TW449477B - Completely dissolved bone tissue and method for producing the same - Google Patents
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Description
經濟部中央搮準局員工消費合作社印製 ,4 9 47 7. 1 a? _*_B7_五、發明説明(1 ) 本發明係有關骨骼組織完全溶解以及其製造方法,特_ 別是於人體可攝取之機能性食品,或飼料、醫療品、化粧 品等適用之新穎材料及其製造方法。 此所謂「骨骼組織」係於本專利中所使用之哺乳類、 鳥類、魚類之骨骼及骨髓、貝殻、甲殼類外皮、蛋殷或珊 瑚等,鈣、蛋白質、多醣類及其他含微量原素之生物組織 之總稱。 市面上販有各種以做爲骨骼疏鬆症及其他骨骼疾病之 補給品以鈣爲主軸之機能性食品。此*些鈣食品在現今所製 造的有以碳峻鈣、乳酸鈣、磷酸鈣所製成者、或以牛骨粉 、蛋殼、魚骨粉等所製成者(天然骨骼之鈣)爲主。 至於,有關體內被吸收之鈣成份之性狀與生體內之分 解吸收面至今尙待硏究,一般而言有單純的攝取鈣鹽不如 攝取天然骨骼較易恢復骨骼疾病之說。但是,先行技術中 所市販之天然鈣食品,如:牛骨粉、骨魚粉等,經粉碎後 製成顆粒,由於粒子過粗因此於胃中無法充份分解、吸收 性有不良之困難點。 因此,爲了使鈣成份被有效吸收,被提出將動物骨骼 於酸性溶液下脫灰之技術(特開平4 — 1 6 1 6 5號公報 )。此技術基本上以粉碎後之骨粉用以鹽酸、硫酸、硝酸 等無機酸、或甲酸、醋酸等有機酸水溶液使脫灰後之酸可 溶性畫分或此畫分更以酵素使作用後水解取得水可溶性畫 分或由此畫分經透析於去除骨骼來源之鈣鹽之畫分加入可 溶性鈣而做爲鈣補給劑。 I - - I V 士 I I (請先鬩讀背面之注$項再填寫本頁) 訂 -ti 本紙張尺度逋用中國國家標準(CNS ) Μ規格(2丨Ο X 2W公釐) 4 49 47 7 (?, ' A7 ____B7________ 五、發明説明(2 ) 更具體者係於上述含無機酸或有機酸之P Η 2〜3之· 水溶液中將粉碎後之骨骼使乳化,經3 0分鐘〜數小時攪 拌後脫灰之後,添加蛋白分解酵素(例:胃蛋白酶)後酵 素分解之,分子量3 0 Q 0〜6萬Da之酸可溶性畫分或 水溶性畫分做爲鈣吸收補助劑或將此畫分經去鹽後由縮氨 酸與蛋白質之混合物所形成之畫分將此添加可溶性乳酸鈣 、碳酸鈣後,做爲鈣補給劑者。 另外,動物骨骼除含鈣之外,當含縮氨酸、聚縮氨酸 之膠原蛋白、胺基酸或多糖、微置生理活性元素等之生理 活性物質。除鈣質以外,此些物質亦可做爲促進生體內發 揮重要機能之生理活性(賀爾蒙之平衡、腸內細菌之活化 )之調節、而對骨骼疾病可當補給劑之期待。特別是最近 被發現之BMP、BSP_I I等蛋白質被證明與骨骼形 成有相當關連,而被做爲可利用於醫藥品之硏討。 經濟部中央標準局負工消费合作社印製 {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 上述先行技術裡爲使用强酸將骨骼成份脫灰,因此於 生成物中僅殘留生理活性低之成份而已。且,在脫灰之前 處理中必先將動物之骨骼微細粉碎之,於此微粒化時蛋白 質、聚糖等具生理活性之成份因受到熱變性,因此,生成 物未含原有天然之骨骼成份。 因此,本發明以提供無變性精純完整之骨骼組織之有 效成份,且可於短時間之內完全溶解對骨疾病者有優異效 果之骨骼組織完全溶解物以及其製造方法爲目的。 爲達本目的之本發明以粉碎後之骨骼組锇與可食酸混 合後,於減壓下溶解之。骨胳組織以哺乳類、鳥類及魚類 本紙張尺度適用中國圉家榡準(CNS)A4規格( 210X297公釐)_ 5 - 449477 A7 B7_ 五、發明説明(3 ) 之骨爲主,亦可使用此些之骨髓、牙齒、或貝殷、甲殼類· 外般、珊瑚。又,做爲可食酸者以使用乳酸較爲恰當。