CN113049809A - 用于心肌八项标志物检测的检测试剂盒、心肌八项标志物检测方法 - Google Patents
用于心肌八项标志物检测的检测试剂盒、心肌八项标志物检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113049809A CN113049809A CN201911384999.3A CN201911384999A CN113049809A CN 113049809 A CN113049809 A CN 113049809A CN 201911384999 A CN201911384999 A CN 201911384999A CN 113049809 A CN113049809 A CN 113049809A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- detection
- capture
- fluorescent
- detected
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 195
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 title abstract description 34
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 100
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 92
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims abstract description 48
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims abstract description 37
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims abstract description 27
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims abstract description 24
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims abstract description 24
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims abstract description 24
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims abstract description 15
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims abstract description 15
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 52
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 52
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 52
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 46
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 45
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 34
- 102400001263 NT-proBNP Human genes 0.000 claims description 32
- 102000016752 1-Alkyl-2-acetylglycerophosphocholine Esterase Human genes 0.000 claims description 30
- 108010024976 Asparaginase Proteins 0.000 claims description 30
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 30
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 30
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 claims description 30
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 claims description 30
- 239000003154 D dimer Substances 0.000 claims description 28
- 101100537532 Rattus norvegicus Tnni3 gene Proteins 0.000 claims description 28
- 108010052295 fibrin fragment D Proteins 0.000 claims description 28
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 25
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 18
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical group [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 16
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 16
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 13
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 13
- -1 carbohydrate compound Chemical class 0.000 claims description 13
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 13
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims description 12
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 claims description 12
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 11
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 11
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 10
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 claims description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 10
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 9
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 9
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 9
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 9
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 8
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 claims description 8
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 8
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical group OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 7
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 7
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 7
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 7
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 7
