TWI230609B - Combination therapy for the treatment of cancer - Google Patents
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1230609 A7 B7 五、發明説明（1 ) 發明背景 發明領域 本發明疋有關利用蛋白質酷胺酸激酶抑制劑組合以環氧 酶抑制劑’特別是環氧酶-2選擇性抑制劑，以治療或預防 贅瘤失調症之方法。 技藝之陳述 贅瘤’或腫瘤是細胞生長不正常，未受控制及無組織之 增殖。贅瘤若有破壞性生長，具侵略性及轉移現象是屬惡 性或癌性。具侵略性是指經由周圍組織之浸潤或破壞使贅 瘤局邵的散布，通常是打破界定組織界線之基底薄層，由 疋常會進入身體之循環系統。轉移通常是指腫瘤細胞為淋 巴或血管所傳佈。轉移也指腫瘤細胞經由漿液腔，或蛛網 膜下或其他2間之直接擴展。經由轉移過程，腫瘤細胞可 轉移至身體其他區域，而在遠離最初出現位置的區域發展 出贅瘤。 癌症目前是全美第二大死因，且每年在美國有超過 8，000,000人口被診斷出有癌症。在1995年，癌症死亡占全 美死亡例之 23.3% (見 U. S· Dept· of Health and Human Services, National Center for Health Statistics, Health United States 1996-97 and Injury Chartbook 1 17 (1997)) 〇 癌症在分子層次上尚未被完全瞭解。已知將細胞曝於致 癌物下’如某些病毒，某些化學藥物，或放射線，會使 D N A改變，其或使"遏止性”基因失去活性或可活化"致癌 基因π。遏止性基因為生長調控基因，其一旦突變將不再 控制細胞生長。致癌基因最初是正常基因（稱致癌基因原） -4 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐) 1230609 A7 _______ B7 五、發明説明（2 ) ’其經由突變或表現不同之内容而變成轉形基因。轉形基 因之產物可引起不適當的細胞生長。經由遺傳改變，有超 過2 0種不同的正常細胞基因會變成致癌基因。經轉形細胞 與正常細胞在許多方面不同，包括細胞外形，細胞與細胞 足父互作用，膜内容物，細胞支架結構，蛋白質之分泌， 基因表現及不朽性（經轉形細胞會無限地生長）。 癌症目前主要以三種療法之一或組合來處理：外科手術 放射線’及化學治療。外科手術涉及有病組織之大量刻 除。而外科手術在移除位於某些位置上之腫瘤有時是有效 的’如在乳房，結腸及皮膚，其無法用來治療位於其他區域 之腫瘤’如脊骨，也無法治療播散性贅瘤狀況，如白血病。 化學治療涉及細胞複製或細胞代謝之瓦解。其最常用於 治療乳房，肺及睪丸癌。 用於治療贅瘤疾病之全身性化療之副作用，是病人在進 行癌症治療中最怕遇到的。在這些副作用中，噁心及嘔吐 是最常見且嚴重的副作用。其他副作用包括血球減少，感 染’惡病質，黏膜炎’此為接受高劑量化療加上骨髓救援 或放射治療之病人所見；脫髮；角質併發症（見M. D. Abeloff, et al. Alopecia and Cutaneous Complications. P. 755^ 56，In Abeloff，M· D·，Armitage，J. 0·，Lichter，A· S·，and
Niederhuber, J. E. (eds) Clinical Oncology. Churchill Livingston,
NeW Y〇rk，1992，關於角質對於化療劑之反應），如瘙癢/ 蓴麻療’及血管水腫；神經學併發症；肺及心臟併發症，此 在接觉放射或化療病人中所見；及生殖及内分泌併發症。 -5 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(2i〇x297公^ 1230609 五、發明説明（ 化療所謗生之副作用可嚴重地衝擊病人之生活品質，且 可劇烈地影響病人對於治療之順服性。 另外，與化療劑有關之不良副作用通常是這些藥物投予 中之大劑量-限制毒性（DLT)。例如，黏膜炎，是許多抗癌 劑之取大劑量限制毒性之一，包括抗代謝胞命劑5-FlJ，胺 甲碟呤，及抗腫瘤抗生素，例如艾黴素（d〇x〇rubicin)。這些 化療-誘生之副作用，有許多若嚴重會導致住院，或需以 鎮痛劑治療來處理疼痛。 由化療劑及放射治療和誘生之不良副作用，已變成癌症 病人臨床處理上十分重要的課題。 目前，科學家正經由抗血管生成劑之使用來治療癌症。 咸信血管生成是一種由此腫瘤取得所需營養物以在體内生 長及轉移至其他部位之機制。抗血管生成劑可以干擾這些 過程，並破壞或抑制腫瘤。 例如U· S· Pat No. 5,854,205描述一種經分離之血管内膜 阻生素（endostatin)蛋白質，其為内皮細胞增殖及血管生成 之抑制劑；U· S· Pat No. 5,843,925描述7-[經取代之胺基]-9- [(經取代之甘胺醯基醯胺基]-6-去甲基-6-去氧四環素，抑 制血管生成及内細胞增殖之方法；U. S. Pat. No. 5,861，372 描述聚集式内皮抑制劑-新血管阻生素（或稱血管抑素'， angiostatin)及其在抑制血管生成之用法；pct/gB97/00650 描述噌啉（cinnoline)衍生物之用法，可造成抗血管生成作 用及/或減低血管滲透性；Tai-Ping，D-描述潛在的抗-血管生成療法，見Trends Pharmacol· Sci. 16，No. 2，57-66，1995; -6 - 本纸乐尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐)
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線 1230609 A7 __B7_. 五、發明説明（4 )
Lode，H· et· al·描述抗血管生成之整合素αν拮抗劑及抗體· 細胞動素融合蛋白質間之協同可惡化自主之腫瘤轉移，見 Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 96(4), 1591-1596, 1999; Giannis, A· et al描述整合素拮抗劑及其他低分子量化合物充作血管 生成之抑制劑，見 New drugs in cancer therapy. Angew. Chem. Int. Ed· Engl· 36(6)，588-590，1997; WO 97/41,844^ 述使用血管抑素化合物之組合，以預防及/或治療人類病 患之新血管生成；WO 98/22,101描述利用[吡咯唑-1-基]苯 磺醯胺充作抗-血管生成劑之方法；及US Pat 5,792,783描 述使用3 -雜芳基-2 -啕哚琳酮，其為蛋白質激酶抑制劑以 及抗血管生成劑，以治療各種癌症。 近來，有報告指出以環氧酶-2選擇性抑制劑，尤其是希 樂葆（Celecoxib®)，組合以ART-2抑制劑，尤其是賀癌平 (Herceptin®)治療結腸直腸癌，轉任一作用物單獨使用更有 效率。因此，需發現化療劑之新組合，其當一起使用較單 獨使用更有效率。本發明完成此需求。 發明要點 在一方面，本發明是有關治療或預防癌症之方法，此方 法包括對需此治療之哺乳動物投予治療有效劑量之： 式（I)之蛋白質激酶抑制劑： R7 R6
本紙張尺度適用中國國家榡準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609 A7 ___ B7___ 五、發明説明（5 ) 其中：· R選自下列包括氫，哌畊-1 -基甲基，4 -甲基哌畊-1 -基 甲基，哌畊-1 -基甲基，2 -羥基甲基哌咯啶-1 -基甲基，2 -羧基吡咯啶-1 -基甲基，及吡咯啶-1 -基甲基； R1選自下列包括氫，li，燒基，經取代的燒基，環燒基 ，經取代之環烷基，芳基，雜芳基，雜脂環族，羥基，烷 氧基，-C(0)NR8R9，-NR13R14，-C(0)R15，及-(CH2)rR16 ; R2選自下列包括氫，鹵，烷基，經取代的烷基，三鹵甲基 ，羥基，烷氧基，氰基，-NR13Ri4，-NRi3C(0)RM，-C(0)Ri5 ，芳基，雜芳基，及·3(0)2Νΐυ3ΙΙΐ4 ; R3選自下列包括：氫，鹵，烷基，經取代的烷基，三鹵甲 基，羥基，烷氧基，芳基，雜芳基，-NR13R14，-NRHSWhRM ，-S(0)2NR13R14，-NR13C(0)R丨4，-NR13C(0)0RM，-(C0)R15 ，及-S02R19 ; R4選自下列包括氫，鹵，烷基，經取代的烷基，羥基， 烷氧基，及-NR13R14 ; R5選自下列包括氫，烷基，經取代的燒基，及-C(0)Ri〇 ; R6選自下列包括氫，烷基，經取代的烷基，及-C(0)Ri〇 ; R7選自下列包括氫，烷基，經取代的烷基，芳基，雜芳 基，-C(0)R17，及-C(0)R1G，限制條件為當R是氫，則R5， R6及R7至少一者是-C(0)R1G;或 R6及R7可組合形成基團，選自下列包括-(CH2)4-，-(CH2)5-及-(ch2)6-; R8及R9獨立選自下列包括氫，烷基，經取代的燒基，及 -8 - 本纸張尺度適用中國繭家搮準(CNS) A4規格(210x 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（6 ) 芳基；
Ri〇選自下列包括羥基，烷氧基，芳氧基，-N(R")(伸烷 S)nR12，其中伸烷基視所需為羥基所取代，及-NR13R14 ; R11選自下列包括氫，烷基，及經取代的烷基；
Rn選自下列包括-NR13R14，羥基，-C(0)R15，芳基，雜芳 基，-N+(〇-)R13R14，-N(OH)R13，及-NHC(0)R18 (其中 R18是烷 基，經取代的烷基，画烷基，或芳烷基）； R13及R14獨立選自下列包括氫，烷基，經取代的烷基， 低碳烷基及羥烷胺基所取代，氰烷基，環烷基’經取代的 環烷基，芳基及雜芳基；或 R13及R14可組合形成雜環基；
Ri5選自下列包括氫，羥基，烷氧基及芳氧基；
Ri6選自下列包括羥基，-NR13R14，-C(0)R15，及-C(0)NR13R14 ; R17選自下列包括烷基，經取代的烷基，環烷基，芳基及 雜芳基； R19選自下列包括烷基，經取代的烷基，芳基，芳烷基， 雜芳基，或雜芳烷基；且 η及r是獨立的1，2，3或4; 並組合以環氧酶抑制劑； 或其藥學上可接受之鹽。 較好，式（I)之蛋白質激酶抑制劑可組合以環氧酶2選 擇性抑制劑·，選自下列包括： (i)式（II)化合物： -9 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（7 R 10a
R iia R 12a 其中： G選自下列包括〇，S及-NRa-其中Ra是氫或烷基；
Rl〇a選自下列包括氫及爹基；
Rlla選自下列包括羧基，烷基，芳烷基，胺基羰基，烷 基橫酿胺基藏基及坑氧羰基； R12a選自下列包括鹵烷基，烷基，专烷基，環烷基及芳 基視所需為一個以上選自下列的基團所取代：坡硫基’硝 基及燒基橫疏基；且 RHa是一個以上獨立選自下列的基團包括：氫，鹵，烷 基，芳烷基，烷氧基，f氧基，举芳氧基，芳烷氧基，雜 芳烷氧基，函烷基，南烷氧基，蟓胺基，爹胺基，芳烷胺 基，雜芳胺基，雜芳烷胺基，硝基，胺基，胺基磺醯基， 烷胺磺醯基，芳胺磺醯基，雜芳胺基磺醯基，芳烷胺基磺 醯基，雜芳烷基胺基磺醯基，雜環磺醯基，烷磺醯基，羥 基芳羰基，硝芳基，视所需取代之芳基，視所需取代的雜 芳基，芳烷羰，雜芳羰基，芳羰基，胺羰基及烷羰基； 或R13a加上E環形成莕基環；或 (ii)式（III)化合物： _ - 10 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（8
R3b (III) 其中： A選自下列包括部份未飽和或未飽和之雜環基及部份未 飽和或未飽和的碳環；
Rib選自下列包括雜環基，環烷基，環烯基及芳基，其中 Rlb是視所需在可取代位置上為一個以上獨立選自下列的基 團所取代，選自烷基，_烷基，氰基，羧基，烷氧羰基， 羥基，羥烷基’自烷氧基，胺基，烷胺基，芳胺基’硝基 ，烷氧烷基’统基亞磺醯基，函，烷氧基及烷硫基； R2b選自下列包括甲基及胺基；且 R3b選自下列包括：氫，_，虎基，烯基，块基，酮基’ 氰基，羧基，氰烷基，雜環氧基，烷氧基，烷硫基，烷羰 基，環烷基，芳基，自烷基，雜環基，環烯基，芳烷基’ 雜環基烷基，醯基，烷基硫烷基，羥烷基，烷氧羰基’芳 黢基，芳燒黢基’芳烯基’燒氧虎基’芳硫燒基’芳氧挽 基，芳烷基硫烷基，芳烷氧烷基，烷氧基芳烷氧基烷基’ 烷氧羰基烷基，胺羰基，胺羰基烷基，烷胺基羰基，N -芳 基胺基羰基，N-烷基-N-芳基胺基羰基，烷胺基羰基烷基 ，羧烷基，烷胺基，N -芳胺基，N -芳烷胺基，N-烷基-N-芳烷胺基，N-烷基-N-芳胺基，胺烷基，烷胺烷基’ -11 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 A7
1230609 A7 B7 五、發明説明 上皮腺癌結節性黑色素瘤，燕麥細胞癌，寡樹突膠質，骨 肉瘤，胰多肽乳頭狀漿液性腺癌，松果腺細胞，腦下腺腫 瘤’漿細胞瘤，擬肉瘤，肺胚細胞瘤，腎細胞癌，視網膜 胚細胞瘤，橫紋肌肉瘤，肉瘤，漿液樣癌，小細胞癌，軟 組織癌，分泌-生長激素阻生素之腫瘤，鱗狀癌，鱗狀細 胞癌’間皮下，表面散佈性黑色素瘤，未分化癌，葡萄膜 黑色素瘤，角化型疣狀癌，血管活性腸瘤，充份分化之腫 瘤’及胚性癌肉瘤。 本發明方法提供一個以上的益處。益處之一是本發明之 、’且a物’作用物及療法可在低劑量，較個別組份各自單獨 才又丁之臨床狀況傳統用法還低之劑量下組合地投藥。 本發明之化合物，組合物，作用物及療法及較低之劑量 投予至哺乳動物的一個益處包括，可減低與較高劑量下相 關副作用之發生率。如，降低治療劑一胺甲碟呤之劑量， 可降低在較高劑量下所觀察到之噁心及嘔吐之頻率及嚴重 性。當本發明之蛋白質激酶抑制劑組合環氧酶抑制劑使用 時，特別是環氧酶-2選擇性抑制劑，可得到類似之益處。 降低副作用之發生率，可使癌症治療病人之生活品質有 所改善。降低副作用發生率之進—步益處包括病人順從性 之改進|減少因治療劑作用而住院之次數，以減少因副作 用所致疼痛下服用鎮痛劑之需求。 另一益處是當蛋白質激酶抑制劑組合環氧酶抑制劑投予 時，較好是環氧酶_2選擇性抑制劑，則腫瘤之抑制作用較 任一作用物單獨投予時均大。 _______ - 13 - 本紙張尺度適財s ------------------------- !23〇6〇9 A7 B7 i、發明説明 自下列的基團所取代，視所需經取代之低碳烷基（為1或2 個獨立選自羧基或酯所取代），_烷基，氰基烷基，鹵， 硝基，氰基，羥基，烷氧基，胺基，單烷胺基，二烷胺基 ’芳烷基，雜芳烷基，-COR (其中R是烷基）或-COOR其中 R是（氫或烷基）。較特異地，雜環基不受限地包括：四氫 吡喃基，2,2-二甲基-l，3-二呤戊烷，哌啶基，N -甲基哌啶-3 -基，3 -吡咯啶基，嗎福啉基，硫嗎福啉基，硫嗎福啉_ 1 -化氧’硫嗎福p林基-1，1 - 一*氧化物’ 4 -乙氧魏基^辰p井基， 3 -酮基峰畊基，2 -咪唑啶酮，2 -吡咯啶酮，2 -酮基高喊畊 基，四氫嘧啶-2 -酮，及其衍生物。較好，雜環基視所需 為一或二個獨立選自下列之取代基所取代：自，低碳烷基 ，低碳烷基為羧基，酯羥基，單或二烷胺基所取代。 π羥基”指-Ο Η基。 '•烷氧基"指-0 -(烷基）及-0 -(環烷基）二者。具代表性 之不受限實例包括：曱氧基，乙氧基，丙氧基，丁氧基， 環丙氧基，環丁氧基，環戊氧基，環己氧基等。 π芳氧基π指-0 -芳基及-0 -雜芳基，如上文所定義。具 代表性之不受限實例包括：苯氧基，吡啶基氧基，呋喃基 氧基，噻吩基氧基，嘧啶基氧基，吡畊基氧基等，及其衍 生物。 ’’鲮基"指-SH基。 ’’烷硫基”指-S -烷基及-S -環烷基。具代表性之不受限實 例如：甲硫基，乙硫基，丙硫基，丁硫基，環丙硫基，環 丁硫基，環戊硫基，環己硫基等。 -20 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐)
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1230609 A7 _ _B7_.___ 五、發明説明（18 ) π芳硫基π指-S -芳基及_ S -雜芳基，如上文所定義。具代 表性之不受限實例包括：苯硫基，吡啶基硫基，呋喃基硫 基，魂吩基硫基，ρ密淀基硫基等，及其衍生物。 π醯基π指-(：(0)-11”基，其中的R，’選自下列包括氫，低碳 烷基，三_甲基，環烷基，芳基視所需為一個以上，較好 一，二或三個選自下列的取代,基所取代：低碳烷基，三鹵 甲基，低碳烷氧基，鹵及-NR18R19，雜芳基（經由環碳而键 結）視所需為一個以上，較好一，二或三個選自下列的取 代基所取代，包括：低碳燒、基，三鹵燒基，低碳虎氧基， 鹵及-NR18R19基及雜脂環（經由環碳而鍵結）視所需為一個 以上，較好一，二或三個選自下列的取代基所取代，包括 :低碳燒基，三鹵燒基，低碳燒氧基，鹵及_NR18R19基.。 具代表性之不受限醯基包括：乙醯基，三氟乙醯基，芊醯 基等。 π醛"指一種醯基，其中R ··是氫。 ”硫醯基”指-C(S)-R"基，其中R"如此中所定義。 ”酯，，指-C(0)0-R”基，R”如此中所定義，除了 R"不可為 氫。 π乙醯基’’指-c(o)ch3基。 π鹵π指氟’氯’溴或碘，較好是氟或氣。 "三齒甲基，，指-CX3基，其中χ是卣基如上文所定義。 "三甲烷磺醯基"指X3CS(=K)2_基，其中χ如上文所定 義。 π吼基”指-C ξ N基。 •21 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公& 1230609 A7 B7 五、發明説明（19 ) "" " ’’伸甲基二氧基”指-OCH2〇-基’其中二個氧原子键結至 相鄰的碳原子。 n伸乙基二氧基，，指-OCH2CH2〇-基，其中二個氧原子鍵結 至相鄰的碳原子。 ns-磺醯胺基，，指-S(0)2NRi8Ri9基，其中Rl8及R19如此中 所定義。 ” N-磺醯胺基”指-NRiss(0)2Ri9基，其中R18及R19如此中 所定義。 ”0-胺甲醯基”指-0C(0)NR18R19基，其中R18及R19如此中 所定義。 ΠΝ-胺曱醯基”指Ri8〇C(0)NR19_基，其中R18及R19如此中 所定義。 硫胺甲醯基’H〇C(S)NR18Ri9基，其中^^及！^9如此 中所定義。 ΠΝ•硫胺甲醯基”指Ri8〇C(S)NR19-基，其中Ri8及Ri9如此 中所定義。 π胺基’•指-NR18N19基，其中Ris及Ri9均為氫。 "C-醯胺基”指-C(0)NRi8Ri9基，其中R18及R19如此中所定 義。 •’N-醯胺基••指RuqCONRB-基，其中R18&Ri9如此中所 定義。 ’’硝基”指-N02基。 ”鹵烷基π表示烷基，較好是低碳烷基，如上所定'義，其 可為一個以上相同的或不同的鹵原子的取代，如-CH2C1， -22 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（20 ) -CF3，-CH2CF3，-CH2CC13，及其他。 π芳烷基"指烷基，較好是如上定義之低碳烷基，其可以 芳基所取代，如上所定義，如_CH2苯基，-(CH2)2苯基， -(CH2)3苯基，CH3CH(CH3)CH2苯基，等及其衍生物。 "雜芳烷基”基表示烷基，較好是低碳烷基如上文所定義 ’其可為雜芳基所取代，如-CH2吡啶基，-(CH2)2嘧啶基， -(CH2)3咪唑基，及其他及其衍生物。 π單烷胺基”表示-NHR基，其中R是未經取代的烷基或環 烷基，如上文所定義，如甲胺基，（丨_甲基乙基）胺基，環 己胺基，等。 1 一燒胺基”表示-NRR其中各R是獨立的未經取代的燒基 或環烷基，如上文所定義，如二甲胺基，二乙胺基，（i _ 甲基乙基）-乙胺基，環己基甲胺基，環戊基甲胺基等。 ”亂燒基π表示燒基，較妤是低碳燒基如上文所定義，其 可為1或2個氰基所取代。 π視所需的”表示接下来所述之事件或狀況可但未必要發 生，且描述包括其中事件或狀況發生及未發生例子。如， π雜環基視所需為烷基所取代”表示烷基可能但未必要存在 ，且說明中包括雜環基為烷基所取代之狀況，及雜環基不 為烷基所取代之狀況。 π 2 - 4丨嗓酮π，"啕嗓-2 -酮"及"2 -經吲嗓"在此可互換使 用，指具有下化式之分子：
-23 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐) 1230609 A7
吡咯"指具下式之分子：
"吡咯取代之2·β哚酮"及，，3_亞吡咯啶基_2_b?丨哚酮"在 此可交換使用，以指具有式（1)所示結構之化學化合物。 具有相同分子式之化合物’但其原子鍵結之本質或次序 或其原子在空間之排列不同時，稱為"異構物"。其原子在 空間之排列不同之異構物稱為”立體異構物，，。 互相非鏡像之立體異構物稱為”非對映立體異構物，，，而 互相非-可重疊之鏡像者稱為”對映體"。當化合物具有一 個不對稱中心，其如鍵結至4個不同的基團，則一對對映 體是可能的。對映體之特徵在於其不對稱中心之絕對構蜇 ，且以Cahn及Prelog之R-及S-定序法則描述，或經由分子 在極化光平面之旋轉方式並命名為右旋或左旋（即，（+ )或 (-))。一個對掌性化合物可以個別的對映體或呈其混合物 型式存在。含有對映體等比例之混合物稱為π外消旋混合 物，，〇 本發明化合物可具有一個以上的不對稱中心；此化合物 因此可產生個別的（R)_或（s)-立體異構物，或呈其混合物 。例如，若在式（I )化合物中之R6取代基是^ _輕乙基，則 爽基所黏附之碳是個不對稱中心，且因此式（丨）化合物吁
" -24 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇χ29^>Λ) 1230609 A7 B7 五、發明説明（22 ) 以（R)-或（S) -立體異構物存在。除非另有所示，在說明書 及申請專利範圍中特殊化合物之說明或命名，包括個別的 對映體及混合物，其外消旋物或其他。決定立體化學及分 離立體異構物之方法是技藝中熟知的（見”Advanced 〇rganic Chemistry” 第 4 章之討論，4th edition j·心灿，J〇hn 別⑽ and Sons, New York, 1992) ° 本發明化合物可呈現互變異構物及結構異構化之現象。 例如，式（I)化合物如此中所述，可在將2_啕哚酮部份與 比各邙伤連接之雙鍵上呈E或Z構型，或可為E及z之混合 物。本發明包括任何的互變異構或結構異構型式及立混合 物，其具有調控PTK，CTK及/或STK活性之能力且不 限於任何一種互變異構或結構異構型式。 ”醫藥組合物”指此中所述一種以上化合物之混合物，或 其生理上/藥學上可接受之鹽或前藥，加上其他的化學組 份、，如生理上/藥學上可接受之載劑及賦形劑。醫藥組合 物之目的是促進化合物投予至有機體。 :發明化合物可以前藥型式作用。"前藥"是指可於活體 内：化成母藥之作用物。前藥常是有用的，因為在某些例 ::，其較母藥更易於投予。例如，其口服是具生物;】用 性的’而母藥❹。前藥在„組合物巾母 :進之溶解度。前藥之未受限實例可為本發明之=為 式（"前藥·，）投予以促進傳送穿越細胞膜，而水溶 :對移動力具有決定性’再代謝地水解或幾酸，即活性實 旦在細胞内此中水溶液是有益的。 -25 - 1230609 A7
前藥的進一步實例可以σ 一 1〇個胺基酸之多肽，:：段短夕月太，如不受限的有2. 幾基，其中多肽於活；内由2胺基鍵結至本發明化合物之 式⑴化合物之前藥心二解或代謝，以釋出活性分子。 、4 1係在本發明範圍之内。 另外希主式⑴化合物在有^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ 物。此代謝物也在本發明範圍之卜 射 如此中所用的，丨丨+ :田L # 上/藥學上可接受之載劑”指對右 機體不會引起顯著刺激性，且不會消去生物活載二= 化合物特性之載劑或稀釋劑。 ”藥學上可接受之賦形劑，，指加至醫藥組合物中之惰性物 質，以進-步促進化合物之投予。賦形劑之實例不受限地 包括碳酸劈，磷酸_，各種糖及殿粉型式，纖維素衍生物 ，明膠，植物油及聚乙二醇。 如此中所用的，”藥學上可接受的鹽，，指保有母化合物之 生物效力及特性之鹽，此鹽包括： (1)酸加成鹽’其中母化合物之自由態鹼與無機酸之反 應而得，酸如氫氣酸，氫溴酸，硝酸，磷酸，硫酸及高氯 故等’或與有機酸反應而得，如醋酸，草酸，（D)或（l)蘋 果酸，馬來酸，甲烷磺酸，乙烷磺酸，對位·甲苯磺酸， 水楊酸，酒石酸，檸檬酸，丁二酸或丙二酸等，較好是氫 氯酸或（L)-蘋果酸，如5-(5-氟-2-酮基-1,2-二氫亞4丨哚-3-基甲基）·2,4-二甲基_1H-吡咯·3·羧酸（2-二乙胺基乙基）醯 胺之L -蘋果酸鹽；或 -26 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐）
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1230609 A7 B7 五、發明説明（24 ) (2)當存在於母化合物之酸性質子或為金屬離子所取代， 如鹼金屬離子，鹼土離子；或與有機鹼配價時可形成鹽。 示例之離子包括鋁，鈣，鋰，鎂，鉀，鈉及鋅，於其尋常 之4貝數下。較佳之有機驗包括質子化之三級胺及四級铵陽 離子，包括（部份地）：三甲胺，二乙胺，N，N，·二芊基伸乙 基二胺，氣普魯卡因，膽鹼，二乙醇胺，伸乙基二胺，葡 萄胺（N-甲基葡萄糖胺）及普魯卡因。 方法’'指完成特定試驗之方式，方法，技術及步驟，包 括已知之方式，方法，技術及步驟但不限於此，或由已知 之方式’方法，技術及步驟由參與化學，藥學，生物，生 化及醫學技藝者容易地發展的。 ’’處理’’指任何過程，作用，應用，治療或其他，其中包 括人類之哺乳動物就直接或間接改進哺乳動物狀況之目的 接受醫藥輔助。特別關於癌症，這些術語單純地表示受癌 症侵犯之個體之壽命可增加，或可改善一種以上之疾病狀 況。此可由原發性或繼發性腫瘤之延緩出現，原發或繼發 腫瘤之緩慢發展，原發或繼發性腫瘤之減少發生，疾病二 次作用之緩解或減低嚴重度，遏止之腫瘤生長及腫瘤退化 ，等追蹤。 而預防包括預防所有臨床明顯贅瘤之發作，或預防高 危險群個體臨床前明顯的贅瘤階段之發作。在此定義中所 包括的尚有惡性細胞啟動之預防，或惡性前細胞演進成惡 性細胞之遏止或反轉。此包括有發展成贅瘤之危險群之預 防性治療。 、 -27 - 1230609 A7 B7 五、發明説明（25 ) ’’治療-有效的”用以定量出各作用物達成改進贅瘤疾病 嚴重性及各作用物本身隨治療而使其頻率有所改善之目標 ’同時可避免與不同治療通常有關之不良副作用之劑量。 ’’治療作用”或”治療有效劑量”用以定量出纾緩贅瘤失調 症一種以上症狀至某些程度下所需之抗癌劑劑量，症狀包 括下列，但不限於此：1 )癌細胞數目之減少；2 )腫瘤大小 之減少；3 )癌細胞浸潤至周邊器官之抑制（即減慢至某些 程度’較好是停止之）；3 )腫瘤轉移之抑制作用（減緩至某 些程度’較好停止）；4 )腫瘤生長之抑制，至某些程度； 5 )纾緩或減輕腫瘤失調症相關之一種以上症狀至某些程度 ’及/或6 )抒緩或減輕因投予.抗癌藥有關之副作用。 '组合治療”、（或”共同-治療，，）包括投予蛋白質激酶抑制 劑及環氧酶-2抑制劑，為特殊療程的一部份，以自這此治 療劑之共同作用中提供有益之效果。組合下之有益效果包 括由治療劑之組合下所致之 '藥物代謝動力學或藥物藥效學 共同作用。在組合下投予這些治療劑，通常於一定時間期 間中進行（通常歷數分，數小時，天或週，依所選用之組 合而定）。”組合治療"通常包括投予二種以上的這些治療 劑為分別單一療程的一部份，其會意外且任意地造成本發 明之組合。”組合治療"用以涵蓋這些治療劑以依序方式^ 予，即，其中各治療劑在不同的時間下投予，以及這些治 療劑，或至少其中二者，以實質上之同時方式投予。^ 上同時之投藥可由如對個體投予具有各治療劑固定比例之 單一膠囊，或針對各治療劑投予多個單一膠囊劑而達成<
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各治療劑之依序或實質 來達成，包括下列投樂可以任何適合的路程 由黏膜組織之直接；：：：此：：：，靜脈内，肌内及經 路徑投予》例如，組合中之第，:丨：以相同路徑或不同 式投予，…治療劑可二^劑可以靜脈内注射方 或均以靜脈内注射方m、$外，二種治療劑可口服 祕Μ許。”么a ·、 ^技樂。治療劑投予之次序並未狹窄 步以以包括如上述治療劑之投予，並進一 Li不=活性組份(如第二種及不同 處 、、d )及非藥物性治療（如外科手術或放射線治 時，放：：Γ於此)。其中組合治療進一步包括放射治療 乂她.療可在任何適合的時間進行，只要可達成治療 刎及放射治療組合之共同作用中之有益效果即可。例如， 在適口的例子中，當放射治療自治療劑投予中暫時地移去 時，可能數天或數週，仍可達成有益效果。 ”、輔助性治療”包括以可減少或避免本發明組合治療下有 關之副作用之治療，包括如可減少抗癌藥毒性作用之作用 物，如骨再吸收抑制劑，心臟保護劑；預防或減少因化療， 放射治療或手術所致之噁心及嘔吐之發生率；減少因投予 具遏止骨髓之抗癌藥相關感染症之發生率，但不限於此。 較佳具體實例 雖然在本發明要點中已示出最廣義之定義，但下列某些 式（I)，（II)及(III)化合物在實行本發明時，仍屬較佳。〜 A ·式（I)化合物-蛋白質酶胺酸激酿抑制劑·· (〇 較佳之式（I)化合物是其中R1，R3及R4是氩者。 -29 - 本纸银尺度適用申囷國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1230609 A7 B7 ------—-----—----— _. __ 五、發明説明（27 ) (2) 另一較佳之式（I)化合物是其中Ri，R2及R4是氫者。 (3) 另一較佳的式（I)化合物是其中Rl，R2及R3是氫。 (4) 另一較佳的式（I)化合物是其中R2，R3及R4是氫。 (5) 另一較佳的式（I)化合物是其中Rl，R2，R3及R4是氫。 (6) 又另一較佳的式（I )化合物是其中R5，R6及R7，較好R5 或 R6，又較好R6是-COR10，其中 R10是·Νΐ^ι((：Η2)ηΙ112其 中： R11是氫或低碳烷基，較好是氫或甲基； η是2，3或4,較好2或3;且 R12是-NR13R14，其中R13及R14是獨立的燒基，較好 是低碳烷基，或R13及R14組合形成選自-(C Η 2) 4 -, -(CH2)5-，-(CH2)2-0-(CH2)2-或-(CH2)2N(CH3)(CH2)2-, 較好R13及R14是獨立的氫，_甲基，乙基或組合形成嗎 福琳-4 -基，吡咯啶-1 -基’喊畊-1 -基，或4 -甲基喊 畊-1 -基。 較好R5或R6在上（6)中是N-(2-二甲胺基乙基）胺基 羰基，N-(2-乙胺基乙基）-N-甲基胺基羰基，N-(3-二甲 胺基丙基）-胺基羰基，N-(2-二乙胺基乙基）胺基羰基 ，N-(3-乙胺基丙基）胺基羰基，N-(3-二乙胺基丙基） 胺基羰基，3 -吡咯啶-1 ·基-丙胺羰基，3 -嗎福啉-4 -基丙基-胺基羰基，2-吡咯啶-1-棊乙基胺基羰基，2-嗎福啉-4-基乙胺基羰基，2-(4-甲基哌畊-1·基）乙胺 基羰基，2-(4-甲基哌畊-1-基）丙基胺基羰基，2-(3,5-二甲基旅畊-1-基）乙胺羰基，或2-(3,5·二甲基哌畊· -30 - 本紙張尺度適用中囷國家搮準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 A7 —__— B7 五、發明説明（28 ) 1-基）丙胺基羰基，甚至較好是N-(2-二乙基胺乙基） 胺基羰基或N-(2-乙胺基乙基）胺基-羰基。 (7) 又另一較佳之式（I)化合物是其中R5 , R6或R7，較好R5 或R6 ,較好R6*_C〇R10其中R10是-NR13RM，其中Rl3是 氫且R14是烷基，較好是低碳烷基為羥基，芳基，雜 芳基，雜脂環或羧基所取代，又較好甲基，乙基，丙 基或丁基為羥基所取代，芳基，雜脂族如哌啶，哌畊 ，嗎福琳等，雜芳基或瘦基《在此（7 )·群中甚至較佳 的，R5或R6是2-乙氧羰基甲基-胺基羰基，羧甲基胺 基羰基，3 -羥丙基-胺基羰基，2 -羥基乙胺羰基，3-二畊-1-基丙胺基-羧基，三畊-1-基乙基胺基談基， 4 - 基苯基乙胺羰基，3 -咪吐-1 -基丙基-胺羧基，p比 淀-4-基甲基胺基羰基，2 -吡咬-2-基乙胺羰基或2_ 咪唑-1 _基乙胺羰基。 (8) 又式（I)另一較佳基團是其中R5，R6或R7，較好民5或R6 ，又較好R6是-COR10，其中Ri〇是-NR"(CH2)nRi2其中： R11是氫或烷基，較好是氩或甲基； η是2，3或4，'較好2或3 ;且 RU是-NR13RM ,其中Rn及Ri4一起組合形成雜環， 較好5，6或7員雜環，含有羧基及1或2個氮原子_較 好R5或R6是2-(3-乙氧羰基甲基哌畊-1-基）乙胺基幾基 ，2-(3-酮基哌畊-1-基）乙基胺基羰基，2-(咪唆唉·1β 基-2-晒）乙胺基談基，2-(四氩喊咬-1-基·2·酮）乙胺 羧基’ S-P-SI5!**1比嘻咬-1-基）-乙胺羧基，甲基 -31 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 一____B7_ 五、發明説明（29 ) 喊畊-1 -基）-丙基胺基羰基，3-(3-乙氧羰基甲基哌畊-1-基）·丙胺羰基，3-(3-_基喊〃井-1-基）丙基-胺談基 ’ 3-(咪。坐淀-1 -基-2 - g同）丙基-胺羧基，3 -(四氫喊 咬-1-基-2·嗣基）-丙胺羧基，3-(2 -酮基ίΌ各淀-1-基） 丙基-胺羰基，2-(2-酮基高哌啶-1 -基）乙胺基-羰基或 3-(2-嗣基南喊淀-1-基）丙胺談基。 (9)又較佳之式（I)化合物是其中R5，R6或R7，較好R5或R6 ，又較好R6是-COR10，其中： (a) R10是-NR"(CH2)nR12其中： R11是氫或烷基，較好氫或甲基； η是2，3或4，較好2或3 ;且 R12是- NR13R14，其中RH是氫且R14是氰烷基或 -NHCORa，其中Ra是烷基；或 (b) R1G是-NR13R14，其中Ri3及Ri4 一起組合形成雜 環，在環内不含有羰基。較好，R5或R6是2-(2-氰乙胺 基）乙胺羰基，2-(乙醯胺基）-乙胺羰基，嗎福啉羰基 ，哌啶-1-基·羰基，2 -氰基甲胺基乙胺羰基或哌啶-1-基羰基。 U〇)另一較佳之式（I)化合物是其中r5是-COR10，其中R10 是-NR13R14，其中RH是氫且rm是低碳烷基為羥基所取 代，低碳烷基為羥烷胺基，羧基或-NR18R19所取代， 其中R1彳及R19是獨立的氫或低碳燒基，較好r5是2-[(二 乙胺基）-2-羥乙基]胺羰基，2-(N-乙基-N-2-羥乙胺基） 乙胺羰基，羧甲胺基-羰基，或2-(2-羥乙胺基）乙胺 __ - 32 - 本紙張尺度逋用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐)
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線 1230609 A7 ____B7_ . 五、發明説明（30 ) 基-羰基。 (1 1)又另一較佳之式（I)化合物是其中R6是-COR10，其中 R10是-NR13Ri4，其中R"是氫且Ri4是低碳烷基為羥基 ，為羥烷胺基所取代之低碳烷基，羧基或-NR18Ri9所 取代，其中R18及R19是獨立的氫或低碳烷基；又較好 R6是2-[(二乙胺基）-2-羥基]乙胺羰基，2-(Ν·乙基-N-2· 羥乙基胺基）乙胺羰基，羧曱胺基羰基，或2-(2-羥乙 胺基）乙胺基-羰基。 (12) 又另一較佳之式（I)化合物是其中R5是-CORio，其中 R10是-NRiyCKhhR12 ,其中 R12是-N + (〇-)NR13R14或 -N(OH)R13，其中Ri3及rm獨立選自下列包括氫及低'碳 烷基，較好R5是羥基-N-乙胺基）-乙胺羰基或2-[n+(o-)(c2h5)2]乙基-胺羰基。 (13) 又另一較佳之式（I)化合物是其中R6是_COR1〇，其中 R10是-NR1 YCHzhR12 ,其中 是 _N + (〇-)NR13RJ4或 -N(OH)R13，其中Rn及Ri4獨立選自下列包括氫及低碳 燒基，較好R6是2-(N-羥基-N-乙胺基）乙胺羰基或2-[N+(〇-)(C2H5)2]乙基-胺羰基。 (14) 在上述較佳之（6) - ( 1 3 ).基團中，當R5是-COR10，則化 合物之較佳基團是其中 R6選自下列包括氫及燒基’較好是氫，甲基，乙 基’異丙基’第三-丁基，異丁基，或正-丁基，較好 是氫或甲基；且 R7選自下列包括氫，烷基，芳基，雜芳基，及 ___- 33 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 ____B7 五、發明説明（31 ) -C(0)R17，其中R17是羥基，烷基或芳基，較好是氫， 甲基，乙基，異丙基，正·，異或第三·丁基，苯基，苄 醯基’乙醯基或幾基’甚至較好是甲基，氫或苯基。 (15) 在上述（6)-(13)之較佳基團中，當R5是-C〇R10，則另 一較佳化合物是其中R6及r7組合形成_(Ch2)4_。 (16) 在上述較佳之（6)-(13)基團中，當R6是-CORio，則化 合物之較佳基團是其中： R5選自下列包括氫及烷基，較好是氫，甲基，乙 基，異丙基，第三_ 丁基，異丁基，或正-丁基，較好 是氫或曱基；且 R7選自下列包括氫，烷基，芳基，雜芳基，及 -C(0)R17 ’其中Ri7是羥基，烷基或芳基，較好是氫， 甲基，乙基，異丙基，正_，異或第三_ 丁基，苯基，芊 酿基，乙醯基或羧基，甚至較好是甲基，氫或苯基。 (17) 在（6 ) - (1 6 )之較佳基團中，化合物甚至較佳的基團為 其中： R1是氫，烷基，-C(0)R8R9，環烷基或芳基，較好 是氫，苯基，3,心二甲氧基苯胺羰基，4 -甲氧基-3-氣苯基-胺羰基，甚至較好是氫或甲基，最好是氫； R2是氰基’氫’鹵’低碳燒氧基，芳基或_s(〇)2nr13r14 ’其中R13是氫且R14是氫，芳基或燒基，較好R2是氫 ，氯，.溴，氟，甲氧基、乙氧基，苯基，二甲胺基磺 醯基’ 3 -氣苯基胺基磺醯基，羧基，甲氧基，胺基績 酿基’甲胺基橫酿基，苯胺基績酿基，咐咬_ 3 -基-胺 ___ - 34 · 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4現格(210X297公釐) 1230609 A7 __ B7 五、發明説明（32 ) 基磺醯基，二甲胺基磺醯基，異丙胺基磺醯基，較佳 的是氫，乳或溴， R3選自下列包括氫，低碳烷氧基，-C ( 〇 ) R 1 5 , -NR13C(0)R14，芳基較好是芳基視所需為一或二個選 自下列的取代基所取代，包括：低碳烷基，自，或低 碳烷氧基’及雜芳基較好是雜芳基視所需為一或二個 選自下列的取代基所取代包括：低碳烷基，自或低碳 烷氧基；較好是氫，甲氧基，羧基，苯基，吡啶-3 -基，3,4-二氯苯基，2 -甲氧基-5 -異丙基苯基，4-正 丁基苯基，3 -異丙基苯基，較好是氫或苯基；且 R4是氫。 (18)另一較佳之式（I)化合物基團為其中： R1是氫，烷基，-C(0)R8R9，環烷基或芳基，較好 是氫’ 3，4-二甲乳基-苯基-胺羰基，4 -甲氧基-3-氣苯 基胺基羰基’甚至較好是氫或甲基，特別是氫； R2是氰基，氫，鹵，低碳烷氧基，芳基或-S(〇)2NR13R14 ，其中R13是氫且R14是氩，芳基或烷基，較妤R2是氫 ，氯，溴，氟，甲氧基，乙氧基，苯基，二甲胺基磺 醯基，3 -氯苯基胺基續臨基，竣基，甲氧基，胺基石黃 醯基，甲胺基績醯基，苯胺基績酿基，p比咬_3 -基-胺 基績酿基’二甲胺基績酿基，異丙胺基-績酿基，較 好是氫，氟，或溴； R3選自下列包括··氫，低碳燒氧基，-C(〇)r15, -NR13C(0)Ri4，芳基較好是芳基視所需為一或二個選自 -35 - 本紙银尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（33 ) 下列之取代基所取代，包括：低碳烷基，自，或低礙 虎氧基’及雜芳基較好是雜芳基視所需為一或二個選 自下列之取代基所取代，包括：低碳烷基，卣，或低 碳烷氧基；較好是氫，甲氧基，羧基，苯基，响咬_ 3 -基，3,4-二氯苯基，2 -甲氧基-5 -異丙基苯基，4_ 正丁基苯基，3 -異丙基苯基，較妤是氫或苯基；且 R4是氫。 在上述（18)較佳基團中，較佳的化合物為其中： R5是-COR10，其中R10如本發明要點中所定義，較 好-NR"(CH2)nRi2或-NRif4如本發明要點中所定義。 R6選自下列包括氫及燒基，較好是氩，甲基，乙美 ，異丙基，第三-丁基，異丁基，或正-丁基，較好是 氫或甲基；且 R7選自下列包括氫’垸基，芳基，雜芳基及-C(〇)R17 其中R17是羥基，烷基或芳基，較好是氫，甲基，乙 基，異丙基，正-，異或第三-丁基，苯基，芊醯基， 乙醯基或羧基，甚至較好是甲基，氩或苯基。 在上述較佳（18)基團中，另一較佳之化合物基團為 其中： R6是-COR10其中R10如本發明要點中所定義，較好 -NR"(CH2)nR12或-NRhrm如本發明要點中所定義。 R5選自下列包括氫及烷基，較好是氫，甲基，乙基 ,異丙基，第三-丁基，異丁基，或正·丁基，較好是 氫或〒基；且 -36 - 1230609 A7 B7 ----^ 五、發明説明（ R7選自下列包括氫，烷基，芳基，雜芳基及-C(〇)R17 其中R17是羥基’fe基或芳基，較好是氫，甲基，乙 基，異丙基，正異或第三-丁基，苯基，芊醯基， 乙醯基或羧基，甚至較好是甲基，氫或苯基。 (19)另一較佳之式（I)化合物基團是其中： R1及R4是氫； R2選自下列包括氫，鹵，低碳烷基，-(:(0)1115及 -S(0)2NR13R14 ; R3選自下列包括氫，低碳烷氧基，-C ( Ο ) R 15及 -S(0)2NR13R14，芳基及雜芳基； R5是-C(0)R丨0 ; R6選自下列包括氫及低碳烷基；且 R7選自下列包括氫，低碳烷基及-C(0)R17。 又目前另一較佳具體實例，即在化合物中具有如 (15)中所述之結構·· R10選自下列包括羥基，低碳烷氧基及-R11(CH〇nR12 ，其中 η是2或3 ; R11選自下列包括氫及低碳烷基；且 R12選自下列包括芳基及-NR13R14 ° 目前進一步較佳具體實例，在化合物中為具有先 前所述之結構，R13及R14獨立選自下列包括··氫，低碳 烷基，及組合成-(CH2)4-，-(CH2)5-，-(CH2)2〇(CH2)2- 或-(CH2)2N(CH3)(CH2)2- 0 ___ - 37 - 本Λ張尺度適用中8 8家料(CNS) A4規格(21GX 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發佩~ 〇〇 (20) 本發明另一較佳具體實例是化合物中： R1選自下列包括氫，低碳烷基，-(CH2)rRi6及 -C(〇)NR8R9 ; R2選自下列包括氫，画，芳基及-SCOhNRURM ; R3選自下列包括氫，低碳烷基，低碳烷氧基，芳基 ，雜芳基及-C(0)R15 ; R4是氫； R5選自下列包括氫及低碳烷基； R6是-C(0)R10 ; R7選自下列包括氫，低碳烷基及芳基； R16選自下列包括羥基及-C(0)R15 ;且 r是2或3。 又本發明較佳之具體實例是具前段所述結構之化合 物，其中R3是芳基視所需為一或多個選自下列的基團 所取代，包括：低碳烷基，低碳烷氧基及鹵。 (21) 另外，本發明目前較佳具體實例是其中： R1選自下列包括氫，低碳烷基，_(CH2)rRi6及 -C(0)NR8R9 ； R2選自下列包括氩，鹵，芳基及-S(0)2NR13Rm ; R3選自下列包括氫，低碳烷基，低碳烷氧基，芳基 ’雜芳基及-C(0)R15， R4是氩； R5選自下列包括氫及低碳烷基； R6是-C(0)R10 ; _____- 38 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（36 ) R7選自下列包括氫，低碳烷基及芳基； R16選自下列包括羥基及-C(0)R15 ;且 r是2或3。 R1G選自下列包括羥基，低碳烷氧基，-NR^RM及 -NRH(CH2)nR12，其中η是1，2或3，R11是氫及RU選自下 列包括羥基，低碳烷氧，-C(0)R15，雜芳基及-NR13RM。 (22) 目前進一步較佳之本發明具體實例是具上述結構之化 合物，其中R13及R14獨立選自下列包括氫，低碳烷基 ，雜芳基，及組成 _(CH2)4-，-(CH2)5-，-(CH2)20(CH2)2-或-(CH2)2N(CH3)(CH2)2-。 (23) 本發明目前另一較佳具體實例是其中·· R1是-C(〇)NR8R9,其中R8是氫且R9是芳基視所需為 一個以上選自下歹1j的基團所取代，包括鹵，經基及低 碳烷氧基； R2選自下列包括氫，卣，芳基及-s(o)2nr13r14 ; R3選自下列包括氫，低碳烷基.，低碳烷氧基，芳基 ，雜芳基及-C(〇)R15 ; R4是氫； R5選自下列包括氫及低碳烷基； R6是-C(0)R10; R7選自下列包括氫，低碳烷基及芳基； R16選自下列包括羥基及-C(0)R15 ;且 I·是2或3 〇 (24) 又進一步目前本發明較佳具體實例是化合物其中： -39 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐)
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線 1230609 A7 __ B7 五、發明説明（37 ) R1選自下列包括氫及低碳燒基； R2選自下列包括氫，鹵，低碳燒氧基，芳基，-0(0)1115 及-S(0)2NR13R14 ; R3選自下列包括氫，鹵，芳基’雜芳基及-(:(0)1115 ; R4是氫； R5是-C(0)R1G ;且 R6及R7組合形成-((：112)4-基。 在具有上述結構之化合物中，目前較佳具體實例為R10 選自下列包括羥基，烷氧基，·NR13R14及-NH(CH2)nNR13R14 其中η是2或3。 本發明目前較佳具體實例中，具上示結構之化合物 其中R13及R14獨立選自下列包括：氫，低碳烷基，及組合 成-(CH2)4-，-(<：Η2)5-，-(CH2)2〇(CH2)2-或-(CH2)2N(CH3)(CH2)2-。 具代表性之式（I)化合物示於下表I中。 表1 實例 結構 名稱 1 4-甲基-5-(2-酮基-1，2-二氫亞4嗓-3-基 甲基）-1Η-吡咯-致酸 2 4 -甲基-5-(1-甲基-2-酮基_ι，2-二氫亞4丨 嗓-3-基甲基）-lHw比疼-2-竣酸 3 4 -甲基-5-(2-嗣基-1，2-二氫亞4卜朵-3-基 甲基歎酸 -40 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐)
線 1230609 五、發明説明（38 ) A7 B7 4 Η 5-(5-氣-2-酮基-1，2-二氫亞啕哚-3-基甲 基）-4 -甲基- p各-2-叛酸乙酉旨 5 c'O^OH Η 5-(5-氯-2-酮基-1，2-二氫亞峋哚-3-基甲 基）-4-甲基-1H-吡咯-2-羧酸 6 5-(5 ->臭-2-嗣基-1，2 -二風亞卜朵-3 -基甲 基）-4-甲基-1H-吡咯-2-羧酸（3-吡咯啶-1-基丙基）醯胺 7 5-(5 ->臭-2-酬基-1，2 -二鼠亞卜呆-3 -基甲 基）-4-甲基-1H-吡咯-2-羧酸（3-二乙胺基 ’丙基）醯胺 8 5-(5-溴-2-酮基-1,2-二氫亞吲哚-3-基甲基 )-1Η-吡咯-2-羧酸（3-二乙胺基丙基）醯胺 t 9 5 - (2 -嗣基-6 -本基-1，2 -二氮亞丨嗓-3 -基 甲基）-1Η-吡咯-2-羧酸（2-二乙胺基乙基） ^ 醯胺 10 5-(5 ->臭-2-嗣基-1,2 -二氮亞4丨嗓-3-基甲 基）-1Η-吡咯-2-羧酸（2-二乙胺基丙基）甲 基醯胺 11 cr^K 5 - (2 -嗣基-6 -本基-1，2 -二氮亞丨噪-3 -基 甲基）-1Η-吡咯-2-羧酸（2-二乙胺基丙基） 甲基醯胺 12 | 3-甲基-5-(2-酮基-1,2-二氩亞吲哚-3-基 甲基）-1Η-吡咯-2-羧酸（3-二乙胺基丙基） 醯胺
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線 -41 -本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（39 ) 13 Η 5-(5 - >臭-2-嗣基-1，2 -二風亞4丨嗓-3 -基甲 基）-3-甲基-1H-吡咯-2-羧酸（3-二乙胺基 丙基）醯胺 14 一 C 3 -甲基-5 - (2 -嗣基-6 -丰基-1，2 -二鼠亞p弓丨 哚-3-基甲基）-1Η-吡咯-2-羧酸（3-二乙胺 基丙基）龜胺 15 5 - (5 -甲氧基-2 -嗣基-1，2 -二氣亞丨嗓-3 - 基甲基）-3-甲基-1H-吡咯-2-羧酸（3-二乙 胺基丙基）酿胺 16 5-(6-甲氧基-2-酮基-1,2-二氫亞啕哚-3- 、。χχΡ。 u Η 基甲基）-3-甲基-1H-吡咯-2-羧酸（3-二乙 胺基丙基）酿胺 17 g 3-(5-溴-2-酮基-1，2-二氫亞啕哚-3-基甲 Β^χχΦ{ 基）-4,5,6,7-四氫-2H-異啕哚-1-羧酸（2- Η 二乙胺基乙基）醯胺 18 Λκ° 3-(5 ->臭-2-嗣基-1，2 -二氮亞丨嗓-3-基甲 基）-4,5,6,7-四氫-2H-異啕哚-1-羧酸（3- 二乙胺基丙基）醯胺 19 8r rSr° 3-(5 -·/臭-2-嗣基-1，2·二氮亞Μ丨嗓-3-基甲 txp， h r κι 基）-4,5,6,7-四氫-2Η-異啕哚-1-羧酸（3- ώ ρ比洛-1 -基丙基）酿胺 20 .qq 3 - (2 -嗣基-6 -咏^各-3 -基-1，2 -二風亞丨咳· 3-基甲基)-4,5,6,7-四氫-2H-異啕哚-1-羧 酸（2-二乙胺基乙基）酿胺 -42 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 五、發明説明（40 ) A7 B7 21 4-芊醯基-5-(5-溴-2-酮基-1，2-二氫亞吲 哚-3-基甲基）-3-甲基-1H-吡咯-2-羧酸（3- 二乙胺基丙基）酸胺 22 Η 4 -卞酿基- 5- (5 ->臭-2-銅基-1，2 -二鼠亞丨 哚-3-基甲基）-3-甲基·1Η-吡咯-2-羧酸（3- 嗎福琳-4 -基丙基）酿胺 23 中。 4 -卞驢基-3 -甲基-5 - (2 -嗣基-1，2 -二風亞 吲哚-3-基甲基）-1Η-吡咯-2-羧酸（3-吡咯 淀-1-基丙基）酿胺 24 4-芊醯基-5-(5-溴-2-酮基-1，2-二氫亞吲 哚-3-基甲基）-3-甲基-1Η-吡咯-2-羧酸（3-p比哈症-1-基丙基）醯胺 25 〇^〇 4-卞酿基-3 -甲基-5-(2-嗣基-6-苯基-1，2-二氫亞啕哚-3-基甲基）-1Η-吡咯-2-羧酸 (3 -p比洛淀-1-基丙基）酿胺 26 U Η 4 -卞酿基- 5- (6 -甲氧4基-2-嗣基-1，2 -二氣 亞啕哚-3-基甲基）-3-甲基-1H-吡咯-2-羧 酸（3 -p比哈淀-1-基丙基）酿胺 27 4 -卞酿基- 5- (5-甲氧基-2 -嗣基-1，2 -二風 亞啕哚-3-基甲基）-3-甲基-1H-吡咯-2-羧 酸（3 - p比哈症-1-基丙基）酿胺 28 在Μ 4-苄醯基-5-(5-氟-2-酮基-1，2-二氫亞啕 哚-3-基甲基）-3-甲基-1H-吡咯-2-羧酸（3-吡咯啶-1-基丙基）醯胺 29 4-乙酿基- 5·(5->臭-2-嗣基-1，2-二風亞Μ丨 哚-3-基甲基）-3-甲基-1Η-吡咯-2-羧酸（3-二乙胺基丙基）醯胺
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線 -43 -本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4祝格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（41 ) 30 3 \ 4-乙醯基-5-(5-溴-2-酮基-1，2-二氫亞啕 哚-3-基甲基）-3-甲基-1 Η-吡咯-2-羧酸（3-吡咯啶-1-基丙基）醯胺 31 妨穴， Η 4 -乙酿基- 5- (5 -》臭-2-酉同基-1，2 -二氣亞ρ弓丨 哚-3-基甲基）-3-甲基-1Η-吡咯-2-羧酸（3-嗎福琳-4 -基丙基）酿胺 32 Η . 4-乙酿基- 5- (5 ->臭-2-嗣基-1，2-二鼠亞p弓丨 哚-3-基甲基）-3-甲基-1H-吡咯-2-羧酸(3-經基丙基）醯胺 33 0 4-乙醯基-5-(5-溴-2-酮基-1,2-二氫亞啕 哚-3-基甲基）-3-甲基-1H-吡咯-2-羧酸（2-羥基-乙基）醯胺 34 8rxxP ° Η 4-乙酿基- 5- (5 - >臭-2-自同基-1，2-二鼠亞丨 哚-3-基甲基）-3-甲基-1H-吡咯-2-羧酸（2-嗎福啉-4-基乙基）醯胺 35 4 -乙酿基- 5- (5 -澳-2-嗣基-1，2 -二氮亞丨 哚-3-基甲基）-3-甲基-1H-吡咯-2-羧酸(2-吡咯啶-1-基乙基）醯胺 36 0 Η 4-乙酿基- 5- (5 ->臭-2-嗣基-1，2-二風》亞p弓丨 哚-3-基甲基）-3-甲基-1H-吡咯-2-羧酸[2-(4-羥基-苯基）-乙基醯胺 37 5-(5-溴-2·酮基-1,2-二氫亞啕哚-3-基甲 基)-2-異丙基-4-苯基-1H-吡咯-3-羧酸(2-二乙胺基丙基）醯胺 -44 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（42 ) 38 5-(5-溴-2-酮基-1，2-二氫亞啕哚-3-基甲 基）-2-異丙基-4-苯基-1 Η-吡咯-3-羧酸(3-叶匕哈淀-1-基丙基）酿胺 39 5-(5 ->臭-2-酉同基-1，2 -二鼠亞4丨嗓-3 -基甲 基）-2-異丙基-4-苯基-1H-吡咯-3-羧酸(2-二乙胺基乙基）醯胺 40 5-(5-溴-2-酮基-1,2-二氫亞啕哚-3-基甲 基）-2 -異丙基-4 -本基-lH-p比洛-3 -竣酸[3 -(4-甲基-喊p井-1-基）-丙基]酿胺 41 Q>oh 5-(5 ->臭-2-酉同基-1，2 -二氣亞4丨嗓-3 -基甲 基）-2-異丙基-4-苯基-1H-吡咯-3-羧酸 42 arxxP^ Η 5-(5 ->臭-2-嗣基-1,2 -二氮亞丨嗓-3-基甲 基）-2-甲基-4-苯基-1H-吡咯-3-羧酸(2-吡 洛淀-1-基-乙基）酿胺 43 of^ 1 5-[6-(2 -甲氧基-+基）-2-嗣基-1，2-二風 亞啕哚-3-基甲基]-2-甲基-4-苯基-1H-吡 咯-3-羧酸（2-吡咯啶-1-基乙基）醯胺 44 5-(5-溴-2-酮基-1，2-二氫亞啕哚-3-基甲 基）-2-甲基-4-苯基-1H-吡咯-3-羧酸(2-二 甲胺基-乙基）酿胺 45 w· of^M 5-[6-(2 -甲乳基-本基）-2-嗣基-1，2 -二致 亞4丨嗓-3 -基甲基]-2 -甲基-4 -本基-1Η - p比 咯-3-羧酸（2-二甲胺基-乙基）醯胺
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線 -45 -本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609 A7 B7 五 、發明説明（43 ) 46 5-(5-溴-2-酮基-1，2-二氫亞啕哚-3-基甲 基）-2 -甲基-4 - +基-1Η - 口比洛-3 -棱故乙酉旨 47 5-(5-溴-2-酮基-1，2-二氫亞啕哚-3-基甲 基）-2-甲基-4-苯基-1Η-吡咯-3-羧酸（3-二 乙胺基丙基）酸胺 48 0 μ' XSs 5-(5-溴-2-酮基-1，2-二氫亞峋哚-3-基甲 基）-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2-二甲 胺基-乙基）醯胺 49 2，4 -二甲基-5 - (2 -嗣基-6 -冬基-1，2 -二風 亞啕哚-3-基甲基）-1Η-吡咯-3-羧酸（2-二 ' 甲胺基-乙基）醯胺 50 5-(5-氯-2-酮基-1，2-二氫亞啕哚-3-基甲 基）-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2-二甲 胺基-乙基）醯胺 51 0 μ yJ^-N 5-(5-溴-2-酮基-1,2-二氫亞啕哚-3-基甲 基）-2,3-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2-二乙 胺基乙基）醯胺 52 0 5-(5 ->臭-2-銅基-1，2 -二氮亞嗓-3-基甲 基）-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸（2-吡咯 症-1-基-乙基）臨胺 53 Ν- 5-(5 -’/臭-2-嗣基-1，2 -二氮亞卜呆-3-基甲 基）-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸（3-咪唑-1-基丙基）醯胺 -46 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐) 1230609 A7 B7 五 、發明説明（44 ) 54 0 U 1 5-[6-(2-甲乳基-苯基）-2-嗣基-1，2-,一氣 亞㈣哚-3-基甲基]-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸（2-二甲胺基-乙基）醯胺 55 5-[6-(3 -甲氧i基-苯基）-2 -酉同基·1，2 -二氮 亞啕哚-3-基甲基]-2,4-二甲基-1Η-吡咯· 3-羧酸（2-二甲胺基-乙基）醯胺 56 2，4 -二甲基-5 - (2 -酉同基-5 -私基-1，2 --一氣 亞啕哚-3-基甲基）-1Η-吡咯-3-羧酸(2-二 乙胺基乙基）醯胺 57 2,4-二甲基-5-(2-酮基-5-苯基-1，2-二氫 亞啕哚-3-基甲基）-1Η-吡咯-3-羧酸（2-吡 咯啶-1-基-乙基）醯胺 58 0 g Η 2，4 -二甲基-5 - (2 -嗣基-5 -冬基-1，2 -二風 亞啕哚-3-基甲基)-1Η-吡咯-3-羧酸（3-咪 唑-1-基丙基）醯胺 59 0 Η ν_>Β 2，4 -二甲基-5 - (2 -嗣基-6 -苯基-1，2 -二鼠 亞叫丨哚-3-基甲基）-1Η-吡咯-3-羧酸(2-二 乙胺基乙基）醯胺 60 2,4-二甲基-5-(2-酮基-6-苯基-1，2-二氫 亞⑷哚-3-基甲基）-ΊΗ-吡咯-3-羧酸（2-吡 洛淀-1-基-乙基）酿胺 61 2，4 -二甲基-5 - (2 -嗣基-6 -苯基· 1，2 -二風 亞啕哚-3-基甲基)·1Η-吡咯-3-羧酸（3-咪 唑-1-基丙基）醯胺 -47 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210x 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（45 ) 62 〇 r* Cl 5-[6-(3,5 -二鼠-+ 基）-2 -嗣基 _ 1，2 -二鼠亞 蜊哚-3-基甲基]-2,4-二甲基-lHw比咯-3-羧酸（2-二乙胺基乙基）醯胺 63 0 H 2,4-二甲基-5-(2-酮基-6-吡啶-3-基-1，2-二氫亞啕哚-3·基甲基）-1 Η-吡咯-3-羧酸 (2-二乙胺基乙基）醯胺 64 2,4-二甲基-5-(2-酮基-6-吡啶-3-基-1，2-二氫亞啕哚-3-基甲基）-1Η-吡咯-3-羧酸 (2-ρ比洛淀-1-基-乙基）臨胺 65 2,4-二甲基-5-(2-酮基-6-吡啶-3-基-1，2-二氫亞吲哚-3-基甲基）-1 Η-吡咯-3-羧酸 (3-二甲胺基-丙基）酿胺 66 H 2,4-二甲基-5-(2-酮基-5-苯基-1，2-二氫 亞啕哚-3-基甲基）-1Η-吡咯-3-羧酸（3-二 甲胺基-丙基）醯胺 67 H 2,4-二甲基-5-(2-酮基-5-苯基-1，2-二氫 亞峋哚-3-基甲基）-1Η-吡咯-3-羧酸（3-二 乙胺基丙基）醯胺 68 —0 H 2，4 -二甲基-5 - (2 -嗣基-6 -苯基-1，2 -二風 亞巧哚.-3-基甲基）-1Η-吡咯-3-羧酸（3-二 乙胺基丙基）醯胺 69 3-[4-(3-二乙胺基-丙基胺甲醯基)-3,5-二甲 基-ΙΗ-ί7比嘻-2-基亞甲基]-2-嗣基-2,3-二氮-1Η-啕哚-4-羧酸(3-氯-4-甲氧基-苯基）醯胺
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-48 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（46 ) 70 5-(5-溴-2-酮基-1，2-二氫亞⑼哚-3-基甲 基）-2,4-二甲基-1H-说咯-3-羧酸（3-二乙 胺基丙基）醯胺 71 5-(5-溴-2-酮基-1，2-二氫亞吲哚-3-基甲 基）-2,4-二異丙基-1H-吡咯-3-羧酸（2-二 乙胺基乙基）醯胺 72 Η 5-(5-溴-2-酮基-1,2-二氫亞啕哚-3-基甲 基）-2,4-二異丙基-1H-吡咯-3-羧酸（3-二 乙胺基丙基）醯胺 73 Η 5-(5-溴-2-酮基-1，2-二氫亞啕哚-3-基甲 基）-2,4-二異丙基-1H-吡咯-3-羧酸（3-吡 咯啶-1-基丙基）醯胺 74 5-(5-溴-2-酮基-1，2-二氫亞啕哚-3-基甲 基）-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（吡啶-4-基甲基）醯胺 75 ο 〇 5 - [ 6 - (4 - 丁基-冬基）-2 -嗣基-1，2 -二風亞 叫丨哚-3-基甲基]·2,4-二甲基-1H-吡咯-3-幾酸（2 -ρ比洛淀-1-基-乙基）酿胺 76 0 ^ 丨y 5-[6-(5-異丙基-2-甲氧基-苯基)-2-酮基-1，2-二氫亞<哚-3-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(2-吡咯啶-1-基乙基）醯胺 77 ο 5-[6-(4-乙基-苯基）-2-酮基-1，2-二氫亞 啕哚-3-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2-吡咯啶，1-基）醯胺 裝 訂
