293822 A6 B6 五、發明説明（1 ) 發明背景 1 .發明範圍 本發明是有關高α_葡萄糖基一L一抗壊血酸含量産 物之製法，及該製法中所用的分離糸統，更待別地是有關 自含α—葡萄糖基一L一抗壞血酸及其他摻雜物，如L— 抗壞血酸及糖，之水溶液中製備高α —葡萄糖基- L —抗 酸血酸之製法，及用於該方法中之分離条統。 2 .先前技藝說明 如日本專利公開公紙No.135, 992/91及 1 39, 288/9 1中所掲示的，α —葡萄糖基一L — 抗壞血酸是具式I所示化學結構之L 一抗壞血酸糖衍生物 ，且其和L—抗壊血酸不同，不呈現直接的還原活性，且 具有令人滿意的穩定性，以及可於活體内容易地水解，以 呈現L一抗痰血酸固有的活性。 式1 : (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -丨裝· 訂· i線- 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製
CHi-OK I H-C-OH
本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐〉 -3 - 2938^2 A6 B6 缦濟部中央標準局KK工消费合作社印製 五、發明説明（2 ) 如日本專利公開公報No.135, 992/91及 183, 492/91所掲示的，為達成α—葡萄糖基一 L _抗壊血酸之製備，可將含L —抗壊血酸及c(一葡萄糖 基之水溶液接受有或無葡萄糖澱粉酶下之糖類轉移酶作用 Ο 如此獲得的反應混合物，含有相當少量的α—葡萄糖 基- L —抗壞血酸及相當大量的其他摻雜物，如L -抗壞 血酸及糖類。 為了自反應混合物中製備高α—葡萄糖基一L_抗壞 血酸含量産物，已知可採，用吸附作用及解吸作用（其中使 用陰離子交換樹脂）及管柱層析（其中使用陽離子交換樹 脂）。 吸附作用及解吸作用是一種純化方法，其中包括以陽 離子交換樹脂（H< —型）脱礦質化反應混合物，令生成 之脱礦質化溶液吸附在陰離子交換樹脂（0 Η ·—型）上 ，以水洗滌陰離子交換樹脂以除去糖類，如D—葡萄糖及 α—葡糖基糖類，並以酸或鹽溶液溶離吸附在陰離子交換 樹脂上之物質。 然而，此方法有缺點即有一個複雜的步驟，且需相當 V · 大量的水，溶離劑及再生劑；且生成之α—葡萄糖基一L 一抗壞血酸之濃度及産率相當低。 頃發現其中使用陽離子交換樹脂之管柱層析有缺點， 即其需相當大量的水以達成組份之分離，且由於主題之α 一葡萄糖基一L一抗壞血酸溶液被稀釋，且産製費用增加 (請先閲面之注意事項再f本頁) .裝. 訂· 線· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） -4 - 經濟部中央標準局8工消费合作社印製 A6 B6_ 五、發明説明（3 ) 0 —直需要有一種工業規模之製法，以自含有α—葡萄 糖基一L一抗壞血酸及其他如L—抗壞血酸及糖類之摻雜 物的水溶液中産製高α -葡萄糖基一 L 一抗壞血酸含量産 物。 發明要點 本發明者已研究一種膜分離技術，以自含ct 一葡萄糖 基一L-抗壊血酸及如L一抗壞血酸及糖類之摻雜物之水 溶液中，發展出高α —葡!萄糖基一 L 一抗壊血酸含量産物 之工業規模製法。 結果，本發明者發現高α—葡萄糖基一L一抗壞血酸 含量産物可容易地製備，即將含有α—葡萄糖基一L一抗 酸血酸加上L -抗壊血酸及/或糖類之水溶液接受電透析 ，其中使用陰離子交換樹脂，且此分離方法是工業上有益 的，因其可提供有相當高濃度及相當高産率之高α —葡萄 糖基-L一抗壞血酸含量産物。再者，本發明者發展出一 種工業規模之分離糸統，可製備高α_葡萄糖基一L一抗 酸血酸含量産物。因此，吾等完成本發明。 附圖説明 圖1示出依據本發明之分離条統實例。 於圖片中，、、1 〃表示可維持溶液之容器；a 2 〃是 給料槽；、、3 "是滲透槽；4 〃是陰離子交換膜；* 5 (請先閲讀背面之注意事項再填^本頁) .丨裝_ 訂- .丨線_ 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公货） -5 " __ ___ Β7 , ________丄二二!