KR20140108562A - 변이체 액티빈 수용체 폴리펩티드 단독 또는 화학 치료법과의 결합, 및 그들의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 액티빈 A, 미오스타틴 또는 GDF-11과 결합하고 저해할 수 있는 변이체 액티빈 IIB 용해성 펩티드 및 단백질을 제공한다. 본 발명은 또한 변이체 폴리펩티드 및 단백질을 생산할 수 있는 폴리뉴클레오티드, 벡터 및 숙주 세포를 제공한다. 근육 소모성 질환과 다른 질환들 및 질환들을 치료하기 위한 조성물 및 방법이 또한 제공된다.

Description

변이체 액티빈 수용체 폴리펩티드 단독 또는 화학 치료법과의 결합, 및 그들의 용도 {VARIANT ACTIVIN RECEPTOR POLYPEPTIDES, ALONE OR IN COMBINATION WITH CHEMOTHERAPY, AND USES THEREOF}

변이체 액티빈 수용체 폴리펩티드 및 그의 용도

관련 출원의 상호 참조

본 출원은 2011년 12월 19일자 제출된 U.S. 일련 No. 13/329,897에 기초하여 우선권의 권리를 주장하며, 이것의 전체 내용은 모든 목적에서 그 전체가 참고자료로 본원에 포함된다.

본 출원은 2008년 2월 11일자 제출된 미국 임시 출원 일련번호 제61/065,474호, 및 2007년 3월 6일자 제출된 미국 임시 출원 일련번호 제60/905,459호의 이익을 주장하는, 현재 U.S. 특허 No. 7,947,646로서 특허된 2008년 3월 5일자 제출된 U.S. 일련 No. 12/074,877의 분할인, 현재 계류중인 2011년 4월 5일자 제출된 U.S. 일련 No. 13/080,515와 관련되며, 이들의 내용은 신뢰되고, 본원에 참고자료로 포함된다.

서열목록에 대한 언급

본 출원은 전자 형식의 서열목록과 함께 제출된다. 서열목록은 265,085 바이트 크기의 파일제목 A-1219-US-CIP_SeqList.txt으로 제공되며, 이것은 2011년 12월 19일에 작성되었다. 서열목록의 전자 형식의 정보는 그 전체가 참고자료로 본원에 포함된다.

기술분야

본 발명의 기술 분야는 성장 인자-β(TGF-β) 패밀리 멤버 및 용해성 TGF-β 수용체의 형질전환, 뿐만 아니라 다양한 질환의 치료를 위하여 TGF-β 패밀리 멤버의 활성을 조정하는 방법에 관한 것이다.

단백질의 성장 인자 β(TGF-β) 패밀리를 형질전환(transforming)하는 것은 성장 인자-β(TGF-β), 액티빈, 골 형성 단백질(BMP), 신경 성장 인자(NGFs), 뇌-유래 신경영양 인자(BDNF), 및 성장/분화 인자(GDFs)를 형질전환하는 것을 포함한다. 이들 패밀리 멤버들은 세포 증식, 분화, 및 다른 기능들을 포함하는 광범위한 생물학적 과정들의 조절에 관여된다.

미오스타틴이라고도 하는 성장/분화 인자 8(GDF-8)은 발달중인 세포와 성인 골격근 조직의 대부분에서 발현된 TGF-β 패밀리 멤버이다. 미오스타틴은 골격근 성장을 부정적으로 제어하는데 있어서 필수적인 역할을 하는 것으로 보인다(McPherron et al., Nature(London) 387, 83-90(1997)). 미오스타틴에 대한 길항 작용은 동물에서 순수 근육 량(lean muscle mass)을 증가시키는 것으로 나타났다(McFerron et al., supra, Zimmers et al., Science 296:1486(2002)).

단백질 TGF-β 패밀리의 다른 멤버는 관련된 성장/분화 인자, GDF-11이다. GDF-11은 미오스타틴의 아미노산 서열과 대략 90% 동일성을 가진다. GDF-11은 발달중인 동물에서 축방향 패턴화(axial patterning)에 어떤 역할을 하며(Oh et al., Genes Dev 11:1812-26(1997)), 또한 골격근 발달 및 성장에도 어떤 역할을 하는 것으로 보인다.

액티빈 A, B 및 AB는 두 폴리펩티드 사슬, βA 및 βB의 각각의 호모다이머 및 헤테로다이머이다(Vale et al. Nature 321, 776-779(1986), Ling et al. Nature 321, 779-782(1986)). 액티빈은 원래 여포 자극 호르몬 합성의 조절에 관여된 생식선 펩티드로 발견되었으며, 현재는 다수의 생물학적 활성의 조절에 관여된다고 생각된다. 액티빈 A는 액티빈의 우세한 형태이다.

액티빈, 미오스타틴, GDF-11 및 TGF-β 수퍼패밀리의 다른 멤버들은 액티빈 타입 II와 액티빈 타입 IIB 수용체의 조합을 통해서 결합하고 신호하는데, 이들은 모두 막통과 세린/트레오닌 키나아제이다(Harrison et al., J. Biol. Chem. 279, 28036-28044(2004)). 상호간의 연구는 미오스타틴이 액티빈 타입 II 수용체 ActRIIA와 ActRIIB를 시험관내에서 결합시킬 수 있다고 결론지었다(Lee et al., PNAS USA 98:9306-11(2001)). 또한 GDF-11이 ActRIIA와 ActRIIB 둘 다와 결합한다는 증거가 있다(Oh et al., Genes Dev 16:2749-54(2002)).

TGF-β 단백질 발현은 여러 질환 및 질환와 관련된다고 알려져 있다. 따라서 몇몇 TGF-β 단백질을 동시에 길항할 수 있는 치료적 분자는 이들 질환 및 질환에 특히 효과적일 수 있다.

게다가, 단백질 치료제의 생산은 단백질의 발현 및 정제 동안 일어나는 문제들에 의해서 복잡해질 수 있다. 한 가지 문제는 발현 또는 정제 동안 단백질의 응집이다. 세포 배양 조건 동안 높은 수준의 단백질의 축적이 응집을 가져올 수 있다. 정제 과정들은 단백질 응집을 더 촉진하는 추가의 인자들에 단백질을 노출시킬 수 있다(Cromwell, M.E.M. et al., The AAPS Journal 8:E572-E579, 2006). 응집을 야기하는 인자들을 완화하기 위한 시도가 이루어졌지만, 응집체를 형성하는 감소된 경향을 갖도록 설계된 단백질에 대한 필요성이 존재한다. 본 발명은 다수의 리간드와 결합하며, 감소된 응집과 그로 인한 개선된 제작능을 가짐으로써, TGF-β 관련 질환 상태를 치료하는데 유용한 단백질을 효과적으로 생산할 수 있는, 치료적 분자에 대한 필요성을 충족한다.

본 발명은 변이체 사람 액티빈 수용체IIB(vActRIIB 또는 sActRIIB라고 지칭) 폴리펩티드를 포함하는 분리된 단백질을 제공한다. 본원에 사용된 용어 vActRIIB 폴리펩티드는 사람 vActRIIB 폴리펩티드와 사람 vActRIIB5 폴리펩티드를 모두 뜻한다. 하나의 구체예에서, 단백질은 서열번호 2 또는 18의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하고, 여기에 있어서 E28 또는 R40, E28와 R40 모두의 위치에서 아미노산이 다른 비-자생 아미노산으로 치환되고, 폴리펩티드는 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11와 결합할 수 있다. 하나의 구체예에서, 단백질은 서열번호2 또는 18의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 E28 또는 R40, 또는 위치 E28와 R40 둘 다에서 아미노산은 다른 비-자생 아미노산으로 치환되고, 신호 펩티드가 제거되며, 폴리펩티드는 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11와 결합할 수 있다. 하나의 구체예에서, 단백질은 서열번호 2 또는 18의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 E28 또는 R40, 또는 위치 E28와 R40 둘 다에서 아미노산은 다른 아미노산으로 치환되고, 신호 펩티드가 제거되며, 성숙 폴리펩티드의 N-말단이 끝절단되고(tuncated), 폴리펩티드는 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11와 결합할 수 있다. 하나의 구체예에서, N-말단 성숙 끝절단된 vActR-IIB 폴리펩티드는 성숙 서열의 N-말단 4 아미노산 또는 N-말단 6 아미노산을 결여하며, 폴리펩티드는 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11와 결합할 수 있다. 하나의 구체예에서, 위치 E28에서 치환은 W, Y 및 A로 구성되는 군으로부터 선택된다. 추가의 구체예에서, 위치 E28에서 치환은 A, F, Q, V, I, L, M, K, H, W 및 Y로 구성되는 아미노산의 군으로부터 선택된다. 추가의 구체예에서, 위치 R40에서 치환은 G, Q, M, H, K 및 N로 구성되는 아미노산의 군으로부터 선택된다. 추가의 구체예에서, 위치 E28에서 치환은 A, F, Q, V, I, L, M, K, H, W 및 Y로 구성되는 아미노산의 군으로부터 선택되고, 위치 R40에서 치환은 A, G, Q, M, H, K 및 N로 구성되는 아미노산의 군으로부터 선택된다. 추가의 구체예에서, 폴리펩티드는 이종성 단백질을 더 포함한다. 하나의 구체예에서, 이종성 단백질은 Fc 도메인이다. 추가의 구체예에서, Fc 도메인은 사람 IgG Fc 도메인이다.

하나의 구체예에서, 단백질은 서열번호4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 52, 54, 56, 60, 62, 64, 66, 70, 72, 87, 88, 91, 93, 95, 및 97에 제시된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다.

다른 구체예에서, 단백질은 서열번호3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 51, 53, 55, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 92, 94, 96에 제시된 서열 또는 그것의 보체를 갖는 폴리뉴클레오티드에 의해서 암호화된 폴리펩티드를 포함한다.

다른 양태에서, 본 발명은 vActRIIB 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 분리된 핵산 분자를 제공한다. 하나의 구체예에서, 핵산 분자는 서열번호3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 51, 53, 55, 59, 61, 63, 65, 69, 71, 92, 94, 96에 제시된 핵산 서열 또는 그것의 보체를 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.

다른 구체예에서, 핵산 분자는 서열번호4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 52, 54, 56, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 87, 88, 91, 93, 95, 및 97로 구성되는 군에 제시된 아미노산 서열로 구성된 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 추가의 구체예에서, 핵산 분자는 전사 또는 번역 조절성 서열을 더 포함한다. 다른 양태에서, vActRIIB 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터가 제공된다. 다른 양태에서, 재조합 벡터를 포함하는 숙주 세포가 제공되고, vActRIIB 폴리펩티드의 생산 방법이 제공된다.

본 발명은 더 나아가 본 발명의 하나 이상의 vActRIIB 폴리펩티드 또는 단백질을 함유하는 조성물을 제공한다. 하나의 구체예에서, 조성물은 약학적으로 허용되는 담체와 혼합하여 vActRIIB 폴리펩티드 또는 단백질을 함유하는 약학 조성물이다.

다른 양태에서, 본 발명은 대상에게 vActRIIB 폴리펩티드 또는 단백질을 함유하는 치료적 조성물을 투여함으로써 근육 소모성 질환을 이러한 질환로 고통받는 대상에서 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 근육 소모성 질환은 다음의 상태들 또는 이로부터의 결과를 포함하는 것이지만 이에 제한되는 것은 아니다: 암 악액질, 근이영양증, 근위축성 측색 경화증, 울혈성 폐쇄성 폐질환, 만성 심부전, 화학적 악액질, HIV/AIDS로 인한 악액질, 신부전, 요독증, 류마티스 관절염, 노인성 근육감소증, 노인성 허약증, 장기 위축증, 수근관 증후군, 안드로겐 차단, 및 장기간의 침상 안정에 따른 비활동으로 인한 근육 소모, 척수 손상, 뇌졸중, 골절, 및 노화. 근육 소모는 또한 우주 비행으로 인한 무중력상태, 인슐린 내성, 화상으로 인한 근육 소모, 안드로겐 차단, 및 다른 질환들로부터의 결과일 수 있다. 다른 양태에서, 본 발명은 액티빈 A의 발현과 상관이 있는 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 하나의 구체예에서, 질환은 암이다. 다른 양태에서, 본 발명은 이러한 치료가 필요한 대상에게 치료적 조성물을 투여하는 것을 포함하는 대사 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 대사 질환은 골 손실, 당뇨병, 비만, 내당능 질환, 고혈당증, 안드로겐 차단, 및 대사 증후군으로부터 선택된다. 다른 양태에서, 본 발명은 필요한 대상에게 본 발명의 vActRIIB 폴리펩티드 또는 단백질을 암호화하는 벡터를 투여하는 것을 포함하는 유전자 치료법을 위한 방법을 제공하며, 여기서 벡터는 대상에서 vActRIIB 폴리펩티드 또는 단백질을 발현할 수 있다.

다른 구체예에서, i) 변이체 액티빈 IIB 수용체 폴리펩티드(vActRIIB) 및 ii) 화학치료제를 포함하는 약학 조성물을 제공하는데, 상기 폴리펩티드는 위치 28에서 단일 아미노산 치환을 제외한 서열번호 18의 폴리펩티드 서열을 포함하며, 폴리펩티드는 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11과 결합할 수 있다. 약학 조성물의 변이체 액티빈 IIB 수용체는 vActRIIB 폴리펩티드의 위치 28에 E 대신에 A, F, Q, V, I, L, M, K, H, W 및 Y로 구성되는 군으로부터 선택된 치환을 가질 수 있다. 다른 구체예에서, vActRIIB 폴리펩티드의 위치 28에서 치환은 E 대신에 A, W 및 Y로 구성되는 아미노산의 군으로부터 선택되거나, 또는 vActRIIB 폴리펩티드의 위치 28에서 치환은 W이다. 또 다른 구체예에서, vActRIIB 폴리펩티드는 N-말단 신호 서열을 결여한다. 또 다른 구체예에서, 약학 조성물은 또한 약학적으로 허용되는 담체, 화학치료제 및 액티빈 IIB 수용체 폴리펩티드 변이체를 포함한다.

다른 양태에서, 약학 조성물의 화학치료제는 뉴클레오시드 유사체이다. 다른 구체예에서, 화학치료제는 5-플루오로우라실 또는 다카르바진일 수 있다.

다른 구체예에서, i) 변이체 액티빈 IIB 수용체 폴리펩티드(vActRIIB) 및 ii) 화학치료제를 포함하는 약학 조성물의 치료적 유효량을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이러한 치료가 필요한 대상에서 미오스타틴 활성을 저해하는 방법을 제공하는데, 여기에 있어서 상기 폴리펩티드는 위치 28에서 단일 아미노산 치환을 제외한 서열번호 18의 폴리펩티드 서열을 포함하며, 폴리펩티드는 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11과 결합할 수 있다. 약학 조성물의 변이체 액티빈 IIB 수용체는 vActRIIB 폴리펩티드의 위치 28에 E 대신에 A, F, Q, V, I, L, M, K, H, W 및 Y로 구성되는 군으로부터 선택된 치환을 가질 수 있다. 다른 구체예에서, vActRIIB 폴리펩티드의 위치 28에서 치환은 E 대신에 A, W 및 Y로 구성되는 아미노산의 군으로부터 선택되거나, 또는 vActRIIB 폴리펩티드의 위치 28에서 치환은 W이다. 또 다른 구체예에서, vActRIIB 폴리펩티드는 N-말단 신호 서열을 결여한다.

다른 양태에서, i) 변이체 액티빈 IIB 수용체 폴리펩티드(vActRIIB) 및 ii) 화학치료제를 포함하는 약학 조성물의 치료적 유효량을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이러한 치료가 필요한 대상에서 액티빈이 과발현되는 질환을 치료하는 방법이 제공하는데, 여기에 있어서 상기 폴리펩티드는 위치 28에서 단일 아미노산 치환을 제외한 서열번호 18의 폴리펩티드 서열을 포함하며, 폴리펩티드는 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11과 결합할 수 있다. 약학 조성물의 변이체 액티빈 IIB 수용체는 vActRIIB 폴리펩티드의 위치 28에 E 대신에 A, F, Q, V, I, L, M, K, H, W 및 Y로 구성되는 군으로부터 선택된 치환을 가질 수 있다. 다른 구체예에서, vActRIIB 폴리펩티드의 위치 28에서 치환은 E 대신에 A, W 및 Y로 구성되는 아미노산의 군으로부터 선택되거나, 또는 vActRIIB 폴리펩티드의 위치 28에서 치환은 W이다. 또 다른 구체예에서, vActRIIB 폴리펩티드는 N-말단 신호 서열을 결여한다.

본 발명의 한 양태에서, 상기 방법은 암을 치료하는데 사용될 수 있다. 암은 고환암, 난소암 또는 흑색종일 수 있다.

다른 구체예에서, i) 변이체 액티빈 IIB 수용체 폴리펩티드(vActRIIB)로서, 상기 폴리펩티드는 위치 28에서 단일 아미노산 치환을 제외한 서열번호 18의 폴리펩티드 서열을 포함하며, 폴리펩티드는 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11과 결합할 수 있는 폴리펩티드, 및 ii) 화학치료제를 포함하는 약학 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 이러한 치료가 필요한 대상에서 종양 덩어리의 크기를 감소시키는 방법이 제공된다. 약학 조성물의 변이체 액티빈 IIB 수용체는 vActRIIB 폴리펩티드의 위치 28에 E 대신에 A, F, Q, V, I, L, M, K, H, W 및 Y로 구성되는 군으로부터 선택된 치환을 가질 수 있다. 다른 구체예에서, vActRIIB 폴리펩티드의 위치 28에서 치환은 E 대신에 A, W 및 Y로 구성되는 아미노산의 군으로부터 선택되거나, 또는 vActRIIB 폴리펩티드의 위치 28에서 치환은 W이다. 또 다른 구체예에서, vActRIIB 폴리펩티드는 N-말단 신호 서열을 결여한다. 종양 덩어리는 고환암 또는 난소암 또는 흑색종으로부터의 결과일 수 있다.

또 다른 구체예에서, 이러한 치료가 필요한 대상에서 흑색종을 치료하는 방법이 제공되며, 이 방법은 변이체 액티빈 IIB 수용체 폴리펩티드(vActRIIB)를 포함하는 약학 조성물의 치료적 유효량을 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하고, 이때 상기 폴리펩티드는 위치 28에서 단일 아미노산 치환을 제외한 서열번호 18의 폴리펩티드 서열을 포함하며, 폴리펩티드는 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11과 결합할 수 있다.

다른 구체예에서, 이러한 치료가 필요한 대상에서 혈관형성 인자의 과발현을 가진 상태를 치료하는 방법이 제공되며, 이 방법은 변이체 액티빈 IIB 수용체 폴리펩티드(vActRIIB)를 포함하는 약학 조성물의 치료적 유효량을 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하고, 이때 상기 폴리펩티드는 위치 28에서 단일 아미노산 치환을 제외한 서열번호 18의 폴리펩티드 서열을 포함하며, 폴리펩티드는 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11과 결합할 수 있다. 상태는 암일 수 있으며, 암은 난소암일 수 있다. VEGF-A 또는 Ang-1이 과발현될 수 있다.

도 1은 야생형 용해성 ActRIIB-사람 IgG1Fc의 아미노산 서열(서열번호 98)을 도시한다. 신호 펩티드 서열은 볼드체이고, 이후 성숙한 ActRIIB 세포외 도메인이 뒤따르며, 사람 IgG1 Fc는 이탤릭체로서 부분 힌지 영역을 포함한다. 아미노산 E28과 R40은 밑줄로 표시된다. 링커 서열 GGGGS(서열번호 75)은 이탤릭체이고 밑줄로 표시된다. 신호 펩티드 서열은 볼드체이고, 이후 성숙한 ActRIIB5 용해성 도메인이 뒤따르며, 부분 힌지 영역을 포함하는 사람 IgG1 Fc는 이탤릭체이다. E28과 R40은 밑줄로 표시된다. 링커 서열(GGGGS)(서열번호 75)은 이탤릭체이고 밑줄로 표시된다.
도 2는 용해성 ActRIIB5-사람 IgG1Fc(서열번호 99)의 아미노산 서열을 도시한다. 신호 펩티드 서열은 볼드체이고, 이후 성숙한 ActRIIB5 용해성 도메인이 뒤따르며, 부분 힌지 영역을 포함하는 사람 IgG1 Fc는 이탤릭체이다. E28과 R40은 밑줄로 표시된다. 링커 서열 GGGGS(서열번호 75)은 이탤릭체이고 밑줄로 표시된다.
도 3은 인히빈-α 녹아웃 마우스에서 고환(도 3A) 및 난소(도 3B) 질량에 대한 용해성 vActRIIB-Fc E28W 치료의 효과를 도시한다.
도 4(도 4A-4B)는 수컷(도 4A) 및 암컷(도 4B) 인히빈-α 녹아웃 마우스에서 생존율에 대한 용해성 vActRIIB-Fc E28W 치료의 효과를 도시한다.
도 5는 결장 26 종양-보유 마우스에서 체중에 대한 용해성 vActRIIB-Fc E28W 치료의 효과를 도시한다.
도 6은 결장 26 종양-보유 마우스의 생존율에 대한 용해성 vActRIIB-Fc E28W 치료의 효과를 도시한다.
도 7A-7D는 마우스의 액티빈 수준(도 7A)과 KO 마우스에서 난소암(OC)에 대한 sActRIIB(E28W)의 효과를 도시한다. 도 7A는 정상 및 난소암에서 액티빈의 수준을 도시한다. ***P<0.001, 스튜던트 t테스트; n=20. 도 7B는 액티빈 수준에 대한 sActRIIB의 효과를 도시한다. 값들은 평균±SEM이다. ***: P<0.001 대 WT 대조군. n=6-12. 도 7C는 sActRIIB에 의한 난소 질량의 변화를 도시한다. 값들은 평균±SEM이다. ***: P<0.001 대 WT 대조군. n=6-10. 도 7D는 치료된 및 치료되지 않은 마우스에서 난소 종양을 도시한다. 스케일 바 = 10mm
도 8A-8B는 난소 종양에서 VEGF 수준의 과발현을 폐기하는 액티빈 A 봉쇄(도 8A) 및 VEGF 수준의 sActRIIB(E28W)에 의한 치료 후 고환 종양에서 카스파아제-3의 활성화(도 8B)를 도시한다. 도 8A - 값들은 평균 ± SEM이다. *: P<0.05; 스튜던트 t-테스트. n=10. 도 8B - ** P<0.01, 스튜던트 t-테스트.
도 9A-9B는 종양 성장에 대한 액티빈 길항제 sActRIIB(E28W) 및 세포독성 화학치료제의 효과를 도시한다. 도 9A는 누드 마우스에서 TOV-21G 종양 성장 저해에 대한 sActRIIB 및 5-Fu의 효과를 도시한다. 종양 부피의 변화가 길이 방향으로 기록되었다. ***: P<0.001 대 PBS; ^#:P<0.05 대 5-Fu; ^¶: P<0.01 대 sActRIIB; 반복된 측정 ANOVA; n=12. 도 9B는 누드 마우스에서 G361 사람 흑색종 이종이식편의 성장에 대한 sActRIIB 및 다카르바진의 효과를 도시한다. 종양 부피(㎣)의 결과는 평균±SEM로 표시된다. *: P<0.05 대 PBS 군. 반복된 측정 ANOVA에 기초한 통계. n=8.

변이체 사람 액티빈 IIB 수용체(vActRIIB; 또한 sActRIIB라고도 한다) 폴리펩티드를 포함하는 단백질이 개시된다. 이들 단백질 및 폴리펩티드는 3개의 TGF-β 단백질, 미오스타틴(GDF-8), 액티빈 A, 및 GDF-11 중 하나 이상과 결합하고, 이들 단백질의 활성을 저해하는 능력에 의해 특징된다. 이들 단백질 및 폴리펩티드는 또한 본원에 개시된 변형을 함유하지 않는 폴리펩티드와 비교하여 응집에 있어서 감소된 경향을 나타낸다. 변형은 수탁 번호 NP_001097의 야생형 ActRIIB(서열번호 47), ActRIIB(서열번호 18)의 세포외 도메인 또는 ActRIIB5(서열번호 2)를 참조하여 위치 28, 40, 또는 28과 40 모두에서의 아미노산 치환으로 구성된다.

본원에서 사용된 용어 "TGF-β 패밀리 멤버(TGF-β family members)" 또는 "TGF-β 단백질(TGF-β proteins)"은 액티빈을 포함하는 형질전환 성장 인자 패밀리의 구조적으로 관련된 성장 인자, 및 성장 및 분화 인자(GDF) 단백질을 말한다(Kingsley et al. Genes Dev. 8:133-146(1994), McPherron et al. Growth factors and cytokines in health and disease, Vol. 1B, D. LeRoith and C. Bondy. ed., JAI Press Inc., Greenwich, Conn, USA: pp 357-393).

미오스타틴이라고도 하는 GDF-8은 골격근 조직의 부정적(negative) 조절인자이다(McPherron et al., PNAS USA 94:12457-12461(1997)). 미오스타틴은 대략 375 아미노산 길이의 비활성 단백질 복합체로서 합성되며, 사람에 대해서 GenBank 수탁 번호 No: AAB86694(서열번호 49)를 가진다. 전구체 단백질은 4염기성 가공 부위에서 단백질가수분해 절단(cleavage)에 의해서 활성화되며, 이로써 N-말단 비활성 프로도메인 및 대략 109 아미노산 C-말단 단백질이 생산되고, 이것은 다이머화하여 약 25 kDa의 호모다이머를 형성한다. 이 호모다이머는 성숙한, 생물학적으로 활성인 단백질이다(Zimmers et al., Science 296, 1486(2002)).

본원에서 사용된 용어 "프로도메인(prodomain)" 또는 "프로펩티드(propeptide)"는 절단되어 활성 C-말단 단백질을 방출하는 비활성 N-말단 단백질을 말한다. 본원에서 사용된 용어 "미오스타틴" 또는 "성숙한 미오스타틴"은 모노머, 다이머 또는 다른 형태의, 성숙한, 생물학적으로 활성인 C-말단 폴리펩티드, 뿐만 아니라 대립형질 변이체, 스플라이스 변이체, 및 융합 펩티드 및 폴리펩티드를 포함하는 생물학적으로 활성인 단편 또는 관련된 폴리펩티드를 말한다. 성숙한 미오스타틴은 사람, 마우스, 닭, 돼지, 칠면조, 및 래트를 포함하는 많은 종들 중에서 100% 서열 동일성을 갖는 것으로 보고되었다(Lee et al., PNAS 98, 9306(2001)).

본원에서 사용된 GDF-11은 Swissprot 수탁 번호 O95390(서열번호 50)을 갖는 BMP(골 형성 단백질), 뿐만 아니라 그 단백질의 변이체 및 종 상동체를 말한다. GDF-11은 아미노산 수준에서 미오스타틴과 대략 90% 동일성을 가진다. GDF-11은 축방향 골격의 전방/후방 패턴화의 조절에 연류되지만(McPherron et al., Nature Genet. 22(93):260-264(1999); Gamer et al., Dev. Biol. 208(1), 222-232(1999)), 출생후의 기능은 밝혀지지 않았다.

액티빈 A는 폴리펩티드 사슬 βA의 호모다이머이다. 본원에서 사용된 용어 "액티빈 A"는 GenBank 수탁 번호 No: NM_002192(서열번호 48)를 갖는 액티빈 단백질, 뿐만 아니라 그 단백질의 변이체 및 종 상동체(species homologs)를 말한다.

