TW201247703A

TW201247703A - Antibody formulations

Info

Publication number: TW201247703A
Application number: TW101110431A
Authority: TW
Inventors: Christi L Clogston; Twinkle R Christian; Timothy David Osslund; Elisabeth Freeman
Original assignee: Amgen Inc
Priority date: 2011-03-25
Filing date: 2012-03-26
Publication date: 2012-12-01
Also published as: AR085575A1; CA2830538A1; PE20140437A1; JP2017125020A; CO6801637A2; KR20140018315A; IL228455A; ZA201307122B; MX2013011012A; BR112013024493A2; EP2688910A1; US20160083460A1; AP3981A; JP6412964B2; CL2013002743A1; IL228455A0; AU2012236962A1; AP2013007135A0; CN103517920A; CR20160147A

Description

201247703 六、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於一種抗體調配物。 [相關申請案之交叉參考] 本申請案主張2011年3月25曰申請之美國臨時申請案第 61/467,868號的優先權益’該美國臨時申請案的揭示内容以全文引用之方式併入本文中。以電子方式提交之材料以引用方式併入本申請案含有呈電腦可讀形式之序列表（檔名： 4605 3一SeqListing_ST25.txt;建立：2011 年 3月 25 日；40,911 個位元組）作為揭示内容之一單獨部分，該序列表以全文引用之方式併入本文中。【先前技術】單株抗體廣泛用作生物治療劑，而達成供傳遞之超過1 〇〇 mg/ml之尚濃度的要求不斷增加。此對於經由皮下途徑傳遞之溶解度有限蛋白質而言提出挑戰，因為較佳之皮下投藥極限為 1.2 ml(Yang，M.X., Shenoy，B., Disttler，M·, Patel， R.，McGrath, Μ.，Pechenov，S.，Margolin, A.L· (2003)

Crystalline monoclonal antibodies for subcutaneous delivery，PNAS 100，6934-6939) »研發高濃度調配物就調配、分析、穩定性、製造及藥物傳遞的觀點而言提出許多挑戰（Shire，S.J.，Zahra，S·，Liu，J. (2004) Challenges in the development of high concentration formulations, J. Pharm. 93, 1390-1402)。迄今，高濃度調配物要求已藉由添加 163325.doc 201247703 增強穩定性、減少聚集及黏度之如胺基酸、糖及鹽的賦形劑而得到滿足（Shire(同上）；及 Jenkins，T. W. (1998) Three solutions of the protein solubility problem，7: 376-382)〇雖然蛋白質晶體常僅被視作蛋白質結構之中間物，但其就調配觀點而言亦具有重要之作用。呈結晶形式之蛋白質分子的嫡最低，因此使其比在液態下穩定3 kcal/mol-6 kcal/mol(Dreuth, J., Haas, C. (1992) Protein crystals and their stability, ·/. Ογίίίϊ/ GVowi/i 722，107-109)。結晶調配物之主要優勢包括蛋白濃度高、黏度較低、穩定性、因高濃度而消除頻繁給藥以及控制釋放特性（Yang(同上）；及 Basu, S. K., Govardhan, C. P., Jung, C. W., Margolin, A. L. (2004) Protein crystals for the delivery of biopharmaceuticals, Expert Opin. Biol. Thera. 4, 。結晶條件可經操控以針對所需之控制釋放特性達成不同之形態（Pechenov，S” Shenoy, B., Yang, Μ. X., Basu, S., Margolin, A. L. (2004) Injectable controlled release formulations incorporating protein crystals, Journal of Controlled Release 96, 149-158)。胰島素結晶調配物首次報導於20世紀20年代，且當今，其不僅為第一種由FDA批准之重組蛋白質治療劑，其亦為第一種經批准之結晶蛋白質治療劑（Hagedorn H. C.; Jensen, B. N.; Krarup, N. B.; Wodstrup, I. Protamine insulinate, (1936) J. Am. Med. Assn. 106, 177-180 ； Johnson, I. S. (2003) The trials and tribulations of producing the first genetically engineered drug. Nat. Rev. Drug. Discovery 2, 163325.doc 201247703 747-751 ;及 Basu，S. K., Govardhan，C. P.，Jung, C. W.， Margolin, A. L. (2004) Protein crystals for the delivery of biopharmaceuticals, Expert Opin. Biol. Thera. 4, 301-317) ° 使大分子結晶會因大分子固有之可撓性而有挑戰性，但一旦結晶，就調配及調節之觀點而言常常會提出挑戰（Basu(同上）；及 Jen, A.，Merkle，H.P. (2001) Diamonds in the rough: Protein crystals from a formulation perspective, Pharm. Res. 18, 1483-1488)。【發明内容】本發明係關於抗硬化蛋白（sclerostin)免疫球蛋白G型 (IgG)抗體（更尤其Ab-30及Ab-31)之晶體，其適用於非經腸投與之調配物中；製備該等晶體之溶液、鹽及方法；使用該等晶體製備用作藥物之調配物的方法，以及使用該等調配物治療哺乳動物（尤其人類）的方法。在本文所述之晶體或調配物中，晶體或調配物中之抗硬化蛋白 IgG抗體可包含 Ab-30、Ab-30R、Ab-30Rm 或 Ab-31 中任一者之重鏈可變區及輕鏈可變區。因此，在特定實施例中，抗體為包含以下胺基酸序列之IgG: (a)各自較佳融合至適合之恆定區的SEQ ID NO: 5(Ab-30重鏈可變區）及SEQ ID NO: 3(Ab-3〇輕鏈可變區）；或（b)SEQ ID NO·. 15(Ab-30 成熟重鏈）及SEQ ID NO: 13(Ab-3 0成熟輕鏈）；（c)各自較佳融合至適合之恆定區的SEQ ID NO: 17(Ab-30R重鏈可變區）及SEQ ID NO: i6(Ab-30R輕鏈可變區）；（d)SEQ ID NO: 17(Ab-30Rm 重鏈可變區）及 SEQ ID NO: 20(Ab-30Rm 輕鏈可 163325.doc 201247703 變區）’或（e)各自較佳融合至適合之恒定區的seq id ν〇· 25(Ab-31重鏈可變區）&SEQ m NO: 23(Ab-31輕鏈可變區）。在一些實施例中’抗體包含Ab-30、Ab-30R、Ab-3〇Rm 或Ab-3 1之成熟重鍵及輕鍵。在一些實施例中，抗體包含可藉由使編碼如本文所述之抗體Ab-30、Ab-30R、Ab-30Rm 或Ab-3 1中任一者之重鏈及/或輕鏈或各自較佳融合至適合怪定區之重鏈可變區及/或輕鏈可變區的cDNA在哺乳動物伯主細胞中表現而獲得的胺基酸序列。較佳，抗體以1 〇·7 Μ 或ΙΟ·7 Μ以下之Kd結合親和力結合至seq ID NO: 1之硬化蛋白。本文所述之抗體晶體可例如由尺寸、形狀、形態、鹽含量及其他特性來表徵。在一些實施例中，晶體長度在約i 〇〇 μΜ至約500 μΜ氣圍内’或在約5〇 μΜ至約1〇〇 μΜ範圍内，或在約1 μΜ至約50 μΜ範圍内，其視情況具有呈針狀、棒狀、板狀、塊狀、UFO狀、足球狀、葉狀、小麥狀、單峰狀、羽毛狀、橢球形（或衝浪板狀）、麥桿狀、菊花狀或球狀或其混合物的形態》在一些實施例中，晶體長度在約i μιη 至約10 μιη範圍内，或在約1 μηι至約15 μΓη範圍内，或在約i μιη至約20 μιη範圍内’或在約1 μηι至約25 μιη範圍内，或在約1 μιη至約30 μηι範圍内’或在約！ μηι至約35 圍内，或在約1 μπι至約40 μιη範圍内’或在約1 μιη至約45 μηι範圍内’或在約5 μιη至約10 μιη範圍内，或在約5 μιη至約15 μιη 範圍内’或在約5 μιη至約20 μηι範圍内，或在約5 μιη至約25 μηι範圍内，或在約5 μπι至約30 μιη範圍内，或在約5 μπι至 163325.doc 201247703 約35 μηι範圍内，或在約5 μηι至約40 μιη範圍内，或在約5 μιη 至約45 μιη範圍内，或在約50 μηι至約75 μιη範圍内，或在約 50 μιη至約80 μιη範圍内，或在約50 μιη至約85 μηι範圍内，或在約50 μιη至約90 μιη範圍内，或在約50 μηι至約95 μιη範圍内，或在約100 μηι至約150 μηι範圍内，或在約100 μηι至約200 μιη範圍内，或在約100 μιη至約250 μηι範圍内，或在約100 μιη至約300 μιη範圍内，或在約1〇〇 μιη至約350 μπι範圍内，或在約100 μιη至約400 μηι範圍内，或在約1〇〇 μιη至約450 μιη範圍内。視情況，晶體呈簇狀。晶體亦由X射線繞射來表徵。舉例而言’ Ab-30晶體可呈現針狀、棒狀、塊狀或板狀，或其混合物，或其他形狀。大部分Ab-30晶體呈現棒狀、針狀或橢球狀。舉例而言’ Ab-3 1晶體可呈現衝浪板狀或橢球狀或其他形狀。在一些實施例中’晶體長度為約5 μιη，或約1〇 μιη，或約 15 μιη，或約 20 μιη，或約 25 μιη，或約 30 μιη，或約 35 μπι，或約40 μηι，或約45 μηι，或約50 μιη，或約55 μηι，或約60 μηι，或約 65 μιη，或約 70 μιη，或約 75 μιη，或約 80 μπι，或約85 μηι，或約90 μηι，或約95 μηι，或約1〇〇 _，或約125 μηι，或約 150 μιη，或約 175 μηι ,或約 200 μιη，或約 250 μηι，或約 300 μιη，或約 350 μιη，或約 400 μιη，或約 450 μηι，或約500 μηι。與由本文所述之各種結晶條件所產生的晶體之長度無關’隨後可藉由此項技術中已知之方法將長度變為所需長度。舉例而言，若結晶條件產生長度為約5 pm至約 163325.doc 201247703 100 μιη或約5 μηι至約500 μιη或約100 μιη至約5〇〇 μηι之抗體晶體，則可將晶體研磨至較短長度，諸如約5 μηι至約5〇 μιη 範圍内之長度。在一些實施例中’晶體生長條件經調整以獲得考慮中之晶體之特定尺寸、形狀、長度及/或形態。晶體生長條件係由此項技術中已知之任何方式來調整，包括（但不限於）改變 pH值、改變沈澱劑之添加、改變沈澱劑之濃度、改變溫度及納入添加劑，該等添加劑包括（但不限於）鹽（包括（但不限於）乙酸鋅、氣化鋅、硫酸鋅、乙酸銨、乙酸鈣、二水合乙酸鋰、四水合乙酸鎂、氣化鎂、曱酸鎂、硝酸鎂、硫酸鎂及其組合）、胺基酸、糖、碳水化合物、清潔劑（離子型、非離子型、兩性離子型）及界面活性劑。在一些或任何實施例中，本文所述之抗體晶體的特徵在於結晶試劑中鹽之類型。適用於產生Ab-30晶體之鹽包括（但不限於）鱗酸二氩納麟Sa·風一卸、氣化納 '硫酸録、四水合酒石酸鉀納、他希美特（taCsimate)、二水合檸檬酸鈉、三水合乙酸鈉、酒石酸一録、丙二酸納、乙酸鹽、乙酸飼、二甲胂酸鹽、、硫酸鋰、氣化鎂、乙酸辞、氣化鉋、碳酸錄、磷酸鈉、磷酸鉀、氟化鈉、碘化鉀、碘化鈉、碘化銨、硫氰酸鈉、硫氰酸鉀、曱酸鈉、甲酸鉀及甲酸録。舉例而言，用於產生 Ab-30晶體之其他鹽（包括水合物）可包括其他磷酸二氫鹽、磷酸氫鹽、磷酸鹽、氟化物鹽、氣化物鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、他希美特鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、丙二酸鹽、 163325.doc 201247703 二曱胂酸鹽及碟化物鹽、、硫氰酸鹽或甲酸鹽；其具有例如

晶體之其他鹽包括氣化物鹽、乞°舉例而言，用於產生Ab-31 、乙酸鹽或碟酸鹽；其具有例如單價（例如鈉、鉀、錢）陽離子。在一些或任何實施例中，抗體晶體的特徵在於可影響晶體生長及/或形狀之結晶添加劑。適合之結晶添加劑包括（但不限於）沈澱劑，諸如分子量為約2〇〇kDa至約2〇〇〇〇kDa，或約400 kDa至約20,000 kDa，或約1〇〇〇 kD至約1〇〇〇〇⑽ 之 PEG(例如 PEG-3350 或 PEG-8000)或 2-甲基-2,4-戊二醇 (MPD);界面活性劑，諸如聚山梨醇酯2〇、聚山梨醇酯8〇 ; 清潔劑（離子型、非離子型及兩性離子型）；胺基酸、短肽、小有機分子、有機鹽、核苷酸及碳水化合物。在一些實施例中，添加劑（例如PEG、MPD、甘油）之濃度為約〇. 1 %至約 75%(你~或乂~)，或約〇.1%至50%卜/1^或〜幻，或約()1%至 10% (w/v 或 v/v)，或約 1〇。/。至約50% (w/v 或 v/v)，或約2〇% 至 50% (w/v或 v/v) ’ 或至少 10%，或至少 20% (w/v或 v/v)。在一些或任何實施例中，晶體的特徵亦在於產生其之方法，包括殘留雜質。在一些或任何實施例中，抗體晶體在包含含丁二酸、 HEPES及聚乙二醇單甲醚2000之結晶試劑的結晶條件下產生。舉例而言，在一些實施例中，結晶條件包含約〇. 1 Μ至約5 Μ，或約0.1 Μ至約2 Μ，或約0.1 Μ至約1 Μ，或約1 Μ I63325.doc 201247703 至約5M，或約3M至約5M，或約2M至約4M 丁二酸（或約 0.1 Μ，或約0.5 Μ ’或約1 Μ，或約1.5 Μ，或約2 Μ，或約 2.5 Μ，或約3 Μ，或約3.5 Μ，或約4 Μ，或約4.5 Μ，或約 5 Μ丁二酸）；視情況進一步包含約0.1 Μ至約5 Μ，或約0.1 Μ至約2 Μ，或約0.1 Μ至約1 Μ，或約1 Μ至約5 Μ，或約3 Μ 至約5 Μ，或約2 Μ至約4 M HEPES(或約0.1 Μ，或約0.5 Μ，或約1 Μ，或約1.5 Μ，或約2 Μ，或約2.5 Μ，或約3 Μ，或約3.5 Μ，或約4 Μ，或約4.5 Μ，或約5 M HEPES)，其pH 值為約6至約9或約7至約8·5 ;且視情況包含約〇. 1 %至約60% (w/v) ’或約0.1 %至約1 % ’或約1 %至約3%，或約2%至約4%，或約3%至約5%，或約20%至約40%，或約30°/〇至約60%，或約10%至約20% ’或約25°/。至約30%，或約15%至約25%聚乙二醇單甲醚2000(或約0.1%，或約〇.5〇/0，或約1〇/0，或約 1.5% ’或約2% ’或約2.5%，或約3%，或約3.5%，或約4.5%，或約5°/。，或約10%，或約15°/。，或約20%，或約25%，或約 30〇/〇 ’或約35°/。’或約40%，或約45%，或約50%，或約550/〇，或約60%聚乙二醇單曱醚2000)。在一些實施例中，結晶試劑包含 1.0 Μ丁二酸；〇.1 M HEPES，（pH 7);及 1% (w/v) 聚乙二醇單乙醚2000。在一些或任何實施例中，抗體晶體在包含含PEG 8〇〇〇 ' 咪峻及乙酸鈣之結晶試劑的結晶條件下產生。舉例而言，在一些實施例中’結晶試劑包含約1 %至約5〇%，或約1 %至約5%，或約5%至約10%，或約10%至約15%，或約2〇%至約 30%，或約25%至約50%，或約30%至約45%，或約4〇%至約 16332S.doc 10- 201247703 50% PEG-8000(或約1%，或約2%，或約3%，或約4%，或約 5%，或約6%，或約7%，或約8%，或約9%，或約10%，或約11% ’或約12%，或約13%，或約14%，或約15%，或約 20% ’或約25%，或約30%，或約35°/〇，或約40%，或約45% ’ 或約50% PEG-8000);視情況進一步包含約0·05 Μ至約5 Μ，或約0.05 Μ至約0.1 Μ，或約0.1 Μ至約2 Μ，或約0.1 Μ 至約1 Μ，或約1 Μ至約5 Μ，或約3 Μ至約5 Μ，或約2 Μ 至約4 Μ咪唑（或約0.05 Μ，或約0· 1 Μ，或約0.5 Μ，或約1 Μ，或約1.5Μ，或約2Μ，或約2.5Μ，或約3Μ，或約3.5Μ，或約4 Μ，或約4.5 Μ，或約5 Μ咪唑）；且視情況包含約0· 1 Μ至約5 Μ，或約〇. 1 Μ至約2 Μ，或約0.1 Μ至約1 Μ，或約 1 Μ至約5 Μ，或約3 Μ至約5 Μ，或約2 Μ至約4 Μ(或約0 · 1 Μ，或約0.5 Μ，或約1 Μ，或約1.5 Μ，或約2 Μ，或約2.5 Μ，或約3 Μ，或約3.5 Μ，或約4 Μ，或約4.5 Μ，或約5 Μ)乙酸鈣。在一些實施例中，結晶試劑包含10% (w/v) PEG-8000、0.1 Μ咪唑及0.2 Μ乙酸鈣。在一些或任何實施例中，抗體晶體在包含含PEG-8000、 TRIS及氣化鎂之結晶試劑的結晶條件下產生。舉例而言，在一些實施例中，結晶試劑包含約1%至約50%，或約1%至約5%，或約5%至約10%，或約10%至約15%，或約20%至約 30%，或約25%至約50%，或約30%至約45%，或約40%至約 50°/。PEG-8000(或約1%，或約2%，或約3%，或約4%，或約 5%，或約6%，或約7%，或約8%，或約9%，或約10%，或約11%，或約12%，或約13%，或約14%，或約15%，或約 163325.doc 201247703 20% ’或約25% ’或約30%，或約35%，或約4〇%，或約45%，或約50% PEG-8000);視情況進一步包含約〇〇5 M至約5 Μ，或約〇.〇5 Μ至約1 Μ，或約（U Μ至約2 Μ，或約〇 ^ Μ 至約1 Μ，或約1 Μ至約5 Μ，或約3 Μ至約5 Μ，或約2 Μ至約4 M TRIS(或約0.05 Μ，或約〇·ι μ ,或約〇 5 Μ，或約1 Μ，或約1.5 Μ，或約2 Μ，或約2.5 Μ，或約3 Μ，或約3.5 Μ , 或約4 Μ’或約4.5 Μ，或約5 M TRIS);且視情況包含約〇〇5 Μ至約5 Μ，或約0.05 Μ至約1 Μ，或約0.1 Μ至約2 Μ，或約0· 1 Μ至約1 Μ，或約1 Μ至約5 Μ，或約3 Μ至約5 Μ，或約2 Μ至約4 Μ氣化鎮（或約〇. 1 μ，或約〇 · 5 Μ，或約1 Μ，或約1.5 Μ ’或約2 Μ，或約2.5 Μ ’或約3 Μ，或約3.5 Μ，或約4 Μ，或約4.5 Μ，或約5 Μ氯化鎂）。在一些實施例中，結晶試劑包含 10% (w/v)PEG-8000、〇_ 1 M Tris及 0·2 Μ氣化鎖。在一些或任何實施例中，抗體晶體在包含含PEG-1000、磷酸鈉/鉀及氣化鈉之結晶試劑的結晶條件下產生。舉例而言，在一些實施例中’結晶試劑包含約10%至約80%，或約 10°/。-15%，或約15%至約20°/。，或約20%至約25%，或約25% 至約30%，或約20%至約30%，或約40%至約70%，或約50〇/〇至約80%，或約30%至約75% PEG-1000(或約10%，或約 1 5% ’或約20%，或約25。/。，或約30%，或約35%，或約40%，或約45% ’或約50%，或約55%，或約60%，或約65%，或約70%，或約75%，或約80% PEG-1000);視情況進一步包含約0.05 Μ至約5M，或約0.05 Μ至約1 Μ，或約0.1 Μ至約 163325.doc •12· 201247703 2 Μ，或約〇. 1 μ至約1 Μ，或約1 M至約5 Μ，或約3 μ至約 5 Μ，或約2 Μ至約4 Μ磷酸鈉/鉀（或約0·05 Μ，或約ο ι μ，或約0.5 Μ，或約1 Μ，或約1 ·5 Μ，或約2 Μ，或約2.5 Μ，或約3 Μ，或約3.5 Μ，或約4 Μ，或約4.5 Μ ’或約5 Μ磷酸鈉/鉀）；且視情況包含約0.05 Μ至約5 Μ ’或約〇·05 μ至約1 Μ ’或約〇· 1 Μ至約2 Μ，或約〇. 1 Μ至約1 Μ，或約1 μ至約 5 Μ ’或約3 Μ至約5 Μ ’或約2 Μ至約4 Μ氣化鈉（或約〇 · 1 Μ，或約0.5 Μ，或約1 Μ，或約1 ·5 Μ，或約2 Μ，或約2.5 Μ，或約3 Μ，或約3.5 Μ，或約4 Μ，或約4.5 Μ，或約5 Μ氣化鈉）。在一些實施例中，結晶試劑包含20% (w/v)PEG1000、 0.1 Μ磷酸鈉/鉀及0.2 Μ氣化鈉。在一些或任何實施例中，抗體晶體在包含含PEG-8000、二曱胂酸鹽、乙酸鈣及甘油之結晶試劑的結晶條件下產生。舉例而言，在一些實施例中，結晶試劑包含約1%至約 50%，或約1%至約5%，或約5%至約10%，或約1〇%至約 15% ’或約20%至約30%，或約25%至約50%，或約30%至約 45%，或40%至約50% PEG-8000(或約1%，或約2%，或約 3% ’或約4% ’或約5%，或約6°/。，或約7%，或約8%，或約 9%，或約10% ’或約11% ’或約12%，或約13%，或約14%，或約15%，或約20% ’或約25%，或約30%，或約35%，或約40% ’或約45%，或約50% PEG-8000);視情況進一步包含約0.05 Μ至約5 Μ ’或約0.1 Μ至約2 Μ，或約0.1 Μ至約1 Μ ’或約1 Μ至約5 Μ ’或約3 Μ至約5 Μ，或約2 Μ至約4 Μ 二甲胂酸鹽（或約0.05 Μ ’或約〇·〇6 μ，或約0.07 Μ，或約 163325.doc •13- 201247703 0.8 Μ，或約0.9 Μ，或約1 μ，或約1.5 Μ，或約2 Μ，或約 2.5 Μ ’或約3 Μ ’或約3·5 Μ，或約4 Μ，或約4.5 Μ ’或約 5 Μ二曱胂酸鹽）’其pH值為約5至約7，或約6至約7，或約 6.5 ;視情況包含約0.05 Μ至約2 Μ，或約0.5 Μ至約1 Μ，或約0.1 Μ至約1 Μ，或約5 μ至約1 Μ，或約1 Μ至約2 Μ乙酸鈣（或約〇.05 Μ，或約〇.1 μ，或約〇_12 Μ，或約0.14 Μ，或約0.16 Μ’或約0.18 Μ’或約〇·2 Μ，或約0.5 Μ，或約1 Μ，或約1 ·5 Μ ’或約2 Μ乙酸鈣）；且視情況包含約1 %至約65〇/。 (w/v) ’或約1°/。至約10%，或約1%至約5%，或約5%至約 10%，或約10%至約15°/。，或約15%至約20%，或約20%至約 250/。，或約25°/。至約30% ’或約20。/。至約30°/❶，或約35%至約 50% ’或約50。/。至約65%甘油（或約1〇%，或約15%，或約 20% ’或約25°/。，或約30%甘油p在一些實施例中，結晶試劑包含約 14.4% (w/v)PEG-8000、0.08 Μ二甲胂酸鹽、0.16 Μ 乙酸i弓及20% (w/v)甘油。在一些或任何實施例中，抗體晶體在包含含異丙醇及磷酸鈉/鉀之結晶試劑的結晶條件下產生。舉例而言，在一些實施例中，結晶試劑包含約1%至約iOO%，或約1%至約5〇/〇，或約5%至約10%，或約1〇%至約15%，或約15%至約20%，或約20°/◦至約25%，或約25%至約3 0%，或約20%至約30〇/〇，或約35%至約50%，或約40%至約60%，或約75%至約90%，或約80%至約1〇〇% (v/v)異丙醇（或約10%，或約15%，或約 20°/。，或約25% ’或約30%，或約35%，或約40%，或約45%，或約50% ’或約55%，或約60%，或約65%，或約70%，或 163325.doc 14 201247703 約75%，或約80%，或約85%，或約90%，或約95?/。，或約 1 00% (v/v)異丙醇）；且視情況包含約0.05 Μ至約4 Μ，或約 0.05 Μ至約1 Μ，或約〇.1 Μ至約1 Μ ’或約5 Μ至約1 Μ，或約1 Μ至約2 Μ，或約2 Μ至約4 Μ，或約3 Μ至約4 Μ磷酸鈉/鉀（或約0.1 Μ，或約〇.2 Μ，或約〇.3 Μ，或約0.4 Μ，或約0.5 Μ，或約〇·6 Μ，或約0·7 Μ，或約0·8 Μ，或約0.9 Μ，或約1Μ，或約1.5Μ，或約2Μ，或約2.5Μ，或約3Μ，或約3.5 Μ，或約4 Μ磷酸鈉/鉀）。在一些實施例中，結晶試劑包含約19.9%異丙醇及約〇.2 Μ磷酸鈉/鉀。在一些或任何實施例中，抗體晶體在包含含選自由以下組成之群的成員之結晶試劑的結晶條件下產生：2-丙醇、填酸氫二銨、PEG-1000、硫酸敍、酒石酸钟/鈉、PEG-3000、 PEG-8000、1，4-丁二醇、氣化鈉、乙醇、PEG-400、2-甲基 -2,4 -戊二醇（MPD)、Jeffamine M-600、PEG-10,000。舉例而言，在一些實施例中，結晶試劑包含約1%至約50%，或約10%至約20%，或約1%至約10%，或約5%至約10%，或約 8%至約12%，或約15°/。至約20%，或約20%至約35%，或約 40%至約50% (v/v)2-丙醇（或約1%，或約5%，或約1〇%，或約15%，或約20%，或約25%，或約30%，或約35?/。，或約 40%，或約 45%，或約 50% (v/v)2-丙醇）。在一些實施例中，結晶試劑包含約0. 〇 5 Μ至約10 Μ，或約0.5 Μ至約1 Μ，或約1 Μ至約5 Μ，或約5 Μ至約10 Μ磷酸氫二敍（或約0.05 Μ，或約0.1 Μ，或約0.5 Μ，或約1 Μ，或約1 ·5 Μ，或約2 Μ，或約2.5 Μ，或約3 Μ，或約3.5 Μ， 163325.doc -15· 201247703 或約4 Μ，或約4.5 Μ，或約5 Μ，或約6 Μ，或約6.5 Μ，或約7 Μ，或約7.5 Μ，或約8 Μ，或約8.5 Μ，或約9 Μ，或約 9.5Μ，或約ι〇Μ磷酸氫二銨）。在一些實施例中，結晶試劑包含約1 〇%至約80%，或約 10%至約15%，或約15%至約20%，或約20%至約25%，或約 25%至約30%，或約20%至約30%，或約40%至約70°/。，或約 50% 至約 80%，或約 30% 至約 75% (w/v)PEG-1000(或約 10% ’或約1 5%，或約20%，或約25%，或約30%，或约35%，或約40%，或約45%，或約50%，或約55%，或約60%，或約 65%，或約 70%，或約 75%，或約 80% (w/v)PEG-1000)。在一些實施例中，結晶試劑包含約0.5 Μ至約10 Μ，或約 0.5 Μ至約1 μ ’或約1 Μ至約5 Μ，或約5 Μ至約10 Μ硫酸敍（或約0.05 Μ，或約0.1 Μ，或約0.5 Μ，或約1 Μ，或約1.5 Μ ’或約2 Μ，或約2.5 Μ，或約3 Μ，或約3.5 Μ，或約4 Μ，或約4.5 Μ，或約5 Μ，或約6 Μ，或約6 · 5 Μ，或約7 Μ，或約7.5 Μ，或約8 μ，或約8.5 Μ ,或約9 μ ,或約9 · 5 Μ，或約10 Μ硫酸銨）。在一些實施例中，結晶試劑包含約〇5 Μ至約1〇 Μ，或約 0·5M至約1M，或約1M至約5M，或約5M至約l0M酒石酸奸/納（或約0.05 Μ，或約(Μ Μ，或約〇5 Μ，或約1 Μ，或約1.5Μ’或約2Μ，或約2.5Μ，或約3μ，或約35Μ，或約4Μ’或約4.5Μ，或約5Μ，或約6μ，或約6 5Μ，或約7Μ，或約7.5Μ，或約8Μ，或約85μ，或約9Μ，或約 9.5 Μ ’或約1 〇 μ酒石酸鉀/鈉）。 163325.doc • 16· 201247703 在一些實施例中，結晶試劑包含約1 %至約50%，或約10/〇至約5% ’或約1%至約，或約1〇%至約2〇%，或約丨5%至約20% ’或約20%至約25%，或約25%至約30%，或約30°/〇至約50% (v/v)l，4-丁二醇（或約1%，或約5%，或約1〇% ,或約 15%，或約20%，或約25%，或約30%，或約35% ,或約40%，或約 45%，或約 50% (v/v)l，4-丁二醇）。在一些實施例中，結晶試劑包含約〇·5 IV[至約10 Μ，或約 0.5 Μ至約1 Μ ’或約1 Μ至約5 Μ，或約5 Μ至約10 Μ氣化鈉（或約0.05 Μ，或約0.1 Μ，或約0.5 Μ，或約1 Μ，或約1.5 Μ，或約2 Μ ’或約2.5 Μ，或約3 Μ，或約3.5 Μ，或約4 Μ，或約4.5 Μ ’或約5 Μ，或約6 Μ，或約6.5 Μ，或約7 Μ，或約7.5 Μ ’或約8 Μ，或約8.5 Μ，或約9 Μ，或約9.5 Μ，或約10 Μ氣化鈉）。在一些實施例中，結晶試劑包含約1 〇%至約50%，或約 10%至約20%，或約14%至約18%，或約15%至約20%，或約 20%至約25%，或約25°/。至約30%，或約30%至約50% (ν/ν) 乙醇（或約1%，或約5%，或約10%，或約15%，或約20%，或約25%，或約30%，或約35%，或約40%，或約45%，或約 5 0% (ν/ν)乙醇）。在一些實施例中，結晶試劑包含約1 〇%至約80%，或約 10%至約15%，或約15%至約20%，或約20%至約25%，或約 25%至約30%，或約20%至約30%，或約40°/。至約70%，或約 50% 至約 80%，或約 30% 至約 75% (w/v)PEG-400、 PEG-1000、PEG-3，000、PEG-8,000或 PEG-10,000(或約 10%， 163325.doc •17- 201247703 或約15%，或約20%，或約25%，或約30%，或約35%，或約40%，或約45%，或約50%，或約55%，或約60%，或約 65%，或約 70%，或約 75%，或約 80% (w/v)PEG-400、 PEG-1000、PEG-3,000、PEG-8,000 或 PEG-10,000)。在一些實施例中，結晶試劑包含約10%至約5〇%(〜~)2-曱基-2,4-戊二醇（MPD)(或約10%，或約15%，或約20%，或約25%，或約30%，或約35%，或約40%，或約45%，或約 50% (w/v)2-甲基-2,4-戊二醇（MPD))。在一些實施例中，結晶試劑包含約1%至約50%，或約1% 至約10%，或約5%至約15%，或約10%至約20%，或約20% 至約25%，或約20%至約30%，或約15%至25%，或約30%至約 50% (v/v)Jeffamine M-600(或約 1%，或約 5%，或約 10%，或約15%，或約20%，或約25%，或約30%，或約35%，或約 40%，或約 45%，或約 50% (v/v)Jeffamine M-600)。本文所述之另一態樣提供製備本文所述之晶體的方法。在一些實施例中，該方法包括將抗體Ab-30、Ab-30R、 Ab-3 0Rm或Ab-31之溶液與包含適當鹽（包括先前所述之任何鹽）的結晶試劑組合，從而形成晶體。在本文所述之任何實施例中，鹽在結晶試劑中以約0.1 Μ至約30 Μ，視情況約 0.1 Μ至約10 Μ，或約1 Μ至約10 Μ，或約1 Μ至約5 Μ，或約5 Μ至約1 0 Μ之濃度存在。在一些實施例中，該方法包括將抗體Ab-30、Ab-3 0R、Ab-3 0Rm或Ab-31之溶液與包含丁二酸、PEG-1000、PEG-8000或異丙醇之結晶試劑組合，從而形成晶體。對於本文所述之任何晶體產生方法，在一些 163325.doc -18- 201247703 貫施例中，溶液中原始量之至少80% (例如至少85。/。，或至少90%，或至少95%或95%以上）之抗體在組合步驟後結晶。可藉由例如實例5中所述之方法或此項技術中已知之其他方法來測定結晶抗體百分比。製備抗體晶體之方法視情況進一步包括在形成晶體後移除至少一部分結晶試劑（例如藉由離心）。在一些實施例中，接著將晶體置放於包含有機添加劑（例如乙醇或異丙醇）之溶液中。在一些實施例中，將賦形劑（例如蔗糖、海藻糖或山梨糖醇）添加至溶液中。製備抗體晶體之方法視情況進一步包括乾燥已形成之晶體的步驟（例如藉由空氣乾燥晶體或使晶體曝露於真空或氮氣）。產生本文所述之抗體晶體的例示性方法包括此項技術中已知之蒸氣擴散及分批結晶。本文所述之另一態樣為調配物（例如包含本文所述之抗硬化蛋白抗體的粉末及液體調配物）及使用本文所述之抗體晶體製備用於哺乳動物（包括人類）之療法之藥物（諸如調配物）的方法。涵蓋視情況使用本文所述之任何給藥及時程方案之對本文所述之任何病狀的療法。調配物包含抗體晶體’例如Ab-30、Ab-30R、Ab-30Rm或Ab-31晶體，其具有本文所述之一或多種特性（例如尺寸、長度、形狀、鹽含量、添加劑含量或其他特性）。在一些實施例中，調配物中之