-49 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（47 ) 78 v^~N〇 、χχ°^Η 5-[6-(2,4 -二甲氧基-苯基）-2-嗣基-1，2-二 氫亞啕哚-3-基甲基]-2,4-二甲基-1 Η-叶匕 p各-3 -竣版（2 - ρ比洛淀-1 -基-乙基）酿胺 79 ο Ρ 5-[6-(3 -異丙基-苯基）-2-嗣基-1，2 -二氣 亞啕哚-3-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-叛酸（2-ρ比洛淀-1-基-乙基）酿胺 80 5-(5-氟-2-酮基-1,2-二氫亞峋哚-3-基甲 基）-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2-二乙 胺基乙基）醯胺 81 。 cvO^ OH H 3-[4-(2-二乙胺基乙基胺甲醯基）-3,5-二 曱基-1H-吡咯-2-基亞甲基）-2-酮基-2,3-二氯-lH-p?丨噪-6-幾酸 82 0^SO^ 5-(5-二甲基磺胺醯基-2-酮基-1，2-二氫亞 啕哚-3-基甲基）-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2-吡咯啶-1-基-乙基）醯胺 83 5-[5-(3 -乳-冬基橫胺酿基）-2-銅基- l，2-二氫亞峭哚-3-基 甲基]-2,4-二甲基-1H-p比哈-3-幾酸（2-?比0各淀-1-基-乙基）酿胺 84 2,4 -二甲基-5-[2 -嗣基- 5- ( ρ比淀-3-基續胺 醯基)-1，2-二氫亞啕哚-3-基甲基]-1H-吡 咯-3-羧酸（2-吡咯啶-1-基-乙基）醯胺 85 鉍。- 3-[3,5-二甲基-4-(4-甲基-哌畊-1-羰基）-lH-吡咯-2-基亞甲基]-4-(2-羥基-乙基）-1，3·二氫啕哚-2-酮 裝 訂
k -50 -本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（48 ) 86 3-[3,5 -二甲基-4-(4 -甲基-喊呼-1-談基）-l Η - 被 哈 - 2 - 基亞 甲基] - 2 - 銅基 - 2 ， 3 - 二風 ** 1Η-吲哚-5-磺酸苯基醯胺 87 5-(5-二甲基磺胺醯基-2-酮基-1，2-二氫亞 峋哚-3-基甲基）-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸（2-二乙胺基乙基）醯胺 88 。♦切。 5-[5-(3 -氯-苯基橫胺酿基）-2 -嗣基-1，2· 二鼠亞丨嗓-3-基甲基]-2,4 -二甲基-1Η· 吡咯-3-羧酸（2-二乙胺基乙基）醯胺 89 3-(5-溴-2-酮-1，2-二氫-亞啕哚-3-基甲基 )-4,5,6,7-四氫-2H-異峋哚-1-羧酸（2-二 甲胺基-乙基）醯胺 90 0^； 3-(2-酮基-1,2-二氫-亞啕哚-3-基甲基）-4,5,6,7 -四氯- 2H -異叫卜朵-1-叛酸乙酉旨 91 3 -(4-甲基-2-嗣基-1，2-二風-亞丨嗓-3 -基 甲基)-4,5,6,7-四氫-2H-異啕哚-1-羧酸乙酯 92 3-(5 ->臭-2-嗣基-1，2 -二氮-亞4丨嗓-3 -基甲 基）-4,5,6,7_四氫·2Η-異啕哚-1·羧酸乙酯 93 3-(3-乙氧羰基-4,5,6,7-四氫-2Η-異啕哚-1 -基亞甲基）-2 -嗣基-2，3 -二風-1Η - 丨嗓-5-羧酸 裝 訂
k -51 -本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（49 ) 94 3-(5-甲基-2-酮基-1，2-二氫-亞吲哚-3-基 甲基）-4,5,6,7-四氫-2H-異啕哚-1-羧酸 乙酯 95 3-(2-酮基-5-苯基-1，2-二氫-亞啕哚-3-基 甲基）-4,5,6,7-四氫-2H-異峋哚-1-羧酸 •乙酯 96 3-(2 -嗣基-5-橫胺酿基-1，2 -二氯-亞1^卜朵_ 3-基甲基）-4,5,6,7-四氫-2H-異喇哚-1-羧 酸乙酯 97 ?b^； 3-(5-甲基磺胺醯基-2-酮基-1，2-二氫-亞 啕哚-3-基甲基）-4,5,6,7·四氫-2H-異啕 哚-1-羧酸乙酯 98 3-(5-二甲基磺胺醯基-2-酮基-1,2-二氫-亞啕哚-3-基甲基）-4,5,6,7-四氫-2H-異蜊 哚-1-羧酸乙酯 99 3-(2-酮基-5-苯基胺磺醯基-1，2-二氫-亞 啕哚-3-基甲基）-4,5,6,7-四氫-2H-異吲 哚-1-羧酸乙酯 100 3-(6 ->臭-2-嗣基-1，2 -二氯-亞4丨嗓-3 -基甲 基）-4,5,6,7 -四氮- 2H -異4卜呆-1-叛酸乙酉旨 ί 101 rrA^° ^〇>。、 3-(2-酮基-6-苯基-1，2-二氫-亞⑷哚-3-基 甲基）-4,5,6,7·四氫-2Η-異啕哚-1-羧酸 乙酯 裝 訂
-52 -本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（5〇 ) 102 3-(3-乙氧羰基-4,5,6,7-四氫-2Η-異啕哚-1-基亞甲基）-2-酮基-2,3-二氫-11^巧哚-6-羧酸 103 、。〇^ 3-(6-甲氧基-2-酮基-1，2-二氫-亞啕哚-3-基甲基）-4,5,6,7-四氫-2Η-異啕哚-1-羧酸 乙酯 104 3 - (5 -異丙基橫胺酿基-2 -調基-1，2 --一氮_ 亞啕哚-3-基甲基）-4,5,6,7-四氫-2Η-異啕 哚-1-羧酸乙酯 105 3-(3-甲基胺甲醯基-4,5,6,7-四氫-2Η-異 卜呆-1 -基亞甲基）-2 -嗣基-2，3 -二氮-1Η -4卜果-5-羧酸 106 3-(3-二甲基胺甲醯基-4,5,6,7-四氫-2Η-異丨嗓-1 -基亞甲基）-2 -嗣基-2，3 -二鼠-1Η-啕哚-5-羧酸 107 °\^b 2 -嗣基-3 - [ 3 -(卩比洛淀-1 -棱基）-4,5,6,7 -四 氮-2Η -異丨嗓-1-基亞甲基]-2,3 -二氮-1Η-啕哚-5-羧酸 108 3-[3-(嗎福啉-4-羰基）-4,5,6,7-四氫-2Η-異?1?丨嗓-1-基亞甲基]-2-嗣基-2,3-二乳-1Η-啕哚-5-羧酸 109 3-[3-(嗎福啉-4-羰基）-4,5,6,7-四氫-2Η-異卜来-1-基亞甲基]-2 -嗣基-2,3 -二風 1H-啕哚-6-叛酸 裝 訂
-53 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（51 ) 110 3-(5-溴-2-酮基-1，2，-二氫-亞啕哚-3-基甲 基）-4,5,6,7-四氫-2H-異啕哚-1-羧酸甲 醯胺 111 3-(5 -’/臭-2-酉同基-1，2，-二鼠-亞丨嗓-3-基甲 基）-4,5,6,7-四氫-2H-異峋哚-1-羧酸二甲 基醯胺 112 Bftx^ 5-溴-3-[3-(吡咯啶-1-羰基）-4,5,6,7-四 氯-21^-異1151噪-1-基亞甲基-1,3 -二氮 噪-2-酮 113 5 - >臭-3 - [ 3 -(嗎福淋-4 -談基）-4,5,6,7 -四 氫-2H-異啕哚-1-基亞甲基]-1，3-二氫 哚-2-酮 114 〇r〇^、: 3-(3-二甲基胺甲醯基-4,5,6,7-四氫-2H-異卜呆-1-基亞甲基）-2 -嗣基-2,3 -二氮-4丨 哚-6-致酸 115 o \>-o 4 -甲基-5 - (5 -甲基橫胺酿基-2 -嗣基-1，2 · 二氫-亞啕哚-3-基甲基）-1Η-吡咯-3-羧酸 116 〇 0-/ ° . {[4 -甲基-4-(4 -甲基-5 -甲基橫胺酿基-2-酮基-1,2-二氫-亞峭哚-3-基甲基）-1Η-吡 咯-3-羰基]-胺基}•醋酸乙酯 117 {[4 -甲基- 5- (5-甲基橫胺酿基-2-嗣基_ 1，2 -二風-亞丨嗓-3-基甲基）-1Η - p比哈-3 · 羰基]-胺基卜醋酸乙酯 裝 訂
-54 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（52 ) 118 0 {[4-甲基-5-(5-甲基磺胺醯基-2-酮基- 1，2-二氫-亞啕哚-3-基甲基）-1 Η-吡咯-3- 羰基]-胺基}-醋酸 119 , >Λ〇 3-{3-甲基-4-(哌啶-1-羰基）-1Η-吡咯-2- 基亞甲基]-2-酮基-2,3-二氫-1H-W哚-5- 磺酸甲基醯胺 120 5 -甲基-2 - (2 -銅基-1，2 -二氮-亞丨嗓-3 -基 αί" 曱基）-1Η-吡咯-3-羧酸 121 5-甲基-2-(2-酮基-1,2-二氫-亞啕哚-3-基 曱基）-1Η-吡咯-3-羧酸乙酯 122 2-(5-溴-2-酮基-1，2-二氫-亞啕哚-3-基曱 基）-5-甲基-1H-吡咯-3-羧酸乙酯 123 • °5l 2-(5 ->臭-2-酉同基-1，2 -二氮-亞4丨嗓-3-基甲 erOcir 基）-5-甲基-1H-吡咯-3-羧酸 124 2-(5 ->臭-2-嗣基-1，2 -二氮-亞4卜果-3-基甲 基）-5 -甲基-1Η -叶匕p各-3 -竣酸(2 -叶匕嘻淀-1 · XXr° 基乙基）-醯胺 125 〇-C 2-(5 -、/臭-2-嗣基-1，2 -二氮-亞1^卜呆-3-基甲 基）-5-甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2-二乙胺基- 乙基）-醯胺 -55 - 本纸張尺度適用中國困家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（53 ) 126 分〜C:’ a5^CM, Η 2,4-二甲基-5-[2-酮基· 1，2-二氫-亞啕哚-(3Ζ)·基 甲基]-1Η-吡咯-3-羧酸（2-二乙胺基乙基醯胺 381 [Μ+1] 127 广·CH1 〇, N 〜一CH, Η 5-[5-氯-2-酮基-1，2-二氫-亞啕 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(2-二乙胺基乙 基)-醯胺 415 [Μ+1] 128 〜0 o^r， 2,4-二甲基-5-[2-酮基-1，2-二 氫-亞啕哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二 曱基-1H-吡咯-3-羧酸(2-吡咯 淀-1-基乙基)-酿胺 381 [Μ+1] 129 Η 5-[5-氟-2-酮基-1,2-二氫-亞啕 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(2-吡咯啶-1-基 乙基)-醯胺 397 [Μ+1] 130 〜Ο Η 5-[5-氟-2-酮基-1，2-二氫-亞岣 哚-(3Z)-基甲基]-1Η-吡咯-3-羧 S^(2-p比鳴"淀-1-基乙基)-酿胺 413 [Μ+1] 131 ιΜ, Η 2,4-二甲基-5-[2-酮基-1，2-二 氫-亞啕哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二 甲基-1H-吡咯-3-羧酸(2-二甲 胺基乙基)-酿胺 353 [Μ+1] 132 XN'C. Fx^CH> Η 5-[5-氟-2-酮基-1，2-二氫-亞吲 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(2-二甲胺基乙 基)-酿胺 371 [Μ+1] 133 αΌ^κ CH> Η 5-[5-氯-2-酮基-1，2·二氫-亞峋 哚-(3Ζ)-基甲基]-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸(2-乙醯胺基-乙基)-醯胺 399 [Μ+1] -56 - 本紙張尺度逋用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（54 ) 134 〇 N 5-[5-氟-2-酮基-1，2-二氫-亞 4 哚-(3Ζ)-基甲基]-2,4-二甲基-1Η-吡咯各羧酸(2-乙醯胺基-乙基)-醯胺 383 [Μ+1] 135 0 .N 2,4-二甲基-5-[2-酮基-1,2-二 氫-亞蜊哚-(3Ζ)-基甲基]-1Η-吡 口各-3-^紅(2-乙縫胺基-乙基)_ 醯胺 365 [Μ+1] 136 Η 5-[5-溴-2-酮基-1，2-二氫-亞啕 哚-(3Ζ)-基甲基]-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸[3-(2-酮基-四 氣p密咬-1-基)-丙基]-酿胺 500 [Μ+1] 502 [Μ+1] 137 5-[5-亂-2-嗣基-1，2-二風-亞4| 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[3-(2-酮基-四 氣p密咬-1-基)-丙基]-酿胺 454 [Μ-1] 138 wCHj Η 5-[5-氟-2-酮基-1，2-二氫-亞吲 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[3-(2-酮基-四 風^密咬-1-基)-丙基]-酿胺 438 [Μ-1] 139 2,4-二甲基-5-[2-酮基-1，2-二 氫-亞峭哚-(3Z)-基甲基]-1H-吡 咯-3-羧酸[3-(2-酮基-四氫嘧 淀-1-基)-丙基]-驢胺 422 [Μ+1] 140 Η 5-[5-说基-2-§同基-1，2-二風-亞 啕哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[3-(2-酮基-四 鼠♦淀-1-基)-丙基]-酿胺 447 [Μ+1] 141 。δ 三氟醋酸4·Ρ-( {5-[5-溴-2-酮基-1，2-二氫-亞♦朵-(3Ζ)-基甲基]-2,4«二甲基-1Η-吡洛》3-羰基卜胺 基)-乙基>2-酮基-哌畊-1_鑌； 486 [Μ+1] 488 [Μ+1] 142 5-[5-氰基-2-酮基-1,2-二氩-亞 啕哚-(3Ζ)-基甲基]-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸[3-(2-酮基-四 風^比ρ各淀-1-基)-丙基]-酿胺 430 [Μ-1] -57 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4現格(210X297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（55 ) 143 NH ^ wCH, 5-[5-溴-2-酮基-1，2-二氫-亞㈤ 哚-(3Ζ)-基甲基]-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸[2-(2-酮基-咪 峻咬-1-基)-乙基]-酿胺 470 [M-1] 472 [M-1] 144 广NH c W " Η 5-[5-鼠-2-嗣基-1,2-^—裘τ亞丨 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[2-(2-酮基-咪 唑啶-1-基)·乙基]-醯胺 428 [M+1] 145 r^NH 5-[5-氟-2-酮基-1，2-二氫-亞吲 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[2-(2-酮基-咪 唑啶-1-基)-乙基]-醯胺 412 [M+1] 146 (^.NH 2,4-二甲基-5-[2-酮基-1，2-二 氫-亞啕哚-(3Z)-基甲基]-1H-吡 咯-3-羧酸[2-(2-酮基-咪唑啶-1-基)-乙基]-醯胺 392 [M+1] 147 Η 5-[5-氰基-2-酮基-1，2-二氫-亞 ♦呆-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[2-(2-酮基-咪 唑啶-1-基乙基]-醯胺 419 [M+1] 148 分〜0Ύ’ Η {4-[2-({5-[5-溴-2-酮基-1，2-二 氫-亞啕哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二 甲基-1H-吡咯-3-羰基}-胺基)-乙基]-喊呼-1-基}-醋故乙@旨 558 [M+1] 560 [M+1] 149 ο>° Η {4-[2-({5-[5-氯-2-酮基-1,2-二 氫-亞巧丨哚-(3Z)-基曱基]-2,4-二 甲基-1H-吡咯-3-羰基卜胺基)-乙基]-旅p井-1-基酷酸乙酉旨 514 [M+1] 150 Η {4-[2-({5-[5-氟-2-酮基-1，2-二 氫-亞♦果-(3Z)-基甲基]-2,4-二 甲基-1H-吡咯-3-羰基卜胺基)-乙基]-哌畊-1-基卜醋酸乙酯 498 [M+1] 153 0 ΝΗ Η 2,4-二甲基-5-{2-酮基-1，2-二 氫-亞啕哚-(3Z)-基甲基]-1Η-吡 咯-3_羧酸[2-(氰基甲基-胺基)-乙胺 362 [M-1] -58 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（56 ) 154 5-[5-溴-2-酮基-1，2-二氫-亞啕 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[3-(2-酮基-氮 畔-l-基)-丙基]-醯胺 511 [M-1] 513 [M-1] 155 Η 5-[5-氯-2-酮基-1，2-二氫-亞啕 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[3-(2-酮基-氮 畔-1 -基)-丙基]-酿胺 469 [M+1] 156 "of卜 5-〇氟-2-酮基-1，2-二氫-亞峋 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[3-(2-酮基-氮 畔-l-基)-丙基]-酿胺 453 [M+1] 157 ο 2,4-二甲基-5-[2-酮基-1，2-二 氫-亞巧哚-(3Z)-基甲基]-1Η-吡 咯-3-羧酸[3-(2-酮基-氮咩-1-基 丙基]-酷胺 435 [M+1] 158 Η 5-[5-氰基-2-酮基-1，2-二氫-亞 峋哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[3-(2-酮基-氮 咩-1-基)-丙基]-醯胺 460 [M+1] 159 CH， Η 5-[5-溴-2-酮基-1，2-二氫-亞啕 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(2-乙醯胺基-乙基)-醯胺 443 [M-1] 445 [M-1] 160 MfC ο Jj fO^：' ^ 三氟-醋酸4-[2-({5-[5-氟-2-酮基-1，2-二氫K哚-(3Z)-基甲基]-2,4_二甲基-1H-吡哈-3-羰基]-胺 基)-乙基]-2-酮基-喊畊-1·鑌； 426 [M+1] 161 。Jj 三氟-醋酸4-[2-({2,4-二甲基-5-[2-酮基-1，2-二氫-亞啕哚-(3Z)-基甲基]-1Η-吡咯-3-羰基卜胺 基)-乙基]-2-酮基-哌畊-1-鐳； 408 [M+1] -59 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（57 ) 162 〇 三ll-醋酸4-[2-({5-[5-氰基-2-酮 基-1，2-二氫-亞啕哚-(3Ζ)-基甲基 ]-2,4-二甲基-1Η-吡洛-3-羰基}-胺基)-乙基]-2-酮基-喊畊-1_鑌； 433 [M+1] 163 。d CHs Η 5-[5-溴-2-酮基-1，2-二氫-亞啕 哚-(3Ζ)-基甲基]-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸[2-(2-氰基-乙 胺基)-乙基]-酿胺 454 [M-1] 456 [M-1] 164 。一 a. Η 5-[5-氣-2-嗣基-1，2-«— 氮-亞 < 哚-(3Ζ)-基甲基]-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸[2-(2-氰基-乙 胺基)-乙基]-醯胺 410 [M-1] 165 。J Η 5-[5-氟-2-酮基-1，2-二氫-亞吲 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-111-?比哈-3-竣§^[2-(2-氨基-乙 胺基)-乙基]-醯胺 394 [M-1] 166 。 o^N CH， Η 2,4-二甲基-5-[2-酮基-1，2-二 氫·亞啕哚-(3Z)-基甲基]-1Η-吡 洛-3-幾故[2-(2-吼基-乙胺基)_ 乙基]-醯胺 376 [M-1] 167 。 Η 5-[5-氰基-2-酮基-1，2-二氫-亞 啕哚-(3Ζ)-基甲基]-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸[2-(2-氰基-乙 胺基乙基]•醯胺 401 [M-1] 168 。& 。④_V 二取τ醋故4-[2-({5-[5_乳-2-嗣基_ ’ 1，2-二氫-亞♦果-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡洛-3-羰基卜胺 基)-乙基]-2-酮基-喊畊-l*lt ; 440 [M-1] 168 〇 r"YCH, Χί>〇 Μ 5-[5-氣-2-嗣基-1，2-—風-亞口?1 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[2-(4-甲基-哌 畊-1-基)-乙基]-醯胺 424 [M-1] _- 60 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（58 ) 169 0 广… Η 5-[5-氟-2-酮基-1，2-二氫-亞啕 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[2-(4-甲基-哌 _-l-基)-乙基]-酿胺 440[M-1] 170 〇 广， 5-[5-溴-2-酮基-1，2-二氫-亞啕 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[2-(4-甲基-哌 口井-1-基)-乙基]-酿胺 484[M-1] 486 [M-l] 171 〇 广 νΧη， Η 2,4-二甲基-5-0酮基-1，2-二 氫-亞啕哚-(3Z)-基甲基]-1H4匕 咯-3-羧酸[2-(4-甲基-哌畊小 基)-乙基]-醯胺 406 [M-l] 172 。Λ (#CHi Η 2,4-二曱基-5-[2-酮基-1，2-二 氫-亞叫丨哚-(3Z)-基甲基]-1H-吡 咯-3-羧酸[2-(3,5-二甲基-哌畊-1-基)-乙基]-龜胺 422 [M+l] 173 。A Η 5-[5-氟-2-酮基-1,2-二氫-亞吲 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[2-(3,5-二甲 基-哌畊小基)·乙基]-醯胺 438 [M-l] 174 。A axxf"" 5-[5-氣-2-銅基-1，2-二風-亞 | 哚-(3Ζ)-·基甲基]-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸[2-(3,4-二甲 基-喊呼-1-基)-乙基]-酿胺 456 [M+l] 175 ? ?: CM, CCr° H 5-[5-溴-2-酮基-1，2-二氫-亞啕 哚-(3Ζ>基甲基]-2,4-二甲基-1Η-吡 4-3-羧酸[2-(3,5-二甲 基-浪p井-1-基乙基]-酿胺 498 [M-l] 500 [M-l] 176 〇5^· M 2,4-二甲基-5-[2-酮基-1,2-二 氫-亞啕哚-(3Z)-基甲基]-1Η-吡 咯-3-羧酸[3-(4-甲基-哌畊-1-基)-丙基]-酿胺 422[M+1] -61 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（59 ) 177 0 。CH, FO#C：> Η 5-[5-氟-2-酮基-1，2-二氫-亞啕 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[3-(4-甲基-哌 畊-1-基)-丙基]-醯胺 438 [M-1] 178 5-[5-氯-2-酮基-1，2-二氫-亞啕 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[3-(4-甲基-哌 畊-1-基)-丙基]-醯胺 454 [M-1] 179 H 5-[5-溴-2-酮基-1，2-二氫-亞啕 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[3-(4-甲基-哌 畊-1-基)-丙基]-醯胺 498 [M-1] 500 [M-1] 180 〇 H^y H 2,4-二甲基-5-[2-酮基-1，2-二 氫-亞啕哚-(3Z)-基甲基]-1Η-吡 咯-3-羧酸[3-(4-苄基-哌畊-1-基)-乙基]-酿胺 482 [M-1] 181 〇 h^/ 5-[5-氟-2-酮基-1，2-二氫-亞啕 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[2-(4-苄基-哌 畊-1-基)-丙基]-醯胺 500 [M-1] 182 ^fO 〇 H^y H 5-[5-氯-2-酮基-1,2-二氫-亞吲 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[2-(4-芊基-哌 畊-1-基)-丙基]-醯胺 517 [M-1] 183 o _ H 5-[5-溴-2-酮基-1，2-二氫-亞吲 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-咻咯-3-羧酸[2-(4-苄基-哌 呼-1-基)-丙基]-酿胺 560 [M-1] 562 [M-1] 184 H 5-[5-氯-2-酮基-1，2-二氫-亞啕 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(3-吡咯啶-1-基-2-嗣)-酿胺 480 [M+1] -62 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609
五、發明説明（6Q A7 B7 185 0 CF3C〇：H H 三氟醋酸4-P-({5-[5-氯-2-酮基-1，2-二氫-亞啕哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯各致酸卜胺 基)-乙基]-2-酮基-旅畊-1-鑌； 440 [M-1] 186 H 5-[5-氣-2-嗣基-1，2-«—鼠-亞p弓1 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(3-吡咯啶-1-基-2-銅)-驢胺 187 H 5-[5-氟-2-酮基-1,2-二氫-亞啕 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(3-批咯啶-1-基-2-酮)-醯胺 188 H 5-[2-酮基-1，2-二氫-亞吲哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-p 比 ^^-3 - 酸(3 - p 比1-1 -基-2- 酿胺 189 CH， 〇L>=0 cf3co2h H 5-[5-乳-2-銅基-1，2-—氮-亞口弓| 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基 1H-吡咯-3-羧酸(2-吡啶-2-基乙 基)-酿胺 190 ^ CH， iQnVo CF3C〇2H M 5-[5-氟-2-酮基-1，2-二氫-亞峭 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(2-吡啶-2-基乙 基)-醯胺三氟醋酸鹽 191 fr^cs CH1 cm H 5-[2-酮基-1，2-二氫-亞啕哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(2-吡啶-2-基乙 基)-醯胺鹽酸鹽 192 cfiC〇2h H 5-[5-溴-2-酮基-1,2-二氫-亞吲 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(2-吡啶-2-基乙 基)-醯胺三氟醋酸鹽
裝 訂
線 -63 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609 A7 B7 五 、發明説明（61 ) 193 〇 J 5-[5 -氣-2-嗣基-1，2 -二風-亞 4丨嗓- (3Z)- 基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(2- 乙胺基乙基）-醯胺 194 5-[5-氟-2-酮基-1,2-二氫-亞蜊哚-(3Ζ)- 基甲基]-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸(2- 胺乙基）-醯胺 195 5-[5-氟-2-酮基-1，2-二氫-亞峋哚-(3Ζ)- 基甲基]-2,4-二甲基-2,4-二甲基-1Η-吡 17各-3-叛酸(2-二乙基-Ν-嗣基胺乙基)-酿胺 196 。 H,c ^ --- 5-[5 -氣-2-銅基-1，2 -二氯-亞 丨嗓- (3Ζ)- 基甲基]-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸（2- ΧίΟ*0 乙基- N-無基-胺乙基）-酿胺 197 5-[5 -氣-2-嗣基-1，2 -二氮-亞丨嗓-(3 Ζ) _ vy3^ 基甲基]-竣酸（2-二乙胺基-2_ XXr Η 羥乙基）-醯胺 198 r Ο N 5-[5-氟-2-酮基-1,2-二氫-亞啕哚-(3Z)- 基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[2- υ>° Η 乙基-2-(2-羥乙基）胺乙基]-醯胺 199 v-c 5-[5 -乳-2 -嗣基-1，2 -二氮-亞丨嗓- (3Z)_ 基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[2- 乙基-2-(1-羥乙基）胺乙基]-醯胺 200 5-[5 -吼基-2-嗣基-1，2 -二氮-亞4丨嗓- (3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧 o>° 酸（2-N-·乙酿基胺乙基）-酿胺 201 5-[5 -氣-2-嗣基-1，2 -二風-亞 丨嗓-(3 Z) · 基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（羧 UK 甲基）-醯胺 -64 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（ 203 204 202
205 5-[5 -氟-2-_基'1，2*«二氫-亞 4卜呆_ (32)-基甲基]-11^比咯-3-羧酸[2-(2· _氫乙胺基）乙^]-醯胺 5-[5-氰基-2-酮基-1，2-二氫《«亞μ卜果__ (32)-基甲基]-111-吡咯_3-羧酸（2_17比 啶-2-基乙基）-醯氟醋酸鹽 5-[5 -溴-2-酮基-1，2-二氫-亞巧嗓_ (32)-基甲基]-111-吡咯-3-羧酸(3^比 淀-1-基-2-酮丙基)-壟胺三氟醋酸鹽 3-(3,5-二甲基p比嘻-2-基亞甲基）-^ (4-甲基哌畊-1-基甲基>2-啕哚p林酮
3-(3,5-二甲基吡咯-2-基亞甲基）_ 叶匕嘻咬-1-基甲基）-2-4卜呆淋酮 206 化合物編號相當於實例段落之實例編號。即表1中化合 物1之合成述於實例1。示於表1之化合物僅為示範實例不 欲以任何方式限制本發明範圍。可用於本方法中之其他蛋 白質激酶抑制劑包括3-(3,5-二甲基吡咯-2 -基亞甲基]·2_< 哚啉酮（su 5416) ; 3-[3,5-二：甲基-4-(2·羧乙基）吡咯·2_基亞 甲基]-2-W哚啉酮（sii 6668)，及3-[3-(2-羧乙基）·5·甲基峨 哈-2-基亞甲基）-2 -4丨嘴琳嗣。 Β .式（II)及式（III)化合物-環氩gfe - 2選楛性抑制^jr 可用於本發明之COX-2抑制劑未限制實例鑑知於下表工j 及III中。 -65 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（63 )
表II 化合物 商品/研究名 參考文獻 劑量 1，5-二苯基-3-經取代的吡 唆類 W0 97/13755 radicicol W0 96/25928. Kwon et (Cancer Res (1992) 52 6296) GB-02283745 TP-72 Cance Res 1998 58 4717-723 1 -(4-氯亨醯基)-3 -[4-(4-氟苯 基 >墓唑-2-基甲基]-5-曱氧 基-2-甲基喇哚 A-183827.0 GR-253035 4-(4-環己基-2-甲基呤吐-5-基)-2-氟苯磺醯胺 JTE-522 JP 9052882 5-氯-3-(4-(甲基磺醯基)苯 基)-2-(甲基-5-吡啶基)-吡啶 2-(3,5-二氟-苯基)-3,4·(甲基橫 酿基)-麥基)-2-環戊缔-1 -酉同 L-768277 L-783003 MK-966; VI0XX® US 5968974 12.5-100毫克經 P 消炎痛-衍生的啕哚烷酸 WO 96/374679 200毫克/公斤/天 1-甲基績酿基-4-[l，l-二甲 基·4-(4·氟苯基)環戊-2,4-二 婦-3-基]苯 WO 95/30656. WO 95/30652. WO 96/38418. WO 96/38442. 4,4-二甲基-2-苯基-4-[4-(甲 基績醯基)苯基1環丁烯酮 ______ - 66 - 本紙張尺度通用中國國家棣準(CNS) A4規格(21〇x297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（64 ) 化合物 商品/研究名 參考文獻 劑量 butenone 2-(4-甲氧苯基)-4-甲基小(4- 胺績酸基苯基各 EP 79983 N-[5-(4-氟)苯氧基]噻吩-2-甲燒續酸胺 RWJ-63556 5(E)-(3,5-二-第三-丁基-4-羥 基)亞卞基-2-乙基-1，2-異p塞 唑啶-1，1-二氧化物 S-2474 EP 595546 3-甲醯基胺基-7-甲基磺醯 基胺基-6-苯氧基-4H-1-苯並 叶匕喃-4-11¾ Τ-614 DE 38/34204 4-(5-(5-甲基苯基)-3-(二氣 甲基yiH-t7比σ坐-1-基)-本績 醯胺 希樂葆 US 5466823 CS 502 (Sankyo) 2-[(2-氯-6-乳苯基)胺基]-5-甲基苯乙酸 洛米考昔 (Cox-189) WO 99/11605 5-氣-6’-甲基-3-[4-(甲基續酿 基)苯基]-2,3’-聯吡啶 野多考昔 (MK 663) WO 98/03484 BMS 34070 US 6180651 美洛昔康 US 4233299 15-30毫克/天 尼美蘇代 US 3840597 裝 訂
線 -67 -本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（65 ) 表III WO 99/30721 WO 99/30729 US 5760068 WO 98/15528 WO 99/25695 WO 99/24404 WO 99/23087 FR 27/71005 EP 921119 FR 27/70131 WO 99/18960 WO 99/15505 WO 99/15503 WO 99/14205 WO 99/14195 WO 99/14194 OW 99/13799 GB 23/30833 US 5859036 WO 99/12930 WO 99/1 1605 WO 99/10332 WO 99/10331 WO 99/09988 US 5869524 WO 99/05104 US 5859257 WO 98/47890 WO 98/47871 US 5830911 US 5824699 WO 98/45294 WO 98/43966 WO 98/41511 WO 98/41864 WO 98/41516 WO 98/37235 EP 86/3134 JP 10/175861 US 5776967 WO 98/29382 WO 98/25896 ZA 97/04806 EP 84/6,689 WO 98/21195 GB 23/19772 WO 98/1 1080 WO 98/06715 WO 98/06708 WO 98/07425 WO 98/04527 WO 98/03484 FR 27/51966 WO 97/38986 WO 97/46524 WO 97/44027 WO 97/34882 US 5681842 WO 97/37984 US 5686460 WO 97/36863 WO 97/40012 WO 97/36497 WO 97/29776 WO 97/29775 WO 97/29774 WO 97/28121 WO 97/28120 WO 97/27181 WO 95/1 1883 WO 97/14691 WO 97/13755 WO 97/13755 CA 21/80624 WO 97/1 1701 WO 96/41645 WO 96/41626 WO 96/41625 WO 96/38418 WO 96/37467 WO 96/37469 WO 96/36623 WO 96/36617 WO 96/31509 WO 96/25405 WO 96/24584 WO 96/23786 WO 96/19469 WO 96/16934 WO 96/13483 WO 96/03385 US 5510368 WO 96/09304 WO 96/06840 WO 96/06840 WO 96/03387 WO 95/21817 GB 22/83745 WO 94/27980 WO 94/26731 WO 94/20480 WO 94/13635 FR 27/70,131 US 5859036 WO 99/01131 WO 99/01455 WO 99/01452 WO 99/01130 WO 98/57966 WO 98/53814 WO 98/53818 WO 98/53817 WO 98/47890 US 5830911 US 5776967 WO 98/22101 DE 19/753463 WO 98/21195 WO 98/16227 US 5733909 WO 98/05639 WO 97/44028 WO 97/44027 WO 97/40012 WO 97/38986 US 5677318 WO 97/34882 WO 97/16435 裝 訂
線 -68 -本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210X297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（66 ) WO 97/03678 WO 97/03667 WO 96/36623 WO 96/31509 WO 96/25928 WO 96/06840 WO 96/21667 WO 96/19469 US 5510368 WO 96/09304 GB 22/83745 WO 96/03392 WO 94/25431 WO 94/20480 WO 94/13635 JP 09052882 GB 22/94879 WO 95/153 16 WO 95/153 15 WO 96/03388 WO 96/24585 US 5344991 WO 95/00501 US 5968974 US 5945539 US 5994381 US 6180651 吡唑類可以WO 95/153 16所述之方法製備。吡唑類可進 一步以WO 95/153 15所述之方法製備。吡唑類也可以WO 96/03385所述之方法製備。噻吩類似物可以WO 95/00501所 述之方法製備。4吩同系物之製備也述於WO 94/15932中 。噚唑類以WO 95/00501所述之方法製備。哼唑類也可以 WO 94/27980所述地製備。異哼唑可以WO 96/25405所述之 方法製備。咪唑類可以WO 96/03388所述之方法製備。咪 唑類也可以WO 96/03387所述製備。環戊烯環氧酶-2抑制 劑可以U.S. Pat No. 5,344,991所述之方法製備。環戊烷Cox-2抑制劑之製備也述於WO 95/00501。聯三苯基化合物可以 WO 96/16934所述方法製備。嘧唑化合物可以WO 96/03392 所述之方法製備。吡啶化合物可以WO 96/03392所述之方 法製備。吡啶化合物之製備也述於WO 96/24585。 用於本發明治療組合物中之希樂葆（celecoxib)可以U.S· Pat No· 5,466,823所示之方式製備。 用於本發明治療組合物中之伐地考昔（valdecoxib)可以 U.S· Pat No. 5,633,272所示之方式製備。 用於本發明治療組合物中之帕瑞考昔（parecoxib)可以U.S. -69 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（67 )
Pat No. 5,932,598所示之方式製備。 用於本發明治療組合物中之羅菲考昔（rofecoxib)可以u 卩&1>^〇.5,968,974所示之方式製備。 用於本發明治療組合物中之Japan Tobacco JTE-522可以 JP 90/52,882所示之方式製備。 用於本發明治療組合物中之洛米考昔（lumiracoxib)(Cox-189)可以WO 99/1 1605所示之方式製備。 用於本發明治療組合物中之野多考昔（etoricoxib)(MK 663)可以WO 98/03484所示之方式製備。用於本發明治療組合物中之Bristol Meyers SquibNs BMS 34070可以U.S. Pat No.6,180,651所示之方式製備。 列於表II及表III之上述參考文獻，描述各種適用於本發 明之各種COX-2抑制劑，及彼之製法，因此個別納為參考。 可用於本發明之較佳COX_2抑制劑包括下列，但不限於 此： C1)
JTE-522，4-(4-環己基-2 -甲基呤唑-5-基）-2-氟苯磺 醯胺； C2) 5-氣-3-(4-(甲基磺醯基）苯基）-2-(甲基-5-吡啶基）吡啶； -70 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 裝 訂
線 1230609 A7 B7 五、發明説明（68 ) C3) 2-(3,5-二氟苯基）-3,4-(甲基磺醯基）苯基）-2-環戊烯-1 -酮； C4)
4-[5-(4-甲基苯基）-3-(三氟甲基）-1Η-吡唑-1-基]-苯 磺醯胺； C5)
羅菲考昔（rofecoxib)，4-(4-(甲基橫醯基）苯基]-3-苯 基-2(5H)-呋喃酮；
4-(5-甲基-3-苯基異呤唑-4-基）苯磺醯胺； -71 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 A7 B7
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本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（73 ) 4-[1-苯基-3-(三氟曱基）-1Η-吡唑-5-基]苯磺醯胺； C24)
4-[5-(4-氟苯基）-3-(三氟甲基)-1Η-吡唑-1-基]苯磺醯 胺；
N-[2-(環己基氧基）-4-硝基苯基]甲烷磺醯胺； C26)
N-[6-(2,4-二氟苯氧基）-2,3-二氫-1 -酮基-1H-雖-5-基] 甲燒苯橫醯胺； -76 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4現格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（74 ) NHSO2CH3
C27) 3-(4-氯苯氧基）-4-[(甲基磺醯基）胺基]苯磺醯胺； C28)
3-(4-氟苯氧基）-4-[(甲基磺醯基）胺基]苯磺醯胺； C29)
3-[(1-甲基-1H-咪唑-2-基）硫]-4-[(甲基磺醯基）胺基] 苯磺醯胺； C30) ch3
本紙張尺度逍用中國國家標準(CNS) A4現格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（75 ) C31) 5, 5-二甲基-4-[4-(甲基磺醯基）苯基]-3-苯氧基 -2(5H)-呋喃酮； NHSO2CH3 Ύ Ν CH3
〇
C32) N-[6-[(4-乙基- 2-p塞17坐基）硫基]-1，3 -二氯-1-嗣基-5 異苯並呋喃基]甲烷磺醯胺； NHSO2CH3 91,s、
ClH，S\f 3-[(2,4-一乳本基）硫]-4-[(甲基橫酿基）胺基]苯橫酿 胺； C33)
1 -氟-4-[2-[4-[(甲基磺醯基）苯基]環戊晞-1 -基]苯 -78 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7
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本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210x 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（78 ) [1，1\ 2’，Γ-聯三苯基]-4-磺醯胺；
4 C 〇
4-(甲基磺醯基）-1，1'，2]，1”-聯三苯基；
4-(2-苯基-3-ρ比淀基）苯橫驢胺； C43)
言Ο N-(2,3-二氫-1，1-二氧化物基-6 -苯氧基 唑-5-基）甲烷磺醯胺；及 -1,2-苯並異魂 -81
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本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4現格(210X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（83 ) 4-[5-(4-氯苯基）-3-(三氟甲基）-1Η-吡唑-1-基]苯磺醯 胺；及 IX)洛米考昔（lumiracoxib)(COX-189) H2
_ 2-[(2-氯-6-氟苯基）胺基]-5-甲基苯醋酸 又較好，可用於本發明之COX-2抑制劑包括希樂葆 (celecoxib)，伐地考昔（valdecoxib)，帕瑞考昔（parecoxib)， 羅菲考昔（rofecoxib)，洛米考昔（lumiracoxib)及曰本煙草 JTE-522，但不限於此。 也包括在本發明組合物中的是所述化合物之異構型，前 藥及互變異構物，及其藥學上可接受之鹽。可供說明之藥 學上可接受鹽係製備自甲酸，醋酸，丙酸，丁二酸，乙醇 酸，葡糖酸，乳酸，韻果酸，酒石酸，擰檬酸，抗壞血酸 ，葡糖醛酸，馬來酸，延胡索酸，丙酮酸，天冬胺酸，穀 胺酸，苯甲酸，鄰氨基苯甲酸，甲磺酸，硬脂酸，水楊酸 ，對位-羥基苯甲酸，苯基醋酸，杏仁酸，雙羥萘酸，甲 烷磺酸，乙烷磺酸，苯磺酸，泛酸，甲苯磺酸，2 -羥基乙 烷磺酸，磺胺酸，環己基胺基磺酸，海藻酸，β -羥基丁酸 ，半乳糖二酸及半乳糖醛酸。 -86 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 裝 訂
1230609 A7 B7 五、發明説明（84 ) 利用性 本發明化合物為蛋白質激酶（PKs)及環氧酶酵素之抑制劑 ，特別是環氧酶-2酵素，且因此可用於治療癌症。 PKs之催化活性可為本發明式（I)化合物可調控者包括蛋 白質酪胺酸激酶，如受體酪胺酸激酶（RTKs)，細胞酪胺酸 激酶（CTKs)，及弱胺酸-蘇胺酸激酶（STKs)。RTK由與特異 的生長因子（配體）細胞外交互作用而啟動所調介之訊號轉 導，繼之受體之二聚化作用，内在蛋白質酪胺酸激酶活性 及磷醯化作用之暫時刺激作用。由是可生成結合位置以為 細胞内訊號轉導分子，而有與細胞質内傳訊分子之複合物 之形成，其可促進適合的細胞反應（如細胞分裂，對於細 胞外微量環境之代謝作用）。見，Schlessinger and Ullrich， 1992. Neuron 9:303-391。 已示出，在生長因子受體上之酪胺酸磷醯化作用位置作 用是傳訊分子SH2 (src同質物）水能部位之高-親和力結合 位置。Fantl et al·，1992, CeH 69:413-423，Songyang et al·， 1994, Mol Cell. Biol· 14:2777-2785)，Songyang et al·，1993, Cell 72:767-778,及Koch et al·，1991，Science 252:668-678， 已鑑定出許多與RTKs有關之細胞内受質蛋白質。其分成二 大類：（1)具有催化功能部位之受質，及（2)缺乏此功能部 位但可充作承接子，且與催化活性分子有關之受質。 Songyang et al., 1993, C^L 72:767-778。在受體及其受質 SH2功能部位間之交互作用特_異性，可由緊接在磷醯化酪 胺酸殘基之胺基酸殘基來決定。S Η 2功能部份及圍繞在特 -87 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐)
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殊受體上磷酸酪胺酸殘基之胺基酸序列間結合親和力之差 異，和在其受質磷醯化作用特徵上所觀察到之差異符合。 Songyang et al·，1993, CeH 72:767-778。這些觀察建議，各 P T K之功能不僅由其表現型式及配體生物利用率來決定， 也可由可為特殊受體所活化之下游訊號轉導路徑之排列來 決定。因此，磷醯化作用提供一個重要的調控步騾，其可
裝 決足為特異生長因子受體所補給之傳訊路徑之選擇性，以 及分化因子受體。 STKs，主要在胞液中，可影響細胞之内部生化，常可充 作的對PTK事件之直接反應。STKs已涉入傳訊過程中，其 可啟動D N A合成並接續之有絲分裂，最後造成細胞增殖。 訂
因此，在其他反應中，PK訊號轉導可造成細胞增殖， 分化，生長及代謝。不正常的細胞增殖會造成各樣的失調 症及疾病’包括贅瘤之發展，如癌，肉瘤，神經膠質母細 胞瘤及血管瘤，失調症如白血病，牛皮癖，動脈硬化，= 節炎及糖尿病腎病變及與未受控之新血管形成有關之其他 失調症及/或與維管生長有關之失調症。 、 在實行.本發明中，並不需要對本發明化合物抑制pKs之 機制有精確之了解。然而雖然並不因此受縛於任何特殊機 制或理論，咸信式（I)化合物可與PKs催化區中之胺基酸交 互作用。PKs通常具有雙葉結構，其中Ατρ似乎可盥二= 間之裂口結合，其中所有區域之胺基酸之pKs間具^保留 性。咸信PKs之抑制劑可經由非-共價交互作用而結合: 如氩鍵，凡總瓦爾力及在上述A p T與p K s結合之相同一般 -88 -
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發明説明（86 ) £域中之離子交互作用。魴妯3 μ Α 从、 ?又特異的，一般認為式（I)化合 物< 2 -峭哚啉酮組份，可在 、 在為ΑΤΡ<腺嘌呤環所正常占據 < —般空間中結合。而由於六〇 ，丨a u 八 田於在2 ·吲哚啉酮核心上之各種組 物及與特殊PKs具特異性之 足妝基鉍功能邵位間額外的交互 作用，特殊分子可對特殊的 不j P K生成特異性。因此，不同 的％嗓琳酮組份，對特殊的PKs可貢獻不同的結合性。在 不同的ατρ (或其他核:y：酸)結合位置上選擇見活性化合物 义能力，使式（I)化合物可對準任何有此部位之蛋白蛋。 此中所揭示之式⑴化合物對此種蛋白質有於試管内分析 <利用性，而經由與此蛋白質之交互作用也可呈現活體内 之治療作用。 另外，式（I)化合物對於治療各種固體腫瘤可提供治療 途裎，包括癌，肉瘤，包括卡波西氏肉瘤，母紅血球肉瘤 ，神經膠質母細胞瘤，腦膜瘤，星細胞瘤，黑色素瘤及肌 胚細胞瘤。本發明也包括非固體腫瘤癌症之治療或預防， 如白血病《適應症包括腦癌，膀胱癌，卵巢癌，胃癌，胰 臟癌，結腸癌，血癌，肺癌及骨癌，但不限於此。 本發明化合物可用於預防，治療及研究之與不適當PK 活性有關之失調症種類進一步實例包括細胞增殖性失調症 ’纖維性失調症及代謝失調症，但不限於此。 以本發明可預防，治療或進一步研究之細胞增殖性失調 症包括癌症，血管增殖性失調症及系膜細胞增殖性失調症。 血管增殖失調整指的是與不正常的脈管發生（血管形成> 及新血管生成（血管之分佈）有關之失調症。雖然脈管發生 -89 - 本纸張尺度適用中國囷家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（87 ) 及新血管生成在各種正常生理過程中扮演重要角色，如胚 胎發展，黃體形成，傷口癒合及器官再生，其在癌症發展 中也扮演中樞角色，其中其可造成維持腫瘤存活所必要之 新毛細管之形成。血管增殖失調症的其他實例包括關節炎 ，在此新的維血管侵入關節並破壞軟骨，及眼科疾病，如 糖尿病腎病，其中在視網膜上之新的維血管可侵入玻璃體 ，流血並造成失明。 已鑑定出二個結構相關之RTKs，其以高親和力與VEGF 結合：類-fms 路胺酸 1 (fit-1)受體（Shibuya et al·，1990, Oncogene, 5:5 19-524; De Vies et al·，1992，Science, 25 5:989-991)及KDR/FLK-1受體，也知為VEGF-R2。已報告知血管 内皮生長因子（VEGF)是一種内皮細胞特異的分裂素具有試 管内的内皮細胞生長促進活性。Ferrara & Henzel，1989, Biochein. Biophvs. Res. Comm., 161:85 1-858; Vaisman et al·， 1990, J. Biol· Chem·· 265:19461 -19566。在 U.S·申請案 Nos. 08/193,829，08/038,596 及 07/975,750 中所示之資料推知， VEGF並不僅負貴内皮細胞之增殖，也是正常及病理性新 血管生成之主要調控物。大體上見Klagsbum & Soker，1993, Current Biology, 3(10) 699-702; Houck, et al., 1992, J. Biol· Chem·· 267:26031-26037 〇 正常的脈管發生及新血管生成在各種生理過程中扮演重 要的角色，如胚胎的發展，傷口癒合，器官再生及女性之 生殖過程，如在排卵中黃體内之濾泡發展及懷孕後胎盤之 生長。Folkman & Shing，1992, J. Biological Chem.. 267(16): -90 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609 A7 __B7__ 五、發明説明（88 ) 1093 1-34。未受控之脈管發生及/或新血管生成與疾病有關 ，如糖尿病，以及依賴血管生成而生長之惡性固體腫瘤。 Klagsburn & Soker，1993，Current Biology, 3(10): 699-702; Folkham, 1991, J. Natl· Cancer Inst·, 82:4-6; Weidner，et al·， 1991，New Engl· J Med·· 324:1-5 〇 在脈管發生及新血管生成中，VEGF在内皮細胞增殖及 轉移中之综合角色顯示出KDR/FLK-1受體在這些過程中之 重要角色。糖尿病（Folkman，198，於 Xlth Congress of Thrombosis and Haemostasis (Verstraeta, et al., eds), pp. 583-596，Leuven University Press，Leuven)及關節炎，以及惡性 腫瘤生長可能始自未受控之血管生成。如見Folkman，1971， N. Engl. J. Med.. 285: 1 182-1 186。VEGF可與之特異結合之 受體，是一種重要且有力之治療劑，可用於調節及控制脈 管發生及/或新血管生成，及其中因此過程引起不正常細 胞生長之各樣嚴重疾病。Plowman，et al，1994，DN&P, 7(6): 334-339。較特別地，KDR/FLK-1受體對新脈管生成之高度 特異角色，使其成為癌症及涉及未受控血管形成之其他疾 病之首選治療劑。 因此，本發明提出可調節及/或控制酪胺酸激酶訊號轉 導之化合物，包括KDR/FLK-1受體訊號轉導，以抑制或促 進新血管生成及/或血管生成，即當為如VEGF之配體所活 化時，可抑制，預防或干擾KDR/FLK-1所轉導之訊號。雖 然咸信，本發明化合物配合酪胺酸激酶訊號轉導路徑作用 在受體或其他組份，其也可直接作用在腫瘤細胞上，而後 _ - 91 - 本紙張尺度適用中國國家標竿(CNS) A4規格(210X297公釐)
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1230609 A7 B7 五、發明説明（89 ) 者則始自未受控之新血管生成。 雖然人類及鼠類遺傳”flk-I”受體之對映部份名稱有異， 然其在許多方面仍是可互換的。鼠類受體，Flk-Ι，及其人 類對映部份，KDR，在細胞内功能部位内共有93.4%之序 列同質性。另外，鼠類FLK-Ι與人類VEGF之結合親和力和 鼠類VEGF相同，且因此可為由任一種類衍生之配體所活 化。Millauer et al·，1993，Cell, 72:835-846; Quinn et al., 1993, Proc· Natl· Acad· Sci USA, 90:7533-7537 〇 FLK-1 當其 表現在2 9 3細胞中時（人類胚胎腎纖維母細胞）可與人類 R 丁 K受體（如PLC-γ或p85)結合，接下來並酪胺酸磷醯化之。 因此依賴FLK-Ι受體之模式可直接被用來了解KDR受體 。例如，在鑑定可調節鼠類訊號轉導路徑之化合物之方法 中使用鼠類FLK-Ι受體，可直接應用至可調控人類訊號轉 導路徑之化合物之鑑定上，即，可調控與KDR受體有關之 活性。因此，於試管内被鑑知為KDR/FLK-1之抑制劑之化 學化合物，可在適合的活體内模式中被證實。在檢查作用 物作用在KDR/FLK-1誘生之訊號轉導路徑上之臨床潛力方 面，已證明知活體内老鼠及大鼠動物模式是極具價值的。 因此，本發明提出可經由影響KDR/FLK-1受體之酵素活 性及干擾由KDR/FLK-1誘導之訊號，可調節，控制及/或抑 制脈管發生及/或新血管形成之化合物。因此，本發明對 許多種固體腫瘤之治療提供治療途徑，包括神經膠質母細 胞瘤，黑色素瘤及卡波西氏肉瘤，及卵巢，肺，乳房，前 列腺，胰臟，結腸及類上皮細胞癌。此外，數據也建議投 -92 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（9〇 ) 予可抑制KDR/FLK-1調介之訊號轉導路徑之化合物，可用 來治療血管瘤，再狹窄及糖尿病腎病變。 再者，本發明是有關經由其他受體-調介之路徑對脈管 發生及新血管生成之抑制作用，包括含有fit-1受體之路徑。 受體酶胺酸激酶調介之訊號轉導作用，係由與特異生長 因子（配體）之細胞外交互作用而啟動，繼之受體二聚化作 用，内在蛋白質酪胺酸激酶活性之暫時刺激，及自動磷醯 化作用。由是可產生用於細胞内訊號轉導分子之結合位置 ，其導致與各種胞質傳訊分子之複合物之形成，如此有助 於適合的細胞反應，如細胞分化及對細胞外微量環境之代 謝作用。見，Schlessinger and Ullrich, 1992, Neuron· 9:1-20。 KDR/FLK-1之細胞内區域與PDGF-β受體（50.3%同質性）及 /或相關的flt-1受體間之高度同質性顯示，有重疊的訊號轉 導路徑之誘生。例如，對PDGF-β受體而言，已示出src族 之成員（Twamley et al·，1993，Proc· Natl· Acad· Sci. USA· 90:7696-7700)，磷脂醯基肌醇-3’-激酶（Hu et al.，1992, Mol· Cell. Biol·, 12:981-990)，鱗脂酶 cy (Kashishian & Cooper， 1993，Mol. Cell· Biol·· 4:49-5 l)ras-GTPase-活化蛋白質 (Kashishian et al·，1992，EMBO J·· 1 1:1373-1382)，PTP-ID/syp (Kazlauskas et al·，1993，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 10 90:6939-6943)，Grb2 (Arvidsson et al·，1994，Mol· Cell· Biol·, 14:6715-6726)及承接子分子 She 及Nek (Nishimura et al.，1993, Mol· Cell. Biol·, 13:6889-6869)可結合至涉及不同 的自主鱗酿化作用位置之區域《大體上見，Claesson-Welsh， -93 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7_ 五、發明説明（91 ) 1994, Prog. Growth Factor Res., 5:37-54。因此，可為KDR/FLK-1 所活化之訊號轉導路徑包括ras路徑（Rozakis et al·，1992, Nature, 360:689-692)，PI-3*-激酶 ’ src-調介之及plcy-調介 之路徑。這些路徑各自内皮細胞中KDR/FLK-1之新血管生 成及/或脈管發生作用上扮演關鑑性角色。因此，本發明 又進一步方面是有關使用此處所述之有機化合物以調控新 血管生成及脈管發生，因這些過程係由這些路徑所控制的。 反之，與血管之萎縮，收縮或閉合有關之失調症，如再 狹窄，也涉及其中且可以本發明方法所處理或預防的。 纖維變性失調症是指細胞外基質之不正常形成。纖維變 性失調症之實例包括肝硬化及系膜細胞增殖失調症。肝硬 化之特徵在於細胞外基質組份之增加，造成肝硬痂之形成 。細胞外基質增加造成肝硬痂也可由病毒感染所致，如肝 炎《脂肪細胞在肝硬化中似乎扮演主要角色。其他有關之 纖維變性失調症包括動脈硬化。 系膜細胞增殖失調症是指由系膜細胞不正常增殖所致之 失調症。系膜細胞增殖失調症包括各種人類腎臟疾病，如 血管球性腎炎，糖尿病腎病變及惡性腎硬變，以及如血栓 性微血管病變徵候群，移植物排斥，及腎血管球病變。 RTK PDGFR已涉及系膜細胞增殖之維持中。Floege et al·， 1993，Kidney International 43:47S-54S ° 許多癌症為細胞增殖失調症，且如先前所示，P K s與細 1包增座_失調痒JT瀾。因此，並不意外，PKs如RTK族成員 與癌症之發展有關。這些受體中某些、如EGFR (Tuzi et -94 - 本紙張尺度適用中國國家棵準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（92 ) al·，1991，Br. J. Cancer 63:227-233, Torp et al·，1992，APMIS 100:713-719)HER2/neu (Slamon et al., 1989, Science 244 ： 707-712)及 PDGF-R (Kumabe et al., 1992，Oncogene, 7:627-633)在許多腫瘤中過度表現及/或可為自泌素環帶持績地活 化。事實上，在最常見且嚴重之癌症中，這些受體過度表 現（Akbasak and Suner-Akbasak et al., 1992，J Neurol. Sci·， 111:119-133，Dickson et al., 1992，Cancer Treatment Res· 61:249-273, Korc et al·，1992，J. Clin. Invest· 90:1352-1360) 及自泌素環帶（Lee and Donoghue，1992，J. Cell· Biol·, 1 18:1057-1070，Korc et al·，上文，Akbasak and Suner-Akbasak et al,上文）(已被證明。例如，EGFR與鱗狀細胞癌，星細胞 瘤，神經膠質母細胞瘤，頭及頸部癌症，肺癌及膀胱癌有 關。HER2與乳房，卵巢，胃，肺，胰臟及膀胱癌有關。 PDGFR與神經膠質母細胞瘤及黑色素瘤以及肺，卵巢及前 列腺癌有關。RTK c-met也與惡性腫瘤之形式有關。例如， c-met在其他癌症中，與結腸肛門，甲狀腺，胰臟，胃及肝 細胞癌及淋巴瘤有關。此外，c-met與白血病有關。在霍奇 金氏（Hodgkins)病及巴氏（Burkits)病之患者中也可測及c-met基因之過度表現。 IGF-IR，除了涉及營養性支持及在II型糖尿病之外，也 與許多種糖尿病有關。例如，對許多腫瘤型式而言，IGF-I 可充作自泌素生長刺激物，如人類乳癌腫瘤細胞（Arteaga et al·，1989, J. Clin· Invest· 84:1418-1423)及小肺腫瘤細胞 (Macauley et al., 1990, Cancer Res·, 50:25 1 1-25 17)。此外， _____· 95 - 本纸银尺度適用中國國家襟準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609 A7 _B7___ 五、發明説明（93 ) IGF-1雖然完整地涉及神經系之正常生長及分化，似乎也是 人類神經膠質瘤之自泌刺激物。Sandberg-Nordqvist et al·， 1993, Cancer Res· 53:2475-2478。IGF-IR及其配體在細胞增 殖中之重要性可由許多培養中之細胞型式（纖維母細胞， 上皮細胞，平滑肌細胞，T -淋巴細胞，骨髓樣細胞，軟骨 細胞及骨母細胞（骨髓之幹細胞））因IGF-I而刺激生長之事 實而進一步支持。Goldring and Goldring，1991，Eukaryotic Gene Expression, 1:301-326 o Baserga and Coppola 建議， IGF-IR在轉形機制中扮演中樞角色，且因如此為各種人類 惡疾治療介入之較佳標乾。Baserga，1995，Cancer Res·· 55:249-252，Baserga，1994，Call 79:927-930，Coppola et al·， 1994, Mol· Cell. Biol·· 14:4588-4595 ° STKs已涉及於許多癌症型式中，包括值得注意的乳癌 (Cance, et al., Int· J· Cancer, 54:571-77 (1993)) o 不正常P K活性及疾病間之相互關係並不限於癌症。例 如，RTKs與下列疾病有關：牛皮癖，糖尿病，子宮内膜組 織異位形成，新血管生成，粉瘤斑發展，阿滋海默爾氏病 ，再狹窄，凡希波耳-琳達（von Hippel-Lindau)疾，表皮過 度增殖，神經退化性疾病，與年齡有關之斑退化及血管瘤 。例如，EGFR在角質及皮膚傷口癒合上已被示出。而在II 型糖尿病中則有胰島素-R及IGF-IR之缺失。關於特異RTKs 及其治療適應症間較完全之相互關係示於Plowman et al.， 1994, DN&P 7:334-339 〇 如先前所示，不僅是RTKs也有CTKs，包括src，abl，fps _____- 96 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（94 ) ，yes，fyn，lyn，lck，blk，hck，fgr及yrk但不限於此（總覽 見 Bolen et al.，1992, FASEB J·, 6:3403-3409)涉及於增殖及 代謝訊號轉導路徑，且因此可預期且已示出涉及於許多與 本發明有關之PTK-調介之失調症中。例如，突變的src (V-src)已示出是雞之致癌蛋白（pp60v-src)。再者，其細胞同係 物，原-致癌基因pp60c_src可傳送許多受體之致癌訊號。在 腫瘤中EGFR或HER2/neu之過度表現可造成pp60c=^e之原構 性活化，其為惡性細胞特有但在正常細胞中則不存在。另 一方面，缺乏c-src表現之老鼠呈現出骨質石化表現型，顯 示出c-src在破骨細胞功能上有關鑑性參與，且可能涉及於 相關失調症。 類似地，Zap 70涉及於T-細胞傳訊，其可能與自體免疫 失調症有關。 jTKs與發炎，自體免疫疾病，免疫反應，及過度增殖失 調症，如再狹窄，纖維變.性，牛皮癬，骨關節炎及類風濕 性關節炎有關。 P K s也涉及於胚胎之植入。因此，本發明化合物在預防 止胚胎植入上可提供有效的方法，由是可充作生育控制劑 。利用本發明化合物可洽療或預防之額外的失調症有免疫 學失調症，如自體免疫疾病，AIDS，及心血管失調症如動 脈粥樣硬化。 最後，RTKs及CTKs目前均疑似涉及於過度免疫失調症。 本發明許多示例化合物在許多PTKs上之作用實例示於下 表2中。示出之化合物及數據不以任何方式限制本發明範 -97 - 本纸張尺度適用中國國家棵準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 裝 訂
