TW201546269A

TW201546269A - 培養容器

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Publication number: TW201546269A
Application number: TW104124827A
Authority: TW
Inventors: Naoko Obi; Atsushi Onishi; Yoichi Yamaguchi; Hiromi Yamamoto; Tetsuya Nakayama
Original assignee: Nissha Printing
Priority date: 2014-09-05
Filing date: 2015-07-31
Publication date: 2015-12-16
Also published as: JP5731704B1; KR20170052524A; EP3124591A4; JP2016054655A; WO2016035407A1; US20170051241A1; KR102353140B1; TWI541345B; EP3124591B1; EP3124591A1

Abstract

本發明旨在於培養容器中，穩定地形成球形體。本發明之培養容器具備容器本體3與膜狀構件31。容器本體3具有用以收容細胞培養液C之凹部7，於凹部7之底部17形成複數個微孔17a。膜狀構件31於凹部7內，配置於複數個微孔17a之上方，其用以限制於微孔17a內生長之球形體S的移動，以使球形體S不會從微孔17a脫離。

Description

培養容器

本發明係關於一種培養容器，特別係關於收容用以形成球形體之培養液之培養容器。

於醫學及生物領域中，廣泛地進行細胞或菌之培養。又，為了使用符合目的之容器以進行培養，而開發了各種形狀及尺寸之培養容器。

特別是，近年來，以充分發揮細胞原有功能為目的，不同於習知之平面細胞培養，而以三維培養而製作之細胞球形體(以下，稱為球形體)受到矚目。球形體係利用細胞具有之細胞貼附功能，使細胞彼此貼附而形成之三維構造體。作為形成球形體之方法，已知有將細胞懸浮液加入具有複數凹部之培養容器，而於各凹部中形成球形體之技術(例如，參考專利文獻1)。【先前技術文獻】【專利文獻】

專利文獻1：日本特開2010－88347號公報

【發明欲解決之問題】

於專利文獻1所記載之細胞培養容器中，球形體之形成係於細胞漂浮於懸浮液內之狀態下進行。於此方法中，因懸浮液之對流有時使球形體會從凹部飛出。懸浮液對流產生之原因，如為：為了進行球形體觀察，將容器移至顯微鏡時產生搖晃、或為了更換懸浮液而取出或放入懸浮液。從凹部飛出之球形體相互貼附，因此，球形體大小變得不均勻。又，從凹部飛出之球形體，有時會與懸浮液一同被吸走。

本發明之課題在於：於培養容器中穩定地形成球形體。【解決問題之方法】

以下，說明複數個態樣以作為解決問題之方法。此等態樣可依所需任意組合。

本發明之一觀點之培養容器具備：容器本體與膜狀構件。容器本體凹部，該凹部係用以收容培養液，並於底面形成複數個微孔。膜狀構件於凹部內配置於複數個微孔之上方，其用以限制微孔內生長之球形體的移動，以使該球形體不會從該微孔脫離。於此培養容器中，膜狀構件於凹部內配置於複數個微孔之上方，限制於該微孔內生長之球形體的移動，以使該球形體不會從該微孔脫離。因此，於培養容器中，穩定地形成球形體。

膜狀構件亦可具有培養液可通過之形狀或性質。此情形時，可容易更換複數個微孔內之培養液。

膜狀構件亦可具有網格構造。此情形時，因培養液於膜狀構件之任意處皆可通過，故可有效率地更換複數個微孔內之培養液。

亦可對膜狀構件之下面，施加細胞非黏附處理。此情形時，球形體變得不易貼附於膜狀構件之下面，結果，使得球形體不易被貼附於膜狀構件之下面。

膜狀構件亦可為可溶性。此情形時，於球形體形成後，膜狀構件便溶解。因此，不需進行拆除膜狀構件之作業。亦即，球形體之取出變容易。

培養容器亦可更具備筒狀構件，其可插入凹部內，並於底部設有膜狀構件。此情形時，藉由將筒狀構件從凹部取出/放入，可進行膜狀構件之設置及拆除。結果，可提升作業性。

亦可於底面與膜狀構件下面之間，確保有間隙，藉此，使培養液可於各微孔之內外移動。此情形時，即使膜狀構件並非使用培養液可通過之構件，亦可更換複數個微孔內之培養液。【發明效果】