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 7
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 claims description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 6
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 6
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 6
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 6
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 claims description 6
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 6
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 1H-imidazole Chemical compound C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 4
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 claims description 4
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 claims description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 3
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 239000003109 Disodium ethylene diamine tetraacetate Substances 0.000 claims description 2
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 claims description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 claims description 2
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000000749 co-immunoprecipitation Methods 0.000 claims description 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims description 2
- 235000019301 disodium ethylene diamine tetraacetate Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 2
- 239000007986 glycine-NaOH buffer Substances 0.000 claims description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000011147 magnesium chloride Nutrition 0.000 claims description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 2
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims description 2
- KDFYOQXKHPVLKX-UHFFFAOYSA-M sodium 3-[bis(2-hydroxyethyl)amino]-2-hydroxypropane-1-sulfonic acid hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+].OCCN(CCO)CC(CS(=O)(=O)O)O KDFYOQXKHPVLKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 claims description 2
- ZEDAGFBWUVYFQU-UHFFFAOYSA-M sodium;3-morpholin-4-ylpropane-1-sulfonate;hydrate Chemical compound [OH-].[Na+].OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 ZEDAGFBWUVYFQU-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- QBQVXXQXZXDEHE-UHFFFAOYSA-M sodium;propane-1-sulfonate;hydrate Chemical compound O.[Na+].CCCS([O-])(=O)=O QBQVXXQXZXDEHE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 claims description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 2
- 102000011026 Fatty Acid Binding Protein 3 Human genes 0.000 claims 6
- 108010062715 Fatty Acid Binding Protein 3 Proteins 0.000 claims 6
- 108010008064 pro-brain natriuretic peptide (1-76) Proteins 0.000 claims 6
- 239000007982 barbital buffer Substances 0.000 claims 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 abstract description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 abstract description 6
- 101800001904 NT-proBNP Proteins 0.000 description 26
- 102000003896 Myeloperoxidases Human genes 0.000 description 25
- 108090000235 Myeloperoxidases Proteins 0.000 description 25
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 24
- 101710136552 Fatty acid-binding protein, heart Proteins 0.000 description 23
- 102100037738 Fatty acid-binding protein, heart Human genes 0.000 description 23
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 14
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 12
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 6
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 5
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 4
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 3
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 3