Ab-30、Ab-30R、Ab-30Rm或 Ab-3 1 晶體的長度為約 20 μηι 至約1 mm，且形狀呈橢球狀、棒狀及針狀或其混合物。在 163325.doc -19- 201247703 一些實施例中’調配物中之Ab-30、Ab-30R、Ab-30Rm或 Ab-3 1晶體的長度為約5 μιη至約500 μιη，且形狀呈橢球狀、棒狀及針狀或其混合物。在一些或任何實施例中，調配物為無菌調配物且包含抗硬化蛋白IgG抗體之晶體，其中至少70% (或至少75%，或至少80%，或至少85%或至少90%，或至少95%或95%以上）之抗體呈結晶形式》在一些實施例中，調配物中之抗硬化蛋白IgG抗體包含SEQ ID NO: 3及5之輕鏈可變區及重鍵可變區，較佳具有胺基酸序列SEq m NO: 13及15。該等調配物適用於非經腸投與，例如為無菌的；具有可為非經腸投藥所接受之内毒素含量，例如<〇 25 或 0.008 EU/mg;且包含醫藥學上可接受之賦形劑。該等調配物亦較佳具有咼蛋白濃度，例如每毫升調配物至少1 mg 抗體，或至少120 mg/mi，或至少14〇 mg/ml，或至少16〇 mg/ml，或至少1 80 mg/m丨，或至少2〇〇 mg/mi，或至少 mg/ml，或至少240 mg/ml或240 mg/ml以上。在一些實施例中調配物包3至少丨40 mg分散於1.5 ml或1·5 ml以下液體中之濃度的抗體。在例示性實施例中，該等調配物之黏度為約10 cP或10 cP以下，視情況為8 cp或8 cp以下或6 cp 或6 cP以下。如本文所用之術語「黏度」係指「絕對黏度」。絕對黏度有時稱作動態或簡單黏度，為運動黏度與流體密度2之乘積：絕對黏度=運動黏度X密度。運動黏度之大小為 L/T其中L為長度且τ為時間。通常，運動黏度以厘史（〇以）表示。運動黏度之SI單位為mm2/S，其為i cSte絕對黏度以 163325.doc •20- 201247703 厘、泊（cP)之單位表示。絕對黏度之SI單位為毫帕·秒 (mPa'S) ’ 其中 1 cP=l mPa's。

在一些或任何實施例中，再懸浮之液體調配物在儲存及/ 或投藥溫度下之絕對黏度為15 cP或15 cP以下，或14 cp、 13 cP ' 12 cP ^ 11 CP ' 1〇 cP > 9 cP ' 8 cP ' 7 cP > 6 cP ' 5 cP 或4 cP或4 cP以下。在一些或任何實施例中，調配物可經由注射器使用臨床上可接受之力量來注射，該注射器為2〇號針或更細（例如25號針、27號針或更細）。在一些或任何實施例中，調配物包含賦形劑，包括（但不限於）蔗糖、海藻糖及山梨糖醇，或其他糖或多元醇。在一些或任何貫施例中，調配物之pH值在約2至約12，或約6至約9，或約6至8.5，或約7至約7.5範圍内，且滲透重量莫耳濃度在約1 80至約420 mOsm/kg，或約200至約400 mOsm/kg，或約250至約350 mOsm/kg範圍内。雖然等張 (250-350 mOsm/kg)及生理ΡΗ值（約7至7.5)較佳，但調配物可經製備而在此等範圍以外。視情況在非經腸投與之前將調配物再懸浮於懸浮媒劑中。例示性懸浮媒劑包括（但不限於）麩胺酸鹽、山梨糖醇、 HEPES、右旋糖及水。在一些實施例中，懸浮媒劑為右旋糖且右旋糖係以以下範圍内之量提供：約1 %至約〖〇%右旋糖’或約5%至約10%右旋糖，.或約1%至約5%右旋糖，或約 2%至約4%右旋糖（例如約1%右旋糖、約2%右旋糖、約3〇/〇右旋糖、約4%右旋糖、約5%右旋糖、約6%右旋糖、約7% 右旋糖、約8°/〇右旋糖、約9%右旋糖，或約右旋糖p在 163325.doc -21· 201247703 -實施例中’懸浮媒劑為山梨糖醇且山梨糖醇係以以下範圍内之量提供:約1%至約1〇%山梨糖醇或請至約㈣山梨糖醇，或約1%至約5%山梨糖醇，或約2%至約4%山梨糖醇（例如約1%山梨糖醇、約2%山梨糖醇、約3%山梨糖醇、約4%山梨糖醇、約5%山梨糖醇、約6%山梨糖醇、約山 4糖醇 '約8%山梨糖醇、約9%山梨糖醇或約跳山梨糖醇）。在一些實施例中，懸浮媒劑為麵胺酸鹽且麵胺酸鹽係以以下範圍内之量提供：1 mM至約20 mM麩胺酸鹽，或約 10 mM至約15 mM，或約5至約1〇 mM，或約8 mM至約12 mM(或約1 mM麩胺酸鹽、約2 mM麩胺酸鹽 '約3 麩胺酸鹽、約4 mM麩胺酸鹽、約5 mM麵胺酸鹽、約6 mM麵胺酸鹽、約7 mM麵胺酸鹽、約8 mM麩胺酸鹽、約9 mM麵胺酸鹽、約10 mM麩胺酸鹽、約u 胺酸鹽、約12爪河麩胺酸鹽、約13 mM麩胺酸鹽、約14 mM楚胺酸鹽、約1 5 mM 麩胺酸鹽、約16 mM麩胺酸鹽、約π mM麩胺酸鹽、約18 mM 麵胺酸鹽、約19 mM麩胺酸鹽或約20 mM麩胺酸鹽）。在一些實施例中’懸浮媒劑包含山梨糖醇與麩胺酸鹽之組合（例如約1 mM至約20 mM麩胺酸鹽（包括上文所示之中間範圍）及約1 °/。至約1 〇%山梨糖醇（包括上文所示之中間範圍））。在一些實施例中，懸浮媒劑包含約1〇 mM麩胺酸鹽及約5%山梨糖醇。在其他實施例中，懸浮媒劑選自由以下組成之群： (l)HEPES及PEG-3350(例如0_5 M HEPES及20% PEG-3350，pH 7.5) ; (2)Tris 及 PEG-3350(例如 0.5 M Tris 及 50% PEG-3350， 163325.doc •22- 201247703 pH 8);及（3)Tris 及 PEG-3350(例如 0.5 M Tris 及 5〇〇/0 PEG-3350，pH 8.5) 〇視情況’適用於非經腸投與（例如皮下或肌肉内）之調配物存在於容器中，諸如單劑量小瓶、多劑量小瓶、注射器、預裝藥品之注射器或注射裝置+。在一些或任何實施例中，容器包含單劑量抗硬化蛋白抗體（例如約70至約450 mg抗硬化蛋白抗體）。在一些實施例中，該劑量包含至少約5 mg、15 mg、25 mg、50 mg、約 60 mg、約 70 mg、約 80 mg、約 90 mg、約 100 mg、約 120 mg、約 150 mg、約 200 mg、約 240 mg、約 250 mg、約 280 mg、約 300 mg、約 350 mg、約 400 mg、約 420 mg、約 450 mg、約 500 mg、約 550 mg、約 600 mg、約 650 mg、約 700 mg、約 750 mg、約 800 mg、約 85 0 mg、約900 mg、約950 mg，或高達約l，〇〇〇 mg抗硬化蛋白抗體。亦涵蓋此等終點中之任何及所有者之間的範圍’例如約50 mg至約80 mg、約70 mg至約140 mg、約70 mg 至約 350 mg、約 70 mg至約 280 mg、約 70 mg至約 210 mg、約75 mg至約100 mg、約1〇〇 mg至約150 mg、約M〇 mg至約 210 mg ’ 或約 150 mg 至約 200 mg，或約 280 mg 至約 410 mg 抗硬化蛋白抗體。以任何時間間隔投與該劑量，諸如一週多次（例如每週兩次或三次）、一週一次、每兩週一次、每三週一次或每四週一次。舉例而言，在一些或任何實施例中’ 每週兩次投與劑量在約120 mg至約21〇 mg範圍内之抗硬化蛋白抗體。在一些或任何實施例中，每週兩次投與約14〇 mg 劑量之抗硬化蛋白抗體。可以分次給藥形式投與本文所述 163325.doc •23- 201247703 之任何劑量。舉例而言，可以兩次注射7〇111§抗硬化蛋白抗體的形式投與140 mg劑量之抗硬化蛋白抗體。同樣，可以兩次注射105 mg抗硬化蛋白抗體的形式投與21〇 mg劑量之抗硬化蛋白抗體。在一些或任何實施例中’包含本文所述之抗硬化蛋白抗體晶體之調配物保持未結晶之相同抗體之至少5 〇% (或至少60%，或至少65%，或至少70%，或至少75%，或至少80%，或至少85%，或至少90%，或至少95%)或95%以上活體内活性。舉例而言’在一些實施例中’包含Ab30晶體之調配物在以與未結晶之Ab3 0抗體相同（或相似）之劑量給與且以與未結晶之Ab30抗體相同（或相似）之方式投與時保持至少約 50%至約100%，或至少約70%至約1〇〇%，或至少8〇%至至少100%或至少90%至約100% (例如約50%、約60%、約70〇/〇、約80%、約90%或約100%)之活性度。調配物可如本文別處所述以單次給藥或多次給藥形式投與。在一些實施例中，活體内活性為全身（例如頭、軀幹 '手臂及腿）或髖部（例如全體及/或股骨頸）、脊椎（例如腰脊椎）、腕部、手指、腔骨及/或腳跟之骨礦物質密度相較於基線有所增加。在一些或任何實施例中，包含如本文所述之Ab-30、 Ab-30R、Ab-30Rm或Ab-3 1晶體之調配物在投與哺乳動物個體時所介導之骨礦物質密度增加（相較於基線或對照組）為由未結晶之Ab-30、Ab-3 OR、Ab-3 ORm或Ab-3 1抗體所介導之骨礦物質密度增加度的至少約70% (或至少約80%，或至少約90%，或至少約100%)(當以相同（或相似）劑量且經由相 163325.doc • 24· 201247703 同（或相似）投藥途徑投與時；例如以本文所述之劑量，諸如約100 rag/ml之劑量，藉由皮下注射投與調配物可如本文別處所述以單次給藥或多次給藥形式投與。在一例示性實施例中’容器可容納約7〇 mg或75 mg抗硬化蛋白抗體之調配物且應適於投與約1 mg/kg之單次劑量。在其他實施例中，容器可容納約5〇 mg，或約60 mg，或約70 mg，或約80 mg，或約90 mg，或約1〇〇 mg，或約120 mg，或約 130 mg，或約 140 mg，或約 150 mg，或約 100 mg，或約170 mg ’或約180 mg，或約190 mg，或約200 mg，或約210 mg，或約220 mg，或約23 0 mg，或約240 mg，或約 250 mg，或約 250 mg至約 450 mg ;或約 280 mg或 290 mg或 300 mg ;或約 350 mg或 360 mg ;或約 420 mg或 430 mg或 440 mg或450 mg抗硬化蛋白抗體之調配物。在該等實施例中之任一者中，容器可適於投與以下單次劑量：每公斤體重約2 至約6 mg，或每公斤體重約i mg至約4 mg，或每公斤體重約3 mg至約5 mg，或每公斤體重約1 mg至約3 mg(例如每公斤體重約2 mg，或每公斤體重約3 mg，或每公斤體重約4 mg，或母公斤體重約5 mg或每公斤體重約6 mg)。在此等實施例中之任一者中’容器可包含高蛋白濃度（諸如本文所述之濃度）之抗體。在此等實施例中之任一者中，容器可包含粉末狀或凍乾調配物，且用於約〇·5 mL至2 mL體積之懸浮液。亦揭示使上述任何粉末狀調配物再懸浮之方法，其包括添加無菌稀釋劑以達成高蛋白濃度，諸如本文所述之濃度。本文亦揭示一種套組，其包含該容器及包含關於使用為 I63325.doc

•25· S 201247703 達成每公斤患者體重約0.5 mg至20 mg，或每公斤患者體重 0.5 mg至10 mg之劑量所需之適當體積或量之調配物之說明書的標簽。在一些實施例中，調配物之劑量包含每公斤體重約0.1毫克至約50毫克（例如約5毫克至約50毫克），或約1 毫克至約100毫克之抗硬化蛋白抗體（mg/kg)。舉例而言，抗硬化蛋白抗體之劑量可包含至少約0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg、約 2 mg/kg、約 3 mg/kg、約 4 mg/kg、約 5 mg/kg ' 約 6 mg/kg、約 7 mg/kg、約 8 mg/kg、約 9 mg/kg、約 10 mg/kg、約 20 mg/kg、約 25 mg/kg、約 26 mg/kg、約 27 mg/kg、約 28 mg/kg、約 29 mg/kg、約 30 mg/kg、約 3 1 mg/kg、約 32 mg/kg、約 33 mg/kg、約 34 mg/kg、約 35 mg/kg、約 36 mg/kg、約 37 mg/kg、約 38 mg/kg、約 39 mg/kg、約 40 mg/kg、約 41 mg/kg、約 42 mg/kg、約 43 mg/kg、約 44 mg/kg、約 45 mg/kg、約 46 mg/kg、約 47 mg/kg、約 48 mg/kg，或約 49 mg/kg，或約 50 mg/kg、約 55 mg/kg、約 60 mg/kg、約 65 mg/kg、約 70 mg/kg、約 75 mg/kg、約 80 mg/kg、約 85 mg/kg、約90 mg/kg、約95 mg/kg，或高達約100 mg/kg。亦涵蓋此等終點中之任何及所有者之間的範圍，例如約1 mg/kg至約 3 mg/kg、約 1 mg/kg至約 5 mg/kg、約 1 mg/kg至約 10 mg/kg、約 1 mg/kg至約 20 mg/kg、約 1 mg/kg至約 40 mg/kg、約 5 mg/kg至約 30 mg/kg、約 5 mg/kg至約 20 mg/kg、約 2 mg/kg 至約6 mg/kg、約1 mg/kg至約4 mg/kg，或約3 mg/kg至約5 mg/kg。本文亦揭示在室溫及/或4°C下保持穩定至少6個月、7個 163325.doc -26- 201247703 月、8個月、9個月、1〇個月 3玍… 月U個月、1年、18個月、2年、年、5年、6年、7年、8车 qi On ^ 年、9年、10年或更久之調配狀（亦即凍乾）及/或液體調配物）。在一些實施例中調配物包含A b _ 3 〇晶體且調配物在室溫及/或代下保持穩定至少6個月、7個月、8個月、9個月、ι〇個月、聞月、1年、_月、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、年或10年以上。在一些實施例中，調配物在4。^ 及/或室溫下保持穩定至少9個月。本文亦描述使用本文所述之調配物治療任何與骨密度降低有關之病症（骨相關病症）的方法，該病症包括（但不限於）軟骨發育不全、鎖骨顱骨發育不全、軟骨發育不良、纖維 I1 生、、、。構不良、尚雪氏病（Gaucher’s Disease)、低磷酸鹽血症性佝僂病、馬方氏症候群（Marfan，s Syndrome)、多發性遺傳性外生骨疣、神經纖維瘤、成骨不全、骨硬化病、脆弱性骨硬化、硬化性病變、假性關節、化膿性骨髓炎、牙周病、抗癲癇藥物誘發性骨質流失、原發性或繼發性副曱狀腺機能亢進、家族性副甲狀腺機能亢進症候群、失重誘發之骨質流失、男性骨質疏鬆症、停經後骨質流失、骨關節炎、腎性骨營養不良、浸潤性骨病症、口腔骨質流失、頜骨壞死、青少年佩吉特氏病（juvenile Paget's disease)、肢骨紋狀肥大、代謝性骨病、肥大細胞增多症、鐮狀細胞貧血/疾病、器官移植相關性骨質流失、腎移植相關性骨質流失、全身性紅斑狼瘡、強直性脊柱炎、癲癇症、青少年關節炎性皮療、地中海貧血症、黏多醣貯積症、法布裡病（Fabry 163325.doc •27- 201247703