於本發明之培養容器中，球形體可穩定地形成。

1.第1實施形態 (1)整體構造使用圖1～圖3，說明作為本發明之一實施形態之培養容器之細胞培養容器1。圖1係細胞培養容器之容器本體之立體圖。圖2及圖3係細胞培養容器之附設按壓構件板之立體圖。

如圖所示，細胞培養容器1具備：容器本體3；及附設按壓構件板5。容器本體3俯視為長方形，具有複數個凹部(well)7，其係作為用以收容作為培養液之細胞培養液C之細胞培養單元。容器本體3為壁薄且透明之構件，如為透明塑膠製。容器本體3為周知之物，例如，為一般之孔盤(well plate)。

附設按壓構件板5為對應容器本體3之長方形形狀，具有對應凹部7之複數個按壓構件9。附設按壓構件板5為壁薄且透明之構件，如為透明塑膠製。附設按壓構件板5具有：平板狀之本體5a；及形成於其外周面之框5b。於附設按壓構件板5之本體5a上，設有複數個按壓構件9。按壓構件9為可拆除地嵌入凹部7上側之構件。又，圖2所示之附設按壓構件板5具有6×4總計24個之按壓構件9；圖3所示之附設按壓構件板5A具有6×1總計6個之按壓構件9。對於圖1所示之容器本體3，使用4個圖3所示之附設按壓構件板5A。

圖4係細胞培養容器之剖面圖。如圖4所示，於附設按壓構件板5嵌入容器本體3之狀態下，複數個按壓構件9分別進入複數個凹部7內。

又，雖未圖示，但於細胞培養中，從細胞培養容器1上方(亦即，從附設按壓構件板5上方)罩上蓋體。蓋體覆蓋容器本體3及附設按壓構件板5之上部。藉此，可防止對細胞培養液之汙染。

(2)詳細構造其次，使用圖5及圖6，詳細說明凹部7與按壓構件9之構造及兩者之關係。圖5係細胞培養容器之剖面圖；圖6係膜狀構件之頂視圖。

凹部7具有底部17及筒狀部19。筒狀部19之內周面19a於縱剖面大致成鉛直延伸。此底部17之上面為細胞非黏附性。所謂細胞非黏附性係指：貼附性細胞不易貼附之性質。為了實現細胞非黏附性，例如可使用聚乙二醇、聚甲基丙烯酸二羥基乙酯、乙烯-乙烯醇共聚物，作為高親水性物質。又，為了使底部17之上面具親水性，亦可以界面活性劑或磷脂質進行塗佈、或進行電漿處理等表面處理。

於底部17之上面，形成複數個微孔17a。微孔17a為用以形成球形體之微小凹部。微孔17a之直徑如為30～1500μm，最好為50～300μm。微孔17a之深度如為30～1500μm，最好為50～300μm。

按壓構件9主要具有筒狀部25與膜狀構件31。筒狀部25於些微間隙下，嵌入至凹部7之筒狀部19內。亦即，筒狀部25之外周面25a以接近狀態與筒狀部19之內周面19a相對。於筒狀部25之下端，固定著膜狀構件31之外周緣。膜狀構件31亦可與筒狀部25一體成型。

膜狀構件31於凹部7內配置於該微孔17a之上方，其用以限制於微孔17a內生長之物的移動，以使該物不會從該微孔17a脫離。於此實施形態中，膜狀構件31具有細胞培養液可通過之形狀或性質。具體而言，如圖6所示，膜狀構件31為圓形網格構件。因膜狀構件31為網格構件，故整體上細胞培養液可於兩側移動。