- CCMKPCBRNXKTKV-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-5-sulfanylidenepyrrolidin-2-one Chemical compound ON1C(=O)CCC1=S CCMKPCBRNXKTKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 2-[3-(dimethylamino)-6-dimethylazaniumylidenexanthen-9-yl]-4-isothiocyanatobenzoate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](C)C)C=C2OC2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC(N=C=S)=CC=C1C([O-])=O OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KPINNADQYBABPY-UHFFFAOYSA-N 5-(ethyliminomethylideneamino)-n,n-dimethylpentan-1-amine;hydrochloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCCCN(C)C KPINNADQYBABPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000030914 Fatty Acid-Binding Human genes 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 108091022862 fatty acid binding Proteins 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036046 immunoreaction Effects 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- BMVXCPBXGZKUPN-UHFFFAOYSA-N 1-hexanamine Chemical compound CCCCCCN BMVXCPBXGZKUPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 101800000407 Brain natriuretic peptide 32 Proteins 0.000 description 1
- 102400000667 Brain natriuretic peptide 32 Human genes 0.000 description 1
- 101800002247 Brain natriuretic peptide 45 Proteins 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010008479 Chest Pain Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 229940125717 barbiturate Drugs 0.000 description 1
- HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-N barbituric acid Chemical compound O=C1CC(=O)NC(=O)N1 HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 108010079058 casein hydrolysate Proteins 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 125000004218 chloromethyl group Chemical group [H]C([H])(Cl)* 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N dihydromaleimide Natural products O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 108091008039 hormone receptors Proteins 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229910001092 metal group alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- HPNRHPKXQZSDFX-OAQDCNSJSA-N nesiritide Chemical group C([C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(O)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 HPNRHPKXQZSDFX-OAQDCNSJSA-N 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000012803 optimization experiment Methods 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000007781 pre-processing Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- ZNJHFNUEQDVFCJ-UHFFFAOYSA-M sodium;2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid;hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+].OCCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 ZNJHFNUEQDVFCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VOQNBBBLMXZOET-UHFFFAOYSA-M sodium;3-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]propane-1-sulfonic acid;hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+].OCCN1CCN(CCCS(O)(=O)=O)CC1 VOQNBBBLMXZOET-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 1
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6486—Measuring fluorescence of biological material, e.g. DNA, RNA, cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
本申请提供一种用于心肌八项标志物检测的检测试剂盒、检测试剂盒在心肌八项标志物检测中的应用、心肌八项标志物检测方法以及荧光免疫分析系统,该用于心肌八项标志物检测的检测试剂盒包括:捕获免疫组合物以及检测免疫组合物;捕获免疫组合物至少包括:八个固相载体、分别连接八个固相载体的八个捕获配体、以及第一稀释液检测免疫组合物至少包括:NHS生物素、分别连接NHS生物素的八个检测配体、以及第二稀释液,其中,八个捕获配体与八个检测配体一一对应;捕获配体、检测配体可与相应的待测配体特异性结合,以形成免疫复合物。通过上述方式,本申请能够容易的实现心肌八项标志物的分类需求,并降低检测成本。
Description
技术领域
本申请涉及免疫检测技术领域,特别是涉及用于心肌八项标志物检测的检测试剂盒、心肌八项标志物检测方法。
背景技术
急性心肌梗塞(AMI)是冠状动脉急性、持续性缺血缺氧所引起的心肌坏死,严重威胁人类健康。对心肌梗塞预警、快速诊断及有效治疗评价是降低病人死亡率的关键。对于无典型胸痛和心电图改变不明显的心肌梗死患者,仅依靠心电图、超声心动图和心脏核磁共振,难以准确诊断。因此,检测血清心肌标志物是诊断AMI的必要依据。
而医院资源有限的情况下,多重免疫检测技术能够有效提高检测效率成为人们研究的热点,如何实现心肌八项标志物是目前急需解决的问题。
发明内容
本申请提供一种用于心肌八项标志物检测的检测试剂盒、检测试剂盒在心肌八项标志物检测中的应用、心肌八项标志物检测方法以及荧光免疫分析系统,能够容易的实现心肌八项标志物的分类需求,并降低检测成本。
为解决上述技术问题,本申请采用的一个技术方案是:提供一种用于心肌八项标志物检测的检测试剂盒,检测试剂盒包括:捕获免疫组合物以及检测免疫组合物;捕获免疫组合物至少包括:八个固相载体、分别连接八个固相载体的八个捕获配体、以及第一稀释液检测免疫组合物至少包括:NHS生物素、分别连接NHS生物素的八个检测配体、以及第二稀释液;其中,各个捕获配体、各个检测配体可与相应的待测配体特异性结合,以形成免疫复合物。
为解决上述技术问题,本申请采用的一个技术方案是:提供如前述的检测试剂盒在心肌八项标志物检测中的应用。
为解决上述技术问题,本申请采用的一个技术方案是:提供一种心肌八项标志物检测方法,方法包括:制备捕获免疫组合物、检测免疫组合物以及荧光示踪物组合物;处理待测样本以得到待测配体组合物;向检测体系中加入捕获免疫组合物和检测免疫组合物;混合待测样本与捕获免疫组合物、检测免疫组合物;孵育预设时间后,磁分离清洗,获得多个免疫复合物;混合免疫复合物与荧光示踪物组合物,获得待测复合物;检测多个待测复合物的荧光强度值。
为解决上述技术问题,本申请采用的一个技术方案是:提供一种荧光免疫分析系统,荧光免疫分析系统包括:如前述的检测试剂盒以及荧光免疫分析设备;其中,荧光免疫分析设备包括激光模块和信号接收模块,激光模块用于激发检测试剂盒中的多种荧光蛋白和多种固相载体,以发射多种激光;信号接收模块用于接收检测试剂盒中的多种荧光蛋白和多种固相载体的荧光物质发出的多种荧光信号。