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圍。 =衰氧酶·2抑制劑或·2抑制劑或環氧酶·2抑制劑包括 特”抑制-類酵素·環氧酶_2之作用物，而 -顯著抑制作用。較好，其包環氧酶们〜值少二1二 <化合物，以及環氧酶_2抑制作用超過噚氧酶抑制 疋選擇性比例至少5 〇者，且較好至少丨〇 〇者。甚至較好，化 合物之環氧酶·1 IC5。值大於約！ μΜ，且較好大於約1〇_。 研究顯示，由環氧酶合成之前列腺素在癌症之起動及促 ^上扮演關鑑性角色。再者，C〇X_2在結腸，乳房，肺， 前列腺，食道，胰臟，腸，子宮頸，卵巢，尿道，膀胱及 頭頸之贅瘤傷處中有過度表現。在許多試管内及動物模式 中’ COX-2抑制劑可抑制腫瘤生長及轉移。 除了癌症本身，COX-2也可在增殖的及贅瘤傷處之内及 鄰近之新血管生成血管分佈中表現，顯示C〇X_2在新血管 生成中扮演角色。在老鼠及大鼠中，COX-2抑制劑可顯著 地抑制bFGF-誘生之新脈管發生。利用COX-2抑制劑為化 學預防劑，抗新血管生成及化療劑，在文獻中已有所述 (Koki et al., Potential utility of COX-2 inhibitors in chemoprevention and chemotherapy. Exp. Opin. Invest. Drugs (1999) 8(10) pp. 1623-1638，已列為本案參考）。HER-2/nue (ErbB2)之擴大作用及/或過度表現，發生在人類乳癌及卵 巢癌2 0 - 3 0 %中，以及胃癌及食道癌5 - 1 5 %中，且與不良 之癒·後有關。另外，近來於試管内發現，在HER-2/neu致癌 基因過度表現細胞中，COX-2之表現有正向之調控。 -98 - 本紙張尺度適用中國國家梯準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 _B7___ 五、發明説明（96 ) (Subbaramaiah et al., Increased expression of cyclooxygenase-2 in HER-2/neu-overexpressing breast cancer. Cancer Research (submitted 1999)，由是列為本案參考）。在此研究中，和未 轉形母細胞株比較下，經HER-2/neu轉形之乳房上皮細胞中 可測及PGE2產製，COX-2蛋白質及mRNA有顯著增加之水 平。COX-2活性之產物，即前列腺素，可刺激惡性細胞之 增殖，增加侵襲性及加強血管内皮生長因子之產製，其可 促進新血管生成。再者，HER-2/neu可誘使新血管生成因子 之產製，如血管内皮生長因子。 因此，投予COX-2抑制劑並組合以抗HER-2/neu&^，如 trastuzumab (Herceptin®)及其他直接針對抑制 HER-2/neu之 療法，可用來治療其中HER-2/neu過度表現之癌症。, 同時’也希望在其他致癌基因，&.c-myc，N-myc，L-myc，K-ras，H-ras，N-ras，但不限於此）有擴大及/或過度 表現之腫瘤中提高C0X-2水平。COX-2活性之產物可刺激 細胞增殖、，抑制免疫監督，增加惡性細胞之侵襲性，及促 進新血管生成。因此，投予蛋白質激酶抑制劑組合以CbX-2 抑制劑（本發明）可用來預防或治療其中致癌基因過£表現 之癌症。 特異的COX-2抑制劑可用來治療癌症（WO 98/16227)及許 多動物模式中減少因各種生長因子所驅動之新血管生成 (WO 98/2210!)。在有bFGF，血管内皮生長因子（VEGF)或角 叉菜膠’具已知血管生成特性之蛋白質所植入之大鼠中， 以COX-2抑制劑可達成抗-新血管生成。（Masferrer，et al.， -99 - 本紙張尺度適用中國國家棣準(CNS) A4規格(210 x 297公釐) 裝 訂
k 1230609 A7 B7 五、發明説明（97 ) 89th Annual Meeting of the American Association for Cancer Research, March 1998 0 ) 藥學組合物及投藥 本發明化合物或其藥學上可接受之鹽，可如此投予至人 類患者或可以醫藥組合物型式投予，其中前述物質混合以 適合的載劑或賦形劑。調劑之技術及藥物之投予可見於 ’’Remington’s Pharmacological Sciences，” Mack Publishing Co.，Easton，PA·，最新版。 如此中所用的，”投予n指基於預防或治療P K -相關失調 症之目的，對有機體投予本發明式（I)化合物或其藥學上 可接受之鹽或含有彼之醫藥組合物。 適合的投藥路徑包括經口，肛門，局部，穿越黏膜，或 經腸投藥，或肌内，皮下，髓内，鞘内，直接由心室内， 靜脈内，玻璃體内，腹膜内，鼻内或眼内注射。較佳之投 藥路徑是口服及腸外。 另外，吾等可局部投予化合物而非全身方式，如經注射 將化合物直接注入固體腫瘤内，常呈貯置或持續釋出之調 和物型式。 再者，吾等可以標靶藥物傳送系統投藥，如在一個以腫 瘤-特異抗體所包覆之脂質體中。脂質體可被腫瘤所對準 並選擇性攝入。 本發明之醫藥組合物，可以技藝中熟知之方法製備，如 利用傳統之混合，溶解，製粒，糖衣錠-製作，水磨，乳 化，包膠，捕集或冷凍乾燥過程。 -100 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐) !23〇6〇9 A7 B7
五、發明説明（98 依據本發明可供使用之醫 利用一種以上生理可接受之 助於將活性化合物處理成具 所選用之投藥路徑而定。 藥組合物可以傳統方式調和， 載劑’含有賦形劑及佐劑，有 藥用之製劑。適合之調和物依 於注射時，本發明化合物可調和在水性溶液中，較好是 生理上可相容之緩衝溶液，如漢克氏溶液，林格氏溶液， 或生理食鹽水緩衝溶液，越黏膜投藥時，可在調和物 中使用適^欲穿越穿障壁之穿透劑。如穿透劑大體上是技 藝中已知的。 々於口服時’化合物之調和係將活性化合物混合以技藝中 熟知之藥學上可接受之載劑。此載劑使本發明化合物可被 周和成錠剑，丸劑，含鍵，糖衣錠，膠囊劑，液劑，凝膠 ，糖漿劑，淤漿劑，栓劑等，為病人經口攝入。供口服之 藥學製劑可利用固體賦形劑製作，視所需研磨所生成之混 合物，並處理顆粒混合物，若欲求時可再加入其他適合的 佐劑’以得到錠劑或糖衣錠之錠核。有用之賦形劑，特別 包括糖類’有乳糖’蔗糖，甘露醇或山梨醇，纖維素製劑 ’如玉米殿粉，小麥澱粉，米澱粉及馬鈴薯澱粉，及其他 物質如明膠，西黃耆膠，曱基纖維素，羥丙基甲基纖維素 ’羧甲基纖維素鈉，及/或聚乙烯·吡洛啶酮（PVP)。若欲求 時’可加入崩散劑，如交聯的聚乙烯吡咯啶酮，瓊脂，或 藻酸。也可使用鹽，如藻酸鈉。 糖衣錠核可提供以適合的衣劑。基於此目的，可使用濃 縮之糖溶液，其可視所需含有阿拉伯膠，滑石，聚乙烯吡 ____- 101 - ϋ張尺度適財8 Η家標準(CNS) A饿格(210X297公釐)
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1230609 A7 —一 —___B7 五、發明説明（99 ) 各哫酮，聚羧乙烯凝膠，聚乙二醇及/或二氧化鈦，漆溶 硬，及適合的有機溶劑或溶劑混合物。在錠劑或糖衣錠衣 劑中可加入染料或色素，以鑑定或特性化活性化合物劑量 之不同組合。 可口服之醫藥組合物，包括配合插入式膠囊劑，由明膠 所製成，以及由明膠及增塑劑（如甘油或山梨醇）所製成之 軟且熔封之膠囊劑。配合插入式膠囊可含有活性組份，並 摻合以充填劑，如乳糖，黏合劑如澱粉，及/或潤滑劑如 滑石或硬脂酸鎂，及視所需之助溶劑。在軟膠囊劑中，活 性化合物可溶解或懸浮在適合的液劑中，如脂肪油，液體 石蠟，或液態聚乙二醇。在這些調和物中也可加入穩定劑。 膠囊可包裝至棕色玻璃或塑膠瓶内，使活性化合物可避 光。含有活性化合物膠囊調和物之容器必須在受控之室溫 下（15-30。〇貯存。 於吸入式投藥時，依據本發明用法之化合物可合宜地以 氣霧劑噴霧型式來遞送’利用加壓之包裝或吸入器及適合 的推進劑，如二氯二氟甲烷，三氯氟甲烷，二氯四氟乙烷 或二氧化碳’但亦不限於此。在加壓之氣霧劑例子中，提 供一個活門以遞送計量之劑量可控制其劑量。用於吸入器 或嗅入器中之明膠膠囊劑及匣，可調和成含有化合物及適 合的粉末基劑（如乳糖或澱粉）之粉末混合物。 化合物也可調和成供腸外投予，如利用快速增注或連績 輸液。供注射之調和物可以單位劑型呈現，如於安說劑或 多重劑量容器内’並加入保藏劑。組合物可呈栓劑，溶液 -102 - 本紙银尺度適用中國國家搮準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) !23〇6〇9 Α7
或於油性或水性溶媒之乳劑，且可含有調和物質，如 劑，穩定劑及/或分散劑 力 供腸外投藥之醫藥组合物包括水溶性型式之水溶液劑， 如活性化合物之鹽’但不限於此。另外，活性化合物之、 硬劑可製備在親脂性溶媒中。適合的親脂性溶媒包括脂^ 油類，如芝蔴油，合成脂肪酸酯，如油酸乙酯及三甘=酉丨 ’或如脂質體之物質。纟性注射懸液劑^含有可增加縣洋 黏度之物質，如羧甲基纖維素内，山梨醇，或右旋糖:相 所需地，懸浮液也可含有適合的穩定劑及/或增加化合电 溶解度之物質，以可製成高度濃縮之溶液劑β ° ’ 另=，活性組份可呈粉末型式，可為適合的溶媒所重組 如無菌，無熱原之水，於使用前才重組。 化合物也可調和成肛門組合物，如栓劑或滯留之灌腸劑 ，利用如傳統之栓劑基劑，如可可油脂或其他甘油酯。 除了先前所述之調和物外，化合物也可調和成貯存型製 劑。此長效調和物可以植入方式（如皮下或肌内）或以肌内 注射方式投藥。本發明化合物可調和供此投藥路徑，並加 上適合的聚合成疏水性物質（如在乳劑中有藥理上可接受 之油），加上離子交換樹脂，或呈殆不溶衍生物，如殆不 溶之鹽。 用於本發明疏水性化合物之藥用載劑不受限實例是潛溶 劑系統’其中含有芊醇，非極性界面活性劑，水可相混之 有機聚合物及水相如VPD潛溶劑系統iVPD是3% w/v芊醇 ’ 8°/〇 w/v非極性界面活性劑吐溫8〇，及65% w/v聚乙二酵 ___ · 103 · 本紙張尺度適用巾Η B家料(CNS) A4規格(210X297公釐)
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1230609 五、發明説明（ιοί ) 3 00之溶液，在絕對乙醇中使達體積。▽]?〇潛溶劑系 (VPD:D5W)由VPD以5%右旋糖！ ： i稀釋在水溶液中所组成 。此潛溶劑系統可將疏水性化合物充份地溶解，且一曰全 身性投藥可本身產生低毒性。自然地，此潛溶劑系統之本 質可有相當大的變化，只要不破壞其溶解度及毒性特性即 可。再者，潛溶劑組份之本身可予以變化，如可使用其他 的低毒性無極性界面活性劑取代吐溫8 〇，聚乙二醇之部俨 大小可予以變化，其他的生物可相容聚合物可替代聚L二 醇，如聚乙埽吡咯啶酮，且其他糖類或多醣可取代右旋糖 另外，也可應用用於疏水性藥學化合物之其他遞送系統 。脂質體及乳劑是用於疏水性藥物之熟知的遞送溶媒或載 劑實例。此外，也可應用某些有機溶劑，如二甲亞砜，然 而常有較大之毒性。 另外，化合物也可利用持續釋出系統來遞送，如含有治 療劑之固體疏水性聚合物之半通透基質。各種持續二出= 基質均可發展，且為精藝者所熟知。持續釋出之膠囊可依 其化學本質釋出化合物達數週至丨〇 〇天以上。依據治療試 劑之化學本質及生物穩定性，可應用其他的蛋白質穩定策 略0 此中之醫藥組合物也可含有適合的固體或凝膠相載劑或 賦形劑。此載劑或賦形劑之實例包括碳酸鈣，磷酸鈣，各種 糖類’毅粉，纖維素衍生物，明膠，及聚合物如聚乙二醇。 本發明許多P K調控化合物可呈生理上可接受之鹽型式 -104 - 本紙張尺度適財S S家料(CNS)_A4規格(摩挪公爱） 1230609 A7
，其中所中請專利之化合物可形成負電或正電荷 =化合物形成正電荷部份之鹽實例包括四級胺（此中另有 定義）’錢如氫氯化物’碳酸鹽，乳酸鹽，酒石酸睡， :來酸鹽，蘋果酸鹽，丁二酸鹽，但不限於此，其中：級 銨基之氮原子是本發明所選定化合物之氮，其可與適人的 酸反應。而其中本發明化合物形成負電荷部份之睡包ς由 本發明化合物中之羧酸基與適合的鹼(如氫氧化 化神’氫氧化料）所形成之納，神，_及鎂鹽，但不限 於此。 、適用於本發明之醫藥組合物包括其中活性組份之含量足 以達成欲求目的之組合物，如ρκ活性之調控或ρκ_相 調症之治療或預防。 較特異地，治療有效劑量表示化合物之劑量足以預防’ 纾緩或減輕疾病之症狀，或延長患者之存活。 治療有效劑量之決定是在精藝者能力範圍之内，尤其是 就此中所揭示之詳情而言。 ’、疋 關於本發明方法中所用的任何化合物，治療有效劑量可 先自細胞培養分析巾初步估計。之後調和劑量以應用於動 物模式，如此達到循環濃度範圍，其中包括在細胞培養中 所決定之^⑼值（即達到Ρ κ活性最大抑制作用一半時之受 試化合物濃度）。此資料可用來更正確地決定在人體中2 有用劑量。 此中所述化合物之毒性及治療效力，τ由在細胞培養或 實驗動物中之標準藥學步驟來決定，如針對主題化合物決 -105 -
1230609 A7 ____B7 ΐ、發明説明（103 ) — -- 疋1C5及LDso值（二者在另處討論）。由這些細胞培養分析法 及動物研究中所得之數據可用來調和可用於人體之劑量範 圍。劑量可依所應用之劑量型式及所利用之投藥路徑而有 變化地決定。確實之調和物，投藥路徑及劑量可為個別之 醫師基於病人狀況而選用，（如見Fingl，et ah，1975，於，，丁 he
Pharmacological Basis of Therapeutics丨’，Ch. 1 ρ·1)。 劑量及間隔可個別調整，使所提供之活性物質血漿水平 足以維持激酶之調控作用。這些血漿水平稱之為極小有效 ;辰度（MECs)。MEC依各化合物而變化，但可由試管内數據 中估計’如可利用此中所述之分析法確定達到激酶抑制作 用50-90%所必要之濃度。達到ME C所必要之劑量依個別特 性及投藥路徑而定。可使用HPLC分析法或生物分析來決定 血漿濃度。 劑量間隔也可利用Μ E C值來決定。化合物投予可利用使 血漿水平維持在MEC以上達時間之10-90%之療程，較好 30-90%之間，且最好50-90%之間。 目前，式（I)化合物之治療有效劑量可在每天約〇·25毫克 /米2及1500毫克/米2之間；較好約3毫克/米2/日。甚至最好 5 0毫克/qm qd直到400毫克/qd。 環氧酶抑制劑之治療有效劑量是由約〇· 1毫克至約1 〇,〇〇〇 毫克，可治療上述狀況，較佳水平為約1.0毫克至約1，000 毫克。 可與其他抗癌劑組合產生單一劑型之活性組份劑量，可 依接受治療之宿主及特殊投藥模式而變化。 ______- 106 - 本紙張尺度適用中國國家搮竿(CNS) A4現格(210X297公釐) 1230609 五、發明説明（104 ) 藥物之有效局部濃 之其他步驟可用來 在局部投藥或選擇性攝入之例子中， 度可此和血漿濃度無關，且技藝中已知 決定正確之劑量及間隔。 組合：投予之劑量當然依接受治療之個體，病況之嚴重 度，投藥方式，主治醫師之判斷等而定。 組合物於必要時可在一個包裝或分配裝置中，如FDA呼 :之套組中，Λ中可含有一個以上含有活性组份之單位劑 孓。包裝當然可含有金屬或塑質[如發泡膏包裝。 或分配裝置可伴有投藥指示。包裝或分配裝置也可伴有盘 容器有關之注意事m政府部門規定製備，使用或販 售〈說明書型式’纟中此點反映出由部門許可之組合物型 ^或用於人體或獸用。此種注意事項，可以是由美國食品 樂物局所許可之標幟，用以說明藥物或所許可之產品插入 物。也可製備調和在可相容之藥用載劑中之含有本發明化 合物之組合物’放置在適合的容器内，並標記以治療所適 應之狀況。在標幟上示出之適合的條件可包括對腫瘤之治 2，新血管生成之抑制，纖維變性之處理，糖尿糖之治療 本發明的另一方面也包括此處所述化合物，或其鹽或前 樂，可組合以其他的化療劑以治療上述之疾病及失調症。 例如，本發明之化合物，鹽或前藥可組合以烷化劑，如氟 脲嘧啶（5-FU)單獨地，或進一步組合以甲醯四氫葉酸 Ueuk〇Vorin);或其他烷化劑如下列但不限於此二其他嘧啶 同系物，如UFT，截達瘤（又稱卡培他濱，叫心心㈣，
1230609 A7 B7 五、發明説明（1〇5 ) 健擇（又稱吉西他濱gemcitabine)及阿糖胞甞，垸基橫酸酯 類，如白消安（busulfan)(用於治療慢性顆粒細胞白企病）， 英丙舒凡（improsulfan)及旅泊舒凡（piposulfan);疊丙咬類， 如苯佐替派（b e η ζ 〇 d e p a)，卡波自昆（carboquone)，美妥替喊 (meturedepa)及烏瑞替喊（uredepa);乙晞亞胺類及甲基蜜胺 類，如六甲蜜胺（altretamine)，曲他胺（triethylenemelamine) ，三乙晞磷醯胺，三乙晞硫磷醯胺及三：甲基醇蜜胺；及氮 芥，如苯丁酸氮芥（用於治療慢性淋巴性白血病，原發性 巨球蛋白血症及非霍金氏淋巴瘤），環鱗酿胺（用於治療霍 金氏病，多發性骨髓瘤，神經胚細胞瘤，乳癌，卵巢癌， 肺癌，威廉氏腫瘤及橫紋肉瘤），離莫司汀（estramustine)， 異環麟酿胺（ifosfamide)，諾比伯辛（novembrichin)，潑尼莫 司汀（prednimustine)，及尿嘧啶芥（用於痦療原發性血小板 增加症，非霍金氏淋巴瘤，霍金氏病及卵巢癌）；及三，井 類，如氮埽咪胺（用來治療軟組織肉瘤）。 本發明之化合物，鹽或前藥也可組合以其他抗代謝性化 療劑，如下列不受限實例：葉酸同系物，如胺甲碟呤（用 來治療急性淋色性白血病’織毛膜癌，徽菌病，乳癌，頭 及頸部癌及成胃性肉瘤）及蝶羅呤（pteropterin);及嘌吟同 系物，如巯基嘌呤及硫烏嘌呤，可·用於治療急性粒性細胞 ，急性淋巴細胞及慢性粒性細胞白血病。 本發明化合物，鹽或前藥也希望可組合以以天然產物為 基礎之化療劑，如下列但不限於此：長春花生物驗，如長 春鹼（用於治療乳房及睪丸癌），長春新鹼及長春地辛；表 -108 - 本紙張尺度適用中國國家搮準(CNS) A4規格(210X297公釐) 裝 訂
1230609 A7 _B7 五、發明説明（106 ) 鬼臼素，如依托泊甞（etoposide)及替尼泊甞（teniposide)，二 者可用來治療睪丸癌及卡波西氏肉瘤；抗生素型化療劑， 如柔紅霉素（daunorubicin)，多柔比星（doxorubicin)，春柔比 星（epirubicin)，絲裂霉素（用來治療胃，子宮頸，結腸，乳 房’肪耽及胰臟癌）’達卡巴啡（dactinomycin)，替莫吐胺 (temozolomide)，普卡霉素（plicamycin)，博來霉素（用來治 療皮膚，食道及生殖泌尿道癌）；及酵素性化療劑，如L -天冬胺酸酶。 除了上述之外，本發明化合物，鹽或前藥也可組合以鉑 配位複合物（順鉑等）；經取代之踩，如羥脉；甲基肼衍生 物，如丙卡巴肼（procarbazine);腎上腺皮質遏止劑，如米 托坦（mitotane)，氨魯米特（aminoglutethimide);及激素及激 素拮抗劑，如腎上腺皮質固酮（如潑尼松），黃體製劑（如 己酸孕酮）；雌激素（如己婦雌酚）；抗雌激去如泰莫芬 (tamoxifen);雄激素，如睪酮丙酸；及芳族酶抑制劑，如 阿那由咬（anastrozole)。其他技藝中已知之抗贅瘤劑，也可 配合本發明之組合療法使蛔。這些抗贅瘤劑及其他之實例 ，示於 Applicants’ United States專利案系系列 No· 60/113，786 ，公告於 1998 年 12 月 23 日，及PCT^No. WO 00/38716，其揭 示均列為本案參考^ ’ 最後，也希望本發明化合物之組合在與米托蒽醌 (mitoxantrone)或紫杉醇組合治療固體腫瘤癌症或白血病， 如急性骨髓性（非淋巴細胞）白血病（但不限於此）上也是有 效的。 -109 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（107 ) 實例 合成實例 以下示出之製備及貫例，為使精藝者可更加明瞭及可實 行本發明《其不因此限制本發明範圍，但僅供說明及其代 表。 支發明羞白質激醢抑制齊L之舍成-式（I)化合物 二A合成步驟： 以下一般方法用來製備本發明化合物·· 將適當的經取代2-羥峭哚（1當量），適當取代之醛（12當 量）及鹼（0.1當量）混合在溶劑中（1-2毫升/毫莫耳2_羥啕哚） ，且混合物再加熱約2至約1 2小時。冷卻後，過濾所形成 之沈澱，以冷的乙醇或乙醇洗滌，並吸空乾燥以生成固體 產物。若無沈澱形成，反應混合物濃縮，且殘留物以二氯 甲fe /乙醚研磨，生成之固體過濾收集再乾燥。產物可視 所需層析純化。 鹼可為有機或無機鹼。若使用有機鹼，較好是氮鹼。有 機氮鹼之實例有二異丙胺，三甲胺，三乙胺，苯胺，吡啶 ’ 1,8-二吖二環[5.4.1]·、十一碳-7-烯，吡咯啶及哌啶，但不 限於此。 無機鹼之實例有氨，鹼金屬或鹼土金屬氫氧化物，磷酸 鹽，磷酸鹽，重碳酸鹽，重硫酸鹽及醯胺。鹼金屬包括鋰 ’鈉及鉀，而鹼土金屬包括鈣，鎂及銷、 在目前較佳之具體實例中，當溶劑是質子溶劑時，如水 或醇’驗是驗金屬或k驗土無機鹼，較好是鹼金屬或鹼土金 _ ·11〇· 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 裝 訂
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屬氫氧化物。 精藝者應明白，依據有機合成已知之—般原則及此中之 揭不’該鹼應是最適於的欲求之反應。 〜可進行反應之溶劑可為質子或無質子溶劑，較好是質子 :剑。貝子落劑"是有氫原子共價鍵結至氧或氮原子之溶 使氫原子呈酸性，因此可經由氫鍵結與溶質"共有/。 貝子溶劑之實例包括水及醇類，但不限於此。 ’’無質子溶劑”可為極性或非極性，但在任一例子中均不 含酸性氫，因此不與溶質形成氫鍵。非極性無質子溶劑之 =受限實例包括：戊烷，己烷，苯，甲苯，二氯甲烷^四 氯化碳。極性無質子溶劑之實例有氯仿，四氫呋喃，二甲 亞石風及一甲替甲酿胺。 在本發明目前較佳之具體實例中，溶劑是質子溶劑，較 好是水或醇，如乙醇。 反應進行之溫度大於室溫。溫度通常由約3〇l至約l5(rc ’較好约80t：至約100°c，最好約75°c至約85°C，此約為乙 醇之〉弗點。而"約"表示溫度範圍較好在所示溫度之丨〇它之 内’較好所示溫度乏5。(：内，最好是2°C内。因此，"約75°C，， 表不 75°C±10°C，較好是 75°C±5°C，又最好是 75〇C±2°C。 2 -經啕哚及醛，可利用化學技’藝中熟知之技術容易地合 成。精藝者應明白，形成本發明化合物之其他合成路徑也 可應用，且以下經由非限制實例提供之。 方法A :吡咯類之甲醯化作用 p〇Cl3 (1·1當量）逐滴加至- 下之二甲替甲醯胺中（3當 -111 - 本纸張尺度適用中固國家梯準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)
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1230609 A7 ----—___ B7 五、發明説明（109 ) 量）’再加落於二甲替甲醯胺中之適合的吡咯。經攪拌2小 時後’反應混合物以H2〇稀釋，再以1〇 n KON鹼化至pH 11 。以過滤收集所形成之沈澱物，以h2〇洗，再於真空烘箱 中乾燥以生成欲求之醛。 方法B :吡咯羧酸酯之皂化作用 峨哈羧酸酯及KOH (2-4當量）於EtOH之混合物予以迴流 直到薄層層析（TLC)示出反應已完全為止。冷卻之反應混 合物以1 N HC1酸化至pH 3。沈澱物形成後以過濾收集，以 Ηζ0洗，再於真空烘箱中乾燥，可生成欲求之吡咯羧酸。 方法C :醯胺化作用 對溶於二曱替甲醯胺（〇·3 M)之吡咯羧酸攪拌溶液，加入 1-乙基-3-(3-二甲胺基-丙基）碳化二亞胺（1·2當量），^羥 基苯並三吐（1.2當量），及三乙胺（2當量）。加入適合的胺 (1當量）且反應攪拌直到TLC顯示完全為止。再加乙酸乙 酷至反應混合物中，且溶液以飽和的NaHC03及鹽水（加有 額外的鹽）洗滌，在無水MgS04上乾燥再濃縮以生成欲求之 醯胺。 方法D :縮合醛及含有羧酸組份之羥吲哚 羥啕哚（1當量），1當量醛及1 - 3當量哌啶（或吡咯啶）於 乙醇（0·4 M)之混合物，在90-100°C下攪拌直到反應以TL C 知已完全為止。混合物再濃縮，且殘留物以2N HC1酸化。 形成之沈澱物以HiO及EtOH洗滌，再於真空烘箱中乾燥可 生成產物。 方法E :縮合醛及不含羧酸組份之羥啕哚 112 - 本紙張尺度逋用中國國家搮準(CNS) A4規格(210X297公釐) A7 B7
1230609 五、發明説明（110 ) 羥州i當量），i當量搭’及"當量哌唉(或㈣旬 於乙醇（0.4 M)之混合物在9〇-l〇〇°C下嬸址 士， 、， 規讦’直到反應以 T L C示出為完全為止。混合物冷卻至室溫 主，皿，且所形成之固 體以吸空過濾收集，以乙醇洗滌及乾燥可生成產物。#反 應混合物在冷卻下不形成沈殿，則混合物濃縮並以管 析純化。 胃 C ·羥蜊哚合成實例 以下個職㈣之合成實例，並不以任何方式限制本發 明範圍。示出之合成羥啕哚之其他路徑，以及可用來製成本 發明化合物之其他經啕嗓，基於以下揭示對精藝者均是顯 而易見的。此合成及羥<嗓均在本發明範圍及精藝之内。 5 -胺基-2 -經啕哚 5-硝基-2-羥吲哚（6.3克）在甲醇中以1〇% pd/c氫化以生 成3.0克（6 0%產率）之標題化合物呈白色固體。 5 -溴-2 -經4丨嗓 2 -羥啕哚（1.3克）於20毫升乙腈，冷卻至-1(^c，再於撥 摔下緩緩加入2 · 0克的N - ’/臭破轴酿亞胺^反鹿在_ 1 〇 〇c下撥 拌1小時’於0 °C下2小時。收集沈澱，以水洗乾燥後可得 1.9克（90%產率）之標題化合物。 4 -甲基-2 -經峭嗓 草酸二乙酯（30毫升）於20毫升無乙醇，在撥拌下加至 1 9克乙氧化钾於5 0毫升将水乙駿之懸液中。混合物在冰 浴中冷卻’再緩緩加入2 0毫升3 -确基-鄰位-二甲苯於2 〇 笔升供水乙酸。網厚之暗紅色混合物加熱至迴流歷〇 · 5小時 • 113 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐）
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，濃縮成暗紅色固體，並以1〇%氫氧化鈉處理直到幾乎所 有的固體均溶解為止。暗紅色混合物以3〇%過氧化氫處理 直到紅色變成黃色為止。混合物另外以丨〇%氫氧化鈉及 3 0 %過氧化氫處理，直到暗紅色不再出現為止。濾出固體 ,濾液以6 N鹽酸酸化。生成之沈澱物以吸空過濾收集，以 水洗，再於真空下乾燥可生成9·8克（45%產率）之2_甲基- 6 -硝基苯基醋酸，呈摻白色固體。固體在甲醇中以 Pd/c氫化’可生成9.04克標題化合物，呈白色固體。 7 -溴-5 -氫-2 -經μ丨味 5鼠2-¾ 4卜木（16.8克）及19.6克Ν -溴號轴酿亞胺懸浮在 1 4 0耄升乙腈中，再迴流3小時。在2小時迴流下行薄層層 析（夕石乙故乙酉旨）顯示出5 -鼠-2 -海p?丨嗓或ν -溴號j白酿 亞胺（Rf 0.8)產物（Rf 〇·85)，及第二產物（Rf 〇.9)，其特性在 又1小時之迴流後仍未改變。混合物冷卻至1 〇艽，沈殿物 以吸空過濾收集，以2 5毫升乙醇洗滌，再於漏斗中吸乾 20分鐘’可生成14·ι克濕產物（56%產率）。固體懸浮在2〇〇 毫升變性之乙醇中，並在攪拌及迴流下將淤漿洗滌1 〇分鐘 。混合物冷卻在冰浴中至丨'0 t。固體產物以吸空過濾收集 ’以2 5毫升乙醇洗滌，並在4〇 °c下吸空乾燥可生成12.7克 (5 1 %產率）之7 -溴-5 -氫-2 -羥峭哚。 5 -氟· 2 -經μ卜朵 5 〇氟競紅（8.2克）溶於5 0毫升合肼中，並迴流1.〇小時。 反應混合物倒入冰水中。沈澱物再過濾，以水洗並於真空 烘箱中乾燥以生成標題化合物。 114 - 本紙張尺度適用中困國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)
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1230609 A7 B7 五、發明説明（112 ) 5 -硝基-2 -經丨口木 2 -技4丨嗓（6 · 5克）A於2 5愛升濃硫酸中，且混合物在_ 1 〇 °c 至-15°C下維持，同時再逐滴加入2·1毫升發煙硝酸。一旦加 入硝酸，反應混合物在0 °C下攪拌〇·5小時，再倒入冰水中 。沈澱物以過濾收集，以水洗並自5 〇 %醋酸中結晶。遽出 結晶產物，以水洗再於真空下乾燥可生成6.3克（7〇 %)的5一 硝基-2 -羥峭哚。 5 -胺基磺醯基-2 -羥啕哚 在裝有27毫升氯磺酸之1〇〇毫升燒瓶内，緩緩加入133 克2 -羥吲哚。反應溫度維持在3 〇 °C下（於加入過程中）。加 完後，反應混合物在室溫下攪捽1·5小時，加熱至68。(：歷1 小時，冷卻，並倒入水中。沈澱物以水洗再於真空烘箱中 乾燥可生成11·〇克5 -氣橫酿基-2-經< 嗓（50%產率），其可 使用再勿需純化。 5 -氯磺醯基-2 -羥W哚（2· 1克）加至1 〇毫升氫氧化銨於1 〇 毫升乙醇，並在室盔下攪拌一夜。混合物濃縮且固體以吸 空過濾收集可生成0.4克（20%產率）之標題化合物，呈摻白 色固體。 5 -異丙胺基橫酿基-2 -幾ρ朵 在裝有27毫升氣磺酸之1〇〇毫升燒瓶中，緩緩加入丨3.3 克的2 -羥啕哚◊反應溫度在加入過程中維持在3 〇 c下。反 應混合物在室溫下攪拌1·5小時，加熱至68。(：歷1小時，冷 卻，再倒入水中。濾出所形成之沈澱，以水洗及真空烘箱 中乾燥可生成11·〇克（50%) 氯磺醯基-2-羥哚，其可 _ _ -115- 本度通用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇χ 297公爱)
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1230609 A7 B7 五、發明説明（113 ) 使用勿需再純化。 3克5 -氯磺醯基-2 -羥啕哚，1.15克異丙胺及1.2毫升吡啶 於5 0毫升二氯甲烷之懸浮液，在室溫下攪拌4小時，此時 有白色固體之形成。固體以吸空過濾收集，以熱乙醇洗滌 於漿，冷卻，以吸空過濾收集，再於4 0 °C之真空下乾燥一 夜，可生成1 · 5克（4 5 % )的5 -異丙胺基橫睦基-2 -幾4卜朵。 NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.69 (s3 br, 1H, NH), 7.63 (dd，J=2及8 Hz，1H)，7.59 (d，J=2 Hz，1H)，7.32 (d，J=7 Hz，lH，NH-S02-)，6.93(d，J=8Hz，lH)，3.57(s，2H)，3.14-3.23 (m，1H，CH-(CH3)2)，0.94 (d，J=7 Hz，6H，2xCH3)。 5 -苯基胺基磺醯基-2 -羥峭哚 5-氯磺醯基-2-羥峭哚（1.62克，7毫莫耳），苯胺（0.782毫 升，8·4毫莫耳）及吡啶（1毫升）於二氣甲烷（2〇毫升）之懸 浮於在室溫下攪拌4小時。反應混合物以乙酸乙酯（300毫 升）稀釋，並以1Ν鹽酸（16毫升）酸化。有機層以碳酸氫鈉 及鹽水洗滌，乾燥及濃縮。殘留物以乙醇（3毫升）洗滌， 再於矽膠上層析，以甲醇/二氯甲烷1 : 9溶離可生成5 -苯 胺基磺醯基-2 -羥啕哚。 !H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.71 (s, br, 1H, NH), 10.10 (s，br，1H，NH)，7.57-7.61 (m，2H)，7.17-7.22 (m，2H)， 7.06-7.09 (m，2H)，6.97-7.0 (m，1H)，6.88 (d，J=8.4 Hz，1H)， 3.52 (s，2H)。 2 -酮基-2，3-二氫-ΙΗ-啕哚-5 -磺酸吡啶-3 -基酿胺 5 -氯磺醯基-2 -羥啕哚（3.克）及3 -胺基吡啶（丨46克）於吡 -116 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公复） —---- 1230609 A7 B7
啶(15毫升)之溶液在室溫下攪拌一夜，此時有棕色固體會 出現。固體濾出，以乙醇洗滌，再於真空下乾燥可生成14克 (3 8%) 2-酮基-2,3-二氫-1H-吲哚_5-磺酸吡啶_3_基醯胺。 iH NMR (360 MHz，DMSO-d6) δ 10.74 (s，1H，NH)，10.39 (s, 1H, S02NH), 8.27-8.28 (d, 1H), 8.21-8.23 (m, 1H), 7.59- 7.62 (m，2H)，7.44-7.68 (m，ih)，7.24-7.28 (m，1H)，6.68-6.71 (d，1H)，3.54 (s，2H) 〇 MS m/z (APCI+) 290.2。 5 -苯基羥峭哚 5-渙-2-¾啕噪（5克’ 23·5毫莫耳）溶於lio毫升甲苯及 110毫升乙醇中，在攪拌及少許加熱之下。再加肆（三苯膦） 鈀（0)(1.9克，1.6毫莫耳）之後是40毫升（80毫莫耳）2M碳 酸鈉水溶液。在此混合物中加入苯硼酸（3.7克，30.6毫莫耳） 且混合物在100°C之油浴中加熱1 2小時。反應冷卻，以乙 酸乙酯（500毫升）稀釋，以飽和的碳酸氫鈉（200毫升），水 (200毫升），IN HC1 (200毫升）及鹽水（200毫升）洗滌。有機 層在硫酸鎂上乾燥再濃縮可生成棕色固體。以二氯甲烷研 磨可生成3.8克（77%)的5-苯基-2-羥啕哚，呈褐色固體。 NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.4 (br s, ΪΗ, NH), 7.57 (dd，J=1.8及7.2 H)，7.5至7.35 (m，5H)，7.29 (m，1H)，6.89 (d， J=8.2 Hz，1H)，3·51 (s, 2H，CH2CO)。 MS m/z 209 [M+] o 以類似方式，可製備以下的羥啕哚： 6-(3,5-二氣苯基）-1，3-二氫印哚-2-酮 -117 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（115 ) lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.46 (br, 1Η, NH), 7.64 (d, J=1.8 Hz, 2H), 7.57 (m5 1H), 7.27 (m, 2H), 7.05 (d, J=l.l Hz，1H)，3.5 (s，2H)。 MS-EI m/z 277/279 [M]+ ° 6 - (4 - 丁基冬基）-1，3 -二氮丨嗓-2 -酉同 NMR (360 MHz，DMS〇-d6) δ 10.39 (s，1H，ΝΗ)，7·49 (d，J=8.0 Hz，2H)，7.25 (d，J=8 Hz，3H)，7·17 (dd，J=1.5及7.8 Hz，1H), 6.99 (d，J=1.5 Hz，1H)，3.48 (s，2H，CH2CO)，2·60 (t， J=7.5 Hz, 2Hz，CH2CH3)，1.57 (m，2H，CH2)，1·32 (m，2H， CH2)，0.9 (t，J=7.5 Hz，3H，CH3)。 6-(5-異丙基-2 -甲氧苯基）-1，3-二氫吲哚-2-酮 !H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.29 (br s, 1H, NH), 7.16-7.21 (m, 2H), 7.08 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.97-7.01 (m, 2H), 6.89 (d，J=0.8 Hz，1H)，3.71 (s，3H，OCH3)，3.47 (s，2H，CH2CO)， 2·86 (m，1H，CH(CH3)2)，1.19 (d，J=6.8 Hz，6H，CH(CH3)2)。 MS-51 m/z 281 [M]+。 6-(4 -乙基苯基）-1，3 -二氮丨嗓-2-銅 NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.39 (br s, 1H, NH), 7.50 (d, J=8.2 Hz, 2H), 7.28 (d, J=8.2 Hz, 2H), 7.25 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.17 (dd, J=16 & 7.5 Hz, 1H), 6.99 (d, J=1.6 Hz, 1H), 3.48 (s, 2H, CH2CO), 2.63 (q, J=7.6 Hz, 2H, CH2CH3), 1.20 (t, J=7.6 Hz，3H, CH2CH3)。 ’ MS-EI m/z 237 [M]+。 6-(3-異丙基苯基）-1，3 -二氮〃朵-2-嗣 -118 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 __B7 _ _ 五、發明説明（） lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.37 (br s5 1H, NH), 7.43 (m，1H)，7.35-7.39 (m, 1H)，7.17-7.27 (m，3H)，7·01 (d，J=1.8 Hz，1H)，3.49 (s, 2H，CH2CO)，2·95 (m，1H，CH(CH3)2)，1·24 (d，J=6.8 Hz, 6H，CH(CH3)2)。 MS-EI m/z 251 [M]+。 6-(2，4-二甲氧苯基）-1，3-二氮嗓-2-嗣 lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.28 (br s, 1H, NH), 7.17 (m，2H)，6.93 (dd，J=1.6 & 7·6 Hz，1H)，6.86 (d，J=1.6 Hz， 1H)，6.63 (d，J=2.4 Hz，1H)，6.58 (dd，J=2.4 & 8.5 Hz，1H)， 3.79 (s，3H，OCH3)，3.74 (s，3H，〇CH3)，3.45 (s，2H，CH2CO) 0 MS-EI m/z 269 [M]+。 6-吡啶-3·基-1，3-二氫峭哚-2-酮 lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.51 (s, 1H, NH), 8.81 (d, J=2.5 H，1H)，8.55 (dd，J=1.8 及5·7 Hz，1H)，8 (m，1H)， 7.45 (dd，J=5/7及9·3 Hz，1H)，7.3 (m，2H)，7.05 (s，1H)，3.51 (s，2H，CH2CO)。 MS m/z 210 [M]+ o 2 -酮基-2,3 -二氫- 嗓-4-幾酸（3 -氯-4-乙氧基苯基）- 醯胺 對4-羧酸-2-羥啕哚（200毫克，M3毫莫耳）及3-氣-4-甲 氧基苯胺（178毫·克，1.13毫莫耳）於二甲替甲醯胺（15毫升） 在室溫下之溶液，加入苯並三唑-1-基氧叁（二甲胺基）六 氟磷酸鳞（BOP試劑，997毫克，2.26毫莫耳）再加4-二甲胺 基叶(：咬（206毫克’1.69毫莫耳）。混合物在室溫下攪拌72 -119 - 本紙張尺度適用中國a家搮準(CNS) A4規格(21G X 297公f) 1230609 A7 B7 五、發明説明（117 ) 小時。反應再以乙酸乙酯（300毫升）稀釋，以飽和的碳酸氫 鈉（100毫升），水，2N鹽酸（100毫升）’水（3x2〇〇毫升）及鹽 水洗滌。再於硫酸鎂上乾燥及濃縮。殘留物以乙酸乙酯研 磨，可生成2-酮基-2,3-二氫-1H-吲哚-4-羧酸（3-氯-4-乙 氧基苯基）-醯胺，呈粉紅色固體。 lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.50 (s, br, 1H? NH), 10.12 (s, br, 1H, NH), 7.9 (s, J=2.5 Hz, 1H), 7.62 (dd, J=2.5 & 9 Hz, 1H), 7.38 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.32 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.13 (d, J=9 Hz, 1H), 6.98 (d, J=7.6 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H, 〇CH3)，3.69 (s，2H，CH2) 〇 MS-EI m/z 316 [M]+。 4 -經基-2 -經嗓 三甲基矽烷重氮基甲烷於己烷（2 M)之溶液，逐滴加至 2.01克’ 2 -乳-3 -幾基-硝基冬在20¾升甲醇於室溫下之溶 液中’直到不再有氣體溢出為止。再加酷酸以驟冷過量的 三甲基石夕燒基重氮甲燒。反應混合物在真空下蒸發，且殘 留於烘箱中乾燥一夜。2 -氯-3 -甲氧羰基硝基苯得到後有 足夠之純度可用於下一反應。 加丙二酸二甲醋(6.0毫升）至2.1克氩化鈉於15毫升DMSO 之冰冷懸液中。反應混合物在l〇〇t下攪拌1小時，再冷卻 至室溫。一次份加入2 -氯-3-甲氧碳基硝基苯（2.15克），且 混合物加熱至1〇〇°C歷1.5小時。反應混合物再冷卻至室溫 ，倒入冰水中，酸化至pH 5，並以乙酸乙酯萃取β有機層 以鹽水洗，在無水硫酸鈉上乾燥再濃縮以生成3·〇克2 -甲氧 _ - 120 - 本紙伕尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐）
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k 1230609 A7 ______B7 五、發明説明（118 ) 基幾基-6-硝基苯基-丙二酸二甲g旨。 2 -甲氧基羰基-6-硝基苯基丙二酸二甲酯（3·〇克）迴流在 50毫升6 N鹽酸中一夜。混合物濃縮至乾，加入2〇亳升乙 醇及1 · 1克氯化錫（II)，且混合物迴流2小時。混合物經由塞 里過濾’濃縮，並在矽膠上利用乙酸乙酯：己烷：醋酸層 析’可生成0.65克（37%)的4 -叛基-2-獲⑼嗓，呈白色固體。 lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 12.96 (s, br, 1H, C〇〇H)3 10.74 (s5 br, 1H, NH), 7.53 (d, J=8 Hz, 1H), 7.39 (t, J=8 Hz, 1H)，7.12 (d，J=8 Hz，1H)，3.67 (s，2H) o D ·吡咯取代之2 -啕哚啉酮類之合成 實例1 k甲基-5-(2-酮某-1,2-二氤亞⑷哚-3-某甲基V1H-吡略-2- 羧酸 4 -甲基-2 -吡咯羧酸乙酯（已商品化）利用方法A甲醯化， 可生成（73%)的5 -甲醯基-4 -甲基-2 -吡咯羧酸乙酯。其再 利用方法B水解，可生成5 -甲醯基_4 -甲基-1H-吡咯-2-羧 酸（58%) 〇 羥啕哚（133毫克，1毫莫耳）與5-甲醯基-4-甲基-1H-吡 咯-2-羧酸（153毫克）利用方法D縮合，可生成2 6 8毫克 (100%)標題化合物，呈橘紅色固體。 !H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.84 (s, br, 1H, NH)， 12.84 (s, br, 1H, COOH), 10.98 (s, br, 1H, NH), 7.82 (d, J=7.5 Hz，1H)，7.67 (s，1H，H-乙烯基)，7.18 (t, J=7.5 Hz，1H)，7.01 (t J=7.5 Hz, 1H), 6.88 (d, J=7.5 Hz, 1H), 6.71 (d, J=2.2 Hz, __ - 121 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1230609 A7 ______Β7 五、發明説明（119 ) 1H)，2·32 (s，3H，CH3)。 MS (負模式）266·8 [M-l]+。 實例2 生·甲基甲基_2-鋼基-1，2_二氣亞μ丨嗓-3_基甲基）_1士 ?比ρ各_ 2 _參会龄 甲基-1，3-二氫4丨味-2-酉同（147亳克，1毫莫耳）與5_甲 醯基-4 -甲基-iH-p比嘻-2 -幾酸（153毫克）利用方法d縮合， 可生成250亳克（86%)標題化合物。 !H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.82 (s, br, 1H, NH), 12.88 (s，br，1H，7.83 (d，J=7.5 Hz，1H)，7.65 (s，1H，H-乙烯 基），7.26 (t，J=7.5 Hz，1H)，7.02-7.09 (m，2H)，6.70 (d，J=2.2 Hz，1H)，2.32 (s，3H，CH3)。 MS m/z 283·0[Μ+1]+。 實例3 甲基-5-(2-酮基-1,2-二氫亞4丨哚-3 -某甲幕、1H_毗咯- 2-幾酸甲酯 羥啕哚（105毫克，0.79毫莫耳）與5·甲醯基-4 -甲基-1H-17比咯-2-羧酸甲酯（11〇毫克，〇·67毫莫耳）利用方法e縮合， 可生成153.2毫克（81%)標題化合物。 lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.98 (s, br, 1H, NH), 10.97 (s, br, 1H, NH), 7.82 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.67 (s 1H, H-乙缔基），7.2 (dt，J=1.2 & 7·7 Hz，1H)，7.01 (dt，J=1.2，7.7
Hz，1H)，6.90 (d，J=7.6 Hz, 1H)，6.77 (d，J=2 Hz，1H)。 MS (ES) m/z 283 [M++l]。 ___ · 122 · 本紙張尺度適用中國國家揉準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（12〇 ) 實例4 545-氣-2- g同甚-1.2-二氫亞峋哚_3 -基甲基V4-甲某-1H-毗 咯-2 - #酸乙酯 5 -氯-1，3-二氫⑹哚-2 -酮（2·22克’ 13·2毫莫耳）與5 -甲醯 基-4 -曱基-1H-吡咯-2 -幾酸乙酯（2.43克）利用方法E縮合， 可生成4.1毫克（94%)標題化合物，呈橘色固體。 lU NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.95 (s, br, 1H, NH), 7.98 (d，J=2.2 Hz，1H，H-4)，7·78 (s，1H，H-乙烯基），7.18 (dd， J=2.2 & 8.3 Hz, 1H, H-6), 6.87 (d, J=8.3 Hz, 1H, H-7), 7.34 (d, J=1.8 Hz, 1H, H-3f), 4.27 (q, J=7.2 Hz, 2H, OCH2CH3), 2.33 (s，3H，CH3)，1·29 (t，J=7.2 Hz, 3H，OCH2CH3)。 、 MS-EI m/z 330 [M]+。 實例5 5-(5-氯-2 -酮某-1,2-二氫亞4丨哚-3 -基甲基)-4-甲基-1H-喊_ 咯-2-#酸 5-(5-氯-2:酮基-1，2-二氩亞啕哚-3-基甲基）-4-甲基-1H-吡 咯-2-羧酸乙酯（1.3克，4毫莫耳）及氫氧化鉀於甲醇（25毫 升）及乙醇（2 5毫升）之混合物加熱至迴流一夜。以過滤’移 去不溶物，且混合物以6N鹽酸中和，可生成0.876克（70%) 標題化合物。 iH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.80 (s，br，1H，NH)， 12.90 (s, br, 1H, COOH), 11.06 (s, br, 1H, NH), 8.02 (d, J=1.8 r
Hz, 1H，H-4)，7.81 (s，1H，H-乙烯基），7.20 (dd, J=1.8 & 8.3 Hz, 1H, H-6), 6.89 (d, J=8.3 Hz, 1H, H-7), 6.72 (d, J=1.8 Hz, -123 - 本紙張尺度適用中國國家搮準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 __ B7___ 五、發明説明（121 ) 1H，H-3’)，2.35 (s，3H, CH3)。 MS-EI m/z 302 [M]+。 實例6 5-(5-溴-2-酮某-1.2-二窬亞⑷哚-3 -某甲基）-4-甲基-1H-吡 咯-2 v幾酸（3 -吡咯啶-1 -基-丙基）醯胺 5-溴-1,3-二氫吲哚-2-酮（0.16克，0.76毫莫耳）與5 -甲醯 基-4 -甲基-1H-吡咯-2-羧酸（3 -吡咯啶-1 -基丙基）醯胺（〇·2 克，以方法C製備）縮合，可生成60毫克（17%)標題化合物 ，呈橘色固體。 · NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.61 (s, br 1H, NH), 11.02 (s，br，1H，NH)，8.42 (t，J=5.8 Hz，1H，C0NHCH2)，8.12 (d，J=1.8 Hz，1H，H-4)，7.78 (s，1H，H-乙烯基），7.30(dd， J=1.8 & 8.4 Hz, 1H, H-6), 6.82 (d, J=8.4 Hz, 1H, H-7), 6.77 (d，J=2.4 Hz，1H，H-3，），3·22-3·31 (m，2H, CH2)，2.38-2.43 (m， 6H，3xCH2)，2.35 (s，3H，CH3)，1·62-1·71 (m，6H，3xCH2)。 MS-EI m/z 456及458 [M+-1 及M++2]。 實例7 5-(5-溴-2-酮某-1,2-二氤眨⑷哚-3 -基甲基）-4-甲某-1H-吡 咯-2-羧酸（3-二乙胺某-丙基）醯胺 5-溴-1，3-二氫啕哚-2-酮（0.16克，0.75毫莫耳）與5 -甲醯 基-4-甲基-1H-吡咯-2-羧酸（3 -二乙胺基丙基）醯胺（0.2克 ，以方法C製備）縮合，可生成30毫克（8%)標題化合物，呈 橘色固體。 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.61 (s, br, 1H, NH), -124 - 本纸張尺度適用中國國家搮準(CNS) A4規格(210X297公釐)
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k 1230609 A7 B7 五、發明説明（122 ) 11.02 (s, br, 1H, NH), 8.40 (m, 1H, CONHCH2), 8.12 (d, J=1.5 Hz，1H，H-4)，7.78 (s, 1H，H-乙晞基），7.30 (dd, J=1.5 & 8·2 Hz, 1H, H-6), 6.82 (d, J=8.2 Hz, 1H, H-7), 6.78 (d, J=2.4 Hz, 1H，H-3，)，3.23 (m，2H，CH2)，2.38-2.45 (m，6H，CH2 & N(CH2CH3)2)，2.35 (s，3H，CH3)，1.61 (m，2H，CH2)，0.93 (t， J=7.1 Hz，6H，N(CH2CH3)2)。 MS-EI m/z 458及460 [M+-1 及M++2]。 實例8 3-(5-溴-2-酮某-1，2-二氤亞旧哚-3-某甲基）-1 Η-吡咯-2-# 跋（2-二乙胺基乙基）醯胺 5- 溴-1，3-二氫啕哚-2-酮（212毫克，1毫莫耳）與5 -甲醯基-1Η-吡咯-2-羧酸（2 -二乙胺基乙基）醯胺（製備自吡咯-2-羧 酸乙酯，以方法A，Β及C)，可生成1 62毫克（3 8%)標題化 合物。 NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.53 (s, br, 1H, NH), 11.06 (s, br, 1H, NH), 8.37 (t, 1H, CONHCH2), 7.89 (m, 2H), 7.32 (dd, J=2.0 Hz, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.80-6.84 (m, 2H), 3.3 (m，2H，CH2), 2·45-2·55 (m，6H，N(CH2CH3)2 & CH2)，0.95 (t, J=7.2 Hz，6H，N(CH2CH3)2)。 - MS-EI m/z 430及432 [M+-1 及M++1]。 實例9 5-(2-酮某-6 -苽基-1,2-二氤亞⑷哚-3-基甲基VIΗ-毗咯-2- 羧酸（2 -二乙胺基乙基）醯胺 6- 苯基-1,3-二氫啕哚-2-酮（209毫克，1毫莫耳）與5 -甲醯 • 125 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐) 裝 訂
1230609 A7 B7 五、發明説明（123 ) 基- IH-p比洛-2-叛紅（2-二乙胺基乙基）酿胺縮合’可生成 182毫克（42%)標題化合物》 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.56 (s, br, 1H, NH), 11.06 (s, br, 1H，NH), 8.36 (t, 1H, C〇NHCH2)，7.77 (s, 1H, H-乙締基），7.73 (d，J=7.8 Hz，1H)，7·64 (d，J=7.2 Hz，2H), 7.46 (m, 2H), 7.32 (m, 2H), 7.11 (s, 1H), 6.96 (m, 1H), 6.80 (m, 1H), 3.32-3.32 (m, 2H, CH2), 2.46-2.53 (m, 6H, N(CH2CH3)2) & CH2)，0.96 (t，J=6.9 Hz, 6H，N(CH2CH3)2)。 MS-EI m/z 428 [M+]。 實例1 0 1·(5·溴-2-酮基-1，2-二f.砟⑷哚-3-基甲某V1H-毗咯-2-藉 敏（2 -二乙胺基乙基）·曱某-醯胺 5-溴-1，3-二氫啕哚-2-酮（2 12毫克，1毫莫耳）與5 -甲醯 基-1H-吡咯-2-羧酸（2-二乙胺基乙基）甲基醯胺縮合，可 生成246毫克（55%)標題化合物。 !H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.54 (s, br, 1H, NH), 11.06 (s，br，1H，NH)，7.90 (m，2H)，7·33 (dd，J=1.8 & 8·4 Hz, 1H), 6.82-6.85 (m, 3H), 3.55 (s, br, 2H, CH2), 3.25 (s, br, 3H, NHC3)，2.57 (t，J=6.5 Hz，2H，CH2)，2.45 (m，4H，N(CH2CH3)2)， 〇·91 (m，6H，N(CH2CH3)2)。 MS-EI m/z 444及446 [M+-1 及M++1]。 實例1 1 j_-(2 -酮幕· 6 -笨基- I，2-二盡.亞⑷哚-3 -基甲某）-1 Η-吡咯-2 -氣酸（2 ·二乙胺基乙基）甲某醯胺 -126 - 本紙張尺度逋用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐) 裝 訂
線 1230609 A7 ___ B7 五、發明説明（124 ) " 6-苯基-1，3-二氫叫哚-2-酮（209毫克，！毫莫耳）與5_甲醯 基-1H-吡咯-2-羧酸（2-二乙胺基乙基）甲基醯胺縮合，可 生成277毫克（63%)標題化合物。 lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.58 (s3 br, 1H, NH), 11.04 (s，br，1H，NH)，7·78 (s，1H，H-乙埽基），7 73 ⑷ j=7 8