Γ 五、發明説明（4 ) 疋陽極-，是陰極；是電源連接至陰極；且-8’是電源連接至陽極。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 詳細說明 本發明是有關高α -葡萄糖基一 l -抗壞血酸含量產 物之製法’及用於其中之分離系統，更特別地是有關自含 有α —葡萄糖基- L -抗壞血酸加上如l -抗壞血酸及糖 類之其他摻雜物之水溶液中製備高《 —葡萄糖基—L -抗 酸血酸含量產物，及用於其中之分離系統。 ""L -抗壞血酸〃 一語於本發明中表示呈自由態酸及 鹽型（如鹼金屬及鹼土金屬）及其混合物之L -抗壞血酸 ，只要不造成任何不便即可。 和"L 一抗壞血酸"類似的，—葡萄糖基一 L —
抗壞血酸〃表示呈自由態酸及鹽型式之^_葡萄糖基-L —抗壞血酸，只要其不引起任何不便即可》 於本發明所應用之電透析中，L —抗壞血酸及葡 ， 、 經濟部中央橾準局員工消费合作社印製 萄糖基-.L_抗壞血酸可呈鹽或自由態酸（即脫礦質化型 式）型式回收，以符合其最終用途》 用於本發明，原料溶液爲含有α -葡萄糖基-L -抗 酸血酸加上L -抗壞血酸及/或糖類之水溶液。如’於曰 本專利公開公報No. 139，288/9 1中所揭示的 ，可有益地使用一種反應混合物，其係由將含有α 一葡萄 糖基糖類及L -抗壞血酸之溶液接受有或無葡萄糖殿粉酶 下之糖轉移酵素作用而得。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） Α6 Β6 五、發明説明（5 ) (請先閲^^:面之注意事项再填戈表頁) 至於經由糖轉移酵素作用所形成之cx —葡萄糖基一 L _抗壞血酸，其令oc — D _吡喃葡萄糖基偶合至L 一抗壞 血酸部份的第2號碩原子處之醇基上，該a_D—吡喃葡 萄糖基由1至7個葡萄糖基以c(- 1，4方式鍵結而組成 。此種ct —葡萄糖基一 L 一抗壊血酸之實例有：2 — 0 — α—吡喃葡萄糖基一L一抗壊血酸，2—0—α—麥芽糖 基—L 一抗壊血酸，2 - O-ct — D —麥芽三糖基一L 一 抗壞血酸，2 -0 - α—麥芽四糖基一 L —抗壞血酸，2 —0—α—D—麥芽五糖基一L一抗壞血酸，2—0—α —D -麥芽六糖基一L、抗壞血酸及2 — 0 — α — D —麥 芽七糖基一 L 一抗壞血酸。 Τ ct - D-葡萄糖基之數目依據所使用的糖轉移酶而變 化，且通常環麥芽糖糊精葡萄聚糖轉移酶（EC 2.4 .1. 19)可得最高數目及1至7個α — D-葡萄糖基 有大的分佈，然而α—澱粉酶（EC 3. 2.1.1) 造成1至5個c(一 D-葡萄糖基之分佈，且cx_配醏酶（ EC 3. 2. 1. 20)有1至4個α — D-葡萄糖基 之分布。 經濟部中央標準局工消費合作社印製 如此中所述的，含α —葡萄糖基一 L 一抗壞血酸之溶 液可以各種方法形成，通常含有α-葡萄糖基-L-抗壊 血酸加上相當大量的摻雜物，如完整的L一抗痰血酸-D 一葡萄糖及α —葡萄糖基糖類。 為了自溶液中製備高α —葡萄糖基_ L 一抗壊血酸含 量産物，可使用分離方法，其中利用α—葡萄糖基一L一 本紙張尺度適用中國因家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） 經濟部中央標準局S工消费合作社印製 A6 B6_ 五、發明説明θ ) 抗壞血酸及摻雜物（如完整的L 一抗壊血酸及糖類）分子 量及離子性之差異。更特別地，頃發現應用於本發明之電 透析可以相當高濃度及相當高産率回收主題的0C —葡萄糖 基一 L—抗壞血酸，以及可促進oc_葡萄糖基一 L—抗壊 血酸工業現模製備之了解。 於本發明中，於電透析中分離之L一抗壞血酸及α— 葡萄糖基糖類，可有益地重覆使用充作下次糖轉移反應之 原料。 於糖轉移反應完全後及電透析前，所生成之反應混合 物可有益地接受二種以上之純化方法，如膜處理，其中反 應混合物接受濾膜過濾以除去留下的酵素；熱處理，其中 反應混合物被加熱，且生成的不溶性物質移去，及其中反 應混合物接受活性炭處理，以移去澱粉的及有色的物質。 