Disease)、特納氏症候群（Turner Syndrome)、唐氏症候群 (Down Syndrome)、克氏症候群（KHnefelter Syndr〇me)、麻風病、佩氏病（Perthe’s Disease)、青少年特發性脊柱側弯、嬰兒發病型多系統發炎性疾病、溫氏症候群（winchester Syndrome)、門克斯病（Menkes Disease)、威爾遜氏病 (Wilson’s Disease)、缺血性骨病（諸如累-卡佩三氏病 (Legg-Calve-Perthes disease)或局限性移行性骨質疏鬆症）、貧血病況、由類固醇所引起之病狀、糖皮質激素誘發性骨質流失、肝素誘發性骨質流失、骨髓病症、壞血症、營養不良、鈣缺乏症、骨質疏鬆症、骨質減少、酒精中毒、慢性肝病、停經後病況、慢性發炎性病狀、類風濕性關節炎、發炎性腸病、潰瘍性結腸炎、發炎性結腸炎、克羅恩氏病（Crohn’s disease)、月經過少、閉經、妊娠、糖尿病、甲狀腺機能宄進、甲狀腺病症、副甲狀腺病症、庫興氏病 (Cushing、disease)、肢端肥大症、性腺低能症、固定或廢用、反射性交感神經營養不良症候群、局限性骨質疏鬆症、骨軟化病、與關節置換術有關之骨質流失、hiv相關性骨質流失、與生長激素喪失有關之骨f流失、與囊腫性纖維化有關之骨質流失、化學療法相關性f質流失、腫瘤誘發之骨質流失、癌症相關性骨質流失、激素去除性骨質流失、多發性骨髓瘤、藥物誘發性骨質流失、神經性厭食症、疾病相關性面骨骨質流失、疾病相關性顱骨骨質流失、疾病相關性頜骨骨質流失、疾病相關性頭骨骨質流失、與老化有關之骨質流失、與老化有關之面骨骨質流失、與老化有 163325.doc •28· 201247703 關之顱骨骨質流失、與老化有關之頜骨骨質流失、與老化有關之頭骨骨質流失，或與太空旅行有關之骨質流失。本文所述之調配物適用於改善矯形外科程序牙科程序、植入手術、關節置換術、骨移植、骨整形手術及骨修復（諸如骨折癒合、骨不連瘉合、骨療合延遲癒合）及面部重建術之結果。-或多種調配物可在程序、置換術、移植、手術或修復之前、期間及/或之後投與。亦涵蓋包含本文所述之調配物的牙科植入物、基質、凝膠及創口敷料。在—些實施例中，牙科植人物、基質、凝膠及創口敷料塗有調配物。在其他實施例中，視情況在施用牙科植入物、基質或創口敷料之前(或之後)將調配物施用於目標部位（亦即，個體之患病之齒齦部位或患病之牙周袋）。在此等實施例中，藉由此項技術t已知之任何方式施用調配物ϋ實施例中，在施用牙科植人物、基質或創口敷料之前藉由皮下注射投與目標部位調配物。在其他實施例中，在施料科植人物、歸或創σ敷料之前藉由刷塗或以其他方式塗佈罹病部位來投與罹病部位調配物。在另一態樣中，本文描述增加哺乳動物個體之骨礦物質饴度的方法，其包括投與哺乳動物個體有效增加骨礦物質密度之置的本文所述之調配物。在一些實施例中該方法視情況增加骨形成標記之含量。在一些實施例中，使骨礦物質密度增加至少約7天、2週、3週、4週、1個月、5週、6 週' 7週、8週、2個Θ、3個月或更久。在相關態樣中，本文描述治療哺乳動物個體之骨相關病症的方法，其包括投 163325.doc <29- 201247703 與該個體有效治療骨相關病症之量的本文所述之調配物。在二實施例中，該調配物使骨形成標記之含量相較於不存在/β療之情況下的骨標記含量增加至少約1 0°/❼。調配物可經由單次給藥或多次給藥投與。舉例而言，本文所述之調配物可以短期治療方案投與以例如增強骨形成及/ 或可以維持療方案長期投與以預防骨礦物質密度降低。在前述任何方法中，使該患者群體之骨形成標記之含量相較於治療前含量或正常含量增加至少約10%、約20%、約 30Λ、約 40%、約 50%、約 60%、約 7〇%、約 8〇%、約 9〇%、約100%或100%以上並維持至少約2週、3週、3〇天、i個月、 6週、2個月或更久。作為非限制性實例，到治療後第3週時使該患者群體之骨形成標記含量相較於治療前含量或正常含量增加例如至少約20%»在一例示性實施例中，骨骼再吸收之標記為I型膠原蛋白（CTX)之c·端肽之血清含量。在其他例示性實施例中’骨形成標記為骨特異性鹼性磷酸酶 (BSAP)、骨鈣化素（〇stca)及/或丨型原膠原（piNp)iN端延伸段。在另一態樣中，本文描述治療骨相關病症之方法，其中該方法包括投與哺乳動物一定量之本文所述之調配物，該量可有效地使全身（例如頭、軀幹、手臂及腿）或髖部（例如全髖及/或股骨頸）、脊椎（例如腰脊椎）、腕部、手指、脛骨及/或腳跟之骨礦物質密度增加約1%、約2%、約3%、約4%、約 5%、約 6%、約 8%、約 10%、約 12%、約 15%、約 18%、約20%、約25%或30%或30%以上。在一些實施例中，哺乳 163325.doc •30· 201247703 動物個體在、冶療之前的骨礦物質密度為骨質疏鬆症或骨質減少之特徵，且以有效改善骨礦物質密度之量及時間投與 -或多個劑量之調配物’從而使骨礦物質密度不再為骨質疏鬆症及/或骨質減少之特徵。舉例而言’可投與一或多個劑量並維持初始時段以使骨礦物質密度增加至年輕成人正吊之毪度的2.5個或1個標準偏差以内（亦即τ分數卜2.5分或 τ分數ti分）。在例示性實施例中，初始時段為約3個月或3 個月以内、6個月或6個月以内、9個月或9個月以内、丨年或 1年以内、18個月或18個月以内或更久。該方法可進一步包括隨後投與一或多種有效維持骨礦物質密度之量的本文所述之調配物’視情況歷時至少約6個月、1年、2年或更久之維持時段（例如歷經個體之一生）。在另一態樣中，本文描述治療哺乳動物個體之骨相關病症的方法，其係藉由投與本文所述之調配物來達成，其中該調配物包含以下劑量之本文所述之抗硬化蛋白抗體：〇. i mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg、約 2 mg/kg、約 3 mg/kg、約 4 mg/kg、約 5 mg/kg、約 6 mg/kg、約 7 mg/kg、約 8 mg/kg、約 9 mg/kg、約 10 mg/kg、約 20 mg/kg、約 25 mg/kg、約 26 mg/kg、約 27 mg/kg、約 28 mg/kg、約 29 mg/kg、約 30 mg/kg、約 31 mg/kg、約 32 mg/kg、約 33 mg/kg、約 34 mg/kg、約 35 mg/kg、約 36 mg/kg、約 37 mg/kg、約 38 mg/kg、約 39 mg/kg、約 40 mg/kg、約 41 mg/kg、約 42 mg/kg、約 43 mg/kg、約 44 mg/kg、約 45 mg/kg、約 46 mg/kg、約 47 mg/kg、約 48 mg/kg，或約 49 mg/kg，或約 50 mg/kg、約 55 mg/kg、約 60 mg/kg、 163325.doc -31 - 201247703 約 65 mg/kg、約 70 mg/kg、約 75 mg/kg、約 80 mg/kg、約 85 mg/kg、約 90 mg/kg、約 95 mg/kg，或高達約 100 mg/kg。亦涵蓋此等終點中之任何及所有者之間的範圍，例如約1 mg/kg至約 3 mg/kg、約 1 mg/kg至約 5 mg/kg、約 1 mg/kg至約 10 mg/kg、約 1 mg/kg至約 20 mg/kg、約 1 mg/kg至約 40 mg/kg、約 5 mg/kg至約 30 mg/kg、約 5 mg/kg至約 20 mg/kg、約 2 mg/kg至約 6 mg/kg、約 1 mg/kg至約 4 mg/kg，或約 3 mg/kg至約 5 mg/kg ° 在一些實施例中，投與個體（例如人類個體）約50毫克至約1，000毫克之劑量。舉例而言，在一些實施例中，調配物包含以下劑量之本文所述之抗硬化蛋白抗體：約5 mg、1 5 mg、25 mg、50 mg、約 60 mg、約 70 mg、約 80 mg、約 90 mg、約 100 mg、約 120 mg、約 150 mg、約 200 mg、約 240 mg、約 250 mg、約 280 mg、約 300 mg、約 350 mg、約 400 mg、約 420 mg、約 450 mg、約 500 mg、約 550 mg、約 600 mg、約 650 mg、約 700 mg、約 750 mg、約 800 mg、約 850 mg、約900 mg、約950 mg，或高達約1，000 mg抗硬化蛋白抗體。亦涵蓋此等終點中之任何及所有者之間的範圍，例如約50 mg至約 80 mg、約 70 mg至約 140 mg、約 70 mg至約 3 50 mg、約70 mg至約280 mg、約70 mg至約2 1 0 mg、約75 mg至約100 mg、約 100mg 至約 150mg、約 140mg 至約 210mg，或約 150 mg至約 200 mg，或約 280 mg至約 41 0 mg。在本文所述之任何方法中，以任何時間間隔投與劑量，諸如一週多次（例如每週兩次或三次）、每週一次、每兩週一 163325.doc -32- 201247703 次、每三週一次或每四週一次。在一些或任何實施例中，以約120 mg至約210 mg範圍内之劑量每週兩次投與包含本文所述之抗硬化蛋白抗體的調配物。在一些或任何實施例中，以約140 mg調配物之劑量每週兩次投與包含本文所述之抗硬化蛋白抗體的調配物。本文所述之任何劑量可以分次給藥形式投與。舉例而言，可以兩次注射70 mg抗硬化蛋白抗體形式投與140 mg抗硬化蛋白抗體之劑量的包含本文所述之抗硬化蛋白抗體的調配物。同樣，可以兩次注射1 〇5 mg抗硬化蛋白抗體形式投與210 mg劑量之抗硬化蛋白抗體。另外’本文描述治療患有低妈血症或jfj妈血症或有低在弓血症或高鈣jk症之風險之哺乳動物個體、對以副甲狀腺激素或其類似物治療有禁忌之哺乳動物個體或對以雙膦酸鹽治療有禁忌之哺乳動物個體的骨相關病症之方法。該方法包括投與該哺乳動物個體有效增加骨形成標記之含量而不引起低鈣血症或高鈣血症（例如臨床顯著性低鈣血症或高約血症）之量的本文所述之調配物。在另一態樣中，本文描述本文所述之抗硬化蛋白抗體晶體的用途’其用於製備治療骨相關病症之藥物，該藥物首先以第一量歷時第一時段，其中該量有效地使髖部、脊椎、腕部、手指、脛骨及/或腳跟處之骨礦物質密度增加至少約 3°/〇，繼而以有效維持骨礦物質密度之第二量歷時第二時段來治療該骨相關病症。亦提供本文所述之抗硬化蛋白抗體晶體的用途，其用於 163325.doc •33· 201247703 治療骨相關病症’其首先以第一量歷時第一時段，其中該量有效地使髖部、脊椎、腕部、手指、脛骨及/或腳跟處之骨礦物質密度增加至少約3%，繼而以有效維持骨礦物質密度之第一里歷時第一時段來治療該骨相關病症。例示性劑量在約0.1至約20 mg/kg，或約0.1至約12 mg/kg，或約0.5 至約12 mg/kg，或約1至約1〇 mg/kg，或約1至約8 mg/kg，或約2至約8 mg/kg ’或約3至約8 mg/kg範圍内。在一些實施例中，投與個體（例如人類個體）約50毫克至約1，〇〇〇毫克之劑量。舉例而言’在一些實施例中，調配物包含以下劑量之本文所述之抗硬化蛋白抗體：約5 mg、15 mg、25 mg、 50 mg、約 60 mg、約 70 mg、約 80 mg、約 90 mg、約 100 mg、約 120 mg、約 150 mg、約 200 mg、約 240 mg、約 250 mg、約 280 mg、約 300 mg、約 350 mg、約 400 mg、約 420 mg、約 450 mg、約 500 mg、約 550 mg、約 600 mg、約 650 mg、約 700 mg、約 750 mg、約 800 mg、約 850 mg、約 900 mg、約950 mg，或高達約l，〇〇〇 mg抗硬化蛋白抗體。亦涵蓋此等終點中之任何及所有者之間的範圍，例如約50 mg至約80 mg、約 70 mg至約 140 mg、約 70 mg至約 350 mg、約 70 mg 至約 280 mg、約 70 mg至約 210 mg、約 75 mg至約 100 mg、約 100 mg至約 150 mg、約 140 mg至約 210 mg，或約 150 mg 至約200 mg，或約280至約410 mg。在一些或任何實施例中，本文所述之方法或用途進一步包含投與用於治療本文所述之骨相關病症的第二骨增強治療劑。此類型之許多治療劑在此項技術中為已知的。在一 163325.doc •34- 201247703 些實施例中，骨增強治療劑選自由以下組成之群：抗再吸收藥物、骨形成劑、雌激素受體調節劑（包括（但不限於）雷洛昔芬（raloxifene)、巴多昔芬（bazedoxifene)及拉索昔芬 (lasofoxifene))及對破骨細胞有抑制作用的藥物。在一些實施例中，第二骨增強劑選自由以下組成之群：雙膦酸鹽（包括（但不限於）阿侖膦酸鈉（alendronate sodium) (FOSAMAX®)、利塞膦酸鹽（risedronate)、伊班膦酸納（ibandronate sodium)(BONIVA®)及唑來膦酸(zoledronic acid)(RECLAST®))、雌激素或雌激素類似物、妈來源、替勃龍（Tibolone)、抑弼素、鈣化三酵及激素替代療法。在一些實施例中，第二骨增強劑包括（但不限於）副曱狀腺激素（PTH)或其肽片段、 PTH相關蛋白（PTHrp)、骨形態生成蛋白、成骨素、NaF、 PGE2促效劑、抑制素、抗DKK1抗體或抑制劑、抗RANK配體（RANKL)抗體（例如PROLIA®)或RANKL抑制劑、雷尼酸錄（strontium ranelate)、維生素D或維生素D衍生物或其模擬物。在一些實施例中，第二骨增強劑為F〇:rte〇®(特立帕肽 (Teriparatide)或重組人類副曱狀腺激素類似物（1-34))或 Preotact®(副曱狀腺激素）。在一些或任何實施例中，骨增強劑為 Protelos®。在一些實施例中，第二骨增強劑與調配物並行投與（例如歷時治療時段内之一段時間）。在其他實施例中，第二骨增強劑在抗硬化蛋白抗體之治療時段結束後投與一段時間 (亦即，歷時維持時段）。在該等實施例中，投與第二骨增強劑約1週至約5年之維持時段。 163325.doc -35· 201247703 該方法可進一步包括在治療時段結束後隨後投與一或多種有效維持骨礦物質密度之量的調配物，視情況歷時至少約12週、6個月、丨年、2年、3年、4年、5年或更久之維持時段（例如歷經個體之一生）。本發明之其他態樣係定義或概述於以下編號之段落中： 1 · 一種抗硬化蛋白IgG抗體之晶體，該抗體包含sEq ID NO: 3及5之輕鏈可變區及重鏈可變區，較佳具有胺基酸序列 SEQ ID NO: 13及 15。 2. 一種無菌調配物’其包含抗硬化蛋白][gG抗體之晶體’其中至少70%之抗體呈結晶形式。 3· 一種無菌調配物’其包含抗硬化蛋白IgG抗體之晶體’其中至少90%之抗體呈結晶形式。 4. 如段落2或段落3之調配物，其中該IgG抗體包含SEQ ID NO: 3及5之輕鏈可變區及重鏈可變區，較佳具有胺基酸序列 SEQ ID NO: 13及 15。 5. 如前述段落中任一者之晶體或調配物，其中該晶體的長度為至多500 μηι。 6·如前述段落中任一者之晶體或調配物，其中該晶體之形狀選自由橢球狀、棒狀及針狀組成之群。 7. 如前述技術方案中任—者之調配物，其包含長度為至多約500 μιη且形狀選自由橢球狀、冑狀及針狀或其混合物組成之群的晶體。 8. 如刖述段落中任一者之晶體或調配物，其中該晶體包a選自由以下組成之群的鹽：磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀' 163325.doc • 36 · 201247703 氯化鈉、硫酸銨、四水合酒石酸鉀鈉、他希美特、二水合擰檬酸鈉、三水合乙酸鈉、酒石酸二銨、丙二酸鈉、乙酸鹽、乙酸鈣、二甲胂酸鹽、CHES、硫酸鋰、氣化鎂、乙酸辞、氣化鉋、磷酸銨、磷酸鈉、磷酸鉀、氟化鈉、碘化鉀、峨化鈉、換化銨、硫氰酸鈉、硫氰酸鉀、甲酸鈉、甲酸鉀及甲酸銨。 9. 如前述段落中任一者之調配物，其為凍乾調配物。 10. 如前述段落中任一者之調配物，其為液體調配物。 11. 如段落10之調配物’其包含每毫升調配物至少約100 mg之濃度的該抗體。 12. 如段落10之調配物，其包含分散於丨5瓜丨或^ ml以下之液體中的至少約140 mg抗體。 13 ·如段落11或段落12之調配物，其可經由具有2 〇號針或更細之針的注射器使用臨床上可接受之力量注射。 14 ·如前述段落中任一者之調配物，其在以相同劑量且以相同方式給與時保持含有未結晶之該抗體的液體調配物之至少50%活體内活性。 15. 如段落11或段落12之調配物，其在投與哺乳動物個體時所介導之骨礦物質密度增加為由含有未結晶之抗體的液體調配物所介導之骨礦物質密度增加度的至少約7〇0/〇 (當該調配物與含有未結晶之抗體的液體調配物以相同劑量且以相同方式投與該個體時）。 16. 如段落14或段落15之調配物，其以單次給藥形式投與。 163325.doc -37- 201247703 17. 如段落14或段落1 5之調配物，其以多次給藥形式投與。 18. 如前述段落中任一者之調配物，其包含至少20% PEG-3350。 19 ·如前述段落中任一者之調配物，其包含至少1 〇〇/0 PEG-8000。 20. 如前述段落中任一者之調配物，其中該調配物之滲透重量莫耳濃度在約180至約420 mOsm/kg範圍内。 21. —種容器’其包含用於〇·5 mL至2 mL體積之懸浮液的至少50 mg如段落1之抗體晶體。 22. —種容器，其包含如段落2或段落3之調配物。 23. 如段落21或22之容器，其中該容器為小瓶、注射器或注射裝置。 24. 如段落23之容器’其中該注射器針為2〇號或更細。 25. —種使如段落9之調配物再懸浮的方法，其包括使該調配物與約0.5 mL至2 mL無菌懸浮媒劑接觸。 26. 如段落25之方法，其中該懸浮媒劑選自由麵胺酸鹽、山梨糖醇、HEPES、右旋糖及水或其組合組成之群。 27_ —種製備抗硬化蛋白IgG抗體之晶體的方法，該抗體包含SEQIDNO: 3及5之輕鏈可變區及重鏈可變區，較佳具有胺基酸序列SEQHDNO: 13及15’該方法包括視情況在約 6至約8之pH值下，將抗體溶液與包含選自由以下組成之群之鹽的結晶試劑組合’從而形成晶體：磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、氣化鈉，硫酸銨、乙酸銨、四水合酒石酸鉀鈉、 163325.doc -38- 201247703 他希美特、二水合檸檬酸鈉、三水合己酸鈉、酒石酸二錄、丙二酸納、乙酸鹽、乙酸鈣、二曱胂酸鹽、CHES、硫酸鋰、二水合乙酸裡、氣化鎂、四水合乙酸鎂、甲酸鎂、硝酸鎂、硫酸鎮、乙酸鋅、氣化鋅、硫酸鋅、氯化鉋、磷酸銨、磷酸鈉、碌酸鉀、氟化鈉、碘化鉀、碘化鈉、碘化銨、硫氰酸鈉、硫氰酸鉀、甲酸鈉、曱酸鉀及曱酸銨。 28. 如段落27之方法，其中該鹽之濃度為約0.1 Μ至約10 Μ。 29. 如段落27之方法，其中該試劑進一步包含2_曱基_2,4_ 戊二醇（MPD)或聚乙二醇（peg)。 30. 如段落27之方法，其中mpd以約0.1%至約50%之濃度存在。 31. 如段落27之方法，其中PEG之分子量為約40〇 kDa至約 20,000 kDa ° 32. 如段落31之方法，其中PEG以ο」％至約5〇%之濃度存在。 33. —種製備抗硬化蛋白IgG抗體之晶體的方法，該抗體包含SEQ ID NO: 3及5之輕鏈可變區及重鏈可變區，較佳具有胺基酸序列SEQ ID NO: 13及15，該方法包括將抗體溶液與包含選自由以下組成之群之成員的結晶試劑組合，從而形成晶體：丁二酸、PEG-1000、PEG-8000及異丙醇。 34. 如段落33之方法，其中該結晶試劑包含 (a)約0.1 Μ至約5 Μ丁二酸 '約〇.丨M至約5 M HEpES及約 O.l0/。（w/v)至約 60% (w/v)聚乙二醇單甲醚2〇〇〇 ; 163325.doc •39- 201247703 (b) 約 1% (w/v)至約 50% (w/v)PEG-8000、約〇〇5 M至約 5 μ 咪唑及約0· 1 Μ至約5 Μ乙酸鈣； (c) 約 1% (w/v)至約 50% (w/v)PEG-8000、約〇.〇5 μ至約 5 Μ TRIS及約0.05 Μ至約5 Μ氯化鎂； ⑷約 10%至約 80°/。（w/v)PEG-1000、約〇.〇5 Μ至約 5 Μ碌酸鈉/鉀及約0.05 Μ至約5 Μ氣化鈉； ⑷約 1% (w/v)至約 20% (w/v)PEG-8000、約〇〇5 Μ至約 5 Μ 二甲胂酸鹽、約0.1 Μ至約2 Μ乙酸鈣及約丨〇%至約3 〇0/〇 (w/v)甘油；或 (f)約10%至約30%異丙醇及約(u Μ至約2Μ磷酸鈉/鉀。 35·如段落27至34中任一者之方法，其進一步包括在體形成後移除至少一部分結晶試劑。 36.如段落35之方法，其中藉由離心移除該部分結晶試 37.如段落35之方法，其中劑之溶液中。其中將晶體置放於含有有機添加 38.如段落37之方法，其進_ 液中。步包括將賦形劑添加至溶 39.如段落38之方法，糖及山梨糖醇組成之群。其中該賦形劑選自由蔗糖、海藻其中該有機添加劑為乙醇或異 40.如段落37之方法，醇。之方法，其進一步包括乾燥已形 41.如段落27或段落33 成之晶體。 163325.doc •40. 201247703 42. 如段落狀方法’其中藉由曝露於空氣，或藉由曝露於真空’或藉由曝露於氮氣來乾燥晶體。 43. 如段洛27或33之方法，其中使至少8〇%抗體結晶。 44. 如段落27至43中任一者之方法，其為分批結晶方法。 45. —種抗體晶體，其係由段落27或段落33之方法產生。 46. —種增加哺乳動物個體之骨礦物質密度、治療與骨密度降低有關之病症、治療骨相關病症或改善程序、置換術、移植、手術或修復之結果的方法，其包括投與有效增加該個體之骨礦物質密度之量的如前述段落中任一者之調配物。 47. —種抗硬化蛋白igG抗體之晶體，該抗體包含SEq m NO: 23及25之輕鏈可變區及重鏈可變區，較佳具有胺基酸序列 SEQ ID NO: 33及 35。 48. 如段落47之晶體’其中該晶體之長度為約1 ()〇 μΜ至約500 μΜ或約5 μΜ至約50 μΜ。 49. 如段落47或48之晶體，其中該晶體具有橢球形狀。 50. 如段落47至49中任一者之晶體，其中該晶體包含選自由氣化鈉、氣化鉀、乙酸鈉、磷酸鉀及組胺酸組成之群的鹽。 5 1. —種無菌調配物，其包含如段落47之抗體晶體，其中至少70%之抗體呈結晶形式。 52. 如段落47至5 1中任一者之晶體或調配物，其中該晶體之長度為至多約500 μιη。 53. 如段落47至5 1中任一者之晶體或調配物，其中該晶 163325.doc -41 - 201247703 體之形狀選自由橢球狀、棒狀及針狀組成之群。 54·如段落51至53中任一者之調配物，其包含長度為至多約500 μηι且形狀選自由橢球狀、棒狀及針狀或其混合物組成之群的晶體。 55. —種製備抗硬化蛋白IgG抗體之晶體的方法，該抗體包含SEQ ID NO: 23及25之輕鏈可變區及重鏈可變區，較佳具有胺基酸序列SEQ ID NO: 33及35，該方法包括視情況在約6至約8之PH值下，將抗體溶液與包含選自由磷酸鉀及組胺酸組成之群之鹽的結晶試劑組合，從而形成晶體。 56. 如段洛55之方法，其中該鹽之濃度為約丄至π mM，視情況為約1〇 mM。 57. 如段洛55或56之方法，其中該結晶試劑進一步包含聚乙二醇（PEG)。其進一步包括在晶體形成後移除其中藉由離心移除該部分結晶試其中將晶體置放於含有有機添加 58·如段落55之方法，至少一部分結晶試劑。 59.如段落58之方法，劑。 60.如段落55之方法，劑之溶液中。步包括將賦形劑添加至溶 01·如段落55之方法，其進一液中》 62.如段落61之方法，其中該糖或山梨糖醇組成之群。 63.如段落60之方法，其中該賦形劑選自由蔗糖、海藻其中該有機添加劑為乙醇或異丙 163325.doc •42· 201247703 醇。 64·如段落55之方法’其進—步包括乾燥已形成之晶體。 65. 如段落64之方法’其中藉由曝露於空氣，或藉由曝露於真空’或藉由曝露於氮氣來乾燥晶體。 66. —種抗體晶體，其係由段落55至65中任一者之方法產生。 67. 如段落51至54中任一者之調配物，其為凍乾調配物。 68. 如段落51至54中任一者之調配物，其為液體調配物。 69. 如段落68之調配物，其包含每毫升調配物至少約1〇〇 mg之濃度的該抗體。 70. 如段落51至54中任一者之調配物，其中該晶體包含選自由氯化鈉、氣化鉀、乙酸鈉、磷酸鉀及組胺酸組成之群的鹽* 71. 如段落51至54申任一者之調配物，其包含蔗糖、海藻糖及/或山梨糖醇。 72. 如段落68之調配物，其中該調配物之滲透重量莫耳濃度在約180至約420 mOsm/kg範圍内。 73. 如段落68之調配物，其包含分散於丨5爪丨或丨5 ml以下之液體中的至少約140 mg抗體。 74. 如丨又落69或73之調配物’其可經由具有2〇號針或更細之針的注射器使用臨床上可接受之力量注射。 75. 如段落51至54及66至75中任一者之調配物，其在以相同劑量且以相同方式給與時保持含有未結晶之該抗體的液體調配物之至少50%活體内活性。 163325.doc •43· 201247703 76. —種容器，其包含用於0.5 mL至2 mL體積之懸浮液的至少50 mg或50 mg以上如段落66之抗體晶體。 77. —種容器，其包含如段落51之調配物。 78. 如段落77之容器，其中該容器為小瓶、注射器或注射裝置。 79. 如段落78之容器，其中該注射器具有20號或更細之針〇 80. —種使如段落67之調配物再懸浮的方法，其包括使晶體與約0.5 mL至2 mL無菌懸浮媒劑接觸。 81·如段落51至54及66至75中任一者之調配物，其在以相同劑量且以相同方式給與時保持含有未結晶之該抗體的液體調配物之至少50%活體内活性。 82. 如段落51至54及66至75中任一者之調配物，其在投與哺乳動物個體時所介導之骨礦物質密度增加為由含有未結晶之s亥抗體的液體調配物所介導之骨礦物質密度增加度的至少約70%，其中該調配物與含有未結晶之抗體的液體調配物以相同劑量且以相同方式投與該個體。 83. 如技術方案81或82之調配物，其以單次給藥形式投與。 84. 如技術方案81或82之調配物，其以多次給藥形式投與。 85. —種增加哺乳動物個體之骨礦物質密度、治療與骨密度降低有關之病症、治療骨相關病症或改善程序、置換術、移植、手術或修復之結果的方法，其包括投與有效增 163325.doc • 44· 201247703 加該個體之骨礦物質密度之量的如段落51至54及66至75中任一者之調配物。應瞭解，雖然在說明書中在各種情況下使用「包含」措辭呈現各種實施例，但亦可使用「由組成」或「基本上由…組成」措辭描述相關實施例。應注意，術語「一（a)」或「一（an)」係指一或多，例如，「一個免疫球蛋白分子」應理解為表示一或多個免疫球蛋白分子。因而，術語「一 (a)」（或「一（an)」）、「一或多」及「至少一種」在本文中可互換使用。亦應瞭解，當描述值之範圍時，所描述之特徵可為該範圍内所見之個別值。舉例而言，「約pH 4至約pH 值」可為（但不限於）pH 4、4.2、4.6、5.1、5.5等及該等值之間的任何值《另外，「約pH 4至約pH 6之pH值」不應視作意謂在儲存期間所述之調配物之pH值在pH 4至ΡΗ ό範圍内變化 2個pH值單位，而是意謂溶液之pH值可在該範圍内選出，且pH值保持緩衝於大約該pH值。在一些實施例中，當使用術語「約」時，其意謂所述數目加上或減去該所述數目之 5%、10%、15%或15°/。以上。所意欲之實際變化可根據情況來確定。在本文所述之任何範圍内’範圍之終點包括於該範圍内。然而，描述亦涵蓋不包括下限及/或上限終點之相同範圍。本發明之其他特徵及變化將因本申請案之全文（包括圖式及[實施方式])而對熟習此項技術者顯而易見且所有該等特徵意欲為本發明之態樣。同樣’本文所述之本發明特徵 163325.doc -45- 201247703 可再組合成亦意欲為本發明之態樣的其他實施例，而與特徵之組合是否在上文特定地提及為本發明之一態樣或實施例無關。並且’唯有該等在本文中描述為對本發明而言關鍵之限制應視作如上所指；缺少未在本文中描述為關鍵之限制的本發明之變體意欲為本發明之態樣。【實施方式】本文描述抗硬化蛋白免疫球蛋白G型（IgG)抗體之晶體，其適用於非經腸投與之調配物中；使用Ab-30或Ab-31之該等晶體製備用作藥物之調配物的方法；包含高濃度之結晶抗硬化蛋白抗體之調配物’使用此等調配物進行治療之方法’投與此等調配物之方法（例如皮下或肌肉内），及包含此等調配物之容器或套組。 I· 調配物中之抗體在一些實施例中，抗硬化蛋白抗體在調配物中以以下濃度（「尚蛋白濃度」）存在：至少約l〇〇mg/ml、約101 mg/ml、約 102 mg/ml、約 103 mg/ml、約 104 mg/ml、約 105 mg/ml、約 106 mg/m卜約 107 mg/m卜約 1〇8 mg/m卜約 109 mg/m卜約 110 mg/nU、約 111 mg/m卜約 112 mg/m卜約 113 mg/m 卜約 114 mg/ml、約 115 mg/ml、約 116 mg/ml、約 117 mg/ml、約 118 mg/ml、約 119 mg/m卜約 120 mg/m卜約 121 mg/m卜約 122 mg/m卜約 123 mg/m卜約 124 mg/m卜約 125 mg/m卜約 126 mg/ml、約 127 mg/ml、約 128 mg/ml、約 129 mg/ml、約 130 mg/ml、約 131 mg/ml、約 132 mg/ml、約 132 mg/ml、約 133 mg/ml、約 134 mg/ml、約 135 mg/ml、約 136 mg/ml、 • 46- 163325.doc 201247703 約 137 mg/ml、約 138 mg/ml、約 139 mg/ml、約 140 mg/ml、約 141 mg/ml、約 142 mg/ml、約 143 mg/ml、約 144 mg/ml、約 145 mg/ml、約 146 mg/ml、約 147 mg/ml、約 148 mg/ml、約 149 mg/ml、約 150 mg/ml、約 15 1 mg/ml、約 152 mg/ml、約 153 mg/ml、約 154 mg/ml、約 155 mg/ml、約 156 mg/ml、約 157 mg/ml、約 158 mg/ml ' 約 159 mg/ml、約 160 mg/ml、約 161 mg/ml、約 162 mg/ml、約 163 mg/ml、約 164 mg/ml、約 165 mg/ml、約 166 mg/ml、約 167 mg/ml、約 168 mg/ml、約 169 mg/ml、約 170 mg/ml、約 171 mg/ml、約 172 mg/ml、約 173 mg/ml ' 約 174 mg/ml、約 175 mg/ml、約 176 mg/ml、約 177 mg/ml、約 178 mg/ml、約 179 mg/ml、約 180 mg/ml、約 181 mg/ml、約 182 mg/ml、約 183 mg/ml、約 184 mg/ml、約 185 mg/ml、約 186 mg/ml、約 187 mg/ml、約 188 mg/ml、約 189 mg/ml、約 190 mg/ml、約 191 mg/ml、約 192 mg/ml、約 193 mg/ml、約 194 mg/ml、約 195 mg/ml、約 196 mg/ml、約 197 mg/ml、約 198 mg/ml、約 199 mg/ml、約 200 mg/ml，且可直至例如約400 mg/ml、約390 mg/ml、約380 mg/ml、約 370 mg/ml、約 360 mg/ml、約 350 mg/ml、約 340 mg/ml、約 330 mg/ml、約 320 mg/ml、約 3 10 mg/ml、約 300 mg/ml、約 290 mg/ml、約 280 mg/ml、約 270 mg/ml、約 260 mg/ml、約250 mg/ml，或約240 mg/ml。涵蓋具有上述終點之組合的任何範圍，包括（但不限於）：約70 mg/ml至約250 mg/m卜約 70 mg/ml至約 140 mg/ml、約 70 mg/ml至約 350 mg/m卜約 50 mg/ml至約 80 mg/ml、約 70 mg/ml至約 210 mg/ml.、約 100 •47· 163325.doc 201247703 mg/ml至約 150 mg/ml、約 280 mg/ml至約 410 mg/ml、約 100 mg/ml至約 200 mg/ml、約 100 mg/ml至約 250 mg/ml、約 100 mg/ml至約 300 mg/ml、約 100 mg/m丨至約 320 mg/ml，或約 100 mg/ml至約 350 mg/ml。抗硬化蛋白抗體視情況調配成單次劑量（例如約70至約 450 mg抗硬化蛋白抗體）。在一些實施例中，該劑量包含至少約 5 mg、15 mg、25 mg、50 mg、約 60 mg、約 70 mg、約 80 mg、約 90 mg、約 100 mg、約 120 mg、約 150 mg、約 200 mg、約 240 mg、約 25 0 mg、約 280 mg、約 300 mg、約 350 mg、約 400 mg、約 420 mg、約 450 mg、約 500 mg、約 550 mg、約 600 mg、約 650 mg、約 700 mg、約 750 mg、約 800 mg、約850 mg、約900 mg、約950 mg，或高達約l，〇〇〇 mg抗硬化蛋白抗體。亦涵蓋此等終點中之任何及所有者之間的範圍，例如約50 mg至約80 mg、約70 mg至約140 mg、約70 mg 至約 350 mg、約 70 mg至約 280 mg、約 70 mg至約 210 mg、約75 mg至約100 mg、約100 mg至約150 mg、約140 mg至約 210 mg’ 或約 150 mg 至約 200 mg，或約 280 mg 至約410 mg 抗硬化蛋白抗體。以任何時間間隔投與該劑量，諸如一週多次（例如每週兩次或三次）、每週一次、每兩週一次、每三週一次或每四週一次。舉例而言，在一些或任何實施例中，每週兩次投與劑量在約120 mg至約210 mg範圍内之抗硬化蛋白抗體。在一些或任何實施例中，每週兩次投與約140 mg 劑量之抗硬化蛋白抗體。可以分次給藥形式投與本文所述之任何劑量。舉例而言，可以兩次注射70 mg抗硬化蛋白抗 •48· 163325.doc 201247703 體的形式投與140 mg劑量之抗硬化蛋白抗體。同樣，可以兩次注射105 mg抗硬化蛋白抗體的形式投與210 mg劑量之抗硬化蛋白抗體，且可以七次注射20 mg抗硬化蛋白抗體形式投與140 mg劑量之抗硬化蛋白抗體。在一些實施例中，調配物包含約70 mg或75 mg抗硬化蛋白抗體，其適用於投與約1 mg/kg之單次劑量。在其他實施例中，調配物包含約50 mg，或約60 mg，或約70 mg，或約 80 mg ’ 或約 90 mg，或約 100 mg，或約 120 mg，或約 13 0 mg，或約140 mg，或約150 mg，或約160 mg，或約170 mg，或約180 mg，或約190 mg，或約200 mg，或約210 mg，或約 220 mg ’ 或約 230 mg ;或約 240 mg，或約 250 mg，或約 250 mg至約 450 mg;或約 280 mg或 290 mg或 300 mg;或約 350 mg 或360 mg ;或約420 mg或430 mg或440 mg或450 mg抗硬化蛋白抗體。在該等實施例中之任一者中，調配物包含適用於投與以下單次劑量之量的抗硬化蛋白抗體：每公斤體重約2至約6 mg，或每公斤體重約1 mg至約4 mg，或每公斤體重約3 mg至約5 mg ’或每公斤體重約1 mg至約3 mg(例如每公斤體重約2 mg，或每公斤體重約3 mg，或每公斤體重約4 mg，或每公斤體重約5 mg或每公斤體重約6 mg)。在一些實施例中，抗硬化蛋白抗體為Ab-30。在一些實施例中’抗硬化蛋白抗體為Ab-31。抗體Ab-30及Ab-31先前描述於美國專利申請公開案第2007/0110747號中，其揭示内容（包括序列表）以全文引用之方式併入本文中。在其他實施例中’抗硬化蛋白抗體為Ab-30R(SEQ ID NO: 16至19)或 163325.doc -49- 201247703

Ab-30Rm(SEQ ID NO: 17及 19至 21)。本文所述之抗硬化蛋白抗體以10·6 M或ίο·6 M以下，或 ΙΟ·7 Μ或 1(Γ7 Μ以下，或 ΙΟ·8 Μ或 ΙΟ.8 Μ以下，或 ι〇_9 ]^或 1〇·9 Μ以下之Kd結合至SEQ ID NO: 1之硬化蛋白。親和力可藉由此項技術中已知之任何方法，包括經由如例如美國專利申請公開案第2007/0110747號中所述之Biac〇rMi術及 ELISA來測定。在一些實施例中，抗體包含抗體Ab-30、Ab-30R、Ab_30Rm 或Ab-31之重鏈及/或輕鏈。抗體Ab-30、Ab-30R、Ab_30Rm 或Ab-3 1之包括恆定區之成熟全長輕鏈及重鏈之胺基酸序列分別闡述於SEQ ID NO: 13及 15 ; SEQ ID NO: 16及 19 ; SEQ ID NO: 20 及 19 ;以及 SEQ ID NO: 33 及 35 中。編碼抗體Ab-3 0及Ab-3 1之包括恒定區之全長輕鍵及重鍵之相應 cDNA 序列分別闡述於 SEQIDNO: 12 及 14 ; SEQIDNO: 32 及34中。如本文所用之術語「Ab-30抗體」係指由兩條重鏈及兩條輕鏈構成之IgG免疫球蛋白，其中重鏈包含融合至Ig(}恆定區之SEQ ID NO: 5(Ab-30重鏈可變區），且輕鏈包含融合至輕鏈恆定區之SEQ ID NO: 3(Ab-30輕鏈可變區）。較佳， Ab-30包含分別闡述於SEQ ID NO: 15及13中之成熟重鏈及輕鍵胺基酸序列。在一些實施例中，抗體包含以下之重鏈可變區及/或輕鏈可變區：融合至同型IgGl、2、3或4之人類重键恆定區的抗體Ab-30 SEQ ID N〇: 5(Ab_3〇重鏈可變區）（例如原生、共同或經修飾，且已知不影響結合之多種修 163325.doc -50· 201247703 飾在此項技術中為已知的）及/或融合至人類輕鏈恆定區之 SEQ ID NO: 3(Ab-30輕鏈可變區）（例如原生、共同或經修飾以具有已知不影響結合之多處修飾）；融合至同型][gG 1、2、 3或4之人類重鏈恆定區的SEQ ID NO: 17(Ab-30R重鍵可變區）及/或融合至人類輕鏈恆定區之SEQ ID NO: 16(Ab-30R 輕鍵可變區）；融合至同型IgGl、2' 3或4之人類重鍵怪定區之SEQ ID NO: 17(Ab-30Rm重鏈可變區）及/或融合至人類輕鏈恆定區之SEQ ID NO·· 20(Ab-30Rm輕鏈可變區）。如本文所用之術語「Ab-3 1抗體」係指由兩條重鏈及兩條輕鏈構成之IgG免疫球蛋白’其中重鏈包含融合至IgG恆定 &之SEQ ID NO: 25(Ab-3 1重鍵可變區），且輕鍵包含融合至輕鍵恒定區之SEQ ID NO: 23(Ab-31輕鏈可變區）。較佳， Ab-31包含分別闡述於SEQ ID N0: 35及33中之成熟重鏈及輕鏈胺基酸序列。因此，在一些實施例中，抗體包含抗體 Ab-3 1之重鏈可變區及/或輕鏈可變區，即融合至同型 IgGl、2、3或4之人類重鏈恆定區之SEQ ID no: 25(Ab_3〇重鏈可變區）（例如原生、共同或經修飾以具有已知不影響結合之多處修飾）及/或融合至人類輕鏈恆定區之SEq ID N〇: 23(Ab-3 1輕鏈可變區）(例如原生、共同或經修飾以具有已知不影響結合之多處修飾）。在一些實施例中，抗體包含可藉由使編碼抗體人^”、 Ab-30R、Ab-30Rm或Ab-3 1之重鏈及/或輕鏈或重鏈可變區及/或輕鏈可變區的cDNA在哺乳動物宿主細胞中表現而獲得的胺基酸序列。術語「抗體」係指完整免疫球蛋白，例 163325.doc 51 201247703 如在IgG之狀況下係指由兩條重鏈及兩條輕鏈構成之四聚免疫球蛋白（例如較佳具有全長重鏈及/或輕鏈且視情況在構架區或恆定區中具有突變並保持抗硬化蛋白結合特性的嵌合、人類化或人類型式）。「分離」之抗體係指抗體（該術語如本文所定義）已與其天然環境中之組分分離。其天然環境中之污染物組分為干擾抗體之診斷性或治療性使用的物質，且可包括酶、激素及其他蛋白質或非蛋白質溶解物。在某些實施例t，抗體將經純化以（1)達大於95重量％之抗體，且最佳大於99重量 %之抗體’（2 )達到足以獲得N端或内部胺基酸序列之至少i 5 個殘基之程度，或（3)藉由SDS-PAGE在還原或非還原條件下使用庫馬斯藍（Coomassie blue)或較佳使用銀染色劑測定具均〖生。分離之天然存在之抗體包括原位處於重組細胞内之抗體，因為將不存在抗體之天然環境中之至少一種組分。然而，通常，分離之抗體將藉由至少一個純化步驟製備。「單株」抗體係指自實質上同質之抗體群體獲得的抗亦即，相較於「多株」抗體，構成該群體之個別抗體除可迠以較少量存在之天然存在之可能突變外皆相同，該夕株J抗體係指結合不同抗原決定基之具有不同序列之抗體的混合群體。短語「人類化抗體」係指源自非人類抗體（通常為齧齒動物單株抗體）之序列且包含使得該序列較類似人類之修飾的抗體。或者，人類化抗體可源自嵌合抗 έ *吾「人類」抗體係指例如經由已知技術（諸如嗟菌體 163325.doc -52- 201247703 呈現）篩選人類抗體基因文庫而由人類序列產生，或使用不產生内源性免疫球蛋白而經工程改造以含有人類免疫球蛋白基因座的轉殖基因動物產生的抗體。「免疫球蛋白G」或「原生igG抗體」為四聚醣蛋白。在天然存在之免疫球蛋白中，各四聚物由兩對相同之多肽鏈組成，每對具有一條「輕」鏈（約25 kDa)及一條「重」鏈（約 50 kDa至70 kDa)。各鏈之胺基端部分包括r可變」（「Vj ) 區’其具有約100至110個或11 〇個以上胺基酸且主要負責抗原識別。各鏈之羧基端部分界定主要負責效應功能之恆定區。免疫球蛋白可視其重鏈之恆定域之胺基酸序列而歸於不同類別。重鏈分類為μ、Δ'γ'α及ε，且將抗體之同型分別定義為IgM、IgD、IgG、IgA及IgE。此等同型中之若干者可進一步分成子類或同型，例如IgG卜igG2、IgG3、IgG4、 IgAl及IgA2。不同同型具有不同之效應功能；例如，IgG1 及IgG3同型具有抗體依賴性細胞毒性（Adcc)活性。人類輕鏈分類為κ及λ輕鏈。在輕鏈及重鏈内，可變區與怪定區係由具有約12個或12個以上胺基酸的「j」區接合，其中重鏈亦包括具有約10個或10個以上胺基酸的「D」區。一般參見基礎免疫學（Fundamental Immunology)之第 7章（Paul，W.編，第 2版，Raven Press，N.Y. (1989))。術語「高變」區係指互補決定區或CDR中之胺基酸殘基 (亦即’輕鏈可變域中之殘基24_34(L1)、5〇_56(L2)及 89-97(L3) ’ 及重鏈可變域中之 31·35(ηι)、50-65(H2)及 95-102(H3) ’ 如由 Kabat 等人，Sequences of Proteins of 163325.doc -53- 201247703

Immunological Interest,第 5 版，Public Health Service,

National Institutes of Health，Bethesda，Md. (1991)所述）。「構架」或FR殘基為除高變區殘基以外的可變區殘基。術語「變異體」在連同抗體一起使用時係指在可變區或相當於可變區之部分中含有至少一處胺基酸取代、缺失或插入的抗體多肽序列，限制條件為變異體保持所需之結合親和力或生物活性》另外，如本文所述之抗體在恆定區中可具有胺基酸修飾以調節抗體之效應功能，包括半衰期或清除率、ADCC及/或CDC活性。該等修飾可例如增強抗體之藥物動力學或增強抗體之治療有效性。參見Shields等人， J_ Biol. Chem·，276(9):6591-6604 (2001)，其以全文引用之方式併入本文中。在IgGl之狀況下，對怪定區（尤其狡键區或CH2區）之修飾可增加或降低效應功能，包括adcc及/或 CDC活性。在其他實施例中，IgG2恆定區經修飾以減少抗體-抗原聚集體形成。在IgG4之狀況下，對惶定區（尤其鉸键區）之修飾可減少半抗體形成。術語「修飾」在連同本文所述之抗體或多肽一起使用時包括（但不限於）一或多處胺基酸變化（包括取代、插入或缺失）；不干擾硬化蛋白結合活性之化學修飾；藉由結合至治療劑或診斷劑而進行共價修飾；標記（例如用放射性核種或各種酶），共價聚合物連接，諸如聚乙二醇化（用聚乙二醇衍生化）；及藉由化學合成非天然胺基酸而進行插入或取代。在一些實施例中，經修飾之本發明多肽（包括抗體）將保持未經修飾之本發明分子之結合特性。 163325.doc •54· 201247703 術語「衍生物」在連同本發明之抗體或多肽一起使用時係指藉由以下經共價修飾的抗體或多肽：結合至治療劑或診斷劑、標記（例如用放射性核種或各種酶）、共價聚合物連接（諸如聚乙二醇化（用聚乙二醇衍生化））及藉由化學合成非天然胺基酸而進行插入或取代。在一些實施例中，本發明之衍生物將保持未經衍生化之本發明分子的結合特性。可藉由此項技術中已知之方法使蛋白質及非蛋白質藥劑結合至抗體。結合方法包括直接連接、經由共價連接之連接子連接及經由特異性結合對成員（例如抗生物素蛋白-生物素）連接。該等方法包括例如由Greenfield等人，Cancer

Research 50，6600-6607 (1990)關於小紅每（doxorubicin)之結合所述之方法，以及由Arnon等人，Adv. Exp. Med· Biol. 303，79-90 (1991)及Kiseleva等人，Mol. Biol. (USSR) 25, 508-514 (1991)關於鉑化合物之結合所述之方法。 II·製備晶體、晶想調配物及組合物藉由使多肽自水溶液或自含有有機溶劑或添加劑之水溶液中控制結晶來使多肽晶體生長。可控制之溶液條件包括例如溶劑之蒸發速率、有機溶劑或添加劑、適當共溶質及緩衝劑之存在、pH值及溫度。影響蛋白質結晶之各種因素之綜合評述已由 McPherson(1985，Methods Enzymol 114: 112-120)發表。另外，McPherson 及 Gilliland(1988, J Crystal

Growth, 90: 5 1 -59)已彙編已結晶之多肽的综合性清單以及其結晶之條件。晶體及結晶配方的概要以及所解析之蛋白質結構之座標庫係由布魯海文國家實驗室（Brookhaven 163325.doc -55· 201247703

National Laboratory)(www.rcsb.org/pdb/ ; Bernstein 等人， 1977, J Mol Biol 112: 535-542)之蛋白質資料庫（Protein Data Bank)保存。然而’應注意以上引用之大部分參考文獻中所報導之條件已經最佳化以在大多數情況下產生一些繞射品質之大晶體。因此，熟習此項技術者應瞭解，此等條件可隨蛋白質而變化，且不提供大規模產生任何既定多肽之晶體的面產方法。一般而言，藉由將欲結晶之多肽（亦即抗體）與適當水性溶劑或含有適當結晶劑（諸如鹽或有機溶劑或添加劑（統稱為「結晶試劑」））之水性溶劑組合來產生晶體。將溶劑與多肤組合且可在以實驗方式測定適於誘導結晶且可為維持多肽活性及穩定性所接受之溫度下進行攪動。實驗室規模之結晶方法包括懸滴式蒸氣擴散法、沈滴式蒸氣擴散法、微量透析法、微配液法（micr〇batch)、油下結晶法、凝膠中結晶法及夹層液滴法。溶劑可視情況包括共結晶添加劑，諸如沈澱劑、脂肪酸、還原劑、甘油、磺基甜菜鹼、界面活性劑、多兀醇、二價陽離子、輔助因子或離液劑，以及控制pH值之緩衝物質。「共結晶添加劑」包括促成多肽結晶之化合物及/或使蛋白質穩疋且保護其免遭變性之化合物。共溶質之實例包括乙酸銨、氣化銨、氟化銨、甲酸銨、硝酸銨、磷酸銨、硫酸銨、氣化鎘、硫酸鎘、乙酸鈣、氯化鈣、氯化铯、氣化姑 ' CHXCH2)丨 5>j(CH3)3+Br.-(CTAB)、檸檬酸二銨、磷酸氫锻碌知· 一錄、酒石酸二錄、碌酸二狎、構酸二納、酒 163325.doc -56- 201247703 石酸二鈉、DL-蘋果酸、氣化鐵、L-脯胺酸、乙酸鋰、氣化鋰、硝酸鋰、硫酸鋰、乙酸鎂、氣化鎂、甲酸鎂、硝酸鎂、硫酸鎂、氣化鎳、乙酸鉀、溴化鉀、氣化钟、擰檬酸鉀、氟化卸、曱酸卸、頌酸奸、填酸斜、酒石酸钟鈉、硫酸鉀、硫氰酸鉀、乙酸鈉、溴化鈉、氯化鈉、檸檬酸鈉、氟化鈉、甲酸鈉、丙二酸鈉、硝酸鈉、磷酸鈉、硫酸鈉、硫氰酸鈉、丁二酸、他希美特、檸檬酸三銨、檸檬酸三鋰、三甲胺N-氧化物、檸檬酸三鉀、檸檬酸三鈉、乙酸鋅、硫酸鋅及其他用以提供共溶質之化合物。「結晶緩衝劑」包括將溶液之 pH值維持在所需範圍内以促成多肽結晶之化合物。實例包括ACES(N-(2-乙醯胺基）-2-胺基乙烷磺酸）、BES(N，N-雙（2-羥乙基）-2-胺基乙烷磺酸）、Bicine(N，N-雙（2-羥乙基）甘胺酸）、BIS-TRIS(2,2-雙-(羥甲基）-2,2’，2··-氮基三乙醇）、硼酸、 CAPS(3-[環己胺基]-1-丙烷磺酸）、EPPS(HEPPS、4-(2-羥乙基）哌嗪-1-丙烷磺酸）、Gly-Gly(NH2CH2CONHCH2COOH、甘胺醯基-甘胺酸）、HEPES(4-(2-羥乙基）哌嗪-1-乙烷磺酸）、咪唑、MES(2-嗎啉基乙烷磺酸）、MOPS(3-(N-嗎啉基）-丙烷磺酸）、PIPES(哌嗪-1，4-雙（2-乙烷磺酸））、乙酸鈉、碳酸氫鈉、填酸二氫鈉（sodium phosphate monobasic)(填酸二氫鈉 (sodium dihydrogen phosphate))、TAPS(N-[參-(經曱基）甲基]-3-胺基丙烷磺酸）、TAPSO(N-[參（羥曱基）曱基]-3-胺基 -2-羥基丙烷磺酸）、TES(N-[參（羥甲基）曱基]-2-胺基乙烷磺酸）、Tricine(N-[參（經曱基）甲基]甘胺酸）、Tris-HCl、 TRIZMA(2-胺基-2-(羥曱基）-1,3-丙二醇）及其他用以將溶 163325.doc •57· 201247703 液維持於指定pH值或接近指定pH值的化合物β 沈澱劑之選擇為影響結晶之一個因素。舉例而言，可使用例如分子量為600 1^至20,000 1^之叩(}產品。1^(5_3350 為藉由體積排阻效應起作用之長聚合物沈澱劑或脫水劑。感膠離子鹽（諸如硫酸銨）促進沈澱製程，短鏈脂肪酸（諸如辛酸）亦如此。多離子（p〇lyionic)物質亦為可用之沈澱劑。用於皮下注射之調配物中之抗體例如較佳在生理pH值範圍内且在提供等張滲透重量莫耳濃度之結晶試劑中沈澱。對添加劑、共溶質、緩衝劑等之需要及其濃度係以實驗方式確定以促成結晶。適用於多肽之結晶條件的一些實例描述於以下實例1中。