本申请的有益效果是:本实施方式检测试剂盒使用不同的固相载体,捕获配体、检测配体与相应的待测配体进行特异性结合,得到免疫复合物,免疫复合物在荧光检测系统时,可以单个成列依次通过检测器,经采集、处理、分析不同的荧光信号,可以单个成列依次通过检测器,经采集、处理、分析不同的荧光信号,从而识别出各种心肌标志物的种类。进一步地,在该免疫复合物与荧光蛋白结合后,通过另一路荧光信号可同时检测不同固相载体的荧光强度,经数据处理后得出各种心肌标志物的含量,能够容易的实现心肌八项标志物的分类需求,并降低检测成本。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施方式中的技术方案,下面将对实施方式描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施方式,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。其中:
图1是本申请用于心肌八项标志物的检测试剂盒一实施方式的结构示意图;
图2是本申请心肌八项标志物检测方法一实施方式的流程示意图。
具体实施方式
下面将结合本申请实施方式中的附图,对本申请实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施方式仅仅是本申请一部分实施方式,而不是全部实施方式。基于本申请中的实施方式,本领域普通技术人员在没有做出创造性的劳动前提下所获得的所有其他实施方式,都属于本申请保护的范围。
图1是本申请用于心肌八项标志物的检测试剂盒一实施方式的结构示意图。检测试剂盒300包括:试剂盒本体310;试剂容纳位320,试剂容纳位320设置在试剂盒本体310上,用于容纳捕获抗体组合物以及检测抗体组合物。
检测试剂盒300包括:捕获免疫组合物以及检测免疫组合物。
捕获免疫组合物至少包括:八个固相载体、分别连接八个固相载体的八个捕获配体、以及第一稀释液。
检测免疫组合物至少包括:NHS生物素、分别连接NHS生物素的八个检测配体、以及第二稀释液,其中,八个捕获配体与八个检测配体一一对应。
其中,捕获配体、检测配体可与相应的待测配体特异性结合,以形成免疫复合物。该免疫复合物通过生物素与链霉亲和素标记的荧光蛋白连接。
进一步地,固相载体可通过其表面的偶联基团将捕获配体以共价键偶联在其表面,捕获配体包括:抗原、抗体、激素受体、酶、核酸、寡核苷酸、半抗原等。偶联基团包括羧基、羟基、氨基、甲苯磺酰基、氯甲基、巯基、醛基、酰肼、硅羟基、琥珀酰亚胺酯、环氧基中的至少一种。在此不做限定。
其中,捕获免疫组合物可以用于化学发光免疫分析法、电化学发光免疫分析法、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、酶促免疫分析法、生物素-亲和素系统测定法、放射免疫测定法、免疫荧光分析法中的至少一种方法。其中,ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。可以理解的,捕获免疫组合物的组成包括但不限于多种抗体和/或抗原,根据检测方法学的不同,其组成有差异。
区别于现有技术的情况,本实施方式检测试剂盒使用不同的固相载体,捕获配体、检测配体与相应的待测配体进行特异性结合,得到免疫复合物,免疫复合物在荧光检测系统时,可以单个成列依次通过检测器,经采集、处理、分析不同的荧光信号,可以单个成列依次通过检测器,经采集、处理、分析不同的荧光信号,从而识别出各种心肌标志物的种类。进一步地,在该免疫复合物与荧光蛋白结合后,通过另一路荧光信号可同时检测不同固相载体的荧光强度,经数据处理后得出各种心肌标志物的含量,能够容易的实现心肌八项标志物的分类需求,并降低检测成本。
其中,各个固相载体的工作浓度为500-2000个/Test,例如500个/Test、1000个/Test、2000个/Test。
在一实施方式中,固相载体为微孔板、玻璃片、微流控芯片、胶乳、磁性或非磁性的高分子微球、金属合金纳米颗粒、无机微球、无机/有机杂化微球、荧光磁球、磁珠、多功能荧光磁珠中的至少一种。荧光磁球由至少一种荧光染料和磁性微粒复合形成。
优选地,固相载体为具有不同荧光编码且粒径相同的荧光微球,或者,固相载体为具有不同粒径且相同荧光编码的荧光磁球。
由于各个项目固相载体的荧光编码不同(即荧光种类或荧光强度不同),或者各个项目固相载体的粒径不同,因此,其中一路信号可根据固相载体的粒径或荧光编码,从而识别出待测配体的种类,能够容易的实现心肌八项标志物的分类需求。
其中,荧光磁球的粒径可以为1-10um,例如2um、4um、6um或8um。
进一步地,固相载体可以为无荧光磁性高分子微球时,例如磁珠,该固相载体或者捕获配体上可以连接有捕获荧光示踪物,进而能够利用捕获荧光示踪物的种类不同,识别出待测配体的种类。
在一实施方式中,检测试剂盒300包括:检测免疫组合物。检测免疫组合物至少包括:NHS生物素、分别连接NHS生物素的八个检测配体、以及第二稀释液。其中,各个捕获配体、各个检测配体可与相应的待测配体特异性结合,以形成免疫复合物。该免疫复合物通过生物素与链霉亲和素标记的荧光蛋白连接。
区别于现有技术的情况,本实施方式检测试剂盒使用不同的固相载体,捕获配体、检测配体与相应的待测配体进行特异性结合,得到免疫复合物,免疫复合物在荧光检测系统时,可以单个成列依次通过检测器,经采集、处理、分析不同的荧光信号,可以单个成列依次通过检测器,经采集、处理、分析不同的荧光信号,从而识别出各种心肌标志物的种类。进一步地,在该免疫复合物与荧光蛋白结合后,通过另一路荧光信号可同时检测不同固相载体的荧光强度,经数据处理后得出各种心肌标志物的含量,能够容易的实现心肌八项标志物的分类需求,并降低检测成本。
在一实施方式中,按摩尔质量比计,检测配体与NHS生物素的比例为1:20。
在一实施方式中,检测配体的工作浓度为:1-10ug/mL。
在一实施方式中,第二稀释液包括10mMPBS、0.1%BSA、1%甘露醇、0.01%酪蛋白、5%蔗糖、0.05%Tween20以及0.1%防腐剂。
在一实施方式中,检测试剂盒还包括:荧光示踪物组合物。
荧光示踪物组合物至少包括:链霉亲和素标记的荧光蛋白以及第三稀释液,免疫复合物通过NHS生物素与链霉亲和素标记的荧光蛋白连接。
具体的,链霉亲和素是一种糖蛋白,可由蛋清中提取,每个链霉亲和素分子由4个亚基组成,可以和4个生物素分子亲密结合。链霉亲和素与生物素的结合,虽不属免疫反应,但特异性强,亲和力大,两者一经结合就极为稳定。由于1个链霉亲和素分子有4个生物素分子的结合位置,可以连接更多的生物素化的分子,形成一种类似晶格的复合体。
其中,各个项目的免疫复合物所连接的荧光蛋白的种类不同或者荧光强度不同。
区别于现有技术的情况,本申请检测试剂盒使用八个固相载体分别连接八个项目的捕获配体,在捕获配体可与相应的待测配体特异性结合形成免疫复合物后,该免疫复合物在荧光检测系统时,可以单个成列依次通过检测器,经采集、处理、分析不同的荧光信号,从而识别出各种心肌标志物的种类。进一步地,在该免疫复合物与荧光蛋白结合后,通过另一路荧光信号可同时检测不同固相载体的荧光强度,经数据处理后得出各种心肌标志物的含量,能够容易的实现心肌八项标志物的分类需求,并降低检测成本。
在一实施方式中,检测试剂盒还包括:待测配体组合物。待测配体组合物至少包括:待测样本以及第四稀释液。其中,待测样本包含待测配体,待测样本以及第四稀释液的体积比为1:2-1.优选地,待测样本以及第四稀释液的体积比为2:1。
其中,待测样本为全血样本;按体积比计,全血样本与第四稀释液的比例为4:1~1:4。
在一实施方式中,第四缓冲液含有以下成分:缓冲剂、渗透压维持剂、保护剂;
其中,缓冲剂为Tris碱(TrisBase)的缓冲液,渗透压维持剂为氯化钠,保护剂为BSA、海藻糖、蔗糖或HSA中的一种或几种。
在一实施方式中,按质量份数计,每份第四缓冲液中含有6.055份Trisbase、8.766份Nacl、10份BSA、10份海藻糖或者蔗糖、IgM抗体以及950份去离子水。
上述心肌八项标志物cTnI、CKMB、Myo、心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、D-Dimer、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、髓过氧化物酶(MPO)等8种心肌标志物。
对应的,捕获配体包括:cTnI捕获抗体、CKMB捕获抗体、Myo捕获抗体、H-FABP捕获抗体、D-Dimer捕获抗体、Lp-PLA2捕获抗体、NT-proBNP捕获抗体、MPO捕获抗体;检测配体包括:cTnI检测抗体、CKMB检测抗体、Myo检测抗体、H-FABP检测抗体、D-Dimer检测抗体、Lp-PLA2检测抗体、NT-proBNP检测抗体、MPO检测抗体;待测配体包括:cTnI待测抗原、CKMB待测抗原、Myo待测抗原、H-FABP待测抗原、D-Dimer待测抗原、Lp-PLA2待测抗原、NT-proBNP待测抗原、MPO待测抗原。
或者,捕获配体包括:cTnI捕获抗原、CKMB捕获抗原、Myo捕获抗原、H-FABP捕获抗原、D-Dimer捕获抗原、Lp-PLA2捕获抗原、NT-proBNP捕获抗原、MPO捕获抗原;检测配体包括:cTnI检测抗原、CKMB检测抗原、Myo检测抗原、H-FABP检测抗原、D-Dimer检测抗原、Lp-PLA2检测抗原、NT-proBNP检测抗原、MPO检测抗原;待测配体包括:cTnI待测抗体、CKMB待测抗体、Myo待测抗体、H-FABP待测抗体、D-Dimer待测抗体、Lp-PLA2待测抗体、NT-proBNP待测抗体、MPO待测抗体。
