TW444015B

TW444015B - Selective taxanes, a process for the preparation thereof and the use thereof as medicaments

Info

Publication number: TW444015B
Application number: TW086101169A
Authority: TW
Inventors: Ulrich Klar; Hermann Graf; Gunter Neef
Original assignee: Schering Ag
Priority date: 1996-01-31
Filing date: 1997-01-31
Publication date: 2001-07-01
Also published as: CN1073108C; ATE233757T1; JP2001505527A; DE69719502T2; EP0896577A1; AU714313B2; NO983509D0; CZ242698A3; AU1598497A; UA49007C2; IL124951A0; ES2192261T3; HK1018778A1; PL186796B1; CZ292504B6; BR9708295A; EP0896577B1; TR199801415T2; DK0896577T3; SK101198A3

Description

4440 1 5 經濟部中央橾準局貝工消费合作社印裂 A7 B7 五、發明説明,(1 ) 本發明係關於藥學活性化合物，其具有影響微管蛋白聚合與解聚之能力。許多天然的有絲分裂毒素被使用作爲抗腫瘤藥劑或正在臨床試驗之過程。有不同種類的該有絲分裂毒素或是經由抑制纺綞系統中微管之聚合而證明其細胞毒殺活性（例如長春花生物驗，秋水仙素），或是經由微管蛋白聚合的GTP-不依賴性增加以及經由防止微管解聚而達到其細跑毒殺活性（例如紫彩醇：，taxoter)。由於其生理-化學特性，其迄今仍未被了解，且因爲腫瘤性細胞之性質，有絲分裂毒素對於腫瘤細胞具有特定選擇性，但對於非轉形細胞仍#在不小的細胞毒性。尋找較容易量產且-類似紫杉烷種類物質·能夠抑制微管解聚之更具選擇性化合物，令人驚訝地’導致2-莰醇酯之發現，見述於p 4416374.6及 19513040.5。賅種類化合物中之結構修飾呈現相關於微管作用活性相當的調遒潛力。已得到傑出成果，尤其是經由利用Sk-H型式之酸將那些2-茨醇進行形式上酯化。經由合成本文所述之紫杉酵，其中紫杉醇之異絲胺酸鏈已被Sk取代，本發明欲研究該種物質中是否亦有可能得到與紫杉酵相較下改良之微管安定性》令人驚訝地，目前已發現到依據本發明之式j化合物，相較於紫彩^，具有方便改變之活性樣態。除了明顯改善之，微管安定性外，式I化合物證明埤管蛋白聚合上之额外影響依據本發明之紫杉燒經由通式I加以定性 (請先閏讀背面之注意事項再填寫本頁)

4440 j 5 A7 B7 五、發明説明（2 )

鍾濟部中央樣隼局貝工消费合作社印製其中 S k 可爲 0C(0)CH0HCH(NHC0R3)—^n ， R1可爲氫SCi-Cw醯基， R2可爲 a -OH或 y3 -OH， R3可爲Ci-C^o烷基，X-取代之苯基，CrC^o烷氧基， X可爲氩，鹵素，·Ν3或-CN，且 I中之游離羥基困可進而經由醚化或酯化而加以功能性修飾，以及其α -，々-與？* -環糊精籠形包合物，以及利用脂質體加以包覆之通式I化合物。當烷基固R3爲直鏈或爲具有自1至10個碳原子之分支燒基困時，例如甲基，乙基，两基，異丙.基，丁基，異丁基’三級-丁基，戊基，異戊基，新戍基，己基，庚基及癸基’則可纳入考慮。具有自1至4個碳原子之烷基困爲較佳。分別包含於通式I之R1與R3中之醢基及烷氧基固含有自1至10個碳原子，分別以甲酿基’乙酿基，丙酿基及異丙醯基團，以及甲氧基，乙氧基，丙氧基，異丙氧基及t· 丁氧基基固爲較佳〇 -5- 本紙張尺度適用中國两家樣卑（CNS ) A4规格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注^*^項再填寫本頁) 訂 JI. ^440 i 5 A7 B7 r'〇

0 五、發明説明，(3 ) X定義中之鹵素爲氟，氣，漠或破。較佳之通式I化合物爲：. 3、脱苯基_3’-(4-ρ比咬基丨n I) 3 Ν脱卞釀基-3，_Ν_甲氧基羰基-紫杉醇， 3’_脱苯基-3’-(4-吡啶基卜3.-Ν脱节釀基_3，_ν·甲氧基羰基-7-表-紫杉醇， 3’-脱苯基-3’-(4-吡啶基)·23、Ν_雙脱苄醯基·3.·ν甲氧基羰基·紫杉酵，及 3··脱苯基-3·-(4-峨唉基）_3，.Ν_脱»基_3，.ν·甲氧基羰基-10-脱乙醯基-紫杉醇。本發明亦關於式I之2·茨醇衍生物之製備方法，該方法之特徵在於通式II之醇 II， ---L--L-----^------t------ίΎ (請先閱讀背面之注$項再填寫本頁) 經濟部中央梂準局員工消费合作社印製其中R1與R2爲如上文所定義且包含於II中之羥基團爲選擇性地被保護，與通式nia，Illb或IIIc之化合物