Ab-30尤其易於在多種條件下結晶。可在放大㈨秦咖條件下使各種形態之Ab_30晶體生長，其中將液體調配物中之抗體添加至-定體積之已知結晶試劑中且儲存於密封容器中可在此等條件下，於室溫或冷藏溫度（4它）下使Ab_3〇晶體生長不到24小時’且已經展示產生緩慢釋放及高產率。在工業規模之製程中’引起結晶之控制沈殿可最佳地藉由以分批製程簡單組合多肽、沈殿劑、共溶質及視情況選用之緩衝劑來進行。作為另一可選方案，可藉由使用多狀沈澱物作為起始物質來使多肽結晶（「接種」）。在此狀況下，將多肽沈澱物添加至結晶溶液中且培育直至晶體形成為止。亦可採用替代實驗室結晶方法，諸如透析或蒸氣擴散。 McPh⑽η(同上）及GiUiland(同上）在其對結晶文獻之評述中包括適合條件之综合性清單。有時，在欲使結晶之多狀 163325.doc -58- 201247703 交聯之狀況下，預期交聯劑與結晶介質之間的不相容性可能需要將晶體交換至更適合之溶劑系統中》根據一些實施例’藉由以下方法製備多肽晶體、晶體調配物及組合物：首先，使多肽結晶。其次，將如本文所述之賦形劑或成分直接添加至母液中。或者，在移除母液後，將晶體懸浮於賦形劑或其他調配成分之溶液中，歷時最少1 小時至最長24小時。賦形劑濃度通常為約〇〇1%至3〇0/〇 w/w，分別對應於99.99%至70°/。w/w之多肽晶體濃度。在一個實施例中，賦形劑濃度為約〇1%至1〇%，分別對應於 99.9%至90%w/w之晶體濃度。可藉由過濾、緩衝劑交換或藉由離心自晶體漿料移除母液。隨後，在室溫下或在_2〇。。至2rc之溫度下，視情況用5〇%至1〇〇% 一或多種有機溶劑 f添加劑（諸如乙醇、甲醇、異丙醇或乙酸乙酿）之溶液洗滌曰^。藉由使氮氣、空氣或惰性氣體流在晶體上通過來乾 :二： <者’藉由空氣乾燥或藉由凍乾或藉由真空乾燥 =晶體。在洗務後進行乾燥最少i小時至最長72小時，終，必要拉里低於10重篁或佳低於5%。最藉由包括—可對晶體進行微米尺寸化。乾燥多肽晶體為聚二：之方法來移除水、有機溶劑或添加劑或液體乾.用括2、空氣或惰性氣體乾燥’·真空烘箱乾弹·凌乾，用揮發性有機溶劑或添加劑洗務，^知，凌在通風櫥中y, 繼而瘵發溶劑丨或成乾燥。可^由#^ ’在晶體變成自由流動之粉末時達體可選自由二Γ:體流在濕晶體上通過來進行乾操。氣成之群：氮氣、氬氣、氦氣、二氧化碳、 I63325.doc •59- 201247703 空氣或其組合。可藉由在適合研磨機（諸如喷射研磨機）中微米尺寸化來進一步加工本發明之多肽晶體以達成所需粒徑分佈’且可在微米尺寸化之前或之後混合粒子或粉末調配物之組分。所達成之粒子直徑可在0.1微米至100微米範圍内，或在0.2微米至10微米範圍内，或在1〇微米至50微米範圍内，或在0.5微米至2微米範圍内。在一實施例中，由多肽晶體形成之粒子在〇·5微米至1微米範圍内，此範圍為適用於例如吸入之範圍。根據一些實施例，當製備蛋白質晶體、蛋白質晶體調配物或組合物時，在結晶期間不添加增強劑（諸如界面活性劑）。在結晶後將賦形劑或成分以約1 %至丨〇%你^之濃度，或以約0.1❶/。至25% w/w之濃度，或以約01%至5〇% w/w之濃度添加至母液中。此等濃度分別對應於99%至9〇% w/w、 99.9。/。至75% w/w及99·9%至5〇% w/w之晶體濃度。將賦形劑或成分與晶體一起在母液中培育約〇1小時至3小時或進行培育0.1小時至12小時，或進行培育〇1小時至24小時。在一些或任何實施例中，將成分或賦形劑溶解於除母液以外的溶液中’且自母液中移出蛋白質晶體且將其懸浮於賦形劑或成分溶液中。《分或賦形劑濃度及培育時間與上述相同。多肽晶體如本文所用之「晶體」或「結晶」係指物質之一種固態形式，其與第二形式(非晶形固態)不同。晶體呈現包括晶格結構、特徵形狀及光學特性（諸如折射率及雙折射）之 163325.doc -60- 201247703 徵。晶體由以在三維中週期性重複之圖案排列之原子組成 (C. S· Barrett，Structure of Metals,第 2版，McGraw-Hill，

New York’ 1 952，第1頁；^相反，非晶形物質為物質之非結晶固體形式，有時稱為非晶形沈澱物。該等沈澱物不具結晶固態所特有之分子晶格結構且不呈現雙折射或物質之結晶形式所典型之其他光譜特徵。多肽晶體為以晶格形式排列之多肽分子。多肽晶體含有在—維中週期性重複之特定多肽-多肽相互作用之圖案。本發明之多肽晶體將與多肽之非晶形固體形式或沈殿物相區分’諸如藉由凍乾多肽溶液所獲得者。在多肽晶體中，多肽分子形成不對稱單位，該等不對稱單位共同排列形成對稱單位。多肽晶體之對稱單位之幾何結構可為例如立方晶系、六方晶系、.單斜晶系、斜方晶系、四方晶系、三斜晶系或三角晶系。晶體整體上之總體結構可例如呈雙錐晶體、立方晶系、針狀晶體、板狀晶體、棱晶、長斜方形、棒狀晶體或球狀晶體或其組合之形式。所觀測到之其他形式包括塊狀、UFO狀、足球狀、葉狀、小麥狀、單峰狀、羽毛狀、麥稈狀' 菊花狀、球狀或其混合物。在—些實施例巾，觀測到晶體呈㈣。具有「立方晶系」結構類別之晶體可更尤其具有十八面體或十二面體晶形。晶體之直徑係定義為馬丁直徑⑴謙…卜其係量測為平行於目鏡標尺之將隨機^向之晶體分成兩個相等技景> 面積之線的長度。呈諸如針狀晶體或棒狀晶體之形式的明體亦具有在本文中稱為晶體之長度的最大尺寸。 163325.doc 201247703 體亦由x射線繞射表徵β 結晶多肽之測試特性在多狀晶體形成後’可對其進行各種分析以確定其多肽含1且進一步研究其物理結構。舉例而言，必要時，可自、’’〇日日/合液中移出個別晶體且用水性或有機溶劑或添加劑洗滌，接著乾燥（例如藉由空氣乾燥、藉由使惰性氣體流在晶體上通過、藉由凍乾或藉由真空）。可分離晶體，自晶體生長液滴中移出，且接著固定以進行χ射線繞射。 ea體亦可由此項技術中所述之多種方法表徵。參見例如

Basu等人，Expert Opin. Biol. Thera· 4, 301-317 (2004)，其關於蛋白質晶體產生及調配程序以及用於表徵晶體及其組成蛋白之分析工具的揭示内容以全文引用之方式併入本文中。雖然通常使用粉末χ射線繞射來識別結晶物質，但其需要極大且完整之蛋白質晶體且不常應用於通常用於結晶調配物中之蛋白質微晶體。電子繞射及固態核磁共振（ssnmr) 可應用於表徵晶體。晶體大小、形狀及形態（例如表面形態）可例如藉由光學顯微術、透射電子顯微術、掃描電子顯微術、原子力顯微術及/或光散射（例如光子相關光譜學或 DLS、低角度雷射光散射或LAALS)來檢測。亦可表徵晶體之總表面積及孔隙度》質譜、微衰減全反射-傅立葉變換紅夕卜光譜（Fourier transform infrared spectroscopy，FTIR)及 / 或差示掃描量熱法（DSC)可提供關於蛋白質一級及二級結構之資訊。作為另一實例，可自結晶溶液中移出多肽晶體且洗條或 163325.doc • 62- 201247703 沖洗，或可自晶體移除大部分結晶溶液且用不同溶液替換。以此方式，用於結晶程序中之特定鹽可在晶格令經不同鹽置換。在本發明之一實施例令，自結晶緩衝液分離結晶之Ab-30、Ab-30R、Ab_3〇Rn^Ab31抗體且置放於含有納鹽、鉀鹽錢鹽（例如乙酸鈉、氣化鈉、檸檬酸納、鱗酸鈉、硫酸鈉、氣化鉀、檸檬酸鉀或硫酸鎂）之溶液中。對於 X射線繞射’替換溶液可含有適用於測定結晶之多肤之原子座標的重原子。作為另一實施例，可使抗體Ab 3〇、Ab-观、 Ab-30Rm或Ab_3!與硬化蛋白一起共結晶以測定Μ】、 Ab-30R、泰逝域Ab_3卜硬化蛋白相互作用之詳細結構。在另一實例中，可自結晶溶液㈣出多肽晶體且溶解於適當緩衝液t以進-步測試，諸如溶解於含有卿之緩衝液中以藉由凝膠電泳分析已結晶之多肽。藉由凝膠電泳分析蛋白質之方法為熟知的且包括用銀或庫馬斯藍染料對凝膠進订染色’及比較已結晶之多狀之電泳遷移與具有已知分子量之多肽標記之遷移。在另一方法中，於凝膠中藉由使用特異性結合至多肽之經標記抗體來使多肽顯現。亦可使已結晶之多肽溶解於適用於藉由埃德曼降解 degradatk)進行胺基酸序列、適用於質譜、適用於其他光譜散射、折射、繞射或吸收研究，或適用於藉由使標記分子連接至多肽來標記多肽的緩衝液中。 III.用於治療性投藥之調配物如本文所用，如本文利之術語「組合物」意謂包含至少兩種組分之混合物。敎而言，本文描述包含結晶抗硬 163325.doc -63- 201247703 化蛋白抗體之組合物及使用結晶抗硬化蛋白抗體製備之組合物。在一些實施例中，包含結晶抗硬化蛋白抗體或使用結晶抗硬化蛋白抗體製備之組合物或調配物適用於對有需要之患者進行注射及/或投藥。欲出於醫藥目的投與患者之組合物實質上無菌且不含對接受者具有過度毒性或感染性的藥劑。在一些實施例中’結晶抗硬化蛋白抗體（諸如結晶抗體 Ab-3 0、Ab-30R、Ab-30Rm或Ab-3 1)以包含結晶抗硬化蛋白抗體之生理學上可接受之組合物（在本文中亦稱為醫藥組合物或醫藥調配物）形式投與，該組合物係用以下一或多者調配：生理學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑。該等載劑、賦形劑或稀釋劑在所用之劑量及濃度下對接受者無毒。通常’製備該等組合物需要將結晶抗硬化蛋白抗體與以下一或多者組合：緩衝劑；抗氧化劑，諸如抗壞血酸；低分子量多肽（諸如具有少於1〇個胺基酸之多肽）；蛋白質；胺基酸，碳水化合物，諸如葡萄糖、蔗糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA、麩胱甘肽；以及其他穩定劑及賦形劑。在液體調配物中，與非特異性血清白蛋白混合之中性緩衝生理食鹽水或生理食鹽水為例示性適當稀釋劑。根據適當行業標準，亦可添加防腐劑，諸如苯曱醇。可用於醫藥調配物中之組刀之其他實例呈現於Remingt〇n,s pharmaceutjcai

Sciences,第 16版，Mack Publishing Company, Easton，Pa” 1980以及由美國醫藥協會（American pharmaceuticai

Association)與英國醫藥學會（pharmaceuticai s〇ciety 0f 163325.doc •64- 201247703

Great Britain)聯合出版之醫藥賦形劑手冊（Handb〇〇k 〇f

Pharmaceutical Excipients)令。在一實施例中，本文所述之調配物預期製備成總體調配物’且因而，醫藥組合物之組分經調節以使其高於投藥所需’且在投藥之前適當稀釋。本文所述之抗體晶體可調配成固體結晶或粉末調配物，該調配物呈適用於儲存及處理之形式，及適用於吸入或經肺投藥之形式，例如呈用於製備氣溶膠調配物之粉末形式、。在另-實施射，抗體晶體可調配成該等晶體之液體溶液’或該等晶體之漿料。在另一實施例中，抗體晶體用於製備液體調配物’諸如水性調配物，以用於治療性投藥。 A.抗趙晶趙之固體調配物 '抗體晶體之固體調配物包括已實質上自液體溶液中分離或乾燥且以游離晶體或粒子形式存在於例如粉末形式中之晶體。在本發明上下文中，術語「粉末」係指基本上乾燥之粒子的集合’亦即水分含量低於約1〇重量％，或低於❻ 里％ ’或低於4重量％。多狀晶體或粉末可視情況與載劑或界面活性劑組合。適合載劑包括（但不限於川碳水化合物，例如單醣，諸如果糖、半乳糖、葡萄糖及山梨糖；2)二醣， Γ乳糖及海藻糖；3)多酶，諸如棉子糖、麥芽糊精及聚㈣糖㈣醇’諸如甘露糖醇及木糖醇；5)無機鹽，諸如氣化納；及6)有機鹽，諸如料酸納及抗壞血酸納。在某些實施例中，載劑選自由以下組成之群：耗糖、棉子糖、甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、肌醇、薦糖、氣化納 163325.doc -65 - 201247703 及檸檬酸鈉。界面活性劑可選自由脂肪酸鹽、膽鹽或磷脂組成之群。脂肪酸鹽包括Cl^4脂肪酸之鹽，諸如癸酸鈉、月桂酸鈉及肉豆蔻酸鈉β膽鹽包括熊去氧膽酸鹽、牛磺膽酉文鹽、甘膽酸鹽及牛磺二氫夫西地酸鹽。在一實施例中，界面活性劑為牛磺膽酸鹽，諸如牛磺膽酸鈉。可用作界面活性劑之磷脂包括溶血磷脂醯膽鹼。本發明之粉末調配物中結晶多肽與界面活性劑之莫耳比為例如9:1至1:9，或5:1 至 1:5，或 3:1 至 1:3。 Β.溶液或漿料中之晶鱧本文亦描述使得多肽晶體適於儲存於懸浮液中之方法，其包括用非水性溶劑替換結晶緩衝液（母液）。在另一實施例中，可藉由旋#出第_溶劑且使用第二有機溶劑或添加劑洗滌殘餘結晶固體以移除水，繼而蒸發非水性溶劑來使結晶漿料變成固體。結晶治療性蛋白質之非水性漿料尤其適用於皮下傳遞。在一該實施例中’將本文所述之多肽晶體與液體有機添加劑組合以使多肽晶體穩定。該混合物的特徵在於水性-有機混合物，包含η%有機添加劑（其中11為i至99)及^%水溶液 (其中m為100-η)β有機添加劑之實例包括酚化合物，諸如間甲酚或笨酚或其混合物；及丙酮、甲醇、甲基異丁基酮、氣仿、1-丙醇、異丙醇、2_丙醇、乙腈、卜丁醇、2_ 丁醇、乙醇、環己燒、二喔院、乙酸乙醋、三卞基甲醯胺、二氯乙烷、己烷、異辛烷、二氯甲烷、第三丁醇、甲苯、四氣化碳或其組合。 163325.doc •66· 201247703 c·液體調配物本文提供之另一實施例為允許穩定長期儲存醫藥組合物之水性調配物’其中結晶抗硬化蛋白抗體為用於製備醫藥組合物之活性成分。此調配物在某種程度上因更方便患者使用而可用’因為此調配物不需要任何額外步驟，諸如復水。如本文所用之「溶液」或「液體調配物」為含有溶解於適合溶劑或可互相混溶之溶劑的混合物中之一或多種化學物質的液體製劑。復原為將多肽晶體或晶體調配物或組合物溶解於適當緩衝液或醫藥調配物中。再懸浮係指將多肽晶體懸浮於適當緩衝液或醫藥調配物中。在一些em D·醫藥調配物之組分本發明醫藥組合物係藉由除如上所述之結晶抗硬化蛋白抗體之外亦組合以下段落中所列之以下一或多種類型之成分或賦形劑來製備’該等成分或賦形劑中之多者或全部係獲自商業供應商。一般技術者應瞭解，可按任何適當順序組合欲納入組合物中之各種組分，即，可首先中間或最後添加緩衝劑’且亦可首先、中間或最後添加張力調節劑。一般技術者亦將瞭解，此等化學物質中之—些化學物質在某些組合中可能不相容，且因此’易於用具有相似特性但在相m物t相容之不同化學物f替換。此項技術令存在關於存在於例如用㈣存醫藥組合物之容器及/或用於治療性投藥之裝置中之賦形劑及其他成分或物質之各種組 I63325.doc -67- 201247703 合之適合性的知識（參見例如Akers，2002, J Pharm Sci 91: 2283-2300)。可納入本文所述之調配物中之其他試劑之非限制性實例包括酸化劑（包括（但不限於）乙酸、冰乙酸、檸檬酸、反丁烯二酸、鹽酸、稀鹽酸、蘋果酸、硝酸、磷酸、稀磷酸、硫酸、酒石酸及其他適合酸）；活性成分（包括（但不限於）適當劑量的減輕注射部位不適之其他活性成分，及非類固醇消炎藥，諸如緩血酸胺（tromethamine));氣溶膠推進劑（包括（但不限於）丁烷、二氣二氟曱烷、二氯四氟乙烷、異丁烷、丙烷及三氣單氟曱烷）；醇變性劑（包括（但不限於）地那銨苯甲酸鹽、曱基異丁基酮、八乙酸蔗糖酯）；鹼化劑（包括（但不限於）濃氨溶液、碳酸銨、二乙醇胺、二異丙醇胺、氫氧化鉀、碳酸氫鈉、硼酸鈉、碳酸鈉、氫氧化鈉、三乙醇胺）；防結塊劑（包括（但不限於）矽酸鈣、矽酸鎂、膠體二氧化矽及滑石）；消泡劑（包括（但不限於）二甲聚矽氧烷及聚二甲矽氧烧）；螯合劑（chelating agent)(亦稱作螯合劑（sequestering agent))(包括（但不限於）依地酸二鈉、乙二胺四乙酸及鹽及依地酸）；包衣劑（包括（但不限於）羧甲基纖維素鈉、乙酸纖維素、鄰苯二甲酸醋酸纖維素、乙基纖維素、明膠、醫藥光滑劑、羥基丙基纖維素、經丙基甲基纖維素、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素、曱基丙烯酸共聚物、甲基纖維素、聚乙二醇、聚乙酸乙烯酯鄰苯二曱酸酯、蟲膠、蔗糖、二氧化鈦、巴西棕櫊蠟、微晶蠟及玉米蛋白）；著色劑（包括（但不限於）焦糖、紅螢素（FD及C紅色第3號）；FD及C紅色第40 163325.doc -68 - 201247703 號；FD及C黃色第5號；FD及C黃色第6號；FD及C藍色第1 號；紅色、黃色、黑色、藍色或摻合物及氧化鐵）；錯合劑 (包括（但不限於）乙二胺四乙酸（EDTA)及其鹽、依地酸、龍膽酸乙醇醯胺及硫酸羥基喹啉乾燥劑（包括（但不限於）氯化4弓、硫酸妈及二氧化石夕）；過渡助劑（包括（但不限於）粉末狀纖維素及純化碎藤土）；調味劑及香料（包括（但不限於）大茴香腦、大茴香油、苯甲越、肉桂油、可可、乙基香蘭素、薄荷腦、水楊酸甲酯、麩胺酸單鈉、橙花油、橙油、胡椒薄荷、胡椒薄荷油、胡椒薄荷輯：、玫瑰油、濃玫瑰水、瑞香草酚、吐魯香脂酊、香草、香草蘭酊及香蘭素）；保濕劑（包括（但不限於）甘油、己二醇、丙二醇及山梨糖醇）；軟膏基質（包括（但不限於）羊毛脂、無水羊毛脂、親水性軟膏、白色軟膏、黃色軟膏、聚乙二醇軟膏、礦脂、親水性礦脂、白礦脂、玫瑰水軟膏及角鯊烷）；增塑劑（包括（但不限於）蓖麻油、二乙醯化單酸甘油酯、鄰苯二甲酸二乙酯、甘油、單乙醯化及二乙醯化單酸甘油酯、聚乙二醇、丙二醇、三乙酸甘油酯及擰檬酸三乙酯）；聚合物膜（包括（但不限於）乙酸纖維素）；溶劑（包括（但不限於）丙酮、醇、稀醇、水合戊烯、苯甲酸苯曱酯、丁醇、四氣化碳、氣仿、玉米油、棉籽油、乙酸乙酯、甘油、己二醇、異丙醇、曱醇、二氯曱烷、曱基異丁基酮、礦物油、花生油、聚乙二醇、碳酸伸丙S曰、丙二醇、芝麻油、注射用水、無菌注射用水、無菌沖冼用水及純化水）；吸附劑（包括（但不限於）粉末狀纖維素、木炭、純化矽藻土；及二氧化碳吸附劑：氫氧化鋇石 163325.doc -69- 201247703 灰及鹼石灰）；硬挺劑（包括（但不限於）氫化蓖麻油' 十六醇十八醇混合物、十六醇、十六基酯蠟、硬脂、石蠟、聚乙烯賦形劑、十八醇、乳化蠟、白蠟及黃蠟）；栓劑基質（包括 (但不限於）可可脂、硬脂及聚乙二醇）；懸浮劑及/或黏度增加劑（包括（但不限於）阿拉伯膠、瓊脂、海藻酸、單硬脂酸鋁、膨潤土、純化膨潤土、膨潤土乳漿、卡波姆 (carbomer)934p、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈉12、角叉菜膠、微晶纖維素及羧曱基纖維素鈉、糊精、明膠、瓜爾膠、羥乙基纖維素、羥基丙基纖維素、羥丙基曱基纖維素、矽酸鎂鋁、甲基纖維素、果膠、聚氧化乙稀、聚乙稀醇' 聚維酮、海藻酸丙二醇酯、二氧化石夕、膠體二氧化矽、海藻酸鈉、黃芪膠及黃原膠）；甜味劑（包括 (但不限於）阿斯巴甜糖、葡萄糖結合劑、右旋糖、賦形劑右旋糖、果糖、甘露糖醇、糖精、糖精鈣、糖精鈉、山梨糖醇、溶液山梨糖醇、蔗糖、可壓縮糖、糠粉及糖漿）；錠劑黏合劑（包括（但不限於）阿拉伯膠、海藻酸、羧曱基纖維素納、微晶纖維素、糊精、乙基纖維素、明膠、液體葡萄糖、瓜爾膠、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素、聚氧化乙烯、聚維嗣、預膠凝澱粉及糖漿）；錠劑及/或膠囊稀釋劑（包括 (但不限於）碳酸鈣、磷酸氫鈣、磷酸三鈣、硫酸鈣、微晶纖維素、粉末狀纖維素、葡萄糖結合劑、糊精、右旋糖賦形劑、果糖、高嶺土、乳糖、甘露糖醇、山梨糖醇、澱粉、預膠凝澱粉、蔗糖、可壓縮糖及糖粉）；錠劑崩解劑（包括（但不限於）海藻酸、微晶纖維素、交聯羧甲纖維素鈉、交聯聚 163325.doc •70· 201247703 維酮、波拉克林鉀（polacrilin potassium)、羥基乙酸澱粉納、澱粉及預膠凝澱粉）；錠劑及/或膠囊潤滑劑（包括（但不限於）硬脂酸鈣、蘿酸甘油酯、硬脂酸鎂、輕質礦物油、聚乙二醇、硬脂醯反丁浠二酸鈉、硬脂酸、純化硬脂酸、滑石、氫化植物油及硬脂酸鋅）；媒劑（包括（但不限於）調味及/或甜化（芳香酏劑、化合物苯甲醛酏劑、等醇酏劑、胡椒薄荷水、山梨糖醇溶液、糖漿、吐魯香脂糖漿）；油性劑（杏仁油、玉米油、棉籽油、油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、礦物油、輕質礦物油、肉豆蔻醇、辛基十二烷醇、橄禮油、7b生油、桃仁油、芝麻油、大豆油、角鯊烧）；固體載劑’諸如糖球；及無菌媒劑（抑菌注射用水、抑菌氣化鈉注射液），及拒水劑（包括（但不限於）環曱聚矽氧烷、二甲聚矽氧烷及聚二甲矽氧烷）。在本文所述之調配物中亦可包括降低多肽締合成不適當或不需要之三70或四元複合物之傾向的聚集抑制劑。適合之聚集抑制劑包括胺基酸L-精胺酸及/或l—半胱胺酸，其可用以在長時段（例如兩年或兩年以上）内減少含有Fc域之多肽聚集。調配物中聚集抑制劑之濃度可為約】福以M，或約1〇mM至約200 mM，或約1〇mM至約i〇〇mM，或約ΐ5 mM至約75mM，或約5mM至㈣福，或約5福至約ΐ5 mM，或約10mM至約2〇mM，或約15〇福至約25〇邊，或約25 mM。在本文所述之調配物中亦可包括抗氧化劑1期用於製備調配物之抗氧化劑包括胺基酸，諸如甘胺酸及離胺酸； 163325.doc 201247703 螯合劑，諸如EDTA及DTPA ;及自由基清除劑，諸如山梨糖醇及甘露糖醇。其他抗氧化劑包括抗壞血酸、抗壞血基棕櫚酸酯、丁基化羥基大菌香醚、丁基化羥基甲苯、次磷酸、單硫代甘油、沒食子酸丙酯、亞硫酸氫鈉、曱醛合次硫酸虱納、偏亞硫酸氫納、硫代硫酸鈉、二氧化硫、生育酚及生育酚賦形劑。氮氣或二氧化碳上覆層亦預期用於抑制氧化。氮氣或二氧化碳上覆層可在填充製程期間引入小概或預裝藥品之注射器之頂部空間中。在本文所述之調配物中亦可包括將醫藥調配物之pH值維持在所需範圍内之緩衝劑。當將醫藥組合物之pH值設定在生理學水準或接近生理學水料，患者在㈣時之舒適性達到最大。特定而言，在某些實施例中，醫藥組合物之P 值在約4.0至8.4之pH值範圍内’或約5(^8〇2pH值範目内或.々5.8至7.4，或約6 2至7 〇之阳值範圍内。應瞭解可根據需要調節pH值以使特定調配物中多肽之穩定性及会解度達到最大且因而，超出生理學範圍但患者仍可耐3 P值處於本發明之範各種適用於本發明之醫藥* 合物中之緩衝劑包括組胺酸、驗金屬鹽（峨酸納或碌酸卸；、氫a或氫1 )、檸檬酸鈉/檸檬酸、乙酸鈉/乙酸、檸求

酸斜、順丁稀—酸、乙酸錢、參(經甲基）_胺基甲烧（tds) 各種形式之乙酸雎另P ^ 皿一乙醇胺、碳酸錄、璘酸錄、棚酸、 $ ,碌酸偏碟酸钟、碟酸二氫钟、乳酸納溶液’及jtl 項技術中已知之任何其他醫藥學上可接受之pH值緩衝劑〇亦可包括諸如料1氧化域其鹽之_調節劑以達至 163325.doc •72· 201247703 所需pH值。一種適用於將醫藥組合物維持於pH 6.2或PH 6.2 附近的緩衝劑為磷酸鈉。在另一實例中，乙酸鹽為在pH 5 下比在pH 6下更有效之緩衝劑，因此相較於在pH 6下，在 pH 5下於溶液中使用較少乙酸鹽。調配物中緩衝劑之濃度可為約1 mM至約1 Μ ’或約〇.1 mM至約1 mM，或約〇.1 mM 至約0.5 mM，或約10 mM至約300 mM。在本文所述之調配物中亦可包括聚合載體。聚合載體為用於囊封多肽晶體以傳遞多肽（包括生物學傳遞）之聚合物。該等聚合物包括生物相容性及生物可降解聚合物。聚合載體可為單一聚合物類型或其可由聚合物類型之混合物構成。適用作聚合載體之聚合物包括例如聚（丙稀酸）、聚（氰基丙烯酸酯）、聚（胺基酸）、聚（酐）、聚（縮肽）、聚（酯），諸如聚（乳酸）或PLA、聚（乳酸-共-乙醇酸）或Plga、聚（β·羥基丁酸酯）、聚（己内酯）及聚（二氧環己酮）；聚（乙二醇）、聚（經基丙基）曱基丙烯醯胺、聚[(有機）磷氮烯]、聚（原酸酯）、聚 (乙烯醇）、聚（乙烯基。比咯啶酮）、順丁烯二酸酐_烷基乙烯謎共聚物、普洛尼克多元醇（pluronic p〇ly〇l)、白蛋白、天然及合成多肽、海藻酸鹽、纖維素及纖維素衍生物、膠原蛋白、纖維蛋白、明膠、玻尿酸、寡醣、甘胺基聚糖、硫酸化多醣，或任何囊封多肽晶體之習知物質。諸如抗微生物防腐劑之防腐劑亦預期用於本文所述之調配物中。適合防腐劑包括（但不限於）氣化苯曱烴敍、氣化苯甲烴銨溶液、氣苄硫銨、苯曱酸、苯曱醇、對經基苯曱酸丁酯、氯化十六烧基《比錄：' 氣丁醇、氣曱紛、甲齡、脫氫 163325.doc -73- 201247703 乙酸、對經基苯甲酸乙酯、對經基苯甲酸曱酯、對經基苯曱酸甲酯鈉鹽、苯酚、苯乙醇、乙酸苯汞、硝酸苯汞、苯甲酸鉀、山梨酸鉀、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丙醋鈉鹽、苯曱酸鈉、脫氫乙酸鈉、丙酸鈉、山梨酸、硫柳汞及瑞香草酚。所包括之防腐劑之量在〇%至2% (w/v)或約 1% (w/v)範圍内。亦可將增加多肽之溶解度及/或使多肽在溶液中（或呈乾燥或冷凍形式）時穩定的增溶劑及穩定劑（亦稱為乳化劑、共溶質或共溶劑）添加至醫藥組合物中。增溶劑及穩定劑之實例包括（但不限於）糖/多元醇，諸如：蔗糖、乳糖、甘油、木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、麥芽糖、肌醇、海藻糖、葡萄糖，聚合物，諸如：血清白蛋白（牛血清白蛋白（BSA)、人類SA(HSA)或重組HA)、聚葡萄糖、PVA、羥丙基甲基纖維素（HPMC)、聚乙烯亞胺、明膠、聚乙烯吡咯啶酮（pvp)、經乙基纖維素（hec),非水性溶劑，諸如：多元醇（例如 peg、乙二醇及甘油）、二甲亞砜（DMS〇)及二甲基曱醯胺 (DMF);胺基酸，諸如：脯胺酸、L_曱硫胺酸、^絲胺酸、麩胺酸鈉、丙胺酸、甘胺酸、鹽酸離胺酸、肌胺酸及丫_胺基丁 k，界面活性劑，諸如：吐溫（Tween)_8〇、吐溫_2〇、 SDS、聚山梨㈣、聚氧化乙烯共聚物；及各種穩定賦形劑，諸如：磷酸鉀、乙酸鈉、硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、二甲胺N-氧化物、甜菜鹼、金屬離子（例如鋅、銅、鈣、錳及鎂）、CHAPS、單月桂酸酯、2_〇_p_甘露甘油酸酯；或以下任一者：阿拉伯膠、膽固醇、二乙醇胺（佐劑）、單硬脂酸 I63325.doc •74- 201247703 甘油醋、羊毛脂醇、卵磷脂、單酸甘油酯及二酸甘油酯、單乙醇胺（佐劑）、油酸（佐劑）、油醇（穩定劑）、泊洛沙姆 (poloxamer)、聚氧化乙烯％硬脂酸酯、聚烴氧基 (p〇lyoxyl)35蓖麻油、聚烴氧基4〇氫化蓖麻油、聚烴氧基1〇油基喊、聚烴氧基20十六基十八基醚、聚烴氧基4〇硬脂酸酉曰、聚山梨醇酿20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、二乙酸丙二醇酯、單硬脂酸丙二醇酯、十二烷基硫酸鈉、硬脂酸鈉、單月桂酸脫水山梨糖醇酯、單油酸脫水山梨糖醇酯、單棕櫚酸脫水山梨糖醇酯、單硬脂酸脫水山梨糖醇酯、硬脂酸、三乙醇胺、乳化蠟；濕澗劑及7或增溶劑，諸如氣化苯曱烴銨、苄索氣銨、氣化十六烷基吡錠、多庫酯鈉、壬苯醇醚9、壬苯醇醚1〇、辛苯聚醇9、聚丈二氧基50硬脂酸酯、泰洛沙泊（tyl〇xap〇1);或上述任何組合。調配物中增溶劑/穩定劑之濃度可為約〇〇〇1重量％至5 重量％ ’或約〇.1重量％至2重量％。在一實施例巾，穩定劑選自脫水山梨糖醇單-9-十八烯酸酯聚（氧基_〖，2_乙二基）衍生物，包括（但不限於）聚山梨醇酯8〇或聚山梨醇酯2(^在一次性或多劑量調配物中，用於此實施例中之聚山梨醇醋2〇或80之量在請以至⑽。（w/v)範圍之内諸如〇〇〇5% (w/v)。在另一實施例中，在調配物中包括〇〇5 _至5〇_ 範圍内之游離L-甲硫胺酸：一次性調配物中游離。甲硫胺酸之量為0.05 mM至5 mM，且多劑量調配物中游離^甲硫胺酸之量為1 mM至10 mM。在本文所述之調配物中亦可包括張力調節劑。張力㈣ 163325.doc •75· 201247703 劑係理解為促成溶液之滲透重量莫耳濃度的分子。醫藥組合物之滲透重量莫耳濃度較佳經調節以使活性成分之穩定性達到最大且亦使患者在投藥時之不適減至最小。血清為約300+Λ50毫滲莫耳（mjiii〇sm〇iai)/公斤。一般較佳，醫藥組合物與血清等張，亦即具有相同或相似之滲透重量莫耳濃度，其係藉由添加張力調節劑來達成，因此滲透重量莫耳濃度預期將為約180至約420毫滲莫耳，然而，應瞭解滲透重量莫耳濃度可根據特定條件需要而較高或較低。適用於調節滲透重量濃度之張力調節劑的實例包括（但不限於）（例如精胺酸、半胱胺酸、組胺酸及甘胺酸）、鹽（例如氣化鈉、氣化鉀及檸檬酸鈉）及/或醣類（例如蔗糖、葡萄糖、右旋糖、甘油及甘露糖醇）。調配物中張力調節劑之濃度可為約1 mM至1 Μ，或約1〇 mM至約2〇〇 mM。在一實施例中，張力調節劑為氯化鈉，濃度範圍為〇mM至2〇〇 mM。在另一實施例中，張力調節劑為山梨糖醇或海藻糖且不存在氣化納。在某些實施例中，調配物包含選自以下之化合物或其任何組合.以下之鹽：1)胺基酸，諸如甘胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、天冬醯胺、麵醯胺酸、脯胺酸； 2)碳水化合物，例如單醣，諸如葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖、木糖、核糖；3)二醣，諸如乳糖、海藻糖、麥芽糖、蔗糖；4)多醣’諸如麥芽糊精、聚葡萄糖、澱粉、肝糖；5)醛醣醇，諸如甘露糖醇、木糖醇、乳糖醇、山梨糖醇；6)葡糖醛酸、半乳糖醛酸；7)環糊精，諸如甲基 163325.doc -76- 201247703 環糊精、羥基丙基-β-環糊精；8)無機鹽，諸如氣化鈉、氣化鉀、氣化鎂、鈉之磷酸鹽及鉀之磷酸鹽、硼酸、碳酸銨及磷酸銨；9)有機鹽，諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽、抗壞血酸鹽、乳酸鹽；10)乳化劑或增溶劑，諸如阿拉伯膠、二乙^ 胺、單硬脂酸甘油酯、卵磷脂、單乙醇胺、油酸、油醇、泊洛沙姆、聚山梨醇酯、十二烷基硫酸鈉、硬脂酸、單月桂酸脫水山梨糖醇酯、單硬脂酸脫水山梨糖醇酯，及其他脫水山梨糖醇衍生物、聚烴氧基衍生物、蠟、聚氧化乙烯知生物、脫水山梨糖醇衍生物；u)黏度增加試劑，諸如瓊脂、海藻酸及其鹽、瓜爾膠、果膠、聚乙烯醇、聚氧化乙烯、纖維素及其衍生物、碳酸伸丙酯、聚乙二醇、己二醇、泰洛沙泊；及12)特定成分，諸如蔗糖、海藻糖、乳糖、山梨糖醇、乳糖醇、肌醇、納鹽及卸鹽（諸如乙酸鹽、麟酸趟、檸檬酸鹽、賴鹽）、甘胺酸、精胺酸、聚氧化乙烯、聚乙烯醇、聚乙二醇、己二醇、甲氧基聚乙二醇、明膠及羥基丙基-β-環糊精。 Ε·持續釋放形式 ,在-些實施例t，使用結晶抗硬化蛋白抗體之持續釋放《式（亦稱作「控制釋放」形式），包括結晶抗體、 mH30Rm或Ab_3丨之持續釋放形式；包含結晶抗體、Ab-30R、抓通喊八㈣及在 dHAb-3〇R、Ab_30R_Ab_31^„^: 物可用性之物質的持續或控制釋放形式。適用於所揭示之方法中之持續釋放形式包括(但不限於) I63325.doc •77· 201247703 囊封於持續釋放物質（諸如緩慢溶解之生物相容性聚合物 (例如本文所述之聚合載體、美國專利第6,〇36,978號中所述之海藻酸鹽微粒或美國專利第6,083,534號中所述之聚乙烯 -乙酸乙烯酯及聚（乳酸_乙醇酸）組合物））中、與該種聚合物 (包括局部施用之水凝膠）混合，及/或埋入生物相容性半滲透性植入物中之結晶抗體Ab-30、Ab-30R、Ab-30Rm或 Ab-3 1。本發明之其他實施例包括其他持續釋放形式諸如聚合微粒，其中活性成分與持續釋放物質（諸如聚合物（例如 PLGA))之混合物分散於連續相内，且直接凍乾所得分散液以移除水及有機溶劑或添加劑且形成該等微粒（美國專利第6,020,004號’其以全文引用之方式併入本文中）；可注射凝膠組合物，其包含生物可降解陰離子多醣（諸如海藻酸酯）、多肽及至少一種結合之多價金屬離子（美國專利第 6,432,449號’其以全文引用之方式併入本文中）；可注射生物可降解聚合基質，其具有逆向熱膠凝特性且視情況具有 pH值反應性膠凝/去膠凝（de-gelation)特性（美國專利第 6,541，033號及第6,451，346號，其以全文引用之方式併入本文中）；生物相容性多元醇：油懸浮液，諸如懸浮液包含約i 5 重量％至約3 0重量％範圍内之多元醇的懸浮液（美國專利第 6,245,740號，其以全文引用之方式併入本文中）。該等持續釋放形式適用於經由以儲槽形式投與來連續傳遞多狀，其中該儲槽可為植入物’或可呈可注射微球體、奈来球體或凝膠形式。以上所列之美國專利（美國專利第6,〇36,978號；第 6,083,534號；第 6,020,004號；第 6,432,449號；第 6,541，〇33 163325.doc -78 · 201247703 號；第6,451,346號；及第6,245,740號）以全文引用之方式併入本文中。另外，本發明之結晶多肽之持續或控制釋放形式包含各型持續釋放物質，諸如Kim, C.，2000,「Controlled

