KR102062585B1

KR102062585B1 - 세포배양키트

Info

Publication number: KR102062585B1
Application number: KR1020180024330A
Authority: KR
Inventors: 홍종욱
Original assignee: 글라드아이 주식회사
Priority date: 2018-02-28
Filing date: 2018-02-28
Publication date: 2020-01-06
Also published as: US11377630B2; US20190264155A1; KR20190103653A; WO2019168232A1

Abstract

본 발명은 세포배양키트에 대한 것으로서, 보다 상세하게는 세포 배양을 하는 경우 배양된 세포를 용이하게 분리할 수 있으며, 나아가 계대배양을 하는 경우 세포에 별도의 효소처리없이 세포를 분리할 수 있는 세포배양키트에 대한 것이다.

Description

세포배양키트 {Cell Culture Kit}

본 발명은 세포배양키트에 대한 것으로서, 세포 배양을 하는 경우 배양된 세포를 용이하게 분리하여 관찰할 수 있으며, 나아가 계대배양을 하는 경우에도 생착된 세포에 별도의 효소처리없이 세포를 분리할 수 있는 세포배양키트에 대한 것이다.

세포 또는 조직 배양 기술은 분자생물학을 포함한 생물학 연구에서 매우 기본적이고 중요한 기술이며, 암 진단 연구, 암 치료 물질을 비롯한 바이오 신약 개발 연구, 유전자 치료 연구, 줄기세포 분화 연구, 특성 물질 생성 연구 등 다양한 연구 분야에 활용되고 있는 기술이다.

전술한 연구 목적에 따라 다양한 방법으로 배양된 세포는 살아있는 세포의 상태로 세포의 기능적 또는 형태적 연구(live cell research)를 수행하기도 하고, 또는 세포 또는 조직 고정액을 선택하여 세포가 변성되지 않도록 고정(fixation)한 후 일련의 과정으로 된 면역세포학적 염색이나 면역 형광염색을 완료하고 봉입하여 광학현미경(light microscope), 형광현미경(fluorescent microscope), 공초점 레이저 현미경(confocal laser microscope) 등 실험 목적에 맞는 현미경으로 관찰함으로써 실험 결과의 계량화 및 실험의 재현성에 대한 신뢰를 확보할 수 있다.

종래의 세포 배양을 통한 분석 방법을 살펴보면 다음과 같다.

먼저, 원형의 세포 또는 조직 배양용기에 멸균처리된 커버글라스를 용기의 내부에 안착시키고, 상기 커버글라스 위에 세포를 배양한 후, 세포가 생착되어 층을 이룬 뒤, 상기 커버글라스를 배양 접시로부터 분리하고, 이를 조직검사용 커버글라스 위에 부착시켜, 연구 목적에 맞게 적합한 현미경(microscope)으로 관찰 및 분석하는 방법이다.

그러나 전술한 방법은, 몇가지 문제점을 발생시킬 수 있다. 첫번째로, 플라스틱 세포배양면에 생착하여 자라도록 적응된 세포주가 유리 소재인 커버글라스 위에서 생착률이 바뀌어, 세포 성질의 변화를 초래할 수 있다. 두번째로, 외부에서 유래된 커버글라스를 세포배양 용기에 삽입하는 과정에서 세포배양 환경의 변화를 초래하여, 심할 경우 세포배양 시 내부오염이 발생할 수 있다. 세번째로, 유리의 깨지기 쉬운 성질로 인해, 세포배양에서 현미경 관찰까지의 일련의 과정 중, 세포가 생착된 커버글라스가 깨질 위험이 상주한다. 네번째로, 실험군과 대조군을 각기 다른 세포배양 용기 상단의 커버글라스에 세포를 배양하고, 관찰 및 분석 시 에러를 가져올 가능성이 높아지는 경우가 종종 생긴다.

특히, 종래 세포 배양을 통한 분석 방법에서 계대배양(subculture)을 할 경우가 있다. 즉, 세포 또는 조직을 배양접시에 배양하게 되면 세포 또는 조직이 접시에 부착하여 단층으로 계속 증식하게 되는데 시간이 지나면 배양접시 전체를 차지하여 부착할 공간이 부족하여 증식이 멈추게 된다. 이 경우, 세포 또는 조직의 증식을 계속하기 위해서는 해당 세포의 일부를 떼어 다른 배양접시에 옮겨주는 계대배양을 해야한다. 이러한 계대배양의 경우, 기존 배양접시에서 세포 또는 조직을 분리하기 위하여 효소처리과정(trypsinization)을 필요로 한다.

그런데, 이 경우 배양된 세포 또는 조직을 정확하게 분리해야하는 어려움이 있다. 또한, 배양된 세포 또는 조직을 분리하기 위하여 효소로 처리하는 과정에서 세포 또는 조직이 변성될 수 있는 문제점이 있다.

본 발명은 배양된 세포 또는 조직을 용이하게 분리하여 관찰할 수 있는 세포배양키트를 제공하는데 목적이 있다.

또한, 본 발명은 외부에서 커버글라스를 세포배양용기의 내부에 투입할 필요가 없도록 하여 세포의 생착률 변화가 없도록 하여 세포 배양 환경의 변화를 방지할 수 있는 세포배양키트를 제공하는데 목적이 있다.

또한, 본 발명은 생착해 자라는 세포의 계대배양 시, 필수적 과정인 효소처리(trypsinization)를 없애 사용자 편의성 증대와 세포 손상을 방지할 수 있는 세포배양키트를 제공하는데 목적이 있다.

또한, 본 발명은 세포 또는 조직을 2차원적으로 생장시키는 동시에 3차원 세포집합체를 함께 생장시켜 상기 세포집합체의 관찰 및 검사를 가능하게 하는 세포배양키트를 제공하는데 목적이 있다.

상기와 같은 본 발명의 목적은 상부가 개방되어 내부에 수용공간을 제공하는 외부용기와, 상기 외부용기의 내측에 적어도 한 개 이상 분리 가능하게 적층되어 구비되는 세포배양필름 및 상기 외부용기의 개방된 상부에 결합되는 커버부를 구비하는 것을 특징으로 하는 세포배양키트에 의해 달성된다.

여기서, 상기 세포배양필름은 폴리스티렌 필름(polystyrene film) 또는 실리콘 중합체로 형성될 수 있다.

한편, 상기 세포배양필름은 0.1 내지 0.2 mm 의 두께를 가질 수 있다.

나아가, 상기 세포배양필름은 굴절률을 1.4 내지 1.6으로 하여 종래 현미경 관찰에 사용되던 커버글라스의 굴절률과 유사하게 제작되어 상기 세포배양필름을 종래 커버글라스 대용으로 사용할 수 있다. 또한, 상기 세포배양필름은 투명한 재질로 제작될 수 있다.

한편, 상기 세포배양필름에는 절취선이 형성될 수 있다.

또한, 상기 세포배양필름의 가장자리의 적어도 일부가 상부를 향해 절곡되어 손잡이부를 형성할 수 있다.

한편, 상기 세포배양필름에는 다수개의 배양홀이 형성될 수 있다. 이 경우, 상기 세포배양필름의 배양홀은 하부에 위치한 세포배양필름의 배양홀과 서로 겹치지 않게 배치될 수 있다. 나아가, 상기 세포배양필름의 배양홀을 통해 상기 외부용기의 베이스의 상면 또는 하단의 세포배양필름의 상면이 노출될 수 있다.

한편, 상기 세포배양필름에는 하부를 향해 돌출 형성되어 내부에 세포집합체를 배양할 수 있는 하나 이상의 세포배양홈이 형성되고, 상기 외부용기의 베이스에는 상기 세포배양홈에 대응하여 상기 세포배양홈이 수용되는 수용홈이 형성될 수 있다.

이때, 상기 세포배양홈이 형성된 상기 세포배양필름이 최하단에 위치하고, 다수개의 배양홀이 형성된 세포배양필름이 상부에 적어도 한 개 위치할 수 있다.