在一实施方式中,检测试剂盒进一步包括:至少一个离心管,离心管内设有悬浮液;捕获免疫组合物和检测免疫组合物溶于悬浮液内。悬浮液包括缓冲液、表面活性剂、无机盐、稳定剂以及防腐剂。其中,缓冲液的pH范围在7.0-9.0之间,缓冲液的浓度范围为10-100mmol/L。缓冲液为3-(N-吗啉基)丙磺酸-氢氧化钠缓冲液(MOPS-NaOH)、3-[N,N-二(羟乙基)氨基]-2-羟基丙磺酸-氢氧化钠缓冲液(DIPSO-NaOH)、4-(2-羟乙基)-1-哌嗪丙磺酸-氢氧化钠缓冲液(HEPPS-NaOH)、三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲液(Tris-HCl)、N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸-NaOH缓冲液(HEPES-NaOH)、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、咪唑缓冲液、柠檬酸缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液或巴比妥缓冲液中的至少一种。稳定剂为明胶、牛血清白蛋白或酪蛋白。无机盐为氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化铵、氯化镁、硫酸钠或硫酸钾中的至少一种。表面活性剂为吐温20或曲拉通X-100。稳定剂为浓度1%-5%的蔗糖、海藻糖、甘油、甘露醇、聚乙二醇、聚乙烯比咯烷酮或乙二胺四乙酸二钠的至少一种。防腐剂为叠氮钠、硫柳汞或Proclin-300中的至少一种。
在一实施方式中,捕获抗体组合物进一步包括:第一封闭化合物和第二封闭化合物,均修饰于固相载体和表面,第一封闭化合物和第二封闭化合物用于封闭固相载体和表面的活性位点。其中,第一封闭化合物为多羟基糖类化合物或蛋白质类化合物,第二封闭化合物为多羟基糖类化合物或蛋白质类化合物,第一封闭化合物不同于第二封闭化合物。
在包被过程中,包被物通过以上的几种作用固定在固相载体表面,但在固相载体的表面还有一些未被目标包被物占据的活性位点存在。这些位点的存在就会引起固相载体的非特异性结合,从而会产生高的背景信号,提高会影响到检测结果的灵敏度。为此必须对这些非特异性结合位点进行封闭。封闭是继包被之后用高浓度的封闭剂,如本申请中的第一封闭化合物、第二封闭化合物再包被的过程,就是让大量不相关的第一封闭化合物、第二封闭化合物占据这些残余的位点,从而抑制在其后的免疫反应步骤中各种干扰物质的非特异性吸附,从而降低背景信号,改善免疫反应灵敏度、准确性。
封闭的程序与包被过程相类似。现有技术中最常用的封闭剂是0.05g/mL-10g/mL的蛋白质类,如牛血清蛋白(BSA)等,本申请发明人发现,在传统免疫亲和反应中,对于某些特定的检测项目来说,蛋白质类封闭剂的封闭效果不佳,会产生较高的背景信号,从而影响检测结果的灵敏度、准确性。本申请发现当使用多羟基糖类化合物和蛋白质类化合物对固相载体表面进行封闭,有效提高封闭效果,提高检测结果的灵敏度、准确性。
在一实施方式中,捕获抗体组合物进一步包括:修饰于固相载体和/或表面的第三封闭化合物;其中,第三封闭化合物为含有伯氨基(-NH2)的小分子化合物。具体的,在修饰有多羟基糖类化合物和蛋白质类化合物之前用含伯胺基(-NH2)的小分子量化合物先进行封闭,以钝化残留的活性基团。
在一实施方式中,多羟基糖类化合物可以为葡萄糖、蔗糖、乳糖、海藻糖、葡聚糖、甘露醇或聚蔗糖中的至少一种;蛋白质类化合物可以为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、酪蛋白、明胶、酪蛋白水解物、免疫球蛋白、奶粉、人或动物血清中的至少一种;含有伯氨基的小分子化合物可以为三羟甲基氨基甲烷、乙醇胺、羟胺、己胺或甘氨酸中的至少一种。
在一实施方式中,检测试剂盒进一步包括:用于心肌八项标志物的校准品以及复合质控品。
本申请提供前述检测试剂盒在心肌检测中的应用。
参阅图2,本申请提供一种心肌八项标志物检测方法,该心肌八项标志物方法包括以下步骤:
S101:制备捕获免疫组合物、检测免疫组合物以及荧光示踪物组合物。
S102:处理待测样本以得到待测配体组合物。
具体的,提取受试者的全血样本作为待测样本。
S103:向检测体系中加入捕获免疫组合物和检测免疫组合物,混合待测样本与捕获免疫组合物、检测免疫组合物。
具体的,待测样本和捕获抗体组合物和检测抗体组合物的混合方式,可同时进行,也可依次进行。同时进行的方式为:将待测样本、捕获抗体组合物和检测抗体组合物同时进行混合,孵育一定时间后,磁分离清洗后进行荧光信号的检测。依次进行的方式为:将待测样本和捕获抗体组合物先进行混合,孵育一定时间后,加入检测抗体组合物,再孵育一段时间,磁分离清洗后进行荧光信号的检测。
S104:孵育预设时间后,磁分离清洗,孵育预设时间后,磁分离清洗,获得多个免疫复合物。
将受试者样本与检测试剂盒的捕获免疫组合物和检测免疫组合物孵育形成免疫复合物:固相载体-捕获配体-待测配体-检测配体-NHS生物素。
S105:检测检测体系的荧光强度值。
混合免疫复合物与荧光示踪物组合物,获得待测复合物。
该待测复合物:固相载体-捕获配体-待测配体-检测配体-NHS生物素-链霉亲和素-荧光蛋白。
其中,荧光检测信号可以包括定量信号和分类信号,定量信号由荧光蛋白受光激发产生;分类信号可以由固相载体中的荧光分子受光激发产生。
在一实施方式中,制备捕获免疫组合物包括以下步骤:
S201:取八个具有不同荧光编码且粒径相同的荧光磁球;
S202:对荧光磁球进行清洗和磁吸附,重复1-5次;
S203:活化各个荧光磁球;
S204:对活化后的荧光磁球进行清洗和磁吸附,重复1-5次;
S205:将各个活化后的荧光磁球与相应的捕获配体进行偶联;
S206:对偶联后的荧光磁球进行清洗和磁吸附,重复1-5次;
S207:封闭各个偶联后的荧光磁球;
S208:分别用流式细胞仪对各个封闭后的荧光磁球进行计数;
S209:利用第一稀释液稀释荧光磁球的工作浓度至500-2000个/Test,得到捕获免疫组合物。
具体地,制备捕获免疫组合物包括以下步骤:
(1)磁球清洗:取荧光编码不同的8种羧基编码荧光微球,分别加入1mLpH=4-6的20-50mmol/L MES清洗液清洗30s-60s,磁吸附30s-60s,去掉上清,重复此清洗过程1-5次;
(2)磁球活化:加入适量pH=4-6的20-50mmol/L MES重新磁球,重新磁球浓度为1-10mg/mL,按照活化剂与磁球重量比为1:10至10:1的比例加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC溶液和N-羟基硫代琥珀酰亚胺S-NHS溶液活化剂(活化剂使用pH=4-6的20-50mmol/L MES配制,现配现用),室温震荡活化10-60min;
(3)磁球清洗:磁球活化完成后,加入1mLpH=4-6的20-50mmol/L MES清洗液清洗30s-60s,磁吸附30s-60s,去掉上清,重复此清洗过程1-5次;
(4)磁球偶联抗体:采用pH=4-6的20-50mmol/L MES缓冲液将活化的荧光磁球浓度配制成1-20mg/mL,按照1mg磁球加入0.01-0.1mg的抗体比例,分别在装有不同编码荧光微球离心管中加入cTnI、CKMB、Myo、H-FABP、D-Dimer、Lp-PLA2、NT-proBNP、MPO抗体,室温或37℃800-1000rpm震荡仪孵育2-4h;
(5)磁球清洗:抗体偶联完成后,加入1mLpH=4-6的20-50mmol/L MES清洗液清洗30s-60s,磁吸附30s-60s,去掉上清,重复此清洗过程1-5次;
(6)磁球封闭:加入封闭剂,将磁球浓度配制成0.1-10mg/mL,室温或37℃封闭处理3-12h;
(7)磁球封闭完成后,用第一稀释液收集已获得磁球,分别用流式细胞仪对8个项目的磁球进行计数;
(8)用第一稀释液将cTnI、CKMB、Myo、H-FABP、D-Dimer、Lp-PLA2、NT-proBNP、MPO磁球稀释至工作浓度500-2000个/Test,混合后得到8个项目的磁球工作液。
在一实施方式中,制备捕获免疫组合物包括以下步骤:
S301:制备检测免疫组合物的步骤包括:
S302:采用缓冲液分别将各个检测配体的浓度稀释至2mg/mL;
S303:按摩尔质量比计,将比例为1:20的检测配体与荧光蛋白混匀,并孵育;
S304:采用第二稀释液分别将连接有荧光蛋白的检测配体稀释至工作浓度1-10ug/mL,混合后得到检测免疫组合物。
具体地,制备检测免疫组合物包括以下步骤:
(1)采用pH=8-10碳酸钠/碳酸氢钠分别将cTnI、CKMB、Myo、H-FABP、D-Dimer、Lp-PLA2、NT-proBNP、MPO抗体浓度稀释至2mg/mL;
(2)按照抗体:NHS生物素=1:20摩尔质量比在装有不同编码荧光微球离心管中加入NHS生物素,混匀后37℃孵育8h;
(3)采用第二稀释液分别将cTnI、CKMB、Myo、H-FABP、D-Dimer、Lp-PLA2、NT-proBNP、MPO生物素化抗体稀释至工作浓度1-10ug/mL,混合后得到8个项目的生物素化抗体工作液。
其中,第二稀释液配方:10mMPBS+0.1%BSA+1%甘露醇+0.01%酪蛋白+5%蔗糖+0.05%Tween20+0.1%防腐剂。
在一实施方式中,步骤S102包括:
S401:配置第四稀释液;
S402:按质量份数计,称取6.055份Trisbase、8.766份Nacl、10份BSA、10份海藻糖或者蔗糖、以及950份去离子水;
S403:充分溶解后,用盐酸将pH值调至7.2-8.0;
S404:将所述第四稀释液与全血样本按照体积比为2-1:14进行红细胞免疫共沉淀反应,得到所述待测配体组合物。
本申请提供一种荧光免疫分析系统,所述荧光免疫分析系统包括:上述实施方式中的检测试剂盒以及荧光免疫分析设备;