Release Dosage Form Design」，Techonomic Publishing Co.，

Lancaster Pa.中所述者’其包括以下：天然聚合物（明膠、海藻酸鈉、黃原膠、阿拉伯樹膠或聚葡萄胺糖）、半合成聚合物或纖維素衍生物（例如曱基纖維素、乙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥乙基甲基纖維素、羥丙基曱基纖維素、羧甲基纖維素鈉、乙酸纖維素、乙酸丁酸纖維素、乙酸丙酸纖維素、鄰苯二甲酸醋酸纖維素或鄰笨二甲酸羥丙基曱基纖維素）、及合成聚合物（例如離子交換樹脂 (曱基丙烯酸、磺化聚苯乙烯/二乙烯基苯）、聚丙烯酸（卡巴浦爾（Carbopol))、聚（MMA/MAA)、聚（MMA/DEAMA)、聚 (MMA/EA)、I(乙酸乙稀g旨鄰苯二甲酸醋）、聚（乙稀醇）、聚（乙烯基吡咯啶酮）、聚（乳酸）、聚（乙醇酸）、聚（乳酸/乙醇酸）、聚乙二醇、聚氧化乙烯、聚（二甲基聚矽氧）、聚（曱基丙烯酸羥乙酯）、聚（乙烯/乙酸乙烯酯）、聚（乙烯/乙烯醇）、聚丁二烯、聚（酐）、聚（原酸酯）及聚（麩胺酸））。本文揭示之其他實施例包括囊封於至少一種聚合載體中以形成微球體的Ab-30、Ab-30R、Ab-3 0Rm或Ab-31晶體，藉助於囊封於聚合載體基質内來保持其原生及生物活性三級結構，如美國專利第6,541，6〇6號所述，該專利以全文引用之方式併入本文。將Ab-30、Ab-3 0R、Ab-30Rm或Ab-31 晶體或其調配物懸浮於溶解於有機溶劑或添加劑中之聚合 163325.doc •79· 201247703 載體（諸如PLGA)中。在儲存於類似條件下時，該等囊封之 Ab-30、Ab-30R、Ab-30Rm 或 Ab_31 晶體維持抗體抓3〇、 Ab-3OR、Ab-3ORm或Ab_3丨之生物活性的時段長於溶液中之抗體 Ab-30、Ab-30R、Ab-30Rm 或 Ab-31。 IV.套組作為另一態樣，本文描述套組，其包含一或多種本文所述之調配物，該等調配物以促成其用於向個體投藥的方式經封裝。在一實施例中，該套組包括本文所述之調配物（例如包含其中所述之任何抗體的組合物），該調配物封裝於容器（諸如密封瓶、容器、一次性或多次使用之小瓶、預裝藥之注射器或預裝藥品之注射裝置）中，視情況有標簽黏貼於谷器或包括於封裝中以描述化合物或組合物在實行方法中之使用。在一態樣中，化合物或組合物以單位劑型封裝。套組可進一步包括適用於根據特定投藥途徑投與組合物之裝置。較佳，套組含有描述本文所述之抗體或本文所述之調配物之使用的標簽。 V·劑量涉及治療本文所述之病狀之方法的給藥方案將由主治醫師，在考慮各種改變藥物作用之因素下確定，該等因素為例如患者之年齡、病狀、體重、性別及膳食、任何感染之嚴重度、投藥時間及其他臨床因素。在各種態樣中，每日方案在每公斤體重0· 1 mg至50 mg抗體製劑之範圍内（計算單獨蛋白質之質量而無化學修飾）。在一些實施例中，劑量為約 0.5 mg/kg至 20 mg/kg，或約 0.5-10 mg/kg，或約 1 mg/kg 163325.doc • 80 · 201247703 至約3 mg/kg，或約1 mg/kg至約4 mg/kg，或約1 mg/kg至約 5 mg/kg，或約 2 mg/kg至約 4 mg/kg，或約 2 mg/kg至約 5 mg/kg、約 1 mg/kg至約 3 mg/kg、約 1 mg/kg至約 5 mg/kg、約 2 mg/kg至約 6 mg/kg’ 或約3 mg/kg至約 5 mg/kg、約 1 mg/kg至約 10 mg/kg、約 1 mg/kg至約 20 mg/kg、約 1 mg/kg 至約 40 mg/kg、約 5 mg/kg至約 30 mg/kg，或約 5 mg/kg至約 20 mg/kg。調配物一般非經腸投與，例如靜脈内、皮下、肌肉内、經由氣溶膠投與（肺内或吸入投與），或經由長期釋放之儲槽投與。在一些實施例中’調配物藉由初始快速注射（b〇lus)，繼而連續輸注以維持藥物產品之治療性循環含量來靜脈内投與。在其他實施例中，調配物以單次給藥形式投與。一般技術者將易於最佳化如藉由優良醫學實踐及個別患者之臨床病狀所確定之有效劑量及投藥方案。給藥頻率將視藥劑之藥物動力學參數及投藥途徑而定。最佳醫藥調配物將由熟習此項技術者視投藥途徑及所需劑量而確定。參見例如 Remington's Pharmaceutical Sciences,第 18 版（1990,

Mack Publishing Co” Easton，PA 18042)第 1435-1712頁，其揭示内容以引用方式併入本文中。該等調配物可能影響所投與藥劑之物理狀態、穩定性、活體内釋放速率及活體内清除速率。視投藥途徑而定，可根據體重、體表面積或器官大小計算適合劑量。通常由一般技術者在不進行過度實驗的情況下’尤其根據本文所揭示之劑量資訊及分析以及在上述人類臨床試驗中所觀測到之藥物動力學資料來對為 163325.doc •81 · 201247703 測定適用於涉及上述各調配物之治療之劑量所需之計算進行進一步改進。適當劑量可經由使用測定液含量劑量之確定分析連同適當劑量-反應資料來確定。在進行研究時’將出現關於適用於各種疾病及病狀之劑量及治療持續時間的其他資訊。 VI.調配物之治療用途本文所述之調配物適用於治療或預防骨相關病症，諸如與異常成骨細胞或破骨細胞活性有關之骨相關病症。在一些實施例中，調配物係投與患有選自由以下組成之群之骨相關病症的個體：軟骨發育不全、鎖骨顱骨發育不全、軟骨發育不良、纖維性結構不良、高雪氏病、低磷酸鹽血症性佝僂病、馬方氏症候群、多發性遺傳性外生骨疣、神經纖維瘤、成骨不全、骨硬化病、脆弱性骨硬化、硬化性病變、假性關節、化膿性骨髓炎、牙周病、抗癲癇藥物誘發性骨質流失、原發性及繼發性副甲狀腺機能亢進、家族性副甲狀腺機能亢進症候群、失重誘發之骨質流失、男性骨質疏鬆症、停經後骨質流失、骨關節炎、腎性骨營養不良、浸潤性骨病症、口腔骨質流失、頜骨壞死、青少年佩吉特氏病、肢骨紋狀肥大、代謝性骨病、肥大細胞增多症、鐮狀：胞貧血/疾病、器官移植相關性骨質流失、腎移植相關 ^骨質流失、全身性紅斑狼瘡、強直性脊柱炎、癲癇症、青少年關節炎性皮療、地中海貧灰症、黏多酷貯積症、法布裡病、特納氏症候群、唐氏症候群、克氏症候群、麻風病'佩氏病、青少年特發性脊柱側彎、嬰兒發病型多系統 163325.doc -82 - 201247703 發炎性疾病、溫氏症候群、門克斯病、威爾遜氏病、缺血性骨病（諸如累卡·佩三氏病及局限性移行性骨質疏鬆症）、貧血病況、由類固醇所引起之病狀、糖皮質激素誘發性骨質流失、肝素誘發性骨質流失 '㈣病症、壞血症、營養不良、鈣缺之症、骨質疏鬆症、骨質減少、酒精中毒、 k性肝病、停經後病況、慢性發炎性病狀、類風濕性關節炎、發炎性腸病、潰瘍性結腸炎、發炎性結腸炎、克羅恩氏病、月經過少、閉經、姓娠、糠尿病、甲狀腺機能充二甲狀腺病症、冑甲狀腺病症、庫興氏病、肢端肥大症、性腺低能症、固定或廢用、反射性交感神經營養不良症候群、局限性骨質疏鬆症、骨軟化病、與關節置換術有關之骨質抓失、HIV相關性骨質流失、與生長激素喪失有關之骨質流失、與囊腫性纖維化有關之骨質流失、化學療法相關性骨質流失、腫瘤誘發之骨質流失、癌症相關性骨質流失、激素去除n月質流失、多發性骨髓瘤、藥物誘發性骨質流失、神經性厭食症、疾病相關性面骨骨質流失、疾病相關性顱骨骨質流失、疾病相關性頜骨骨質流失、疾病相關性頭骨骨質流失、與老化有關之骨質流失、與老化有關之面骨骨質机失、與老化有關之顧骨骨質流失、與老化有關之領骨骨質流失、與老化有關之頭骨骨質流失及與太空旅行有關之骨質流失。在一些實施例中，本文所述之調配物適用於改善矯形外科程序、牙科程序、植入手術、關節置換術、骨移植、骨整形手術及骨修復(諸如骨折癒合、骨不連癒合、骨癒合延 163325.doc •83- 201247703 遲癒合）及面部重建術中之結果。一或多種組合物可在程序、置換術、移植、手術或修復之前、期間及/或之後投與。調配物無需治癒個體之録或完全防範骨相關病症發病以達成有益之生物反應。調配物可預防性使用，意欲完全或部分防範骨相關病症或其症狀。調配物亦可治療性使用以完全或物文善骨相關病症或其症&，或完全或部分防範骨相關病症或其症狀進一步進展。實際上，本發明之物質及方法尤其適用於增加骨礦物質密度且在一定時段内維持增加之骨礦物質密度。可經例如約1週至約18则（例如約1個月至約12個月、約個月至約9個月，或約！個月至約6個月或約⑽月至約3 個月）之‘療時段-或多次投與本文所述之調配物。在一些實施例中，經例如約i個月至約12個月（例如約2個月、約3 :月、約糊月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、 “月，勺10個j，或約u個月）之治療時段投與個體一本文所34之調配物。在—些實施财，投與個體一以維持骨礦物f密度。如本文所用之術語「維質进度J意謂在約6個月、約9個月、約 :起:2:期間’或在患者一生當中由初始劑量之調配物之骨礦物質密度不下降超過約1%至約5%β應階段。。^要增加骨密度與維持骨密度之交替治療另外’投與多次劑量之調配物或的，視選用於特宏彻触六分W篁馮有利 •疋個體之治療方案而定。可經 163325.doc -84 - 201247703 以内之時段（例如9個月或9個月以内、6個月或6個月以内，或3個月或3個月以内）週期性投與調配物。就此而言，調配物可每約3天、或約7天’或2週，或3週，或4週或5週，或6週’或7週’或8週，或9週，或1〇週，或"週，或12週，或13週’或14週，或15週’或16週，或⑽，或_，或 19週，或20週，或21週，或22週，或23週，或6個月，或個月投與人類一次。 VII.監測療法 ~T使用單此及雙能X射線吸收測定術、超音波、電腦斷層攝影術、放射攝影術及磁共振成像來量測抗硬化蛋白抗體所’|導之骨礦物質含量或骨密度增加。亦可由體重或藉由使用其他方法計算骨質量（參見Guinness_Hey，Metab. Bone Dis_ Relat· Res，81 (1984))。在此項技術中使用動物模型來測試醫藥組合物及方法對模擬人類疾病（諸如骨質疏鬆症及骨質減少）之病狀的例如骨質流失、骨骼再吸收、骨形成、骨強度或骨礦化作用參數的影響。該等模型之實例包括切除卵巢之大鼠模型（Kalu，Bone and Mineral， 15:175-192 (1991) ; Frost 及 Jee，Bone and Mineral, 18.227-236 (1992);及 Jee及 Yao, J. Musculoskel. Neuron.

Interact·，1:193-207 (2001))。量測本文所述之抗硬化蛋白抗體活性的方法亦可用於測定其他硬化蛋白抑制劑之功效。在人類中’臨床上可使用雙重X射線吸收測定術（DXA) 測定例如髖部及脊椎之骨礦物質密度。其他技術包括定量電腦斷層攝影術（QCT)、超音波檢查術、單能X射線吸收測 163325.doc -85- 201247703 定術（SXA)及放射攝影吸收測定術。用於量測之常見中心骨骼部位包括脊椎及髖部；周邊部位包括前臂、手指、腕部及腳跟。除超音波檢查術外，美國醫藥協會（American Medical Association)指示BMD技術通常涉及使用X射線且基於輻射視輻射路徑中組織之厚度及組成而衰減的原理。所有技術涉及將結果與標準資料庫比較。或者’可藉由監測骨標記含量來確定對一或多種硬化蛋白結合劑的生理反應。骨標記為在骨重塑過程期間產生之產物且由骨、成骨細胞及/或破骨細胞釋放，骨骼再吸收及/ 或骨形成「標記」含量波動表示骨重塑/塑造變化。國際骨質疏鬆基金會（International Osteoporosis Foundation，IOF) 建議使用骨標記來監測骨密度療法（參見例如Deimas等人，

Osteoporos Int”增刊6:S2-17 (2000)，其以引用方式併入本文中）。指示骨骼再吸收（或破骨細胞活性）之標記包括例如c 端肽（例如1型膠原蛋白之C端端肽（CTX)或血清交聯C端肽）、N端肽（1型膠原蛋白之N端端肽（NTX))、去氧吡啶啉 (deoxypyddinoline，DPD)…比啶啉、尿羥脯胺酸、半乳糖苷基羥基離胺酸及抗酒石酸鹽酸性磷酸酶（例如血清抗酒石酸鹽酸性磷酸酶同功異型物5bp骨形成/礦化標記包括

(但不限於）骨特異性驗性峨酸酶（BsAp)、由】型原膠原之N 端及c端延伸段釋放之肽（P1NP、picp)及骨鈣化素 (〇StCa)。若干套組市售可得以偵測及定量臨床樣品（諸如尿及血液）中之標記。 VIII.組合療法 163325.doc -86 - 201247703 尸糟：組合兩種或兩種以上靶向相同病原體或生物化學路徑之藥劑來治療病變有時會相對於單獨使用治療相關劑量之各藥劑產生較大功效且使副作用減少。在一些狀況下，藥物組合之功效為累加功效（組合之功效約等於單獨各藥物之作用的總和），但在其他狀況下，作用可為協同作用（組合之功效大於單獨給與之各藥物之作用的總和）。如本文所用之術語「組合療法」意謂可以同時方式（例如並行）傳遞兩種化合物，或以首先投與一種化合物，繼而投與第二藥劑之方式（例如依序）傳遞兩種化合物。所需結果可為劑量接受者之一或多種症狀之主觀減輕或可客觀識別之改善。在一些實施例中，調配物連同用於治療骨礦物質密度降低之照護標準治療劑一起投與。如本文所用之術語「照護標準」係指由臨床醫生公認用於診斷患有一定類型之疾病之某一類型患者的治療。在一些實施例中，照護標準治療劑選自由以下組成之群：抗再吸收藥物、骨形成劑、雌激素受體拮抗劑（包括（但不限於）雷洛昔芬、巴多昔芬及拉索昔芬）及對破骨細胞有刺激作用的藥物。在一些實施例中，抗再吸收藥物包括（但不限於）雙膦酸鹽（包括（但不限於）阿侖膦酸鹽、利塞膦酸鹽、伊班膦酸鹽及唑來膦酸鹽 (zoledronate))、雌激素或雌激素類似物、選擇性雖激素受體調節劑（SERM)及鈣來源、替勃龍、抑鈣素、鈣化三醇及激素替代療法。在一些實施例中，骨形成劑包括（但不限於）副曱狀腺激素（PTH)或其肽片段、PTH相關蛋白（PTHrp)、骨形態生成蛋白、成骨素、NaF、PGE2促效劑、抑制素、 163325.doc -87 * 201247703 抗DKK抗體及RANK配體(RANKL)。在一些實施例中，對破骨細胞具有刺激作用之藥物包括（但不限於）維生素D或維生素D衍生物或其模擬物。在一些實施例中，在個體對以本文所述之照護標準治療劑治療有禁忌時投與其調配物。實例實例1 :使Ab_30結晶在多種條件下使抗體Ab-30結晶，該抗體由兩條成熟重鏈 (SEQ ID NO: 15)及兩條成熟輕鏈（SEQ ID NO: 13)組成且由編碼此等鍵中之每一者的DNA重組產生。使用結晶篩選（索引篩選（Index Screen) ; Hampton Research，Aliso Viejo, Calif·)使Ab-30結晶，該結晶篩選使用稱為「懸滴式」蒸氣擴散之用於使大分子結晶的方法。將由多肽樣品與結晶試劑（「結晶緩衝液」或「母液」）之混合物構成的液滴置於石夕烧化蓋玻片下侧上，且接著用油脂密封蓋玻片上之液滴且置放於具有試劑之液體儲集液 (reservoir)之引起蒸氣平衡之通常24孔ν〇χ盤上方。為達成平衡’水蒸氣在液滴與盤之孔中之1 ml儲集溶液之間進行交換。隨著水離開液滴，多肽樣品之相對濃度不斷增加，最終引起過飽和。多肽樣品之濃度增加為出現結晶所必需°通常，液滴所含之試劑的濃度低於儲集液，且通常，液滴所含之試劑之濃度為儲集液中之濃度的一半，因為混合等體積樣品與試劑形成液滴。

