TW201116294A

TW201116294A - RSV F protein compositions and methods for making same

Info

Publication number: TW201116294A
Application number: TW099123300A
Authority: TW
Inventors: Kurt Swanson; Philip R Dormitzer
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2009-07-15
Filing date: 2010-07-15
Publication date: 2011-05-16
Also published as: CA2768186A1; US20110305727A1; EP2453918B1; US20230348574A1; US11261239B2; US11655284B2; US20120164176A1; US20220213177A1; EP4183412A1; US20220372115A1; BR112012001666A2; US20230348575A1; HRP20220756T1; EP4218800A1; CO6491045A2; PL3178490T3; US20220340645A1; SI3178490T1; EP3988115A2; US20230357370A1

Description

201116294 六、發明說明：相關申請案本申請案主張於20〇9年7月15日提出申請之美國專利申請案第61/225,805號及2010年1月12日提出申請之美國專利申請案第61/294,426號之權益。上述申請案之整體揭示係以參照方式納入本文。

域領術技之屬所明發 rL 本發明關於呼吸道合胞病毒（RSV ) F蛋白組成物及製造彼之方法。術技前先呼吸道合胞病毒（RSV)係有封套之不分段負股RNA病毒，屬於副黏液病毒科肺炎病毒屬。此病毒係最常造成吳童出生的第一年中之細支氣管炎及肺炎的原因。RSV亦達成重複感染包括嚴重下呼吸道疾病，這可能發生在任何与齡，特別是在老年人或心、肺或免疫系統不全者。爲了要感染宿主細胞，副黏液病毒諸如R S V (和其他眉封套病毒諸如流感病毒及HIV—樣）需要融合病毒之膜與相主細胞之膜。以RSV而言，該保留性融合蛋白（RSV F)藉由結合不可逆之蛋白質再摺疊與該等膜之並置以融合該病養及細胞之膜。在根據副黏液病毒硏究之現行模型中，聲 RSV F蛋白一開始摺疊成爲介穩態之「預融合」構型。在翅入細胞期間’該預融合構型進行再摺疊及構型變化成爲伤 -5- 201116294 之穩定的「融合後」構型。 RSV F蛋白係自mRNA被轉譯成大約574個胺基酸之蛋白質，稱爲F〇。F〇之轉譯後處理包括藉由內質網中之信號肽酶移除N端信號肽。F〇也在反式高基氏體中被細胞蛋白酶（特別是三呋喃基二氫咪唑（furin))切割二個位置（大約 109/1 10處及大約1 3 6/ 1 3 7處）。此切割導致移除短中介序列而產生二個維持彼此相關之次單位，稱爲F,(〜5 0 kDa ; C 端；大約殘基137至5 74)&F2 (〜20 kDa; N端；大約殘基1 至109)。F,包含位於彼之N端之疏水性融合肽，還有二個兩親性七重複區（HRA及HRB)。HRA係靠近融合肽，HRB 係靠近跨膜結構域。三個雜二聚體組合成病毒粒子中之FrF2同源三體》目前無法購得拮抗 RSV感染之疫苗，但是市場上有此需求。一種可能的產製疫苗之方法是以經純化之RSV F 蛋白爲基礎之次單位疫苗。然而，就此方法而言，需要的是呈單一形式及構型之經純化之RSV F蛋白以求長時間之穗定性、不同疫苗批量之一致性及方便純化。該RSV F蛋白可被截短（例如藉由刪除跨膜結構域及細胞質尾）以允許彼之表現爲可能具可溶性之胞外域。此外，雖然RSV F蛋白最初被轉譯爲單體，但是該等單體係經切割及組合成三體。當RSV F蛋白呈經切割之三體形式，該疏水性融合肽被暴露。在不同三體（例如可溶性胞外域三體）上經暴露之疏水性融合肽可彼此相關，導致形成玫瑰花簇。該疏水性融合肽亦可與來自例如被用來表現重組 201116294 可溶性RSV F蛋白之細胞的脂質及脂蛋白相連。由於RSV F蛋白在處理、結構及再摺疊之複雜性，因此難以獲得經純化之均質性免疫原性製劑。因此，我們需要經改善之RSV F蛋白組成物及製造 RSV F蛋白組成物之方法。【發明內容】

本發明關於含有一或多種呼吸道合胞病毒（RSV) F多肽之免疫原性組成物及某些經工程化之RSV F蛋白及編碼該等經工程化之RSV F蛋白之核酸。在一態樣中，該RSV F蛋白係可溶的。舉例來說，該 R S V F蛋白之跨膜區及細胞質尾可被刪除。在一些態樣中，該可溶性R S V F包含下列一或多項：1 )在二個三呋喃基二氫咪唑切割位置之一或二處發生一或多個突變，2)該融合肽發生一或多個突變’ 3)該p27連接子發生一或多個突變，4)含有經添加之寡聚序列，及5)含有經添加之胺基酸序列以提供蛋白酶切割位置。在額外或替代性態樣中，該 RSV F蛋白係單體、三體或單體與三體之組合。該三體可呈單分散或呈玫瑰花簇之形式。在其他額外或替代性態樣中’該RSV F蛋白可呈預融合構型、中間構型或融合後構型。在一態樣中，該免疫原性組成物包含一或多種呼吸道合胞病毒F (RSV F)多肽’該等多肽之胺基酸ι〇〇至15〇係 201116294 經 SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:ll、SEQ ID N0:13 、SEQIDNO:91或SEQIDNO:92之胺基酸序列取代。在一些實施態樣中，該RSV F多肽係可溶的（例如胞外域）。

在另一態樣中，該免疫原性組成物包含其中該RSV F 之胺基酸1〇〇至150係經SEQ ID NO:12之胺基酸序列取代之 RSV F多肽。在一些實施態樣中，該RSV F多肽係可溶的（例如胞外域）。在又一態樣中，該免疫原性組成物包含其中該RSV F 之胺基酸 1〇〇至 150 係經 SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、 SEQ ID NO:8、SEQ ID NO: 1 0、SEQ ID NO: 1 1、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:92之胺基酸序列取代之RSV F多肽。

在一些實施態樣中，該R S V F多肽係可溶的（例如胞外域）〇在另一態樣中，該免疫原性組成物包含其中胺基酸 100至150係經SEQ ID NO:9之胺基酸序列取代之RSV F多肽。在一些實施態樣中，該RSV F多肽係可溶的（例如胞外域 )0 在另一態樣中，該免疫原性組成物包含其中RSV F含有 SEQ ID ΝΟ:1 或 SEQ ID NO:2 之胺基酸 23 至 99 及 151 至 524 之RSV F多肽。在一些實施態樣中，該RSV F多肽係可溶的（例如胞外域）。 -8 - 201116294

在一態樣中，該免疫原性組成物選自S E Q ID Ν Ο : 4 9、 SEQ ID N〇:68、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、 SEQ ID N〇:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、 SEQ ID N〇:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48 ' SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、 SEQ ID N〇:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、 SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64 > SEQ ID NO:65 ' SEQ ID NO:66 ' SEQ ID NO：67 ' SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO: 88 ' SEQ ID NO:89 或 S E Q ID N O : 9 3之多肽。在一些實施態樣中，該信號肽及/ 或H IS標記係經删除。在一些實施態樣中，該RSV F多肽係可溶的（例如胞外域）。在一態樣中’該免疫原性組成物含有SEQ ID NO:68或替代性地SEQ ID NO:68中信號肽及可任意選擇之HIS標記係經刪除者。在一態樣中，該免疫原性組成物含有選自SEQ ID N〇:49、SEQ ID NO:71，或任何上述序歹IJ中信號肽及可任意選擇之Η I S標記係經刪除之多肽。在一些實施態樣中，該RSV F多肽係可溶的（例如胞外域）。在較佳之實施態樣中，該免疫原性組成物將包含佐劑 -9 - 201116294 。該佐劑係較佳地鋁鹽、水包鯊烯乳劑（諸如MF 59)、苯幷萘啶化合物、磷脂化合物（諸如E6020)、小分子免疫增強劑或前述任二者或任多者之組合。

本發明之另一態樣包括重組RSV F多肽。該RSV F係呈單體、三體、三體之玫瑰花簇或單體與三體之組合的形式。該重組多肽可能包含異源性寡聚結構域、表位或信號肽。該異源性寡聚結構域係較佳地源自流感血球凝集素、 SARS刺突蛋白、HIV gp41、HIV NadA、HIV經修飾之 GCN4或HIV ATC酶之三聚化結構域。在一態樣中，該重組RSV F多肽之胺基酸100至150係經 SEQ ID NO:9 ' SEQ ID NO: 12 ' SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:ll、SEQ ID NO:13 、SEQ ID NO:9 1或SEQ ID NO: 92之胺基酸序列取代。在一些實施態樣中，該RSV F多肽係可溶的（例如胞外域）。

在另一態樣中，該重組RSV F多肽之該RSV F之胺基酸100至150係經SEQ ID NO:12之胺基酸序列取代。在一些實施態樣中，該RS V F多肽係可溶的（例如胞外域）。在另一態樣中，該重組RSV F多肽之該RSV F之胺基酸 100 至 150 係經 SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:ll、SEQ ID N〇:13 或SEQ ID NO :92之胺基酸序列取代。在一些實施態樣中’ 該RSV F多肽係可溶的（例如胞外域）。 -10- 201116294 在又一態樣中’該重組RSV F多肽之該RSV F之胺基酸100至150係經SEQ ID NO:9之胺基酸序列取代。在一些實施態樣中，該RSV F多肽係可溶的（例如胞外域）。

在一態樣中，該重組多肽係選自SEQ ID NO:49、SEQ ID NO: 6 8 > SEQ ID NO:71 ' SEQ ID NO:25 ' SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、 SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、 SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、 SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、 SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、 SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、 SEQ ID NO :93或任何彼等之組合。可任意選擇的是，該信號肽及/或HIS標記係經刪除。在一些實施態樣中，該RSV F多肽係可溶的（例如胞外域）。又一態樣包括編碼任何前述多肽之核酸。該核酸可爲自我複製之RNA分子。本發明之另一態樣係一種包含編碼RSV F多肽之自我複製之RN A的免疫原性組成物。該免疫原性組成物可包含遞送系統。 -11 - 201116294 本發明之另一態樣包括藉由投予任何該等免疫原性組成物以誘導對RSV F之免疫反應之方法。

本發明關於製備組成物之方法及包含RSV F蛋白（諸如可溶性RSV F胞外域多肽）之組成物，包括免疫原性組成物。該RSV F胞外域多肽可呈單一形式，諸如未經切割之單體、未經切割之三體、經切割之三體或經切割之三體之玫瑰花簇。該RSV F胞外域多肽亦可呈二種或二種以上之形式，例如平衡存在之二種或二種以上之形式，諸如未經切割之單體與未經切割之三體之間的平衡。本發明提供多項優點。舉例來說，在免疫原性組成物中以單一所欲之形式存之RSV F，使得對個體投予該組成物時提供較可預期之免疫反應，且當調製成疫苗時具有較一致之穩定性及其他物理及化學特徵。

在一態樣中，本發明係一種供製備包含經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之組成物之方法。該方法包含a)提供包含一或多個蛋白酶切割位點之未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽，當切割時產生？1及F2片段，及b)以辨識該（等）蛋白酶切割位點之蛋白酶切割該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽。一般來說，該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之胺基酸序列包含經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位點，且該RSV F蛋白胞外域多肽係自以胺基酸101至胺基酸161 之位置處未經切割之形式（例如位置1 06至1 09及1 3 1至1 3 6 處之三呋喃基二氫咪唑切割位置未經切割）產製彼等之宿主細胞分泌。在一些實施態樣中，在a)中所提供之未經切 -12-

201116294 割之R S V F蛋白胞外域多肽係經純化。在a)中所提供之未經切割之r S V F蛋包含完整之融合肽或經改變之融合肽（例肽或經突變之融合肽）。當在a)中所提供之 F蛋白胞外域多肽包含完整之融合肽，步致形成三體之玫瑰花簇。當在a)中所提, RSV F蛋白胞外域多肽包含經改變之融合切割導致形成三體。該方法可另包含純化由切割該未經切胞外域多肽所產製之玫瑰花簇或三體之任佳之實施態樣中’由該方法所產製之經切胞外域多肽實質上不含脂質及脂蛋白。在另一態樣中，本發明係一種供製備 RSV F蛋白胞外域多肽單體、三體或單體組成物之方法。該方法包括a)提供含有未蛋白胞外域多肽之生物性物質，及b)自該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體或，該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位點，且外域多肽係自以胺基酸1 〇 1至胺基酸1 6 1之之形式（例如位置106至109及131至136處咪唑切割位置未經切割）產製彼等之宿主些實施態樣中，該未經切割之RSV F蛋白基酸序列另包含經改變之胰蛋白酶切割位

白胞外域多肽可如經刪除之融合 .未經切割之R S V 驟b )中之切割導供之未經切割之肽，步驟b )中之割之RSV F蛋白選性步驟。在較割之RSV F蛋白包含未經切割之與三體之組合之經切割之R S V F 生物性物質純化三體。一般來說胺基酸序列包含該RSV F蛋白胞位置處未經切割之三呋喃基二氫細胞分泌。在一胞外域多肽之胺置，且該RSV F -13- 201116294 蛋白胞外域多肽在胺基酸101至胺基酸161之間的位置處不被胰蛋白酶所切割。在其他實施態樣中，該未經切割之 RSV F蛋白胞外域多肽之胺基酸序列另包含經改變之融合肽。

在一些實施態樣中，未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽三體係經純化。在其他實施態樣中，未經切割之RSV F 蛋白胞外域多肽單體係經純化。在仍其他之實施態樣中，未經切割之R S V F蛋白胞外域單體及三體（可能呈動態平衡 )之混合物係經純化。在較佳之實施態樣中，由該方法所產製之經切割之RSV F蛋白胞外域多肽實質上不含脂質及脂蛋白。

在另一態樣中，本發明係一種供製備包含經切割之 RSV F蛋白胞外域多肽單體、三體或單體與三體之組合之組成物之方法。該方法包括a)提供含有經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之生物性物質，該等多肽含有經改變之融合肽，及b)自該生物性物質純化經切割之RSV F蛋白胞外域多肽。在一些實施態樣中，經切割之RSV F蛋白胞外域多肽三體係經純化。在其他實施態樣中，經切割之R S V F蛋白胞外域多肽單體係經純化。在仍其他之實施態樣中，經切割之RSV F蛋白胞外域單體及三體（可能呈動態平衡）之混合物係經純化。在較佳之實施態樣中，由該方法所產製之經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係較佳地實質上不含脂質及脂蛋白。在又一實施態樣中，含有經改變之融合肽的經 -14- 201116294 切割之RSV F蛋白胞外域三體係經純化。在其他態樣中，本發明提供利用本發明之方法所製備之組成物，包括免疫原性組成物。本發明之詳細說明

本發明關於呼吸道合胞病毒F (RSV F)多肽及/或蛋白、包含RSV F多肽及/或蛋白之免疫原性組成物、供製備 RSV F多肽及/或蛋白及含有RSV F多肽及/或蛋白之組成物之方法，及編碼RSV F多肽及/或蛋白之核酸。一般來說，該免疫原性組成物包含含有突變（例如胺基酸取代、刪除或添加）之RSV F多肽及/或蛋白，該等突變提供有利之特徵，諸如下列一或多項：1 )穩定之預融合或中間（非融合後）構型’ 2)減少或清除該融合肽之暴露， 3 )增進穩定性（例如減少聚集及/或降解），及4)更密切地模擬活性F1/F2病毒蛋白。該些特徵提供該等免疫原性組成物之優點及該等免疫原性組成物在製備上之優點。舉例來說，如此處所述，R S V F蛋白之非融合後構型（意即預融合構型、中間構型）可爲較佳之免疫原且誘發較佳之中和抗體反應。藉由例如導入突變或刪除至三呋喃基二氫咪唑切割位置以減少或消除該融合肽之暴露，將減少該多肽之疏水性及有利於純化，且亦能減少或消除該RSV F蛋白與投予該蛋白之個體中之細胞膜之相關。增進該蛋白之穩定性有助於製備其中該蛋白聚集或降解之傾向降低之免疫性組成物，以在對個體投予該組成物時提供更加可預測之免疫 -15- 201116294 反應。最後，藉由例如刪除所有或部分之p27連接子區域以模擬F1/F2病毒蛋白之突變RSV F多肽或蛋白可能誘發較佳之中和抗體反應。本發明之其他優點係於此處描述。本發明亦關於用於製備含有RSV F蛋白（特別是RSV F 胞外域多肽）之組成物之方法，另關於含有RSV F蛋白之組成物，包括免疫原性組成物。較佳地，該R S V F胞外域多肽係呈單一形式或呈已知形式之間之動態平衡。

定義

此處所使用之「族群」係指存在於組成物中超過一種 RSV F多肽或蛋白。該族群實質上可爲均質性的，其中實質上所有RSV F多肽或蛋白係實質上相同（例如相同胺基酸序列、相同構型）、異源性或具有所欲程度之同源性（例如至少約5〇%、至少約55%、至少約60%、至少約65% '至少約7 0 %、至少約7 5 %、至少約8 0 %、至少約8 5 %、至少約 90%、至少約95%、至少約99%之RSV F多肽或蛋白係預融合構型、融合後構型、單體或三體）。該RSV F蛋白之「融合後構型」係以六螺旋束存在爲特徵之三體，該六螺旋束包含3個HRB及3個HRA區。該RSV F蛋白之「預融合構型」係以含有三螺旋之三體爲特徵之構型，該三螺旋包含3個HRB區。此處所使用之「RSV F胞外域多肽」係指包含實質上成熟RSV F蛋白之細胞外部分的RSV F蛋白多肽，其具有或不具有信號肽（例如約胺基酸1至約胺基酸524，或約胺基 -16- 201116294 酸22至約胺基酸524)，但缺乏天然發生之Rsv F蛋白的跨膜結構域及細胞質尾。此處所使用之「經切割之RSV F胞外域多肽」係指在介於約1 0 1 / 1 0 2至約1 6 0 /1 6 1之間的一或多個位置處被切割以產生二個次單位之RSV F胞外域多肽’其中的一個次單位包含F,及另一次單位包含F2 °

此處所使用之「C端未經切割之RSV F胞外域多肽」係指在介於約101/102至約131/132之間的一或多個位置處被切割，但在介於約1 3 2 /1 3 3至約1 6 0 /1 6 1之間的一或多個位置處未經切割，以產生二個次單位之RSV F胞外域多肽，其中的一個次單位包含F,及另一次單位包含F2。此處所使用之「未經切割之RSV F胞外域多肽」係指在介於約101/102至約160/161之間的一或多個位置處未經切割之R S V F胞外域多肽。未經切割之R S V F胞外域多肽可爲例如單體或三體。此處所使用之「融合肽」係指RSV F蛋白之胺基酸137至 154° 此處所使用之「經改變之融合肽」係指其中一或多個胺基酸被獨立地取代或刪除之融合肽，包括取代或刪除介於位置137至154處之所有胺基酸。較佳地，包含「經改變之融合肽」之經切割之RSV F胞外域多肽不形成玫瑰花簇。此處所使用之「經純化」之蛋白或多肽係經重組或合成產製、或由彼之天然宿主產製且已與該重組或合成產製系統或天然宿主之其他成分分離之蛋白或多肽，以使存在於 -17- 201116294 組成物中該蛋白相對於其他巨分子成分之量係實質上高於存在於粗製劑中之該量。一般來說，經純化之蛋白將爲至少約5 0 %均質性且更佳地爲至少約7 5 %、至少約8 0 %、至少約8 5 %、至少約9 0 %、至少約9 5 %或實質上之均質性。

此處所使用之「實質上不含脂質及脂蛋白」係指當蛋白及/或多肽（例如RSV F多肽）之純度係於SDS PAGE膠體上觀察且總蛋白含量利用UV28 0吸收或BCA分析測量，而脂質及脂蛋白含量利用磷脂酶C測定法（瓦可（Wako)產品編號 43 3 -3 6 20 1 )測量時，組成物、蛋白及多肽就質量基礎而言至少約95%不含脂質及脂蛋白。

此處所使用之「經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位置」係指在天然發生之RSV F蛋白中被三呋喃基二氫咪唑或類三呋喃基二氫咪唑蛋白酶辨識及切割之大約位置106至109 處及大約位置133至136處之胺基酸序列，但是該胺基酸序列在未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽中包含一或多個胺基酸取代、一或多個胺基酸刪除，或一或多個胺基酸取代與一或多個胺基酸刪除之組合，以使包含經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位置之RSV F胞外域多肽係以該經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位置未經切割之形式自產製彼之細胞分泌。適用於本發明之RSV F蛋白胞外域之特徵在此處參照由源自A2株之RSV F蛋白之序列（SEQ ID ΝΟ:1)的胺基酸位置所識別之特定胺基酸加以描述。RSV F蛋白胞外域可具有源自該A2株或任何其他所欲毒株之F蛋白的胺基酸序列 -18- 201116294