나아가, 상기 다수개의 배양홀이 형성된 세포배양필름에서 상기 배양홀 중에 적어도 한 개는 상기 세포배양홈과 연통하도록 배치되고, 상기 세포배양필름의 나머지 배양홀은 하부에 위치한 세포배양필름의 배양홀과 서로 겹치지 않게 배치될 수 있다.

한편, 상기 세포배양필름의 가장자리에서 상부를 향해 절곡 형성된 측벽을 더 포함할 수 있다.

이때, 상기 세포배양필름의 측벽은 수직선을 기준으로 미리 정해진 각도로 외부를 향해 경사져서 형성될 수 있다.

또한, 상기 세포배양필름에는 다수개의 배양홀이 형성될 수 있다. 이 경우, 상기 세포배양필름의 배양홀은 하부에 위치한 세포배양필름의 배양홀과 서로 겹치지 않게 배치될 수 있다.

나아가, 상기 세포배양필름의 측벽의 상단부에 손잡이가 더 구비될 수 있다.

또한, 상기 세포배양필름의 측벽의 상단부의 높이는 상기 외부용기의 측벽의 상단부의 높이보다 상대적으로 더 높을 수 있다. 따라서, 상기 세포배양필름의 측벽의 상단부를 외부를 향해 접는 경우에 상기 세포배양필름의 접힌 상단부에 의해 상기 외부용기의 측벽의 상단부가 완전히 덮힐 수 있다.

한편, 상기 커버부는 외부커버와, 상기 외부커버의 내측에 상기 세포배양필름의 개수에 대응하여 분리 가능하게 적층된 내부커버를 구비할 수 있다.

이때, 상기 내부커버는 손잡이를 더 구비할 수 있다.

본 발명에 따른 세포배양키트는 복수개의 적층된 세포배양필름을 구비하여, 상기 세포배양필름의 베이스의 상면에서 조직 또는 세포를 배양한 후, 상기 세포배양필름을 분리하여 그대로 관찰할 수 있다.

따라서, 배양된 세포 또는 조직을 배양접시에서 분리하여 조직검사용 커버글라스로 옮기는 과정을 생략할 수 있다. 이에 따라 외부에서 커버글라스를 세포배양용기의 내부에 투입할 필요가 없도록 하여 세포의 생착률 변화가 없도록 하여 세포 배양 환경의 변화를 방지할 수 있다.

또한, 배양된 세포 또는 조직을 옮기는 과정에서 발생할 수 있는 세포 또는 조직의 변성을 방지하고 빠른 시간 내에 용이하게 세포 또는 조직을 검사할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 세포배양키트는 계대배양을 필요로 하는 경우에 세포를 분리하기 위하여 별도의 효소처리과정을 필요로 하지 않으며, 이에 따라 효소처리과정에서 발생할 수 있는 세포 또는 조직의 변성을 방지할 수 있다.

또한, 본 발명은 세포 또는 조직을 2차원적으로 생장시키는 동시에 3차원 세포집합체를 함께 생장시켜 일반적으로 생장한 세포의 검사와 함께 상기 세포집합체의 관찰 및 검사를 가능하게 한다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 세포배양키트의 분해 사시도,
도 2는 도 1에서 세포배양필름의 평면도,
도 3은 본 발명의 다른 실시예에 따른 세포배양키트의 분해 사시도,
도 4는 도 3에서 세포배양필름의 평면도,
도 5는 도 4에 따른 세포배양필름을 이용한 계대배양과정을 도시한 도면,
도 6은 본 발명의 또 다른 실시예에 따른 세포배양키트의 사시도,
도 7은 도 6에 따른 세포배양키트의 분해 사시도,
도 8은 본 발명의 또 다른 실시예에 따른 세포배양키트의 사시도,
도 9는 도 8에 따른 세포배양키트의 분해 사시도,
도 10은 도 9에서 세포배양필름의 평면도,
도 11은 도 9에 따른 세포배양필름을 이용한 계대배양과정을 도시한 도면,
도 12는 본 발명의 또 다른 실시예에 따른 세포배양키트의 사시도,
도 13은 도 12의 분해 사시도,
도 14는 도 13에서 세포배양필름의 분해 사시도,
도 15는 도 13에서 내부커버의 분해 사시도,
도 16은 도 12에서 세포배양필름의 상단부가 외부를 향해 접힌 상태를 도시한 사시도,
도 17은 세포배양필름의 측벽의 측단면도,
도 18은 본 발명의 또 다른 실시예에 따른 세포배양필름의 분해 사시도,
도 19는 3차원 세포배양을 위한 본 발명의 또 다른 실시예에 따른 세포배양키트의 사시도,
도 20은 도 19에서 세포배양필름의 측단면도,
도 21은 본 발명의 또 다른 실시예에 따른 세포배양필름의 분해 사시도,
도 22는 도 21에 따른 세포배양필름을 이용하여 계대배양 및 3차원 세포집합체를 생장시키는 과정을 도시한 도면이다.

이하에서는 첨부된 도면을 참고하여 본 발명의 바람직한 실시예를 상세하게 설명한다. 특별한 정의가 없는 한 본 명세서의 모든 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자가 이해하는 당해 용어의 일반적 의미와 동일하고, 만약 본 명세서에 사용된 용어가 당해 용어의 일반적 의미와 충돌하는 경우에는 본 명세서에 사용된 정의에 따른다. 한편, 이하에 기술될 장치의 구성이나 제어방법은 본 발명의 실시예를 설명하기 위한 것일 뿐 본 발명의 권리범위를 한정하기 위함은 아니며, 명세서 전반에 걸쳐서 동일하게 사용된 참조번호들은 동일한 구성요소들을 나타낸다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 세포배양키트(1000)의 분해 사시도이고, 도 2는 도 1에서 세포배양필름(1300)의 평면도이다.

도 1 및 도 2를 참조하면, 상기 세포배양키트(1000)는 상부가 개방되어 내부에 수용공간을 제공하는 외부용기(1200), 상기 외부용기(1200)의 내측에 적어도 한 개 이상 분리 가능하게 적층되어 구비되는 세포배양필름(1300) 및 상기 외부용기(1200)의 개방된 상부에 결합되는 커버부(1100)를 구비한다.

본 발명에 따른 세포배양키트(1000)는 상기 외부용기(1200)의 내측에 세포 또는 조직을 배양할 수 있는 세포배양필름(1300)을 별도로 구비할 수 있다. 이 경우, 세포배양필름(1300)의 상면에 세포 또는 조직을 배양한 후 배양된 세포 또는 조직을 별도로 분리할 필요 없이 상기 세포 또는 조직이 배양된 세포배양필름(1300)을 상기 외부용기(1200)에서 분리함으로써 세포 또는 조직을 필름에서 분리하는 공정을 생략할 수 있다. 또한, 상기 세포배양필름(1300)을 조직검사용 현미경 등에 커버 글래쓰(cover glass) 대용으로 그대로 사용함으로써 세포 또는 조직의 분리 시 발생할 수 있는 조직 또는 세포의 변성을 방지할 수 있으며, 나아가 세포 또는 조직의 분리공정을 생략할 수 있어 보다 빠르고 간편하게 조직 또는 세포를 관찰할 수 있다. 이하, 도면을 참조하여 상기 세포배양키트(1000)의 구조에 대해서 보다 상세히 살펴보기로 한다.

도 1 및 도 2에 도시된 바와 같이, 상기 외부용기(1200)는 내부에 전술한 세포배양필름(1300)을 수용하여 세포 또는 조직을 배양할 수 있는 공간을 제공한다.

이 경우, 상기 외부용기(1200)는 도면에 도시된 바와 같이 상부가 개방되어 상기 세포배양필름(1300)을 내부에 수용할 수 있다. 또한, 상기 외부용기(1200)는 그 단면이 원형의 형상을 갖지만, 이에 한정되지는 않으며 필요에 따라 적절하게 변형될 수 있다.