於此實施形態中，對膜狀構件31之下面，施加細胞非黏附處理。所謂細胞非黏附處理，例如，與上述者相同。如後所述，藉由此處理，球形體S不易貼附於膜狀構件31。又，亦可不施加細胞非黏附處理。於此實施形態中，膜狀構件31為可溶性。膜狀構件31如於1週內溶解。膜狀構件31如為：交聯明膠、澱粉、PVA。藉此，如後所述，使變得容易取出球形體S。又，膜狀構件31亦可為非可溶性。於此情形時，膜狀構件31如由尼龍、PE、PP、碳、PEEK、鐵氟龍(登錄商標) 、PET、金屬所構成。

膜狀構件31之網格間隙尺寸如為30～1500μm。膜狀構件31與底部17上面之間之尺寸如為50～300μm。又，球形體尺寸為30～1500μm，配合此尺寸而調整網格間隙尺寸。又，上述實施形態中，網格間隙尺寸係設定成種細胞c可通過，但亦可設定成種細胞c不可通過。於此情形時，種細胞c在膜狀構件31固定前播種至微孔17a。

按壓構件9更具有凸緣部27。於此實施形態中，為了方便說明，謂凸緣部27為固定於附設按壓構件板5之本體5a之構件，但凸緣部27亦可與本體5a一體形成。凸緣部27從筒狀部25於外周側延伸，而座落於凹部7之筒狀部19上面。如此，因於按壓構件9設置凸緣部27，故使得按壓構件9易從凹部7拆卸。

(3)球形體製作程序使用圖7～圖9，說明球形體S之製作程序。圖7～圖9係用以說明球形體製作之示意圖。起初，進行種細胞c之播種。具體而言，如圖7所示，將細胞培養液植入於凹部7內。細胞培養液係為：由液體培養基與均勻擴散於培養基之種細胞c所成之懸浮液。種細胞c具有貼附性，例如，為人骨肉瘤細胞等之癌細胞或肝細胞。培養基使用適於貼附性細胞培養之周知培養基。於以上情形時，每個種細胞c通過膜狀構件31之間隙31a，下降並著床於微孔17a。

接著，如圖8所示，於微孔17a內凝結複數個種細胞c，而形成球形體S。於此細胞培養容器1中，膜狀構件31於凹部7內配置於複數個微孔17a之上方，限制於微孔17a內生長之球形體S的移動，以使球形體S不會從微孔17a脫離。因此，於細胞培養容器1中穩定形成球形體S。

亦可使用未圖示之管路及泵，設置將培養基供應及排出至凹部7內部之裝置。藉此，可透過流入口，將新的培養基植入至凹部7內，並且透過流出口，將球形體培養容器內之培養基排出。亦即，於種細胞c在微孔17a中形成球形體S時，進行凹部7內之培養基更換。於上述培養基更換中，於凹部7內中產生培養基之流動，但於此時，因藉由膜狀構件31按壓球形體S，故球形體S不會從微孔17a飛出。因此，可防止球形體S流出。

藉由前述之培養基更換，利用培養基循環，於培養中亦對細胞供應養分及氧，使細胞能健康生長。結果，可形成需較長培養期之大球形體S，且可長期儲存所形成之球形體S。又，藉由培養基更換，可去除未形成球形體S之細胞垃圾及老舊廢物。

再者，如圖9所示，於形成球形體S後，由於膜狀構件31溶解，而露出球形體S。藉此，使取出球形體S變成容易。又，膜狀構件31為非可溶性之情形時，藉由拆除膜狀構件，而得到圖9之狀態。

2.第2實施形態膜狀構件作為具有細胞培養液可通過之形狀者，不限於網格構件。如圖10所示，膜狀構件31A為整面形成複數個微小孔31b之圓形薄膜。膜狀構件31A如由玻璃、塑膠膜、塑膠板所構成。複數個微小孔31b如由藉由雷射而形成。