其中,荧光免疫分析设备包括激光模块和信号接收模块,所述激光模块用于激发所述检测试剂盒中的多种荧光蛋白和多种固相载体,以发射多种激光;所述信号接收模块用于接收所述检测试剂盒中的多种所述荧光蛋白和多种所述固相载体的荧光物质发出的多种荧光信号。
在一实施方式中。所述激光模块用于激发所述检测试剂盒中荧光蛋白的激光;所述信号接收模块包括第一荧光信号接收器、第二荧光信号接收器和激光发射器;所述第一荧光信号接收器用于接收所述荧光蛋白发出的第一荧光信号;所述激光发射器用于激发所述检测试剂盒中固相载体中荧光物质的第二激光;所述第二荧光信号接收器用于接收所述固相载体中荧光物质发出的第二荧光信号;其中,所述第一激光与所述第二激光的波长不同。
下面以心肌八项标志物cTnI、CKMB、Myo、心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、D-Dimer、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、髓过氧化物酶(MPO)为例,阐述本申请的基本原理:
本申请是基于液相芯片技术,在同一反应体系中同时进行双抗夹心反应和竞争反应,同时配套荧光免疫分析设备,一步实现对心肌八项标志物的检测。
本申请采用第四稀释液对全血样本进行预处理,并通过液相芯片技术可以同时检测全血样本中多种生物标志物,具有高通量、高灵敏度、检测快速、且样本操作简单等优点,能对多种心肌标志物同时进行定性和定量分析。本试剂盒心血管标志物包括cTnI、CKMB、Myo、心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、D-Dimer、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、髓过氧化物酶(MPO)等8种心肌标志物,能够一次性快速检测同一个全血样品中的8种心肌标志物,能够心血管疾病的发生和发展进行全面的预测、诊断和预后。
液相芯片技术,相对于常规的固相芯片,具有线性范围宽、灵敏度高等优点,但是以全血样本作为检测样本进行直接检测仍然是液相芯片的热点和难题。全血样本作为检测样本时,红细胞的存在会干扰液相芯片的检测结果,需要对红细胞进行预处理,目前Triton-100、CTAB等常规的红细胞裂解液均会降低检测的反应度,造成假阴性结果。若分离血清和血浆则操作过程繁琐,样本处理时间久且对仪器设备有要求,因此全血检测对于急诊项目至关重要。本检测试剂盒通过了一种能用于液相芯片技术的第四稀释液,能够对全血样本进行预处理且不会影响试剂的检测结果。第四稀释液含有IgM抗体,能够促进全血样本中的红细胞快速凝集,不需要裂解红细胞或者单独分离出血清、血浆进行检测。第四稀释液对全血样本进行预处理后,样本中的待测物与不同编码荧光微球上的捕获抗体以及生物素化抗体发生特异性结合,形成“荧光微球-捕获配体-待测配体-检测配体-NHS生物素”的免疫复合物,免疫复合物与链霉亲和素标记的荧光蛋白结合后,得到待测复合物:荧光微球-捕获配体-待测配体-检测配体-NHS生物素-链霉亲和素-荧光蛋白。通过检测不同微球的荧光信号和荧光蛋白的荧光信号,从而确定待测样本中各种心肌标志物的浓度。
下面结合实施例对本申请作进一步描述:
实施例1
捕获免疫组合物的制备:
(1)磁球清洗:取荧光编码不同的8种羧基编码荧光微球,分别加入1mL pH=4-6的20-50mmol/L MES清洗液清洗30s-60s,磁吸附30s-60s,去掉上清,重复此清洗过程1-5次;
(2)磁球活化:加入适量pH=4-6的20-50mmol/L MES重新磁球,重新磁球浓度为1-10mg/mL,按照活化剂与磁球重量比为1:10至10:1的比例加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC溶液和N-羟基硫代琥珀酰亚胺S-NHS溶液活化剂(活化剂使用pH=4-6的20-50mmol/L MES配制,现配现用),室温震荡活化10-60min;
(3)磁球清洗:磁球活化完成后,加入1mL pH=4-6的20-50mmol/L MES清洗液清洗30s-60s,磁吸附30s-60s,去掉上清,重复此清洗过程1-5次;
(4)磁球偶联抗体:采用pH=4-6的20-50mmol/L MES缓冲液将活化的荧光磁球浓度配制成1-20mg/mL,按照1mg磁球加入0.01-0.1mg的抗体比例,分别在装有不同编码荧光微球离心管中加入cTnI、CKMB、Myo、H-FABP、D-Dimer、Lp-PLA2、NT-proBNP、MPO抗体,室温或37℃800-1000rpm震荡仪孵育2-4h;
(5)磁球清洗:抗体偶联完成后,加入1mL pH=4-6的20-50mmol/L MES清洗液清洗30s-60s,磁吸附30s-60s,去掉上清,重复此清洗过程1-5次;
(6)磁球封闭:加入封闭剂,将磁球浓度配制成0.1-10mg/mL,室温或37℃封闭处理3-12h;
(7)磁球封闭完成后,用第一缓冲液收集已获得磁球,分别用流式细胞仪对8个项目的磁球进行计数;
(8)用第一缓冲液将cTnI、CKMB、Myo、H-FABP、D-Dimer、Lp-PLA2、NT-proBNP、MPO磁球稀释至工作浓度500-2000个/Test,混合后得到8个项目的磁球工作液。
实施例2
捕获免疫组合物的工作浓度的优化:
按照下表1-8所示的捕获免疫组合物的工作浓度,将cTnI、CKMB、Myo、H-FABP、D-Dimer、Lp-PLA2、NT-proBNP、MPO包被的荧光磁球分别稀释成500个/Test、1000个/Test、2000个/Test、4000个/Test的捕获免疫组合物,采用校准品分别对cTnI、CKMB、Myo、H-FABP、D-Dimer、Lp-PLA2、NT-proBNP、MPO项目进行检测。
表1 cTnI捕获免疫组合物工作浓度的优化
表2 Myo捕获免疫组合物工作浓度的优化
表3 CKMB捕获免疫组合物工作浓度的优化
表4 NT-proBNP捕获免疫组合物工作浓度的优化
表5 D-Dimer捕获免疫组合物工作浓度的优化
表6 H-FABP捕获免疫组合物工作浓度的优化
表7 Lp-PLA2捕获免疫组合物工作浓度的优化
表8 MPO捕获免疫组合物工作浓度的优化
从上表结果可以看出,捕获免疫组合物的工作浓度为500-2000个/Test时,8个项目的测试值与靶值相对偏差均<10%,工作浓度过高时,会造成反应度下降,因此,最佳工作浓度为500-2000个/Test。
实施例3
检测免疫组合物的制备:
(1)采用pH=8-10碳酸钠/碳酸氢钠缓冲液分别将cTnI、CKMB、Myo、H-FABP、D-Dimer、Lp-PLA2、NT-proBNP、MPO抗体浓度稀释至2mg/mL;
(2)按照抗体:NHS生物素=1:20摩尔质量比在装有不同编码荧光微球离心管中加入NHS生物素,混匀后37℃孵育8h;
(3)采用第二稀释液分别将cTnI、CKMB、Myo、H-FABP、D-Dimer、Lp-PLA2、NT-proBNP、MPO生物素化抗体稀释至工作浓度1-10ug/mL,混合后得到8个项目的生物素化抗体工作液。
第二稀释液配方:10mM PBS+0.1%BSA+1%甘露醇+0.01%酪蛋白+5%蔗糖+0.05%Tween20+0.1%防腐剂。
实施例4
以NT-proBNP项目为例,进行全血样本第四缓冲液与全血样本体积比的优化
表9 NT-proBNP项目的全血样本测试结果
按照上表全血与全血样本第四缓冲液的体积比,对NT-proNP全血样本进行检测,全血样本预处理30S-60S后,全血样本第四缓冲液与红细胞发生凝集,吸取上清进行检测。
从上表结果可以看出,全血与样本第四缓冲液体积比为2:1或者1:1时,与罗氏化学发光仪cobas e411检测结果基本一致,相对偏差小于15%。说明全血样本与样本第四缓冲液体积比为2:1和1:1时,样本第四缓冲液与红细胞反应较完全,同时考虑到生产成本的问题,最终选择最佳体积比为2:1。
实施例5
心肌八项标志物的联合检测
取全血样本,采用本联检试剂盒进行检测,分别计算全血样本中cTnI、CKMB、Myo、H-FABP、D-Dimer、Lp-PLA2、NT-proBNP、MPO的浓度,雅培、罗氏、三菱、北京热景检测同一人的血清样本做对照,对比同一人的全血样本和血清样本检测结果的差异。测试结果如下表10-17所示:
表10心肌八项标志物的联合检测之cTnI项目的检测结果
表11心肌八项标志物的联合检测之Myo项目的检测结果
表12心肌八项标志物的联合检测之CKMB项目的检测结果
表13心肌八项标志物的联合检测之NT-proBNP项目的检测结果
表14心肌八项标志物的联合检测之D-Dimer项目的检测结果
表15心肌八项标志物的联合检测之H-FABP项目的检测结果
表16心肌八项标志物的联合检测之LP-PLA2项目的检测结果
表17心肌八项标志物的联合检测之MPO项目的检测结果
由上表可以看出,本发明的用于心肌八项标志物检测的检测试剂盒的全血样本检测结果与对照组基本一致,说明本发明的用于心肌八项标志物检测的检测试剂盒具备良好的准确性。
通过上述优化试验可知:在进行心肌八项标志物检测时,各实验组均检测出了心肌八项标志物,且线性相关实验、重复性、最低检出限以及准确度的检测结果均能达到单一检测的检测效果,能够容易的实现心肌八项标志物检测的分类需求和定量分析需求,并降低检测成本。
以上所述仅为本申请的实施方式,并非因此限制本申请的专利范围,凡是利用本申请说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换,或直接或间接运用在其他相关的技术领域,均同理包括在本申请的专利保护范围内。