r3-^n-H 〇H

Hlb

nic -6 本紙張尺度適用中Ββ家鏢率（CNS > A4A格（210X297公羞）經濟部中央揉準局員工消费合作社印袋 Α7 ___Β7_______ 五、發明説明（4 ) 其中R3爲如上文所定義且X·可爲羥基，0-烷基或鹵素，且其中游離羥基團經由醚化或酯化加以保護，進行反應以形成通式I之化合物，其中游離羥基團可進而經由醚化或酯化加以功能性.修飾。爲了 II中醇功能之酯化，去質子化作用係利用一鹼加以施行，例如金屬氫化物（如氫化鈉），鹼金屬醇化物（如甲醇酸鈉，三級-丁醇酸鉀），鹼金屬六甲基二矽氣烷（如六甲基 * 二矽氣烷鈉），1，5-二氮雜雙環[4.3.0]壬-5-烯(〇丑1^)，1，8-二氮雜雙環[5_4.0]十一碳-7-烯（DBU)，三乙基胺，4-(二甲基胺基）吡啶（DMAP)或1,4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷 (DABCO)，且該反應可與通式III之羧酸衍生物於惰性溶劑，例如二氣曱烷，二乙醚，或四氩呋喃中，自-70 °C至 + 5 0°C下一起施行《較佳之反應係利用氫化鈉作爲鹼，環醯胺作爲羧酸衍生物且四氩呋喃作爲溶劑於自-10°C至+ 2 5 °C之溫度下進行〇式I中游離羥基困可進而依據垌於此技藝者所熟知之方法加以功能性修飾，例如經由醚化或酯化。舉例來説，游離羥基圑可，利用生理上可对受之酸而加以轉換成爲吡嗡鹽類，利用生理上可耐受之鹼而轉換成爲磷酸或其逢類或成爲其酯類，利用生理上可耐受之鹼而轉換成爲硫酸或其鹽類或成爲其酯類，或利用水溶性聚合物加以轉換成爲酯類或醚類。本身能夠證明腫瘤抑制活性之化合物醚類及酯類亦可進行製備。新穎紫杉醇衍生物之生物學效果及應用範团 $张纽逋用中國因家搮隼（CNS > A4规格（210X297公釐> ---j--------- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本页) 訂- ^440 1 5 A7 ___B7 五、發明説明（5 ) 式I之新穎化合物爲筇貴的藥物。它們經由影響微管蛋白之聚合且安定已形成之微管而與微管蛋白交互作用且因此能夠以時特異性方式影響細胞分裂。其尤其影響到快速生長之腫^性細胞，該生長大部分不受細胞間調控機制之影響。該型式的活性成分主要適合於當影響細胞分裂可能爲治療指示時之疾病治療。可能經由例示方式提到惡性腫瘤，瘧疾之治療，革蘭氏陰性菌所引起疾病之治療，以及基於刺激毒性機制之中樞與周園神經系統疾病之治療，例如急性神經退化徵候之治療，如站立’例如中風或外傷性腦傷害之結果，包括阿茲海默症之慢性神經退化徵候之治療，以及肌萎縮性侧索硬化症之治療。可能作爲惡性腫瘤之應用範圍而提到，例如卵巢，胃，直腸，腺，，乳房，肺，頭部及頸部癌，惡性黑色素瘤及急性淋巴性與骨趙細胞性白血病之治療。依據本發明之化合物通常可單獨使用或，爲了得到加成或協成效果’而與其它活性要素及可能在治療領域使用中有疑問之物質種類互相組合。經濟部中央標準局負工消費合作社印製 ^-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 以腫瘤治療作爲範例，可能提到與下列物質之组合始錯合物’例如順销（ciSplatin)，碳始（carb〇piatin)， •嵌入物質，例如，得血蒽環類抗生素（anthraCyCnne)種類，如阿徽素（doxorubicin)，或得自蒽吡唑（anthrapyrazole) 種類，如C1-941， •.與微管蛋白交互作用之物質，例如得自長春花生物 ί -8 - 本紙張尺度it用中關家搞率（CNS ) Α4脉（210X297公 444015 經濟部中央橾準局負工消費合作社印裝 A7 B7 五、發明説明（6 ) 鹼，如長春新鹼與長春花鹼，或得自P 4416374.6及 19513040.5中所述之新穎種類2-莰醇酯類，或得自大環内醋種類，例如力索辛素（rhizoxin)，或其它化合物，例如秋水仙素，使君子素（combretastatin) A-4及伊比隆（epothilon) A及B » .DNA拓撲異構酶抑制劑，例如喜樹餘（camptothecin)，鬼臼乙又，武（etoposide)，特普肯（topotecan)及鬼白p塞吩武 (teniposide)， •葉酸或喊咬代謝括抗物，例如洛米特索（lometrexol)及眞希特本（gemcitubin)， • DNA烷化化合物，例如安朵奇辛素（adozelesin)及代斯特徽素（dystamycin) A， •生長因子抑制劑（例如PDGF，EGF，TGFb，EGF之抑制劑），生長抑素，蘇拉明，蛙皮素拮抗劑， •酪胺酸蛋白激酶或蛋白激酶A及C之抑制劑，例如厄本抑制素（erbstatin)，染料木黃網（genistein)，星抱素 (staurosporine)，伊莫弗辛素（ilmofosin)及8-Cl-cAMP， •得自抗助孕素種類之荷爾蒙拮抗物，例如米弗普酮 (mifepristone)，欧那普網（onapristone)或得自抗雌激素種類之荷爾蒙拮抗物，例如三苯氧胺（tamoxifen)，或得自抗雄性激素種類之荷爾蒙拮抗物，例如醋酸環丙孕酮 (cyproterone acetate) » .轉移-抑制化合物，例如得自類廿燒醇（eicosanoid)種類，如PGI2，PGE!，6 -氧-PGEi*其安定衍生物（如伊洛 -9 · 本紙張又度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210 X 297公兼> J—L_|L-----------IT------岣 V (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 4440I5 經濟部中央揉準扃貝工消费合作社印笨 Α7 Β7 五、發明説明（7 ) 普（iloprost)，西卡普（cicaprost)，布瑞普（beraprost))， •穿膜性C a2+流入之抑制劑，例如異博停（verapamil)，加勒帕米（galopamil)，氟苯桂嗅（flunarizine)，地爾硫革 (diltiazem)，確苯比咬（nifedipine)及寧莫得平 (nimodipine) » .精神安定藥類，例如氣丙嗅（chlorpromazine)，三氟啦嗅（trifluoperazine)，甲硫喊嗓（thioridazine)及經》底氣丙唤 (perphenazine) » .