菌（Absidia lichtheimi)、泡盛麴菌（Aspergillus awamori)、黑麴菌 (Aspergillus niger)、米麴菌（Aspergillus oryzae)、白麴菌 (Aspergillus candius)、變種米麹菌（Aspergillus oryzae var. oryzae)、酸性變種富堤麴菌（Aspergillus foetid us var. acidus)、草酸青黴菌（Penicillium oxalicum)、福蘭多沙奇果菌（Grifola frondosa)、爬行曲黴菌屬（Eurotium repens) 、露西靈芝菌（Ganoderma lucidum)、膠狀肉座菌 (Hypocrea gelatinosa)、奈格螺旋枝黴菌（Helicostylum nigricans)、變異共真菌輪枝孢菌（Verticillium fungicola -6- 1245801 五、發明説明（5 ) var. fungicola)、玫瑰鐮刀菌（Fusarium roseum)、米三泰拉青菌屬（Tritirachium oryzae)、艾沙貝那被孢黴菌 (Mortierella isabellina)、米勒假蜜環菌（Armillariella mellea)、硬化柱盤孢菌（Cylindrocarpon sclerotigenum)、肺炎克雷氏菌（Klebsiella pneumoniae)、酯香金色菌 (Aureobacterium esteraromaticum)、黃單胞菌 (Xanthomonas sp.)、惡臭假單胞菌（Pseudomonas putida)、包皮垢分支桿菌（Mycobacterium smegmatis)、迪氏分支桿菌（Mycobacterium diernhoferi)、母牛分支桿菌 (Mycobacterium vaccae)、草分支桿菌（Mycobacterium phlei)、偶然分支桿菌（Mycobacterium fortuitum)、產氯黴素分支桿菌（Mycobacterium chlorophenolium)、鮭魚色擲孢酵母菌（Sporobolomyces salmonicolor)、克拉立彿蜜司攤孢酵母菌（Sporobolomyces coralliformis)、強森氏鎖擲孢酵母菌（Sporidiobolus johnsonii)、白色擬無枝酸菌 (Amycolatopsis alba)、藍色擬無枝酸菌（Amycolatopsis azurea)、科羅拉多擬無枝酸菌（Amycolatopsis coloradensis) 、東方擬無枝酸菌薈黃亞種（Amycolatopsis orientalis luridda)、東方擬無枝酸菌東方亞種（Amycolatopsis orientalis orientalis)、根狀可普來內氏菌（Coprin us rhizophorus)、黏質沙雷氏菌（Serratia marcescens)、灰暗紅球菌（Rhodococcus erythropolis)、玫瑰紅紅球菌 (Rhodococcus rhodochrous)、橙黃色酵母菌（Rhodotorula aurantiaca)等之微生物爲佳。 1245801 五、發明説明（6 ) 又，至於本發明之上述微生物，較佳爲至少一種選自摩根氏菌屬（Morganella)、微菌屬（Microbacterium)、鞘氨醇菌屬（Sphingobacterium)、類諾卡氏菌屬（Nocardioides)、妙卡菌屬（Mucor)、阿塞迪菌屬（Absidia)、麴菌屬（Aspergillus) 、青黴菌屬（Penicillium)、奇果菌屬（Grifola)、曲黴菌屬 (Eurotium)、靈芝菌屬（Ganoderma)、肉座菌屬（Hypocrea) 、螺旋枝黴菌屬（Helicostylum)、輪枝孢菌屬（Verticillium) 、鐮刀菌屬（Fusarium)、三泰拉青菌屬（Tritirachium)、被孢黴菌屬（Mortierella)、假蜜環菌屬（Armillariella)、柱盤孢菌屬（Cylindrocarpon)、克雷氏菌屬（Klebsiella)、金色菌屬（Aureobacterium)、黃單胞菌屬（Xanthomonas)、假單胞菌屬（Pseudomonas)、分支桿菌屬（Mycobacterium)、擲孢酵母菌屬（Sporobolomyces)、鎖娜孢酵母菌屬 (Sporidiobolus)、紅球菌屬（Rhodococcus);具體言之，以選自摩根尼摩根氏菌（Morgan ella morganii)、樹狀微菌 (Microbacterium arborescens)、多食革肖氨酉享菌 (Sphingobacterium multivorum)、單純類諾卡氏菌屬 (Nocardioides simplex)、分歧妙卡菌（Mucor ambiguus)、爪睦妙卡菌（1^11(：01'】3乂&11丨(：115)、易碎妙卡菌（]\411(：01：^&§川3) 、衣戚司密阿塞迪菌（Absidialichtheimi)、泡盛麴菌 (Aspergillus awamori)、黑麴菌（Aspergillus niger)、米麴菌（Aspergillus oryzae)、白麴菌（Aspergillus candius)、變種米麴菌（Aspergill us oryzae var. oryzae)、酸性變種富堤麴菌（Aspergillus foetidus var. acid us)、草酸青黴菌 1245801 五、發明説明（7 ) (Penicillium oxalicum)、福蘭多沙奇果菌（Grifola frondosa) 、爬行曲黴菌屬（Eurotium repens)、露西靈芝菌（Ganoderma lucidum)、膠狀肉座菌（Hypocrea gelatinosa)、奈格螺旋枝黴菌（Helicostylum nigricans)、變異共真菌輪枝孢菌 (Verticillium fungicola var· fungicola)、玫瑰鐮刀菌 (Fusarium roseum)、米三泰拉青菌屬（Tritirachium oryzae) 、艾沙貝那被孢黴菌（Mortierella isabellina)、米勒假蜜環菌（Armillariella mellea)、硬化柱盤孢菌（Cylindrocarpon sclerotigenum)、肺炎克霄氏菌（Klebsiella pneumoniae)、酯香金色菌（Aureobacterium esteraromaticum)、黃單胞菌 (Xanthomonas sp.)、惡臭假單胞菌（Pseudomonas putida)、包皮垢分支桿菌（Mycobacterium smegmatis)、迪氏分支桿菌（Mycobacterium diernhoferi)、母牛分支桿菌 (Mycobacterium vaccae)、草分支桿菌（Mycobacterium phlei)、偶然分支桿菌（Mycobacterium fortuitum)、產氯黴素分支桿菌（Mycobacterium chlorophenolium)、鮮魚色擲孢酵母菌（Sporobolomyces salmonicolor)、克拉立彿蜜司擲孢酵母菌（Sporobolomyces coralliformis)、強森氏鎖擲孢酵母菌（Sporidiobolus johnsonii)、灰暗紅球菌 (Rhodococcus erythropolis)、玫瑰紅紅球菌（Rhodococcus rhodochrous)、橙黃色酵母菌（Rhodotorula aurantiaca)等之微生物更佳。藉由使用此等微生物，可以高選擇性且簡易的步驟得到高獲率之前述一般式（Π)所示光學活性^ -胺基醇之（1S，2S)-胺基醇。 -9- 1245801 五、發明説明（8 ) 再者，至於本發明之上述微生物，較佳爲至少一種選自擬無枝酸菌屬（Amycolatopsis)、可普來內氏菌屬（Coprinus) 、沙雷氏菌屬（Serratia)、紅球菌屬（Rhodococcus)、紅酵母菌屬（Rhodotorula)等之微生物；具體言之，以選自白色擬無枝酸菌（Amycolatopsis alba)、藍色擬無枝酸菌 (Amycol atop sis azure a)、科羅拉多擬無枝酸菌 (Amycolatopsis coloradensis)、東方擬無枝酸菌薈黃亞種 (Amycolatopsis orientalis luridda)、東方擬無枝酸菌東方亞種（Amycol at opsis orientalis orientalis)、根狀可普來內氏菌（Coprinus rhizophorus)、黏質沙雷氏菌（Serratia marcescens)、灰暗紅球菌（Rhodococcus erythropolis)、玫瑰紅紅球菌（Rhodococcus rhodochrous)、橙黃色酵母菌 (1111〇(1〇1:〇1*111&&1^&111^〇3)等之微生物更佳。藉由使用此等微生物，可以高選擇性且簡易的步驟得到高獲率之前述一般式（II)所示光學活性/3 -胺基醇之（1R，2R)-胺基醇。還有關於本發明，將一般式（Π )

4/YVN\ (瓜） R XR6 (式中R4爲低級烷基，R5，R6相同或不同之氫原子，低級烷基或醯基，Y是c = 0或CH-0H) 所示之活性誘導劑添加到培養基中培養上述微生物。此種活性誘導劑存在下，光學活性Θ -胺基醇的生產效率變得更佳。 -10- 1245801 五、發明説明（9 ) 圖式之簡單說明第1 A圖〜第1 D圖是以下光學活性/5 -胺基醇類的構造 (包含絕對組態）的表示圖。第1A圖是表示依據本發明而得的（1S，2S)組態之/3-胺基醇，第1B圖是表示依據本發明而得的（lS，2S)-( + )僞麻黃鹼，第1C圖是表示依據本發明而得的（1R，2R)組態的 /5-胺基醇，第1D圖是表示依據本發明而得的（lR，2R)-(-M爲麻黃鹼。發明之最佳實施態樣以下是有關本發明合適的實施態樣，詳細說明如下。本發明之光學活性Θ -胺基醇的製造方法是一般式（I )