액티빈 수용체

본원에서 사용된 용어 액티빈 타입 IIB 수용체(ActRIIB)는 수탁 번호 NP_001 097(서열번호 47)을 갖는 사람 액티빈 수용체를 말한다. 용어 용해성 ActRIIB는 ActRIIB(서열번호 18)의 세포외 도메인, ActRIIB5(서열번호 2) 및 이들 서열에서 위치 64에서 아르기닌이 알라닌으로 치환된 것들도 역시 포함한다.

변이체 용해성 ActRIIB 폴리펩티드

본 발명은 사람 변이체 용해성 ActIIB 수용체 폴리펩티드(본원에서 vActRIIB 폴리펩티드, 또는 변이체 폴리펩티드 또는 sActRIIB라고 한다)를 포함하는 분리된 단백질을 제공한다. 본원에서 사용된 용어 "vActRIIB 단백질"은 vActRIIB 폴리펩티드를 포함하는 단백질을 말한다. 본원에서 사용된 용어 "분리된"은 내인성 물질로부터 어느 정도까지 정제된 단백질 또는 폴리펩티드 분자를 말한다. 이들 폴리펩티드 및 단백질은 액티빈 A, 미오스타틴, 또는 GDF-11 중 어느 하나와 결합하고, 활성을 저해하는 능력을 갖는 것을 특징으로 한다. 일부 구체예에서, 액티빈 A, 미오스타틴, 또는 GDF-11에 대한 변이체 폴리펩티드의 결합 친화성은 야생형 폴리펩티드와 비교하여 개선된다.

하나의 구체예에서, vActRIIB 폴리펩티드는 서열번호 2 또는 18의 아미노산 서열을 가지며, 여기서 위치 E28 또는 R40 중 어느 하나, 또는 위치 E28과 R40 둘 다에서 아미노산이 다른 비-자생 아미노산으로 치환되고, 폴리펩티드는 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11과 결합할 수 있다. 다른 구체예에서, vActRIIB 폴리펩티드는 이들 서열의 성숙한 버전, 또는 끝절단된 성숙한 버전이다. 본원에서 사용된 용어 "성숙한 vActRIIB 폴리펩티드"는 아미노산 신호 서열이 제거된 폴리펩티드를 말한다. 하나의 구체예에서, 성숙한 서열은, 예를 들어 서열번호 2의 아미노산 19에서 160, 및 서열번호 18의 아미노산 19에서 134이며, 여기서 위치 28과 40에서 하나 또는 두 아미노산이 다른 비-자생 아미노산으로 치환되고, 폴리펩티드는 액티빈 A, 미오스타틴, 또는 GDF-11과 결합하는 능력을 보유한다. 본원에서 사용된 용어 끝절단된 성숙한 vActRIIB 폴리펩티드는 신호 서열과 거기에 더해서 성숙한 폴리펩티드의 N-말단으로부터 아미노산이 제거된 폴리펩티드를 말한다. 하나의 구체예에서, 성숙한 폴리펩티드의 성숙한 N-말단 4 아미노산 또는 N-말단 6 아미노산이 제거된다. 이 구체예에서, 끝절단된 성숙한 서열은, 예를 들어 서열번호 2의 아미노산 23에서 160, 또는 서열번호 2의 아미노산 25에서 160; 및 서열번호 18의 아미노산 23에서 134, 또는 서열번호 18의 아미노산 25에서 134이며, 여기서 위치 28과 40에서 하나 또는 두 아미노산은 액티빈 A, 미오스타틴, 또는 GDF-11과 결합하는 능력을 보유하는 비-야생형 아미노산으로 치환된다. 본원에서 사용된 용어 "위치 28" 및 "위치 40"(즉, E28 및 R40)은 18개 아미노산 신호 서열을 포함하는 서열 서열번호2 및 18을 참조하여 아미노산 위치를 말한다. 일치를 위해서, 성숙한 vActRIIB 폴리펩티드가 성숙한 또는 끝절단된 성숙한 서열과 관련하여 위치 10 및/또는 위치 22에서 치환을 갖거나, 또는 끝절단된 성숙한 폴리펩티드가 위치 6 및/또는 위치 18에서 치환, 또는 위치 4 및/또는 위치 16에서 치환을 가진다면, 이들 변이체도 역시 전장 서열번호2 및 18와 관련하여, 또는 도 1 또는 2에 도시된 대로, 즉 위치 E28 및/또는 R40에서 아미노산 치환으로 언급될 것이다. 이러한 성숙한 구체예 또는 N-말단 끝절단된 구체예가 아래 예시된다.

하나의 구체예에서, 위치 E28에서 치환은 W, Y 및 A로 구성되는 아미노산의 군으로부터 선택된다. 하나의 구체예에서, 위치 28에서 치환은 W이다. 추가의 구체예에서, 위치 28에서 치환은 A, F, Q, V, I, L, M, K, H, W 및 Y로 구성되는 아미노산의 군으로부터 선택된다. 추가의 구체예에서, 위치 40에서 치환은 G, Q, M, H, K 및 N으로 구성되는 아미노산의 군으로부터 선택된다. 추가의 구체예에서, 위치 28에서 치환은 A, F, Q, V, I, L, M, K, H, W 및 Y로 구성되는 아미노산의 군으로부터 선택되고, 위치 40에서 치환은 A, G, Q, M, H, K, 및 N으로 구성되는 아미노산의 군으로부터 선택된다. 하나의 구체예에서, 단백질은 서열번호4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 52, 54, 56, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 87, 88, 91, 93, 95, 및 97로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 다른 구체예에서, 단백질은 서열번호3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 51, 53, 55, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 92, 94, 96으로 구성되는 군에 제시된 서열 또는 그것의 보체를 갖는 폴리뉴클레오티드에 의해서 암호화된 폴리펩티드를 포함한다.

하나의 구체예에서, 신호 서열이 vActRIIB 폴리펩티드로부터 제거되면서 성숙한 변이체 폴리펩티드가 남는다. 다양한 신호 펩티드가 본 출원의 폴리펩티드의 제조에서 사용될 수 있다. 신호 펩티드는 도 1 및 2에 도시된 서열을 가질 수 있거나(서열번호 73), 또는 서열번호 2 및 18에 대한 신호 서열인 서열번호 74와 같은 대안적인 신호 서열을 가질 수 있다. vActRIIB 또는 vActRIIB5 폴리펩티드를 발현하는데 유용한 어떤 다른 신호 펩티드가 사용될 수 있다.

다른 구체예에서, vActRIIB 폴리펩티드는 서열번호2 및 18과 실실적으로 유사한 서열을 가진다. 본원에서 사용된 용어 "실질적으로 유사한"은 서열번호2 및 18에 제시된 아미노산 서열에 대해 약 80% 이상의 동일성, 약 85% 이상의 동일성, 약 90% 이상의 동일성, 약 95% 이상의 동일성, 약 98% 이상의 동일성, 또는 약 99% 이상의 동일성을 갖는 폴리펩티드를 말하며, 여기서 위치 28 및/또는 40에서 하나 또는 두 아미노산은 비-야생형 타입 아미노산으로 치환되고, 폴리펩티드는 미오스타틴, 액티빈 A 또는 GDF-11과 결합하고 저해하는 능력인, 서열번호2 및 18의 폴리펩티드의 활성을 보유한다. 이에 더하여, 용어 vActRIIB 폴리펩티드는 본원에 설명된 위치 28 및/또는 40에서 치환을 함유하는 N 및 C-말단 끝절단체와 같은 서열번호2 또는 18의 단편을 포함하며, 여기서 폴리펩티드는 미오스타틴, 액티빈 A 또는 GDF-11과 결합하고 저해할 수 있다.

본원에서 사용된 용어 vActRIIB 및 vActRIIB5 폴리펩티드의 "유도체"는 글리코실기, 지질, 아세틸기 또는 C-말단 또는 N-말단 융합 폴리펩티드와 같은 공유 또는 응집 콘쥬게이트, PEG 분자와의 콘쥬게이트, 및 아래 더 충분히 설명되는 다른 변형들을 형성하기 위한 하나 이상의 추가의 화학적 부분, 또는 하나 이상의 추가의 폴리펩티드의 부착을 말한다. 변이체 ActRIIB 수용체 폴리펩티드(vActRIIB)는 또한 포유류 세포, E. coli, 효모 및 다른 재조합 숙주 세포와 같은 다양한 세포 타입에서의 발현으로 인한 가공으로부터 생기는 C 및 N 말단에 대한 변형을 포함하여 추가의 변형 및 유도체를 포함할 수 있다. 또한, 서열번호4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 52, 54, 56, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 87, 88, 91, 93, 95, 및 97에 제시된 폴리펩티드 서열의 비활성화된 N-글리코실화 부위(들), 비활성화된 프로테아제 가공 부위(들), 또는 보존성 아미노산 치환(들)을 포함하는 vActRIIB 폴리펩티드 단편 및 폴리펩티드가 포함된다.

본원에서 사용된 용어 "vActRIIB 또는 vActRIIB5 폴리펩티드 활성" 또는 "용해성 ActRIIB 또는 ActRIIB5 폴리펩티드의 생물학적 활성"은, 제한은 아니지만, 아래 실시예에서 증명된 것들을 포함하는 vActRIIB 및 vActRIIB5 폴리펩티드의 하나 이상의 시험관내 또는 생체내 활성을 말한다. vActRIIB 폴리펩티드의 활성은, 제한은 아니지만, 미오스타틴 또는 액티빈 A 또는 GDF-11와 결합하는 능력, 및 미오스타틴 또는 액티빈 A 또는 GDF-11의 활성을 감소시키거나 중화시키는 능력을 포함한다. 본원에서 사용된 용어 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11과 "결합할 수 있는"은 아래 실시예 2에 설명된 Biacore 방법과 같은, 본 분야에 알려진 방법에 의해서 측정된 결합을 말한다. 또한, 실시예 2에서 pMARE C2C12 세포-기반 어세이는 액티빈 A 중화 활성, 미오스타틴 중화 활성, 및 GDF-11 중화 활성을 측정한다. 생체내 활성은, 제한은 아니지만, 본 분야에 알려진 아래 동물 모델에서 증명된 대로, 체중 증가, 순수 근육 질량 증가, 골격근 질량 증가, 지방 질량 감소를 포함한다. 생물학적 활성은 또한 특정 타입의 종양에 의해서 야기된 악액질의 감소 또는 예방, 특정 타입의 종양의 성장 예방, 및 특정 동물 모델의 생존 증가를 포함한다. vActRIIB 폴리펩티드 활성에 대한 추가의 논의는 아래 제공된다.

본 발명의 폴리펩티드는 융합 단백질을 형성하기 위해서 직접 또는 링커 서열을 통해서 vActRIIB 폴리펩티드에 부착된 이종성 폴리펩티드를 더 포함한다. 본원에서 사용된 용어 "융합 단백질"은 재조합 DNA 기술을 통해서 부착된 이종성 폴리펩티드를 갖는 단백질을 말한다. 이종성 폴리펩티드는, 제한은 아니지만, Fc 폴리펩티드, His 태그, 및 류신 지퍼 도메인을 포함하며, 이들은 예를 들어 참고자료로 본원에 포함되는 WO 00/29581에 설명된 대로 변이체 ActRIIB 폴리펩티드의 올리고머화 및 안정화를 촉진한다. 하나의 구체예에서, 이종성 폴리펩티드는 Fc 폴리펩티드 또는 도메인이다. 하나의 구체예에서, Fc 도메인은 사람 IgG1, IgG2, 및 IgG4 Fc 도메인으로부터 선택된다. 이들은 서열번호80, 82 및 84에 제공된다. vActRIIB는 그것의 각 IgG Fc 영역에 인접한 IgG1, IgG2, 또는 IgG4의 힌지 서열의 전부 또는 일부를 더 포함할 수 있다. IgG1, IgG2, 및 IgG4에 대한 전체 힌지 서열은 각각 서열번호76, 77, 및 78에 제공된다.

vActRIIB 폴리펩티드는 선택적으로 "링커" 서열을 더 포함할 수 있다. 링커는 주로 폴리펩티드와 제2 이종성 폴리펩티드 또는 다른 타입의 융합 사이의 또는 둘 이상의 변이체 ActRIIB 폴리펩티드 사이의 스페이서로서 소용된다. 하나의 구체예에서, 링커는 펩티드 결합에 의해서 함께 결합된 아미노산, 바람직하게 펩티드 결합에 의해서 결합된 1 내지 20 아미노산으로 이루어지며, 여기서 아미노산은 20개의 자연 발생 아미노산으로부터 선택된다. 이들 아미노산 중 하나 이상은 글리코실화될 수 있으며, 이는 당업자에게 이해되는 대로이다. 하나의 구체예에서, 1 내지 20 아미노산은 글리신, 알라닌, 프롤린, 아스파라긴, 글루타민 및 리신으로부터 선택된다. 바람직하게, 링커는 글리신 및 알라닌과 같은 입체장해가 없는 아미노산으로 대부분 이루어진다. 예시적인 링커는 폴리글리신(특히 (Gly)5, (Gly)8, 폴리(Gly-Ala)), 및 폴리알라닌이다. 아래 실시예에 나타낸 하나의 예시적인 적합한 링커는 (Gly)4Ser(서열번호 75)이다. 추가의 구체예에서, vActRIIB는 힌지 링커를 포함할 수 있으며, 이것은 서열번호 79에 예시된 힌지 영역에 인접 제공된다.

링커는 또한 비-펩티드 링커이다. 예를 들어, -NH-(CH2)s-C(O)-(여기서 s = 2-20)와 같은 알킬 링커가 사용될 수 있다. 이들 알킬 링커는 저급 알킬(예를 들어, C1-C6) 저급 아실, 할로겐(예를 들어, Cl, Br), CN, NH2, 페닐 등과 같은 어떤 비-입체장해 기에 의해서 더 치환될 수 있다.

하나의 구체예에서, vActRIIB 폴리펩티드는 직접 또는 링커를 통해서, 또는 힌지 링커를 통해서 Fc 폴리펩티드에 부착될 수 있다. 하나의 구체예에서, Fc는 사람 IgG Fc이다. Fc에 부착된 vActRIIB는, 표 1 및 2에 도시되고, 본원에서 실시예에 설명된 대로, 예를 들어 vActRIIB-IgG1Fc, E28A(서열번호 60); vActRIIB-IgG1Fc, E28W(서열번호 62), vActRIIB-IgG1Fc, E28Y(서열번호 64), vActRIIB-IgG Fc, R40G(서열번호 66), vActRIIB5-IgG1Fc, E28A(서열번호 70), 및 vActRIIB5-IgG1Fc E28W(서열번호 72)를 포함한다. 추가의 구체예는 vActRIIB-IgG2 Fc, E28W(서열번호 91), vActRIIB-IgG2 Fc, E28Y(서열번호 93), 및 vActRIIB-IgG2 Fc(서열번호 95)를 포함한다. 변이체는 아래 실시예에서 증명된 대로 야생형 ActRIIB-IgG2 IgG2와 비교하여 응집을 덜 야기하는 것으로 증명되었다.

본원에 개시된 vActRIIB 폴리펩티드는 또한 분해 감소 및/또는 반감기 증가, 독성 감소, 면역원성 감소, 및/또는 ActRIIB 폴리펩티드의 생물학적 활성 증가와 같은 원하는 특성을 부여할 목적에서 비-폴리펩티드 분자에 부착될 수 있다. 예시적인 분자는, 제한은 아니지만, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리리신, 덱스트란과 같은 선형 중합체; 지질; 콜레스테롤 기(스테로이드와 같은); 탄수화물, 또는 올리고당 분자를 포함한다.

다른 양태에서, 본 발명은 본 발명의 vActRIIB 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 분리된 핵산 분자를 제공한다. 본원에서 사용된 용어 "분리된"은 내인성 물질로부터 어느 정도까지 정제된 핵산 분자를 말한다. 하나의 구체예에서, 본 발명의 핵산 분자는 서열번호4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 52, 54, 56, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 87, 88, 91, 93, 95, 및 97의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 하나보다 많은 코돈이 동일한 아미노산을 암호화할 수 있는 유전자 코드의 알려진 축퇴로 인하여, DNA 서열은 서열번호3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 51, 53, 55, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 92, 94, 및 96에 도시된 것 또는 서열번호3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 51, 53, 55, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 92, 94, 및 96의 상보성 가닥으로부터 변할 수 있고, 여전히 서열번호4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 52, 54, 56, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 87, 88, 91, 93, 95, 및 97의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 암호화할 수 있다. 이러한 변이체 DNA 서열은 생산 동안 발생하는 침묵 돌연변이로부터의 결과일 수 있거나, 또는 이들 서열의 의도된 돌연변이유발의 생성물일 수 있다.

다른 구체예에서, 본 발명의 핵산 분자는 서열번호3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 51, 53, 55, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 92, 94, 및 96에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열 또는 서열번호3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 51, 53, 55, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 92, 94, 및 96의 상보성 가닥을 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 긴축 또는 온건한 조건하에서 서열번호3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 51, 53, 55, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 92, 94, 및 96의 폴리펩티드-암호화 영역과 혼성화하는 핵산 분자를 제공하며, 여기서 암호화된 폴리펩티드는 서열번호4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 52, 54, 56, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 87, 88, 91, 93, 95, 및 97에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 암호화된 폴리펩티드는 vActRIIB 폴리펩티드의 활성을 유지한다.

본 발명의 핵산 분자는 단일 가닥 및 이중 가닥 형태 모두의 DNA, 뿐만 아니라 그것의 RNA 보체를 포함한다. DNA는, 예를 들어 cDNA, 게놈 DNA, 합성 DNA, PCR에 의해서 증폭된 DNA, 및 이들의 조합을 포함한다. 게놈 DNA는 종래의 기술에 의해서, 예컨대 SEQ ID NOS:1 또는 17, 또는 이들의 적합한 단편을 프로브로 사용함으로써 분리될 수 있다. ActRIIB 폴리펩티드를 암호화하는 게놈 DNA는 많은 종들로부터 이용가능한 게놈 라이브러리로부터 얻어진다. 합성 DNA는 올리고뉴클레오티드 단편을 중첩시킨 후, 단편을 조립하여 코딩 영역 및 측면 서열의 일부 또는 전부를 재구성하는 화학적 합성으로부터 이용가능하다. RNA는 mRNA의 높은 수준의 합성을 지시하는 원핵생물 발현 벡터, 예컨대 T7 프로모터 및 RNA 폴리머라아제를 사용하는 벡터로부터 얻어질 수 있다. cDNA는 ActRIIB를 발현하는 다양한 조직으로부터 분리된 mRNA로부터 제조된 라이브러리로부터 얻어진다. 본 발명의 DNA 분자는 전장 유전자뿐만 아니라 이들의 폴리뉴클레오티드 및 단편을 포함한다. 전장 유전자는 또한 N-말단 신호 서열을 암호화하는 서열을 포함할 수 있다.

본 발명의 다른 양태에서, 핵산 서열을 함유하는 발현 벡터가 또한 제공되고, 이러한 벡터로 형질전환된 숙주 세포 및 vActRIIB 폴리펩티드의 생산 방법이 또한 제공된다. 용어 "발현 벡터"는 폴리뉴클레오티드 서열로부터 폴리펩티드를 발현하기 위한 플라스미드, 파지, 바이러스 및 벡터를 말한다. vActRIIB 폴리펩티드의 발현을 위한 벡터는 벡터 증식과 클론된 삽입체의 발현에 필요한 최소 서열을 함유한다. 발현 벡터는 (1) 유전자 발현에서 조절성 역할을 갖는 유전자 요소 또는 요소들, 예를 들어 프로모터 또는 인핸서, (2) mRNA로 전사되고 단백질로 번역되는 vActRIIB 폴리펩티드를 암호화하는 서열, 및 (3) 적절한 전사 개시 및 종결 서열의 조립체를 포함하는 전사 단위를 포함한다. 이들 서열은 선택 마커를 더 포함할 수 있다. 숙주 세포에서 발현에 적합한 벡터는 쉽게 이용가능하며, 핵산 분자는 표준 재조합 DNA 기술을 사용하여 벡터에 삽입된다. 이러한 벡터는 특정 조직에서 기능하는 프로모터, 및 표적화된 사람 또는 동물 세포에서 vActRIIB의 발현을 위한 바이러스 벡터를 포함할 수 있다. vActRIIB의 발현에 적합한 예시적인 발현 벡터는 vActRIIB 폴리뉴클레오티드를 함유하는 pDSRa(WO 90/14363에 설명됨, 본원에 참고자료로 포함된다) 및 그것의 유도체, 뿐만 아니라 본 분야에 알려진 또는 아래 설명된 어떤 추가의 적합한 벡터이다.

본 출원은 vActRIIB 폴리펩티드를 제조하는 방법을 더 제공한다. 여러 다른 발현/숙주 시스템이 활용될 수 있다. 이들 시스템은, 제한은 아니지만, 재조합 박테리오파지, 플라스미드 또는 코스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 박테리아와 같은 미생물; 효모 발현 벡터로 형질전환된 효모; 바이러스 발현 벡터(예를 들어, 배큘로바이러스)로 감염된 곤충 세포 시스템; 바이러스 발현 벡터(예를 들어, 콜리플라워 모자이크병 바이러스, CaMV; 담배 모자이크병 바이러스, TMV)로 트랜스펙션된 또는 박테리아 발현 벡터(예를 들어, Ti 또는 pBR322 플라스미드)로 형질전환된 식물 세포 시스템; 또는 동물 세포 시스템을 포함한다. 재조합 단백질 생산에 유용한 포유류 세포는, 제한은 아니지만, VERO 세포, HeLa 세포, 중국햄스터 난소(CHO) 셀라인, 또는 혈청-무함유 배지에서 성장한 Veggie CHO 및 관련된 셀라인과 같은 이들의 유도체(Rasmussen et al., 1998, Cytotechnology 28:31 참조) 또는 DHFR에 결핍이 있는 CHO 균주 DX-B11(Urlaub et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-20 참조), 원숭이 신장 세포의 COS7 계통과 같은 COS 세포(ATCC CRL 1651) (Gluzman et al. 1981, Cell 23:175 참조), W138, BHK, HepG2, 3T3(ATCC CCL 163), RIN, MDCK, A549, PC12, K562, L 세포, C127 세포, BHK(ATCC CRL 10) 셀라인, 아프리카 녹색 원숭이 신장 셀라인 CV1(ATCC CCL 70) 유래 CV1/EBNA 셀라인(McMahan et al., 1991, EMBO J. 10:2821 참조), 293, 293 EBNA 또는 MSR 293과 같은 사람 배아 신장 세포, 사람 표피 A431 세포, 사람 Colo205 세포, 다른 형질전환된 영장류 셀라인, 정상 2배체 세포, 일차 조직의 시험관내 배양물로부터 유래된 세포 균주, 일차 외식편, HL-60, U937, HaK 또는 Jurkat 세포를 포함한다. 포유류 발현은 분비된 또는 용해성 폴리펩티드의 생산을 허용하며, 이들은 성장 배지로부터 회수될 수 있다.

적합한 숙주-벡터 시스템을 사용하여 vActRIIB 폴리펩티드는 생산을 허용하는 조건하에서 본 발명의 핵산 분자를 함유하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 배양함으로써 재조합적으로 생산된다. 형질전환된 세포는 장기적, 고-수율 폴리펩티드 생산을 위해서 사용될 수 있다. 일단 이러한 세포가 선택성 마커뿐만 아니라 원하는 발현 카세트를 함유하는 벡터로 형질전환되면, 이 세포는 선택적 배지로 전환되기 전에 부화된 배지에서 1-2일 동안 성장하도록 허용될 수 있다. 선택성 마커는 도입된 서열을 성공적으로 발현한 세포의 성장 및 회수를 허용하도록 설계된다. 안정하게 형질전환된 세포의 저항력 있는 클럼프가 이용된 셀라인에 적절한 조직 배양 기술을 사용하여 증식될 수 있다. 재조합 단백질의 발현에 대한 개관은 Methods of Enzymology, v. 185, Goeddell, D.V., ed., Academic Press(1990)에서 찾아진다.

일부 경우, 예컨대 원핵생물 시스템을 사용한 발현에서, 본 발명의 발현된 폴리펩티드는 적절한 3차 구조로 "리폴드"되고 산화되어야 하며, 생물학적으로 활성이 되기 위해서 이황화 결합이 생성될 필요가 있을 수 있다. 리폴딩은 본 분야에 잘 알려진 많은 과정을 사용하여 달성될 수 있다. 이러한 방법은, 예를 들어 가용화된 폴리펩티드를 무질서화제의 존재하에 일반적으로 7 이상의 pH에 노출시키는 것을 포함한다. 무질서화제의 선택은 봉입체 가용화에서 사용된 선택과 유사하지만, 무질서화제는 전형적으로 더 낮은 농도로 사용된다. 예시적인 무질서화제는 구아니딘 및 유레아이다. 대부분의 경우, 리폴딩/산화 용액은 또한 환원제와 그것의 산화된 형태를 특정 비율로 함유할 것이며, 이로써 시스테인 다리의 형성을 위해 이황화물 셔플링이 발생하는 것을 허용하는 특정한 레독스 전위가 생성된다. 일부 흔히 사용된 레독스 커플은 시스테인/시스타민, 글루타티온/디티오비스 GSH, 염화제2구리, 디티오트레이톨 DTT/디티안 DTT, 및 2-메르캅토에탄올(bME)/디티오-bME를 포함한다. 많은 예에서, 리폴딩의 효능을 증가시키기 위해서 공용매가 사용될 수 있다. 흔히 사용된 공용매는 글리세롤, 다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜 및 아르기닌을 포함한다.

이에 더하여, 폴리펩티드는 종래의 기술에 따라서 용액 중에서 또는 고체 지지체 상에서 합성될 수 있다. 다양한 자동 합성장치가 상업적으로 이용가능하며, 알려진 프로토콜에 따라서 사용될 수 있다. 예를 들어, Stewart and Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2d.Ed., Pierce Chemical Co.(1984); Tam et al., J Am Chem Soc, 105:6442,(1983); Merrifield, Science 232:341-347(1986); Barany and Merrifield, The Peptides, Gross and Meienhofer, eds, Academic Press, New York, 1-284; Barany et al., Int J Pep Protein Res, 30:705-739(1987)를 참조한다.

본 발명의 폴리펩티드 및 단백질은 당업자에게 잘 알려진 단백질 정제 기술에 따라서 정제될 수 있다. 이들 기술은 하나의 수준에서 단백질성 및 비단백질성 분획들의 조 분획화를 수반한다. 다른 단백질로부터 펩티드 폴리펩티드를 분리할 때, 관심의 펩티드 또는 폴리펩티드는 크로마토그래피 및 전기영동 기술을 사용하여 더 정제될 수 있고, 이로써 부분적 또는 완전한 정제(또는 균질성까지의 정제)가 달성된다. 본원에서 사용된 용어 "분리된 폴리펩티드" 또는 "정제된 폴리펩티드"는 다른 성분들로부터 분리가능한 조성물을 말하도록 의도되며, 여기서 폴리펩티드는 그것의 자연적으로 얻어질 수 있는 상태에 비해서 어느 정도까지 정제된다. 따라서, 정제된 폴리펩티드는 또한 그것이 자연적으로 발생할 수 있는 환경에서는 없는 폴리펩티드를 말한다. 일반적으로 "정제된"은 다양한 다른 성분들을 제거하기 위하여 분획화를 행한 폴리펩티드 조성물로서, 조성물이 그것의 발현된 생물학적 활성을 실질적으로 보유하는 폴리펩티드 조성물을 말할 것이다. 용어 "실질적으로 정제된"이 사용된 경우, 이 지칭은 해당 폴리펩티드 또는 펩티드가 조성물의 주 성분을 형성하는, 예컨대 조성물 중 단백질의 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 85%, 또는 약 90% 이상을 구성하는 펩티드 또는 폴리펩티드 조성물을 말할 것이다.