局部麻醉劑類，例如苯基胺甲酸（carbanilate)-Ca7，地布卡因（cinchcaine)，笨基胺甲酸（carbanilate)-Ca3，艾卡因 (articaine)，苯基胺甲酸（carbanilate)，來多卡因 (lidocaine)， .血管生成抑制物質，例如抗-VEGF抗體，内抑制素 (endostatin) B，干擾素 α ·，AGM 1470，及 •牛皮癬，卡波西氏肉瘤及神經母細胞瘤中細胞增生之抑制劑。本發明亦關於基於通式I化合物之製藥上可接受醫藥，即使用劑量不具毒性之化合物，其選擇性地與習用之賦形劑，載劑及添加劑一起。依據本發明之化合物可依據本身已知之格倫派製藥方法進行加工而成爲用於腸道，經皮的，非經腸道或局部施用之醫藥製備物。它們可以錠劑，糖衣錠，明膠膠囊，顆粒，栓劑，植入物，可注射性，無菌水性或油性溶液，懸浮液或乳剞，軟膏，乳膏或凝膠之形式加以施用。因此本 -10 - 本紙張尺度遑用中國•家4皁（CNS ) Α4规格（210X297公釐) 1.1 ^--；------- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 444〇 1 5 經濟部中央揉準爲貝工消费合作社印裝 Α7 Β7 i、發明説明（8 ) 發明亦關於依據本發明之化合物在醫藥製備中的用途β 活性成分可與格儉派製藥中習用之賦形劑一起混合，例如阿拉伯膠’滑石，澱粉，甘露醇，甲基纖維素，乳糖，如Tweens或Myrj之界面活性劑，硬脂酸鎂，水性或非水性載劑，石蠟衍生物’溼潤劑，分散劑，乳化劑及防腐劑，以及調味料以調整味道（如精油）。本發明1¾此亦關於包含至少一種依據本發明之化合物作爲活性成分之醫藥组合物及藥劑。一單位劑量包含大約自 0.1至100毫克的活性成分。依據本發明化合物之劑量在人類大約爲每天自0.1至1000毫克。囷示説明圖1顯示時間與溫度函數形式之吸收改變過程（3,·脱苯基_ 3’-(4-吡啶基）-3*-：^-脱芊鏟基-3，-；^-甲氧基羰基-紫杉醇，施用實施例2 )。囷2顯示時間與溫度函數形式之吸收改變過程（3, _脱苯基· 3·-(4·吡啶基）-3’-Ν-脱芊醯基-3，-Ν-甲氧基羰基-7-表-紫，杉醇，施用實施例3)。闽3顯示時間與溫度函數形式之吸收改變過程（3，_脱笨基_ 3·-(4-吡啶基）-2,3·_Ν-雙脱苄醢基-3*-Ν·甲氧基羰基 -紫杉酵，施用實施例4) » 囷4顯示時間與溫度函數形式之吸收改變過程（3*_脱苯基_ 3_-(4-吡啶基）-3'_1^-脱苄磁基-3'-：^-甲氧基羰基-1〇· 脱乙醯基-紫杉醇，施用實施例5)。以下實施例作爲進一步解釋依據本發明化合物之製備但 -11 - 本纸張尺度逋用中两國家揉率（CNS ) Α4规格（210Χ2ί)7公釐） ♦ —j：-----— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 • /1— —^1 Α7 Β7 4440 J 5 五、發明説明（9 ) 不限制其於實施例。實施例1 3'-脱苯基-3'-(4-吡啶基）-3·-Ν-脱芊醯基-3'-N-甲氧基羰基-紫杉醇於四氫呋喃中，8.6微升1M氟化四丁銨溶液在3 °C，無水氬之大氣下被加至3.1毫克（2.9微莫耳）依據實施例1所製備之化合物於0.5毫升無水四氫呋喃中之溶液，且反應混合物進行揽拌k 3 0分鐘。該混合物被傾倒入飽和的碳酸氫鈉溶液中且利用二氣甲烷進行萃取，有機性萃取物進行濃縮且殘餾物經由一半的分析性薄層板上進行色層分析而加以純化。乙酸乙酯被使用作爲流動相且二氣甲烷與甲醇之混合物被使用作爲洗提劑。0.4毫克（0.5微莫耳，17%)之標題化合物被分離出來》 iH-NMR (CDC13) : d=l」0 (3H)，1.25 (3H)，1.70 (3H)，1.75 (1H), 1.84 (3H), 1.90 (1H), 2.26 (3H), 2.25-2.38 (2H), 2.38 (3H), 2.48 (1H), 2.56 (1H), 3.62 (3H), 3.81 (1H), 4.19 (1H), 4.31 (1H), 4.40 (1H), 4.71 (1H), 4.95 (1H), 5.37 (1H), 5.66 (1H), 5.69 (1H), 6.28 (1H), 6.31 (1H), 7.40 (2H), 7.51 (2H), 7.61 (1H), 8.11 (2H), 8.66 (2H) ppm » 實施例1 a 2·-三異丙基欢坑基- 3· -脱苯基- 3·-(4-«»比咬基）-3'_N -脱节殖基- 3··Ν-甲氧基幾基-7-二乙基硬坑基·紫杉醇 12毫克之約60%氫化納分散液在3°C，無水氬之大氣下被加至4.2毫克（6.0微莫耳）及11.4毫克依據實施例ib與lc所 -12- 本紙張ΛΑ14财鮮（CNS ) A4狀（21GXM7公釐) ' ' I— .-I U-----vy------IT------ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁〕經濟部中央揉率局R工消費合作社印袋 4440 1 5 A7 B7 五、發明説明（10 ) 製備之化合物於0.1毫升無水四氫吱喃中之溶液，且反應混合物被加熱至3 0ec並進行攪拌達30分鐘。該混合物再度被冷卻至3 °C，30%之醋酸水溶液被加入並利用二乙謎進行萃取數次。匯集之有機萃取物利用飽和的氣化鈉溶液加以清洗並於硫酸鎂上進行乾燥。經過遽並除去溶劑後，殘餘物經由兩個分析性薄層板上進行色層分析而加以純化。正-己烷及乙皈b酯之混合物被使用作爲流動相，且二氣甲烷與甲醇之混合物被使用作爲洗提劑。3·7毫克(3·4微莫耳，57%) 之標題化合物被分離出來。 ^-NMR (CDC13) ： d=0.60 (6H), 0.80-1.02 (30H), 1.25 (6H), 1.70 (3H), 1.91 (1H), 2.03 (3H), 2.14 (1H), 2.20 (3H), 2.36 (1H), 2.49 (3H), 2.53 (1H), 3.54 (3H), 3.84 (1H), 4.18 (1H), 4.30 (1H), 4.49 (1H), 4.85 (1H), 4.93 (1H), 5.30 (1H)S 5.60 (1H), 5.70 (1H), 6.32 (1H), 6.47 (1H), 7.28 (2H), 7.49 (2H), 7,59 (1H), 8.13 (2H), 8.64 (2H) ppm。實施例1 b