在此等實驗中’液滴中之初始多肽濃度通常為〇 1 mg/mL 163325.doc -88· 201247703 至 300 mg/mL或 3 mg/mL至 100 mg/mL。在24孔VDX聚丙烯組織培養盤中建立結晶篩選。VDX盤中之各位置皆含有1 mL試劑儲集液，其中各孔中之試劑儲集液的組成與其他孔不同，以形成一系列不同之結晶緩衝液條件。將各多肽濃度之1 μί至10 μι多肽溶液添加至1 μι 至10 μΐ儲集溶液中’形成液滴。在4°C下或在環境室溫下培育盤。 •结邊錶# ’使用複數種試劑在4°C及室溫下觀測到Ab-3 0 結晶（參見下表1至8)。表1.在室溫下一天后產生Ab-30晶體之結晶條件結晶篩選結晶條件晶體形態 INDX第18號 0.49 Μ碌酸二氫鈉、0.91 Μ鱗酸氫二鉀，pH 6.9 棒狀晶體 INDX第22號 0,8 Μ丁二酸，pH 7 棒狀簇狀晶體 INDX第30號 0.1 Μ氯化鈉、〇·ΐ M Bis-Tris(pH 6.5)、1.5 Μ硫酸銨棒狀晶體 INDX第31號 0.814四水合酒石酸鉀鈉、〇.11^1^(?118.5); 0.50% w/v聚乙二醇單曱醚5000 棒狀簇狀晶體 INDX第34號 1 Μ丁二酸(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、1% w/v聚乙稀棒狀簇狀晶體 INDX第35號 1 M硫酸銨、〇_l M HEPES(pH 7.0)、0.50% w/v 聚乙二醇8000 棒狀簇狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0) ' 0.1 M HEPES(pH 7.0)、2% w/v聚乙二醇3350 棒狀晶體、棒狀簇狀晶體表2.在4°C下一天后產生Ab-30晶體之結晶條件結晶篩選結晶條件晶體形態 INDX第12號 0·1 M Tris(pH 8.5)、3 Μ氣化鈉来記錄 INDX第18號 0.49 Μ填酸二氫鈉、〇·91 Μ填酸氫二鉀，pH 6.9 榛狀晶體 INDX第22號 0.8 Μ丁二酸，pH 7 榛狀簇狀晶體 INDX第31號 0.8 Μ四水合酒石酸鉀鈉、o.i M Tris(pH 8.5); 0.50% w/v聚乙二醇單曱喊5000 棒狀藏狀晶體 INDX第35號 1 Μ硫酸銨、0.1 M HEPES(pH 7.0)、0.50% w/v 聚乙二醇8000 棒狀蘇狀晶體 163325.doc •89- 201247703 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7·0)、2% w/v聚乙二醇3350 棒狀晶體簇狀晶體棒狀表3.在室溫下兩天后產生Ab-30晶體之結晶條件結晶篩選結晶條件晶體形態鹽-RX(SALT-RX) 第1號 1.8 Μ 乙酸鈉(pH 7.0)、0.1 M Bis-Tris丙烷 (pH 7) 晶粒或小棒狀晶體鹽-RX第19號 0.7 Μ脫水檸檬酸三鈉、0.1 M Bis-Tris丙烷 (pH 7) 棒狀簇狀晶體鹽-RX第20號 0.7 Μ二水合檸檬酸三鈉、0.1 M Tris(pH 8.5) 棒狀晶體 INDX第17號 1.26 Μ墙酸二氫鈉、0.14 Μ鱗酸氫二鉀棒狀晶體表4.在4°C下兩天后產生Ab-30晶體之結晶條件結晶篩選結晶條件晶體形態鹽-RX第1號 1 ·8 Μ 乙酸鈉(pH 7.0)、0.1 M Bis-Tris丙烷(pH 7) 棒狀晶體鹽-RX第19號 0.7 Μ脫水檸檬酸三鈉、0.1 M Bis-Tris丙烷(pH 7) 晶粒鹽-RX第20號 0.7 Μ二水合檸檬酸三鈉、0.1 MTris(pH 8.5) 棒狀簇狀晶體表5·在室溫下產生Ab-30晶體之其他市售可得之篩選條件結晶篩選結晶條件晶體形態鹽-RX第2號 2·8 Μ 乙酸鈉(pH 7.0)、0.1 M Bis-Tris丙烷(pH 7.0) 未記錄 INDX第24號 2.8 M三水合乙酸鈉，pH 7.0 針狀晶體 INDX第26號 1.1 Μ酒石酸二銨，pH 7.0 棒狀簇狀晶體 INDX第28號 35% v/v他希美特，pH 7.0 菊花狀晶體 INDX第33號 1.1 Μ 丙二酸鈉(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 0.50% v/v Jeffamine ED-2001 試劑(pH 7.0) 未記錄 WIZI第9號 0.1 M乙酸鹽(pH4.5)、1 M(NH4)2HP04 棒狀晶體 WIZI第12號 0.2 M Ca(OAc)2、0.1 M咪唑(pH 8)、20% w/v PEG-1000 未記錄 WIZI第13號 0.1^[二甲胂酸鹽(?>16.5)、1.26]^(1^11)23〇4 未記錄 WIZI第22號 0.1 M Tris(pH 8.5)、10% v/v 2-丙醇棒狀晶體 WIZI第26號 0.1 M CHES(pH 9.5) ' 10% w/v PEG-3000 棒狀晶體 WIZI第29號 0.2 M NaQ、0.1 M CHES(pH 9.5)、10% w/v PEG-8000 未記錄 WIZI第30號 0.2 M NaCn、0.1 M乙酸鹽(pH 4.5)、1.26 M (NH4)2S04 小晶體 WIZI第35號 0.1 M乙酸鹽(pH 4.5)、20% v/v 1,4-丁二醇未記錄 WIZI 第 37!^ 0.1 M咪唑(pH 8)、2·5 MNaCl 未記錄 163325.doc -90- 201247703 WIZI第39號 0.2 M Li2S04、0.1 Μ磷酸鹽檸檬酸鹽(pH 4.2)、 20% w/v PEG-1000 未記錄 WIZI第42號 0·1 MTris(pH7.0)、15%v/v 乙醇針狀晶體 WIZI第46號 0.2 M Ca(OAc)2、0.1 M咪唑(pH 7.0)、10% w/v PEG-8000 小晶體 WIZII 第 10號 0.1 M Tris(pH 8_5)、1 M (NH4)2HP〇4 棒狀晶體 WIZII第 12號 0.2 M Li2S04、0_1 M二甲胂酸鹽(pH 6.5)、30% v/v PEG-400 小晶體 WIZII 第 15 號 0.1 M HEPES(pH 7.5)、1.26 M (NH4)2HP〇4 棒狀晶體 WIZII 第 21 號 0.1 M乙酸鹽(pH 4.5)、35% v/v 2-曱基-2,4-戊二醇小晶體 WIZII 第 22 號 0.1 M咪。坐(pH 8.0)、10% v/v 2-丙醇棒狀晶體 WIZII 第 25 號 0.2 M NaCl Ό.1 M HEPES(pH 7.5) ' 35% v/v 2-甲基-2,4-戊二醇小晶體 WIZII 第 26 號 0.1 M CHES(pH 9.5)' 30% v/v PEG-400 小晶體 WIZII 第 27 號 0.2 M MgCl2、0.1 M二曱胂酸鹽(pH 6.5)、10% w/v PEG-3000 棒狀晶链 WIZII 第 30 號 0.2 M Zn(OAc)2、0.1 M咪唑(pH 8.0)、20% v/v 1，4-丁二醇小晶體 WIZII 第 32 號 0.1 M Tris(pH 8.5) > 20% w/v PEG-1000 小晶體 WIZII 第 38 號 0.2 M Li2S04、0.1 M乙酸鹽(pH 4.5)、2.5 M NaCl 小晶體 WIZII 第 42 號 0.2 M NaCl Ό.1 M HEPES(pH 7.5)' 30% v/v PEG-400 棒狀晶體 WIZIII 第 22 號 0.1 MTris(pH 8.5)、20% v/v 乙醇針狀晶體 WIZIII 第 25 號 10% w/v PEG 8000 ' 10% w/v PEG 1000 小晶體 WIZIII 第 28 號 0.1 M HEPES(pH 7.5) ' 70% v/v MPD 小晶體 WIZIII 第 29 號 0.1 M Tris(pH 8.0)、40% v/v MPD 小晶體 WIZIII 第 35 號 0· 16 M 乙酸鈣、0.08 M二曱胂酸鹽(pH 6·5)、4.40/〇 w/v PEG 8000、20% v/v甘油棒狀晶體 WIZIII 第 38 號 2% v/v 二噁烷、0.1 M 檸檬酸鹽(pH 5.5)、15% w/v PEG 10,000 小晶體 WIZIII 第 39 號 0.1 M HEPES(pH 7.5)' 20% v/v Jeffamine M-600 棒狀晶體 WIZIII 第 40 號 0·1 M Bicine(pH 9.0)、10% v/v MPD 棒狀晶體 WIZIII 第 41 號 0.2 M氣化鈣、0.1 M HEPES(pH 7_5)、28% v/v PEG 400 小晶體 WIZIII 第 42 號 0.2 M硫酸鋰、0·1 M Tris(pH 8.5)、30% w/v PEG 4000 小晶體 WIZIII 第 46 號 0.2 M磷酸二氫銨、0.1 M Tris(pH 8.5)、50% v/v MPD 小晶體 WIZIII 第 58 號 0.1 M HEPES(pH 7.5) ' 20% w/v PEG 10,000 小晶體 WIZIV 第 13 號 0.8 M丁二酸，pH 7.0 棒狀晶體 WIZIV 第 14號 40% (v/v)PEG 400、0.1 M Tris鹼/鹽酸(pH 8.5)、 0.2 M硫酸鋰棒狀晶體 WIZIV 第 26 號 10% (w/v) PEG 2000MME、0.1 M 乙酸鈉/乙酸 (pH 5.5)、0.2 M硫酸銨棒狀晶體 163325.doc ·91· 201247703 WIZIV 第 31 號 20% (w/v)聚丙烯酸5100、0.1 M HEPES/氫氧化鈉(pH 7.0)、〇.〇2 Μ氯化鎂棒狀晶體 WIZIV 第 33 號 0.8 Μ碟酸氫二钟、o.l M HEPES/氣氧化納(pH 7.5)、0.8 Μ峨酸納棒狀晶體 CS-CRYO 第 36 號 0.065 Tris-鹽酸鹽(pH 8.5)、5.2% w/v聚乙二醇 8,000、35%甘油棒狀晶體 CS-CRYO 第 46 號 0·16 Μ水合乙酸鈣、〇·〇8 Μ三水合二曱胂酸鈉 (pH6.5)、14.4°/〇w/v聚乙二醇8,000、20°/〇甘油針狀晶體 PPT33%第 3號 0.66 Μ硫酸銨、0,33% v/v MPD、0.1 Μ HEPES(pH 7.5) 棒狀晶體 PPT33% 第 4號 0.66 Μ硫酸銨、1.65% v/v PEG 400、0.05 Μ硫酸鎂、0.1 M Tris鹼(pH 8.5) 針狀晶體 PPT33% 第 1〇號 6.6% v/v甘油、0.825 Μ磷酸二氫鉀/填酸氩二鈉 (pH 7.5) 棒狀晶體 PPT33% 第 13號 1.65% v/v異丙醇、0.66 Μ檸檬酸銨/捧檬酸(pH 6.5) 棒狀晶體 PPT33% 第 14 號 1.65% v/v PEG 400、0.66 Μ檸檬酸銨/棒檬酸(pH 7.5) 棒狀晶體 PPT33% 第 17號 0.561 硫酸鋰、2.24% v/v MPD、0.085 Μ咪唑(pH 6.5) 針狀晶體 PPT33% 第 18號 0.66 Μ硫酸鋰、0.66% v/v PEG 400、0.1 M Tris 鹼(pH 8.5) 小針狀晶體 PPT33% 第 24 號 6.6% v/v PEG 400、0.165磷酸二氫鉀/破酸氫二鈉(pH 7.5) 棒狀晶體 PPT33% 第 34 號 13.2% v/v異丙醇、4.65% w/v PEG 8000、0.1 Μ 咪唑(pH 6.5) 針狀晶體 PPT33% 第 35 號 6.6% v/v異丙醇、4.95% w/v PEG 3350、0.2 M檸檬酸銨/檸檬酸(pH 7.5) 棒狀晶體 PPT33% 第 39 號 6.6% v/v PEG 400 > 4.95% w/v PEG 1000 Ό. 15 M 磷酸二氫鉀/構酸氫二鈉(pH 6.5) 棒狀晶體 PPT33% 第 41 號 8.25% v/v PEG 400、6/6% w/v PEG 3350、0.1 Μ 氣化鎂、0.1 M Tris鹼(pH 8.5) 棒狀晶體 PPT33% 第 43 號 9.9% w/v PEG 1500、3.3% v/v異丙醇、0.1 M氣化鈣、0.1 M咪唑(pH 6.5) 棒狀晶體 PPT33% 第 45 號 9.9% w/v PEG 1500'2.64% v/v MPD Ό.1 M Tris 鹼(pH 8.5) 小晶體 PPT33% 第 46 號 8.25% w/v PEG 3350、4.95% v/v異丙醇、0.2 M 檸檬酸銨/擰檬酸(pH 4.5) 棒狀晶體 PPT33% 第 48 號 8.25% w/v PEG 3350、4.95% v/v MPD、0.2 Μ硫酸鋰、0.1 M咪唑(pH 6.5) 棒狀晶艘 PPT67% 第 4號 1.34 M硫酸銨、3.35% v/v PEG 400、0.05 M硫酸鎂、0.1 Μ Tris鹼(pH 8.5) 棒狀晶體 PPT67%第 5號 2.613 M氣化鈉、1.34% v/v PEG 400、0.1 M 氯化鎂、0.1 Μ乙酸鹽(pH 5.5) 棒狀晶體 163325.doc ·92· 201247703 PPT67% 第 9號 1.34% v/v PEG 400、1.34 Μ磷酸二氫鉀/碌酸氫二鈉(pH 6.5) 棒狀晶鱧 PPT67%第31號 20.1% v/v MPD、5.36% w/v PEG 8000、0.5 Μ氯化鈉、0.1 M Tris鹼(pH 8.5) 棒狀晶體 PPT67% 第 35 號 13·4% v/v異丙醇、10.05% w/v PEG 3350、0.2 Μ 檸檬酸銨/檸檬酸(pH 7.5) 棒狀晶體 PPT67% 第 39 號 13.4% v/v PEG 400、10.05% w/v PEG 1000、0.15 M磷酸二氫鉀/磷酸氫二鈉(pH 6.5) 棒狀晶體表6.在下產生Ab-30晶體之其他市售可得之篩選條件結晶篩選結晶條件晶鱧形態 INDX第17號 pH 5.6 ’ 1.26 Μ磷酸二氫鈉、0.14 Μ磷酸氫二鉀未記錄 INDX第26號 1.1 Μ酒石酸二銨，pH 7.0 小晶體 INDX第28號 35% v/v他希美特，pH 7.0 小晶體 INDX第33號 1.1^1丙二酸鈉(?117.0)、0.1141^£5肿7.0)、 0.50% v/v Jeffamine ED-2001 試劑(pH 7.0) 小晶體 WIZI第2號 0.2 M Naa、0.1 M HEPES、10% v/v 2-丙醇小晶體 WIZI第9號 0.1 M乙酸鹽(ρΗ4·5)、1 M(NH4)2HP〇4 棒狀晶體 WIZI第13號 0.1^1二曱胂酸鹽挪6.5)、1.2614(1^)23〇4 未記錄 WIZI第18號 0.2 M NaCl、0.1 M咪》坐(pH 8)、1 M酒石酸鉀/納小晶體 WIZI第22號 0.1 M Tris(pH 8.5)、10〇/〇 v/v 2-丙醇 ‘狀晶體 WIZI第25號 0.2 M MgCl2、0.1 M Tris(pH 8.5)、30% v/v PEG-400 小晶體 WIZI第34號 0·1 M咪唑(pH 8)、1 M (NH4)2HP04 小晶體 WIZI第35號 0.1 M乙酸鹽(pH4.5)、20% v/v 1,4-丁二醇未記錄 WIZI第37號 0.1 M咪唑(pH 8)、2.5 MNaCl 未記錄 WIZI第40號 0.2 M Ca(OAc)2、0.1 M MES(pH 6.0)、10% v/v 2-丙醇小晶體 WIZI第42號 0.1 M Tris(pH 7.0)、15% v/v 乙醇針狀晶體 WIZI第43號 0.1 M磷酸鈉/鉀(pH 6.2)、35% v/v 2-曱基-2,4-戊二醇未記錄 WIZI第44號 0.2 M Ca(OAc)2、0.1 M 乙酸鹽(pH 4.5)、30% v/v PEG-400 未記錄 WIZI第46號 0.2 M Ca(OAc)2、0.1 M咪唑(pH 7.0)、10% w/v PEG-8000 小晶體 WIZII第5號 0.2 M NaCl Ό.1 M HEPES(pH 7.5) > 20% v/v 1,4-丁二醇未記錄 WIZII第6號 0.2 M Li2S04、0.1 M鱗酸鹽-棒檬酸鹽(pH 4.2)、 10% v/v 2-丙醇未記錄 WIZII 第 10號 0.1 M Tris(pH 8.5)、1 Μ (NH4)2HP〇4 小晶體 WIZII第 13號 0.2 M Li2S04、0.1 M檸檬酸鹽(pH 5·5)、15% v/v 乙醇小晶體 WIZII 第 14號 0.2 M Naa、0.1 M磷酸鈉/鉀(pH 6.2)、20% w/v PEG-1000 棒狀晶體 163325.doc •93· 201247703 WIZII 第 17 號 0.2 M MgCl2 Ό.1 M Tris(pH 7.0) ' 2.5 M NaCl 小晶體 WIZII 第 20 號 0.2 M Zn(0Ac)2、0.1 M MES(pH 6.0)、15% v/v 乙醇小晶體 WIZII 第 21 號 0.1 M 乙酸鹽 &114.5)、350/〇乂/^2-曱基-2,4-戊二醇小晶體 WIZII 第 22 號 0.1 Μ咪嗤(pH 8.0)、10% v/v 2-丙醇針狀晶體 WIZII 第 23 號 0.2 M MgCb、0.1 M HEPES(pH 7·5)、15% v/v 乙醇小晶體 WIZII 第 27 號 0.2 M MgCl2'0.1 M二曱胂酸鹽(pH 6.5)、10% w/v PEG-3000 棒狀晶體 WIZII 第 29 號 0.2 M NaCl ' 0.1 M CHES(pH 9.5) ' 1.26 M (NH4)2S〇4___ 小晶體 WIZII 第 33 號 0.2 M NaC卜 0.1 M檸檬酸鹽(pH 5.5)、1 M (NH4)2S〇4__ 小晶體 WIZII 第 36 號 0.2 M NaQ、0.1 M磷酸鹽-棒檬酸鹽(pH 4.2)、 10% w/v PEG-3000 小晶體 WIZII 第 45 號 0.1 M MES(pH 6.0)、1.26 M (NH4)2S04 棒狀晶體 WIZII 第 46 號 0·2 M NaCl、0.1 M咪唑(pH 8.0)、1 M (NH4)2HP〇4 小晶體 WIZII 第 48 號 0.1 M MES(pH 6.0)、1 M酒石酸斜/納小晶體 WIZIII 第 8號 0.2 M硝酸鉀、20% w/v PEG 3350 棒狀晶體 WIZIII 第 22 號 0.11^1'1^〇5118.5)、20%乂/乂乙醇針狀晶體 WIZIII 第 23 號 2% v/v二噁烷、0.1 M Bicine(pH 9.0)、10% w/v PEG 20,000 小晶體 WIZIII 第 24 號 0.1 M乙酸鈉(pH 4.6)、2 1^硫酸銨小晶體 WIZIII 第 27 號 0.2 M 氮化鎂、0.1 M HEPES(pH 7·5)、30% v/v PEG 400 小晶逋 WIZIII 第 32 號 0.04 M磷酸二氫鉀、16% w/v PEG 8000、20% v/v 甘油小晶體 WIZIII 第 33 號 0.1 M MES(pH 6.5)、1.6 M硫酸鎂小晶體 WIZIII 第 40 號 0.1 M Bicine(pH 9.0) ' 10% v/v MPD 棒狀晶體 Peg-離子(Peg-Ion) 第1號 0.2 M 氟化鈉、20% w/v PEG 3,350(pH 7.3) 小晶體 Peg-離子第2號 0.2 M氟化鉀、20% w/v PEG 3,350(pH 7.3) 小晶體 Peg-離子第10號 0.2 M碘化鈉、20% w/v PEG 3,350(pH 7.0) 小晶體 Peg-離子第11號 0.2 M碘化鉀、20% w/v PEG 3,350(pH 7.0) 小晶體 Peg-離子第12號 0.2 M碘化銨 ' 20% w/v PEG 3,350(pH 6.2) 小晶體 Peg-離子第13號 0.2 M硫氟酸鈉、20% w/v PEG 3,350(pH 6.9) 小晶體 Peg-離子第14號 0.2 M硫氰酸鉀、20% w/v PEG 3,350(pH 7.0) 小晶體 Peg-離子第21號 0.2 M 甲酸鈉、20% w/v PEG 3,350(pH 7.2) 小晶體 Peg-離子第22號 0.2 M 甲酸鉀、20% w/v PEG 3,350(pH 7.3) 小晶體 Peg-離子第23號 0.2 M 甲酸銨、20% w/v PEG 3,350(pH 6.6) 小晶體 CS-CRYO 第 36 號 0.065 Tris鹽酸鹽(pH 8.5)、5.2% w/v聚乙二醇 8,000、35%甘油棒狀晶體 163325.doc -94- 201247703 表7.在室溫下產生Ab-30晶體之其他結晶條件結晶篩選結晶條件晶體^ I GRAS第1號 19.90%異丙醇、〇.〇2 Μ峨Si鈉-鉀，pH 7.5 小晶體 - GRAS第2號 45.39%異丙醇小晶體 ' GRAS第50號 0.40 Μ檸檬酸鈉、〇.〇6 M Tris-HCI(pH 7.5)、 2.36%甘油針狀晶體晶體、塊狀晶艚 GRAS第53號 46.10%乙醇、0.03 Μ乙酸鈉(pH 4.5)、4.94% 甘油小晶體 GRAS第54號 43.29%乙醇、〇.〇1〇/。吐溫-80 小晶~-- GRAS第58號 49.65%異丙醇、〇.〇6 M Tris-HCl(pH 6.5) 小晶體 GRAS第65號 33.74%異丙醇、0.06Μ麩胺酸(pH6.5) 小晶體 GRAS第67號 39_35%異丙醇、〇.〇31^乙酸納(?114_5)、0.01]^ EDTA 小晶體 GRAS第68號 38.05%異丙醇、〇.〇2 Μ磷酸鈉-鉀(pH 7.5) 小晶體 GRAS第70號 1.60 Μ乙酸納、3.41%乙醇針狀晶體 ~ GRAS第74號 0.29 Μ檸檬酸鈉、〇.〇8 Μ磷酸鈉-鉀(pH 7.5) 針狀晶體、塊狀晶體 GRAS第78號 1.82 Μ乙酸^ 針狀晶體 GRAS第81號 13.29%乙醇、0.01%吐溫-80 小晶體 GRAS第82號 0.71 Μ檸檬酸鈉、〇.〇1 Μ組胺酸(pH 5.5)、 6.29%甘油小晶體 GRAS第83號 2.04 Μ 乙酸鈉、〇·〇7 MTris-HCl(pH 8.5) 小針狀晶體 GRAS第85號 20.18%異丙醇、o.oi μ組胺酸(pH 5.5)、0.09 Μ 磷酸鈉-鉀小針狀晶體 GRAS第88號 12.78%乙醇、〇.〇5 Μ磷酸鈉-鉀(pH 5.5)、 0.01% 吐溫-80 小針狀晶體 GRAS第96號 0.38 Μ檸檬酸鈉、〇.〇3 Μ乙酸鈉(pH 6.5)、 0.01 % 吐溫-20 針狀晶體、塊狀晶體表8.在4°C下產生Ab-30晶體之其他結晶條件結晶篩選結晶條件 GRAS第4號 Ο·79 Μ摔檬鹼鈉、〇.〇丨μ組胺酸(pH 6.5) GRAS第5號 39.39%異丙醇 ' 〇·8 μ Tris-HCl(pH 7.5) GRAS第1〇號 1.9 Μ乙酸鈉' 〇·〇5 μ磷酸鈉-鉀(pH 7.5)、7.07%異丙醇 GRAS第11號 0-96M填酸鈉-卸、〇.01 MEDTA、1.86%甘油 GRAS第12號 0·96M磷酸鈉-卸、0.01 MEDTA、1.86%甘油 GRAS第15號 18.90% 乙醇、0.02 M EDTA GRAS第16號〇·41 M檸檬酸鈉、〇·10 M填g曼納·斜(pH 7.5)、4.12%甘油 GRAS第17號 1·77 Μ乙酸鈉、6.00®/。嚴糖、0.01%吐溫-80 GRAS第18號 1.97 Μ乙酸鈉 GRAS第22號 2.31 Μ乙酸鈉、〇·〇5 μ磷酸鈉-鉀(pH 7.5) GRAS第24號 1-431^磷酸鈉-鉀、〇.03]^棒檬酸納^1^.5)、4.63%甘油 I63325.doc •95- 201247703 GRAS第50號 0.40 Μ檸檬酸鈉、〇_〇6 MTris-HCl(pH 7.5)、2.36%甘油 GRAS第54號 43.29%乙醇、0.01%吐溫-80 GRAS第57號 0.76 Μ檸檬酸鈉、〇.〇1 Μ檸檬酸鈉(pH 4.5)、0.02 M EDTA GRAS笫60號 1.77Μ磷酸鈉-鉀 GRAS第64誕 0.51 M NaQ、0.06 Μ檸檬酸鈉(pH 7.5) GRAS第66號 12.13%異丙醇、9.21%乙醇、9.24%甘油 GRAS第70號 1.60M乙酸鈉、3.41%乙醇表8·在室溫下於索引第36號及添加劑（鹽）下產生Ab-30晶體之其他結晶條件結晶篩選結晶條件晶體形態 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2%w/v聚乙二醇3350、10mM乙酸銨棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2%w/v聚乙二醇3350、lOmM二水合乙酸鋰棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2%w/v聚乙二醇3350、lOmM四水合乙酸錢棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2%w/v聚乙二醇3350、lOmM乙酸鋅棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2%w/v聚乙二醇3350、lOmM氣化鎂棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2°/〇w/v聚乙二醇3350、lOmM氣化辞棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2%w/v聚乙二醇3350、lOmM甲酸鎂棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2%w/v聚乙二醇3350、lOmM硝酸鎂棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7·〇)、 2%w/v聚乙二醇3350、lOmM硫酸鎂棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2%w/v聚乙二醇3350、i〇mM硫酸鋅棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2%w/v聚乙二醇3350、lOmM乙酸妈、lOmM乙酸録棒狀晶體 —一’ 一表9·在室溫下使用索引第36號及添加劑（胺基酸）產體之其他結晶條件生Ab-30晶晶體形態結晶篩選結晶條件 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 2%w/v聚乙二醇3350、lOmM精胺酸棒狀晶體棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 2% w/v聚乙二醇3350、20 mM精胺酸 163325.doc •96- 201247703 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、40 mM精胺酸棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、80 mM精胺酸棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、100 mM精胺酸棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7·0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、10 mM半胱胺酸棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、20 mM半胱胺酸棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、40 mM半胱胺酸棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0·1 M HEPES(pH 7·0)、 2% w/v聚乙二醇3350、8〇 mM半胱胺酸 ¥狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、100 mM半胱胺酸棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、10 mM甲硫胺酸棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、20 mM曱硫胺酸棒狀晶體 INDX第36號 15〇/〇 v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、40 mM甲硫胺酸 4狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、80 mM曱硫胺酸棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7·0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2%〜/乂聚乙二醇3350、10〇111]^甲硫胺酸榛狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、10 mM脯胺酸棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、— 2% w/v聚乙二醇3350、20 mM脯胺酸棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、4〇 mM脯胺酸棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2°/〇w/v聚乙二醇3350、80mM脯胺酸棒狀晶體 INDX第36號 150/〇 v/v他希美特(pH 7 0)、01 μ HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、100 mM脯胺酸 ‘狀晶體表10.在室 AB-30晶體戈溫下使用索引第36號及添加劑（低溫保護劑）產生二其他結晶條件結晶篩選結晶條件晶體形態 INDX第36號 15°/。v/v他希美特(pH 7 0)、01 M HEPES(pH 7 〇)、 2% w/v聚乙二醇3350、1%乙二醇 _狀晶體 -97- 163325.doc 201247703 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、〇·1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、2%乙二醇棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7·0)、 2% w/v聚乙二醇3350、3%乙二醇棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、〇·1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、4%乙二醇棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、5%乙二醇棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、6%乙二醇棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、7%乙二醇棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350'8%乙二醇棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、9%乙二醇棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、10%乙二醇棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7·0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、15%乙二醇棒狀晶鱧 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、20%乙二醇棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、25%乙二醇棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7·0)、 2% w/v聚乙二醇3350、3〇%乙二醇棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希 ^^(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、4〇〇/0乙二醇棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、1%甘油棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0·1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、2%甘油棒狀晶體 INDX第36號 150/〇 v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、3%甘油棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0) ' 0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、4%甘油棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、〇·1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、5%甘油棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、〇·1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、6%甘油棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、〇.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、7%甘油棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7·0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、8%甘油棒狀晶體 •98- 163325.doc 201247703 INDX第36號 15¼ v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、9%甘油棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、10%甘油棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2°/〇w/v聚乙二醇3350、1°/。蔗糖棒狀晶癃 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、2%蔗糖棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7·0)、〇·ΐ M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、3%蔗糖棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、4%蔗糖棒狀晶體 INDX第36號 15¼ v/v他希美特(pH 7·0)、〇·1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、5%蔗糖棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7_0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、6%斧糖棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0,1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、7%蔗糖棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、8%蔗糖棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、9%蔴糖棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、10%薄糖棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7·〇)、o.i μ HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、1%海藻糖棒狀晶體 INDX第36號 15/〇 v/v他希美特(pH 7·0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2°/〇 w/v聚乙二醇3350、2%海藻糖棒狀晶體 INDX第36號 i：>u/〇 v/v他布美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、3%海藻糖棒狀晶體 INDX第36號 i；r/〇 v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、4%海藻糖棒狀晶體 INDX第36號 15y〇 ν/ν他希美特(pH 7_0)、〇·1 M HEPES(pH 7.0) 2% w/v聚乙二醇3350、5。/〇海藻糖棒狀晶體 INDX第36號 i；>u/〇 v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% Wv聚乙二醇3350、6%海藻糖棒狀晶體 INDX第36號 13% v/v他希美特(pH 7·〇)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、7。/〇海藻糖棒狀晶體 INDX第36號 i：>u/。V/V他布吳特(pH 7·0)、〇·1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、8%海藻糖棒狀晶體 INDX第36號 v/v他希美特(pH 7_0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、9%海藻糖棒狀晶體 INDX第36號 1；5/〇 v/v他希矣特(pH 7.0)、〇.1 M HEPES(pH 7.0)、 20/〇 w/v聚乙二醇3350、10%海藻糖棒狀晶體 -99· 163325.doc 201247703 INDX第36號 v” 似叩夭时/ υ)、〇] M HEpES&H 7 2% w/v聚乙二醇3350、15%沲薄梓棒焱晶體 INDX第36號 15/〇 v/v他希美特(pH 7.0)、〇.i μ HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、20%沲菹嫵棒狀晶體 INDX第36號 15/〇 v/v他希美特(pH 7.0)、〇·ΐ μ HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、1%木糖醇棒狀晶體 INDX第36號 15/。v/v他希美特(pH 7·0)、〇·ΐ M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、2%太撼哮棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、O.l M HEPES(pH 7.0)、 2¼ w/v聚乙二醇3350、3%木線醢棒狀晶體 INDX第36號 b/o v/v他布美特(pH 7.0)、0.1 μ HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、4%木糖醢棒狀晶體棒狀晶體 INDX第36號 15/〇 v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 μ HEPES(pH 7.0) 2% w/v聚乙二醇3350、5%木糖醇 INDX第36號 15/〇 v/v他希美特(pH 7.0)、〇.1 μ HDEPESCpH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、6%木糖薛棒狀晶體棒狀_晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)「 2% w/v聚乙二醇3350、7%木糖醇 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、8%木糖醆棒狀晶體 INDX第36號 I5/〇 v/v他希美特(pH 7.0)、〇·1_ M HEPES(pH 7·0)、 2% w/v聚乙二醇3350、9〇/0木糖醇棒狀晶體 INDX第36號 15/。v/v他希美特(pH 7·ϋ)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2¼ w/v聚乙二醇3350、10%木糖酿棒狀晶體棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.U)、0.1 M HEPES(pH 7.0)T~ 2% w/v聚乙二醇3350、15%木糖醢 INDX第36號 15/。v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、20%木糖醢棒狀晶體表11.在室比不同）產ί — -一 J 溫下使用索引第36號及添加劑（聚山梨醇_ tAb-30晶體之其他結晶條件指20之百分結晶篩選結B日條件晶擁开名能 INDX 第 36^ 15/〇 v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、20/。 w/v聚乙二醇3350、0.05%聚山梨醇酯20 BB ί<£5· 棒狀晶體 INDX第36號 15/〇 v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、2% w/v聚乙二醇3350、0.10%聚山梨醇酷20 棒狀晶體 INDX第36號 15/。v/v他希美特(pH 7.0)' 0.1 M HEPES(pH 7.0)、2% w/v聚乙二醇3350、0.15%聚山梨醇酯20 棒狀晶體 INDX 第 36'號 15/〇 v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、2% w/v聚乙二醇3350、0.20%聚山梨醇酯2〇棒狀晶體 INDX第36號 15/〇 v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、2% w/v聚乙二醇3350、0.25%聚山梨醇酯20 棒狀晶體 •100· 163325.doc 201247703 INDX第36號 15^V/V他希美特(pH 7·0)、丽 7: % w/v聚乙二醇3350、〇·3〇%聚山齟气啼π 櫸狀晶體 INDX第36號 l5%y/v%WWmi 7.0) ^ 〇.rMiffipES(pH7：0) ^ 2% w/v聚乙二醇3350、〇·35%聚山犁岬酯邛棒狀晶體 INDX第36號 1 他希美特(pH 7 〇)、〇 j M 取四 H 、2% w/v聚乙二醇3350、0.40%聚山靱棒狀晶體 INDX第36號 l：>% ^/v他希美特(pH 7 0)、0 ] μ 取卿肿 7 〇)、2% w/v聚乙二醇3350、〇 45%聚山梨棒狀晶體 INDX第36號 ί 他希美特(pH 7 〇)、〇 a M HEpE H 、2% w/v聚乙二醇335〇、〇5〇%聚山怼哼 —_ 丨—— 棒狀晶體可在放大條件下使各種形態之Ab_3〇晶體生長，其中將液體調配物中之抗體添加至一定體積之已知結晶試劑中且儲存於密封容器中。可在此等條件下，於室溫或冷藏溫度（4 °C ) 下使Ab-30晶體生長不到24小時，且已經展示產生緩慢釋放及高產率。在表1至11中所提供之一些條件下產生之Ab_3 〇晶體已經展示可經受在4°C下儲存超過6個月之時段，且可經受在室溫（RT)下儲存21個月（索引第3 6號及不同濃度之低溫保護劑）、22個月（索引第36號及胺基酸）、32個月（索引第36號及鹽）及25個月（索弓丨第36號及不同百分比之聚山梨醇醋20)之時段。產生該等Ab-30晶體之例示性結晶條件及在4。(：及室溫下之儲存時間分別提供於下表12及13中。表12. 結晶篩選結晶條件在4°C下之 WIZI第22號 0.1 M Tris(pH 8.5)、10% v/v 2-丙醇 9個月一-一一-一 WIZI第9號〇·1 Μ乙酸鹽(pH 4.5)、1 M (NH4)2HP〇4 9個月一^一 WIZI第42號 0-lMTris(pH7.0)、15%v/vL, 10個月 __^— WIZIII 第 40 號〇·1 M Bicine(pH 9.0) ' 10% v/v MPD 10個月 ^ 163325.doc -101 - 201247703 表13. 結晶篩選在室溫下之結晶條件在室溫下之儲存時間 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.〇)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v 聚乙二醇3350 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、3%乙二醇 21個月 INDX 第 36k 15% v/v他希-美特(ρΗ 7·〇)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、4。/。乙二醇 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(ρΗ 7·〇)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、5%乙二醇 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、〇·1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、9%乙二醇 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、15%乙二醇 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、25%乙二醇 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(ρΗ 7·〇)、o.l M HEPES(pH 7.0)、 2°/«^/^聚乙二醇335〇、3〇〇/0乙二醇 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、35%乙二醇 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、40%乙二醇 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、1%甘油 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、oj μ HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、2%甘油 21個月 INDX第3 6旎 150/〇 v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、3%甘油 21個月 INDX第3 6號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、4%甘油 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、5%甘油 21個月 INDX第36號 15°/〇 v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、6%甘油 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、8%甘油 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2°/〇w/v聚乙二醇3350、9%甘油 21個月 INDX第36號 150/〇 v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、10%甘油 21個月 INDX第36旎 150/。v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、1 %拜糖 21個月 •102· 163325.doc 201247703 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、2%蔗糖 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、3%蔗糖 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、4%蔗糖 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、5%蔗糖 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0_1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、6%蔗糖 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、7%蔗糖 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、8%蔗糖 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、10%蔗糖 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7_0)、0.1 M HEPES(pH 7_0)、 2% w/v聚乙二醇3350、1%海藻糖 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、2%海藻糖 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、3%海藻糖 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、4%海藻糖 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、5%海藻糖 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、6%海藻糖 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、7%海藻糖 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、8%海藻糖 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、10%海藻糖 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、15%海藻糖 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、20%海藻糖 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、1%木糖醇 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、2%木糖醇 21個月 INDX第36號 15。/。v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7,0)、 2°/〇 w/v聚乙二醇3350、3%木糖醇 21個月 163325.doc -103- 201247703 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、4%木糖醇 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2%w/v聚乙二醇3350、5°/〇木糖醇 21個月 INDX第36嬈 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、7%木糖醇 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、9%木糖醇 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7·0)、 2% w/v聚乙二醇3350、15%木糖醇 21個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、20 mM精胺酸 22個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、80 mM精胺酸 22個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、80 mM半胱胺酸 22個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0) ' 0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、100 mM半胱胺酸 22個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、10 mM甲硫胺酸 22個月 INDX第36號 150/〇 v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、40 mM甲硫胺酸 22個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、80 mM甲硫胺酸 22個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、100 mM甲硫胺酸 22個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2°/〇w/v聚乙二醇3350、10mM脯胺酸 22個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0；)、 2°/〇 w/v聚乙二醇3350、20 mM脯胺酸 22個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、40 mM脯胺酸 22個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0·1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、80 mM脯胺酸 22個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(p_ri 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、0.05%聚山梨醇酯2〇 25個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、0.10%聚山梨醇酯2〇 25個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0) ' 0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、0.15%聚山梨醇酷州 25個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0·1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、0.20%聚山梨醇酷：>〇 · 25個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、0.25%聚山梨醇酷川 25個月 -104- 163325.doc 201247703 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、0.30%聚山梨醇酯2〇 25個月 INDX承36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、0.35%聚山梨醇酯2〇 25個月 INDX涑36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、(Μ μ HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、0.40%聚山梨醇酯2〇 25個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7_0)、0·1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、0.45%聚山梨醇酯20 25個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、0.50%聚山梨醇酯2〇 25個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v 聚乙二醇3350 26個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0,1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、10 mM乙酸鋅 31個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEfES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、10 mM四水合乙酸鎮 32個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、10 mM硝酸鎂 32個月 INDX第36號 15。/<^/丫他希美特(?117.0)、0.11^11£?£3〇>117.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、10 mM硫酸鎂 32個月 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v聚乙二醇3350、10 mM硫酸鋅 32個月 PEG篩選索引第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、 2% w/v 聚乙二醇3350 4年零3個月 -盤最初於 4。(：下設立且最後6個月儲存於室溫下上述實例表明Ab-30可在多種結晶條件下結晶，但在所測試之每一條件下並非皆形成晶體。在多種不同之市售（亦即 Hampton Research，Emerald Bioscience)且專有之篩選中測試約2000種結晶條件，但僅約775種條件產生Ab-30晶體。實例2 : Ab-30之分批結晶在1.5mL微量離心管中’將50μΙ/之75.7mg/mLAb-30與 50 μί結晶條件（GRAS篩選、索引篩選、wizard I篩選、 Wizard II篩選及Wizard III篩選）混合，產生總共1〇〇 pL之批料體積。將40 pL Ab-30(75.7 mg/mL)與20 pL低離子濃度 -105- I63325.doc 201247703 篩選緩衝液及5〇 gL 4% PEG-3350混合，產生總共110 pL批料體積。所用之結晶條件係如下表14中所述。表14· 結晶綷選結晶條件 %效率形態 GRAS 1 19.9%異丙醇、〇.〇2 Μ磷酸鈉-鉀，pH 7.5 85.783 橢球狀晶體 GRAS 2 45.39%異丙醇 N/A N/A GRAS 50 0.40 Μ檸檬酸鈉、〇.〇6 Μ TRIS-HCL(pH 7.5)、2.36°/。甘油 70.012 橢球狀晶體 GRAS 53 46.10%乙醇、0.03 Μ麩胺酸(pH 4.5)、 4.94%甘油 N/A N/A GRAS 54 43.29%乙醇、0.01%吐溫-80 N/A N/A GRAS 58 49.65%異丙醇、〇.〇6 M TRIS-HCL(pH 6.5) N/A N/A GRAS 65 33.74%異丙醇、0.06 Μ 麩胺酸(pH 6.5) N/A N/A GRAS 67 39.35%異丙醇、0.03 Μ麩胺酸(pH 4.5)、0.01 M EDTA N/A N/A GRAS 68 38.05%異丙醇、0.02 Μ磷酸鈉-鉀(pH 7.5) 77.647 橢球狀晶體 GRAS 70 1.60 Μ乙酸鈉' 3.41%乙醇 69.462 橢球狀晶體 GRAS 74 0.29 Μ檸檬酸鈉、〇.〇8 Μ磷酸鈉-鉀 (pH 7.5) 73.229 橢球狀晶體 GRAS 78 1.82 Μ乙酸鈉 73.561 橢球狀晶體 GRAS 81 13.29%乙醇、0.01 %吐溫-80 N/A N/A GRAS 82 0.71 Μ檸檬酸鈉、〇.〇1 Μ組胺酸(pH 5·5)、6.29%甘油 82.633 橢球狀晶體 GRAS 83 2_04 Μ 乙酸鈉、0.07 M TRIS-HCL(pH 8.5) 67.999 橢球狀晶體 GRAS 85 20.18%異丙醇、0.01 Μ組胺酸(pH 5.5)、0.09 Μ碟酸鈉-鉀 N/A N/A GRAS 88 12.78% 乙醇、0.05 Μ填酸納-鉀、0.01% 吐溫-80 72.536 橢球狀晶體 GRAS 96 0.38 Μ檸檬酸鈉、0.03 Μ乙酸鈉(pH 6·5)、0.01%吐溫-20 75.029 橢球狀晶體 INDX第17號 1.4單水合磷酸二氫鈉/填酸氫二鉀(pH 5.6) 53.209 棒狀晶體 INDX第18號 1.4單水合磷酸二氫鈉/填酸氫二鉀(pH 6.9) 79.667 棒狀晶體 INDX笫22號 0.8 Μ丁二酸，pH 7.0 82.371 棒狀晶體 INDX笛24號 2.8三水合乙酸鈉，pH 7.0 76.762 棒狀晶體 INDX笫26號 1.1 Μ酒石酸二銨，pH 7.0 N/A N/A INDX第28號 35% v/v他希美特，pH 7.0 83.178 棒狀晶體 163325.doc • 106 - 201247703 INDX第30號〇1 Μ氣化鈉、〇.1 M BIS-TRIS(pH 6.5)、1.5 Μ硫酸敍 70.106 棒狀晶體 INDX第31號 0.8 Μ四水合酒石酸鉀鈉、〇·ι μ Tris(pH 8.5)、0.5% w/v聚乙二醇單甲醚 5,000 79.394 ‘狀晶體 INDX第33號 1.1 Μ 丙二酸鈉(pH 7.0)、0.1 Μ HEPES(pH 7.0)、0.5% v/v Jeffamine ED-2001(pH 7.0) 85.613 棒狀晶體 INDX第34號 1.0丁二酸(pH 7.0)、0·1 M HEPES(pH 7.0)、1% w/v聚乙二醇單曱醚2,000 87.384 棒狀晶體 INDX第35號 1.0 M硫酸録、o.i μ HEPES(pH 7.0)、 0.5% w/v/ PEG-8000 51.844 棒狀晶體 INDX第36號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0) ' 2% w/v PEG-3350 76.235 棒狀晶鱧 INDX 第 36-1 號 15% v/v他希美特(pH 7·0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、2% w/v PEG-3350 52.485 橢球狀晶體 INDX 第 W-2 號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、2% w/v PEG-3350、 10 mM乙酸敍 70.246 微小晶體 INDX 第 36-3 號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0·1 M HEPES(pH 7.0) > 2% w/v PEG-3350 ' lOmM脫水乙酸鋰 66.129 橢球狀晶體 (小） INDX 第 36-4 號 15% v/v他希美特(pH 7·0)、0.1 Μ HEPES(pH 7.0)、2% w/v PEG-3350、 10 mM四水合乙酸鎂 57.306 橢球狀晶體 INDX 第 36-5 號 n% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 Μ HEPES(pH 7.0)、2% w/v PEG-3350、 10 mM乙酸録 50.297 橢球狀晶髗 INDX 第 36-6 號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0)、2% w/v PEG-3350、 lOmM氣化鎂 51.951 k球狀晶體 INDX 第 36-7 號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.0) ' 2% w/v PEG-3350 ' lOmM氣化鋅 48.838 橢球狀晶體 INDX 第 36-8 號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7.G)、2% w/v PEG-3350、 10 mM甲酸鎂 62.074 橢球狀晶體 (小） INDX 第 36-9 號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、〇·ι m HEPES(pH 7.0)、2% w/v PEG-3350、 10 mM硝酸錯 49.246 橢球狀晶體 INDX 第 36-10號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 M HEPES(pH 7,〇)、2% w/v peg-3350、 10 mM硫酸錯 70.490 徙1小晶體 163325.doc •107· 201247703 INDX 第 36-11 號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 Μ HEPES(pH 7·0)、2% w/v PEG-3350、 10 mM硫酸鋅 54.408 橢球狀晶體 INDX 第 36-12 號 15% v/v他希美特(pH 7.0)、0.1 Μ HEPES(pH 7.0)' 2% w/v PEG-3350 > 10 mM乙酸鈣及乙酸辞 64.613 橢球狀晶鱧 WIZI第2號 10% v/v 2-丙醇、0.1 M HEPES(pH 7.5) ' 0.2 Μ NaCl Ν/Α Ν/Α WIZI第9號 1.0 Μ磷酸氫二銨、0.1 Μ乙酸鹽(pH 4.5) 48.48 橢球狀晶體 WIZI第12號 20% w/v PEG-1000、0.1 Μ咪唑(pH 8.0)、0.2 M乙酸約 47.87 橢球狀晶體 WIZI第13號 1.26 Μ硫酸銨、0.1 Μ二甲胂酸鹽(pH 6.5) Ν/Α Ν/Α WIZI第18號 1.0 Μ酒石酸鉀-鈉、0.1 Μ咪唑(pH 8.0) ' 0.2 M NaCl 62.14 橢球狀晶趙 WIZI第22號 10% v/v 2-丙醇、0.1 M Tris(pH 8.5) Ν/Α 棒狀晶體 WIZI第26號 10% w/v PEG-3000、0.1 Μ CHES(pH 9.5) 48.04 棒狀晶體 WIZI第29號 10% w/v PEG-8000 Ό.1 M CHES(pH 9.5)、0.2 M NaCl 87.73 橢球狀晶體 WIZI第30號 1.26 M硫酸銨、0.1 M乙酸鹽(pH 4.5) > 0.2 M NaCl Ν/Α Ν/Α WIZI第35號 20% v/v 1，4-丁二醇、0.1 M 乙酸鹽(pH 4.5) Ν/Α Ν/Α WIZI第37號 2.5 M NaCl ' 0.1 M咪唑(pH 8.0) Ν/Α Ν/Α WIZI第39號 20% w/v PEG-1000、0.1 M磷酸鹽-檸檬酸鹽(pH 4.2)、0.2 M硫酸鋰 Ν/Α Ν/Α WIZI第42號 15% v/v 乙醇、0.1 M Tris(pH 7.0) Ν/Α Ν/Α WIZI第46號 10% w/v PEG-8000、0.1 M咪唑(pH 8.0)、0.2 M乙酸鈣 91.46 橢球狀晶體 WIZII 第 10號 1.0 M磷酸氫二銨、0.1 M Tris(pH 8.5) 49.026 橢球狀晶體 WIZII 第 12號 30% v/v PEG-400、二甲胂酸鹽(pH 6.5)、0.2 M疏酸鋰 59.491 橢球狀晶體 WIZII 第 13號 15% v/v乙醇、0.1 M檸檬酸鹽(pH 5.5)、0.2 M疏酸鋰 Ν/Α Ν/Α WIZII 第 14 號 20% w/v PEG-1000、0.1 M磷酸鈉/鉀 (pH 6.2)' 0.2 M NaCl 90.258 橢球狀晶體 WIZII 第 15 號 1.26 M硫酸銨、0.1 M HEPES(pH 7.5) 64.775 橢球狀晶體 WIZII 第 21 號 35% v/v 2-曱基-2,4-戊二醇、0.1 M乙酸鹽(pH 4.5) Ν/Α Ν/Α WIZII 第 22 號 10% v/v 2·丙醇、0.1 M咪唑(pH 8.0) 80.572 橢球狀晶逋 WIZII 第 25 號 35% v/v 2-曱基-2,4-戊二醇、0.1 Μ HEPES(pH 7.5) ' 0.2 Μ NaCl Ν/Α Ν/Α 163325.doc •108· 201247703 WIZII 第 26 號 30% v/v PEG-400 Ό.1 M CHES(pH 9.5) N/A NM~~- WIZII 第 27 號 10% w/v PEG-3000、0.1 M二甲胂酸鹽 (pH 6.5)、0.2 M氣化鎂 54.811 橢球狀晶體 WIZII 第 30 號 20% v/v 1，4-丁二醇、0.1 Μ咪唑(pH 8.0)、0.2 Μ乙酸鋅 N/A ~n7a~~ WIZII 第 32 號 20% w/v PEG-1000 Ό.1 M Tris(pH 8.5) N/A n/a WIZII 第 37 號 1.0 M 酒石酸斜/鈉、0.1 M Tris(pH 7.0)、0·21^硫酸鋰 74.353 橢球狀晶體 WIZII 第 38 號 2.5 M NaC卜 0.1 Μ 乙酸鹽(pH 4.5)、0.2 M硫酸鋰 N/A N/A WIZII 第 42 號 30% v/v PEG-400 Ό.1 M HEPES(pH 7.5)' 0.2MNaCl 82.982 橢球狀晶體 WIZII 第 43 號 10% w/v PEG-8000、0.1 M Tris(pH 7.0)、0.2 M氣化鎂 91.443 憜球狀晶體 WIZIII 第 13 號 8% w/v PEG-4000、0.1 M 乙酸鈉(pH 4.65) N/A N/A WIZIII 第 22 號 20% v/v乙醇、0.1 MTris(pH 8.5) 51.597 棒狀晶體 WIZIII 第 25 號 10% w/v PEG-100 Ί 0% w/v PEG-8000 N/A N/A WIZIII 第 28 號 70% v/v MPD > 0.1 M HEPES(pH 7.5) N/A N/A WIZIII 第 29 號 40% v/v MPD Ό.1 M Tris(pH 8.0) N/A N/A WIZIII 第 35 號 14.4% w/v PEG-8000、0.8 M二甲胂酸鹽(pH 6.5)、0.16 M 乙酸鈣、20% v/v 甘油 92.195 .贿球狀晶體 WIZIII 第 36 號 30% v/v Jeffamine M-600*(pH 7.0) ' 0.1 M MES(pH 6.5)、0·05 氮化鉋 N/A N/A WIZIII 第 38 號 15% w/v PEG-10,000、0.1 Μ檸檬酸鹽 (pH 5·5)、2% v/v二噁烷 N/A N/A WIZIII 第 39 號 20% v/v Jeffamine M600*(pH 7.0)' 0.1 M HEPES(pH 7.5) N/A N/A WIZIII 第 40 號 10% v/v MPD ' 0.1 M Bicine(pH 9.0) N/A N/A WIZIII 第 41 號 28% w/v PEG-400 Ό.1 M HEPES(pH 7.5)、0.2 M氣化鈣 N/A N/A WIZIII 第 42 號 30% w/v PEG-4000 >0.1 M Tris(pH 8.5)、0.2 M硫酸鋰 N/A N/A WIZIII 第 46 號 50% v/v MPD Ό.1 M Tris(pH 8.5)' 0.2 M氣化敍 N/A N/A WIZIII 第 48 號 20% w/v PEG-10,000、0_1 M HEPES(pH 7.5) N/A N/A LISS第1號 0.5 M氣化鉀、4% PEG-3350 ’ pH 2 N/A N/A LISS第2號 0.05 M檸檬酸、4% PEG-3350，pH 3 N/A N/A LISS第3號 0.05 M梅檬酸、4% PEG-3350，pH 3.5 N/A N/A LISS第4號 0.05 M檸檬酸、4% PEG-3350，pH 4 N/A N/A LISS第5號 0.05 M檸檬酸、4% PEG-3350，pH 4.5 N/A N/A L—----- 163325.doc -109- 201247703 LISS第6號 0.05 Μ掩檬酸、4% PEG_3350，pH 5 87.632 橢球狀晶體 LISS第7號 0 05 Μ檸檬酸、4% PEG-3350 ’ pH 5.5 88.526 棒狀晶體 LISSH8 號 LISS笫9號 0 05 M MES ' 4% FEG-3350 > pH 6 N/A N/A 0 05 M Bis Tris' 4% PEG-3350 > pH 6.5 N/A N/A τ 10號 0 05 M°米嗤、4% PEG-3350，pH 7 78.786 概冰狀晶通 LISS第11號 0.05 M HEPES ' 4% PEG-3350 > pH 7.5 N/A 大量沈澱 LISS第12鉍 Π OS M Tris ' 4% PBG-3350 » pH 8 N/A 大量沈激 T TSS铱13號 0 05 M Tris > 4% PbG-3350 > pH 8.5 N/A 大量沈澱 LTSS第14號 0.05 M甘胺酸、PEG-3350，PH 9 N/A N/A LISS第15號 0.05 M甘胺敏、4% pwi·3350，PH 9·5 N/A 中等沈澱 LISS笫16號 0.05 M甘胺醢、4% PECj-3350 ’ PH 10 N/A 大量沈澱 LISS第Π號 0.05 M填酸氫二鈉、4% PEG·3350， dH 11 . N/A 大董沈殿 LISS第18號 0.05 M填酸氫二鈉、4% PEG_3350， pH 11 N/A 棒狀晶體

