CN105777858B - 多种抗体的复合稳定剂及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种多种抗体的复合稳定剂及其使用方法。本发明包括以下组分(浓度)：吐温80 10‑13g/L，谷氨酸20‑30g/L，谷胱甘肽1‑3g/L，海藻糖50‑60g/L，十二烷基二甲基甜菜碱2‑6g/L，卵磷脂3‑6g/L，缓冲液100‑120mmol/L。本发明成本低、适用范围广、稳定期长、稳定效果好。

Description

多种抗体的复合稳定剂及其使用方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种多种抗体的复合稳定剂及其使用方法。

背景技术

国内外临床生化诊断试剂产品中广泛应用到多种抗体作为生物化学诊断试剂的主要原料，是临床生化诊断试剂中最为关键的原材料之一。但是几乎所有抗体的稳定性都较差，尤其稀释后在水溶液中的保存时间比较短，有的时候保存数天，在临床诊断使用中造成很大的不方便。

抗体为活性物质，自身分解较快，因此抗体在水溶液中难以长期保存，稳定性较差。抗体为蛋白质多肽链，具有氨基端和羧基端，其活性下降多伴随着多肽链的分解。作为临床生化诊断产品中主要原材料抗体的种类很多，但是国内目前没有对多种抗体同时能起到保护和复合稳定的有效方法。大多是制成单独的试剂盒，不同的抗体研制、配合不同配方的稳定剂进行长期、低温的保存，调节不同的用量、剂型、pH等，如中国专利CN104198420A“一种稳定的总胆汁酸检测试剂盒”，提供了一种NADH为活性物质的试剂盒，在其中加入了抗氧化酶以提高制剂的稳定性，提高循环反应的速度，使用针对性较高，适用范围较窄。目前的抗体稳定剂在实际应用过程中，效果并不理想，增加抗体稳定的时间一般不超过37℃1-2天。因此寻找一种能大幅度增加抗体稳定性，并能对常用的多种抗体起稳定作用的稳定剂有着极大的迫切性。为追求稳定剂的通用型和保存时长，冻干保护剂的研发正逐渐兴起，中国专利CN103705935A“一种耐热冻干保护剂及其制备方法和应用”，提供了一种冻干保护剂，可与疫苗病毒液混合冻干制成冻干疫苗，虽然在2-8℃下可保存36个月，但是由于疫苗剂型限制，使用多有不便。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种成本低、适用范围广、稳定期长、稳定效果好的多种抗体的复合稳定剂及其使用方法。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

本发明多种抗体的复合稳定剂，包括以下组分(浓度)：吐温80 10-13g/L，谷氨酸20-30g/L，谷胱甘肽1-3g/L，海藻糖50-60g/L，十二烷基二甲基甜菜碱2-6g/L，卵磷脂3-6g/L，缓冲液100-120mmol/L。

本发明多种抗体的复合稳定剂，进一步的，所述复合稳定剂包括以下组分(浓度)：吐温80 10g/L，谷氨酸20g/L，谷胱甘肽2g/L，海藻糖50g/L，十二烷基二甲基甜菜碱4g/L，卵磷脂5g/L，缓冲液100mmol/L。

本发明多种抗体的复合稳定剂，进一步的，所述缓冲液为Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、HEPS缓冲液或AMP缓冲液。

本发明多种抗体的复合稳定剂，进一步的，所述缓冲液pH值为7-8。

本发明多种抗体的复合稳定剂，进一步的，所述复合稳定剂按照以下方法制备而成：取一定量水，然后加入吐温80、谷氨酸、谷胱甘肽、海藻糖、十二烷基二甲基甜菜碱、卵磷脂、缓冲液，待物质完全溶解后，定容。

本发明多种抗体的复合稳定剂的使用方法，复合稳定剂以体积比为1:(80-99)加入抗体制剂中。

本发明多种抗体的复合稳定剂与现有技术相比，具有如下有益效果：

本发明多种抗体的复合稳定剂进行了特殊的选材和配比调整，并且在配方中添加了卵磷脂，其在组合中起到了很好的调和与促进作用，将自身与其他稳定剂的功效发挥至最大，使得到的复合稳定剂可同时对多种不同种类的抗体具有优异的保护效果。

现有市面上的稳定剂大多是应用在试剂盒中，针对一种或一类抗体保护效果较好，但是大多也都是在2-8℃范围内保存，在37℃下的有效保存时间一般不超过5天，但是本发明制得的复合稳定剂对多种不同类别的抗体能同时起到较好的保护作用，在37℃下处理7d、9d、12d的各种抗体的残剩活性可分别达到79-94％、67-85％和57-80％，不仅使得抗体的保存期限和条件明显优于现有市面上常见的稳定剂，而且在适用的抗体种类上，涵盖了现在市面上常用的抗体种类，适用范围之广是现有稳定剂所无法达到的，且效果原优于市面常见的通用型稳定剂30％左右。