7-三乙基矽烷基-漿果赤黴素III 經濟部中央揉準局貝工消费合作社印裝 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 21微升之三乙基氣矽烷與ι〇·3毫克之咪唑在3°C，無水氬之大氣下被加至於0.3毫升無水二甲基甲醯胺中3.7毫克（6.3 微莫耳）經色層分析所純化之漿果赤黴素III之溶液，且反應混合物進行攪拌達1小時。該混合物被傾倒入飽和的碳酸氫鈉溶液中，利用二乙醚進行萃取數次並接著利用飽和的氣化鈉溶液加以清洗，且匯集之有機性萃取物進行濃縮。過濾並除去溶劑後所得到之殘餘物經由一半的分析性 -13 · 本纸張尺度逋用中國國家橾率（CNS ) Μ规格（2丨0X297公簸) t A7 B7 «440 i 5 五、發明説明（11 ) 薄層板上進行色層分析而加以純化。正-己烷與乙酸乙酿之混合物被使用作爲流動相，且二氣甲烷與甲醇之混合物被使用作爲洗提劑。3.0毫克（5.6微莫耳，88%)之標題化合物被分離出來。 ^-NMR (CDC13) : d=0.59 (6H), 0.92 (9H), 1.06 (3H), 1.20 (3H), 1.62 (1H), 1.69 (3H), 1.88 (1H), 2.04 (1H), 2.19 (6H), 2.28 (2H), 2.29 (3H), 2.53 (1H), 3.88 (1H), 4.14 (1H), 4.31 (1H), 4.50 (1H), 4.83 (1H), 4.98 (1H), 5.63 (1H), 6.47 (1H), 7.49 (2H)，7.61 (1H), 8.11 (2H) ppm。實施例1 c (3R,4S)-l-(甲氧基羰基）-3 -三異丙基矽烷基氧- 4- (4 -吡啶基）-2 -吖丁啶酮 573毫克之4-二甲基胺基吡啶與193微升之氣甲酸甲酯在3 °C，無水氬之大氣下被加至250毫克（0.78毫莫耳）依據實施例Id所製備之化合物於10毫升無水二氣甲烷中之溶液，且反應混合物被加熱至2 3 °C並進一步攪拌達1 6小時。該混合物被傾例t飽和的氣化按溶液中，利用二乙酸進行萃取數次並利用飽和的氣化鈉溶液加以清洗，且匯集之有機性萃取物進行濃缩β過濾並除去溶劑後所得到之殘餘物經由約 150毫升之薄矽膠上進行色層分析而加以純化，其使用正-己烷與乙酸乙酯之混合物作爲流動相。251毫克（0.66毫莫耳，85%)之標題化合物被分離出來。 iH-NMR (CDCI3) ： d=0.82-1.07 (21H), 3.82 (3H), 5.11 (1H), 5.26 (1H), 7.23 (2H), 8.61 (2H) ppm - 14· 本紙張尺度逋用中鲴H家揉率（CNS ) ( 210义297公釐） f IL-I.-----II (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部中央梯準局貞工消費合作社印裝經濟部中央揉準局貝工消费合作社印製 A7 B7 五、發明説明（12 ) 實施例1 d, (3R，4S)-3-三異丙基碎娱*基氧- 4- (4-<ι比喊基）_2_u丫丁峻嗣於700毫升水中之67.3克硝酸按高舞溶液在3Χ：，無水氬之大氣下被加至17.2毫克（4〇.3毫莫耳）依據實施例1 e所製備之化合物於384毫升乙腈中之溶液’且反應混合物進行攪拌達30分鐘。該混合物被傾倒入飽和的破酸氫納溶液中，利用乙酸乙酯進行萃取數次，且匯集之有機性萃取物利用1% 氫氧化鈉溶液加以清洗並於硫酸鎂上進行乾燥。過滤並除去溶劑後所得到之殘餘物經由約800毫升之薄碎膠上進行色層分析而加以純化，其使用正-己坑與乙酸乙酯之混合物作爲流動相。7.89克（24.6毫莫耳，61%)之標題化合物被分離出來。 1 ^-NMR (CDC13) : <1=*0.78-1.07 (21H), 4.81 (1H), 5.23 (1H), 6.39 (1H), 7.28 (2H)，8.59 (2H) ppm。實施例1 e (3R,4S)-l-(4 -甲氧基苯基）-3 -三異丙基矽烷基氧-4-(4- 吡啶基）-2 -吖丁啶酮於70毫升無水四氩呋喃中之12.6毫升新鮮蒸餾的二異丙基胺在無水氬之大氣下進行冷卻至-30 °C，3 7.6毫升正-己烷中之2.4M正-丁基鋰溶液被加入且混合物被加熱至〇eC » 經過30分鐘後，該混合物被冷卻至-78 °C，類似 Tetrahedron Vol. 48, No. 34, 6985-7012頁，1992中所述之方法所製備i22.1克（56.6毫莫耳）（lR，2S)-2-苯基-1-環己基-三異丙基矽烷基氧乙酸酯於70毫升無水四氫呋喃中之溶液 •15· 本纸張尺度逋用中·國家樑率（CNS > A4规格（210X297公釐) II._：-----------^------ry- (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 4440 | 5 經濟部中央揉準局貝工消费合作杜印裂 Α7 Β7 五、發明説明（13 ) 被逐滴加入且混合物進行攪拌達3小時。15 6克（73 5毫莫耳）依據實施例If所製備醛亞胺於！5。毫升無水四氫吱喃中之溶液接著被加入且混合物在16小時期間被加熱至23。(：。混合物被傾倒入飽和的氣化銨溶液，利用乙酸乙酯進行萃取數次並利用飽和的氣化鈉溶液加以清洗，且匯集之有機性萃取物進行濃縮。過濾並除去溶劑後所得到之殘餘物經由約 1‘8升之薄碎膠上進行色層分析而加以純化，其使用正-己燒與乙酸乙酯之混合物作爲流動相。丨7 2克（40.3毫莫耳， "71%)之標刼化合物被分離出來。 lH-NMR (CDC13) ： d=0.82-1.12 (21H), 3.76 (3H), 5.12 (1H), 5.29 (1H)，6.80 (2H)，7.19-7.30 (4H)，8.60 (2H) ppm。實施例1 f N-(4 -甲氧基苯基）-(4 -吡啶基）趁亞胺 7· 8毫升之吡啶·4·醛與8·4克之硫酸鎂在無水氬之大氣下被加至10克（81.1毫莫耳）4·茴香胺於120毫升無水二氣甲烷中之溶液，且混合物在23Χ：下進行攪拌達4小時。過濾並除去溶劑後所得到之殘餘物自正-己烷進行再結晶化。15.9克 (74.9毫莫耳，92%)之標題化合物被分離出來。 ^-NMR (CDC13) ： d=3.83 (3H), 6.95 (2H), 7.29 (2H), 7.73 (2H)，8.47 (1H)，8·73 (2H) ppm。實施例2 3·-脱苯基-3*-(4·吡啶基）-3’·Ν-脱苄醣基-3·-Ν -甲氧基羰基-7-表-紫杉醇（Α)及3、脱苯基-3·-(4-吡啶基）-2,3’-Ν-雙脱芊醯基-3^Ν-甲氧基羰基-紫杉醇（Β) • 16 - 本纸張尺度逍用中國國家橾準ί CNS ) Α4*格（210Χ297公釐） (請先聞讀背面之注意事項再填寫本萸)