Hz, 1H), 7.64 (d, J=7.5 Hz, 2H)? 7.46 (m, 2H), 7.33-7.36 (m, 2H)，7.11 (s，1H)，6.84 (m，1H)，6·78 (m，1H)，3.55 (s，br，2H， CH2)，3.25 (s，bi*，3H，NCH3)，2.58 (t，2H，CH2)，2·44 (m，4H， N(CH2CH3)2)，0.92 (m，6H，N(CH2CH3)2)。 實例1 2 甲-基-5-(2 -酮基-1，2-二氫亞M卜朵-3 -某甲基比.疼-2-叛酸（3 -二乙胺基丙基）酼胺 羥吲哚（66.5毫克，0.5毫莫耳）與5 -甲醯基-3 -甲基-1H-吡 咯-2-羧酸（3 -二乙胺基丙基）醯胺（製備自3 -甲醯基-3H-甲 基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯，利用方法B及C)縮合，可生成39 毫克（21%)標題化合物。 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.34 (s5 br, 1H, NH), 10.88 (s，br，1H，NH)，7.62-7.67 (m，3H)，7.17 (m, 1H)，6.99 (m，lH)，6.87(d，J=7.6Hz，lH)，6.63(d，J=lHz，lH)，3.26-3.23 (m，2H，CH2)，2.41-2.48 (m，6H，CH2 & N(CH2CH3)2)， 2.29 (s，3H，CH3)，1.63 (m，2H，CH2)，0.93 (t，J=7.2 Hz，6H， N(CH2CH3)2)。 MS-EI m/z 380 [M+]。 實例1 3 -127 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210x 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（125 ) 5-(5-溴-2 -酮摹-1·2-二氫砟⑷哚-3-基甲基）-3_甲某-ίΗ-吡 咯- 2-#酸（3 -二匕眩其-雨某）醯皮 5- 溴-1,3-二氫㈣哚-2 -酮（106毫克，〇·5毫莫耳）與5 -甲醯 基-3 -甲醯基-1Η-吡咯-2-羧酸（3 -二乙胺基丙基）醯胺縮合 ，以生成35毫克（15%)的標題化合物。 lU NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.35 (s, br, 1H, NH), 11.00 (s，br，1H，NH)，7.89 (d，J=1.9 Hz，1H，H-4)，7.80 (s， 1H，H-乙晞基），7.74 (t，J=5.3 Hz，1H，CONHCH2)，7·31 (dd， J=1.9 % 8.4 Hz, 1H, H-6), 6.83 (d, J=8.4 Hz, 1H, H-7), 6.63 (s, 1H, H-3f), 3.26 (m, 2H, CH2), 2.41-2.48 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2), 2.29 (s，3H，CH3)，1.63 (m，2H，CH2)，0.93 (t， J=7.1 Hz，6H，N(CH2CH3)2)。 MS-EI m/z 458及460 [M+-l及M++1]。 實例1 4 ir甲基-5-(2 -酮某-6-苽某-1,2-二1亞吲哚-3-某甲某VIH-1咯-2-羧酸（2 -二乙胺基丙基）醯胺 6- 苯基-1，3-二氫啕哚-2(105毫克，0.5毫莫耳）與5 -甲 醯基-5-甲基- lH-p比洛-2-致酸（2 -二乙胺基丙基）酿胺縮合 ，可生成67.8克（30%)的標題化合物。 !H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.37 (s, br, 1H, NH), 11.02 (s, br, 1H, NH), 7.23-7.73 (m, 11H), 3.29 (m, 2H, CH2), 2.41-2.48 (m，6H，CH2 & N(CH2CH3)2)，2.29 (s，3H，CH3), 1.64 (m，2H，CH2)，0.94 (t, J=7.0 Hz，6H，N(CH2CH3)2)。 MS-EI m/z 456 [M+]。 -128 - 本紙張尺度適用中國國家揉準(CNS) A4規格(210 X 297公爱) 1230609 A7 _B7_____ 五、發明説明（126 ) 實例1 5 5-(5-甲氳某-2 - i同某-1,2-二遗K唤-3 -某甲基）-3-甲基-1H-吡咯-2 -藉酸（3 -二乙胺基-丙基）_胺 5- 甲氧基-1，3-二氫峭哚-2-酮（82.5毫克，0.5毫莫耳）與5-曱醯基-3 -甲基-1H-吡咯-2 -羧酸（3 -二乙胺基丙基）醯胺縮 合，可生成80毫克（3 9%)標題化合物。 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.45 (s, br, 1H, NH), 10.70,（s，br，1H，NH)，_ 7.68-7.70 (m，2H)，7.32 (d，J=1.8 Hz， 1H)，6.72-6.79 (m，2H)，6.60 (s，1H), 3.73 (s，3H，OCH3)，3.28 (m，2H，CH2)，2.41-2.48 (m，6H，CH2 & N(CH2CH3)2)，2.29 (s， 3H，CH3)，1.63 (m，2H，CH2)，0.93 (t，J=7.0 Hz, 6H，N(CH2CH3)2)。 MS m/z 410 [M+]。 實例1 6 5-(6-甲氫某-2-酮某-1,2-二1亞㈣哚-3-基甲基）-3-甲基-ΙΗ-吡咯-2 -藉酸（3 -二乙胺基-丙基）醯胺 6- 甲氧基-1，3-二氫啕哚-2-酮（82.5毫克，0·5毫莫耳）與5· 甲醯基-3 -甲基-1Η-吡咯-2-羧酸（3-二乙胺基丙基）醯胺縮 合，可生成63毫克（31%)標題化合物。 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.22 (s, br, 1H, NH), 10.86 (s，br, 1H，NH)，7.39-7.36及6·37-6·55 (m，6H)，3.73 (s， 3H, OCH3), 3.3 (m, 2H, CH2), 2.45 (m, 6H, CH2 & N(CH2CH3)2), 2.28 (s，3H，CH3)，1.63 (m, 2H，CH2)，0.93 (m, 6H，N(CH2CH3)2)。 MS m/z 410 [M+] 0 實例1 7 • 129 二 本紙張尺度適用中國B家搮準(CNS)A4規格(210X297公釐) 1230609 A7 _B7____ 五、發明説明（127 ) 3-(3-溴-2 -酮某-1,2-二氪亞⑷哚-3-某甲某）-4,5,6,7-四氫二 211-異丨嗓-1-幾酸（2-二乙胺基-乙基）酿胺 4,5,6,7-四氫-2H-異峋哚-1 -羧酸乙酯（May，Donald，A·; Lash, Timothy D.; J.〇rg. Chem·, 1992, 57; 18, 4820-4828)利 用方法A及B甲醯化，可生成3 -甲醯基-4,5,6,7-四氫-2H-異 p弓卜果-1 -叛酸。 5 -溴-1，3-二氫吲哚-2-酮（1.43克，6.8毫莫耳）與3 -曱醯 基-4,5,6,7-四氫-2H-異哬哚-1-羧酸（2-二乙胺基乙基）醯胺 (1.97克）縮合，可生成2.2克（67%)標題化合物，呈黃橘色固 NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.47 (s, 1Η, NH), 11.0 (s，1H，NH)，8.0 (d，1H，NH)，7·70 (s，1H，CH)，7.28 (dd， J=2.1 及8.2 H，1H，ArH)，7.16 (m，1H，ArH)，6·8 (d，J=8.3 Hz, 1H，ArH)，3.3 (s，2H，CONH)，2·5 (m，6H，3xNCH2)，2.78 (br m，2H，吡咯 CH2)，2.72 (br m，2H，吡咯 CH2)，1.7 (br m，4H， N(CH2CH3)2), 1.74 (br s, 4H, CH2CH2CH2CH2), 0.96 (t, J=7.4 Hz, 6H, N(CH2CH3)2)。 MS-EI m/z 484及486 [M+-1 及M++1]。 實例1 8 3-(5-溴-2-酮基-1,2-二氤亞<哚-3-某甲基）-4,5,6,7-四氣-2H-異啕哚-1 -藉酸（3 -二乙胺基-丙某、sife脖 5 -溴-1,3-二氫啕哚-2-酮（20毫克，〇·1毫莫耳）與3 ·甲醯 基-4,5,6,7-四氫-2H-異啕哚-1 -羧酸（3 ·二乙胺基丙基）醯胺 (3 0毫克）縮合，可生成33毫克（46%)的標題化合物，呈黃 -130 · 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（128 ) 橘色固體。 lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.9 (s, 1Η, NH), 8.0 (m, 1H，NH)，7·68 (m，1H，ArH)，7.4 (m，1H，ArH)，7.29 (d，J=1.9 及8.5 Hz，1H，ArH)，6.8 (d，J=8 Hz，1H，ArH)，2.7 (br m，4H， 2xNCH2)，2.4 (m，8H，4xNCH2)，ι·7 (br m，4H，N(CH2CH3)2)， 1.6 (br m，2H，CH2CH2CH2)，0.93 (t，J=7.4 Hz，6H，N(CH2CH3)2)。 MS-EI m/z 499及501 [M+及M十+2] o 實例1 9 3-(5-溴-2 -酮基-1，2-二氫亞啕哚-3·基甲基）-4,5.6,7•四j. · 2H-異蜊哚-1 -羧酸（3 -吡咯啶-1 -基丙某）醯胺 5-漠-1，3-二氫4丨嗓-2-酮（80毫克，〇·4毫莫耳）與3 -甲酿 基-4,5,6,7-四氫-2H-異啕嗓-1 -幾酸（3 - p比哈啶-1 ·基丙基） 醯胺（120毫克）縮合，可生成43毫克（22%)標題化合物，呈 褐橘色固體β lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.4 (s, 1H, NH), 10.9 (s, 1H, NH), 8.0 (m，1H，NH)，7.69 (m，1H，ArH)，7.49 (m, ih， ArH)，7.28 (d，J=1.7 及 7·8 Hz，1H，ArH)，6.8 (d，j：=8 Hz 1H ArH), 3.3 (br m，2H，2xNCH2)，2.8 (m，4H，2x p比略 c2) 2 5 (br m，4H，N(CH2CH3)2)，1·6 (br m，8H，2x p比哈 CH2CH2 CH2CH2CH2及 CONHCH2)。 MS-EI m/z 497及49 [M+及M++2]。 實例2 0 3-(2 - _ 基-6 -叶I:咬-3 -基-1·2-二 §. K 嗓甲某）· 4..H7-四1-2H-異W哚-1 -羧酸（2-二乙胺基乙酿胺 -131 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)
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1230609 A7 ___B7_ 五、發明説明（129 ) 6 -吡咯-3 ·基-1,3-二氫啕哚-2 -酮（60毫克，0.4毫莫耳）與 3 -甲酸基-4,5,6,7-四氫-2H-異啕哚-1 -羧酸（2 -二乙胺基乙 基）驢胺（80毫克）縮合可生成5〇毫克（38%)標題化合物，呈 微紅色固體。 !H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.4 (s, 1Η, NH), 11 (s, 1H，NH)，8.9 (d，1H，NH)，8·7 (dd，1H，ArH)，8.1 (dd，1H， ArH)，7·9 (d，1H，ArH)，7.6 (s，1H，CH)，7.5 (dd，1H，ArH)， 7.3 (dd, 1H, ArH), 7.1 (m, 2H, ArH), 3.35 (m, 2H, CONHCH2), 2.8 (m，4H，2x 吡咯 CH2)，2.5 (br m，6H，N(CH2CH3)2)及 NCH2)， 1.75 (br s，4H，2x 吡咯 CH2CH2)，0.9 (t，6H，N(CH2CH3)2)。 MS-EI m/z 484 [M+]。 ' 實例2 1 4二芊醯基-5-(5-溴-2-酮基-1,2-二氤亞⑷哚-3-墓甲基）-3-甲 基-1H-吡咯-2-#醢（3-二乙胺基丙某）醯胺 對苄醯基（1當量）及氯化鋁（1當量）於二氯乙烷之混合物 ，在〇°C下加入3,5-二甲基-2-吡咯羧酸乙酯（1當量）。混合 物在8 0 °C下攪拌4小時。混合物再以乙酸乙酯（EtOAc)及水 萃取。混合的有機萃取物以飽和的碳酸氩鈉及鹽水洗鉍， 乾燥及濃縮可生（51%) 4-苄醯基-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-羧 酸。、 4-芊醯基-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯（4.13克，15.2 毫莫耳）及硝酸高鈽銨（3 3克，4當量）於5 0毫升四氫呋喃 (THF) ··醋酸（HOAc) : H2〇 1 : 1 : 1之混合物迴流一夜。反 應混合物再冷卻，以EtOAc萃取，·再以碳酸鈉鹼化至pH 9 -132 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 裝 訂
線 1230609 A7 ____B7 五、發明説明（13〇 ) 。有機層再以鹽水洗，乾燥（MgS04)並濃縮，利用管柱層 析可生成3.25克（75%) 4 -芊醯基-5-甲醯基-3-甲基-1H-吡 咯-2-羧酸乙酯，呈黃色固體。 5 -溴-1,3-二氫- < 哚-2-酮與4 -苄醯基-5-甲醯基-3-甲 基-1H-吡咯-2-羧酸利用方法D縮合，可生成4 -苄醯基-5-(5-溴-2-酮基-1，2-二氫亞峋哚-3-基甲基）-3-甲基-1H·说咯-2-羧酸。 上述羧酸與N，N-二乙基-1,3-丙二胺利用方法C偶合，可 生成標題化合物。 lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 7.96 (m, 1Η, CONHCH2), 7.76 (d，J=7.0 Hz，2H)，7·68 (t，1H)，7.56 (m，2H)，7·40 (s, 2H), 7.33 (dd，J=1.6 & 8·3 Hz，1H，H-6)，6.84 (d，J=8.3 Hz， 1H，H-7)，3.33 (m，2H，CH2)，2.42-2.46 (m，6H，3xCH2)，2.10 (s，3H，CH3)，1.65 (m，2H，CH2)，0.94 (t，J=7.0 Hz，6H， N(CH2CH3)2)。 MS 電子撞擊m/z 564 [M++1]。 實例2 2 4-芊醯某-5-(5-溴-2 -酮基·1,2-二1亞⑻哚-3 -基甲基V3-甲 基-1H-吡咯-2-藉酸（3-嗎福啉-4-基丙基）醯胺 !H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14.10 (s3 1H, NH), 11.14 (br s, 1H, NH), 7.92 (m, 1H, CONHCH2), 7.75 (m, 2H), 7.69 (t, 1H), 7.56 (m, 2H), 7.42 (m, 2H), 7.33 (dd, J=1.9 & 8.3 Hz, 1H, H-6), 6.85 (d, J=8.3 Hz, 1H, H-7), 3.56 (m, 4H, 2xCH2), 3.33 (m, 2H, CH2), 2.35 (m, 6H, 3xCH2), 2.10 (s, 3H, CH3), -133 - 本紙張尺度逋用中國國家搮準(CNS) A4規格(210 x 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（131 ) 1.70 (m，2H，CH2)。 實例2 3 4 —^酿基_3_甲基-5-(2 -嗣基-1,2 -二现亞p亏|嗓-3-基甲基）_ 1比咯-2 -藉酸（3 -吡咯啶-1 -墓丙基）醯胺 lH NMR (300 MHz3 DMSO-d6) δ 14.18 (s3 1Η, NH), 11.14 (br s，1H，NH), 8.01 (m，1H，CONHCH2)，7·74 (m，1H)，7·67 (m，1H)，7.55 (m，1H)，7.32 (s，1H，H-乙烯基），7.17 (m，1H)， 6·92 (m，1H)，3.36 (m，2H，CH2)，2.44 (m，6H，3xCH2)，2.11 (s，3H，CH3)，1.65-1.75 (m，6H，3xCH2)。 M S 電子撞擊 m/z 482 [M+]。 實例2 4 基-1H-吡咯-2-羧酸（3-吡咯啶-1 -基丙基）醯胺 m NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14.01 (s, 1H, NH), 11.18 (br s, 1H, NH), 7.98 (m, 1H, CONHCH2), 7.75 (m, 2H), 7.68 (m, 1H), 7.55 (m； 2H), 7.40 (m, 2H), 7.33 (dd, J=2.0 & 8.2 Hz, 1H, H-6), 6.84 (d3 J=8.2 Hz, 1H, H-7), 3.34 (m, 2H, CH2), 2.42-2.47 (m, 6H, 3xCH2), 2.09 (s, 3H, CH3), 1.70 (m, 2H, CH2), 1.64 (m, 4H, 2xCH2) ° 貪例25 4-芊醯基-3 -甲基-5-(2-酮基-6-笨基-1,2-二氪亞峭哚-3-基 甲基）-1Η-吡咯-2-羧酸（3-吡咯啶-1-基丙基）醯胺 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.15 (s, 1H, NH), 11.16 (br s, 1H, NH), 7.98 (m, 1H, CONHCH2), 7.77 (d, J=7.7 Hz, -134 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210x 297公釐)
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1230609 A7 __B7__ 五、發明説明（132 ) 2H), 7.69 (m, 1H), 7.53-7.63 (m, 4H), 7.44 (m, 2H), 7.33-7.37 (m, 2H), 7.24 (s, 2H), 7.12 (s3 1H), 3.36 (m, 2H, CH2), 2.43-2.48 (m，6 H, 3xCH2)，2.12 (s, 3H，CH3)，1.74 (m，2H，CH2)， 1.69 (m，4H，2xCH2)。 M S 電子撞擊 m/z 558 [M+]。 實例2 6
4-芊醯基-5-(6-甲氣基-2 -酮基-1,2-二氫亞⑷哚-3 -基甲某V 3- 甲基-1H-吡咯-2-#酸（3-吡咯啶-1-基丙某）醯胺 !H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.99 (s, 1H, NH), 11.05 (br s，1H，NH)，7.93 (m，1H，CONHCH2)，7.72 (m，2H)，7.65 (m，1H)，7.54 (m，2H)，7.15 (s，1H，H-乙烯基），7.04 (d，J=8.4 Hz, 1H, H-4), 6.51 (dd, J=2.3 & 8.4 Hz, 1H, H-5), 6.44 (d, J=2.3 Hz，1H，H-7)，3·74 (s，3H，OCH3)，3·35 (m，2H, CH2)， 2.42- 2.46 (m, 6H, 3xCH2), 2.10 (s, 3H, CH3), 1.72 (m, 2H, CH2)，1.65 (m，4H，2xCH2)。 MS 電子撞擊m/z 512 [M+] e 實例2 7 4- 芊醯基-5-(5-甲氣基-2·酮某-1,2-二氪亞⑷哚-3-基甲基V 3-甲基-1H-吡咯-2-#酸（3-吡咯啶-1-某丙某）醯胺 !H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14.24 (s, 1H, NH), 10.90 (br s, 1H, NH), 7.97 (m, 1H, CONHCH2), 7.75 (d, J=7.2 Hz, 2H)，7.69 (m，1H)，7·56 (m，2H)、，7.24 (s，1H，H-乙烯基），6.79 (m, 2H), 6.66 (m, 1H), 3.67 (s, 3H, OCH3), 3.34 (m, 2H, CH2), 2.43- 2.48 (m, 6 H, 3xCH2), 2.14 (s, 3H, CH3), 1.71 (m, 2H, -135 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210x 297公釐) 裝 訂
線 1230609 A7 B7 五、發明説明（133 ) CH2)，1.66 (m，4H，2xCH2)。 MS 電子撞擊m/z 512 [M+]。 實例2 8 4-芊醯基-5-(5-氣-2-酮基-1,2-二1亞㈣哚-3-某甲某V3-甲 基-1H-吡咯-2 -淼酸（3 -吡咯啶-1 -基丙基）醯胺 {U NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.20 (s5 1Η, NH), 11.14 (br s，1H，NH)，8·03 (m，1H，CONHCH2)，7·75 (m，2H)，7.68 (m，1H)，7·55 (m，2H)，7·38 (s，1H，H-乙晞基），7·08 (m，1H)， 7.01 (m，1H)，6·87 (m，1H)，3.34 (m，2H，CH2)，2.42-2.48 (m， 6H，3xCH2)，2.09 (s，3H，CH3)，1.70 (m，2H，CH2)，1.65 (m， 4H，2xCH2)。 MS 電子撞擊m/z 500 [M+]。 實例2 9 4-乙醯基-5-(5-溴-2-酮基-1,2-二氫亞㈣哚-3-基甲某V3-甲 基-1H-吨咯-2-藉酸（3-二乙胺基丙基）醯胺 !H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.19 (s, 1H, NH), 11.19 (br s，1H，NH)，8.15 (m，1H，CONHCH2)，8.11 (s，1H，H-乙烯 基)，7.72 (d，J=1.8 Hz，1H，H-4)，7.38 (dd，J=1.8 & 8.2 Hz， 1H，H-6)，6.87 (d，J=8.2 Hz，1H，H-7)，3.2*7 (m，2H，CH2)， 2.57 (s，3H，CH3CO), 2·46 (m，9H，CH3 & 3xCH2)，1.64 (m， 2H，CH2)，〇·93 (t，j=7.1 Hz，6H，N(CH2CH3)2)。 實例3 0 4-乙醯朞-5·(5_溴-2 -酮基-1，2-二氫亞M卜朵-3 -基曱某V3-甲 基- ΙΗ-ρ比哈-2-我酸（3-p比洛淀-1-基丙基）酿胺 -136 - 本紙張尺度適用中國囷家標準(CNS) A4現格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（134 ) lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.14 (m, 1Η, CONHCH2), 8.10 (s, 1H，H-乙烯基），7.70 (d，1H，H-4)，7.36 (dd, J=1.6 & 8.1 Hz, 1H, H-6), 6.85 (d, J=8.1 Hz, 1H, H-7), 3.32 (m, 2H, CH2), 2.57 (s5 3H5 CHbCO), 2.44 (s, 3H, CH3)5 2.35-2.48 (m, 6H, 3xCH3)，1.65-1.71 (m，6H，3xCH2)。 MS m/z 499及501 [M+]&[M++2] 0 實例3 1 4-乙醯基-5-(5-溴-2-酮某-1.2-二i,亞⑷哚-3-基甲基）-3-甲 基-1H-吡咯-2-卷酸（3-噁福琳-4-基丙基）醯胺 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.20 (s, 1H, NH), 11.26 (br s，1H，NH)，8.09 (m，2H，H-乙烯基 & CONHCH2)，7.73 (d， J=1.5 Hz, 1H, H-4), 7.38 (dd, J=1.5 & 8.3 Hz, 1H, H-6), 6.87 (d, J=8.3 Hz, 1H, H-7), 3.55 (m, 4H, 2xCH2), 3.26 (m, 2H, CH2), 2.57 (s, 3H, CH3CO), 2.44 (s, 3H, CH3), 2.35 (m, 6H, 3xCH3)，1.68 (s，2H，CH2)。 MS-EI m/z 514&516 [M+-1]及[M++1]。 實例3 2 4-乙醯基-5-(5-溴-2-酮某-1.2-二1亞⑷哚-3-基甲基）-3-甲 基-1H-吡咯-2-#酸（3-羥丙某）醯胺 [H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14.17 (s, 1H, NH), 11.25 (br s，1H，NH)，8.1Ό (s，1H，H-乙烯基)，8·03 (m，1H，CONHCH2); 7.71 (br s, 1H, H-4), 7.37 (br d, J=8.4 Hz, 1H, H-6), 6.87 (d, J=8.4 Hz, 1H, H-7), 4.51 (br s, 1H, OH), 3.51 (br s, 2H, CH2), 3.36 (m, 2H, CH2), 2.57 (s, 3H, CH3CO), 2.43 (s, 3H, CH3), -137 - 本紙張尺度適用中a國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 ____B7__ 五、發明説明（135 ) 1.70 (m，2H，CH2)。 MS-EI m/z 445及447 [M+-1]及[M++1]。 實例3 4 4-乙醯基-5-(5-溴-2-酮其-1,2-二氮亞旧哚-3-基甲基V3-甲 基-1H-吡咯-2 -羧酸（2 -嗎福啉-4 -基乙基）醯胺 NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14.19 (s, 1Η, NH), 11.14 (br s，1H，NH)，8·10 (s，1H，H-乙婦基)，7·84 (m，1H，CONHCH2)， 7.71(d，J=1.8Hz，lH，H-4)，7.38(dd，J=1.8&8.2Hz，lH，H-6)，6,87 (d，J=8.2 Hz, 1H，H-7)，3.58 (m，4H，2xCH2)，3.40 (m，2H，CH2)，2.57 (s，3H，CH3CO)，2.49 (m，4H，2xCH2)， 2.45 (m，CH3 & CH2)。 MS-EI m/z 500 & 502 [M+-1] & [M++1] 0 實例3 5 4-乙醯基-5·(5-溴-2-酮某二氤亞叫1哚-3-基甲墓）-3-甲 基-1H-吡咯-2-#酸（2-毗哝畦-4-某乙基）醯胺 !H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14.17 (s, 1H, NH), 11.23 (s，1H，NH)，8.11 (s，1H，H-乙婦基），7.91 (m，1H，CONHCH2)， 7.73 (d, J=1.9 Hz, 1H, H-4), 7.39 (dd, J=1.9 & 8.3 Hz, 1H, H-6)，6.88 (d，J=8.3 Hz，1H，H-7)，3.40 (m，2H，CH2)，2.62 (m， 2H, CH2), 2.57 (s, 3H, CH3CO), 2.49 (m, 4H, 2xCH2), 2.44 (s, 3H, CH3), 1.69 (m，4H, 2xCH2)。 實例30 4-乙醯基-5_(5-溴-2 -酮某-1.2-二氤亞M卜朵-3 -基甲基）-3-甲 基-1H-吡咯-2-淼酸「2-(4-鞀某笟某）乙某1醯胺 -138 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（136 ) iH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14·21 (s，1H，NH)，11.18 (s，1Η，OH), 9.09 (s，1Η，ΝΗ)，8.06-8.10 (m，2Η)，7.73 (s， 1H), 7.38 (d，J=7.8 Hz, 1H)，7.04 (d，J=7.1 Hz，2H)，6.88 (d， J=7.8 Hz, 1H)，6.67 (d，J=7.1 Hz，2H)，3.42 (m，2H，CH2)， 2.72 (m，2H，CH2)，2.56 (s，3H，CH3C〇），2.37 (s，3H，CH3)。 MS-EI m/z 507 & 509 [M+-1]&[M++1]。 實例37 5-(5-溴-2 -酮基-1，2-二氪亞嘴-3 -基甲基）-2-異丙華-zL _节 某- lH-p比洛-3-複酸（3 -二乙胺基丙基）酿胺 2-胺基苯乙酮鹽酸鹽（1當量），異丁醯基醋酸乙酯（1·2當 量）及醋酸鈉（2·4當量）於Ηβ之混合物在1〇〇它下攪拌1 8小 時，再冷卻至室溫。水層傾析，且油溶於乙酸乙酷中。再 以水及鹽水洗，乾燥後可生成（93%) 2-異丙基-4-苯基-1Η· 吡咯-3 -羧酸乙酯，呈紅色色油。 iH NMR (300 MHz，DMSO-d6) δ 11.21 (s，br，1H，NH)， 7.14-7.27 (m, 5H), 6.70 (d, J=2.7 Hz, 1H), 4.02 (q, J=7.1 Hz, 2H，OCH2CH3)，3.65 (m，1H，CH(CH3)2)，1.22 (d，J=7.5 Hz， 6H，CH(CH3)2)，1·04 (t，J=7.1 Hz，3H，OCH2CH3)。 MS-EI m/z 257 [M+] 0 上述之吡咯利用方法A甲醯化，可生成（41 %) 5 -甲醯基-2-異丙基-4·苯基-1H-吡咯-3-羧酸乙酯，呈微紅色固體。 ϊΗ NMR (300 MHz, DMSO-d6)5 12.35 (s, br, 1H, NH), 9.14 (s，1H，CHO)，7.36 (s，5H)，3.96 (q, J=7.1 Hz，2H，OCH2CH3)， 3.74 z(m，1H，CH(CH3)2)，1.29 (d，J=6.9 Hz，6H，CH2(CH3)2)， -139 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 _______B7 五、發明説明（137 ) 0.90 (t，J=7.1 Hz，3H，OCH2CH3) 〇 MS-EI m/z 285 [M+] 〇 吡咯羧酸酯利用方法B水解，可生成（57%) 5 _甲醯基_ 2 _ 異丙基-4-苯基-1H-吡咯-3-羧酸，呈灰褐色固體。 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.28 (s, br, 1H, COOH), 12.02 (s，br，1H，NH)，9·10 (s，1H，CHO)，7.35 (s，5H)，3·81 (m，1H，CH(CH3)2)，1·28 (d，J=6.9 Hz，6H，CH(CH3)2)。 MS-EI m/z 257 [M+] o 5-溴-1，3-二氫吲哚-2-酮（120毫克，〇·31毫莫耳）與5-甲醯 基-2-異丙基-4-苯基-1H-吡咯-3-羧酸（3·二乙胺基丙基）醯 胺（依方法C )縮合，可生成1 2 〇毫克（71 %)的標題化合物。 !H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.23 (s, br, 1H, NH), 11.08 (s，br，1H，NH)，7.38-7.55 (m，7H Ar-H & CONHCH2)， 7.30 (s，1H，H-乙晞基），7.26 (dd，J=1.8 & 7.8 Hz，1H)，6·85 (d，J=8.7 Hz，1H)，3·36 (m，1H，CH(CH3)2)，3·07 (m，2H， CH2), 2.34 (q, J=7.1 Hz, 4H, N(CH2CH3)2), 2.22 (t, J=6.9 Hz, 2H, CH2), 1.40 (m, 2H, CH2), 1.31 (d, J=6.9 Hz, 6H, CH(CH3)2), 0.86 (t，J=7.1 Hz, 6H，N(CH2CH3)2” MS m/z 565.1 [M++l]。 ， 實例3 8 5-(5-溴-2-酮某-1,2-二氤砭⑷哚-3-某甲基）-2-異丙某-4-茉 基-1H-吡咯- 3-#酸（3 -吡咯啶-1-某丙基）醯胺 5-(5-溴-2-酮基-1,2-二氫亞啕哚-3-基甲基）-2-異丙基-4-苯基-1H-吡咯-3-羧酸（127毫克，0.28毫莫耳）與3-吡咯啶- __- 140 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（138 ) 1-基-丙胺（43毫克，0.336毫莫耳）縮合，可生成140毫克 (66%)的標題化合物。 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.40 (s, br, 1H, NH), 7.38-7.47 (m，7H)，7.23-7.27 (m，2H)，6.84 (d，J=8.1 Hz，1H)， 3·36 (m，1H，CH(CH3)2)，3.08 (m，2H，CH2)，2.30 (m，4H， 2xCH2)，2.20 (t，J=7.0 Hz，2H，CH2)，1.62 (m，4H，2xCH2)， I. 42 (t，J=7.0 Hz，2H，CH2)，1.31 (d，J=7.2 Hz，6H，CH(CH3)2)。 MS-EI m/z 560及562 [M+-1 及M++1]。 實例3 9 5-(5-溴-2-酮基-1,2-二氤亞⑹哚-3-基甲基V2-異丙甚-4-芡 基-1H-吡咯-3-羧酸（2-二乙胺基乙基）醯胺 5-溴-1,3-二氫吲哚-2-酮（57克，0.27毫莫耳）與5-甲醯 基-2-異丙基-4-苯基-1H-吡咯-3-羧酸（2 -二乙胺基乙基） 醯胺（120毫克）縮合，以生成78毫克（53%)標題化合物，呈 黃色固體。 !H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.23 (s, br, 1H, NH), II. 09 (s, br, 1H, NH), 7.38-7.51 (m, 6H), 7.25-7.28 (m, 2H), 7.19 (t, 1H, CONHCH2), 6.85 (d, J=7.8 Hz, 1H), 3.43 (m, 1H, CH(CH3)2), 3.11 (m, 2H, CH2), 2.28-2.39 (m, 6H, N(CH2CH3)2) & CH2, 1.31 (d, J=6.9 Hz, CH(CH3)2), 〇.85 (t, J=7.0 Hz, 6H, N(CH2CH3)2) 〇 MS-EI m/z 548及550 [M+-1 及M++1] ° 實例40 5-(5-溴-2-酮某-1.2-二氤亞峭唤-3-基_甲基）-2-異丙基·4-笨 -141 - 本纸張尺度適用中國Η家搮準(CNS) Α4規格(210X297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（139 ) 某-1H-毗咯-3 -藉酸「3-(4-甲基哌啡-1 -棊）丙基1醯胺 5-溴-1，3-二氫啕哚-2-酮（53毫克，0.25毫莫耳）與5-甲 醯基-2-異丙基-4-苯基-1H-吡咯-3-羧酸[3-(4-甲基哌畊_ 1 -基）丙基]醯胺（3〇〇毫克）縮合，可生成65毫克的標題化 合物。 m NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.22 (s, br, 1H, NH), 11.08 (s, br, 1H, NH), 7.23-7.50 (m, 9H), 6.85 (d5 J=8.7 Hz, 1H)，3.37 (m，2H，CH(CH3)2)，3.05 (m，2H，CH2)，2.24 (m，8H， 4xCH2)，2.11 (m，5H，CH2 & CH3)，1.42 (m，2H，CH2)，1·31 (d， J=7.2 Hz，6H，CH(CH3)2)。 MS-EI m/z 589及591 [M+-1 及M++1]。 實例4 1 5-(5-溴-2 -酮基-1，2-二氫亞峭哚-3 -基甲某V2-異丙某-4-莩 某-1H-吡咯-3-羧酸 5-溴-1，3-二氫蜊哚-2·酮（170毫克，0.8毫莫耳）與5-曱醯 基-2-異丙基-4 -苯基-1H-»7比嘻-3-幾酸（205毫克）利用方法 D縮合，可生成2 10毫克（58%)的標題化合物，呈黃色固體。 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.31 (s, br, 1H, NH), 11.16 (s，br，1H，NH)，7.26-7.44 (m，7H)，7.11 (s，1H，H-乙埽 基），6.85 (d，J=7.8 Hz，1H)，3.78 (m，1H，CH(CH3)2)，1.34 (d， J=6.9 Hz，6H，CH(CH3)2)。 MS-EI m/z 452 [M++1]。 實例4 2 5-(5-溴-2 -酮基-1，2-二氫亞㈣哚-3 -某甲基）-2-甲基-4 -苯 • 142 · 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1230609
基^.Ul·批咯- 3- ¾酸（2 -吡咯喊基乙其）醯脉 5- 溴·1，3-二氫啕哚-2-酮（44毫克，〇·21毫莫耳）與5-甲 醯基-2 -曱基-4-苯基-1Η-吡咯-3-羧酸（2-吡咯啶」-基乙 基）醯胺（70¾克，如異丙基同系物之相同方式製備）可生 成0.03克（27%)的標題化合物，呈黃色固體。 NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.87 (s, br, 1H, NH), 11.11 (s, br, 1H, NH), 7.36-7.51 (m, 6H), 7.26 (dd, J=1.8 & 8·1 Hz，1H)，7.2 (s，1H，H-乙埽基)，7.09 (m，ih，CONHCH2) 6.83 (d，J=8.1 Hz，1H)，3.17 (m, 2H，NCH2)，2.48 (m，CH3)， 2.29-2.35 (m，6H，3xNCH2)，1.59 (m，4H，2xCH2)。 MS-EI m/z 518及520 [M+-1 及M++1]。 實例4 3 ir丄6-_(2-甲_里^苯基）-2 -酮基-1，2-二氤亞州唤_ 3 -某甲幕ι·9·甲 基.-4 -苯基jJ H-p比哈-3 -幾酸（2 - ρ比哈畦-1 -基乙某） 6- (2-甲氧苯基）-1，3-二氫吲哚-2-酮（50毫克，〇·21亳莫耳） 與5 -甲醯基-2-甲基-4-苯基-1H-吡嘻-3-幾酸（2 -吡嘻淀· 1-基乙基）醯胺（7 0毫克）縮合，可生成〇·〇4克（35%)標題化合 物，呈黃橘色固體。 · iH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.82 (s，br，1Η，ΝΗ)， 11.02 (s, br, 1H, NH), 7.48 (m, 2H), 7.43 (m, 1H), 7.32 (m, 1H)，7.24 (m，2H), 7.16 (s, 1H，H-乙烯基)，7·〇8 (m，2H)，7·〇3 (m, 1H), 7.0 (m, 2H)/3.74 (s, 3H, OCH3), 3.19 (m, 2H, NCH2), 2.49 (m, CH3), 2.32-2.38 (m, 6H, 3xNCH2), 1.59 (m,. 4H, 2xCH2)。 -143 - 本紙張尺度適用中困國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐)
裝 訂
k 1230609
MS-EI m/z 546 [M+l] 實例4 4 •4 5二(5·溴i酮基- ΐ·2-二新砟 < 哚_3 · 基二11L^L^3-羧酸（2-二甲胺基乙甚、_脸 5-溴-1,3-二氫叫丨哚-2-酮（46毫克，〇·22毫莫耳）與5•甲 醯基-2 -甲基-4-苯基-1H-吡咯-3·羧酸（2·二甲胺基乙基） 醯胺（65毫克）縮合，可生成60毫克（55%)的標題化合物， 呈黃色固體。 lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.86 (s, br, 1H, NH), 11.09 (s, br3 1H, NH), 7.47-7.49 (m, 2H), 7.38-7.41 (m, 4H), 7·26 (dd，J=2.2 & 8.3 Hz, 1H)，7·21 (s，1H，H-乙烯基），7.04 (m, 1H, CONHCH2), 6.77 (d, J=8.3 Hz, 1H), 3.15 (m, 2H, NCH2), 2.48 (m, CH3), 2.16 (t, J=6.8 Hz, 2H, 3xNHC2), 2.02 (s，6H, 2xNCH3) 〇 MS-EI m/z 493及494.8 [M+及M+-2]。 實例4 5 $二[6-(2-甲氣笨基）-2 -酮某-1,2-二氤氐pj卜袋-3 -基甲基1-2 -甲_ 基- 4 -苯基·1Η-ρ比啥-3·藉酸（2 -二甲胺基乙基）醯胺 6-(2-甲氧苯基）-1,3-二氫啕哚-2-酮（53毫克，0.22毫莫耳） 與5 -甲醯基-2 -甲基-4-苯基-1H-吡咯-3-羧酸（2-二甲胺基 乙基）醯胺（6 5毫克）縮合，可生成〇.〇5克（44%)標題化合物， 呈橘色膠狀。 - !H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.82 (s, br, 1H, NH), 11.02 (s, br, 1H, NH), 7.37-7.52 (m, 5H), 7.32 (m, 1H), 7.22- -144 - 本紙張尺度適用中國國家搮準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（142 ) 7.27 (m, 2H), 7.16 (s, 1H), 7.08 (m, 2H), 7.03 (m, 1H), 7.〇 (m, 2H), 3.74 (s, 3H, OCH3), 3.15 (m, 2H, NCH2), 2.49 (m, CH3)，2.16 (t, J=6.5 Hz，2H，NCH2)，2.02 (s, 6H，2xNCH3)。 MS m/z 521 [M++l] 〇 實例4 6 5-(5 ->臭-2 -嗣基-1,2-二氣亞g弓丨嗓-3'基曱基）·2-甲基-4_笨_ 基-1H-吡咯-3-羧酸乙酯 5-溴-1,3-二氫吲哚-2-酮（60毫克，0.29毫莫耳）與5-甲 醯基-2 -曱基-4-苯基-1H-吡咯-3-羧酸乙酯（75毫克）縮合 ，可生成78毫克（60%)的標題化合物，呈橘色固體。 NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 14.01 (s, br, 1H, NH), 11.13 (s, br, 1H5 NH), 7.42-7.46 (m, 3H), 7.27-7.34 (m, 4H), 7.12 (s5 1H), 6.84 (dd, J=2.2 & 8.3 Hz, 1H), 3.99-4.03 (m, 2H, OCH2CH3), 2.61 (s, 3H，CH3)，0.98-1.03 (m，3H，〇CH2CH3)。 MS-EI m/z 450及452 及[M++1]。 實例4 7 5-(5-溴-2 -酮基-1,2-二氤亞㈣哚-3-基甲基）-2-甲基-4-笨 某-1H-吡略-3-羧酸Π-二乙胺某丙基）醯胺 5-溴-1，3-二氫啕哚-2-酮（0·47克，2.2毫莫耳）與5-甲醯 基-2 -甲基-4-苯基-lH-p比咯-3-羧酸（3-二乙胺基丙基）醯 胺（0.75克）縮合，可生成0.11克（42%)標題化合物，呈橘色 固體。 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.86 (s, br, 1H, NH), 7.42-7.46 (m, 3H), 7.37-7.50 (m, 7H), 7.24-7.28 (m, 2H), 6.83 -145 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（143 (d, J=8.1 Hz, 1H), 3.09 (m, 2H, NCH2), 2.45 (s, 3H, CH3), 2.38 (q, J=7.1 Hz, 4H, 2xNCH2CH3), 2.26 (t, J=6.9 Hz, 2H, NCH2)，1.42 (m，2H，NCH2)，，0.87 (t，J=7.1 Hz，6H, 2xNCH2CH3)。 MS-EI m/z 535.0及537 [M+及M++2]。 實例4 8 (5-澳-2 -酮基-1,2-二1亞4丨嗓-3-基甲某）-2,4-二甲基-1H-g比洛-3 -卷酸（2 -二甲胺基-乙基）酿胺 3 -酮基丁酸第三-丁 g旨及亞硝酸鈉（1當量）之混合物於醋 酸中，在室溫下攪拌可生成2 -肟基-3-酮基丁酸第三-丁基 酯。 3 -酮基丁酸乙酯（1當量），鋅粉（3·8當量）及粗製的2 -肟 基-3-酮基丁酸第三-丁酯於醋酸，在60 °C下攪拌1小時。 反應混合物倒入ΗζΟ中，且收集濾液以生成（65%) 2 —第三. 丁氧羰基-3,5-二甲基-4-乙氧羰基吡咯。 2 -弟二-丁乳談基-3,5-二甲基-4-乙氧談基p比ρ各及原甲酸 三乙酯（1.5當量）於三氟醋酸之混合物在1 5 t：下攪拌1小時 。反應濃縮，且殘留物純化以生成（64%) 2,4-丄甲基-3 -乙 氧羰基-5-甲醯基吡咯，呈黃色針狀。’ 2，4-二甲基-3 -乙氧談基-5 -甲醯基p比哈利用方法B水解， 可生成（90%) 5 -甲醯基-2，·4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸。 NMR (360 MHz，DMSO-d6) δ 12 (br s，2Η，ΝΗ 及 C02H)，9.85 (s，1H，CHO)，2.44 (s，3H，CH3)，2.40 ((s，3H， CH3)〇 -146 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 裝 訂
1230609 A7 _______Β7 _ 五、發明説明（144 ) MS m/z 267 [M+]。 5- 溴-1，3-二氫啕哚-2-酮（0.17克，〇·8毫莫耳）與5-甲醯 基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2-二甲胺基乙基）醯胺（0·2 克，以方法C製備）縮合，利用方法Β可生成0.3克（83%)標題 化合物，呈黃色固體。 lU NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.60 (s, br, 1H, NH), 10.94 (s, br, 1H, NH), 8.07 (d, J=1.8 Hz, 1H, H-4), 7.75 (s, 1H，H-乙烯基），7·44 (t，J=5.2 Hz, 1H，CONHCH2)，7.24 (dd， J=1.8 & 8.4 Hz, 1H, H-6), 6.82 (d, J=8.4 Hz, 1H, H-7), 3.26- 3.33 (m，2H，NCH2)，2.42 (s, 3H，CH3)，2.41 (s, 3H，CH3), 2·38 (t，J=6.7 Hz，2H，NCH2), 2·18 (s，6H，N(CH2)2) 〇 MS-EI m/z 430及432 [M+-1 及M++1]。 .實例49 -一甲基- 5- (2 -酉同基-6-笨基-1，2 -二氣Μ丨口朵·3 -舞甲幕）一_ 1Η-吡咯-3-淼醢门-二甲胺基乙基）醯胺 6- 苯基-1，3-二氫吲哚-2-酮（0.17克，0.8亳莫耳）與5_甲酿 基-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸（2-二甲胺基乙基）醯胺（〇.2 克）縮合，可生成0.13克（36%)標題化合物，呈黃橘色固體。 !H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.59 (s, br, 1H, NH) 10.93 (, br, 1H, NH), 7.85 (d, J=7.92 Hz, 1H, H-4), 7.63-7.65 (m, 3H), 7.40-7.47 (m, 3H), 7.32-7.36 (m, 1H, Ar-H), 7.3〇 (dd, J=1.6 & 7.9 Hz, 1H, H-5), 7.11 (d, J=1.6 Hz, 1H, H-7), 3.28-3.34 (m, 2H, NCH2), 2.43 (s, 3H, CH3), 2.41 (s, 3H, CH3)，2.38 (t, J=6.8 Hz, 2H, NCH2), 2.18 (s，6H，N(CH3)2)。 -147 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 ____ B7 五、發明説明（us ) MS-EI m/z 428 [M+1]。 實例5 0 1:(5-氣-2 -酮某-1·2-二氤亞蜊哚-3 -基甲基）-2·4-二甲其-1H-也洛-3 -羧酸（2 -二甲胺基-乙某）醯脖 5-氯-1，3-二氫味-2-酮（0.1克，0.6毫莫耳）與5-甲醯基-2,4-一甲基-ΙΗ-ρ比洛-3-致缸（2 -二甲胺基乙基）酿胺（015克） 縮合，可生成0.22克（90%)標題化合物，呈黃色固體。 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.61 (s, br, 1H, NH), 10.98 (，br，1H，NH)，7·96 (d，J=2.0 Hz，1H，Η·4)，7.75 (s，1H， H-乙烯基），7.50 (t，J=5.5 Hz，1H，CONHCH2)，7.12 (dd，J=2.0 & 8.3 Hz, 1H，H-6)，6·86 (d，J=8.3 Hz，1H，H-7)，3.26-3.31 (m，2H，NCH2)，2.42 (s，3H，CH3)，2.40 (s，3H，CH3)，2.36 (t， J=6.6 Hz，2H，NCH2)，2.17 (s，6H，N(CH3)2)。 MS-EI m/z 386 [M+] o 實例5 1 5-(5-溴-2-酮基-1·2-二氤亞⑷哚-3-基甲基）-2·4-二甲其_〗1 吡咯-3 -羧酸（2 -二曱胺墓-乙基）醯胺 5-溴-1,3-二氫吲哚-2-酮（0.17克，0.8毫莫耳）與5-甲醯 基-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸（2-二乙胺基乙基）醯胺（〇·2 克）縮合，可生成0.09克（26%)標題化合物，呈黃色固體。 lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.61 (s, br, 1H, NH), 10.98 (，br，1H，NH)，8.09 (d，J=1.7 Hz，1H，H-4)，7.76 (s，1H， H-乙締基），7·42 (t，J=5.5 Hz，1H，CONHCH2)，7.24 (dd，J=1.7 & 8.0 Hz, 1H，H-6)，6.82 (d，J=8.0 Hz, 1H，H-7)，3.23-3.32 -148 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（146 ) (m，2H，NCH2)，2.46-2.55 (m，6H，3xNCH2)，2.43 (s，3H， CH3)，2·42 (s，3H, CH3)，〇·96 (t，J=7.2 Hz，6H，2xNCH2CH3)。 MS-EI m/z 458及460 [M+-1 及M++1]。 實例Η 5-(5-溴-2-酮某-1.2-二 fK 哚-3-基曱基）二2,4·二甲某-ΙΗ-吔咯-3 -羧酸（2 -吡咯啶-1 -基-乙基）醯胺一 5-溴-1，3-二氫啕哚-2-酮（0.09克，0.4毫莫耳）與5-甲醯 基-2,4-二甲基-lH-p比嘻-3_竣酸（2-ρ比洛咬-1-基乙基）酿胺 (0.1克）縮合，可生成0.14克（81%)標題化合物，呈黃橘色固 體。 NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.61 (s, br5 1H, NH), 10.98 (，br，1H，NH)，8.09 (d，J=1.9 Hz，1H，H-4)，7.76 (s，1H, H-乙婦基），7.53 (t，J=5.5 Hz, 1，CONHCH2)，7.24 (dd，J=1.9 & 8.5 Hz, 1H, H-6), 6.81 (d, J=8.5 Hz, 1H, H-7), 3.29-3.35 (m, 2H, NCH2), 2.54 (t, J=6.9 Hz, 2H, NCH2), 2.47 (m, under DMSO), 2.42 (s, 3H, CH3), 2.40 (s, 3H, CH3), 1.66-1.69 (m, 4H，2xCH2) 〇 MS-EI m/z 465及458 [M+-1 及M++1]。 實例5 3 [-(5-溴-2-酮基-1，2-二氤亞4卜朵-3-某甲幕）-2.4-二甲某_111-也咯-3-羧酸（3 -咪唑-1-甚-丙某） 5-溴-1,3-二氫吲哚-2-酮（〇·〇9克，〇·4毫莫耳）與5-甲醯 基-2,4-二甲基-1Η·〃比咯-3-羧酸（3 -咪唑-1 -基丙基）醯胺（〇1 克）縮合’可生成0.1克（59%)標題化合物，呈黃橘色固體。 -149 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 裝 訂
1230609 A7 __B7____ 五、發明説明（147 ) lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.63 (s, br, 1H, NH), 10.99 (, br, 1H, NH), 8.09 (d, J=2.2 Hz, 1H, H-4), 7.77 (s, 1H, H-乙烯基），7.71〇，1=5.7 1^，11"1，（：01^1^(：112)，7.65(8，1只八1·-H)，7.25 (dd，J=2.2 & 8·4 Hz，1H，H-6)，7.20 (s，1H，Ar-H)， 6.89 (s, 1H, Ar-H), 6.81 (d, J=8.4 Hz, 1H, H-7), 4.02 (t, J=6.7 Hz, 2H, NCH2), 3.18 (q, J=6.7 Hz, 2H, NCH2), 2.43 (s, 3H, CH3)，2.41 (s, 3H, CH3)，1·93 (m，2H，CH2)。 MS-EI m/z 467及469 [Μ+·1 及M++1]。 實例5 4 5-「6-(2-甲氣笨基）-2-酮某-1,2-二氤亞⑷哚-3-基甲基1-2,4-士甲基-1H-吡咯-3 -羧酸（2 -二甲胺基乙基）醯胺 6-(2-甲氧苯基）-1，3-二氫啕哚-2-酮（3 0毫克，0.13毫莫耳） 與5-甲醯基-2,4-二甲基-1H·吡咯-3-羧酸（2-二甲胺基乙基） 醯胺(30毫克）縮合，可生成〇.〇6克（100%)標題化合物，呈黃 橘色膠狀。 !H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.60 (s, br, 1H, NH), 10.89 (s5 br, 1H, NH), 7.79 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H, H-乙烯基），7.46 (t，J=5.5 Hz，1H，CONHCH2)，7·28-7·35 (m，2H)， 6.99-7.11 (m, 4H), 3.76 (s, 3H, OCH3), 3.27-3.31 (m, 2H, NCH2), 2.43 (s, 3H, CH3), 2.39 (s, 3H, CH3), 2.37 (m, 2H, CH2)，2.18 (s，6H, N(CH3)2)。 MS-EI m/z 458 [M+]。
實例H
Lf6-(3-甲氧苯基）-2-酮某-1.2-二IL亞㈣哚-3-某甲某1-2,4- _- 150 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 A7 _________B7_______ 五、發明説明（Μ8 ) 士.甲基-lH-p比咯-3-#酸（2-二甲脖某乙某）醯胺 M3-甲氧苯基）-；ι，3-二氫啕哚-2·酮（3〇毫克，〇13毫莫耳） 與5-甲酿基-2,4·二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2·二甲胺基乙基） 醯胺（30毫克）縮合，可生成8亳克（14%)標題化合物，呈黃 橘色固體。 W NMR (360 MHz，DMSO-d6) δ 13.59 (s，br，1H，NH)， 10.92 (s, br, 1H, NH), 7.84 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H, H-乙浠基），7.42 (m，1H，CONHCH2)，7.36 (d，J=7.8 Hz，1H)， 7.29 (dd, J=1.6 & 7.6 Hz, 1H), 7.20 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.14 (d, J=2.8 Hz, 1H), 7.11 (d, J=1.6 Hz, 1H), 6.91 (dd, J=2.8 & 7.8 Hz，1H)，3.82 (s，3H，OCH3)，3.21-3.33 (m，2H，NCH2)， 2·43 (s，3H，CH3)，2.40 (s，3H，CH3)，2.36-2.40 (m，2H， NCH2)，2.18 (s，6H，N(CH3)2) 〇 MS-EI m/z 458 [M+] 〇 實例5 ό 二二甲-酮基-5 -茉基-1·2-二氪亞峭哚-3 -某甲某v 1Η-吡咯-3-羧酸（2-二乙胺某乙某）醯脖 5-冬基-1，3-二風4丨嗓_2_嗣（80毫克，〇·4毫莫耳）與5-甲 醯基-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3 -羧酸（2-二乙胺基乙基）醯胺 (0.1克）利用方法Β縮合，可生成79毫克（46%)標題化合物。 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.66 (s, br, 1H, NH), 10.95 (, br, 1H, NH), 8.15 (d, J=1.2 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H, H- 乙烯基），7·71 (d，J=7.5 Hz, 1H)，7.40-7.47 (m, 4H)，7.31 (m， 1H), 6.95 (d, J=8.1 Hz； 1H), 3.2-3.31 (m, 2H, NCH2), 2.46- -151 - 本纸張尺度適用中國8家搮準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 ___B7____ 五、發明説明（149 ) 2·55 (m，6H，3xNCH2)，2.44 (s，6H, 2xCH3)，0.96 (t，J=7.4 Hz， 6H, 2xNCH2CH3) 0 MS-EI m/z 456 [M+]。 實例5 7 2,4-二甲基-5-(2-酮基-5-芡某-1.2-二 ft.亞⑷哚 1_H-吡哈-3 -数酸（2 -吡啥啶· 1 -某乙某）醯胺 5-苯基-1，3-二氫啕哚-2-酮（0.04克，0.2毫莫耳）與％甲 醯基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2-吡咯啶-1-基乙基）醯胺 (0.04克）縮合，可生成標題化合物，呈黃橘色固體。 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.65 (s, br, 1H, NH), 10:96 (，br，1H，NH)，8.15 (d，J=1.0 Hz，1H)，7.80 (s，1H，H-乙晞基），7·71 (d，J=7.2 Hz，2H)，7.49 (t，J=6.3 Hz，1H， CONHCH2), 7.41-7.46 (m, 3H), 7.31 (m, 1H), 6.95 (d, J=7.8 Hz, 1H), 4.08 (m, 4H, 2xNCH2), 3.32 (m, 2H, NCH2), 2.55 (t, J=7.1 Hz, 2H, NCH2), 2.47 (m, under DMSO), 2.43 (s, 6H, 2xCH3), 1.66 (m, 4H，2xCH2)。 MS-EI m/z 454 [M+] 〇 實例5 8 K二甲基-5-(2-酮基-5-苽某-1,2_二氤亞4唼-3-基甲基）· JJH-吡咯-3-羧酸（3 -咪唑-1-基丙基）醯胺 5-苯基-1,3-二氫啕哚-2-酮（8毫克，0.04毫莫耳）與5-甲 醯基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（3-咪唑-1-基丙基）醯胺 (10毫克）縮合，可生成10毫克（59%)標題化合物，呈橘色 固體。 ___ - 152 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（150 ) lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.67 (s, br, 1H, NH) 10.96 (, br, 1H, NH), 8.16 (d, J=1.2 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H, H- 乙晞基），7.65-7.72 (m，4H)，7.44 (m，3H)，7.31 (m，1H， CONHCH2), 7.21 (s, 1H, Ar-H), 4.02 (t, J=6.5 Hz, 2H, NCH2), 3.19 (q, J=6.5 Hz, 2H, CONHCH2), 2.44 (s, 6H, 2xCH3), 1.93 (m, 2H，CH2CH2CH2)。 MS-EI m/z 465 [M+] o 實例5 9 2,4-二甲基_5_(2-嗣基-6-笨基-1，2-二氲亞吋|嗓一3一基甲某）_ 1H-吡哈-3-藉酸（2 -二乙胺基乙某）醯胺 6-苯基-1，3-二氫啕嗓-2-酮（0.08克，〇·4毫莫耳）與5·甲 醯基-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸（2 -二乙胺基乙基）酿胺 (〇·1克）縮合，可生成65毫克（38%)標題化合物，呈黃色固 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.61 (s, br, 1H, NH), 10.99 (，br，1H，NH)，7.86 (d，J=7.8 Hz，1H)，7.62-7.66 (m， 3H), 7.40-7.47 (m, 3H), 7.28-7.36 (m, 2H), 7.10 (d, J=1.2 Hz, 1H), 3.26 (m, 2H, NCH2), 2.46-2.55 (m，6H, 3xNCH2)，2.44 (s, 3H， CH3)，2.41 (s，3H，CH3)，0.97 (t，J=7.2 Hz, 6H，2xNCH2CH3” MS-EI m/z 456 [M+]。 實例6 0 2,4·二甲某-5-(2-酮某-6-苽某-1,2-二氪亞⑷哚-3-基甲某）二 1H-吡咯-3-羧酸（2-二乙胺某乙基）醯胺 6-苯基-1,3-二氫啕哚-2-酮（30毫克，0.15毫莫耳）與5- -153 - 本紙張尺度適用中國國家搮準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（151 ) 甲酿基-2,4 - 一甲基- ΙΗ-ρ比洛-3-幾酸（2-ρ比p各咬基乙笑） 酿胺（40毫克）縮合，可生成5.9毫克（8.5%)標題化合物，呈 黃橘色固體。 iH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.60 (s，br, 1H，NH) 10.99 (, br, 1H, NH), 7.86 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.63-7.66 (m 3H)，7.51 (m，1H，CONHCH2)，7·45 (m，2H)，7.28-7.36 (m，’ 2H), 7.10 (d, J=1.5 Hz, 1H), 3.31 (m, 6H, 3xNCH2), 2.55 (t J=6.6 Hz, 2H，NCH2)，2.43 (s, 3H, CH3)，2.40 (s, 3H, CH3) 1.67 (m，4H，2xCH2)。 ' ’ MS-EI m/z 454 [M+]。 實例6 1 2_，4·二甲基- 5-(2 -酮基-6-笨基-1，2-二氣亞4丨嗓_3·幕甲苹) 1Η-吡咯-3 -羧酸（3 -咪唑-1 -某丙某）3¾脖 6-苯基-1，3-二氫啕嗓-2-_(8毫克，〇.〇4毫莫耳）與5_曱 醯基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（3-咪唑-1-基丙基）酿胺 (1 0毫克）縮合，可生成7·3毫克（43%)標題化合物，呈橘色 固體。 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.62 (s, br, 1Η, NH) 10.99 (，br，1H，NH)，7.86 (d，J=8.2 Hz，1H)，7.62-7.70 (m， 5H), 7.45 (m, 2H), 7.35 (m, 1H), 7.30 (dd, J=1.4 & 8.2 Hz, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.10 (d, J=1.4 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 4.〇2 (t, J=6.9 Hz, 2H, CH2), 3.19 (m, 2H, NCH2CH2), 2.43 (s, 3H, CH3)，2·41 (s，3H, CH3)，1.93 (t，J=6.9 Hz, 2H, NCH2)。 'MS-EI m/z 465 [M+]。 • 154 - 本紙張尺度適用中國因家標準(CNS) A4現格(210X 297公釐) 裝 訂