若必要時其他純化方法可有益地混合使用，如吸附作 用及解吸作用，其中使用陰離子交換樹脂以移去糖類，及 管柱層析中使用陽離子交換樹脂以移去L-抗壊血酸。 於原料接受電滲析之例子中，溶液通常調至ΡΗ8或 較好是ΡΗ8以下，pH約2_7,以避免α—葡萄糖基 一 L —抗壞血酸，L -抗壊血酸及糖類令人不滿意之分解 Ο 應用於本發明之電透析於下文說明。 如Up-to-date Foodprocessing，Vo 1 · 21，No.7 pp. 54-57( 1986)中所述，電透析利用本身已知的一種離子交 換膜。 (請先閲讀背面之注-*事項再f本頁) 裝· 訂- 丨線- 本紙張尺度適用中圃國家標準（CNS>甲4规格（210 X 297公;g·) -8 - 經濟部中央標準局員工消费合作社印繫 A6 B6__ 五、發明説明7 ) 大體而言，電透析之裝置包括可維持溶液之容器，交 替排列於容器中之陽及陰離子交換膜以形成小池，於容器 二端小池中的一對陰極及陽極，以及與膜分開且連接至電 極之D C電源。 可用於本發明中之離子交換膜如：高分子量之有機膜 ，其主要為聚苯乙烯一二乙烯共聚物組成，且以合成纖維 為増強劑。可用於本發明之陽離子交換膜通常為具磺酸基 圍者，以呈現選擇性之陽離子滲透力。 可用於本發明中之陰離子交換膜，通常為具吸銨鹽基 圍者，以呈現選擇性之陰,離子滲透力。 可用於本發明之電極置電極槽中，其中常是充滿電解 液，如約◦. 1 一 2 N鹽溶液。 然而當使用離子交換膜時，確實難以估計電滲透是否 確實可行，因為組份及原料特性強烈影響適應性。 關於此點，在上述公告第55頁中段6 — 9列處描述 道：a食品工業之原料組份十分複雜，因此需確定離子交 換膜是否可為原料中之天然有機化合物所壅塞沾污"。 於本發明中發現，其中使用離子交換膜之電透析可應 用於高α—葡萄糖基一L一抗壊血酸含量産物之製備，而 不致有如弄污之麻煩，且電透析可以相當高濃度及相當高 産率製備α _葡萄糖基一 L —抗壊血酸。 也發現其中使用離子交換膜之電透析未必需陽離子交 換膜，且即使於使用此種陽離子交換膜之例子時，其選擇 未必受限只要其可抑制共存糖類之滲透，同時陰離子交換 (請先閲面之注-^事項再場寫本頁) .丨裝- 訂· 線- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） -9 - A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（8 ) 膜之使用是不可避免的，且其選擇十分重要，即具有約 10◦—1, 000範圍之分子量截去值者可適當的使用 〇 於自L一抗壊血酸中分離α—葡萄耱基一L—抗壊血 酸之例子中，頃發現自具有分子量截去值在約10◦-200範圍内中選擇之陰離子交換膜，且可令L一抗壊血 酸大部份穿透者可適合地使用，且於自糖類中分離〇(-葡 萄糖基一L一抗壊血酸之例子中，自具有分子量截去值在 約200—1， 000範圍内中選擇之陰離子交換膜，且 可令大部份α - Μ萄糖基! - L 一抗壊血酸穿透者可適用。 本發明用於製備高oc —葡萄糖基一 L -抗壞血酸含量 産物之分離糸統，及其用法於下文中將說明。 本發明分離糸統實例將以圖片說明。 圖1說明一個分離糸統，包括容器a 1 "可維持溶液 ,陰離子交換膜'' 4 〃，將容器'' 1 〃分成原料槽'' 2 〃 及穿透槽> 3 〃，陽極* 5 "及陰極a 6 〃分別位槽中， D C電源7 "及” 8 "則分別連接至電極。 於此例子中，為了增加離子交換膜'"1 〃之表面積， 及改進分離速度，將可有益地將容器分成3値以上小槽， 較好是50—5000個小槽，係將至少一對的陽離子及 陰離子交換膜置容器之指示距離處，加上或取代陰離子交 換膜a 1 ",以另外形成原料槽及穿透槽，且在容器二端 之槽中均安置電極。 