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明之完全可溶化之骨骼組織係將骨骼組織與可食 性之酸性溶液混合(滲透、溶解、懸浮)後,於減壓下溶 解而取得者。減壓狀態例如:於眞空狀態下將此混合液攪 拌後時,骨粉中之微小空隙內之空氣被排出、酸性溶液渗 入微小空隙內。 一般大氣壓下將骨粉與可食酸混合浸漬時,出現發泡 現象,因此,阻礙了骨與溶解液之接觸,造成無法充份完 全溶解,若於減壓下時,則可抑制發泡、消泡效果提高, 促進骨與溶液之接觸,縮短溶解、處理之時間,提昇溶解 效率。 經濟部中央標準局貞工消費合作社印製 即,發泡被抑制狀態下,骨粉之外周圍及內部微小空 隙均能確定的與酸性溶液相接觸,接受溶解作用。在減壓 下浸入骨骼組織內部接觸酸性溶液之絕對量比大氣壓條件 下攪拌後時酸性溶液之接觸量大數十倍〜數百倍。因此, 溶解處理時間飛躍性的縮短同時,更重要的可完全溶解骨 骼成份(減壓度與溶解度之關係如後述圖7所示)。酸性 溶液由微小骨粉體內接鐲之,因而可充份的抽出骨骼組織 之鈣、蛋白質、微量生理活性元素等等。 又,由於縮短溶解處理時間,可於酸性溶液下使造成 骨成份之變性減至最小限而大增其效率。 本發明之骨骼組織完全溶解物不僅限定適用於功能性 食品(特別是鈣的補給劑〉。對於轚藥品、化粧品、骨塡 本紙張尺度逋用中國國家橾準(CNS ) A4规格(210X297公釐) 449477 9 A7 B7 經濟部t央搮準扃員工消费合作社印製
五、發明説明(4 ) 充劑(醫療原料)、牙資原料、漸放性之體內埋設顆粒劑 等亦適用之。 做爲功能性食品予人類口服攝取時,必須對人體無害 者。亦即,本發明中不可使用鹽酸等之强酸。實驗過程基 本原料不致影響骨成份,而且對人體無害之可溶化溶液之 醋酸(含米醋)、果實醋、甲酸等之有機酸爲本發明實施 中所期待者。 又,使用乳酸做爲溶解液時,做爲最終產物所取得之 骨骼組織完全溶解物由於骨骼組織鈣成份被轉化成乳酸鈣 ,因此,進入人體之吸收性極高且可確保骨骼(組織)之 全成份之高生理活性生成物之完全保存。 <圖面之簡單說明> 圖1係有關本發明之骨骼組織完全溶解物示例之色譜 法0 . 圖2係代表先行技術中所取得之動物之骨骼之脫灰成 份之色譜法。 圖3係代表存在於骨骼組織完全溶解物中之BMP之 西方吸漬圖。 圖4係骨骼組織完全溶解物埋植於老鼠背部皮下之實 驗後所製成之軟X -射線照片圖。 圖5係代表骨骼組織完全溶解物之鹹性磷酸酯酶活性 之測定値所示之畫面。 圖6係存在於骨骼組锇完全溶解物中之BSP — I I I ^^^1 m^i I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 本紙張尺度適用中國國家棣準(CNS ) A4規格(2丨OX 297公釐} 4 49 47 7 A7 _ B7 五'發明説明(5 ) 所示之西方吸漬圖。 圖7係代表減壓度與溶解時間之關係所示之畫面。 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 圖1係有關本發明骨骼組織完全溶解物之成份所代表 之一例。其中,可以確定骨骼組織原有之有機物分子量由 最小數百Da至最大2 0 0萬Da以上,但先行技術中之 上述圖2所示所取得有機物分子量僅3 0 0 0〜6萬Da 左右之小範圍中。此乃意味著脫灰、去鹽之處理過程中, 流失了高成份之生體利用性。針對此點,本發明可防止生 體利用性之高成份的流失,取得分子量爲1 0 0〜2 0 0 萬Da之蛋白質(含縮氨酸)、多醣類等之有機物。 實施例 本發明之骨骼組織完全溶解物如下操作後取得。 經濟部中央梂準局負工消費合作社印製 首先,極力控制動物骨骼或貝殻之發熱粉碎爲適當粒 徑之粒狀,於水中充份洗淨。粒子之粒徑以5mni以下爲 宜。洗淨後,將此以適當之濃度如1 0 %濃度之乳酸溶液 與之混合之,於每個容器排氣裝置內撹拌之,放置於減壓 狀態下。此時,若排氣愈好則骨骼組織之溶解處理速度愈 快。