JP2001505527A

JP2001505527A - ピリジル置換されたｃ▲下１３▼側鎖を有するタキサン誘導体、その製造方法および抗腫瘍剤としてのその使用

Info

Publication number: JP2001505527A
Application number: JP52730897A
Authority: JP
Inventors: クラーウルリヒ; ネーフギュンター; グラーフヘルマン
Original assignee: シェーリングアクチエンゲゼルシャフト
Priority date: 1996-01-31
Filing date: 1997-01-31
Publication date: 2001-04-24
Also published as: DE19605024A1; HK1018778A1; HUP9901027A2; PL328055A1; NO983509D0; AU714313B2; PL186796B1; HUP9901027A3; US6162920A; IL124951A; ATE233757T1; CN1210535A; SK101198A3; NO983509L; TW444015B; ES2192261T3; EP0896577A1; DE69719502T2; RU2163599C2; ZA97847B

Abstract

(57)【要約】一般式（Ｉ）：［式中、Ｓｋは（ｉ）、Ｒ¹は水素またはＣ₁〜Ｃ₁₀アシル、Ｒ²はα−ＯＨまたはβ−ＯＨ、Ｒ³はＣ₁〜Ｃ₁₀アルキル、Ｘ置換されたフェニル、Ｃ₁〜Ｃ₁₀アルコキシ、Ｘは水素、ハロゲン、−Ｎ₃または−ＣＮであってもよく、かつ（Ｉ）中のヒドロキシ基はさらにエーテル化またはエステル化により官能的に変性されていてもよい］およびそのα−、β−およびγ−シクロデキストリンクラスレート、およびまたリポソームで包接された一般式（Ｉ）の化合物を記載する。本発明による一般式（Ｉ）の化合物は、タキソールと比較して、有利に変化した活性プロフィールを有する。明らかに改善された、微小管の安定化に加え、式（Ｉ）の化合物はチューブリンの重合に付加的な影響を示す。

Description

【発明の詳細な説明】ピリジル置換されたＣ₁₃側鎖を有するタキサン誘導体、その製造方法および抗腫瘍剤としてのその使用本発明は、チューブリンの重合および脱重合に影響を与える能力のある、薬学的に活性な化合物に関する。一連の天然有糸分裂毒素は抗腫瘍剤として使用されているか、または臨床試験の過程にある。紡錘体系中で微小管の重合を阻害することによる細胞毒作用を示す（例えばビンカアルカロイド、コルヒチン）か、またはチューブリンの重合におけるＧＴＰ非依存性の増加により、および微小管の脱重合の阻害により細胞毒作用を達成する（例えばタキソール、タキソテル）種々のクラスの前記の有糸分裂毒素が存在する。これまで理解されていない物理化学的性質および腫瘍細胞の特性の結果として、有糸分裂毒素は腫瘍細胞に対するある種の選択性を有するが、しかし非形質転換細胞に対する著しい細胞毒性がまだ残っている。さらに選択的で、より容易に製造でき、かつタキサンクラスの物質のように、微小管の脱重合を阻害することができる化合物に対する探求は、意外なことにドイツ特許出願番号４４１６３７４．６およびドイツ特許出願番号１９５１３０４０．５に記載のように、ボルネオールエステルの発見につながった。前記の化合物クラスにおける構造的な変性は、微小管に対する作用に関して最適化のための著しい可能性を示した。とりわけＳｋ−Ｈタイプの酸と前記のボルネオールとのホルマールエステル化により優れた結果が得られた。ここに記載の、タキソールのイソセリン鎖がＳｋにより代えられているタキソール誘導体の合成により意図するところは、タキソールと比較してこのクラスの物質においてもまた微小管の改善された安定化を達成することが可能であるかどうかを研究することであった。さらに以下の刊行物が薬理学的活性を示す化合物を開示している：ＷＯ−Ａ−９４２１２５２ Bioorg．Med．Chem．Lett．(1994)4(11)，1381-1384 ＥＰ−Ａ−０５３４７０８ Angew．Chem．Int．Ed．Engl．(1994)33(1)，15-44 ＷＯ−Ａ−９５１３０５３ＷＯ−Ａ−９５１９９９４ J．Pharm．Sci．(1995)84(10)，1223-1230 ＷＯ−Ａ−９６００７２４しかし、ＷＯ−Ａ−９４２１２５２に開示されている化合物は先行技術の最も類似している状態を形成している。ところで以外にも、本発明による式Ｉの化合物は、タキソールおよび先行技術の化合物と比較して、有利に変化した活性プロフィールを有することが判明した。