換言之，分離条統主要含有一個容器可維持溶液，至 (請先閲讀背面之注龙事项再^本頁) r 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） _ 10 _ A6 B6 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 五、發明説明（9 ) 少一對陽離子及陰離子交換膜，其置於容器指示距離處以 將容器分成原料槽及穿透槽，一對陰極及陽極，其置容器 二端之槽中，以及與膜分開，且有一値DC電源連接至電 極，此分離条統可極有益地充作本發明製備高α-葡萄糖 基一L一抗壊血酸含量産物之工業規模分離条統。 本分離条統可用於單階段或多階段中以符合最終用途 〇 如，當以含至少有α_葡萄糖基_L一抗壊血酸，L —抗壞血酸及糖類3組份之水溶液充作原料時，通常採用 二階段之分離条統。 n 高CX -葡萄糖基一 L 一抗壞血酸含量産物之製備，偽 將原料接受電透析，其中離子交換膜選自分子量截去值在 約1 00 — 200範圍中者，以使大部份的L 一抗壞血酸 可穿過膜自原料槽至第一穿透槽，且將α—葡萄糖基一L _抗痰血酸及糖類保留於原料槽中；且自糖類中分離生成 之α—葡萄糖基- L 一抗壊血酸，俗將生成之水溶液於原 料槽中充作原料而接受電透析，其中使用分子量截去值在 約200—1000之陰離子交換膜，以將糖類留於原料 槽中，且大部份的α—葡萄糖基一L一抗壞血酸可穿透膜 t ♦ 由原料槽至第二穿透槽。 若必要時，此一雙階段分離糸統可以反方向使用：卽 將原料置第一原料槽中，原料接受電透析，其中使用分子 量截去值在約200—1, 000範圍之陰離子交換膜， 以令大部份的α -葡萄糖基一 L 一抗壞血酸及L —抗壞血 (請先閲讀背面之注意事項再填»本頁) •丨裝 訂. •線· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公货） -11 - 經濟部中央標準局8工消費合作社印製 A6 B6___ 五、發明説明（10 ) 酸穿透膜，由第一原料槽至第一穿透槽，且將生成之水溶 液維持在第一穿透槽中充作第二原料，接受其中陰離子交 換膜選自分子量截去值在約1 0 0 ~ 2 0 0者之電透析， 以將α —葡萄糖基- L 一抗壞血酸留在第二原料槽中，令 L-抗壊血酸大部份可通過，由第二原料槽至第二穿透槽 Ο 本發明分離条統之用法，依原料之主成份而變化，以 及依所生成高α —葡萄糖基_ L 一抗壞血酸含量産物之終 用途而變化。 通常對於含α -葡萄，糖基一L 一抗壊血酸及L —抗壞 血酸或糖類2種主組份之原料溶液，以及含α—葡萄糖基 —L一抗壞血酸及糖類3種主組份之原料溶液，當共存之 L 一抗壞血酸或糖類不干擾所生成之高α -葡萄糖基- L —抗壞血酸含量産物之最終用途，則可應用單階段分離条 統。 最好儘可能移除結晶前溶液中之摻雜物，以得呈高α 一葡萄糖基一 L _抗壊血酸含量産物之晶狀2 _ ◦ _ α -Utt喃葡糖基一 L _抗壞血酸。 當以本發明分離糸統得到的高α —葡萄糖基一 L -抗 酸血酸含量産物是呈自由態酸型式之高2—Ο—α—吡喃 葡糖基一 L 一抗壞血酸之水溶液，則經濃縮成過飽和溶液 後水溶液可容易地結晶，且由於此是一種晶狀因此2-〇 一 α —吡喃葡糖基一 L _抗壊血酸可以相當高産率回收。 當以本發明分離糸統得到的高α—葡萄糖基一L一抗 (請先閲讀背面之注意事項再f本頁) -裝- 訂. i線- 本紙張尺度適用中國國家標竿（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） -12 - A6 B6 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 五、發明説明（11 ) 酸血酸是有一個以上經偶合的α —葡萄糖基之α —Μ萄糖 -L一抗壊血酸混合物，如圖1所示，則産物可以葡糖殺 粉酶（EC 3. 2. 1. 3)有益地水解成2 — 0 — α 一吡喃葡糖基一 L 一抗壞血酸及D —葡萄糖，且生成的混 合物以本分離条統純化，或若必要時以吸附作用及解吸作 用純化，其中使用陰離子交換樹脂，或利用管柱層析。