정제에 사용하기 적합한 다양한 기술이 당업자에게 잘 알려져 있을 것이다. 이들은, 예를 들어 황산암모늄, PEG, 항체(면역침전) 등에 의한 침전이나, 또는 열 변성 후 원심분리에 의한 침전; 크로마토그래피, 예컨대 친화성 크로마토그래피(단백질 A 칼럼), 이온 교환, 젤 여과, 역상, 히드록시아파타이트, 소수성 상호작용 크로마토그래피; 등전 포커싱; 젤 전기영동; 및 이들 기술의 조합을 포함한다. 본 분야에 일반적으로 알려진 대로, 다양한 정제 단계를 수행하는 순서는 변화될 수 있거나, 또는 특정 단계는 생략될 수 있으며, 그래도 여전히 실질적으로 정제된 폴리펩티드의 제조를 위한 적합한 방법이 된다고 생각된다. 예시적인 정제 단계들은 아래 실시예에 제공된다.

폴리펩티드의 정제 정도를 정량하기 위한 다양한 방법이 본 개시에 비추어 당업자에게 알려지게 될 것이다. 이들은, 예를 들어 활성 분획의 특이적 결합 활성을 결정하거나, 또는 SDS/PAGE 분석에 의해서 분획 내에서 펩티드 또는 폴리펩티드의 양을 평가하는 것을 포함한다. 폴리펩티드 분획의 순도를 평가하는 바람직한 방법은 분획의 결합 활성을 계산하고, 그것을 초기 추출물의 결합 활성과 비교하고, 이로써 정제 정도를 계산하는 것이며, 그것은 "-배 정제 수"로 평가된다. 결합 활성의 양을 표시하는데 사용된 실제 단위는 물론 정제 후 선택된 특정한 어세이 기술 및 폴리펩티드 또는 펩티드가 검출가능한 결합 활성을 나타내는지 여부에 의존할 것이다.

변이체 액티빈 타입 IIB 폴리펩티드는 근육-분해 연쇄과정을 활성화하는 리간드와 결합한다. 리간드 액티빈 A, 미오스타틴, 및/또는 GDF-11와 결합하고 활성을 저해할 수 있는 vActRIIB 폴리펩티드는 근위축증을 수반하는 질환에 대한 치료적 잠재성을 가질뿐만 아니라, 특정 암, 예를 들어 난소 종양, 전립선 종양 및 흑색종 및 아래 실시예에 나타낸 다른 질환들의 치료에서도 치료적 잠재성을 가진다.

그러나 야생형 ActRIIB 또는 ActRIIB5 폴리펩티드를 발현하거나 정제할 때 응집이 일어날 수 있다. 이런 응집은 발현 동안에는 구조화된 올리고마 형성을 포함하고, 발현 동안과 폴리펩티드 정제 후에는 모두 비-구조화된 응집체 생성을 포함한다.

구조 분석, 분자 모델링, 및 질량분광법의 조합된 접근법은 비글리코실화된 ActRIIB 폴리펩티드 사이에서 정전기 및 수소 결합 상호작용에 의해서 보조된 분자간 이황화 결합 형성을 통해서 ActRIIB 폴리펩티드에서 멀티머화가 생길 수 있다는 것을 나타냈다. 두 ActRIIB 분자의 계면에, 예를 들어 하나의 ActRIIB에서 E28 측쇄와 나머지 하나의 ActRIIB에서 R40 측쇄 사이에 유의한 수소 결합이 존재한다. 이에 더하여, 하나의 ActRIIB에서 E28과 나머지 하나의 ActRIIB에서 R40 사이에 중요한 정전기 상호작용이 존재한다.

이들 정전기 상호작용은 일시적 ActRIIB 다이머들의 집단을 증가시키는데 유의하게 기여할 수 있으며, ActRIIB 단위 사이에서 비공유 및/또는 공유 결합 형성의 촉진을 가져온다. 잔기 28과 40 사이의 상호작용은 이런 상호작용들 중에서 가장 중요한데, 이들 두 잔기는 이중 수소 결합 및 강한 정전기 상호작용에 관여되기 때문이다. 잔기 28 및 40은 ActRIIB:ActRIIB 상호작용에 관여되지만, ActRIIB:리간드 상호작용에는 관여되지 않는다. 따라서, 잔기 28 및 40은 본 발명에 따른 비-자생 아미노산으로 치환될 수 있으며, 이로써 수용체 폴리펩티드의 용해도가 개선되고, 응집이 감소된다. 따라서, E28 및 R40은 다른 가능한 천연 아미노산으로 각각 치환되고, 발현되며, 아래 나타낸 대로 Biacore에 의해서 시험되었다. Biacore 결정된 결합은 아래 실시예 2에서 표 1A 및 1B에 나타낸다. 또한, vActRIIB 폴리펩티드의 응집 퍼센트도 아래 결정된다.

아래 실시예들의 결과는 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11과 결합하고 중화시키는 능력을 보유한 상태에서 본원에 설명된 아미노산 치환을 갖는 vActRIIB 폴리펩티드 및 단백질의 감소된 응집을 나타낸다.

항체

본 발명은 본 발명의 vActRIIB 폴리펩티드와 특이적으로 결합하는 것들을 포함하여, 변이체 ActRIIB 폴리펩티드와 결합하는 항체를 더 포함한다. 본원에서 사용된 용어 "특이적으로 결합하는"은 10⁶ M^-1 이상의 vActRIIB 폴리펩티드에 대한 결합 친화성(Ka)을 갖는 항체를 말한다. 본원에서 사용된 용어 항체는 다클론성 항체를 포함하는 온전한 항체(예를 들어, Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Lane(eds), Cold Spring Harbor Press,(1988) 참조), 및 단클론성 항체(예를 들어, U.S. Patent Nos. RE 32,011, 4,902,614, 4,543,439, 및 4,411,993, 그리고 Monoclonal Antibodies: A New Dimension in Biological Analysis, Plenum Press, Kennett, McKearn and Bechtol(eds.)(1980) 참조)를 말한다. 본원에서 사용된 용어 "항체"는 또한 재조합 DNA 기술 또는 온전한 항체의 효소 또는 화학 절단에 의해서 생산되는 F(ab), F(ab’), F(ab’)2, Fv, Fc, 및 단쇄 항체와 같은 항체의 단편을 말한다. 용어 "항체"는 또한 이중특이적 또는 이중기능 항체를 말하며, 이들은 두 상이한 중쇄/경쇄 쌍과 두 상이한 결합 부위를 갖는 인공 하이브리드 항체이다. 이중특이적 항체는 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편의 결합을 포함하는 여러 방법에 의해서 생산될 수 있다(Songsivilai et al., Clin. Exp. Immunol. 79:315-321(1990), Kostelny et al., J. Immunol.148:1547-1553(1992) 참조).

본원에서 사용된 용어 "항체"는 또한 키메라 항체, 즉 하나 이상의 비-사람 각변 항체 면역글로불린 도메인에 연결된 사람 불변 항체 면역글로불린 도메인을 갖는 항체, 또는 이들의 단편을 말한다(예를 들어, U.S. Patent No. 5,595,898 및 U.S. Patent No. 5,693,493 참조). 항체는 또한 "사람화된" 항체(예를 들어, U.S. Pat. No. 4,816,567 및 WO 94/10332 참조), 미니바디(WO 94/09817), 맥시바디, 및 트랜스제닉 동물에 의해서 생산된 항체를 말하며, 여기서 사람 항체 생산 유전자를 어떤 비율로 함유하지만 내인성 항체의 생산에 결핍이 있는 트랜스제닉 동물은 사람 항체를 생성할 수 있다(예를 들어, Mendez et al., Nature Genetics 15:146-156(1997), 및 U.S. Patent No. 6,300,129 참조). 용어 "항체"는 또한 멀티머 항체, 또는 헤테로다이머 항체와 같은 단백질의 고차원 복합체, 및 항-유전자형 항체를 포함한다. "항체"는 또한 항-유전자형 항체를 포함한다. vActRIIB에 대한 항체는, 예를 들어 vActRIIB를 시험관내 및 생체내 확인하고 정량하기 위하여 사용될 수 있다.

또한, 서열번호4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 52, 54, 56, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 87, 88, 91, 93, 95, 및 97을 포함하는, 본원에 설명된 vActRIIB 폴리펩티드와 특이적으로 결합하는 어떤 포유류로부터의 다클론성 항체, 예를 들어 마우스 및 래트 항체, 및 토끼 항체가 포함된다.

이러한 항체는 본원에 개시된 폴리펩티드를 검출하고 분석하기 위한 연구 도구로서 그리고 정량 어세이에서 용도를 찾는다. 이러한 항체는 상기 설명되고 본 분야에 알려진 방법을 사용하여 제조된다.

약학 조성물

또한, 본 발명의 vActRIIB 단백질 및 폴리펩티드를 함유하는 약학 조성물이 제공된다. 이러한 조성물은 약학적으로 허용되는 물질, 및 생리학적으로 허용되는 조제 물질과 혼합하여 폴리펩티드 또는 단백질의 치료적 또는 예방적 유효량을 포함한다. 약학 조성물은, 예를 들어 조성물의 pH, 삼투농도, 점도, 투명도, 색, 등장성, 냄새, 멸균성, 안정성, 용해 또는 방출 속도, 흡착 또는 침투를 변형, 유지 또는 보존하기 위한 조제 물질을 함유할 수 있다. 적합한 조제 물질은, 제한은 아니지만, 아미노산(예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 리신); 항균제; 항산화제(예컨대 아스코르브산, 아황산나트륨 또는 아황산수소나트륨); 버퍼(예컨대 붕산염, 중탄산염, 트리스-HCl, 시트레이트, 포스페이트, 다른 유기산들); 벌크화제(예컨대 만니톨 또는 글리신), 킬레이트화제(예컨대 에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA)); 복합체화제(예컨대 카페인, 폴리비닐피롤리돈, 베타-시클로덱스트린 또는 히드록시프로필-베타-시클로덱스트린); 필러; 단당류; 이당류 및 다른 탄수화물(예컨대 글루코오스, 만노오스 또는 덱스트린); 단백질(예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린); 착색제; 향미제 및 희석제; 유화제; 친수성 중합체(예컨대 폴리비닐피롤리돈); 저분자량 폴리펩티드; 염-형성 카운터이온(예컨대 나트륨); 보존제(예컨대 염화벤잘코늄, 벤조산, 살리실산, 티메로살, 페네틸 알코올, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로르헥시딘, 소르브산 또는 과산화수소); 용매(예컨대 글리신, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜); 당 알코올(예컨대 만니톨 또는 소르비톨); 현탁제; 계면활성제 또는 습윤제(예컨대 플루로닉스, PEG, 소르비탄 에스테르, 폴리소르베이트, 예컨대 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 트리톤, 트로메타민, 레시틴, 콜레스테롤, 틸록사팔); 안정성 증진제(수크로오스 또는 소르비톨); 장성 증진제(예컨대 알칼리 금속 할로겐화물(바람직하게 염화나트륨 또는 염화칼륨, 만니톨 소르비톨); 송달 비히클; 희석제; 부형제 및/또는 약학 애쥬번트를 포함한다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, A.R. Gennaro, ed., Mack Publishing Company, 1990).

최적 약학 조성물은, 예를 들어 의도된 투여 경로, 송달 형태, 및 원하는 용량에 따라 당업자에 의해 결정될 것이다. 예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences(상동)을 참조한다. 이러한 조성물은 폴리펩티드의 물리적 상태, 안정성, 생체내 방출 속도, 및 생체내 클리어런스 속도에 영향을 미칠 수 있다. 예를 들어, 적합한 조성물은 주사용 물, 비경구 투여를 위한 생리학적 식염수 용액일 수 있다.

약학 조성물에서 주 비히클 또는 캐리어는 자연에서 수성 또는 비-수성일 수 있다. 예를 들어, 적합한 비히클 또는 캐리어는 주사용 물, 생리학적 식염수 용액 또는 인공 뇌척수액일 수 있으며, 아마도 비경구 투여용 조성물에 공통되는 다른 물질로 보충될 것이다. 중성 완충된 식염수 또는 혈청 알부민과 혼합된 식염수가 추가의 예시적인 비히클이다. 다른 예시적인 약학 조성물은 약 pH 7.0-8.5의 트리스 버퍼, 또는 약 pH 4.0-5.5의 아세테이트 버퍼를 포함하며, 이들은 소르비톨 또는 그것의 적합한 대용물을 더 포함할 수 있다. 본 발명의 하나의 구체예에서, 조성물은 동결건조된 케이크 또는 수성 용액의 형태로 원하는 정도의 순도를 갖는 선택된 조성물을 선택적인 조제 제제(Remington's Pharmaceutical Sciences, 상동)와 혼합함으로써 보관에 알맞게 제조될 수 있다. 또한, 치료적 조성물은 수크로오스와 같은 적절한 부형제를 사용하여 동결건조체로서 조제될 수 있다.

제제는 여러 방법으로, 예를 들어 흡입 치료법, 경구, 또는 주사에 의해서 송달될 수 있다. 비경구 투여가 고려되는 경우, 본 발명에서 사용되는 치료적 조성물은 약학적으로 허용되는 비히클 중에 원하는 폴리펩티드를 포함하는 발열원-무함유, 비경구 허용되는 수성 용액의 형태일 수 있다. 비경구 주사에 특히 적합한 비히클은 멸균 증류수이며, 여기에 폴리펩티드가 멸균, 등장 용액으로 조제되어 적절히 보존된다. 또 다른 제조물은 주사가능한 마이크로스피어, 생체-침식 입자, 중합체 화합물(폴리락트산, 폴리글리콜산), 비드 또는 리포솜과 같은 제제를 가진 원하는 분자의 제제를 수반할 수 있으며, 이것은 제품의 제어 또는 지속 방출을 제공하고, 이것은 이어서 데포 주사를 통해서 송달될 수 있다. 히알루론산인 또한 사용될 수 있으며, 이것은 순환 중 지속 기간을 촉진하는 효과를 가질 수 있다. 원하는 분자의 도입을 위한 다른 적합한 수단은 이식가능한 약물 송달 장치를 포함한다.

다른 양태에서, 주사가능한 투여에 적합한 약학 제제는, 바람직하게 생리학적으로 양립가능한 버퍼, 예컨대 행크 용액, 링거 용액, 또는 생리학적으로 완충된 식염수 중에 수성 용액으로 조제될 수 있다. 수성 주사 현탁액은 나트륨 카복시메틸 셀룰로오스, 소르비톨 또는 덱스트란과 같은 현탁액의 점도를 증가시키는 물질을 함유할 수 있다. 추가하여, 활성 화합물의 현탁액은 적절한 유성 주사 현탁액으로 제조될 수 있다. 적합한 친유성 용매 또는 비히클은 지방 오일, 예컨대 참깨 오일, 또는 합성 지방산 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트, 트리글리세리드, 또는 리포솜을 포함한다. 또한, 비-지질 폴리양이온성 아미노 중합체가 송달에 사용될 수 있다. 선택적으로, 현탁액은 또한 적합한 안정제 또는 화합물의 용해도를 증가시키고, 매우 농축된 용액의 제조를 허용할 수 있는 제제를 함유할 수 있다. 다른 구체예에서, 약학 조성물은 흡입용으로 조제될 수 있다. 흡입 용액은 또한 에어로졸 송달을 위한 추진제와 함께 조제될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 용액은 분무될 수 있다. 폐 투여는 화학적으로 변형된 단백질의 폐 송달을 설명하는 PCT 출원 No. PCT/US94/001875에 더 설명된다.

또한, 특정 제제는 경구 투여될 수 있다고 생각된다. 본 발명의 하나의 구체예에서, 이 방식으로 투여되는 분자는 정제 및 캡슐과 같은 고체 제형의 화합에 관례적으로 사용되는 캐리어들과 함께 또는 그것 없이 조제될 수 있다. 예를 들어, 캡슐은 생체이용률이 최대화되고, 사전-전신 분해가 최소화되었을 때인 위장관에 있는 지점에서 제제의 활성 부분을 방출하도록 설계될 수 있다. 치료적 분자의 흡수를 촉진하기 위해서 추가의 제제들이 포함될 수 있다. 희석제, 향미제, 저 용융점 왁스, 식물성 오일, 윤활제, 현탁제, 정제 붕해제, 및 바인더가 또한 이용될 수 있다. 경구 투여를 위한 약학 조성물은 또한 경구 투여에 적합한 용량으로 본 분야에 잘 알려진 약학적으로 허용되는 캐리어를 사용하여 조제될 수 있다. 이러한 캐리어는 약학 조성물이 환자에 의해서 섭취되는, 정제, 알약, 드라제, 캡슐, 액체, 젤, 시럽, 슬러리, 현탁액 등으로 조제될 수 있도록 가능하게 한다.

경구용 약학 조제물은 활성 화합물과 고체 부형제를 조합하고, 얻어진 과립들의 혼합물(선택적으로 분쇄 후)을 가공하여 정제 또는 드라제 코어를 얻음으로써 얻어질 수 있다. 원한다면 적합한 보조제들이 첨가제될 수 있다. 적합한 부형제는 탄수화물 또는 단백질 필러, 예컨대 락토오스, 수크로오스, 만니톨 및 소르비톨을 포함하는 당; 옥수수, 밀, 쌀, 감자 또는 다른 식물들로부터의 녹말; 셀룰로오스, 예컨대 메틸 셀룰로오스, 히드록시프로필메틸 셀룰로오스 또는 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스; 아라비아 검 및 트래거캔스를 포함하는 검; 및 단백질, 예컨대 젤라틴 및 콜라겐을 포함한다. 원한다면, 가교된 폴리비닐 피롤리돈, 아가, 및 알긴산 또는 그것의 염, 예컨대 나트륨 알기네이트와 같은 붕해제 또는 용해제가 첨가될 수 있다.

드라지 코어는 적합한 코팅, 예컨대 농축 당 용액과 함께 사용될 수 있으며, 이것은 또한 아라비아 검, 탈크, 폴리비닐피롤리돈, 카르보폴 젤, 폴리에틸렌 글리콜, 및/또는 이산화티탄, 래커 용액, 및 적합한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 함유할 수 있다. 제품을 확인하거나 또는 활성 화합물의 양, 즉 용량을 특정하기 위하여 염료 또는 안료가 정제 또는 드라지 코팅에 첨가될 수 있다.

또한, 경구 사용될 수 있는 약학 제조물은 젤라틴으로 이루어진 푸시-핏 캡슐, 뿐만 아니라 젤라틴과 코팅, 예컨대 글리세롤 또는 소르비톨로 이루어진 연질, 밀봉된 캡슐을 포함한다. 푸시-핏 캡슐은 필러 또는 바인더, 예컨대 락토오스 또는 녹말, 윤활제, 예컨대 탈크 또는 마그네슘 스테아레이트 및 선택적으로 안정제와 혼합된 활성 성분을 함유할 수 있다. 연질 캡슐에서 활성 화합물은 적합한 액체, 예컨대 지방 오일, 액체, 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜에 안정제와 함께 또는 그것 없이 용해되거나 현탁될 수 있다.

지속- 또는 제어-송달 제제 중에 폴리펩티드를 포함하는 제제를 포함하여 추가의 약학 조성물도 당업자에게 자명할 것이다. 여러 다른 지속- 또는 제어-송달 수단을 조제하기 위한 기술, 예를 들어 리포솜 캐리어, 생체-침식 마이크로입자 또는 다공질 비드 및 데포 주사가 또한 당업자에게 알려져 있다. 예를 들어, 약학 조성물 송달용 다공질 중합체 마이크로입자의 제어 방출을 설명한 PCT/US93/00829를 참조한다. 지속-방출 제조물의 추가의 예들은 성형품의 형태의 반투과 중합체 매트릭스, 예컨대 필름, 또는 마이크로캡슐을 포함한다. 지속 방출 매트릭스는 폴리에스테르, 히드로겔, 폴리락티드(U.S. 3,773,919, EP 58,481), L-글루탐산과 감마 에틸-L-글루타메이트 공중합체(Sidman et al., Biopolymers, 22:547-556(1983), 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트)(Langer et al., J. Biomed. Mater. Res., 15:167-277,(1981); Langer et al., Chem. Tech.,12:98-105(1982)), 에틸렌비닐 아세테이트(Langer et al., 상동) 또는 폴리-D(-)-3-히드록시부티르산(EP 133,988)을 포함할 수 있다. 지속-방출 조성물은 또한 리포솜을 포함하며, 이것은 본 분야에 알려진 몇 가지 방법 중 어느 것에 의해서 제조될 수 있다. 예를 들어, Eppstein et al., PNAS(USA), 82:3688(1985); EP 36,676; EP 88,046; EP 143,949를 참조한다.

생체내 투여에 사용될 수 있는 약학 조성물은 전형적으로 멸균되어야 한다. 이것은 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해서 달성될 수 있다. 조성물이 동결건조된 경우, 이 방법을 사용한 멸균은 동결건조 및 복원 이전 또는 이후에 수행될 수 있다. 비경구 투여용 조성물은 동결건조 형태나, 또는 용액으로 보관될 수 있다. 이에 더하여, 비경구 조성물은 일반적으로 멸균 액세스 포트를 갖는 용기, 예를 들어 피하 주사 바늘로 뚫릴 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알에 넣어진다.

일단 약학 조성물이 조제되면, 그것은 용액, 현탁액, 젤, 에멀젼, 고체, 또는 탈수된 또는 동결건조된 분말로서 멸균 바이알에 보관될 수 있다. 이러한 제제는 바로 사용하는 형태나, 또는 투여 전에 복원을 요하는 형태(예를 들어, 동결건조)로 보관될 수 있다.

구체적인 구체예에서, 본 발명은 단일-분량 투여 단위를 생산하는 키트에 관한 것이다. 키트는 각각 건조된 단백질을 갖는 제1 용기와 수성 제제를 갖는 제2 용기를 모두 함유할 수 있다. 또한, 단일 및 다수-챔버 사전-충전된 주사기(예를 들어, 액체 주사기 및 동결주사기)를 함유하는 키트도 본 발명의 범위 내에 포함된다.

치료적으로 이용될 수 있는 약학 조성물의 유효량은, 예를 들어 치료 내용과 목적에 따를 것이다. 당업자는 치료를 위한 적절한 용량 수준이 이와 같이 송달된 분자, 폴리펩티드가 사용된 처방, 투여 경로, 및 환자의 크기(체중, 체 표면 또는 장기 크기) 및 상태(나이 및 일반적 건강)에 일부 의존하여 변할 것이라는 것을 인정할 것이다. 따라서, 임상의는 최적의 치료적 효과를 얻기 위해서 용량을 적정하고, 투여 경로를 변형할 수 있다. 전형적인 용량은 상기 언급된 요인들에 따라서 약 0.1mg/kg 내지 최대 약 100mg/kg 이상의 범위일 수 있다. 폴리펩티드 조성물은 바람직하게 정맥내 주사되거나 또는 투여될 수 있다. 장기-작용 약학 조성물은 특정한 제제의 반감기 및 클리어런스 속도에 따라서 3-4일마다, 매주마다, 또는 2주마다 투여될 수 있다. 투약 빈도는 사용된 제제에서 폴리펩티드의 약동학적 변수들에 의존할 것이다. 전형적으로, 조성물은 원하는 효과를 달성하는 용량에 도달할 때까지 투여된다. 따라서, 조성물은 시간에 걸쳐서, 또는 연속 주입으로, 단일 용량으로, 또는 다수 용량(동시에 또는 상이한 농도/용량으로)으로 투여될 수 있다. 적절한 용량의 추가의 개량은 관례적으로 이루어진다. 적절한 용량은 적절한 용량-반응 데이터의 사용을 통해서 규명될 수 있다.

약학 조성물의 투여 경로는 알려진 방법에 따르며, 예를 들어 경구, 정맥내, 복강내, 뇌내(실질내), 뇌실내, 근육내, 안내, 동맥내, 간문맥내, 병소내 경로, 수질내, 척추강내, 심실내, 경피, 피하, 또는 복강내 주사를 통해서; 뿐만 아니라 비내, 장, 국소, 설하, 요도, 질 또는 직장 수단, 지속 방출 시스템에 의해서 또는 이식 장치에 의해서 이루어진다. 원하는 경우, 조성물은 볼루스 주사에 의해서 또는 연속 주입에 의해서, 또는 이식 장치에 의해서 투여될 수 있다. 또는 달리, 또는 추가하여, 조성물은 그 위에 원하는 분자가 흡수되거나 캡슐화되는 막, 스펀지, 또는 다른 적합한 물질의 이식을 통해서 국소 투여될 수 있다. 이식 장치가 사용되는 경우, 장치는 어떤 적합한 조직 또는 장기에 이식될 수 있으며, 원하는 분자의 송달은 확산, 시간지정-방출 볼루스, 또는 연속 투여를 통해서 이루어질 수 있다.

일부 경우, 본 발명의 vActRIIB 폴리펩티드는 폴리펩티드를 발현하고 분비하도록 본원에 설명된 것들과 같은 방법을 사용하여 유전자 조작된 특정 세포를 이식함으로써 송달될 수 있다. 이러한 세포는 동물 또는 사람 세포일 수 있으며, 동종성, 이종성, 또는 이종발생성일 수 있다. 선택적으로, 세포는 불멸화될 수 있다. 면역학적 반응의 기회를 감소시키기 위하여 세포는 주변 조직의 침윤을 피할 수 있도록 캡슐화될 수 있다. 캡슐화 물질은 전형적으로 폴리펩티드 생성물(들)의 방출은 허용하지만 환자의 면역 시스템에 의한 또는 주변 조직으로부터의 다른 해로운 요인들에 의한 세포의 파괴는 방지하는 생체적합성, 반-투과성 중합체 엔클로저 또는 막이다.

또한, vActRIIB, 또는 vActRIIB의 유도체를 암호화하는 핵산 분자가 대상에 직접 도입되는 생체내 vActRIIB 유전자 치료법이 고안된다. 예를 들어, vActRIIB를 암호화하는 핵산 서열이 적절한 송달 벡터, 예컨대 아데노-관련 바이러스 벡터와 함께 또는 그것 없이 핵산 구성물의 국소 주사를 통해서 표적 세포에 도입된다. 대안적인 바이러스 벡터는, 제한은 아니지만, 레트로바이러스, 아데노바이러스, 단순 헤르페스 바이러스 및 유두종 바이러스 벡터를 포함한다. 바이러스 벡터의 물리적 전달은 원하는 핵산 구성물 또는 원하는 핵산 서열을 함유하는 다른 적절한 송달 벡터의 국소 주사, 리포솜-매개 전달, 직접 주사(네이키드 DNA), 또는 마이크로입자 폭격(유전자-총)에 의해서 생체내 달성될 수 있다.

vActRIIB 조성물의 사용

본 발명은 폴리펩티드를 vActRIIB 폴리펩티드와 접촉시킴으로써 생체내 또는 시험관내에서 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11의 양 또는 활성을 감소시키거나 중화시키기 위한 방법 및 약학 조성물을 제공한다. vActRIIB 폴리펩티드는 미오스타틴, 액티빈 A 및 GDF-11에 대해 높은 친화성을 가지며, 미오스타틴, 액티빈 A 및 GDF-11 중 하나 이상의 생물학적 활성을 감소시키고 저해할 수 있다. 일부 구체예에서, vActRIIB 폴리펩티드는 야생형 ActRIIB 폴리펩티드와 비교하여 개선된 활성을 나타낸다. 이것은 아래 실시예에서 증명된다.