式Ｉの化合物は、微小管の明らかに改善された安定化に加えて、チューブリンの重合に対する付加的な影響を示す。本発明によるタキサンは、一般式Ｉ：［式中、Ｒ¹は水素またはＣ₁〜Ｃ₁₀アシルを表し、Ｒ²はα−ＯＨまたはβ−ＯＨを表し、Ｒ³はＣ₁〜Ｃ₁₀アルキル、Ｘ置換されたフェニル、Ｃ₁〜Ｃ₁₀アルコキシを表し、Ｘは水素、ハロゲン、−Ｎ₃または−ＣＮを表し、かつＩ中の遊離ヒドロキシ基はさらにエーテル化またはエステル化により官能的に変性されていてもよい］およびまたこれらのα−、β−およびγ−シクロデキストリンクラスレート、およびまたリポソームで包接された一般式Ｉ化合物により特徴付けられる。アルキル基Ｒ³として、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分枝のアルキル基、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘプチル、ヘキシルおよびデシルが考慮される。１〜４個の炭素原子を有するアルキル基は有利である。一般式ＩのＲ¹およびＲ³中に含有されているアシルおよびアルコキシ基は、それぞれ１〜１０個の炭素原子を有し、ホルミル、アセチル、プロピニルおよびイソプロピニル基を有し、かつそれぞれメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシおよびｔ−ブトキシ基が有利である。Ｘの定義中のハロゲンは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素である。一般式Ｉの有利な化合物は以下のものである：３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３ ’−Ｎ−メトキシカルボニル−タキソール、３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３ ’−Ｎ−メトキシカルボニル−７−エピ−タキソール、３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−２，３’−Ｎ−ビスデベンゾイル−３’−Ｎ−メトキシカルボニル−タキソール、および３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３ ’−Ｎ−メトキシカルボニル−１０−デスアセチル−タキソール。本発明はまた式Ｉのボルネオール誘導体の製造方法にも関し、該方法は、一般式ＩＩ：［式中、Ｒ¹およびＲ²は前記のものを表し、かつＩＩ中に含まれているヒドロキシ基は場合により保護されていてもよい］のアルコールと、一般式ＩＩＩａ、ＩＩＩｂまたはＩＩＩｃ：［式中、Ｒ³は前記のものを表し、かつＸ’はヒドロキシ、Ｏ−アルキルまたはハロゲン、およびその際遊離ヒドロキシ基はエーテル化またはエステル化により保護されていてもよい］の化合物とを反応させて、ヒドロキシ基がエーテル化またはエステル化によりさらに官能的に変性されていてもよい一般式Ｉの化合物を形成することを特徴とする。ＩＩ中のアルコール官能基のエステル化のために、塩基、例えば金属水酸化物（例えば水酸化ナトリウム）、アルカリ金属アルコラート（例えば、ナトリウムメタノラート、カリウムｔ−ブタノラート）、アルカリ金属ヘキサメチルジシラザン（例えばヘキサメチルジシラザンナトリウム）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノン−５−エン（ＤＢＮ）、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデセ−７−エン（ＤＢＵ）、トリエチルアミン、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）または１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）を用いて脱プロトンを実施し、かつ一般式ＩＩＩのカルボン酸誘導体を用いて不活性溶剤、例えばジクロロメタン、ジエチルエーテルまたはテトラヒドロフラン中、−７０℃〜＋５０℃で反応を実施する。有利な反応は塩基として水酸化ナトリウムを、カルボン酸誘導体として環式酸アミドおよび溶剤としてテトラヒドロフランを用いて−１０℃〜＋２５℃の温度で実施する。Ｉ中の遊離ヒドロキシ基は、当業者に公知の方法によりさらに、例えばエーテル化またはエステル化により、官能的に変性されていてもよい。例えば遊離ヒドロキシ基は生理学的に認容性の酸でピリジニウム塩に、生理学的に認容性の塩基でホスフェートまたはその塩に、またはそのエステルに、生理学的に認容性の塩基でスルフェートまたはその塩に、またはそのエステルに、または水溶性ポリマーでエステルまたはエーテルに変換してもよい。