(式中X爲相同或不同之至少一種選自鹵素原子，低級烷基，以保護基保護之經基、硝基及磺醯基，η是0〜3之整數’ R1是低級烷基，R2、R3爲相同或不同之至少一種選自氫原子及低級烷基’*表示不對稱碳原子）所不α -胺基酮化合物或其鹽之對掌異構物混合物，經由至少一種選自摩根氏菌屬、微菌屬、鞘氨醇菌屬、類諾卡氏菌屬、妙卡菌屬、阿塞迪菌屬、麴菌屬、青黴菌屬、奇果菌屬、曲黴菌屬、靈芝菌屬 '肉座菌屬、螺旋枝黴菌屬 -11- 1245801 五、發明説明（1G ) 、輪枝孢菌屬、鐮刀菌屬、三泰拉青菌屬、被孢黴菌屬、假蜜環菌屬、柱盤孢菌屬、克雷氏菌屬、金色菌屬、黃單胞菌屬、假單胞菌屬、分支桿菌屬、擲孢酵母菌屬、鎖擲孢酵母菌屬、擬無枝酸菌屬、可普來內氏菌屬、沙雷氏菌屬、紅球菌屬、紅酵母菌屬等之微生物作用而得一般式（H)

OH

(式中，x，n，R1，R2，R3及*是與前述相同）所示之光學活性/3 -胺基醇化合物。光學活性A -胺基醇之製造方法的特徵係生成具有所欲光學活性之該化合物。於本發明有關光學活性0 -胺基醇之製造方法，所用的原料是在前述一般式（I )所示之α -胺基酮化合物或其鹽之對掌異構物混合物，式中X是相同或不同之至少一種選自鹵素原子，低級烷基，以保護基保護之羥基，硝基及磺醯基，η是表示0〜3的整數，R1是表示低級烷基，R2，R3 是相同或不同之至少一種選自氫原子及低級烷基，*表示含有不對稱碳原子構造之物。以下有關前述含有置換基之α -胺基酮加以說明。關於前述鹵素原子，舉例而言如氟原子，氯原子，溴原子及碘原子。至於低級烷基以碳原子1〜6的烷基爲佳，例如甲基， -12- 1245801 五、發明説明（u) 乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，S-丁基，t-丁基，戊基，異戊基及己基。可採取直鏈狀或分支鏈狀構造。至於取代基以氟原子或氯原子之鹵素原子、羥基、烷基、胺基或烷氧基等爲佳。至於保護羥基的保護基，例如可以水處理去除之物，以酸或弱鹼去除之物，添加氫可去除之物，以路易斯酸觸媒及硫脲可去除之物。前述保護基係可取代之醯基，可有取代基之矽烷基，烷氧基烷基，可有取代基之低級烷基，苄基，對甲氧基苯甲基，2,2,2-三氯乙醯基，烯丙氧基羰基及三苯甲基等。再者前述醯基係包括乙醯基、氯乙醯基、二氯乙醯基、三甲基乙醯基、苯醯基及對-硝基苯醯基等。又，至於取代基，例如羥基，烷基，烷氧基，硝基及鹵素原子等。前記矽烷基係包括三甲基矽烷基、t-丁基二甲基矽烷基及三芳基矽烷基等。又，至於取代基爲可有取代基之烷基、芳基、羥基、烷氧基、硝基及鹵素原子等。前記烷氧基包括甲氧基甲基及2-甲氧基乙氧基甲基等。前記低級烷基包括碳原子1〜6之烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、s-丁基、t-丁基、戊基、異戊基及己基等。可採取直鏈狀或分支鏈狀之任一種構造。又，至於取代基，以氟原子或氯原子等之鹵素原子，羥基，烷基，胺基及院氧基等爲佳。又，前述X以硝基或磺醯基爲佳，具體如甲基磺醯基。再者，前述X之η爲0〜3的整數，以0爲佳。又前述一般式（I )中的R1是表示低級烷基。此等低級烷基以碳數1〜6的烷基爲佳，例如甲基，乙基，丙基，異. -13- 1245801 五、發明説明（12) 丙基，丁基，異丁基，S-丁基，t-丁基，戊基，異戊基及己基等。其可採取直鏈狀或分支鏈狀，任一種之構造。 R2，R3是表示氫原子或低級烷基。前述低級烷基包括碳數1〜6的烷基，例如甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，s-丁基，t-丁基，戊基，異戊基及己基等。其可採取直鏈狀或分支鏈狀，任一種之構造。又，至於前述α -胺基酮化合物的鹽，例如鹽酸鹽，硫酸鹽，磷酸鹽，碳酸鹽等無機酸鹽，或醋酸，檸檬酸等有機酸鹽。前述α -胺基酮爲對應於α -碳已鹵化之苯酮衍生物，其可藉由，例如溴化後以胺基取代溴基等之鹵素。而輕易合成（東德 11，332，3 月 12 日，1 956)。又，關於本發明之微生物，即對前述式（I)所示α -胺基酮化合物或其鹽之對掌異構物混合物作用之微生物係選自摩根氏菌屬、微菌屬、鞘氨醇菌屬、類諾卡氏菌屬、妙卡菌屬、阿塞迪菌屬、麴菌屬、青黴菌屬、奇果菌屬、曲黴菌屬、靈芝菌屬、肉座菌屬、螺旋枝黴菌屬、輪枝孢菌屬、鐮刀菌屬、三泰拉青菌屬、被孢黴菌屬、假蜜環菌屬、柱盤孢菌屬、克雷氏菌屬、金色菌屬、黃單胞菌屬、假單胞菌屬、分支桿菌屬、擲孢酵母菌屬、鎖擲孢酵母菌屬、擬無枝酸菌屬、可普來內氏菌屬、沙雷氏菌屬、紅球菌屬、紅酵母菌屬等之微生物；具體言之，例如摩根尼摩根氏菌IFO 3 848、樹狀微菌IFO 3 750、多食鞘氨醇菌if〇 1 4 9 8 3、單純類諾卡氏菌屬IF Ο 1 2 0 6 9、分歧妙卡菌IF 〇 6742、爪哇妙卡菌IFO 4570、易碎妙卡菌IFO 6449、衣戚司密阿塞迪菌IF0 4009、泡盛麹菌IFO 403 3、黑麹菌 -14- 1245801 五、發明説明（13) IFO 4416、米麴菌IFO 4177、米麴菌I AM 263 0、白麴菌 IFO 5 468、變種米麴菌IFO 6215、酸性變種富堤麴菌IFO 4121、草酸青黴菌IFO 5 748、福蘭多沙奇果菌IFO 30522 、爬行曲黴菌屬IFO 4 8 84、露西靈芝菌IFO 8 3 46、膠狀肉座菌IFO 9165、奈格螺旋枝黴菌IFO 809 1、變異共真菌輪枝孢菌IFO 6642、玫瑰鐮刀菌IFO 7189、米三泰拉青菌屬IFO 7544、艾沙貝那被孢黴菌IFO 8308、米勒假蜜環菌IFO 31616、硬化柱盤孢菌IFO 3 1 8 5 5、肺炎克雷氏菌IFO 33 19、酯香金色菌IFO 3 75 1、黃單胞菌IFO 3 084、惡臭假單胞菌IFO 14796、包皮垢分支桿菌IAM 12065、迪氏分支桿菌IF Ο 14797、母牛分支桿菌IF Ο 14118、草分支桿菌IFO 13160、偶然分支桿菌IFO 13 159 、產氯黴素分支桿菌IFO 1 5527、鮭魚色擲孢酵母菌IFO 1 03 8、克拉立彿蜜司擲孢酵母菌IFO 1 032、強森氏鎖擲孢酵母菌IFO 6903、白色擬無枝酸菌IFO 1 5 602、藍色擬無枝酸菌IFO 145 73、科羅拉多擬無枝酸菌IFO 1 5 804、東方擬無枝酸菌薈黃亞種IFO 145 00、東方擬無枝酸菌東方亞種IFO 1 23 60、東方擬無枝酸菌東方亞種IFO 1 23 62、東方擬無枝酸菌東方亞種IFO 128 06、根狀可普來內氏菌 IFO 301 97、黏質沙雷氏菌IFO 3736、灰暗紅球菌IFO 1 2540、灰暗紅球菌MAK-34、玫瑰紅紅球菌IAM 12 126、橙黃色酵母菌IFO 095 1等微生物。