CN102323403A - 一种抗原包被板保护剂及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抗原包被板保护剂及制备方法，它由低聚糖、大分子物质、多元醇、硫柳汞钠、吐温-20、tris-盐酸缓冲溶液按质量浓度比配制而成。其步骤是：首先配制浓度为0.024%的tris水溶液，用盐酸调pH值为7.2～7.6，即为tris-盐酸缓冲溶液。将tris-盐酸缓冲溶液置磁力搅拌器上室温搅拌，依次加入低聚糖、大分子物质、多元醇、硫柳汞钠、吐温-20。搅拌均匀后，置2～8℃冷藏保存。本发明方法简便，性状稳定。实践表明，用该抗原包被板保护剂处理的抗原或抗体包被板，保存期可明显延长，提高了酶联免疫吸附试验技术的商业价值。该抗原包被板保护剂同时可以起到封闭效果，无需再用其它封闭液处理和洗涤。

Description

一种抗原包被板保护剂及制备方法

技术领域

本发明涉及一种抗原包被板保护剂，具体说涉及酶联免疫吸附试验技术中抗原包被板保护剂，同时还涉及一种抗原包被板保护剂的制备方法。该保护剂适用于酶联免疫吸附试验技术中抗原(或抗体)包被板的处理，可延长包被板的保存期限。

背景技术

酶联免疫吸附试验法(ELISA)是免疫学诊断中的一项常用技术。自该技术问世以来，因其所需仪器化程度低、操作简便、敏感度高、特异性强、特别适合于对大量样本的筛检工作等优点被广泛使用。ELISA法不仅可以用于检测抗体，也可用于检测抗原，因此在生物医学各领域的应用范围日益扩大。

酶联免疫吸附试验法的原理之一是利用抗原或抗体可以物理性的吸附于固相载体表面，并保持其免疫学活性，再通过抗原与抗体免疫学反应发挥检测作用。用于酶联免疫吸附试验法的固相载体通常为聚苯乙烯制成的酶标板。将抗原或抗体吸附于酶标板上的过程称为包被。目前用于酶联免疫吸附试验的抗原(或抗体)包被板通常只用含白蛋白的缓冲溶液封闭，然后在低温干燥的条件下保存。这样简单处理的抗原(或抗体)包被板，在2～8℃低温条件下通常只能保存6个月左右。实际情况下，酶联免疫吸附试验法的检测产品在运输和使用的过程中，经常会遇到低温到室温的反复转变，使抗原(或抗体)包被板的使用期进一步缩短。如果用含糖、大分子物质等的保护剂处理包被了抗原或抗体的酶标板，则可对所吸附的蛋白分子起到保护作用，延长抗原(或抗体)包被板的使用期限，避免因抗原或抗体过早失去活性而影响检测技术的商业价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗原包被板保护剂的配方，该配方合理，保护效果明显，可以用于酶联免疫吸附试验中抗原(或抗体)包被板的处理，延长包被板的使用期限。