3.第3實施形態膜狀構件作為具有細胞培養液可通過之形狀者，不限於網格構件。如圖11所示，膜狀構件31B為形成複數個小孔31c之圓形構件。膜狀構件31B為與膜狀構件31A相同之材料。於此實施形態中，複數個小孔31c於外周側，配置成環狀。孔之形狀、位置及個數無特別限定。但是，如圖11所示，於複數個小孔僅形成於膜狀構件之外周側之情形時，對應膜狀構件之中心部及中間部之微孔中，球形體S之觀察精確度提升。

4.第4實施形態膜狀構件31作為具有細胞培養液可通過之性質者，不限於第1實施形態及第2實施形態之膜狀構件。如圖12所示，膜狀構件31C由水凝膠所構成。所謂水凝膠係指：利用含有多量水分，而具有膨潤性質之高分子材料。水凝膠如由丙烯醯胺、矽酮、瓊脂糖、明膠所構成。藉此，細胞培養液可通過膜狀構件31C。又，水凝膠中，為可進行蛋白質(1～20nm左右)循環之構造即可。

此情形時，細胞之播種於膜狀構件31C設置前進行。其理由係因培養基可通過膜狀構件31C，但細胞不可通過。又，作為膜狀構件，具有細胞培養液可通過之性質者，不限於水凝膠。

5.第5實施形態第1～第4實施形態中，膜狀構件具有細胞培養液可通過之形狀或性質，但膜狀構件只要能限制於微孔內生長之物的移動，使該物不會從該微孔脫離即可，故不限於上述膜狀構件。例如，膜狀構件亦可具有細胞培養液不可通過之形狀或性質。使用圖13，說明上述內容。圖13係細胞培養容器之剖面圖。

如圖所示，膜狀構件35配置於接近凹部7之底部17上面之位置。膜狀構件35具有細胞培養液不可通過之性質。於膜狀構件35之外周緣與筒狀部19之內周面19a下部之間，確定保留環狀間隙35a。膜狀構件35與凹部7之底部17上面之間隙，為1個細胞可通過但球形體不可通過之尺寸。例如，間隙為10μm以上，且100μm以下。又，球形體尺寸為30～1500μm，配合此尺寸調整間隙尺寸。

膜狀構件35藉由複數個固定銷37固定於底部17。固定銷37安裝於膜狀構件35之外周部，其前端插入底部17之安裝孔17b。膜狀構件35為透明薄膜。膜狀構件35如由尼龍、PE、PP、碳、PEEK、鐵氟龍(登錄商標)、PET所構成。

此實施形態中，於膜狀構件35之外周部，細胞培養液可通過間隙35a，於膜狀構件35與底部17間之空間(即，微孔17a中形成球形體S之空間)之內外相互移動。亦即，藉由膜狀構件35，於按壓球形體S之同時，可進行培養基更換。藉由培養基更換，於培養中亦可對細胞供應養分及氧，使細胞健康生長。又，藉由培養基更換，可去除無法成為球形體S之細胞垃圾及老舊廢物。

於此實施形態中，可得到與第1～第4實施形態相同之效果。又，各實施形態之變形例，亦可適當應用於本實施形態。再者，因膜狀構件35為透明，固可以顯微鏡觀察球形體S。

6.第6實施形態將膜狀構件安裝至底部附近之構造，並不限於第5實施形態。使用圖14，說明如此之實施形態。圖14係細胞培養器之剖面圖。

如圖所示，膜狀構件39配置於接近凹部7之底部17上面之位置。膜狀構件39具有培養液不可通過之形狀或性質。膜狀構件39之外周緣固定於筒狀部19之內周面19a之下部。又，於膜狀構件39之外周，形成複數個孔39a。