關於本發明之此等微生物也能生成所欲具有光學活性之前述化合物，對應於一般式（II)所示Θ -胺基醇化合物。至於前述一般式（II)之X，η，R1，R2，R3，及*相同於前述一般式（I)。又所欲之具有光學活性之Θ -胺基醇化合物， -15- 1245801 五、發明説明（14) 例如爲（1S，2S)胺基醇，（1S，2R)胺基醇，（1R,2S)胺基醇， (1R，2R)胺基醇。再者，關於本發明之前述微生物爲至少一種選自摩根氏菌屬、微菌屬、鞘氨醇菌屬、類諾卡氏菌屬、妙卡菌屬、阿塞迪菌屬、麹菌屬、青黴菌屬、奇果菌屬、曲黴菌屬、靈芝菌屬、肉座菌屬、螺旋枝黴菌屬、輪枝孢菌屬、鐮刀菌屬、三泰拉青菌屬、被孢黴菌屬、假蜜環菌屬、柱盤孢菌屬、克雷氏菌屬、金色菌屬、黃單胞菌屬、假單胞菌屬、分支桿菌屬、擲孢酵母菌屬、鎖擲孢酵母菌屬、紅球菌屬等之微生物爲佳；具體言之，以選自摩根尼摩根氏菌、樹狀微菌、多食鞘氨醇菌、單純類諾卡氏菌屬、分歧妙卡菌、爪哇妙卡菌、易碎妙卡菌、衣戚司密阿塞迪菌、泡盛麴菌、黑麴菌、米麴菌、白麴菌、變種米麴菌、酸性變種富堤麴菌、草酸青黴菌、福蘭多沙奇果菌、爬行曲黴菌屬、露西靈芝菌、膠狀肉座菌、奈格螺旋枝黴菌、變異共真菌輪枝孢菌、玫瑰鐮刀菌、米三泰拉青菌屬、艾沙貝那被孢黴菌、米勒假蜜環菌、硬化柱盤孢菌、肺炎克雷氏菌、酯香金色菌、黃單胞菌、惡臭假單胞菌、包皮垢分支桿菌、迪氏分支桿菌、母牛分支桿菌、草分支桿菌、偶然分支桿菌、產氯黴素分支桿菌、鮭魚色擲孢酵母菌、克拉立彿蜜司擲孢酵母菌、強森氏鎖擲孢酵母菌、灰暗紅球菌、玫瑰紅紅球菌等之微生物更佳。藉由使用此等微生物，可以高選擇性且簡易的步驟得到高獲率之前述一般式（Π)所示光學活性/5 -胺基醇之（1S，2S)-胺基醇。 -16- 1245801 五、發明説明（15 ) 再者，至於本發明之上述微生物，較佳爲至少一種選自擬無枝酸菌屬、可普來內氏菌屬、沙雷氏菌屬、紅球菌屬、紅酵母菌屬等之微生物；具體言之，以選自白色擬無枝酸菌、藍色擬無枝酸菌、科羅拉多擬無枝酸菌、東方擬無枝酸菌薈黃亞種、東方擬無枝酸菌東方亞種、根狀可普來內氏菌、黏質沙雷氏菌、灰暗紅球菌、玫瑰紅紅球菌、橙黃色酵母菌等之微生物更佳。藉由使用此等微生物，可以高選擇性且簡易的步驟得到高獲率之前述一般式（II)所示光學活性^ -胺基醇之（1R，2R)-胺基醇。又，本發明之有關微生物包含可選擇性生產前述光學活性/3 -胺基醇化合物中（1S，2S)體之（1S，2S)胺基醇生成菌及選擇性生產（1R，2R)體之（1R，2R)胺基醇生成菌。依本發明能選擇性生成蘇體。藉由前述（1S,2S)胺基醇生成菌作用，可得例如d-蘇-2-甲胺基-1-苯基丙醇（d-僞麻黃鹼），d-蘇-2-二甲胺基-1-苯基丙醇（d-甲基僞麻黃鹼），（lS，2S)-a -(1-胺乙基）-苄醇（d-去甲僞麻黃鹼），（lS，2S)-l-(p-羥苯基）-2-甲胺基-1-丙醇， (lS,2S)-a-(l-胺乙基）-2,5-二甲氧基-苄醇，（lS，2S)-l-(m-羥苯基）-2-胺基-l-丙醇，（lS,2S)_レ（p-羥苯基）-2-胺基-l-丙醇，（1S，2S)-1-苯基-2-乙胺基-1-丙醇，（1S，2S)-1-苯基-2-胺基-1-丁醇，（1S,2S)-1-苯基-2-甲胺基-1-丁醇等。藉由前述（1R,2R)胺基醇生成菌作用，可得例如1-蘇-2-甲胺基-1-苯基丙醇（1-僞麻黃鹼），1-蘇-2-二甲胺基-1-苯基丙醇（1-甲基僞麻黃鹼），（lR,2R)-a -(1-胺乙基）-苄醇（1-去甲僞麻 -17- 1245801 五、發明説明（16 ) 黃鹼），（lR,2R)-l-(p-羥苯基）-2-甲胺基-1-丙醇，（1R,2R)-胺乙基）-2,5-二甲氧基-苄醇，（lR，2R)-l-(m-羥苯基）-2-胺基-1-丙醇，（1R，2R)-1-(P-羥苯基）-2-胺基-1-丙醇， (1R，2R)-1-苯基-2-乙胺基-1-丙醇，（1R，2R)-1-苯基-2-乙胺基-1-丙醇，（1S，2S)-1-苯基-2-胺基-1-丙醇，（1R，2R)-1-苯基-2-甲胺基-1-丁醇等。尙且，藉由所得的（1S，2S) — l-(m-羥苯基）-2-胺基-1-丙醇反轉，可得（lR，2S)-l-(m-羥苯基）-2-胺基-1-丙醇（阿拉明）〇有關本發明之微生物，係附有IFO號碼之微生物，記載於（財團法人）發酵硏究所（IFO)發行「List of Cultures，第 10版（1 996)」，故可得自IFO。又，附有IAM號碼之微生物，記載於東京大學分子細胞生物學硏究所。細胞•機能高分子綜合中心發行之「Catalogue of Strains，1993」，故可得自該保存施設。又使用於本發明之微生物，係限於作用於前述一般式 (I ) α -胺基酮化合物或其鹽之對掌異構物混合物，而能產生對應一般（Π )所示之光學活性/3 -胺基醇化合物之微生物，其任何野生株，變異株或融合細胞等的細胞工學手法或依據基因操作等的基因工程之手法，所衍生之重組株等皆能使用。有關前述微生物之培養方法的各條件，無特別限制，以常用方法由細菌，真菌，酵母各個適合的培養基來進行。通常使用含有碳源，氮源，其他養分的液體培養基。至於培 -18 - 1245801 五、發明説明（17) 養基的碳源，上述微生物可利用任何的碳源。具體而言，可使用葡萄糖，果糖，蔗糖，糊精，澱粉，山梨糖醇等糖類；甲醇’乙醇，甘油等醇類·，富馬酸，檸檬酸，醋酸，丙酸等有機酸及其鹽類；石蠟等的碳氫化合物類；或此等之混合物。至於氮源，上述微生物可利用任何的氮源。具體而言’可使用氯化銨，硫酸銨，磷酸銨等的無機酸的銨鹽；富馬酸銨，檸檬酸銨等的有機酸的銨鹽；硝酸鈉，硝酸鉀等硝酸鹽；肉萃取物，酵母萃取物，麥芽萃取物，腺等無機或有機含氮化合物；或此等之混合物。再者，於培養基適量添加無機鹽，微量金屬鹽，維他命類等通用之培養基營養源爲佳。又，必要時可在培養基添加誘導微生物活性之物質，有效保持pH値的緩衝物質等。前述微生物之活性誘導物質，例如一般式（m)

