CN101995459A - 包被板封闭液 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种包被板封闭液，该包被板封闭液的组成为：0.5～10g/L的蛋白质物质，0.5～5g/L的糖类物质，0.5～10g/L的氨基酸类物质，0.2～2g/L的表面活性剂，50～500万单位/L的硫酸庆大霉素，0.1～2g/L的Proclin 300，pH7.4的0.02mol/L的磷酸盐缓冲液。借助于本发明提供的技术方案，使用本发明的封闭液的包被板，不但能够对生物活性物质起到封闭效果，而且在离开低温环境后能够更长时间地保持生物活性物质的活性，从而能够解决相关技术中包被板离开低温储藏的环境后容易丧失活性的问题。此外，本发明提供的封闭液容易配制、不影响灵敏度、成本低、操作简单、无坏境污染、对人体无毒无害等。
Description
技术领域
本发明涉及一种包被板封闭液。
背景技术
目前，临床领域应用的免疫检测方主要有比浊测定、免疫层析、酶联诊断试剂(EIA)，以及近些年发展应用的化学发光免疫分析(CLIA)。其中，由于微量生物活性物质(例如抗原或抗体)包被吸附到包被板上后很容易丧失活性，板式EIA和CLIA法都涉及到一项关键的技术，即保持包被板的稳定性。
目前常用的包被板封闭液只能对包被板起到封闭的效果，并不能有效地保持其上的生物活性物质的活性。保持包被板上生物活性物质活性的方法通常是将包被板长期保存在-20℃以下的环境中，而在2～8℃冰箱存放一周或37℃破坏一天，其生物活性就损失了50％以上。
可见，相关技术中存在包被板离开低温储藏的环境后，容易丧失活性的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提出了一种包被板封闭液，用以解决相关技术中存在的包被板离开低温储藏的环境后容易丧失活性的问题。
根据本发明的一个方面，提供了一种包被板封闭液。
根据本发明的包被板封闭液的组成为：0.5～10g/L的蛋白质物质，0.5～5g/L的糖类物质，0.5～10g/L的氨基酸类物质，0.2～2g/L的表面活性剂，50～500万单位/L的硫酸庆大霉素，0.1～2g/L的Proclin 300，pH7.4的0.02mol/L的磷酸盐缓冲液。
优选地，上述蛋白质物质包括以下之一：牛血清白蛋白、酪蛋白。
优选地，上述糖类物质包括以下之一：海藻糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖。
优选地，上述氨基酸类物质包括以下之一：甘氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸。
优选地，上述表面活性剂包括以下之一：吐温-20(Tween-20)、吐温-80(Tween-80)、曲拉通X-100(TritonX-100)。
借助于本发明提供的技术方案，使用本发明的封闭液的包被板，不但能够对生物活性物质起到封闭效果，而且在离开低温环境后能够更长时间地保持生物活性物质的活性，从而能够解决相关技术中包被板离开低温储藏的环境后容易丧失活性的问题。此外，本发明提供的封闭液容易配制、不影响灵敏度、成本低、操作简单、无坏境污染、对人体无毒无害等。
本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。
具体实施方式
以下本发明的实施例进行说明，应当理解，此处所描述的实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
在对本发明的实施例进行说明之前，首先对本发明实施例的配制方法和使用方法进行说明。
根据本发明实施例的包被板封闭液的配置方法包括：首先，取一个洁净烧杯，先加入600ml的去离子水；然后，准确称量下述实施例中的各成分(例如蛋白质物质、糖类物质、氨基酸类物质、表面活性剂、硫酸庆大霉素、Proclin 300)；最后，在磁力搅拌器上搅拌至各类物质完全溶解，定容至1000ml，如有沉渣过滤去除。
根据本发明实施例的包被板封闭液使用方法包括：首先，把抗原或抗体以pH7.40.02mol/L的磷酸盐缓冲液稀释成一定浓度；其次，按100ul/孔加入稀释好的包被液，在2～8℃下包被16～20小时；然后，弃去包被板内的包被液，将包被板拍干后，按100ul～300/孔加入上述配制好的包被板封闭液，在2～8℃下包被16～20小时；最后，弃去包被板内的封闭液，将包被板拍干后，放置于湿度小于30％的35～39℃干燥箱中烘干4～6小时即可。
下面对本发明的实施例进行说明。
实施例1
以本发明实施例包被的抗促甲状腺激素(TSH)单抗建立的TSH化学发光免疫分析方法包括以下步聚：
步骤1、按照上述配制方法配制包被板封闭液，其组分和浓度为：
0.02mol/L磷酸盐(PBS)缓冲体系 pH7.4
牛血清白蛋白(BSA) 0.5g/L
葡萄糖 0.5g/L
酪氨酸 0.5g/L
吐温-20(Tween-20) 0.2g/L
硫酸庆大霉素 50万单位/L
Proclin 300 0.1g/L
步骤2、以抗TSH单抗包被白色发光板，包被浓度为5ug/ml，100ul/孔，37℃包被2小时，洗板后，以上述封闭液按200/孔4℃包被18小时后，弃去包被板内的封闭液，拍干后，放置于湿度为25％的37℃干燥箱中烘干4小时；再把多个包被好的包被板分别放置于37℃的恒温箱中3天、7天、15天、30天、60天后取出，与2～8℃存放的包被板平行比较；