於此實施形態中，於膜狀構件35之外周部中，細胞培養液可通過複數個孔39a，於膜狀構件35與底部17間之空間(即，微孔17a中形成球形體S之空間)之內外相互移動。

7.第7實施形態於第1～第6實施形態中，係使用於底部形成微孔之容器，但形成微孔之構件不限於上述構成。使用圖15～圖19，說明球形體形成用之細胞培養容器。圖15～圖18係細胞培養容器之剖面圖。圖19係按壓構件之俯視圖。

圖15顯示細胞培養容器之容器本體103。容器本體103為具有於上側開口之凹部107之容器，用以保持細胞培養液C。細胞培養液C包含多數個種細胞c。於凹部107之底部117，設置微孔構件131。微孔構件131為於上面具有複數個微孔131a之構件。

於此實施形態中，微孔構件131設於底部117之中心，其上面配置於距離底部117較遠之上方。因此，於底部117中，微孔構件131之外周側成為較微孔構件131之上面為低之面。

如圖16所示，按壓構件109插入至容器本體103之凹部107內。如圖16及圖19所示，按壓構件109具有作為膜狀構件之圓板狀下面部123。下面部123配置於接近微孔構件131之上面(形成微孔131a之部分)。又，下面部123中，於較微孔構件131更為外周側之部分，形成複數個氣泡釋出部123b。亦即，氣泡釋出部123b係對應底部117之未形成複數個微孔131a之部分而設置。氣泡釋出部123b為點狀貫通孔。因此，於較下面部123為下方之空間(例如，複數個微孔131a、微孔構件131之周圍)中之氣泡，容易排出至外部。

若於上述狀態進行細胞之培養，則如圖17所示，於微孔131a內形成球形體S。此時，下面部123係配置成接近微孔131a，生長之球形體S無法從微孔131a移至外部。因此，可安全且確實地形成球形體S。

如圖18所示，減少細胞培養液C，使細胞培養液C不存在於較下面部123更為上側之處後，從容器本體103之下方觀察球形體S。此時，因下面部123之下面123a抵接於細胞培養液C之上面，故可消除彎液面。結果，可於容器本體103中正確地觀察球形體S。

8.第8實施形態第7實施形態中，氣泡釋出部為複數個孔，但氣泡釋出部之形態不限於此。使用圖20，說明按壓構件之其他實施形態。圖20係按壓構件之俯視圖。於下面部123中，於較微孔構件131更位於外周側之部分，形成複數個氣泡釋出部123c。氣泡釋出部123c係於圓周方向延伸之弧狀貫通溝。

形成於下面部之作為氣泡釋出部之貫通孔，其形狀、個數、位置並無特別限定。又，氣泡釋出部不限於形成下面部之貫通孔。氣泡釋出部亦可為：形成於按壓構件109之筒狀部125與容器本體103之筒狀部119之間之缺口、開縫、貫通孔。

9.第9實施形態於第7實施形態中，按壓構件之下面部為平坦形狀，但下面部之形狀無特別限定。使用圖21，說明按壓構件109之其他實施形態。圖21係細胞培養容器之剖面圖。

如圖所示，按壓構件109具有：平坦之下面部123A與環狀之凸出部123B。下面部123A配置於接近微孔構件131之上面。環狀凸出部123B形成於下面部123A之外周緣，並往下方延伸。亦即，凸出部123B以包圍微孔構件131之外周側之方式配置。於凸出部123B之底面，形成複數個氣泡釋出部123b。氣泡釋出部123b之形狀為點狀或弧狀之貫通孔或該等之組合。

10.第10實施形態於第1～第9實施形態中，必須正確地管理按壓構件之下面部與其下方之構件之間之尺寸。然而，按壓構件因係用於壓入培養容器之培養基，故必須考慮由於浮力使按壓構件上浮之問題。在此，使用圖22，說明用以解決如上述課題之構造。圖22係細胞培養容器之剖面圖。