1230609 A7 __67_ 五、發明説明（152 ) — 實例6 2 5-「6-(3,5-二氰笨基）-2 -酮某- ΐ·2-二氫亞4丨哚-3-某甲某1- 二甲基-lHw比咯-3-藉酸（2-二乙胺基乙基）醯脖 6-(3,5 - 一氣本基）-1，3 -二氫丨嗓-2-酮（64毫克，0.23毫莫 耳）與5-甲醯基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2 -二乙胺基乙 基）醯胺（6 0毫克）縮合，可生成53毫克（44%)標題化合物， 呈淺棕色固體。 lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.62 (s, br, 1H, NH), 10.99 (s, 1H, NH), 7.89 (d, J=7.9 Hz, 1H, H-4), 7.69-7.71 (m, 3H), 7.55 (m, 1H, CONHCH2), 7.37 (m, 2H), 7.14 (d, J=1.4 Hz, 1H, H-7), 3.27 (m, 2H, NCH2), 2.48-2.58 (m, 6H, 3xNCH2)5 2.45 (s, 3H, CH3), 2.42 (s, 3H, CH3), 0.97 (t, J=6.8 Hz, 6H, 3xNCH2CH3)。 MS-EI m/z 526.9 [M++l] 〇 實例6 3 2,4-二甲基-5-(2 -酮基-6-吡啶-3 -某-1.2-二氫亞峭哚-3-甚 甲基）-1Η-吡咯-3-羧酸（2 -二乙胺某乙基）醯胺 6 -p比淀-3-基-1，3 -二氮丨嗓-2-嗣（40毫克，0.19毫莫耳） 與5 -甲醯基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2-二乙胺基乙基） 醯胺（50毫克）縮合，可生成29毫克（33%)標題化合物，呈 淺橘色固體。 {U NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.62 (s, br, 1H, NH), 11.05 (s, br, 1H, NH), 8.86 (s, br, 1H), 8.53 (d, J=5.8 Hz, 1H)，8.04 (m，1H)，7.91 (d，J=8.1 Hz，1H)，7.70 (s，1H，H-乙缔 -155 - 本紙伕尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1230609 A7 ______B7 五、發明説明（153 ) 基），7.40-7.48 (m，2H)，7.35 (d，J=7.5 Hz，1H)，7.14 (s，1H)， 3·26 (m, 2H，NCH2)，2.48-2.55 (m，3XNCH2)，2.42 (s，3H， CH3)，2.38 (s，3H，CH3)，0.96 (t，J=6.9 Hz, 6H，2xNCH2CH3)。 MS-EI m/z 457 [M+]。 實例6 4 2,4-二_!.基：5-(2-酮基-6-吨^^^基_1,2-二氫亞^哚_3_某 甲基比咯-3 -氣酸（2 -吡咯啶-丨_某乙某）醯胺 6-吡哫-3-基-1,3-二氫吲哚酮（60毫克，0.28毫莫耳） 與5-甲醯基-2,4-二甲基-11^比洛-3-幾酸（2-外1:洛淀-1-基乙 基）醯胺（75毫克）縮合，可生成9〇毫克（71%)標題化合物， 呈淺橘色固體。 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.61 (s, br, 1H, NH), 11.05 (s，br，1H，NH)，8.86 (d，J=1.5 Hz，1H)，8.54 (dd，J=1.5 & 4.8 Hz, 1H), 8.05 (m, 1H), 7.91 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H，H-乙烯基），7.44-7.53 (m，2H)，7.36 (dd，J=1.5 & 8·1 Hz， 1H)，7·15 (d，J=1.2 Hz，1H)，3·33 (m，2H，NCH2)，2.47-2.57 (m，6H，3xNCH2)，2.43 (s，3H，CH3)，2.41 (s，3H，CH3)，1.67 (m, 4H, 2xCH2) ° MS-EI m/z 455 [M+] 0 實例6 5 2,4-二甲基-5-(2-酮基-6-吡啶·3-某·1·2-二藍.亞⑷哚·3-某 甲基）-1Η-吡咯-3-羧酸（3-二甲胺基丙基）醯胺 6-吡啶-3-基-1,3-二氫峭哚-2·酮（42毫克，0.2亳莫耳） 與5 -甲醯基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（3-二甲胺基丙基） -156 - 本紙張尺度通用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 ____B7_____ 五、發明説明（154 ) 醯胺（5 0毫克）縮合，可生成67毫克（75%)標題化合物，呈 黃榇色固體。 lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.61 (s, br5 1H, NH), 11.00 (s, br5 1H, NH), 8.86 (s, br, 1H), 8.54 (s, br3 1H), 8.04 (m，1H)，7.90 (d，J=8.0 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H，H-乙埽基），7·63 (m，1H)，7.45-7.48 (m，1H)，7.35 (dd，J=l.7 & 8.0 Hz，1H)， 7.15 (d，J=1.7 Hz，1H)，3·21-3·27 (m，2H，NCH2)，2.43 (s，3H， CH3)，2.41 (s，3H，CH3)，2.28 (m，2H，NCH2)，2.14 (s，6H， 2xNCH3)，1.64 (m，2H，CH2)。 MS-EI m/z 443 [M+] 〇 實例6 6 之，4-一甲基-5-(2-嗣基-5-笨基-1，2-二氣亞4丨嗓-3-呆甲蒂） 1H-吡咯-3-藉酸η -二甲脖某丙基）醯胺 5-苯基-1,3-二氫啕哚-2-酮（67克，0.32毫莫耳）與5_甲 醯基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（3-二甲胺基丙基）酿胺 (81毫克）縮合，可生成40毫克（28%)標題化合物，呈橘色固 lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.66 (s, br, 1H NH) 10.92 (s，br，1H，NH), 8·14 (s，1H)，7.79 (s，ih)，7·71 (m’ 2H)，7·62 (m，1H)，7.44 (m，3H)，7.32 (m，1H)，6·95 (m，1H)’
3.33 (m，2H，NCH2)，2.43 (s，6H，2xCH3)，2.27 (m，2H NCH2)，2.13 (s，6H，2xNCH3)，1.63 (m，2H，CH2)。 ’ MS-EI m/z 442 [M+] ° 實例6 7 -157 - 本紙浪尺度適财S SI家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（155 ) 2，4-二甲幕- 5-(2-酮基-5-苯基-1，2-二氣亞Μ卜呆-3-幕甲早）_ ΙΗ-ρ比吃-3-淼齡（3 -二乙胺基丙基）醯胺 5 -苯基-1,3 -二氮4丨口朵-2-嗣（1.5克’ 7.16¾莫耳）與5 -甲 醯基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（3-二乙胺基丙基）醯胺（2 克）縮合，可生成1·3克（40%)標題化合物，呈黃橘色固體。 β NMR (360 MHz，DMSO-d6) δ 13.64 (s, 1Η，ΝΗ)，1〇_91 (s，1Η，ΝΗ)，8·14 (d，J=1.4 Ηζ，1Η，ArH)，7·8 (s, 1Η，ArH)， 7·7 (dd，J.l 及 8·5 Hz，2H，ArH)，7·6 (t，J=5.3 Hz，1H， CONHCH2), 7.4 (m, 3H, ArH), 7.3 (t, J=7.4 Hz, 1H, ArH), 6.9 (d, J=8.0 Hz, 1H, ArH), 3.2 (m, 2H, CONHCH2), 2.5 (m, 12H, 3xNCH2 A 2XCH3), 1.61 (m, 2H, CH2CH2CH2), 0.93 (t, J=6.7 Hz，6H，NCH2Cii3) 0 MS-EI m/z 470 [M+]。 實例08 2,4-二甲某-542-酮基-6-苯基-1,2-二fK哚-3_某甲篡V 丄H-吡咯-3-藉酸（3 -二乙胺基丙基）醯胺 6-苯基-1,3-二氫⑷哚-2-酮（1·5克，7.16毫莫耳）與5·甲 醯基-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸（3-二乙胺基丙基）醯胺（2 克）縮合，可生成1.9克（57%)標題化合物，呈橘色固體： W NMR (360 MHz，DMSO-d6) δ 13.58 (s，1Η，ΝΗ)，10.94 (s, 1Η, NH), 7.8 (d, J=7.9 Hz, 1H, ArH), 7.6 (m, 4H, ArH), 7.4 (t, J=1.5 Hz, 2H, ArH), 7.3 (m, 2H), 7.1 (d, J=1.4 Hz, 1H, ArH), 3.2 (m, 2H, CONHCH2), 2.5 (m, 12H, 3xNCH2 及 2xCH3), 1.61(ιη, 2H, CH2CH2CH2), 0.93，(t, J=6.7 Hz, 6H, -158 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210x 297公釐)
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線 1230609 A7 _57 五、發明説明（156 ) NCH2CH3)。 MS-EI m/z 470 [M+] 〇 實例6 9 3二[·4—-(3-二乙胺基丙基胺甲醯基）-3,5_二甲甚-1H-吡咯-?-其 .亞.甲基1-2-酮基二氤·ιη·Η丨嗓-4 ·游鯰（3 _氣-4 _甲氛苯 基）醯胺 2 -酮基·2,3·二氫-1Η-吲哚-4-幾酸（3 -氯-4·甲氧苯基）醯 胺（1克’ 3.16耄莫耳）與5-甲醯基-2,4-二甲基]]^-?比洛-3· 羧酸（3-二乙胺基丙基）醯胺（1克，3.58毫莫耳）縮合，可生 成1.7克（85%)標題化合物，呈黃橘色固體。 MS-EI m/z 578.2 [Μ+]。 實例7 0 5-(5-溴-2-酮基-1,2-二氤亞啕哚-3-基甲某）-2·4·二甲某-1Η- 吡咯-3 -羧酸（3 -二乙胺某-丙基）醯胺 5-溴-1，3-二氫啕哚-2-酮（0.5克，2·36毫莫耳）與5-甲醯 基-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸（3-二乙胺基丙基）（0.51克）縮 合，可生成0.84克標題化合物，呈紅橘色固體。 {H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.61 (s, 1Η, NH), 10.99 (s，1H，NH)，8.09 (d，J=1.8 Hz，1H，ArH)，7·7 (m，4H)，7.2 (dd，J=1.8 及 8.3 Hz，2H，ArH)，6.8 (d，J=7.8 Hz，1H, ArH)， 3.3 (br s，4H, 2xNCH2)，3.2 (m，2H，CONHCH2)，2.6 (br s，2H， NCH2 及 2xCH3)，2.4 (s，6H，2xCH3)，1.66 (m，2H，CH2CH2CH2)， 0.98 (t，J=7.1 Hz，6H，NCH2CH3)。 MS-EI m/z 472及474 [M、l 及M++1]。 -159 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609 A7 ______ B7___._ 五、發明説明（157 ) 實例7 1 溴-2-酮1-1，2-二氤亞4丨哚-3-基甲基）-2」_4-二異丙其二 llLi^b咯- 3- #醢Γ2 -二乙胺墓-乙基）醯胺 5-溴-1,3-二氫啕哚-2-酮（100毫克，0·47毫莫耳）與5·甲 醯基-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸（2 -二乙胺基乙基）醯胺 (150毫克）縮合，可生成〇· 15克（62%)標題化合物，呈黃橘色 固體。 β NMR (300 MHz，DMSO-d6) δ 13.97 (s，1Η，ΝΗ)，1〇·95 (s, 1Η, ΝΗ), 8.09 (d, J=1.3 Hz, 1H, ArH), 7.84 (m, 1H), 7.79 (s，1H)，7·23 (dd，J=1.3 及 8.1 Hz，1H，ArH)，6·8 (d，J=8.1 Hz， 1H，ArH)，3·5 (m，1H，CH)，3.3 (m，3H，CH 及 NHCH2)，2.5 (br m，6H，3xNCH2)，1.28 (d，J=6.9 Hz，6H，2xCH3)，1.23 (d，
Hz, 6H，2xCH3), 0.96 (m，6H，2xCH2CH3)。 MS-EI m/z 514及516 [M+-1 及M++1]。 實例7 2 3-(5 -漠-2 -酮基-1，2-二氫亞4丨嗓-3-基甲某）-2,4-二異丙某_ - 3-羧酸（3 -二乙胺某-丙某）醯胺 5-溴-1，3-二氫吲哚-2-酮（90毫克，0.42毫莫耳）與5-甲 酿基-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸（3-二乙胺基丙基）醯胺 (140亳克）縮合，可生成54毫（25%)標題化合物，呈紅標色 固體。· _ ]H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.98 (s, 1Η, NH), 10.96 (s，1H，NH)，8.09 (d，J=1.7 Hz，2H)，7:78 (s，1H，H-乙埽基）， 7·23 (dd，J=1.7 及 8·1 Hz，1H，ArH)，6.82 (d，J=8.1 Hz，1H， -160 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 ___—〜B7___ 五、發明説明（158 )
ArH), 3.5 (m3 1H, CH), 3.25 (m> 2H, NHCH2), 3.15 (m, 1H, CH), 2·7 (br s，6H，3xNCH2)，1.7 (br m，2H，CH2CH2CH2)， 1.28 (d, J=6.9 Hz, 6H, 2xCH3), 1.24 (d, J=5.9 Hz, 6H, 2xCH3), 1.06 (m，6H，2xCH2CH3) 〇 MS-EI m/z 528及530 [M+-1 及。 實例73 之二ig-漠-2-嗣基-1，2-二氰^嗓-3-某甲基V2 4•二i丙某-m:/比咯-3 -幾酸（3 -吡^^基丙基）醯胺 5-溴-1，3-二氫 < 哚-2-酮（13〇毫克，〇·6毫莫耳）與5_甲醯 基-2,4-二異丙基-1Η-吡咯-3-¾酸（3 ·吡咯啶-；1 _基丙基）醯 胺（150¾克’ 0.45¾莫耳）縮合，可生成36毫（15%)標題化 合物，呈褐-橘色固體。 lH NMR (300 MHz, DMSO^d6) δ 13.98 (s, 1Η, NH), 10.97 (s，1H，NH)，8·10 (d，J=1.6 Hz, 2H)，7H 1H，H-乙烯基）， 7.23 (dd，J=1.6 及 7·6 Hz，1H，ArH)，6.82 (d，J=7.6 Hz，1H， ArH)，3.5 (m，_lH，CH)，3.25 (m，2H，NHCH2)，3·15 (m，1H， CH)，2.7 (br s，6H，3xNCH2)，1·7 (br m，6H，3xNCH2CH2)， 1.28 (d，JN5.6 Hz，6H，2xCH3)，1.24 (d，J=5.7 Hz，6H，2xCH3)。 MS-EI m/z 526及528 [M+-1 及M++1] e 實例7 4 溴-2 -酮基-1，2-二1亞⑷哚-3 -基甲基二甲-1H-毗 咯-3 -羧酸（吡咯-4 -基甲基）醯fe 5-溴-1,3-二氩啕哚-2-酮（170毫克，0.8毫莫耳）與5-甲醯 基-2，4-二甲基-1H-吡哈-3-幾酸（吡啶-4 -基甲基）醯胺（200毫 -161 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)
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線 1230609 A7 B7 五、發明説明（159 ) 克）縮合，可生成1 4毫（4 % )標題化合物，呈黃色固體。 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.67 (s, 1Η, NH), 11.01 (s，br，1H，NH)，8·51 (dd，J=1.6 & 4.3 Hz，2H)，8.23 (t，J=6.0 Hz，1H，CONHCH2)，8.11 (d，J=1.9 Hz，1H)，7.78 (s，1H，H-乙 烯基），7.31 (d，J=6.0 Hz，2H)，7.25 (dd，J=1.9 & 8·1 Hz，1H)， 6.82 (d，J=8.1 Hz，1H)，4.45 (d，J=6.0 Hz, 2H，NCH2)，2.46 (s， 6H，2xCH3) 〇 MS-EI m/z 450及452 [M+-1 及M++1]。 實例7 5 5-『6-(4-丁基茉某）-2-酮基-1,2-二氤亞旧哚-3 -基甲某1-2.4-;甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2-吡略啶-1-基乙某）醯胺 5-[6-(4-丁基苯基）]-1，3-二氫吲哚-2-酮（50毫克，0.19毫莫 耳）與5-甲醯基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2-吡咯啶-1-基乙基）醯胺（50毫克）縮合，可生成74毫克（76%)標題化合 物，呈橘色固體。 NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.58 (s, 1H, NH), 10.93 (s，br，1H，NH)，7·82 (d，J=7.9 Hz, 1H)，7·63 (s，1H，H-乙烯 基），7·54 (d，J=7.9 Ήζ，2H)，7·46 (m，1H，CONH)，7·26 (m， 3H), 7.09 (s, 1H), 3.30 (m, 2H, CH2), 2.52-2.63 (m, 4H, 2xCH2)，2.49 (m，4H，2xCH2)，2.43 (s，3H，CH3)，2·40 (s，3H， CH3)，1.68 (m，4H，2xCH2)，1.58 (m, 2H，CH2)，1.34 (m，2H， CH2)，0.91 (t，J=7.2 Hz, 3H，CH2CH3)。 MS-Εί m/z 510 [M+]。 實例70 -162 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 裝 訂
1230609 A7 _B7 五、發明説明（160 ) 5-『6-(5-異丙基-2-甲氧笨基）-2 -酮甚_ιί2-二g.亞4丨嘴-3-華 -甲基卜2!.4二士甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2 -的k咯邊小基乙某）醯脍 6-(5-異丙基-2-甲氧基苯基）-1，3-二氫啕哚-2-酮（50毫克 ，0.17毫莫耳）與5-甲醯基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3 -羧酸（2 -吡咯啶-1-基乙基）醯胺（45毫克）縮合，可生成67毫克（75%) 標題化合物，呈橘色固體^ lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.60 (m, 1Η5 CONH), 10.82 (s, br, 1H, NH), 7.77 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H, H- 乙婦基），7·45 (m，1H，CONH)，7.0-7.19 (m，5H)，3.73 (s，3H， OCH3)，3.32 (m，2H，CH2)，2.87 (m，1H，CH(CH3)2)，2.56 (m， 2H，CH2)，2.48 (m，4H，2xCH2)，2.43 (s，3H，CH3)，2·40 (s， 3H, CH3), 1.68 (m, 4H, 2xCH2), 1.21 (d, J=6.8 Hz, 6H, CH(CH3)2)。 ， MS-EI m/z 527.2 [M++1]。 實例7 7 乙基苯基）-2 -酮基-1，2-二氫亞 < 哚_某甲其u 士.甲基_1Η·吡咯-3-裁酸（2 -吡咯啶小某乙其、 6-(4-乙基苯基）_i，3-二氫吲嗓-2-酮（45毫克，019毫莫耳） 與5-甲酿基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3 -幾酸（2 -吡>各咬-卜基乙 基）醯胺（5 0毫克）縮合，可生成60毫克（65%)標題化合物， 呈黃橘色固體。 ^ NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.59 (s, 1H, NH), 10.96 (s，br，1H，NH)，7.83 (d，J=8.4 Hz，1H)，7.64 (s，1H，H·乙缔 基），7.51-7.56 (m，3H)，7·25-7·30 (m，3H)，7·〇8 (d，’J=1 Hz -163 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（161 ) 1H), 3.31 (m, 2H, CH2), 2.63 (m, 2H, CH2CH3), 2.55 (m, 2H, CH2), 2.49 (m, 4H, 2xCH2), 2.42 (s, 3H, CH3), 2.40 (s, 3H, CH3)，1.67 (m，4H，2xCH2), 1.20 (t，J=7.5 Hz, 3H，CH2CH3) 〇 MS-EI m/z 482 [M+] 0 實例7 8 5-「6-(2,4-二甲氣茉基）-2 -酮某-1,2-二氪亞 < 哚-3 -某甲基1- 2.4- 二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2-吡咯啶-1-基乙基）醯胺 6-(2,4-二甲氧苯基）-i，3-二氫啕哚-2-酮（5 1毫克，0.19毫 莫耳）與5-甲醯基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3 -羧酸（2 -吡咯啶-1 -基乙基）醯胺（5 0毫克）縮合，可生成3 0毫克（3 1 %)標題化 合物，呈橘色固體。 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.59 (s, 1Η3 ΝΗ), 10.86 (s，br，1Η，ΝΗ)，7·75 (d，J=7.8 Ηζ，1·Η)，7·60 (s，1Η，Η-乙埽 基），749 (m，1Η，CONH)，7·22 (d，J=8.4 Hz, 1Η)，7·03 (m， 1Η), 6.97 (s, 1H), 6.58-6.65 (m, 2H), 3.79 (s, 3H, OCH3), 3.76 (s, 3H, OCH3), 3.33 (m, 2H, CH2), 2.55 (m, 2H, CH2), 2.50 (m, 4H, 2xCH2), 2.42 (s, 3H, CH3), 2.39 (s/3H, CH3), 1.67 (m, 4H, 2xCH2)。 MS-EI m/z 514 [M+] 0 實例79 5_-「6-(3-異丙基茉墓）-2 -酮某-1,2-二氪亞峭哚-3 -基甲某卜 2.4- 二甲基-1!1-叶1：啥-3-藉酸（2-叶1：洛咬-1-基乙基）酿胺 6-(3-異丙基苯基）-1，3-二氫峭哚-2-酮（48毫克，0.19毫莫 耳）與5-甲醯基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2-吡咯啶-1- __- 164 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 裝 訂
線 1230609 A7 __ B7 五、發明説明（162 ) 基乙基）醯胺（5 0毫克）縮合，可生成59毫克（63%)標題化合 物，呈橘色固體。 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.63 (s, 1Η, NH), 10.97 (s，br，1H，NH)，7.87 (d，J=7.8 Hz，1H)，7·68 (s，1H，H-乙烯 基），7.24-7.55 (m，6H)，7·13 (s，1H)，3.34 (m，2H，CH2)，3.30 (m，1H，CH(CH3)2)，2.60 (m，2H，CH2)，2.50 (m，4H，2xCH2)， 2.45 (s，3H，CH3)，2.43 (s，3H，CH3)，1.70 (m，4H，2xCH2)， 1.27 (d，J=6.9 Hz，6H，CH(CH3)2)。 MS-EI m/z 496 [M+] o 實例8 0 氟-2-酮某-1,2-二氮亞⑻哚-3-基曱某二甲其-1H-羧酸（2-二乙胺基-乙基）醯胺 5 -氟-1,3-二氫吲哚-2-酮（0.54克，3.8毫莫耳）與5 -甲醯基-2,4 - 一甲基-ΙΗ-ρ比洛-3-竣酸（2 -二乙胺基乙基）酿胺縮合， 可生成0.83克（55%)標題化合物，呈黃綠色固體。 NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.66 (s, 1H, NH), 10.83 (s，br，1H，NH)，7.73 (dd，J=2.5 & 9.4 Hz，1H)，7.69 (s，1H， H-乙烯基），7.37(1，111，（：0>^〇*12(：112)，6.91(111，111)，6.81-6.85 (m，1H)，3·27 (m，2H，CH2)，2·51 (m，6H，3xCH2)，2.43 (s, 3H, CH3), 2.41 (s, 3H, CH3), 0.96 (t3 J=6.9 Hz, 6H, N(CH2CH3)2) 〇 MS-EI m/z 398 [M+]。 實例8 0 (不同的合成） 5-[5-氟-2-酮基-1,2-二氤亞叫1哚-(3Z)-某甲某1-2,4-二甲基- -165 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)
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1230609 A7 B7 五、發明説明（) 1比哈羧酸（2 -二乙胺基-乙基）醯γ 水合肼（55%，30〇〇毫升）及5-氟靛紅（3〇〇克）加熱至1〇〇。{：： 。以120分鐘在攪拌下分次（100克）加入額外的5 _氟_靛紅 (500克）。混合物加熱至110。(：，並攪拌4小時。混合物冷卻 至室溫，再以吸空過濾收集固體粒子，可生成粗製的（2_ 胺基-5 -氟-苯基）-醋酸醯肼（748克）。醯肼懸浮在水中（7〇〇 當升）’且混合物之ρ Η值以12 Ν鹽酸調至<ρΗ 3。混合物在 室溫下攪拌1 2小時。以吸空過濾收集固體粒子再以水洗二 次。產物在真空下乾燥，可生成5 -氟-ΐ，3-二氫-哚_2 -酮 (600克’73%產率）呈棕色粉末。1^|>^11(二甲亞艰-(16)5 3·46 (s，2Η，CH2)，6.75, 6.95, 7·05 (3 X m，3Η，芳族），10.35 (s，1H，NH)。MS m/z 152 [M+l] 〇 3,5·二甲基- IH-p比洛-2,4-二叛酸2 -第三-丁基酯4 -乙酯 (2600克）及乙醇（7800毫升）劇烈攪掉，同時緩緩加入n 鹽酸（3650¾升溫度由25 °C增加至35 1，氣體開始逸出 。混合物加溫至5 4 °C，並在進一步加熱下攪拌1小時，此 時的溫度是6 7 °C。混合物冷卻至5 °C，再於攪拌下緩緩加 入3 2升的冰及水。以吸空過濾收集固體，再以水洗三次。 固體乾燥至恆重，可生成2,4-二甲基-1H-吡咯-3-叛酸乙醋 (1418克’ 87%產率）呈微紅固體。NMR (二甲亞顶^d6) δ 2.10, 2.35 (2xs, 2x3H, 2xCH3), 4.13 (q, 2H, CH2), 6.37 (s, 1H, CH)，10.85 (s, 1H，NH)。MS m/z 167 [M+l]〇 二甲替甲醯胺（322克〆及二氣甲烷（3700毫升）在冰浴中冷 卻至4 °C，並於授拌下加入磷酿氣（684克）。以1 5分鐘分次 -166 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 裝 訂
1230609 A7 B7 五、發明説明（164 ) 加入固體的2,4-二甲基-1H-吡咯-3 -羧酸乙酯（670克）（緩緩 加入）。最高溫度可達1 8 °C ^混合物加熱至迴流1小時，冷 卻在冰浴中l〇°C，並在劇烈攪拌下快速加入ι·6升冰水。溫 度增加至15°C。在劇烈攪拌加入1〇 ν鹽酸（1.6升）。溫度增 加至2 2 °C。混合物靜置3 0分鐘，再分層。溫度可到達最多 4 0 °C。水層以10 N氫氧化鉀（3·8升）調至pH 12-13 ,速率使 溫度在加入中可到達5 5 °C並維持在此。加入完全後，混合 物冷卻至1 0 °C，並攪拌1小時。固體以吸空過濾收集，再 以水洗4次，可生成5-甲醯基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸 乙酯（778克，100%產率）呈黃色固體。iH NMR (DMSO-d6) δ 1·25 (t，3H，CH3)，2·44, 2·48 (2xs，2x3H，2xCH3)，4·16 (q， 2H，CH2)，9.59 (s，1H，CHO)，12.15 (br s，1H，NH)。MS m/z 195 [M+l]。 5 -甲酿基-2,4 - 一甲基-1H-*7比17各-3 -棱酸乙S旨（806克）’氮 氧化鉀（548克），水（2400毫升）及甲醇（3〇〇毫升）在攪拌下迴 流2小時，再冷卻至8 °C。混合物以二氯甲烷萃取2次。以 1000毫升10 N鹽酸調整水層至pH 4，並保持溫度在15。(：下 。加水促進攪拌。固體以吸空過濾收集，以水洗三次，再 於50 °C真空下乾燥可生成5 -甲醯基-2,4-二甲基- ΙΗ-吡咯-3-羧酸（645克，93·5%產率）呈黃色固體。NMR (DMSO-d6) δ 2.40, 2.43 (2xs, 2x3H, 2xCH3), 9.57 (s, 1H, CHO), 12.07 (br s，2H, NH+COOH)。MS m/z 168 [M+l]。 5 -甲醯基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3 -羧酸乙酯（1204克）及 6020毫升二甲替甲醯胺在室溫下攪拌，同時加入二甲 ___- 167 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 裝 訂
1230609 A7 ______ B7 五、發明説明（165 ) 基-胺丙基-3 ·乙基碳化二亞胺鹽酸鹽（2071克），羥苯並三 也（1460克），三乙胺（2016毫升）及二乙基乙二胺（1215毫升） 。混合物在室溫下攪拌2 〇小時。混合物以3000亳升水， 2000毫升鹽水及3000毫升飽和的碳酸鈉溶液稀釋，pH值再 以10 N氫氧化鈉調至pH 10以上。混合物以各5〇〇〇毫升1 〇 〇/0 甲醇/ 一氟曱燒萃取二次，再混合萃取物，於無水硫酸鎂 上乾燥並旋轉乾燥至乾。混合物以195〇毫升甲苯稀釋，再 次旋轉蒸發至乾。殘留物以3 : 1己烷：二乙醚（4〇〇〇亳升） 研磨。固體粒子以吸空過濾數集，以400毫升乙酸乙酯洗 二次’再於34。(：真空下乾燥21小時，可生成5-甲醯基-2,4-二甲基-1士吡咯_3-羧酸（2-二乙胺基-乙基）-醯胺（819克， 43%產率），呈淺棕色固體。NMR (二甲亞颯-d6) δ 0.96 (t，6Η，2xCH3)，2·31，2.38 (2xs，2 x CH3)，2.51 (m，6Η， 3xCH2)，3.28 (m，2H，CH2)，7.34 (m，1H，醯胺 NH)，9.56 (s， 1H，CHO)，11.86 (s，1H，吡咯 NH)。MS m/z 266 [M+l]。 5 -甲醯基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2-二乙胺基乙基）-醯胺（809克），5-氟-1，3-二氫-吲哚-2-酮（438克），乙醇 (8000毫升）及吡咯啶（1 3毫升）在7 8 °C下加熱3小時。混合 物冷卻至室溫，固體粒子以吸空過濾收集再以乙醇洗滌。
固體粒子以乙醇（5900毫升）在7 2°C下攪拌30分鐘。混合物 冷卻至室溫。固體粒子以吸空過濾收集，以乙醇洗滌，並 在54°C下真空乾燥130小時，以生成5-[5-氟·2-酮基-1,2-二氫亞-(3Ζ)-吲哚基甲基]-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸（2· 二乙胺基-乙基）-醯胺（1013克，88%產率）呈橘色固體。iH ________- 168 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公爱）
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1230609 A7 B7 五、發明説明（166 ) NMR (二甲亞石風-d6) δ 0.98 (t，6H，2xCH3)，2.43，2.44 (2xs 6H，2xCH3)，2.50 (m，6H，3xCH2)，3.28 (q，2H，CH2)，6.84, 6.92，7.42，7.71，7.50 (5xm，5H，芳族，乙晞基，CONH)，10.88 (s，1H，CONH)，13·68 (s，1H，吡咯 NH)。MS m/z 397 [M-l]。 實例8 1 3-「4-(2-二脖某乙基胺甲醯基）-3,5-二甲基-1H-吡咯-2-甚 亞甲基1-2-酮某-2,3-二氫-1H-峭哚-6-藉酸 2-酮基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-羧酸（80毫克，0.45毫莫耳） 與5 -甲醯基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2 -二乙胺基乙基） 醯胺縮合，可生成210毫克（92%)標題化合物，呈黃橘色固 m NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.6 (s, 1Η, NH), 7.76 (d, J=8.0 Hz，1H)，7.66 (s，1H，H-乙烯基），7·57 (dd，J=1.5 & 8·0 Hz, 1H)，7.40-7.42 (m，2H)，3.28 (m，2H，CH2)，2.88 (m，H-喊 啶），2.54 (m，6H，3xCH2)，2.44 (s，3H，CH3)，2·40 (s，3H， CH3)，1.56 (m，H-哌啶)，0·97 (t，J=6.98 Hz，6H，_N(CH2CH3)2r〇 MS m/z 424 [M+] ° 實例8 2 5-(5•二甲基胺績疏基-2 -嗣基-1，2_二氮.亞」引这朵_3·基甲基 2,4-二甲基-111-外匕口各_3_讀酸（2-叶匕啥咬_1二^乙某）g姦脖 2 -銅基-2,3-二氫丨嗓-5-績酸二甲基驢胺（9〇毫克， 〇·38毫莫耳）與5·甲醯基-2,4-二甲基-1H-吡咯」幾酸（2-批 洛淀-1-基乙基）酿胺（100毫克）縮合，可生成100毫克 (54%)標題化合物，呈黃色固體。 -169 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 裝 訂
1230609 A7 B7 五、發明説明（167 ) !H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.65 (s, 1Η, NH), 11.30 (s，br，1H，NH)，8.25 (d，1H)，7·92 (s，1H，H-乙埽基），7.48-7·53 (m，2H)，7·07 (d，J=8.2 Hz，1H)，3.33 (m，2H，CH2)，2.61 (s，6H，N(CH3)2)，2.56 (t，2H，CH2), 2.49 (m，4H，2xCH2)， 2.45 (s，3H，CH3)，2.44 (s，3H，CH3)，1.67 (m，4H，2xCH2)。 MS-EI m/z 485 [M+]。 實例8 3 5-Γ5-Π-氯苯基胺磺醯基）-2 -酮某-1·2-二氪亞峭哚-3 -某甲 甚：1-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3 -羧酸（2 -吡咯啶-1 -基乙基）醯賒 2 -酮基-2,3-二氫-1Η-啕哚-5 -磺酸（3 -氯-苯基）醯胺（120 毫克，0·38毫莫耳）與5·甲醯基-2,4-二甲基-111-叶|;嘻-3-幾酸 (2-吡咯啶-1-基乙基）醯胺（100毫克）縮合，可生成150毫 克（69%)標題化合物，呈黃色橘色固體。 lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.55 (s, 1H, NH), 11.26 (br s，1H，NH), 10.30 (br s，1H，NH)，8.26 (d，1H)，7.79 (s， 1H，H-乙晞基），7.51-7.57 (m，2H)，7.22 (t，J=8.i Hz，1H)，7.15 (m, 1H), 7.07 (m, 1H), 7.0 (m, 2H), 3.44 (m, 2H, CH2), 2.57 (t, J=7.0 Hz, 2H, CH2), 2.49 (m, 4H, 2xCH2), 2.44 (s, 3H, CH3)，2.43 (s, 3H, CH3)，1.68 (m，4H，2xCH2)。 MS m/z 568 [M+] o 實例8 4 2,4-二甲基-5-「2 -酮基-5-笨基（外1：咬-3-某取:確酿某H2-二 i.亞g弓丨哚-3 -基呷基1-1H-吡咯-3 -藉酸（2-扑卜咯啶· 1 -華λ 某）醯胺 -170 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐) 裝 訂
線 1230609 A7 B7 五、發明説明（168 ) 2 -酮基-2,3 -二氫嗓-5 -橫酸ρ比淀-3-基醯胺（11〇毫 克’ 0.38宅莫耳）與5 -甲醯基-2,4-二甲基- lH-p比嘻-3-叛酸 (2-吡咯啶-1 -基乙基）醯胺（1〇〇毫克）縮合，可生成丨5〇毫克 (74%)標題化合物，呈黃橘色固體。 lH NMR (360 MHz，DMS〇-d6) δ 13.58 (s，1H，NH)，8·21 (d，J=2.0 Hz, 2Η)，8.04 (m，1Η)，7.76 (s，1Η，Η-乙埽基），7.49-7.54 (m5 2H), 7.41 (m, 1H), 7.14 (m, 1H), 6.94 (d, J=8.5 Hz, 1H)，3.33 (m，2H，CH2)，2.56 (t，J=7.06 Hz，2H，CH2)，2·49 (m，2H，2xCH2)，2.43 (s，6H，2xCH3)，1.68 (m，4H，2xCH2)。 MS m/z 535 [M+] o 實例8 5 3-f3,5-二甲基-4-(4-甲某畋畊-1 -羰某）-1Η-吡咯-2-基亞甲 基1-4-(2-搜乙基）-1,3 -二惫卜朵-2-嗣 4-(2-羥乙基）-1,3-二氩啩哚-2-酮（71毫克，0.4毫莫耳）與 3,5-二甲基-4-(4-甲基-哌畊-1-羰基）-iH-吡咯-2-醛縮合， 可生成90毫克（55%)標題化合物，呈橘色固體。 NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.25 (s, 1Η, NH), 10.88 (s, 1H，NH), 7·57 (s，1H，H-乙烯基），7·03 (m，ih)，6.75-6.82 (m, 2H), 4.86 (m, 1H, OH), 3.70 (m, 2H, CH2), 3.04 (m, 2H, CH2)，2.48 (m, 4H，2xCH2), 2.28 (br s, 7H)，2.19 (s，3H，CH3)， 2.18 (s，3H，CH3) 0 、— - MS m/z (+ve).409.3 [M+]。 實例8 ό ‘ U3,5-一甲基-4-(4-甲基喊〃井-1-幾基比哈-2-基亞甲 ___- 171 - 本紙張尺度適用中國國家棣準(CNS) A4規格(210X297公I) 1230609 A7 B7 五、發明説明（169 ) 基~|-2 -酬基- 2,3 -二I-IH-Ml嗓-5-確酸苯基酿胺 2 -酮基-2,3-二氫-1H-啕哚-5 -磺酸苯基醯胺（110毫克， 〇·4毫莫耳）與3,5-二甲基-4-(4-甲基哌畊-卜羰基）-1H-吡咯-2-醛（100毫克）縮合，可生成50毫克（24%)標題化合物，呈 黃色固體。 NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.52 (s, 1Η, NH), 11.26 (s, 1H, NH), 10.08 (s, 1H, NH), 8.21 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.75 (s，1H，H-乙烯基），7.50 (dd，J=1.6 & 8.3 Hz，1H)，7.19 (m， 2H), 7.10 (m, 2H), 6.97 (m, 2H), 2.49 (m, 4H, 2xCH2), 2.28 (m, 10H，2xCH3 & 2xCH2)，2.18 (s，3H，CH3)。 MS-EI m/z 519 [M+] 〇 實例8 7 5-(5-二甲基胺磺醯基-2 -酮某-1,2-二氫亞⑹哚-3 -基甲某卜 2,4-二甲基-1H-吡咯-3-藉酸（2-二乙胺基乙基）醯胺 2-酮基-2,3-二氫-1H-吲哚-5-磺酸二甲基醯胺（90毫克， 〇·38毫莫耳）與5 -甲醯基-2,4-二甲基-1H-吡咚-3-羧酸（2-二 乙胺基乙基）醯胺（100毫克）縮合，可生成80毫克（43%)標題 化合物，呈黃色固體。 NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 11.30 (s, 1H, NH), 8.27 (d，J=1.7 Hz, 1H)，7·94 (s，1H，H-乙埽基），7.49 (dd，J=1.7 & 8.0 Hz, 1H), 7.44 (m, 1H, CONHCH2CH2), 7.07 (d, J=8.0 Hz, 1H), 3.26 (m, 2H, CH2), 2.60 (s, 6H, N(CH3)2), 2.53 (m, 2H, CH2), 2.45-2.50 (m, 10H, 2xCH3 & N(CH2CH3)2, 0.96 (t, J=7.2 Hz, 6H，NiCH2CH3)2)。 、 -172 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609
MS-EI m/z 487 [M+] 〇 實例8 8 氫亞^丨哚-3 4胺基乙墓）醯胺 5-f5-(3 -氣苯基績酿基）-2-_ 2,4-二甲基-1H-吡咯-3-淼酸（9 _ 2-酮基-2,3-二氫-1H-峭哚_5·磺酸（3_氯_苯基）醯胺（ι2〇 毫克，3.8毫莫耳）與5·甲疏基_2,4_二甲基.峨嘻-3-幾酸 (2-二胺基乙基）酿胺（100毫克）縮合，可生成“毫克 標題化合物，呈黃色固體。· ^ . NMR (360 MHz, DMS〇.d6) δ 13.,5 (s, 1Η, ΝΗ), 11.24 (s，1Η，ΝΗ)，10·29 (s，1Η，ΝΗ)，8·25 (d，！=18·7 Ηζ，1Η)，7:79 (s，1Η，Η-乙晞基），7·52 (dd，& 8.3 Ηζ，1Η)，7.42 (m， 1H，CONHCH2CH2)，7.22 (t，J=8.〇2 Hz，1H)，7.15 (t，J=2 Hz， 1H), 7.08 (m, 1H), 7.0 (m, 2H), 3.27 (m, 2H, CH2), 2.48-2.57 (m, 6H，3xCH2)，2.45 (s, 3H，CH3)，2.44 (s，3H，CH3)，0.97 (t， J=7.0 Hz，6H，N(CH2CH3)2)。 MS m/z 570.1 [M+]0 實例9 5 liil-酮基-5·苯基-1，2-二氫亞叫丨哚-3-篡甲其V4'6,7_四氪-2H-異巧哚-1-羧酸乙酯 iH NMR (360 MHz，DMSO-d6) δ 13·74 (s，1H，NH), 11.00 (s，1Η，ΝΗ)，8·13 (d，J=1.7 Ηζ，1Η)，7·74 (s，1Η，Η_ 乙烯基）， 7.70 (d, J=7.7 Hz, 2H), 7.49 (dd, J=1.7 & 8.0 Hz, 1H), 7.44 (t, J=7.7 Hz, 2H), 7.32 (m, 1H), 6.96 (d, J=8.0 Hz, 1H), 4.26 (q, J=7.0 Hz, 2H； OCH2CH3), 2.79 (m, 2H, GH2), 2.72 (m, 2H, -173 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（171 ) * CH2)，1.73 (m，4H，2xCH2)，1.30 (t，J=7.0 Hz，3H，〇CH2CH3)。 MS-EI m/z 412 [M+]。 實例9 9 3-(2-酮基-5-笨基胺磺醯基-1，2·二氫亞㈣哚-3-基甲基）-4,5,6,7-四氫-2H-異⑻哚-1 -羧酸乙酯 !H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.64 (s, 1Η, NH), 11.33 (s，1H，NH)，10.07 (s，1H，NH)，8.24 (d，J=1.8 Hz，1H)，7.74 (s，1H，H-乙烯基），7.57 (dd，J=1.8 & 8.0 Hz，1H)，7.21 (t， J=7.6 Hz, 2H)5 7.11 (d, J=7.6 Hz, 2H), 6.99 (d, J=8.0 Hz, 1H), 6.98 (d，J=7.6 Hz，1H)，4.27 (q，J=7.0 Hz，2H，OCH2CH3)， 2.80 (m，2H，CH2)，2.73 (m，2H，CH2)，1.73 (m，4H，2xCH2)， 1·30 (t，J=7.0 Hz，3H，OCH2CH3)。 MS-EI m/z 491 [M+]。 實例1 0 9 2-「2-(3-嗎福啉-4-羰基）-4,5,6,7-四氮-21!_異41哚-1-基亞甲 基[2 -嗣基- 2,3·二氮嗓-6 -妓酸 !H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.60 (s, 1H, NH), 12.75 (br s，1H，COOH)，11.08 (s，1H，NH)，7.85 (d，J=7.8 Hz，1H)， 7.71 (s，1H，H-乙烯基），7.62 (dd，J=1.4 & 7·8 Ήζ，1H)，7.41 (d，J=1.4 Hz，1H)，3.65 (m，4H，2xCH2)，3·55 (m，4H，2xCH2)， 2.81 (m，2H，CH2)，2.54 (m，2H，CH2)，1.73 (m，4H，2xCH2)。 MS-EI m/z 421 [M+] 0 實例1 1 2 5-溴-3-「3-(吡咯啶-1-羰基）-4,5,6,7-四氤-2士異^哚-1-某亞 -174 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（172 ) 甲基M，3-二氮-W哚-2-酮 lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.56 (s, 1Η, NH), 11.〇 (s, 1H，NH), 8·05 (d, J=1.8 Hz, 1H)，7.74 (s，1H，H-乙晞基）， 7.28 (dd, J=1.3 & 8.3 Hz, 1H), 6.83 (d, J=8.3 Hz, 1H), 3.57 (m，4H，2xCH2)，2.79 (m，2H，CH2)，2.65 (m，2H，CH2)，1.88 (m，4H，2xCH2)，1.71(m，4H，2xCH2)。 MS-EI m/z 439 & 441 [M+-1]&[M++1] 0 實例1 1 4 3-(3-二甲基胺續陸基-4,5,6,7 -四氣-2H -異4丨噪-1-某亞甲某 2-酮基-2,3-二氮-1H-M丨哚-6-羧酸 !H NMR (360 MHz5 DMSO-d6) δ 13.60 (s, 1H, NH), 12.72 (br s, 1H, COOH), 11.05 (s, 1H, NH), 7.85 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.72 (s，1H，H-乙晞基），7.62 (dd，J=1.3 & 7.9 Hz，1H)，7.42 (d，J=1.3 Hz, 1H)，3.03 (s，6H，N(CH3)2)，2.81 (m，2H，CH2)， 2.55 (m，2H，CH2)，1.73 (m，4H，2xCH2)。 MS-EI m/z 379 [M+] 〇 實例1 1 5 4 -甲基-5-(5 -甲基胺橫酿基-2-嗣基-1，2·二氮-亞嗓-3·某 甲基V1H-吡咯-3-羧酸 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.56 (br s, 1H, NH), 8.24 (d，J=1.5 Hz，1H)，7.86 (s，1H，H-乙婦基），7.74 (d，J=2.96 Hz， 1H), 7.56 (dd, J=1.5 & 8.1 Hz, 1H), 7.20 (br m, 1H, NHCH3), 7.03 (d，J=8.1 Hz，1H), 2.57 (s，3H，CH3)，2.41 (s，3H，CH3)。 MS-EI m/z 361 [M+] 〇 -175 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公羡)
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1230609 A7 B7 五、發明説明（173 ) 實例1 1 6 U4- 基：5-(4-甲基-5 -甲某胺石菱酿基-2 -酮某-1,2-二寶,-5 啕哚-Α:·_基甲基）-1 H-p比咯· 3 -教酸卜胺基}-酷龄λ啼 4 -甲基-1Η-吡咯-3 -羧酸乙酯（交獻參考d. 〇· Cheng，Τ. L. Bowman and E. Legoff； j. Heterocyclic Chem.； 1976; 13; 1 145-1 147)利用方法A甲醯化，利用方法B水解，再行疏行化 作用（方法C)可生成[(5-甲醯基-4-甲基-1H-吡咯-3 -羰基）· 胺基]-醋酸乙酯。 4-甲基-5-甲基胺基磺醯基-2-羥吲哚（50毫克，0.21毫 莫耳）與[(5-甲醯基-4·甲基-1H-吡咯-3-羰基）-胺基]-醋酸 乙酯縮合（100毫克，0.42毫莫耳）並加上旅畊（0.1毫升）於乙 醇（2毫升），可生成50毫克（52%)標題化合物。 iH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.59 (s, 1H, NH), 11.29 (v.br. s, 1H, NH-CO), 8.33 (t, J=5.8 Hz, 1H, CONHCH2), 7.83 (d，J=3.11 Hz, 1H)，7.80 (s, 1H，H-乙晞基），7.71 (d，J=8.5 Hz, 1H), 7.34 (br m, 1H, NHCH3), 6.89 (d, J=8.5 Hz, 1H), 4.11 (q, J=7.1 Hz, 2H, OCH2CH3), 3.92 (d, J=5.8 Hz, 2H, GlyCH2), 2.86 (s, 3H, CH3), 2.48 (s, 3H, CH3), 2.42 (d, J=4.71 Hz, 3H, HNCH3)，1.20 (t，J=7.1 Hz, 3H，OCH2CH3)。 MS-EI m/z 460 [M+] 〇 實例1 1 7 H4-甲基-5-(5-甲基胺確醯基-2-酮某-1.2-二氤-亞㈣哚-3 -某甲基V1H-吡咯-3-羧酸卜胺基丨-醋酸乙酯 5 -甲胺基磺醯基-2-羥啕哚（0.06克，0.22毫莫耳），[(5-甲 -176 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公爱) 裝 訂
線 1230609 A7 ____B7—_ 五、發明説明（174 ) 醯基-4-甲基-1H-吡咯羰卜胺基]_醋酸乙酯（〇 〇75克， 0.27毫莫耳）及哌啶（2滴）於乙醇（5毫升）之混合物，在9〇t 足熔封管中加熱1 2小時。冷卻後，以吸空過濾收集沈澱物 ’以乙醇洗’以二氯甲烷/乙醚研磨，並乾燥後可生成 0.035克（36%)標題化合物，呈微黃棕色固體。 lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.6 (s, 1Η, NH)5 11 (v.br. s, 1H, NH-CO), 8.30 (t, J=5.7 Hz, 1H, CONHCH2), 8.25 (d，J=1.2 Hz，1H)，7.88 (s，1H，H-乙烯基），7.84 (d，J=3.3 Hz， 1H)，7.57 (dd，J=1.9 & 8.5 Hz, 1H)，7.14 (br m，1H，NHCH3)， 7.04 (d，J=8.4 Hz，1H)，4.11 (q，J=6.7 Hz，2H，OCH2CH3), 3.92 (d, J=5.7 Hz, 2H, GlyCH2), 2.55 (s, 3H, CH3), 2.41 (m, 2H，NCH3)，1.20 (t，J=6.7 Hz，3H，OCH2CH3)。 MS m/z 446 [M]+。 實例1 1 8 IB-甲某-5-(5 -甲基胺磺醯某-2-酮某-1.2-二氤·亞⑷哚-3-基甲基V1H-毗咯-3-淼酸1-胺某}-醋酸 [(5-曱醯基-4-甲基-1H-吡咯-3-羰）-胺基]-醋酸乙酯 (0.142克，〇·59毫莫耳）及IN NaOH (1.2毫升）於甲醇（10毫升） 之混合物，在室溫下攪拌1小時。反應濃縮，殘留物與5 -甲胺基磺醯基-2-羥啕哚（0.13克，0·48毫莫耳）及哌啶（0.12 毫升）於乙醇（12毫升）縮合，可生成0.11克（52%)標題化合 物。 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.98 (br s, 1H, NH), 8.17 __ - 177 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公黄Γ 1230609 A7 B7 五、發明説明（175 ) (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.75 (d, J=3.1 Hz, 1H), 7.51 (dd, J=2 & 8.2 Hz，1H)，7.21 (m on br s，2H)，6.97 (d，J=8.1 Hz，1H)， 3.41 (d，J=4.2 Hz，2H，CH2NH)，2.54 (s，3H，吡咯-CH3)，2.39 (s, 3H, ArCH3) ^ MS m/z 417 [M-l]+ 0 實例1 2 0 5 -曱基-2-(2-酮基-1，2-二氪-亞㈣哚-3-基甲基）-1 H-吡咯-3- 羧酸 NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.77 (br s, 1H, NH), 12.49 (s，1H，COOH) 11.07 (s，1H，NH)，8.39 (s，1H，H-乙晞 基），7·43 (d，J=7.47 Hz，1H)，7.20 (t，J=7.47 H，1H)，7.03 (t， J=7.47 Hz，1H)，6.91 (t，J=7.47 Hz，1H)，6.49 (d，J=1.53 Hz， 1H)，2.34 (s，3H，CH3) o MS m/z 269 [M+H]+ o 實例1 2 1 5 -甲基-2-(2-酮基-1，2-二齑,-亞钊哚-3 -基甲基）-1 H-吡咯-3 -羧酸乙酯 lH NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.79 (s, 1H, NH), 11.08 (s，1H，NH)，8.31 (s，1H，H-乙烯基），7.45 (d，J=7.52 Hz，1H)， 7.20 (t, J=7.52 Hz, 1H), 7.03 (t, J=7.52 Hz, 1H), 6.91 (d, J=7.52 Hz, 1H), 6.50 (d, J=2.1 Hz, 1H), 4.26 (q, J=7.2 Hz, 2H, OCH2CH3), 2.33 (s, 3H, CH3), 1.32 (t, J=7.2 Hz, 3H, OCH2CH3)。 MS m/z 297.1 [M+H]+。 -178 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（176 ) 實例1 2 2 2-(5-溴-2-酮基-1,2-二氤亞㈣哚-3-基甲基）-5-甲基-ΙΗ-吡咯-3 -羧酸乙酯 lH NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.72 (s, 1Η, NH), 11.16 (s，1H，NH)，8.29 (s，1H，H-乙烯基），7.53 (d，J=2,0 Hz, 1H)， 7.35 (dd, J=2.0 & 8.05 Hz, 1H), 6.87 (t, J=8.05 Hz, 1H), 6.53 (d, J=2.4 Hz, 1H), 4.28 (q, J=7.03 Hz, 2H, OCH2CH3), 2.35 (s, 3H，CH3)，1.33 (t，J=7.03 Hz，3H，OCH2CH3)。 MS m/z 375 & 377 [M+H]+。 實例1 2 3 2- (5-溴-2-酮基-1·2-二氤砭峭哚-3-基甲基V5-甲基-1H-吡咯- 3- 羧酸 ]H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.72 (s, 1H, NH), 12.57 (s，1H，COOH)，11.19 (s，1H，NH)，8.36 (s，1H，H-乙晞基）， 7.51 (d, J=1.4 Hz, 1H), 7.34 (dd, J=1.4 & 8.17 Hz, 1H), 6.87 (t，J=8.17 Hz，1H)，6·52 (d，J=2.5 Hz，1H)，2.35 (s，3H，CH3)。 MS m/z 347 & 349 [M+H]+ o 實例1 2 4 2-(5-溴-2-酮某-1·2-二氤砟⑷哚-3-某甲某V5-甲基-1H-吡咯-3 -羧酸（2-吡咯啶-1-基乙某醯胺 對2-甲醯基-5-甲基-1H-吡咯-3-羧酸（250毫克，1.63毫 莫耳）於二甲替甲胺（3毫升）之溶液，加入乙基-3·(3_二甲 胺基丙基）碳化二亞胺（376毫克，1.2當量），卜羥基苯並三 唑（265毫克，1.2當量），三乙胺（〇·45毫升，2當量）及1-(2- -179 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（177