步骤3、把抗TSH单抗-HRP酶结合物以1％BSA/0.01M PBSpH 7.4作为酶稀释液配成1ug/ml的浓度；
步骤4、配制0μIU/ml、0.1μIU/ml、0.5μIU/ml、2.5μIU/ml、15μIU/ml、100μIU/ml系列TSH定标品；
步骤5、设定好加样孔，将50μl系列TSH定标品和质控品QCL、QCH加在存放在2～8℃的TSH包被板和分别放置于37℃的恒温箱中3天、7天、15天、30天、60天破坏后的TSH包被板上，再加50μl稀释抗TSH单抗HRP酶结合物，37℃反应1小时后，用加入吐温-20的磷酸盐缓冲液(PBS-T)洗板5次，拍干；
步骤6、每孔加入底物液100μl，第5分钟以光子计数仪检测发光信号值，其结果如下表一所示。
表一
实施例二
以本发明实施例包被的抗TSH单抗建立的TSH化学发光免疫分析方法包括以下步聚：
步骤1、按照上述配制方法配制包被板封闭液，其组分和浓度为：
0.02mol/L PBS缓冲体系 pH7.4
酪蛋白 3.5g/L
海藻糖 2.5g/L
脯氨酸 2.5g/L
吐温-80(Tween-80) 1.0g/L
硫酸庆大霉素 160万单位/L
Proclin 300 1g/L
步骤2、以抗TSH单抗包被白色发光板，包被浓度为5ug/ml，100ul/孔，37℃包被2小时，洗板后，以上述封闭液按200/孔4℃包被18小时后，弃去包被板内的封闭液，拍干后，放置于湿度为25％的37℃干燥箱中烘干4小时；再把多个包被好的包被板分别放置于37℃恒温箱中3天、7天、15天、30天、60天后取出，与2～8℃存放包被板平行比较；
步骤3、把抗TSH单抗-HRP酶结合物以1％BSA/0.01M PBSpH 7.4作为酶稀释液配成1ug/ml的浓度；
步骤4、配制0μIU/ml、0.1μIU/ml、0.5μIU/ml、2.5μIU/ml、15μIU/ml、100μIU/ml系列TSH定标品；
步骤5、设定好加样孔，将50μl系列TSH定标品和质控品QCL、QCH加在存放在2～8℃的TSH包被板和分别放置于37℃的恒温箱中3天、7天、15天、30天、60天破坏后的TSH包被板上，再加50μl稀释抗TSH单抗-HRP酶结合物，37℃反应1小时后，以PBS-T洗板5次，拍干；
步骤6、每孔加入底物液100μl，第5分钟以光子计数仪检测发光信号值，其结果如下表二所示。
表二
实施例三
以本发明实施例包被的抗TSH单抗建立的TSH化学发光免疫分析方法，该方法包括以下步聚：
步骤1、按照上述配制方法配制包被板封闭液，其组分和浓度为：
0.02mol/L PBS缓冲体系 pH7.4
牛血清白蛋白 10g/L
乳糖 5g/L
甘氨酸 10g/L
曲拉通X-100(Triton X-100) 2g/L
硫酸庆大霉素 500万单位/L
Proclin 300 2g/L
步骤2、以抗TSH单抗包被白色发光板，包被浓度为5ug/ml，100ul/孔，37℃包被2小时，洗板后，以上述封闭液按200/孔4℃包被18小时后，弃去包被板内的封闭液，拍干后，放置于湿度为25％的37℃干燥箱中烘干4小时；再把多个包被好的包被板分别放置于37℃的恒温箱中3天、7天、15天、30天、60天后取出，与2～8℃存放的包被板平行比较；
步骤3、把抗TSH单抗-HRP酶结合物以1％BSA/0.01M PBSpH 7.4作为酶稀释液配成1ug/ml的浓度；
步骤4、配制0μIU/ml、0.1μIU/ml、0.5μIU/ml、2.5μIU/ml、15μIU/ml、100μIU/ml系列TSH定标品；
步骤5、设定好加样孔，将50μl系列TSH定标品和质控品QCL、QCH加在存放在2～8℃的TSH包被板和分别放置于37℃的恒温箱中3天、7天、15天、30天、60天破坏后的TSH包被板上，再加50μl稀释抗TSH单抗-HRP酶结合物，37℃反应1小时后，以PBS-T洗板5次，拍干；
步骤6、每孔加入底物液100μl，第5分钟以光子计数仪检测发光信号值，其结果如下表三所示。
表三
实施例四
以本发明实施例包被的抗人绒毛膜促性腺激素(HCG)单抗建立的HCG酶联免疫分析方法包括以下步聚：
步骤1、按照上述配制方法配制包被板封闭液，其组分和浓度为：
0.02mol/L PBS缓冲体系 pH7.4
酪蛋白 0.5g/L
蔗糖 0.5g/L
谷氨酰胺 0.5g/L
Tween-20 0.2g/L
硫酸庆大霉素 50万单位/L
Proclin 300 0.1g/L
步骤2、以抗HCG单抗包被白色发光板，包被浓度为5ug/ml，100ul/孔，37℃包被2小时，洗板后，以上述封闭液按200/孔4℃包被18小时后，弃去包被板内的封闭液，拍干后，放置于湿度为25％的37℃干燥箱中烘干4小时；再把多个包被好的包被板分别放置于37℃的恒温箱中3天、7天、15天、30天、60天后取出，与2～8℃存放的包被板平行比较；
步骤3、把抗HCG单抗-HRP酶结合物以1％BSA/0.01M PBSpH 7.4作为酶稀释液配成1ug/ml的浓度；
步骤4、配制0mIU/ml、2mIU/ml、10mIU/ml、25mIU/ml、100mIU/ml、250mIU/ml系列HCG定标品；