。當使用源自A2株以外之毒株的F蛋白胞外域，該F蛋白之胺基酸係參照該源自A 2株之F蛋白之編號加以編號，並視需要插入間隔。此可藉由排比任何所欲之R S V F蛋白與該 A2株之F蛋白的序列達成，如此處所示之源自該A2株、 CP52株、B株、長株及該18537株之F蛋白。見圖5。序列排比係較佳地利用 Corpet，Nucleic Acids Research, 1998, 16(22) : 108 8 1 - 1 0 8 90所揭示之演算法產生，使用內建參數 (Blossum 62符號比較表、空位開放罰分：12、空位延伸罰分·· 2)。本發明提供可溶性R S V F多肽及蛋白、包含該可溶性 R S V F多肽及蛋白之免疫原性組成物以及包含編碼該可溶性RSV F多肽及蛋白之核酸（例如自我複製之RNA分子）的組成物。該RSV F多肽（例如胞外域多肽）可呈任何所欲形式，諸如單一形式，諸如未經切割之單體、未經切割之三體、經切割之三體或經切割之三體之玫瑰花簇。該RSV F胞外域多肽亦可呈二種或二種以上之形式，例如平衡存在之二種或二種以上之形式，諸如未經切割之單體與未經切割之三體之間的平衡。本發明提供多項優點。舉例來說，以 RSV之單一所欲形式或動態平衡之多種已知形式存在於免疫原性組成物中，提供更可預測之調製劑、可溶性及穩定性，且對個體投予該組成物時提供更可預測之免疫反應。較佳地，該RSV F胞外域多肽係呈單一形式，諸如未經切割之單體、未經切割之三體、經切割之三體、經切割 -19- 201116294 之三體之玫瑰花簇，或該等形式之亞群之間呈動態平衡（例如呈平衡之未經切割之單體與未經切割之三體）。在本發明之一態樣中，該RSV F多肽及蛋白係呈預融合構型。該預融合構型之表位可能較能誘發可辨識及中和天然病毒粒子之抗體。

在本發明之一實施態樣中，免疫原性組成物含有呈預融合構型之呼吸道合胞病毒F糖蛋白之族群。在本發明之另一態樣中，免疫原性組成物含有相較於經分離之RSV F 糖蛋白族群不偏好融合後構型之呼吸道合胞病毒F糖蛋白族群。本發明亦提供包含展示存在於呼吸道合胞病毒F糖蛋白之預融合或中間融合構型但不存在於該糖蛋白之融合後構型中之表位的多肽之免疫原性組成物。 F糖蛋白

RSV之F糖蛋白藉由融合病毒粒子之封套與宿主細胞質膜以指示病毒穿透》其爲第一型單次跨膜整合膜蛋白，具有四個一般結構域：N端ER轉位信號序列（SS)、胞外域 (ED)、跨膜結構域（TM)及細胞質尾（CT)。CT包含單一棕櫚醯基半胱胺酸殘基。F蛋白之序列在RSV分離株之間具高度保留性’但是不斷演化中（7)。與大部分副黏液病毒不同的是，RSV中之F蛋白可媒介進入及合胞形成而不需依賴其他病毒蛋白（其他副黏液病毒除F以外通常還需要HN)。 hRSV F mRNA被轉譯成574個胺基酸之前體蛋白，稱 -20- 201116294

爲F〇’其包含在N端之信號肽序列，該信號肽序列由內質網中之信號肽酶所移除。F〇的二個位置（胺基酸109/110處及136/1 3 7處）在反式高基氏體中被細胞蛋白酶（特別是三呋喃基二氫咪唑）所切割，導致移除短糖基化中介序列及產生二個次單位，稱爲F〆-〗。kDa; C端；殘基137至574)及 F2(〜20 kDa; N端；殘基1至109)(見例如圖1)。？，包含位於彼之N端之疏水性融合肽，還有二個疏水性七重複區（H R A 及HRB)。HRA係靠近融合肽，HRB係靠近跨膜結構域（見例如圖1 )。三個F , - F 2雜二聚體組合成病毒粒子中之同源三聚體。 RSV以單一血清型存在，但具有二個抗原性子群：A 及B。該二個子群之F糖蛋白具有大約90%之一致性。A子群、B子群或二者之組合或混合可被用於本發明。該A子群之示範序列係 SEQ ID NO: 1 (A2 株；GenBank GI: 1 3 8 2 5 1; Swiss Prot P03420)，B 子群之示範序列係 SEQ ID NO: 2 ( 1 8 53 7株；GI: 1 3 8 250; Swiss Prot P 1 3 843)。SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO: 2二者均爲5 74個胺基酸之序列。A2株之信號肽係胺基酸1至21，但是在18537株中爲1至22。在二個序列中，TM結構域係自約胺基酸5 3 0至5 5 0，但被選擇性地報告爲525至548。 SEQ ID NO: 1

1 MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIE 60 61 LSNIKENKCNGTDAKVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPPTNNRARRELPRFMNYTLN 120

121 NAKKTNVTLSKKRKRRFLGFLLGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAVVS 21 - 201116294 180

181 LSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVN 240

241 AGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEVLAYV 300

301 VQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQAETCKV 360

361 QSNRVFCDTMNSLTLPSEINLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKT 420

421 KCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSNKGMDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDP 480

481 LVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVNAGKSTTNIMITTIIIVIIVILLS 540 541 LIAVGLLLYCKARSTPVTLSKDQLSGINNIAFSN 574 SEQ ID NO: 2

1 MELLIHRSSAIFLTLAVNALYLTSSQNITEEFYQSTCSAVSRGYFSALRTGWYTSVITIE 60 61 LSNIKETKCNGTDTKVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQNTPAANNRARREAPQYMNYTIN 120 121 TTKNLNVSISKKRKRRFLGFLLGVGSAIASGIAVSKVLHLEGEVNKIKNALLSTNKAVVS 180

181 LSNGVSVLTSKVLDLKNYINNRLLPIVNQQSCRISNIETVIEFQQMNSRLLEITREFSVN 240

241 AGVTTPLSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSSNVQIVRQQSYSIMSIIKEEVLAYV 300

301 VQLPIYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNIKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQADTCKV 360

361 QSNRVFCDTMNSLTLPSEVSLCNTDIFNSKYDCKIMTSKTDISSSVITSLGAIVSCYGKT 420

421 KCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKLEGKNLYVKGEPIINYYDP 480

481 LVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRRSDELLHNVNTGKSTTNIMITTIIIVIIVVLLS 540 541 LIAIGLLLYCKAKNTPVTLSKDQLSGINNIAFSK 574 本發明可使用任何所欲之RSV F胺基酸序列，諸如 -22- 201116294 SEQ ID NO: 1或2，或與SEQ ID NO: 1或2具有一致性之序列。通常該序列將與S E Q ID Ν Ο : 1或2具有至少7 5 %之一致性，例如與S E Q ID Ν 0 : 1或2具有至少8 0 %、至少8 5 %、至少9 0 %、至少9 5 %、至少9 7 %、至少9 8 %、至少9 9 %之一致性。該序列可能自然地發現於RSV中。若本發明使用F蛋白之整體或部分之胞外域，該胞外域可能包含：

(i) 含有SEQ ID NO: 1之大約胺基酸22至5 2 5處之多肽； (ii) 含有SEQ ID NO: 2之大約胺基酸23至525處之多肽； (iii) 含有與（i)或（ii)具有至少75%—致性（例如至少 80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少 98%、至少99%之一致性）之胺基酸序列的多肽； (iv)含有（i)、（Π)或（iii)之片段的多肽，其中該片段包含至少一個F蛋白表位。該片段之長度將通常爲至少約 1 〇〇個胺基酸，例如至少約1 5 0、至少約2 0 0、至少約2 5 0、至少約3 00、至少約3 5 0、至少約400、至少約450個胺基酸長。該胞外域可爲具有或不具信號肽之F〇形式’或可包含二個分開但彼此相關之肽鏈（例如單位及F2次單位）’ 舉例來說，該等次單位可能藉由雙硫鍵連接。因此’自約胺基酸1 〇 1至約1 6 1之所有或一部份（諸如胺基酸1 1 0至1 3 6 處）可能不存在於該胞外域中。因此該整體或部分之胞外 -23- 201116294 域可含有：

(V) 與該第一多肽鏈有關之第一肽鏈及第二肽鏈，其中該第一肽鏈含有與SEQ ID NO: 1之約胺基酸22至約胺基酸101或SEQ ID NO: 2之約胺基酸23至約胺基酸101具有至少7 5 % —致性（例如至少8 0 %、至少8 5 %、至少9 0 %、至少 9 5 %、至少9 7 %、至少9 8 %、至少9 9 %或甚至1 0 0 % —致性）之胺基酸序列，且該第二肽鏈含有與SEQ ID NO: 1之約胺基酸162至約525或SEQ ID NO: 2之約胺基酸162至525具有至少75%—致性（例如至少80%、至少85%、至少90%、至少9 5 %、至少9 7 %、至少9 8 %、至少9 9 %或甚至1 0 0 % —致性 )之胺基酸序列；

(vi)與該第一多肽鏈相關之第一肽鏈及第二肽鏈，其中該第一肽鏈含有包含SEQ ID NO: 1之約胺基酸22至約胺基酸101或SEQ ID NO: 2之約胺基酸23至約胺基酸109的片段之胺基酸序列’且該第二肽鏈含有SEQ ID NO: 1之約胺基酸162至約胺基酸5M或SEQ ID NO: 2之約胺基酸161至約胺基酸525之片段》該等片段之一或二者將含有至少一個F蛋白表位》在第一肽鏈中之片段的長度將通常爲至少 20個胺基酸，例如至少30、至少40、至少50、至少60、至少70、至少80個胺基酸長。在第二肽鏈中之片段的長度將通常爲至少1〇〇個胺基酸’例如至少150、至少200、至少 250、至少300、至少350、至少400、至少450個胺基酸長 (vii)由三呋喃基二氫咪唑消化（i)、（ii)、（iii)或（iv)所 -24- 201116294 獲得之分子。因此’本發明所使用之胺基酸序列可能自然地發現於 RSVF蛋白之內（例如缺乏tm及CT之可溶性RSVF蛋白，約 SEQ ID NO: 1或2之胺基酸522至5 74)，及/或其可能相對於天然RSV序列具有一個或超過一個（例如1、2、3、4、5、6 、7、 8 ' 9、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19

、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30個）單一胺基酸突變（插入、刪除或取代）。舉例來說，已知使F 蛋白突變以清除彼等之三呋喃基二氫咪唑切割序列，藉此防止細胞內處理。在特定實施態樣中，該RSV F蛋白缺乏 TM及CT (SEQ ID ΝΟ:1或2之約胺基酸522至574)，且相對於天然RSV序列含有一個或超過一個（例如1、2、3、4、5 、6、 7、 8、 9、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 22、 23、 24、 25、 26、 27、 28、 29、 30個）單一胺基酸突變（插入、刪除或取代）。三呋喃基二氫咪唑切割、胰蛋白酶切割及融合肽突變 RSV F多肽或蛋白可能含有防止在三呋喃基二氫咪唑切割位置（意即SEQ ID NO: 1及2之胺基酸1〇9及136處）之一或二處切割之一個或超過一個突變。該等突變可防止可溶性多肽或蛋白之聚集且藉此協助純化，若該R S V F蛋白係表現於細胞之表面上諸如藉由自病毒複製子表現（例如阿爾法病毒複製子顆粒），或若該RSV F蛋白係類病毒顆粒之成分則可防止細胞-細胞融合。該等單獨存在或與此處所 -25- 201116294 描述之其他突變組合之突變亦可能穩定於預融合構型中之蛋白。

適當之三呋喃基二氫咪唑切割突變之示範例包括以 RARK (SEQ ID NO:77)、RARQ (SEQ ID NO:78) ' QAQN (SEQ ID NO:79)或 IEGR (SEQ ID NO:80)取代 SEQ ID NO: 1 或2之胺基酸殘基106至109»另外或額外地，SEQ ID NO: 1或2之胺基酸殘基133至136可被RKKK (SEQ ID NO:81)、 △ △△R、QNQN (SEQ ID NO:82)、QQQR (SEQ ID NO:83) 或IEGR (SEQ ID NO:80)取代。（△表示該胺基酸殘基已被刪除。）該等突變可視需要地與此處所描述之其他突變組合，諸如在P27區（SEQ ID NO: 1或2之胺基酸110至136)中之突變，包括刪除整體或部分之p27區。

該等三呋喃基二氫咪唑切割突變可視需要地與此處所描述之其他突變組合，諸如胰蛋白酶切割突變及融合肽突變。適當之胰蛋白酶切割突變之示範例包括刪除介於SEQ ID NO: 1或2之約位置101處至位置161處之間的任何離胺酸或精胺酸殘基，或以除了離胺酸或精胺酸之外的胺基酸取代任何該離胺酸或精胺酸殘基。舉例來說，在P2 7區 (SEQ ID NOS: 1或2之約胺基酸110至136)中之離胺酸及/或精胺酸殘基可被取代或刪除，包括刪除整體或部分之P2 7 區。另外或除了該三呋喃基二氫咪唑切割突變以外，RSV F多肽或蛋白可能在該融合肽區域（SEQ ID NO: 1或2之胺基酸137及153)中含有一或多個突變。舉例來說，此區可 -26- 201116294 被整體或部分刪除。在特定實施態樣中，該RSV F多肽或蛋白（諸如SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2或彼等之可溶性胞外域）之胺基酸殘基100至150之序列係 (Furmt) TPATNNRARKELPRFMNYTLNNAKKTNVTLSKKRKKKFLGFLLGVGSAIAS (SEQ ID NO: 3) (Furdel) TPATNNRARQELPRFMNYTLNNAKKTNVTLSKK——RFLGFLLGVGSMAS (SEQ ID NO: 4)

(Furx) TPATNNQAQNELPRFMNYTLNNAKKTNVTLSQNQNQNFLGFLLGVGSAIAS (SEQ ID NO: 6) (Furx R113Q, K123N, K124N) TPATNNQAQNELPQFMNYTLNNANNTNVTLSQNQNQNFLGFLLGVGSAIAS (SEQ ID NO:5) (Furx R113Q, K123Q, K124Q)) TPATNNQAQNELPQFMNYTLNNAQQTNVTLSQNQNQNFLGFLLGVGSAIAS (SEQ ID NO:92)

(Delp21Furx) TPATNNQAQN---------------------QNQNQNFLGFLLGVGSAIAS (SEQ ID NO:7)

(Delp23Furx) TPATNNQAQN-----------------------QNQNFLGFLLGVGSAIAS (SEQ ID NO:8)

(Delp21 furdel) TPATNNRARQ---------------------QNQQQRFLGFLLGVGSAIAS (SEQ ID NO:109)

(Delp23furdel) TPATNNRARQ-----------------------QQQRFLGFLLGVGSAIAS (SEQ ID NO:9) (Nterm Furin) TPATNNRARRELPQFMNYTLNNAQQTNVTLSQNQNQNFLGFLLGVGSAIAS (SEQ ID N0:10) (Cterm Furin)TPATNNQAQNELPQFMNYTLNNAQQTNVTLSKKRKRRFLGFLLGVGSAIAS (SEQ ID N〇：ll) (Fusion peptide deletion 1) TPATNNRARRELPRFMNYTLNNAKKTNVTLSKKRKRR---------SAIAS (SEQ ID NO:12), (Fusion peptide deletion 2) TPATNNRARRELPRFMNYTLNNAKKTNVTLSKKRKRR— ----GVGSAIAS (SEQ ID NO:91),或 (Factor Xa) TPATNNIEGRELPRFMNYTLNNAKKTNVTLSKKIEGRFLGFLLGVGSAIAS (SEQ ID NO: 13);其中符號表示在該處之胺基酸係經刪除。 -27- 201116294

除了三呋喃基二氫咪唑切割及融合肽突變之外，或另外地，可溶性RSV F多肽或蛋白（諸如該些缺乏跨膜區及細胞質尾者）可能含有一或多個寡聚序列。寡聚序列存在時，其係較佳地三聚序列。適當之寡聚序列係該領域眾所周知，且包括舉例來說酵母菌GCN4白胺酸拉鍊蛋白之捲曲螺旋、源自噬菌體T4纖維蛋白（fibritin)( “摺疊子”）之三聚序列及流感HA之三體結構域。該些及其他適當之寡聚序列係於此處更加詳細地描述。在特定實施態樣中，該RSV F多肽或蛋白之羧基端的序列（始於位置480處）係 (GCN) PLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVNDKIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGE (SEQ ID NO:14) (HA) PLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVNEKFHQIEKEFSEVEGRIQDLEK (SEQ ID NO:15) (Idealized helix) PLVFPSDEFDASISQINEKINQILAFIRKIDELLHNIN (SEQ ID NO:16)

(foldon short) PLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVNGSGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFL (SEQ ID NO:17);或 (foldon long) PLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVNNKNDDKGSGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWV LLSTFL (SEQ ID NO:18) 除了三呋喃基二氫咪唑切割突變、融合肽突變與經添加之寡聚序列之任何組合以外，或另外地，包含跨膜區之 RSV F多肽或蛋白可能含有經添加之胺基酸序列以提供蛋白酶切割位置。此種類型之RSV F多肽或蛋白可藉由在細 -28- 201116294

胞表面上表現加以產製，並經適當之蛋白酶自該細胞表面切割後以可溶性形式收集。一般來說，提供蛋白酶切割位置之胺基酸序列將位於該跨膜結構域之胺基端（SEQ ID NO: 1或2之胺基酸525)的約60個胺基酸、約50個胺基酸、約40個胺基酸、約30個胺基酸、約20個胺基酸、約10個胺基酸以內或實質上鄰近該跨膜結構域之胺基端。許多由可購得之蛋白酶所切割之適當胺基酸序列係該領域所廣爲周知。舉例來說，凝血酶切割序列LVPR (SEQ ID NO:75)、因子Xa切割序列IEGR及腸激酶切割序列DDDDK (SEQ ID NO :76)。該些胺基酸序列可被導入RSV F多肽之中。在特定實施態樣中，該RSV F多肽或蛋白始於位置48 8至TM區之序列係如圖2所顯示之序列。本發明所使用之免疫原性多肽將通常爲經分離或經純化的。因此，彼等將不與彼等正常在天然中可發現之分子 (若有的話）相關。舉例來說，本發明所使用之F蛋白將不呈RSV病毒粒子之形式（雖然彼可能呈人工病毒粒子之形式，諸如類病毒顆粒（virosome)或VLP)。多肽通常將由在重組宿主系統中表現加以製備。通常，彼等（例如RSV胞外域）係藉由在適當之重組宿主細胞中表現編碼該胞外域之重組建構物加以產製，不過任何適當之方法均可被使用。適當之重組宿主細胞包括舉例來說昆蟲細胞（例如埃及斑蚊（Aedes aegypti)、加州苜蓿夜蛾 (Autographa californica)、中國桑蠶（Bombyx mori)、黑腹果繩（Drosophila melanogaster)、草地夜蛾（Spodoptera -29- 201116294

frugiperda)及粉紋夜蛾（Trichoplusia ni))、哺乳動物細胞（例如人、非人靈長動物、馬、牛、羊、狗、貓及嚼齒動物 (例如倉鼠））、鳥類細胞（例如雞、鴨及鵝）、細菌（例如大腸桿菌（E. coli)、枯草桿菌（Bacillus subtilis)及鏈球菌屬 (Streptococcus spp·))、酵母菌細胞（例如啤酒釀母菌 (Saccharomyces cerevisiae)、白色念珠菌（C a n d i d a albicans)、麥芽糖念珠菌（Candida maltosa)、多形漢遜酵母（Hansenual polymorpha)、脆壁克魯維酵母 (Kluy veromyces fragilis)、乳酸克魯維酵母 (Kluyveromyces lactis)、季也蒙畢赤酵母（Pi chi a guillerimondii)、巴斯德畢赤酵母（Pichia pastoris)、栗酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe)及解脂耶氏酵母 (Yarrowia lipolytica))、四膜蟲（Tetrahymena)細胞（例如嗜熱四膜蟲（Tetrahymena thermophila))或彼等之組合。許多適當之昆蟲細胞及哺乳動物細胞係該領域所廣爲周知。適當之昆蟲細胞包括例如Sf9細胞、Sf21細胞、Τη5細胞、施耐德氏（Schneider) S2細胞及High Five細胞（源自親代粉紋夜蛾（Trichoplusia ni) BTI-TN-5B1-4細胞系之選殖分離株（英維特基（Invitrogen)公司））。適當之哺乳動物細胞包括例如中國倉鼠卵巢（CHO)細胞、人胚胎腎細胞（HEK293細胞，通常由經剪切之第5型腺病毒DNA轉形）、NIH-3T3細胞、293-T細胞、維洛（Vero)細胞、海拉（HeLa)細胞、 PERC.6細胞（ECACC寄存編號 96022940)、Hep G2細胞、 MRC-5 細胞（ATCC CCL-171)、WI-38 細胞（ATCC CCL-75) -30- 201116294 、恆河猴胎肺細胞（ATCC CL-160)、馬達氏牛腎（“MDBK”) 細胞、馬達氏犬腎（“ M D C K ”）細胞（例如M D C K (N B L 2 )， ATCC CCL34 ；或 MDCK 33016，DSM ACC 2219)、幼倉鼠腎（BHK)細胞（諸如BHK2 1-F)、HKCC細胞及該類似細胞。適當之鳥類細胞包括例如雞胚胎幹細胞（例如EBx®細胞）、雞胚胎纖維母細胞、雞胚胎生殖細胞、鴨細胞（例如在例如 Vaccine 27:4975-4982 (2009)及 W02005/042728 中所描

述之 AGE1.CR 及 AGEl.CR.pIX細胞系（ProBioGen 公司））、 EB66細胞及該類似細胞。適當之昆蟲細胞表現系統（諸如桿狀病毒（baculovirus) 系統）係爲該領域之技藝人士所知，且描述於例如Summers and Smith, Texas Agricultural Experiment Station Bulletin No. 1 5 5 5 ( 1 9 8 7)中。用於桿狀病毒/昆蟲細胞表現系統之材料及方法可以套組形式購自例如加州聖地牙哥市（San Diego CA)之英維特基（Invitrogen)公司。鳥類細胞表現系統亦爲該領域之技藝人士所知，且描述於例如美國專利第 5,340,740 ' 5,656,479 、 5,830,510 、 6，114,168及 6,500,668 號；歐洲專利第078 7 1 80B號；歐洲專利申請案第 0329 1 813.8號；國際公開第03/0434 1 5號及國際公開第 0 3/076 60 1號。同樣地，細菌及哺乳動物細胞表現系統亦爲該領域所知且描述於例如Yeast Genetic Engineering (B ar r e t a 1 _，ed s ·，1 9 8 9 ) B utt er wo rth s，Lo nd ο n 中。編碼RSV F蛋白胞外域之重組建構物可利用習知方法於適當之載體中製備。許多用於在昆蟲或哺乳動物細胞中 -31 - 201116294