如圖所示，於附設按壓構件板5之上方，配置蓋體11。蓋體11覆蓋附設按壓構件板5之上側全部。蓋體11具有：平坦之本體11a；及從本體11a之外周緣往下方延伸之筒狀部11b。於蓋體11之本體11a與附設按壓構件板5之間，配置緩衝構件12。緩衝構件12為如彈簧、橡膠、海綿等之彈性構件。

緩衝構件12藉由於附設按壓構件板5與蓋體11之間壓縮，而產生彈性力。藉此，可防止附設按壓構件板5上浮，可固定於容器本體3內。藉此，如於形成球形體之情形時，可正確地確保微孔與網格間之間隙，藉此可確實得到球形體固定效果。

11.第11實施形態於第10實施形態中，蓋體僅利用本身重量壓縮彈性構件，但亦可藉由其他構造壓縮彈性構件。在此，使用圖23，說明用以解決如上述課題之構造。圖23係細胞培養容器之剖面圖。

其基本構造與第10實施形態相同。於此實施形態中，於容器本體3之外周部形成第1卡合部15，更於蓋體11之筒狀部11b形成第2卡合部16。第1卡合部15與第2卡合部16互相卡合，藉此，蓋體11不會從容器本體3分離。

於此實施形態中，緩衝構件12藉由於附設按壓構件板5與蓋體11之間壓縮，而產生彈性力。藉此，可防止附設按壓構件板5上浮，可固定於容器本體3內。藉此，即使如於形成球形體之情形時，亦可充分縮短微孔與網格間之間隙，藉此可確實得到球形體固定效果。

12.第12實施形態於第10實施形態及第11實施形態中，係藉由使用蓋體及緩衝構件，而防止附設按壓構件板5上浮，但藉由其他機構亦可防止上浮。例如，藉由增加附設按壓構件板5之重量，可防止因浮力所導致之上浮。具體而言，利用部分使用金屬製材料，可使附設按壓構件板5本身變重。或於附設按壓構件板5之一部分附加重塊。

13.第13實施形態使用圖24，說明用以將固定於筒狀部19之膜狀構件31正確定位之構造。圖24係細胞培養容器之剖面圖。於附設按壓構件板5之凸緣27部下面，固定銷構件41。銷構件41之下端插入至孔43內，孔43係形成於容器本體3之筒狀部19之上面。

如此，藉由銷與孔，正確地進行按壓構件9與凹部7之上下方向之定位。因此，可正確地確保膜狀構件31與底部17之上面之間之間隙。又，利用上述銷與孔所成之定位構造，其個數、形狀、位置無特別限定。

14.第14實施形態使用圖25，說明用以進行固定於筒狀部19之膜狀構件31之定位之構造。圖25係細胞培養容器之剖面圖。於筒狀部19之下端，設置複數個凸起45。凸起45較膜狀構件31更往下方延伸。凸起45之下端插入至形成於底部17上面之安裝孔17b內。

如此，藉由凸起與孔，正確地進行按壓構件9與凹部7之上下方向之定位。因此，可正確地確保膜狀構件31與底部17之上面之間之間隙。又，利用上述凸起與孔所成之定位構造，其個數、形狀、位置無特別限定。又，筒狀部之下部與底部之間之定位，不限於該實施形態。例如，筒狀部之下部亦可由設於底部之承接部所支撐。

15.第15實施形態為了使複數個按壓構件能平順地嵌入複數個凹部，說明兩者之定位構造。

使用圖26，說明如此之實施形態。圖26係細胞培養容器之容器本體之立體圖。又，基本構造與第1～第15實施形態相同。以下，以相異點為主，加以說明。

於容器本體3上側之角落，直立設置複數個銷71。具體而言，銷71配置於本體部分之外側部分之四角，且於該本體部分形成容器本體3之凹部7。於附設按壓構件板5上，在對應銷71之位置形成孔73。具體而言，孔73形成於框5b之四角。

於將附設按壓構件板5嵌入容器本體3時，藉由利用銷71與孔73進行定位，使複數個按壓構件9平順地嵌入凹部7。又，銷與孔之數量不限於該實施形態。再者，容器本體3與附設按壓構件板5之定位構造，不限於銷與孔。