自体が腫瘍抑制作用を示す化合物のエーテルおよびエステルを製造することもできる。新規のタキソール誘導体の生物学的作用および使用分野式Ｉの新規の化合物は貴重な医薬品である。該化合物はチューブリンの重合に影響を与え、かつ形成された微小管を安定化することによりチューブリンと相互作用し、かつ従って相特有の方法で細胞分裂に影響を与えることができる。これは特に急速に成長し、細胞間の調整機構により大幅にその成長が影響をうけることのない腫瘍細胞に作用する。前記のタイプの活性物質は、原則として、細胞分裂に対する影響を治療的に示しうる疾患の治療に適切である。例えば、悪性腫瘍、マラリアの治療、グラム陰性菌に起因する疾患の治療、およびまたエクサイトキシン機構に基づく中枢および末梢神経系の疾患の治療、例えば脳卒中または外傷性脳損傷の結果として生じた急性神経退行症状の治療、アルツハイマー症を含む、慢性神経退行症状の治療、およびまた筋萎縮性側索硬化症の治療が挙げられる。悪性腫瘍のための使用の分野として、例えば卵巣、胃、結腸、アデノ、胸、肺、頭および首の癌、悪性メラノーマならびに急性リンパ球性および骨髄性白血病の治療が挙げられる。本発明による化合物は一般に単独で、または相加または相乗効果を得るために、その他の活性成分および問題の治療分野で使用される物質クラスと組み合わせて使用してもよい。腫瘍治療の例として、以下のものとの組み合わせが挙げられる：白金錯体、例えばシスプラチンおよびカルボプラチン、例えばドキソルビシンのようなアントラサイクリンのクラスからの、または例えばＣｌ−９４１のようなアントラピラゾールのクラスからの層間物質、例えばビンクリスチンおよびビンブラスチンのようなビンカアルカロイドのクラスから、またはドイツ特許出願番号４４１６３７４．６およびドイツ特許出願番号１９５１３０４０．５に記載のボルネオールエステルの新規のクラスから、あるいは例えばリゾキシン(rhizoxin)または例えばコルヒチン、コンブレタスタチン(combretastatin)Ａ−４およびエポチロン(epothilon)ＡおよびＢのようなその他の化合物のようなマクロライドからの、チューブリンと相互作用する物質、ＤＮＡトポイソメラーゼ阻害剤、例えばカンプトテシン、エトポシド、トポテカン(topotecan)およびテニポシド(teniposide)、葉酸塩またはピリミジンアンチメタボライト、例えばロメトレキソール(lomet rexol)およびゲンシツビン(gemcibutin)、ＤＮＡアルキレート化化合物、例えばアドゼレシン(adozelesin)およびダイスタマイシン(dystamycin)Ａ、増殖因子阻害剤（例えばＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＴＧＦｂ、ＥＧＦ）、例えばソマトスタチン、スラミン、ボンベシン拮抗阻害物質、チロシンタンパク質キナーゼの、またはタンパク質キナーゼＡおよびＣの阻害薬、例えばエルブスタチン(erbstatin)、ゲニステイン、スタウロスポリン(stau rosporin)、イルモフォシン(ilmofosin)および８−Ｃｌ−ｃＡＭＰ、例えばミフェプリストン、オナプリストン(onapristone)のようなアンチゲスターゲンのクラスからの、または例えばタモキシフェンのようなアンチオステロゲンのクラスからの、または例えばシプロテロンアセテートのようなアンチアンドロゲンのクラスからのアンチホルモン、例えばＰＧＩ₂、ＰＧＥ₁、６−オキソ−ＰＧＥ₁およびこれらの安定化した誘導体（例えばイロプロスト(iloprost)、シカプロスト(cicaprost)、ベラプロスト(beraprost)）のような、例えばエイコサノイドのクラスからの転移阻害化合物、膜内外Ｃａ²⁺流入阻害剤、例えばベラパミル、ガロパミル(galopamil)、フルナリジン、ジルチアゼム、ニフェジピンおよびニモジピン、精神安定剤、例えばクロロプロマジン、トリフルオペラジン、チオリダジンおよびペルフェナジン、局所麻酔薬、例えばカルバニレート−Ｃａ７、シンコカイン(cinchocaine)、カルバニレート−Ｃａ₃、アルチカイン(articaine)、カルバニレート、リドカイン、血管形成阻害物質、例えばアンチ−ＶＥＧＦ抗体、エンドスタチン(endostati n)Ｂ、インターフェロンａ、ＡＧＭ１４７０、および乾癬、カポジ肉腫およびニューロブラストーマにおける細胞増殖の阻害薬。本発明は、製薬的に認容性である一般式Ｉの化合物、つまり使用される用量で毒性のない化合物をベースとし、場合により通例の助剤、担体および添加剤を含有する医薬品にも関る。