4 440 1 S 經濟部中夬搮準局貝工消费合作社印笨 A7 B7 五、發明説明（14 ) 42微升於四氫呋喃中之iM氟化四丁銨溶液在3 °C，無水氬之大氣下被加至15毫克（13.9微莫耳）依據實施例la所製備之化合物於0.5毫升無水四氫呋喃中之溶液，五混合物在3ec 下進行攪拌達30分鐘，被加熱至23eC並進一步攪拌達30分鐘。該混合物被傾倒入飽和的碳酸氫鈉溶液中，利用二氣甲淀進行萃取，有機性萃取物進行濃縮且殘餘物經由兩個分析性薄層板上進行色層分析而加以純化β乙酸乙醋與甲醇之混合物被使用作爲流動相，且二氣甲烷與甲醇之混合物被使用作爲洗提劑。 3.8毫克（4,7微莫耳’34%)之標題化合物八，2.4毫克（3.4 微莫耳，25%)之標題化合物β以及1.2毫克（1.5微莫耳，11%) 見述於實施例1中之化合物被分離出來。 ^-NMR (CDC13) of A ： d=1.18 (3H), 1.23 (3H), 1.68 (3H), 1.71 (1H), 1.80 (1H), 1.83 (3H), 2.15-2.48 (4H), 2.21 (3H), 2.49 (3H), 3.56 (3H), 3.71 (1H), 3.92 (1H), 4.37 (2H), 4.63 (1H), 4.71 (1H), 4.91 (1H), 5.37 (1H), 5.67 (1H), 5.76 (1H), 6.34 (1H), 6.81 (1H), 7.33 (2H), 7.51 (2H), 7.61 (1H), 8.16 (2H)，8·63·(2H) ppm。實施例3 3·-脱苯基-3’-(4-吡啶基）-3'_;^-脱苄醯基-3'-；^-甲氧基幾基-10 -脱乙醢基-紫杉醇 20.4微升之4ΝΙΙ酸在無水氩之大氣下被加至9.0毫克（10.2 微莫耳）依據實施例3a所製備之化合物Α於0.8毫升乙醇及 0.2毫升四氫呋喃中之溶液，且反應混合物在23 X：下進行攪 -17- 本紙張纽逋用中國S家料（CNS_>A4*WM 210x297公釐> ----ί--:------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部中央揉率局負工消费合作社印裝 4440 I 5 A7 B7 五、發明説明（15 ) f 拌達1小時。鹽酸另外被重覆加入兩次，每次均在1小時攪拌之後’抱和的碳酸氫納溶液被加入，利用二氣曱燒進行萃取，有機性萃取物進行濃縮且殘餘物經由兩個分析性薄層板上進行色層分析而加以純化。乙酸乙酯與乙醇之混合物被使用作爲流動相，JL二氣甲烷與甲酵之混合物被使用作爲洗提劑。6.5毫克(8.5微莫耳，83%)之標題化合物被分離出來。 iH-NMR (CDC13) : d=l‘13 (3H)，1.24 (3H)，1.78 (3H)，1.83 (3H), 1.73-1.96 (3H), 2.25 (2H), 2.37 (3H), 2.60 (1H), 3.62 (3H), 3.92 (1H), 4.14-4.28 (2H), 4.20 (1H), 4.32 (1H), 4.69 (1H), 4.94 (1H), 5.21 (1H), 5.36 (1H), 5.68 (1H), 5.83 (1H), 6.30 (1H), 7.34 (2H), 7.50 (2H), 7.62 (1H), 8.10 (2H), 8.61 (2H) ppm e 實施例3a 3·-脱苯基·3·-(4·吡啶基）-3，-N-脱苄醯基-3*-N-甲氧基羰基-7-三乙基矽烷基-10·脱乙醯基-紫杉醇（A) 及 3··脱苯基·3·-(4-吡啶基）-2,3·-Ν-雙脱苄醯基甲氧基羰基-7-三乙基矽烷基-10-脱乙醢基·紫杉醇（B) 25毫克（23微莫耳）依據實施例3b所製備之粗製產物在-10eC下以類似於實施例1方式進行反應，經過逐漸完成及純化後，9.0毫克（10.2微莫耳，44%>之樣題化合物A，2.5毫克（3.2微莫耳，14%)之標题化合物B以及2.2毫克(2.9微莫耳， 12%)實施例3之標題化合物被分離出來。 -18- ϋίΜΐ度埴用中B8)家揉率（CNS )入4規格（210X297公釐) -I ^^^1 ^^^1 ^^^1 I ^^^1 ^^^1 ϋ ^^^1 ^^1 (請先《讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 4440 J 5 A7 B7 五、發明説明,（16 ) ^-NMR (CDCI3) of A ： d=0.43-0.67 (6H), 0.94 (9H), 1.13 (3H), 1.24 (3H), 1.70 (1H), 1.76 (3H), 1.87 (3H), 1.93 (1H), 2.24 (2H), 2.36 (3H), 2.48 (1H), 3.62 (3H), 3.87 (1H), 4.18 (1H), 4.29 (1H)} 4.34 (IH), 4.68 (1H), 4.91 (1H), 5.12 (1H), 5.36 (1H), 5.63 (1H), 5.77 (1H), 6.29 (1H), 7.33 (2H), 7.49 (2H), 7.60 (1H), 8.10 (2H)，8.60 (2H) ppm。 ^-NMR (CDCI3) of B ： d=0.45-0.64 (6H), 0.94 (9H), 1.02 (3H), 1.25 (4H), 1.67 (1H), 1.72 (3H), 1.82 (3H), 1.88-2.12 (2H), 2.18 (4H), 2.47 (1H), 3.50 (1H), 3.67 (1H), 3.70 (3H), 3.90 (lH),' 4.26 (1H), 4.30 (1H), 4.59 (1H), 4.61 (1H), 4.66 (1H), 4.91 (1H), 5.03 (1H), 5.27 (1H), 5.65 (1H), 6.25 (1H), 7.32 (2H)，8.62 (2H) ppm。實施例3b 2、三異丙基矽烷基-3’-脱苯基-3、（4-吡啶基）-3、N-脱苄醯基-3、N-甲氧基羰基-7-三乙基矽烷基-10-脱乙醯基-紫杉醇經濟部中央揉準局負工消费合作社印製 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 0.23毫升之氫氧化鉼在無水氬之大氣下被加至25毫克 (23.2微莫耳）依據實施例la所製備之化合物於1.2毫升乙醇中之溶液，且混合物在23°C進行攪拌達24小時《該混合物被傾倒入飽和的氣化鈉溶液中，利用乙酸乙醋進行萃取數次並於硫k鎂上進行乾燥。過濾並除去溶劑後所得到之殘餘物未經純化而進一步進行反應。22毫克（最大値21微莫耳，最大値91%)之標題化合物，其仍含有小量的起始物質，被分離出來。 -19- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ί A4规格（2丨0X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 4440 1 5 A7 B7 五、發明説明（17 ) « 以下施用實施例證明依據本發明化合物之生物學活性而不限制其應用於那些實施例。施用實施例1 微管蛋白之分離及純化牛腦（每個330克）係取自新鮮打開的牛頭且於冰冷的PM4-M緩衝液中進行運送。每個腦均不含腦膜亦不含任何血栓並利用足量的PM4-M緩衝液於冷卻容器中進行均質化。得自兩個牛腦之均質化材料利用總量5〇〇毫升之緩衝液補至 1.0公升之總饉積並施予第一次離心（GSA轉子，15分鐘，4 。(：，6500 g)。該上清液之表面不含有脂溢性皮膚，其於4 層的薄細知布上進行過濾，轉移至平衡的雜心管（420毫升）中並再次離心（Ti 45轉子，96000 g，75分鐘，4 eC)。上清液利用吸管自沉《物移開並於6層的薄細棉布上進行過濾，且於0.01M重破酸鹽/PBS中之50mMGTP溶液被加入以得到1 mM之最終濃度。第一次聚合作用係在平衡的離心管中，水浴加熱溫至371下施行達45分鐘。已形成之微管經由離心而被移除（Ti 45轉子，27eC，96000 g，60分鐘），上清液經由吸管而小心地被移除且非常柔軟之蛋白色沉澱物利用刮勺小心地與管壁分開。之後40毫升的冷PM緩衝液被加至沉澱物，接著使用小型玻璃研缽進行均質化並在冷卻容器内;的平衡離心管中於冰上過夜培育（自12至16小時）。解聚產物經由Ti 60轉子中離心而被除去（4°C，96000 g，60分鐘）且上清液利用PM8-M緩衝液進行稀釋至1 : 1，其在37 °C下平衡之離心管中進行培育達4 5分鐘並再次離心 -20- 本紙張/dil财目财揉率（CNS > A4*Mfr (21GX297公釐)! (請先閲讀背面之注f項再填寫本頁) 訂 44401^ A7 B7