表現重組蛋白之適當載體係該領域所廣爲周知且慣用。適當之載體可包括許多成分，包括但不限於下列一或多項：複製起點、可選擇之標記基因、一或多種表現控制元件（諸如轉錄控制元件（例如啓動子、增強子、終止子）及/或一或多種轉譯信號）及以經選擇之宿主細胞（例如哺乳動物來源或來自異源性哺乳動物或非哺乳動物物種）中之分泌途徑爲目標之信號序列或前導序列。舉例來說，在昆蟲細胞中之表現使用適當之桿狀病毒表現載體諸如pFastBac(英維特基（Invitrogen)公司）以產製重組桿狀病毒顆粒。該桿狀病毒顆粒係經放大且用於感染昆蟲細胞以表現重組蛋白。在哺乳動物細胞中之表現，使用將驅使該建構物於該所欲之哺乳動物宿主細胞（例如中國倉鼠卵巢細胞）中表現之載體。

RSV F蛋白胞外域多肽可利用任何適當之方法純化。舉例來說，藉由免疫親和性層析純化RSV F胞外域多肽之方法係該領域所知。ei α/.，·/. Gen. F/ro/·, 55:3 677-3 6 8 7 (2004)。純化所欲蛋白之適當方法係該領域眾所周知，包括沉降及各種類型諸如疏水性交互作用、離子交換、親和性、螯合及大小排除之層析。適當之純化計畫可利用二種或二種以上之該些或其他適當之方法產生。需要時該RSV F蛋白胞外域多肽可包括促進純化之「標記」，諸如表位標記或HIS標記。該等經標記之多肽可藉由螯合層析或親和層析之方法，自舉例來說條件培養基方便地純化 -32- 201116294 該RSV F多肽亦可能藉由在個體之細胞中表現編碼彼等之核酸加以原位產製。舉例來說，藉由表現此處所描述之自我複製之RNA。

多肽可能包括除了該等R S V序列以外之額外序列。舉例來說，多肽可能包括促進純化之序列（例如多聚H i s序列）。同樣地，就表現之目的而言，該F蛋白之天然前導肽可由不同之前導肽取代。舉例來說，參考文獻6使用蜜蜂蜂毒肽之前導肽以取代天然者。多肽之形式及構型本發明所包括的免疫原性組成物包含此處所揭示之 RSV F多狀及蛋白之任何形式及構型，包括此處所揭示之任何所欲之RSV F多肽及蛋白之形式及構型的組合。該 RSV F多肽可爲單體，或該RSV F蛋白可爲包含三個單體多肽之三體。三體可爲單分散或可呈玫瑰花簇之形式，舉例來說由於個別三體之融合肽之間的交互作用所致。免疫原性組成物所包含之多肽爲單體、三體、單體與三體之組合（例如呈動態平衡）、三體之玫瑰花簇及任何前述之組合。此外，如此處進一步描述的，該RSV F蛋白可呈融合後構型'預融合構型或中間構型。該RSV F蛋白可呈預融合構型、融合後構型或中間構型。該RSV F蛋白之「融合後構型j被認爲是天然RSV F之低能量構型，且係以六螺旋束存在爲特徵之三體，該六螺旋束包含3個HRB及3個HRA區。該融合後構型在電子顯微 ς -33- 201116294 鏡下具有特徵化之「高爾夫球釘」形狀。該RSV F蛋白之「預融合構型」係以含有捲曲螺旋之三體爲特徵之構型，該捲曲螺旋包含3個HRB區。該融合肽不暴露於預融合構型中，因此預融合構型通常不形成玫瑰花簇，且在電子顯微鏡下具有「球及突柄」之形狀。在一些態樣中，該R S V F蛋白係呈融合後構型。舉例來說，該RSV F蛋白可呈融合後構型之單分散三體之形式，或呈包含融合後三體之玫瑰花簇之形式。

在一些實施態樣中，該RSV F多肽係單體》在一些實施態樣中，該RSV F多肽係三體。在其他態樣中，該RSV F蛋白係呈預融合構型。在不希望被任何特定理論束縛之前提下，一般認爲RSV F蛋白之預融合構型或中間形式可能包含與在天然RSV病毒粒子上所表現之RSV F蛋白上的表位相同之表位，因此提供誘發中和抗體之優點。

本發明之一些態樣使用不偏好該F蛋白之融合後構型之多肽。較佳地’該多肽（整體或部分）將展示預融合F蛋白之表位或當從預融合構型轉換至融合後構型之中間構型的表位。該些多肽可能爲呈預融合狀態之天然或經突變之 F蛋白、可能爲呈中間構型之天然或經突變之F蛋白、或可能爲不利或優先排除融合後構型之天然或經突變之蛋白的族群。在特定情況中，該天然或經突變之蛋白可能與—或多個額外分子組合’以協助維持該多肽呈前述狀態之一種，諸如優先地與該預融合構型或中間構型結合之單株抗體 -34- 201116294 。此外，該多肽可能爲天然F蛋白之衍生物。該等衍生物包括含有天然F蛋白之一或多個片段的多肽、含有天然F蛋白（或彼之片段）及異源性序列的融合多肽及包含具有一或多個突變之天然F蛋白序列的多肽。該等（或其他）修飾可能不利該融合後構型。不偏好該融合後構型之示範性方法包括穩定該預融合構型、穩定中間構型、去穩定化該融合後構型或增加一或多個導致該融合後構型之步驟的活化障

礙。在另一實施態樣中，本發明係一種展示至少一個表位之多肽，該表位係該預融合構型F蛋白或中間構型F蛋白所特有。該預融合構型F蛋白或中間構型F蛋白所特有之表位係不存在於融合後構型中之表位。較佳的是該至少一個表位係穩定地存在，例如該表位係穩定地存在於溶液中至少 1 2小時、至少一天、至少二天、至少四天、至少六天、至少一周、至少二周、至少四周、或至少六周。該等多肽可能爲呈預融合狀態' 中間狀態或其中該融合後狀態係代表性不足或相較於經分離之天然F蛋白具有較低百分比之狀態群的天然或經突變之F蛋白，或其可能爲天然F蛋白之衍生物。該等衍生物包括含有天然F蛋白之一或多個片段的多肽、含有天然F蛋白（或彼之片段）及異源性序列的融合多肽及包含具有一或多個突變之天然F蛋白序列的多肽。該些（或其他）修飾可能穩定呈彼之預融合構型的F蛋白胺基酸序列、穩定呈中間構型之f蛋白胺基酸序列、去穩定F蛋白胺基酸序列之融合後構型、增加轉變 -35- 201116294 成F蛋白胺基酸序列之融合後構型的能量障礙，或前述二項或多項之組合。

該F蛋白之TM及/或CT結構域對於預融合構型之穩定性而言係重要的（8)。因此該些結構域可能被有用地保留於本發明之免疫原中。由於可能希望不要在可溶性免疫原中包括跨膜結構域，不過TM之功能效應可藉由其他方式達成。舉例來說，副流感病毒5型之F蛋白的預融合及融合後行爲已經被相當詳細地硏究（6)，該些作者藉由使異源性三聚結構域與該ED之C端融合以穩定該ED之預融合結構。寡聚結構域

在本發明之另一實施態樣中，該組成物可能包含含有第一結構域及第二結構域之多肽（例如重組多肽），其中（i) 該第一結構域包含該RSV F蛋白（例如整體或部份之RSV胞外域），及（Π)包含異源性寡聚結構域之第二結構域。該第二結構域允許該多肽之寡聚，藉此促進該第一結構域採取預融合狀態或中間狀態。該多肽較佳地將以寡聚體存在，特別是三體。各種寡聚結構域係該領域之技藝人士所可取得。這些是可形成可與在其他多肽（不論相同或不同）中之寡聚結構域（不論相同或不同）交互作用之結構的胺基酸序列，以使多個多肽可相連（通常爲非共價）以形成寡聚體，例如三體。舉例來說，HIV(意即gpl 60)之F蛋白的三聚化已藉由將彼與大腸桿菌（E· coli)天冬胺酸轉胺甲醯酶（ATC酶）之催化 -36- 201116294

次單位融合而被達成，該酶係天然穩定之三體（9)。因此此 ATC酶之次單位可被用於本發明中。同樣地，HIV (10)及 PIV5 (6)之F蛋白的三聚化已藉由使彼等之胞外域與GCNt 融合而被達成。因此本發明所使用之寡聚結構域可能包含酵母菌GCN4白胺酸拉鍊蛋白之捲曲螺旋（11)。源自流感A 型病毒之Η A蛋白之胞外域的三聚化已藉由利用來自噬菌體T4纖維蛋白之三聚序列（‘摺疊子’ MGSGYIPEAPRDGQ AYVRKDGEWVLLSTFL-SEQ ID NO:19)加以完成（12)。因此本發明所使用之寡聚結構域可包含該摺疊子。天然發生之蛋白質寡聚體（包括雜寡聚體及同元寡聚體二者）以各種不同之方式相連，例如藉由不同單體中之冷-折疊相連、藉由不同單體中之α-螺旋相連、藉由疏水性表面補丁相連等。與蛋白寡聚化有關之一種常見的結構模體係捲曲螺旋結構域。該捲曲之α -螺旋結構模體本身可形成螺旋，且二、三、四或五個α -螺旋可彼此包覆以形成被稱爲「捲曲螺旋」之左手超螺旋，雖然人工右手超螺旋已被設計U 3 -1 9)。該捲曲螺旋結構域之簡單性使其成爲用於設計具有經定義之寡聚狀態的嵌合性蛋白之受歡迎選擇（16)。在捲曲螺旋結構中，該α -螺旋透過沿著各螺旋之一側形成無極性條帶之疏水性殘基交互作用，在此條帶之兩側的側鏈之間亦可能有穩定之靜電交互作用。在α -螺旋之abcdefg七重複之內，該無極性條帶係由在殘基a及d之疏水性側鏈所定義，任何靜電交互作用主要發生在殘基e及g -37- 201116294 。位置a最常爲白胺酸、異白胺酸或丙胺酸，位置d通常爲白胺酸或丙胺酸。殘基e及g通常爲麩胺酸或麩醯胺酸，精胺酸及離胺酸亦常見於位置g。帶電荷之殘基通常位於位置b、c及f，因爲這些殘基與溶劑接觸。然而，此一般七肽模式有所例外，有時候可於該七肽中發現脯胺酸殘基。該等例外通常具有功能顯著性，包括舉例來說去穩定化該寡聚結構域以允許諸如在該F蛋白中所發生之再摺疊及重排。

數百種捲曲螺旋結構域序列係爲該領域所知，且任何適當之序列可被用來作爲本發明之寡聚結構域，前提是其保有與其他捲曲螺旋結構域寡聚之能力且其不破壞該多肽內其他結構域之功能。較佳的是使用在細胞外發現（20)且天然作爲寡聚結構域之捲曲螺旋結構域。作爲使用天然捲曲螺旋結構域之替代方案，可使用人工捲曲螺旋結構域 (2 1，22)。由於捲曲螺旋結構域之結構具有高度重複性，該結構域特別適合電腦模擬因爲每個胺基酸殘基之骨架部分可被參數化而不需將各個殘基之骨架部分當作具有自己變數之獨特單位》結構域（b)可能包括白胺酸拉鍊序列或丙胺酸拉鍊序列（23) » 本發明之多肽中所使用之捲曲螺旋結構域較佳地係形成三體之結構域，以使本發明之多肽亦可組成三體。較佳之捲曲螺旋結構域係該些取自細菌性跨膜蛋白者。較佳之跨膜蛋白子群係黏附蛋白（意即媒介與其他細胞或表面黏附之細胞表面蛋白），特別是非菌毛黏附蛋白（例如在寡聚 -38- 201116294

捲曲螺旋黏附蛋白中，或‘ Oca’家族）。本發明所使用之特定序列包括該些於參考文獻24中所揭示之源自小腸大腸炎耶氏桿菌（Yersinia enterocolitica)黏附蛋白YadA、腦膜炎奈瑟球菌（Neisseria meningitidis)黏附蛋白NadA、卡他性莫拉氏菌（Moraxella catarrhalis)表面蛋白UspA2及其他黏附蛋白者，諸如源自流感嗜血桿菌（Haemophilus influenzae)埃及（aegyptius)生物型之HadA黏附蛋白等（參考文獻24之SEQ ID NOs 28至31及42至58)。此外，真核性熱休克轉錄因子具有可分開表現之捲曲螺旋三聚結構域因此可用於本發明。在具有捲曲螺旋區域之多肽的胺基酸序列內，該α-螺旋之七重複特性表示該捲曲螺旋結構域之界線可被相當精確地決定，但是可稱爲捲曲螺旋排列終止處之準確殘基可能無法絕對正確地得知。然而，缺乏此絕對正確性並不造成實施本發明之困難，因爲可能有懷疑時例行檢測可顯示該捲曲螺旋是否需要任何特定之胺基酸殘基。即便如此，本發明不需要知道絕對精確之界線，因爲本發明唯一之基本要求在於該捲曲螺旋結構域應以允許該多肽與其他捲曲螺旋結構域寡聚之方式作用而不破壞該多肽內其他結構域之功能。可用於本發明之另一類型之寡聚結構域係發現於稱爲膠原螺旋之左手三螺旋中（25)。該等三螺旋形成序列涉及 klyJXaa^Xaa之基本三肽重複序列，其中2Xaa通常係脯胺酸，3Xaa通常係4-羥基脯胺酸。雖然此模體被稱爲「膠 -39 - 201116294 原」螺旋，其在除了膠原以外的許多蛋白中發現。該寡聚結構域因此可能爲含有該序列模體1(31 y-2xaa_3xaa多次重複之序列，該模體摺疊以形成可與其他多肽鏈中對應之螺旋結構寡聚之螺旋結構。

膠原亦提供另一類型之寡聚結構域。參考文獻26描述在X型膠原之非膠原結構域1 (NC1)中發現之模體’此模體可被用於無三螺旋之三體及更高級之多體形成。此三體形成係高度熱穩定性，不含分子間雙硫鍵。該寡聚結構域因此可能包含NC1序列。

其他寡聚結構域可能源自寡聚性TM蛋白之跨膜結構域。由於該些結構域通常具親脂性，因此位於彼等之TM 區外側的疏水性殘基可能被帶電荷之殘基取代，以提供可溶性結構域。該等藉由蛋白質工程使跨膜結構域可溶化之方法係該領域已知，例如參考文獻27。此法亦已被用於 GCN4，其中該“a”及“d”七重複位置被異白胺酸取代（1 1): KQIEDKIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGEA (SEQ ID NO: 20) 。用於寡聚結構域內之適當捲曲螺旋序列的長度通常將介於20至3 5個胺基酸，例如23至30個胺基酸殘基。用於本發明之寡聚結構域通常不需形成單體間雙硫鍵結以維持寡聚性結構，但是含有雙硫連接單體之寡聚體並不被本發明排除。作爲替代或除了使用寡聚結構域以穩定呈彼之預融合構型之F蛋白以外，可使用突變。舉例來說，參考文獻28 指出在猿猴病毒（simian virus)5型或亨德拉病毒（hendra -40- 201116294 virus)之F蛋白中’ F2次單位之保留區的突變可影響該預融合構型之穩定性。在一些情況下’低P Η値亦可能被用來有利於該預融合構型。穩定該HRB結構域三體

在本發明之另一較佳態樣中，藉由穩定該H R Β結構域三體可能不利於該F蛋白之融合後構型。該HRB結構域在預融合形式及可能在中間形式形成三股捲曲螺旋。如前所述，由於捲曲螺旋之單純性，彼等已被廣泛地硏究以作爲蛋白質之間之分子間交互作用的模型系統及更進一步作爲分子內交互作用之模型系統（意即三級摺疊交互作用）。該些硏究係用於揭示可能被用於穩定該三體捲曲螺旋形式中之HRB結構域之方法。舉例來說，在該七重複之a及/或d位置的一或多個殘基可能被有利於穩定三體捲曲螺旋形成之殘基所取代諸如異白胺酸殘基。此外，雖然較不偏好，不過可能刪除在e及g位置不利之離子交互作用或可能在e及g 位置添加有利之離子交互作用。該HRB結構域中較適合供操作之區域係介於？484至 N5 17之間的七重複。較佳之作爲突變目標之a及d殘基實例係 F488、 1492、 V495、 1499、 S502、 1506、 S509、 L512及 V5 1 6。絲胺酸殘基特別適合，因爲以疏水性殘基取代該等親水性殘基將穩定該捲曲螺旋之疏水性核心。另一較佳之目標是以較小較適合包覆於核心中之疏水性殘基取代$ Θ - 41 - 201116294 胺酸，諸如異白胺酸。去穩定該HRA結構域三體

在本發明之另一較佳態樣中，藉由去穩定該HRA結構域三體可能不利於該F蛋白之融合後構型。該HRA結構域在融合後形式及可能在一或多個中間形式形成三股捲曲螺旋。舉例來說’在該七重複之a及/或d位置的一或多個殘基可能被不利於穩定三體捲曲螺旋形成之殘基所取代。此外’雖然較不偏好’不過可能刪除在e及g位置有利之離子交互作用或可能在e及g位置添加不利之離子交互作用。根據預融合及融合後形式之PIV5 F蛋白之可取得結晶結構所建立之模型’對該預融合構型中HRA結構域之穩定性影響最小之該等突變將被較佳地選擇。其他修飾

除了前述修飾以外，修飾可根據該hRSV F蛋白之分子模型進一步設計，該hRSV F蛋白之分子模型係以預融合及融合後形式之PIV5 F蛋白可取得之結晶結構爲基礎。可能設計去穩定該融合後構型諸如該HR A及HRB結構域之6HB 摺疊之突變’或穩定該預融合構型諸如該預融合構型中之 HRA摺疊之突變。此外，可能增加導致該融合後構型之轉變的能量障礙。雖然該領域之技藝人士將了解穩定該起始構型或去穩定該終末構型可具有增加該能量障礙之效應，影響該轉變狀態本身之其他修飾可能被導入。 -42- 201116294

另一個實例是，該HRB結構域之胺基酸N-端（大約胺基酸449至482處，較佳地V459至F483)作爲「繫鏈劑」，以允許該HRB結構域從該F蛋白三體之一側移至另一側，使該HRB結構域得以加入該融合後構型之6HB。刪除一或多個該等胺基酸將損害或完全防止該HRB結構域加入該F蛋白之融合後構型的6HB摺疊（見圖3)。此外，該繫鏈劑與該預融合構型之F蛋白之間的交互作用可被穩定以防止該繫鏈劑被拉走，進而允許該HRB結構域加入該6HB摺疊。可被設計之穩定突變之實例爲在該繫鏈劑與該繫鏈劑所接觸之預融合構型F蛋白的部分之間的半胱胺酸鍵結。又一例係穩定該預融合構型中之HRA(殘基T50至 Y3 06)。同樣地，根據同源性F蛋白之結晶結構，該疏水性核心可能藉由以類似大小之疏水性殘基取代埋藏之親水性或離子性殘基加以穩定。再者，半胱胺酸鍵結可能被導入表面或該核心之中。此外，如溶菌酶突變之廣泛結晶結構分析所示，該疏水性核心或蛋白相當堅固因此導入孔洞可預期地去穩定該溶菌酶突變。類似地，重包該預融合構型之F蛋白的核心以消除任何天然孔洞可穩定該預融合或中間構型之F蛋白，因此不利該融合後構型。製備組成物之方法本發明關於製備組成物之方法及包含RSV F蛋白（特別是可溶性RSV F胞外域多肽）之組成物，包括免疫原性組成物。較佳地，該RSV F胞外域多肽係呈單一形式，諸如未 -43- 201116294

經切割之單體、未經切割之三體、經切割之三體、經切割之三體之玫瑰花簇，或該等形式之亞群之間呈動態平衡（例如呈平衡之未經切割之單體與未經切割之三體）。本發明提供多項優點。舉例來說，如此處所描述，本發明提供產製包含主要所欲形式之RSV F蛋白或單一所欲形式之 RSV F蛋白的組成物之方法，諸如未經切割之單體、未經切割之三體、經切割之三體、經切割之三體之玫瑰花簇、該等形式之亞群之間呈動態平衡（例如呈平衡之未經切割之單體與未經切割之三體）或所欲形式之RSV F蛋白的混合物。該等類型之組成物可被用於各種目的，諸如用於產製可被用於製造疫苗之免疫原性組成物。以RSV F之單一所欲形式或動態平衡之多種已知形式存在於免疫原性組成物中，提供更可預測之調製劑、可溶性及穩定性，且對個體投予該組成物時提供更可預測之免疫反應。

當RSV F蛋白胞外域多肽係藉由在宿主細胞中以習知之重組表現加以產製，該多肽在該宿主細胞之產製期間在大約位置109/110處及大約位置13 6/ 137處之三呋喃基二氫咪唑切割位置被切割，接著被分泌至培養基。由該宿主細胞切割該等多肽允許RSV F蛋白胞外域多肽之再摺疊，導致暴露該疏水性融合肽。因此，該經切割之RSV F蛋白胞外域多肽（由於經暴露之融合肽之存在）形成玫瑰花簇並與源自該宿主細胞及培養基之脂質及脂蛋白相關。事實上，在昆蟲細胞中產製並利用HIS6-標記純化之經切割之RSV F 胞外域的電子顯微鏡顯示，該等多肽具有拐杖形狀且與殘 -44-