本发明的另一个目的是在于提供了一种抗原包被板保护剂的制备方法，该方法易行，操作简便，对操作人员和仪器设备的要求均不高，易于推广。

为了实现上述的目的，本发明采用以下技术方案：

一种抗原包被板保护剂，它由以下原料按重量百分比配制而成：

所述的低聚糖为海藻糖或蔗糖；

所述的大分子物质为牛血清白蛋白(BSA)或水解明胶；

所述的多元醇为山梨醇或甘露醇。

一种抗原包被板保护剂，它由以下原料按重量百分比配制而成：(较好范围)：

一种抗原包被板保护剂，它由以下原料按重量百分比配制而成：(最佳范围)：

一种抗原包被板保护剂，它由以下原料按重量百分比配制而成：(最佳值)：

一种抗原包被板保护剂的制备方法，其步骤是：

A、配制浓度为0.024％的tris水溶液，用盐酸调PH值为7.2～7.6，即为tris-盐酸缓冲溶液。

B、将tris-盐酸缓冲溶液置磁力搅拌器上室温(20～25℃，以下相同)搅拌，向溶液中依次加入低聚糖、大分子物质、多元醇、吐温-20、硫柳汞钠。

C、搅拌均匀后，置2～8℃冷藏保存。短期内不用，可分装置-20℃冻存。

上述抗原包被板保护剂的使用方法，包括以下步骤：

a)向吸附了抗原或抗体的的酶标板孔中各加120～150uL抗原包被板保护剂，置2～8℃环境下孵育10～14小时。

b)倒掉孔中的抗原包被板保护剂，在干净毛巾或吸水纸上拍干。

c)将抗原包被板冷冻干燥或室温吹干，放入锡箔袋中密封保存。

本发明中的低聚糖和多元醇成分能与蛋白分子形成氢键而代替了原有水的位置，起到低温保护功能和脱水保护作用。吐温-20作为表面活性剂在冻结和脱水过程中既能降低界面张力所引起的冻结和脱水变形，又能在复水过程中对活性组分起到润湿剂的作用。大分子物质能起到封闭效果，与糖类保护剂联合使用也能起到保护目标蛋白的作用。硫柳汞钠能起到抑制细菌生长的作用，防止保护剂因污染而变质。该抗原包被板保护剂有一定的粘稠度，会黏附在板孔中，干燥后起到保护抗原或抗体的作用。

本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：

本发明的保护剂原料易于获得，配制成本低，使用方法简便，性状稳定。实践表明，用该抗原包被板保护剂处理的抗原或抗体包被板，保存期可明显延长，提高了酶联免疫吸附试验技术的商业价值。此外，该抗原包被板保护剂同时可以起到封闭效果，无需再用其它封闭液处理和洗涤，简化了抗原或抗体包被板的生产工艺。

附图说明

图1为一种抗原包被板保护剂与常用的3种封闭液处理抗原包被板效果的比较示意图；

图1数据是用4种溶液处理的抗原包被板在不同保存时间内检测同样的阳性对照品所得的数据，当样品吸光值降低到0.8时，检测方法失效；

图2为一种抗原包被板保护剂与常用的3种封闭液封闭效果的比较示意图。

具体实施方式

本发明的抗原包被板保护剂含低聚糖、多元醇和大分子物质等保护剂成分，并对保护剂成分所占比例进行了优化。针对不同的反应体系，本领域的技术人员可根据使用效果选用不同的配方。其中的大分子物质有封闭效果，本领域的技术人员也可根据需要选择其他的大分子物质。配方中的山梨醇和甘露醇为同分异构体，效果相当，可互换。下面通过以下实施例对本发明详细说明。

实施例1

一种抗原包被板保护剂，它由以下原料按重量百分比配制而成：

一种抗原包被板保护剂的制备方法，其步骤是：首先配制浓度为0.024％的tris水溶液，用盐酸调PH值为7.2～7.6，即为tris-盐酸缓冲溶液。将tris-盐酸缓冲溶液置磁力搅拌器上室温搅拌，依次加入海藻糖、牛血清白蛋白、山梨醇、硫柳汞钠、吐温-20。搅拌均匀后，置2～8℃冷藏保存。短期内不用，可分装置-20℃冻存。

一种抗原包被板保护剂，它由以下原料按重量百分比配制而成：

其制备步骤与实施例1相同。

使用不同配比的抗原包被板保护剂处理口蹄疫病毒某非结构蛋白抗原包被板，检验其保护效果，结果如表1和表2所示。

表1含不同比例低聚糖和大分子物质的抗原包被板保护剂护效果比较表

从表1中的数据可知，低聚糖的含量在5％～20％，大分子物质含量在0.5％～3％时，抗原包被板的保质期较长。考虑到0.5％浓度以下的水解明胶封闭效果欠佳，2％的水解明胶和3％牛血清白蛋白久置易析出少量沉淀物，故将低聚糖的最佳含量确定为5％～10％，大分子物质最佳含量确定为0.5％～2％。

表2含不同比例多元醇和吐温-20的抗原包被板保护剂护效果比较表

从表2中的数据可知，在确定低聚糖和大分子物质浓度的前提下，多元醇的含量在2％～5％，吐温-20含量在0.03％～0.2％时，抗原包被板的保质期较长。硫柳汞钠作为防腐剂，用量一般为0.01％～0.04％，考虑到汞可能对环境造成污染，最佳用量确定为0.01％。