R

(ΙΠ) (式中R4是表示低級烷基，R5，R6爲相同或不同之氫原子，低級烷基或醯基，Y是表示00或CH-OH) 所示之活性誘導劑。至於低級烷基及醯基，如先前定義之各例。較佳的活性誘導劑，具體性爲1-胺基-2-丙醇，1-胺基-2-羥基丁烷，1-乙醯胺基-2-丙醇，1-甲胺基-2-丙醇， 1-胺基-2-羥基丙烷，2-胺基-3-羥基丁烷等。於此等化合物如有不對稱碳原子存在時，可適當選擇光學活性體，任一外消旋體。藉由添加活性誘導劑到培養基中，可誘導微生

-19- 1245801 五、發明説明（18 ) 物的活性，之後生成光學活性/3 -胺基醇，比無添加時進行之效率好。活性誘導劑可各自單獨使用，或混合使用數個誘導劑混合物。此等活性誘導劑的添加量，較好爲培養基0.01〜10重量％。微生物的培養可於適合繁殖之條件下進行。具體言之，培養基可於pH値3〜10，較佳爲4〜9，溫度0〜50°C，較佳爲20〜40°C進行。微生物的培養可於好氧或厭氧條件下進行。培養時間較佳爲10〜150小時，依各個微生物適宜者而定。有關本發明Θ -胺基醇的製造之反應方法，前述一般式 (I )所示之α -胺基酮化合物或其鹽之對掌異構物混合物與前述微生物作用，生成對應於一般式（Π )所示光學活性/3 -胺基醇之方法，並無特別限定。原料α -胺基酮水溶液，緩衝液或水等洗淨後的菌體混合後開始反應。又，反應條件是選擇在不損害一般式（Π )所示光學活性 /3 -胺基醇化合物產生之範圍。菌體量，就乾燥菌體而言，較佳爲對應於外消旋胺基酮的100分之1〜1000倍，更佳爲10分之1〜1 00倍。又，作爲受質的外消旋胺基酮的濃度較佳爲0.01〜20%，更佳爲0.1〜10%。再者，反應液 pH較佳爲5〜9’更佳爲6〜8，反應溫度較佳爲1〇〜50°C ’更佳爲2 0〜4 0 C ’反應時間以5〜1 5 0小時爲佳，依各個微生物適宜者而定。又，爲使反應更有效率的進行，可添加葡萄糖等糖類，醋酸等有機酸，甘油等能量物質。此等物可各各單獨使用， -20- 1245801 五、發明説明（l9 ) 也可以其混合物來使用。添加量較佳爲對應於受質的100 分之1〜1 〇倍量。也可添加輔酵素等。輔酵素是··菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸（NAD)，還原型菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸（NAPH)，菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP)，還原型菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH)等，單獨或混合物使用皆可。添加量較佳爲對應於外消旋胺基酮的1000 分之1〜5分之1倍量。又，加上此等輔酵素可添加輔酵素再生酵素，例如可添加葡萄糖氫化酶。添加量較佳爲對應於外消旋胺基酮的1000分之1〜5分之1倍量。又輔酵素再生酵素的受質，例如可添加葡萄糖。添加量較佳爲對應於外消旋胺基酮的1 00分之1〜1 0倍量。再者，葡萄糖等糖類，醋酸等有機酸，甘油等能量物質，輔酵素，輔酵素再生酵素及輔酵素再生酵素之受質可各別組合使用。此等物質本來就積蓄在菌體中，必要時藉由添加此等物質，適當選擇性提高反應速率，收獲率。再者，反應液加上如上述特定的鹽，在此條件下反應則會促進未反應的α -胺基酮異構體之外消旋化，可更有效率進行微生物之受質成爲鏡像異構體之變換。據此從原料可得50%以上高收獲率之目的物α -胺基醇。促進未反應^ -胺基酮之外消旋化的鹽類’如醋酸鹽，酒石酸鹽，安息香酸鹽，檸檬酸鹽’丙二酸鹽，磷酸鹽，碳酸鹽，對硝基苯酚鹽’亞硫酸鹽及硼酸鹽等的弱酸鹽，較佳爲利用磷酸鹽（例如：磷酸二氫鈉，磷酸二氫鉀，磷酸二氫銨），碳酸鹽（例如：碳酸鈉’碳酸氫鈉’碳酸鉀’碳 -21- 1245801 五、發明説明（2〇 ) 酸銨），檸檬酸鹽（例如：檸檬酸鈉，檸檬酸鉀，檸檬酸錢）等。又，此等混合物之使用，就pH6.0〜8.0的緩衝液而言’較佳爲添加至最終濃度爲〇 · 01〜1 Μ。例是如磷酸鹽時’將磷酸二氫鈉及磷酸一氫鈉以9對1至5對95的比率來混合較佳。依反應生成之光學活性/3 -胺基醇，可依據慣用的分離精製方法來精製。例如直接從反應液或將菌體分離後，膜分離’以有機溶媒（例如··甲苯，氯仿等）抽取，依據管柱色層分析，減壓濃縮，蒸餾，晶析，再結晶等的常用精製方法，可得光學活性^ -胺基醇。生成之光學活性^ -胺基醇的光學純度可依據高速液體色層分析法-(HPLC)測定。 (實施例）以下依據實施例將本發明具體性的說明。但是本發明實施例並不限制其技術範圍。 (製造例1) d 1-2-甲胺某-1-苯基-1-丙酮之製造在1-苯基-1-丙酮134g，碳酸鈉42g，水200ml之混合物，滴下溴51.6ml，以70°C反應3小時而得反應混合物。對前述反應混合物添加40%單甲基胺水溶液350ml，40°C 反應1小時後，在1升氯仿中抽出反應生成物。然後用 1 00ml稀鹽酸抽出氯仿層中的反應生成物，在水層加活性碳3g過濾後，將此濾液濃縮可得dl-2-甲胺基-1-苯基-1-丙酮鹽酸鹽89g。 (實施例1) d“lS，2SV僞麻黃鹼之生成 1245801 五 '發明説明（21 ) 5 ml含有葡萄糖1%，蛋白腺0.5%，酵母萃取物0.3 %的培養基，接種樹狀微菌IFO3 7 5 0，3 0°C振盪培養48小時。離心分離培養液而得菌體後，放入試管，並加入〇. 1 Μ 磷酸鈉緩衝液（pH7.0)lml懸浮之。加入dl-2-甲胺基-1-苯基-1 ·丙酮鹽酸鹽1 m g，3 0 °c進行振盪反應2 4小時。反應結束後，離心分離反應液去除菌體，上淸液進行HPLC而得光學活性之麻黃驗（"Bondapakphenyl Wotas社製，直徑 40mm，長度300mm。溶離液0.05 Μ磷酸鈉緩衝液（含有乙腈7%)ρΗ5·0，流速〇.8ml/分，檢出光波長UV220nm)。絕對組態及光學純度以HPLC(住化分析中心製 Kalamusmikiral AGP，直徑 4mm，長度 150mm，0.03M 磷酸鈉緩衝液，ρΗ7·0，流速0.5ml/分，檢出光波長220nm) 測定。其結果如表1所示，可選擇性只得到d-僞麻黃鹼。以下生成量全是以鹽酸鹽的量換算來表示。 (實施例2〜12)这-(1S,2S)-僞麻黃鹼之生成除了使用表1所示微生物替換樹狀微菌IF03 750以外，與實施例1同樣的得到光學活性僞麻黃鹼，其結果如袠i 所示般可選擇性只得到d-僞麻黃鹼。 1245801 五、發明説明（22) 表1 實施例微生物光學純度(％) 生產量屬 IF〇 d-麻黃鹼 1-麻黃鹼 d-僞麻黃驗 1-僞麻黃鹼 mg/ml 實施例1 樹狀微菌(Microbacterium arborescens) 3750 0 0 100 0 0.16 實施例2 肺炎克雷氏菌(Klebsiella pneumoniae) 3319 0 0 100 0 0.3 實施例3 酯香金色菌(Aureobacterium esteraromaticum) 3751 0 0 100 0 0.14 實施例4 黃單胞菌(Xanthomonas sp.) 3084 0 0 100 0 0.049 實施例5 惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida) 14796 0 0 100 0 0.1 實施例6 包皮垢分支桿菌 (Mycobacterium smegmatis) IAM 12065 0 0 100 0 0.24 實施例7 迪氏分支桿菌(Mycobacterium diernhoferi) 14797 0 0 100 0 0.25 實施例8 母牛分支桿菌(Mycobacterium vaccae) 14118 0 0 100 0 0.28 實施例9 艾沙貝那被孢黴菌(Mortierella isabellina) 8308 0 0 100 0 0.15 實施例10 硬化柱盤孢菌(Cylindrocarpon sclerotigenum) 31855 0 0 100 0 0.09 實施例11 強森氏鎖擲孢酵母菌 (Sporidiobolus johnsonii) 6903 0 0 100 0 0.07 實施例12 灰暗紅球菌(Rhodococcus erythropolis) MAK 34 0 0 100 0 0.3 -24- 1245801 五、發明説明（23 ) (實施例13〜37) d- HS,2SV僞麻黃鹼之牛成除了使用表2所示微生物替換樹狀微菌IF03 750以外，與實施例1同樣的得到光學活性的僞麻黃鹼。d-僞麻黃鹼的生成量與光學純度如表2所示。 -25- 1245801 五、發明説明（24 ) 表2 實施例微生物生成量 (mg/ml) 光學純嵐t 屬 IFO d-僞麻黃鹼實施例13 單純類諾卡氏菌屬(Nocardioides simplex) 12069 0.35 99 實施例14 草分支桿菌(Mycobacterium phlei) 13160 0.27 95.6 實施例15 分歧妙卡菌(Mucor ambiguus) 6742 0.07 93 實施例16 爪口圭妙卡菌(Mucor javanicus) 4570 0.04 95 實施例17 易碎妙卡菌(Mucor fragilis) 6449 0.17 90 實施例18 衣戚司密阿塞迪菌(Absidia lichtheimi) 4009 0.04 93 實施例19 泡盛麴菌(Aspergillus awamori) 4033 0.18 93 實施例20 黑麴菌(Aspergillus niger) 4416 0.11 90 實施例21 米麴菌(Aspergillus oryzae) 4177 0.18 91 實施例22 白麹菌(Aspergillus candius) 5468 0.07 94 實施例23 米麹菌(Aspergillus oryzae) IAM2630 0.08 92 實施例24 變種米麴菌(Aspergillus oryzae var. oryzae) 6215 0.05 95 實施例25 草酸青黴菌(Penicillium oxalicum) 5748 0.06 94 實施例26 福蘭多沙奇果菌(Grifo丨a frondosa) 30522 0.08 92 實施例27 爬行曲黴菌屬(Eurotium repens) 4884 0.08 92 實施例28 露西靈芝菌(Ganoderma lucidum) 8346 0.05 92.2 實施例29 膠狀肉座菌(Hypocrea gelatinosa) 9165 0.27 92.2 實施例30 奈格螺旋枝黴菌(Helicostylum nigricans) 8091 0.27 93.2 實施例31 酸性變種富堤麴菌(Aspergillus foetidus var. acidus) 4121 0.43 91.9 實施例32 變異共真菌輪枝孢菌(Verticillium fungicola var. fungicola) 6624 0.10 92.7 實施例33 玫瑰鐮刀菌(Fusarium roseum) 7189 0.40 89.6 實施例34 米三泰拉青菌屬(Tritirachium oryzae) 7544 0.34 92 實施例35 米勒假蜜環菌(ArmiUariella mellea) 31616 0.28 91 實施例36 鮭魚色躑孢酵母菌(Sporobolomyces salmonicolor) 1038 0.14 95 實施例37 克拉立彿蜜司擲孢酵母菌(Sporobolomyces coralliformis) 1032 0.2 95 -26- 1245801 五 '發明説明（25 ) (實施例38) d-(lS，2SM爲麻黃鹼之牛成將摩根尼摩根氏菌IF03 848接種於含有葡萄糖1%，蛋白腺0.5%，酵母萃取物0.3%的培養基，30°C好氧下振盪培養48小時。取此培養液5ml以離心分離而得菌體並風乾，所得乾燥菌體以0.05M三鹽酸緩衝液（PH7.5)lml懸浮。在前述乾燥菌體懸浮液加入葡萄糖50mg，葡萄糖脫氫酶 0.2mg，NADP 0.6mg，NAD 0.6mg，d卜2-甲胺基-1-苯基-1-丙酮鹽酸鹽l〇mg，28°C以300rpm來回振盪。進行反應48小時後，將反應液如上述實施例1般藉由HPLC 來測定僞麻黃鹼及光學純度。其結果如表3所示，可以選擇性只得到d-僞麻黃鹼。表3 實施例微生物光學純度（％) 生成量 (mg/ml) 屬 IFO d-麻黃驗 1 -麻黃鹼 d -僞麻黃鹼 1 -僞麻黃驗實施例38 摩根尼摩根氏菌 (Morganella morganii) 3848 0 0 100 0 0.79 (實施例39) d-(lS,2SV僞麻黃鹼鹽酸鹽之牛成將包皮垢分枝桿菌IAM-1 2065接種於含有葡萄糖1%，蛋白腺0.5%，酵母萃取物0.3%的培養基，3(TC好氧下振盪培養48小時。離心分離前述培養液1升，而得菌體 5〇ml懸浮液，加入dl-2-甲胺基-1-苯基-1-丙酮鹽酸鹽後，3 0°C，1 50rpm來回振盪。振盪1 00小時後，在前述反應液生成7.Og/Ι的d-僞麻黃鹼。將前述反應液所離心分離除去菌體後，藉由加入氫氧化鈉將pH調整至1 2以上。在 -27- 1245801 五、發明説明（26) 此反應液加入二氯甲烷，抽出反應生成物。倒去溶劑加入鹽酸後，濃縮乾固成鹽酸鹽。在前述鹽酸鹽加入乙醇溶解，再次加入醚使反應生成物析出結晶。此結果得到d-僞麻黃鹼鹽酸鹽。把所得d-僞麻黃鹼鹽酸鹽的結晶0.3 2g以 HPLC(住化分析中心製Kalamusmikiral AGP，直徑4mm，長度150mm，0.03M磷酸鈉緩衝液，ρΗ7·0，流速0.5ml/ 分，檢出光波長UV220nm)分析，結果光學純度是100%。 (實施例40) d-(lS,2SV甲基僞麻黃鹼之生成將包皮垢分枝桿菌IAM- 1 2065接種於含有葡萄糖1%，蛋白腺0.5%，酵母萃取物0.3%的培養基，3(TC好氧下振盪培養48小時。過濾培養液1升而得菌體經水洗，加水 50ml做成懸浮液。前述懸浮液加入2-二甲胺基-1-苯基-1-丙酮鹽酸鹽l〇〇g(2g/l)，在30°C以150rpm來回振盪48小時。將反應液以HPLC(住化分析中心製Kalamusmikiral AGP，直徑4mm，長度150mm，0.03M磷酸鈉緩衝液， PH7.0，流速0.5ml/分，檢出光波長UV220nm)分析，結果生成d-(lS，2S)-甲基僞麻黃鹼0.23g/卜光學純度是77%。 (實施例41) 1-(1R，2RV僞麻黃鹼之牛成將白色擬無枝酸菌IF01 5 602接種於含有葡萄糖1%，蛋白腺0.5%，酵母萃取物0.3%的培養基，30°C好氧下振盪培養48小時。前述培養基5ml經離心分離而得菌體，前述菌體以0.1 Μ磷酸鈉緩衝液（pH7.0)1 ml懸浮液後，加入 dl-2-甲胺基-1-苯基-卜丙酮鹽酸鹽lmg，在30°C以 1 5Orpm來回振盪反應48小時。前述反應液以HPLC(住化 -28- 1245801 五、發明説明（27 ) 分析中心製Kalamusmikiral AGP，直徑4mm，長度 150mm，0·03Μ磷酸鈉緩衝液，ρΗ7·0，流速0.5ml/分，檢出光波長UV220nm)分析，可選擇性得到1-僞麻黃鹼。其結果如表4所示。 (實施例42-46) 1 -HR，2RV僞麻黃鹼之牛成白色擬無枝酸菌IFO 1 5 602以表4所示微生物將之替換以外，如實施例41般得到光學活性僞麻黃鹼。其結果如表4所示，可選擇性只得到1 -僞麻黃鹼。表4 實施例微生物光學純度（％) 生成量 (mg/ml) 屬 IFO d-麻黃鹼 1 -麻黃鹼 d-僞麻黃鹼卜僞麻黃鹼實施例4 1 白色擬無枝酸菌 (Amycolatopsis alba) 15602 0 0 0 100 0.33 實施例42 藍色擬無枝酸菌 (Amycolatopsis azurea) 14573 0 0 0 100 0.064 ------ 實施例43 科羅拉多擬無枝酸菌 (Amycolatopsis co Ioradens is) 1 5804 0 0 0 100 0.5 實施例44 東方擬無枝酸菌薈黃亞種（Amycolatopsis orientalis luridda) 14500 0 0 0 100 0.18 -------- 實施例45 東方擬無枝酸菌東方亞種（Amycolatopsis orientalis orientalis) 12360 0 0 0 100 0.5 ______ 實施例4 6 黏質沙雷氏菌（Serratia marcesce) 3736 0 0 0 100 0.47 (實施例47，48) 1 -(1 僞麻黃鹼鹽酸_之牛成白色擬無枝酸菌IFO 1 5602以表5所示微生物將之替換 -29- 1245801 五、發明説明（28) 以外，如實施例4 1般得到光學活性僞麻黃鹼。N僞麻黃鹼的生成量與光學純度如表5所示。表5 實施例微生物光學純度 (%) 生成量 (mg/ml) 屬 IF〇 1_僞麻黃鹼實施例47 灰暗紅球菌（Rhodococcus erythropol is) 12540 98.6 0.11 實施例48 玫瑰紅紅球菌（Rhodococcus rhodochrous) 1 5564 96.6 0.10 (實施例49) l-nR，2RV僞麻黃鹼之牛成