本発明による化合物は自体公知の製剤法により加工して、腸内、経皮、非経口または局所投与のための薬学的製剤にしてもよい。これらは錠剤、糖衣錠、ゼラチンカプセル、グラニュール、座薬、埋め込み剤、注射用蒸留水水溶液または油溶液、懸濁液またはエマルジョン、軟膏、クリームおよびゲルの形で投与することができる。従って本発明は、医薬品製剤における本発明による化合物の使用にも関する。活性物質は、製剤において通例の添加剤、例えばアラビアゴム、タルク、デンプン、マンニトール、メチルセルロース、ラクトース、界面活性剤例えばトゥイーンズ(Tweens)またはミルジ(Myrj)、ステアリン酸マグネシウム、水性または非水性担体、パラフィン誘導体、湿潤剤、分散剤、乳化剤および保存剤、および味を調整するための着香剤（例えばエーテル油）と混合してもよい。従って本発明は、活性物質として本発明による化合物を少なくとも１種含有する製薬的組成物および医薬品に関する。１回服用量は約０．１〜１００ｍｇの活性物質を含有する。本発明による化合物のヒトにおける投与量は約０．１〜１０００ｍｇ／日である。図の説明図１は、時間と温度の係数としての吸収の変化の経過を示す（３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３’−Ｎ−メトキシカルボニル−タキソール、適用例２）。図２は、時間と温度の係数としての吸収の変化の経過を示す（３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３’−Ｎ−メトキシカルボニル−７−エピ−タキソール、適用例３）。図３は、時間と温度の係数としての吸収の変化の経過を示す（３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−２，３’−Ｎ−ビスデベンゾイル−３’−Ｎ− メトキシカルボニル−タキソール、適用例４）。図４は、時間と温度の係数としての吸収の変化の経過を示す（３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３’−Ｎ−メトキシカルボニル−１０−Ｎデスアセチルータキソール、適用例５）。以下の例は本発明による化合物の製造をさらに詳しく説明するものである。例１３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３’ −Ｎ−メトキシカルボニル−タキソールテトラヒドロフラン中のフッ化テトラブチルアンモニウムの１Ｍ溶液８．６μ ｌを乾燥アルゴン雰囲気下に３℃で、無水テトラヒドロフラン０．５ｍｌ中の、例１ａにより製造した化合物３．１ｍｇ（２．９μモル）の溶液に添加し、かつ反応混合物を３０分撹拌する。該混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液に注ぎ、かつジクロロメタンで抽出を行い、有機抽出物を濃縮し、かつクロマトグラフィーにより分析薄層プレートの半分上で残留物を精製する。酢酸エチルを移動相として使用し、かつジクロロメタンとメタノールとの混合物を溶離剤として使用する。表題化合物０．４ｍｇ（０．５μモル、１７％）が単離される。例１ａ２’−トリイソプロピルシリル−３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル） −３’−Ｎ−デベンゾイル−３’−Ｎ−メトキシカルボニル−７−トリエチルシリル−タキソール約６０％の水素化ナトリウム分散液１２ｍｇを乾燥アルゴン雰囲気下に３℃で、無水テトラヒドロフラン０．１ｍｌ中の例１ｂおよび１ｃにより製造した化合物４．２ｍｇ（６．０μモル）および１１．４ｍｇの溶液に添加し、かつ該混合物を３０℃に加熱し、かつ３０分撹拌する。該混合物を再度３℃に冷却し、３０％酢酸水溶液を添加し、かつジエチルエーテルで数回抽出を行う。合した有機抽出物を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、かつ硫酸マグネシウム上で乾燥させる。濾過および溶剤の除去後、クロマトグラフィーにより２つの分析薄層プレート上で残留物を精製する。ｎ−ヘキサンと酢酸エチルとの混合物を移動相として使用し、かつジクロロメタンとメタノールとの混合物を溶離剤として使用する。表題化合物３．７ｍｇ（３．４μモル、５７％）が単離される。例１ｂ７−トリエチルシリル−バッカチンＩＩＩトリエチルクロロシラン２１μｌおよびイミダゾール１０．３ｍｇを乾燥アルゴン雰囲気下に３℃で、無水ジメチルホルムアミド０．３ｍｌ中の、クロマトグラフィーにより精製したバッカチンＩＩＩ(Calbiochem Corp.)３．７ｍｇ（６．３μモル）の溶液に添加し、かつ反応混合物を１時間撹拌する。