減壓下未見成份變化。因此,爲使處理時間縮至最短 ,以接近眞空狀態之容器之撹拌爲佳。搅拌溫度並未限定 ,但,爲防止雜菌的繁殘等目的,最好於低溫(如:攝 0 °C以上至2 0 °C以下)更佳者以4 eC下進行處理爲最理 想者。 ·: 如上在眞空條件下經5〜6小時攪拌後,即可將動物 本紙張尺度適用中國國家榡準(CNS ) A4規格(210X297公釐)-8 . ~ 一 19477, • A7 _B7__ 五、發明説明(6 ) 骨骼及貝殼組繊之全成分完全溶解。若與未減壓下之處理· 時間相比較此處理時間特別快速。更且,若未在減壓下無 法取得骨骼組織之全成份之溶解物,若於減壓下可取得未 變性之全成份。· 如上述於減壓條件下(不一定眞空下亦可)之骨骼組 織原有鈣質、有機物及微量元素之收率與非減壓條件相比 較有明顯增加現象。若以1 0 %乳酸溶液於減壓狀態(如 :眞空狀態)下放置時與非減壓條件下攪拌時之收率相較 下,確定了於眞空狀態下放置比非減壓條件下相比更比上 述之收率約大爲6〜1 Q倍。 經濟部中央梯準局負工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 又,如上述之減壓條件下(未必一定爲眞空條件亦可 )可取得幾乎完整之骨骼原有鈣質、有機物及微量元素。 亦即,健康天然之骨骼組織之蛋白質(含p e p t丨d e )如圖1所示,其分子量具數百〜2 Ο 0萬Da以上之廣 範圍裡,若於未減壓條件下取得之骨骼溶解物之分子量則 如圖2所示頂多僅爲3千〜6萬a右而已。與此相較,於 減壓狀態下攪拌骨粉一乳酸溶液混合容器時,其分子量可 取得爲1 0 0〜2 0 0萬Da之廣範圍者。 本發明係基於考量骨骼組織完全溶解物於未變性狀態 下將蛋白質可溶化,使含充份完整之生整活性之蛋白質者 。因此,有關存在於骨骼組織完全溶解物中之B S P — I I (骨Sh i a 1 〇蛋白質,Bone Sialoprotein I I )及BMP (骨胳形成蛋白質,Bone Morphogenetie [i:r o t e i η ),即確定其存在之有無與其生理活性之有無相 本紙張尺度逋用中國國家棣车(CNS>A4规格(2丨〇乂297公釐)_ g — 經濟部中央橾隼局負工消费合作社印製 44947? , at _B7___五、發明説明(7 ) 關者。 圖3係討論有關BMP是否存在於骨骼組織完全溶解 物。方法爲於西方吸漬以抗牛BMP — 2 -單株抗體做確 認。此結果1ane2中反應於抗牛BMP—2—單株抗 體做確認。此結果1 an e 2中反應於抗牛BMP — 2 — 單株抗體之光譜帶被檢測出其分子量爲2 8 0 Q左右。另 外,1 on e 4亦同樣檢出分子量爲2 8 0 〇左右。此於 骨骼組織完全溶解物中存在BMP,且經一般所進行之 q u a n i d i η抽取法顯示存在於更完整的狀態下。 接著,檢査有關此蛋白質是否保持生理活性,以老鼠 背部皮下之埋植實驗,視其骨骼形成能力之有無。 圖4係進行老鼠背部皮下埋植實驗後,製成軟X -射 線照片之圖。由2及3呈無透射像證明骨骼形成能力存於 骨骼組織完全溶解物中。 圖5係測定引起石灰化後,顆粒中鹹性磷酸酯酶活性 之結果。3與2比1之抑制性來得高,3又比2又高些, 活性極高。因此,圖4之不透射像不單爲鈣的沈澱,同時 意味著骨骼的形成。 圖6係討論有關骨骼組織完全溶解物中B S Ρ _ I I 是否存在。以抗牛BSP—I I單株抗體於西方吸漬方法 下確認之。由此圖可清楚的檢測出骨骼組織完全溶解物( 1 an e 2,3 )中之反應於抗牛BSP — I I單株抗體 之吸收帶。 ' 如上述,本發明所製造之骨骼組織完全溶解物中,近 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度逍用中國國家標牟(CNS)A4規格(210X297公釐 >-丄〇 經濟部中央揉隼局員工消費合作社印装 4 4 9 477 A7 B7五'發明説明(8 ) 來被確定存在有具高度被重視之骨骼疏鬆症等骨骼疾病治· 療上有關之BMP及BSP— I I等骨骼形成之蛋白,本 骨骼組織完全溶解物不單爲鈣鹽之補給,同時促使與其他 微量生理活性元素之骨骼形成供給蛋白質進而可提供恢復 骨骼疾病之各種製品。 