한 양태에서, 본 발명은 대상에게 vActRIIB 조성물의 유효 용량을 투여함으로써 이러한 치료가 필요한 대상에서 미오스타틴-관련 및/또는 액티빈 A-관련 질환을 치료하기 위한 방법 및 시약을 제공한다. 본원에서 사용된 용어 "대상"은 어떤 동물, 예컨대 사람을 포함하는 포유류를 말한다.

본 발명의 조성물은 체중의 퍼센트로서 순수 근육 량을 증가시키고, 체중의 퍼센트로서 지방 질량을 감소시키기 위해서 사용된다.

vActRIIB 조성물에 의해서 치료될 수 있는 질환은, 제한은 아니지만, 당뇨병 및 관련된 질환와 같은 다양한 형태의 근육 소모성일 뿐만 아니라 대사성인 질환, 및 골다공증과 같은 골 퇴행성 질환을 포함한다. vActRIIB 조성물은 아래 실시예 3에 제시된 다양한 질환 모델에서 근육 소모성 질환을 치료하는데 효과적인 것으로 증명되었다. 이것은 인히빈-α 녹아웃 마우스에서 근육 소모의 치료, 결장-26 암 악액질 모델에서 근육 소모의 치료, 뒷다리 들기 모델에서 근위축증의 예방, 지방 질량의 감소, 및 골 미네랄 함량의 증가에서 증명되었다.

근육 소모성 질환은 또한 듀시엔 근이영양증, 진행성 근이영양증, 베커 타입 근이영양증, 리제린-란도르 근이영양증, 에르브 근이영양증, 및 유아 신경측색 근이영양증과 같은 이영양증을 포함한다. 추가의 근육 소모성 질환은 만성 질환 또는 근위축성 측색 경화증, 울혈성 폐쇄성 폐질환, 암, AIDS, 신부전, 장기 위축증, 안드로겐 차단, 및 류마티스 관절염과 같은 질환로부터 생긴다.

미오스타틴 및/또는 액티빈의 과발현은 악액질, 중증의 근육 및 지방 소모성 증후군에 기여할 수 있다. 동물 모델에서 악액질을 치료하는데 vActRIIB 폴리펩티드의 효능이 아래 실시예 3에 나타난다. 악액질은 또한 류마티스 관절염, 당뇨성 신장병증, 신부전, 화학치료법, 화상으로 인한 손상뿐만 아니라 다른 원인들로 인해서 생긴다. 다른 예에서, 미오스타틴-면역반응성 단백질의 혈청 및 근육내 농도는 AIDS-관련 근육 소모를 나타내는 남성에서 증가될 수 있는 것으로 판명되었고, 지방-무함유 질량과는 역으로 관련되었다(Gonzalez-Cadavid et al., PNAS USA 95: 14938-14943(1998)). 미오스타틴 수준은 또한 화상 손상에 반응하여 증가하는 것으로 나타났으며, 이것은 이화작용성 근육 효과를 가져온다(Lang et al., FASEB J 15, 1807-1809(2001)). 근육 소모를 가져오는 추가의 상태는 휠체어 생활, 뇌졸중으로 인한 장기간의 침상 안정, 병, 척수 손상, 골절 또는 외상, 및 극소중력 환경(우주비행)에서 근위축증과 같은 거동질환로 인한 비활동으로부터 생길 수 있다. 예를 들어, 혈장 미오스타틴 면역반응성 단백질은 장기간의 침상 안정 후 증가하는 것으로 판명되었다(Zachwieja et al., J Gravit Physiol. 6(2):11(1999). 우주왕복선 비행 동안 극소중력 환경에 노출된 래트의 근육이 노출되지 않았던 래트의 근육과 비교하여 미오스타틴의 증가된 양을 발현했다는 것도 또한 판명되었다(Lalani et al., J.Endocrin 167(3):417-28(2000)).

이에 더하여, 지방 대 근육 비율의 노인성 증가, 및 노인성 근위축증도 미오스타틴과 관련된 것으로 보인다. 예를 들어, 평균 혈청 미오스타틴-면역반응성 단백질은 청년(19-35세), 중년(36-75세) 및 노년(76-92세)의 남성 및 여성에서 나이와 함께 증가했고, 평균 근육 질량 및 지방-무함유 질량은 이들 그룹에서 나이와 함께 쇠퇴했다(Yarasheski et al., J Nutr Aging 6(5):343-8(2002)). 이에 더하여, 미오스타틴은 현재 심장 근육에서 낮은 수준으로 발현되는 것으로 판명되었으며, 발현은 경색 후 심근세포에서 상향조절된다(Sharma et al., J Cell Physiol. 180(1):1-9(1999)). 따라서, 심장 근육에서 미오스타틴 수준의 감소는 경색 후 심장 근육의 회복을 개선할 수 있다.

미오스타틴은 또한 타입 2 당뇨병, 비인슐린-의존성 당뇨병, 고혈당증 및 비만을 포함하는 대사성 질환에 영향을 미치는 것으로 보인다. 예를 들어, 미오스타틴의 결여는 두 마우스 모델에서 비만 및 당뇨병 표현형을 개선하는 것으로 나타났다(Yen et al., FASEB J. 8:479(1994). 미국출원 일련번호 제11/590,962호, 미국출원 공개 제2007/0117130호에서 AAV-ActRIIB5 벡터는 동물, 특히 비만 동물 모델에서 근육 대 지방 비율을 증가시키는 것으로 증명되었다. 본 개시의 vActRIIB 폴리펩티드, 예컨대 서열번호4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 52, 54, 56, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 87, 88, 91, 93, 95이 이러한 사용에 적합하다. 따라서, 본 발명의 조성물을 투여함으로써 지방 조성을 감소시키는 것은 동물에서 당뇨병, 비만, 및 고혈당 상태를 개선할 것이다. 이에 더하여, vActRIIB 폴리펩티드를 함유하는 조성물은 ActRIIB5 폴리펩티드에 대한 미국출원 일련번호 제11/590,962호, 미국출원공개 제2007/0117130호에서 증명된 대로, 비만 개체에서 음식 섭취를 감소시킬 수 있다.

본 발명의 ActRIIB 폴리펩티드를 투여하는 것은 골 강도를 개선하고, 골다공증 및 다른 퇴행성 골 질환을 감소시킬 수 있다. 이것은 아래 설명된 OVX 마우스 모델에서 증명되었다. 또한, 예를 들어 미오스타틴-결핍 마우스가 증가된 미네랄 함량 및 마우스 상완골의 밀도와 근육이 부착된 영역에서 지주골 및 해면골의 증가된 미네랄 함량은 물론 증가된 근육 질량을 나타냈다는 것이 판명되었다(Hamrick et al. Calcif Tissue Int 71(1):63-8(2002)). 이에 더하여, 본 발명의 vActRIIB 조성물은 전립선암의 치료에 사용된 안드로겐 차단 치료법과 같은 안드로겐 차단의 효과를 치료하는데 사용될 수 있다.

또한, 본 발명은 동물에 vActRIIB 단백질의 유효 용량을 투여함으로써 식용 동물에서 근육 질량을 증가시키기 위한 방법 및 조성물을 제공한다. 성숙한 C-말단 미오스타틴 폴리펩티드는 시험된 모든 종에서 동일하므로, vActRIIB 폴리펩티드는 소, 닭, 칠면조 및 돼지를 포함하는 어떤 농업상 중요한 종들에서 근육 질량을 증가시키고 지방을 감소시키는데 효과적일 것으로 예상된다.

본 발명의 vActRIIB 폴리펩티드 및 조성물은 또한 액티빈 A의 활성을 길항한다. 액티빈 A는 특정 타입의 암, 특히 난소 암종과 같은 생식선 종양에서 발현되며, 중증의 악액질을 야기하는 것으로 알려져 있다(Ciprano et al., Endocrinol 141(7):2319-27(2000), Shou et al., Endocrinol 138(11):5000-5(1997); Coerver et al., Mol. Endocrinol 10(5):534-43(1996); Ito et al., British J. Cancer 82(8):1415-20(2000), Lambert-Messerlian, et al., Gynecologic Oncology 74:93-7(1999)). 아래 실시예 3에서 본 발명의 vActRIIB 폴리펩티드는 중증의 악액질을 치료하고, 종양 크기를 감소시키고, 인히빈-α 녹아웃 마우스 모델 및 결장-26 암 악액질 마우스 모델에서 생존을 연장하는데 효과적인 것으로 증명되었다. 따라서, 본 발명의 조성물은 액티빈 A 과발현뿐만 아니라 미오스타틴 발현과 관련된 상태, 예컨대 특정 암으로 인한 악액질 및 특정 생식선 타입 종양 및 흑색종의 치료에 사용될 수 있다.

본 개시의 조성물은 단독으로, 또는 이들의 치료 효과를 증진시키거나 또는 잠재적 부작용을 감소시킬 수 있는 다른 치료제와 조합하여 사용될 수 있다. 이런 특성은 증가된 활성, 증가된 용해성, 감소된 분해, 증가된 반감기, 감소된 독성 및 감소된 면역원성을 포함한다. 따라서, 본 개시의 조성물은 연장된 치료 섭생에 유용하다. 이에 더하여, 본 발명의 화합물의 친수성 및 소수성의 특성은 잘 균형을 이루며, 이로써 시험관내 및 특히 생체내 용도에서 모두 이들의 활용이 증진된다. 구체적으로, 본 개시의 화합물은 체내에서 흡수 및 생체이용률을 허용하는 수성 배지 중에서 적절한 정도의 용해도를 가지면서, 또한 화합물이 세포막을 가로질러 추정 작용 부위, 예컨대 특정한 근육 덩어리까지 가는 것을 허용하는 지질 중에서도 어느 정도 용해도를 가진다.

본 발명의 vActRIIB 폴리펩티드 및 조성물은 암을 치료하기 위한 화학치료제와 조합하여 사용될 수 있다. 화학치료제는 항신생물 약물을 포함할 수 있다. 화학치료제는 또한 알킬화제, 항대사물질, 식물 알칼로이드 및 테르페노이드를 포함할 수 있다.

알킬화제는 시스플라틴 및 카로플라틴을 포함할 수 있다. 항대사물질은 퓨린류(예를 들어, 아자티프린 또는 메르캅토퓨린) 또는 피리미딘을 포함할 수 있다. 추가하여, 화학치료제는 뉴클레오시드 유사체, 예를 들어 5-플루오로실일 수 있다. 빈카 알칼로이드, 예컨대 빈크리스틴 또는 빈블라스틴이 또한 사용될 수 있다.

추가의 항신생물제는, 예를 들어 질소 머스타드를 포함하는 알킬화제, 예컨대 메클로레스아민, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 멜팔란 및 클로람부실; 니트로소유레아, 예컨대 카뮤스틴(BCNU), 로뮤스틴(CCNU) 및 세뮤스틴(메틸-CCNU); 에틸렌이민/메틸멜라민, 예컨대 트리에틸렌멜라민(TEM), 트리에틸렌, 티오포스포라미드(티오테파), 헥사메틸멜라민(HMM, 알트레타민); 알킬 술포네이트, 예컨대 부술판; 트리아진, 예컨대 다카르바진(DTIC); 엽산 유사체를 포함하는 항대사물질, 예컨대 메토트렉세이트 및 트리메트렉세이트, 피리미딘 유사체, 예컨대 5-플루오로우라실, 플루오로데옥시우리딘, 겜시타빈, 시토신 아라비노시드(AraC, 시타라빈), 5-아자시티딘, 2,2'-디플루오로데옥시시티딘, 퓨린 유사체, 예컨대 6-메르캅토퓨린, 6-티오구아닌, 아자티오프린, 2'-데옥시코포르마이신(펜토스타틴), 에리트로히드록시논일아데닌(EHNA), 플루다라빈 포스페이트 및 2-클로로데옥시아데노신(클라드리빈, 2-CdA); 항유사분열 약물을 포함하는 천연 생성물, 예컨대 파클리탁셀, 빈블라스틴(VLB), 빈크리스틴 및 빈오렐빈을 포함하는 빈카 알칼로이드, 탁소테르, 에스트라뮤스틴, 및 에스트라뮤스틴 포스페이트; 프피포도필로톡신, 예컨대 에토포시드 및 테니포시드; 항생물질, 예컨대 악티모마이신 D, 다우노마이신(루비도마이신), 독소루비신, 미톡산트론, 이다루비신, 블레오마이신, 필카마이신(미트라마이신), 미토마이신 C, 및 악티노마이신; 효소, 예컨대 L-아스파라기나아제; 생물학적 반응 조정제, 예컨대 인터페론-알파, IL-2, G-CSF 및 GM-CSF; 백금 배위 착물을 포함하는 각종 제제, 예컨대 시스플라틴 및 카보플라틴, 안트라센디온, 예컨대 미톡산트론, 치환된 유레아, 예컨대 히드록시유레아, N-메틸히드라진(MIH) 및 프로카바진을 포함하는 메틸히드라진 유도체, 아드레노코르티칼 억제제 예컨대 미토탄(o,p'-DDD) 및 아미노글루테티미드; 호르몬 및 아드레노코르티코스테로이드 길항제를 포함하는 길항제, 예컨대 프레드니손 및 등가물, 덱사메타손 및 아미노글루테티미드; 프로게스틴, 예컨대 히드록시프로게스테론 카프로에이트, 메드록시프로게스테론 아세테이트 및 메게스테롤 아세테이트; 에스트로겐, 예컨대 디에틸스틸베스트롤 및 에틴일 에스트라디올 등가물; 안티에스트로겐, 예컨대 타목시펜; 테스토스테론 프로피오네이트 및 플루옥시메스테론/등가물을 포함하는 안드로겐; 항안드로겐, 예컨대 플루타미드, 고나도트로핀-방출 호르몬 유사체 및 류프롤라이드; 및 비-스테로이드 항안드로겐, 예컨대 플루타미드를 포함할 수 있다.

이에 더하여, 본 발명의 vActRIIB 폴리펩티드는 많은 어세이에서 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11을 검출하고 정량하는데 유용하다. 일반적으로, 본 발명의 ActRIIB 폴리펩티드는, 예를 들어 Asai, ed., Methods in Cell Biology, 37, Antibodies in Cell Biology, Academic Press, Inc., New York(1993)에 설명된 것들과 유사한, 여러 어세이에서 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11을 결합하고 고정하기 위한 포착제로서 유용하다. 이 폴리펩티드는 어떤 방식으로 표지될 수 있거나, 또는 미오스타틴이 검출되고 정량되는 것을 가능하게 하도록 표지된 항체와 같은 제3 분자와 반응할 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드 또는 제3 분자는 검출가능한 부분, 예컨대 바이오틴으로 변형될 수 있고, 다음에 제4 분자, 예컨대 효소-표지된 스트렙토아비딘, 또는 다른 단백질들에 의해서 결합될 수 있다(Akerstrom, J Immunol 135:2589(1985); Chaubert, Mod Pathol 10:585(1997)).

본 발명이 설명되었고, 이하 실시예들은 예시일 뿐 본 발명에 대한 제한이 아니다.

실시예

실시예 1: VACTRIIB 폴리펩티드의 발현 및 정제

다음의 방법이 변이체 ActRIIB 폴리펩티드의 발현 및 정제에 사용되었다.

사람 액티빈 타입 IIB 수용체의 cDNA를 사람 고환 기원의 cDNA 라이브러리로부터 분리하고(Clontech, Inc.), 미국 출원 일련번호 제11/590,962호, 미국 출원 공개 제2007/0117130호에 설명된 대로 클로닝했다.

아미노산 치환의 결정

구조 분석, 분자 모델링, 및 질량분광법의 조합된 접근법은 비글리코실화된 ActRIIB 분자들 사이에 정전기 및 H-결합 상호작용에 의해서 촉발된 분자간 이황화 결합 형성을 통해 ActRIIB에서 응집(올리고머화)이 생길 수 있음을 나타냈다. 잔기 28 및 40은 ActRIIB:ActRIIB 상호작용에 관여되고, ActRIIB와 그것의 리간드의 상호작용에는 관여되지 않는 것으로 결정되었다.

처음에 ActRIIB-Fc 상의 E28 및 R40을 각 위치에서 A로 치환했다. 광 산란 및 질량분광법 분석은 완전히 글리코실화된 vActRIIB-IgG1Fc, E28A, 및 vActRIIB-IgG1Fc R40A의 단편이 야생형 단백질과 비교하여 유의하게 증가되었음을 확인했다. E28A 및 R40A vActRIIB-IgG1Fc를 6일 동안 37℃에서 인큐베이션했으며, 이것은 야생형과 비교하여 응집을 거의 또는 전혀 가져오지 않았다. 야생형 ActRIIB(서열번호2 및 18)의 발현 및 정제 동안 일어날 수 있는 응집을 완화시키거나 방지하기 위하여 위치 28 및 40(신호 서열을 가진 서열번호2 및 18와 관련하여)에서 아미노산 치환이 이루어졌다. 이런 응집은 발현 동안에는 구조화된 올리고머 형성으로서, 그리고 발현 동안과 단백질 정제 후에는 모두 비-구조화된 응집체 생성으로서 확인되었다.

생산 및 정제 과정의 상이한 단계들에서 응집을 아래 과정에 따라서 크기 배제 크로마토그래피를 사용하여 결정했다.

이후의 예시적인 방법을 사용하여 변이체 ActRIIB 폴리펩티드(vActRIIB 및 vActRIIB5)생산했다. vActRIIB, E28W(서열번호 23)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 E28W을 가져오는 돌연변이를 함유하는 프라이머를 사용해서 PCR 오버랩 익스텐젼을 사용하여 힌지 링커 서열(서열번호 79를 암호화하는 뉴클레오티드)을 통해서 사람 IgG1 Fc 도메인(서열번호 82)을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 또는 사람 IgG2 Fc(서열번호 84)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드와 융합시켰다. 전체 폴리뉴클레오티드 서열은 서열번호 61이다. pTT5(Biotechnology Research Institute, National Research Council Canada(NRCC), 6100 Avenue Royalmount, Montreal(Quebec) Canada H4P 2R2), pDSRa(WO/9014363에 설명됨) 및/또는 pDSRα의 유도체에 이중 가닥 DNA 단편을 클로닝했다. 다른 구체예에서, vActRIIB 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 링커 GGGGS(서열번호 75) 또는 그것의 멀티머, 또는 힌지 링커(예컨대 서열번호 79)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드에 부착했다.

조작된 vActRIIB-Fc 및 vActRIIB5-Fc의 일시적 발현을 다음과 같이 수행했다.

상기 2개 분자의 조작된 변이체를 250μg/ml 제네티신(Invitrogen) 및 0.1% Pluronic F68(Invitrogen)로 보충된 FreeStyle™ 배지(Invitrogen Corporation, Carlsbad,CA)에 유지된 혈청-무함유 현탁액 적응된 293-6E 세포(National Research Council of Canada, Ottawa, Canada)에서 일시적으로 발현시켰다. 1L 배양물로서 트랜스펙션을 수행했다. 간단히 말해서, 세로 접종물을 4L 페른바흐 쉐이크 플라스크(Corning, Inc.)에서 1.1 x 10⁶ 세포/ml까지 성장시켰다. 쉐이크 플라스크 배양물을 37℃ 및 5% CO₂에서 유지된 가습 인큐베이터에 넣어 65 RPM으로 Innova 2150 쉐이커 플랫폼(News Brunswick Scientific, Edison, NJ) 상에 유지했다. 트랜스펙션시에 293-6E 세포를 1.0 x 10⁶ 세포/ml로 희석했다.

100ml FreeStyle 배지 중에서 트랜스펙션 복합체를 형성했다. 먼저 1mg 플라스미드 DNA를 배지에 첨가하고, 이어서 3ml FuGene HD 트랜스펙션 시약(Roche Applied Science, Indianapolis, IN)을 첨가했다. 트랜스펙션 복합체를 대략 15분 동안 실온에서 인큐베이션하고, 이후 쉐이크 플라스크 안의 세포에 첨가했다. 트랜스펙션 후 20시간째에 20%(w/w) 펩톤 TN1(OrganoTechnie S.A., TeknieScience, QC, Canada)를 0.5%(w/w)의 최종 농도에 도달하도록 첨가했다. 트랜스펙션/발현을 4-7일 동안 수행했고, 이후 컨디션된 배지를 4℃에서 60분 동안 4,000 RPM으로 원심분리하여 수거했다.

안정한 트랜스펙션 및 발현을 다음과 같이 수행했다. 표준 전기천공 과정을 사용하여 발현 플라스미드 pDC323-vActRIIB(E28W)-huIgG2 Fc 및 pDC324-vActRIIB (E28W)-huIgG2 Fc(Bianchi et al에 따름, Biotech and Bioengineering, 84(4):439-444(2003))로 안정한 CHO 숙주 세포를 트랜스펙션하여 vActRIIB-사람(hu) IgG2-Fc 셀라인을 만들었다. 발현 플라스미드에 의한 숙주 셀라인의 트랜스펙션 후, 플라스미드의 선택 및 세포의 회수를 허용하도록 세포를 2-3주 동안 GHT 없이 혈청-무함유 선택 배지에서 성장시켰다. 85%를 넘는 생육성에 도달했을 때 세포를 선택했다. 다음에, 트랜스펙션된 세포의 이 풀을 150nM 메토트렉세이트를 함유하는 배지에서 배양했다.

셀라인 클로닝

다음의 과정에 따라서 선택된 클론들로 세포 뱅크를 제조했다. 안정한 트랜스펙션된 세포의 증폭된 풀을 96-웰 플레이트에 파종하고, 소규모 연구에서 후보 클론을 성장 및 생산성 성과에 대해서 평가했다. 대략 60 바이알의 예비-마스터 세포 뱅크(PMCB)를 선택된 클론으로부터 제조했다. 모든 PMCB를 멸균성, 미코플라스마 및 바이러스에 대해 시험했다.

vActRIIB-Fc 발현 셀라인을 전형적인 페드-뱃치 과정을 사용하여 스케일업했다. 세포를 파동 생물반응기(Wave Biotech LLC)에 접종했다. 배양물을 볼루스 공급으로 3번 공급했다. 10일째 10L를 수거했고, 나머지는 11일째 수거했다. 두 수거물은 모두 심층 여과 후 멸균 여과를 거쳤다. 컨디션된 배지를 10인치 0.45/0.2 마이크론 프레 필터를 통해 여과했고, 이어서 6인치 0.2 마이크론 필터를 통해 여과했다.

단백질 정제

ActRIIB-Fc(both IgG1 및 IgG2), ActRIIB5-Fc(both IgG1 및 IgG2), 및 이들의 변이체를 함유하는 컨디션된 배지 대략 5L를 5 ft² 10K 막 접선 유동 필터(Pall)를 사용하여 농축했다. 농축된 물질을 PBS(염화마그네슘 또는 염화칼슘을 갖지 않는 듈베코)로 평형화된 5mL 단백질 A 고성능 칼럼™(GE Healthcare)에 적용했다. 280nm에서 흡광도(OD280)가 0.1 미만이었을 때까지 평형 버퍼로 칼럼을 세척한 후, 결합된 단백질을 0.1M 글리신-HCl, pH 2.7로 용출하고, 1M 트리스-HCl, pH 8.5로 즉시 중화시켰다. 중화된 용출된 풀을 1mL 부피로 농축하고, PBS(염화마그네슘 또는 염화칼슘을 갖지 않는 듈베코)로 평형화된 320ml Sephacryl-200 칼럼(GE Health care)에 적용했다. 4-20% SDS PAGE 젤(Invitrogen)에 전개시켜 풀에 대해 분획들을 결정했다. 아래 나타낸 대로 이들 폴리펩티드를 활성, 및 응집도에 대해 시험했다.

선택적으로, 폴리펩티드는, 예를 들어 Shp-Sepharose 칼럼을 사용하여 더 정제될 수 있다. 농도는 OD280을 사용하여 결정되었다.

실시예 2: 시험관내 활성 어세이

상기 설명된 대로 정제된 vActRIIB 폴리펩티드의 샘플을 0.2mg/ml까지 포스페이트-완충 식염수(PBS: 2.67mM 염화칼륨, 138mM 염화나트륨, 1.47mM 칼륨 포스페이트 모노베이직, 8.1mM 나트륨 포스페이트 다이베이직, pH 7.4)으로 희석하고, 6일 동안 37℃에서 인큐베이션하고, 다음에 MALDI-MS(매트릭스-보조 레이저 탈착/이온화 질량분광법), SEC 및/또는 SEC-LS 분석에 적용했다. 단백질 A 정제 단계 후 wt 및 변이체 폴리펩티드의 응집을 SEC 또는 SEC-LS를 사용하여 결정하고, 분자의 분자량을 아래 설명된 MALDI-MS 과정을 사용하여 확인했다.

크기 배제 크로마토그래피(SEC). 직렬로 2개 칼럼이 놓인 Agilent 1100HPLC 시스템(TOSOHAAS G3000swxl, 7.8 x 300mm)에서 실험을 수행했다. 2x PBS를 0.5ml/분으로 이동상으로 사용했다.

크기 배제 크로마토그래피-광 산란(SEC-LS). Superdex-200 젤 여과 칼럼을 구비한 Agilent 1100 HPLC 시스템(Amersham Pharmacia, Waukesha, WI)에서 실험을 수행했다. 다음에, 샘플을 Wyatt miniDawn LS 레이저 광 산란 검출장치와 Wyatt Optilab DSP 굴절계를 통과시켜 분자 질량을 결정했다. PBS를 0.4ml/분으로 이동상으로 사용했다.

매트릭스-보조 레이저 탈착/이온화 질량분광법. 샘플을 시나핀산과 혼합하고(1:1), MALDI-MS(Applied Biosystems Voyager System 2009)에 적용했다. 이 과정을 사용하여 분자의 분자량을 체크했다.

액티빈 및 미오스타틴에 대한 결합 친화성, 및 IC50 값의 결정을 아래 설명된 대로 얻었다.

정량적 BIAcore® 어세이. E28 및 R40을 상기 설명된 대로 IgG1 Fc과의 융합에서 다른 천연 아미노산으로 각각 치환했다. 이들은 아래 표에 나타낸 대로 링커와 함께 또는 그것 없이 생성되었다. 컨디션된 배지로부터 각각의 vActRIIB-IgG1Fc 샘플을 염소 항-사람 IgG1 Fc 항체(Jackson Immuno Research, cat# 109-005-098, lot 63550) 코팅된 CM5 표면에 포착했다. 액티빈 A 20nM을 BIACore2000 (BIACore Life Sciences, Piscataway, New Jersey)를 사용하여 포착된 샘플 표면 위에 주사했다. 얻어진 센서그램을 vActRIIB-IgG1Fc 변이체의 포착된 RL(500 RU)에 대해 정규화했다. 일부 변이체에 대한 정규화된 결합 반응(RU)을 표 2에 나타내고, 아래 더 설명한다. 또한, 액티빈에 대한 상대적 결합 친화성을 포유류 세포 발현으로부터 얻어진 컨디션된 배지를 사용하여 Biacore 측정에 의해서 결정했다. 액티빈 A(20nM)는 컨디션된 배지에서 용해성 수용체 폴리펩티드를 포착하는데 사용되었으며, 측정된 SPR 신호는 정규화되었다. 정규화된 SPR +++++: > 60, ++++: 40-60, +++: 20-40, ++: 10-20, +: 5-10, -: <5.

표 1A 및 1B는 상대적 결합 데이터의 결과를 요약한다. 아래 표는 vActRIIB-IgG1Fc의 특정 구체예가 야생형보다 높은 친화성으로 액티빈 A와 특정하게 결합되며, 야생형과 비슷한 친화성을 보유했다는 것을 나타낸다.