步骤5、设定好加样孔，将50μl系列HCG定标品和质控品QCL、QCH加在存放在2～8℃的HCG包被板和分别放置于37℃的恒温箱中3天、7天、15天、30天、60天破坏后的HCG包被板上，再加50μl稀释抗HCG单抗-HRP酶结合物，37℃反应1小时后，以PBS-T洗板5次，拍干；
步骤6、每孔加入四甲基联苯胺(TMB)底物液A和B各50μl，37℃避光反应10分钟后，加入终止液50μl，以波长450nm(参考波长630nm)读取各孔OD值，其结果如下表四所示。
表四
实施例五
以本发明实施例包被的抗HCG单抗建立的HCG酶联免疫分析方法包括以下步聚：
步骤1、按照上述配制方法配制包被板封闭液，其组分和浓度为：
0.02mol/L PBS缓冲体系 pH7.4
酪蛋白 10g/L
蔗糖 5g/L
赖氨酸 10g/L
Tween-80 2g/L
硫酸庆大霉素 500万单位/L
Proclin 300 2g/L
步骤2、以抗HCG单抗包被白色发光板，包被浓度为5ug/ml，100ul/孔，37℃包被2小时，洗板后，以上述封闭液按200/孔4℃包被18小时后，弃去包被板内的封闭液，拍干后，放置于湿度为25％的37℃干燥箱中烘干4小时；再把多个包被好的包被板分别放置于37℃的恒温箱中3天、7天、15天、30天、60天后取出，与2～8℃存放的包被板平行比较；
步骤3、把抗HCG单抗-HRP酶结合物以1％BSA/0.01M PBSpH 7.4作为酶稀释液配成1ug/ml的浓度；
步骤4、配制0mIU/ml、2mIU/ml、10mIU/ml、25mIU/ml、100mIU/ml、250mIU/ml系列HCG定标品；
步骤5、设定好加样孔，将50μl系列HCG定标品和质控品QCL、QCH加在存放在2～8℃的HCG包被板和分别放置于37℃的恒温箱中3天、7天、15天、30天、60天破坏后的HCG包被板上，再加50μl稀释抗HCG单抗-HRP酶结合物，37℃反应1小时后，以PBS-T洗板5次，拍干；
步骤6、每孔加入TMB底物液A和B各50μl，37℃避光反应10分钟后，加入终止液50μl，以波长450nm(参考波长630nm)读取各孔OD值，其结果如下表五所示。
表五
综上所述，使用本发明提供的封闭液的包被板，不但能够对生物活性物质起到封闭效果，而且在离开低温环境后能够更长时间地保持生物活性物质的活性，可使包被了生物活性物质的包被板2～8℃稳定性长达二年，37℃稳定性长达一月，从而能够解决相关技术中包被板离开低温储藏的环境后容易丧失活性的问题。此外，本发明提供的包被板封闭液容易配制、不影响灵敏度、成本低、操作简单、无坏境污染、对人体无毒无害等。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种包被板封闭液，其特征在于，其组成为：0.5～10g/L的蛋白质物质，0.5～5g/L的糖类物质，0.5～10g/L的氨基酸类物质，0.2～2g/L的表面活性剂，50～500万单位/L的硫酸庆大霉素，0.1～2g/L的Proclin 300，pH7.4的0.02mol/L的磷酸盐缓冲液。
2.根据权利要求1所述的包被板封闭液，其特征在于，所述蛋白质物质包括以下之一：
牛血清白蛋白、酪蛋白。
3.根据权利要求1所述的包被板封闭液，其特征在于，所述糖类物质包括以下之一：
海藻糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖。
4.根据权利要求1所述的包被板封闭液，其特征在于，所述氨基酸类物质包括以下之一：
甘氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸。
5.根据权利要求1所述的包被板封闭液，其特征在于，所述表面活性剂包括以下之一：
吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100。
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| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C53 | Correction of patent of invention or patent application | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Liu Ping Inventor after: Luan Dawei Inventor after: Liang Xiubin Inventor after: Su Dongming Inventor before: Liu Ping Inventor before: Luan Dawei |
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| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: LIU PING LUAN DAWEI TO: LIU PING LUAN DAWEI LIANG XIUBIN SU DONGMING |
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| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20110330 |