因 此，可得高純度之2 - 0 - ot_D_吡喃葡糖基一 L 一抗 壞血酸水溶液，其再濃縮成過飽和溶液以達成結晶作用， 之後回收所生成之晶狀2 — 0 — a -D —吡喃葡糖基一 L 一抗壞血酸。 η 如此獲得的高α—葡萄糖基一L一抗壞血酸含量産物 ，可有益地充作有令人滿意的穩定性及安全性之維生素C 加豐劑，以及口味改進劑，酸授予劑，穩定劑，品質增進 劑，抗氧化劑及UV —吸收劑，納入食品，香煙，煙草， 飼料，及寵物食品，疑似疾病之預防及治療劑如病毒疾病 ，細薗性疾病及惡性腫瘤，以及化粧品如皮虜潤飾劑及皮 慮漂白劑。α—葡萄糖基一L一抗壞血酸納入上産物之含 量至少◦. 〇0 1w/w% w/w%〃符號於說明書 中可縮寫成a % 。 當依據本發明之α —葡萄糖基一 L 一抗壞血酸呈自由 酸型式時，其可與金屬氫氧化物及/或金屬磺酸鹽反應形 成鹽，如鈉鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、亞鐵鹽、銅鹽及鋅鹽 ,再調整pH值以得具維生素c活性及礦物質加豐活性之 産物。如此獲得的産物也可用於食品、藥品及化粧品中。 本纸張尺度適用中國國家櫺準（CNS)甲4規格（210 X 297公货） _ 13 _ (請先閲讀背面之注意Ϋ項再f本頁) 裝· 訂· 線_ 84 8. 1 A7 B7 2J繼2 五、發明説明（12 ) 以下-實驗說明本發明 實驗1 分離α -葡菊糖某—L 一抗壊血酸及L -抗壊而酸 含有250毫克 2 — 0 - α -吡喃葡糖基—L-抗 壞血酸及2 5 0毫克 L -抗壞血酸’充作原料溶液之5 毫升水溶液（ΡΗ4· 5)，接受3. 4伏特’Microac- ilyzer Gl〃之電透析，此係一種手提式脫鹽裝置，可購 白 Asahi Chemical Industry Co., Ltd., Tokyo, Japan ，其中裝配有A c i p 1 e x C a r t r i d g e A C - 1 1 0 - 1 0 A ，包括 —個陽離子交換膜及陰離子交換膜，二者均具有1 0 0之 分子量截去值，且面積約10公分2 。 以高效液體色層分析法（HPLC)在預定之時間間 隔下偵測原料槽中 2-0- 吡喃葡糖基—L —抗壞 血酸及L _抗壞血酸之殘留百分率。 結果示於表 表1 (請先閲讀背面之;i'意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 時間 _ 2 — 0-a — D_吡喃葡糖基 (分） 一 L 一抗壞血酸（％) L 一抗壞血酸 (% )
本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 14 - _B6_ 五、發明説明43 ) (請先閲讀背面之注意事項再項寫本頁) - i 由表1結果可見出，L—抗壊血酸大部份可自原料槽 穿透陰離子交換膜，且此也由穿透槽之數據證實。 奮驗2 分離α —葡糖基一L 一抗鹿.血酸及糖類 含有250毫克 2-Ο—α—吡喃葡糖基一L一抗 壞血酸及2 5 0毫克麥芽糖（二者幾乎有相同的分子量） ，充作原料溶液之5毫升水溶液（ρΗ5. 0),如實驗 1般類似地電透析，偽利^用、、Microacilyzer G1 ", —種 手提式脱鹽裝置，可購自Asahi Chemical Industing Co. ,Ltd.，Tokyo，Japan,其裝配有、、Aciplex.Cartridge AC-110-10 〃，包括一値分子量截去值約1 0 〇之陽離子 交換膜，及分子量截去值約300之陰離子交換膜，二者 之表面積均為約1 〇公分2。 於預定的時間間隔下偵測於原料槽中保有之2 _ 〇 -a —吡喃葡糖基~ L —抗壞血酸及L 一抗壞血酸殘留百分 率。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 結果示於表2。