[표 1A]

[표 1B]

C2C12 세포 기반 활성 어세이

vActRIIB5-IgG1Fc 및 vActRIIB-IgG1Fc 변이체를 상기 설명된 대로 생성했다. 액티빈 A 또는 미오스타틴과 액티빈 IIB 수용체의 결합을 저해하는 이들 변이체의 능력을 아래 설명된 대로 세포-기반 활성 어세이를 사용하여 시험했다.

미오스타틴/액티빈/GDF-11-반응성 리포터 셀라인을 pMARE-luc구성물로 C2C12 근아세포 세포(ATCC No: CRL-1772)를 트랜스펙션하여 생성했다. pMARE-luc 구성물은 TATA 박스의 하류에서 pLuc-MCS 리포터 벡터(Stratagene cat # 219087)에 미오스타틴/액티빈 반응 요소를 표시하는, CAGA 서열의 12 반복부를 클로닝함으로써 제조했다(Dennler et al., EMBO 17:3091-3100(1998)). C2C12 세포는 본래 이들의 세포 표면에서 액티빈 수용체 IIB를 발현한다. 미오스타틴/액티빈A/GDF-11이 세포 수용체와 결합했을 때, Smad 경로가 활성화되고, 포스포릴화된 Smad가 반응 요소와 결합하여(Macias-Silva et al., Cell 87:1215(1996)), 루시페라제 유전자의 발현을 가져온다. 다음에, 루시페라제 활성을 상업용 루시페라제 리포터 어세이 키트(cat # E4550, Promega, Madison, WI)를 사용하여 제조자의 프로토콜에 따라서 측정했다. pMARE-luc(C2C12/pMARE)로 트랜스펙션된 C2C12 세포의 안정한 계통을 사용하여 이후의 과정에 따라서 활성을 측정했다. 리포터 세포를 96 웰 배양물에 플레이트했다. 상기 설명된 대로 구성된 야생형 및 변이체 ActRIIB-IgG1 Fc 융합의 희석물을 사용한 스크리닝을 4nM 액티빈으로 고정된 농도에서 수행했다. 액티빈 A를 몇몇 농도에서 수용체와 함께 예비 인큐베이션했다. 시험된 배양물에서 루시페라제 활성을 결정함으로써 액티빈 활성을 측정했다. 각 폴리펩티드에 대해 IC50 값을 결정했다. 이들을 표 2에 나타낸다. 미오스타틴 결정을 위해서 상기 설명된 대로 생산된 ActRIIB-huIgG2 Fc에 대해 동일한 과정을 속행했다. 단백질 A 정제된 wt 및 변이체를 동일한 방법을 사용하여 미오스타딘에 대한 IC50 값의 결정에서 사용했다. 이 결정을 위해서 폴리펩티드를 4nM 미오스타틴과 함께 예비 인큐베이션했다. 이에 더하여, 상기 설명된 과정을 사용하여 응집도를 결정했다. 이들 값은 아래 표 3에 주어진다.

표 1A에 열거된 ActRIIB5-IgG1 Fc 변이체의 세트 중에서 몇몇 ActRIIB-IgG1 Fc 변이체와 3개 ActRIIB5-IgG1 Fc 변이체를 야생형 타입 폴리펩티드와 함께 더 정제하고, 20nM 액티빈 A에서 SPR(표면 플라즈몬 공명)에 의해서 분석했다. 표 2는 액티빈에 대한 선택된 vActRIIB-IgG1 Fc 폴리펩티드의 SPR 결합 친화성을 나타낸다. 액티빈 A(20nM)은 샘플에서 vActRIIB 폴리펩티드를 포착하는데 사용되었으며, 측정된 SPR 신호는 정규화되었다. IC50 값은 상기 설명된 세포-기반 액티빈 저해 어세이로부터 얻어졌다. 표준 오차는 모든 결과에서 10% 미만이다.

[표 2]

상기 표 2에 나타난 대로, 야생형과 비교하여 액티빈 차단을 위한 vActRIIB-IgG1Fc(E28W)의 IC50 값은 2.07nM였고, vActRIIB-IgG1Fc(E28Y)의 IC50 값은 2.1nM였다. 또한, vActRIIB-IgG1Fc의 E28W 및 E28Y 변이체는 안정했고, 정제된 후 응집되지 않았다.

미오스타틴 차단 세포 기반 어세이에서 IC50 값을 추가의 변이에 폴리펩티드에 대해서도 결정했다. 이들 변이체는 신호 서열과 N-말단의 처음 6개 아미노산을 결여한 성숙한 끝절단된 vActRIIB 폴리펩티드였다. 이들 서열을 표 3에 나타낸다. 표 3은 단백질 A 정제 후 단백질의 응집 퍼센트, 및 미오스타틴과 관련하여 IC50 값을 나타낸다. 응집 퍼센트는 야생형과 비교하여 변이체 폴리펩티드에서 훨씬 적다. 신호 서열과 N-말단 4 아미노산이 없고, 아래 나타낸 것과 동일한 치환을 가진 성숙한 끝절단된 vActRIIB 폴리펩티드에 대해서도 유사한 결과가 얻어졌다.

[표 3]

표 4는 서열 목록에서 SEQ ID NOS:1-99에 상응하는 서열들을 확인한다.

[표 4]

실시예 3: vActRIIB 를 사용한 생체내 치료

이후의 동물 연구는 모두 성숙한 끝절단된 vActRIIB-IgG2 Fc(E28W) 폴리펩티드(서열번호 91)를 사용하여 아래 설명된 과정에 따라서 수행되었다.

인히빈 -α 결핍 마우스에서 근육 소모의 치료

인히빈-α는 액티빈 A의 자연 발생 억제인자이다. 인히빈-α를 결여한 마우스는 순환 중 유의하게 상승된 액티빈 A 수준을 나타내며, 난소암, 고환암 및 생식선 암과 같은 종양의 자발적 형성과 관련된 치명적인 소모성 증후군으로 고통받는다(Matzuk et al., PNAS 91(19):8817-21(1994), Cipriano et al., Endocrinology 121(7):2319-27(2000), Matzuk et al. Nature 360(6402):313-9(1992)). 이후의 실험에서 인히빈-α 녹아웃 마우스(C57BL/6J)는 Charles River Laboratories로부터 얻었다. 체중 및 근육 질량에 대한 vActRIIB-IgG2 Fc E28W(서열번호 91)(이후 E28W, 또는 E28W 폴리펩티드, 또는 용해성 수용체 E28W)의 효과를 인히빈-a 녹아웃 마우스에서 검사했다. 8주령 수컷 인히빈-α 녹아웃 마우스에서 14일 단일-주사 연구를 수행했다. 8주령째 수컷 인히빈-α 녹아웃 마우스는 나이 일치된 야생형 한배새끼 대조군 마우스와 비교하여 체중의 25% 이상을 잃었다. 녹아웃 마우스 중 5마리는 E28W(30mg/kg)의 단일 피하 주사를 주었고, 5마리 녹아웃 마우스는 0일째에 동등한 부피의 PBS(비히클)을 피하 투여했다. 베이스라인 대조군으로서 5마리의 나이 일치된 야생형 마우스에는 0일째에 비히클의 단일 피하 주사를 투여했다. 마우스는 0일, 7일 및 14일째에 칭량했다. 14일째 마지막에 모든 마우스를 죽이고, 이들의 순수 사체 중량 및 종아리 근육 덩어리를 부검을 통해서 분석했다. 14일 연구 기간에 걸쳐서 비히클-치료된 녹아웃 마우스의 평균 체중은 0일째 22.5g에서 14일째 21.4g으로 대략 1.1g까지 떨어졌다. 반대로, E28W-치료된 녹아웃 마우스의 평균 체중은 0일째 22.1g에서 14일째 33.1g으로 11g까지 극적인 획득을 나타냈다. 말단 부검 분석은 E28W 폴리펩티드가 아래 나타낸 대로 인히빈-α 녹아웃 마우스에서 순수 사체 중량 및 종아리 근육 질량이 사실상 2배였다는 것을 드러냈다. E28W-치료된 녹아웃 마우스의 평균 순수 사체 중량은 비히클-치료된 녹아웃 마우스에 대한 대략 8.0g, 및 비히클-치료된 야생형 대조군 마우스에 대한 대략 12.1g과 비교하여 대략 14.9g이었다. E28W-치료된 녹아웃 마우스의 평균 종아리 근육 중량(양쪽 다리)은 비히클-치료된 녹아웃 마우스에 대한 대략 209mg, 및 비히클-치료된 야생형 대조군 마우스에 대한 대략 324g과 비교하여 대략 426mg이었다. 이들 결과는 체중 손실 및 근육 소모성인 질환 상태의 치료에 대한 E28W 폴리펩티드의 효능을 증명하며, 이것은 아래 표에 요약된다.

*: P<0.05 대 WT + 비히클; #: P<0.05 대 KO + 비히클

고환 및 난소 종양의 형성 비율에 대한 E28W 폴리펩티드의 투여 효과를 수컷 및 암컷 인히빈-α KO 마우스에서 각각 검사했다. 이 연구에서 8주령 수컷(n=5) 및 9주령 암컷(n=6)을 포함하는 인히빈-α 녹아웃 마우스 11마리를 E28W(30mg/kg)의 단일 피하 주사로 치료했고, 나이 일치된 수컷(n=5) 및 암컷(n=6)을 포함하는 인히빈-α 녹아웃 마우스의 다른 11마리는 동등한 부피의 PBS(비히클)의 단일 주사를 받았다. 이에 더하여, 나이 일치된 수컷(n=5) 및 암컷(n=6)을 포함하는 야생형 한배새끼 대조군 마우스 11마리에 비히클의 단일 주사를 투여했다. 치료 후 2주째에 마우스를 죽이고, 부검을 행하여 육안으로 확인가능한 고환 및 난소 종양의 형성 비율을 검사했다. 11마리의 비히클-치료된 녹아웃 마우스 중 10마리에서 확인가능한 종양이 발생했음이 관찰되었다. 구체적으로, 고환 및 난소 종양 형성은 시험된 5마리 수컷 중 5마리와 6마리 암컷 중 5마리에서 각각 발견되었다. 이들 종양의 크기는 야생형 대조군 마우스에서 상응하는 정상 고한 또는 난소보다 2-3배 큰 것으로 판명되었다. 이것은 도 3에 도시된다. E28W-치료된 인히빈-α 녹아웃 마우스 중에서는 단지 10%(11마리 중 1마리)만 가시적인 종양 형성을 나타냈다. 구체적으로, 암컷에서 E28W-치료된 녹아웃 마우스 6마리 중 1마리에서 확인가능한 난소 종양이 발생했고, 치료되지 않은 암컷 녹아웃 6마리 중 5마리는 나이 일치된 야생형 대조군과 비교하여 난소의 크기나 그로스 형태에 변화가 거의 또는 전혀 없었다. E28W-치료된 수컷 녹아웃 마우스 5마리 중 5마리가 가시적인 종양을 나타내지 않았으며, 야생형 대조군과 비교하여 고환의 크기나 그로스 형태에도 변화가 거의 또는 전혀 없었다. 이들 결과는 E28W 투여가 인히빈-α KO 마우스에서 고환 및 난소 종양의 형성을 감소시키고, 또한 흑색종의 형성을 감소시키는데 효과적이었음을 증명하며, 이는 암 치료에서 이 용해성 수용체 치료법의 임상적 활용을 시사한다.

거식증을 치료하는데 있어서 E28W 폴리펩티드의 효능을 수컷 인히빈-α 녹아웃 마우스에서 검사했다. 이 연구에서 인히빈-α 녹아웃 마우스(n=5)에서 음식 소비는 나이 일치된 야생형 마우스(n=10)와 비교하여 유의하게 감소했다. E28W-치료된 인히빈-α 녹아웃 마우스의 음식 섭취는 검사된 3주 기간 동안 유의하게 증가했음이 관찰되었다. E28W-치료된 인히빈-α 녹아웃 마우스에서 평균 주 음식 섭취는 나이 일치된 야생형 마우스(n=10)보다 약간 더 높은 수준까지 증가했고, 비히클로 치료된 녹아웃 마우스의 평균 주 음식 섭취보다 약 50% 더 많았다. 따라서, 이 데이터는 E28W 치료가 인히빈-α KO 마우스에서 거식증을 완화시키는데 매우 효과적이었음을 나타낸다.

생존에 대한 E28W 치료의 효과를 수컷 및 암컷 인히빈-α KO 마우스에서 각각 검사했다. 수컷의 경우, 약 50일령의 25마리 인히빈-α KO 마우스에 E28W 폴리펩티드(10mg/kg/wk, SC)를 투여했고, 26마리의 나이 일치된 인히빈-α KO 마우스는 비히클(PBS)을 받았다. 19마리의 나이 일치된 야생형 수컷 마우스는 비히클을 받았고, 베이스라인 대조군으로 사용되었다. 비히클-치료된 녹아웃 마우스는 연구 15일째에 죽기 시작했다(약 65일령). 실험 34일째(약 84일령) 비히클-치료된 녹아웃 마우스의 50%가 죽었고, 78일째(약 128일령) 100%가 죽었다. 반대로, E28W 폴리펩티드로 치료된 25마리의 녹아웃 마우스는, 또는 비히클로 치료된 19마리의 야생형 대조군 마우스는 연구 78일(약 128일령) 전에 한 마리도 죽지 않았다. E28W-치료된 녹아웃 마우스에서 25마리 중 1마리가 연구 78일째(약 128일령) 죽었고, 25마리 중 24마리는 100일(약 150일령)을 지나서까지 생존했다. 비히클-치료된 야생형 마우스는 100일 연구 기간 동안 한 마리도 죽지 않았다. 암컷 인히빈-α KO 마우스에서도 유사한 생존 결과가 얻어졌다. 약 50일령의 22마리 인히빈-α KO 마우스에 E28W(10mg/kg/wk, SC)를 투여했고, 같은 나이의 23마리의 인히빈-α KO 마우스는 비히클(PBS)을 받았다. 한편, 야생형 암컷 대조군 마우스 17마리는 비히클로 치료되었다. 비히클-치료된 암컷 녹아웃 마우스는 연구 40일째에 죽기 시작했다(약 90일령). 실험 58일째(약 108일령) 비히클-치료된 녹아웃 마우스의 50%가 죽었고, 86일째(약 136일령) 100%가 죽었다. 반대로, E28W-치료된 암컷 녹아웃 마우스 중 단지 약 5%(22마리 중 1마리)만이 죽었고, 약 90%(22마리 중 20마리)는 연구 120일(약 170일령)이 지나서까지 생존했다. 비히클-치료된 야생형 마우스는 120일 연구 기간 동안 한 마리도 죽지 않았다. 따라서, 이 데이터는 E28W 폴리펩티드 치료법이 수컷과 암컷 인히빈-α KO 마우스 모두의 생존을 극적으로 연장시키는데 효과적임을 증명한다. 수컷 및 암컷 녹아웃 마우스에 대한 생존 곡선의 도식적 플롯이 도 4에 제공된다.

결장-26 종양 보유 마우스에서 근육 소모의 치료

결장-26 종양 보유 마우스는 암 악액질을 연구하기 위한 전임상 동물 모델로서 널리 사용된다(Fujita et al., Int J Cancer 68(5):637-43(1996), Kwak et al., Cancer Research 64(22):8193-8 (2004)). 체중 변화, 근육 질량 및 생존율에 대한 E28W 폴리펩티드의 효과를 종양-보유 마우스에서 연구했다. 결장-26(C-26) 종양 세포를 40마리 10주령 수컷 CDF1 마우스에 마우스당 0.5 x 10⁶ 세포로 피하 이식했다. 종양 이식은 0일째에 수행했다. 종양 이식 후 5일째에 시작하여 20마리 C-26 마우스를 10mg/kg vActRIIB IgG2 Fc E28W(서열번호 91)의 피하 주사로 매주 치료했고, 20마리 C-26 마우스는 비히클(PBS)로 치료했다. 동시에 10마리의 나이와 체중 일치된 정상 마우스를 비히클(PBS)로만 치료했다. 체중 및 음식 섭취를 주당 3번 결정했다. 종양-보유 마우스는 생존에 대해 매일 2번 조사했다. 종양 크기를 PC 컴퓨터에 연결된 캘리퍼(Ultra-Cal IV IP65 전자 캘리퍼, Fred V Fowler Co. Boston MA)를 사용하여 측정했으며, 값들은 마이크로 엑셀 데이터 파일의 워크시트에 자동 기록되었다. 도 5에 도시된 대로, 종양 이식 후 2주째에 C-26 종양을 보유한 마우스는 중증의 악액질이 발생했고, 이들의 체중을 극적으로 잃었다. E28W 치료는 종양-보유 마우스에서 체중 손실을 효과적으로 완화시켰다. E28W로 치료된 종양-보유 마우스의 평균 체중은 비히클로 치료된 종양-보유 마우스보다 유의하게 더 높았다(p<0.001, 종양 접종 후 7일에서 33일까지, 언페이드 t-테스트 Graph pad Software Inc. San Diego CA).

E28W 폴리펩티드 치료된 그룹과 비히클 치료된 그룹에서 종양 크기에 차이는 없었으며, 이는 치료가 C-26 종양 성장에 효과가 없음을 나타낸다. 말단 부검 분석은 E28W-치료된 C-26 종양-보유 마우스의 평균 순수 사체 질량과 종아리 근육 중량이 비히클로 치료된 종양-보유 마우스보다 유의하게 더 높았음을 나타냈다(순수 사체와 종아리 근육 모두에 대해 p<0.001). C-26 종양-보유 마우스의 생존에 대한 E28W의 효과가 도 6에 도시된다. 비히클 치료된 마우스는 종양 이식 후 약 14일째에 죽기 시작했다. 종양 이식 후 35일째에 비히클-치료된 C-26 종양-보유 마우스는 20마리가 전부 죽었지만, E28W로 치료된 C-26 종양-보유 마우스는 20마리 중 17마리가 여전히 생존중이었다. 따라서, E28W 치료는 C-26 종양-보유 마우스의 생존에 유의한 연장을 초래했다(p<0.0001, 카이-스퀘어 테스트). 따라서, E28W 폴리펩티드는 체중 및 근육 질량을 유지하는데 뿐만 아니라 C-26 종양-보유 마우스의 생존을 연장하는데도 효과적이었다.

뒷다리 들기( Hindlimb suspension ) 마우스의 치료

사용불능 상태에서 근육 질량에 대한 vActRIIB-IgG2 Fc E28W(서열번호 91)의 효과를 검사하기 위해서 뒷다리 들기 마우스 모델을 사용했다. 뒷다리 들기 과정은 본질적으로 Carlson CJ et al.에 의해서 보고된 것과 동일하다(Carlson CJ, Booth FW and Gordon SE: Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 277:R601-RR606, 1999). 9주령 암컷 C57BL/6 마우스를 연구에 사용했다. 총 60마리 마우스를 다음과 같이 세 그룹으로 나눴다: 1. 비히클(PBS)로 치료된 들지 않는 베이스라인 대조군 그룹(20마리 마우스), 2. 비히클로 치료된 뒷다리 들기 그룹(20마리 마우스), 및 3. vActRIIB-IgG2 Fc, E28W로 치료된 뒷다리 들기 마우스 그룹(20마리). 구체적으로, vActRIIB-IgG 2 Fc E28W 또는 비히클 30mg/kg의 단일 SC 주사를 상기 설명된 그룹에 각각 뒷다리 들기의 개시 시점에 제공했다. 주당 2-3번 길이 방향으로 체중 변화를 측정했다. 각 그룹으로부터 5마리 마우스를 4번 상이한 시간 지점에서 죽였다: 1일, 3일, 7일 및 14일. 종아리 근육 중량을 부검을 통해서 결정했다.

아래 표에 나타낸 대로, 뒷다리 들기는 최대 10%까지 체중의 유의한 손실을 초래했다. ANOVA 측정에 의해서 분석된 대로, vActRIIB-IgG2 Fc E28W에 의한 뒷다리 들기 마우스의 치료는 비히클 치료된 뒷다리 들기 그룹 또는 들지 않는 베이스라인 대조군 그룹보다 높은 수준까지 유의한 체중 획득을 초래했다. 2주 연구 기간 동안 vActRIIB-IgG2 Fc E28W(서열번호 91) 치료 그룹의 평균 체중 획득은 비히클-치료된 들기 그룹의 0.2% 하락 및 들지 않는 베이스라인 대조군 그룹의 4.8% 중량 획득과 각각 비교하여 12.6%였다. 시간-경과 부검 결과는 뒷다리 근육 질량이 체중과 평행하게 변화했음을 나타냈다. vActRIIB-IgG2 Fc(E28W)에 의한 들기 마우스의 치료는 근육 손실을 완전히 완화시켰다. 따라서, 이 실험의 결과는 E28W가 사용불능과 관련된 근위축증의 치료에 효과적임을 나타낸다.

OVX 마우스의 치료

난소절제된 암컷 C57Bl6 마우스(OVX)는 암컷 성선기능저하증 및 골다공증에 대한 모델인 것으로 생각된다. 24마리의 암컷 C57Bl6 마우스를 3개월령째 난소절제하고, 3개월 동안 회복하도록 두었다. 6개월령째에 24마리 OVX 마우스뿐만 아니라 24마리의 나이 일치된 거짓 수술된 대조군 C57Bl6 마우스를 3개월 치료 기간에 걸쳐서 NMR 및 골 질량(PIXImus - GE LUNAR Corporation)에 의해서 체중, 근육 및 지방 질량의 길이 방향 변화에 대해 측정했다. 기간의 마지막에 동물을 죽이고, 말단 부검 동안 골 조직을 수집해서 Faxitron 엑스레이 및 microCT(Faxitron X-ray Corporation 및 GE Medical system) 분석을 행했다. E28W 변이체 수용체(서열번호 91)는 체중, 구체적으로 순수 골격근 질량, 및 골 질량을 증가시키면서 마우스의 지방 함량을 비-난소절제된 마우스에서 보이는 수준까지 감소시키는데 효과적이었음이 증명되었다. 구체적으로, 12주 기간에 걸쳐서 순수 근육 질량은 E28W로 치료된 거짓 수술된 마우스에 대한 20g에서 27.5g과 비교하여 E28W로 치료된 OVX 마우스에 대해서 20g에서 27.0g까지 증가되었고, 비교하면 OVX 더하기 비히클 또는 거짓 수술 더하기 비히클에서는 순수 근육 질량에 거의 증가가 없었다(OVS 더하기 비히클에 대해 약 19g과 야생형 더하기 비히클에 대해 약 20g). 같은 연구에서 12주 연구의 마지막까지 E28W로 치료된 OVX 마우스는 거짓 수술된 동물과 비교하여 동물당 평균 8g에서 동물당 평균 약 4g까지 감소된 지방 질량을 나타냈다. 반대로, 비히클로 치료된 OVX 마우스는 연구 동안 어떤 시간에도 지방 질량을 잃지 않았다. 마지막으로, 비히클 치료된 OVX 마우스와 비교하여 E28W로 치료된 OVX 마우스에서는 골 질량이 증가했다. 말단 부검 동안 수집된 절개된 골의 대퇴골/정강이뼈 BMC(골 미네랄 함량)의 분석을 pQCT 분석(주변 정량 컴퓨터 단층촬영)에 의해서 결정했다. E28W로 치료된 OVX 마우스는 12주 연구의 마지막에 약 0.045g/cm에서 약 0.055g/cm까지 BMC가 증가했으며, 이것은 거짓 수술된 부형제 치료된 동물의 마지막 BMC와 비슷하다. 비히클로 치료된 OVX 마우스는 12주 연구의 마지막에 약 0.045g/cm의 동일한 BMC를 나타냈다. E28W 치료된 야생형 마우스는 12주 연구의 마지막에 약 0.054g/cm에서 약 0.065g/cm까지 BMC의 증가를 나타냈다. 이들 연구는 노화에서 허약증, 골다공증 및 비만의 잠재적 치료로서 E28W 폴리펩티드의 효능을 증명한다.

실시예 4: SACTRIIB에 의한 암의 치료( E28W - SEQ ID NO . 91)

난소암(OC)을 가진 마우스에서 액티빈 수준을 조사했다(도 7A). 순환 액티빈 A 수준은 정상 대조군 대상(정상)과 비교하여 난소암(OC)을 가진 마우스에서 유의하게 증가했다. 혈청 액티빈 A는 ELISA에 의해 측정했다. sActRIIB(E28W)(SEQ ID. NO: 91)에 의한 난소암 치료의 효과가 도 7B-7D에 도시된다. 확립된 난소 종양을 가진 12주령 암컷 KO 마우스를 sActRIIB 또는 PBS의 단일 주사에 의해서 14일 동안 치료했다. 나이 일치된 암컷 WT 한배새끼인 대조군은 PBS를 받았다. KO 마우스에서 액티빈 A의 상승된 순환 수준은 sActRIIB 치료에 의해서 WT 대조군 수준까지 급격히 감소했다는 것을 도 7B에서 알 수 있다. 혈청 액티빈 A를 치료 후 0일, 1일 및 14일째에 ELISA에 의해 측정했다.

도 7C에서 sActRIIB 치료가 KO 마우스에서 난소 종양 질량을 WT 대조군 수준까지 급격히 감소시켰다는 것을 볼 수 있다. 개별 동물의 난소(왼쪽 및 오른쪽)의 중량을 치료 후 0일, 1일 및 14일째에 부검을 통해서 코호트에 의해 분석했다. 난소들의 대표적인 그로스 형태 이미지는 14일 sActRIIB 치료에 반응하여 KO 마우스에서 진행된 난소 종양의 극적인 회귀를 묘사한다(도 7D).

sActRIIB로 치료된 KO 마우스에서 몇 가지 추가의 관찰이 이루어졌다(데이터 미도시). 액티빈 A mRNA의 과발현이 KO 마우스의 난소 종양에서 보였다. 과발현은 sActRIIB 치료에 의해서 방지되었다. 추가하여, sActRIIB 치료는 KO 마우스에서 난소 종양에서 포스포-Smad2의 증가를 완전히 차단했다. 또한, KO 마우스의 난소 종양에서 E-캐드헤린의 중증의 손실이 sActRIIB 치료에 의해서 역전되었다. 마지막으로, 대표적인 면역조직학 이미지는 KO 마우스의 난소 구획으로부터 E-캐드헤린 면역반응성의 완전한 소실과 sActRIIB에 의한 14일 치료 후 강한 E-캐드헤린 염색의 재출현을 나타냈다.

도 8A는 인히빈-α KO 마우스에서 난소 종양에서 VEGF의 과발현을 폐기할 수 있는 액티빈 A 봉쇄를 도시한다. 확립된 난소 종양을 가진 12주령 암컷 KO 마우스를 sActRIIB 또는 PBS의 단일 주사에 의해서 14일 동안 치료했다. 대조군으로서 나이 일치된 암컷 WT 한배새끼는 PBS를 받았다. ELISA 데이터는 혈정 VEGF 수준이 KO 마우스에서 현저히 상승되지만, sActRIIB 치료 후 WT 대조군 수준에 도달된다는 것을 드러낸다.

추가하여, 도시되지 않은 데이터에서, 면역조직화학 염색 이미지가 KO 마우스에서 난소 종양 구획에서 극적으로 증가된 VEGF 및 Ang-1 면역반응성을 나타냈으며, 이것은 sActRIIB 치료에 의해서 완전히 폐기되었다는 것이 관찰되었다. 또한, 웨스턴 블롯 분석은 종양 혈관형성-관련 단백질, 엔도글린, 오스테로폰틴, IGFBP-1 및 IGFBP-2의 발현이 KO 마우스에서 난소 종양에서 상당히 유도되었지만, sActRIIB 치료 후 WT 대조군 수준까지 감소되었음을 드러냈다.