該混合物を飽和炭酸水素ナトリウムに注ぎ、ジエチルエーテルで数回抽出を行い、その後に飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、かつ合した有機抽出物を濃縮する。濾過および溶剤の除去後に得られた残留物を、クロマトグラフィーにより分析薄層プレートの半分上で精製する。ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物を移動相として使用し、かつジクロロメタンとメタノールとの混合物を溶離剤として使用する。表題化合物３．０ｍｇ（５．６μモル、８８％）が単離される。例１ｃ（３Ｒ，４Ｓ）−１−（メトキシカルボニル）−３−トリイソプロピルシリルオキシ−４−（４−ピリジル）−２−アゼチジノン４−ジメチルアミノピリジン５７３ｍｇおよびクロロギ酸メチルエステル１９３μｌを乾燥アルゴン雰囲気下に３℃で、無水ジクロロメタン１０ｍｌ中の、例１ｄにより製造した化合物２５０ｍｇ（０．７８ミリモル）の溶液に添加し、かつ反応混合物を２３℃に加熱し、かつさらに１６時間撹拌する。該混合物を飽和塩化アンモニウム溶液に注ぎ、ジエチルエーテルで数回抽出を行い、その後に飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、かつ合した有機抽出物を濃縮する。濾過および溶剤の除去後に得られた溶液を、クロマトグラフィーにより約１５０ｍｌの微粒子状シリカゲル上でｎ−ヘキサンと酢酸エチルとの混合物を移動相として使用して精製する。表題化合物２５１ｍｇ（０．６６ミリモル、８５％）が単離される。例１ｄ（３Ｒ，４Ｓ）−３−トリイソプロピルシリルオキシ−４−（４−ピリジル）− ２−アゼチジノン水７００ｍｌ中の硝酸セリウムアンモニウム６７．３ｇの溶液を、アルゴン雰囲気下に３℃で、アセトニトリル３８４ｍｌ中の、例１ｅにより製造した化合物１７．２ｇ（４０．３ミリモル）の溶液に添加し、かつ反応混合物を３０分撹拌する。該混合物を飽和炭酸水素ナトリウムに注ぎ、酢酸エチルで数回抽出を行い、かつ合した有機抽出物を１％水素化ナトリウム溶液で洗浄し、かつ硫酸マグネシウム上で乾燥する。濾過および溶剤の除去後に得られた残留物を、クロマトグラフィーにより約８００ｍｌの微粒子状シリカゲル上でｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの移動相混合物を使用して精製する。表題化合物７．８９ｇ（２４．６ミリモル、６１％）が単離される。例１ｅ（３，４Ｓ）−１−（４−メトキシフェニル）−３−トリイソプロピルシリルオキシ−４−（４−ピリジル）−２−アゼチジノン無水テトラヒドロフラン７０ｍｌ中の、蒸留したてのジイソプロピルアミン１２．６ｍｌの溶液を、乾燥アルゴン雰囲気下で−３０℃に冷却し、ｎ−ヘキサン中のｎ−ブチルリチウムの２．４Ｍ溶液３７．６ｍｌを添加し、かつ該混合物を０℃に加熱する。３０分後、該混合物を−７８℃に冷却し、無水テトラヒドロフラン７０ｍｌ中の、Tetrahedoron Vol．48，No．34，pp.6985-7012，1992の記載と同様に製造した（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニル−１−シクロヘキシル−トリイソプロピルシリルオキシアセテート２２．１ｇ（５６．６ミリモル）の溶液をここに滴加し、かつ該混合物を３時間撹拌する。次いで無水テトラヒドロフラン１５０ｍｌ中の、例１ｆにより製造したアルジミン１５．６ｇ（７３．５ミリモル）の溶液を添加し、かつ該混合物を１６時間、２３℃ に加熱する。該混合物を飽和塩化アンモニウム溶液に注ぎ、酢酸エチルで数回抽出を行い、その後に飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、かつ合した有機抽出物を濃縮する。濾過および溶剤の除去後に得られた残留物を、クロマトグラフィーにより約１．８リットルの微粒子状シリカゲル上でｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの移動相混合物を使用して精製する。表題化合物１７．２ｇ（４０．３ミリモル、７１％）が単離される。例１ｆＮ−（４−メトキシフェニル）−（４−ピリジル）アルジミンピリジン−４−アルデヒド７．８ｍｌおよび硫酸マグネシウム８．４ｇを乾燥アルゴン雰囲気下に無水ジクロロメタン１２０ｍｌ中の４−アニシジン１０ｇ（８１．１ミリモル）の溶液に添加し、かつ該混合物を２３℃で４時間撹拌する。濾過および溶剤の除去後に得られた残留物をｎ−ヘキサンから再結晶させる。表題化合物１５．９ｇ（７４．