胺乙基）吡咯啶（0.23毫升，1·1當量）《在室溫下攪拌一夜， 反應以飽和的碳酸氫鈉及鹽水（有額外的鹽）稀釋，並以 1 0 %甲醇/二氯甲烷萃取。混合的有機層以鹽水洗，在無 水硫酸鈉上乾燥及濃縮，可生成丨3 〇毫克2 _甲醯基_ 5 •甲 基_1Η·吡咯-3-羧酸（2-吡咯啶-1-基-乙基）·醯胺。 5-溴-2-羥啕哚（1〇6毫克，〇·5毫莫耳），2_甲醯基甲 基- lH-p比ρ各_3_幾酸（2_ρ比洛淀-1-基-乙基）_酿胺（125毫克 ’ 1當量）及哌啶（〇·2毫升）於乙醇（2毫升）之混合物，在8(rc 之密封管中加熱1小時再冷卻。所形成之沈澱物以吸空過 濾收集，以乙醇及乙酸乙酯洗滌並乾燥，可生成標題化合 物，呈橘色固體。 iH NMR (300 MHz，DMSO-d6) δ 13.62 (s，1H，NH)，11.06 (br s，1Η，ΝΗ)，8.56 (s，1Η，Η·乙晞基)，8·15 (m，1H，c〇NHCH2)，， 7.48 (d, J=1.8 Hz, IH), 7.31 (dd, J=1.8 & 7.9 Hz, 1H), 6.86 (d, J-7.9 Hz, IH), 6.60 (d/J=2.3 Hz, IH), 3.35 (m, 2H, NHCH2CH2), 2.56 (t, J=6.91 Hz, 2H, HNCH2CH2), 2.35 (s, 3H, CH3), 1.67 (m, 4H, 2xCH2)。 MS m/z 443/445 [M+及M+十2] 〇 實例1 2 5 漠酮基-l，2-二氫亞啕喝二甲某甲某_1H-毗咯-3 -羧酸（2 -二乙胺基乙基肱 對2-甲醯基-5-甲基-1H-吡咯-3-羧酸（32〇毫克，2.丨毫莫 耳）於一甲替甲胺（3耄升）之溶液，加入1 -乙基-3-(3-二甲胺 基丙基）碳化二亞胺（483毫克，ι·2當量），丨·羥基苯並三唑 -180 - 本纸银尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公:¢)
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(340毫克，L2當量），三乙胺（0·59毫升，2當量）及队沁二 乙基乙二胺（0.32毫升，1.1當量）。在室溫下攪拌一夜後， 反應以飽和的碳酸氫鋼及鹽水（加有過量的鹽）稀釋，再以 1 0 %甲醇/二氯甲烷萃取。混合的有機層以鹽水洗滌，在 無水硫酸鈉上乾燥及濃縮，可生成2-甲醯基甲基」Η_ 外匕哈-3 -叛酸（2 -二乙胺基乙基）-醯胺。 5-溴-2-羥吲哚（1〇6毫克，〇·5毫莫耳），2_甲醯基·5_甲 基-1Η-吡咯-3-羧酸（2·二乙胺基·乙基）_醯胺（126毫克，j 當量）及哌啶（0.2毫升）於乙醇（2毫升）之混合物在8〇。(：之密 封管中加熱1小時，再冷卻。以真空過濾收集沈澱物，以 乙醇及乙酸乙酯洗滌，乾燥可生成標題化合物，呈橘色固 ^ NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 13.62 (s, iH, NH), 11.11 (br s，1H，NH)，8.54 (s，1H，H-乙婦基)，8·1 (m，1H，c〇NHCH2)， 7.49 (d，>2·2 Hz，1H)，7.31 (dd，J=2.2 & 8 3 Hz，ih)，6別’ (d，JN8.3 Hz，1H)，6·58 (d，J=2.24 Hz，ih)，3·31 (m，2H， HNCH2CH2), 2.59 (m, 6H, 3xCH2), 2.36 (s, 3H, CH3), 0.99 (t, J=6.8 Hz，6H，N(CH2CH3)2)。 ’ MS m/z 445/447 [M+ 及 M++2]。實例1 2 ό L4·一甲基酮基-1，2-二虱亞啕味-3 _華基）-1Η-叶k吟· 羧酸（2 -二乙胺某-乙某）-醯脖 1，3-二氫嗓-2-(266毫克，2毫莫耳），甲醯基-2,4-二甲基-1H^比哈-3-叛酸（2-二乙胺基·乙基）·醯胺（53〇毫克 -181 - 本紙張尺度通用中國國家標準(CNS) A4祝格(210X297公釐)
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k 1230609 A7 B7 五、發明説明（179 ) ，2毫莫耳）及哌啶（1滴）於乙醇之混合物，在9〇<5c下加熱2 小時。反應冷卻至室溫，所生成之沈澱物以吸空過濾收集 ，以乙醇洗滌及乾燥，可生成422毫克（55%)標題化合物， 呈淺黃色固體。 iH NMR (400 MHz，DMSO, δ 13.7 (S，1H，NH)，7.88 (d， J-7.6 Hz，1H)，7·64 (s，1H，Η-乙缔基)，7.41 (t，J=5.4 Hz，1H， NH), 7.13 (dt, J=1.2 & 7.6 Hz, 1H), 6.99 (dt, J=1.2 & 7.6 Hz, 1H)，6.88 (d，J=7.6 Hz, 1H)，3.28 (m，2H)，2.48-2.55 (m，6H)， 2.44 (s，3H，CH3)，2.41 (s，3H，CH3), 0·97 (t，J=7.2 Hz, 6H， N(CH2CH3)2)。 ’ MS +ve APCI 381 [M++l]〇 實例1 2 7 乏.二(5-乳.-2-酮棊1，2-一虱亞4丨嗓-3 _基甲幕）-2,4-二甲基-1H二 土匕..洛-3-羧酸（2 -二乙胺基-乙基）_5患眩 5-氯-1，3-一氫-啕嗓-2-_(335毫克，2毫莫耳），5-甲醯 基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3.羧酸（2_二乙胺基乙基卜醯胺 (530耄克，2耄莫耳）及喊淀（1滴）於乙醇之混合物，在9 〇。〔 下加熱2小時。反應冷卻至室溫，生成之沈殿物以吸空過 濾收集，以乙醇洗再乾燥，可生成565毫克（68%)標題化合 物，呈橘色固體。 iH NMR (400 MHz，DMSO-d6) δ 13·65 (s，1H，ΝΗ)，11·〇 (s，1Η，ΝΗ)，7.98 (d，J=2.1 Ηζ，1Η)，7·77 (s，1Η，Η-乙埽基）， 7.44 (t, NH), 7.13 (dd, J=2.1 & 8.4 Hz, 1H), 6.87 (d, J=8.4
Hz，1H)，3·28 (g，2H)，2.48-2.53 (m，6H)，2.44 (s，3H，CH3)， -182 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐)
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1230609 A7 B7 五、發明説明（180 ) , 2.43 (s，3H，CH3)，0.97 (t，J=7.0 Hz, 6H，N(CH2CH3)2)。 MS + ve APCI 415 [M++l]。 實例1 2 8 2.4-二甲基-5-(2-酮某-172-二氣-亞峭哚-3-基甲基）-1!1-吨 口各-3 -被故（2 - 口比洛淀_ 1 -乙某）-酉盘月士_一 1，3-二氫-啕哚-2 -酮與5 -甲醯基-2,4-二甲基-1H_吡咯-3 -羧酸（2 -吡咯啶-1 -基-乙基）-醯胺縮合，可生成標題化合 物。 MS + ve APCI 379 [M++1]。 實例1 2 9 5-(5-氣-2-酮基-1,2-二氤㈣唤-3-基甲基）-2,4-二曱笔 吡咯-3 -羧酸（2 -吡咯啶-1 -基-乙某）-醯胺 5-氟-1，3-二氫-吲哚-2-酮與5 -甲醯基-2,4-二甲基- Up比 咯-3 -羧酸（2 -吡哈啶-1 -基-乙基）-醯胺縮合，可生成標題 化合物。 MS + ve APCI 397 [M++1]。 擴大規模步驟： 5 -甲酿基-2,4-二甲基- iH-p比洛-3-竣酸（61克），5 -氟 二氫啕哚-2-酮（79克），乙醇（300毫升）及吡哈啶（32毫升） 迴流4.5小時。加醋酸（2 4毫升）至混合物中，迴流再繼續 3 0分鐘。混合物冷卻至室溫，固體粒子以吸空過濾收集， 再以乙醇洗二次。固體粒子在40%丙酮水溶液（400毫升）， 内12 N鹽酸（6·5毫升）攪拌1 3 0分鐘。固體粒子以吸空過減 收集，以4 0 %丙酮水溶液洗二次。固體粒子在真空乾澡， ____ _ 183 _
本紙張尺度適用中國國家棵準(CNS) Α4規格(210X297公爱) 1230609 A7 B7 五、發明説明（181 ) 可生成5-[5-氟-2-酮基- l，2-二氫-亞峭哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-啕咯-3-羧酸（86克，79%產率）呈橘色固體。iH-NMR (二甲亞δ 2.48，2.50 (2xs，6H，2xCH3)，6.80, 6.88, 7·68，7·72 (4xm，4H，芳族及乙烯基），10.88 (s，1H，CONH)， 12.12 (s，1H，COOH)，13.82 (s，1H，吡咯 NH)。MS m/z 299 [M-l] 0 5-[5-氟-2-酮基-i，2-二氫-亞啕哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二曱 基-1H-吲咯-3 -羧酸（100克）及二甲替甲醯胺（5〇〇毫升）攪拌 ’再加入苯並三唑-丨-基氧基叁（二甲胺基）六氟磷酸鳞（221 克），1-(2-胺乙基）吡咯啶（45.6克）及三乙胺（93毫升）。混 合物在環境溫度下攪拌2小時。固體產物以吸空過〉慮收集 ,再以乙醇洗滌。固體粒子在乙醇中（500毫升）中攪拌以洗 滌淤漿，在6 4 t：下歷1小時，再冷卻至室溫。固體粒子以 吸空過濾收集，以乙醇洗滌，於真空下乾燥，可生成5_[5_ 氟-2-酮基-1,2-二氫·亞吲哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H· 啕咯-3-羧酸（2-吡咯啶-1·基-乙基）·醯胺（1〇1·5克，77%產 率）。iH-NMR (二甲亞颯-d6) δ 1.60 (m，4Η，2xCH2)，2.40, 244 (2xs, 6H, 2xCH3), 2.50 (m, 4H, 2xCH2), 2.57, 3.35 (2x, 4H, 2XCH2)，7.53，7.70，7.73，7.76 (4xm，4H，芳族及乙烯基）， 1〇·88 (s，1H，CONH)，13.67 (s，1H，吡咯 NH)。MS m/z 396 [M+i]。 實例1 3 0 iiUz·氣-2-酮基-1，2:_二氫亞啕哚-3-基甲某牡二甲某· 也啥酸（2-说洛淀-1-棊-乙基酿脖 L___ - 184 _ 本紙張尺度遴用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（182 ) 5-氣-1，3 -二氫-啕嗓-2 -酮與5 -甲醯基-2,4-二甲基- lH-p比 洛-3-幾酸（2 -p比洛淀-1-基-乙基）-酿胺縮合，可生成標題 化合物。 MS + ve APCI 413 [M++1]。 實例1 3 1 2,4-二甲基-5-(2-酉同基麵1，2-二藎.-亞沔1口果轉3鑛基曱幕）_1^}-口比 咯-3-藉酸（2 -二甲胺基乙基醯胺 1，3-二氫-〃?丨嗓-2-酮與5-甲醯基-2,4-二甲基-11*1-叶(：哈-3- 羧酸（2-二甲胺基-乙基）-醯胺縮合，可生成標題化合物。 lU NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.63 (s, 1Η, NH), 10.90 (s, 1H，NH)，7.78 (d，J=7.8 Hz，1H)，7.63 (s，1H，H-乙烯基），7.48 (t，1H，NH)，7.13 (dt，1H)，6·98 (dt，1H)，6·88 (d，J=7.7 Hz，^ 1H), 3.31 (q, J=6.6 Hz, 2H), 2.43 (s, 3H, CH3), 2.40 (s, 3H, CH3)，2.38 (t，J=6.6 Hz，2H), 2.19 (s, 6H，N(CH2CH3)2)。 MS + ve APCI 353 [M++1 卜 實例1 3 2 5-(5-氣-2-酮基-1,2-二氫亞⑹哚-3 -基甲基）-2,4-二f華-n 吡咯-3-羧酸（2 -二甲胺基乙基醯胺 5-氟-1，3-二氫-峭哚-2-酮與5 -甲醯基-2,4-二甲基- iH-p比 咯-3-羧酸（2 -二甲胺基乙基）醯胺縮合，可生成標題化合 物0 iH NMR (400 MHz，DMSO-d6) δ 13.68 (s，1H，NH)，1〇·9〇 (s，1Η，ΝΗ)，7·76 (dd，J=2.4 & 9.4 Hz, 1Η)，7.71 (s，1Η，Η_ 乙 晞基），7·51 (t，1H，NH), 6.93 (m，1H)，6.84 (dd，J=4.6 & 8.4 -185 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1230609 A7 _____B7 五、發明説明（183 )
Hz, 1H), 3.31 (q, j=6.6 Hz, 2H), 2.43 (s, 3H, CH3), 2.41 (s, 3H, CH3)，2·38 (t，J=6.6 Hz，2H)，2.19 (s，6H，N(CH2CH3)2)。 MS + ve APCI 371 [M十+1] 0 實例1 9 3 5-f5-·氯:,·2-酮茱- i，2-二氣-亞啕哚_(3Z)·某甲某~|-2·4-二甲基- 1Η-ρ比_空二3 -辫醆（2 -乙胺基-乙某醯胺 5-甲醯基-2,4-二曱基-1H-吡咯-3-羧酸（2 -乙胺基-乙基）-醯胺（99克），乙醇（4〇〇毫升），5_氟_2-羥啕哚（32克）及吡 洛淀（1 · 5克）在攪;拌下迴流3小時。混合物冷卻至室溫，固 體粒子以吸空過濾收集。固體粒子在之乙醇中撥拌， 冷卻至室溫，再以吸空過濾收集。產物在真空下乾燥，可 生成5-[5-氟-2-酮基-1，2-二氫-亞啕哚-(32)-基甲基]-2,4-二甲 基-lH-p比咯-3-羧酸（2-乙胺基-乙基）-醯胺（75克，95 %產 率）。iH-NMR (二甲亞砜-d6) δ 1.03 (t，3H，CH3)，2.42, 2.44 (2xs，6H，2xCH3)，2.56 (q，2H，CH2)，2.70，3.30 (2xt，4H， 2xCH2)，6.85, 6.92, 7.58, 7.72, 7.76 (5xm，5H，芳族乙晞基及 CONH)，10·90 (br s，1H，CONH)，13.65 (bw s，1H，吡咯 NH)。 MS m/z 369 [M-l] 〇 實例1 9 5 5-[5-氟-2-_某-111二氣-泛<哚-(32)-篡曱某1-2,4-二甲某-lH-p比哈-3-勒齡-二乙胺基-N-酮某胺某-乙基）-醯胺 方法A : 5-[5-氟-2-酮基-1,2-二氫-亞啕哚-(3Z)-基甲基卜2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2-二乙胺基-乙基）-醯胺（598毫克）及二氯 ____- 186 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7
⑽，况芳族），7.70 (s，1H，芳族)，6%⑽iH，芳族)，6 δ4 (m，1H，芳族)，3.63 (m, 2H，CH2)，3.29 (m，2H，CH2)，3.14 (m 4H, 2xCH2), 2.47 (s, 1H, CHC3), 2.45 (s, 3H, CH3), 1.64 (t! 4H, 2xCH3)。MS m/z 415 [M-l]。 ’ 方法B : 甲燒(60毫升)於冰浴中，以3_氯過苯甲酸(336毫克)處理 ，並將混合物在室溫下攪拌一夜。溶劑旋轉蒸發，且殘留 物懸浮在一甲醇中（2〇毫升）。加入含有氫氧化鈉（240毫克） 之水（2 0愛=)’且混合物撥拌！小時。以吸空過滤收集沈 澱物，以5毫升水洗；條，在真空下乾燥可生成5_[5_氣_2·嗣 基-1,2-二氫-亞+果.(3Ζ)·基甲基]_2,4_二甲基_ih“比咯小幾 酸（2-二乙胺基-N·酮基胺基·乙基）·醯胺（51〇毫克，82% 產率）呈橘色固體。1H-NMR (二甲亞颯〇 s 13 72加，ih NH), 11.02 (br s, 1H, CONH), 9.81 (br s, 1H, CONH), 7.75 5_甲醯基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2-二乙胺基_乙基）· 醯胺（10克）懸浮在二氯甲虎（1 〇〇毫升），並在冰浴中冷卻。 在攪拌下加入3-氯-過氧苯甲酸（131克），在混合物加溫至 至m，再攪拌一夜。混合物旋轉至蒸發乾，並在梦膠管柱 上層析，以20%甲醇/二氯甲烷溶離。混合物產物之流份 ，並旋轉蒸發至乾，可生成曱醇基_2,4_二甲基」H_吡咯 羧酸（2 -二乙基·Ν -酮胺基-乙基）·醯胺（9克，830/。產率）。 5 -甲醯基-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸（2-二乙胺基酮 胺基-乙基）-醯胺9克），5-氟-1，3-二氫-啕哚-2.酮（（9克， 83%產率）及吡咯啶（（9克，83%產率（〇·ι克））在乙醇中 __ - 187 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐） 1230609 A7 __ _B7 _ 五、發明説明（185 ) (3 0毫升）迴流4小時。混合物在冰浴中冷卻，且沈;殿物吸 空過濾收集，再以乙醇洗滌。固體粒子在乙酸乙酯（3 0毫 升）中攪拌，以吸空過濾收集，以乙酸乙酯洗滌，再於真 2下乾燥，可生成5-[5-氟-2-酮基-1，2-二氫-亞吲嗓-(3Z)-基 甲基]-2,4-二曱基-1H-吡咯-3-羧酸（2-二乙胺基-N-酮基胺 基-乙基）-醯胺（10·3克，80%產率）呈橘色固體。iH-NMR (DMS〇-d6) δ 13.72 (br，1H，ΝΗ)，11·〇2 (br s，1H，CONH)， 9·81 (br s，1H，CONH)，7·75 (dd，1H，芳族)，7.70 (s，1H，芳族)， 6·93 (td，1H，芳族），6·84 (m，1H，芳族），3.63 (m，2H，CH2)， 3·29 (m，2H，CH2)，3.14 (m，4H，2xCH2)，2.47 (s，1H，CHC3)， 2·45 (s，3H，CH3)，1.64 (t，4H，2xCH3)。MS m/z 415 [M+l]。 實例1 9 0 ^12^1^酮基-1,2-二氤-亞4丨哚-(32)-基甲基1-2,4-二甲基-3 -卷酸「2 - Γ吡啶-1 -基乙某1 - gj胺 5-[5-氟-2-酮基-1,2-二氫-亞啕哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（120毫克，0.4毫莫耳）與EDC，HC1 (96毫 克’ 0.5¾莫耳）’無水i-技基-苯並三吐（68毫克，0.5¾莫 耳）及2-(2-胺基乙基吡啶）（購自Aldrich)於無水DMF (3毫升） 中’以室溫共震盪2-3天。反應混合物以1M NaHC03 (1.5 耄升）稀釋，再加8毫升水。以過滤收集沈殿之粗製產物， 以水洗，乾燥及結晶或層析純化，可生成5-[5-氟-2-酮基-1，2-二氫-亞吲哚_(3Ζ)·基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸 [2 -(吡咯-1 -基）_乙基]醯胺。 實例1 8 9 ____ - 188 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐） 1230609 A7 _____B7 五、發明説明（186 ) 5-『5-氣-2-酮基-1.2-二氣-藐峭哚-(32)-某甲某1-2,4-二甲基-1技二?比哈-3 -羚酸「2 - Oh啶-1 -某）乙基ί醯胺 步驟如先前實行，但5-[5-氟-2-酮基-1，2-二氫-亞吲哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸以5-[5-氯-2-酮基-1，2-二氫-亞吲噪-(3之）-基甲基]-2,4-二甲基-1^1-吡洛-3-羧酸 (127毫克），可生成5_[5-氯酮基-丨，2•二氫-亞⑷哚-(3Z)-基甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3 -幾酸[2 -(吡啶-1 -基）乙基] 醯胺。 實例1 9 2 5-[H2-酮基-1,2-二氡-亞沔丨哚-(3ZV某甲某 1H洛-3 - #酸「2 “吡啶-1 -甚）乙某1醯賒 ^ 依上實例190所述進行，但5_[5-氟-2-酮基-1,2-二氫-爻弓 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-iH-p比嘻-3-羧酸以臭-2^ 基-1，2-二氫-亞峭哚气3Ζ)·基甲基>2,4·二甲基-lH-毗咯-3 -及 酸（145毫克），可生成5-[5-溴·2-酮基·丨，2•二氫-爻㈣咬-(3Z) 基甲基]-2，4-二甲基-1 Η-吡咯· 3 _幾酸[2 -(吡啶-卜基）乙基] 醯胺。 實例1 9 1 5吖2:奥基-172-二氣-亞，弓卜吳-(3Ζ)_某甲基 洛-3二羧酸「2 -(吡啶-1 -基）乙某1醯脖 依上貫例1 9 0所述進行，但5-[5υ_酮基- ΐ，2-二虱-爻 哚-(3Ζ)-基甲基]-2,4-二甲基-1Η-吡咯-3-羧酸，以5-[2·鋼基$ 1，2-二氫-亞啕哚-(3Ζ)-基甲基]-2,4-二甲基-1Η〆比咯-3 —羧鉍 (113毫克）取代，可生成5-[2-酮基β1，2-二氫-亞4嵊-(3Ζ)-基
___ - 189 -
本紙張尺度適用中國國豕標準(CNS) Α4%格(21〇X 297公D 1230609 A7 B7 五、發明説明（187 ) 甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[2-(吡啶-1-基）乙基]醯 胺。 實例2 0 3 5-「5二氧基-2-酮基-1，2-二氮.-亞印哚-(32)-基甲某卜2.4-二甲 基-1 吡哈-3 -羧酸「2 -(吡啶-1 -基）乙某1醯脖 依上實例190所述進行，但5-[5-氟-2-酮基-1，2-二氫-亞啕 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸以5-[5-氰基-2-酮基-1，2-二氫-亞吲嗓-(32)-基甲基]-2,4-二甲基-1士毗洛-3-致酸（123毫克）替代，可生成5-[5-氰基-2-嗣基-1，2-二氫-亞 峭哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸[2-(吡啶-1-基）乙基]醯胺。 實例 142，187，187，188及204 依實例190，189，191，192及203所述進行，但2-(2-胺乙 基）吡啶以1-(2-胺乙基）吡咯啶取代，其購自Aldrich Chemical Company, Inc·可生成欲求化合物。 實例 1 4 3 - 1 4 7 依實例190，189，191，192及203所述進行，但2-(2-胺乙 基）吡啶替代1 -(2-胺基乙基）咪唑啉-2 -酮（以熱的碳酸二曱 酯加上雙（2 -胺乙基）胺（2當量）製備，在熔封的燒瓶中加 熱至 150 °C，3 0 分鐘，依循 Rohm & Haas Co.之 U. S. Pat 2613212 (1950)所述之步驟。粗製產物在砍石上純化，利用 氣仿-甲醉-氣水8 0 · 2 5 · 2之溶離劑混合物），可生成欲求 化合物。 實例 148-151 及 184 -190 -
本紙張尺度逋用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7
依上實例190，189，191，192及203所述進行，但2_(2_胺 乙基）吡淀替代4-(2-胺乙基）哌畊· 1 ·醋酸乙酯（如下製備： 哌畊-1-醋酸乙酯（11·22克）以碘乙腈（5.〇毫升）處理，並有 碳酸鉀（6·9克）於乙酸乙酯（260毫升）在0°c下之存在。碘 腈完全加完後（45分鐘）。反應混合物過濾，濾液再蒸發。 殘留物在硼化姑（製備自CoCh及氳硼化鈉）之存在下氯^ , 於室溫，50 psi下於乙醇中2天。過濾，蒸發及利用氯仿-甲 醇-氨（80 : 25 : 2)之溶離劑混合物層析純化，可生成欲求的 胺（3.306克），呈淺黃色油）可生成欲求之化合物。 實例 152-153 依實例190，189，191，192及203所述進行，但2-(2_胺乙 基）说啶以2-[(2-胺乙胺基）]乙腈（依下製備：碘乙腈（5〇毫 莫耳）於乙醇（80毫升）之溶液，加至〇。〇下乙二胺（15〇毫升） 於乙醇（60毫升）在0°C下之溶液中，歷3〇分鐘。在〇°c下再 繼續攪拌1小時’再於室溫下1 4小時，加入5 5毫莫耳碳酸 抑’再攪拌30分鐘，過濾，且濾液於室溫下濃縮。殘留物 在矽石上純化’利用氯仿-甲醇-氨水8〇 :丨5 : 1 5之溶離劑 系統’可生成2-[(2-胺乙胺基）]乙腈（3.550克），其可立即使 用]替代，可生成欲求化合物。 實例 154-158 依上實例190，189，191，192及203所述進行，但2-(2-胺 乙胺基）咐啶以1-(3-胺丙基）·氮呼_2 -酮（依1^巧八·：）·
Chem. Soc· Perkin Trans· 1，6，1999, 705-14，所述製備，除 了 DBU之水解在145C下進行，純淨地並有氫氧化經之存 _·191 - 本紙張尺度適財8 8家標準(CNS) A4規格(咖χ 297公爱)
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1230609 A7 B7 五、發明説明（189 ) 在（1小時，5毫升的D B U，2毫升水，420毫克氫氧化經_ 水合物）。粗製產物在矽石上純化，利用氯仿-甲醇·氨水8〇 :40 : 4之溶離劑混合物，可生成1-(3-胺丙基）氮呼明 (4.973克，87%產率）），可生成欲求的化合物。 實例 133-135，159及200 依上實例190，189，191，192及203所述進行，但2-(2_胺 乙基）吡啶以N -乙醯基乙二胺替代（其製備是將乙酸乙酷及 乙二胺（1.5當量）之混合物加熱至160°C，1小時，在密封之 容器内。經真空蒸餾可生成5 6 °/〇產率之欲求產物。N _乙酿 基乙二胺也可購自Aldrich)，可生欲求的化合物。 實例 146-140 依實例190，189，191，192及203所述進行，但2_(2•胺乙 胺基）p比症以1-(3-胺丙基）-四氫密咬替代（其製備方 式和1-(3-胺丙基）-氮呼-2-酮相同，依Kraft Aj J Chem Soc. Perkin Trans· 1，6，1999，705-14之步驟，簡 士之， 1，3,4,6,7,8-氫-2H-嘧啶並[l，2-a]嘧啶（4.939克），氫氧化里水 合物（918毫克）及2毫升水，在無溶劑下於密封容器内加熱 至145 C歷1小時。粗製產物在珍石上純化，利用氯仿·甲 醇-氨水80 : 40 : 4可生成純的胺（5.265克，94%產率）。 實例 141，160-162 及 185 依實例190，189，191，192及203所述進行，但是2-(2•胺 乙胺基）吡啶則以1-(2-胺乙基）-哌畊-2-酮替代（其製備方 法如下：純淨的第三-丁基二苯基矽烷基氣（25毫升，97 7 毫莫耳）逐滴加至DBU (19.5毫升，130毫莫耳）及雙胺乙 -192 - 本纸張尺度適用中國國家搮準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609
基）胺（4·32毫升，40毫莫耳）於無水二甲基乙醯胺（8〇毫升） 之溶液中，在室溫下，並在水浴中冷卻，於5分鐘之内。 混合物攪拌5小時。一旦冷卻至室溫，加入淨的溴醋酸乙 酿（6·70毫升，60亳莫耳反應攪拌25分鐘，再於高真空 下洛發。殘留物溶於甲醇（2〇〇毫升），加入khC03 (10克）及 KF (12克，200毫莫耳），且混合物在6〇°C下攪拌5小時。加 入1 〇克的NazCO3，攪拌1 〇分鐘，冷卻再過濾。濾液蒸發 。殘留物以己烷萃取（2次各2 5 0毫升）。己烷-不溶性物質 溶於乙醇中（6 0毫升），過濾及蒸發。殘留物在梦石管柱上 純化，以氯仿-甲醇-氨水80 : 40 : 4可生成純的胺（4.245克 ，74%產率）可生成欲求化合物。 實例 163-167 依實例190，189，191，192及203所述進行，但2-(2-胺乙胺 基）吡啶以3-[(2-胺乙基）胺基]丙腈替代（其製備自乙二胺 (150毫莫耳）及丙烯腈（50毫莫耳）於THF，在室溫下，如 Israel, M. et al: J. Med Chem· 7，1964, 710-16所述，可生成 欲求之胺（4.294克）可生成欲求的化合物。 實例1 6 8 5-(5 -氟-2-酮基-1,2-二亞Η丨嗓·基甲基）-2,4-二曱某-1H-外匕 咯-3 -燊酸甲基哌畊-1-基乙基1-醯胺 對5-[5-氟-2-酮基-1，2-二氫-亞峭哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲 基-1H-吡咯-3-羧酸（9 0毫克），DMF (0.8毫升)及TEA (0.084 毫升）在2 0毫升反應管中之攪拌的黃色混濁混合物，加入 BOP試劑（199毫克）。混合物在5分鐘内變得澄清。2-(4-甲 -193 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609
於、、、a、基）乙胺1 (51毫克）加至澄清混合物中。生成之 =夜，溫下授拌_夜。黃色固體產物可自反應系統中沈 你& $層層析(10 %甲醇於二氯甲烷)顯示，所有的起始 =轉化成產物°固體以吸空過遽分離，以乙醇（1毫升） 、鱗’入固體以吸空過濾分離，以乙醇㈠毫升）洗一次。 固缸在一乙醚（2耄升）中音波震盪分鐘，再以吸空過濾 =集。經真空下乾燥，可得5-(5-氟-2-酮基-丨，2-二氫亞… 木3基甲基）-2,4-二甲基比p各-3 -致酸（4 ·甲基喊畊_ 1 _ 基-乙基）-酿胺（79毫克，62%產率）。 W NMR (DMSO-d6) δ 2.13 (s，3H，CH3)，2.40, 2.42 (2xs，6H， 2x CH3), 2.41 (m, 2H, CH2), 2.47 (m, 8H, 4xCH2), 3.30 (m； 2H, CH2), 6.82 (dd, J=4.5, 8.7 Hz, 1H), 6.91 (td, 2J=2.4, 3J=8.8 Hz, 1H), 7.43 (t, J=5.6 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.75 (dd, J=2.8, 9.6 Hz, 1H)(芳族及乙烯基），10·88 (s，1H，CONH)，13.67 (s，1H, NH)。LC-MS (m/z) 424.4 (M-l)。 實例1 6 9 — * L(5-氣-2-酮基-1,2-二敷-亞 < 唤-某甲某）-2.4-二甲基-1H-毗 唼-3-羧酸（4-甲基哌畊-1-某-乙某）-醯胺 依循實例168，但5-[5-氟-2-酮基-1,2-二氫-亞啕哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸以5-[5-氯-2-酮基-i，2-二氩-亞啕哚-(32)-基甲基]-2,4-二甲基-111-吡咯-3-羧酸（9 5 毫克，〇·3毫莫耳）替代，可生成5-(5-氯-2·酮基-1,2-二氩-亞峭哚-3-基曱基）-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（4 -甲基哌 畊-1-基-乙基）-醯胺（76毫克，58%)。 -194 -
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本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210 X 297公#) 1230609 A7 B7 五、發明説明（192 ) lH NMR (DMSO-d6) δ 2.13 (s5 3H, CH3), 2.41, 2.42 (2xs, 6H, 2x CH3), 2.42 (m, 2H, CH2), 2.48 (m, 8H, 4xCH2), 3.30 (m, 2H, CH2), 6.84 (dd, J=8.0 Hz, 1H), 7.11 (dd, J=2.0, 8.0 Hz, 1H), 7.44 (t, J=5.6 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.97 (d, J=2.0 Hz, 1H)(芳族及乙烯基），10.98 (s, 1H，CONH)，13.62 (s，1H， NH)。LC-MS (m/z) 440.2 (M-l)。 實例1.7 〇 5-(5-溴-2-酮基-1,2-二氣-亞钊哚-基曱基）-2,4-二曱基-1H-吡 咯-3 -羧酸（4-曱基哌畊-1 -基乙基）-醯胺 依循實例168，但5-(5-氯-2-酮基-1，2-二氫-亞吲哚-3-基 甲基）-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸以5-(5-溴-2-酮基-1，2-二 氫-亞叫丨哚-3-基曱基）-2,4-二曱基-1H-吡咯-3-羧酸替代， 可生成5-(5->臭-2-嗣基-1，2-二氣-亞嗓-3-基甲基）-2,4 -二 甲基-1士吡咯-3-羧酸（4-甲基哌畊-1-基-乙基）-醯胺（3 9 毫克，54%)，來自SU01 1670 (54毫克，0·15毫莫耳）。 lH NMR (DMSO-d6) δ 2.14 (s, 3Η, CH3), 2.41, 2.42 (2xs, 6H, 2x CH3)，2·42 (m，2H，CH2)，2·48 (m，8H，4xCH2)，3·31 (m， 2H，CH2)，6·80 (dd，J=8.0 Hz，1H)，7.23 (dd，J=2.0，8.0 Hz， 1H)，7.44 (t，J=5.6 Hz，1H)，7.76 (s，1H)，8.09 (d，J=2.0 Hz， 1H)(芳族及乙烯基），10.99 (s，1H，CONH)，13.61 (s，1H，NH)。 LC-MS (m/z) 486.6 (M)。 實例1 7 2 5 - (2 - _ 基一1，2 -二 1 -亞 口亏 I 口朵一3 -基甲基）一2，4 -二甲基 _ 1H _ 口比 口各 _ 3 _致酸（4 -甲基喊口井-1-基乙基）_酿胺 -195 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（193 ) 依循實例168，但5-(5-氟-2-酮基·ι，2-二氫·亞⑷哚-3-基 甲基）-2,4-二甲基-1H-吡咯-3 -羧酸SU014900以5-(2 -酮基-1，2-二氫-亞啕哚-3-基甲基）-2,4-二曱基-11>1-吡咯-3-羧酸替 代，可生成5-(2-酮基-1，2-二氫-亞啕哚-3-基甲基）-2,4-二 甲基-1H-吡洛-3 -竣酸（4 -甲基喊畊· 1 ·基-乙基）·醯胺（13 6 毫克，84%)(112.8毫克，0.4毫莫耳）。 ^ NMR (DMSO-d6) δ 2.13 (s, 3H, CH3)5 2.39, 2.42 (2xs, 6H, 2x CH3), 2.42 (m, 2H, CH2), 2.48 (m, 8H, 4xCH2), 3.30 (m, 2H, CH2)，6.86 (d，J=8.0 Hz，1H)，6.96 (t，J=7.4 Hz, 1H)，7.10 (t，J=7.8 Hz，1H)，7·41 (t，J=5.4 Hz，1H)，7.62 (s，1H)，7·76 (d，J=7.6 Hz，1H)(芳族及乙晞基），10·88 (s，1H，CONH)，13·61 (s，1H，NH)。LC-MS (m/z) 406.6 (M-l)。 實例1 7 1 5-『2-酮某-1·2-二氣-亞⑷哚-(3Z)-某甲某1-2,4-二甲某-111-吡 咯-3-羧酸「2-Π.5-二甲基哌畊-1-基）乙某卜醯賒 對5-[2-酮基-1,2-二氫-亞啕哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（112·8毫克，0.4毫莫耳），DMF (0.5毫升）及 三乙胺（0.111毫升）在20毫升反應試管中之經攪拌的黃色混 澤混合物，加入Β Ο Ρ試劑（265毫克）。混合物在5分鐘内會 變得澄清。在此澄清混合物内加入2-(2,6-二甲基哌畊-2 -基） 乙胺（68.6 毫克）（
Tudanca, R. Mosquera, L. Labeaga, A. Innerarity, A. Orjales, J. Med. Chem.. 1999, 42, 2870-2880)。生成之溶液在室溫下 攪拌一夜。薄層層（10%甲醇於二氯甲烷）顯示，所有的起 -196 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（194 ) 啟物已轉化成產物。反應混合物蒸發至乾，再以快速層_ 純化（(：112(：12/€：113〇11=20/1-15/1)再行再結晶作用生成5_[2-網 基-1，2-二氫-亞噪-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基]|^_11比洛_3二羧 酸〇(3,5-二甲基哌畊-1-基）乙基]醯胺（83亳克，50%產 率” m NMR (DMSO-d6) δ 1.15，1.16 (2xs，6Η，2xCH3)，1.95 (t J=11.6 Hz，2H，CH2)，2.41，2.47 (2xs，6H，2xCH3)，2.50 (m， 2H，CH2)，3.03 (d，J=10 Hz，2H)，3·19 (m，2H)，3·3〇 (m，3H， CH2)，6.86 (d，J=8.0 Hz，1H)，6.97 (t，J=7.2 Hz，1H)，7.11 (t， J=7.8 Hz, 1H), 7.48 (t, J=5.6 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.75 (d, J=7.6 Hz，1H)(芳族及乙烯基），10.88 (s，1H，CONH)，13.62 (s， 1H，NH)。LC-MS (m/z) 422.2 (M+l) 〇 實例1 7 3 5-「5-氣-2·酮基-1，2-二氣-亞旧哚-(3Z)-某曱某^2.4-二甲基-lH-吡咯-3-羧酸f2-(3,5-二甲某哌畊-l-某）乙某l醯胺 依循實例1 6 8之步驟，可得欲求化合物（6 0毫克，0.2毫 莫耳）。 iH NMR (DMSO-d6) δ 0.891，0.907 (2xs，6H，2xCH3)，1.49 (t， J=10,4 Hz，2H)，2:401，2.42 (2xs，6H，2x CH3)，2·41 (m，2H， CH2), 2.74 (m, 4H), 3.30 (m, 2H), 6.82 (dd, J=4.5, 8.7 Hz, 1H), 6.90 (td, 2J=2.4, Hz, 1H), 7.42 (t, J=5.6 Hz, 1H), 7.70 (s，1H)，7.74 (dd，J=4.6, 8·4 Hz，1H)，（芳族及乙締基）， 10.88 (s，1H，CONH)，13.65 (s，1H; NH)。LC-MS (m/z) 438.4 (M-l)〇 ___ - 197 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609 A7 ___B7___ 五、發明説明（195 ) 實例1 7 4 5-f5 -氣-2-酉同基-1,2-二氣-^^弓1口朵-(32)-基甲基1-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-務酸「2-Π.5-二甲某哌畊-1-基）乙基"I醯胺 依循實例171之步驟，可自5-[5-氯-2-酮基-1，2-二氫-亞啕 哚-(3Z)-基甲基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（63毫克，0.2 毫莫耳）得欲求化合物（31.2毫克，34%)。 NMR (DMSO-d6) δ 1.15, 1.16 (2xs, 6H, 2xCH3), 1.95 (t, J=11.6 Hz, 2H, CH2)5 2.40, 2.42 (2xs, 6H, 2xCH3), 2.50 (m, 2H5 CH2), 3.03 (d, J=11.2 Hz, 2H), 3.19 (m, 2H), 3.30 (m, 2H, CH2)3 6.85 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.11 (dd, J=2.0, 8.0 Hz, 1H), 7.52 (t，J=5.6 Hz，1H), 7·76 (s，1H)，7.97 (d，J=2.0 Hz，1H)(芳 族及乙烯基），10.99 (s，1H，CONH)，13.63 (s，1H，NH)。LC-MS (m/z) 456.2 (M+l) 〇 實例1 7 5 _5-[5-溴-2-酮某-1.2-二乳-葰⑷哚-(3ZV基甲某1·2,4-二甲某-1Η-吡咯-3-勒酸C2-(3,5-二甲某哌畊-1-基）乙基1醯胺 依循實例171之步驟，可自5-[5-溴-2-酮基-1，2-二氫-亞巧 哚-(3Z)-基曱基]-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（74毫克，0.2 毫莫耳）得欲求化合物（4 0毫克，40%)。 lH NMR (DMSO-d6) δ 1.15, 1.16 (2xs, 6H, 2xCH3), 1.95 (t, J=11.6 Hz, 2H, CH2)； 2.40, 2.42 (2xs, 6H, 2xCH3), 2.50 (m, 2H, CH2), 3.03 (d, J-10.4 Hz, 2H), 3.19 (m, 2H), 3.30 (m, 2H, CH2), 6.81 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.24 (dd, J=2.0, 8.4 Hz, 1H), 7.51 (t，J=5.6 Hz, 1H)，7.76 (s，1H)，8·10 (d, J=2.0 Hz, 1H)(芳 __- 198 - 本纸浪尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐)
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1230609 A7 B7 五、發明説明（196 )
族及乙晞基），10.99 (s, 1H，CONH)，13.62 (s，1H，NH)。LC-MS (m/z) 498.4 (M+1)。 實例2 0 5 (3Z)-3-|XL_5-一甲·基一-lH-p比哈-2 -幕）-次甲華甲基 口瓜g井基）甲基1-1，3 -二氫-2Η -Μ卜朵-2.西同 Ν-甲基哌畊（10克，1〇〇毫莫耳）加至甲水溶液（1〇克 38%落液’ 100毫莫耳）及3-(3,5-二甲基-1Η-吡咯-2-基次曱 基）-1、，3-二氫-啕哚-2-酮（2·3δ克，1〇毫莫耳）於甲醇（1〇〇毫 升）之攪拌溶液中。溶液在6 0 °C下加熱1小時，濃縮至低量 ，濾出沈澱物，以曱醇洗滌，乾燥後生成2·38克的標題化 合物，mp 160-164°C。HPLC Rt 4.72分鐘。W NMR (CDC13) δ 2·26 (s，3Η)，2·33 (s，3Η)，2,38 (s 3Η)，2·43 (br s，4Η)，2·'70 (br s，4H)，4.59 (s，2H)，5·96 (d，1H)，7.02-7.08 (，2H)，7.15 (dd，1H)，7.38 (s，1H)，7.48 (dd，1H)及 13.0 (br s，1H)。分析估 計值 C21H26N40:’C，71·97; H，7·48; N，15.99。實測值：C 71.75; Η，7·46; Ν，15·87。 (3Ζ)-3-[(3,5-二甲基-1Η-吡咯-2-基）-次甲基]-ΐ-[ι·(4-甲 基哌畊基）甲基]-1,3-二氫-2Η-吲哚-2-酮可轉化成二鹽酸鹽。 實例2 0 6 舍成.（3Ζ)·3-「(3,5·一 甲某· 1 哈-2 -基）-次甲基 V1-Π -叶b 吟 淀基甲基）-1，3-二遗丨嗓-3-嗣 叶匕哈咬（450毫克’ 6.3毫莫耳）加至甲醛水溶液（500毫克之 38%溶液，6.0毫莫耳）及3-(3,5-二甲基-1H-吡咯-2·基次甲 基）-1，3-二氫-吲哚-2·酮（9〇〇毫克，3.8毫莫耳）於甲醇（50 ___- 199 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格bioX 297公I)
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k 1230609 A7 _____ B7 五、發明説明（197 ~) " _ 毫升）之攪拌溶中。1 5分鐘後，溶液冷卻至0 °C，再濾出沈 澱物，以水洗，乾燥後可生成丨.08克標題化合物>1111)129- 132°C，HPLC Rt 4.87 分鐘。iH NMR [(CD3)2S〇] δ1·65 (m， 4H)，2·32 (s，3H)，2·34 (s，3H)，2.62 (m，4H)，4·72 (s，2H)， 6.07 (d，1H)，7.00 (m，1H)，7.15 (m，2H)，7.61 (s，1H)，7·76 (d，2H)及 13.1 (br s，1H)。分析估計值 C2〇H23N30: C，74.74; H， 7·21; N，13.07。實測值：c，74.61; H，7.25; N，13.03。 生物學實例 式（Π之蛋白質激醃抑制逾丨： 以下分析法可用來決定式（I)化合物之活性水平，及在 一個以上蛋白質激酶（下文寫作p K s )上之作用。類似之分 析可針對任何PK，利用技藝中熟知之技術，依相同方式 予以設計。 A ·分析步驟 此中所述之分析法，有許多係在ELISA (酵素-鏈結之免 疫吸附三明治式分析法）模式進行（VoUer，et al.，198〇, "Enzyme-Linked Immunosorbent Assay," Manual of Clinical Immunology, 2d ed., Rose and Friedman, Am. Soc. Of
Microbiology，Washington，D. C·，pp. 359-371)。一般步驟如 下：式（I)化合物引入可表現受試激酶之細胞内，其或自 然地或重組地表現，經一段選定時間後，若受試激酶是一 種受體，則加入已知可活化該受體之配體。將細胞溶解， 且溶胞產物轉移至ELISA盤之孔洞内，其中已先塗佈有可 確認酵素磷醯化反應受質之特異抗體。洗去非受質之細胞 一 -200 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（198 ) 溶解組份，並以可特異地確認磷酸酪胺酸之抗體，偵測出 受質上磷醯化作用之量，與未與受試化合物接觸之對照細 胞比較之。 以下示出針對特異PKs，進行ELISA實驗之目前較佳策 略。然而，採用這些策略以決定化合物拮抗其他受體酪胺 酸激酶（RTKs)之活性，而針對胞質酪胺酸激酶（CTKs)及絲 胺酸蘇胺酸酪胺酸激酶（STKs)均在精藝者技藝範圍之内。 此中所述之其他分析是偵測因反映受試激酶活化作用而製 成之DN A含量，其為增殖反應之一般測法。此分析之一般 步驟如下：化合物引入可表現激酶之細胞中，或天然地或 重組地表現，在一段選定時間後，若受試的激酶是受體， 則加入可活化該受體之配體。在至少培育一夜後，加入 DNA標記試劑，如5-溴去氧尿嘧啶核菩（BrdU)或H3-胸甞 。以抗-BrdU抗體或偵測放射活性以偵測經標記D N A之量 ，並與未和受試化合物接觸之對照細胞比較。 GST-FLK-1生物分析法 此分析法分析GST-Flkl在聚（glu，tyr)肽上之酪胺酸激酶 活性。 材料及試劑： 1. Corning 96-孔洞 ELISA盤（Corning Catalog No· 5805-96)。 、 2·聚（glu，tyr) 4 : ϊ 冷來乾燥物（Sigma Catalog # Ρ0275)。 3·製備聚（giu，tyr)(pEY)塗佈之分析盤：塗佈2微克/孔 洞之聚(glu，ty〇(pEY)於100微升PBS中，保持在室 _ - 201 - 本紙張尺度適用中國國家棣準(CNS) A4規格(210X297公釐）
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1230609 A7 B7 五、發明説明（1") 溫下2小時，或在4 °C下一夜。覆蓋盤孔洞以避免蒸 發作用。 4. PBS緩衝溶液：於1升，混合0.2克KH2P〇4，1.15克 Na2HP04，0.2 克 KC1 及 8 克NaCl 於約 9 00 毫升 dH20 中。 當試劑均溶解時，p Η值以H C 1調至pH 7.2。使總體 積以dH20達到1升。 5. PBST緩衝溶液··在1升PBS緩衝溶液中，加入1.0毫 升 Tween-20 〇 6. TBB-阻斷緩衝溶液：於1升，混合1.21克TRIS，8.77 克NaCl，1毫升TWEEN-20於約9 0 0毫升dH20中。以 HC1調整pH至7.2。加入1 0克BSA，攪拌至溶解。以 dH20使總體積達到1升。過濾以移去微粒物質。 7. 1% BSA於PBS :製成lx操作溶液，加10克BSA以達 約9 9 0毫升P B S緩衝溶液，攪拌以溶解。以P B S緩 衝溶液使總體積達到1升，過濾以移去微粒物質。 8 . 50 mM Hepes pH 7.5 〇 9. GST-Flklcd純化自sf9重組體杆病毒轉形成用（SUGEN， Inc·) 〇 10. 4% DMSO於dH20。 11· 10 mM ATP於dH20。 12. 40 mM MnCh。 13·激酶稀釋緩衝溶液（KDB) ·•混合10毫升Hepes (pH 7·5) ，1毫升5Μ NaCl，40微升100 mM原釩酸鈉及0.4毫升 5% BSA於dH20加上 88.56毫升 dH20。 -202 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐)
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1230609 A7 B7 五、發明説明（200 ) 14. NUNC 96-孔洞 V 型底聚丙晞盤，Applied Scientific Catalog # AS-72092。 15. 丑0丁八：混合14.12克乙底酸（三0丁八）至約70毫升〇!私〇 。加10 N NaOH直到EDTA溶解為止。調pH值至8.0。 以dH20調總體積至100毫升。 16. 1G抗體稀釋緩衝溶液：混合10毫升5% BSA於PBS緩 衝溶液，加上89.5毫升丁33丁。 17. 抗-磷酸酪胺酸單株抗體共軛至辣根過氧化酶（PY99 HRP，Santa Cruz Biotech) 〇 18· 2·2’-次偶氮基雙（3 -乙基苯並嘧唑啉-6-磺酸（ABTS， Moss，Cat· No· ABST) 0 19· 10% SDS。 步驟： 1. Corning 96-孔洞之ELISA盤以2微克polyEY肽在無菌 P B S中塗佈，如材料及試劑中步驟3所述。 2. 由倒轉培養盤將未結合之液體自孔洞中移去。以 TBST洗一次。盤輕拍在衛生紙上以移去過量液體。 3 · 在各孔洞中加1 00微升1% BSA於PBS。在震盤下培育 1小時，於室溫下。 4.重覆步驟2。 5· 以50 mM HEPES (pH 7.5)(150微升/孔洞）浸泡孔洞。 6.以dH20/4% DMSO稀釋受試化合物，至欲求最終分析 濃度之4倍，在96-孔洞聚丙烯盤上。 7 ·加2 5微升經稀釋之受試化合物至ELISA盤。在對照 -203 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐） 裝 訂
1230609 A7 B7 _____ 五、發明説明（2〇1 ) 孔洞中，加入2 5微升dH2〇/4%DMSO。 8.在各孔洞中加入2 5微升4〇1111^]^11(：12，並加有4\八丁？ (2 μΜ)。 9·在負面對照孔洞中加入25微升0·5 M EDTA。 10·以KDB稀釋GST-Flkl至0.005微克（5毫微克）/孔洞。 11. 在各孔洞中加入5 0微升稀釋的酵素。 12. 在室溫下震盪培育15分鐘。 13. 加5 0微升250 mM EDTA (pH 8.0)以停止反應。 14. 以TBST洗3 X，並將盤倒扣在衛生紙上以移去過量的 液體。 15. 在各孔洞中加100微升抗-磷酸酪胺酸HRP共軛物， 以抗體稀釋緩衝溶液1 ·· 5,000稀釋。在室溫下以震盪 培育9 0分鐘。 16. 如步驟14般洗滌。 17·在各孔洞中加入100微升室溫的ABTS。 18·在震盪下培育10-15分鐘。移去任何泡沫。 19.在各孔洞中加入20微升10°/〇 SDS以停止反應。 20·在Dynatech MR7000 ELISA讀取機上讀出結果，測試 濾膜在410 nM，參考濾膜在630 nM。 PYK2生物分析法 此分析法可用來偵測HA表位-加標幟之全長pyk2 (FL.pyk2-HA)之試管内激酶活性，於ELISA分析中。 材料及試劑 1. Corning 96-孔洞 Elisa盤。 ___ - 204 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（202 ) 2. 12CA5 單株抗-HA 抗體（SUGEN，Inc.) 3. PBS (Dulbecco’s 罐酸鹽-緩衝之食鹽水（Gibco Catalog # 450-1300EB) 4. TBST緩衝溶液··於1升，混合8.766克NaCl，6.057克 ，丁1113及1毫升0.1%丁1^〇11乂-100於約 9 00 毫升(11120。 調整pH值至7.2，使體積達到1升。 5. 阻斷緩衝溶液：於1升，混合100克10% BSA，12.1克 100 mM TRIS，58.44克，1M NaCl及 10毫升 1% TWEEN-20 ° 6. FL.pyk2-HA來自 s f 9 細胞溶胞產物（SUGEN，Inc·)。 7. 4% DMSO於MilliQue H20 中。 8. 10 mM ATP於dH20。 9. 1M MnCl2。 10· 1M MgCl2 0 , 11. 1M二硫異赫絲藻醇（DTT)。 12. 10X激酶緩衝溶液磷醯化作用：混合5.0毫升1M Hepes (pH 7.5)，0·2毫升 1M MnCl2，1.0亳升 1M MgCl2 ，1.0毫升10% Triton X-100於2.8毫升dH20中。在使用 前，才加入0.1毫升1M DTT。 13. NUNC 96-孔洞V型底聚丙烯盤。 14. 500 mM EDTA於dH20 中。 15. 抗體釋稀釋緩衝溶液：於100毫升，1毫升5% BSA/PBS及1 毫升 10% Tween-20於88 毫升 TBS。 16· HRP-共軛的抗-Ptyr PY99)，Santa Cruz Biotech Cat· -205 - 本紙伕尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（203 ) No. SC-7020。 17. ABTS，Moss，Cat· No. ABST-2000。 18· 10% SDS 〇 步驟： 1. 以0.5微克每孔洞12CA5抗-HA抗體於1 00微升PB S塗 佈Corning 96孔洞ELISA盤。在4°C下貯存一夜。 2. 倒轉培養盤自孔洞中移去未結合之Η A抗體。以dH20 洗培養盤。盤輕拍在衛生紙上以移去過量液體。 3. 在各孔洞中加入1 5 0微升阻斷緩衝溶液。在震盪下培 育，於室溫下歷30分鐘。 4. 以TBS-T洗滌培養盤4x。 5. 溶胞產物稀釋在PBS中（1.5微克溶胞產物/100微升 PBS)。 6. 在各孔洞中加入1 0 0微升稀的溶胞產物。在室溫下震 盪1小時。 7. 如步驟4般洗滌。 8·加5 0微升2X激酶緩衝溶液至含有經捕獲之pyk2-HA 之ELISA盤。 9·加25微升400 μΜ受試化合物於4% DMSO至各孔洞。 在對照組孔洞中只使用4% DMSO。 10.在負對照孔洞中加入2 5微升0.5 M EDTA。 11·在所有孔洞中加入25微升20 μΜ ΑΤΡ。在震盪下培育10 分鐘。 12.加25微升500 mM EDTA (pH 8.0)至所有孔洞以中止 -206 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐）
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k 1230609 A7 _B7__ 五、發明説明（204 ) 反應。 13. 如步驟4般洗〉條。 14. 加100微升HRP共軛之抗-Ptyi*稀釋1 ·· 6000於抗體稀 釋緩衝溶液。在室溫下以震盪培育1小時。 15. 以 TBST 洗盤 3X，以 PBS 洗 IX。 16. 在各孔洞中加入1 〇〇微升ABST。 17. 若必要時，20微升10% SDS以停止展開反應。 18. 在ELISA讀取機上讀出結果，受試濾膜在410 nM且參 考濾膜在630 nM。 FGFR1生物分析 此分析法可於ELISA分析中，用來偵測FGF1-R之試管内 激酶活性。 材料及試劑： 1 · Costar 96-孔洞 Elisa盤（Corning Catalog # 3369)。 2. 聚（Glu-Ty〇(Sigma Catalog # P0275)。 3. PBS (Gibco Catalog # 450-1300EB)。 4· 50 mM Hepes緩衝溶液。 5. 阻斷緩衝溶液（5% BSA/PBS)。 6. 經純化的 GST-FGFR1 (SUGEN，Inc·) 7. 激酶稀釋緩衝溶液。 混合 5 00 微升 1M Hepes (GIBCO)，20 微升5% BSA/PBS ，10微升100 mM原釩酸鈉，及50微升5M NaCl。
8. 10 mM ATP 9· ATP/MnCl2磷醯化作用混合物：混合20微升ATP， __ - 207 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（2〇5 ) 400微升 1M MnCl2及 9.56毫升 dH20。 10. NUNC 96-孔洞 V 底聚丙歸τ 盤（Applied Scientific Catalog # AS-72092) ° 11· 0·5 M EDTA 0 12. 0.05% TBST，加500微升丁WEEN至 1 升TBS。 13. 兔子多株抗-磷酸酪胺酸血清（SUGEN，Inc.)。 14. 山羊抗-兔子IgG過氧化酶共輛物（Biosource，Catalog # ALI0404)。 15. ABTS溶液。 16. ABTS/H202溶液。 步驟： 1. 以每孔洞1微克聚（Gly，Tyr)於100微升PBS塗佈Costar 96孔洞之ELISA盤，在4°C下貯存一夜。 2. 以P B S洗塗佈盤一次。 3·在各孔洞加入150微升5% BSA/PBS阻斷緩衝溶液。 在震盪下於室溫培育1小時。 4. 以PBS洗盤2x，再以50 mM Hepes洗一次。盤在衛生 紙上輕拍以移去過量之液體及氣泡。 5. 在盤中加入25微升0.4 mM受試化合物於4% DMSO， 或單獨的4% DMS0 (對照組）。 6. 緩稀釋之純化的GST-FGFR1於激酶稀釋緩衝溶（5毫 微克激酶/ 5 0微升K D B /孔洞）。 7·在各孔洞加入5 0微升經稀釋之激酶。 8.開始激酶反應，係加入2 5微升/孔洞新鮮製備之 _____- 208 · 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（2〇6 ) ATP/Mn++ (0.4 毫升 1M MnCl2，40微升 10 mM ATP， 9.56毫升(IH2O)。 9. 此為快速激酶反應，需以25微升之0.5M EDTA停止 ，方式類似A T P之加入。 10. 以新鮮的TBST洗盤4x。 11. 組成抗體稀釋緩衝溶液：每50毫升： 混合5毫升5% BSA，250微升的5%乳汁及50微升100 mM，釩酸鈉，以0.05% TBST使達終體積。 12. 每孔洞加1 00微升抗-磷酸酪胺酸（1 : 10000稀釋於 ADB中），在室溫下震盪培育1小時。 13. 如步驟10般洗滌。 14. 每孔洞加1 〇〇微升的Biosource山羊抗-兔子IgG過氧 化酶共軛物（1 : 6000稀釋於ADB)。在室溫下震盪培育 1小時。 15·如步驟1 〇般洗滌，再以P B S移去過量的氣泡及過量 的 TWEEN 〇 16.在各孔洞中加入1〇〇微升ABTS/H202溶液。 17·在震盪下培育10-20分鐘。移去任何的氣泡。 18.在Dynatech MR7000 elisa讀取機上讀出分析結果：測 試濾膜在410 nM，參考濾膜在630 nM。 EGFR生物分析 此分析可於ELISA分析中用於試管内測出FGF1-R之激酶 活性。 材料及試都丨: _____ - 209 - 本紙張尺度適用中國囷家標竿(CNS) A4規格(210X297公釐) 裝 訂
1230609 A7 _B7__ 五、發明説明（2〇7 ) 1· Corning 96-孔洞 Elisa盤。 2. SUM01 單株抗-EGFR 抗體（SUGEN，Inc·)。
3. PBS 4. TBST緩衝溶液 5. 阻斷緩衝溶液：於1 00毫升，混合5.0克Carnation即 溶無脂牛乳®，加上1 〇 〇毫升PBS。 6. A43 1 細胞溶胞產物（SUGEN，Inc.)。 7. TBS緩衝溶液： 8. TBS + 10%DMSO:於1升，混合1·514克TRIS，2.192克 NaCl及25毫升DMSO ;以dH20使總體積達到1升。 9. ATP (腺甞-5’-三磷酸，來自馬肌肉，Sigma Cat. No· A-5394)，1.0 mM溶液於dH20。此試劑在使用前應立 即組成，並保存在冰上。 10· 1.0 mM MnCh 0 11. ATP/MnCl2磷醯化作用混合物··為製成1 0毫升，混合 3 00 微升的1111?^八11)，500微升％11(：12及9.2毫升(11120, 使用前才製備，保持在冰上。 12· NUNC 96-孔洞V底聚丙晞盤。 13· EDTA 〇 14.兔子多株抗-磷酸酪胺酸血清（SUGEN，Inc.)。 15·山羊抗-兔子IgG過氧化酶共輛物（Bio source Cat. No. ALI0404). 16. ABTS 〇 17· 30%過氧化氫。 -210 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐) 裝 訂