本发明多种抗体的复合稳定剂对多种抗体的保护效果稳定，不会随着保存时间的延长和条件的改变，出现较大的差异。当环境温度上升到37℃时，随着保存时间的延长，市售稳定剂对抗体的稳定效果就会有明显的下降，且稳定效果的下降程度逐渐增大。从保护抗体的种类来讲，市售稳定剂对不同种类抗体的保护效果差异较大，随着时间的延长，这种差异逐渐增大，而本发明制得的复合稳定剂对不同种类的抗体保护效果比较均衡，且很稳定，不会随着时间的延长，产生对不同种类抗体的保护效果差异扩大的现象。

具体实施方式

制备实施例

本发明按照以下方法制备多种抗体的复合稳定剂：

取900mL水，然后加入表1所示量的各种成分，待物质完全溶解后，定容至1000mL。

表1 复合稳定剂的组分及其用量

	实施例1	实施例2	实施例3	实施例4	实施例5
						吐温80(g)	10	12	11	10	13
谷氨酸(g)	30	25	20	22	27
						谷胱甘肽(g)	2	2.4	1	3	1.6
海藻糖(g)	52	60	55	50	59
						十二烷基二甲基甜菜碱(g)	4	2	6	3	5
卵磷脂(g)	3	5	6	3	4
						Tris缓冲液(mmol)	100				120
磷酸盐缓冲液(mmol)				120
						HEPS缓冲液(mmol)		110
AMP缓冲液(mmol)			100

应用实施例

设置5个实验组和1个对照组，每组设置3个平行实验，实验组取制备实施例制得的复合稳定剂10毫升添加至990毫升分别含有β2-微球蛋白抗体、视黄醇结合蛋白抗体、前白蛋白抗体、肌钙蛋白I抗体、肌红蛋白抗体、胱氨酸蛋白抗体抑制剂C抗体、载脂蛋白A1抗体、载脂蛋白B抗体、载脂蛋白E抗体、脂蛋白a抗体、糖化血红蛋白抗体、超敏C反应蛋白抗体、抗链球菌溶血素“O”抗体、类风湿因子抗体的制剂中，放37℃水浴箱7d、9d、12d后，分别检测残剩抗体活性，并将各组实施例的检测结果做统计平均分析，结果如表2所示。对照组为未添加任何稳定剂的抗体制剂。

表2 37℃下放置7d、9d、12d后的残剩抗体活性检测

针对表2中所述多种不同种类的抗体制剂，与不添加任何稳定剂的抗体制剂相比，添加了本发明制得的复合稳定剂，在37℃下处理7d、9d、12d的各种抗体的残剩活性有明显的提高。在37℃下处理7d，实验组的残剩抗体制剂活性平均为79-94％，与对照组相比，提高了22-41％；在37℃下处理9d，实验组的残剩抗体制剂活性平均为67-85％，与对照组相比，提高了9-44％；在37℃下处理12d，实验组的残剩抗体制剂活性平均为57-80％，与对照组相比，提高了20-48％。现有市面上的稳定剂大多是应用在试剂盒中，针对一种或一类抗体保护效果较好，但是大多也都是在2-8℃范围内保存，在37℃下的有效保存时间一般不超过5天，但是本发明制得的复合稳定剂对多种不同类别的抗体能同时起到较好的保护作用，在37℃条件下放置12d，仍可保证残剩抗体活性在60％以上，不仅使得抗体的保存期限和条件明显优于现有市面上常见的稳定剂，而且在适用的抗体种类上，涵盖了现在市面上常用的抗体种类，适用范围之广是现有稳定剂所无法达到的，且效果原优于市面常见的通用型稳定剂。

对比实施例1

设置1个空白对照组、2个实验组和2个对比组，空白对照组为未添加任何稳定剂的抗体制剂，实验组取上述制备实施例1、3制得的复合稳定剂10mL添加至800mL分别含有β2-微球蛋白抗体、视黄醇结合蛋白抗体、前白蛋白抗体、肌钙蛋白I抗体、肌红蛋白抗体、胱氨酸蛋白抗体抑制剂C抗体、载脂蛋白A1抗体、载脂蛋白B抗体、载脂蛋白E抗体、脂蛋白a抗体、糖化血红蛋白抗体、超敏C反应蛋白抗体、抗链球菌溶血素“O”抗体、类风湿因子抗体的制剂中，对比组分别选取上海闪晶分子生物科技有限公司生产的抗体稳定剂和上海博升生物科技有限公司生产的抗体稳定剂(PBS)，将其按指定用量添加至含有上述抗体的制剂中，分别放置在37℃的水浴箱内2d和5d，检测其残剩抗体活性，检测结果如表3所示。