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -15 - A6 B6 五、發明説明（L4 ) 表2 時間 2 — 0_ot — D -吡喃葡糖基 L 一抗壤血酸 (分） _ L 一抗壊血酸（％) (%) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 0 10 0 10 0 3 0 5 8 6 9 6 0 3 3 9 4 9 0 9 9 1 由表2結果可證知，，2 — Ο — α — D—吡喃葡糖基一 L-抗壊血酸可大部份自原料槽中穿透陰離子交換膜，且 此也由穿透槽中所得之數據證實。 奮驗3 分離α —蘅萄糖某一 L 一杭墟rftl酿及糖類 含有250毫克 2—Ο—α-D—吡喃葡糖基一L 一抗壞血酸及250毫克麥芽糖，充作原料溶液之7. 5 毫升水溶液（PH4. 5)接受二階段電透析。 依據實驗1之方法，水溶液利用 artridge AC-110-10 〃的手提式脱鹽裝置電透析。 結果，L一抗壞血酸大部份可穿透如實驗1之膜，且 於開始電透析後120分鐘，100% L—抗壞血酸可 穿透至穿透槽中。麥芽糖及2_0_a_D—吡喃葡糖基 一L一抗瓌血酸分別以98%及91%殘留百分率保留在 (請先閲讀背面之注意事項再f本頁) i裝- *^. .線· 本紙張尺度適用中國囷家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） 一 16 _ 經濟部中央標準肩員工消费合作社印製 A6 B6 五、發明説明（15 ) 原料槽中。 由此，原料槽中2—0—a-D—吡喃葡糖基一L一 抗壊血酸之純度可由約3 3%增加至約48%。 依據實驗2之方法，所生成的溶液於原料槽中充作原 料溶液，而接受裝置有★ Aciplex Cartridge AC-120-10 〃的手提式脱鹽裝置之電透析。 結果，類似實驗2, 2 — 0 — ct_D —吡喃葡糖基一 L —抗壞血酸可大部份穿透膜，且於開始電透析後90分 鐘所得的數據顯示，2 — 0 — a — D -吡喃葡糖基一 L-抗壞血酸於穿透槽中之純度為約90 %,且相對於原料溶 液中之2—0_α—D—吡喃葡糖基一L一抗壊血酸，産 率為約8 3 %。 於電透析過程中所有的組份，如2_0 — c(一 D —吡 喃葡糖基-L_抗壊血酸，L一抗壊血酸及麥芽糖均穩定 ,且不致引起不必要的分解。 本發明之實例將述於下文。 奮例1 製備高《—蘅萄糖某_ L 一抗恧rfn酴含眚産物 y 3份按重計之糊精溶於5份按重計的水中，並加熱之 ，生成的混合物加入2份按重計之L一抗壊血酸，調至 PH5, 5,加熱至6〇t：,再加400單位/克猢精的 環麥芽糖糊精葡聚糖轉移酶（其購自Hayashibara Bioch- emical La bo r a t o r i e s I n c ·，Ok a y a ma，J apa η ,依據乾固 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） 一 17 — (請先閱讀背面之注-¾事项再1本頁) -丨裝. 訂. .丨線. A6 B6 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 五、發明説明（16 ) 體重量計（d. s. b)),並接受酵素反應24小時。 反應混合物之高性能液相層析（HP LC)分析顯示 ，其含有約40%的葡萄糖基一L一抗壞血酸，如2 一 0_ a — D —妣喃葡糖基一 L 一抗壊血酸，·2 — 0 — α _D —麥芽糖基一 L 一抗壞血酸，2 — 0 — ct_D —麥芽 三糖基一L一抗壊血酸，2—0_a_D—麥芽四糖基— L一抗壞血酸，及2-O—α-D—麥芽五糖碁—L一抗 壞血酸。 反應混合物以UF-膜處理以移去留下的酵素，且已 穿透的溶液以活性炭脱色及過濾以得具9 0克固體圍塊之 3 0 0毫升滤液（d.S♦b)。滅液利用''Microaci卜 yZer G3"電透析，其傺一種手提式脱鹽裝置，可購自As-ahi Chemical Industry Co . , Ltd.. Tokyo , Japan,其 中並裝配 Aciplex Cartridge Ac-110-400 ",其中包括 陽離子交換膜及陰離子交換膜，二者均具有約100之分 子量截去值，及約400公分2之表面積，且使用◦. 