상기 외부용기(1200)의 재질은 적절하게 선택될 수 있는데, 예를 들어 합성수지 등을 블로잉(blowing) 또는 사출 등의 방법을 이용하여 제작할 수 있다.

한편, 상기 커버부(1100)는 상기 외부용기(1200)의 개방된 상부에 결합된다.

상기 커버부(1100)는 상기 외부용기(1200)의 개방된 상부에 결합됨으로써 상기 세포배양필름(1300)을 이용하여 세포 또는 조직을 배양하는 경우에 미생물 또는 이물질 등이 내부로 침투하는 것을 방지할 수 있다.

이때, 상기 커버부(1100)는 상기 외부용기(1200)의 개방된 상부에 결합될 수 있도록 상기 외부용기(1200)의 단면 형상에 대응하는 형상을 가질 수 있다. 또한, 상기 커버부(1100)도 상기 외부용기(1200)와 마찬가지로 합성수지 등을 블로잉(blowing) 또는 사출 등의 방법을 이용하여 제작할 수 있다.

한편, 상기 외부용기(1200)의 내측에는 세포배양필름(1300)이 구비될 수 있다. 본 실시예의 경우 상기 세포배양필름(1300)이 한 개 있는 경우를 상정하여 설명하지만, 상기 세포배양필름(1300)은 두 개 이상, 즉 복수개로 구비되어 집합체를 구성할 수 있다. 상기 세포배양필름(1300)이 복수개로 구성되어 집합체를 구성하는 실시예에 대해서는 이후에 상세히 설명한다.

상기 세포배양필름(1300)은 상기 외부용기(1200)의 단면 형상에 대응하여 형성되며, 상기 외부용기(1200)의 내측에 안착될 수 있다. 도 1 및 도 2에 도시된 바와 같이 상기 외부용기(1200)의 단면 형상이 원형의 형상을 가지는 경우에 상기 세포배양필름(1300)도 이에 대응하여 원형의 형상을 가질 수 있다.

한편, 상기 세포배양필름(1300)은 상기 외부용기(1200)의 내측에 분리 가능하게 안착될 수 있다. 예를 들어, 상기 세포배양필름(1300)은 미리 정해진 온도로 가열되어 상기 외부용기(1200)의 베이스(1202)에 점착되거나, 또는 레진(resin) 또는 실리콘 소재의 폴리머 레진(polymer resin) 등과 같이 세포 또는 조직의 성장에 영향을 주지 않는 소재의 점착제를 사용하여 점착될 수 있다. 여기서, '점착'이라 함은 상기 세포배양필름(1300)이 상기 외부용기(1200)의 내측에 부착되지만, 상기 세포배양필름(1300) 또는 상기 외부용기(1200)의 내측에 오염을 남기지 않고 용이하게 분리될 수 있는 상태로 정의될 수 있다.

또한, 상기 세포배양필름(1300)의 가장자리의 적어도 일부가 상부를 향해 절곡되어 손잡이부(1310A, 1310B)를 형성할 수 있다. 상기 세포배양필름(1300)을 상기 외부용기(1200)의 내측 베이스(1202)에서 분리하기 위하여 핀셋(pincette) 등의 분리도구를 사용할 수도 있다. 그런데, 이러한 분리도구를 사용하여 매우 얇은 상기 세포배양필름(1300)을 분리하는 것이 쉽지 않으며 이러한 분리과정에서 상기 세포배양필름(1300)의 세포 또는 조직에 변성이 발생할 수 있다.

따라서, 본 실시예에 따른 상기 세포배양필름(1300)은 상기 외부용기(1200)에서 용이하게 분리할 수 있도록 상기 세포배양필름(1300)의 가장자리를 따라 한 쌍의 손잡이부(1310A, 1310B)를 구비할 수 있다. 이 경우, 상기 손잡이부(1310A, 1310B)를 형성하기 위하여 별도의 부재를 부착하는 것이 아니라, 상기 세포배양필름(1300)의 가장자리의 일부가 손잡이 역할을 하게 된다.

구체적으로, 상기 손잡이부(1310A, 1310B)는 상기 세포배양필름(1300)의 중앙부를 중심으로 대칭적으로 한 쌍이 배치될 수 있다. 이때, 상기 세포배양필름(1300)의 가장자리의 일부가 절개되어 상부를 향해 절곡됨으로써 손잡이부(1310A, 1310B)를 형성할 수 있다.

따라서, 작업자는 상기 세포배양필름(1300)의 상면에서 세포 또는 조직을 배양한 다음, 상기 손잡이부(1310A, 1310B)를 상기 외부용기(1200)에서 잡아당김으로써 상기 세포배양필름(1300)을 상기 외부용기(1200)에서 용이하게 분리할 수 있다.

그런데, 상기 외부용기(1200)의 내측에 배치된 세포배양필름(1300)의 상면에서 세포 또는 조직을 배양하고 상기 세포배양필름(1300)을 분리한 다음, 상기 배양된 조직 또는 세포를 관찰하기 위하여 상기 조직 또는 세포를 상기 세포배양필름(1300)에서 조직검사용 커버글라스 등에 분리하여 옮기게 되면 상기 배양된 조직 또는 세포에 변성이 발생할 수 있다.

따라서, 본 발명에서는 전술한 문제점을 해결하기 위하여 세포 또는 조직이 배양된 세포배양필름(1300)을 상기 외부용기(1200)에서 분리한 경우에 이를 바로 형광현미경과 같은 관찰용 현미경에 투입하여 관찰할 수 있는 커버글라스(cover galss) 역할을 하도록 할 수 있다.

이를 위하여, 상기 세포배양필름(1300)의 두께는 대략 0.1 mm 내지 0.2 mm 의 두께를 가질 수 있으며, 커버글라스와 유사한 굴절률을 가지도록 대략 1.4 내지 1.6에 해당하는 굴절률을 가지도록 제작할 수 있다.

나아가, 상기 세포배양필름(1300)은 투명한 재질의 생체 친화성 재질로 이루어질 수 있다. 예를 들어, 상기 세포배양필름(5300A ~ 5300G)은 폴리디메틸실록산 (PDMS, Polydimethylsiloxane), 폴리메타크릴산 메틸(PMMA, poly(methylmethacrylate)), 폴리스티렌 필름(polystyrene film) 또는 실리콘 중합체로 형성될 수 있다.

따라서, 세포 또는 조직이 배양된 세포배양필름(1300)을 분리한 경우에 배양된 세포 또는 조직을 별도의 검사용 커버글라스에 옮길 필요없이 분리된 세포배양필름(1300)을 바로 검사용 현미경에 투입하여 바로 검사를 수행하여 편리하게 검사를 수행할 수 있다. 이러한, 세포배양필름(1300)의 두께, 재질 및 투광성에 대한 특성은 이후에 설명하는 실시예들에 따른 세포배양키트의 세포배양필름에도 모두 적용될 수 있다.

한편, 상기 세포배양필름(1300)을 한 개 구비하는 경우에 배양된 세포 또는 조직을 여러 종류의 실험 또는 관찰을 위해 분리할 필요가 발생할 수 있다. 이 경우, 상기 세포배양필름(1300)의 분할을 위하여 상기 세포배양필름(1300)에는 도 2에 도시된 바와 같이 절취선(1302)이 형성될 수 있다.

도 2에서는 상기 절취선(1302)이 평행한 형태로 형성되어, 상기 세포배양필름(1300)의 중앙부를 네 개의 구역으로 구획하고 있는데, 상기 절취선(1302)은 필요에 따라 다양한 형태로 형성될 수 있다.

따라서, 상기 세포배양필름(1300)의 상면에서 세포 또는 조직을 배양한 다음, 상기 절취선(1302)에 의해 상기 세포배양필름(1300)을 절취하는 경우에 복수개의 세포배양필름(1300)으로 분할이 가능하게 되어 용도에 맞게 관찰 또는 실험을 반복할 수 있다.