根狀可普來內氏菌IF03 0197接種於含有葡萄糖1%，蛋白腺0.5%，酵母萃取物0.3%的培養基，30°C好氧下培養 48小時。前述培養基5ml離心分離而得菌體，將菌體風乾而得乾燥菌體，加入0.05M三鹽酸緩衝液（pH7.5)lml懸浮液，加入葡萄糖50mg葡萄糖脫氫酶〇.2mg，NADP 0.6mg，NAD 0.6mg，dl-2-甲胺基-1-苯基-1-丙酮鹽酸鹽 l〇mg。前述懸浮液在2 8°C，3 000rpm來回振盪反應48小時。前述反應液以HPLC(住化分析中心製Kalamusmikiral AGP，直徑4mm，長度150mm，0.03M磷酸鈉緩衝液， pH7.0，流速〇.5ml/分，檢出光波長UV220nm)分析，測定僞麻黃鹼的生成量及光學純度。其結果如表6所示’可選擇性只得到1-僞麻黃鹼。 -30- 1245801 五、發明説明（29 ) 表6

(實施例50) (1S，2SVI-(對羥苯某）-2-甲胺某@ 灰暗紅球菌MAK-34株在含有蔗糖1%，玉米浸漬液 0.5%，磷酸-鉀0.1%，磷酸二鉀0.3%，1-胺基-2_丙醇〇·1 %的培養基5 ml，3 0°C振盪培養48小時。離心分離或過濾而得菌體。於此加入適當量的水，1 Μ磷酸鈉緩衝液 (pH7.0)0.2ml，葡萄糖10mg，外消旋體之1-(對經苯基）-2-甲胺基-1-丙酮鹽酸鹽lmg並混合，取lml於3 0°C振盪反應48小時。離心分離或過濾反應液，上淸液以HPLC(g Bondapakphenyl Wotas 社製，直徑 4mm，長度 300mm，溶離液[0.05M磷酸鈉緩衝液（含有乙腈7%)，ρΗ6·5，流速〇.8ml/分，檢出波長UV220nm])分析。其結果確認產生蘇體-1_(對羥苯基）-2-甲胺基-1-丙醇鹽酸鹽〇.6mg/ml。爲了鑑定生成物的光學純度，樣品以HPLC(住化分析中心製 KalamusmikiralOA-4900，溶離液己院：二氯乙院：甲醇：二氯乙酸=240:140:40:1，流速lml/分，檢出波長UV254nm) 分析。其結果證明可得（lS，2S)-l-(p-羥苯基）-2-甲胺基-1-丙醇光學純度是100%。 (實施例51〜54)光學活件的1-(對羥苯基醇之牛成灰暗紅球菌MAK-34株以表7所示微生物，依照表中培 -31- 1245801 五、發明説明（) 養條件，如實施例50般進行反應而得光學活性之1-(對羥苯基）-2-甲胺基-1 -丙醇。結果如表7所示。皆可得到好效率的光學活性化合物。尙且在表7〜9記載的培養條件如下：培養條件①：在含有葡萄糖1%，蛋白腺0.5%，酵母萃取物0.3%的培養基接種微生物，於3(TC振盪150rpm的條件培養48小時。培養條件②：在含有麥芽萃取物5%，酵母萃取物0.3 %培養基20ml(pH6.0)接種微生物，於30°C振盪150rpm的條件培養48小時。表7 實施例菌種 IFO 培養條件生成量 (mg/ml) 生成物的立體構型光學純度 (%) 實施例5 1 奈格螺旋枝黴菌 (Helicosty lum nigricans) 809 1 ① 0.06 IS 2S 90 實施例52 東方擬無枝酸菌薈黃亞種（Amycolatopsis orientalis luridda) 14500 ① 0.0 1 1R 2R 100 實施例53 東方擬無枝酸菌東方亞種（Amycolatopsis orientalis orientalis) 12362 ① 0.02 1R 2R 100 實施例54 東方擬無枝酸菌東方亞種（Amycolatopsis orientalis orientalis) 12806 ① 0.01 1R 2R 100 (實施例55) (15,2 8)-2-甲胺某-1-苯某-1-丙醇之牛成灰暗紅球菌MAK-34株接種於含有蔗糖1%，玉米浸漬液0.5%，磷酸-鉀0.1%，磷酸二鉀0.3%，1-胺基-2-丙醇 -32- 1245801 五、發明説明（3i ) 〇.1 %的培養基5ml，3 0°C振盪培養48小時。離心分離或過濾而得菌體。在此加入適當量的水’ 1 M磷酸鈉緩衝液 (pH7.0)0.2ml，葡萄糖10mg，外消旋體之2-甲胺基-1-苯基-1-丙酮鹽酸鹽lmg並混合，取lmi於30°C振盪反應48 小時。反應液離心分離或是過濾。將上淸液以 HPLC[pBondapakphenyl Wotas 社製，直徑 4mm，長度 1 5 0mm，溶離液0.05M磷酸鈉緩衝液（含有乙腈7%)， ρΗ6·5，流速0.8ml/分，檢出波長UV220nm]分析。結果確認生成蘇體-2-乙胺基-1-苯基-1-丙醇鹽酸鹽〇.47mg/ml。爲決定生成物的光學純度，將樣品以HPLC(TAISAL社製 KALAM OD，直徑4.6mm，長度250mm，溶離液己烷：異丙醇：二乙胺=90:10:1，流速lml/分，檢出波長UV254nm) 分析。結果鑑定生成物是（lS，2S)-2-乙胺基-1-苯基-1-丙醇 (光學純度100%)。 (實施例56〜58) (l_R，2R)-2-乙胺某-1-苯基-1—丙醇之生成灰暗紅球菌MAK-34株以表8所示微生物代替，遵照表的培養條件，如實施例55般進行反應而得（ir，2R)-2-乙胺基-1-苯基-1-丙醇。結果如表8所示。 1245801 五、發明説明（32) 表8 實施例菌種 IFO 培養條件生成量 (mg/ml) 生成物的立體光學純度 (%) 實施例56 白色擬無枝酸菌 (Amycolatopsis alba) 15602 ① 0.01 1R 2R 100 實施例57 東方擬無枝酸菌東方亞種（Amycolatopsis orientalis orientalis) 12806 ① 0.01 1R 2R 100 實施例58 橙黃色酵母菌 (Rhodotorula aurantiaca) 095 1 ① 0.01 1R 2R 100 (實施例59〜61)光璺活件的羥茏甚哼甚-1·丙醇之生成表9記載的微生物以各培養條件的培養基50ml，在30°C 振盪培養48小時。離心分離或是過濾而得菌體。在此加入適當量的水，1 Μ憐酸鈉緩衝液（p Η 7.0) 0.2 m 1，蔔萄糖 10mg，外消旋體之l-(m-羥苯基）-2-胺基-1-丙酮鹽酸鹽 1 mg並混合，取其lml以3(TC振盪反應48小時。然後離心分離或是過濾、，上淸液以HPLC[pBondapakphenyl Wotas 社製，直徑4mm，長度300mm，溶離液0.05Μ磷酸鈉緩衝液（含有乙腈7%)，ρΗ6·5，流速〇.8ml/分，檢出波長 UV220nm]分析。結果確認生成蘇體i-(m-羥苯基）-2-胺基-1-丙醇。爲決定生成物的光學純度，樣品以HPLC Crownpak CR+，Daisal 製，高氯酸，pH2.0，1.0ml/分， UV254nm)分析。結果證明得到表9所示之立體組態光學活性之1 - (m -經苯基）-2 -胺基-1 -丙醇。 -34- 1245801 五、發明説明（33) 表9 實施例菌種 IFO 培養條件生成量 (mg/ml) 生成物的立體構型光學純度 (%) 實施例59 奈格螺旋枝黴菌 (Helicostylum nigricans) 809 1 ① 0.0i IS 2S 100 實施例60 白色擬無枝酸菌 (Amycolatopsis alba) 1 5602 ① 0.01 1 R 2R 78 實施例61 橙黃色酵母菌 (Rhodotorula aurantiaca) 0951 ② 0.01 1R 2R 100 (實施例62) nR，2R)-l-(對-羥苯某）·2-胺基-1-丙醇之牛成白色擬無枝酸菌IFO-1 5 602以培養條件①培養，離心分離或過濾得菌體。此物加入適當量的水，1 Μ磷酸鈉緩衝液（pH7.0)0.2ml，葡萄糖10mg，外消旋體之1-(對-羥苯基）-2-胺基-1-丙醇鹽酸鹽lmg並混合，取其液lml於3 0°C振盪反應48小時。然後離心分離或是過濾，上淸液以 HPLC [pBondapakphenyl Wotas 社製，直徑 4mm，長度 3 00mm，溶離液0.05M磷酸鈉緩衝液（含有乙腈7%)， pH6.5，流速0.8ml/分，檢出波長UV220nm]分析。結果確認生成蘇體-1-(對-羥苯基）-2-胺基-1-丙醇鹽酸鹽0.03 mg/ ml。爲決定生成物的光學純度，樣品用HPLC(Crownpak CR+、Daisal 製，高氯酸，ρΗ2·0，10ml/分，UV254nm)分析。結果鑑定生成物是（lR，2R)-l-(對-羥苯基）-2-胺基-1-丙醇（光學純度100%)。 (實施例63) (1S，2SM-苯基-2-胺某-1-丙醇之生成奈格螺旋枝黴菌IFO-809 1以培養條件①培養，離心分 -35- 1245801 五、發明説明（34) 離或是過濾取得菌體。在此物加入適當量的水，1 Μ磷酸鈉緩衝液（pH7.0)0.2ml，葡萄糖l〇mg，外消旋體之1-苯基-2-胺基-1-丁酮鹽酸鹽lmg並混合，取其液lml於30°C振盪反應4 8小時。反應液離心分離或是過濾，上淸液以 HPLC [pBondapakphenyl Wotas 社製，直徑 4mm，長度 150mm，溶離液0.05M磷酸鈉緩衝液（含有乙腈7%)， PH6.5，流速0.8ml/分，檢出波長UV220nm]分析。結果確認生成蘇體-1-苯基-2-胺基-1-丁醇鹽酸鹽〇.6mg/ml。爲決定生成物的光學純度，樣品以HPLC(OD，Daisal，直徑 4mm，長度 250mm，己烷：異丙醇：二乙胺=90:10:0.1，lml/ 分，UV254nm)分析。結果鑑定生成物是（1S,2S)-1_苯基-2-胺基-1-丙醇。 (實施例64) (111,210-1-苯基-2-胺基-1-丁醇之生成東方擬無酸菌東方亞種IFO- 1 2806以培養條件①培養，以實施例63般生成（1R，2R)-1-苯基-2-胺基-1-丁醇0.21mg/ ml 〇 (實施例65)藉由添加誘導劑之影響（Π 於（表10)培養基1，加入1-胺基-2-羥基丙烷至試管5ml 以成5g/L，以矽栓在121°C高壓滅菌30分鐘。此等培養基與無添加誘導劑之培養基，接種表Π記載之微生物，於3 0°C，3 00i:pm振盪培養48小時。將培養液0.5ml以 1 0 0 0 0 G離心分離2 0分鐘，除去上淸液而得菌體，加入水懸浮至均勻的懸浮液。在此物加入水，緩衝液’ d 1 -2 -甲胺基-卜苯基-1-丙酮10mg，取lml加入試管，以30°C， -36- 1245801 五、發明説明（35) 1 5 Orpm進行振盪反應12小時。反應終了後，以離心分離除去菌體，將上淸液置HPLC進行僞麻黃鹼生成量之測定。 (HPLC 條件：// Bondapakphenyl Wotas 社製’直徑 4mm ，長度300 mm，溶離液0.05M磷酸鈉緩衝液（含有乙腈7%) Ph6.5，流速0.8ml/分，檢出波長UV220nm)