5 小硝酸鈉充作電極槽中之電解液。 電透析始自11. 6伏特，且隨著原料槽中所保留的 溶液比電阻之增加，再逐步降低電壓。 L一抗壊血酸大部份都可穿透陰離子膜，且約98% 的L 一抗壞血酸及撤量的《—葡萄糖基一L 一抗壞血酸於 電透析開始後7小時可穿透膜。 結果，含實質上是全部量的α —葡萄糖基_L —抗壞 血酸及糖類之溶液可自原料槽中回收，並得到純度為4 8 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) i裝- 訂. i線. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） -18 - Α6 Β6 五、發明説明（17 ) %之高C(一葡萄糖基—L 一抗壊血酸含量産物。 相對於原料液中之α—葡萄糖基一L一抗壞血酸，d .s . b，産率為約9 5 %以上。 産物具有令人滿意的穩定性及生理活性，且使其可有 益地用於食品、藥品及化粧品中，充作維生素c加豐劑、 穩定劑，品質改進劑，抗氣化劑，口味改進劑，生物活化 劑及UV—吸收劑。 於本實例中，以脱鹽裝置進行電透析即使經過20次 重覆使用後，仍無因壅塞弄污造成分離行為明顯降低之現 象。 η 面 之 注 項 頁 裝 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 啻例2 剪備窩《—蒱萄糖某一L一杭鹿向酴含景産物 類似實例1,除去留在以實例1方法所得之酵素反應 混合物中之酵素，且生成的溶液以活性炭脱色並過濾，以 得有90克固體物質（d. s. b)之300毫升濾液， 其在依實例1之方法電透析，利用手提式脱鹽裝置a Mi roacilyzer G3",其購自 Asahi Chemical Industry Co· ，Ltd·, Tokyo, Japan,其中並裝置、、Aciplex Cartrid- \ 1 ge AC-130-400 〃，包括分子量截去值約l〇〇的陽離子 交換膜，及分子量截去值約1,◦〇〇的陰離子交換膜， 二者之表面積均為約4 0 0公分2。 α —葡萄糖基一 L 一抗壞血酸及L 一抗壞血酸大部份 可穿透陰離子交換膜，且實質上全部量之L-抗壞血酸及 -紙張尺度適用中國囷家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） ~ 19 ~ 訂 線 A6 B6 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 五、發明説明（18 ) ct 一葡萄糖基一 L 一抗壞血酸，以改進之純度自穿透槽中 回收。回收自穿透槽中之生成的混合物於真空下乾燥，並 粉碎成高α —葡萄糖基- L _抗壊血酸含量産物。 相對於原料溶液中之α —葡萄糖基一 L 一抗壊血酸， d. s. b,粉末的産率為約90%。 雖然由於共存的L一抗漿血酸本質，使産物呈現直接 還原活性，其實質上具有α—葡萄糖基-L一抗壊血酸之 固有特色，且類似實例1之産物，其可有益地用於各種領 域中，如食品、藥品及化粧品。 於本實例中，以脱琿裝置進行電透析即使經過20次 重覆使用後，仍無因雍塞弄污造成分離行為明顯降低之現 象。 管例3 製備窩α —葙萄糖甚一L 一杭癒rfn酴含畺産物 以實例2方法製備的高α —葡萄糖基一 L 一抗痰血酸 含量産物溶於水中，使呈約2 0%水溶液，其再如實例1 方法類似地電透析，使用手提式脱鹽裝置"Microacilyz- er G3"，其可購自 Asahi Chemical Industry Co·，Ltd. ，Tokyo Japan,並裝置有、、Aciplex Cartridge AC-llO- 400 〃， 包括陽離子交換膜及 陰離子交換膜 ，二者均具約 1 0 0之分子量截去值及約4 0 0公分2之表面積。類似實例1, L —抗痰血酸大部份可穿透，且α -葡 萄糖基_L 一抗壊血酸以約70%改進之純度（d. s. 