表3 37℃下放置2d和5d后的抗体残剩活性检测结果

由表3可知，在37℃下放置5天后，对比组使用市售稳定剂的残剩抗体活性已经与未使用任何稳定剂的空白对照组的相差无几，与对比组相比，采用本发明实施例1、3制得的复合稳定剂的抗体残剩活性仍然较高，37℃下放置2d，残剩抗体活性为91-100％，比空白对照组高12-26％，比对比组高5-26％；37℃下放置5d，残剩抗体活性为84-94％，比空白对照组高23-34％，比对比组高19-30％，可见，当环境温度上升到37℃时，随着保存时间的延长，对比组的市售稳定剂对抗体的稳定效果就会有明显的下降，且稳定效果的下降程度逐渐增大。从保护抗体的种类来讲，对比组市售稳定剂对不同种类抗体的保护效果差异较大，随着时间的延长，这种差异逐渐增大，而由表3可见，本发明制得的复合稳定剂对不同种类的抗体保护效果比较均衡，且很稳定，不会随着时间的延长，产生对不同种类抗体的保护效果差异扩大的现象。

对比实施例2

以上述制备实施例4所述配方为基准，进行对比实验。设置9组对比实验，1-6组分别将吐温80、谷氨酸、谷胱甘肽、海藻糖、十二烷基二甲基甜菜碱和卵磷脂顺次去掉一种成分，其余成分的用量浓度与制备实施例4所述配方相同，7-9组将上述六种组分的配比进行随机颠倒和互换，具体配方如表4所示，并按照制备实施例4所述方法进行制备，得到的稳定剂取10mL添加至900mL分别含有β2-微球蛋白抗体、视黄醇结合蛋白抗体、前白蛋白抗体、肌钙蛋白I抗体、肌红蛋白抗体、胱氨酸蛋白抗体抑制剂C抗体、载脂蛋白A1抗体、载脂蛋白B抗体、载脂蛋白E抗体、脂蛋白a抗体、糖化血红蛋白抗体、超敏C反应蛋白抗体、抗链球菌溶血素“O”抗体、类风湿因子抗体的制剂中，在37℃条件下放置7d，分别检测其中残剩抗体的活性，检测结果如表5所示。

表4对比实施例2的各对比组中组分的用量

	1	2	3	4	5	6	7	8	9
										吐温80(g)		10	10	10	10	10	3	3	30
谷氨酸(g)	22		22	22	22	22	10	50	3
										谷胱甘肽(g)	3	3		3	3	3	22	3	10
海藻糖(g)	50	50	50		50	50	3	3	10
										十二烷基二甲基甜菜碱(g)	3	3	3	3		3	50	22	3
卵磷脂(g)	3	3	3	3	3		3	10	22
										磷酸盐缓冲液(mmol)	120	120	120	120	120	120	120	120	120

表5 37℃下放置7d各对比组的残剩抗体活性检测结果

由表5可知，对比实验1-6组，分别将活性成分去掉一种制得的稳定剂，与制备实施例4相比，其对相同种类的抗体活性的保护效果出现了不同程度的降低，并且针对抗体的种类不同，其活性的降低程度出现较大的浮动，由此可见，去掉本发明配方中的活性成分，会导致复合稳定剂的保护效果变差，并且对不同种类抗体的使用范围发生变化。7-9组将活性组分的用量进行随机颠倒和互换，制得的稳定剂对不同种类的抗体保护效果差异较大，缩小了复合保护剂的有效适用范围。

以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (5)

1.多种抗体的复合稳定剂，其特征在于：由以下组分组成：吐温80 10-13g/L，谷氨酸20-30g/L，谷胱甘肽1-3g/L，海藻糖50-60g/L，十二烷基二甲基甜菜碱2-6g/L，卵磷脂3-6g/L，缓冲液100-120mmol/L；所述缓冲液pH值为7-8。

2.根据权利要求1所述的多种抗体的复合稳定剂，其特征在于：由以下组分组成：吐温80 10g/L，谷氨酸20g/L，谷胱甘肽2g/L，海藻糖50g/L，十二烷基二甲基甜菜碱4g/L，卵磷脂5g/L，缓冲液100mmol/L。

3.根据权利要求1所述的多种抗体的复合稳定剂，其特征在于：所述缓冲液为Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、HEPS缓冲液或AMP缓冲液。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的多种抗体的复合稳定剂，其特征在于：所述复合稳定剂按照以下方法制备而成：取一定量水，然后加入吐温80、谷氨酸、谷胱甘肽、海藻糖、十二烷基二甲基甜菜碱、卵磷脂、缓冲液，待物质完全溶解后，定容。

5.根据权利要求1-3任意一项所述的多种抗体的复合稳定剂的使用方法，其特征在于：复合稳定剂以体积比为1:(80-99)加入抗体制剂中。