한편, 도 3은 본 발명의 다른 실시예에 따른 세포배양키트(2000)의 분해 사시도이고, 도 4는 도 3에서 세포배양필름(2300)의 평면도이다.

도 3 및 도 4를 참조하면, 상기 세포배양키트(2000)는 상부가 개방되어 내부에 수용공간을 제공하는 외부용기(2200), 상기 외부용기(2200)의 내측에 적어도 한 개 이상 분리 가능하게 적층되어 구비되는 세포배양필름(2300) 및 상기 외부용기(2200)의 개방된 상부에 결합되는 커버부(2100)를 구비한다.

이때, 본 실시예에 따른 상기 세포배양필름(2300)은 다수개의 배양홀(2320)이 형성될 수 있다.

즉, 상기 세포배양필름(2300)에는 도 3 및 도 4에 도시된 바와 같이 다수개의 배양홀(2320)이 상기 세포배양필름(2300)을 관통하여 형성될 수 있다. 따라서, 상기 세포배양필름(2300)이 상기 외부용기(2200)의 내측 베이스(2202)에 안착되는 경우에 상기 배양홀(2320)을 통해 상기 외부용기(2200)의 내측 베이스(2202)의 상면이 노출된다.

종래 기술의 경우, 세포 또는 조직의 계대배양(subculture)을 하는 경우에 배양접시에서 배양된 세포 또는 조직에 효소처리과정(trypsinization)을 수행하고, 세포 또는 조직을 분리하게 된다. 그런데, 이러한 효소처리과정은 매우 민감한 과정으로서 배양된 세포 또는 조직을 정확하게 분리해야 하는 어려움이 있다. 또한, 배양된 세포 또는 조직을 분리하기 위하여 효소로 처리하는 과정에서 세포 또는 조직이 변성될 수 있는 문제점이 있다.

그런데, 본 실시예에 따른 상기 세포배양키트(2000)의 경우 세포 또는 조직을 계대배양하는 경우에 전술한 종래기술과 같이 세포 또는 조직에 대한 효소처리과정을 생략하고 용이하게 분리할 수 있는 장점이 있다.

도 5는 본 실시예에 따른 세포배양키트(2000)를 사용하여 계대배양을 하는 과정을 도시한 개략도이다. 도 5를 참조하여 세포 또는 조직의 계대배양 과정을 살펴보면 다음과 같다.

먼저, 도 5의 (a)와 같이 상기 세포배양필름(2300)을 상기 외부용기(2200)의 내측 베이스(2202)에 안착시킨다.

이어서, 도 5의 (b)와 같이 상기 세포배양필름(2300)의 상면에서 세포 또는 조직(10)을 배양시킨다.

이 경우, 배양된 세포 또는 조직(10)은 상기 세포배양필름(2300)의 상면을 덮어 배양되고, 이어서 도 5의 (c)와 같이 상기 배양홀(2320)을 통해 노출된 상기 외부용기(2200)의 베이스(2202)의 상면에도 배양될 수 있다.

이 경우, 작업자가 상기 세포배양필름(2300)의 손잡이부(2310A, 2310B)(도 3 참조)를 당겨서 도 5의 (d)와 같이 상기 세포배양필름(2300)을 상기 외부용기(2200)에서 분리하면, 상기 세포배양필름(2300)의 상면뿐만 아니라 상기 외부용기(2200)의 내측 베이스(2202)의 상면에도 배양된 세포 또는 조직이 남게 된다.

따라서, 상기 외부용기(2200)의 베이스(2202)에서 계속해서 세포 또는 조직을 배양할 수 있게 되어 종래기술과 같이 계대배양을 하는 경우에 세포 또는 조직을 분리하기 위한 별도의 효소처리를 필요로 하지 않게 된다.

한편, 이 경우, 상기 외부용기(2200)의 내측 베이스(2202)에서 세포 또는 조직을 배양하게 되므로, 본 실시예에 따른 상기 외부용기(2200)의 재질은 상기 세포배양필름(2300)과 동일하게 형성될 수 있다. 즉, 상기 외부용기(2200)는 폴리디메틸실록산 (PDMS, Polydimethylsiloxane), 폴리메타크릴산 메틸(PMMA, poly(methylmethacrylate)), 폴리스티렌 필름(polystyrene film) 또는 실리콘 중합체 등과 같은 생체 친화성 재질로 형성될 수 있다.

도 6은 본 발명의 또 다른 실시예에 따른 세포배양키트(3000)의 사시도이고, 도 7은 상기 세포배양키트(3000)의 분해 사시도이다.

도 6 및 도 7을 참조하면, 상기 세포배양키트(3000)는 상부가 개방되어 내부에 수용공간을 제공하는 외부용기(3200), 상기 외부용기(3200)의 내측에 적어도 한 개 이상 분리 가능하게 적층되어 구비되는 세포배양필름(3300A ~ 3300G) 및 상기 외부용기(3200)의 개방된 상부에 결합되는 커버부(3100)를 구비한다.

이 경우, 상기 세포배양필름(3300A ~ 3300G)은 복수개로 구성되어 세포배양필름 집합체(3300)를 구성할 수 있다. 즉, 도 7에 도시된 바와 같이 상기 세포배양필름 집합체(3300)는 복수개의 개별 세포배양필름(3300A ~ 3300G)이 적층되어 형성될 수 있다. 각 개별 세포배양필름(3300A ~ 3300G)에 형성되는 손잡이부(3310A, 3310B)에 대해서는 전술한 실시예와 유사하므로 반복적인 설명은 생략한다.

상기 세포배양필름(3300A ~ 3300G)을 복수개 구비하게 되면, 본 실시예에 따른 세포배양키트(3000)를 사용하여 세포 또는 조직을 배양하는 경우에 1회 세포 배양이 끝난 후에 세포배양키트(3000)를 폐기하는 것이 아니라 반복적으로 사용할 수 있다는 장점이 있다.

즉, 제1단(최상단)에 위치한 세포배양필름(3300A)에서 세포 또는 조직을 배양한 후, 상기 세포배양필름(3300A)을 분리하고, 그 하단인 제2단에 위치한 세포배양필름(3300B)에 다시 새롭게 세포 또는 조직을 배양할 수 있다. 따라서, 상기 세포배양필름(3300A ~ 3300G)의 개수만큼 상기 세포배양키트(3000)를 반복적으로 사용할 수 있게 되어 1회 사용하고 버리는 경우에 비해 경제성을 높일 수 있으며, 나아가 보다 간편하고 용이하게 세포의 검사 및 관찰이 가능하게 된다.

이때, 상기 세포배양필름(3300A ~ 3300G)을 복수개 구비하는 경우에 상기 복수개의 세포배양필름(3300A ~ 3300G)은 분리 가능하게 적층될 수 있다. 예를 들어, 상기 복수개의 세포배양필름(3300A ~ 3300G)은 미리 정해진 온도로 가열되어 점착되거나, 또는 레진(resin) 또는 실리콘 소재의 폴리머 레진(polymer resin) 등과 같이 세포 또는 조직의 성장에 영향을 주지 않는 소재의 점착제를 사용하여 점착될 수 있다.

이때, '점착'이라 함은 상기 복수개의 상기 세포배양필름(3300A ~ 3300G)이 서로 부착되지만, 상기 세포배양필름(3300A ~ 3300G)을 분리하는 경우에 다른 세포배양필름에 오염을 남기지 않고 용이하게 분리될 수 있는 상태로 정의될 수 있다.

도 8은 본 발명의 또 다른 실시예에 따른 세포배양키트(4000)의 사시도이고, 도 9는 상기 세포배양키트(4000)의 분해 사시도이다.

도 8 및 도 9를 참조하면, 상기 세포배양키트(4000)는 상부가 개방되어 내부에 수용공간을 제공하는 외부용기(4200), 상기 외부용기(4200)의 내측에 적어도 한 개 이상 분리 가능하게 적층되어 구비되는 세포배양필름(4300A ~ 4300G) 및 상기 외부용기(4200)의 개방된 상부에 결합되는 커버부(4100)를 구비한다.