Ab-30在室溫下於總共104種條件下分批結晶’顯示出 40%至92%之產率百分比範圍（參見表14)。所有此等條件皆在室溫下藉由懸滴式蒸氣擴散達成晶體命中（hit) ’但其並非皆以分批形式結晶。在104種分批結晶條件當中’僅有8 種條件在第一天於室溫下之產率百分比大於85°/〇 (亦即 INDX 第 34號、WIZ I 第 46號、WIZ II 第 43 號、WIZ II 第 14 號、WIZ III第35號及GRAS 1)。在第一天所遠成之Ab-30晶體最高產率為92.195% (WIZ第35號）。晶體產率基於晶體生長條件而變化。雖然Ab-30在室溫及4°C下皆可結晶，但僅基於在室溫下之結晶效率考慮室溫晶體命中。實例3 : Ab-30之分批結晶、懸浮及溶解研究在室溫下，於1.5 ml微量離心管中將200 μΐ Ab-30(75.7 mg/ml)與200 μ1結晶條件（如下表15中所述）混合。在添加結晶條件後渦旋該管，且視覺上檢查澄清度、乳濁度或沈澱物形成。在第〇天及第1天用裝備有Axi〇cam軟體之蔡司 -110- 163325.doc 201247703 (Zeiss)顯微鏡獲得所測試之各結晶條件之各微量離心管的照片。記錄在各結晶條件下產生之晶體的形態°除研究4 外（基於晶體堆積之晶體溶解’其中在第8天收集晶體）’在第3天收集晶體以進行所有三項溶解速率研究’而與個別條件達到最高產率百分比所花費之時間無關° 以10,000 rpm短暫離心晶體15分鐘且移除上清液且將晶體再懸浮於不同媒劑（如下表1 5中所述）中。在實驗過程期間將微量離心管儲存於室溫下°使用1；乂光譜儀在A28〇 nm下量測產率百分比。在臺式離心機上以10,000 rpm短暫離心微量離心管15分鐘。在水中進行1:100稀釋且在UV光谱儀上讀取A280。表15. 研究編號結晶條件懸浮媒劑形態 1 INDX第36號水橢球狀晶體 INDX第36號 10 mM乙酸鹽、9%蔗糖及 0.004% PS20，pH 5.2 橢球狀晶體 INDX第36號生理食鹽水橢球狀晶體 INDX第36號右旋糖 h橢球狀晶體 INDX第36號 PBS 橢球狀晶體 2 INDX第36號 0.05 M HEPES(pH 7.5) ' 20% PEG-350 橢命狀晶體 INDX第36號 0.05 M HEPES(pH 8.0)、 20% PEG-350 化球狀晶體 INDX第36號 0.05 M HEPES(pH 8.5)、 20% PEG-350 橢球狀晶體 INDX第36號 10 mM麩胺酸鹽、5%山梨糖醇，pH 4.8 橢球狀晶體 INDX第36號 10 mM麩胺酸鹽、5%山梨糖醇，pH 5.0 橢球狀晶體 163325.doc • 111- 201247703 3 WIZIII 第 35 號 PBS 橢球狀晶體 GRAS第88號 PBS 棒狀晶體 WIZI第26號 PBS 棒狀晶體 Peg-離子第1號 PBS 沈澱 GRAS第1號 PBS 橢球狀晶體 (微小） GRAS第82號 PBS 橢球狀晶體 (微小） GRAS第83號 PBS 橢球狀晶體 (微小） 4 INDX 第 36-1 號 PBS 橢球狀晶體 INDX 第 36-2 號 PBS 橢球狀晶體 INDX第36號+10 mM乙酸鈣 PBS 橢球狀晶體 INDX第 36-3 號 PBS 橢球狀晶體 INDX 第 36-4 號 PBS 橢球狀晶體 INDX 第 36-5 號 PBS 橢球狀晶體 INDX 第 36-12 號 PBS 橢球狀晶體 INDX 第 36-6 號 PBS 橢球狀晶體 INDX 第 36-7 號 PBS 橢球狀晶體 INDX 第 36-8 號 PBS 橢球狀晶體 INDX 第 36-9 號 PBS 橢球狀晶體 INDX 第 36-10號 PBS 橢球狀晶體 INDX 第 36-11 號 PBS 橢球狀晶體 5 WIZIII 第 35 號 * 右旋糖橢球狀晶體 GRAS 第 88 號 * 右旋糖棒狀晶體 WIZI 第 26 號 * 右旋糖棒狀晶體 GRAS第1號* 右旋糖橢球狀晶體 (微小） GRAS 第 82 號 * 右旋糖橢球狀晶體 (微小） GRAS 第 83 號 * 右旋糖橢球狀晶體 (微小） WIZIII 第 35 號 ** 右旋糖橢球狀晶體 GRAS 第 88 號** 右旋糖棒狀晶體 WIZI 第 26 號 ** 右旋糖棒狀晶體 GRAS第1號0 右旋糖橢球狀晶體 (微小） GRAS 第 82號** 右旋糖橢球狀晶體 (微小） GRAS 第 83 號 ** 右旋糖橢球狀晶體 (微小） 163325.doc • 112· 201247703 磊禮茗摩及憑孕媒#/ .·在室溫下進行研究1至4之溶解速率實驗。將用星號（*)標記之研究5溶解速率實驗樣品儲存於 4°C下且將用雙星號（**)標記之研究5樣品儲存於3 7°C下。在研九1及2中’ b日體生長條件保持.)·亙定’該條件為Hampton Research索引篩選第36號，且將晶體再懸浮於不同媒劑中以監測晶體溶解速率。之所以選擇索引第36號作為生長條件’是因為其極易於形成晶體。在研究3中，雖然晶體生長條件及形態可變’但針對所有條件’晶體懸浮媒劑（即PB§) 保持一致。

A52SuT(10 mM乙酸鹽、9°/。蔗糖、0.004%聚山梨醇酯20， pH 5.2)、生理食鹽水及pbs在溶解速率方面展示極大差異。水及右旋糖在42天后在相較於T=〇時未展示較大溶解活性。因此，水及右旋糖為洗滌Ab-3 0晶體而不使大量晶體在洗滌步驟期間損失的理想媒劑。低離子濃度篩選緩衝液 (0.05 M HEPES(pH 7.5) > 20〇/〇 PEG-3350 ；〇.〇5 M Tris(pH 8.0)、20/。PEG-3350 ; 0.05 M Tris(pH 8.5)、20。/。PEG-3350) 在一個月期間展示極緩慢之實際上接近於基線的溶解速率。晶體在此等緩衝液中之溶解緩慢的一種可能性可能歸因於晶體由20% PEG-3350覆蓋。1〇 111]^麵胺酸鹽、5%山梨糖醇（pH4.8)及10m]V[甦胺酸鹽、5%山梨糖醇（pH50)在研究1中展示類似於水及右旋糖溶解速率的約丨m g / m 1之溶解速率。A52SUT、生理食鹽水、右旋糖、PBS及10 mM麵胺酸鹽緩衝液為等張及可注射的（參見圖3及4)。邱邀洛庳身邊邀形廣..在研究3中，晶體生長條件及形態 163325.doc -113- 201247703 不同i而針對所有條件，懸浮媒劑（PBS)相同。考慮總共四種不同形態.概球狀晶體、棒狀晶體、沈;殿及微小橢球狀日日體。晶體溶解之毫克/毫升數基於晶體形態而不同，但總體上所有形態遵循相似之溶解模式，#中在第12天達到峰值浴解。基於所#之溶解概《兄，可;寻出結冑：晶體溶解視晶體形態 '晶體大小、晶體生長條件及甚至晶體堆積而定。旧邀溶庳痒邊邀雄癀..在研究4中，晶體生長條件不同，而針對所有條件，晶體形態及懸浮媒劑（PBS)一致。使在索引36以及*同添加劑（1〇邊鹽）十生長。此研究之資料表明，添加劑中之不同陽離子及陰離子對晶體堆積有影響 (圖5A至5F)。在所有添加劑中’鋅鹽展示最小溶解作用，表示可添加鋅以達成持續釋放作用。氣化鋅相較於其他鋅鹽展示最小溶解作用，而硝酸鎮在鎂鹽#中展示最小溶解作用。基於溫度及晶體形態之晶體溶解：在砑％5今、氤馥^ 條件、晶體形態、晶體儲存溫度不同，但懸浮關（右旋糖）針對所有條件保持相同^將晶體再懸浮於右旋糖中，儲存於4°C及37°C下，且監測溶解速率9天。如所預期，晶體溶解速率主要並非視溫度（除WIZ 11]：第35號外）（其中在37它下之溶解速率高於在4t下之溶解速率）或形態而定。實際上，溶解速率與晶體纟長條件㈣。對於特定晶體生長條件而言’溶解速率之趨勢相似，而與溫度無關（圖6八及叩）。此對於在不同條件下生長且在不同溫度下再懸浮於相同或不同懸浮媒劑中之所有Ab_30晶體而言未必如此。 163325.doc •114- 201247703 概括而言，晶體溶解視一種以上因素而定，即晶體生長溶液及其組分、晶體形狀、大小、長度、晶體形態、晶體懸浮媒劑、溫度及/或晶體堆積。一或多種上述因素可在各種組合中變化以調配不同種類（液體、固體或漿料）之調配物。實例4:分析Ab-30晶體之蛋白質含量鹽常常存在於樣品或反萃溶劑（countersolvent)中，且此等鹽在試圖結晶期間可能形成晶體。一種普遍之區分鹽晶體生長與相關目標晶體生長的方法為暴露於染色染料，諸如由 Hampton Research(Laguna Niguel，Calif)製造之 IZITTM。IZITTM染料將蛋白質晶體染成藍色，但不對鹽晶體進行染色。藉由染色（ΙΖΙΤΤΜ染料；Hampton Research)將在 15% ν/ν 他希美特（pH 7.0)、0_1 M HEPES(pH 7.0)、2% w/v聚乙二醇 8000之結晶條件下產生之Ab-30晶體確定為蛋白質晶體且記錄為結晶命中。實例5 :結晶抗硬化蛋白抗體調配物此實例說明一種抗硬化蛋白抗體晶體之調配物，其包含高濃度之蛋白質而具有緩慢釋放之潛能，且使用包含分別闡述於SEQ ID NO: 19及21中之Ab-3 0Rm重鏈及輕鏈的抗硬化蛋白抗體。簡言之，使用低離子濃度篩選（Harris等人，（1995) Crystallization of intact monoclonal antibodies, Proteins: Structure, Function and Genetics 23，285-289 ; Hampton 163325.doc -115- 201247703

Research，Aliso Viejo，CA)針對 Ab-30Rm篩選總共 108 種結晶條件。基於pH值、滲透重量莫耳濃度、可注射成分及結晶效率百分比縮減至兩種條件供調配物用。成功地製成適用於在動物研究中皮下注射的Ab-30Rm晶體調配物。材料與方法懸滴式蒸氣擴散與目測蛋白質晶體命中：利用懸滴式蒸氣擴散法，使用具有密封劑之VDX 24孔培養盤（Hampton Research，Aliso Viejo，CA(HR3-170))使 Ab-30Rm晶體生長。將1 ml脫水劑24°/。PEG-3350吸取於孔溶液中。將4 μΐ於A5SuT(10 mM乙酸鈉（來自乙酸）、9%蔗糖、0.004%聚山梨醇酯 20, pH 5.0)中之4 mg/ml Ab-3 0Rm+2 μΐ低離子濃度緩衝液+5 μΐ x% PEG-3350添加至蓋玻片 (HR3-233，22 mm直徑x〇.22 mm厚度之矽化玻璃蓋玻片： Hampton Research, Aliso Viejo, CA)上，達到 11 μΐ之最終體積。反轉蓋玻片而不混合液滴，且置放於已有間隙之密封劑上以形成氣密性密封。在懸滴式蒸氣擴散實驗中，在液滴與孔溶液之間達到平衡時形成晶體。使用低離子濃度篩選（LISS)(HR2-120，Hampton Research) 建立總共108種條件。LISS為使用2至12之pH值範圍内之18 種緩衝液、6種不同百分比之沈澱劑PEG-3350且使用24% PEG-33 50作為脫水劑的三部分結晶篩選。參見下表16。表16.

LISS篩選 PEG濃度 4% 8% 12% 16% 20% 24% 0.05 Μ氣化鉀，pH 2 C 163325.doc -116- 201247703 LISS篩選 PEG濃度 0.05 Μ檸檬酸，pH 3 —-— 0.05 Μ檸檬酸，pH 3.5 ---- 0.05 Μ檸檬酸，pH 4 0.05 Μ檸檬酸，pH 4.5 ------ 0.05 Μ搏檬酸，pH 5 ——— 0.05 Μ檸檬酸，pH 5.5 "~~—.. 0.05 M MES，pH 6 — 0.05 M Bis Tris > pH 6.5 C 0.05 M咪唑，pH 7 c c c 1——-- 0.05 M HEPES · pH 7.5 c c c 0.05 M Tris > pH 8 c c c ~c 0.05 M Tris，pH 8.5 c c c c 0.05 M甘胺酸，pH 9 c c c 1---- 0.05 M甘胺酸，pH 9.5 --—. 0.05 M甘胺酸，pH 10 ------ 0.05 M磷酸氫二鈉，pH 11 ——- 0.05 M磷酸氫二鈉，pH 12 --- — c=得到晶體使用裝備有軟體Axiovison 4.0之卡爾蔡司（Carl Zeiss) Stemi SV11顯微鏡每天掃描晶體盤並維持一週且接著每週掃描一次。記錄晶體命中且使用内部晶體評分系統及形態描述表徵。以下兩組條件為用於抗體晶體調配物之例示性條件： (a)A5SuT+0.05 M Tris(pH 8.0)+22% PEG-3350(最終pH值為約7.2，滲透重量莫耳濃度為340 mOsm/kg且％效率為 95%) ; (b)A5SuT+0.05 M Tris(pH 8.0)+24% PEG-3350(最終 pH值為約7.2，滲透重量莫耳濃度為412 ^1〇31!1/1^且％效率為 99%)。虔 # 激·* 使用 Mettler Toledo MP230 pH計量測 pH值立針對pH4.0及pH 7.0緩衝液標準品進行校正。為量測pH值’ 藉由將40 μΐ蛋白質、20 μΐ LISS緩衝液及50 μΐ各別百分比 163325.doc •117· 201247703 之？丑〇-335〇添加於埃彭道夫管（69061^〇11'11^6)中且渦旋來製備樣品。滲透重量莫耳濃度：使用Advanced Instruments 2020多樣品滲透壓計（Norwood, ΜΑ)量測滲透重量莫耳濃度。該儀器藉由使用冰點下降法來量測滲透重量莫耳濃度。為在低離子篩選中量測Ab-30Rm之滲透重量莫耳濃度，混合8 μΐ蛋白質、2 μΐ LISS缓衝液及5 μΐ X% PEG-3350。精確地將20 μΐ 此混合物置放於拋棄式微量樣品管（Advanced Instruments, Norwood，ΜΑ.目錄號：202825)中，且置放於儀器旋轉式傳送盤（carousel)中。放# 藉由以1〇,〇〇〇 rpm短暫離心1.5 ml埃彭道夫管15分鐘，用mili-Q水對上清液進行1:100稀釋且將其在UV—VISS 譜儀上於A280下讀取來計算％效率。分批結晶及動物研究實驗之細節：氚η 今豫·良為 24.39 mg/ml之Ab-30Rm進行初始Ab-30Rm晶體篩選及分批結晶。對於針對動物研究之最終分批結晶研究’使用A5SuT 中濃度為31.148 mg/ml之Ab-30Rm。用於動物研究之 Ab-3 0Rm之液體調配物為於A5SuT中之100 mg/ml之液體調配物，而用於調配物之晶體漿料以1 〇〇 mg/ml、pH 7.2處於 0.05 M Tris(pH 8.0)及 22% PEG-3350 中。藉由在1.5 ml埃彭道夫管中添加400 μΐ於A5SuT中之

Ab-30Rm+200 μΐ 0.05 M Tris(pH 8.0)緩衝液+5〇〇 μΐ 22% PEG-3350沈澱劑達1.1 ml之最終體積（在混合時變渾濁）來製備Ab-30Rm之調配物。溶液最終在第二天變澄清’其中 163325.doc -118- 201247703 形成可辨別之晶體。六天后收集晶體且以3000 rpin短暫離心15分鐘且移除上清液以使管中無可溶蛋白質留下。用母液替換上清液。如下製備母液：埃彭道夫管中2〇〇 μΐ 〇.〇5 Μ

Tris(PH 8.0)緩衝液+ 500 μΐ 22% PEG-3350沈澱劑。請注意，不向其中添加A5SuT。在1.1 ml批料中存在12.46 mg蛋白質，且因此添加124.9 μΐ母液以達到1〇〇 mg/ml最終濃度。在一個3 cc小瓶中混合來自另外兩個埃彭道夫管的1〇〇 mg/ml漿料以製備用於各大鼠之各別小瓶。如下製備調配物緩衝液：400 μΐ A5SuT緩衝液+200 μΐ 〇.〇5 M Tris(pH 8.0) 緩衝液+500 μΐ 22% PEG-3350沈澱劑以得到i.i mi之最終體積。在100 mg/ml下，最終注射體積介於2〇〇 μ1-250 μΐ之間，視個別大鼠之體重而定’且使用27 G1/2針進行皮下注射。用28只體重為400公克至500公克之6個月大雌性SD大鼠進行持續8週之單次劑量研究。最終劑量為50 mg/kg(各大鼠需要20 mg至25 mg蛋白質），將1〇只個別大鼠用於各液體及粉末調配物’而將8只大鼠用於安慰劑（A52SuT+0.05 Μ Tris(pH 8.0)+22% PEG-3350) ° 潜求典論遂/使用Hampton低離子篩選濃度篩選（LISS) 來篩選Ab-30Rm且在pH 2及pH 6.5至9.0下獲得總共20個晶體命中。8%及12%PEG-33 50在所篩選之所有不同百分比之 PEG-33 50中具有最多晶體命中。〇.〇5 M Tris(pH 8.0)為自 8%-24% PEG-3350(除4% PEG-3350外）中產生晶體之唯一條件。所得之大部分Ab-30Rm晶體命中處於pH 7.0至7.5之 PH值範圍内，此在動物研究中對於避免在皮下注射後出現 163325.doc •119- 201247703 組織壞死而言為重要的。基於滲透重量莫耳濃度數據’一些16%及24% PEG-33 50 條件及所有20°/。PEG-3 350條件處於滲透重量莫耳濃度範圍内°皮下注射可接受之滲透重量莫耳濃度範圍為約25〇_350 mOsm/Kg(參見圖1A)。當將滲透重量莫耳濃度與晶體命中重疊時，僅有三種條件處於滲透重量莫耳濃度範圍内且亦具有晶體命中（圖1B)。 PEG-33 50歸為影響結晶之化學因素且可表徵為藉由體積排阻效應起作用之長鍵聚合物沈澱劑。如在以LISS進行之篩選中所見’ Ab-30Rm晶體之形態隨peg-3350濃度增加而降級（圖2)。較高百分比peg-3350晶體命中具有雙相性分離及/或沈澱。Ab-30Rm晶體花費約一週來生長，此在將相同條件用於分批結晶的情況下為緩慢的。在懸滴式蒸氣擴散與分批結晶中，結晶速率未必相同。為增加結晶速率，調控pH值範圍，此為另一影響Ab-30Rm 結晶及濃度之化學因素，在12% PEG-3350下僅集中於 HEPES及Tris條件。對Ab-30Rm進行HEPES網格式篩選（Grid 8〇代印)1^6.8至8.2及丁1^網格式篩選1^7.0至9.0。在任一網格式篩選中均未觀測到結晶速率變化，但在兩個網格式篩選中觀測到在高於7.5之pH值下晶體豐度增加。因此，為改變結晶速率，藉由研究沈澱劑PEG-3350之濃度來進行另一嘗試。使用pH值範圍為7至9.0之LISS條件第10號至第14號，且以2%之增量研究4°/〇至24%之？£〇-3 3 50。0.05 1^1^(卩1^.0) 163325.doc •120· 201247703 在22%及24% PEG-3350下在第2天得到第一晶體命中。以55 μΐ、11 Ο μΐ及1 ml總體積於此等條件下進行分批結晶，全部皆在第2天得到晶體命中。11 μΐ懸滴式蒸氣擴散與分批結晶中於22%及24% PEG-3350下之結晶速率相同。對於兩種條件所量測到之最終pH值皆處於7至7.5之pH值範圍内，其中對於 22% PEG-3 3 50，pH值=7.203，且對於 24% PEG-3350， pH 值=7.354。對於 0.05 M Tris、22% PEG-3350，滲透重量莫耳濃度為 340 mOsm/kg，而對於0.05 M Tris(pH 8.0)，滲透重量莫耳濃度為412 mOsm/kg，其超出滲透重量莫耳濃度範圍。藉由以10，〇〇〇 rpm旋轉晶體1 5分鐘，量測上清液之 A280 nm來量測％效率。Ab-30Rm晶體於水中之溶解速率為 11分鐘，於生理食鹽水中之溶解速率為6分鐘且於PBS中之溶解速率為15分鐘。

Ab-30Rm調配物達成等張及可注射條件以用於動物研究，其中最終pH值為7.203，滲透重量莫耳濃度為340 mOsmo/kg且結晶效率為95°/。。在動物研究中測試液體相較於再懸浮抗體晶體調配物。上述實例表明Ab-30Rm可在多種結晶條件下結晶，但在所測試之每一條件下並非皆形成晶體。在多種不同之市售 (亦即Hampton Research)篩選中測試約240種結晶條件，但僅約50種條件產生Ab-30Rm晶體。有趣的是，Ab-30R(其相較於Ab-3 0Rm有一個胺基酸不同）僅在於多種不同之市售 (亦即 Hampton Research, Emerald Bioscience)及專有筛選中所測試之約1120種條件中之5種條件下產生晶體。 163325.doc -121 - 201247703 上述實例亦表明獲得pH值及滲透重量莫耳濃度足以投與哺乳動物之包含Ab-30Rm晶體之調配物。實例6 :抗硬化蛋白抗體「液體」及「晶體/結晶」調配物之大鼠活體内測試自Charles River Laboratories獲得雌性史泊格多利 (Sprague Dawley，SD)大鼠且飼養於清潔籠具中，每籠兩隻動物。室溫維持於68°F至72°F，且相對濕度維持於34%至 73%。置放籠具之實驗室具有12小時明/暗週期且符合所有 AAALAC規定。在大鼠約6.5個月大時皮下注射測試物品（液體Ab-30Rm 及晶體/結晶Ab-30Rm)及緩衝液（媒劑對照組）。在研究開始時（第0天），用由以下比率之成分製成之緩衝液對9只大鼠進行注射：取400微升A5SuT(10 mM乙酸鈉（pH 5)、9%蔗糖、 0.004%聚山梨醇酯20[吐溫])，接著添加200微升0.05 Μ Tris(pH 8)且接著添加500微升22% PEG-3350 »此為緩衝液/ 媒劑組。在研究開始時（第〇天），用「晶體/結晶」Ab-30Rm 於由以下比率之成分製成之懸浮液中之100 mg/ml溶液以 50 mg/kg對10只大鼠進行注射：200微升0_05 M Tris(pH 8) 及500微升22% PEG-33 50。此為「晶體/結晶」組。在研究開始時（第〇天）’用「液體」Ab-30Rm(未結晶）於A5SuT中之 100 mg/ml溶液以50 mg/kg對10只大鼠進行注射。此為「液體」組。藉由雙能X射線吸收測定術（DXA，Hologic QDR 4500a， Hologic Inc., Bedford, Μ A)測定麻醉之大鼠（異氟烧）的面積 163325.doc -122· 201247703 骨礦物質密度（BMD)。基線BMD在開始處理前4天測定。亦在處理（第0天）後第2週、第3週、第4週、第6週及第8週測定 BMD。相關區域（ROI)包括腰椎（LV1-5)及「M」（股骨-脛骨 [整個股骨連同脛骨/腓骨接合點以上之脛骨部分])。使用GraphPad Prism進行統計分析。使用單因子變異數分析（ANOVA)，繼而使用杜奈特氏檢驗（Dunnett's test)確定統計差異。當尸值小於0.05(Ρ<0·05)時，各數據集合之組平均值視作具顯著性差異。以絕對BMD(g/cm2)形式以及單獨以 BMD自基線變化百分比（對於各個別動物進行計算）形式分析數據。 3個動物組之BMD數據（絕對BMD及BMD自基線變化百分比）指示，在此大鼠研究中單次投與Ab-30Rm之「液體」調配物與單次投與Ab-30Rm之「晶體/結晶」調配物使得 BMD達成相似程度之增加。發現「液體」Ab-30Rm組（圖7A 及7B)及「晶體/結晶」Ab-30Rm組（圖7B)在腰椎骨骼部位及「腿」（股骨-脛骨）骨骼部位（圖8B)處達成之增加相較於緩衝液/媒劑組皆具統計顯著性。此等資料表明「液體」及「晶體/結晶」Ab-30Rm調配物兩者皆具正向骨作用。實例7 :結晶Ab-30調配物此實例說明抗硬化蛋白抗體晶體之調配物，其包含高濃度之蛋白質而具有緩慢釋放之潛能，且包含由兩條成熟重鏈（SEQ ID NO: 15)及兩條成熟輕鏈（SEQ ID NO: 13)組成之抗硬化蛋白抗體Ab-30，該抗體由編碼此等鏈中之每一者的 DNA重組產生。 163325.doc -123- 201247703 簡言之，使用GRAS篩選、索引篩選、Wizard I篩選、Wizard II篩選及Wizard III篩選針對Ab-30篩選總共104種結晶條件。基於結晶效率百分比縮減至四種條件供調配物用（亦即 WIZ III 第 35號、GRAS 第 1號、INDX第 34號、INDX第 36號及WIZ I第46號）。成功地製成適用於在動物研究中皮下注射的再懸浮於5%右旋糖中之Ab-30調配物。實例8 :抗硬化蛋白抗體Ab-30「液體」及「晶體/結晶」調配物之大鼠活體内測試自Charles River Lab orator ies獲得雌性史泊格多利（SD)大鼠且飼養於清潔籠具中，每籠兩隻動物。室溫維持於68°F 至72°F，且相對濕度維持於34%至73%。置放籠具之實驗室具有12小時明/暗週期且符合所有AAALAC規定。在大鼠約6.5個月大時皮下注射投與測試物品（液體Ab-30 及各種晶體/結晶形式之Ab-30)及緩衝液（媒劑對照組）。在研究開始時（第0天），用5%右旋糖（來源：Baxter IV袋）對8 只大鼠進行注射。此為緩衝液/媒劑組。在研究開始時（第〇天），用以下一者之100 mg/ml溶液以100 mg/kg對8只大鼠進行注射. -「晶體/結晶」Ab-30調配物WIZ III第35號，該等晶體已再懸浮於5%右旋糖（來源：Baxter IV袋）中（「W35組」）； -「晶體/結晶」Ab-30調配物INDX第34號，該等晶體已再懸浮於5%右旋糖（來源：Baxter IV袋）中（「134組」）； -「晶體/結晶」Ab-30調配物INDX第36號，該等晶體已再懸浮於5%右旋糖（來源：Baxter IV袋）中（「136組」）； 163325.doc -124- 201247703 -「晶體/結晶j Ab-3〇調配物WIZ I第46號，該等晶體已再懸浮於5%右旋糖（來源：Baxter IV袋）中（「W46組」）；或 -A5Su(10 mM乙酸鈉（PH5)、9%蔗糖）中之「液體」Ab-30(未結晶）（「液體組」）。藉由雙能X射線吸收測定術（DXA ’ Hologid QDR 4500a， Ho logic Inc., Bedford，Μ A)測定麻醉之大鼠（異氟烧）的面積骨礦物質密度（BMD)。基線BMD在開始處理前7天測定。亦在處理（第0天）後第2週及第4週測定BMD »相關區域（R〇i) 包括腰椎（LV1-5)及「腿」（股骨-脛骨[整個股骨連同脛骨/ 腓骨接合點以上之脛骨部分])。使用GraphPad Prism進行統計分析。使用單因子變異數分析（ANOVA)，繼而使用杜奈特氏檢驗確定統計差異。當尸值小於0.05(P<0.05)時，各數據集合之組平均值視作具顯著性差異。以絕對BMD(g/cm2)形式以及單獨以BMD自基線變化百分比（對於各個別動物進行計算）形式分析數據。發現「液體」Ab-30組（圖9A及9B)及某些（例如W35、136) 「晶體/結晶」Ab-30調配物組（圖9B)在腰椎處之BMD增加相較於緩衝液/媒劑組具統計顯著性。亦發現「液體」Ab-30 組（圖10B)及某些（例如W35、136)「晶體/結晶」Ab-30調配物組（圖10B)在「腿」（股骨·脛骨）骨骼部位處之BMD增加相較於緩衝液/媒劑組具統計顯著性。此等資料表明「液體」及「晶體/結晶」Ab-30調配物兩者皆具正向骨作用。實例9:使抗硬化蛋白抗體Ab-31結晶