結果如表11所示，有添加誘導劑培養的生成量，比無添加誘導劑培養的生成量顯著增大。表1 0 培養基1的組成培養基2的組成培養基3的組成培養基4的組成蔗糖1% 玉米浸漬液0.5°/。磷酸一鉀0.1% 磷酸二鉀0.3% P-胺基苯酸 (PABA)O.Ol% pH7.0 葡萄糖0.1% 胰蛋白酶水解物 0.5% 酵母萃取物0.5% 磷酸二鉀0.1% ρΗ7·0 葡萄糖1% 細菌蛋白腺0.5% 酵母萃取物0.3% ΡΗ7.0 可溶性澱粉1% 葡萄糠〇·5% Ν乙胺型Α0.3% 胰蛋白酶水解物0.5 % 酵母萃取物2% 磷酸二鉀硫酸鎂7水合物0·05%

-37- 1245801 五 '發明説明（36 ) 表11

No 微生物 No 培養基生成物 (無添加） mg 生成物 (添加） mg 1 灰暗紅球菌（Rhodococcus erythropol is) MAK-34 1 0.18 1.26 2 產氯黴素分支桿菌 (Mycobacterium chlorophenolium) IFO 15527 3 0.032 0.77 3 包皮垢分支桿菌 (Mycobacterium smegmatis) IAM 12065 3 0.048 0.21 4 單純類諾卡氏菌屬 (Nocardioides simplex) IFO 12069 2 0 0.19 5 肺炎克雷氏菌（Klebsiella pneumoniae) IFO 3319 2 0.018 0.066 6 衣戚司密阿塞迪菌（Absidia lichtheimi) IFO 4409 4 0.0035 0.22 7 泡盛麴菌（Aspergillus awamori) IFO 4033 4 0.00048 0.17 8 白麴菌（Aspergillus candius) IFO 5468 4 0.0092 0.018 9 藍青黴菌（Penicillium cyaneum) IFO 5337 4 0.031 1.26 10 膠狀肉座菌（Hypocrea gelatinosa) IFO 9165 4 0.0058 0.64 11 奈格螺旋枝黴菌（Helicostylum nigricans) IFO 8091 4 0.0067 0.52 12 米三泰拉青菌屬（Tritirachium oryzae) IFO 7544 4 0.0047 0.078 13 米勒假蜜環菌（Armillariella mellea) IFO 31616 4 0.0042 0.46 -38- 1245801 五、發明説明（37 ) (實施例06)藉由添加誘導劑之影響（2) 在含有蔗糖1.0%，玉米浸漬液0.5%，磷酸二氫鉀0.1% ，磷酸氫二鉀0.3%，p-胺基苯酸（PABA)O.Ol%。各種誘導劑0.1%，ρΗ7·0的培養基5ml，接種灰暗紅球菌MAK-34 ，於30°C，振盪培養48小時。培養液以離心分離得菌體後，放入試管，加入2M磷酸鈉緩衝液（pH7.0)1.0m懸浮。之後加入dl-2-甲胺基-1-苯基-1-丙酮鹽酸鹽10mg，葡萄糖20mg於3 0°C，進行振盪反應16小塒。反應終了後，反應液以離心分離除去菌體，將上淸液置於HPLC而得光學活性的僞麻黃驗（V Bondapakphenyl Wotas社製，直徑 4mm，長度150mm，溶離液7%乙腈，0.05M磷酸鈉緩衝液（PH6.5)，流速0.8ml/分，檢出波長UV220nm)。其生產量如表1 2所示，比無添加誘導劑之產値有顯著的增高。表12 化合物名生成量（mg) 1-乙醯胺基-2-丙醇 3.00 1-甲胺基-2-丙醇 2.83 1-胺基-2-羰基丙烷 1.97 2-胺基-3-羰基丁烷 0.05 1-胺基-2-羰基丁烷 0.65 無添加 0.02 (比較例1) 以不規則形酒香酵母菌（8^“&110111}^63&110111&1113)1?0 G642取代樹狀黴菌IFO3750以外，如實施例1般試出僞麻黃鹼之生成反應。但是無還原生成物。 (比較例2) -39- 1245801 五、發明説明（38 ) 以不規則形酒香酵母菌（Brettanomyces anomalus)IFO 〇566取代樹狀黴菌IF03 750以外，如實施例1般試出僞麻黃鹼之生成反應。但是無還原生成物。 (比較例3) 以龐貝裂殖酵母菌（Schizosaccharomyces pombe)IFO 03 58取代樹狀黴菌IFO3750以外，如實施例1般試出僞麻黃鹼之生成反應。但是無還原生成物。 (比較例4) 以枯草桿菌IFO3037取代樹狀黴菌IFO3750以外，如實施例1般試出僞麻黃鹼之生成反應。但無還原生成物。產業上可利用性如上之說明，若依據本發明光學活性/3 -胺基醇的製造方法，由α -胺基酮化合物或其鹽之對掌異構物化合物，充分防止非對映異構物之副產物生成，俾使所欲之具光學活性/3 -胺基醇具高收獲率且高選擇性又可以簡易工程來製造。因此，若依據本發明可使所欲之具有光學活性僞麻黃鹼具有高收獲率且能以簡易工程製造成爲可能，非常實用於醫藥或其中間體之製造過程。 -40-

Claims

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月”日修(更)正本六、申請專利範圍第901 04939號「光學活性卢-胺基醇之製法」專利案 (2005年5月27日修正）六申請專利範圍： 1 · 一種光學活性Θ —胺基醇之製造方法，其係由一般式（工）

(式中X爲相同或不同之至少一種選自鹵素原子，1〜6碳原子之院基，經保護基保護之經基’硝基及磺醯基；η 是0〜3之整數；R1是1〜6碳原子之烷基；R2，R3爲相同或不同之至少一種選自氫原子及1〜6碳原子之烷基；* 表不對稱碳原子）所示α -胺基酮化合物或其鹽之對掌異構物混合物，經由至少一種選自摩根氏菌屬 (Morganel la)、微菌屬 jMlc r ob a c t e r i um )、鞘氨醇菌屬 (Sphingobacterium)、類諾卡氏菌 S m〇 c a r d i ojd e^J,.-妙卡菌屬rMucor )、阿塞迪菌屬(Ab!id“）、麴菌屬 (Aspergillus)、青黴菌屬 I Pen i c_i. Π i um )、奇果菌屬 (Grifola)、曲黴菌屬、靈芝菌屬 (Ganoderma)、肉座菌屬丄、螺旋枝黴菌屬 (Helicostvlum)、輪枝孢菌屬、鐮刀菌屬(Fusarium)、三泰拉青菌屬.(T r i t i r L〇 h i um^、被孢黴菌屬(Mort ierella)、假蜜環菌屬(A r m i 1 1 a r i e Uai,、柱 1245801 六、申請專利範圍盤孢菌屬(Cvlindrocarpon)、克雷氏菌屬 (Klebsiella)、金色菌屬(Au r eobac t e r i um )、黃單胞菌屬(Xan t homona s )、假單胞菌屬(Pseudomonas )、分支桿菌屬(Mycobacterium)、擲孢酵母菌屬 (Spo r obo 1 omvc e s )、鎖鄭孢酵母菌屬 (Sporidiobolus)、擬無枝酸菌屬(Amycolatopsis)、可普來內氏菌屬(Cop r i nu s )、沙雷氏菌屬(S e r r a t i a )、紅球菌屬(Rhodococcus)、紅酵母菌屬(Rhodo t o r u 1 a )等之微生物作用而生成一般式（II)

(Π) (式中X，η，R1，R2，R3及*同前之定義）所示之具有所欲光學活性之光學活性0 -胺基醇化合物。 2 .如申請專利範圍第1項之光學活性-胺基醇之製造方法，上述微生物爲至少一種選自摩根尼摩根氏菌 (Morganella morganii)、樹狀微菌(Microbacterium a r b〇 r e s c_e_n s )、多食鞘氨醇菌(Sph i ngobac t e r i um mult i vQ..i；JLn])、單純類諾卡氏菌(No c a r d i o i d e s simp l.e.x,!、分歧妙卡菌(Muco r amb i guu s )、爪哇妙卡菌 (Mucor ,j,..,a.vani cus )、易碎妙卡菌(Mucor f ragi 1 i s )、

