CN103472222B - 一种长效酶标板稳定剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种用于维持酶标板中蛋白活性的长效酶标板稳定剂，其每100ml水中，含有：蛋白质0.1-5g，糖类物质1-15g，有机物0.1-10g，防腐剂0.01-0.1%(V/V)，缓冲液盐类10-200mmolpH7.2-7.4。本发明采取的是将封闭工艺和稳定工艺合为一体的技术路线，所发明的稳定剂不仅能有效的封闭酶标板中的多余位点，同时稳定剂中的一些有效成分能够保证酶标板持续稳定。本发明的配方简单，在稳定酶标板的同时，不会对结果产生任何影响。本发明的组分易得且配方简单，有利于降低稳定液的成本。<b><u /></b>
Description
技术领域
本发明涉及一种用于维持酶标板中蛋白活性的酶标板稳定剂。
背景技术
免疫检测技术在当今的临床检测及生命科学研究中都得到了广泛的应用，相关产品数量巨大，市场前景广阔。免疫检测技术包括酶联免疫分析技术、化学发光免疫分析技术、时间分辨荧光免疫分析技术等，这些检测技术所用的固相载体大部分为酶标板。
酶标板作为免疫检测试剂盒的关键组分之一，不仅要有一定的敏感度和特异性，其重复性和稳定性也是非常重要的。良好的稳定性，是其数据可靠性的一个重要标志。但是，一些酶类及蛋白标记物质，其稳定性是非常差的。当抗原或抗体包被于酶标板中后，在运输及长期保存的过程中，抗原或抗体的结构有可能发生改变，导致酶标板原有的检测功能衰退或彻底丧失，从而导致检测试剂的整体失效。
目前解决酶标板的稳定性问题的方法有两种：一种是将封闭工艺和稳定工艺分两步，即先封闭，后加稳定剂；该方法耗时长、效率低。第二种是将封闭工艺和稳定工艺合为一体，实现在一步中达到封闭及稳定的效果。该方法具有耗时短，操作简单等特点，已逐渐被大多数生产厂家所采用。
近年来，人们发现了一些有助于提高蛋白质溶液稳定性的物质，如牛血清白蛋白（BSA）等。将牛血清白蛋白添加到酶标板中，可以在一定程度上保持蛋白质的活性，但是效果仍然不理想。因此，很有必要开发一种由多组分构成的价格低廉且长效酶标板稳定剂。
中国专利CN201110162393.2公开了一种微孔板封闭稳定剂，其包括蛋白、糖类、有机聚合物、非离子型表面活性剂、防腐剂和缓冲液，可以有效延长微孔板的有效期；非离子型表面活性剂在生物科学领域有着广泛的应用，但是其仍旧具有一些生物毒性，如吐温类表面活性剂有溶血作用，且吐温20色深、有异味。中国专利CN201210116851.3公开了一种酶联免疫体外诊断试剂中封闭液，其包括缓冲液、牛血清蛋白、海藻糖、蛋白稳定剂、L-赖氨酸、Proclin300以及氢氧化钠或盐酸，其中的氢氧化钠或盐酸，虽然只是作为酸碱调节剂，加入的量较少，但由于其属于强酸或强碱，电离后产生的阳离子和阴离子仍会对试验产生一定的影响。因此，迫切需要开发一种更安全、更长效的新型酶标板稳定剂。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于维持酶标板中蛋白活性的由多组分构成的、稳定杆的长效酶标板稳定剂。
本发明的技术方案如下：
本发明的长效酶标板稳定剂，每100ml水中，含有：
蛋白质0.1-5g
糖类物质1-15g
有机物0.1-10g
防腐剂0.01-0.1%(V/V)
缓冲液盐类10-200mMpH7.2-7.4
所述的蛋白质为重组人血清白蛋白、牛血清白蛋白、卵清白蛋白或酪蛋白水解物中的一种或两种以上；
所述的糖类物质为葡萄糖、肌糖、菊糖、麦芽糖糊精、右旋糖酐或肝素中的一种或两种以上；