면역조직화학 분석은 sActRIIB 치료가 KO 마우스에서 고환 종양에서 카스파아제-3 활성화를 초래한다는 것을 나타낸다. 도 8B에서 화살표는 sActRIIB-치료된 난소 종양 구획에서 활성 카스파아제-3 면역반응성을 가리키며, 여기서 잔류 종양 세포는 클러스터를 이루고 있다. PBS-치료된 난소 종양 구획에서는 활성 카스파아제-3 면역염색이 부재했다. 오른쪽의 히스토그램은 각 그룹에서 3마리 동물로부터의 다수의 난소 구획에 기초한 활성 카스파아제-3의 정량 분석을 도시한다.

다른 실험에서, 액티빈 A 길항작용은 안지오포에이틴-1 과발현을 억제했고, TOV-21G 사람 난소암 이종이식편에서 종양 극소환경에서 신생혈관형성을 방지했다. TOV-21G 사람 난소암 이종이식편의 이식은 CD1 누드 마우스에서 순환 중 상승된 액티빈 A를 가져왔다. 액티빈 A는 ELISA에 의해 측정했다. CD1 누드 마우스에서 액티빈 A 길항제 sActRIIB의 투여는 TOV-21G 종양 성장을 억제했다. TOV-21G 이종이식편-보유 마우스를 종양 이식 후 12일째에 sActRIIB, 또는 PBS로 치료했다.

액티빈 A의 차단은 세포 배양물에서 TOV-21G 세포의 시험관내 증식에 직접적인 효과를 갖지 않았다. TOV-21G 세포의 성장을 IncuCyte 시스템을 사용하여 "실시간 시험관내 마이크로-이미징"에 의해서 모니터했다. 액티빈 A 저해인자를 세포 파종 때 첨가했다. 모니터링 시스템의 신뢰성을 증명하기 위해서 세포 성장의 저해에 대한 양성 대조군으로 스타우로스포린을 사용했다.

액티빈 A를 차단하는 것은 Ang-1 과발현을 억제했고, TOV-21G 난소 종양 이종이식편에서 종양 신생혈관형성을 저해했다. TOV-21G 이종이식편-보유 누드 마우스를 종양 이식 후 12일째에 sActRIIB 또는 PBS로 치료했다. TOV-21G 종양을 치료 후 상이한 시간 지점에서 분리했고, 이어서 신생혈관화의 마커로서 Ang-1 및 CD31에 대해 면역조직화학 염색을 행했다. 세포 핵을 대조 염색했다.

또한, TOV-21G 이종이식편 종양에서 카스파아제-3 활성화 및 암 세포 세포자살이 액티빈 A의 차단에 뒤따랐다. TOV-21G 종양 구획을 활성 카스파아제-3-특이적 항체를 사용하여 카스파아제-3 활성화에 대해, 그리고 TUNEL 염색을 사용하여 세포 세포자살에 대해 면역조직화학 시험했다. sActRIIB는 활성 카스파아제-3 및 세포 세포자살을 유도했다.

이 실험은 액티빈 A가 다수의 세포 타입(즉, 암, 내피, 섬유아 및 단구 세포)에 의한 혈관형성 인자 과발현(예를 들어, VEGF-A 및 Ang-1)을 자극할 수 있지만, 종양에서 상승된 액티빈 A의 차단이 혈관형성 인자의 과발현을 방지했고, 활성화된 카스파아제-3과 세포 세포자살의 결과로서 종양 억제를 초래한다는 것을 증명한다.

실시예 5: 난소 및 고환 형태

나이 일치된 WT 대조군과 함께 PBS 또는 sActRIIB로 2주 동안 치료된 10주령 수컷 및 4주령 암컷 인히빈-α KO 마우스에서 난소 및 고환 종양의 조직학적 검사를 수행했다. 8주령 수컷 및 12주령 암컷 인히빈-α KO 마우스는 sActRIIB 또는 PBS의 단일 주사를 받았다. 치료 후 14일째 난소 및 고환 장기를 부검에 의해서 수거했다. 조직 구획을 난소에 대해서 과요오드산-쉬프 염색 그리고 고환에 대해서 메이슨 트리크롬 염색을 행했다.

치료되지 않은 암컷 KO 마우스에서 상당히 확장된 난소가 고형 암 덩어리와 큰 출혈로 지배적으로 채워졌고, 어떤 인식가능한 여포는 거의 남지 않았다. 그러나 sActRIIB 치료 후 난소는 정상 크기였으며, 이들의 형태도 많은 인식가능한 여포, 최소 암 침입 및 적은 출혈을 가진 비교적 정상으로 보였다. 따라서, 이런 현미경 분석은 종양 중량 및 그로스 형태에 대한 우리의 발견을 확증하며, sActRIIB 치료가 KO 동물에서 고환 및 난소에서 극적인 암 회귀를 야기했음을 확인했다. 치료되지 않은 수컷 KO 마우스에서는 정상 고환 구조가 광 현미경에 의해 더이상 인식가능하지 않았고, 세정관이 커다란, 미분화 암 덩어리로 대부분 대체되었다. 그러나 sActRIIB 치료 후 고환 구조는 몇몇 작은 영역은 아직도 잔류 암 세포를 함유했고, 일부 세관에서 정자 세포의 수가 감소했지만, 대부분의 세정관이 거의 온전한 상태로 비교적 정상인 것으로 보였다.

또한, sActRIIB 치료가 KO 마우스에서 고환 종양 덩어리를 WT 대조군 수준까지 급격히 감소시켰음이 주지되었다. 개별 동물의 고환(왼쪽 및 오른쪽)의 중량을 치료 직전과 14일 후에 부검을 통해서 코호트에 의해 분석했다. 이 실험의 경우, P<0.001 대 WT 대조군. n=6-12.

추가하여, sActRIIB는 VEGF 및 Ang-1 과발현을 폐기했고, 인히빈-α KO 마우스에서 고환 종양에서 카스파아제-3 활성화를 유도했음이 주지되었다. 안티오포이에틴-2 전사체는 난소 종양과 고환 종양 모두에서 sActRIIB 치료 후 대조군 수준까지 감소했다.

실시예 6: sActRIIB와 화학치료제의 조합의 효과

누드 마우스에서 TOV-21G 종양 성장 저해에 대한 액티빈 길항제 sActRIIB와 세포독성 화학치료제 5-플루오로우라실의 효과(도 9A). TOV-21G 이종이식편-보유 누드 마우스를 sActRIIB, 5-Fu, 또는 sActRIIB와 5-Fu의 조합으로 각각 종양 이식 후 12일째에 치료했다. 종양 부피의 변화를 길이 방향으로 기록했다. sActRIIB는 단독으로 종양 부피를 34%까지 감소시키고, 5-플루오로우라실(5-FU)은 단독으로 종양 부피를 49%까지 감소시킨다는 것이 도 9A에서 관찰될 수 있다. 그러나 두 개를 함께 조합하는 것은 종양 부피를 74%까지 감소시킨다.

도 9B는 누드 마우스에서 G361 사람 흑색종 이종이식편의 성장 저해에 대한 sActRIIB 및 다카르바진의 효과를 도시한다. BALB/c 누드 마우스를 sActRIIB, 다카르바진, 또는 sActRIIB 더하기 다카르바진으로 치료했다. 다카르바진 조합 연구를 위해서, 종양 이식 후 18일째에 시작하여 G361 이종이식편(5x10⁶ 세포/마우스)이 이식된 BALB/c 누드 마우스를 sActRIIB 단독(10mg/kg, SC, 1X/wk), 다카르바진 단독(5mg/kg으로 매일 IP 주사를 4일 연속한다), 또는 sActRIIB 및 5-FU 조합으로 치료했다. 종양 부피를 이식 후 최대 26일까지 전자 캘리퍼로 길이 방향으로 측정했다.

화학치료제와 sActRIIB가 아마도 상이한 메커니즘으로 작용할 것이므로, 증명된 결과, 즉 조합된 두 제제가 개별적으로 어느 하나의 제제보다 많이 전체적인 종양 성장에 영향을 미친다고 반드시 예상되지는 않는다.

난소암은 모든 부인과 암 중 가장 치명적이다. 월경 주기를 조절하는데 있어서 중요한 기능을 제공하는 생식선 사이토카인인 액티빈 A는 난소암을 포함하는 많은 악성물에서 강하게 발현된다. 액티빈 A를 중화시키는 것은 인히빈-결핍 마우스에서 확립된 난소 종양을 근절하고, 누드 마우스에서 다수의 액티빈 A-분비 난소 이종이식편 종양의 성장을 현저히 지연시킨다. 액티빈 A의 차단은 세포 배양물에서 난소암 세포의 시험관내 증식에 직접적인 효과는 갖지 않는 것으로 보이지만, 생체내에서 그것은 혈관형성 인자(즉, VEGF 및 안지오포이에틴)의 과발현을 완전히 폐기하고, 종양 극소환경에서 신생혈관형성을 저해한다. 그것은 이렇게 해서 난소 종양에서 카스파아제-3 활성화 및 암 세포 세포자살을 유도한다. 이런 심대한 생체내 효과는 종양 극소환경에 남은, 숙주의 내피 세포에서 혈관형성 인자의 과생산을 촉발하는 종양-유래된 액티빈 A의 능력에 의해서 적어도 부분적으로 설명될 수 있다. 난소 종양에 더하여, 액티빈 봉쇄는 또한 액티빈 A를 분비하는 두 가지 이상의 다른 암 타입(고환 종양 및 흑색종)의 생체내 성장을 저해하는 것으로 판명되었다. 중요한 점은 액티빈 길항작용의 종양-저해성 효과가 적어도 5-플루오로우라실 또는 다카르바진 화학치료법의 효과에 덧붙여진 것으로 판명되었다는 것이다. 이런 발견은 종양 혈관형성 및 종양형성의 중요한 매개인자로서 액티빈 A의 기능을 증명한다. 따라서, sActRIIB에 의한 상승된 액티빈 A의 차단은 난소암, 고환암, 흑색종 및 가능한 다른 악성물과 싸우기 위한 유망한 새로운 접근법인 것으로 보인다.

본 발명은 본원에 설명된 구체적인 구체예들에 의해서 범위가 제한되지 않으며, 이들은 본 발명의 개별 양태들에 대한 하나의 예시로서 의도되고, 기능적으로 동등한 방법 및 성분들은 본 발명의 범위 내이다. 실제로 본원에 나타내고 설명된 것들에 더하여 본 발명의 다양한 변형이 전술한 설명 및 첨부한 도면으로부터 당업자에게 분명해질 것이다. 이러한 변형은 첨부된 청구항의 범위 내에 들어가는 것으로 의도된다.