由兩條成熟重鍵（SEQ ID NO: 35)及兩條成熟輕鏈（SEQ 163325.doc • 125· 201247703 ID NO: 33)組成之抗體Ab-3 1係由編碼此等鍵中之每一者的 DNA重組產生’使該抗體在多種條件下結晶。使用結晶筛選（PEG/LiCl網格式篩選；Hampt〇n Research，

Aliso Viejo, Calif.)使Ab-3 1結晶，該結晶篩選使用稱為『懸滴式』蒸氣擴散之用於使大分子結晶的方法。將由多狀樣品與結晶試劑（「結晶緩衝液」或「母液」）之混合物構成的液滴置於石夕烧化蓋玻片下側上’且接著用油脂密封蓋玻片上之液滴且置放於具有試劑之液體儲集液之引起蒸氣平衡之通常24孔VDX盤上方。為達成平衡，水蒸氣在液滴與盤之孔中之1 ml儲集溶液之間進行交換。隨著水離開液滴，多肽樣品之相對濃度不斷增加，最終引起過飽和。多肽樣品之濃度增加為出現結晶所必需。通常，液滴所含之試劑的濃度低於儲集液，且通常，液滴所含之試劑之濃度為儲集液中之濃度的一半，因為混合等體積樣品與試劑形成液滴。在此等實驗中’液滴中Ab-3 1之初始蛋白質濃度為3〇 mg/ml。在24孔VDX聚丙烯組織培養盤中建立結晶筛選。 VDX盤中之各位置皆含有1 mL試劑儲集液，其中各孔中之試劑儲集液的組成與其他孔不同，以形成一系列不同之結晶緩衝液條件。將各多肽濃度之丨mL多肽溶液添加至丨μΐ 儲集溶液中，形成液滴。在4t下或在環境室溫下培育盤。在以下結晶條件下於4〇c及室溫下觀測到Ab-3i結晶：1〇組胺酸（pH 7.15 至 pH 7.47)以及 10 mM磷酸鉀（ΡΗ 7.2)。所得晶體之長度在約100 μιη至約1000 μιη之間變化，且呈現 163325.doc •126· 201247703 橢球形狀，如由具有偏振之蔡司Stemi s v丨丨立體顯微鏡所 /則疋，該立體顯微鏡與以Axi〇 vision 4.0軟體操作之蔡司 AxioCam MRc數位攝影機連接。上述實例表明Ab-3 1可在多種結晶條件下結晶，但在所測 »式之母條件下並非皆形成晶體。雖然測試約250種不同結晶條件’但僅約36種條件產生Ab-31晶體。在實踐本發明令熟習此項技術者在考慮其當前較佳實施例後預期會想起許多修改及變化。因此，僅有應對本發明範嘴施加之限制為出現於隨附申請專利範圍中之限制。本說明書中所提及及/或申請案資料表中所列之所有美國專利、美國專利申請公開案、美國專利申請案、國外專利、國外專利申請案及非專利出版物係以全文引用之方式併入本文中。自上述應瞭解，雖然本文已出於說明之目的描述本發明之特定實施例，但可進行各種修改而不背離本發明之精神及範_。【圖式簡單說明】圖1A提供各種Ab-3 ORm結晶篩選之滲透重量莫耳濃度數據。圖1B為展示組合物Ab-30Rm、LISS緩衝液及X0/〇 PEG-3350之滲透重量莫耳濃度數據的圖表。圖2展示如使用卡爾蔡司Axiocam MRc顯微鏡所觀測及記錄之在第12號0·05 M Tris pH 8.0中且在不同PEG-33 50百分比下之Ab-30Rm晶體形態。圖3A及3B為展示Ab-30晶體在各種懸浮媒劑中之溶解速 163325.doc •127· 201247703 率的圖表。圖4為展示基於晶體形態之Ab-30晶體之溶解速率的圖表。圖5A至5F為展示基於晶體堆積之Ab-30晶體之溶解速率的圖表。圖6A及6B為展示基於溫度及晶體形態之Ab-30晶體之溶解速率的圖表。圖7展示在投與緩衝液/媒劑單次注射或「液體」 Ab-30Rm(50 mg/kg之1 00 mg/ml溶液）單次注射或「晶體/結晶」Ab-30Rm(50 mg/kg之100 mg/ml溶液）單次注射後隨時間推移在腰椎處所量測之大鼠的骨礦物質密度（BMD)(絕對 BMD(A)及自基線變化百分比（B))。BL=基線。數據展示為平均值+/-平均值標準誤差（SEM)。相較於緩衝液/媒劑對照組之統計顯著性差異係由星號指示。*相較於媒劑， p<0.05(ANOVA杜奈特氏檢驗）。緩衝液/媒劑組之N=9。「液體」Ab-30Rm組之N=10。「晶體/結晶」Ab-30Rm組之N=10。

圖8展示在投與緩衝液/媒劑單次注射或「液體」 Ab-3 0Rm(5 0 mg/kg之1 00 mg/ml溶液）單次注射或「晶體/結晶」Ab-30Rm(50 mg/kg之100 mg/ml溶液）單次注射後隨時間推移在腿（股骨-脛骨）處所量測之大鼠的骨礦物質密度 (BMD)(絕對BMD(A)及自基線變化百分比（B))。BL=基線。數據展示為平均值+/-平均值標準誤差（SEM)。相較於緩衝液/媒劑對照組之統計顯著性差異係由星號指示。對於圖 8B，*ρ<0·05，**ρ<0·(Η，***p<0.001(相較於媒劑，ANOVA 163325.doc -128- 201247703 杜奈特氏檢驗）。各組之N=8，緩衝液/媒劑組之n=9。「液體」

Ab-3 0Rm組之N=10。「晶體/結晶」Ab-30Rm組之N=10。圖9展示在投與緩衝液/媒劑單次注射或「液體」 Ab-30(100 mg/kg之100 mg/ml溶液）單次注射或晶體調配物 W35、134、136或 W46之「晶體 /結晶」Ab-30(100 mg/kg之 100 mg/ml溶液）單次注射後隨時間推移在腰椎處所量測之大鼠的骨礦物質密度（BMD)(絕對BMD(A)及自基線變化百分比（B))» BL=基線。數據展示為平均值+/_平均值標準誤差 (SEM)。相較於緩衝液/媒劑對照組之統計顯著性差異係由星號指示。對於圖9A，"相較於媒劑’ p<〇〇1(AN〇VA杜奈特氏檢驗）。對於圖 9B，*ρ<0.05，**ρ<〇·〇ι，***p<〇〇〇1 (相較於媒劑’ ANOVA杜奈特氏檢驗）。圖10展示在投與緩衝液/媒劑單次注射或「液體」 Ab-30(100 mg/kg之1〇〇 mg/ml溶液）單次注射或晶體調配物 W35、134、136或W46之「晶體/結晶」Ab_3〇(1〇〇吨心之 100 mg/ml溶液）單次注射後隨時間推移在腿（股骨_脛骨）處所量測之大鼠的骨礦物質密度（BMD)(絕對BMD(A)及自基線變化百分比（B))。BL=基線。數據展示為平均值+/_平均值標準誤差（SEM)。相較於緩衝液/媒劑對照組之統計顯著性差異係由星號指示。對於圖1〇Β，*ρ<〇〇5，**ρ<〇〇1， "*Ρ<0.001(相較於媒劑，AN〇VA杜奈特氏檢驗卜各組之 N=8。 163325.doc <；： 129- 201247703 序列表 <11〇>美商安美基公司 <120>抗體調配物

<130> 31173/46053A <140> 101110431 <141> 2012-03-26 <150> 61/467,868 <151> 2011-03-25 <160> 35 <170> patentln 3.5 版 <210> 1 <211> 213 <212> PRT <213>智人 <220〉 <221>成熟肽 <222> (25)..(213) <400> 1

Met Gin Leu Pro Leu Ala Leu Cys Leu Val Cys Leu Leu Val His Thr •20 -15 -10

Ala Phe Arg Val Val Glu Gly Gin Gly Trp Gin Ala Phe Lys Asn Asp •5 -11 5

Ala Thr Glu lie lie Pro Glu Leu Gly Glu 丁yr Pro Glu Pro Pro Pro 10 15 20

Glu Leu Glu Asn Asn Lys Thr Met Asn Arg Ala Glu Asn Gly Gly Arg 25 30 35 40

Pro Pro His His Pro Phe Glu Thr Lys Asp Val Ser Glu Tyr Ser Cys 45 50 55

Arg Glu Leu His Phe Thr Arg Tyr Val Thr Asp Gly Pro Cys Arg Ser 60 65 70

Ala Lys Pro Val Thr Glu Leu Val Cys Ser Gly Gin Cys Gly Pro Ala 75 80 85

Arg Leu Leu Pro Asn Ala lie Gly Arg Gly Lys Trp Trp Arg Pro Ser 90 95 100

Gly Pro Asp Phe Arg Cys lie Pro Asp Arg Tyr Arg Ala Gin Arg Val 105 110 115 120

Gin Leu Leu Cys Pro Gly Gly Glu Ala Pro Arg Ala Arg Lys Val Arg 125 130 135

Leu Val Ala Ser Cys Lys Cys Lys Arg Leu Thr Arg Phe His Asn Gin 140 145 150

Ser Glu Leu Lys Asp Phe Gly Thr Glu Ala Ala Arg Pro Gin Lys Gly 155 160 165 163325-序列表.doc 201247703

Arg Lys Pro Arg Pro Arg Ala Arg Ser Ala Lys Ala Asn Gin Ala Glu

Leu Glu Asn Ala Tyr 185 <210> 2 <211> 321 <212> DNA ' <213>人工序列 <220> <223>人類化抗體 <220> <221〉mi sc—feature <223> Ab-30輕鏈可變區 <400> 2 60 120 180 240 300 321 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctctccgcal ccgtaggcga ccgcgtaacc ataacatgta gagcatctca agatatttcc aactatttga attggtacca acaaaaaccc ggcaaagcac ctaaactcct catttactat acatcaagac tcctctccgg cgttccatca cgattctcag gctccggctc cggcacagat ttcacactca ctatttcctc cctccaacca gaagattttg caacctatta ctgtcaacaa ggcgatacac tcccatacac attcggcggc ggcacaaaag ttgaaattaa a <210> 3 <211> 107 <212> PRT <213>入工序列 <220〉 <223>人類化抗體 <220> <221> MISC FEATURE <223〉Ab-30輕鏈可變區 <400> 3

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 163325-序列表.doc 】00 201247703 <210> 4 <211> 369 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>人類化抗體 <220> <221> misc_feature <223> Ab-ib重鏈可變區 <400> 4 60 120 180 240 300 360 369 gaggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtaaaaaaac caggagcaag cgttaaagtt tcttgtaaag caagcggata tacatttaca gattacaaca tgcattgggt aagacaagcg ccaggacaag gattggaatg gatgggcgaa attaacccta atagtggagg agcaggctac aatcaaaaat tcaaagggag agttacaatg acaacagaca caagcacttc aacagcatat atggaactgc gatcacttag aagcgacgat acagctgtat actattgcgc acgacttggg tatgatgata tatatgatga ctggtatttc gatgtttggg gccagggaac aacagttacc gtctctagt <210> 5 <211> 123 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人類化抗體 <220> <221> MISC FEATURE <223> Ab-3*5重鏈可變區 <400> 5

Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Asn Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Glu He Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp lie Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 163325·序列表.doc 201247703 G1 y p Tr c s Γ c s va ΓΟ Th12 va Γ Th Γ Th <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>大鼠化抗體 <220>

<221> MISC FEATURE <223> Ab-30R 及 Ab-30Rm LCDR1 <400> 6

Arg Ala Ser Gin Asp He Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 7 <211> 7 <212〉 PRT <213>人工序列 <220> <223>大鼠化抗體 <220>

<221> MISC FEATURE <223> Ab-30R 及 Ab-30Rm LCDR2 <400> 7

Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>大鼠化抗體 <220〉

<221> MISC FEATURE <223> AbOOR 及 Ab-30Rm LCDR3 <400> 8

Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr <210> 9 <211> 5 <212> PRT <2】3>人工序列 <220> <223>大鼠化抗體 <220>

<221> MISC FEATURE <223> Ab-35R 及 Ab-30Rm HCDR1 <400〉 9 163325-序列表.doc 201247703

Asp Tyr Asn Met His <210> 10 <211> 17 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 大鼠化抗體 <220〉 <221> MISC.FEATURE <223> Ab-30R 及 Ab-30Rm HCDR2 <400> 10

Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gin Lys Phe Lys 15 10 15

Gly <210> 11 <211> 14 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>大鼠化抗體 <220>

<221> MISC_FEATURE <223> Ab-30R 及 Ab-30Rm HCDR3 <400> 11

Leu Gly Tyr Asp

Asp lie Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val 10 <210> 12 <211> 642 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>人類化抗體 <220> <221> misc_feature <223> Ab-30 輕鏈 <400> 12 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctctccgcat ccgtaggcga ccgcgtaacc ataacatgta gagcatctca agatatttcc aactatttga attggtacca acaaaaaccc ggcaaagcac ctaaactcct catttactat acatcaagac tcctctccgg cgttccatca cgattctcag gctccggctc cggcacagat ttcacactca ctatttcctc cctccaacca gaagattttg caacctatta ctgtcaacaa ggcgatacac tcccatacac attcggcggc ggcacaaaag ttgaaattaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 163325·序列表.doc 60 120 180 240 300 360 420 201247703 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg ctgascaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt <210> 13 <21l> 214 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人類化抗體 <220〉 <221> MISC FEATURE <223> Ab-30 輕鏈 <400> 13

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Gly Asp Τ.Γ Leu Pro Tyr

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110

Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly ΤΤ,γ Ala Ser Va. Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190

Ala Cys Glu Val ΤΤ,γ His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser • 6· 480 540 600 642 163325·序列表 201247703

Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210〉 14 <211> 1347 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>人類化抗體 <220> <221> misc feature <223〉Ab-30 重鏈 <400> 14 gaggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtaaaaaaac caggagcaag cgttaaagtt 60 tcttgtaaag caagcggata tacatttaca gattacaaca tgcattgggt aagacaagcg 120 ccaggacaag gattggaatg gatgggcgaa attaacccta atagtggagg agcaggctac 180 aatcaaaaat tcaaagggag agttacaatg acaacagaca caagcacttc aacagcatat 240 atggaactgc gatcacttag aagcgacgat acagctgtat actattgcgc acgacttggg 300 tatgatgata tatatgatga ctggtatttc gatgtttggg gccagggaac aacagttacc 360 gtctctagtg cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc 420 acctccgaga gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 480 acggtgtcgt ggaactcagg cgctctgacc agcggcgtgc acaccttccc agctgtccta 540 cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag caacttcggc 600 acccagacct acacctgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaca 660 gttgagcgca aatgttgtgt cgagtgccca ccgtgcccag caccacctgt ggcaggaccg 720 tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780 gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccccg aggtccagtt caactggtac 840 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccac gggaggagca gttcaacagc 900 acgttccgtg tggtcagcgt cctcaccgtt gtgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 960 tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020 accaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1080 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1140 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacacc tcccatgctg 1200 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1347 <210> 15 <211> 449 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人類化抗體 C. 163325-序列表.doc 201247703 <220> <221> MISC.FEATURE <223> Ab-30 重鏈 <400> 15

Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Asn Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp lie Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110

Trp Gly Gin Gly Thr Thr Va! Thr Val Ser Ser A)a Ser Thr Lys Gly 115 120 125

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser 130 135 140

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175

Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190

Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val 195 200 205

Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys 210 215 220

Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Aia Pro Pro Val Ala Gly Pro 225 230 235 240

Scr Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser 245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270

Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn -8 - 163325·序列表.doc 201247703 275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val 290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys 325 330 335

Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr 340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr 355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380

Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu 385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415

Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445

Lys

<210> 16 <211〉 107 <212> PRT <213> 褐家鼠(Rattusnorvegicus) <220> <221> MISC.FEATURE <223> Ab-30R輕鏈可變區 <400> 16

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 163325·序列表.doc 201247703

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Ser lie Ser Ser Leu Glu Ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210〉 17 <211> 123 <212> PRT <213>人工序列 <223>大鼠化抗體 <220>

<221> M1SC—FEATURE ^23〉Ab-30R及Ab-30Rm重鏈可變區 <400> 17

Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro G)u Leu Gin Arg Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Asn Met His Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp He Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 310

Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 18 <211> 123 <212> PRT <213>褐家鼠 <220> <221〉MI SC FEATURE <223> Ab-35R 輕鏈 <400> is

Giu Val Gin Leu Gin Gin Ser Giy Pro Giu Leu Gin Arg Pro Giy Ala 15 10 15 -10- 163325-序列表.doc 201247703

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Asn Met His Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp lie Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110

Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210〉 19 <211> 445 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>大鼠化抗體 <220>

<221> MISC.FEATURE <223> Ab-3_0R 及 Ab-30Rm 重鏈 <400> 19

Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Gin Arg Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Asn Met His Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp He 35 40 45

Gly Glu lie Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gin Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp lie Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110

Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Glu Thr Thr Ala 115 120 125 • 11 - 163325-序列表.doc 201247703

Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Thr Ala Leu Lys Ser Asn Ser 130 135 140

Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160

Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ala Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175

Pro Ala Val Leu Gin Ser Gly Leu Tyr Thr Leu Thr Ser Ser Val Thr 180 185 190

Val Pro Ser Ser Thr Trp Ser Ser Gin Ala Val Thr Cys Asn Val Ala 195 200 205

His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys lie Val Pro Arg Glu 210 215 220

Cys Asn Pro Cys Gly Cys Thr Gly Ser Glu Val Ser Ser Val Phe lie 225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Thr Lys Asp Val Leu Thr iie Thr Leu Thr Pro Lys 245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp lie Ser Gin Asn Asp Pro Glu Val Arg 260 265 270

Phe Ser Trp Phe lie Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gin Thr His 275 280 285

Ala Pro Glu Lys Gin Ser Asn Ser Thr Leu Arg Ser Val Ser Glu Leu 290 295 300

Pro lie Val His Arg Asp Trp Leu Asn Gly Lys Thr Phe Lys Cys Lys 305 310 315 320

Val Asn Ser Gly Ala Phe Pro Ala Pro lie Glu Lys Ser He Ser Lys 325 330 335

Pro Glu Gly Thr Pro Arg Gly Pro Gin Val Tyr Thr Met Ala Pro Pro 340 345 350

Lys Glu Glu Met Thr Gin Ser Gin Val Ser lie Thr Cys Met Val Lys 355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Pro Asp lie Tyr Thr Glu Trp Lys Met Asn Gly Gin 370 375 380

Pro Gin Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Pro Pro Thr Met Asp Thr Asp Gly 385 390 395 400

Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Asn Val Lys Lys Glu Thr Trp Gin 405 410 415

Gin Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn 420 425 430 •12· 163325-序列表.doc 201247703

His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 20 <211> 106 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>大鼠化抗體 <220> <221> MISC FEATURE <223> Ab-30Rm輕鏈可變區 <400> 20

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 .55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Ser lie Ser Ser Leu Glu Ser Glu 65 70 75 80

Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr 85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 21 <211> 213 <212> PRT <213>人工序列 <223>大鼠化抗體 <220> <221> MISC.FEATURH <22^> Xb-30IRm 輕鍵 <400> 21

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Arg Leu lie 35 40 45 •13- 163325·序列表.doc 201247703

Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Se, G.y Val Pro Ser Arg Phe Ser G.y Ser

Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Ser lie Ser Ser Leu Glu Ser Glu 65 70 75 80

Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gin Gin Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr 85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro 100 】05 no

Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Thr Glu Gin Leu Ala Thr Gly Gly Π5 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Met Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Asp He Ser

Va. Lys Trp Lys He Asp Gly ΤΤ,γ Glu Arg Arg Asp Gly Val Leu Asp

Ser Val Thr Asp Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser 165 170 175 Τ,γ Leaser Leu T,r Lys A,a Asp Tyr G,u Ser His Asn Leu Tyr Τ,γ

Cys Glu Val Val His Lys Thr Ser Ser Ser Pro Val Val Lys Ser Phe 195 200 205

Asn Arg Asn Glu Cys 210 <210> 22 <211> 318 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>人類化抗體 <220> <221> misC-feature <223> Ab-31輕鏈可變區 <400> 22 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggtga ccgtgtcacc atcacttgcc gcgcaagtca ggatattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatctattct acttcccgtt tgaatagtgg ggtcccatca cgcttcagtg gcagtggctc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct gaagattttg caacttacta ctgtcaacag gatattaaac accctacgtt cggtcaaggc accaaggtgg agatcaaa <210> 23 <211> 106 <212> PRT <213>人工序列 14- 163325·序列表.doc 201247703 <220> <223>人類化抗體 <220〉 <221> MISC.FEATURE <223> Ab-31輕鏈可變區 <400> 23

Asp lie Gin Met pir Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Uc Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Ser Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ser Thr Ser Arg Leu Asn Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 gr Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Asp lie Lys His Pro Thr 85 90 95

Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 24 <211> 360 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>人類化抗體 <220> <221> misc^feature <223> Ab-31重鏈可變區 <400> 24 gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaage ctgagtcctc ggtgaaggtc tcctgcaagg cttctggttt taccttcacc gactatatta tgcactgggt gcgtcaggcc cctggtcaag ggcttgagtg gatgggctat atcaaccctt ataatgatga caccgaatac aacgagaagt tcaagggccg tgteaegatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac atggagctga gcagcctgcg ctctgaggac acggccgtgt attactgtgc gegttegatt tattactacg atgccccgtt tgcttactgg ggccaaggga ctctggtcac cgtctctagt <210> 25 <211> 120 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人類化抗體 15- 163325·序列表.doc 201247703 <220〉

<221> MISC.FEATURE <223> Ab-31重錢可變區 <400> 25

Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 lie Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Ser lie Tyr Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin 100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 26 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人類化抗體 <220> <221> MISC.FEATURE <223> Ab-3l LCDR1 <400> 26

Arg Ala Ser Gin Asp He Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 27 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人類化抗體 <220> <221> M1SC_FEATURE <223> Ab-3l LCDR2 <400〉 27

Ser Thr Ser Arg Leu Asn Ser 16- 163325-序列表.doc 201247703 <210> 28 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人類化抗逋 <220> <221> MISC.FEATURE <223> Ab-3l LCDR3 <400> 28

Gin Gin Asp lie Lys His Pro Thr <210> 29 <211> 5 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 人類化抗體 <220> <221> MISC FEATURE <223> Ab-3l HCDR1 <400> 29 Asp Tyr lie Met His <210> 30 <211> 17 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 人類化抗體 <220> <221> MISC FEATURE <223> Ab-3l HCDR2 <400> 30

Tyr lie Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 15 10 15

Gly <210> 31 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人類化抗體 <220> <221> MISC FEATURE <223> Ab-3l HCDR3 17· 163325-序列表.doc 201247703 <400〉 31

Ser lie Tyr Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr 1 5 10 <210〉 32 <211> 639 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>人類化抗體 <220> <221> mi sc feature <223> Ab-31 輕鏈 <400> 32 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggtga ccgtgtcacc atcacttgcc gcgcaagtca ggatattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatctattct acttcccgtt tgaatagtgg ggtcccatca cgcttcagtg gcagtggctc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct gaagattttg caacttacta ctgtcaacag gatattaaac accctacgtt cggtcaaggc accaaggtgg agatcaaacg tacggtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt <210> 33 <211> 213 <212> PRT <213>人工序列 <223>人類化抗體 <220> <221> MISC FEATURE <223> Ab-31 輕鏈 <400〉 33

Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Ser Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ser Thr Ser Arg Leu Asn Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro -18· 163325·序列表,doc 201247703 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Asp lie Lys His Pro Thr 85 90 95

Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110

Ser Va. Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Br

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140

Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 34 <211> 1338 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>人類化抗體 <220> <221> misc_feature <223> Ab-31 重鏈 <400> 34 gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaage ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggttt taccttcacc gactatatta tgcactgggt gcgtcaggcc 120 cctggtcaag ggcttgagtg gatgggctat atcaaccctt ataatgatga caccgaatac 180 aacgagaagt tcaagggccg tgteaegatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgcg ctctgaggac acggccgtgt attactgtgc gegttegatt 300 tattactacg atgccccgtt tgcttactgg ggccaaggga ctctggtcac cgtctctagt 360 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag 420 agcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480 tggaactcag gcgctctgac cagcggcgtg cacaccttcc cagctgtcct acagtcctca 540 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcaacttcgg cacccagacc 600 tacacctgca aegtagatea caagcccagc aacaccaagg tggacaagac agttgagcgc 660 •19· 163325·序列表.doc 201247703 aaatgttgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg tggcaggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca cgggaggagc agttcaacag cacgttccgt gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacac ctcccatgct ggactccgac ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtctc cgggtaaa <210> 35 <211> 446 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人類化抗體 <220> <221〉 MlSC FEATURE <223> Ab-3l 重鏈 <400〉 35

Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr lie Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Tyr Ue Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Val TT,r lie Br Ala Asp Lys Ser TT,r Ser Thr A,a Tyr

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Ser lie Tyr Tyr Tyr Asp Ala Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gin 100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 •20· 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1338 163325-序列表.doc 201247703

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175

Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190

Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val 210 215 220

Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro 245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro G!u Val 260 265 270

Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val 290 295 300

Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser 325 330 335

Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380

Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415

Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430

Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 •21 · 163325·序列表.doc

Claims

201247703 七、申請專利範圍： 1. 一種抗硬化蛋白IgG抗體之晶體，該抗體包含SEQ ID NO: 3及5之輕鏈可變區及重鏈可變區，較佳具有胺基酸序列 SEQ ID NO: 13及 15 » 2. —種無菌調配物’其包含抗硬化蛋白IgG抗體之晶體，其中至少70%之該抗體呈結晶形式。 3. —種無菌調配物’其包含抗硬化蛋白IgG抗體之晶體，其中至少90%之該抗體呈結晶形式。 4. 如請求項2或3之調配物’其中該IgG抗體包含SEQ ID NO: 3及5之輕鏈可變區及重鏈可變區，較佳具有胺基酸序列 SEQ ID NO: 13及 15。 5 ·如前述請求項中任一項之晶體或調配物，其中該晶體之長度為至多約500 μηι。 6·如前述請求項中任一項之晶體或調配物其中該晶體之形狀選自由橢球狀、棒狀及針狀組成之群。 7·如刚述β月求項中任一項之調配物，其包含長度為至多5〇〇 μηι且形狀選自由橢球狀、棒狀及針狀或其混合物組成之群的晶體。 8.如則述。月求項中任一項之晶體或調配物，其中該晶體包 3選自由以下組成之群的鹽：磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、氣化納、硫酸銨、四水合酒石酸鉀鈉、他希美特 (tacsimate)、—水合檸檬酸鈉、三水合乙酸鈉酒石酸二丙一 8文鈉、乙酸鹽、乙酸鈣、二曱胂酸鹽、、力酸鐘氣化鎂、乙酸鋅、氣化絶、構酸敍碗酸納、 163325.doc 201247703 填k钟氟化鈉、峨化鉀、換化鈉、碟化敍、硫氰酸納、硫氰酸鉀、曱酸鈉、甲酸鉀及甲酸銨。 9. 如前述凊求項中任一項之調配物，其為凍乾調配物。 10. 如前述請求項中任—項之調配物，其為液體調配物。 11. 如4求項1 〇之調配物，其包含每毫升調配物至少約i 〇〇 mg之濃度的該抗體。 12. 如凊求項1〇之調配物，其包含分散於丨5⑺丨或丨5 mi以下之液體中的至少約14〇 mg抗體。 13. 如清求項11或12之調配物，其可經由具有2〇號針或更細之針的注射器使用臨床上可接受之力量注射。 14. 如前述請求項中任一項之調配物，其在以相同劑量且以相同方式給與時保持含有未結晶之^亥抗體的液體調配物之至少50%活體内活性。 15. 如請求項11或12之調配物，其在投與哺乳動物個體時所介導之骨礦物質密度增加為由含有未結晶之該抗體的液體調配物所介導之骨礦物質密度增加度的至少約7〇%，其中該調配物與該含有未結晶之該抗體的液體調配物以相同劑量且以相同方式投與該個體。 16. 如請求項14或15之調配物，其以單次給藥形式投與。 17 ·如請求項14或15之調配物，其以多次給藥形式投與。 18. —種容器，其包含用於0.5 mL至2 mL體積之懸浮液的至少50 mg如請求項1之抗體晶體。 19. 一種容器，其包含如請求項2或3之調配物。 20. 如§青求項18或19之谷盗’其_該容器為小瓶、注射器戍 163325.doc -2- 201247703 注射裝置。 21.如請求項20之容器，其中該注射器針為2〇號或更細。 2 2 · —種使如請求項9之調配物再懸浮的方法，其包括使該調配物與約0.5 mL至2 mL無菌懸浮媒劑接觸。 23. 如請求項22之方法，其中該懸浮媒劑選自由麩胺酸鹽、山梨糖醇、HEPES、右旋糖及水或其纟且合組成之群。 24. —種製備抗硬化蛋白IgG抗體之晶體的方法，該抗體包含 SEQ IDNO:3及5之輕鏈可變區及重鏈可變區，較佳具有胺基酸序列SEQIDNO: 13及15,該方法包括視情況在約6 至約8之pH值下’將該抗體之溶液與包含選自由以下組成之群之鹽的結晶試劑組合，從而形成晶體：填酸二氫鈉、填酸氫二卸、氣化納、硫酸錢、乙酸錄、四水合酒石酸鉀鈉、他希美特、二水合檸檬酸鈉、三水合乙酸鈉、酒石酸二録、丙二酸納、乙酸鹽、乙酸約、二甲胂酸鹽、 CHES、硫酸鐘、二水合乙酸链、氣化鎂、四水合乙酸鎮、甲酸鎂、硝酸鎂、硫酸鎂、乙酸鋅、氯化辞、硫酸鋅、氯化鉋、磷酸銨、磷酸鈉、磷酸鉀、氟化鈉、碘化斜、換化納、峨化錄、硫氰酸鈉、硫氰酸_、甲酸納、曱酸鉀及甲酸銨。 25. 如請求項24之方法’其中該鹽之濃度為約〇1 μ至約1〇 M。 26. —種製備抗硬化蛋白IgG抗體之晶體的方法，該抗體包含 SEQ ID NO: 3及5之輕鍵可變區及重鍵可變區，較佳具有胺基酸序列SEQ ID NO: 13及1 5 ’該方法包括將該抗體之溶液與包含丁二酸、PEG-1000、PEG-8000或異丙醇之結 163325.doc 201247703 晶試劑組合，從而形成晶體。 27.如請求項24或26之方法，其中使至少80°/。之該抗體結晶。 28_如請求項24或26之方法，其為分批結晶法。 29. 如請求項26之方法，其中該結晶試劑包含 (a) 約0.1 Μ至約5 Μ丁二酸、約0.1 Μ至約5 M HEPES及約 0.1% (w/v)至約60% (w/v)聚乙二醇單甲醚2000 ; (b) 約 1% (w/v)至約 50% (w/v)PEG-8000、約 0.05 Μ至約 5 Μ 味°坐及約0.1 Μ至約5 Μ乙酸弼； (c) 約 10%至約 80% (w/v)PEG-1000、約 0.05 Μ至約 5 Μ磷酸鈉/鉀及約0.05 Μ至約5 Μ氣化鈉； (d) 約 1% (w/v)至約 20% (w/v)PEG-8000、約〇.〇5 Μ至約 5 Μ 二甲胂酸鹽、約0·1 Μ至約2 Μ乙酸鈣及約10%至約 3 0% (w/v)甘油；或 (e) 約10%至約30%異丙醇及約（Μ μ至約2 Μ磷酸鈉/卸。 30. —種抗體晶體’其係由如請求項24或26之方法產生。 31. —種增加哺乳動物個體之骨礦物質密度、治療與骨密度降低有關之病症、治療骨相關病症或改善程序、置換術、移植、手術或修復之結果的方法，其包括投與有效增加該個體之骨礦物質密度之量的如請求項2至17中任一項之調配物。 I63325.doc