Claims (25)
1.一种用于心肌八项标志物检测的检测试剂盒,其特征在于,所述检测试剂盒包括:捕获免疫组合物以及检测免疫组合物;
所述捕获免疫组合物至少包括:八个固相载体、分别连接八个所述固相载体的八个捕获配体、以及第一稀释液;
所述检测免疫组合物至少包括:NHS生物素、分别连接所述NHS生物素的八个检测配体、以及第二稀释液,其中,八个捕获配体与八个检测配体一一对应;
其中,所述捕获配体、所述检测配体可与相应的所述待测配体特异性结合,以形成免疫复合物。
2.根据权利要求1所述的检测试剂盒,其特征在于,所述检测试剂盒还包括:荧光示踪物组合物;
所述荧光示踪物组合物至少包括:
链霉亲和素标记的荧光蛋白,所述免疫复合物通过所述NHS生物素与所述链霉亲和素标记的荧光蛋白连接;以及
第三稀释液。
3.根据权利要求1所述的检测试剂盒,其特征在于,所述检测试剂盒还包括:待测配体组合物;
所述待测配体组合物至少包括:
待测样本,其中,所述待测样本包含所述待测配体;以及
第四稀释液;
所述待测样本以及所述第四稀释液的体积比为2-1:1。
4.根据权利要求1所述的检测试剂盒,其特征在于,
各个所述固相载体的工作浓度为500-2000个/Test。
5.根据权利要求1所述的检测试剂盒,其特征在于,
八个所述固相载体为具有不同荧光编码且粒径相同的荧光磁球,或者具有不同粒径且相同荧光编码的荧光磁球。
6.根据权利要求1所述的检测试剂盒,其特征在于,
按摩尔质量比计,所述检测配体与所述NHS生物素的比例为1:20。
7.根据权利要求1所述的检测试剂盒,其特征在于,
所述检测配体的工作浓度为:1-10ug/mL。
8.根据权利要求1所述的检测试剂盒,其特征在于,
所述第二稀释液包括10mM PBS、0.1%BSA、1%甘露醇、0.01%酪蛋白、5%蔗糖、0.05%Tween20以及0.1%防腐剂。
9.根据权利要求2所述的检测试剂盒,其特征在于,
各个所述免疫复合物所连接的所述荧光蛋白的种类不同或者荧光强度不同。
10.根据权利要求3所述的检测试剂盒,其特征在于,
所述待测样本为全血样本;
按体积比计,所述全血样本与所述第四稀释液的比例为4:1~1:4。
11.根据权利要求10所述的检测试剂盒,其特征在于,
所述第四稀释液含有以下成分:缓冲剂、渗透压维持剂、保护剂;
其中,所述缓冲剂为Tris碱(TrisBase)的缓冲液;
所述渗透压维持剂为氯化钠;
所述保护剂为BSA、海藻糖、蔗糖或HSA中的一种或几种。
12.根据权利要求11所述的检测试剂盒,其特征在于,
按质量份数计,每份所述第四稀释液中含有6.055份Trisbase、8.766份Nacl、10份BSA、10份海藻糖或者蔗糖、IgM抗体以及950份去离子水。
13.根据权利要求1所述的检测试剂盒,其特征在于,
所述捕获配体包括:cTnI捕获抗体、CKMB捕获抗体、Myo捕获抗体、H-FABP捕获抗体、D-Dimer捕获抗体、Lp-PLA2捕获抗体、NT-proBNP捕获抗体、MPO捕获抗体;
所述检测配体包括:cTnI检测抗体、CKMB检测抗体、Myo检测抗体、H-FABP检测抗体、D-Dimer检测抗体、Lp-PLA2检测抗体、NT-proBNP检测抗体、MPO检测抗体;
所述待测配体包括:cTnI待测抗原、CKMB待测抗原、Myo待测抗原、H-FABP待测抗原、D-Dimer待测抗原、Lp-PLA2待测抗原、NT-proBNP待测抗原、MPO待测抗原。
14.根据权利要求1所述的检测试剂盒,其特征在于,
所述捕获配体包括:cTnI捕获抗原、CKMB捕获抗原、Myo捕获抗原、H-FABP捕获抗原、D-Dimer捕获抗原、Lp-PLA2捕获抗原、NT-proBNP捕获抗原、MPO捕获抗原;
所述检测配体包括:cTnI检测抗原、CKMB检测抗原、Myo检测抗原、H-FABP检测抗原、D-Dimer检测抗原、Lp-PLA2检测抗原、NT-proBNP检测抗原、MPO检测抗原;
所述待测配体包括:cTnI待测抗体、CKMB待测抗体、Myo待测抗体、H-FABP待测抗体、D-Dimer待测抗体、Lp-PLA2待测抗体、NT-proBNP待测抗体、MPO待测抗体。
15.根据权利要求1所述的检测试剂盒,其特征在于,所述检测试剂盒进一步包括:至少一个离心管,所述离心管内设有悬浮液;
所述捕获免疫组合物和所述检测免疫组合物溶于所述悬浮液内。
16.根据权利要求15所述的检测试剂盒,其特征在于,
所述悬浮液包括缓冲液、表面活性剂、无机盐、稳定剂以及防腐剂;
其中,所述缓冲液的pH范围在7.0-9.0之间,所述缓冲液的浓度范围为10-100mmol/L;
所述缓冲液为3-(N-吗啉基)丙磺酸-氢氧化钠缓冲液、3-[N,N-二(羟乙基)氨基]-2-羟基丙磺酸-氢氧化钠缓冲液、4-(2-羟乙基)-1-哌嗪丙磺酸-氢氧化钠缓冲液、三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲液、N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸-NaOH缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、咪唑缓冲液、柠檬酸缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液或巴比妥缓冲液中的至少一种;
所述稳定剂为明胶、牛血清白蛋白或酪蛋白中的至少一种;
所述无机盐为氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化铵、氯化镁、硫酸钠或硫酸钾中的至少一种;
所述表面活性剂为吐温20或曲拉通X-100;
所述稳定剂为浓度1%-5%的蔗糖、海藻糖、甘油、甘露醇、聚乙二醇、聚乙烯比咯烷酮或乙二胺四乙酸二钠的至少一种;
所述防腐剂为叠氮钠、硫柳汞或Proclin-300中的至少一种。
17.根据权利要求1所述的检测试剂盒,其特征在于,所述捕获免疫组合物进一步包括:
封闭化合物,修饰于各个所述固相载体表面,用于封闭所述固相载体表面的活性位点;
其中,所述封闭化合物为多羟基糖类化合物、含有伯氨基的小分子化合物或蛋白质类化合物。
18.根据权利要求1所述的检测试剂盒,其特征在于,所述检测试剂盒进一步包括:用于心肌八项标志物的校准品以及复合质控品。
19.如权利要求1-18任一项所述的检测试剂盒在心肌八项标志物检测中的应用。
20.一种心肌八项标志物检测方法,其特征在于,所述方法包括:
制备捕获免疫组合物、检测免疫组合物以及荧光示踪物组合物;
处理待测样本以得到待测配体组合物;
向检测体系中加入所述捕获免疫组合物和所述检测免疫组合物,混合所述待测样本与所述捕获免疫组合物、所述检测免疫组合物;
孵育预设时间后,磁分离清洗,获得多个免疫复合物;
混合所述免疫复合物与所述荧光示踪物组合物,获得待测复合物;
检测多个所述待测复合物的荧光强度值。
21.根据权利要求20所述的方法,其特征在于,所述制备捕获免疫组合物的步骤包括:
取八个具有不同荧光编码且粒径相同的荧光磁球;
对所述荧光磁球进行清洗和磁吸附,重复1-5次;
活化各个所述荧光磁球;
对活化后的所述荧光磁球进行清洗和磁吸附,重复1-5次;
将各个活化后的所述荧光磁球与相应的捕获配体进行偶联;
对偶联后的所述荧光磁球进行清洗和磁吸附,重复1-5次;
封闭各个偶联后的所述荧光磁球;
分别用流式细胞仪对各个封闭后的所述荧光磁球进行计数;
利用第一稀释液稀释所述荧光磁球的工作浓度至500-2000个/Test,得到所述捕获免疫组合物。
22.根据权利要求20所述的方法,其特征在于,所述制备检测免疫组合物的步骤包括:
采用缓冲液分别将各个检测配体的浓度稀释至2mg/mL;
按摩尔质量比计,将比例为1:20的所述检测配体与所述荧光蛋白混匀,并孵育;
采用第二稀释液分别将连接有所述荧光蛋白的检测配体稀释至工作浓度1-10ug/mL,混合后得到所述检测免疫组合物。
23.根据权利要求20所述的方法,其特征在于,所述处理待测样本以得到待测配体组合物的步骤包括:
配置第四稀释液;
按质量份数计,称取6.055份Trisbase、8.766份Nacl、10份BSA、10份海藻糖或者蔗糖、以及950份去离子水;
充分溶解后,用盐酸将pH值调至7.2-8.0;
将所述第四稀释液与全血样本按照体积比为2-1:14进行红细胞免疫共沉淀反应,得到所述待测配体组合物。
24.一种荧光免疫分析系统,其特征在于,所述荧光免疫分析系统包括:如权利要求1-18任一项所述的检测试剂盒以及荧光免疫分析设备;
其中,荧光免疫分析设备包括激光模块和信号接收模块,所述激光模块用于激发所述检测试剂盒中的多种荧光蛋白和多种固相载体,以发射多种激光;所述信号接收模块用于接收所述检测试剂盒中的多种所述荧光蛋白和多种所述固相载体的荧光物质发出的多种荧光信号。
25.根据权利要求24所述的荧光免疫分析系统,其特征在于,
所述激光模块用于激发所述检测试剂盒中荧光蛋白的激光;
所述信号接收模块包括第一荧光信号接收器、第二荧光信号接收器和激光发射器;
所述第一荧光信号接收器用于接收所述荧光蛋白发出的第一荧光信号;
所述激光发射器用于激发所述检测试剂盒中固相载体中荧光物质的第二激光;
所述第二荧光信号接收器用于接收所述固相载体中荧光物质发出的第二荧光信号;