SEQUENCE LISTING <110> AMGEN INC. <120> VARIANT ACTIVIN RECEPTOR POLYPEPTIDES, ALONE OR IN COMBINATION WITH CHEMOTHERAPY, AND USES THEREOF <130> IF14P117/US <140> PCT/US2012/070571 <141> 2012-12-19 <150> 13/329,897 <151> 2011-12-19 <160> 99 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 480 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(480) <400> 1 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg gag tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gga ccc tgg gcc tcc 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser 115 120 125 acc acc atc ccc tct ggt ggg cct gaa gcc act gca gct gct gga gat 432 Thr Thr Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp 130 135 140 caa ggc tcg ggg gcg ctt tgg ctg tgt ctg gaa ggc cca gct cat gaa 480 Gln Gly Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu 145 150 155 160 <210> 2 <211> 160 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser 115 120 125 Thr Thr Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp 130 135 140 Gln Gly Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu 145 150 155 160 <210> 3 <211> 480 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(480) <220> <221> modified_base <222> (84)..(84) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 3 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg gcn tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Ala Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gga ccc tgg gcc tcc 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser 115 120 125 acc acc atc ccc tct ggt ggg cct gaa gcc act gca gct gct gga gat 432 Thr Thr Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp 130 135 140 caa ggc tcg ggg gcg ctt tgg ctg tgt ctg gaa ggc cca gct cat gaa 480 Gln Gly Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu 145 150 155 160 <210> 4 <211> 160 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Ala Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser 115 120 125 Thr Thr Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp 130 135 140 Gln Gly Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu 145 150 155 160 <210> 5 <211> 480 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(480) <220> <221> modified_base <222> (84)..(84) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (120)..(120) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 5 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg gcn tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Ala Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag gcn acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Ala Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gga ccc tgg gcc tcc 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser 115 120 125 acc acc atc ccc tct ggt ggg cct gaa gcc act gca gct gct gga gat 432 Thr Thr Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp 130 135 140 caa ggc tcg ggg gcg ctt tgg ctg tgt ctg gaa ggc cca gct cat gaa 480 Gln Gly Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu 145 150 155 160 <210> 6 <211> 160 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Ala Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Ala Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser 115 120 125 Thr Thr Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp 130 135 140 Gln Gly Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu 145 150 155 160 <210> 7 <211> 480 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(480) <400> 7 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg tgg tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Trp Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gga ccc tgg gcc tcc 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser 115 120 125 acc acc atc ccc tct ggt ggg cct gaa gcc act gca gct gct gga gat 432 Thr Thr Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp 130 135 140 caa ggc tcg ggg gcg ctt tgg ctg tgt ctg gaa ggc cca gct cat gaa 480 Gln Gly Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu 145 150 155 160 <210> 8 <211> 160 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Trp Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser 115 120 125 Thr Thr Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp 130 135 140 Gln Gly Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu 145 150 155 160 <210> 9 <211> 480 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(480) <400> 9 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg tac tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Tyr Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gga ccc tgg gcc tcc 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser 115 120 125 acc acc atc ccc tct ggt ggg cct gaa gcc act gca gct gct gga gat 432 Thr Thr Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp 130 135 140 caa ggc tcg ggg gcg ctt tgg ctg tgt ctg gaa ggc cca gct cat gaa 480 Gln Gly Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu 145 150 155 160 <210> 10 <211> 160 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Tyr Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser 115 120 125 Thr Thr Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp 130 135 140 Gln Gly Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu 145 150 155 160 <210> 11 <211> 480 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(480) <220> <221> modified_base <222> (82)..(84) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 11 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg nnn tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Xaa Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gga ccc tgg gcc tcc 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser 115 120 125 acc acc atc ccc tct ggt ggg cct gaa gcc act gca gct gct gga gat 432 Thr Thr Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp 130 135 140 caa ggc tcg ggg gcg ctt tgg ctg tgt ctg gaa ggc cca gct cat gaa 480 Gln Gly Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu 145 150 155 160 <210> 12 <211> 160 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Ala, Phe, Gln, Val, Ile, Leu, Met, Lys, His, Trp or Tyr <400> 12 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Xaa Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser 115 120 125 Thr Thr Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp 130 135 140 Gln Gly Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu 145 150 155 160 <210> 13 <211> 480 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(480) <220> <221> modified_base <222> (82)..(84) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (118)..(120) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 13 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg nnn tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Xaa Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag nnn acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Xaa Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gga ccc tgg gcc tcc 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser 115 120 125 acc acc atc ccc tct ggt ggg cct gaa gcc act gca gct gct gga gat 432 Thr Thr Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp 130 135 140 caa ggc tcg ggg gcg ctt tgg ctg tgt ctg gaa ggc cca gct cat gaa 480 Gln Gly Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu 145 150 155 160 <210> 14 <211> 160 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Ala, Phe, Gln, Val, Ile, Leu, Met, Lys, His, Trp or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Ala, Gly, Gln, Met, His, Lys or Asn <400> 14 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Xaa Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Xaa Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser 115 120 125 Thr Thr Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp 130 135 140 Gln Gly Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu 145 150 155 160 <210> 15 <211> 480 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(480) <220> <221> modified_base <222> (118)..(120) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 15 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg gag tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag nnn acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Xaa Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gga ccc tgg gcc tcc 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser 115 120 125 acc acc atc ccc tct ggt ggg cct gaa gcc act gca gct gct gga gat 432 Thr Thr Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp 130 135 140 caa ggc tcg ggg gcg ctt tgg ctg tgt ctg gaa ggc cca gct cat gaa 480 Gln Gly Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu 145 150 155 160 <210> 16 <211> 160 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Gly, Gln, Met, His, Lys or Asn <400> 16 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Xaa Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser 115 120 125 Thr Thr Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp 130 135 140 Gln Gly Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu 145 150 155 160 <210> 17 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(402) <400> 17 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg gag tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 ccc ccg aca gcc ccc acc 402 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 18 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 19 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(402) <220> <221> modified_base <222> (84)..(84) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 19 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg gcn tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Ala Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 ccc ccg aca gcc ccc acc 402 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 20 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Ala Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 21 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(402) <220> <221> modified_base <222> (84)..(84) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (120)..(120) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 21 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg gcn tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Ala Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag gcn acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Ala Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 ccc ccg aca gcc ccc acc 402 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 22 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Ala Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Ala Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 23 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(402) <400> 23 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg tgg tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Trp Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 ccc ccg aca gcc ccc acc 402 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 24 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Trp Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 25 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(402) <400> 25 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg tac tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Tyr Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 ccc ccg aca gcc ccc acc 402 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 26 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Tyr Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 27 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(402) <220> <221> modified_base <222> (82)..(84) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 27 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg nnn tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Xaa Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 ccc ccg aca gcc ccc acc 402 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 28 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Ala, Phe, Gln, Val, Ile, Leu, Met, Lys, His, Trp or Tyr <400> 28 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Xaa Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 29 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(402) <220> <221> modified_base <222> (82)..(84) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (118)..(120) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 29 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg nnn tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Xaa Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag nnn acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Xaa Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 ccc ccg aca gcc ccc acc 402 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 30 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Ala, Phe, Gln, Val, Ile, Leu, Met, Lys, His, Tyr or Trp <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Ala, Gly, Gln, Met, His, Lys or Asn <400> 30 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Xaa Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Xaa Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 31 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(402) <220> <221> modified_base <222> (118)..(120) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 31 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg gag tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag nnn acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Xaa Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 ccc ccg aca gcc ccc acc 402 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 32 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Gly, Gln, Met, His, Lys, Asn <400> 32 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Xaa Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 33 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(402) <220> <221> modified_base <222> (84)..(84) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (192)..(192) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 33 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg gcn tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Ala Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg gcn 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 ccc ccg aca gcc ccc acc 402 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 34 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Ala Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 35 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(402) <220> <221> modified_base <222> (84)..(84) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (120)..(120) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (192)..(192) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 35 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg gcn tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Ala Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag gcn acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Ala Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg gcn 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 ccc ccg aca gcc ccc acc 402 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 36 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Ala Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Ala Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 37 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(402) <220> <221> modified_base <222> (192)..(192) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 37 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg tgg tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Trp Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg gcn 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 ccc ccg aca gcc ccc acc 402 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 38 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Trp Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 39 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(402) <220> <221> modified_base <222> (192)..(192) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 39 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg tac tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Tyr Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg gcn 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 ccc ccg aca gcc ccc acc 402 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 40 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Tyr Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 41 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(402) <220> <221> modified_base <222> (82)..(84) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (192)..(192) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 41 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg nnn tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Xaa Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg gcn 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 ccc ccg aca gcc ccc acc 402 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 42 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Ala, Phe, Gln, Val, Ile, Leu, Met, Lys, His, Tyr or Trp <400> 42 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Xaa Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 43 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(402) <220> <221> modified_base <222> (82)..(84) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (118)..(120) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (192)..(192) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 43 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg nnn tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Xaa Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag nnn acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Xaa Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg gcn 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 ccc ccg aca gcc ccc acc 402 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 44 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Ala, Phe, Gln, Val, Ile, Leu, Met, Lys, His, Trp or Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Ala, Gly, Gln, Met, His, Lys or Asn <400> 44 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Xaa Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Xaa Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 45 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(402) <220> <221> modified_base <222> (118)..(120) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (192)..(192) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 45 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg gag tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag nnn acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Xaa Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg gcn 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 ccc ccg aca gcc ccc acc 402 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 46 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Gly, Glu, Met, His, Lys or Asn <400> 46 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Xaa Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 47 <211> 512 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 47 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu 130 135 140 Pro Ile Gly Gly Leu Ser Leu Ile Val Leu Leu Ala Phe Trp Met Tyr 145 150 155 160 Arg His Arg Lys Pro Pro Tyr Gly His Val Asp Ile His Glu Asp Pro 165 170 175 Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Val Gly Leu Lys Pro Leu Gln Leu 180 185 190 Leu Glu Ile Lys Ala Arg Gly Arg Phe Gly Cys Val Trp Lys Ala Gln 195 200 205 Leu Met Asn Asp Phe Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Leu Gln Asp Lys 210 215 220 Gln Ser Trp Gln Ser Glu Arg Glu Ile Phe Ser Thr Pro Gly Met Lys 225 230 235 240 His Glu Asn Leu Leu Gln Phe Ile Ala Ala Glu Lys Arg Gly Ser Asn 245 250 255 Leu Glu Val Glu Leu Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Asp Lys Gly Ser 260 265 270 Leu Thr Asp Tyr Leu Lys Gly Asn Ile Ile Thr Trp Asn Glu Leu Cys 275 280 285 His Val Ala Glu Thr Met Ser Arg Gly Leu Ser Tyr Leu His Glu Asp 290 295 300 Val Pro Trp Cys Arg Gly Glu Gly His Lys Pro Ser Ile Ala His Arg 305 310 315 320 Asp Phe Lys Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Ser Asp Leu Thr Ala Val 325 330 335 Leu Ala Asp Phe Gly Leu Ala Val Arg Phe Glu Pro Gly Lys Pro Pro 340 345 350 Gly Asp Thr His Gly Gln Val Gly Thr Arg Arg Tyr Met Ala Pro Glu 355 360 365 Val Leu Glu Gly Ala Ile Asn Phe Gln Arg Asp Ala Phe Leu Arg Ile 370 375 380 Asp Met Tyr Ala Met Gly Leu Val Leu Trp Glu Leu Val Ser Arg Cys 385 390 395 400 Lys Ala Ala Asp Gly Pro Val Asp Glu Tyr Met Leu Pro Phe Glu Glu 405 410 415 Glu Ile Gly Gln His Pro Ser Leu Glu Glu Leu Gln Glu Val Val Val 420 425 430 His Lys Lys Met Arg Pro Thr Ile Lys Asp His Trp Leu Lys His Pro 435 440 445 Gly Leu Ala Gln Leu Cys Val Thr Ile Glu Glu Cys Trp Asp His Asp 450 455 460 Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala Gly Cys Val Glu Glu Arg Val Ser Leu 465 470 475 480 Ile Arg Arg Ser Val Asn Gly Thr Thr Ser Asp Cys Leu Val Ser Leu 485 490 495 Val Thr Ser Val Thr Asn Val Asp Leu Pro Pro Lys Glu Ser Ser Ile 500 505 510 <210> 48 <211> 426 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48 Met Pro Leu Leu Trp Leu Arg Gly Phe Leu Leu Ala Ser Cys Trp Ile 1 5 10 15 Ile Val Arg Ser Ser Pro Thr Pro Gly Ser Glu Gly His Ser Ala Ala 20 25 30 Pro Asp Cys Pro Ser Cys Ala Leu Ala Ala Leu Pro Lys Asp Val Pro 35 40 45 Asn Ser Gln Pro Glu Met Val Glu Ala Val Lys Lys His Ile Leu Asn 50 55 60 Met Leu His Leu Lys Lys Arg Pro Asp Val Thr Gln Pro Val Pro Lys 65 70 75 80 Ala Ala Leu Leu Asn Ala Ile Arg Lys Leu His Val Gly Lys Val Gly 85 90 95 Glu Asn Gly Tyr Val Glu Ile Glu Asp Asp Ile Gly Arg Arg Ala Glu 100 105 110 Met Asn Glu Leu Met Glu Gln Thr Ser Glu Ile Ile Thr Phe Ala Glu 115 120 125 Ser Gly Thr Ala Arg Lys Thr Leu His Phe Glu Ile Ser Lys Glu Gly 130 135 140 Ser Asp Leu Ser Val Val Glu Arg Ala Glu Val Trp Leu Phe Leu Lys 145 150 155 160 Val Pro Lys Ala Asn Arg Thr Arg Thr Lys Val Thr Ile Arg Leu Phe 165 170 175 Gln Gln Gln Lys His Pro Gln Gly Ser Leu Asp Thr Gly Glu Glu Ala 180 185 190 Glu Glu Val Gly Leu Lys Gly Glu Arg Ser Glu Leu Leu Leu Ser Glu 195 200 205 Lys Val Val Asp Ala Arg Lys Ser Thr Trp His Val Phe Pro Val Ser 210 215 220 Ser Ser Ile Gln Arg Leu Leu Asp Gln Gly Lys Ser Ser Leu Asp Val 225 230 235 240 Arg Ile Ala Cys Glu Gln Cys Gln Glu Ser Gly Ala Ser Leu Val Leu 245 250 255 Leu Gly Lys Lys Lys Lys Lys Glu Glu Glu Gly Glu Gly Lys Lys Lys 260 265 270 Gly Gly Gly Glu Gly Gly Ala Gly Ala Asp Glu Glu Lys Glu Gln Ser 275 280 285 His Arg Pro Phe Leu Met Leu Gln Ala Arg Gln Ser Glu Asp His Pro 290 295 300 His Arg Arg Arg Arg Arg Gly Leu Glu Cys Asp Gly Lys Val Asn Ile 305 310 315 320 Cys Cys Lys Lys Gln Phe Phe Val Ser Phe Lys Asp Ile Gly Trp Asn 325 330 335 Asp Trp Ile Ile Ala Pro Ser Gly Tyr His Ala Asn Tyr Cys Glu Gly 340 345 350 Glu Cys Pro Ser His Ile Ala Gly Thr Ser Gly Ser Ser Leu Ser Phe 355 360 365 His Ser Thr Val Ile Asn His Tyr Arg Met Arg Gly His Ser Pro Phe 370 375 380 Ala Asn Leu Lys Ser Cys Cys Val Pro Thr Lys Leu Arg Pro Met Ser 385 390 395 400 Met Leu Tyr Tyr Asp Asp Gly Gln Asn Ile Ile Lys Lys Asp Ile Gln 405 410 415 Asn Met Ile Val Glu Glu Cys Gly Cys Ser 420 425 <210> 49 <211> 375 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49 Met Gln Lys Leu Gln Leu Cys Val Tyr Ile Tyr Leu Phe Met Leu Ile 1 5 10 15 Val Ala Gly Pro Val Asp Leu Asn Glu Asn Ser Glu Gln Lys Glu Asn 20 25 30 Val Glu Lys Glu Gly Leu Cys Asn Ala Cys Thr Trp Arg Gln Asn Thr 35 40 45 Lys Ser Ser Arg Ile Glu Ala Ile Lys Ile Gln Ile Leu Ser Lys Leu 50 55 60 Arg Leu Glu Thr Ala Pro Asn Ile Ser Lys Asp Val Ile Arg Gln Leu 65 70 75 80 Leu Pro Lys Ala Pro Pro Leu Arg Glu Leu Ile Asp Gln Tyr Asp Val 85 90 95 Gln Arg Asp Asp Ser Ser Asp Gly Ser Leu Glu Asp Asp Asp Tyr His 100 105 110 Ala Thr Thr Glu Thr Ile Ile Thr Met Pro Thr Glu Ser Asp Phe Leu 115 120 125 Met Gln Val Asp Gly Lys Pro Lys Cys Cys Phe Phe Lys Phe Ser Ser 130 135 140 Lys Ile Gln Tyr Asn Lys Val Val Lys Ala Gln Leu Trp Ile Tyr Leu 145 150 155 160 Arg Pro Val Glu Thr Pro Thr Thr Val Phe Val Gln Ile Leu Arg Leu 165 170 175 Ile Lys Pro Met Lys Asp Gly Thr Arg Tyr Thr Gly Ile Arg Ser Leu 180 185 190 Lys Leu Asp Met Asn Pro Gly Thr Gly Ile Trp Gln Ser Ile Asp Val 195 200 205 Lys Thr Val Leu Gln Asn Trp Leu Lys Gln Pro Glu Ser Asn Leu Gly 210 215 220 Ile Glu Ile Lys Ala Leu Asp Glu Asn Gly His Asp Leu Ala Val Thr 225 230 235 240 Phe Pro Gly Pro Gly Glu Asp Gly Leu Asn Pro Phe Leu Glu Val Lys 245 250 255 Val Thr Asp Thr Pro Lys Arg Ser Arg Arg Asp Phe Gly Leu Asp Cys 260 265 270 Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys Arg Tyr Pro Leu Thr Val 275 280 285 Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp Ile Ile Ala Pro Lys Arg Tyr 290 295 300 Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu Phe Val Phe Leu Gln Lys 305 310 315 320 Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gln Ala Asn Pro Arg Gly Ser Ala 325 330 335 Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser Pro Ile Asn Met Leu Tyr 340 345 350 Phe Asn Gly Lys Glu Gln Ile Ile Tyr Gly Lys Ile Pro Ala Met Val 355 360 365 Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser 370 375 <210> 50 <211> 217 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Ile Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Gly Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 210 215 <210> 51 <211> 480 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(480) <220> <221> modified_base <222> (82)..(84) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (118)..(120) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 51 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg nnn tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Xaa Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag nnn acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Xaa Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gga ccc tgg gcc tcc 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser 115 120 125 acc acc atc ccc tct ggt ggg cct gaa gcc act gca gct gct gga gat 432 Thr Thr Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp 130 135 140 caa ggc tcg ggg gcg ctt tgg ctg tgt ctg gaa ggc cca gct cat gaa 480 Gln Gly Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu 145 150 155 160 <210> 52 <211> 160 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Any amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Any amino acid <400> 52 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Xaa Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Xaa Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser 115 120 125 Thr Thr Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp 130 135 140 Gln Gly Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu 145 150 155 160 <210> 53 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(402) <220> <221> modified_base <222> (82)..(84) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (118)..(120) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 53 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg nnn tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Xaa Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag nnn acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Xaa Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 ccc ccg aca gcc ccc acc 402 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 54 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Any amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Any amino acid <400> 54 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Xaa Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Xaa Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 55 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(402) <220> <221> modified_base <222> (82)..(84) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (118)..(120) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (192)..(192) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 55 atg acg gcg ccc tgg gtg gcc ctc gcc ctc ctc tgg gga tcg ctg tgc 48 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 gcc ggc tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg nnn tgc atc tac tac 96 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Xaa Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 aac gcc aac tgg gag ctg gag nnn acc aac cag agc ggc ctg gag cgc 144 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Xaa Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg gcn 192 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala 50 55 60 aac agc tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat 240 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 gac ttc aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac 288 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc 336 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 ttc act cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca 384 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 ccc ccg aca gcc ccc acc 402 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 56 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Any amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Any amino acid <400> 56 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Xaa Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Xaa Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr 130 <210> 57 <211> 1047 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1044) <400> 57 tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg gag tgc atc tac tac aac gcc 48 Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala 1 5 10 15 aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc tgc gaa 96 Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu 20 25 30 ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc aac agc 144 Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser 35 40 45 tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat gac ttc 192 Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe 50 55 60 aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac ccc cag 240 Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln 65 70 75 80 gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc ttc act 288 Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr 85 90 95 cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca ccc ccg 336 His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro 100 105 110 aca gcc ccc act gga gga gga gga tct gac aaa act cac aca tgc cca 384 Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 115 120 125 ccg tgc cca gca cct gaa ctc ctg ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc 432 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 130 135 140 ccc cca aaa ccc aag gac atc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc 480 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 145 150 155 160 aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc 528 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 165 170 175 aac tgg tac gtg ggc ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccg 576 Asn Trp Tyr Val Gly Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 180 185 190 cgg gag gag cag tac aac agc acg tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc 624 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 195 200 205 gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc 672 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 210 215 220 tcc aac aaa gcc ctc cca gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc 720 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 225 230 235 240 aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg 768 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 245 250 255 gat gag ctg acc aag aac cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc 816 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 260 265 270 ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg cag ccg 864 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 275 280 285 gag aac aac tac aag acc acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc 912 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 290 295 300 ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag 960 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 305 310 315 320 ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac 1008 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 325 330 335 tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg ggt aaa tga 1047 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 340 345 <210> 58 <211> 348 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58 Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala 1 5 10 15 Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu 20 25 30 Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser 35 40 45 Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe 50 55 60 Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln 65 70 75 80 Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr 85 90 95 His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro 100 105 110 Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 115 120 125 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 130 135 140 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 145 150 155 160 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 165 170 175 Asn Trp Tyr Val Gly Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 180 185 190 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 195 200 205 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 210 215 220 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 225 230 235 240 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 245 250 255 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 260 265 270 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 275 280 285 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 290 295 300 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 305 310 315 320 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 325 330 335 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 340 345 <210> 59 <211> 1047 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1044) <400> 59 tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg gcg tgc atc tac tac aac gcc 48 Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Ala Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala 1 5 10 15 aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc tgc gaa 96 Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu 20 25 30 ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc aac agc 144 Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser 35 40 45 tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat gac ttc 192 Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe 50 55 60 aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac ccc cag 240 Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln 65 70 75 80 gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc ttc act 288 Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr 85 90 95 cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca ccc ccg 336 His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro 100 105 110 aca gcc ccc act gga gga gga gga tct gac aaa act cac aca tgc cca 384 Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 115 120 125 ccg tgc cca gca cct gaa ctc ctg ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc 432 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 130 135 140 ccc cca aaa ccc aag gac atc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc 480 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 145 150 155 160 aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc 528 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 165 170 175 aac tgg tac gtg ggc ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccg 576 Asn Trp Tyr Val Gly Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 180 185 190 cgg gag gag cag tac aac agc acg tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc 624 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 195 200 205 gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc 672 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 210 215 220 tcc aac aaa gcc ctc cca gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc 720 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 225 230 235 240 aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg 768 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 245 250 255 gat gag ctg acc aag aac cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc 816 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 260 265 270 ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg cag ccg 864 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 275 280 285 gag aac aac tac aag acc acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc 912 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 290 295 300 ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag 960 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 305 310 315 320 ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac 1008 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 325 330 335 tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg ggt aaa tga 1047 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 340 345 <210> 60 <211> 348 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60 Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Ala Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala 1 5 10 15 Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu 20 25 30 Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser 35 40 45 Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe 50 55 60 Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln 65 70 75 80 Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr 85 90 95 His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro 100 105 110 Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 115 120 125 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 130 135 140 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 145 150 155 160 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 165 170 175 Asn Trp Tyr Val Gly Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 180 185 190 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 195 200 205 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 210 215 220 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 225 230 235 240 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 245 250 255 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 260 265 270 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 275 280 285 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 290 295 300 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 305 310 315 320 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 325 330 335 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 340 345 <210> 61 <211> 1047 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1044) <400> 61 tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg tgg tgc ctc tac tac aac gcc 48 Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Trp Cys Leu Tyr Tyr Asn Ala 1 5 10 15 aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc tgc gaa 96 Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu 20 25 30 ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc aac agc 144 Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser 35 40 45 tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat gac ttc 192 Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe 50 55 60 aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac ccc cag 240 Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln 65 70 75 80 gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc ttc act 288 Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr 85 90 95 cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca ccc ccg 336 His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro 100 105 110 aca gcc ccc act gga gga gga gga tct gac aaa act cac aca tgc cca 384 Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 115 120 125 ccg tgc cca gca cct gaa ctc ctg ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc 432 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 130 135 140 ccc cca aaa ccc aag gac atc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc 480 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 145 150 155 160 aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc 528 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 165 170 175 aac tgg tac gtg ggc ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccg 576 Asn Trp Tyr Val Gly Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 180 185 190 cgg gag gag cag tac aac agc acg tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc 624 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 195 200 205 gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc 672 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 210 215 220 tcc aac aaa gcc ctc cca gcc ccc att gag aaa acc atc tcc aaa gcc 720 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 225 230 235 240 aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg 768 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 245 250 255 gat gag ctg acc aag aac cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc 816 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 260 265 270 ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg cag ccg 864 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 275 280 285 gag aac aac tac aag acc acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc 912 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 290 295 300 ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag 960 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 305 310 315 320 ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac 1008 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 325 330 335 tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg ggt aaa tga 1047 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 340 345 <210> 62 <211> 348 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62 Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Trp Cys Leu Tyr Tyr Asn Ala 1 5 10 15 Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu 20 25 30 Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser 35 40 45 Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe 50 55 60 Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln 65 70 75 80 Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr 85 90 95 His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro 100 105 110 Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 115 120 125 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 130 135 140 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 145 150 155 160 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 165 170 175 Asn Trp Tyr Val Gly Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 180 185 190 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 195 200 205 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 210 215 220 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 225 230 235 240 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 245 250 255 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 260 265 270 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 275 280 285 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 290 295 300 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 305 310 315 320 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 325 330 335 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 340 345 <210> 63 <211> 1047 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1044) <400> 63 tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg tac tgc atc tac tac aac gcc 48 Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Tyr Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala 1 5 10 15 aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc tgc gaa 96 Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu 20 25 30 ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc aac agc 144 Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser 35 40 45 tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat gac ttc 192 Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe 50 55 60 aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac ccc cag 240 Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln 65 70 75 80 gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc ttc act 288 Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr 85 90 95 cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca ccc ccg 336 His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro 100 105 110 aca gcc ccc act gga gga gga gga tct gac aaa act cac aca tgc cca 384 Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 115 120 125 ccg tgc cca gca cct gaa ctc ctg ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc 432 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 130 135 140 ccc cca aaa ccc aag gac atc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc 480 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 145 150 155 160 aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc 528 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 165 170 175 aac tgg tac gtg ggc ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccg 576 Asn Trp Tyr Val Gly Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 180 185 190 cgg gag gag cag tac aac agc acg tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc 624 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 195 200 205 gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc 672 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 210 215 220 tcc aac aaa gcc ctc cca gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc 720 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 225 230 235 240 aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg 768 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 245 250 255 gat gag ctg acc aag aac cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc 816 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 260 265 270 ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg cag ccg 864 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 275 280 285 gag aac aac tac aag acc acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc 912 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 290 295 300 ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag 960 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 305 310 315 320 ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac 1008 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 325 330 335 tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg ggt aaa tga 1047 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 340 345 <210> 64 <211> 348 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Tyr Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala 1 5 10 15 Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu 20 25 30 Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser 35 40 45 Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe 50 55 60 Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln 65 70 75 80 Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr 85 90 95 His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro 100 105 110 Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 115 120 125 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 130 135 140 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 145 150 155 160 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 165 170 175 Asn Trp Tyr Val Gly Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 180 185 190 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 195 200 205 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 210 215 220 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 225 230 235 240 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 245 250 255 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 260 265 270 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 275 280 285 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 290 295 300 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 305 310 315 320 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 325 330 335 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 340 345 <210> 65 <211> 1047 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1044) <400> 65 tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg gag tgc atc tac tac aac gcc 48 Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala 1 5 10 15 aac tgg gag ctg gag ggc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc tgc gaa 96 Asn Trp Glu Leu Glu Gly Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu 20 25 30 ggc gag cag gac aag cgg ctg ccc tgc tac gcc tcc tgg cgc aac agc 144 Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu Pro Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser 35 40 45 tct ggc ccc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat gac ttc 192 Ser Gly Pro Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe 50 55 60 aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac ccc cag 240 Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln 65 70 75 80 gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc ttc act 288 Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr 85 90 95 cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca ccc ccg 336 His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro 100 105 110 aca gcc ccc act gga gga gga gga tct gac aaa act cac aca tgc cca 384 Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 115 120 125 ccg tgc cca gca cct gaa ctc ctg ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc 432 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 130 135 140 ccc cca aaa ccc aag gac atc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc 480 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 145 150 155 160 aca tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc 528 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 165 170 175 aac tgg tac gtg ggc ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccg 576 Asn Trp Tyr Val Gly Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 180 185 190 cgg gag gag cag tac aac agc acg tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc 624 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 195 200 205 gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc 672 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 210 215 220 tcc aac aaa gcc ctc cca gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc 720 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 225 230 235 240 aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg 768 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 245 250 255 gat gag ctg acc aag aac cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc 816 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 260 265 270 ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg cag ccg 864 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 275 280 285 gag aac aac tac aag acc acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc 912 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 290 295 300 ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag 960 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 305 310 315 320 ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac 1008 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 325 330 335 tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg ggt aaa tga 1047 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 340 345 <210> 66 <211> 348 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 66 Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala 1 5 10 15 Asn Trp Glu Leu Glu Gly Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu 20 25 30 Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu Pro Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser 35 40 45 Ser Gly Pro Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe 50 55 60 Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln 65 70 75 80 Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr 85 90 95 His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro 100 105 110 Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 115 120 125 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 130 135 140 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 145 150 155 160 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 165 170 175 Asn Trp Tyr Val Gly Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 180 185 190 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 195 200 205 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 210 215 220 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 225 230 235 240 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 245 250 255 Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 260 265 270 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 275 280 285 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 290 295 300 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 305 310 315 320 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 325 330 335 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 340 345 <210> 67 <211> 1125 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1122) <400> 67 tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg gag tgc atc tac tac aac gcc 48 Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala 1 5 10 15 aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc tgc gaa 96 Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu 20 25 30 ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc aac agc 144 Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser 35 40 45 tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat gac ttc 192 Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe 50 55 60 aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac ccc cag 240 Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln 65 70 75 80 gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc ttc act 288 Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr 85 90 95 cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gga ccc tgg gcc tcc acc acc 336 His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser Thr Thr 100 105 110 atc ccc tct ggt ggg cct gaa gcc act gca gct gct gga gat caa ggc 384 Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp Gln Gly 115 120 125 tcg ggg gcg ctt tgg ctg tgt ctg gaa ggc cca gct cat gaa gga gga 432 Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu Gly Gly 130 135 140 gga gga tct gac aaa act cac aca tgc cca ccg tgc cca gca cct gaa 480 Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 145 150 155 160 ctc ctg ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac 528 Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 165 170 175 acc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac 576 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 180 185 190 gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc 624 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 195 200 205 gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag tac aac 672 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 210 215 220 agc acg tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg 720 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 225 230 235 240 ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca 768 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 245 250 255 gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gaa 816 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 260 265 270 cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gat gag ctg acc aag aac 864 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn 275 280 285 cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc 912 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 290 295 300 gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc 960 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 305 310 315 320 acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag 1008 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 325 330 335 ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc 1056 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 340 345 350 tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc 1104 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 355 360 365 tcc ctg tct ccg ggt aaa tga 1125 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 370 <210> 68 <211> 374 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68 Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala 1 5 10 15 Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu 20 25 30 Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser 35 40 45 Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe 50 55 60 Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln 65 70 75 80 Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr 85 90 95 His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser Thr Thr 100 105 110 Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp Gln Gly 115 120 125 Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 145 150 155 160 Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 165 170 175 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 180 185 190 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 195 200 205 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 210 215 220 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 225 230 235 240 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 245 250 255 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 260 265 270 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn 275 280 285 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 290 295 300 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 305 310 315 320 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 325 330 335 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 340 345 350 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 355 360 365 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 370 <210> 69 <211> 1125 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1122) <220> <221> modified_base <222> (30)..(30) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 69 tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg gcn tgc atc tac tac aac gcc 48 Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Ala Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala 1 5 10 15 aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc tgc gaa 96 Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu 20 25 30 ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc aac agc 144 Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser 35 40 45 tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat gac ttc 192 Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe 50 55 60 aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac ccc cag 240 Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln 65 70 75 80 gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc ttc act 288 Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr 85 90 95 cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gga ccc tgg gcc tcc acc acc 336 His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser Thr Thr 100 105 110 atc ccc tct ggt ggg cct gaa gcc act gca gct gct gga gat caa ggc 384 Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp Gln Gly 115 120 125 tcg ggg gcg ctt tgg ctg tgt ctg gaa ggc cca gct cat gaa gga gga 432 Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu Gly Gly 130 135 140 gga gga tct gac aaa act cac aca tgc cca ccg tgc cca gca cct gaa 480 Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 145 150 155 160 ctc ctg ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac 528 Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 165 170 175 acc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac 576 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 180 185 190 gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc 624 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 195 200 205 gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag tac aac 672 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 210 215 220 agc acg tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg 720 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 225 230 235 240 ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca 768 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 245 250 255 gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gaa 816 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 260 265 270 cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gat gag ctg acc aag aac 864 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn 275 280 285 cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc 912 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 290 295 300 gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc 960 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 305 310 315 320 acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag 1008 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 325 330 335 ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc 1056 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 340 345 350 tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc 1104 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 355 360 365 tcc ctg tct ccg ggt aaa tga 1125 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 370 <210> 70 <211> 374 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 70 Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Ala Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala 1 5 10 15 Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu 20 25 30 Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser 35 40 45 Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe 50 55 60 Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln 65 70 75 80 Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr 85 90 95 His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser Thr Thr 100 105 110 Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp Gln Gly 115 120 125 Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 145 150 155 160 Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 165 170 175 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 180 185 190 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 195 200 205 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 210 215 220 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 225 230 235 240 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 245 250 255 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 260 265 270 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn 275 280 285 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 290 295 300 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 305 310 315 320 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 325 330 335 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 340 345 350 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 355 360 365 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 370 <210> 71 <211> 1125 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1122) <400> 71 tct ggg cgt ggg gag gct gag aca cgg tgg tgc atc tac tac aac gcc 48 Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Trp Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala 1 5 10 15 aac tgg gag ctg gag cgc acc aac cag agc ggc ctg gag cgc tgc gaa 96 Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu 20 25 30 ggc gag cag gac aag cgg ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc aac agc 144 Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser 35 40 45 tct ggc acc atc gag ctc gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat gac ttc 192 Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe 50 55 60 aac tgc tac gat agg cag gag tgt gtg gcc act gag gag aac ccc cag 240 Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln 65 70 75 80 gtg tac ttc tgc tgc tgt gaa ggc aac ttc tgc aac gag cgc ttc act 288 Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr 85 90 95 cat ttg cca gag gct ggg ggc ccg gaa gga ccc tgg gcc tcc acc acc 336 His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser Thr Thr 100 105 110 atc ccc tct ggt ggg cct gaa gcc act gca gct gct gga gat caa ggc 384 Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp Gln Gly 115 120 125 tcg ggg gcg ctt tgg ctg tgt ctg gaa ggc cca gct cat gaa gga gga 432 Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu Gly Gly 130 135 140 gga gga tct gac aaa act cac aca tgc cca ccg tgc cca gca cct gaa 480 Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 145 150 155 160 ctc ctg ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac 528 Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 165 170 175 acc ctc atg atc tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac 576 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 180 185 190 gtg agc cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc 624 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 195 200 205 gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag tac aac 672 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 210 215 220 agc acg tac cgt gtg gtc agc gtc ctc acc gtc ctg cac cag gac tgg 720 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 225 230 235 240 ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc ctc cca 768 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 245 250 255 gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc cga gaa 816 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 260 265 270 cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gat gag ctg acc aag aac 864 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn 275 280 285 cag gtc agc ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc 912 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 290 295 300 gcc gtg gag tgg gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc 960 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 305 310 315 320 acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag 1008 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 325 330 335 ctc acc gtg gac aag agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc 1056 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 340 345 350 tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc 1104 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 355 360 365 tcc ctg tct ccg ggt aaa tga 1125 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 370 <210> 72 <211> 374 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 72 Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Trp Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala 1 5 10 15 Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu 20 25 30 Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser 35 40 45 Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe 50 55 60 Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln 65 70 75 80 Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr 85 90 95 His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser Thr Thr 100 105 110 Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp Gln Gly 115 120 125 Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu Gly Gly 130 135 140 Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 145 150 155 160 Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 165 170 175 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 180 185 190 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 195 200 205 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 210 215 220 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 225 230 235 240 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 245 250 255 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 260 265 270 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn 275 280 285 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 290 295 300 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 305 310 315 320 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 325 330 335 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 340 345 350 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 355 360 365 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 370 <210> 73 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 73 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Trp 1 5 10 15 Pro Gly <210> 74 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 74 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly <210> 75 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 75 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 76 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 76 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 15 <210> 77 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 77 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 78 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 78 Glu Ser Lys Thr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro 1 5 10 <210> 79 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 79 Gly Gly Gly Gly Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 80 <211> 216 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 80 Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 1 5 10 15 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 20 25 30 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val 35 40 45 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 50 55 60 Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln 65 70 75 80 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly 85 90 95 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro 100 105 110 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 115 120 125 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 130 135 140 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 145 150 155 160 Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 165 170 175 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 180 185 190 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 195 200 205 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 210 215 <210> 81 <211> 648 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(648) <220> <221> modified_base <222> (3)..(3) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (6)..(6) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (9)..(9) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (12)..(12) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (15)..(15) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (18)..(18) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (21)..(24) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (27)..(27) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (33)..(33) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (39)..(39) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (42)..(42) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (48)..(48) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (57)..(57) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (60)..(60) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (67)..(72) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (75)..(75) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (78)..(78) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (84)..(84) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (87)..(87) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (93)..(93) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (96)..(96) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (99)..(99) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (105)..(108) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (120)..(120) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (126)..(126) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (144)..(144) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (150)..(150) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (153)..(153) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (159)..(159) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (168)..(168) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (174)..(174) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (180)..(183) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (199)..(201) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (204)..(204) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (208)..(210) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (213)..(213) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (216)..(219) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (222)..(222) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (225)..(225) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (228)..(228) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (231)..(231) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (234)..(234) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (249)..(249) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (255)..(255) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (276)..(279) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (288)..(288) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (291)..(291) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (294)..(294) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (297)..(297) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (300)..(300) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (312)..(312) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (316)..(318) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (324)..(324) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (330)..(330) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (336)..(339) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (345)..(345) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (351)..(351) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (357)..(357) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (360)..(360) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (363)..(363) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (366)..(372) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (384)..(384) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (396)..(399) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (402)..(402) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (405)..(405) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (411)..(411) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (414)..(414) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (420)..(420) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (429)..(432) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (441)..(441) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (444)..(444) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (454)..(456) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (462)..(462) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (468)..(468) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (486)..(486) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (489)..(489) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (492)..(492) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (495)..(495) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (501)..(501) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (505)..(507) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (513)..(516) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (525)..(525) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (529)..(531) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (537)..(537) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (540)..(540) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (543)..(543) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (550)..(555) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (567)..(567) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (573)..(573) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (577)..(579) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (583)..(585) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (588)..(588) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (600)..(600) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (603)..(603) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (618)..(618) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (625)..(627) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (630)..(633) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (636)..(639) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (642)..(642) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (645)..(645) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 81 gcn ccn ccn gtn gcn ggn ccn nnn gtn tty ytn tty ccn ccn aar ccn 48 Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 1 5 10 15 aar gay acn ytn atg ath nnn nnn acn ccn gar gtn acn tgy gtn gtn 96 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 20 25 30 gtn gay gtn nnn cay gar gay ccn gar gtn car tty aay tgg tay gtn 144 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val 35 40 45 gay ggn gtn gar gtn cay aay gcn aar acn aar ccn nnn gar gar car 192 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 50 55 60 tty aay nnn acn tty nnn gtn gtn nnn gtn ytn acn gtn gtn cay car 240 Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln 65 70 75 80 gay tgg ytn aay ggn aar gar tay aar tgy aar gtn nnn aay aar ggn 288 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly 85 90 95 ytn ccn gcn ccn ath gar aar acn ath nnn aar acn aar ggn car ccn 336 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro 100 105 110 nnn gar ccn car gtn tay acn ytn ccn ccn nnn nnn gar gar atg acn 384 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 115 120 125 aar aay car gtn nnn ytn acn tgy ytn gtn aar ggn tty tay ccn nnn 432 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 130 135 140 gay ath gcn gtn gar tgg gar nnn aay ggn car ccn gar aay aay tay 480 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 145 150 155 160 aar acn acn ccn ccn atg ytn gay nnn gay ggn nnn tty tty ytn tay 528 Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 165 170 175 nnn aar ytn acn gtn gay aar nnn nnn tgg car car ggn aay gtn tty 576 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 180 185 190 nnn tgy nnn gtn atg cay gar gcn ytn cay aay cay tay acn car aar 624 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 195 200 205 nnn ytn nnn ytn nnn ccn ggn aar 648 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 210 215 <210> 82 <211> 217 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 82 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Ile Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Gly Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 210 215 <210> 83 <211> 651 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 83 cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacatcctc 60 atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct 120 gaggtcaagt tcaactggta cgtgggcggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg 180 cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag 240 gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaagccct cccagccccc 300 atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg 360 cccccatccc gggatgagct gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc 420 ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac 480 aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctctacag caagctcacc 540 gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct 600 ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtctc cgggtaaatg a 651 <210> 84 <211> 217 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 84 Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 210 215 <210> 85 <211> 651 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(651) <220> <221> modified_base <222> (3)..(3) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (6)..(6) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (15)..(15) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (18)..(18) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (21)..(21) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (24)..(27) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (30)..(30) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (36)..(36) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (42)..(42) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (45)..(45) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (51)..(51) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (60)..(60) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (63)..(63) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (70)..(75) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (78)..(78) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (81)..(81) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (87)..(87) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (90)..(90) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (96)..(96) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (99)..(99) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (102)..(102) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (108)..(111) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (123)..(123) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (129)..(129) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (147)..(147) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (153)..(153) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (156)..(156) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (162)..(162) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (171)..(171) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (177)..(177) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (183)..(186) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (202)..(204) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (207)..(207) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (211)..(213) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (216)..(216) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (219)..(222) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (225)..(225) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (228)..(228) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (231)..(231) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (234)..(234) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (237)..(237) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (252)..(252) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (258)..(258) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (279)..(282) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (291)..(291) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (294)..(294) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (297)..(303) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (315)..(315) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (319)..(321) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (327)..(327) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (333)..(333) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (339)..(342) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (348)..(348) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (354)..(354) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (360)..(360) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (363)..(363) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (366)..(366) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (369)..(372) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (387)..(387) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (399)..(402) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (405)..(405) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (408)..(408) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (414)..(414) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (417)..(417) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (423)..(423) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (432)..(435) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (444)..(444) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (447)..(447) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (457)..(459) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (465)..(465) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (471)..(471) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (489)..(489) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (492)..(492) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (495)..(495) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (498)..(498) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (501)..(501) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (504)..(504) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (508)..(510) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (516)..(519) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (528)..(528) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (532)..(537) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (540)..(540) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (543)..(543) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (546)..(546) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (553)..(558) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (570)..(570) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (576)..(576) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (580)..(582) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (586)..(588) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (591)..(591) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (603)..(603) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (606)..(606) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (621)..(621) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (628)..(630) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (633)..(636) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (639)..(642) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (645)..(645) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (648)..(648) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 85 gcn ccn gar tty ytn ggn ggn ccn nnn gtn tty ytn tty ccn ccn aar 48 Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 ccn aar gay acn ytn atg ath nnn nnn acn ccn gar gtn acn tgy gtn 96 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 gtn gtn gay gtn nnn car gar gay ccn gar gtn car tty aay tgg tay 144 Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 gtn gay ggn gtn gar gtn cay aay gcn aar acn aar ccn nnn gar gar 192 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 car tty aay nnn acn tay nnn gtn gtn nnn gtn ytn acn gtn ytn cay 240 Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 car gay tgg ytn aay ggn aar gar tay aar tgy aar gtn nnn aay aar 288 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 ggn ytn ccn nnn nnn ath gar aar acn ath nnn aar gcn aar ggn car 336 Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 ccn nnn gar ccn car gtn tay acn ytn ccn ccn nnn car gar gar atg 384 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met 115 120 125 acn aar aay car gtn nnn ytn acn tgy ytn gtn aar ggn tty tay ccn 432 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 nnn gay ath gcn gtn gar tgg gar nnn aay ggn car ccn gar aay aay 480 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 tay aar acn acn ccn ccn gtn ytn gay nnn gay ggn nnn tty tty ytn 528 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 tay nnn nnn ytn acn gtn gay aar nnn nnn tgg car gar ggn aay gtn 576 Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val 180 185 190 tty nnn tgy nnn gtn atg cay gar gcn ytn cay aay cay tay acn car 624 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 aar nnn ytn nnn ytn nnn ytn ggn aar 651 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 210 215 <210> 86 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 86 Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg 1 5 10 15 Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg 20 25 30 Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu 35 40 45 Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln 50 55 60 Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys 65 70 75 80 Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly 85 90 95 Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr 100 105 110 <210> 87 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 87 Glu Thr Arg Trp Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg 1 5 10 15 Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg 20 25 30 Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu 35 40 45 Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln 50 55 60 Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys 65 70 75 80 Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly 85 90 95 Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr 100 105 110 <210> 88 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 88 Glu Thr Arg Tyr Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg 1 5 10 15 Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg 20 25 30 Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu 35 40 45 Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln 50 55 60 Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys 65 70 75 80 Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly 85 90 95 Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr 100 105 110 <210> 89 <211> 338 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 89 Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg 1 5 10 15 Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg 20 25 30 Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu 35 40 45 Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln 50 55 60 Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys 65 70 75 80 Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly 85 90 95 Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 130 135 140 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 145 150 155 160 Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 165 170 175 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg 180 185 190 Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 195 200 205 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu 210 215 220 Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 225 230 235 240 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 245 250 255 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 260 265 270 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 275 280 285 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 290 295 300 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 305 310 315 320 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 325 330 335 Gly Lys <210> 90 <211> 1014 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1014) <400> 90 gag aca cgg gag tgc atc tac tac aac gcc aac tgg gag ctg gag cgc 48 Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg 1 5 10 15 acc aac cag agc ggc ctg gag cgc tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg 96 Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg 20 25 30 ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc aac agc tct ggc acc atc gag ctc 144 Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu 35 40 45 gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat gac ttc aac tgc tac gat agg cag 192 Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln 50 55 60 gag tgt gtg gcc act gag gag aac ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt 240 Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys 65 70 75 80 gag ggc aac ttc tgc aac gag cgc ttc act cat ttg cca gag gct ggg 288 Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly 85 90 95 ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca ccc ccg aca gcc ccc acc gga gga 336 Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly 100 105 110 gga gga tct gtc gag tgc cca ccg tgc cca gca cca cct gtg gca gga 384 Gly Gly Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 115 120 125 ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc atg atc 432 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 130 135 140 tcc cgg acc cct gag gtc acg tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa 480 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 145 150 155 160 gac ccc gag gtc cag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat 528 Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 165 170 175 aat gcc aag aca aag cca cgg gag gag cag ttc aac agc acg ttc cgt 576 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg 180 185 190 gtg gtc agc gtc ctc acc gtt gtg cac cag gac tgg ctg aac ggc aag 624 Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 195 200 205 gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa ggc ctc cca gcc ccc atc gag 672 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu 210 215 220 aaa acc atc tcc aaa acc aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tac 720 Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 225 230 235 240 acc ctg ccc cca tcc cgg gag gag atg acc aag aac cag gtc agc ctg 768 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 245 250 255 acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg 816 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 260 265 270 gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc aca cct ccc atg 864 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 275 280 285 ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac 912 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 290 295 300 aag agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat 960 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 305 310 315 320 gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg 1008 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 325 330 335 ggt aaa 1014 Gly Lys <210> 91 <211> 338 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 91 Glu Thr Arg Trp Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg 1 5 10 15 Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg 20 25 30 Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu 35 40 45 Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln 50 55 60 Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys 65 70 75 80 Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly 85 90 95 Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 130 135 140 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 145 150 155 160 Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 165 170 175 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg 180 185 190 Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 195 200 205 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu 210 215 220 Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 225 230 235 240 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 245 250 255 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 260 265 270 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 275 280 285 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 290 295 300 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 305 310 315 320 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 325 330 335 Gly Lys <210> 92 <211> 1014 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1014) <400> 92 gag aca cgg tgg tgc atc tac tac aac gcc aac tgg gag ctg gag cgc 48 Glu Thr Arg Trp Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg 1 5 10 15 acc aac cag agc ggc ctg gag cgc tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg 96 Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg 20 25 30 ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc aac agc tct ggc acc atc gag ctc 144 Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu 35 40 45 gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat gac ttc aac tgc tac gat agg cag 192 Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln 50 55 60 gag tgt gtg gcc act gag gag aac ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt 240 Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys 65 70 75 80 gag ggc aac ttc tgc aac gag cgc ttc act cat ttg cca gag gct ggg 288 Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly 85 90 95 ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca ccc ccg aca gcc ccc acc gga gga 336 Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly 100 105 110 gga gga tct gtc gag tgc cca ccg tgc cca gca cca cct gtg gca gga 384 Gly Gly Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 115 120 125 ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc atg atc 432 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 130 135 140 tcc cgg acc cct gag gtc acg tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa 480 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 145 150 155 160 gac ccc gag gtc cag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat 528 Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 165 170 175 aat gcc aag aca aag cca cgg gag gag cag ttc aac agc acg ttc cgt 576 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg 180 185 190 gtg gtc agc gtc ctc acc gtt gtg cac cag gac tgg ctg aac ggc aag 624 Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 195 200 205 gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa ggc ctc cca gcc ccc atc gag 672 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu 210 215 220 aaa acc atc tcc aaa acc aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tac 720 Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 225 230 235 240 acc ctg ccc cca tcc cgg gag gag atg acc aag aac cag gtc agc ctg 768 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 245 250 255 acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg 816 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 260 265 270 gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc aca cct ccc atg 864 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 275 280 285 ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac 912 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 290 295 300 aag agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat 960 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 305 310 315 320 gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg 1008 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 325 330 335 ggt aaa 1014 Gly Lys <210> 93 <211> 338 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 93 Glu Thr Arg Tyr Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg 1 5 10 15 Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg 20 25 30 Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu 35 40 45 Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln 50 55 60 Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys 65 70 75 80 Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly 85 90 95 Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 130 135 140 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 145 150 155 160 Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 165 170 175 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg 180 185 190 Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 195 200 205 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu 210 215 220 Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 225 230 235 240 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 245 250 255 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 260 265 270 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 275 280 285 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 290 295 300 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 305 310 315 320 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 325 330 335 Gly Lys <210> 94 <211> 1014 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1014) <400> 94 gag aca cgg tac tgc atc tac tac aac gcc aac tgg gag ctg gag cgc 48 Glu Thr Arg Tyr Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg 1 5 10 15 acc aac cag agc ggc ctg gag cgc tgc gaa ggc gag cag gac aag cgg 96 Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg 20 25 30 ctg cac tgc tac gcc tcc tgg cgc aac agc tct ggc acc atc gag ctc 144 Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu 35 40 45 gtg aag aag ggc tgc tgg cta gat gac ttc aac tgc tac gat agg cag 192 Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln 50 55 60 gag tgt gtg gcc act gag gag aac ccc cag gtg tac ttc tgc tgc tgt 240 Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys 65 70 75 80 gag ggc aac ttc tgc aac gag cgc ttc act cat ttg cca gag gct ggg 288 Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly 85 90 95 ggc ccg gaa gtc acg tac gag cca ccc ccg aca gcc ccc acc gga gga 336 Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly 100 105 110 gga gga tct gtc gag tgc cca ccg tgc cca gca cca cct gtg gca gga 384 Gly Gly Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 115 120 125 ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc ctc atg atc 432 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 130 135 140 tcc cgg acc cct gag gtc acg tgc gtg gtg gtg gac gtg agc cac gaa 480 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 145 150 155 160 gac ccc gag gtc cag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cat 528 Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 165 170 175 aat gcc aag aca aag cca cgg gag gag cag ttc aac agc acg ttc cgt 576 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg 180 185 190 gtg gtc agc gtc ctc acc gtt gtg cac cag gac tgg ctg aac ggc aag 624 Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 195 200 205 gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa ggc ctc cca gcc ccc atc gag 672 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu 210 215 220 aaa acc atc tcc aaa acc aaa ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tac 720 Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 225 230 235 240 acc ctg ccc cca tcc cgg gag gag atg acc aag aac cag gtc agc ctg 768 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 245 250 255 acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg 816 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 260 265 270 gag agc aat ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc aca cct ccc atg 864 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 275 280 285 ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac agc aag ctc acc gtg gac 912 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 290 295 300 aag agc agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat 960 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 305 310 315 320 gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg 1008 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 325 330 335 ggt aaa 1014 Gly Lys <210> 95 <211> 338 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 95 Glu Thr Arg Ala Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg 1 5 10 15 Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg 20 25 30 Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu 35 40 45 Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln 50 55 60 Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys 65 70 75 80 Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly 85 90 95 Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 130 135 140 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 145 150 155 160 Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 165 170 175 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg 180 185 190 Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 195 200 205 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu 210 215 220 Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 225 230 235 240 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 245 250 255 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 260 265 270 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 275 280 285 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 290 295 300 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 305 310 315 320 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 325 330 335 Gly Lys <210> 96 <211> 1014 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1014) <220> <221> modified_base <222> (6)..(9) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (12)..(12) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (30)..(30) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (42)..(42) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (46)..(48) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (51)..(51) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (58)..(60) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (63)..(63) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (66)..(66) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (70)..(72) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (81)..(81) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (94)..(96) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (99)..(99) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (111)..(114) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (118)..(120) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (124)..(129) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (132)..(132) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (135)..(135) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (144)..(144) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (147)..(147) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (156)..(156) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (165)..(165) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (187)..(189) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (201)..(201) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (204)..(204) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (207)..(207) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (219)..(219) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (225)..(225) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (246)..(246) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (262)..(264) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (270)..(270) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (276)..(276) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (279)..(279) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (285)..(285) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (288)..(288) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (291)..(291) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (294)..(294) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (300)..(300) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (303)..(303) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (312)..(312) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (315)..(315) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (318)..(318) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (321)..(321) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (324)..(324) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (327)..(327) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (330)..(330) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (333)..(333) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (336)..(336) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (339)..(339) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (342)..(345) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (348)..(348) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (357)..(357) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (360)..(360) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (366)..(366) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (369)..(369) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (372)..(372) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (375)..(375) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (378)..(378) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (381)..(381) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (384)..(384) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (387)..(390) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (393)..(393) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (399)..(399) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (405)..(405) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (408)..(408) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (414)..(414) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (423)..(423) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (426)..(426) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (433)..(438) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (441)..(441) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (444)..(444) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (450)..(450) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (453)..(453) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (459)..(459) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (462)..(462) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (465)..(465) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (471)..(474) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (486)..(486) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (492)..(492) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (510)..(510) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (516)..(516) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (519)..(519) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (525)..(525) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (534)..(534) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (540)..(540) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (546)..(549) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (565)..(567) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (570)..(570) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (574)..(576) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (579)..(579) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (582)..(585) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (588)..(588) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (591)..(591) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (594)..(594) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (597)..(597) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (600)..(600) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (615)..(615) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (621)..(621) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (642)..(645) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (654)..(654) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (657)..(657) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (660)..(660) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (663)..(663) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (666)..(666) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (678)..(678) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (682)..(684) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (690)..(690) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (696)..(696) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (702)..(705) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (711)..(711) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (717)..(717) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (723)..(723) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (726)..(726) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (729)..(729) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (732)..(738) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (750)..(750) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (762)..(765) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (768)..(768) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (771)..(771) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (777)..(777) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (780)..(780) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (786)..(786) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (795)..(798) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (807)..(807) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (810)..(810) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (820)..(822) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (828)..(828) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (834)..(834) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (852)..(852) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (855)..(855) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (858)..(858) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (861)..(861) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (867)..(867) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (871)..(873) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (879)..(882) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (891)..(891) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (895)..(897) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (903)..(903) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (906)..(906) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (909)..(909) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (916)..(921) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (933)..(933) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (939)..(939) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (943)..(945) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (949)..(951) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (954)..(954) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (966)..(966) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (969)..(969) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (984)..(984) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (991)..(993) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (996)..(999) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (1002)..(1005) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (1008)..(1008) <223> a, c, t, g, unknown or other <220> <221> modified_base <222> (1011)..(1011) <223> a, c, t, g, unknown or other <400> 96 gar acn nnn gcn tgy ath tay tay aay gcn aay tgg gar ytn gar nnn 48 Glu Thr Arg Ala Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg 1 5 10 15 acn aay car nnn ggn ytn gar nnn tgy gar ggn gar car gay aar nnn 96 Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg 20 25 30 ytn cay tgy tay gcn nnn tgg nnn aay nnn nnn ggn acn ath gar ytn 144 Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu 35 40 45 gtn aar aar ggn tgy tgg ytn gay gay tty aay tgy tay gay nnn car 192 Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln 50 55 60 gar tgy gtn gcn acn gar gar aay ccn car gtn tay tty tgy tgy tgy 240 Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys 65 70 75 80 gar ggn aay tty tgy aay gar nnn tty acn cay ytn ccn gar gcn ggn 288 Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly 85 90 95 ggn ccn gar gtn acn tay gar ccn ccn ccn acn gcn ccn acn ggn ggn 336 Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly 100 105 110 ggn ggn nnn gtn gar tgy ccn ccn tgy ccn gcn ccn ccn gtn gcn ggn 384 Gly Gly Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 115 120 125 ccn nnn gtn tty ytn tty ccn ccn aar ccn aar gay acn ytn atg ath 432 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 130 135 140 nnn nnn acn ccn gar gtn acn tgy gtn gtn gtn gay gtn nnn cay gar 480 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 145 150 155 160 gay ccn gar gtn car tty aay tgg tay gtn gay ggn gtn gar gtn cay 528 Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 165 170 175 aay gcn aar acn aar ccn nnn gar gar car tty aay nnn acn tty nnn 576 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg 180 185 190 gtn gtn nnn gtn ytn acn gtn gtn cay car gay tgg ytn aay ggn aar 624 Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 195 200 205 gar tay aar tgy aar gtn nnn aay aar ggn ytn ccn gcn ccn ath gar 672 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu 210 215 220 aar acn ath nnn aar acn aar ggn car ccn nnn gar ccn car gtn tay 720 Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 225 230 235 240 acn ytn ccn ccn nnn nnn gar gar atg acn aar aay car gtn nnn ytn 768 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 245 250 255 acn tgy ytn gtn aar ggn tty tay ccn nnn gay ath gcn gtn gar tgg 816 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 260 265 270 gar nnn aay ggn car ccn gar aay aay tay aar acn acn ccn ccn atg 864 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 275 280 285 ytn gay nnn gay ggn nnn tty tty ytn tay nnn aar ytn acn gtn gay 912 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 290 295 300 aar nnn nnn tgg car car ggn aay gtn tty nnn tgy nnn gtn atg cay 960 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 305 310 315 320 gar gcn ytn cay aay cay tay acn car aar nnn ytn nnn ytn nnn ccn 1008 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 325 330 335 ggn aar 1014 Gly Lys <210> 97 <211> 338 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Ala, Phe, Gln, Val, Ile, Leu, Met, Lys, His, Trp or Tyr <400> 97 Glu Thr Arg Xaa Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg 1 5 10 15 Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg 20 25 30 Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu 35 40 45 Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln 50 55 60 Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys 65 70 75 80 Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly 85 90 95 Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Ser Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 130 135 140 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 145 150 155 160 Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 165 170 175 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg 180 185 190 Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 195 200 205 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu 210 215 220 Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 225 230 235 240 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 245 250 255 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 260 265 270 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 275 280 285 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 290 295 300 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 305 310 315 320 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 325 330 335 Gly Lys <210> 98 <211> 367 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (64)..(64) <223> Ala or Arg <400> 98 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Trp 1 5 10 15 Pro Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Xaa 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Gly Ser Val Asp Lys Thr His 130 135 140 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 145 150 155 160 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 165 170 175 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 180 185 190 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 195 200 205 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 210 215 220 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 225 230 235 240 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 245 250 255 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 260 265 270 Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 275 280 285 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 290 295 300 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 305 310 315 320 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 325 330 335 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 340 345 350 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 355 360 365 <210> 99 <211> 392 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (64)..(64) <223> Ala or Arg <400> 99 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Trp 1 5 10 15 Pro Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gly Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Xaa 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser 115 120 125 Thr Thr Ile Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp 130 135 140 Gln Gly Ser Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu 145 150 155 160 Gly Gly Gly Gly Ser Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 165 170 175 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 180 185 190 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 195 200 205 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 210 215 220 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 225 230 235 240 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 245 250 255 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 260 265 270 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 275 280 285 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu 290 295 300 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 305 310 315 320 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 325 330 335 Tyr Leu Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 340 345 350 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 355 360 365 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 370 375 380 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 385 390