201116294 餘細胞碎片相連。因此，無法輕易地以在宿主細胞中之重組表現獲得高純度之R S V F蛋白胞外域多肽的玫簇及其他形式與構型之製劑。產製經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之方法在一態樣中，本發明係一種供製備包含經切割之 F蛋白胞外域多肽之組成物之方法。一般來說，該方及提供未經切割之R S V F蛋白胞外域多肽，然後切割以產製F !次單位及F 2次單位。如此處所述，未經切 RSV F蛋白胞外域多肽可利用適當之方法以自污染脂脂蛋白輕易地純化及分離，諸如大小排除層析。在不被任何特定理論束縛之前提下，一般認爲該疏水性融並不在未經切割之R S V F蛋白胞外域多肽中暴露，因未經切割之多肽不與脂質及脂蛋白污染物相連。如此 —步描述，未經切割之RSV F蛋白胞外域可被切割以 φ [,及？2次單位，其可被純化爲三體、三體之玫瑰花簇體及三體之玫瑰花簇之混合物。未經切割之R S V F蛋白胞外域多肽可利用任何適方法製備。舉例來說，藉由於產製該RSV F蛋白胞外肽當時不包含活性三呋喃基二氫咪唑或類三呋喃基二唑蛋白酶之宿主細胞中重組產製。多種方法可被使用成此產製方法，諸如於經突變以防止三呋喃基二氫咪類三呋喃基二氫咪唑蛋白酶表現（有條件地或完全「基除」）之重組宿主細胞中產製，及各種減少或防止三呋習知瑰花 RS V 法涉彼等割之質及希望合肽此該處進產製或三當之域多氫咪以達 D坐或因剃喃基 -45- 201116294 二氫咪唑或類三呋喃基二氫咪唑蛋白酶於宿主細胞中表現之方法，例如利用RN A千擾或其他類似方法，或利用蛋白酶抑制劑抑制三呋喃基二氫咪唑或類三呋喃基二氫咪唑蛋白酶於宿主細胞之活性。

未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係較佳地藉由重組表現建構物加以產製，該建構物編碼其中該三呋喃基二氫咪唑切割位置之胺基酸序列係經改變之RSV F蛋白胞外域，以使該 RSV F蛋白胞外域多肽由未經切割地產製該多肽之宿主細胞分泌。該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽可利用任何適當之宿主細胞產製，諸如昆蟲細胞（例如埃及斑蚊（Aedes aegypti)、加州苜宿夜蛾（Autographa californica)、中國桑蠶（Bombyx mori)、黑腹果蠅 (Drosophila melanogaster) 、草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)及粉紋夜蛾（Trichoplusia ni))、哺乳動物細胞（例如人、非人靈長動物、馬、牛、羊、狗、貓及囈齒動物 (例如倉鼠））、鳥類細胞（例如雞、鴨及鵝）、細菌（例如大腸桿菌（E. coli)、枯草桿菌（Bacillus subtilis)及鏈球菌屬 (Streptococcus spp·))、酵母菌細胞（例如啤酒釀母菌 (Saccharomyces cerevisiae)、白色念珠菌（Candida albicans)、麥芽糖念珠菌（Candida maltosa)、多形漢遜酵母 (Hansenual polymorpha) 、脆壁克魯維酵母 (Kluyveromyces fragilis) 、乳酸克魯維酵母 (Kluyveromyces lactis)、季也蒙畢赤酵母 (Pichia guillerimondii)、巴斯德畢赤酵母（Pichia pastoris) 、栗酒 -46- 201116294

裂殖酵母（8〇11丨2〇33(：(：1131'〇1117〇63 0〇11^6)及解脂耶氏酵母 (Yarrowia lipolytica))、四膜蟲（Tetrahymena)細胞（例如嗜熱四膜蟲（Tetrahymena thermophila))或彼等之組合。許多適當之昆蟲細胞及哺乳動物細胞係該領域所廣爲周知。適當之昆蟲細胞包括例如S f 9細胞、S f 2 1細胞、τ η 5細胞、施耐德氏（Schneider) S2細胞及High Five細胞（源自親代粉紋夜蛾（Trichoplusia ni) BTI-TN-5B1-4細胞系之選殖分離株（英維特基（In vitro gen)公司））。適當之哺乳動物細胞包括例如中國倉鼠卵巢（C Η Ο)細胞、人胚胎腎細胞（Η E K 2 9 3細胞，通常由經剪切之第5型腺病毒DNA轉形）、ΝΙΗ-3Τ3細胞、2 93 -Τ細胞、維洛（Vero)細胞、海拉（HeLa)細胞、 PERC.6 細胞（ECACC寄存編號 96022940)、Hep G2 細胞、 MRC-5 細胞（ATCC CCL-171)、WI-38 細胞（ATCC CCL-75) 、恆河猴胎肺細胞（ATCC CL-160)、馬達氏牛腎（“MDBK”）細胞、馬達氏犬腎（“MDCK”）細胞（例如MDCK(NBL2)， ATCC CCL34 ；或 MDCK 3 30 1 6，DSM ACC 2219)、幼倉鼠腎（BHK)細胞（諸如BHK2 1-F)、HKCC細胞及該類似細胞。適當之鳥類細胞包括例如雞胚胎幹細胞（例如EBx®細胞）、雞胚胎纖維母細胞、雞胚胎生殖細胞' 鴨細胞（例如在例如 Vaccine 27:4975-4982 (2009)及 W02005/042728 中所描述之 AGE1.CR 及 AGEl.CR.pIX細胞系（ProBioGen 公司））' E B 6 6細胞及該類似細胞。適當之昆蟲細胞表現系統（諸如桿狀病毒（baculovirus) 系統）係爲該領域之技藝人士所知，且描述於例如S u m m e r s 3 -47- 201116294

and Smith, Texas Agricultural Experiment Station Bulletin No. 1555 (1987)中。用於桿狀病毒/昆蟲細胞表現系統之材料及方法可以套組形式購自例如加州聖地牙哥市（San Diego CA)之英維特基（Invitrogen)公司。鳥類細胞表現系統亦爲該領域之技藝人士所知，且描述於例如美國專利第 5,340,740 ' 5,656,479 ' 5，83 0，5 1 0、6，114，1 68及 6，500，668 號；歐洲專利第0787 1 80B號；歐洲專利申請案第 0329 1 8 1 3.8號；國際公開第03/0434 1 5號及國際公開第 03/07 6601號。同樣地，細菌及哺乳動物細胞表現系統亦爲該領域所知且描述於例如Yeast Genetic Engineering (Barr et al., eds., 1 9 8 9 ) B u 11 er w o r ths，Lo nd ο n 中 °

一般來說，未經切割之RSV F蛋白胞外域之胺基酸序列係經改變以防止在大約位置109/1 10及大約位置136/137 處之三呋喃基二氫咪唑切割位點切割，但是包含當切割時產生Fl&單位及F2次單位之天然發生或經導入之蛋白酶切割位點。舉例來說，該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽可具有經改變以防止在大約位置1 09/1 1 0及大約位置 136/137處之三呋喃基二氫咪唑切割位置切割之胺基酸序列，但是包含一或多個天然發生或導入之自約位置1〇1至約位置1 6 1處之蛋白酶切割位置。將允許未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽由宿主細胞產製及表現之多種特定胺基酸序列（包括不在約位置 109/1 10處及約位置1 3 6/ 1 3 7處之三呋喃基二氫咪唑切割位置切割之胺基酸序列）可輕易地由該領域之一般技藝人士 -48- 201116294 設計及展望。一般來說，一或多個係約位置109/1 10處及約位置1 3 6/ 1 3 7處之三呋喃基二氫咪唑切割位點之部分的胺基酸或位置靠近之胺基酸被獨立地取代或刪除。一些適合防止RSV F蛋白胞外域多肽切割之胺基酸取代及刪除係已知。舉例來說，R108N、R109N、R108N/R109N取代（彼等抑制在1 09/1 10處之切割）及K 13 1Q取代或刪除位置1 31至 134處之胺基酸（彼等抑制位置1 36/ 1 3 7處之切割）已於

Gonzalez-Reyes et al·， Proc. Natl. Acad. S ci. USA, 98:9859-9864 (2001)描述。包含胺基酸取代R108N/ R109N/K131Q/ R133Q/R135Q/R136Q 之未經切割之 RSV F 胞外域多肽已被描述。ei β/·, ·/_ Virol. <55:3677687 (2004)。如此處詳細描述，其他導致該RSV F 胞外域多肽以未經切割形式自宿主細胞分泌之RSV F蛋白胺基酸序列包含經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位置，例如改變約位置106至109處及約位置133至136處之胺基酸序列。該經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位置包含至少一個在約位置106至丨09處之胺基酸取代或刪除，及至少一個在約位置1 3 3至1 3 6處之胺基酸取代或刪除。類似地，未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽的多種特定胺基酸序列包含當切割時產生含有？,之第一次單位及含有F2之第二次單位的蛋白酶切割位置（例如天然發生或經導入者）是可能的，且可輕易地被設計及展望。舉例來說，RSV F蛋白之胺基酸序列在約位置101至約位置161處包含胰蛋白酶切割位置，且一或多個該胰蛋白酶切割位置可 -49- 201116294 被胰蛋白酶切割以產生f1&f2次單位。需要時，一或多個適當之蛋白酶辨識位置可被導入未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽，例如介於約位置1 〇 1至約位置1 6 1處。該經導入之蛋白酶辨識位置可利用適當之蛋白酶切割以產生？,及？2 次單位。當蛋白酶辨識位置被導入未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽的胺基酸序列，較佳的是該位置係由不切割天然發生之RSV F蛋白之胞外域的蛋白酶所辨識。

本發明之此態樣的方法包括：a)提供包含蛋白酶切割位點之未經切割之RSV F蛋白胞外域多狀，當切割時產生

F2片段，及b)以辨識該蛋白酶切割位點之蛋白酶切割該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽。一般來說，該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之胺基酸序列包含經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位點，且該RSV F蛋白胞外域多肽係自以大約位置106至109及大約位置131至136處之三呋喃基二氫咪唑切割位置未經切割之形式產製彼等之宿主細胞分泌。該提供之未經切割之RSV F蛋白胞外域多態可被純化至所欲程度。舉例來說，該提供之未經切割之RSV F蛋白胞外域多態可被提供爲實質上未經處理（例如未經處理或僅經澄清）或呈部分或實質上經純化形式之細胞裂解液、細胞均質液或細胞培養條件培養基。在特定實例中，該提供之未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係於細胞培養條件培養基中提供，該培養基選自昆蟲細胞條件培養基、哺乳動物細胞條件培養基、鳥類細胞條件培養基、酵母菌細胞 -50- 201116294 條件培養基、四膜蟲細胞條件培養基或彼等之組合。

通常較佳的是，該提供之未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係經純化，舉例來說經純化至至少約8 0 %、至少約 8 5%、至少約90%、至少約95%或實質上之均質性。如此處所述，未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽可輕易地自脂質及脂蛋白純化，然而傳統產製之經切割形式之RSV F蛋白與脂質及脂蛋白污染物共純化。因此，當經純化之未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽被提供，該方法可被用於輕易地產製含有實質上不含脂質或脂蛋白之經切割之RSV F蛋白胞外域之組成物。利用蛋白酶切割多肽之適當方法係該領域所廣爲周知且慣用。通常，將被切割之多肽係與足量之蛋白酶在適合切割該多肽之條件（例如pH、多狀及蛋白酶濃度 '溫度）下組合。許多適當之蛋白酶係可購得的，且對許多蛋白酶而言適用於進行多肽切割之條件係廣爲周知。需要時’該經切割之R S V F蛋白胞外域多肽可在蛋白酶切割之後加以純化。在該方法之一例中，包含完整融合肽之未經切割之 RSV F蛋白胞外域多肽被提供，諸如其中沒有一個介於位置137至154處之胺基酸係經取代或刪除之未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽。在一些實施態樣中’該提供之未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係經純化。該提供之含有完整融合肽之未經切割之R S V F蛋白胞外域多肽係經切割’且切割導致形成經切割之RSV F蛋白胞外域多肽三體之玫瑰 -51 - 201116294 花簇。需要時，該玫瑰花簇可利用任何適當方法進一步純化，諸如大小排除層析。

在該方法之另一例中，包含經改變之融合肽之未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽被提供，諸如其中大約胺基酸 137至152、大約胺基酸137至153、大約胺基酸137至145或大約胺基酸1 3 7至1 4 2係經刪除之未經切割之R S V F蛋白胞外域多肽。其他適當之融合肽刪除亦已被描述，諸如刪除位置 137 至 146 處之胺基酸。ei a/., J. Gen. Hro/., 8 5:3 677-3 68 7 (2004)。在—些實施態樣中，該提供之未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係經純化。該提供之未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係經切割，且切割導致形成經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之三體。需要時，該三體可利用任何適當方法進一步純化，諸如大小排除層析。

在該方法之特定例中，該提供之未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽包含至少一個選自furdel或delp23 furdel之多肽（例如均質性胰蛋白酶可切割之furdel、均質性胰蛋白酶可切割之delp23 furdel，或胰蛋白酶可切割之furdel與胰蛋白酶可切割之delp23 furdel之混合物）。該提供之未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係經例如胰蛋白酶之切割，且切割導致形成RSV F蛋白胞外域多肽之經切割之三體、經切割之三體之玫瑰花簇或經切割之三體與經切割之三體之玫瑰花簇的組合。需要時，該經切割之三體及/或經切割之三體之玫瑰花簇可利用任何適當方法進一步純化，諸 -52- 201116294 如大小排除層析。

產製未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之方法在另一態樣中，本發明係一種供製備包含未經切割之 RSV F蛋白胞外域多肽之組成物之方法。一般來說，該方法涉及提供含有未經切割之R S V F蛋白胞外域多肽之生物性物質，諸如細胞裂解液、細胞均質液或細胞培養條件培養基，及接著純化該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽。如此處所述，已經發現經純化之未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體可自行相連以形成未經切割之三體，且呈未經切割之單體與未經切割之三體之混合物或該未經切割之單體與未經切割之三體之間的平衡。在不希望被任何特定理論束縛之前提下，一般認爲該平衡傾向單體，但在濃溶液中該平衡將移向三體。本發明之此態樣的方法包括：a)提供含有未經切割之 R S V F蛋白胞外域多肽之生物性物質，諸如細胞裂解液、細胞均質液或細胞培養條件培養基，及b)自該生物性物質純化未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體 '三體或單體與三體之組合。在一些實施態樣中，未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體係經純化，或未經切割之R S V F蛋白胞外域多肽三體係經純化，或單體與三體係經純化。一般來說’該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之胺基酸序列包含經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位點，且該 RSV F蛋白胞外域多肽係自以介於約位置101至約位置161 -53- 201116294 處（包括在位置106至109及131至136處之三呋喃基二氫咪唑切割位置）未經切割之形式產製彼等之宿主細胞分泌° 在更特定之例中，含有未經切割之RSV F蛋白胞外域多狀之生物性物質包含至少一種選自furmt、furdel、delp21 furx、delp23 furx、delp21 furdel、delp23 furdel或因子 Xa 建構物（該建構物可利用因子Xa被切割）之多肽》

在一些實施態樣中，該RSV F蛋白胞外域多肽之胺基酸序列包含經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位點，且在約位置1 0 1至約位置1 6 1之間的其他蛋白酶切割位點（例如胰蛋白酶切割位點）係經改變或刪除以防止蛋白酶（例如胰蛋白酶）切割。舉例來說，胰蛋白酶以在離胺酸及精胺酸殘基之後切割著稱。在特定較佳之實施態樣中，該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之胺基酸序列含有經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位置，存在於約位置101至約位置161之間的一或多個離胺酸及/或精胺酸殘基（例如所有離胺酸及精胺酸殘基）係經刪除或由非離胺酸或精胺酸之胺基酸取代，該RSV F蛋白胞外域多肽係自以約位置101至約位置 1 6 1之間未經切割形式產製彼等之宿主細胞分泌，且該 RSV F蛋白胞外域多肽在約位置1〇1至約位置161之間係未經胰蛋白酶切割。較佳地，當1毫克/毫升之R S V F蛋白胞外域多肽溶液（以25毫莫耳Tris pH 7.5，300毫莫耳NaCl稀釋）經千分之一體積之胰蛋白酶溶液（來自牛血清之胰蛋白酶以25毫莫耳Tris pH 7·5，300毫莫耳NaCl稀釋至濃度1毫克/毫升：於消化反應中之終質量比係0.001:1胰蛋白酶： •54- 201116294 RSV F胞外域；胰蛋白酶之用量爲每毫克蛋白質使用10至 1 5 B A E E單位）於3 7 °C處理1小時，該R s V F蛋白胞外域多肽不被胰蛋白酶切割。

需要時’該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽（例如包含經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位點之多肽及包含經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位點及經改變之胰蛋白酶切割位點之多肽）可另包含經改變之融合肽，諸如其中舉例來說大約胺基酸137至152係經刪除，大約胺基酸137至154係經刪除，大約胺基酸1 3 7至1 4 5係經刪除或大約胺基酸1 3 7 至142係經刪除之未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽。其他適當之融合肽刪除亦已被描述，諸如刪除位置1 3 7至1 4 6處之胺基酸。ei α/., ·/· Gen. Fz_ro/., 85:3677- 3687 (2004) ° 在特定實施態樣中，該方法包括：a)提供含有未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之生物性物質（諸如細胞裂解液、細胞均質液或細胞培養條件培養基），其中該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之胺基酸序列含有經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位置，存在於約位置1 〇 1至約位置1 6 1之間的離胺酸及精胺酸殘基係經刪除或由非離胺酸或精胺酸之胺基酸取代，該RSV F蛋白胞外域多肽係自以在約位置 1 0 1至約位置1 6 1之間未經切割形式產製彼等之宿主細胞分泌，且該RSV F蛋白胞外域多肽在約位置1〇1至約位置161 之間不被胰蛋白酶切割；及b)自該生物性物質純化未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體、三體或單體與三體之組 201116294 合。在更特定之實例中，該包含未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之生物性物質包含至少一種選自Furx、Furx R113Q K123N K124N、delp21 furx 或 delp23 furx之多肽。

在其他特定實施態樣中，該方法包括：a)提供含有未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之生物性物質，諸如細胞裂解液、細胞均質液或細胞培養條件培養基，其中該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之融合肽係經突變（例如至少一部分之融合肽係經刪除）；及b)自該生物性物質純化未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽。該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽可包含經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位點，且該RSV F蛋白胞外域多肽係自以介於約位置101至約位置 161處（包括在位置106至109及131至136處之三呋喃基二氫咪唑切割位置）未經切割之形式產製彼等之宿主細胞分泌。需要時，該具有經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位點之未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽在約位置1 0 1至約位置 1 6 1之間另包含經改變或經刪除之其他蛋白酶位點（例如胰蛋白酶切割位點）以防止蛋白酶（例如胰蛋白酶）切割。舉例來說，一或多個存在約位置101至約位置161之間的離胺酸及/或精胺酸殘基（例如所有離胺酸及精胺酸殘基）係經刪除或被非離胺酸或精胺酸之胺基酸取代，且該RSV F蛋白胞外域多肽在約位置1 〇1至約位置1 6 1之間不被胰蛋白酶切割該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體、三體及單 -56- 201116294

體與三體之組合可被純化至所欲程度。通常較佳的是，該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體或三體係經純化至例如至少約7 5 %、至少約8 0 %、至少約8 5 %、至少約9 0 %、至少約95 %或實質上之均質性。如此處所述，未經切割之 RSV F蛋白胞外域多肽可輕易地自脂質及脂蛋白純化，例如藉由大小排除層析。因此，該方法可被用於輕易地產製含有經切割且實質上不含脂質及脂蛋白之R S V F蛋白胞外域多肽單體 '三體或單體與三體之組合的組成物。在一實例中，該方法包括提供昆蟲細胞培養條件培養基、哺乳動物細胞培養條件培養基、鳥類細胞條件培養基、酵母菌細胞條件培養基、四膜蟲細胞條件培養基或彼等之組合。在一些實施態樣中，未經切割之R S V F蛋白胞外域多肽三體係經純化。在其他實施態樣中，未經切割之 RSV F蛋白胞外域多肽單體係經純化。在其他實施態樣中，未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體及三體係經純化產製具有經改變之融合肽的經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之方法在一態樣中，本發明係一種供製備包含經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之組成物之方法，其中該等多肽包含經改變之融合肽。當宿主細胞表現不包含經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位點的RSV F蛋白胞外域多肽，該宿主細胞處理該些多肽，部分藉由切割該多肽在約位置1〇9/110處 -57- 201116294

及約位置1 3 6/ 1 3 7處之三呋喃基二氫咪唑位點以產製？，及F2 次單位。該經處理之多肽被分泌至培養基中，可以相連之次單位（例如經雙硫鍵結之F!&F2次單位）被收集，該等次單位可透過經暴露之融合肽的聚集形成三體之玫瑰花簇。含有經改變之融合肽的RSV F蛋白胞外域多肽可以相連之Fi-Fa次單位於宿主細胞中產製及自宿主細胞分泌，且較佳地不聚集成玫瑰花簇或與脂質或脂蛋白污染物聚集。在不希望被任何特定理論束縛的前提下，一般認爲該等多肽不形成玫瑰花簇或與脂質及脂蛋白污染物相連，因爲該經改變之融合肽不媒介聚集。