經濟部中央梯準局貞工消费合作社印$L 五、發明説明（18 (Ti 45轉子，27aC，96000 g，60分鐘）。上清液經由吸管而小心地被移除且非常柔軟之蛋白色沉殿物被取放於2 0毫升之冷PM緩衝液中，使用小型玻璃研缽進行均質化並在冰上進行培育達30分鐘。重新離心（Ti 60轉子，4X：，96000 g，60分鐘）得到微管蛋白，其蛋白含量係依據Pearce或依據 280微毫米下之光度測量加以測定。在蛋白測定中，分離材料對ΡΜ^衝液之稀釋以1 : 10，1 : 20及1 : 40被採用》 ΡΜ緩衝液具有自己的消光且以0値自測定之蛋白含量中扣除。分離之材料利用ΡΜ緩衝液加以稀釋至想要的蛋白濃度（2毫克/毫升）。施用實施例2 3'-脱苯基-3’-(4-吡啶基）-3_-：«-脱苄醢基-3，-：^-甲氧基羰基-紫杉醇於微管蛋白之生物學影響微管蛋白聚合之測量及微管之解聚係經由光度學加以施行。測量之前，依據施用實施例1所製備之微管蛋白進行解凍及脱氣達15分鐘。計光器被設定至350微毫米波長。3 微升之溶押/檢髗，6微升GTP(最终0-25微草耳/升）及291 微升之微管蛋白（2毫克蛋白/毫升）被吸入乾燥且乾淨之盤中（1 0毫米）β檢禮小心地加以攪拌（不產生氣泡），立即放入盤架中且在37Τ下開始測量操作。一旦聚合最大値已達到（20分鐘後之溶劑對照组及紫杉醇1Ε-5莫耳/升），解聚係經由降低溫度至1 5 °C而開始》測量操作係在解聚之末加以停止且吸收改變過程以時間與溫間之函數圖形形式加以呈現（參見圏1)。 -21 - t纸依尺度逍用中國國家樑準（CMS ) A4洗格（ 210X297 公釐） „--^-----W-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 4440 I 5 A7 B7 經濟部中央橾準局舅工消费合作社印« 五、發明説明（19 ) 此圖明顯地呈現紫杉醇相較於對照组加速了微管蛋白之聚合並抑制解聚，而依據本發明之化合物3、脱苯基-3、 (4-吡啶基）-3、N-脱苄醯基·3'-Ν-甲氧基羰基-紫杉醇抑制聚合且明顯地比紫杉醇更能安定已形成之微管。施用實施如3 3匕脱苯基·3_-(4-吡啶基）-3'-Ν-脱苄醯基-3，-Ν-甲氧基羰基-7-表-紫杉醉於微管蛋白之生物學影響 3·-脱苯基-3*-(4-吡啶基）-3，-Ν·脱芊醯基-3，·Ν·甲氧基羰基-7_表-紫杉酵引起微管蛋白聚合之更明顯加強作用並且比紫杉醇更能安定已形成之微管》該結果被顯示於圖 2。施用實施例4 3·-脱苯基-3'-(4-吡啶基）-2,3_-1^-雙脱芊醯基-3'-1^-甲氧基羰基-紫杉醇對於微管蛋白之生物學影響 3、脱苯基-3’-(4-吡啶基）.2,3，-N·雙脱苄醢基·3，-Ν -甲氧基羰基-紫杉醉引起微管蛋白聚合之更明顯加強作用並且比紫杉_更能安定已形成之微管。該結果被顯示於阖3。施用實施例5 3'-脱苯基·3*-(4-吡啶基）-3，-Ν-脱芊醢基-3’·Ν-甲氧基藏基-10-脱乙醯基-紫杉醇對於微管蛋白之生物學影響 3··脱苯基-3·-(4-吡啶基）·3，-Ν-脱芊醯基-3'-Ν-甲氧基羰基-10-脱乙醯基-紫杉醇在相關於微管蛋白聚合之行爲上與紫杉醇並無本同，但其確實比紫杉醇基本上更能安定已形成之微管。該結果被頰示於圈4。 22· 良纸铁尺度璁用中國國家榡準（CNS > Α4祝格（210X297公漦>