16.實施形態之共同點第1～第15實施形態具有下述共同點。培養容器(例如，細胞培養容器1)具備容器本體(例如，容器本體3)與膜狀構件(例如，膜狀構件31、膜狀構件31A、膜狀構件31B、膜狀構件31C、膜狀構件35、膜狀構件39、下面部123、下面部123A)。容器本體3具有用以收容培養液(例如，細胞培養液C)之凹部(例如，凹部7、凹部107)，於其底面(例如，底部17之上面、微孔構件131之上面)形成複數個微孔(例如，複數個微孔17a、微孔131a)。膜狀構件於凹部內配置於複數個微孔之上方，其用以限制於微孔內生長之球形體(例如，球形體S)的移動，以使該球形體不會從該微孔脫離。於此培養容器中，膜狀構件於凹部內配置於複數個微孔之上方，限制於微孔內生長之球形體的移動，以使該球形體不會從該微孔脫離(例如，參考圖8、圖17)。因此，於培養容器中，穩定地形成球形體。

17.其他實施形態以上，針對本發明之複數個實施形態加以說明，但本發明不限於上述實施形態，於不脫離發明要旨之範圍內，可進行各種變更。特別是，本說明書所記載之複數個實施形態及變形例，依所需可任意組合。

於上述實施形態中，說明球形體之培養，然而本發明不限於此。本發明亦可應用於如胚樣體之培養。胚樣體具有與初期胚相似之構造，為由ES細胞或iPS細胞等所成之細胞塊。於上述實施形態中，於球形體形成中進行培養基更換，但不一定非進行培養基更換不可。凹部及按壓構件之俯視形狀及該等之組合不限於上述實施形態。凹部及按壓構件之個數不限於上述實施形態。

於上述實施形態中，培養容器之一例係以使用細胞培養液之細胞培養容器，加以說明。然而，於本發明之培養容器中，亦可培養如動物細胞、植物細胞、菌、細菌。【產業上之利用可能性】

本發明可廣泛應用於用以收容顯微鏡觀察所用之培養液之培養容器。

1‧‧‧細胞培養容器
3、103‧‧‧容器本體
5、5A‧‧‧附設按壓構件板
5a、11a‧‧‧‧‧‧本體
5b‧‧‧框
7、107‧‧‧凹部
9、109‧‧‧按壓構件
11‧‧‧蓋體
12‧‧‧緩衝構件
15‧‧‧第1卡合部
16‧‧‧第2卡合部
17、117‧‧‧底部
17a、131a‧‧‧微孔
17b‧‧‧安裝孔
11b、19、25、119、125‧‧‧筒狀部
19a‧‧‧內周面
25a‧‧‧外周面
27‧‧‧凸緣部
31、31A、31B、31C、35、39‧‧‧膜狀構件
31a、35a‧‧‧間隙
31b‧‧‧微小孔
31c‧‧‧小孔
37‧‧‧固定銷
41‧‧‧銷構件
39a、43、73‧‧‧孔
45‧‧‧凸起
71‧‧‧銷
123、123A‧‧‧下面部
123B‧‧‧凸出部
123a‧‧‧下面
123b、123c‧‧‧氣泡釋出部
131‧‧‧微孔構件
C‧‧‧細胞培養液
c‧‧‧種細胞
S‧‧‧球形體