本發明之此態樣的方法包括：a)提供含有經切割之 RSV F蛋白胞外域多肽之生物性物質，諸如細胞裂解液、細胞均質液或細胞培養條件培養基，其中該經切割之RSV F蛋白胞外域多肽含有經改變之融合肽（例如至少一部分之融合肽係經刪除）；及b)自該生物性物質純化經切割之R S V F蛋白胞外域多肽。該經純化之經切割之R S V F蛋白胞外域多肽可被純化爲經切割之三體、經切割之三體之玫瑰花簇、或經切割之三體與經切割之三體之玫瑰花簇的混合物。含有經改變之融合肽的適當RSV F蛋白胞外域多肽在約 109/110處及約136/137處包含可切割之三呋喃基二氫咪唑切割位點，且另包含如此處所述之經改變之融合肽。舉例來說，其中約胺基酸1 3 7至1 5 2係經刪除、約胺基酸1 3 7至 153係經刪除、約胺基酸137至145係經刪除、約胺基酸137 至146係經刪除或約胺基酸137至142係經刪除之RSV F蛋白 -58- 201116294 胞外域多肽可被用於該方法。在特定實例中，含有未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之該生物性物質包括至少該融合肽刪除1。

該經切割之RSV F蛋白胞外域多肽（例如經切割之三體或經切割之三體與經切割之三體之玫瑰花簇的混合物）可被純化至所欲程度。通常較佳的是，該經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係經純化至例如至少約7 5 %、至少約8 0 %、至少約8 5 %、至少約9 0 %、至少約9 5 %或實質上之均質性。如此處所述’含有經改變之融合肽之經切割之RSV F蛋白胞外域多肽可輕易地自脂質及脂蛋白純化，例如藉由大小排除層析。因此，該方法可被用於輕易地產製含有實質上不含脂質及脂蛋白之經切割之RSV F蛋白胞外域多肽三體、經切割之三體之玫瑰花簇或經切割之三體與經切割之三體之玫瑰花簇之組合的組成物。產製具有C端三呋喃基二氫咪唑突變之RSV f蛋白胞外域多肽之方法在另一態樣中，本發明係一種供製備包含C端未經切割之R S V胞外域多肽之組成物的方法及—種製備經切割之 RSV F蛋白胞外域多肽之方法。在不希望被任何特定理論束縛的前提下’一般認爲C端未經切割之R S V F蛋白胞外域多肽係由產製該等蛋白質之細胞在約位置1 09/1 1 〇處之三呋喃基二氫咪唑切割位點切割，但不切割約位置1 3 6/1 3 7 處之三呋喃基二氫咪唑切割位點，且以與F 2次單位相連之 Λ -59- 201116294 F j次單位被分泌至培養基。另外認爲，該疏水性融合肽並不在C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽中暴露，因此該 C端未經切割之多肽不與脂質及脂蛋白污染物相連。如此處另外描述，C端未經切割之RSV F蛋白胞外域可被進一步切割以產製與F2次單位相連之F!次單位，其中該胺基端係自位置1 10至約位置161處。該等F2次單位可被純化爲三體、三體之玫瑰花簇、或三體與三體之玫瑰花簇的混合物。

一般來說，C端未經切割之RSV F蛋白胞外域的胺基酸序列係經改變以防止在大約位置1 3 6 / 1 3 7處之三呋喃基二氫咪唑切割位點切割，但是包含當切割時產生F,次單位（其中該胺基端係自位置11〇處至約位置161處）及？2次單位之天然發生或經導入之蛋白酶切割位點。舉例來說，該C 端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽可具有經改變以防止在大約位置1 3 6/1 3 7處之三呋喃基二氫咪唑切割位點切割之胺基酸序列，但是包含一或多個天然發生或經導入之自約位置1 〇 1至約位置1 6 1處之蛋白酶切割位點。在特定實例中，該C端未經切割之RSV F蛋白胞外域之胺基酸序列係經改變以防止在大約位置136/137處之三呋喃基二氫咪唑切割位點切割，但是在約位置1 09/1 1 0處包含天然發生之三呋喃基二氫咪唑切割位點。將允許C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽由宿主細胞產製及表現之多種特定胺基酸序列（包括不在約位置 136/137處之三呋喃基二氫咪唑切割位置切割之胺基酸序 -60- 201116294

列）可輕易地由該領域之一般技藝人士設計及展望。一般來說，一或多個係約位置136/137處之三呋喃基二氫咪唑切割位點之部分的胺基酸或位置靠近之胺基酸被獨立地取代或刪除。防止在約位置1 3 6/1 3 7處切割之適當胺基酸取代及刪除係於此處描述。舉例來說1取代K 1 3 1 Q、刪除位置131至134處之胺基酸或取代K131Q/R133Q/R135Q/R136Q (彼等各自抑制136/1 37處之切割）可被使用。在特定實施態樣中，C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽包含至少一個在約位置133至136處之胺基酸取代或刪除。類似地，C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽的多種特定胺基酸序列包含當切割時產生含有第一次單位及含有F2之第二次單位的蛋白酶切割位置（例如天然發生或經導入者）是可能的，且可輕易地被設計及展望。舉例來說，RSV F蛋白之胺基酸序列在約位置101至約位置〗61處包含胰蛋白酶切割位置，且一或多個該胰蛋白酶切割位置可被胰蛋白酶切割以產生F1及F2次單位。需要時，一或多個適當之蛋白酶辨識位置可被導入C端未經切割之RSV F1I 白胞外域多肽，例如介於約位置1 〇 1至約位置1 6 1處。該經導入之蛋白酶辨識位置可利用適當之蛋白酶切割以產生Fl 及F2次單位。當蛋白酶辨識位置被導入C端未經切割之 RSV F蛋白胞外域多肽的胺基酸序列，較佳的是該位置係由不切割天然發生之RSV F蛋白之胞外域的蛋白酶所辨識 C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽可利用任何適當 -61 - 201116294

之方法製備。較佳之方法係藉由重組表現編碼其中在約位置1 3 6/ 1 3 7處之三呋喃基二氫咪唑切割位點之胺基酸序列係經改變之RSV F蛋白胞外域的建構物，以使該C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽由以在約位置136/137處之三呋喃基二氫咪唑切割位點未經切割地產製該等多肽之宿主細胞分泌。較佳地，該C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係由產製彼爲與F2次單位相連之F,次單位之宿主細胞分泌，其中該F ,次單位之胺基端係自位置1 3 2至約位置1 6 1，但非位置137。C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽可利用任何如此處所述之適當宿主細胞製備。

本發明之此態樣的一種方法包括：a)提供在位置 13 6/1 3 7處包含經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位點的C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽，且該C端未經切割之 RSV F蛋白胞外域多肽係自以F2片段之形式產製彼等之細胞分泌，該F2片段與包含次單位相關但在位置136/137 處未經切割，及b)以蛋白酶切割該提供之C端未經切割之 RSV F蛋白胞外域多肽，該蛋白酶切割RSV F蛋白胞外域介於位置1 〇 1至1 6 1處之間的位點，藉此產製該組成物。在特定實施態樣中，步驟b)包含以蛋白酶切割該提供之C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽，該蛋白酶切割RSV F 蛋白胞外域介於約位置101至132處、或約位置132至161處、或約位置Π〇至13 2處。或者或此外，在一些實施態樣中，該C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽在位置136/137 處包含經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位點，唯其該經改 -62- 201116294 變之三呋喃基二氫咪唑切割位點不刪除胺基酸1 3 1至1 3 4。在特定實例中，含有C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之生物性物質至少包括N端三呋喃基二氫咪唑多肽。

該提供之C端未經切割之R S V F蛋白胞外域多態可被純化至所欲程度。舉例來說，該提供之C端未經切割之RSV F 蛋白胞外域多態可被提供爲實質上未經處理（例如未經處理或僅經澄清）或呈部分或實質上經純化形式之細胞裂解液、細胞均質液或細胞培養條件培養基。在特定實例中，該提供之C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係於細胞培養條件培養基中提供，該培養基選自昆蟲細胞條件培養基、哺乳動物細胞條件培養基、鳥類細胞條件培養基、酵母菌細胞條件培養基、四膜蟲細胞條件培養基或彼等之組合通常較佳的是，該提供之C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係經純化，舉例來說經純化至至少約80%、至少約8 5%、至少約90%、至少約95%或實質上之均質性。如此處所述，C端未經切割之R S V F蛋白胞外域多肽可輕易地自脂質及脂蛋白純化，然而傳統產製之經切割形式之RSV F 蛋白與脂質及脂蛋白污染物共純化。因此，當經純化之C 端未經切割之R S V F蛋白胞外域多肽被提供，該方法可被用於輕易地產製含有實質上不含脂質或脂蛋白之經切割之 RSV F蛋白胞外域之組成物。利用蛋白酶切割多肽之適當方法係該領域所廣爲周知且慣用。通常，將被切割之多肽係與足量之蛋白酶在適合 -63- 201116294 切割該多肽之條件（例如pH、多肽及蛋白酶濃度、溫度）下組合。許多適當之蛋白酶係可購得的，且對許多蛋白酶而言適用於進行多肽切割之條件係廣爲周知。需要時，該 RSV F蛋白胞外域多肽可在蛋白酶切割之後加以純化。

在該方法之一例中，包含完整融合肽之C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽被提供，諸如其中沒有一個介於位置1 3 7至1 5 4處之胺基酸係經取代或刪除之C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽。在該方法之另一例中，包含經改變之融合肽之C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽被提供，諸如其中大約胺基酸137至152、大約胺基酸137至153 '大約胺基酸137至145或大約胺基酸137至142係經刪除之 C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽。其他適當之融合肽刪除亦已被描述，諸如刪除位置137至146處之胺基酸。 Ruiz-Arguello et al ·，J. Gen· Virol·，85:3677-3687 (2004)

在一些實施態樣中，該提供之C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係經純化。該提供之未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係經切割，且切割導致形成經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之三體。需要時，該三體可利用任何適當方法進一步純化，諸如大小排除層析。在該方法之特定實例中，該提供之C端未經切割之 RSV F蛋白胞外域多肽至少包括N端三呋喃基二氫咪唑多肽（圖1)。該提供之C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係經例如胰蛋白酶之切割，且切割導致形成RSV F蛋白胞 -64- 201116294 外域多肽之經切割之三體、經切割之三體之玫瑰花簇或經切割之三體與經切割之三體之玫瑰花簇的組合。需要時，該經切割之三體及/或經切割之三體之玫瑰花簇可利用任何適當方法進一步純化，諸如大小排除層析。

本發明之此態樣的另一方法包括：a)提供含有在位置 1 3 6/ 1 3 7處包含經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位點之C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽的生物性物質（諸如細胞裂解液、細胞均質液或細胞培養條件培養基），且該可溶性RSV F蛋白胞外域多肽係自以F2片段之形式產製彼等之細胞分泌，該F2片段與包含F,之次單位相關但在位置 1 3 6/ 1 3 7處未經切割，唯其該經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位置不刪除胺基酸1 3 1至1 34 ;及b)自該生物性物質純化該C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽，藉此產製該組成物。較佳地，該F ,次單位之胺基端係自約位置1 1 0至約位置1 32。更佳地，該F,次單位之胺基端係約位置1 1 0。特別較佳的是，該F,次單位之胺基端不是位置137。在特定實例中，含有C端未經切割之RSVF蛋白胞外域多肽之生物性物質至少包括N端三呋喃基二氫咪唑多肽。需要時，該C端未經切割之R S V F蛋白胞外域多肽在約位置1 0 1至約位置1 6 1之間另包含經改變或經刪除之其他蛋白酶位點（例如胰蛋白酶切割位點）以防止蛋白酶（例如胰蛋白酶）切割。舉例來說，一或多個存在約位置1 〇 1至約位置 1 6 1之間的離胺酸及/或精胺酸殘基（例如所有離胺酸及精胺酸殘基）係經刪除或被非離胺酸或精胺酸之胺基酸取代， -65- 201116294 且該C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽在約位置101至約位置1 6 1之間不被胰蛋白酶切割。該C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽可包含完整之融合肽或如此處所述之經改變之融合肽。

該C端未經切割之RSVF蛋白胞外域多肽例如單體、三體及單體與三體之組合可被純化至所欲程度。通常較佳的是，該C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體或三體係經純化至例如至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約9 0%、至少約95 %或實質上之均質性。如此處所述，C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽可輕易地自脂質及脂蛋白純化，例如藉由大小排除層析。因此，該方法可被用於輕易地產製含有C端未經切割且實質上不含脂質及脂蛋白之RSV F蛋白胞外域多肽（例如單體、三體或單體與三體之組合）的組成物。在該方法之特定實例中，該C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽至少包括N端三呋喃基二氫咪唑多肽（圖1)。在一實例中，該方法包括提供昆蟲細胞培養條件培養基、哺乳動物細胞培養條件培養基、鳥類細胞條件培養基、酵母菌細胞條件培養基、四膜蟲細胞條件培養基或彼等之組合。在一些實施態樣中，C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽三體係經純化。在其他實施態樣中，C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體係經純化。在其他實施態樣中’ C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體及三體係經純化。 -66- 201116294

自我複製之RN A

此處所描述之RSV-F多肽可藉由在個體之細胞中表現編碼該等多肽之重組核酸加以產製。可對個體投予以造成 RSV-F多肽產製之較佳核酸係自我複製之RNA分子。本發明之自我複製之RN A分子係根據RN A病毒之基因組RN A，但缺乏編碼一或多個結構蛋白之基因。該自我複製之RNA 分子可被轉譯以產製該RNA病毒之非結構蛋白及由該自我複製之RNA所編碼之異源性蛋白。該自我複製之RN A通常包含至少一或多個選自病毒複製酶、病毒蛋白酶、病毒解螺旋酶及其他非結構性病毒蛋白之基因，且亦包含5 及3 端順式活性複製序列及需要時編碼所欲胺基酸序列（例如蛋白、抗原）之異源性序列。引導該異源性序列表現之次基因組的啓動子可被包括在該自我複製之RN A中。需要時，該異源性序列可被符合讀框地融合至該自我複製之RN A的其他編碼區域及/或可能在內部核糖體進入位點（IRES)之控制下。本發明之自我複製之RN A分子可被設計以使該自我複製之RN A分子無法誘發感染性病毒粒子之產製。此可藉由舉例來說在自我複製之RN A中刪除一或多個編碼結構蛋白之病毒基因加以達成，該等結構蛋白係產製病毒顆粒所需。舉例來說，當該自我複製之RN A分子係根據阿爾法 (alpha)病毒（諸如辛德比斯病毒（Sinebis virus)(SIN)、塞姆利基森林病毒（Semliki forest virus)及委內瑞拉馬腦炎病毒（Venezuelan equine encephalitis virus)(VEE))，一或多 201116294 個編碼病毒結構蛋白（諸如殼體及/或封套糖蛋白）之基因可被刪除。需要時，本發明之自我複製之RN A分子可被設計以誘發經減毒或具毒性之感染性病毒顆粒之產製，或產製能引起單一輪之後續感染的病毒顆粒。

自我複製之RN A分子當被遞送至即使不含任何蛋白質之脊椎動物細胞時，可藉由自身（或自身之反義複製物）之轉錄導致產製多個子RN A。該自我複製之RN A在遞送至細胞後可被直接轉譯，此轉譯提供RN A依賴性RN A聚合酶以自該經遞送之RNA產生轉錄物。因此該經遞送之RNA導致產製多個子RNA。這些轉錄物相對於該經遞送之RNA係反義的，彼等本身可能被轉譯以提供原位表現基因產物，或可能被轉錄以提供另外與該經遞送之RN A同義之轉錄物，該等轉錄物經轉譯以提供原位表現該經編碼之RSV-F多肽

一種達成自我複製之適當系統係使用阿爾法病毒基底之RN A複製子》這些正股複製子在被遞送至細胞後經轉譯以產生複製酶（或複製酶-轉錄酶）。該複製酶係經轉譯爲多聚蛋白，該多聚蛋白自動切割以提供產生該經遞送之正股 RNA的基因組負股拷貝之複製複合物。這些負股轉錄物本身可被轉錄以產生該正股親代RN A之其他拷貝，同時產生編碼該RSV-F多肽之次基因組轉錄物。該次基因組轉錄物之轉譯因此導致該RSV-F多肽於該經感染細胞之原位表現。適當之阿爾法病毒複製子可使用來自辛德比斯病毒 (Sindbis virus)、塞姆利基森林病毒（Semliki forest virus) -68- 201116294 、東 ρβ 馬月 a 炎病毒（easteril equine encephalitis virus)、委內瑞拉馬腦炎病毒（Venezuelan equine encephalitis virus) 等之複製酶。較佳之自我複製之RNA分子因此編碼（i) RNA依賴性 RNA聚合酶’其可自該自我複製之RNA分子轉錄rna，及 (ii) RSV-F多肽。該聚合酶可爲阿爾法病毒複製酶，例如包含阿爾法病毒蛋白nsP4。

然而天然阿爾法病毒基因組除了非結構性複製酶多聚蛋白以外編碼結構病毒粒子蛋白，較佳的是本發明之阿爾法病毒基底之自我複製之RNA分子不編碼阿爾法病毒結構蛋白。因此該自我複製之RNA可導致在細胞中產製其自身之基因組RNA拷貝，但不產製含RNA之阿爾法病毒粒子。無法產製該些病毒粒子表示，不像野生型阿爾法病毒，該自我複製之RNA分子無法以感染形式自我延續。野生型阿爾法病毒延續所需之結構蛋白不存在於本發明之自我複製之RNA中，彼等之位置係由編碼該所欲之基因產物之基因所取代，諸如編碼該所欲基因產物之次基因組轉錄物而非該結構性阿爾法病毒粒子蛋白。因此本發明所使用之自我複製之RN A分子可能具有二個開放閱讀框。第一個（5')開放閱讀框編碼複製酶，第二個（3’）開放閱讀框編碼RSV-F多肽。在一些實施態樣中，該 RNA可能具有額外之（下游）開放閱讀框，例如編碼其他所欲之基因產物者。自我複製之RN A分子可具有與該編碼之複製酶相容之5 1序列。 -69- 201116294

在一態樣中，該自我複製之RNA分子係源自或基於阿爾法病毒。在其他態樣中，該自我複製之RNA分子係源自或基於阿爾法病毒以外之病毒，較佳地正股RNA病毒，更佳地小核糖核酸病毒（picornavirus)、黃病毒（flavivirus)、風疼病毒（rubivirus)、癒疫病毒（pestivirus)、肝炎病毒 (hepacivirus)、杯狀病毒（calicivirus)或冠狀病毒 (coronavirus)。適當之野生型阿爾法病毒序列係廣爲周知且可得自序列寄存庫，諸如美國馬里蘭州洛克維爾市 (Rockville)之美國菌種保存中心（American Type Culture Collection)。適當之阿爾法病毒的代表性實例包括奧拉 (Aura)病毒（ATCC VR-368)、貝巴魯病毒（Bebaru virus)(ATCC VR-600, ATCC VR-1 240)、卡巴蘇（Cabassou) 病毒（ATCC VR-922)、屈公病毒（C h i ku n gun y a v i r u s ) ( A T C C VR-64，ATCC VR-1241)、東部馬腦脊髓炎病毒（Eastern equine encephalomyelitis virus)(ATCC V R - 6 5 , ATCC V R -1 242)、摩根堡病毒（Fort Morgan)(ATCC VR-924)、給塔病毒（Getah virus)(ATCC VR-3 69，ATCC VR- 1 243 )、克澤拉格齊病毒（Kyzylagach)(ATCC VR-927)、馬亞羅（Mayaro) (ATCC VR-66)、馬亞羅病毒（Mayaro virus)(ATCC VR-1 277)、密德堡病毒（Middleburg)(ATCC VR-3 70)、穆坎布病毒（Mucambo virus) (ATCC VR-580，ATCC VR-1244)、恩杜茂病毒（Ndumu)(ATCC VR-371)、皮春納病毒（Pixuna virus)(ATCC VR-372, ATCC VR-1245)、羅斯河病毒（Ross River virus)(ATCC VR-3 73，ATCC VR- 1 246)、塞姆利基森 -70- 201116294

林病毒（Semliki forest)(ATCC VR-67，ATCC VR- 1 247)、辛德比斯病毒（Sindbis virus)(ATCC VR-68, ATCC VR- 1 248) 、托納特病毒（Tonate)(ATCC VR-925)、特里尼蒂病毒 (Triniti)(ATCC VR-469)、烏納病毒（Una)(ATCC VR-3 74) 、委內瑞拉馬腦脊髓炎病毒（Venezuelan equine encephalomyelitis virus) (ATCC VR-69, ATCC VR-923, ATCC VR-1250 ATCC VR-1249， ATCC VR-532)、西部馬月甾脊髓炎（Western equine encephalomyelitis)病毒（ATCC VR- 70，ATCC VR-1251，ATCC VR-622, ATCC VR-1252)、瓦塔羅阿（Whataroa)病毒（ATCC VR-926)及 Y-62-33 病毒（ATCC VR-3 75)。該自我複製之RNA可能與遞送系統相關。該自我複製之RN A可能與佐劑或不與佐劑一起投予。 RN A遞送系統本發明之自我複製之RN A係適合以各種樣式遞送，諸如裸RN A遞送或與脂質、聚合物或其他有助於進入細胞之化合物組合。本發明之自我複製之RN A分子可利用任何適當技術以導入目標細胞或個體中，例如藉由直接注射、顯微注射、電穿孔、脂質體轉染、生物發射（biolystic)及該類似方法。該自我複製之RNA分子亦可能藉由受體媒介性胞飲作用被導入細胞中。見例如美國專利第6,090,6 1 9號； Wu and Wu, J. Biol. Chem., 2 63:1 462 1 ( 1 98 8 )；及 Curiel et al.，Proc. N a 11. A c ad · S c i U S A，8 8 : 8 8 5 0 ( 1 9 9 1 )。舉例 •71 - 201116294 來說，美國專利第6,08 3,74 1號揭示藉由相連核酸與聚陽離子基團（例如具有3至100個離胺酸殘基之多聚-L-離胺酸）以將外源性核酸導入哺乳動物細胞中，該聚陽離子基團本身與整合素受體結合基團（例如具有序列Arg-Gly-Asp之環狀狀）親合。