이 경우, 상기 세포배양필름(4300A ~ 4300G)은 복수개로 구성되어 세포배양필름 집합체(4300)를 구성하며, 나아가 상기 복수개의 세포배양필름(4300A ~ 4300G)은 복수개의 배양홀(4320A ~ 4320G)을 각각 구비할 수 있다.

도 10은 상기 세포배양필름 집합체(4300)의 평면도이다.

도 10을 참조하면, 상기 세포배양필름(4300A ~ 4300G)의 배양홀(4320A ~ 4320G)은 하부에 위치한 세포배양필름(4300A ~ 4300G)의 배양홀(4320A ~ 4320G)과 서로 겹치지 않게 형성될 수 있다.

즉, 도 10에 도시된 바와 같이 제1단의 세포배양필름(4300A)의 배양홀(4320A)은 그 하단에 위치한 제2단의 세포배양필름(4300B)의 배양홀(4320B)과 겹치지 않게 형성된다.

따라서, 상기 세포배양필름(4300A ~ 4300G)의 배양홀(4320A ~ 4320G)을 통해 바로 하단의 세포배양필름(4300A ~ 4300G)의 상면이 노출된다.

즉, 전술한 도 3와 같이 배양홀(2320)이 형성된 세포배양필름(2300)을 한 개 구비하는 경우에는 상기 세포배양필름(2300)의 배양홀(2320)을 통해 상기 외부용기(2200)의 베이스(2202)의 상면이 노출되고, 도 9와 같이 복수개의 개별 세포배양필름(4300A ~ 4300G)을 구비한 경우에는 상기 배양홀(4320A ~ 4320G)을 통해 하단의 세포배양필름(4300A ~ 4300G)의 상면이 노출될 수 있다. 복수개의 개별 세포배양필름(4300A ~ 4300G)을 구비한 경우에도 최하단의 세포배양필름(4300G)의 배양홀(4320G)에는 상기 외부용기(4200)의 베이스(4202)의 상면이 노출된다. 결국, 상기 세포배양필름(2300, 4300A ~ 4300G)의 배양홀(2320, 4320A ~ 4320G)을 통해 상기 외부용기(2200, 4200)의 베이스(2202, 4202)의 상면 또는 하단의 세포배양필름(4300A ~ 4300G)의 상면이 노출된다고 할 수 있다.

본 실시예에 따른 세포배양키트(4000)의 경우, 도 3 내지 도 5에 따른 실시예와 마찬가지로 계대배양을 하는 경우에 배양된 세포 또는 조직의 분리를 위한 효소처리과정을 생략할 수 있다.

도 11은 본 실시예에 따른 세포배양키트(4000)를 사용하여 계대배양을 하는 과정을 도시한 개략도이다. 도 11에서는 도시의 편의를 위해 복수개의 세포배양필름(4300A ~ 4300G) 중에 제1단의 세포배양필름(4300A)과 그 하단인 제2단의 세포배양필름(4300B)만을 도시한다. 도 11을 참조하여 세포 또는 조직의 계대배양 과정을 살펴보면 다음과 같다.

먼저, 도 11의 (ㅁ)와 같이 제2단의 세포배양필름(4300B)의 상부에 제1단의 세포배양필름(4300A)이 배치된다. 이 경우, 제1단의 세포배양필름(4300A)의 배양홀(4320A)은 그 하단에 위치한 제2단의 세포배양필름(4300B)의 배양홀(4320B)과 겹치지 않게 형성된다. 따라서, 상기 제1단의 세포배양필름(4300A)의 배양홀(4320A)을 통해 바로 하단의 세포배양필름(4300B)의 상면이 노출된다.

이어서, 도 11의 (b)와 같이 상기 제1단의 세포배양필름(4300A)의 상면에서 세포 또는 조직(10)을 배양시킨다.

이 경우, 배양된 세포 또는 조직(10)은 상기 제1단의 세포배양필름(4300A)의 상면을 덮어 배양되고, 이어서 도 11의 (c)와 같이 상기 배양홀(4320A)을 통해 노출된 상기 제2단의 세포배양필름(4300B)의 상면에도 배양될 수 있다.

이 경우, 작업자가 상기 제1단의 세포배양필름(4300A)의 손잡이부(4310A, 4310B)를 당겨서 도 11의 (d)와 같이 상기 제1단의 세포배양필름(4300A)을 상기 제2단의 세포배양필름(4300B)에서 분리하면, 상기 제1단의 세포배양필름(4300A)의 상면뿐만 아니라 상기 제2단의 세포배양필름(4300B)의 상면의 일부에도 배양된 세포 또는 조직이 남게 된다.

따라서, 상기 제2단의 세포배양필름(4300B)의 상면에서 계속해서 세포 또는 조직을 배양할 수 있게 되어 종래기술과 같이 계대배양을 하는 경우에 세포 또는 조직을 분리하기 위한 별도의 효소처리를 필요로 하지 않게 된다.

한편, 이러한 계대배양과정은 반복적으로 수행될 수 있다. 즉, 도 11에는 도시되지 않았지만, 제2단의 세포배양필름(4300B)의 아래에는 제3단의 세포배양필름(4300C)이 위치하게 된다. 따라서, 전술한 도 11의 과정을 반복하여 효소처리가 생략된 계대배양 과정을 반복할 수 있다.

도 12는 본 발명의 또 다른 실시예에 따른 세포배양키트(5000)의 사시도이고, 도 13은 상기 세포배양키트(5000)의 분해 사시도이고, 도 14는 도 13에서 세포배양필름 집합체(5300)의 분해 사시도이고, 도 15는 도 13에서 커버부(5100)를 구성하는 내부커버 집합체(5130)의 분해 사시도이다.

도 12 내지 도 15를 참조하면, 상기 세포배양키트(5000)는 상부가 개방되어 내부에 수용공간을 제공하는 외부용기(5200), 상기 외부용기(5200)의 내측에 적어도 한 개 이상 분리 가능하게 적층되어 구비되는 세포배양필름(5300A ~ 5300G) 및 상기 외부용기(5200)의 개방된 상부에 결합되는 커버부(5100)를 구비한다.

이 경우, 상기 세포배양필름(5300A ~ 5300G)은 복수개로 구성되어 세포배양필름 집합체(5300)를 구성할 수 있다. 또한, 상기 각 개별 세포배양필름(5300A ~ 5300G)은 그 상면에서 세포 또는 조직이 배양되는 베이스(5310)와, 상기 베이스(5310)의 가장자리에서 상부를 향해 절곡 형성된 측벽(5320)을 구비할 수 있다.

나아가, 상기 세포배양필름(5300A ~ 5300G)의 측벽(5320)의 상단부에는 손잡이(5330)가 구비될 수 있다. 상기 손잡이(5330)는 상기 세포배양필름(5300A ~ 5300G)의 측벽의 상단부에서 위쪽을 향해 연장 형성될 수 있다. 상기 손잡이(5330)는 도면에 도시된 바와 같이 삼각형의 형태로 형성되거나, 또는 다른 형태로 적절하게 변형되어 형성될 수 있다.

따라서, 상기 세포배양필름 집합체(5300) 중에 최상단의 세포배양필름(5300A)을 분리하고자 하는 경우에는 상기 최상단의 세포배양필름(5300A)의 손잡이(5330A)를 잡고 상기 외부용기(5200)에서 잡아당김으로써 최상단에 위치한 상기 세포배양필름(5300A)을 분리할 수 있다.

결국, 본 실시예에 따른 각 세포배양필름(5300A ~ 5300G)은 도면에 도시된 바와 같이 상부를 향해 형성된 측벽(5320)을 구비한다는 점에서 전술한 실시예들과 차이가 있다. 이와 같이 각 세포배양필름(5300A ~ 5300G)이 측벽(5320)을 구비하게 되면 상기 세포배양필름(5300A ~ 5300G)의 베이스(5310)의 상면에서 세포 또는 조직을 배양하는 경우에 그 환경을 보존하기 용이하다는 장점이 있다. 즉, 상기 측벽(5320)이 없는 경우에 비해 외부의 영향을 최소화할 수 있다.