f請先閑讀背面之注#項再填弯本頁J i 訂-

4440 1 S A7 _B7 五、發明説明,(20 ) 施用實施例6 對於腫瘤細胞株之抗-增殖效果： 3·-脱苯基-3_-(4-吡啶基脱苄醯基-3，·Ν-甲氧基羰基-紫杉醇（1)， 3’ -脱苯基-3’-(4-吡啶基）-3'-1^-脱苄醯基-3，-1^-甲氧基羰基·7-表-紫杉醇（2)， 3·-脱苯基-3·-(4-吡啶基）-2,3·-Ν·雙脱苄醯基-3·-Ν -甲氧基羰基·紫杉醇（3)及 3、脱苯基-3^(4-吡啶基）-3·-Ν-税苄醢基-3·-Ν -甲氧基羰基-10-¾¾乙醯基-紫杉醇（4) MDA MB 435乳癌細胞（5000細胞/孔）被放置於微滴定盤中（第0天’ RPMI培養基，1 %非必需胺基酸，1 %丙酮酸， 10%胎牛血清）。數種濃度之物質係在第1天加入。抗增殖效果是在第3天使用MTT方法進行測定。IC5()値自其進行決定。該結果顯示於表1中。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央揲準局負工消费合作社印製表1 化合物 ^«)八-；\13 43 5細胞 ICs〇[nM3 1 2.0 2 0.8 3 8000 4 60 紫杉酵 3 (參考） -23 * 本纸浪尺度逋用中國國家梯率（CNS 210X2974^*7 4440 1 £ A7 B7 五、發明説明（21 ) ♦ 3、脱苯基-3·-(4-吡啶基）-3、N-脱苄醯基-3'-N -甲氧基羰基·紫杉醇證明類似於紫杉醇之活性，而3’-脱苯基-3·-(4-吡啶基）-3’-N-脱芊醯基-3*-N-甲氧基羰基-7-表-紫杉醇證明相較於紫杉醇明顯地改良之抑制活性。 (請先閲讀背面之注$項再填寫本頁) 經濟部中央揉準局負工消費合作社印製 24- 本紙張尺度逍用中國國家標率（CNS ) A4规格（210X297公釐）

Claims

Λ. % 〇也_轵私1〇1169號專利申請案請專利範圍修正本(90年3月） A8 B8 C8 D8 經濟部中央榡率局負工消费合作社印製六、申請專利範圍 1. 一種通式I之紫杉烷類

其中 S k 可為〇CC0)CH0HCH(NHC0R3}-^^ . R1可為氫iCrCg醯基， R2可為a -0H或泠-0H， R3可為crc6烷基，χ_取代之苯基，CrCV>^氧基， X可為氩，鹵素，或-CN，且 I中之游離羥基可進而經由醚化或酯化而進行官能性修雀申，以及其at -，泠-與τ -環糊精籠形包合物’以及利用脂質體包覆之通式I化合物。 2. 根據申請專利範圍第1項之通式I之紫杉烷類’其係為3 ·-脫苯基-3，-(4-吡啶基）-3'-1<[-脫芊醯基-3’-：^-甲氧基羰基-紫杉醇" 3. 根據申請專利範圍第1項之通式I之紫杉沈類’其係為3，-脫苯基-3,-(4-吡啶基）-3，-：^-脫笮醢基-3'_：^甲氧基羰基-7-表·紫杉酵。 4. 根據申請專利範圍第i項之通式I之紫杉炫類’其係為3，· 本紙張尺度遽用中家檬準（CNS > A4*t格（210X297公* ) I - I-1 I,·— !1r· I - ^^1 I n ^^1 > i---- — . ^^1 (請先H讀背面之注$項再填寫本頁) 444〇 15 Α8 BS C8 D8 經濟部中央梯牟局貝工消费合作社印製 A、申請專利範圍脫苯基·3’_(4-吡啶基）-2,3'-Ν·雙脫苄醯基-3，-N-甲氧基敛基-紫杉酵》 5. 根據申請專利範園第丨項之通式〗之紫杉烷類，其係為3 脫苯基_3、4-吡啶基）-3,-N-脫芊醯基_3,_N -甲氧基幾基-10 -脫乙醯基-紫杉醇。 6. —種製備根據申請專利範圍第〖至5項中任一項通式〖紫杉烷衍生物的方法，其特徵在於由通式II之醇

其中R與R 2為如申請專利範圍第丨項所定義且包含於工Γ 中之羥基可視需要加以保護，與通式nia，1111?或111(；之化合物反應 da 其中R為如申請專利範圍第i項所定義且χ，，可為羥基，〇烷基或’且其中游離羥基經由醚化或酯化加以保護，形成通式ί化合⑯，其中游離經基可進而經 ! - —^1 ml ^^1 1^1 —ii I - j II .... .....^^1 / (請先w讀背面之注意事項再填寫本頁)

R：1 人-H 〇

-2 ·