９ミリモル、９２％）が単離される。例２３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３’ −Ｎ−メトキシカルボニル−７−エピ−タキソール（Ａ）および３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−２，３’−Ｎ−ビスデベンゾイル−３’−Ｎ− メトキシカルボニル−タキソール（Ｂ）テトラヒドロフラン中のフッ化テトラブチルアンモニウムの１Ｍ溶液４２μｌを乾燥アルゴン雰囲気下に３℃で、無水テトラヒドロフラン０．５ｍｌ中の、例１ａにより製造した化合物１５ｍｇ（１３．９μモル）の溶液に添加し、かつ該混合物を３℃で３０分撹拌し、２３℃に加熱し、かつさらに３０分撹拌する。該混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液に注ぎ、かつジクロロメタンで抽出を行い、有機抽出物を濃縮し、かつ残留物をクロマトグラフィーにより２つの分析薄層プレート上で精製する。酢酸エチルとメタノールとの混合物を移動相として使用し、かつジクロロメタンとメタノールとの混合物を溶離剤として使用する。表題化合物Ａ３．８ｍｇ（４．７μモル、３４％）、表題化合物Ｂ２．４ｍｇ（３．４μモル、２５％）および例１に記載の化合物１．２ｍｇ（１．５μｍ、１１％）が単離される。例３３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３’ −Ｎ−メトキシカルボニル−１０−デスアセチル−タキソール４Ｎ塩酸２０．４μｌを、アルゴン雰囲気下に、エタノール０．８ｍｌおよびテトラヒドロフラン０．２ｍｌ中の例３ａにより製造した化合物９．０ｍｇ（１０．２μモル）の溶液に添加し、かつ該反応混合物を２３℃で１時間撹拌する。塩酸の添加をさらに２回、その都度１時間撹拌後に反復し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液を添加し、ジクロロメタンで抽出を行い、有機抽出物を濃縮し、かつ残留物をクロマトグラフィーにより２つの分析薄層プレート上で精製する。酢酸エチルとエタノールとの混合物を移動相として使用し、かつジクロロメタンとメタノールとの混合物を溶離剤として使用する。表題化合物６．５ｍｇ（８．５μモル、８３％）が単離される。例３ａ３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３’ −Ｎ−メトキシカルボニル−７−トリエチルシリル−１０−デスアセチル−タキソール（Ａ）および３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−２，３’−Ｎ−ビスデベンゾイル−３’−Ｎ−メトキシカルボニル−７−トリエチルシリル−１０−デスアセチル−タキソール（Ｂ）例３ｂにより製造した粗生成物２５ｍｇ（２３μモル）を−１０℃で例１と同様に反応させ、かつ後処理および精製後に、表題化合物Ａ９．０ｍｇ（１０．２ μモル、４４％）、表題化合物Ｂ２．５ｍｇ（３．２μモル、１４％）およびまた例３の表題化合物２．２ｍｇ（２．９μモル、１２％）が単離される。例３ｂ２’−トリイソプロピルシリル−３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル） −３’−Ｎ−デベンゾイル−３’−Ｎ−メトキシカルボニル−７−トリエチルシリル−１０−デスアセチル−タキソール水酸化ヒドラジニウム０．２３ｍｌを、アルゴン雰囲気下に、エタノール１．２ｍｌ中の、例１ａにより製造した化合物２５ｍｇ（２３．２μモル）の溶液に添加し、かつ該混合物を２３℃で２４時間撹拌する。該混合物を飽和塩化ナトリウム溶液に注ぎ、酢酸エチルで数回抽出を行い、かつ硫酸マグネシウム上で乾燥を行う。濾過および溶剤の除去後に得られた残留物を精製しないでさらに反応させる。表題化合物２２ｍｇ（最大２１μモル、最大９１％）が単離され、該化合物はまだ少量の出発物質を含有している。以下の適用例は、本発明による化合物の生物学的活性を、その適用を以下の例に限定することなく実証する。適用例１チューブリンの単離および精製切開したばかりのウシの頭部からウシの脳（それぞれ３３０ｇ）を取り出し、かつ氷冷したＰＭ４−Ｍ緩衝液中に移す。それぞれの脳から髄膜および血栓を除去し、かつ十分なＰＭ４−Ｍ緩衝液で冷却室中にて均質化する。２つのウシの脳からの均質化した材料を合計５００ｍｌの緩衝液で合計体積１．０リットルにし、かつ第一の遠心分離にかける（ＧＳＡローター、１５分、４℃、６５００ｇ）。