【圖1】細胞培養容器之容器本體之立體圖。【圖2】細胞培養容器之附設按壓構件板之立體圖。【圖3】細胞培養容器之附設按壓構件板之立體圖。【圖4】細胞培養容器之剖面圖。【圖5】細胞培養容器之剖面圖。【圖6】膜狀構件之頂視圖。【圖7】用以說明球形體製作之示意圖。【圖8】用以說明球形體製作之示意圖。【圖9】用以說明球形體製作之示意圖。【圖10】膜狀構件之頂視圖(第2實施形態)。【圖11】膜狀構件之頂視圖(第3實施形態)。【圖12】膜狀構件之頂視圖(第4實施形態)。【圖13】細胞培養容器之剖面圖(第5實施形態)。【圖14】細胞培養容器之剖面圖(第6實施形態)。【圖15】細胞培養容器之剖面圖(第7實施形態)。【圖16】細胞培養容器之剖面圖。【圖17】細胞培養容器之剖面圖。【圖18】細胞培養容器之剖面圖。【圖19】按壓構件之俯視圖。【圖20】按壓構件之俯視圖(第8實施形態)。【圖21】細胞培養容器之剖面圖(第9實施形態)。【圖22】細胞培養容器之剖面圖(第10實施形態)。【圖23】細胞培養容器之剖面圖(第11實施形態)。【圖24】細胞培養容器之剖面圖(第13實施形態)。【圖25】細胞培養容器之剖面圖(第14實施形態)。【圖26】細胞培養容器之容器本體之立體圖(第15實施形態)。

17‧‧‧底部

17a‧‧‧微孔

31‧‧‧膜狀構件

31a‧‧‧間隙

S‧‧‧球形體

Claims

一種培養容器，其具備：容器本體，具有凹部及定位用之孔；及附設按壓構件板，具有平板狀之本體、設於該本體且可插入該凹部之按壓構件、及銷或凸起，該凹部包含底部與筒狀部，於該底部之上面形成用以收容培養液之複數個微孔，該培養液包含液體之培養基與均勻擴散於該培養基之種細胞，該按壓構件包含：膜狀構件，於該凹部內配置於該複數個微孔之上方；及筒狀構件，於底部設有該膜狀構件，該膜狀構件具有該種細胞可通過但於該微孔內生長之球形體不可通過之性質或形狀，於該附設按壓構件板嵌入至該容器本體之狀態下，將該銷或凸起插入至該孔，使該膜狀構件與該底部上面之間隙為1個細胞可通過但球形體不可通過之尺寸。
一種培養容器，其具備：容器本體，具有凹部；附設按壓構件板，具有平板狀之本體與設於該本體且可插入至該凹部之按壓構件；蓋體，具有平坦之本體與從該本體之外周緣往下方延伸之筒狀部，並覆蓋該容器本體與該附設按壓構件板；及緩衝構件，配置於該附設按壓構件板與該蓋體之間，該凹部包含底部及筒狀部，於該底部之上面形成用以收容培養液之複數個微孔，該培養液包含液體之培養基與均勻擴散於該培養基之種細胞，該按壓構件包含：膜狀構件，於該凹部內配置於該複數個微孔之上方；及筒狀構件，於底部設有該膜狀構件，該膜狀構件具有該種細胞可通過但於該微孔內生長之球形體不可通過之性質或形狀，該附設按壓構件板嵌入至該容器本體，使得該膜狀構件與該底部上面之間隙為1個細胞可通過但球形體不可通過之尺寸，該緩衝構件被壓縮在該附設按壓構件板與該蓋體之間。
如申請專利範圍第2項之培養容器，其中，於該容器本體之外周部，形成第1卡合部，於該蓋體之該筒狀部，形成第2卡合部，藉由使該第1卡合部與該第2卡合部相卡合，而壓縮該緩衝構件。
如申請專利範圍第1至3項中任一項之培養容器，其中，該膜狀構件更具有氣泡釋出部。
如申請專利範圍第1至3項中任一項之培養容器，其中，該凹部於底部具有微孔構件，該複數個微孔形成於該微孔構件之上面，於該底部中，該微孔構件之外周側係為較該微孔構件之上面更低之面。
如申請專利範圍第4項中任一項之培養容器，其中，該凹部於底部具有微孔構件，該複數個微孔形成於該微孔構件之上面，於該底部中，該微孔構件之外周側係為較該微孔構件之上面更低之面。