其中,所述第一激光与所述第二激光的波长不同。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201911384999.3A CN113049809A (zh) | 2019-12-28 | 2019-12-28 | 用于心肌八项标志物检测的检测试剂盒、心肌八项标志物检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201911384999.3A CN113049809A (zh) | 2019-12-28 | 2019-12-28 | 用于心肌八项标志物检测的检测试剂盒、心肌八项标志物检测方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113049809A true CN113049809A (zh) | 2021-06-29 |
Family
ID=76507170
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201911384999.3A Pending CN113049809A (zh) | 2019-12-28 | 2019-12-28 | 用于心肌八项标志物检测的检测试剂盒、心肌八项标志物检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN113049809A (zh) |
Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1990015328A1 (en) * | 1989-06-06 | 1990-12-13 | Ampcor, Inc. | Improved immunoassay |
CN101995459A (zh) * | 2009-08-26 | 2011-03-30 | 刘萍 | 包被板封闭液 |
CN102062735A (zh) * | 2009-11-18 | 2011-05-18 | 江苏迈迪基因生物科技有限公司 | 急性冠状动脉综合症的生物标志物检测法及诊断试剂盒 |
CN102323418A (zh) * | 2011-08-31 | 2012-01-18 | 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 | B型利钠肽原前体(proBNP)定量测定试剂盒及其检测方法 |
CN102353789A (zh) * | 2011-06-22 | 2012-02-15 | 江苏迈迪基因生物科技有限公司 | 心脑血管疾病相关的蛋白标志物的联合检测方法及其诊断试剂盒 |
CN103134930A (zh) * | 2011-12-05 | 2013-06-05 | 中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所 | 一种用于农药阿特拉津的量热酶联免疫吸附(telisa)检测方法 |
WO2015054941A1 (zh) * | 2013-10-16 | 2015-04-23 | 深圳市大爱医疗科技有限公司 | 一种量子点标记的蛋白质芯片试剂盒及其制备方法 |
CN104730231A (zh) * | 2015-03-26 | 2015-06-24 | 北京乐普医疗科技有限责任公司 | 一种用于荧光免疫定量检测的样本缓冲液及其应用 |
CN105277716A (zh) * | 2015-09-23 | 2016-01-27 | 上海凯璟生物科技有限公司 | 脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)免疫荧光探针检测试剂盒 |
CN107942061A (zh) * | 2017-11-29 | 2018-04-20 | 洛阳现代生物技术研究院有限公司 | 一种检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的试纸卡、制备及其检测方法 |
-
2019
- 2019-12-28 CN CN201911384999.3A patent/CN113049809A/zh active Pending
Patent Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1990015328A1 (en) * | 1989-06-06 | 1990-12-13 | Ampcor, Inc. | Improved immunoassay |
CN101995459A (zh) * | 2009-08-26 | 2011-03-30 | 刘萍 | 包被板封闭液 |
CN102062735A (zh) * | 2009-11-18 | 2011-05-18 | 江苏迈迪基因生物科技有限公司 | 急性冠状动脉综合症的生物标志物检测法及诊断试剂盒 |
CN102353789A (zh) * | 2011-06-22 | 2012-02-15 | 江苏迈迪基因生物科技有限公司 | 心脑血管疾病相关的蛋白标志物的联合检测方法及其诊断试剂盒 |
CN102323418A (zh) * | 2011-08-31 | 2012-01-18 | 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 | B型利钠肽原前体(proBNP)定量测定试剂盒及其检测方法 |
CN103134930A (zh) * | 2011-12-05 | 2013-06-05 | 中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所 | 一种用于农药阿特拉津的量热酶联免疫吸附(telisa)检测方法 |
WO2015054941A1 (zh) * | 2013-10-16 | 2015-04-23 | 深圳市大爱医疗科技有限公司 | 一种量子点标记的蛋白质芯片试剂盒及其制备方法 |
CN104730231A (zh) * | 2015-03-26 | 2015-06-24 | 北京乐普医疗科技有限责任公司 | 一种用于荧光免疫定量检测的样本缓冲液及其应用 |
CN105277716A (zh) * | 2015-09-23 | 2016-01-27 | 上海凯璟生物科技有限公司 | 脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)免疫荧光探针检测试剂盒 |
CN107942061A (zh) * | 2017-11-29 | 2018-04-20 | 洛阳现代生物技术研究院有限公司 | 一种检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的试纸卡、制备及其检测方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11959912B2 (en) | Fluorescence immunochromatographic detection card and a preparation method therefor and use thereof | |
CN111381024B (zh) | 免疫捕获组合物、制备方法、试剂盒以及应用 | |
KR101975993B1 (ko) | 심근 트로포닌의 측정법 | |
CN111381025A (zh) | 用于多重检测的免疫检测试剂盒、应用以及多重检测方法 | |
US10352937B2 (en) | Pretreatment method of sample for detecting HBs antigen and use thereof | |
CN111381027B (zh) | 免疫捕获组合物及其制备方法和应用、免疫检测试剂盒 | |
US11268956B2 (en) | Method for producing antibody reagent | |
US10191039B2 (en) | Human factor XIII as a normalization control for immunoassays | |
JP2000508075A (ja) | 発光特異的結合アッセイ | |
JP2010107363A (ja) | トロポニンiの測定方法及び測定用試薬キット | |
EP3444612B1 (en) | Immunoassay employing sulfated polysaccharide | |
CN113049835A (zh) | 联合检测试剂盒及检测方法、免疫分析系统 | |
JPS63127160A (ja) | 特異的蛋白質の検出方法 | |
CN113049809A (zh) | 用于心肌八项标志物检测的检测试剂盒、心肌八项标志物检测方法 | |
EP0488195B1 (en) | Chemiluminescence immunoassay | |
CN111381026A (zh) | 多重检测免疫试剂及其制备方法、试剂盒、系统及应用 | |
CN108241052A (zh) | 一种检测结核抗体的多重液相芯片 | |
JP2021099243A (ja) | 免疫学的測定法 | |
JPH07159406A (ja) | 洗浄液と洗浄方法 | |
CN114563578A (zh) | 人膜性肾病诊断试剂盒 | |
CN115128261A (zh) | 一种磁珠偶联方法及其检测试剂盒 | |
CN113933497A (zh) | I型胶原氨基端延长肽磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其检测方法 | |
CN115541891A (zh) | 一种过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒及其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210629 |