1245801 六、申請專利範圍衣戚司密阿塞迪菌(Absidia lichtheimi )、泡盛麴菌 (Aspergillus awamo r i )、黑麴菌(Aspergillus n i g e r )、米麴菌(Aspergillus orvzae )、白麴菌 (Aspergillus c and i u s ) ' 變種米麹菌(Aspergillus orvzae var. orvzae)、酸性變種富堤麴菌 (Aspergillus foetidus v a r . acidus)、草酸青黴菌 (Penicillium oxalic um) ' 福蘭多沙奇果菌(G r i f ο 1 a f rondosa)、爬行曲黴菌(Eurotium repens )、露西靈芝菌(Ganoderma 1 u c i dum ) ' 膠狀肉座菌(Hydoc r e a ge 1 a t i no s a )、奈格螺旋枝黴菌(He 1 i co s t y 1 um nigricans)、變異共真菌輪枝孢菌(Ve r t i c i 1 1 i um fungicola var. fungicola)、玫瑰鐮刀菌(Fu s a r i um r o s e um ) ' 米三泰拉青菌屬(Tritirachium oryzae) ' 艾沙貝那被孢黴菌(Mortierella isabellina)、米勒假蜜環菌(Armi 1 Uriel la mel lea)、硬化柱盤孢菌 (Cyl indrocarpon s c 1 e r o t i genum )、肺炎克雷氏菌 (Klebsiella pneumoniae)、酉旨香金色菌 (Aureobacterium esteraromaticum)、黃單胞菌 (Xan t homonas s p .) ' 惡臭假單胞菌(Pseudomonas pu t i d a ) ' 包皮垢分支桿菌(Mycobacterium smegma t i s ) ' 迪氏分支桿菌(Mycobacterium diernhoferi )、母牛分支桿菌(Mycobacterium v a c c a e )、草分支桿菌(Mycobacterium phlei)、偶然分

1245801 六、申請專利範圍支桿菌(Mycobacterium f 〇 r t u i t um )、產氯黴素分支桿菌(Mycobacterium chi o r opheno 1 i um )、鮭魚色摟P 孢酵母菌(Spo robo 1 omyce s salmonicolor)、克拉立彿蜜司擲孢酵母菌(Sporobolomyces coralliformis)、強森氏鎖攤孢酵母菌(Sporidiobolus iohnsonii)、白色擬無枝酸菌(Amy co 1 atopsis alba)、藍色擬無枝酸菌 (Amvco 1 a t ops i s azurea)、科羅拉多擬無枝酸菌 (Amvco 1 a t ops i s coloradensis)、東方擬無枝酸菌薈黃亞種(Amy co 1 a t ops i s orientalis luridda)、東方擬無枝酸菌東方亞種(Amvco 1 a t op s i s orientalis orientalis)、根狀可普來內氏菌(Cop r i nu s rhi zophorus )、黏質沙雷氏菌(Rhodococcus r hodoch r ou s ) ' 橙黃色酵母菌(Rhodo t o r u 1 a auran t i aca )等之微生物爲佳。 3 ·如申請專利範圍第1項之光學活性/3 -胺基醇之製造方法，上述微生物爲至少一種選自摩根氏菌屬 (Mo r gane 1 1 a )、微菌屬(Microbacterium)、鞘氨醇菌屬 (Sph i ngobac t e r i um) ' 類諾卡氏菌屬(Nocardioides^ > 妙卡菌屬(Muco r )、阿塞迪菌屬(Ab s i d i a )、麴菌屬 (Aspergillus)、青黴菌屬(Pen i c i 1 1 i um )、奇果菌屬 (G r i f ο 1 a )、曲黴菌屬(E u r o t i u m )、靈芝菌屬 (Ganoderma)、肉座菌屬(Hypo c r e a )、螺旋枝黴菌屬 (Helicostvlum)、輪枝孢菌屬(Ye r t i c i 1 1 i um )、鐮刀菌 1245801 六、申請專利範圍屬(Fu s a r i um )、三泰拉青菌屬(Tritirachium)、被孢黴菌屬(Mortierella)、假蜜環菌屬(Armillariella)、柱盤孢菌屬(Cv 1 i nd r oc a r pon )、克雷氏菌屬 (Klebsiella)、金色菌屬(Aureobacterium)、黃單胞菌屬(Xan t homona s)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、分支桿菌屬(Mycobacterium)、擲孢酵母菌屬 (Sporobol omvces )、鎖擲孢酵母菌屬 (Sporidiobolus) ' 紅球菌屬(Rhodococcus )，以及該一般式（11 )所示光學活性々-胺基醇爲（1 S，2S )-胺基醇。 4 .如申請專利範圍第3項之光學活性Θ -胺基醇之製造方法，其特徵爲上述微生物至少一種選自摩根尼摩根氏菌 (Morganel la mo r g an i i ) ' 樹狀微菌(Microbacterium—— arborescens ) ' 多食鞘氨醇菌(Sphingobacterium mu 1 t i v o r um ) ' 單純類諾卡氏菌(Nocardioides simplex) '分歧妙卡菌(Muco r amb i guu s ) '爪卩圭妙卡菌 (Mu c o r i avan i cus )、易碎妙卡菌(Mucor fragilis)、衣戚司密阿塞迪菌(Absidia lichtheimi)、泡盛麴菌 (Aspergillus awamo r i )、黑麴菌(Aspergillus niger )、米麴菌（A s d e r g i 1 1 u s o r v z a e )、白麴菌 (Aspergillus candius)、變種米麴菌(Aspergillus orvzae var, oryzae)、酸性變種富堤麹菌 (Aspergillus foetidus v a r . acidus)、草酸青黴菌 (Penicillium oxalicum)、福蘭多沙奇果菌(G r i f ο 1 a 1245801 、申請專利範圍 frondosa) '爬行曲黴菌(Eurotium repens) '露西靈芝菌(Ganoderma luci dum )、膠狀肉座菌(Hy doc r e a g e 1 a t i no s a ) ' 奈格螺旋枝黴菌(Helicostylum nigricans)、變異共真菌輪枝孢菌(V e r t i c i 1 1 i um f ung i co 1 a v a r . f ung i co 1 a )、玫瑰鐮刀菌(Fu s a r i um r o s e um ) ' 米三泰拉青菌屬(Tritirachium orvzae) ' 艾沙貝那被孢黴菌(Mortierella isabellina)、米勒假蜜環菌(Armillariella mellea)、硬化柱盤孢菌 (Cv 1 i nd roca r pon s c 1 e r o t i genum )、肺炎克雷氏菌 (Klebsiella pneumoniae)、酉旨香金色菌 (Aureobacterium esteraromaticum)、黃單胞菌 (Xan t homon a s s p .) ' 惡臭假單胞菌(Pseudomonas pu t i d a ) ' 包皮垢分支桿菌(Mycobacterium s me gma t i s ) ' 迪氏分支桿菌(Mycobacterium diernhoferi ) ' 母牛分支桿菌(Mycobacterium v a c c a e ) ' 草分支桿菌(Mycobacterium phlei)、偶然分支桿菌(Mycobacterium fortuitum)、產氯黴素分支桿菌(Mycobacterium chlorophenol ium)、鮭魚色摟P 孢酵母菌(Spo r obo 1 omyc e s s a 1 mon i co 1 o r )、克拉立彿蜜司擲孢酵母菌(Spo r obo 1 omvc e s coralliformis)、強森氏鎖擲孢酵母菌（SDoridiobolus iohnsonii)、灰暗紅球菌(Rhodococcus ervthropolis)、玫瑰紅紅球菌 (Rhodococcus rhodochrous) ° 1245801 六、申請專利範圍 5 .如申請專利範圍第1項之光學活性Θ -胺基醇之製造方法，上述微生物爲至少一種選自擬無枝酸菌屬 (Amvco 1 a t ops i s )、可普來內氏菌屬(Copr i nusl、沙雷氏菌屬(Se r r a t i a )、紅球菌屬(Rhodococcus )、紅酵母菌屬(Rhodotorula)等之微生物，以及該一般式（I I )所示光學活性/3 -胺基醇爲（1R，2R)-胺基醇。 6 .如申請專利範圍第5項之光學活性/3 -胺基醇之製造方法，其特徵爲上述微生物至少一種選自白色擬無枝酸菌 (Amvco latopsis alba)、藍色擬無枝酸菌 (Amvco 1 a t ops i s azu r e a )、科羅拉多擬無枝酸菌 (Amycolatopsis coloradensis)、東方擬無枝酸菌薈黃亞種(Amycolatopsis orientalis luridda)、東方擬無枝酸菌東方亞種(Amy colatopsis orientalis ,or_i,.ent aj i s ).、根狀可普來內氏菌(Copr inus Lh„iz,〇Bho,rus ),、黏質沙雷氏菌(Serrat ia gl,.a_i： c e s c e n s ),、灰暗紅球菌(Rhodococcus er_yA.h.r〇P-Ql Ul -玫瑰紅紅球菌（Rhodo c o c c u s lhodochr,Qu,sJ,^ 橙黃色酵母菌（Rhodo t o r u 1 a aurantiaca) 〇 7 .如申請專利範圍第1 - 6項中任一項之光學活性/3 -胺基醇之製造方法，其特徵爲將一般式（111) 1245801 六、申請專利範圍 R5r4〜<r6 (奶 (式中R4是1〜6碳原子之烷基；R5，R6爲相同或不同之氫原子，1〜6碳原子之烷基或2〜7碳原子之醯基，Y 爲C = 0或CH - 0H )所示活性誘導劑添加到培養基中培養上述微生物。