또한, 전술한 바와 같이 상기 각 세포배양필름(5300A ~ 5300G)이 측벽(5320)을 구비하는 경우에 상기 커버부(5100)는 외부커버(5110)와 상기 외부커버(5110)의 내측에 상기 세포배양필름(5300A ~ 5300G)의 개수에 대응하여 분리 가능하게 적층된 내부커버(5130A ~ 5130G)를 구비하는 내부커버 집합체(5130)를 구비할 수 있다.

상기 내부커버 집합체(5130)는 상기 외부커버(5110)의 내측에 구비된다. 이때, 상기 내부커버 집합체(5130)는 복수개의 개별 내부커버(5130A ~ 5130G)를 구비할 수 있으며, 상기 개별 내부커버(5130A ~ 5130G)의 개수는 전술한 개별 세포배양필름(5300A ~ 5300G)의 개수에 대응한다.

즉, 상기 개별 세포배양필름(5300A ~ 5300G)을 분리하는 경우에 상기 개별 내부커버(5130A ~ 5130G)를 분리하여 상기 분리된 세포배양필름(5300A ~ 5300G)의 측벽에 상기 분리된 개별 내부커버(5130A ~ 5130G)를 결합시키게 된다.

따라서, 이와 같이 세포배양필름(5300A ~ 5300G)이 측벽(5320)을 구비하고, 나아가 상기 측벽(5320)에 결합되는 개별 내부커버(5130A ~ 5130G)를 구비하게 되면, 상기 세포배양필름(5300A ~ 5300G)의 내부 환경을 보존하기 용이하고 외부 영향을 최소할 수 있다는 장점이 있다.

이때, 상기 복수개의 개별 내부커버(5130A ~ 5130G)는 분리 가능하게 적층될 수 있다. 예를 들어, 상기 복수개의 개별 내부커버(5130A ~ 5130G)는 미리 정해진 온도로 가열하여 점착되거나, 또는 레진(resin) 또는 실리콘 소재의 폴리머 레인(polymer resin) 등과 같이 세포 또는 조직의 성장에 영향을 주지 않는 소재의 점착제를 사용하여 점착될 수 있다.

이 경우, 상기 개별 내부커버(5130A ~ 5130G)에는 분리용 손잡이(5132A ~ 5132G)가 아래를 향해 형성될 수 있다. 따라서, 상기 내부커버(5130A ~ 5130G)를 분리하고자 하는 경우에는 상기 내부커버(5130A ~ 5130G) 중에 제일 아래쪽에 위치한 상기 손잡이(5132G)를 잡고 상기 외부커버(5110)에서 잡아당김으로써 최하단에 위치한 내부커버(5130G)를 분리할 수 있다.

한편, 상기 내부커버(5130A ~ 5130G)의 재질은 상기 세포배양필름(5300A ~ 5300G)과 마찬가지로 생체 친화성 재질로 이루어질 수 있다. 예를 들어, 폴리디메틸실록산 (PDMS, Polydimethylsiloxane), 폴리메타크릴산 메틸(PMMA, poly(methylmethacrylate)), 폴리스티렌 필름(polystyrene film) 또는 실리콘 중합체로 형성될 수 있다.

한편, 도 16은 전술한 도 12에서 세포배양필름 집합체(5300)의 상단부가 외부를 향해 접힌 상태를 도시한 사시도이다.

도 16을 참조하면, 상기 외부용기(5200)의 내측에 상기 세포배양필름(5300A ~ 5300G)이 적층되어 안착된 경우에 상기 세포배양필름 집합체(5300)의 측벽의 상단부의 높이는 상기 외부용기(5200)의 측벽의 상단부의 높이보다 상대적으로 더 높게 형성된다.

이 경우, 상기 세포배양필름 집합체(5300)의 측벽의 상단부를 외부를 향해 접는 경우에 상기 세포배양필름 집합체(5300)의 접힌 상단부에 의해 상기 외부용기(5200)의 측벽의 상단부가 덮히게 된다.

따라서, 상기 커버부(5100)를 상기 외부용기(5200)의 상부에 결합시키는 경우에 용이하게 결합할 수 있다.

한편, 본 실시예에 따른 세포배양필름 집합체(5300)의 경우 복수개의 개별 세포배양필름(5300A ~ 5300G)을 구비하며, 각 개별 세포배양필름(5300A ~ 5300G)은 측벽(5320)을 구비하게 된다.

이때, 상기 각 개별 세포배양필름(5300A ~ 5300G)의 측벽(5320)이 모두 수직하게 형성된다면 상기 각 세포배양필름(5300A ~ 5300G)을 적층하기 쉽지 않을 뿐만 아니라 상기 각 개별 세포배양필름(5300A ~ 5300G)을 분리하기도 쉽지 않을 수 있다.

따라서, 도 17에 도시된 바와 같이 상기 각 개별 세포배양필름(5300A ~ 5300G)의 측벽(5320)은 수직선을 기준으로 미리 정해진 각도로 외부를 향해 경사져서 형성될 수 있다. 도 17은 제1단의 세포배양필름(5300A)의 측벽(5320A)의 측단면도이다.

도 17을 참조하면, 상기 제1단의 세포배양필름(5300A)의 측벽(5320A)은 수직선에 대해 미리 정해진 각도(θ), 예를 들어 대략 0.5° 내지 1.5°, 바람직하게는 대략 1° 정도 외부를 향해 경사져서 형성될 수 있다.

이와 같이 각 개별 세포배양필름(5300A ~ 5300G)의 측벽(5320)이 외부를 향해 경사져서 형성된다면, 상기 각 개별 세포배양필름(5300A ~ 5300G)을 적층하는 과정이 용이하게 이루어질 수 있다. 또한, 상기 각 개별 세포배양필름(5300A ~ 5300G)을 분리하는 경우에 보다 쉽게 분리할 수 있다.

도 18은 본 발명의 또 다른 실시예에 따른 세포배양필름 집합체(6300)의 분해 사시도이다.

도 18에 따른 세포배양필름 집합체(6300)는 전술한 도 12 내지 도 14의 실시예와 비교하여 상기 각 세포배양필름(6300A ~ 6300G)에 다수개의 배양홀(6340A ~ 6340G)이 형성되어 있다는 점에서 차이가 있다.

이 경우, 상기 세포배양필름(6300A ~ 6300G)의 배양홀(6340A ~ 6340G)은 하부에 위치한 세포배양필름(6300A ~ 6300G)의 배양홀(6340A ~ 6340G)과 서로 겹치지 않게 형성될 수 있다. 상기 세포배양필름(6300A ~ 6300G)의 베이스(6310), 측벽(6320) 및 손잡이(6330)에 대한 설명은 전술한 도 14의 설명과 유사하므로 반복적인 설명은 생략한다. 또한, 본 실시예에의 경우에도 상기 개별 세포배양필름(6300A ~ 6300G)에 결합할 수 있는 복수개의 내부커버(미도시)를 구비할 수 있다.

한편, 본 실시예에 따른 세포배양필름(6300A ~ 6300G)을 이용하여 계대배양을 하는 경우 배양된 세포 또는 조직을 분리하기 위하여 효소처리과정을 생략할 수 있다. 이에 대해서는 전술한 도 10 및 도 11의 설명과 유사하므로 반복적인 설명은 생략한다.

한편, 도 19는 3차원 세포배양을 위한 본 발명의 또 다른 실시예에 따른 세포배양키트(7000)의 사시도이고, 도 20은 도 19에서 세포배양필름(7300)의 측단면도이다.