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS>甲4规格（210 X 297公釐〉 -20 ~ (請先閲讀背面之注意事項再蜞寫本頁) I裝. 訂. •丨線. 經濟部中央標準局β工消费合作社印製 A6 B6 五、發明説明（19 ) b)可回收自原料槽。因此可得高α—葡萄糖基一L一抗 壞血酸含量液體。 類似實例1之産物，本産物具有令人滿意之穗定性， 且如此使其有益的用於各種領域中，如食品、藥物及化粧 品。 奮例4 靱備高α _蘅萄糖某一 I, -抗鹿血酸含量産物 依實例1方法，由酵素反應及電透析所製備之含高α -葡萄糖基-L—抗壞血酸含量産物之溶液，加熱至 55Ό，調至ΡΗ4. 5，加入10單位/克葡萄糖澱粉 酶（d. s. b),並在溫度及pH值下接受24小時的 酵素反應，以將α—葡萄糖基一L一抗壊血酸轉化成2— Ο — ot_D_吡喃葡糖基一 L —抗壞血酸。 反應混合物加熱以滅活留下的葡萄糖澱粉酶，以活性 炭脱色及過濾。生成之濾液填料至充填有陽離子交換樹脂 CH*型）之管柱中以達成去礦質化作用，且生成的溶液 瑱料至充填有陰離子交換樹脂（〇H_ )之管柱中，以將 陰離子吸附其上。管柱充填以陰離子交換樹脂者以水洗以 除去葡萄糖，且填上0. 5N鹽酸以達成溶離，之後回收 高2 — 0 - a — D_吡喃葡糖基一 L 一抗壞血酸含量流份 〇 流份真空濃縮成約7 3%溶液，再置於結晶器中，力Π 入晶種，加熱至40t：再逐漸冷卻至1 51C歷2天，並在 冬紙張尺度適用中國圉家標準（CNS>甲4规格（210 X 297公釐） 一 21 — (請先閲讀背面之注$項再f本頁) .I裝· 訂· ，線 A6 B6 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 五、發明説明（20 ) 缓和攪拌條件下進行。生成的混合物以籃式離心機分離， 生成之晶體經少量水噴灑後回收。 産物為高純度晶狀2 — Ο — ct_D —吡喃葡糖基一L -抗壞血酸，其未呈現直接的還原活性但有令人滿意的穩 定性及生理活性。産物可有益地用於各種領域，如食品、 藥品及化粧品，可充作維生素c加豐劑、穩定劑、品質增 進劑、抗氧化劑、生理活化劑及UV —吸收劑。 如上文所述，本發明之特色為：於本發明自含有α_ 葡萄糖基一L一抗壞血酸加上L-抗壞血酸及/或糖類之 水溶液中製備高α -葡氧糖基- L—抗壊血酸含量産物之 方法中，將水溶液接受電透析，其中使用陰離子交換膜以 令大部份的L —抗壞血酸可穿透膜，且自α —葡萄糖基一 L 一抗壊血酸中分出L 一抗壞血酸；或為了使大部份的cc 一葡萄糖基_L一抗壞血酸可穿透膜，並自糖類中分出α 一葡萄糖基一L一抗壞血酸。因此，可以相當高濃度及相 當高産率容易地製備高α —葡萄糖基一 L 一抗壊血酸含量 産物。 本發明勿需溶離劑及再生劑，且減少水之用量。 基於這些，含有α—葡萄糖基一L一抗壊血酸之溶液 ^ . 不會被不必要地稀釋。 因此，本發明在α—葡萄糖基一L一抗壞血酸之工業 規模製備中有極大優點。 且由於在電透析中並無物質不必要的分解，也是有益 的。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐） -22 ~ (請先閲讀背面之注噫事項再被寫本頁) --裝· 訂. 線_ A6 _B6_ 五、發明説明（21 ) 因此所得的ct 一葡萄糖基一 L 一抗壊血酸含量産物， 具有令人谋意的穩定性及生理活性，且如此可有益地用於 各種領域中，如食品、藥品及化粧品，可充作維生素c加 豐劑、穩定劑、品質改進劑、抗氣化劑、口味改進劑、生 理活化劑及UV —吸收劑。 因此，本發明高α—葡萄糖基一L一抗壞血酸含量産 物之製法及用於該製法之分離条統，在各種領域中有大的 意義，如食品、藥品及化粧品。 雖已描述被視為本發明較佳之具體實例，但仍要了解 其中可有許多變化，且此種變化均涵蓋在所附之申請專利 範圍中，如在本發明之真精義及範圍内一般。 (請先閲讀背面之注意事項再^寫本頁) 裝· 訂· 線- 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 2W公釐） -23 -