用本抗原包被板保护剂与常用的3种封闭液处理某抗原包被板，在不同保存时间内检测同样的阳性对照品，比较保护效果。其中封闭液1为含0.5％牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液，封闭液2为含5％脱脂奶粉的磷酸盐缓冲液，封闭液3为含1％明胶的磷酸盐缓冲液。试验结果表明本抗原包被板保护剂能显著延长抗原包被板的保存期，见图1；用本抗原包被板保护剂与常用的3种封闭液处理某抗原包被板，同步检测相同的阳性和阴性对照品，比较P/N值，确定各自的封闭效果。其中P为阳性对照品的吸光值，N为阴性对照品的吸光值，P/N值越大说明封闭效果越好。结果表明，本抗原包被板保护剂具有与常用封闭液相当的封闭效果，见图2。

以上所述实施例是本发明的较佳实施例。本发明的保护范围不限于实施例列举的范围，凡依本发明专利申请范围所述的特征及原理所做的等效变化，均包括在本发明专利申请范围内。

Claims (8)

1.一种抗原包被板保护剂，它由以下原料按重量百分比配制而成：

原料                       重量百分比%

低聚糖                     5%～20%

大分子物质                 0.5%～3%

多元醇                     2%～5% 

硫柳汞钠                   0.01%～0.04%

吐温-20                    0.03%～0.2%

tris-盐酸缓冲溶液            补至100%；

所述的低聚糖为海藻糖或蔗糖；

所述的大分子物质为牛血清白蛋白或水解明胶；

所述的多元醇为山梨醇或甘露醇。

2.根据权利要求1所述的一种抗原包被板保护剂，其特征在于：

原料                    重量百分比%

低聚糖                     5 %～15%

大分子物质                 0.5%～2.5% 

多元醇                     2%～5%

硫柳汞钠                   0.01%～0.04%

吐温-20                    0.03%～0.15%

tris-盐酸缓冲溶液            补至100%。

3.根据权利要求1所述的一种抗原包被板保护剂，其特征在于：

原料                     重量百分比%

低聚糖                     5 %～10%

大分子物质                 0.5%～2%

多元醇                     2%～4%

硫柳汞钠                   0.01%～0.02%

吐温-20                    0.04 %～0.1%

tris-盐酸缓冲溶液            补至100%。

4.根据权利要求1所述的一种抗原包被板保护剂，其特征在于：

原料                      重量百分比%

低聚糖                    6%

大分子物质                1%

多元醇                    3%

硫柳汞钠                 0.01%

吐温-20                  0.05%

tris-盐酸缓冲溶液          补至100%。

5.根据权利要求1所述的一种抗原包被板保护剂，其特征在于：

原料                     重量百分比%

低聚糖                   10%

牛血清白蛋白             0.5%

多元醇                   3%

硫柳汞钠                 0.01%

吐温-20                  0.05%

tris-盐酸缓冲溶液          补至100%。

6.根据权利要求1所述的一种抗原包被板保护剂，其特征在于：

原料                     重量百分比%

低聚糖                    6%    

牛血清白蛋白              2%   

甘露醇                    3%    

硫柳汞钠                 0.01%    

吐温-20                  0.05%    

tris-盐酸缓冲溶液        补至100%。

7.根据权利要求1所述的一种抗原包被板保护剂，其特征在于：

原料                    重量百分比%

   蔗糖                     10%

水解明胶                  1%

山梨醇                    4%

硫柳汞钠                 0.01%   

吐温-20                  0.05%   

tris-盐酸缓冲溶液        补至100%。

8.权利要求1所述的一种抗原包被板保护剂的制备方法，其步骤是：

A、配制浓度为0.024%的tris水溶液，用盐酸调PH值为7.2～7.6，即为tris-盐酸缓冲溶液；

B、将tris-盐酸缓冲溶液置磁力搅拌器上室温搅拌，向溶液中依次加入低聚糖、大分子物质、多元醇、硫柳汞钠、吐温-20；

C、搅拌均匀后，置2～8℃冷藏保存。

Images