本發明之自我複製之RN A分子可經由兩親分子被遞送至細胞中。見例如美國專利第6,071，890號。通常，核酸分子可能與陽離子型兩親分子形成複合物。與該複合物接觸之哺乳動物細胞可輕易地攝取該複合物。

該自我複製之RNA可以裸RNA被遞送（例如僅呈RNA之水性溶液），但是爲了增進進入細胞及後續之細胞間效應，該自我複製之RNA係較佳地與遞送系統組合投予，諸如顆粒或乳劑遞送系統。多種遞送系統係爲該領域之技藝人士所廣爲周知。該等遞送系統包括例如脂質體基底遞送 (Debs and Zhu (1 993) WO 93/24640; Mannino and Gould-Fogerite ( 1 9 8 8) BioTechniques 6(7): 68 2-69 1; Rose 美國專利第 5,279,83 3 號；Brigham (1991) WO 91 /06309; and Feigner et al. (1987) Proc. Natl. Acad. S ci. USA 84: 74 1 3-7414)以及使用病毒載體（例如腺病毒（見例如Berns d a/· ( 1 995) Ann. NY Acad. Sci. 772: 95- 1 04; Ali et al. (1 994) Gene Th er. 1: 3 67-3 84; and Haddada e t al. ( 1 995 ) C u r r. Top. Microbiol. Immunol. 199 (Pt 3): 297-306 之回顧文獻）、乳頭狀瘤病毒、反轉錄病毒（見例如Buchscher d αΓ (1992) J. Virol. 66(5) 2731-2739; Johann et al. (1992) J. -72- 201116294

Virol. 66 (5): 1 63 5 - 1 640 ( 1 992); Sommerfelt et al., ( 1 990) Virol. 1 7 6:5 8 -5 9; Wilson et al. ( 1 98 9) J. Virol. 63:2 3 74-2378; Miller et al., J. Virol. 65:2220-2224 ( 1 99 1 ); Wong-Staal e t al., PCT/US94/05 700，and Rosenburg and Fauci ( 1 9 9 3) in Fundamental Immunology, Third Edition Paul (ed) Raven Press, Ltd.，New York及其中之參考文獻，與 Yu ei α/.，Gene Therapy (1 994)同上），及腺病毒相關性載體（見 W e s t e ί β / · ( 1 9 8 7 ) V i r ο 1 〇 g y 1 6 0 : 3 8 - 4 7 ; C a r t e r e ί a/· ( 1 989)美國專利第 4,797,3 68 號；Carter a/· WO 9 3/2464 1 ( 1 993); Kotin ( 1 994) Human Gene Therapy 5:793 -80 1 ; Muzyczka ( 1 994) J. Clin. Invst. 94:1 3 5 1 and Samulski(同上）有關AAV載體之回顧文獻；亦參見 Lebkowski，美國專利第 5,173,414 號；Tratschin ei α/. ( 1 98 5) Mol. Cell. Biol. 5 ( 1 1 ): 3 2 5 1 - 3 2 6 0 ; Tratschin，et al. ( 1 984) Mol. Cell. Biol., 4:2072-2081; Hermonat and Muzyczka (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6466-6470; McLaughlin et a l. ( 1 9 8 8) and Samulski e t a l. ( 1 98 9) J. Virol.，63:03 822-3 8 2 8 )及該類似物。三種特別有用之遞送系統爲（i)脂質體（ii)不具毒性且可生物降解之聚合物微粒（i i1)陽離子型次微米水中油乳劑脂質體不同的兩親性脂質可在水性環境中形成雙層以包覆含 -73- 201116294

RNA之水性核心成爲脂質體。這些脂質可具有陰離子、陽離子或兩性離子親水性頭部基團。自陰離子磷脂質形成脂質體始於I 960年代，陽離子脂質體形成脂質則自199〇年代開始硏究。有些磷脂質爲陰離子，其他則爲兩性離子。適當類型之磷脂質包括但不限於磷脂醯乙醇胺、磷脂醯膽鹼、磷脂醯絲胺酸及磷脂醯甘油及一些列於表2 0中有用之磷脂質。有用之陽離子脂質包括但不限於二油醯基三甲基銨丙烷（DOTAP)、1，2-二硬脂基氧基-N，N-二甲基-3-胺基丙烷 (DSDMA)、1，2-二油醯基氧基-N，N-二甲基-3-胺基丙院 (DODMA)、1，2-二亞麻油基氧基-N，N-二甲基-3-胺基丙烷 (DLinDMA)及1,2-二亞麻油烯基氧基-N，N-二甲基-3-胺基丙烷（DLenDMA)。兩性離子脂質包括但不限於醯基兩性離子脂質及醚兩性離子脂質。有用之兩性離子脂質實例係 DPPC、DOPC及十二基磷酸膽鹼。該脂質可爲飽和或不飽和。

脂質體可自單一脂質或自脂質之混合物形成。混合物可能包含（i)陰離子脂質之混合物、（ii)陽離子脂質之混合物、（iii)兩性離子脂質之混合物、（iv)陰離子脂質及陽離子脂質之混合物、（v)陰離子脂質及兩性離子脂質之混合物、（vi)兩性離子脂質及陽離子脂質之混合物或（vii)陰離子脂質、陽離子脂質及兩性離子脂質之混合物。同樣地，混合物可能包含飽和及不飽和之脂質。舉例來說，混合物可能包含DSPC(兩性離子、飽和）、DlinDMA(陽離子、不飽和）及/或DMPG(陰離子、飽和）。當使用脂質之混合物，不 -74 - 201116294 是所有在混合物中之成分脂質必須爲兩性分子，例如一或多種兩性脂質可與膽固醇混合。脂質之親水性部分可經PEG化（也就是與聚乙二醇共價連接加以修飾）。此修飾可增加穩定性及預防該脂質體之非專一性吸收。舉例來說，脂質可利用諸如該些於H e y e s et al. (2005) J Controlled Release 107:276-87中所揭示之技術與PEG共軛。

DSPC、DlinDMA、PEG-DMPG及膽固醇之混合物係用於該些實施例中。本發明之另一態樣係包含DSPC、 DlinDMA、PEG-DMG及膽固醇之脂質體。此脂質體較佳地包封RNA，諸如編碼免疫原之自我複製之RNA。脂質體通常被分成三種：多層囊泡（MLV)、小型單層囊泡（SUV)及大型單層囊泡（LUV)。MLV在各個囊泡中具有多個雙層，形成數個分開之含水隔室。SUV及LUV具有包封水性核心之單一雙層；SUV通常具有$50奈米之直徑， LUV具有>5〇奈米之直徑。可用於本發明之脂質體理想地係直徑介於50至22〇奈米之LUV。就包含不同直徑之LUV群的組成物而言：（i)至少8 0 %的數量應具有介於2 0至2 2 0奈米之直徑，（ii)該群之平均直徑（Zav，由密度測量）係理想地介於40至200奈米，及/或（iii)該直徑應具有<〇.2之多分散指數。製備適當脂質體之技術係該領域所廣爲周知例如見

Liposomes: Methods and Protocols, Volume 1: Pharmaceutical

Nanocarriers: Methods and Protocols, (ed. Weissig). Humana -75- 201116294

Press, 2 0 0 9. ISBN 160327359X; Liposome Technology, volumes I，II & III. (ed. G r e go r i a d i s). In forma Healthcare, 2 0 0 6; and Functional Polymer Colloids and Microparticles volume 4 (Microspheres， microcapsules & liposomes). (e d s. A r s h a d y & G u y o t) · C i t u s B ο o k s，2 0 0 2。一種可用之方法涉及混合（i)脂質之乙醇溶液、（ii)核酸之水性溶液及 (Ui)緩衝液，接著混合、平衡、稀釋及純化（Heyes d (2005) J Controlled Release 1 07:276-87)。

RN A係較佳地包封於脂質體中，因此該脂質體在含 RNA水性核心周圍形成外層。此包封已被發現能保護RNA 不被RN A酶消化。該脂質體可包括一些外部RN A(例如在該脂質體之表面），但是至少一半（最好是全部）的RNA係被包封。多聚性微粒

多種聚合物可形成微粒以包封或吸附RNA。使用實質上無毒性之聚合物代表接受者可安全地接受該等微粒，使用可生物降解之聚合物代表該等微粒可在遞送後被代謝以避免長期留存。可用之聚合物亦爲可滅菌的，以利醫藥級調製劑之製備》適當之無毒性及可生物降解之聚合物包括但不限於聚 (α-羥酸）、聚羥基丁酸、聚內酯（包括聚己酸內酯）、聚二氧環己酮、聚戊內酯、聚原酸酯、聚酐、聚氰基丙烯酸酯、酪胺酸衍生性聚碳酸酯、聚乙烯吡咯烷酮或聚酯醯胺， -76- 201116294 及彼等之組合。

在一些實施態樣中，該等微粒可自聚（α -羥酸）形成，諸如聚乳交酯（“PLA”）、乳交酯與乙交酯之共聚物諸如聚 (D，L-乳交酯-共-乙交酯）（“PLG”）及D,L·乳交醋與己內酯之共聚物。可用之PLG聚合物包括該些乳交酯/乙交酯之莫耳數比介於例如20:80至80:20者，例如25:75、40:60、45:55 、55:45、60:40、75:25。可用之PLG聚合物包括該些分子量介於例如5，000至200,000道爾頓者，例如介於10,000至 100,000、 20,000至 70,000或 40,000至 50,000道爾頓。該等微粒之直徑理想地介於〇 . 〇 2微米至8微米。以包含不同直徑之微粒群的組成物而言，至少80%之數量應具有〇.〇3至7微米之直徑。製備適當微粒之技術係該領域所廣爲周知，見例如

Functional Polymer Colloids and Microparticles volume 4 (Mi cro spheres, microcapsules & liposomes), (eds. Arshady & Guyot). Citus Books, 2002; Polymers in Drug Delivery. (eds. Uchegbu & S chatzl ei n). CRC Press, 2006.(特別是第 Ί 章）及 Microparticulate Systems for the Delivery of

Proteins and Vaccines, (eds. Cohen & Bernstein). CRC Press，1 996。爲了增進RNA之吸附，微粒可包括例如 O’Hagan e t aL (200 1 ) J Virology 75:9037-9043 及 Singh et a/. (2003) PAarmacew".ca/ iiesearcA 20: 247-251 中所揭示之陽離子表面活性劑及/或脂質。另一種製備聚合性微粒之方式爲藉由例如W02009/ 1 3 2206中所揭示之注模及膠封 -77- 201116294 本發明之微粒可具有介於40至100毫伏之t電位。 RNA可被吸附至該等微粒，且吸附係藉由在該微粒中包括陽離子物質（例如陽離子脂質）而增進。陽離子型水中油乳劑

水中油乳劑以佐劑化流感疫苗聞名，例如在FLUADtm 產品中之MF59tm佐劑及PREP ANDRIXtm產品中之AS03佐劑。本發明之RNA遞送可利用水中油乳劑，前提爲該乳劑包括一或多種陽離子分子。舉例來說，陽離子脂質可被包括在乳劑中以提供帶正電之液滴表面，使帶負電之RNA得以連接其上。

該乳劑包含一或多種油。適當之油（類）包括該些來自例如動物（諸如魚）或植物來源者。該油理想上是可生物降解（可代謝）及生物相容的。植物油之來源包括堅果、種子及穀物。花生油、大豆油、椰子油及橄欖油是最經常取得之堅果油實例。取自例如荷荷巴豆之荷荷巴油可被使用。種子油包括紅花籽油、棉花籽油、葵花籽油、芝麻籽油及該類似物》在穀物群中，玉米油是最容易取得的，但是其他穀粒諸如小麥、燕麥、黑麥、米、畫眉草、黑小麥及該類似物之油亦可被使用。6至10個碳之甘油及1,2-丙二醇脂肪酸酯類雖然不存在於天然之種子油中，但可利用水解、分離及酯化作用，自堅果及種子油中之適當物質開始製備。來自哺乳動物乳汁中之油脂係可代謝的，因此可被使用 -78- 201116294 。分離、純化、皂化程序及其他自動物來源取得純油脂所需之方法係該領域所廣爲周知。

大部分的魚包含可輕易地收集之可代謝之油。舉例來說’ _魚肝油、鯊魚肝油及鯨魚油諸如鯨蠟爲數種此處可使用之魚油的實例。數種支鏈油以生化方式合成爲五碳異戊二稀單位’通常被稱爲類萜。鯊烷（鯊烯之飽和類似物）亦可被使用。魚油（包括鯊烯及鯊烷）可輕易地自商業來源購得’或可利用該領域已知之方法取得。其他可用之油係維生素E，特別是與鯊烯之組合。當乳劑之油相包括維生素E，任何α ，yS ，7 ，（5 ，ε或（維生素Ε均可被使用’但是α維生素ε係較佳地。D型-α維生素Ε及DL型維生素Ε兩者均可被使用。一種較佳之α 維生素Ε係DL型-〇：維生素Ε。包含鯊烯及維生素Ε(例如DL 型-α -維生素E)之油組合可被使用。較佳之乳劑包含鯊烯，這是一種分支不飽和類萜之鯊魚肝油（c30h50 ; [(ch3)2c[ = chch2ch2c(ch3)]2 = chch2-]2 ;2，6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯；CAS RN 768 3 -64-9)。在該乳劑中之油可能包含油類之組合，例如鯊烯及至少一種其他之油。該乳劑之水性成分可能爲淡水（例如注射用水）或可包括其他成分例如溶質。舉例來說，其可能包括鹽類以形成緩衝液例如檸檬酸鹽或磷酸鹽，諸如鈉鹽。典型緩衝液包括：磷酸鹽緩衝液、Tris緩衝液、硼酸鹽緩衝液、琥珀酸 -79- 201116294 鹽緩衝液、組胺酸緩衝液、或檸檬酸鹽緩衝液。經緩衝之含水相係較佳，緩衝液將通常被包括在5至20毫莫耳之範圍中。

該乳劑亦包括陽離子脂質。較佳地此脂質係界面活性劑，以便能促進該乳劑之形成及穩定。有用之陽離子型脂質通常包含在生理條件下帶正電荷之氮原子例如三級或四級胺。此氮可爲在兩親分子性界面活性劑之親水性頭部基團中。可用之陽離子脂質包括但不限於：1，2-二油醯基氧基·3-(三甲基氨）丙烷（DOTAP)、3’-[N-(N'，N’-二甲基胺基乙烷）-胺甲醯基]膽固醇（DC膽固醇）、二甲基雙十八烷基銨 (DDA例如溴化物）、1,2-雙肉豆蔻醯基-3-三甲基銨丙烷 (DMTAP)、雙棕櫚醯基（C16:0)三甲基銨丙烷（DPTAP)、雙硬脂醯基三甲基銨丙烷（DSTAP)。其他有用之陽離子型脂質爲：氯化烷基二甲基苄基銨（BAK)，氯化苄乙氧銨、溴化十六烷基三甲銨（其包含四癸基三甲基溴化銨及可能小量之十二烷基三甲基溴化銨及十六烷基三甲基溴化銨）、十六烷基氯化吡啶（CPC)、十六烷基三甲基氯化銨（CTAC) 、N，N'，N’-聚氧乙烯（10)-N-獸脂-1，3-二胺丙烷、十二烷基三甲基溴化銨、十六烷基三甲基溴化銨、經混合之烷基三甲基溴化銨、苯甲基二甲基十二烷基氯化銨、苯甲基二甲基十六烷基氯化銨、苯甲基三甲基甲氧化銨、十六烷基二甲基乙基溴化銨、二甲基雙十八烷基溴化銨（DDAB)、甲基氯化苄乙氧銨、氯化十甲烯胺、甲基混合之三烷基氯化銨、氯化甲基三辛銨）、氯化N，N-二甲基-N-[2(2-甲基-4- -80- 201116294

(1，1，3,3四甲基丁基）-苯氧基]-乙氧基）乙基]-苯甲銨 (DEBDA)、二烷基二甲基銨鹽、[1-(2,3-二油氧基）-丙基]-N,N，N,三甲基氯化銨、1，2·二醯基-3-(三甲基氨）丙烷（醯基二二肉豆蔻醯基、二棕櫚醯基、二硬脂醯基、二油醯基）、 1，2-二醯基-3-(二甲基氨）丙烷（醯基=二肉豆蔻醯基、二棕櫚醯基、二硬脂醯基、二油醯基）、丨，2-二油醯基-3-(4'-三甲基氨）丁醯基-sn-甘油、1,2-二油醯基·3-琥珀醯基-sn-甘油膽鹼酯，膽甾烯基（4’-三甲基氨）丁酸鹽）、N-烷基吡啶鑰基鹽類（例如溴化十六烷基吡啶及十六烷基氯化吡啶）、 N-烷基哌啶鹽類、雙陽離子bola型電解質（C12Me6; C 12BU6)、二院基甘油憐酸膽驗、溶脂酸卵隣月旨、L-α二油醯基磷脂醯乙醇胺、膽固醇半琥珀酸膽鹼酯、脂多胺類，包括但不限於雙十八基醯胺基甘胺醯基精胺（DOGS)、雙棕櫚醯基磷脂醯乙醇-醯胺基精胺（D P P E S )、脂聚-L (或D )-離胺酸（LPLL, LPDL)、與N-戊二醯基磷脂醯乙醇胺共軛之聚 (L(或D)-離胺酸、具有側胺基WGluPhCriN)之雙十二基麩胺酸酯、具有側胺基（C14GIuCnN + )之雙十四基麩胺酸酯、膽固醇之陽離子衍生物，包括但不限於膽甾烯基-3 Θ氧基琥珀醯胺基乙烯三甲基銨鹽、膽甾烯基-3 /3氧基琥珀醯胺基乙烯二甲基胺、膽甾烯基-3/3-羧基醯胺基乙烯三甲基銨鹽、及膽甾烯基-3 /9 -羧基醯胺基乙烯二甲基胺。其他有用之陽離子脂質係描述於US 2008/0085870及US 2〇〇8/0057080中’該等參考文獻以參照方式納入此處。該陽離子脂質較佳係可生物降解（可代謝）及生物相容 -81 - 201116294 的。

除了油及陽離子脂質以外，乳劑可包括非離子型界面活性劑及/或兩性離子型界面活性劑。該等界面活性劑包括但不限於聚氧乙烯去水山梨糖醇酯界面活性劑（通常指的是吐溫（Tween)，特別是聚山梨醇酯20及聚山梨醇酯80) :環氧乙烷（EO)、環氧丙烷（PO)及/或環氧丁烷（BO)之共聚物（以DOWFAXTM商品名販售，諸如直鏈EO/PO團聯共聚物；辛苯聚醇類，彼等之差異在於重複乙氧基（氧基-1，2-乙烷二基）基團之數目，以辛苯聚醇-9(氚核（Triton) X-100 或t-辛基苯氧基聚乙氧基乙醇）最受注意：（辛基苯氧基）聚乙氧基乙醇（IGEPAL CA-630/NP-40);磷脂質諸如磷脂醯膽鹼（卵磷脂）：源自月桂基、十六烷基、硬脂基及油基醇類之聚氧乙烯脂肪醚（稱爲Brij界面活性劑），諸如三乙烯甘油單月桂基醚（Brij 30);聚氧乙烯-9-月桂基醚；及去水山梨糖醇酯類（通常被稱爲司盤（Span))，諸如去水山梨糖醇三油酸酯（司盤85)及去水山梨糖醇一月桂酸酯。較佳之包括於乳劑中之界面活性劑爲聚山梨醇酯80(吐溫80;聚氧乙烯去水山梨糖醇單油酸酯）、司盤85 (去水山梨糖醇三油酸酯）、卵磷脂及氚核X-100。該等界面活性劑之混合物可被包括於乳劑中，例如吐溫80/司盤85混合物’或吐溫80/氚核-X100混合物。聚氧乙烯去水山梨糖醇酯之組合諸如聚氧乙烯去水山梨糖醇單油酸酯（吐溫80)及辛苯聚醇諸如t -辛基苯氧基-聚乙氧基乙醇（氚核X-100)亦爲適合。另一有用之組合包含月桂醚9加聚 -82- 201116294 氧乙烯去水山梨糖醇酯及/或辛苯聚醇。有用之混合物可包含HLB値介於10至2〇之介面活性劑（例如聚山梨醇酯80， H LB値1 5 · 0)及H LB値介於1至1 0之界面活性劑（例如去水山梨糖醇三油酸酯，HLB値1.8)。最終乳劑中較佳之油量（體積百分比）係介於2至2 0 %，例如5至1 5 %、6至1 4 %、7至1 3 %、8至1 2 %。鯊烯含量約4 至6%或約9至1 1 %係特別有用。

在最終乳劑中界面活性劑較佳之量（重量百分比）係介於0· 00 1 %至8%。舉例來說：聚氧乙烯去水山梨糖醇酯類（諸如聚山梨醇酯80)0.2至4%，特別地介於0.4至0.6%、介於0.4 5至0.5 5 % (約0 · 5 %)或介於1 . 5至2 %、介於1 . 8至2.2 %、介於1 . 9至2.1 % (約2 % )或0.8 5至0.9 5 %或約1 % ;去水山梨糖醇酯類（諸如去水山梨糖醇三油酸酯）0.02至2%，特別是約 0.5 %或約1%;辛基-或壬基苯氧基聚氧乙醇類（諸如氚核 Χ-100)0.001至0.1%，特別是0.005至0.02 %:聚氧乙烯醚類 (諸如月桂醚9 ) 0.1至8 %，較佳地0 · 1至1 0 %及特別是0.1至 1 % 或約 0.5 %。油及界面活性劑之絕對量及彼等之比可能變化極大但仍形成乳劑。技藝人士可輕易地改變該等成分之相對比例以取得所欲之乳劑，但是重量比介於4 : 1至5 : 1之油及界面活性劑係典型的（油多）。確保乳劑之免疫刺激活性的一項重要參數（特別是在大型動物）係該油滴之大小（直徑）。最有效之乳劑具有次微米範圍之液滴大小。適當之液滴大小將介於5 0至7 5 0奈米 -83- 201116294