도 19 및 도 20을 참조하면, 본 실시예에 따른 세포배양키트(7000)는 3차원 세포 배양(3D Cell Culture)기술을 적용할 수 있는 세포배양키트에 해당한다. 최근 각종 장기의 세포나 줄기세포에 대한 연구가 활발해짐에 따라 세포의 3차원 세포집합체인 스페로이드(Spheroids)(이하, '세포집합체'라 함)를 배양할 수 있는 세포배양키트에 대한 연구가 활발해지고 있다.

도 19 및 도 20에 도시된 세포배양키트(7000)는 이와 같은 세포집합체를 배양할 수 있는 세포배양키트(7000)에 해당한다.

구체적으로, 상기 세포배양키트(7000)는 상부가 개방되어 내부에 수용공간을 제공하는 외부용기(7200), 상기 외부용기(7200)의 내측에 적어도 한 개 이상 분리 가능하게 적층되어 구비되는 세포배양필름(7300) 및 상기 외부용기(7200)의 개방된 상부에 결합되는 커버부(7100)를 구비한다.

이때, 상기 세포배양필름(7300)에는 하부를 향해 돌출 형성되어 내부에 세포집합체(20)를 배양할 수 있는 하나 이상의 세포배양홈(7320)이 형성되고, 상기 외부용기(7200)의 베이스(7202)에는 상기 세포배양홈(7320)에 대응하여 상기 세포배양홈(7320)이 수용되는 수용홈(7220)이 형성될 수 있다.

상기 세포배양필름(7300)는 상기 세포집합체(20)를 내측에 배양할 수 있는 세포배양홈(7320)이 하부를 향해 소정 깊이로 돌출 형성된다. 예를 들어, 상기 세포배양홈(7320)은 그 내부에 세포집합체(20)가 3차원으로 배양될 수 있도록 소정의 부피를 갖도록 상기 세포배양필름(7300)의 하부를 향해 돌출 형성될 수 있다. 이 경우, 상기 세포배양홈(7320)은 도면에서는 반구 형태로 도시되나, 이에 한정되지는 않으며 내측에 세포집합체(20)를 배양하기에 적절한 형태로 변형될 수 있다.

한편, 상기 세포배양필름(7300)의 하부에 상기 세포배양홈(7320)이 돌출 형성되므로, 상기 외부용기(7200)의 베이스(7202)에는 대응하여 상기 세포배양홈(7320)이 수용되는 수용홈(7220)이 형성될 수 있다.

상기 수용홈(7220)은 상기 세포배양홈(7320)의 돌출 형상에 대응하는 내측 형상을 가지며, 상기 수용홈(7220)의 개수는 상기 세포배양홈(7320)의 개수에 대응할 수 있다.

본 실시예에 따른 세포배양키트(7000)의 경우, 상기 세포배양필름(7300)의 세포배양홈(7320)에서 세포집합체(20)를 3차원으로 배양한 다음, 냉동절편법(Frozen Sectioning)에 표본을 제작하여 현미경으로 표본을 관찰 또는 검사할 수 있다.

이때, 별도의 몰드(mould)를 구비할 필요없이 상기 세포배양필름(7300)이 몰드 역할을 하여 간편하고 손쉽게 표본을 제작하여 세포 집합체의 관찰이 가능하게 된다.

상기 세포배양필름(7300)의 두께는 대략 0.1 mm 내지 0.2 mm 의 두께를 가질 수 있으며, 대략 1.4 내지 1.6에 해당하는 굴절률을 가지도록 제작할 수 있다.

나아가, 상기 세포배양필름(7300)은 투명한 재질의 생체 친화성 재질로 이루어질 수 있다. 예를 들어, 상기 세포배양필름(7300)은 폴리디메틸실록산 (PDMS, Polydimethylsiloxane), 폴리메타크릴산 메틸(PMMA, poly(methylmethacrylate)), 폴리스티렌 필름(polystyrene film) 또는 실리콘 중합체로 형성될 수 있다.

또한, 상기 세포배양필름(7300)은 상기 외부용기(7200)에서 용이하게 분리할 수 있도록 상기 세포배양필름(7300)의 가장자리를 따라 한 쌍의 손잡이부(7310A, 7310B)를 구비할 수 있다.

한편, 상기 세포배양필름(7300)은 상기 외부용기(7200)의 베이스(7202)의 상면에 분리 가능하게 안착될 수 있다.

예를 들어, 상기 세포배양필름(7300)은 미리 정해진 온도로 가열되어 상기 외부용기(7200)의 베이스(7202)에 점착되거나, 또는 레진(resin) 또는 실리콘 소재의 폴리머 레진(polymer resin) 등과 같이 세포 또는 조직의 성장에 영향을 주지 않는 소재의 점착제를 사용하여 점착될 수 있다.

상기 커버부(7100)에 대해서는 이미 상술하였으므로 반복적인 설명은 생략한다.

도 21은 본 발명의 또 다른 실시예에 따른 세포배양필름의 분해 사시도이다.

도 21을 참조하면, 상기 세포배양필름(7400A, 7400B, 7400C, 7400D)은 복수개로 구성되어 세포배양필름 집합체(7400)를 구성한다.

이때, 전술한 세포배양홈(7430)이 형성된 상기 세포배양필름(7400D)이 상기 세포배양필름 집합체(7400)의 최하단에 위치하고, 다수개의 배양홀(7420A, 7420B, 7420C)이 형성된 세포배양필름(7400A, 7400B, 7400C)이 최하단에 위치한 상기 세포배양필름(7400D)의 상부에 적어도 한 개 위치할 수 있다.

즉, 상기 세포배양필름 집합체(7400)의 최하단에 상기 세포배양홈(7430)이 형성된 상기 세포배양필름(7400D)이 배치되고, 상기 세포배양필름(7400D)의 위쪽에 다수개의 배양홀(7420A, 7420B, 7420C)이 형성된 세포배양필름(7400A, 7400B, 7400C)이 위치한다.

이 경우, 상기 세포배양필름(7400A, 7400B, 7400C, 7400D)이 분리 가능하게 서로 적층되어 점착되는 구조는 이미 상술하였으므로 반복적인 설명은 생략한다.

한편, 위와 같은 구성을 가지는 상기 세포배양필름 집합체(7400)에서 상기 다수개의 배양홀(7420A, 7420B, 7420C)이 형성된 세포배양필름(7400A, 7400B, 7400C)에서 상기 배양홀(7420A, 7420B, 7420C) 중에 적어도 한 개의 배양홀(7420A', 7420B', 7420C')(도 22 참조)은 상기 세포배양홈(7430)과 연통하도록 배치될 수 있다. 또한, 이 경우 상기 세포배양필름(7400A, 7400B, 7400C)의 나머지 배양홀은 하부에 위치한 세포배양필름(7400A, 7400B, 7400C)의 배양홀과 서로 겹치지 않게 된다.

도 22는 도 21에 도시된 세포배양필름 집합체(7400)의 측단면도를 도시하여 도 21에 따른 세포배양필름 집합체(7400)를 이용하여 계대배양 및 3차원 세포집합체를 생장시키는 과정을 도시한 도면이다.

도 22의 (a)를 살펴보면, 상기 세포배양필름 집합체(7400)의 최하단에 상기 세포배양홈(7430)이 형성된 상기 세포배양필름(7400D)이 배치되고, 상기 세포배양필름(7400D)의 위쪽에 다수개의 배양홀(7420A, 7420B, 7420C)이 형성된 세포배양필름(7400A, 7400B, 7400C)이 위치한다.

이때, 상기 세포배양필름(7400A, 7400B, 7400C)에 각각 형성된 다수개의 배양홀(7420A, 7420B, 7420C) 중에 적어도 하나의 배양홀(7420A', 7420B', 7420C')은 상기 세포배양홈(7430)과 연통하도록 배치될 수 있다. 즉, 적어도 하나의 배양홀(7420A', 7420B', 7420C')은 서로 겹치도록 배치된다.

또한, 이 경우, 상기 세포배양필름(7400A, 7400B, 7400C)의 나머지 배양홀(7420A, 7420B, 7420C)은 하부에 위치한 세포배양필름(7400A, 7400B, 7400C)의 배양홀과 서로 겹치지 않게 된다.