上澄みから表面上の皮脂性皮膚を除去し、４層の薄いモスリンを介して濾過し、カウンターバランス遠心分離管（４２０ｍｌ）へ移し、かつ再度遠心分離する（Ｔｉ４５ローター、９６０００ｇ、７５分、４℃）。上澄みをピペットによりペレットを通して除去し、かつ６層の薄いモスリンを介して濾過し、かつ０．０１Ｍ重炭酸／ＰＢＳ中の５０ｍＭＧＴＰ溶液を添加して１ｍＭの最終濃度が得られる。第一の重合は、カウンターバランス遠心分離管中で４５分、３７℃に加温した水浴中で実施する。形成された微小管を遠心分離により（Ｔｉ４５ローター、２７℃、９６０００ｇ、６０分）除去し、上澄みを慎重にピペットにより除去し、かつ極めて柔軟な、乳白色のペレットを慎重にスパチュラで内壁から分離する。次いで冷ＰＭ緩衝液４０ｍｌを該ペレットに添加し、その後に小さいガラス乳鉢を使用して均質化し、かつ冷却室中のカウンターバランス遠心分離管中にて氷上で一夜（１２〜１６時間）インキュベートする。脱重合生成物をＴｉ６０ローター（４℃；９６０００ｇ、６０分）中で遠心分離により除去し、かつ上澄みをＰＭ８−Ｍ緩衝液で１：１に希釈し、カウンターバランス遠心分離管中、３７℃で４５分インキュベートし、かつ再度遠心分離する（Ｔｉ４５ローター、２７℃、９６０００ｇ、６０分）。上澄みを慎重にピペットにより除去し、かつ極めて柔軟な乳白色ペレットを冷ＰＭ緩衝液２０ｍｌ中に取り、小さいガラス乳鉢を使用して慎重に均質化し、かつ氷上で３０分インキュベートする。再度遠心分離（Ｔｉ６０ローター、４℃、９６０００ｇ、６０分）するとチューブリンが得られ、該チューブリンのタンパク質含有量をピアス(P earce)により、または２８０ｎｍでの光度測定により決定する。タンパク質決定において、単離した材料対ＰＭ緩衝液が１：１０、１：２０および１：４０の希釈液を使用する。ＰＭ緩衝液は自体の吸光度を有し、かつ決定されたタンパク質含有量からゼロ価として演繹される。単離された材料をＰＭ緩衝液で意図するタンパク質含有量（２ｍｇ／ｍｌ）に希釈する。適用例２３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３’ −Ｎ−メトキシカルボニル−タキソールチューブリンの重合および微小管の脱重合の測定を、測光法により実施する。測定前に、適用例１により製造したチューブリンを溶かし、かつ１５分脱気する。光度計を３５０ｎｍの波長にセットする。溶剤／サンプル３μｌ、ＧＴＰ６μ ｌ（０〜２５μモル／ｌ最終）およびチューブリン２９１μｌ（タンパク質２ｍｇ／ｍｌ）をピペットで、乾燥した清潔な皿に取る（１０ｍｍ）。該サンプルを慎重に撹拌し（気泡が生じないように）、直ちにディッシュキャリッジに入れ、かつ測定操作を３７℃で開始する。一度重合が最大に達したら（溶剤制御、および２０分後にタキソール１Ｅ−５モル／ｌ）、温度を１５℃に低下させることにより脱重合を開始する。脱重合の終了時に測定操作を停止し、かつ吸収における変化の経過を時間と温度の係数としてグラフの形にして示す（図１を参照のこと）。該図は、対照標準と比較してタキソールはチューブリンの重合を促進し、かつ脱重合を抑制し、他方本発明による化合物である３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’− Ｎ−デベンゾイル−３’−Ｎ−メトキシカルボニル−タキソールは明らかにタキソールよりも良好に重合を抑制し、かつ形成された微小管を安定させることを明らかに示している。適用例３３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３’ −Ｎ−メトキシカルボニル−７−エピ−タキソールのチューブリンへの生物学的作用３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３ ’−Ｎ−メトキシカルボニル−７−エピ−タキソールは、タキソールよりもはるかに著しくチューブリンの重合を加速し、かつはるかに良好に、形成された微小管を安定化する。結果を図２に示す。適用例４３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−２，３’−Ｎ−ビスデベンゾイル−３’−Ｎ−メトキシカルボニル−タキソールのチューブリンへの生物学的作用３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−２，３’−Ｎ−ビスデベンゾイル−３’−Ｎ−メトキシカルボニル−タキソールは、タキソールよりもはるかに著しくチューブリンの重合を加速し、かつ形成された微小管を良好に安定化する。結果を図３に示す。