1230609 A7 _ B7_ 五、發明説明（2〇8 ) 18· ABTS/H202 〇 19. 0.2 M HC1。 步驟： 1·以〇·5微克SUM01於100微升PBS每孔洞塗佈Corning 96孔洞ELISA盤，貯於4 °C下一夜。 2·倒轉盤以移去液體而移去孔洞中未結合之SUM01。 以dHzO洗1 X。在衛生紙上輕拍以移去過量的液體。 3·在各孔洞中加入1 5 〇微升阻斷緩衝溶液。震盪培育 3 0分鐘，於室溫下。 4·以去離子水洗盤3 X，再以TBST洗一次。在衛生紙上 輕拍盤以移去過量液體及氣泡。 5·溶胞產物稀釋在PBS中（7微克溶胞產物/1〇〇微升 PBS)。 6 ·在各孔洞中加入1 〇 〇微升稀釋之溶胞產物。在室溫下 震盡1小時。 7·如上4般洗滌。 8.加120微升TBS至含有經捕獲之EGFR之ELISA盤子。 9·受試化合物以1 ·· 10稀釋於TBS ,置孔洞中。 10·在ELISA盤上加13.5微升經稀釋的受試化合物。於對 照組孔洞，加13.5微升TBS於10%DMSO。 11·在震盪上培育，於室溫下3 〇分鐘。 12 ·除了負面對照組孔$ ,在各孔洞中加入丨5微升鱗醯 化作用混合物。最終孔洞的體積應是約丨5 〇微升，在 各孔洞應是3 μΜ ATP/5 mM MnCl2之終濃度。震盛培 ______ - 211 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（2〇9 ) 育5分鐘。 13.加16.5微升EDTA溶液，於震盪下停止反應。再震盪1 分鐘。 14·以去離子水洗4x，以TBST洗2x。 15.每孔洞中加入1 〇〇微升抗-磷酸酪胺酸（1 : 3000稀釋 於丁 BST)。在震盪下培育3 0 -4 5分鐘，於室溫下。 16 ·如上4般洗〉條。 17·在各孔洞中加1 0 0微升Biosource山羊抗-兔子IgG過 氧化酶共軛物（1 : 2000稀釋於TBST)。在室溫下震盪 培育3 0分鐘。 18. 如上4般洗滌。 19. 在各孔洞中加入100微升ABTS/H202溶液。 20·在震盪下培育5-10分鐘。移去任何氣泡。 21.若必要時，加1 00微升〇·2 M HC1 (每孔洞）以停止反 應。 22·在Dynatech MR7000 ELISA讀取機上讀出分析：測試 濾膜在410 nM，參考濾膜在630 nM。 PDGFR生物分析 此分析可在ELISA分析中於試管中測試FGF1-R之激酶活 性。 材料及試劑： 1· Corning 96-孔洞 Elisa盤。 2. 28D4C10單株抗-PDGFR抗體（SUGEN，Inc·)。 3. PBS 〇 -212 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（210 ) 4. TBST緩衝溶液。 5. 阻斷緩衝溶液（和EGFR生物分析相同）。 6. 可表現PDGFR-β之NIH 3T3細胞溶胞產物（SUGEN， Inc·) 0 7. TBS緩衝溶液。 8. TBS + 10% DMSO。 9. ATP。 10. MnCl2。 11 ·激酶緩衝溶液磷醯化作用混合物：於1 0毫升，混合 250 微升 1M TRIS，200 微升 5M NaCl，100 微升 1M MnCl2及 5 0微升 100 mM Triton X-100以足夠的 dH20 使 達1 0毫升。 12. NUNC 96-孔洞V底聚丙晞盤。 13· EDTA。 14·兔子多株抗-磷酸基酪胺酸血清（SUGEN，Inc.)。 15.山羊抗-兔子IgG過氧化酶共輛物（Bio source Cat. No. ALI0404)。 16· ABTS 〇 17. 過氧化氫，30%溶液。 18. ABTS/H202。 19· 0.2 M HCM。 步驟： 1.以0.5微克28D4C10於100微升PBS (每孔洞）塗佈 Corning 96孔洞ELIS A盤，在4°C下貯放一夜。 -213 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 裝 訂
1230609 A7 B7 五、發明説明（211 ) 2.倒轉盤以移去液體，而可除去孔洞中未結合之 28D4C10。以dH20洗l x。輕拍在衛生紙上以移去過 量的液體。 3 ·加1 5 0微升阻斷緩衝溶至各孔洞。在室溫下震盪培育 3 0分鐘。 4. 以去離子水洗盤3 X，以TBST洗一次，盤在在衛生紙 上輕拍以移去過量之液體及氣泡。 5. 溶胞產物稀釋在HNTG中（1 0微克溶胞產物/100微升 HNTG)。 6. 各孔洞中加入1 0 0微升稀釋之溶胞產物。在室溫下震 堡6 0分鐘。 7. 如步驟4般洗盤。 8. 加8 0微升操作激酶緩衝溶液混合物，至含有捕獲的 PDGFR 之 ELISA盤中。 9·受試化合物以1 : 1 0稀釋在T B S，於9 6孔洞之聚丙 晞盤中^ 10. 加1 0微升經稀釋之受試化合物至ELISA盤。於對照 孔洞，加入10微升TBS + 10% DMSO。在室溫下震盪 培育3 0分鐘。 11. 在所有孔洞直接加10微升ATP，除了負面對照孔洞（在 各孔洞之最終體積並以20 μΜ ATP使達約100微升）。 在震盪下培育30分鐘。 12. 在各孔洞加10微升EDTA溶液以停止反應。 13. 以去離子水洗4χ，以.TBST洗二次。 -214 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（212 ) 14. 每孔洞中加入1 00微升抗-磷酸酪胺酸（1 : 3000稀釋 於TBST)。在室溫下震盪培育30-45分鐘。 15. 如步驟4般洗滌。 16. 各孔洞中加1 0 0微升Bio source山羊抗-兔子IgG過氧 化酶共軛物（1 : 2000稀釋於TBST)。 17. 如步驟4般洗滌。 18. 各孔洞中加1 00微升ABTS/H202溶液。 19. 震盪下培育10-30分鐘《移去任何的氣泡。 20. 若必要時，加1 0 0微升0·2 M HC1 (每孔洞）以停止反 應。 21. 在Dynatech MR7000 ELISA讀取機上讀出分析結果： 測試濾膜在410 nM，且參考濾膜在630 nM。 細胞HER-2激酶分析 此分析可在ELISA型式中偵測完整細胞中之HER-2激酶活 性。 材料及試劑 1. DMEM (GIBCO Catalog #1 1965-092)。 2. 胚牛血清（FBS，GIBCO Catalog #16000-044)，在56°C 水 浴中3 0分鐘以加熱使失活。 3. 胰蛋白酶（GIBCO Catalog #25200-056)。 4. L-穀胺醯胺（GIBCO Catalog #25030-081)。 5. HEPES (GIBCO Catalog #15630-080)。 6. 生長培養基 混合500毫升DMEM，55毫升經熱失活之FBS，10毫 -215 - 本紙银尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 裝 訂
線 1230609 A7 _B7___ 五、發明説明（213 ) 升HEPES及5.5毫升L-穀胺醯胺。 7. 飢餓培養基 混合5 0 0毫升0“五]\4,2.5毫升熱去活之？63，10毫升 HEPES及5.5亳升L-穀胺醯胺。 8. PBS 0 9. 扁平底之9 6 -孔洞組織培養微滴定盤（Corning Catalog #25860” 10· 15 公分組織培皿（Corning Catalog #08757148)。 11 · Corning 96-孔洞 ELIS人盤 β 12· NUNC 96-孔洞V底聚丙埽盤。 13·用於 Transtar 96(Costar Catalog #7610)之 CostarTransfer 匣。 14· SUMO 1 :單株抗-EGFR抗體（SUGEN，Inc.)。 15. TBST緩衝溶液。 16·阻斷緩衝溶液：5% Carnation即溶牛乳@於？丑3。 17· EGF配體：EGF-201，Shinko American，Japan，粉末懸 浮在100微升之10 mM HC1，加100微升10 mM NaOH ，加800微升PBS，並轉移至Eppendorf管内，在-20°C 下貯放至使用為止。 18. HNTG溶解緩衝溶液 於貯液 5X HNTG，混合 23.83 克 Hepes，43.83 克 NaCl， 500毫升甘油及1〇〇毫升Triton X-100及足夠的dH20使 總溶液為1升。於IX HNTG·，混合2毫升HNTG，100 微升 〇·1Μ Na3V04，·250 微升 0·2Μ Na4P207 及 100 微升 EDTA 〇 ， -216 - 本紙張尺度適用中國國家樣準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐） 裝 訂
線 1230609 A7 B7 五、發明説明（214 ) 19· EDTA。 20. Na3VO4。為製成貯液，混合1.84克Na3V04與90毫升 dH20。pH值調至1 0。在微波中煮沸1分鐘（溶液變澄 清）。冷卻至室溫。p Η調至1 0。重覆加熱/冷卻循環 ，直到ρ Η保持在1 0。 21. 200 mM Na4P207。 22. 與磷酸酪胺酸特異之兔子多株抗血清（抗-Ptyr抗體， SUGEN，Inc·) 〇 23. 親和力純化之抗血清，山羊抗-兔子IgG抗體，過氧 化酶共輛物（Biosource Catalog # AL10404)。 24. ABTS溶液。 25. 3 0%過氧化氫溶液。 26· ABTS/H202。 27. 0·2 M HC卜 步驟： 1.以每孔洞1.0微克於PB S之SUM01塗佈Corning 96孔 洞之ELISA盤，100微升終體積/孔洞。在4°C下貯放 一夜。 2·在使用當日，移去塗佈緩衝溶液並以dH20洗盤3次， 再以TBST緩衝溶液洗一次。在此分析中之所有洗滌 均應以此方式進行，除非另有所示。 3.各孔洞加100微升阻斷緩衝溶液。在震盪下在室溫培 育盤達30分鐘，使用前才洗盤。 4·於此分析中使用EGFr/HER-2嵌合體/3T3-C7細胞株。 • 217 - 太紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 裝 訂
線 1230609 A7 B7
5·選出群集度具80-90%之皿。以胰蛋白酶化及在室溫 下以1000 rpm離心5分鐘收集細胞。 6·細胞懸浮在飢餓培養基中，並以錐藍計數。存活率 高於90%是必要的。細胞以每孔洞2,5〇〇個細胞之密 度種在飢餓培養基中，每孔洞9 〇微升，於9 6孔洞之 微滴定盤。此種入細胞再於37°c&5% c〇2下培育一 夜。 7.種入二天後開始分析。 8·爻試化合物溶於4% DMSO中。樣品再於盤中以飢餓_ DMEM直接進一步稀釋。典型而言，此稀釋比例為又 • 1 0以上。所有孔洞再轉移至細胞盤，以丨：丨〇進 一步稀釋（10微升樣品及培養基至9〇微升飢餓培養 基。取終之DMSO濃度應在1%以下。也可使用標準 的連續稀釋。 9·在5%(：02及37。(：下培育2小時。
• 10· I備E G F配體’係將貯液EGF (16·5 μΜ)以溫DMEM 稀釋至150 ηΜ。 11·製備新鮮的HNTG*足供每孔洞1〇〇微升；置於冰上。 12·與受試化合物共培育2小時後，加入所製備之ε g f配 體細胞中，每孔洞5 0微升，終濃度為50 ηΜ。陽性對 照孔洞接受相同量之E G F ^陰性對照組無E G F。在 37 C下培育10分鐘。 13.移出受試化合物，EGF及DMEM。以PBS洗細胞一次。 14· HNTG*轉移至細胞，每孔洞1〇〇微升。置冰上5分鐘 -218 - 木紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐）
訂
1230609 A7 B7 五、發明説明（216 ) 。同時自ELISA盤上移去阻斷緩衝溶液並洗滌。 1 5.以微量滴定器刮出盤内細胞，並重覆吸取及分散在 HNTG*溶解緩衝溶液中以使細胞勻漿化。溶胞產物 轉移至已塗佈且阻斷及洗過之ELISA盤上，或利用 Co star轉移匣轉移溶胞產物至盤内。 16. 在室溫下以震盪培育1小時。 17. 移出溶胞產物，洗滌，轉移新鮮稀釋之抗-Ptyr抗體（1 :3000至丁BST)至ELISA盤，每孔洞100微升。 18. 在室溫下震盪培育30分鐘。
19. 移出抗-Ptyr抗體，洗滌。轉移新鮮稀釋之BIOSOURCE 抗體至£1^13八盤（1:8000於丁63丁，每孔洞100微升）。 20. 在室溫下震盪培育30分鐘。 21. 移去BIOSOURCE抗體，洗滌。轉移新鮮製備之 ABTS/H202溶液至ELISA盤，每孔洞100微升。 22. 在震盪下培育5-10分鐘。移去任何氣泡。 23. 每孔洞加100微升0.2M HC1以停止反應。 24·在Dynatech MR7000 ELISA讀取機上讀出分析結果， 測試濾膜在410 nM且參考濾膜在630 nM。 CDK2/週期素A分析 此分析可於閃爍親近法（SPA)中偵測人類cdk2/週期素A 之試管内絲胺酸/蘇胺酸激酶活性。 材料及試劑： 1 · Wallac 96-孔洞之聚對苯二甲酸乙二醇酯（flexi)盤 (Wallac Catalog # 1450-401) ° -219 - 大铋得尺序谪用Φ困困宏捸準(ΌΝΑ A4规格（210 X 297公釐） 裝 訂
線 1230609 A7 B7 五、發明説明（217 ) 2. Amersham Redivue [γ33Ρ] ATP (Amersham catalog #AH 9968)。 3. Amersham鏈抗生物素蛋白塗佈之聚乙烯甲苯SPA珠 粒（Amersham catalog #RPNQ0007)。珠粒應在 PBS 中 重組，但不加錢或#5，在20毫克/毫升下。 4. 經活化之cdk2/週期素A酵素複合物，純化自s f 9細胞 (SUGEN，Inc·)。 5 ·生物素化之肽受質（Debtide)。肽生物素-X-PKTPKKAKKL 溶於dH20中，濃度為5毫克/毫升。 6·肽/ATP混合物，於1 0毫升，混合9.979毫升dH20， 0.00125毫升，，冷的"（非放射性）ATP，0.010奎升 Debtide及0.010毫升γ33Ρ ATP。每孔洞最終之濃度為 0.5 μΜ ” 冷的"ΑΤΡ，0.1微克 Debtide 及 0.2 μΟΜ γ33Ρ ATP。 7·激酶緩衝溶液：於1 0毫升，混合8.85毫升dH20， 0·625 毫升 TRIS (pH 7·4)，0.25 毫升 1M MgCh，〇·25 毫 升10% ΝΡ40及0.025毫升1Μ DTT，在使用前才新鮮加 入。 8. 10 mM ATP於dH20 中。 9. 1M Tris，pH以HC1 調至 7.4。 10· 1M MgCl2。 11· 1M DTT。 12· PBS (Gibco Catalog # 14190-144) 〇 13. 0.5M EDTA。 -220 - 太皈伕尺唐逋用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 裝 訂
線 1230609 A7 B7 五、發明説明（218 ) 14.停止溶液：於10毫升，混合9.25毫升PBS，0.005毫升 100 mM ATP，0.1 毫升 0.5 M EDTA，0.1 毫升 10% Triton X-100及1.25毫升的2 0毫克/毫升SPA珠粒。 步驟： 1. 製備受試化合物溶液，為欲求最終濃度在5% DMSO 中之5 X ^在各孔洞加1 0微升。於負對照孔洞，使用 1 0微升單獨的5% DMSO。 2. 以2.1毫升2 X激酶緩衝溶液稀釋5微升cdk2/週期素A 溶液。 3. 各孔洞加20微升酵素。 4. 加1 0微升0.5 M EDTA至負對照組孔洞。 5. 為開始激酶反應，在各孔洞加2 0微升肽/ΑΤΡ混合物 。在未震盪下培育1小時。 6. 在各孔洞中加200微升停止溶液。 7. 保持至少10分鐘。 8. 盤以2300 rpm自旋3-5分鐘。 9. 利用Trilux或類似的讀取機計數盤。 MET轉磷醯化作用 此分析可用來偵測在聚（穀胺酸：酪胺酸（4 : 1 ))受質上 磷酸酪胺酸之水平，作為鑑定受質之m e t轉磷醯化作用之 激動劑/结抗劑之方法。 材料及試劑： 1. Corning 96-孔洞 Elisa盤，Corning Catalog # 25805-96。 2. 聚（glu，tyr) 4:1，Sigma，Cat. No. P 0275 0 -221 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（219 ) 3. PBS, Gibco Catalog # 450-1300EB。 4. 50 mM HEPES。 5. 阻斷緩衝溶液·· 2 5克牛血清白蛋白，Sigma Car. No A-7888溶於500毫升PBS，經由4微米濾膜過濾。 6. 純化的GST融合蛋白質，含有M e t激酶功能部位， Sugen， Inc 〇 7. TBST緩衝溶液。 8. 10% DMSO水溶液（MilliQue H20) DMSO。 9. 10 mM腺嘗-5’-三磷酸水溶液（<1Η2〇)，Sigma，Cat· No· A-5394 。 10. 2X激酶稀釋緩衝溶液：於100毫升，混合10毫升1M HEPES，pH 7·5加上0.4毫升 5% BSA/PBS，0·2毫升0·1 Μ 原釩酸鈉及1毫升5Μ氯化鈉，於88.4毫升dH20。 11. 4X ATP反應混合物：於10毫升，混合0.4毫升1 Μ氯 化鎂及0.02毫升0.1 Μ ΑΤΡ於9.56毫升dH20。 12. 4X負對照混合物：於10毫升，混合0.4毫升1 Μ氣化 鎂於9.6毫升dH20。 13· NUNC 96-孔洞 V 底聚丙缔盤，Applied Scientific Catalog # S-72092 ° 14· 500 mM EDTA。 15. 抗體稀釋緩衝溶液：於100毫升，混合10毫升5% BSA/PBS，0.5毫升5% Carnation即溶牛乳@於尸63，及 0.1毫升0.1 Μ原釩酸鈉於8.84毫升TBST。 16. 兔子多株抗鱗酸酪胺酸抗體，Sugen，Inc。 -222 - 本紙張尺度逋用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 裝 訂
線 1230609 A7 B7 五、發明説明（220 ) 17. 山羊抗-兔子萍菜過氧化酶共軛的抗體，Biosource， Inc 0 18. ABTS溶液：於1升，混合19.21克檸檬酸，35.49克 Na2HP04及500毫克ABTS，加上足夠的dH20使達1升。 19. ABTS/H202 ··混合15毫升ABST溶液與2微升H2〇2，使 用前5分鐘才混合。 20. 0.2 M HC卜 步驟： 1. 以 2 微克 Poly(Glu-Tyr)於 100微升 PBS 塗佈 ELISA盤， 並貯於4 °C下一夜。 2. 以150微升5% BSA/PBS阻斷盤60分鐘。 3. 以PBS洗盤二次，50 mM Hepes緩衝溶液，pH 7.4洗 一次。 ， 4·對所有孔洞加入5 0微升經稀釋的激酶（純化的激酶以 激酶稀釋緩衝溶液稀釋。終濃度應為10毫微克/孔洞）。 5·加25微升受試化合物（於4% DMSO)或單獨的DMS0 (4%於dH20)於對照組盤。 6·培育激酶1化合物混合物歷1 5分鐘。 7·在負對照組孔洞中加2 5微升40 mM MnCh。 8·對其他所有孔洞（除了負對照組）加2 5微升ATP/MnCl2 混合物。培育5分鐘。 9.加2 5微升5〇〇 mM EDTA以停止反應。 10·以 TBST洗盤 3X。 11 ·在各孔洞中加入，100微升兔子多株抗-Ptyr稀釋1 : __^__- 223 · 本紙張尺度適用中國國家槺準(CNS) A4規格(21〇x 297公釐) 1230609 A7 _B7__ 五、發明説明（221 ) 10,000於抗體稀釋緩衝溶液。在室溫下震盪培育1小 時。 12.以 TBST 洗盤 3X。 13· Biosource HRP共軛的抗-兔子抗體，以1 : 6,000稀釋 於抗體稀釋緩衝溶液中。每孔洞加100微升，並在室 溫下震盪培育1小時。 14. 以PBS洗盤IX。 15. 各孔洞加100微升ABTS/H202溶液。 16. 若必要時，加100微升0.2M HC1/孔洞以停止發展反應。 17·在Dynatech MR7000 elisa讀取機上讀出盤結果，其中 測試濾膜在410 nM，且參考濾膜在630 nM。 IGF-1轉磷醯化作用分析 此分析可用來偵測在聚（穀胺酸··酪胺酸）（4 : 1 )上之磷 酸酪胺酸水平，以鑑定受質gst-IGF-Ι轉磷醯化作用之激動 劑/拮抗劑。 材料及試劑： 1. Corning 96-孔洞 Elisa盤。 2. 聚（Glu，tyr) 4:1，Sigma, Cat· No· P 0275。 3. PBS，Gibco Catalog # 450-1300EB。 4. 50 mM HEPES。 5. TBB阻斷緩衝溶液：於1升，混合100克BSA，12.1克 TRIS (pH 7.5)，58.44克氯化鈉及 1 0 毫升 1% TWEEN-20 〇 6. 經純化之GST融合蛋白質含有IGF-1激酶功能部位， _ - 224 - 本紙張尺度適用中國困家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 裝 訂
線 1230609 A7 B7 ___ 五、發明説明（222 ) (Sugen, Inc.) ° 7. TBST緩衝溶液··於1升，混合6.057克，Tris，8.766克 氯化鈉及0.5毫升TWEEN-20，加入足夠的dH20以製成 1升。 8. 4% DMSO於Milli-Q H20 中。 9. 10 mM ATP於dH20。 10. 2X激酶稀釋緩衝溶液：於100亳升，混合10毫升1M HEPES (pH 7.5)，0.4毫升50/〇 BSA於dH20，0.2毫升〇·1 Μ 原釩酸鈉及1毫升5Μ氯化鈉，加足夠的dH20使達100 毫升。 11· 4X ATP反應混合物：於1 0毫升，混合0.4毫升1 Μ MnCl2及0.008 毫升 0·01 Μ ATP於9.56毫升 dH20 ° 12· 4X負對照混合物：混合0.4毫升1 Μ氯化鎂於9.60毫 升 dH20。 13· NUNC 96-孔洞V底聚丙烯盤。 14· 500 mM EDTA於dH20。 15.抗體稀釋緩衝溶液：於1〇〇毫升，混合1 〇毫升5% BSA於PBS，0.5毫升5% Carnation即溶無月旨牛乳®於 PBS，及0.1毫升〇·1 Μ原釩酸鈉於88.4毫升TBST中。 16·兔子多株抗罐酸酷胺酸抗體，Sugen，Inc。 17·山羊抗-兔子HRP共輛的抗體，Biosource。 18. ABTS溶液。 20· ABTS/H202 ·•混合1 5毫升ABST溶液與2微升H2〇2，使 用前5分鐘。 ___- 225 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 裝 訂
線 1230609 A7 B7 五、發明説明（223 ) 21. 0·2 M HC1 於dH20。 步驟： 1. 以 2.0微克 / 孔洞聚（Glu-Tyr) 4 ·· 1 (Sigma P0275)塗佈 ELIS A盤，於100微升PBS中，貯於4 °C下一夜。 2. 以PBS盤洗一次。 3. 在各孔洞加入100微升TBB阻斷緩衝溶液。培養盤在 室溫震盪1小時。 4. 以P B S洗盤一次，再以50 mM Hepes緩衝溶液pH 7.5 洗二次。 5 . 在盤中加25微升受試化合物於4% DMSO (10 mM受 試化合物於100% DMSO以dH20稀釋而得）。 6.對所有孔洞加入10.0毫微克gst-IGF-Ι激酶於5 0微升 激酶稀釋緩衝溶液。 1 ·對所有測試孔洞及陽性對照孔洞，加入2 5微升4X ATP反應混合物以開始激酶反應。加入2 5微升4 X負 對照混合物至所有負對照孔洞。在室溫下震盪培育 1 0分鐘。 8. 對所有孔洞加入25微升0.5M EDTA (pH 8.0)。 9. 以TBST緩衝溶液洗盤4X。 10. 加兔子多株抗-磷酸酪胺酸抗血清，以1 : 1〇,〇〇〇於 1 0 0微升抗體稀釋緩衝溶液之稀釋倍數加至所有孔洞 。在室溫下震盪培育1小時。 11. 如步驟9般洗盤。 12·加入100微升Biosource抗-兔子HRP，以1 : 10,000於抗 -226 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 裝 訂
1230609 A7 B7 五、發明説明（224 ) 體稀釋緩衝溶液中之稀釋液加至所有孔洞，並在室 溫下震盪培育1小時。 13. 如步驟9般洗滌，再以PBS洗一次以減少氣泡及過量 的 Tween-20 〇 14. 各孔洞加100微升/孔洞ABTS/H202以展開。 15. 約5分鐘後，在ELISA讀取機上讀出結果，測試濾膜 在410毫微米，且參考濾膜在630毫微米。 BRDU納入分析 以下分析法所使用之細胞係經遺傳操作可表現所選定之 受體，再由決定BrdU納入D N A，以評估重點化合物在配 體-誘生之D N A合成活性上之作用。 以下材料，試劑及步驟為以下BrciU納入分析一般原則。 示出特殊分析中之變化。 材料及試劑= 1. 適合的配體。 2. 適合的經遺傳操作細胞。 3. BudU標記試劑：10 mM，於PBS (pH 7.4)(Boehringer Mannheim, Germany) ° 4. FixDenat :固定溶液（即可使用）（Boehringer Mannheim， Germany) 0 5. 抗-BrdU-POD :老鼠單株抗體共軛以過氧化酶 (Boehringer Mannheim, Germany) 〇 6· ΤΜΒ受質溶液：肆甲芊胺（TMB，Boehringer Mannheim， Germany) ο __- 227 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210x 297公釐） 裝 訂
線 1230609 A7 B7 五、發明説明（225 ) 7. PBS洗滌溶液：IX PBS，pH 7.4。 8. 白蛋白，牛（BSA)，V部份粉末（Sigma Chemical Co.， USA)。 一般步驟： 1.細胞以8000細胞/孔洞種於10% CS，2 mM Gin於 DMEM，於9 6孔洞盤。細胞在37°C，5% C〇2中培育一 夜。 2· 24小時後，細胞以PBS洗滌，再於無血清培養基中 (0% CS DMEM加上0.1% BSA)使血清耗竭，歷24小時。 3.於第3天，在細胞中同時加入適合的配體及受試化合 物。負對照孔洞接受無血清之DMEM，只加0.1 % BSA ;陽性對照細胞接受配體但無受試化合物。受試化 合物製備在無血清之DMEM中，並加上配體，在96 孔洞盤中，再連續稀釋歷7個測試濃度。 4·配體活化1 8小時後，加入稀釋的BrdU標記試劑（1 : 100於DMEM，0.1% BSA)，且細胞與BrdU (終濃度 =10 μΜ)共培育1.5小時。 5. 與標記試劑培育後，傾析並輕拍倒立之盤於衛生紙 上以移去培養基。加入FixDenat溶液（50微升/孔洞） 且培養盤在震盪槽上以室溫培育45分鐘。 6. 以傾析及輕拍倒立之盤於衛生紙上以完全移去 FixDenat溶液。加入牛乳（5 %脫水牛乳於PBS，200微 升/孔洞）以為阻斷溶液，盤再於室溫及盤震盪器上 培育3 0分鐘。 ____- 228 - 本紙張尺度逋用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐)
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1230609 A7 B7 五、發明説明（226 ) 7. 由傾析移去阻斷溶液，且孔洞以P B S洗一次。加入 抗-BrdU-POD 溶液（1 : 200 稀釋在 PBS，1% BSA)(50 微 升/孔洞），且盤在室溫下於震盪器上培育9 0分鐘。 8. 抗體共軛物以傾析充份移去，並以P B S潤洗5次，且 盤倒轉並在衛生紙上輕拍以乾燥。 9. 加入TMB受質溶液（100微升/孔洞），並在震盪器上 以室溫培育2 0分鐘，直到展開的顏色供光計器偵測。 10. 樣品之吸光度在Dynatech ELIS A盤讀取機上以410毫 微米偵測（以’’雙重波長”模式，濾膜在4 9 0毫微米為 參考波長）。 EGF-誘生之BrdU納入分析 材料及試劑： 1 .老鼠 EGF，201 (丁oyobo Co·，Ltd.曰本）。 2 . 3T3/EGFRc7。 EGF-誘生之Her-2·驅動之BrdU納入分析 材料及試劑： 1 ·老鼠 EGF，201 (Toyobo Co·，Ltd.日本）。 2. 3T3/EGFr/Her2/EGFr (EGFr 有Her-2激酶功能部位）。 EGF-誘生之Her-4-驅動之BrdU納入分析 材料及試劑： 1 .老鼠 EGF，201 (Toyobo Co·，Ltd.日本）。 2. 3T3/EGFr/Her4/EGFr (EGFr* 有 Her-4激酶功能部位）。 PDGF-誘生之BrdU納入分析 材料及試劑： ___ - 99Q - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（227 ) 1 .人類 PDGF B/B (Boehringer Mannheim，德國）。 2. 3T3/EGFRc7。 FGF-誘生之BrdU納入分析 材料及試劑： 1 ·人類 FGF2/bFGF (Gibco BRL，USA” 2 . 3T3c7/EGFr。 IGF 1-誘生之BrdU納入分析 材料及試劑： 1·人類，重組體（G511，PromegaCorp.，USA)。 2 . 3T3/IGFlr。 胰島素-誘生之BrdU納入分析：計算值：實測值 材料及試劍： 1 ·胰島素，結晶狀，牛，鋅（13007，Gibco BRL，USA)。 2· 3T3/H25。 HGF-誘生之BrdU納入分析 材料及試劑： 1 ·重組體人類 HGF (Cat· No. 249-HG，R&D Systems，
Inc·，USA) 〇 2 . BxPC-3 細胞（ATCC CRL-1687)。 步驟= 1. 細胞以9000細胞/孔洞種入11?]^110%?33中，於9 6孔 洞盤。細胞在37。(：，5% C02中培育一夜。 2. 24小時後，細胞以PBS洗滌，再以100微升無血清培 養基中（RPMI加上0.1%BSA)使血清耗盡，歷24小時。 -230 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 裝 訂
線 1230609 A7 B7 五、發明説明（228 ) 3. 在第3天，於細胞中加入2 5微升含配體溶液（以1微 克/毫升製備在有0.1% BSA之RPMI中；終HGF濃度為 2 0 0毫微克/毫升）及受試化合物。負對照孔洞接受 25微升無血清RPMI但只加有0.1% BSA ;陽性對照細 胞接受配體（HGF)但無受試化合物。受試化合物以終 濃度的5倍製備在無血清之RPMI中，但加有配體， 於9 6孔洞盤，並連續稀釋以得7個測試濃度。典型而 言，最高之受試化合物終濃度是100 μΜ，且使用1 : 3 稀釋（即終受試化合物濃度範圍是0.137-100 μΜ)。 4. 在配體活化1 8小時後，在各孔洞加12.5微升經稀釋 之BrdU標記試劑（1 : 100於RPMI，0.1% BSA)，且細胞 與BrdU (終濃度是10 μΜ)共培育1小時。 5. 和一般步驟相同。 6. 和一般步驟相同。 7. 由傾析移除阻斷溶液，且孔洞以P B S洗一次。加入 抗-BrdU-POD 溶液（1 : 100稀釋於 PBS，1% BSA)(100 微升/孔洞），且盤在震盪器上以室溫培育9 0分鐘。 8. 和一般步驟相同。 9. 和一般步驟相同。 10. 和一般步驟相同。 HUV-EC-C 分折 此分析用來偵測化合物拮抗PDGF-R，FGF-R，VEGF， aFGF或Flk-1/KDR之活性，其均可為HUV-EC細胞自然地表 現0 -231 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐）
訂
線 1230609 A7 B7 五、發明説明（229 ) 第〇天 1 · 洗滌及胰蛋白酶HUV-EC-C細胞（人類臍靜脈内皮細 胞）（American Type Culture Collection, catalogue no. 173〇 CRL)。以Dulbecco’s磷酸鹽-緩衝食鹽水洗務2次（D-PBS， 得自 Gibco BRL，catalogue, no· 14190-029)，每 1〇公分2組織 培養燒瓶約1毫升，以0.05%胰蛋白酶-EDTA於無酵素之細 胞解離溶液（Sigma Chemical Company，catalogue no. C-1544) 進行胰蛋白酶化。0·05%胰蛋白酶之製備係將〇·25%騰蛋白 酶 / 1 mM EDTA (Gibco，catalogue no· 25200-049)稀釋在細胞 解離溶液中。以約1毫升/2 5 -3 0公分2組織培養燒瓶，胰蛋 白酶化約5分鐘，3 7 °C下。一旦細胞自燒瓶剝離，加入等 量的分析培養基，並轉移至5 0毫升無菌離心管内（Fisher Scientific, catalogue no. 05-539-6) ° 2 ·以每5 0毫升無菌離心管中約3 5毫升分析培養基來洗 滌細胞，其係先加入分析培養基，以約200 X g離心1 〇 4鐘 ，吸出上清液，再以35毫升D-PBS懸浮之。D-PBS之洗條 需重覆二次以上，細胞再以每15公分2組織培養燒瓶約i毫 升分析培養基而懸浮之。此分析培養基含有F12K培養基 (Gibco BRL，catalogue no· 211.27-014)及 0.5%經熱失活之胚 牛血清。以 Coulter Counter® (Coulter Electronics，Inc.)計數 細胞，再加入分析培養基·，使每毫升有〇·8-1·〇 χ i〇5細胞之 濃度。 3 .細胞加至9 6 -孔洞之扁平底盤内，每孔洞含1 〇〇微升或 0.8-1.0 X 104個細胞。並於3 7°C，5% C02下培育約24小時。 -232 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 裝 訂
線 1230609 A7 B7 五、發明説明（230 ) 第1天 1 . 在分別的9 6 -孔洞盤中製成受試化合物2倍滴定量， 通常是由50 μΜ至0 μΜ。利用和上文第0天’第2步驟相同 之分析培養基。滴定量是每孔洞加入200 μΜ之9 0微升化合 物（最終濃度之4 X )，放於特定盤一攔中最上方之孔洞。由 於貯液通常是在DMSO中呈20 mM，故200 μΜ藥物濃度中含 有 2% DMSO。 稀稀劑是在分析培養基中（F12K + 0.5%胚牛血清）製成 2% DMSO，以此作為受試化合物滴定時之稀釋劑，以稀釋 受試化合物但仍可保持DMSO固定。在欄中其他孔洞加入 此稀釋劑6 0微升。自攔中最上方孔洞之200 μΜ受試化合物 稀釋液120微升中，取出60微升，再與欄中第二孔洞之60 微升混合。此孔洞取出6 0微升與第三孔洞中的6 0微升混 合，且如此直到2倍滴定量完成為止。當倒數第二個孔洞 混合時，取此孔洞120微升中之60微升，並丟棄之。留下 最後一個孔洞是6 0微升DMSO/培養基稀釋劑，充作無受試 化合物之對照組。製成經滴定受試化合物9欄，足供三組 孔洞，各自為：（1) VEGF (得自 Pepro Tech Inc· catalogue no· 100-200，（2)内皮細胞生長因子（ECGF)(已已知為酸性纖維 母細胞生長因子，或aFGF)(得自Boehringer Mannheim Biochemica，catalogue no· 1439 600)或（3) 1人類 PDGF B/B (1276-956，Boehringer Mannheim，Germany)及分析培養基對 照組。ECGF加有肝素鈉為製劑。 2 · 每孔洞轉移5 0微升受試化合物稀釋液至9 6 -孔洞分 -233 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 裝 訂
線 1230609 A7 B7 五、發明説明（231 ) 析盤，其中自〇天開始含有0.8-1 ·0χ104細胞/100微升/孔洞 之HUV-EC-C細胞，並在37°C，5% C〇2中約培育2小時。 3 . 以三個一組方式，每孔洞中加入5 0微升的8 0微克/ 毫升VEGF，20毫微克/毫升ECGF，或培養基對照組至各受 試化合物條件。至於受試化合物，生長因子濃度為最終欲 求濃度欲求濃度之4X。在37°C，5% C02下培育約24小時 。各孔洞具有5 0微升之受試化合物稀釋液，5 0微升生長 因子或培養基，及1〇〇微升細胞，經估算每孔洞共200微升 。因此一旦每件都加至孔洞中，則受試化合物及生長因子 之4X濃度會變成IX。 第2天 1 .加 1 μ(ϋί/ 孑L 洞之 3H-胸替（Amersham，catalogue no· TRK-686) (10微升/孔洞之10 pCi/毫升溶液，在RPMI培養基 + 10%經熱失活之胚牛血清中製成），並在37°C，5% C02約培 育 2 4 小時。RPMI得自 Gibco BRL，catalogue no. 11875-051。 第3天 1. 在-20°C冷凍盤一夜。 第4天 將盤解;東’並以9 6 -孔洞盤回收器（Tomtec Harvester 96®) 在濾盤上（Wallac，catalogue no· 1205-401)，上回收，於 Wallac BetaplateTM液體閃爍計數器上計數。 表2示出式（I)某些示例化合物之生物試驗結果。結果以 ICw報告，受試化合物之微莫耳濃度（μΜ)可造成標的PKT 活性5 0 %變化，此乃與未加受試化合物之對照組之ρ τ κ活 _____- 234 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐） 1230609 A7 B7 五、發明説明（232 ) 性比較而言。特言之，顯示之結果顯出欲減低標的P T K活 性5 0 %所需之受試化合物濃度。以下詳述已用於或可用於 評估也金也之生物分析法。 表2
Example bio flkGST IC50 (μΜ) bio FGFR1 IC50 (μΜ) bio PDGF IC50 (μΜ) bio EGF IC50 (μΜ) cell EGF IC50 (μΜ) ,Her2 Kinase IC50 (μΜ) cdk2spa C50 (μΜ) bio pyk2 IC50 (μΜ) 1 57.68 15.16 >100 >100 >100 >100 2 >100 >100 >100 >100 3 9.85 9.62 >100 >100 >100 >100 4 .3.57 >20 >100 >100 >100 >100 5 8.3 16.06 >100 >100 >100 >100 6 4.04 >100 3.26 7.82 2.43 7 7.74 >100 5.07 9.8 4.24 8 12.1 >100 51.34 20.08 5.5 9 0.96 >100 >100 >100 16.38 10 5.72 >100 94.04 15.86 8.06 11 9.77 >100 >100 >100 >100 12 >20 21.46 >100 27.73 13 >20 81.92 8.17 2.66 14 13.01 42.41 >100 66.02 15 >20 >100 >100 98.61 16 >20 98.06 >100 23.32 17 8.25 2.47 94.35 0.83 11.47 15.94 >10 18 2.67 2.57 9.23 4.99 19 7.5 6.86 34.18 8.37 20 11.53 >100 41.16 8 21 7.18 >100 40.34 27.69 22 >20 >100 >100 87.67 23 >20 >100 36.64 4.05 24 >100 16.84 5.31 25 12.55 >100 23.48 7.9 26 16.03 66.87 34.67 10.04 27 >100 26,5 3.91 裝 訂
線 -235 -本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（233 )
Example bio flkGST IC50 ί_ bio FGFR1 IC50 (μΜ) bio PDGF IC50 (μΜ) bio EGI IC50 (μΜ) 「ceN EGi IC50 (μΜ) r Her2 Kinase IC50 (μΜ) cdk2spa C50 (μΜ) bio pyk2 IC50 (μΜ) 28 4.5 71.27 53.66 2.67 29 10.12 >100 26.72 3.98 30 9.4 >100 18.69 4.1 31 >50 >100 9.83 47.19 32 45.74 5.94 >100 >100 34 >50 >100 >100 >100 35 >20 >100 80.4 54.14 36 >20 >100 >100 >100 37 0.22 3.06 10.78 9.84 1.4 38 4.17 3.06 6.04 8.97 2.16 39 3.38 4.69 3.67 14.54 3.53 40 4.5 7.9 6.52 6.27 42 0.1 0.12 11.95 74.55 20.43 43 1.12 8.38 >100 37.33 53.37 44 <0.05 0.02 20.73 67.46 6.99 * 45 1.71 >100 >100 29.95 >100 46 30.62 6.18 >100 >100 >100 - 47 0.08 1.56 0.06 11.42 41.54 8.4 >20 j 1.05 48 0.006 0.3 <0.78 17.88 21.58 7.93 j 0.09 49 <0.78 >100 43.86 >100 50 <0.78 >100 20.34 >100 51 0.006 1.66 0.01 18.1 21.61 23.24 16.69 j 0.35 52 0.08 1.26 <0.78 12.53 >100 >100 10.66 0.45 53 <0.78 >100 >100 >100 54 1.98 <0.78 23.88 9.76 7.02 55 0.27 0.53 6.03 35.99 77.82 56 2.32 3.19 >100 10.03 7.11 1 1 57 0.06 7.98 >100 9.97 6.94 58 21.14 >100 >100 >100 59 <0.78 >100 >100 >100 60 1 <0.78 >100 >100 >100 61 <0.78 >100 >100 >100 62 8.00 8.32 >100 >100 >100 63 0.21 <0.78 8.59 >100 >100 1 64 0.55 <0.78 30.49 >100 >100 ί 65 0.37 1 <0.05 j >100 74.36 15.97 ! 66 <0.05 \ I >100 11.84 2.76 1 67 0.39 | 24.77 31.38 19.79 2.56 ί -236 - 本紙張尺度逋用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（234 )
Example bio flkGST IC50 (μΜ) bio FGFR1 IC50 (μΜ) bio PDGF IC50 (μΜ) bio EGi IC50 (μΜ) -cell EGF IC50 (μΜ) • Her2 Kinase IC50 (μΜ) cdk2spa C50 (μΜ) bio pyk2 IC50 _ .68 1.16 0.03 >100 23.52 34.13 69 0.3 56.55 >100 97.54 j >l〇〇 70 | 0.09 1.50 0.0030 10.57 6.42 7.99 12.62 0.63 71 15.21 22.5 >100 9.91 72 6.06 10.54 >100 39.94 9.65 73 5.95 14.12 >100 39.5 8.59 74 1.2 0.09 46.75 >100 75 2.7 61.55 >100 >100 76 '3.33 19.18 5.11 3.01 77 0.49 25.01 >100 >100 78 1.94 70.62 9.33 4.25 79 1.49 >100 27.39 >100 80 0.13 4.29 0.001 >100 50.19 17.19 0.28 81 0.21 0.18 >100 >100 82 2.03 7.69 6.88 >100 >100 0.31 83 0.34 0.41 9.46 2.18 86.9 0.008 84 1.38 12.51 67.2 5.86 0.006 85 0.2 0.8 2.59 >100 3.76 86 1.45 1.3 19.6 41.8 >100 3.58 87 3.27 7.56 6.46 >100 9.1 0.17 88 0.35 1.18 8.06 2.36 >100 0.09 89 7.84 47.58 8,53 9.67 15.97 115 7.3 7.48 >100 >100 0.006 116 >20 >100 >100 >100 <0.0005 117 0.91 12.9 >100 >100 0.006 118 1.93 1.2 >100 >100 0.002 119 1.38 61.63 >100 >100 <0.0005 活體内動物模式 異種移植物動物模式 人類腫瘤生長成無胸腺老鼠中之異種移植物（如Balb/c， -237 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 _____B7 五、發明説明（235 ) nu/nu)之能力，是研究人類腫瘤對治療之生物反應之有用 的活體内模式❶由於是人類腫瘤在無胸腺老鼠第一次成功 的異種移植（Rygaard and Povlsen，1969 Acta Pathol. Microbial. ScanH 77:758-760)，因此許多不同的人類腫瘤細 胞株（如乳房，肺，生殖泌尿，頭及頸，神經膠質，母細 胞瘤，骨骼及惡性黑色素瘤）已被移植且成功地在初生老 鼠中生長。以下分析法可用來決定活性水平，不同式（j) 化合物之特異性及作用。 在評估式（I)化合物上有三個一般分析法可使用：細胞/ 催化，細胞/生物及活體内。細胞/催化分析法的目的是決 定式（I)化合物對於T K在細胞已知受質上磷醯化酪胺酸能 力之作用。細胞/生物分析法的目的是決定式（J)化合物在 由細胞中τ K所刺激之生物反應上之作用。活體内分析法 之目的是決定式（I)化合物在特定失調症（如癌症）之動物模 式中之作用。 用於皮下異種移植實驗之適合的細胞株包括C 6細胞（神 經質瘤，ATCC # CCL 107)，A375細胞（黑色素瘤，ATCC # CRL 1619)，A431 細胞（類上皮癌，ATCC # CRL 1555)， Cain 6細胞（肺，ATCC # HTB 56)，PC3細胞（前列腺， ATCC # CRL 1435)，SKOV3TP5細胞及 NIH 3T3 纖維母細 胞，經遺傳工程可過度表現EGFR，PDGFR，IGF-1R或其他 任何受試之激酶，以下策略可用來進行異種移植實驗： 雌性無胸腺老鼠（BALB/c，nu/nu)得自Simonsen實驗室 (Gilroy, C A)。所有動物均在以α -射線乾燥塾草之乾燥空間 -238 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐）
線 1230609 A7 B7 五、發明説明（236 ) 狀況下之小型隔離籠子内。給予無菌處理之老鼠口糧，及 可自由飲水。 細胞株生長在適合的培養基（如MEM ’ DMEM ’ Ham's F10或Ham's F12加上5%-1〇%胚牛血清（FBS)及2 mM穀胺醯胺 (GLN))。所有的細胞培養基，穀胺酸及胚牛血清均購自 Gibco Life Technologies (Grand Island，NY)，除非另有所示 。所有細胞均在90-95%空氣及5-10% C02，37°C之潮濕大氣 下生長。所有細胞例常繼代培養一週二次，且以Mycotect 方法（Gibco)決定知為黴漿菌陰性。 細胞在呈融合狀或接近融合狀時，以0.05%胰蛋白酶-EDTA回收，並以450 X g離心1 0分鐘使成團塊。團塊再懸 浮於無菌的PBS或培養基中（無FBS)使達特定濃度，且細 胞移植入老鼠之後側腹（8-10隻老鼠一組，2-10 x 1〇6細胞/ 動物）。3至6週後測量腫瘤之生長，利用彎腳規測量。腫 瘤體積以生成物之長X寬X高來估算，除非另有所述。P值 利用史都頓t-試驗來計算。式（I)受試化合物在50-100微升 賦形劑中（DMSO，或VPD:D5W)可在不同濃度下以IP注射投 予，通常在移植後第1天開始。 腫瘤侵入模式 已發展以下的腫瘤侵入模式，並用於評估已鑑知可選擇 性抑制KDR/FLK-1受體之式（I)化合物之治療價值及效力。 步驟 以8週大之初生老鼠（雌性）（Simonsen Inc.)充作實驗動物 。腫瘤細胞之植入可在水平流動廚中進。以甲苯嘧畊/氯 ____ - 239 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 裝 訂
•4 1230609 A7 B7
胺酮摻合液（100毫克/公斤之氯胺酮及5毫克/公斤之甲苯4 畊）腹膜内投藥麻醉之。進行中線切開曝露出腹腔（長約^ $ 公分）注入107腫瘤細胞/100微升培養基。細胞注入胰臟之 十二指腸葉内或在結腸之漿膜下。腹膜及肌肉以6 _ 〇絲線 縫合，皮膚再以傷口鉗閉合。動物每天觀察其變化。 分析 、 2-6週後，依據對動物之大體觀察，犧牲老鼠，切除並 分析轉移至各種器官之局部腫瘤（肺，肝，腦，胃，脾， 心臟’肌肉）（測出腫瘤大小，侵入等級，免疫化學，在原 位雜交決定等）。 C-KIT分妍 此分析可用來偵測c-kit酪胺酸磷醯化作用之水平。 M07E (人類急性骨髓樣白血病）細胞在%血清中使血 清耗盡達一夜。在配體刺激前，細胞以式（〗）化合物預處 理（同時有血清之耗盡）^細胞以250毫微米/毫升rh-SCF刺 淚1 5分鐘。刺激後，細胞溶解並以抗-c-kit抗體免疫沈澱 。以西方墨點決定磷酸酪胺酸及蛋白質水平。 MTT增殖分折 M07E細胞使血清耗盡，並如磷酿化實驗所述般，以式 (I)化合預處理。細胞以4X1 〇5細胞/孔洞塗佈在96孔洞皿 中，於100微升RPMI + 10%血清+。加入rh-SCF (100毫微 克/毫升）並培育此盤4 8小時^ 4 8小時後，加入1 〇微升的5 毫克/毫升MTT [3-(4,5-二甲基嘍唑-2-基）-2,5-二苯基四銼 化鎮），並令其培育4小時。加入酸異丙酸（100微升的〇·〇4Ν __ - 240 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（238 ) HC1於異丙醇），並在550毫微米波長下測光密度。 細胞凋零分析 M07E細胞在+/- SCF及+/-式（I)化合物下，於加有化^]^ CSF (10毫微克/毫升）及rh-IL-3 (10毫微克/毫升）之1〇% FBS 中培育。在2 4及4 8小時時分析樣品。為偵測已活化之卡 斯蛋白酶-3，樣品以P B S洗滌，並以冰冷的70%乙醇通透 之。細胞再以P E -共軛之多株兔子抗-活性卡斯蛋白酶· 3染 色，並以FACS分析。為偵測的解離之PARP，將樣品溶解 再以抗-PARP抗體行西方墨點分析。 額外分析 可用來評估估式（I)化合物的額外分析法包括下列，但 不限於此：bio-flk-Ι分析法，EGF受體-HER2之嵌合受體 分析法（於完全細胞中），bio-src分析，bio-lck分析及彳貞測 r a f磷醯化功能之分析法。這些分析法各自之策略可見於 U· S· Application Ser· No· 09/099,842，其包括附圖，已列為 本案參考。 細胞毒性之偵測 治療性藥性在抑制受體酪胺酸激酶活性上，應較所展現 之胞毒性更具強度。由決定治療指數可得化合物效力及細 胞毒性之測度，即IC5〇/LD5〇，IC5〇，達到5 0 %抑制作用所 需之劑量，其可利用此中所述之標準技術偵測。LD5〇是造 成5 0 %毒性之劑量。也可以標準技術測得（Mossman，1983, J· Immunol· Methods, 65:55-63)，可偵測 LDH 釋出量 (Korzeniewski and Cellewaert, 1983, J. Immunol· Methods, • 241 - 本紙張尺度適用中國H家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐） 裝 訂
1230609 A7 B7 五、發明説明（239 ) 64:313，Decker and Lohmann-Matthes，1988，J. Immunol·
Me—ds，115:61)或測出動物模式中之致死劑量。以具大治 療心數之化合物為較佳。治療指數應大於2，較好至少i 〇 ，又較好至少5 0。 B ·利用5_(5_氟-2 -酮基- i，2-二氫亞啕哚_3 -基甲基）_2,4-二甲 基-1H-吡咯-3-羧酸（2-二乙胺基-乙基）醯胺（化合物8〇)之 細胞分析結果實例 為了證實5-(5·氟-2-酮基-1，2-二氫亞4丨哚-3-基甲基）- 2.4- 二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2·二乙胺基-乙基）醯胺（化合物 8 0 )在生化分析中所測及之效力，因此在以細胞為基礎之分 析中評估該化合物抑制配體-依賴之RT K磷醯化作用之能 力’其中採用經遺傳工程可過程表現Fik-l或人類PDGFRp 之NIH-3T3老鼠細胞^ 5-(5-氟-2 -酮基-1,2-二氫亞吲哚-3 -基甲基）-2,4-二甲基-1H-吡咯-3 -羧酸（2 -二乙胺基·乙基）醯 胺（化合物8 0)以約〇·〇3 μΜ之IC5。值可抑制與VEGF-有關之 Flk-Ι酷胺酸磷醯化作用。此數值和5-(5_氟-2-酮基-^-二 風亞卜木-3-基甲基）-2,4-二甲基-lH-p比哈-3-幾酸（2-二乙胺 基-乙基）醯胺（化合物8 0)在生化分析中抑制Flk-Ι所得之 0.009 μΜ Ki值相似。此顯示5-(5-氟-2-酮基-1，2-二氫亞岣 嗓-3 -基甲基）-2,4·二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2 -二乙胺基-乙 基）醯胺（化合物8 0 )可容易地穿透至細胞。和生化數據符合 (見下文）顯示5-(5·氟-2 -酮基-1，2-二氫亞吲哚-3 -基甲基）- 2.4- 二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2-二乙胺基-乙基）醯胺（化合物 80)在拮抗Flk-Ι及PDGFRp上有比得上之活性，也發現，其 -242 - 本纸張尺度適用中國固家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 ____— B7 五、發明説明（24〇 ) 以約0·03 μΜ之IC5〇值可抑制細胞中PDGF·有關之受體磷醯 化作用。5-(5-氟-2-酮基-1，2-二氫亞吲哚-3-基甲基）-2,4-二 甲基-lHw比咯-3-羧酸（2-二乙胺基-乙基）醯胺（化合物8〇) 抑制之能力利用可表現此受體之M07E細胞決定，此c-kit是 可與幹細胞因子（SCF)結合之極相關之RTK。此化合物也可 抑制由病人週邊血液中所分離出之急性骨髓樣白血病 (AML)母細胞中由SCF-刺激之c-kit磷醯化作用。 除了測試5-(5-氟-2 -酮基-1，2-二氫亞吲哚-3 -基甲基）-2,4-二甲基-1H-吡咯-3·羧酸（2-二乙胺基·乙基）醯胺（化合物） 抑制細胞中與配體-有關之受體磷醯化作用之能力外，也 於活體内檢查細胞對配體-有關之增殖反應上之作用（見表 4)。在這些研究中，由血清耗盡一夜使細胞休眠，而在加 入適合的有效分裂配體上可誘使其進行DNA合成。如表中 所示，3,5-(5-氟-2-酮基-1，2-二氫亞吲哚-3·基甲基）-2,4-二 甲基-幾酸（2 -二乙胺基-乙基）酿胺（化合物8〇) 分別以0·03 1及0.069 μΜ之IC5〇值可在過量表現PDGFRp或 PDGFRoc之NIH-3T3細胞中，抑制由PDGF-誘生之增殖，而以 0.007 μΜ之ICm值可抑制SCF-誘生在M07E細胞中之增殖作 用0 243 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7 五、發明説明（241 ) 表3 生化 細胞IC50 受體 Κι1 受體 配體-有關之增 (μΜ) 磷醯化作用（μΜ) 殖作用（μΜ) Flk-1/KDR 0.009 0.032 0.0043 PDGFRa 0.008 0.034 0.0314 PDGFRp ND ND 0.0695 FGFR 0.83 ND 0.73 c-kit ND 0.01-0.I6 0.0076 ND =未決定 1利用重組體素決定 2利用可表現Flk-Ι之血清耗盡之NIH-3T3細胞決定 3利用血清耗盡之HUVECs決定 4利用可表現PDGFRa之血清耗盡之NIH-3T3細胞決定 5利用可表現PDGFRP之血清耗盡之NIH-3T3細胞決定 6利用血清耗之M07E細胞決定_ 如表3所示，在5-(5-氟-2-酮基·1，2-二氫亞啕哚-3-基甲 基）-2,4-二曱基-1Η-吡咯-3-羧酸（2-二乙胺基-乙基）醯胺（化 合物8 0)之生化及細胞活性間有一致的符合可支持以下結 論，即此化合物可穿越細胞膜。再者，可結論細胞反應是 化合物8 0拮抗所示標靶之活性結果。相反的，當於試管内 之完全生長培養基下測試時，為抑制各種人類腫瘤細胞之 生長，常需較高濃度之5-(5-氟-2-酮基-1,2-二氫亞㈤哚-3-基甲基）-2,4-二甲基-1H·吡咯-3-羧酸（2-二乙胺基-乙基）醯 胺（化合物80)(>10 μΜ)(見表4)。此顯示，化合物在抑制 -244 - 本紙張尺度逋用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 裝 訂
1230609 A7 B7 五、發明説明（242 ) 配體-有關之受體磷醯化作用及細胞增殖所需之濃度下 並不會直接抑制這些細胞之生長0 表4 細胞株 來源 IC5〇 (μΜ) LDso (μΜ) HT29 結腸癌 10 22 A549 肺癌 9.5 22 NCI-H460 NSC肺癌 8.9 20 SF767T 神經膠質瘤 7.9 14 A431 類上皮癌 6.0 18 簡言之，示於表4之結果係將細胞於5-(5-氟-2-酮基-1，2-二氫亞朵-3-基甲基）-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2-二乙 胺基-乙基）醯胺連續稀釋液存在下，於完全生長培養基中 培育4 8小時而得。在生長期末了，決定細胞之相對數目。 以化合物抑制細胞生長達未處理細胞之5 〇 %之濃度為IC5〇 值。LDw值為和實驗之初相較下，細胞數目5 〇 %減少之化 合物濃度。 評估5-(5-氟-2-酮基-1，2-二氫亞啕哚_3_基甲基）-2,4-二甲 基-1H-说洛·3-幾酸（2-二乙胺基-乙基）醯胺（化合物8〇)抗一 血管生成效力的一個較相關的與細胞為基礎之分析法是於 試管内之有絲分裂發生分析，其中以人類臍靜脈内皮細胞 (HUVECs)為模式系統，應用於血管生長過程中具關鑑性之 内皮細胞增殖作用。在此分析中，一旦加入VEGF或FGF， 可在血清-耗盡之HUVECs中誘生有絲分裂反應，此可由 -245 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公I) 1230609 A7 B7 五、發明説明（243 ) DN A合成增加測出。在這些細胞中，5-(5·氟_基-1 2-二氫亞吲嗓-3 -基甲基）-2,4-二甲基-1H-吡哈-3 -幾酸（2 ·二乙 胺基-乙基）醯胺（化合物8 0)當在4 8小時分析中全程存在時 ，其分別以0.004 μΜ及0·7 μΜ之IC5G值，以劑量·有關方式 抑制VEGF-及FGF-誘生之有絲分裂反應。 簡言之，利用血清-耗盡之HUVECs可得上述結果，其在 5-(5 -氟-2-酉同基-1，2 -二氫亞4丨嗓-3-基甲基）-2,4 -二甲基-H p比 咯-3-羧酸（2 -二乙胺基-乙基）醯胺（化合物8〇)存在下（連 續稀釋液）與有絲分裂濃度之VEGF (100亳微克/毫升）或 FGF ( 3 0毫微克/毫升）共培育2 4小時。在以下2 4小時中， 於配體及抑制劑存在下可定量有絲分裂反應，其中依據激 去氧尿苷納入細胞D N A為基礎偵測D N A之合成而定量之。 在分別的實驗中，化合物8 0可以劑量一有效方式，抑制 ERK 1/2 (p42/44MAP激酶）之VEGF-有關的磷醯化作用，此 為Flk-1/KDR之早期下游標乾。化合物8 〇之抑制活性也示 出其在此系統中是長效的；即自培養基中移去氟^ - 2 -酮基-1，2-二氫亞啕哚·3 -基甲基）-2,4-二甲基-1H-吡咯-3 -羧 酸（2 -二乙胺基-乙基）酿胺（化合物8 〇 )，再短暫（2小時）曝 露於微莫耳濃度化合物下，則抑制ERK 1/2之VEGF-有關之 磷醯化作用可長達4 8小時。 VEGF已被鑑知是内皮細胞重要的存活因子Q由於5-(5-氟-2 -酮基-1,2-二氫亞吲哚-3 -基甲基）-2,4·二甲基-1H-外I：哈-3-羧酸（2-二乙胺基-乙基）醯胺（化合物8〇)可抑制HUVECs 之VEGF-有關之有絲分裂反應，可檢視化合物在HUVEC# -246 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐）
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活上之作用。在這些實驗中，卡斯蛋白酶3受質聚_AD卜核 糖基聚合酶（PARP)之解離可作為細胞凋零之讀值指示。 HUVECs培養在無血清條件下24小時可呈現相當程度之 PARP解離’此可由23 kDa pARp解離片段之累積測出。此 可由VEGF加至細胞培養基中而大部份預防，顯示vEGF在 此^析中是充作存活因子。已示出，5_^氟酮基 二氳亞吲哚-3·基甲基）-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸（2_二乙 胺基-乙基）醯胺（化合物80)可抑制〖1)11傳訊。因此，5· (5 -氟-2 ·酮基-1,2-二氫亞吲哚-3 -基甲基）·2,4·二甲基-1H-吡 嘻-3 -竣酸（2 -二乙胺基-乙基）醯胺（化合物8〇)可以劑量_ 依賴方式抑制VEGF-調介之HUVEC存活。因此，這些數據 顯π，化合物在VEGF存在下之培養中，可減少内皮細胞 之細胞凋零。 C·活體内效力研究 i ·拮抗已發現之腫瘤異種移植物之效力 在皮下（SC)異種移植物模式中研究5-(5·氟-酮基」，2_二 氫亞啕嗓-3 ·基甲基）-2,4-二甲基-lH-p比洛_ 3 -幾酸（2 -二乙胺 基-乙基）醯胺（化合物8 0 )之活體内效力，其中利用植入無 胸腺老鼠後側腹區之人類腫瘤細胞。植入後，在以化合物 開始口服治療前’令腫瘤先發展至100 — 550毫米3大小。 當腫瘤生長至400毫米3後開始治療，則每天口服化合物 80可造成A431腫瘤生長之劑-；f目關之抑制作用。在4〇毫克 /公斤/天（74%抑制作用）及80毫克/公>/天（84%抑制作用） 之劑量下可見腫瘤生長具統計上有意義（Ρ<0·05)之抑制作 -247 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐)