이 경우, 도 22의 (a)에 도시된 바와 같이, 상기 세포배양홈(7430)과 서로 연통하는 배양홀(7420A', 7420B', 7420C')을 통해 최상단의 세포배양필름(7400A)에서 최하단의 세포배양필름(7400D)의 세포배양홈(7430)을 향해 수직 방향의 터널이 형성될 수 있다.

이러한 구조를 가지는 경우에 계대배양을 수행함과 동시에 3차원 세포집합체를 생장시킬 수 있는 바, 도 22를 참조하여 살펴보기로 한다.

먼저, 도 22의 (a)와 같이 상기 세포배양필름 집합체(7400)의 제1단에 위치한 세포배양필름(7400A)의 상면에 세포 또는 조직(10)을 배양시킨다.

이 경우, 배양된 세포 또는 조직(10)은 상기 제1단의 세포배양필름(7400A)의 상면을 덮어 배양되고, 이어서 도 22의 (b)와 같이 상기 배양홀(7420A)을 통해 노출된 상기 제2단의 세포배양필름(7400B)의 상면에도 배양될 수 있다.

한편, 배양된 세포 또는 조직(10)은 서로 연통하는 배양홀(7420A', 7420B', 7420C')을 통해 하부에 위치한 세포배양홈(7430)까지 내려가서 생장하게 된다.

즉, 상기 서로 연통하는 배양홀(7420A', 7420B', 7420C')을 통해 상기 세포배양홈(7430)까지 수직 방향의 터널이 형성되므로, 상기 터널을 통해 세포 또는 조직이 세포배양홈(7430)까지 생장하면서 내려가서 상기 세포배향홈(7430)의 내측 공간에서 3차원적으로 생장하게 된다.

이 경우, 작업자가 상기 제1단의 세포배양필름(7400A)의 손잡이부(7410A, 7410B)(도 21 참조)를 당겨서 도 22의 (c)와 같이 상기 제1단의 세포배양필름(7400A)을 상기 제2단의 세포배양필름(7400B)에서 분리하면, 상기 제1단의 세포배양필름(7400A)의 상면뿐만 아니라 상기 제2단의 세포배양필름(7400B)의 상면의 일부에도 배양된 세포 또는 조직이 남게 된다.

따라서, 상기 제2단의 세포배양필름(7400B)의 상면에서 계속해서 세포 또는 조직을 배양할 수 있게 되어 종래기술과 같이 계대배양을 하는 경우에 세포 또는 조직을 분리하기 위한 별도의 효소처리를 필요로 하지 않게 된다.

또한, 이 경우에 상기 세포배양홈(7430)에서는 세포 또는 조직이 지속적으로 생장하여 세포집합체(20)의 형태를 가지게 된다.

상기 세포집합체(20)는 3차원 형태로서, 세포배양필름(7400A, 7400B, 7400C)의 상면에 2차원적으로 생장시키는 세포 또는 조직에 비해서는 생장시간이 상대적으로 더 많이 걸리게 된다.

따라서, 상기 배양홀(7420A, 7420B, 7420C)이 형성된 세포배양필름(7400A, 7400B, 7400C)을 순차적으로 분리하면서 계대배양을 통해 세포 또는 조직을 검사 및 관찰할 수 있게 되며, 이 경우 상기 세포배양홈(7430)에서는 세포 또는 조직이 지속적으로 생장하여 도 22의 (d)와 같이 세포집합체(20)의 형태를 가지게 되어, 3차원 세포집합체(20)의 검사 및 관찰도 가능하게 된다.

본 발명은 다양한 형태로 변형되어 실시될 수 있을 것인 바 상술한 실시예에 그 권리범위가 한정되지 않는다. 따라서 변형된 실시예가 본 발명 특허청구범위의 구성요소를 포함하고 있다면 본 발명의 권리범위에 속하는 것으로 보아야 할 것이다.

1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 7000 : 세포배양키트
1100, 2100, 3100, 4100, 5100, 7100 : 커버부
1200, 2200, 3200, 4200, 5200, 7200 : 외부용기
1300, 2300, 3300, 4300, 5300, 7300 : 세포배양필름

Claims

상부가 개방되어 내부에 수용공간을 제공하는 외부용기;
상기 외부용기의 내측에 분리 가능하게 상하로 점착되어 적층되어 구비되는 복수개의 세포배양필름; 및
상기 외부용기의 개방된 상부에 결합되는 커버부;를 구비하고,
상기 복수개의 세포배양필름은 상면 및 하면이 서로 붙어서 상하로 점착되어 분리 가능하게 적층되는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제1항에 있어서,
상기 세포배양필름은 폴리스티렌 필름(polystyrene film) 또는 실리콘 중합체로 형성되는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제1항에 있어서,
상기 세포배양필름은 0.1 내지 0.2 mm 의 두께를 가지는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제1항에 있어서,
상기 세포배양필름은 굴절률이 1.4 내지 1.6에 해당하는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제1항에 있어서,
상기 세포배양필름에는 절취선이 형성되어 있는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제1항에 있어서,
상기 세포배양필름의 가장자리의 적어도 일부가 상부를 향해 절곡되어 손잡이부를 형성하는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제1항에 있어서,
상기 세포배양필름에는 다수개의 배양홀이 형성되어 있는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제7항에 있어서,
상기 세포배양필름의 배양홀은 하부에 위치한 세포배양필름의 배양홀과 서로 겹치지 않는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제8항에 있어서,
상기 세포배양필름의 배양홀을 통해 상기 외부용기의 베이스의 상면 또는 하단의 세포배양필름의 상면이 노출되는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제1항에 있어서,
상기 세포배양필름에는 하부를 향해 돌출 형성되어 내부에 세포집합체를 배양할 수 있는 하나 이상의 세포배양홈이 형성되고, 상기 외부용기의 베이스에는 상기 세포배양홈에 대응하여 상기 세포배양홈이 수용되는 수용홈이 형성되는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제10항에 있어서,
상기 세포배양홈이 형성된 상기 세포배양필름이 최하단에 위치하고, 다수개의 배양홀이 형성된 세포배양필름이 상부에 적어도 한 개 위치하는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제11항에 있어서,
상기 다수개의 배양홀이 형성된 세포배양필름에서 상기 배양홀 중에 적어도 한 개는 상기 세포배양홈과 연통하도록 배치되고,
상기 세포배양필름의 나머지 배양홀은 하부에 위치한 세포배양필름의 배양홀과 서로 겹치지 않는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제1항에 있어서,
상기 세포배양필름의 가장자리에서 상부를 향해 절곡 형성된 측벽을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제13항에 있어서,
상기 세포배양필름의 측벽은 수직선을 기준으로 미리 정해진 각도로 외부를 향해 경사져서 형성되는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제13항에 있어서,
상기 세포배양필름에는 다수개의 배양홀이 형성되어 있는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제15항에 있어서,
상기 세포배양필름의 배양홀은 하부에 위치한 세포배양필름의 배양홀과 서로 겹치지 않는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제13항에 있어서,
상기 세포배양필름의 측벽의 상단부에 손잡이가 더 구비되는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제13항에 있어서,
상기 세포배양필름의 측벽의 상단부의 높이는 상기 외부용기의 측벽의 상단부의 높이보다 상대적으로 더 높은 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제18항에 있어서,
상기 세포배양필름의 측벽의 상단부를 외부를 향해 접는 경우에 상기 세포배양필름의 접힌 상단부에 의해 상기 외부용기의 측벽의 상단부가 덮히는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제13항에 있어서,
상기 커버부는 외부커버와,
상기 외부커버의 내측에 상기 세포배양필름의 개수에 대응하여 분리 가능하게 적층된 내부커버를 구비하는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.
제20항에 있어서,
상기 내부커버는 손잡이를 더 구비하는 것을 특징으로 하는 세포배양키트.