又,使用乳酸絲減壓下,可取得以骨骼鈣質爲主之可 溶性鈣之型態。做爲功能性食品使用時,其消化吸收性要 比其他鈣鹽格外優異。 本發明製造骨骼組織完全溶解物時,並未限定使用乳 酸溶液不可。同樣的使用乳酸溶液時亦可添加骨骼組織粉 加牛乳(粉乳)(必要時加砂糖),將此加入乳酸菌比室 溫稍高之溫度下,如3 7°C左右下攪拌之,此時牛奶變爲 乳酸溶液製造骨骼組織粉之溶解作用。因此,牛奶中添加 乳酸菌與骨骼組織粉混合後,放置於減壓條件下可與上述 實施例相同天然骨骼成份可在短時間內完全溶解。此時, 初期溫度難以稍高爲宜,不過,只要牛奶轉爲乳酸溶液時 ,於減壓下同樣可取得與上述實施例相同之結果。但是, 此條件下等待轉爲乳酸之處理時間則稍嫌過長。 又,.本發明之骨骼組織完全溶解物並無限定僅爲如上 述實施例之處理過程取得者。例如:使用之可食酸未必限 於乳酸。上述資施例以乳酸做示例之前提乃因做爲骨疾病 之復元劑或功能性食品而直接服用時,無不快感之可溶解 物的取得,因此,做爲食物材料只要在消化吸收後,對人 體不造成毒害之溶解物之取得,則未必一定使用乳酸做爲 本紙張尺度適用中國國家橾隼(CNS) A4規格(210X297公釐)_ u _ ~ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 449477 經濟部中央標準局身工消费合作社印装 A7 B7 五、發明説明(9 ) 溶解物。只要結果相同,亦可使用醋酸、檸檬酸、酸性果. 汁等溶解溶液。當然,若最終產物(骨骼組織完全溶解物 )非做爲食物材料者,亦可使用鹽酸,其他非可食酸均可 0 又,上述實施例中說明了骨骼組織粉與乳酸溶液之混 合容器於減壓狀態(眞空狀態)下攪拌,其中所謂減壓係 使酸性溶液易於侵入粉粒內空隙。因此,爲使溶解作用更 佳者,最好使骨骼組織粉內部空隙與酸性溶之接觸機會增 加者。因此,亦可使侵入之酸性溶液佔滿微小空隙內。如 :於眞空狀態下搅拌3 0分後,5分鐘返回大氣壓*再於 眞空中3 0分以間隔計時器重覆操作。間隔計時器之時間 並未限定。重覆減壓一非減壓之間隔定時使骨粉之溶解於 更短時間內完成。 本發明之骨骼組織完全溶解物不僅可提供鈣質,亦包 含近年來被重視治療骨疾病(如:骨骼疏鬆症)之BMP 、B S P — I I等之骨彤成蛋白質之完整形態因此可積極 的作用於骨骼疏鬆症等之骨疾病之骨形成之功能性食品。 更且,做爲乳酸溶解劑使用時,骨骼組織鈣質可以可溶性 鈣質的形態出現,因此做爲功能性食品使用時,其消化吸 收性遠比其他鈣鹽優異許多。 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張足度適用令國國家揉牟{ CNS ) A4規格(210 X 297公釐)-12 -
Claims (1)
- ABCD449477 六、申請專利範圍 第8 5 1 0 1 4 6 5號專利申請案 中文中請専利範圍修正本 民國9 0年5月修正 1 . 一種骨骼組織完全溶解物之製造方法,苒特徴爲 混合粉碎後之骨骼組織與5〜3 0 %濃度之至少一種選自 醋酸(含米醋)、乳酸、果實醋、甲酸、檸檬酸的可食用 酸‘於大氣壓以下的減壓下於0〜2 0 °C溫度之間.使其 溶解者《 2 .如申請專利範圍第1項之製造方法_其:爲製造功 能性食品中所用的骨骼組織完全解物者。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙蒗尺度適用中國國家榇準(CNS ) A4说格(210X297公釐)
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