Claims (53)

1. i) 변이체 액티빈 IIB 수용체 폴리펩티드(vActRIIB); 및 ii) 5-플루오로우라실(5-FU)을 포함하는 화학치료제를 포함하는 약학 조성물로,
   상기 폴리펩티드는 서열번호 91의 아미노산 서열을 포함하고, 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11과 결합할 수 있는 폴리펩티드인, 약학 조성물.
2. i) 변이체 액티빈 IIB 수용체 폴리펩티드(vActRIIB); 및 ii) 화학치료제를 포함하는 약학 조성물로,
   상기 폴리펩티드는 28번 위치의 아미노산에서의 단일 아미노산의 치환을 제외한 서열번호 18의 폴리펩티드 서열을 포함하고, 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11과 결합할 수 있는 폴리펩티드 서열을 포함하는, 약학 조성물.
   
3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 vActRIIB 폴리펩티드 28번 위치의 아미노산에서의 치환은 E 대신 A, F, Q, V, I, L, M, K, H, W 및 Y로 구성되는 아미노산의 군으로부터 선택되는 아미노산으로 치환되는 것인, 약학 조성물.
   
4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 vActRIIB 폴리펩티드 28번 위치의 아미노산에서의 치환은 E 대신에 A, W 및 Y로 구성되는 아미노산의 군으로부터 선택되는 아미노산으로 치환되는 것인, 약학 조성물.
   
5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 vActRIIB 폴리펩티드 28번 위치의 아미노산에서의 치환은 W가 되는 것인, 약학 조성물.
   
6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드는 서열번호 91의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 또는 폴리펩티드는 서열번호 91의 폴리펩티드 서열로 구성되는 것인, 약학 조성물.
   
7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 vActRIIB 폴리펩티드는 N-말단 신호 서열을 결여한 것인, 약학 조성물.
   
8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학치료제는 뉴클레오시드 유사체인 것인, 약학 조성물.
   
9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학치료제는 5-플루오로우라실인 것인, 약학 조성물.
   
10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학치료제는 다카르바진인 것인, 약학 조성물.
    
11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
    
12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항의 조성물을 치료적 유효량으로 치료를 요하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 대상의 액티빈 활성을 저해하는 방법.
    
13. 제 12 항에 있어서, 상기 투여는 상기 대상에서 인산염 완충 식염수(PBS)를 투여한 대조군 대상과 비교하여 혈관형성 인자의 발현 수준의 감소를 가져오는 것인, 방법.
    
14. 제 13 항에 있어서, 상기 혈관형성 인자는 혈관 내피 성장 인자(VEGF), Ang-1, 엔도글린, 오스테로폰틴, IGFBP-1, 또는 IGFBP-2인, 방법.
    
15. 제 12 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 상기 대상에서 PBS를 투여한 대조군 대상과 비교하여 카스파아제 3 활성화의 증가를 가져오는 것인, 방법.
    
16. 제 12 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 상기 대상에서 PBS를 투여한 대조군 대상과 비교하여 세포자살의 증가를 가져오는 것인, 방법.
    
17. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항의 조성물을 치료적 유효량으로 치료를 요하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 대상의 액티빈이 과발현되는 질환을 치료하는 방법.
    
18. 제 17 항에 있어서, 상기 질환은 암인 것인, 방법.
    
19. 제 18 항에 있어서, 상기 질환은 생식선 암, 고환암, 난소암, 피부암, 또는 흑색종인, 방법.
    
20. 제 17 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 상기 대상에서 인산염 완충 식염수(PBS)를 투여한 대조군 대상과 비교하여 혈관형성 인자의 발현 수준의 감소를 가져오는 것인, 방법.
    
21. 제 20 항에 있어서, 상기 혈관형성 인자는 혈관 내피 성장 인자(VEGF), Ang-1, 엔도글린, 오스테로폰틴, IGFBP-1, 또는 IGFBP-2인 것을 특징으로 하는 방법.
    
22. 제 17 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 상기 대상에서 PBS를 투여한 대조군 대상과 비교하여 카스파아제 3 활성화의 증가를 가져오는 것인, 방법.
    
23. 제 17 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 상기 대상에서 PBS를 투여한 대조군 대상과 비교하여 세포자살의 증가를 가져오는 것인, 방법.
    
24. 제 17 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 상기 대상에서 PBS를 투여한 대조군 대상과 비교하여 암 세포의 세포자살의 증가를 가져오는 것인, 방법.
    
25. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항의 조성물을 치료적 유효량으로 치료를 요하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 대상에서 종양 덩어리의 크기를 감소시키는 방법.
    
26. 제 25 항에 있어서, 상기 종양 덩어리는 생식선 암, 고환암, 난소암, 피부암, 또는 흑색종으로부터 얻어진 것인, 방법.
    
27. 조성물을 치료적 유효량으로 치료를 요하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는 대상의 생식선 암, 고환암, 난소암, 피부암, 또는 흑색종을 치료하는 방법으로,
    상기 조성물은 변이체 액티빈 IIB 수용체 폴리펩티드(vActRIIB)를 포함하고,
    상기 폴리펩티드는 28번 위치의 아미노산에서의 단일 아미노산의 치환을 제외한 서열번호 18의 폴리펩티드 서열을 포함하고, 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11과 결합할 수 있는, 방법.
    
28. 제 27 항에 있어서, 상기 암은 난소암인 것을 특징으로 하는 방법.
    
29. 제 27 항 또는 제 28 항에 있어서, 상기 vActRIIB 폴리펩티드 28번 위치의 아미노산에서의 치환은 E 대신에 A, F, Q, V, I, L, M, K, H, W 및 Y로 구성되는 아미노산의 군으로부터 선택되는 아미노산으로 치환되는 것인, 방법.
    
30. 제 27 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 vActRIIB 폴리펩티드 28번 위치의 아미노산에서의 치환은 E 대신에 A, W 및 Y로 구성되는 아미노산의 군으로부터 선택되는 아미노산으로 치환되는 것인, 방법.
    
31. 제 27 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 vActRIIB 폴리펩티드 28번 위치의 아미노산에서의 치환은 W가 되는 것인, 방법.
    
32. 제 27 항 내지 제 31 항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드는 서열번호 91의 폴리펩티드 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
    
33. 제 27 항 내지 제 32 항 중 어느 한 항에 있어서, vActRIIB 폴리펩티드는 N-말단 신호 서열을 결여한 것인, 방법.
    
34. 제 27 항 내지 제 33 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 상기 대상에서 인산염 완충 식염수(PBS)를 투여한 대조군 대상과 비교하여 혈관형성 인자의 발현 수준의 감소를 가져오는 것인, 방법.
    
35. 제 34 항에 있어서, 상기 혈관형성 인자는 혈관 내피 성장 인자(VEGF), Ang-1, 엔도글린, 오스테로폰틴, IGFBP-1, 또는 IGFBP-2인 것을 특징으로 하는 방법.
    
36. 제 27 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 상기 대상에서 PBS를 투여한 대조군 대상과 비교하여 카스파아제 3 활성화의 증가를 가져오는 것인, 방법.
    
37. 제 27 항 내지 제 36 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 상기 대상에서 PBS를 투여한 대조군 대상과 비교하여 세포자살의 증가를 가져오는 것인, 방법.
    
38. 제 27 항 내지 제 37 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 상기 대상에서 PBS를 투여한 대조군 대상과 비교하여 암 세포의 세포자살의 증가를 가져오는 것인, 방법.
    
39. 변이체 액티빈 IIB 수용체 폴리펩티드(vActRIIB)를 포함하는 약학 조성물의 치료적 유효량을 치료를 요하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 대상의 흑색종을 치료하는 방법으로,
    상기 폴리펩티드는 28번 위치의 아미노산에서의 단일 아미노산 치환을 제외한 서열번호 18의 폴리펩티드 서열을 포함하고,
    상기 촐리펩티드는 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11과 결합할 수 있는 것인, 방법.
    
40. 변이체 액티빈 IIB 수용체 폴리펩티드(vActRIIB)를 포함하는 약학 조성물의 치료적 유효량을 치료를 요하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 대상의 혈관형성 인자 과발현 상태를 치료하는 방법으로,
    상기 폴리펩티드는 28번 위치의 아미노산에서의 단일 아미노산 치환을 제외한 서열번호 18의 폴리펩티드 서열을 포함하고,
    상기 폴리펩티드는 미오스타틴, 액티빈 A, 또는 GDF-11과 결합할 수 있는 것인, 방법.
    
41. 제 40 항에 있어서, 상기 상태는 암인, 방법.
    
42. 제 41 항에 있어서, 상기 암은 난소암인, 방법.
    
43. 제 40 항 내지 제 42 항 중 어느 한 항에 있어서, VEGF-A 또는 Ang-1이 과발현되는 것인, 방법.
    
44. 제 40 항 내지 제 43 항에 있어서, 상기 vActRIIB 폴리펩티드의 28번 위치의 아미노산에서의 치환은 E 대신에 A, F, Q, V, I, L, M, K, H, W 및 Y로 구성되는 아미노산의 군으로부터 선택되는 아미노산으로 치환되는 것인, 방법.
    
45. 제 40 항 내지 제 44 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 vActRIIB 폴리펩티드의 28번 위치의 아미노산에서의 치환은 E 대신에 A, W 및 Y로 구성되는 아미노산의 군으로부터 선택되는 아미노산으로 치환되는 것인, 방법.
    
46. 제 40 항 내지 제 45 항 중 어느 한 항에 있어서,상기 vActRIIB 폴리펩티드의 28번 위치의 아미노산에서의 치환은 W가 되는 것인, 방법.
    
47. 제 40 항 내지 제 46 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 서열번호 91의 펩티드 서열을 포함하는, 방법.
    
48. 제 40 항 내지 제 47 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 vActRIIB 폴리펩티드는 N-말단 신호 서열을 결여한 것인, 방법.
    
49. 제 40 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 상기 대상에서 인산염 완충 식염수(PBS)를 투여한 대조군 대상과 비교하여 혈관형성 인자의 발현 수준의 감소를 가져오는 것인, 방법.
    
50. 제 49 항에 있어서, 상기 혈관형성 인자는 혈관 내피 성장 인자(VEGF), Ang-1, 엔도글린, 오스테로폰틴, IGFBP-1, 또는 IGFBP-2인 것을 특징으로 하는 방법.
    
51. 제 40 항 내지 제 50 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 상기 대상에서 PBS를 투여한 대조군 대상과 비교하여 카스파아제 3 활성화의 증가를 가져오는 것인, 방법.
    
52. 제 40 항 내지 제 51 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 상기 대상에서 PBS를 투여한 대조군 대상과 비교하여 세포자살의 증가를 가져오는 것인, 방법.
    
53. 제 40 항 내지 제 52 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 상기 대상에서 PBS를 투여한 대조군 대상과 비교하여 암 세포의 세포자살의 증가를 가져오는 것인, 방법.

Images