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線 1230609 A7 B7 五、發明説明（245 ) 用（見表6)。在初步實驗中，較高劑量之化合物（16〇毫克/ 公斤/天）在拮抗已發展之A431腫瘤上並不較8〇毫克/公斤/ 天之劑量更為有效。此外，老鼠以16〇毫克/公斤/天劑量之 化合物處理會減重，顯示較高劑量也無法耐受。在其中令 A431腫瘤達到1〇〇毫米3大小之實驗中，可得類似的結果（見 表4)。在此第二貫驗中，接受8〇亳克/公斤/天歷η天的8 隻動物中有6雙會發生腫瘤之完全消退。此六隻動物中， 在治療末了後又110天觀察期間，腫瘤並未有生長。在其 中腫瘤再生長至大體積（2000-3000亳米3)之二隻動物，因反 應化合物8 0第二輪之治療故腫瘤消退。很重要地，在所有 效力實驗中’ 80毫克/公斤/天之5_(5•氟_2_酮基·丨，2•二氫 亞巧嗓-3-基甲基）-2,4-二甲基-1H-吡咯_3-羧酸（2-二乙胺 基-乙基）醯胺（化合物80)可被充分耐受，即使繼續給藥達 1 0 0天以上。
表5 最初腫瘤體 化合物1 抑制％ Ρ-值 (毫米3) (毫克/公斤/天） (天） 80 84 (36、 0.001 400 40 74 (36) 0.003 20 51 (36) 0.130 80 93 (40) 0.002 100 40 75 (40) 0.015 1 》人此Ο Λ 10 61 (40) 0.059 訂
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簡言之’示於表5之結果係利用A43i細胞所得（〇·5 x 106 細胞/老鼠）’其皮下植入無胸腺老鼠之後側腹區。當腫瘤到 達所不之平均體積時，可每天口服5-(5_氟-2_酮基二氫 亞巧嗓-3-基甲基）-2,4-二甲基-1H-吡咯-3 -羧酸（2 -二乙胺基-乙基）醯胺（化合物8 〇 )於以聚氧乙烯蓖麻油（Crem〇ph〇re)e 為基礎（溶媒中，或溶媒對照組。利用彎腳規來測出腫瘤 ，再以生成物長X寬X高來估算出腫瘤體積。p值之估算是 將接受化合物80之動物腫瘤大小（n==8)與接受溶媒者 (n=16)比較，在實驗最後天時利用史都頓卜試驗進行。 利用C〇1〇205 (結腸癌），SF763T (神經膠質瘤）及Να_ Η460 (非小細胞肺癌）異種移植物（見表6 )可決定化合物8 〇 拮抗不同來源之人類腫瘤之效力。這些實驗利用5_(5-氣 2-酮基-1,2-二氫亞吲哚-3-基甲基）-2,4-二甲基啥·3幾 酸（2 -二乙胺基-乙基）醯胺（化舍物8 0 )進行，以8 〇毫克/八 斤/天口服；此劑量是有效且可被充份耐受。 表6 腫瘤 最初腫瘤 ---—-- 抑制％ ——_ P-值 型式 體積（毫米3) (天） A4311 類上皮 100 93 (40) 〇 〇〇9 A4311 類上皮 400 84 C〇1〇205 結腸 370 77 (54) --—-- ^^028 NCI-H460 肺 300 61 (54) 0.003 SF763T 神經膠質瘤 550 53 (30) -___ 0.001 數據得自表5之實驗報告 -249 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1230609 A7
1230609 A7 B7 五、發明説明（248 ) ± 5.7。由相關之腫瘤生長遏止中所預期的，腫瘤細胞增殖 之顯著抑制作用可在化合物8 0處理腫瘤中證知。在溶媒處 理腫瘤中，其有絲分裂指數僅有一半（數據未示出）。化合 物8 0在MVD及腫瘤細胞增殖上之作用顯示，化合物即使在 腫瘤並未被消退之狀況下，有顯著的抗-血管生成及抗·腫 瘤作用。 也可在表現高水平PDGFRp之SF763T腫瘤上評估化合物 8 0抑制PDGFR磷醯化作用及接下來之活體内傳訊之能力。 SF763T腫瘤以化合物80處理，可在已發展之SF763T腫瘤中 強烈抑制PDGFRp酪脍酸磷酸化作用。化合物8〇也可減低磷 醯化（活化型）磷酸脂酶Cy (PLC-γ)之水平，此為PDGFR活 化作用之立即下游指示劑。這些數據顯示，口服化合物8 〇 可於活體内造成腫瘤標靶（PDGFR)活性之直接作用。， 依據化合物80於試管内抑制HUVECs之VEGF-有關之傳 訊之能力是長效的之證明（見上文），因此也估評化合物在 C〇1〇205腫瘤模式中非頻繁投藥之效力。如表7所示，當每 天投藥時，8 0毫克/公斤（9 1 %抑制）及4 0毫克/公斤（8 4 % 抑制）是有效的，但每週二次則否《相反的，化合物8 〇之 較高劑量（160毫克/公斤）當每週投予二次確可抑制已展之 C〇1〇205腫瘤之生長（52%抑制），推知，此化合物當以較高 劑量非頻繁投藥時可證明是有效的。應注意到，在無不當 實驗下由精藝者可決定给藥療程。 ____- 251 - 本纸張尺度適财a S家標準(CN^ A4規格(21()X297公^7 裝 訂
線 1230609 A7 B7 五、發明説明（249 ) 表7 劑量 頻率 抑制％ Ρ-值 (毫克/公斤） 1 60 每週二次 52 0.085 每週一次 17 NS 80 每天 91 0.039 每週二次 19 NS 每週一次 0 NS 40 每天 84 0,028 每週二次 36 NS NS :無意義（ρ>〇·〇5)
簡吕之’表7所示之結果是利用c〇l〇205細胞所得（〇·5 X 1〇ό細胞/老鼠），其中SC植入無胸腺老鼠之後侧腹區。當 腫瘤到達400毫米3時，依據所示療程開始口服化合物8〇。 利用f腳規測量腫瘤，再以生成物之長xtx高計算出腫瘤 體積。於實驗最後一天比較以化合物8 〇處理之動物腫瘤大 小與接受落媒動物之大小，利用二尾式史都頓t _試驗來求 出。 ii·化合物8 0在播散性疾病模式中之效力 血ΐ生成除了支持固庇原發腫瘤之持續生長外，也是支 持由原發腫瘤轉移之播放性疾病發展之基本組份。在Βΐ6_ F1細胞經由尾靜脈接種至無胸腺老鼠，使其群落在肺中並 形成腫瘤。如表7所示，口服8 〇毫克/公斤/天之化合物8 〇 __ - 252 - 本紙張尺度適用t a S家標準(CNS) Α4規格(21〇 χ 297公爱） 1230609 A7 B7 五、發明説明（250 ) - 可有效減少肺中B16-F1細胞之負擔，此可由測量肺部總重 而評估。這些數據推知，化合物80可於活體内抑制播=性 疾病。 表8 肺重量（克） 抑制％ --：- P -值 溶媒 0.83 ± 0.07 r - 0 化合物1 0·41 ± 0·04 50 <0.001 1化合物8 0 簡言之，表8之結果是將B16-F1腫瘤細胞（5 X 1〇5個細胞/ 老鼠）經由尾靜脈接種至無胸腺老鼠中所得。老鼠每天口 服80毫克/公斤/天之化合物80 (n=l〇)或溶媒（n==18),於腫 瘤細胞接種後進行24天。在實耠期末了。殺死老鼠再取出 其肺部並稱重。將接受化合物8 〇動物之肺重量與只接受溶 媒者之肺重量比較，可估算出抑制百分率。利用二尾式史 都頓t -試驗來決定出P -值。 II. COX-2抑制劍 利用下述之路易氏肺模式可測試COX-2抑制劑延緩腫瘤 生長之能力。 老鼠在右掌皮下注入（1χ 106腫瘤細胞懸浮在30% Matrigel) ，再利用血管充盈度計每週二次評估腫瘤體積共3 0 - 6 0天 。在2 4小時策略實驗中抽血二次，以評估血漿濃度，並以 AUC分析總曝露量。數據以平均值+/- SEM表示。使用史 都頓及Mann-Whitney試驗，利用InStat軟體評估平均值間之 -253 - 本紙張尺度適用中國國家棵準(CNS) A4規格(210X297公釐)
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線 1230609 A7 B7 五、發明説明（251 ) 差異。在飲食中給予160-3200 ppm之希樂葆（celec〇xib)可延 緩這些腫瘤之生長。希樂葆之抑制作用是和劑量有關的， 且和對照腫瘤比較下範圍中4 8 %至8 5 %。在所有動物中進 行肺轉移之分析，係在立體顯微鏡中計數轉移及在連、續的 肺切片中進行組織化學分。希樂葆在16〇 ppm之低劑量下 不會影響肺轉移，然而當給予480-3200 ppm劑量，表面轉 移可減少達5 0 %以上❶此外，組織病理學分析顯示，布樂 葆可以劑量-有關方式減低肺中轉移傷害之大小。 2.HT-29 模式： 老鼠自左掌皮下注入（lx 106腫瘤細胞懸浮在3〇% Matrgel 中，再利用血管充盈度計每週二次評估腫瘤體積，歷3〇-60天。將人類結腸癌細胞（HT-29)植入初生老鼠，在3〇-5〇 天間可產生達到0.6-2毫升之腫瘤。在2 4小時策略中於實驗 期間抽血二次，以評估血漿濃度，再以AUC分析測出總曝 露量。數據以平均值+/- SEM表示。使用史都頓及Mann-Whitney試驗來評估平均值間之差異，其中使用InSut套裝 軟體。 A ·以HT-29癌細胞注入之老鼠，在飲食中含有或不含有 希樂ί呆下’於第5 ’ 7及9天時，i.p給予50毫克/公斤之癌 得星（cytoxin)。由測量腫瘤體積來決定二作用物之效力。 利用希樂葆有關之COX-2抑制、劑（SC-58236)治療可減小腫瘤 體積達8 9 % ^在相同的分析中，在飲水中給予消炎痛最接 近最大耐受之2毫克/公斤/天劑量，可抑制腫瘤形成達 7 7 %。再者’ COX-2選擇性抑制劑可完全抑制肺轉移之形 __________- 254 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A7 B7
成，而非選擇性NS AID-消炎痛則是無效的。由這些研究結果 證明，將希樂葆投予在有腫瘤老鼠之飲食中，备二^、 療方式投予時可延緩腫瘤之生長及轉移。再者，a : $ 备布樂樣 與胞毒劑，如環磷醯胺，共同投予時可觀察到正面益處 B ·在第二個分析中，注入HT-29結腸癌細胞之老藏在第 10天於飲食中開始希樂葆（10 , 40或16〇卯叫之治療队可$ 察到接近劑量相關之作用（表9 )。 表9 ·抑制HT-29人類結腸癌
體積（毫升） III·利用蛋_鱼_質激酶組合以環氧酶-2選搔彳^赶^劑治療癌 症之活體内分析法 一 可在下述之1483異種移植物模式中測試蛋白質激酶抑制 劑組合以COX-2選擇性抑制劑，延緩腫瘤生長之能力。 1483異種移植物是一種效法人類上皮癌之動物異種移植 物，其在腫瘤細胞及在血管組織中會表現環氧酶·2 (c〇x· 2) 〇 -255 - 本紙張尺度適用中國S家棵準(CNS) A4規格(210 X 297公釐）
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1230609 A7 B7 五、發明説明（253 ) 頭及頸部鱗狀細胞癌（1483細胞株）之人類腫瘤異種移植 物初生老鼠模式，其可在腫瘤細胞及血管組織中表現COX-2，類似人類上皮癌，吾等咸信此模式代表人類上皮癌，且 是將抗癌藥物（包括COX-2抑制劑）之效力與在人類中之效 力使互有關聯之良好模式。 材料及方法： 細胞培養· 1483人類頭及頸鱗狀細胞癌（HNSCC)細胞貯放在冷凍小 瓶内，其中含有3x 106個細胞，90%胚牛血清（FBS)及10% 二甲亞颯（DMSO)。取出冷凍瓶，並在3 7 °C下快速解凍， 再置T-162公分2 (Corning)燒瓶内，其中含有D-MEM/F12培 養基（GibcoBRL)並加上15 mM Hepes緩衝溶液，L-鲮胺醯 胺，说哆醇鹽酸鹽及10% FBS。細胞在5% C02及37°C下生 長及培育。每兩天更換培養基一次，細胞於呈80-90%融合 ·, 狀時換盤。於轉移細胞時，以1 0毫升磷酸鹽緩衝食鹽水 (PBS)洗條，吸出，再加2毫升胰蛋白酶/EDTA (0·25%/1 mM，GibcoBRL)置回培育箱，5分鐘後細胞剝離。將上述培 養基8毫升加至燒瓶中潤洗，再轉移至無菌的5 0毫升離心 管内。加入3 0毫升更多的培養基，混合，再以血球計數器 計數細胞，將之塗佈於T-162公分2燒瓶内，計3-4 X 106個細 胞。 1483動物模式： 在回收1483細胞注入初生老鼠前24小時更換培養基。如 上述，在細胞培養段般胰蛋白酶化1483細胞。計數細胞並 -256 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)
訂
線 1230609 A7 B7 五、發明説明（254 ) 決定細胞數目。以1000 rpm在室溫下離心5分鐘。以Hank 氏緩衝之鹽水溶液（HBSS，Gibco BRL)再懸浮細胞團塊並匯 集假若有多個5 0毫升離心管至一個5 0毫升離心管，並如 前述般離心。可能需約2 5 %以上的細胞，之後注入較多的 細胞。若注入7 2隻老鼠，可能需1〇〇 X 1〇6個細胞，準備所 有欲注入老鼠之細胞。每隻老鼠注入〇.〇3毫升計1 X 1〇6細 胞的1483細胞。 細胞之注射是加在 30% Matrigel (Collaborative Biomedical Products)及 70% HBSS 中。先以 2.1 毫升（70%)冷的 HBSS 懸 浮所匯集之團塊。加入0.9毫升（3 0 % )經解凍液化，冷的 Matrigel，在冰上充份混合《此時細胞製劑全程保持在冰上 。研究中採用4 - 6週大雄性初生老鼠（Harlen)。以C02/02氣 體麻醉，再利用0.5 cc結核菌素注射器注入老鼠右後掌中 (Beckerson & Dicekerson)。注射曰（第〇天）稱重，以為開始 研究之基礎體重。第7天稱重，利用血管充盈度計（Stoelting Co·)測出在右後掌中腫瘤之體積。血管充盈度計，是一種 以水置換方式來測量掌中體積的一種設備。也測量右側未 注射之掌，求平均值以為背景而可自右側腫瘤中扣除。 當腫瘤大小到達100-200微升時，動物擺上含有本案化合 物之口糧，且在整個研究中繼績此化合物餐。某些化合物 只給蛋白質激酶抑制劑或環氧酶-2選擇性抑制劑。某些老 鼠給予蛋白質激酶抑制劑及環氧酶-2選擇性抑制劑，依據 試管内分析結果決定每天給予適合劑量。 在第7，10，14，17，21，24及28天時對老鼠稱重及偵測 257 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 _ A7 ------------B7 五、發明説明（^ ----- 於弟〇天開始化合物之治療（預防性）或於約第7天開始有 腫瘤發展時給予（治療性）。約3 0天時，、給予溶媒（對照組） 足老鼠有較大的腫瘤（約1·〇-1·5亳升），並開始減低重量， 匕寺中止以落媒處理之動物。若在處理組見到腫瘤受制， 且其有良好之健康狀況，則安樂死一半的處理組動物，並 保持半處理組動物存活，以決定腫瘤生長之延緩情況。 精藝者也應容易地明白，本發明可予以改編以進行目的 並獲得所述之結果及優點，以及此中所述的。此中所述 之刀子複合物及方法，步驟，治療，分子，特殊化合物為 目前較佳之具體實巧代表。且不應因此限制本發明範圍。 此中的變化及其他用法對精藝者而言是顯而易見的，均包 括在本發明精義之内，且為所附之申請專利範圍所定義。 精藝者應明白，此中所揭示的只要不偏離其範疇及精義 ’可有各種取代及修飾。 在本說明書中所述之所有專利及刊物，均為參與本案者 所明示的。此中列為參考之所有專利及刊物均如同個別刊 物般特異且個別地為本案參考。 -258 -
Claims (1)
- 118425號專利申請案 諳專利範圍替換本(93年U月）品 A8 B8 專利範圍 1 · 一種用於治療或預防癌症之醫藥組合物，其中含有治 療有效劑量之： 式（I)蛋白質激酶抑制劑： . R3裝 其中： 訂 R選自下列包括氫，哌畊-1 _基甲基，4 -甲基哌畊-1 -基甲基，哌啶-1 -基甲基，2 -羥甲基吡咯啶-1 -基甲 基，2 -羧基吡咯啶-1 -基甲基，及吡咯啶-1 -基甲基； R1選自下列包括氫，.鹵，烷基，經取代的烷基，環烷基 ，經取代的環烷基，芳基，雜芳基，雜脂環族，羥基， 烷氧基，-C(0)NR8R9，-NR13R14，-C(0)R15，及-(CH2)rR16 R2選自下列包括氫，鹵，燒基，經取代的燒基’三鹵 甲基，羥基，烷氧基，氰基，-NR13R14，-NR13C(0)R14 ，-C(0)R15，芳基，雜芳基，及-S(0)2NR13R14 ; R3選自下列包括氫，鹵，烷基，經取代的烷基，三鹵甲 基，羥基，烷氧基，芳基，雜芳基，-NR13R14，-NR13S(0)2R14 ，-S(0)2NR13R14，-NR13C(0)R14，-NR13C(0)0R14， 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 歆 C8 _______ _ D8 ______ 六、申請專利範圍 -(C0)R15 , A-S02R19 ; R4選自下列包括氫，鹵，烷基，經取代的烷基，羥基 ，烷氧基及-NR13R14 ; R5選自下列包括氫，燒基，經取代的燒基，及-C(0)R1G ; R6選自下列包括氫，烷基，經取代的烷基，及-C(0)RiG R7選自下列包括氫，烷基，經取代的烷基，芳基，雜 芳基，_C(0)R17，及-C(0)R1G，限制條件為當R是氫’則 R5’R6及R7至少一者是-C(0)R1G;或 R6及R7可組合形成選自下列之基團，包括-(CH2)4-， -(CH2)5-及-(CH2)6-; R8及R9獨立選自下列包括氫，烷基，經取代的烷基， 及芳基； R1G選自下列包括羥基，烷氧基，芳氧基，-N(Rn)(伸烷 基）nR12，其中伸烷基視所需為羥基所取代，及-NRUR14 ; R11選自下列包括氫.，烷基及經取代的烷基； R12選自下列包括-NR13R14，羥基，-C(0)R15 ’芳基’ 雜芳基，-N+(〇-)R13R14，_N(OH)R13，及-NHC(0)R18 (其 中R18是燒基，經取代的貌基，鹵燒基，或芳燒基）； R13及R14獨立選自下列包括氫，烷基，經取代的烷基 ，低碳烷基及羥烷胺基所取代，氰烷基，環烷基’經 取代的環燒基，芳基及雜芳基；或 R13及R14可組合形成雜環基； R15選自下列包括：氫，羥基，烷氧基及芳氧基； R16選自下列包括：羥基，-NR13R14，-C(0)R15，及 -2 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公羡) A8 B8 C8 D8 1230609 六、申請專利範圍 -(〇)NR13R14 ； R17選自下列包括烷基，經取代的烷基，環烷基’芳 基及雜芳基； R19選自下列包括烷基，經取代的烷基，芳基，芳垸 基，雜芳基，或雜芳烷基；且 η及r是獨立的1，2，3或4 ; 並組合以環氧酶抑制劑； 或其藥學上可接受之鹽； 其中： π烷基’f指飽和的脂族烴基團，包括1至2 0個碳原子 之直鏈及分支鏈基； ”經取代的烷基”表示如上定義之烷基，為一或多個 獨立選自下列的基團所取代，包括：自，羥基，低碳 烷氧基，芳基（此芳基視所需為一個以上基團所取代， 較好為一，二或三個基團所取代，該取代基互相獨立 為鹵，羥基，低碳烷基或低碳烷氧基），芳氧基（此芳 氧基其視所需以一個以上基團所取代，較佳為一，二 或三個基團所取代，該取代基互相獨立為鹵，羥基， 低碳烷基或低碳烷氧基），6 -員雜芳基（此6 ·員雜芳基 在其環中具有1至3個氮原子，在環中之碳視所需為一 個以上基團所取代，較好一，二或三個基團，其互相 獨立是||，羥基，低碳烷基或低碳烷氧基），5 -員雜芳 基（此5 -員雜芳基具有1至3雜原子選自下列包括氮，氧 及硫，在此基團中之碳及氮原子視所需為一個以上的 -3 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 έ88 C8 _ D8 六、申請專利範圍 基團所取代，較好一，二或三個基團，其互相獨立為 鹵，羥基，低碳烷基或低碳烷氧基），5 -或6 -員雜脂環 基（此5 -或6 -員雜脂環基具有1·至3個雜原子選自由氮， 氧及硫組成之群，在此基團中之碳及氮（若存在時）可 視所需為一個以上基團所取代，較好一，二或三個基 團，其互相獨立為鹵，羧基，低碳烷基或低碳烷氧基） ，銃基，（低碳烷基）基，芳碎L基（此芳At基視所需為 一個以上基團所取代，較好一，二或三個基團，其互 相獨立為自，羥基，低碳烷基或低碳烷氧基），氰基， 醯基，硫酿基，0 -胺甲酿基，N -胺甲酸基，Ο -硫胺甲 醯基，N-硫胺甲醯基，C-醯胺，基，N-醯胺基，硝基， N -磺醯胺基，S_ 磺醯胺基，Ri8s(〇)-，Ri8s(〇)2- , _ C(0)0R18，R18C(0)0-及-NR18R19，其中 R18 及 R19獨立選 自由氫，低碳烷基，三鹵甲基，（C3-C6)環烷基，低碳 晞基，低碳块基及芳基組成之群（該芳基視所需為一個 以上基團所取代，較好是一，二或三個基團其互相獨 立為||，羥基，低碳烷基或低碳烷氧基）； ’’環烷基’’指3 - 8員全碳單環，全碳5 -員/ 6 -員或6 -員 / 6 -員稠合的二環，或多環稠合環，其中一個以上的環 可含有一個或多個的雙鍵，但無一環有完全共輛的P i -電子系統，其中稠環系統指該系統中每一環與該系統 中之另一環共同相鄰之雙碳原子； ”經取代的環烷基’’表示如上定義之環烷基，其為一 個以上更佳為一或二個取代基所取代，該取代基係獨 -4 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇 X 297公釐) 1230609 έ88 C8 ^_ D8 六、申請專利範圍 立選自下列基團，其包括低碳燒基，三鹵燒基，函， 羥基，低碳烷氧基，芳基（此芳基視所需以一個以上， 較好一或二個基團所取代，其互相獨立為卣，幾基， 低碳fe基或低碳燒氧基）’芳氧基（此芳氧基視所需為 一個以上，較好一或二個基團所取代，其互相獨立為 鹵，羥基，低碳烷基或低碳烷氧基），6 -員雜芳基（此 6 -員雜芳基在環中有1至3個氮原子，環中之碳可視所 需為一個以上，較好一或二個基團所取代，其互相獨 立為函，經基，低破烷基或低碳烷氧基），5 -員雜芳基 (此5 -員雜芳基具有1至3個雜原子，選自由氮，氧及硫 組成之群，基團中之碳及氮原子視所需為一個以上， 較好一或二個基團所取代，其互相獨立為鹵，羥基， 低碳坑基或低碳燒氧基）’ 5 -或6 -員雜脂壤（此5 -或6 * 員雜脂環具有1至3個雜原子選自由氮，氧及硫組成之 群，在基團之碳及氮（若存在）原子可視所需為一個以 上，較好一或二個基團所取代，其互相獨立為鹵，幾 基，低碳烷基或低碳烷氧基），銃基，（低碳烷基）硫基 ，芳硫基（此芳硫基視所需為一個以上，較好一或二個 基團所取代，其互相獨立為iS，羥基，低碳烷基或低 碳烷氧基），氰基，醯基，硫醯基，Ο -胺甲醯基，N -胺甲醯基，Ο -硫胺甲醯基，N -硫胺甲醯基，C -醯胺基 ’ N ·酿胺基’硝基’ N -橫酿胺基’ S -績醒胺基’ R18S(0)-，R18S(0)2-，-C(0)0R18，R18C(0)0-，及-NRUR19如上文所定義； -5 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609 A8 B8 C8Π芳基’’指1至1 2個碳原子之全碳單環或稠合環多環 基團並有完全共軛的p i -電子系統； Π雜芳基’’指5至1 2個環原子之單環或稠合環，含有 一，一或三個環雜原子選自Ν，〇或s，其餘的環原子 係C且此外具有完全共輛的p i -電子系統；及 ”雜脂環”指具5至9環原子之單環或稠合環基團，其 中一或二個環原子是選自N，〇或3(〇)11 (其中n是由〇至 2之^數）之雖原子’其餘的環原子是匚且雖該環會有一 或多個雙鍵，環無完全共軛的p i _電子系統。 2. —種治療或預防癌症之醫藥組合物，其中含有治療有 效劑量之·· 式（I)蛋白質激酶抑制劑：裝訂其中： R選自下列包括氫，哌畊-1 -基甲基，4 -甲基哌畊-1 -基甲基，哌啶-1 -基甲基，2 -羥曱基吡咯啶-1 -基甲 基，2 -羧基吡咯啶-1 -基甲基，及吡咯啶-1 -基甲基； R1選自下列包括氫，i，烷基，經取代的烷基，環烷基 -6 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 έβ8 C8 D8 ___ 六、申請專利範園 ，經取代的環烷基’芳基’雜芳基’雜脂環’經基’燒 氧基，_c(〇)NR8R9，-NR13R14，-C(0)R15及-(CH2)rR16 ; R2選自下列包括氫，鹵，燒基’經取代的燒基，三鹵 甲基，羥基，烷氧基，氰基，-NR13R14，-NR13c(〇)R14 ，-C(0)R15，芳基，雜芳基，及-S(0)2NR13RM ; R3選自下列包括氫，鹵，燒基，經取代的燒基，三鹵甲 基，羥基，炫氧基，芳基，雜芳基’ -NR13R14，-nri3S(o)2ri4 ，-S(0)2NR13R14，-NR13C(0)R14 ’ -nr13C(〇)〇R14， -(C O) R15，及-S O 2 R19， R4選自下列包括氫，鹵，烷基’經取代的燒基，輕基 ，烷氧基及-NR13R14 ; R5選自下列包括氫，燒基，經取代的燒基，及-C(〇)R10 ; R6選自下列包括氫，烷基，經取代的烷基，及-C(〇)R10 ; R7選自下列包括氫，烷基，經取代的烷基，芳基，雜 芳基，-C(0)R17及-C(0)R1G，限制條件為當&是氫’則R5 ，R6及R7至少一者是-C(0)R1();或 R6及R7可組合形成選自下列之基團’包括-(CH2)4-’ _(CH2)5-及-(CH2)6-; R8及R9可獨立選自下列包括氫，烷基’經取代的燒基 ’及芳基； R1G選自下列包括羥基，烷氧基，芳氧基，-N(RU)(伸烷 基）nRU，其中伸烷基視所需為羥基所取代’及-NRURU ; R11選自下列包括氫，烷基及經取代的乾基， R12選自下列包括-NR13R14，羥基，-CCCOR15 ’芳基， 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) AS B8 C8 D8 1230609 々、申請專利範圍 雜芳基，-N+(〇-)R13R14 ’ -N(〇H)R13 ’ 及-NHC(0)R18 (其 中R18是烷基，經取代的烷基’鹵燒基’或芳燒基）； R13及R14獨立選自下列包括：氫’烷基’經取代的烷 基，低碳烷基為羥烷胺基所取代，氰燒基，環烷基， 經取代的環梡基，芳基及雜芳基；或 R13及R14可組合形成雜環基； R15選自下列包括：氫，羧基’燒氧基及芳氧基； R16選自下列包括：羥基，_NR13R14，_C(0)R15 ,及 -(0)NR13R14 ; R17選自下列包括烷基，經取代的燒基’環烷基’芳 基及雜芳基； R19選自下列包括烷基，經取代的燒基’芳基’芳燒 基，雜芳基，或雜芳烷基；且 η及r獨立地為1，2’3或4; 並組合以環氧酶-2選擇性抑制劑，選自下列包括·· (i)式（II)化合物：其中： G選自下列包括〇，S及-NRa-，其中Ra是氫或烷基； R10a選自下列包括氫及芳基； 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A8 B8 C8 D8 々、申請專利範圍 Rlla選自下列包括羧基，烷基，芳烷基，胺羰基，烷 基磺醯胺基羰基及烷氧羰基； R12a選自下列包括鹵烷基，烷基，芳烷基，環烷基， 及芳基視所需為一個以上選自下列的基團所取代··烷 硫基’硝基及基續酸基；且 RUa是一個以上基團，獨立選自下列包括氫，鹵，烷 基，芳烷基，烷氧基，芳氧基，雜芳氧基.，芳烷氧基 ，雜芳烷氧基，i烷基，齒烷氧基，烷胺基，芳胺基 ，芳烷胺基，雜芳胺基，雜芳烷基胺基，硝基，胺基 ，胺基磺醯基，烷胺基磺醯基，芳胺基磺醯基，雜芳 胺基橫酸基，芳燒胺基績酸基，雜芳燒胺基磺酸基， 雜環磺醯基，烷基磺醯基，羥基芳羰基，硝芳基，視 所需取代的芳基，視所需取代的雜芳基，芳烷羰基，雜 芳羰基，芳羰基，胺羰基及烷羰基； 或R13a加上環E形成莕基環；或 (ii) 式（III)化合物：其中： A選自下列包括邵份不飽和或不飽和之雜環基，及部 份不飽和或不飽和的碳環； 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 έβ8 C8 D8 六、申請專利範圍 Rlb選自下列包括雜環基，環烷基，環婦基及芳基， 其中Rlb是視所需為一個以上獨立選自下列之基團取代 在取代位置：烷基，鹵烷基，氰基，羧基，烷氧羰基 ，羥基，羥烷基，齒烷氧基，胺基，烷胺基，芳胺基 ，硝基，院氧烷基，烷基亞磺醯基，鹵，烷氧基及烷 硫基； R2b選自下列包括甲基及胺基；且 R3b選自下列包括氫，，烷基，晞基，块基，酮基 ，氰基，羧基，氰烷基，雜環氧基，烷氧基，烷硫基 ，烷羰基，環烷基，芳基，鹵烷基，雜環基，環烯基 ，芳燒基，雜環燒基，醯基，燒硫院基，經燒基，燒 氧羰基，芳羰基，芳烷羰基，芳婦基，烷氧烷基，芳 硫烷基，芳氧烷基，芳烷硫烷基，芳烷氧烷基，烷氧 芳烷氧烷基，烷氧羰烷基，胺羰基，胺羰烷基，烷胺 羰基，N-芳基胺基羰基，N-烷基-N-芳基胺羰基，烷 胺羰基烷基，羧烷基，烷胺基，N-芳胺基，N-芳烷胺 基，N -烷基-N -芳烷胺基，N -烷基-N -芳胺基，胺烷 基，烷胺烷基，N-芳基胺烷基，N-芳烷胺基烷基，N-烷基-N-芳烷基胺基烷基，N-烷基-N-芳胺基烷基，芳 氧基，芳烷氧基，芳硫基，芳烷硫基，烷基亞磺醯基 ’虎基續基’胺基續醒基5燒胺基續酿基^ N -芳胺 基磺醯基，芳基磺醯基，及N -烷基-N -芳基胺基磺醯 基； 或其藥學上可接受之鹽； -10 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 其中： π烷基”指飽和的脂族烴基團，包括1至2 0個碳原子 之直鏈及分支鏈基； ”經取代的坑基”表不如上定義之坑基，為一或多個 獨立選自下列的基團所取代，包括：鹵，羥基，低碳 烷氧基，芳基（此芳基視所需為一個以上基團所取代， 較好為一，二或三個基團所取代，該取代基互相獨立 為鹵，經基，低碳烷基或低碳烷氧基），芳氧基（此芳 氧基其視所需以一個以上基團所取代，較佳為一，二 或三個基團所取代，該取代基互相獨立為鹵，羥基， 低碳烷基或低碳烷氧基），6 員雜芳基，（該6 ·員雜芳 基在其環中具有1至3個氮原子，在環中之碳視所需為 一個以上基團所取代，較好一，二或三個基團，其互 相獨立是li，羥基，低碳烷基或低碳烷氧基），5 -員雜 芳基（此5 -員雜芳基具有1至3雜原子選自下列包括氮， 氧及硫，在此基團中之碳及氮原子視所需為一個以上 的基團所取代，較好一，二或三個基團，其互相獨立 為鹵，羥基，低碳烷基或低碳烷氧基），5 -或6 -員雜脂 環基（此5 -或6 -員雜脂環基具有1至3個雜原子選自由氮 ，氧及硫組成之群，在此基團中之碳及氮（若存在時） 可視所需為一個以上基團所取代，較好一，二或三個 基團’其互相獨立為齒’經基’低碳燒基或低碳燒氧 基），統基，（低碳_燒基）硫基，芳硫基（此芳硫基視所 需為一個以上基團所取代，較好一，二或三個基團， -11 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公爱) 1230609 as B8 C8 _____ D8 六、申請專利範圍 .其互相獨立為鹵，羥基，低碳烷基或低碳烷氧基），氰 基，醯基，硫醯基，Ο -胺甲醯基，N -胺甲醯基，Ο -硫 胺甲醯基，N -硫胺甲醯基，C -醯胺基，N -醯胺基，硝 基’ N -續酿胺基’ S -橫酿胺基，1^188(0)-’1^188(0)2-，-C(0)0R18，Rl8C(〇)〇-&-NRl8Rl9，其中 獨立 選自由氫，低碳烷基，三自甲基，（C3-C6)環烷基，低 碳婦基，低碳炔基及芳基組成之群（該芳基視所需為一 個以上基團所取代，較好是一，二或三個基團其互相 獨立為鹵，羥基，低碳烷基或低碳烷氧基）； π環烷基"指3 - 8員全碳單環，全碳5 -員/ 6 -員或6 -員 / 6 -員稠合的二環，或多環稠合環，其中一個以上的環 可含有一個或多個的雙鍵，但無一環有完全共軛的p i -電子系統，其中稠環系統指該系統中每一環與該系統 中之另一環共同相鄰之雙碳原子； ’’經取代的環烷基”表示如上定義之環烷基，其為一 個以上更佳為一或二個取代基所取代，該取代基係獨 立選自下列基團，其包括低碳燒基，三鹵燒基，鹵， 藉基，低破燒氧基，芳基（此芳基視所需以一個以上， 較好一或二個基團所取代，其互相獨立為函，魏基， 低碳烷基或低碳烷氧基），芳氧基（此芳氧基視所需為 一個以上，較好一或二個基團所取代，其互相獨立為 鹵，經基，低碳燒基或低碳燒氧基），6 -員雜芳基（此 6 -員雜芳基在環中有1至3個氮原子，環中之碳可視所 需為一個以上，較好一或二個基團所取代，其互相獨 -12 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 έ88 C8 D8 六、申請專利範圍 立為鹵，羥基，低碳烷基或低碳烷氧基），5 -員雜芳基 (此5 -員雜芳基具有1至3個雜原子，選自由氮，氧及硫 組成之群，基團中之碳及氮原子視所需為一個以上， 較好一或二個基團所取代，其互相獨立為卣，羥基， 低碳烷基或低碳烷氧基），5 -或6 -員雜脂環（此5 -或6-員雜脂環具有1至3個雜原子選自由氮，氧及硫組成之 群，在基團之碳及氮（若存在）原子可視所需為一個以 上，較好一或二個基團所取代，其互相獨立為齒，羥 基，低碳烷基或低碳烷氧基），銃基，（低碳烷基）硫基 ，芳硫基（此芳硫基視所需為一個以上，較好一或二個 基團所取代，其互相獨立為自，羥基，低碳烷基或低 碳垸氧基），氰基，Si基，硫醯基，0 -胺甲Bi基，N -胺甲醯基，Ο -硫胺甲醯基，N -硫胺甲醯基，C -醯胺基 ，N -醯胺基，硝基，N -磺醯胺基，S -磺醯胺基， R18S(0)-，R18S(0)2-，-C(0)0R18 , R18C(0)0-，及-NR18R19如上文所定義； π芳基π指1至1 2個碳原子之全碳單環或稠合環多環 基團並有完全共軛的p i -電子系統； π芳烷基”指以如上定義之芳基取代之烷基； Μ芳氧基”指-0 -芳基及-0 -雜芳基； ’’雜芳基’’指5至1 2個環原子之單環或稠合環，含有 一，二或三個環雜原子選自Ν，0或S，其餘的環原子 係C，且此外具有完全共輛的p i -電子系統；及 ’’雜脂環’’指具5至9環原子之單環或稠合環基團，其 -13 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) A8 B8 C8 1230609 申請專利範圍 中一或二個環原子是選自N，Ο或S(0)n (其中n是由〇至 2之整數）之雜原子，其餘的環原子是匚且雖該環會有一 或多個雙鍵，環無完全共軛的p i _電子系統。 3·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中環氧酶_ 2 選擇性抑制劑是式（II)化合物，其中： G選自下列包括氧及硫； R1 u選自下列包括羧基，低碳烷基，低碳芳烷基及低 碳烷氧羰基； R12a選自下列包括低碳鹵烷基，低碳環烷基及苯基；且 R13a是一個以上選自下列的基團包括·· Η，鹵，低碳 烷基，低碳烷氧基，低碳鹵烷基，低碳鹵烷氧基，低 碳烷胺基，硝基，胺基，胺基磺醯基，低碳烷胺基磺 醯基，5 -員雜芳基烷胺基磺醯基，6 -員雜芳基烷胺磺 醯基，低碳芳烷胺基磺醯基，5 -員含氮雜環磺醯基， 6-員含氮雜環磺醯基，低碳烷基磺醯基，視所需取代 的苯基，低碳芳烷羰基，及低碳烷羰基；或R13a加上環 E形成蒸基。 4·根據申請專利範圍第3項之鲁藥組合物，其中： 尺11&是羧基； R12a*低碳鹵烷基；且 R13a是一個以上選自下列基團，包括Η，鹵，低碳烷 基，低竣鹵燒基，低礙函燒氧基，低礙燒胺基，胺基 ，胺基磺醯基，低碳烷胺基磺醯基，5 -員雜芳基烷胺 基磺醯基，6 -員雜芳基烷胺基磺醯基’低碳芳烷胺基 -14-裝 訂本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公爱) 1230609 έΐ C8 D8 六、申請專利範圍 續酿基，低竣燒基續酸基’ 6 -員含氮雜環續酸基，視 所需取代的苯基，低碳芳挺羰·基及低碳規基幾基；或 R13a加上環E形成蓁基。 5.根據申請專利範圍第4項之醫藥組合物，其中·· R12a選自下列包括：氟甲基，氯甲基，二氯甲烷基， 三氯甲基，五氟乙基，七氟丙基，二氟乙基，二氟丙 基，二氯乙基，二氯丙基，二氟甲基，及三氟甲基；且 R13a是一個以上選自下列的基團，包括：氫化物，氯 ，氟，溴，碘，甲基，乙基，異丙基，第三-丁基，丁 基，異丁基，戊基，己基，甲氧基，乙氧基，異丙氧 基，第三-丁氧基，三氟甲基，，二氟甲基，三氟甲氧基 ，胺基，N，N-二甲胺基，N，N-二乙胺基，N-苯基甲胺 基磺醯基，N -苯基乙胺基磺醯基，N-(2-呋喃基甲基） 胺基磺醯基，硝基，N，N-二甲胺基磺醯基，胺基磺醯 基’ N -甲胺基續酸基’ N -乙基續酿基，2,2 -二甲基乙 胺基磺醯基，N，N-二甲胺基磺醯基，N-(2-甲基丙基）胺 基續醯基，N -嗎福淋基績醯基，甲基續醯基，芊基羰 基，2,2-二甲基丙羰基，苯基乙醯基及苯基；或RUa加 上環E形成莕基。 6·根據申請專利範圍第5項之醫藥組合物，其中： &12&選自下列包括三氟甲基及五氟乙基；且 R13a是一個以上選自下列的基團，包括：氫化物，氯 ，氟，溴，碘，甲基，乙基，異丙基，第三-丁基，甲 氧基，三氟甲基，三氟甲氧基，Ν -苯基甲胺基磺醯基 ____ - 15 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(21〇χ 297公釐) 1230609 As B8 C8 ^_______ D8 六、申請專利範圍 ，N -苯基乙胺基磺醯基，N-(2-呋喃基甲基）胺基磺醯 基，N，N-二甲基胺基磺醯基，N -甲胺基磺醯基，N-(2，2-二甲基乙基）胺基續酿基，二甲胺基橫g盛基，2 -甲 基丙基胺基績S盛基’ N -嗎福琳基續g盛基，甲基續醴基 ，芊基窥基，及苯基；或其中R13a加上環E形成審基。 7.根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中環氧酶_ 2 選擇性抑制劑選自下列包括： 6-氯-2-三氟甲基-2H-1-苯並p比喃-3-複酸； 6- 氯-7 -甲基-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 8-(1-甲基乙基）-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 6 -氯-7-(1,1-二甲基乙基）-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3 -叛酸； 6 -氣-8-(1-甲基乙基）-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3 -幾 酸； 2-三氟甲基-3H-莕並吡喃-3-羧酸； 7- (1，1-二甲基乙基）-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 6-溴-2·三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3_羧酸； 8- 氯-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 6- 三氟甲氧基-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 5.7- 二氯-2-三氟甲基-2H_1-苯並吡喃-3-羧酸； 8-苯基-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 7.8- 二甲基-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 6.8- 雙（二甲基乙基）-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 7- (1-甲基乙基）-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； -16 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 Jt>o C8 _____ D8 六、申請專利範圍 .7-苯基-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 6-氯-7 -乙基-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 6-氯-8 -乙基-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 6 -氣-7-苯基-2-二氣甲基-2H-1-苯並p比喃叛酸； 6.7- 二氯-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 6.8- 二氯-2-三氟甲基-2H-1·苯並吡喃-3-羧酸； 2-三氟甲基-3H-莕並[2，l_b]吡喃-3-羧酸； 6-氯-8 -甲基-2-三氟甲基_2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 8-氯-6 -甲基-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 8-氯_6_甲氧基-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 6-溴-8-氯-2-三氟甲基-2H-1·苯並吡喃-3-羧酸； 8 -溴-6-孰-2 -三氟甲基-2H-1-苯並p比喃-3 -幾酸； 8 -漠-6-甲基-2-三氟甲基-2H-1-苯並p比喃-3-複酸； 8_溴-5-氟-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 6-氯-8-氟-2_三氟甲基-；2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 6 -漠-8-甲氧基-2-三氟甲基-2 H-1-苯並p比喃-3 -複酸； 6-[[(苯基甲基）胺基]磺醯基]-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡 喃-3 _叛酸； 6-[(二甲胺基）磺醯基]-2·三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3 -羧 酸； 6-[(甲胺基）橫醯基]-2-三氟甲基-2H_1-苯並吡喃-3-致酸； 6-[(4-嗎福淋基）磺醯基]-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3 - 羧酸； 6-[(1，1-二甲基乙基）胺基續醯基]三氟甲基_2H-1-苯 1230609 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 並吡喃-3-羧酸； 6-[(2-甲基丙基）胺基磺醯基卜2_三氟甲基苯並吡， 喃-3-羧酸； 6 -甲基磺醯基-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 8-氯4-[[(笨基甲基）胺基]磺醯基三氟甲基-211-1-苯 並吡喃-3-羧酸； 6-苯基乙醯基-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 6.8- 二溴-2-三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 8-氯-5,6-二甲基-2-三氟曱基-2H-1-苯並吡喃-3-羧酸； 6.8- 二氯-(S)-2_三氟甲基-2H-1-苯並吡喃-3 -羧酸； 6 -苄基磺醯基-2-三氟甲基-2H- L-苯並吡喃-3 -羧酸； 6-[[N-(2-呋喃基甲基）胺基]磺醯基]-2-三氟甲基-2Η·1-苯並吡喃-3 -羧酸； 6-[[Ν-(2-苯基乙基）胺基]磺醯基]-2-三氟甲基-2Η-1-苯 並吡喃-3 -羧酸； 6- 碘-2-三氟甲基-2Η-1-苯並吡喃-3-瘦酸； 7- (1，1-二甲基乙基）-2-五氟乙基-2Η-1-苯並吡喃-3·羧酸 :及 6-氯-2-三氟甲基苯並吡喃-3-羧酸；或其藥學上 可接受的鹽。 8·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中環氧酶-2 選擇性抑制劑是選自下列包括： a)本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 C8 D81230609 C8 D81230609 C8 D81230609 έ88 C8 D8 六、申請專利範圍(S)-6 -氣-1，2 -二氯- 2- (三氣甲基）-3 -峻12林瘦酸 或其藥學上可接受的鹽；及其任何組合。 9.根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中該環氧 酶-2選擇性抑制劑是式（III)化合物，選自下列包括： a)chf2 -22 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 C8 D81230609 8 8 8 8 ABCD 々、申請專利範圍 b)或其藥學上可接受之鹽；及其任何組合。 11.根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中該環氧 酶-2選擇性抑制劑是：或其藥學上可接受的鹽。 12.根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中該環氧 酶-2選擇性抑制劑是：-24 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609或其藥學上可接受的鹽。 α根據中請專利範圍第η之醫藥組合物，其中環氧酶」 選擇性抑制劑是4-[4-(甲基）-1續醯基]苯基]_3_苯基-2(5Η)-呋喃酮，或其藥學上可接受的鹽。 Κ根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中該環氧 酶_2選擇性抑制劑是甲基_3_苯基）_心異啰唑基]苯 基磺醯胺，或其藥學上可接受的鹽。 15.根據申請專利範圍第i項之醫藥組合物，其中該環氧 酶-2選擇性抑制劑是甲基吡淀小基）_3·(4_^基績 驗基苯基）-5-氯吡啶，或其藥學上可接受的鹽。 16·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中環氧酶2 選擇性抑制劑是4-[5-⑷甲基苯基）1(三氣甲基）Μ•峨 唑-1 -基]苯基磺醯胺，或其藥學上可接受的鹽。 Π·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中環氧酶2 選擇性抑制劑是4-[(2-甲基-4-環己基号唑基]苯基 磺醯胺，或其藥學上可接受的鹽。 土 土 18·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中環氧酶2 選擇性抑制劑是4-[5-(3-氟-4-甲氧苯基(二氟甲基卜 1H-吡唑-1-基]-苯磺醯胺，或其藥學上可接受的蹄二_ 19·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中環^酶_2 選擇性抑制劑是（S)-6,8-二氯-2-(三氟曱基）-2Η_丨·苯並吡 喃-3 -叛酸，或其藥學上可接受的鹽。 、 2〇·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中環氧酶2 選擇性抑制劑是下式化合物： / -25 - A8 B8 C8 D8 1230609 申請專利範園 R 13bC02H R 12b R 其中： x是o或s， 尺1215是低碳鹵燒基； R3b選自下列包括氫化物及鹵；， R13b’選自下列包括氫化物’鹵，低碳烷基’低礙鹵燒 基，低碳烷氧基’低碳芳烷羰基，低碳二烷胺基磺酿 基’低碳燒胺基橫醯基’低碳芳燒胺基績醯基’低碳 雜芳烷基胺基磺醯基，5 -員含氮雜環磺醯基’及6 -員 含氮雜環磺醯基； RUb"選自下列包括氫化物，低碳烷基，鹵，低碳烷氧 基，及芳基；且 Rm’，，選自下列包括氫化物，自，低碳烷基，低碳烷 氧基及芳基；或 其藥學上可接受的鹽。 21·根據申請專利範圍第2 0項之醫藥組合物，其中： 尺咖選自下列包括三氟甲基及五氟乙基； RUb選自下列包括氫化物，氯及氟； -26 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609 έ88 C8 D8_ 六、申請專利範圍 R13b·選自下列包括氫化物，氯，溴，氟，碘，甲基， 第三-丁基，三氣甲氧基，甲氧基，芊基羰基，二甲胺 基磺醯基，異丙胺基磺醯基，甲胺基磺醯基，苄胺基 磺醯基，苯基乙胺基磺醯基，甲基丙胺基磺醯基，甲 基續B盛基’及嗎福p林基續S&基， RUb"選自下列包括氫化物，甲基，乙基，異丙基，第 三-丁基，氯，甲氧基，二乙胺基及苯基；且 Rnb…選自下列包括氫化物，氯，溴，氟，甲基，乙 基，第三·丁基，甲氧基及苯基。 22.根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中蛋白質激 酶抑制劑是式（I )化合物，其中： R1選自下列包括氫，鹵，烷基，環烷基，芳基，雜芳 基，雜脂環，羥基，烷氧基，-C(0)R15，-NR13R14， -(CH2)rR16及-C(0)NR8R9 ; R2選自下列包括氫，鹵，烷基，三鹵甲基，羥基，烷 氧基，-NR13R14，-NR13C(0)R14，-C(0)R15，芳基，雜芳 基及-S(0)2NR13R14 ; R3選自下列包括氫，鹵，蜣基，三鹵甲基，羥基，烷 氧基，-(CO)R15，-NR13R14，芳基，雜芳基，-NR13S(0)2R14 ，-S(0)2NR13R14，-NR13C(0)R14及-NR13C(0)0R14; R4選自下列包括氫，鹵，烷基，羥基，烷氧基及 -NR13R14 ; R5選自下列包括氫，烷基及-C(0)R1G ; R6選自下列包括氫，烷基及-C(0)R1G ; -27 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1230609 g _ D8__ 六、申請專利範園 R7選自下列包括氫，燒基，芳基’ 3 -複丙基’雜方 基，-C(0)R17及-C(〇)Ri〇 ; R6及R7可組合形成下列的基團，包括-(CH2)4-’ -(CH2)3-及-(CH2)6-; R8及R9獨立選自下列包括氫，烷基及芳基； R10選自下列包括羥基，烷氧基，芳氧基，-N(Ru)(CH2)nR12 及-NR13Ri4 ; Ru選自下列包括氫及烷基； R12選自下列包括-NR13R14，羥基’ _C(0)R15，芳基及 雜芳基； R13及R14獨立選自下列包括氫，，烷基，環烷基，芳基 及雜芳基； R13及R14可組合形成選自下列的基團，包括彳(：112)4-，-(CH2)5-，-(CH2)2〇(CH2)2-，及-(CH2)2N(CH3)(CH2)2-; R15選自下列包括氫，羥基，烷氧基及芳氧基； R16選自下列包括羥基，-C(0)R15，-nrurh及_q(^NR13R14 ; R17選自下列包括烷基，環烷基，芳基及雜芳基；且 η及r是獨立的1，2，3或4 ; 或其藥學上可接受之鹽。 23·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中蛋白f激 酶抑制劑是式（I)化合物，其中： R6 是-COR10，其中 是-NRn(CH2)nRi2其中： R11是氫或低碳燒》基； η是2或3 ;且 -28 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐) A8 B8 C8 D8 1230609 六 申請專利範圍 R!2是-NRUR“，其中Ru及Rm是獨立的低碳烷基。 24.根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中蛋白質激 酶抑制劑是式（I)化合物，其中： R6 是-COR10 其中 Ri〇 是-NRii(CH2)nR12其中： R11是氫或低碳烷基； η是2或3 ;且 RU是-NRURi4，其中"組合形成選自下列的基團 • -(CH2)4- ’ -(CH2)5- ’ -(CH2)2-〇-(CH2)2-或-(CH2)2N(CH3)(CH2)2-。 25·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中蛋白質激 酶抑制劑是式（I)化合物，其中r6*n_(2_二甲胺基一乙 基）胺基羰基，N-(2-二乙胺基乙基）·Ν_甲胺基羰基，N_ (3-二甲胺基-丙基）-胺基羰基，N-(2_二乙胺基乙基）胺 羧基’ N-(2-乙基胺乙基）-胺基羰基，^^(3_乙胺丙基）-胺 羰基，或Ν-(3·二乙胺基-丙基）胺羰基， 26·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中蛋白質激 酶抑制劑是式（I)化合物，其中R6是Ν-(2-二乙胺基乙基） 胺氣基或Ν-(2 -乙胺基-乙基）胺基幾基。 27·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中蛋白質激 酶抑制劑是式（I)化合物，其中R6是3 - Ρ比咯啶-丨-基丙 基致基’ 3 -嗎福琳-4 -基丙胺基·談基，2 - p比咯淀_ 1 _基 乙胺基-羰_基’ 2 -嗎福淋· 4 -基乙胺窥基，2-(4-甲基u瓜 畊-1-基）乙基-胺羰基，2-(3,5-二甲基哌畊-1-基）乙基_ 胺羰基，3-(4-甲基哌畊-1-基）丙胺基羰基或3-(3,5-二甲 基哌畊-1 -基）丙胺基-羰基。 _ - 29 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 g __________08_ 請專利範圍 ~ ' 28·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中蛋白質激 酶抑制劑是式（I)化合物，其中R6是-COR10其中Rio是 _NR13R14，其中是氮且R“是低碳燒基為經基，芳基， 雜脂環，雜芳基或羧基所取代。 29·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中蛋白質激 酶抑制劑是式（I)化合物，其中r6是2 -三畊-1 _基丙胺窥 基’ 2 -二呼-1-基乙胺基談基’ 3 -味唆-1-基丙胺羰基 ’ p比淀-4 -基甲基胺羰基，2 _ p比淀-2 -基乙胺羰基或2 _ 咪唑-1-基乙胺羰基。 30.根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中蛋白質激 酶抑制劑是式（I)化合物，其中： R6 是-COR10,其中 Ri〇 是-NRUCCHOnRU其中： R11是氫或低碳烷基； η是2或3 ;且 R12是-NR13R14，其中Rl3及Rl4組合形成_個雜環。 31·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，並φ疋& # 八甲蛋白質激 酶抑制劑是式（I )化合物，其中·· R6是-COR10,其中ίυ〇*_ΝΚη((：Η2)η；Κΐ2其中： R11是氫或低碳燒基； η是2或3 ;且 π是-NR〒，其中R13及R14-起組合形成5， 個碳之雜環，含有一個羰基及在環内古 鬥有一或二個氮原 子。 32·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，Α ，、千蛋白質激 -30 -1230609 έ88 C8 —---- -------—-—_-_ 六、申請專利範園 酶抑制劑是式（I)化合物，其中R6是2-(3-酮基哌畊-1-基） 乙胺羰基，2-(咪唑啶-1-基-2-酮）乙胺羰基，2-(四氫 嘧啶-1_基-2-酮）乙胺羰基，2-(2-酮基吡咯啶-1-基）-乙 胺羰基，3-(3-酮基哌畊-1-基）丙胺羰基，3-(咪唑啶-1-基-2 -酮基）丙胺羰基，3 -(四氫嘧啶-1 -基-2 -酮）-丙胺 羰基，或3-(2-酮基吡咯啶-1-基）丙胺羰基。 33.根據申請專利範圍第2 2至3 2項中任一項之醫藥組合物 ，其中蛋白質激酶抑制劑是式（I)化合物，其中： R5選自下列包括氫及低碳烷基；且 R7選自下列包括氫，烷基，芳基，雜芳基及-C(0)R17 ，其中R17是羥基，低碳烷基或芳基。 34·根據申請專利範圍第3 3項之醫藥組合物，其中： R1是氫，低碳烷基，-C(0)NR8R9，環烷基或芳基； R2是氫，鹵，低碳烷氧基，氰基，芳基，-S〇2R20， 或-S(0)2NR13R14，其中R13是氫且RB是氫，芳基或燒基； R3是選自下列包括氫，低碳烷氧基，-C ( Ο ) R 15， -NR13C(0)R14，芳基及雜芳基；且 R4是氫。 35.根據申請專利範圍第3 4項之醫藥組合物，其中： R1是氮或苯基； R2是氫，氯，溴，氟，甲氧基，乙氧基，苯基，二甲 胺基續醯基，氰基，甲基磺醯基，乙基績醯基，芊基 橫S盈基，3 -氯苯基-胺基磺酸基，幾基，甲氧基，胺基 —S&基’甲基胺基續g盡基’苯胺基續酿基，p比咬-3 _ -31 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 έΙ C8 D8 六、申請專利範圍 基-胺基績醒基’二甲胺基橫驢基’或異丙胺基-續酉盈 基； R3是氫，甲氧基，羧基，苯基，吡啶-3-基，3,4-二 氯苯基，2 -甲氧基-5 -異丙基苯基，4 -正-丁基苯基， 3 -異丙基苯基；且 R4是氫。 36. 根據申請專利範圍第3 5項之醫藥組合物，其中： R1是氫； R2是氫，氰基，氟，氯或溴； R3是苯基；且 R4是氫。 37. 根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中： R1是氫，低碳烷基，-C(0)NR8R9，環烷基或芳基； R2是氫，鹵，低碳烷氧基，氰基，芳基或-S(0)2NR13R14 ，其中R13是氫，且R14是氫，芳基或烷基； R3選自下列包括氫，低碳烷氧基，-C(0)R15，-NR13C(0)R14 ，芳基，及雜芳基；且 R4是氫。 38. 根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中： R1是氫，或甲基； R2是氫，氰基，氟，氯或溴； R3是選自下列包括氫或苯基；且 R4是氫。 39. 根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中R6是 -32 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)裝 訂 !23〇6〇9 as B8 C8 _ _ D8 _____ 六、申請專利範圍 -COR10其中R10是-NR13R14，其中R13是氫且R14是低碳烷 基為羥基所取代，低碳烷基為羥烷胺基所取代，羧基 或-NR18R19，其中Ri8及Ri9獨立地為氫或低碳烷基。 40·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中R6是是[2-(二乙胺基）-2-羥基]乙胺羰基，2-(N-乙基-N-2-羥乙胺基）-乙胺羰基，羧甲胺基胺羰基，或2 -羥乙基-胺羰基。 41. 根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中R6是 -COR1。其中 是-NRnCCHbhR12，其中 R12 是-N+(〇)_NR13R14 ，或-N(OH)R13其中R13及R"獨立選自下列包括低碳烷 基。 42. 根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中R0是2·(Ν_ 羥基-Ν·乙胺基）乙胺羰基或2-[N+(〇-)(C2H5)2]乙基-胺基 羰基。 43·根據申請專利範圍第4 1或42項之醫藥組合物，其中·· R5選自下列包括氫或甲基；且 R7選自下列包括甲基，氫或苯基。 44·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中： R1是氫； R2是氫，氰基，氯，氟或溴； R3是氫；且 R4是氫。 45·根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中激酶抑制 劑係選自下列包括： _ - 33 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1230609 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍裝 訂 或其L -蘋果酸鹽。 46.根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中激酶抑制 劑是下式化合物：-34 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1230609 B8 C8 D8 六、申請專利範園 中含有治療有 47. —種治療或預防癌症之醫藥組合物， 效劑量之： 式（I)蛋白質激酶抑制劑：並組合以下式之環氧酶-2選擇性抑制劑或其藥學上可接受之鹽。 中含有治療有 48. —種治療或預防癌症之醫藥組合物，其 效劑量之： 式（I)蛋白質激酶抑制劑：並組合以下式之環氧酶-2選擇性抑制劑 -35 - 本紙强:尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 09 06 3 2 0 8 8 8 M- B c D 六、申請專利範圍或其藥學上可接受的鹽。 49. 一種治療或預防癌症之醫藥組合物，其中含有治療有 效劑量之： 式（I)蛋白質激酶抑制劑：並組合以下式之環氧酶-2選擇性抑制劑：或其藥學上可接受的鹽。 50. —種治療或預防癌症之醫藥組合物，其中含有有效劑 -36 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 8 8 8 8 A B c D 1230609 六、申請專利範圍 量之： 式（I)蛋白質激酶抑制劑Ο 並組合以下式之環氧酶-2選擇性抑制劑或其藥學上可接受的鹽 37 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐)
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