所述的有机物为甘油、山梨醇、精氨酸、甘氨酸、甘露醇、脯氨酸、谷氨酸钠、谷氨酸、丙氨酸、赖氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、甲基丙烯酸酯类或聚乙烯亚胺中的一种或两种以上；
所述的防腐剂为ProClin150、ProClin200、ProClin300或ProClin5000中的一种；
所述的缓冲液盐类为磷酸盐缓冲液和/或NaCl-EDTANa缓冲液。
进一步的，本发明还包括金属离子螯合剂。
进一步的，本发明所述的蛋白质为牛血清白蛋白或酪蛋白水解物。
进一步的，本发明所述的糖类物质为菊糖或右旋糖酐。
进一步的，本发明所述的有机物为甘油、山梨醇或甘露醇。
进一步的，本发明所述的缓冲液盐类为磷酸盐缓冲液。
进一步的，本发明所述的金属离子螯合剂为乙二胺四乙酸二钠盐。
其中所述蛋白质的作用是吸附于酶标板上，将酶标板上的结合位点全部填充，使酶标板上的蛋白质达到一定的浓度，即起到封闭的作用，又可以保持酶与目的蛋白的稳定性。
其中所述糖类物质的作用是阻止蛋白质结构的改变，防止蛋白质的伸展和聚集，并提供一种亲水的整体环境，可以显著提高酶与目的蛋白的稳定性。
其中所述有机物的作用是：使得目的蛋白优先与水分子结合，蛋白质表面张力增加，化学势提高，从而提高了整个蛋白质分子的稳定性。
其中所述防腐剂的作用是：防止细菌、真菌及酵母菌的生长，本发明选用的防腐剂具有光谱的抗菌性，能长时间的抑制细菌、真菌和酵母菌等微生物的生长。
其中所述缓冲盐的作用是：提供一定的离子环境。
其中金属离子螯合剂的作用是：螯合金属离子，避免金属离子对实验结果造成的影响。
本发明的有益效果是：本发明采取的是将封闭工艺和稳定工艺合为一体的技术路线，所发明的稳定剂不仅能有效的封闭酶标板中的多余位点，同时稳定剂中的一些有效成分能够保证酶标板持续稳定。本发明的配方简单，在稳定酶标板的同时，不会对结果产生任何影响。本发明的组分易得且配方简单，有利于降低稳定液的成本。
具体实施方式
下面结合实施例及附表对本发明做进一步的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
每100ml水中含有：
重组人血清白蛋白0.5g
右旋糖酐10g
甘油10ml
ProClin2000.02%
磷酸盐缓冲液100mM，pH7.4
乙二胺四乙酸二钠盐5mmol。
将100μL上述稳定剂加入到包被有甲胎蛋白抗体的酶标板中，以不加稳定剂的作为对照组。
使用方法：将100μL上述稳定剂加入到酶标板中，37度温浴1小时，将酶标板置于真空干燥箱中，真空干燥，封装。
将两种酶标板放置于37度环境中，放置2、4、6、8、10、12、14天，以0天的酶标板作为对照，以酶联免疫法检测并计算两种酶标板的残余活性。
从表1的数据中可以看出，没有加稳定剂的酶标板很快就失去了活性，而加有实施例1的酶标板随着时间的推移，其活性基本保持不变，显示本发明的稳定剂效果非常好。根据稳定性试验，预期加有本发明的酶标板的保质期为15个月，而一般市售酶标板的保质期为3个月，本发明可显著延长酶标板的有效期。
表1.实施例1的酶标板稳定性检测结果
实施例2
每100ml水中含有：
酪蛋白水解物2.5g
菊糖15g
山梨醇2g
ProClin3000.05%
磷酸盐缓冲液100mMpH7.4
乙二胺四乙酸二钠盐5mmol。
将100μL上述稳定剂加入到包被有甲胎蛋白抗体的酶标板中，以不加稳定剂的作为对照组。
使用方法：将100μL上述稳定剂加入到酶标板中，37度温浴1小时，将酶标板置于真空干燥箱中，真空干燥，封装。
将两种酶标板放置于37度环境中，放置2、4、6、8、10、12、14天，以0天的酶标板作为对照，以酶联免疫法检测并计算两种酶标板的残余活性。