之範圍。最有用之平均液滴大小係小於250奈米，例如小於200奈米，小於150奈米。該平均液滴大小係有用地介於 80至180奈米。理想地，至少80%(數量上）且較佳地至少 90%之乳劑油滴的直徑係小於250奈米。用於決定乳劑中之平均液滴大小及大小分布之裝置係可購得的。該些裝置通常使用動態光線散射及/或單粒子光學感應之技術，例如可購自顆粒大小系統（Particle Sizing Systems)公司（美國聖塔芭芭拉市）之AccusizerTM& NicompTM系列之儀器，或來自馬爾文（Malvern)儀器公司（英國）之ZetasizerTM儀器，或來自堀場（Ho rib a)公司（日本京都）之顆粒大小分布分析儀理想上，該液滴大小之分布（按數量）僅具有一個最大値，意即單一族群之液滴以平均（模式）分布，而非具有二個最大値。較佳之乳劑具有<0.4之多分散性，例如0.3、〇 . 2或更小。

具有次微米液滴及狹窄大小分布之適當乳劑可利用微射流法獲得。此技術藉由將輸入成分液流以高壓及高流速推進通過幾何固定通道以減少平均油滴大小。該些液流接觸通道壁、腔室壁及彼此。該導致之剪力、衝擊力及空穴力造成液滴大小之減少。可重覆進行微射流之步驟，直到達成具有所欲液滴大小平均値及分布之乳劑。作爲微射流法之替代方法，加熱法可被用於造成相轉變。該等方法亦可提供具有緊緻顆粒大小分布之次微米乳劑。 -84 - 201116294 較佳之乳劑可經過濾滅菌，也就是彼等之液滴可通過 220奈米之過濾器。除了提供滅菌作用之外，此程序同時移除乳劑中之任何大型液滴。

在特定實施態樣中，該乳劑中之陽離子脂質係DOTAP 。該陽離子水中油乳劑可能包含自約0.5毫克/毫升至約25 毫克/毫升之DOTAP。舉例來說，該陽離子水中油乳劑可能包含自約0.5毫克/毫升至約25毫克/毫升、自約0.6毫克/ 毫升至約2 5毫克/毫升、自約0.7毫克/毫升至約2 5毫克/毫升、自約0.8毫克/毫升至約25毫克/毫升、自約0.9毫克/毫升至約25毫克/毫升、自約1.0毫克/毫升至約25毫克/毫升 '•自約1.1毫克/毫升至約25毫克/毫升、自約1.2毫克/毫升至約2 5毫克/毫升、自約1 . 3毫克/毫升至約2 5毫克/毫升、自約1.4毫克/毫升至約25毫克/毫升、自約1.5毫克/毫升至約2 5毫克/毫升、自約1 . 6毫克/毫升至約2 5毫克/毫升、自約1 .7毫克/毫升至約25毫克/毫升、自約0.5毫克/毫升至約 24毫克/毫升、自約0.5毫克/毫升至約22毫克/毫升、自約 0.5毫克/毫升至約20毫克/毫升、自約0.5毫克/毫升至約18 毫克/毫升、自約0.5毫克/毫升至約15毫克/毫升、自約0.5 毫克/毫升至約12毫克/毫升、自約0.5毫克/毫升至約10毫克/毫升、自約0.5毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約0.5毫克 /毫升至約2毫克/毫升、自約0_5毫克/毫升至約1.9毫克/毫升、自約0.5毫克/毫升至約1.8毫克/毫升、自約0.5毫克/毫升至約1.7毫克/毫升、自約0.5毫克/毫升至約1.6毫克/毫升、自約0.6毫克/毫升至約1 .6毫克/毫升 '自約0.7毫克/毫升 -85- 201116294

至約1 ·6毫克/毫升、自約0.8毫克/毫升至約1 .6毫克/毫升、約0.5毫克/毫升、約〇.6毫克/毫升、約0.7毫克/毫升、約 0.8毫克/毫升、約0.9毫克/毫升、約1.0毫克/毫升、約u 毫克/毫升、約1.2毫克/毫升、約1.3毫克/毫升、約1.4毫克 /毫升、約1 .5毫克/毫升、約1.6毫克/毫升、約12毫克/毫升、約18毫克/毫升、約2〇毫克/毫升、約21.8毫克/毫升、約 24毫克/毫升等之DOTΑΡ。在一示範性實施態樣中，該陽離子水中油乳劑包含自約0.8毫克/毫升至約1.6毫克/毫升之DOT AP，諸如0.8毫克/毫升、1.2毫克/毫升、1.4毫克/毫升或1.6毫克/毫升。

在特定實施態樣中，該陽離子脂質係DC膽固醇。該陽離子水中油乳劑可能包含自約0.1毫克/毫升至約5毫克/毫升之DC膽固醇。舉例來說，該陽離子水中油乳劑可能包含自約0.1毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約0.2毫克/毫升至約 5毫克/毫升、自約0.3毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約0.4 毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約0.5毫克/毫升至約5毫克/ 毫升、自約0.62毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約1毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約1.5毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約2毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約2.46毫克/毫升至約 5毫克/毫升、自約3毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約3.5毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約4毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約4.5毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約0.1毫克/毫升至約4.92毫克/毫升、自約0.1毫克/毫升至約4.5毫克/毫升、自約〇. 1毫克/毫升至約4毫克/毫升、自約〇· 1毫克/毫升至約 -86- 201116294

3 . 5毫克/毫升、自約0 . 1毫克/毫升至約3毫克/毫升、自約 0.1毫克/毫升至約2.46毫克/毫升、自約0.1毫克/毫升至約2 毫克/毫升、自約0.1毫克/毫升至約1.5毫克/毫升、自約0.1 毫克/毫升至約1毫克/毫升、自約0.1毫克/毫升至約0.62毫克/毫升、約0.15毫克/毫升、約0.3毫克/毫升、約0.6毫克/ 毫升、約0.62毫克/毫升、約0.9毫克/毫升、約1.2毫克/毫升、約2.46毫克/毫升 '約4.92毫克/毫升等之DC膽固醇。在一示範性實施態樣中，該陽離子水中油乳劑包含自約 0.62毫克/毫升至約4.92毫克/毫升之DC膽固醇，諸如2.46 毫克/毫升 ° 在特定實施態樣中，該陽離子脂質係DDA。該陽離子水中油乳劑可能包含自約〇. 1毫克/毫升至約5毫克/毫升之 DDA。舉例來說，該陽離子水中油乳劑可能包含自約0. 1毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約0.1毫克/毫升至約4.5毫克/ 毫升、自約0.1毫克/毫升至約4毫克/毫升、自約0.1毫克/毫升至約3.5毫克/毫升、自約0.1毫克/毫升至約3毫克/毫升、自約0.1毫克/毫升至約2.5毫克/毫升、自約0.1毫克/毫升至約2毫克/毫升、自約0. 1毫克/毫升至約1 .5毫克/毫升、自約 0.1毫克/毫升至約1.45毫克/毫升、自約0.2毫克/毫升至約5 毫克/毫升、自約0.3毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約0.4毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約0.5毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約0.6毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約0.73毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約0.8毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約0.9毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約1.0毫克/毫升至約 -87- 201116294

5毫克/毫升、自約1·2毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約1.45 毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約2毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約2.5毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約3毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約3.5毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約4毫克/毫升至約5毫克/毫升、自約45毫克/毫升至約5毫克/毫升、約1 .2毫克/毫升、約丨.45毫克/毫升等之DDA。或者’該陽離子水中油乳劑可能包含約2 0毫克/毫升、約2 1 毫克/毫升、約21.5毫克/毫升、約21.6毫克/毫升、約25毫克/毫升之DDA。在一示範性實施態樣中，該陽離子水中油乳劑包含自約0.73毫克/毫升至約1.45毫克/毫升之DDA ，諸如1.45毫克/毫升。

導管或類似裝置可被用於遞送本發明之自我複製之 RNA分子（裸RNA或與遞送系統組合）至目標器官或組織中。適當之導管係揭示於例如美國專利第4,1 86,745; 5,397,307; 5,547,472; 5,674,192;及 6,129，705 號，所有皆以參照方式納入此處。本發明包括使用適當之遞送系統（諸如含有經包封或吸附之自我複製之RNA的脂質體、聚合物微粒或次微米乳劑微粒）遞送編碼RSV-F多肽之自我複製之RNA分子，以例如單獨地或與其他巨分子組合地誘發免疫反應。本發明包括具有經吸附及/或經包封之自我複製之RN A分子的脂質體、微粒及次微米乳劑及彼等之組合。如在實施例中進一步證實，該與脂質體及次微米乳劑微粒相連之自我複製之RN A分子可被有效地遞送至宿主細 -88- 201116294 胞’且可誘發對g亥自我複製之RNA所編碼之蛋白的免疫反應。該免疫原性組成物

本發明提供免疫原性組成物。該免疫原性組成物可能包括單一種活性免疫原性劑，或數種免疫原性劑。舉例來說，該免疫原性組成物可包含呈單一形式（例如單體、三體或玫瑰花簇）或呈二或多種形式（例如單體與三體之混合物或單體與三體間之動態平衡）之RSV F多肽。該免疫原性組成物可包含編碼RSV-F多肽之自我複製之RNA，且較佳地亦包含適當之遞送系統，諸如脂質體、聚合物微粒、水中油乳劑及彼等之組合。本發明之免疫原性組成物可能亦包含一或多種免疫調節劑。該等佐劑可能包括如下進一步討論之ΤΗ 1佐劑及/或 T Η 2佐齊IJ。在另一實施態樣中，本發明之免疫原性組成物包含展示存在於RSV-F糖蛋白之預融合或中間融合構型但不存在於該糖蛋白之融合後構型中之表位的多肽。在另一實施態樣中，本發明之免疫原性組成物包含第一多肽及第二多肽’其中該第一多肽包含整體或部分之 RSV F蛋白，且該第二多肽包含異源性寡聚結構域。該第一多肽可包含RSV F蛋白胞外域。該第二多肽可爲源自流感血球凝集素之三聚化結構域、源自SARS刺突蛋白之三聚化結構域、源自HIV gp41、NadA、經修飾之GCN4或 -89 - 201116294 ATC酶之三聚化結構域。在一態樣中，本發明係一種包含經切割之RS V F蛋白胞外域多肽之組成物，該等經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係如此處所述藉由提供未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽，或C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽，並切割彼等以產生FiS F2次單位加以產製。

在另一態樣中，本發明係一種包含未經切割之RSV F 蛋白胞外域多肽三體及/或單體之組成物，該等未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽三體及/或單體係如此處所述藉由提供含有未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之生物性物質，及自該生物性物質純化未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體、未經切割之三體或未經切割之單體與未經切割之三體之組合（例如混合物或動態平衡）加以產製。在一些實施態樣中，該RSV F蛋白胞外域多肽在約位置106至109處及約位置1 3 3至1 3 6處包含經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位點，需要時可另包含經改變之融合肽。在其他實施態樣中，該RSV F蛋白胞外域在約位置106至1 09處及約位置1 33 至1 3 6處包含經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位點，且在約位置1 0 1至約位置1 6 1之間包含經改變之胰蛋白酶切割位點，需要時可另包含經改變之融合肽。在另一態樣中，本發明係一種包含C端未經切割之 RSV F蛋白胞外域多肽三體及/或單體之組成物，該等C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽三體及/或單體係如此處所述藉由提供含有C端未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之 -90 - 201116294 生物性物質，及自該生物性物質純化未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體、未經切割之三體或未經切割之單體與未經切割之三體之組合（例如混合物或動態平衡）加以產製

在另一態樣中，本發明係一種包含經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之組成物，該等經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係如此處所述藉由提供含有經切割之包含經改變之融合肽（例如至少一部分之融合肽係經刪除）的RSV F蛋白胞外域多肽之生物性物質及自該生物性物質純化經切割之 RSV F蛋白胞外域多肽三體加以製備。在另一態樣中，本發明係一種包含未經切割之RSV F 蛋白胞外域多狀之組成物，該等未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係如此處所述藉由提供含有未經切割之包含經改變之融合肽（例如至少一部分之融合肽係經刪除）的RSV F 蛋白胞外域多肽之生物性物質及自該生物性物質純化未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體加以製備。本發明之組成物係較佳地適合用於對哺乳動物個體（諸如人）投予，且包括一或多種醫藥上可接受之載劑及/或賦形劑，包括佐劑。該等成分之完整討論請參閱參考文獻 29。組成物將通常呈水性形式。該組成物係免疫原性組成物時，將其投予至哺乳動物（諸如人）將誘發免疫反應。該免疫原性組成物可被用於製備供免疫哺乳動物之疫苗調製劑。該免疫原性組成物可能包括單一種活性免疫原性劑， -91 · 201116294 或數種免疫原性劑。舉例來說，該RSV F蛋白胞外域多肽可呈單一形式（例如未經切割之單體、經切割之單體、未經切割之三體、經切割之三體或經切割之三體之玫瑰花簇 )或呈二或多種形式（例如未經切割之單體與未經切割之三體的混合物或在未經切割之單體與未經切割之三體之間的動態平衡）。此外，該組成物可包含RSV F蛋白胞外域多肽及一或多種其他RSV蛋白（例如G蛋白及/或Μ蛋白）及/或其可能與來自其他病原之免疫原組合。

該組成物可能包括保存劑諸如硫柳汞或2 -苯氧基乙醇。然而較佳的是，該疫苗應實質上不含（也就是少於5微克/ 毫升）汞物質，例如不含硫柳汞。不含汞之免疫原性組成物係較佳。不含保存劑之免疫原性組成物係特別較佳。

爲了要控制張力，較佳的是包括生理性鹽，諸如鈉鹽。氯化鈉（NaCl)係較佳，其可能以介於1至20毫克/毫升存在。其他可能存在之鹽類包括氯化鉀、二氫磷酸鉀、去水磷酸二鈉、氯化鎂、氯化鈣及該類似物。組成物通常將具有介於200毫滲/公斤至400毫滲/公斤之滲透壓，較佳地介於240至360毫滲/公斤，且將更佳地落在介於290至310毫滲/公斤之範圍內。組成物可能包括一或多種緩衝液。典型緩衝液包括：磷酸鹽緩衝液、Tris緩衝液、硼酸鹽緩衝液、琥珀酸鹽緩衝液、組胺酸緩衝液（特別是含有氫氧化鋁佐劑）、或檸檬酸鹽緩衝液。緩衝液通常將被包括在5至20毫莫耳之範圍。該組成物之pH値通常將介於5.0至8.1，更典型地介於6.0 -92 - 201116294 至8.0，例如介於6.5至7.5，或介於7.0至7.8。本發明之方法因此可能包括在包裝前調整未分裝疫苗之pH値的步驟。該組成物係較佳地無菌。該組成物係較佳地非致熱性，例如每劑包含< 1 EU (內毒素單位，標準測量），較佳地每劑<0.1 EU。該組成物係較佳地不含麩質。人疫苗通常以約0.5毫升之劑量體積投予，不過可能對兒童投予半劑（意即約0.25毫升）。

佐劑本發明之組成物（包含RSV-F多肽或編碼RSV-F多肽之核酸）亦可能包含一或多種佐劑，例如二、三、四或多種佐劑，該等佐劑之功能爲增強在接受該組成物之病患體內所誘發之免疫反應（體液及/或細胞性）。該等佐劑可能包括 TH1佐劑及/或TH2佐劑。可用於本發明之組成物中的佐劑包括但不限於：含礦物質組成物。適合用來作爲本發明中之佐劑的含礦物質組成物包括礦物鹽，諸如鈣鹽及鋁鹽 (或彼等之混合物）。本發明包括礦物鹽類諸如氫氧化物（例如氫氧化合物）、磷酸鹽（例如羥基磷酸鹽、正磷酸鹽）、硫酸鹽等，或呈任何適當形式（例如膠體、晶體、無定形等）且較佳地吸附之不同礦物化合物之混合物。鈣鹽包括磷酸鈣（例如在參考文獻3 8中揭示之“ c A P，，顆粒）。鋁鹽包括氫氧化物、磷酸鹽、硫酸鹽及該類似物。該含礦物 • 93 - 201116294 之組成物亦可能被調製成金屬鹽之顆粒（3 9)。鋁鹽佐劑係於下更詳細地描述。 . 油乳劑組成物（見下述詳細討論）。適合用來作爲本發明中之佐劑的油乳劑組成物包括鯊烯-水乳劑，諸如M F 5 9 (5 %鯊烯、〇 · 5 %吐溫8 0及0 · 5 %司盤，利用微射流機調製成次微米顆粒）。

• 細胞介素誘導劑（見下述詳細討論）。適合用於本發明中之細胞介素誘導劑包括類鐸受器7 (TLR7) 協同劑（例如於WO 2 009/ 1 1 1 3 3 7中揭示之苯并萘陡化合物）。

• 皂素（參考文獻74之第22章）是一群異源性之固醇糖苷類及三萜式糖苷類，它們在廣泛植物物種之樹皮、樹葉、莖、根甚至花中發現。來自智利皂莢樹（Quillaia saponaria Molina)之樹皮的皇素已被廣泛地硏究以作爲佐劑。皂素亦可購自棕菝葜 (Smilax ornata)(孩契精（sarsaprilla))、錐花絲石竹（Gypsophilla paniculata )(新娘頭紗（brides veil))、及肥巷草（Saponaria officianalis)(肥巷根 (soap root))。皂素佐劑調製劑包括經純化之調製劑（諸如QS2 1)以及脂質調製劑（諸如ISCOM)。 QS21係以史堤慕蘭（STIMULON) (TM)之名稱販售。皂素組成物利用HPLC及RP-HPLC純化。某些利用該些技術純化之組分已被識別，包括QS7、 QS1 7 ' QS18、QS21、QH-A、QH-B 及 QH-C。較 -94- 201116294

佳地，該皂素係QS21。製備QS21之方法係於參考文獻40中揭示。皂素調製劑亦可包含固醇，諸如膽固醇（41)。皂素與膽固醇之組合可被用於形成稱爲免疫刺激複合物（IS COM)之獨特顆粒（參考文獻74之第23章）。ISCOM通常亦包括磷脂質諸如磷脂醯乙醇胺或磷脂醯膽鹼。任何已知之皂素可被用於ISCOM中。較佳地，該ISCOM包括一或多種QuilA、QHA及QHC。ISCOM係進一步描述於參考文獻41至43。可任意選擇地，該ISCOM可能缺乏額外之清潔劑（44)。皂素基底佐劑之發展回顧可見於參考文獻45及46。脂質佐劑（見下述詳細說明）包括水中油乳劑、源自腸內菌脂多糖之經修飾之天然脂質、磷脂質化合物（諸如該經合成之磷脂質二聚體E6 020)及該類似物。

細菌性ADP-核糖基化毒素（例如大腸桿菌（E. coli )不耐熱性腸毒素“LT”、霍亂毒素“CT”或百日咳毒素“PT”）及彼等之去毒性衍生物，諸如稱爲LT-K63及LT-R72之突變毒素（47)。去毒性ADP-核糖基化毒素作爲黏膜佐劑之用途係描述於參考文獻 48及作爲非經腸佐劑參見參考文獻49。生物黏著劑及黏膜黏著劑，諸如酯化玻糖醛酸微粒（5 0)或聚葡萄胺糖及彼之衍生物（51)。微粒（意即直徑約〜1 0 0奈米至〜1 5 0微米，更佳地 -95- 201116294 直徑〜200奈米至~30微米，或直徑〜500奈米至〜10 微米之顆粒），該等微粒自可生物降解且無毒之物質（例如聚（α-羥酸）、聚羥基丁酸、聚聚原酸酯、聚酐、聚己酸內酯及該類似物）形成，以聚（乳酸交酯-共-乙交酯）爲較佳，其可任意選擇地經處理以具有帶負電之表面（例如以SDS處理）或帶正電之表面（例如以陽離子清潔劑諸如CTAB處理）

脂質體（參考文獻74之第13及14章）。適合用來作爲佐劑之脂質體調製劑之實例係描述於參考文獻 52 至 54 °

聚氧乙烯醚類及聚氧乙烯酯類（5 5)。該等調製劑另包括聚氧乙烯去水山梨糖醇酯界面活性劑與辛苯聚醇之組合（5 6)以及聚氧乙烯烷基醚類或酯類界面活性劑與至少一種其他非離子性界面活性劑諸如辛苯聚醇之組合（57)。較佳之聚氧乙烯醚類係選自下列：聚氧乙烯-9-月桂基醚（月桂醚9)、. 聚氧乙烯-9-硬脂基醚、聚氧乙烯-8-硬脂基醚、聚氧乙烯-4-月桂基醚、聚氧乙烯- 35-月桂基醚或聚氧乙烯-23-月桂基醚。胞壁醯基肽類諸如Ν-乙醯基胞壁醯基-L-蘇胺醯基-D-異麩醯胺酸（“thr-MDP”）、Ν-乙醯基-降胞壁醯基-L-丙胺醯基-D-異麩醯胺酸（nor-MDP)、N-乙醯基葡萄胺醯基-N-乙醯基胞壁醯基-L-A1-D-異 -96- 201116294 葡-L-Ala-二棕櫚氧基丙基醯胺（“dTP-DPP”或 “TheramideTM”）、N-乙醯基胞壁醯基-L-丙胺醯基-D-異麩醯胺基-L-丙胺酸_2-(l，-2，二棕櫚醯基-sn-甘油-3-羥基磷醯基氧基）_乙基胺（“MTP-PE，，）