適用例５３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３’ −Ｎ−メトキシカルボニル−１０−デスアセチル−タキソールのチューブリンへの生物学的作用３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３ ’−Ｎ−メトキシカルボニル−１０−デスアセチル−タキソールは、チューブリンの重合挙動に関してタキソールと異ならないが、しかし形成された微小管をタキソールよりも実質的に良好に安定化する。結果を図４に示す。適用例６腫瘍細胞系に対する増殖抑制作用：３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３ ’−Ｎ−メトキシカルボニル−タキソール（１）、３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３ ’−Ｎ−メトキシカルボニル−７−エピ−タキソール（２）３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−２，３’−Ｎ−ビスデベンゾイル−３’−Ｎ−メトキシカルボニル−タキソール（３）３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３ ’−Ｎ−メトキシカルボニル−１０−デスアセチル−タキソール（４）ＭＤＡＭＢ４３５乳ガン細胞（５０００細胞／ウェル）を微量定量プレートに入れる（第０日、ＲＰＭＩ培地、１％非必須アミノ酸、１％ピルビン酸塩、１０％胎児ウシ血清）。数種の濃度での物質の添加を第１日に実施する。増殖抑制作用を第３日にＭＴＴ法を使用して測定する。ＩＣ₅₀値をここから決定する。結果を第１表に示す。３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３ ’−Ｎ−メトキシカルボニル−タキソールは、タキソールの活性に類似の活性を示し、他方３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ−デベンゾイル−３’−Ｎ−メトキシカルボニル−７−エピ−タキソールはタキソールと比較して著しく改善された抑制活性を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ヘルマングラーフドイツ連邦共和国Ｄ―79110 フライブルクイムブライスガウエルゼッサーシュトラーセ 48

Claims

【特許請求の範囲】１．一般式Ｉ：［式中、ＳｋはＲ¹は水素またはＣ₁〜Ｃ₁₀アシルを表し、Ｒ²はα−ＯＨを表し、Ｒ³はＣ₁〜Ｃ₁₀アルキル、Ｘ置換されたフェニル、Ｃ₁〜Ｃ₁₀アルコキシを表し、Ｘは水素、ハロゲン、−Ｎ₃または−ＣＮを表し、かつＩ中のヒドロキシ基はさらにエーテル化またはエステル化により変性されていてもよい］のタキサンならびにまたそのα−、β−およびγ−シクロデキストリンクラスレート、ならびにまたリポソームで包接された一般式Ｉの化合物。２．請求項１記載の３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ −デベンゾイル−３’−Ｎ−メトキシカルボニル−タキソール。３．請求項１記載の３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ −デベンゾイル−３’−Ｎ−メトキシカルボニル−７−エピ−タキソール。４．請求項１記載の３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−２，３’ −Ｎ−ビスデベンゾイル−３’−Ｎ−メトキシカルボニル−タキソール。５．請求項１記載の３’−デスフェニル−３’−（４−ピリジル）−３’−Ｎ −デベンゾイル−３’−Ｎ−メトキシカルボニル−１０−デスアセチル−タキソール。６．請求項１から５までのいずれか１項記載の一般式Ｉのタキサン誘導体の製造方法において、一般式ＩＩ：［式中Ｒ¹およびＲ²は前記のものを表し、かつ式ＩＩ中に含有されているヒドロキシ基は場合により保護されている］のアルコールを一般式ＩＩＩａ、ＩＩＩｂまたはＩＩＩｃ：［式中、Ｒ³は前記のものを表し、かつＸ’はヒドロキシ、Ｏ−アルキルまたはハロゲン、およびその際遊離ヒドロキシル基はエーテル化またはエステル化により保護されている］の化合物と反応させ、さらにエーテル化またはエステル化により遊離ヒドロキシ基が官能的に変性されている一般式Ｉの化合物を形成することを特徴とする、一般式Ｉのタキサン誘導体の製造方法。７．請求項１から５までのいずれか１項記載の一般式Ｉの化合物１種以上からなる医薬品。８．通例の助剤、担体および添加剤を有する請求項７記載の医薬品。９．請求項１から５までのいずれか１項記載の一般式Ｉの化合物の、医薬品の製造における使用。