从表2的数据中可以看出，没有加稳定剂的酶标板很快就失去了活性，而加有实施例2的酶标板随着时间的推移，其活性基本保持不变，显示本发明的稳定剂效果非常好。根据稳定性试验，预期加有本发明的酶标板的保质期为15个月，而一般市售酶标板的保质期为3个月，本发明可显著延长酶标板的有效期。
表2.实施例2的酶标板稳定性检测结果
实施例3
每100ml水中含有：
牛血清白蛋白5g
菊糖1g
甘露醇1g
ProClin3000.1%
磷酸盐缓冲液100mMpH7.4
乙二胺四乙酸二钠盐5mmol。
将100μL上述稳定剂加入到包被有甲胎蛋白抗体的酶标板中，以不加稳定剂的作为对照组。
使用方法：将100μL上述稳定剂加入到酶标板中，37度温浴1小时，将酶标板置于真空干燥箱中，真空干燥，封装。
将两种酶标板放置于37度环境中，放置2、4、6、8、10、12、14天，以0天的酶标板作为对照，以酶联免疫法检测并计算两种酶标板的残余活性。
从表3的数据中可以看出，没有加稳定剂的酶标板很快就失去了活性，而加有实施例3的酶标板随着时间的推移，其活性基本保持不变，显示本发明的稳定剂效果非常好。根据稳定性试验，预期加有本发明的酶标板的保质期为15个月，而一般市售酶标板的保质期为3个月，本发明可显著延长酶标板的有效期。
表3.实施例3的酶标板稳定性检测结果
实施例4~7
将100μL上述稳定剂加入到包被有甲胎蛋白抗体的酶标板中，以不加稳定剂的作为对照组。
使用方法：将100μL上述稳定剂加入到酶标板中，37度温浴1小时，将酶标板置于真空干燥箱中，真空干燥，封装。
将两种酶标板放置于37度环境中，放置14天，以0天的酶标板作为对照，以酶联免疫法检测并计算两种酶标板的残余活性。
从表4的数据中可以看出，没有加稳定剂的酶标板很快就失去了活性，而加有实施例4~7的酶标板随着时间的推移，其活性基本保持不变，显示本发明的稳定剂效果非常好。根据稳定性试验，预期加有本发明的酶标板的保质期为15个月，而一般市售酶标板的保质期为3个月，本发明可显著延长酶标板的有效期。
表4.实施例4~7的酶标板稳定性检测结果
Claims (3)
1.一种长效酶标板稳定剂，其特征在于其由下述物质组成，每100ml水中：
蛋白质0.1-5g
糖类物质1-15g
有机物0.1-10g
防腐剂0.01-0.1%(V/V)
缓冲液盐类10-200mMpH7.2-7.4
所述的蛋白质为重组人血清白蛋白、牛血清白蛋白或酪蛋白水解物中的一种；
所述的糖类物质为菊糖或右旋糖酐；
所述的有机物为甘油、山梨醇或甘露醇中的一种；
所述的防腐剂为ProClin200或ProClin300；
所述的缓冲液盐类为磷酸盐缓冲液和/或NaCl-EDTANa缓冲液。
2.根据权利要求1所述的一种长效酶标板稳定剂，其特征在于其由下述物质组成，每100ml水中：
蛋白质0.1-5g
糖类物质1-15g
有机物0.1-10g
防腐剂0.01-0.1%(V/V)
缓冲液盐类10-200mMpH7.2-7.4
金属离子螯合剂5~10mM
所述的蛋白质为重组人血清白蛋白、牛血清白蛋白或酪蛋白水解物中的一种；
所述的糖类物质为菊糖、右旋糖酐中的一种；
所述的有机物为甘油、山梨醇、甘露醇中的一种；
所述的防腐剂为ProClin200、ProClin300中的一种；
所述的缓冲液盐类为磷酸盐缓冲液和/或NaCl-EDTANa缓冲液；
所述的金属离子螯合剂为乙二胺四乙酸二钠盐。
3.根据权利要求1或2所述的一种长效酶标板稳定剂，其特征在于所述的缓冲液盐类为磷酸盐缓冲液。
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