自第一革蘭氏陰性細菌製備之外膜蛋白之蛋白體製劑與源自第二革蘭氏陰性細菌之脂糖製劑之組合’其中該外膜蛋白之蛋白體與脂糖製劑形成穩定之非共價佐劑複合物。該等複合物包括“〖V X — 908” ’ 一種包含腦膜炎奈瑟球菌（NeisserU meningitidis)外膜與脂多糖之複合物。一種聚氧化鑰聚合物（58，59)或其他N -氧化聚乙烯-哌井環衍生物。甲基肌苷5·-單磷酸鹽酯（“MIMP”）（60)。

一種聚羥基化吡咯雙烷化合物（6 1 )，諸如具有下式者：

CH2〇H 其中R係選自氫、直鏈或分支、未經取代或經取代飽和或未飽和之醯基、烷基（例如環烷基）、燦基、$ 基或芳基，或彼之醫藥上可接受之鹽或衍生物。胃丨列包括但不限於：木麻黃素（casuarine)、木麻黃素_6 ^ D-葡萄脈喃糖、3表-木麻黃素、7表-木麻黃素、 3，7-二表-木麻黃素及該類似物。 -97- 201116294 * —種CD Id配體，諸如α -糖基神經醯胺（62-69)( 例如α -半乳糖苷基神經醯胺）、含植物鞘氨醇之 «-糖基神經醯胺類、〇(：11、1<：1^7000 [(23,3 3,411)-1-〇-(01-〇-半乳哌喃糖基）-2-(心二十六醯基胺基）-1，3,4-十八烷三醇]、CRONY-101、3··-0-磺基-半乳糖苷基神經醯胺等。 * —種伽瑪菊糖（70)或彼之衍生物，諸如明礬菊粉 (algammulin) 〇

* 病毒體（Virosome)及類病毒顆粒（VLP)。該等結構通常包含一或多種可任意選擇地與磷脂質組合或調製之病毒來源蛋白。該等蛋白通常不具病原性、不具複製性，且通常不包含任何天然病毒基因組。該病毒蛋白可能經重組產製或自完整病毒分離。該等適用於病毒體或VLP之病毒蛋白包括源自流感病毒（諸如HA或ΝΑ)、B型肝炎病毒（諸如核心或殼體蛋白）、E型肝炎病毒、麻疹病毒、辛德比斯病毒（Sindbis virus)、輪狀病毒、口蹄疫病毒、反轉錄病毒、諾瓦克病毒（Norwalk virus)、人乳頭狀瘤病毒、HIV、RNA-噬菌體、 QB·噬菌體（諸如外套蛋白）、GA-噬菌體、fr-噬菌體、AP 205噬菌體及Ty(諸如逆轉位子Ty蛋白pi) 之蛋白。這些及其他佐劑活性物質更詳細地於參考文獻7 4及7 5 中討論》 -98- 201116294 組成物可能包括二、三、四或多種佐劑。舉例來說，本發明之組成物可能有利地包括水中油乳劑與細胞介素誘導劑二者，或含礦物組成物與細胞介素誘導劑二者，或二種水中油乳劑佐劑，或二種苯并萘啶化合物等。在組成物中之抗原及佐劑將通常被混合。油乳劑佐劑

適合用來作爲本發明中之佐劑的油乳劑組成物包括鯊烯-水乳劑，諸如M F 5 9 ( 5 %鯊烯' 0.5 %吐溫8 0及0 · 5 %司盤 85，利用微射流機調製成次微米顆粒）。完全弗氏佐劑 (CFA)及不完全弗氏佐劑（IFA)亦可能被使用。多種水中油乳劑係爲已知，它們通常包括至少一種油及至少一種界面活性劑，該（等）油（類）及該（等）界面活性劑（類）係可生物降解（可代謝）且可生物相容。在乳劑中之油滴的直徑通常小於5微米，甚至可能具有次微米直徑，這些微小體積利用微射流機達成以提供穩定之乳劑。直徑小於22 0奈米之液滴係較佳因爲彼等可經由過濾滅菌。本發明可使用油類，諸如該些來自動物（諸如魚）或植物來源者。植物油之來源包括堅果、種子及穀物。花生油、大豆油、椰子油及橄欖油是最經常取得之堅果油實例。取自例如荷荷巴豆之荷荷巴油可被使用。種子油包括紅花好油、棉花好油、葵花好油、芝麻好油及該類似物。在穀物群中，玉米油是最容易取得的，但是其他穀粒諸如小麥、燕麥、黑麥、米、畫眉草、黑小麥及該類似物之油亦可 -99 - 201116294 被使用。6至10個碳之甘油及1，2-丙二醇脂肪酸酯類雖然不存在於天然之種子油中，但可利用水解、分離及酯化作用，自堅果及種子油中之適當物質開始製備。來自哺乳動物乳汁之脂肪及油類係可代謝的，因此可被用於實施本發明。分離、純化、皂化程序及其他自動物來源取得純油脂所需之方法係該領域所廣爲周知。大部分的魚包含可輕易地收集之可代謝之油。舉例來說，鱈魚肝油、鯊魚肝油及鯨魚油諸如鯨蠟爲數種此處可使用之魚油的實例》數種支鏈油以生化方式合成爲五碳異戊二烯單位，通常被稱爲類萜。鯊魚肝油包含分支、不飽和之類萜稱爲鯊烯（2,6,10,15, 19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯），此特別適用於此處。鯊烷（鯊烯之飽和類似物）亦爲較佳之油。魚油（包括鯊烯及鯊烷）可輕易地自商業來源購得，或可利用該領域已知之方法取得。其他較佳之油類係維生素E(見下述 )。油類之混合物可被使用。界面活性劑可根據彼等之H LB被分類（親水性/親油性平衡）。本發明之較佳界面活性劑具有至少1 0、較佳至少 1 5及更佳至少1 6之H L Β値。本發明可使用之界面活性劑包括但不限於聚氧乙烯去水山梨糖醇酯界面活性劑（通常指的是吐溫（Tween)，特別是聚山梨醇酯20及聚山梨醇酯80) :環氧乙烷（EO)、環氧丙烷（PO)及/或環氧丁烷（BO)之共聚物（以DOWFAXTM商品名販售，諸如直鏈EO/PO團聯共聚物；辛苯聚醇類，彼等之差異在於重複乙氧基（氧基-1，2-乙烷二基）基團之數目，以辛苯聚醇-9(氚核（Trit〇n)X-100 -100- 201116294

或t-辛基苯氧基聚乙氧基乙醇）最受注意；（辛基苯氧基）聚乙氧基乙醇（IGEPAL CA-630/NP-40);磷脂質諸如磷脂醯膽鹼（卵磷脂）；壬基苯酚乙氧化物，諸如TERGITOL(TM) NP系列；源自月桂基、十六烷基、硬脂基及油基醇類之聚氧乙烯脂肪醚（稱爲Brij界面活性劑），諸如三乙烯甘油單月桂基醚（Brij 30);及去水山梨糖醇酯類（通常被稱爲司盤 (SPAN))-諸如去水山梨糖醇三油酸酯（司盤85)及去水山梨糖醇一月桂酸酯。非離子性界面活性劑係較佳。較佳之包括於乳劑中之界面活性劑爲吐溫80(TM)(聚氧乙烯去水山梨糖醇單油酸酯）、司盤85(去水山梨糖醇三油酸酯）、卵磷脂及氚核X-100。界面活性劑之混合物可被使用，例如吐溫8 0 (T Μ )/司盤85混合物。聚氧乙烯去水山梨糖醇酯之組合諸如聚氧乙烯去水山梨糖醇單油酸酯（吐溫80(ΤΜ))及辛苯聚醇諸如t-辛基苯氧基聚乙氧基乙醇（氚核X-100)亦爲適合。另一有用之組合包含月桂醚9加聚氧乙烯去水山梨糖醇酯及/或辛苯聚醇。界面活性劑之較佳量（重量百分比）係：聚氧乙烯去水山梨糖醇酯（諸如吐溫80(ΤΜ))0·01至1%(特別地約0.1%); 辛基-或壬基苯酚聚氧乙醇（諸如氚核Χ-100或其他氚核系列之清潔劑）〇.〇〇1至0.1 %(特別地0.005至0.02%);聚氧乙烯醚類（諸如月桂醚9) 0.1至2 0 % (較佳地〇 1至1 〇 %及特別地 0 . 1 至 1 % 或約 0 · 5 %)。可用於本發明之特定水中油乳劑佐劑包括但不限於： -101 - 鯊烯、吐溫80(TΜ)及司盤85之次微米乳劑。該乳劑組成物之體積比可爲約5%鯊烯、約0.5%聚山梨醇酯8 0及約0.5 %司盤8 5。以重量而言，該等比例爲4.3%鯊烯、0.5%聚山梨醇酯80及0.48%司盤 85。此佐劑被稱爲MF59(7 1 -73 ) ’如參考文獻74 第10章及參考文獻75第12章中詳細描述。該 MF59乳劑有利地包括檸檬酸鹽離子，例如1〇毫莫耳檸檬酸鈉緩衝液。鯊烯、維生素E及吐溫80(TM)之乳劑。該乳劑可能包括磷酸鹽緩衝鹽水。可能也包括司盤8 5(例如1 %)及/或卵磷脂。該等乳劑可能具有自2至1 0% 鯊烯、自2至10%維生素E及自0.3至3%吐溫80 (TM)，且鯊烯：維生素E之重量比係較佳地<1，因爲提供較穩定之乳劑。鯊烯與吐溫80 (TM)之體積比可能爲約5 : 2。這種乳劑可藉由溶解吐溫 80 (TM)於PBS中以得到2%溶液，接著混合90毫升此溶液與（5克之DL-型α維生素E及5毫升之鯊烯）的混合物，然後微射流化該混合物加以製備。該形成之乳劑可能具有次微米油滴，例如平均直徑介於1〇〇至250奈米，較佳地約180奈米。鯊烯、維生素Ε及氚核清潔劑（例如氚核X-1〇〇)之乳劑。該乳劑也可能包括3d-MPL(見下述）。該乳劑可能包含磷酸鹽緩衝液。包含聚山梨醇酯（例如聚山梨醇酯8 0)、氚核清潔 -102- 劑（例如氚核X-100)及維生素E(例如α -維生素£琥珀酸鹽）之乳劑。該乳劑可能包括該三種成分之質量比爲約75: 11:10(例如75 0微克/毫升聚山梨醇酯80、110微克/毫升氚核Χ-100及1〇〇微克/毫升 α -維生素Ε琥珀酸鹽），且該濃度應包括來自抗原之該等成分的任何貢獻。該乳劑也可能包括鯊烯。該乳劑也可能包括3d-MPL(見下述）。該水相可能包含磷酸鹽緩衝液。鯊烷、聚山梨醇酯80及泊洛沙姆（poloxamer) 401 (普盧蘭尼克（PLURONIC) (TM) L121)之乳劑。該乳劑可被調製於P Η 7.4之磷酸鹽緩衝鹽水中。此乳劑係用於遞送胞壁醯基二肽之有用載劑，其與蘇胺醯基-MDP被用於SAF-1佐劑（76) (0.05至 l°/〇Thr-MDP、5%鯊烷、2.5%普盧蘭尼克L121及 0.2%聚山梨醇酯80)。該乳劑亦可在無Thr-MDP下使用，如在AF佐劑中（77) (5%鯊烷、1.25%普盧蘭尼克L1 21及0.2%聚山梨醇酯80)。微射流化係較佳。包含鯊烯、水性溶劑、聚氧乙烯烷基醚親水性非離子界面活性劑（例如聚氧乙烯（1 2)十六烷基十八基醚）及疏水性非離子界面活性劑（例如去水山梨糖醇酯或二縮甘露醇酯，諸如去水山梨糖醇一油酸酯或司盤8 0)之乳劑。該乳劑係較佳地熱可逆性及/或有至少90%之油滴（體積）大小小於200奈 -103- 201116294 米。該乳劑也可能包括一或多種：醛醇、抗凍劑 (例如糖，諸如十二基麥芽糖苷及/或蔗糖）及/或烷基聚糖苷。該等乳劑可能經冷凍乾燥。

. 包含0.5至50%之油、0.1至10%之磷脂質及0.05至 5%之非離子界面活性劑之乳劑。如參考文獻78中所述，較佳之磷脂質成分係磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯絲胺酸、磷脂醯肌醇、磷脂醯甘油、磷脂酸、神經鞘磷脂及心脂。次微米之液滴大小係有利的。

• 不可代謝之油（諸如輕礦物油）及至少一種界面活性劑（諸如卵磷脂、吐溫80 (TM)或司盤80)之次微米水中油乳劑。可包括添加劑，諸如QuilA皂素、膽固醇、皂素-親脂分子共軛物（諸如參考文獻 79中所述之GP 1-0 100，藉由經葡萄糖醛酸之羧基添加脂肪族胺至去乙醯化皂素加以產製）、二甲基雙十八基溴化胺及/或Ν,Ν-雙十八基-N，N-雙（2-羥基乙基）丙烷二胺。 • 包含礦物油、非離子親脂性乙氧基化脂肪醇及非離子親水性界面活性劑（例如乙氧基化脂肪醇及/ 或聚氧乙烯-聚氧丙烯團聯共聚物）之乳劑。 • 包含礦物油、非離子親水性乙氧基化脂肪醇及非離子親脂性界面活性劑（例如乙氧基化脂肪醇及/ 或聚氧乙烯-聚氧丙烯團聯共聚物）之乳劑。 • 一種其中皂素（例如QuilA或QS21)及固醇（例如膽 -104· 201116294 固醇）係與螺旋微胞相關之乳劑（80)。該乳劑可在遞送當下即時地與抗原混合。因此該佐劑及抗原可分開保存於經包裝或配送之疫苗中，可供使用時之最終調製。該抗原將通常呈水性形式，以使該疫苗最後藉由混合二種液體加以製備。該用於混合之二種液體的體積比可以不同（例如介於5 : 1至1 : 5 )，但通常約爲1 : 1。

細胞介素誘導劑本發明之組成物中所包括之細胞介素誘導劑當被投予至病患能夠誘發免疫系統釋放細胞介素，包括干擾素及介白素。較佳之劑可誘發釋放下列一或多項：T-干擾素、介白素-1、介白素-2、介白素-12、TNF-α 、TNF-yS及GM-CSF。較佳之劑誘發釋放與Thl型免疫反應有關之細胞介素，例如r -干擾素、TNF- α、介白素-2。刺激7 -干擾素及介白素-2二者係較佳。因此，接受本發明之組成物之結果，將使病患具有受到RSV F蛋白刺激時將以抗原專一性方式釋放該所欲之細胞介素的Τ細胞。舉例來說，自彼等之血液所純化之Τ細胞於活體外暴露於F蛋白時將釋放7 -干擾素。測量週邊血液單核細胞（P BMC)中之該等反應之方法係該領域所知，包括E L IS A、E LI S Ρ Ο T、流式細胞測定及即時P C R。舉例來說，在參考文獻8 1所報告之試驗中對於抗破傷風類毒素之抗原專一性T細胞媒介之免疫反應（特別是r -干擾素反應）進行監測，發現ELI SPOT是最敏感的區別抗原專一性TT- -105- 201116294 誘發性反測細胞質適當應與自發性反應之方法，但是以流式細胞測定偵內細胞介素是最有效之偵測再刺激效應之方法。之細胞介素誘導劑包括但不限於：免疫刺激性寡核苷酸，諸如包含CpG模體（含有由磷酸鍵連接之未甲基化胞嘧啶與鳥苷之二核苷酸序列）者、或雙股RN A、或包含迴文序列之寡核苷酸、或包含聚（dG)序列之寡核苷酸。

3-0-去醯化一磷醯脂A(3dMPL，亦稱爲MPL(TM)) (82-85) ° 咪唑喹啉化合物，諸如IMIQUIMOD(TM) (“R-837”) (8 6, 8 7)、RESIQUIMOD(TM) (“R-84 8”）（88)及彼等之類似物，及彼等之鹽類（例如鹽酸鹽）。有關免疫刺激性咪唑喹啉化合物之其他細節可見於參考文獻89至93。一種苯并萘啶化合物，諸如：（a)具有下式之化合物：

其中： R4 係選自 Η、鹵素、-C(0)0R7 ， -C(0)R7 ， · C(0)N(RllR12) ， -N(RmR12) > -N(R9)2 ，- NHN(R9)2，-SR7 - -(CH2)nOR7，-(CH2)nR7，-LR8，-LR10，-OLR8，-OLR10，Ci-Ce烷基、C,- -106- 201116294

C6雜烷基、Ci-Ce鹵代烷基、C2-C8烯、（：2-(：8炔、CkQ烷氧基、Ci-Ce鹵代烷氧基、芳基、雜芳基、C3-C8環烷基及<33-(：8雜環烷基，其中該R4之 C^-Ce烷基、CrCe雜烷基、CrQ鹵代烷基、C2-Cs嫌、C2-C8炔、C「C6垸氧基、C1-C6齒代院氧基、芳基、雜芳基、（：3-(：8環烷基及c3-c8雜環烷基係各自可任意選擇地經1至3個獨立選自鹵素、-CN，-NO〗，-R7，-OR8，-C(0)R8，-0C(0)Rs ，-C(0)0R8 ， -N(R9)2 ， -P(0)(0R8)2 ，- OP(0)(OR8)2，-P(O)(ORl0h，-0P(0)(0R 丨〇)2，· C(0)N(R9)2，-S(0)2R8，-s(o)r8，-S(0)2N(R9)2 ，及-nr9s(o)2r8之取代基取代；各L係獨立地選自鍵結、-(0(CH2)m)t-、Ci-G烷基、匚2-(：6伸烯基及C2-C6伸炔基，其中該基、C2-C6伸烯基或C2-C6伸炔基係各自可任意選擇地經1至4個獨立選自鹵素、-R8，-OR8，-N(R9)2 ， -P(〇)(〇R8)2 ， -〇P(〇)(〇R8)2 ，- P(〇)(OR1Q)2或-0P(0)(0R1C1)2之取代基取代； R7係選自H、Ci-G烷基、芳基、雜芳基、c3-c8環烷基、C!-C6雜院基、Ci_C6鹵代院基、C2-C8稀、 C2-C8炔、Ci-Ce烷氧基、CrC6鹵代烷氧基及c3-Cs雜環烷基，其中該尺7之（^-(：6烷基、芳基、雜芳基、C3-Cs環烷基、C^-CU雜烷基、C丨_c6鹵代烷基、C2-C8烯、C2-C8炔、匸丨-(：6烷氧基、CrCe -107- 201116294 齒代院氧基及CyC8雜環烷基係各自可任意選擇地經1至3個R 13基團取代；

各R8係獨立地選自H、-CHiR1。、、Cl-C8烷基、C2-C8 燃、C2-C8炔、Ci-Ce齒代院基、Cl-c^氧基、 CrG雜烷基、（：3-(：8環烷基、c2-C8雜環烷基、 Ci-Ce羥基烷基或CmQ鹵代烷氧基’其中該R8之 Ci-Cs烷基、c2-c8烯、C2_C8炔、c丨-C6雜烷基、 Ci-C6鹵代烷基、（^-(：6烷氧基、c3-C8環烷基、 C2-C8雜環烷基、CrCe羥基烷基及Cl-C6鹵代烷氧基係各自可任意選擇地經1至3個獨立選自-CN • R11 > -OR11 · -SR11 . -C(0)R11 » -0C(0)Rm > -C(0)N(R9)2 > -C(0)OR^ , -NR9C(0)R" > - NR9R10，-NRUR12，-N(R9)2，-OR9，-OR丨0，-C(0)NR"R12 > -C(0)NRn〇H » -SCOJzR11 > - SCOJR11 > -S(0)2NR1'R12 » -NR1 1 S(0)2R'1 '-

PiO^OR11):，及-(^(OKOR11):之取代基取代；各 R9 係獨立地選自 H、-C(0)R8，-C(0)OR8，-C(0)R1() ，-C(0)OR10’ -S(0)2R10，-Κ6 烷基、《^-(^雜烷基或c3-c6環烷基’及各R9係獨立地匚,-^烷基，該等R9與彼等所連接之N—起形成C3-C8雜環院基，其中該C3-C8雜環烷基環可任意選擇地包含一個選自N、〇及S之額外雜原子，且其中該R9 之1-(：6烷基、（^-06雜烷基、C3-C6環烷基或C3-C 8雜環烷基係各自可任意選擇地經1至3個獨立 -108 - 201116294 選自-CN，R11，-OR11，-SR丨丨，-C(〇)rh，· 〇C(0)R" ， -C(0)0Rn ， -NR1 'R12 ，. C(0)NR"R12 ' -C(0)NRm0H - -S(0)2R"- S(0)Rn > -S(0)2NR,,R12 - -NR1 1 S(0)2R'« ,

PiOKOR11)?及- 之取代基取代；

各R1G係獨立地選自芳基、Cs-C8環烷基、c3-C8雜環院基或雜芳基，其中該芳基、〇3_(：8環烷基、c3-c8 雜環烷基及雜芳基係可任意選擇地經丨至3 g 自鹵素、-!^8，-^^8，-!^9，-!^!^，-!^!^^，-NR9C(0)R8，-NR9C02R8，-C02R8，_c(〇)R8 及· c(o)n(r9)2之取代基取代； R11及R12係獨立地選自η、（^-(：6烷基、（^ — (^雜烷基、 Ci-c；6,代院基、芳基、雜芳基、〇3-〇8環院基及匸3-(：8雜環烷基，其中該R11及R122Cl_c6烷基、 Ci-C：6雜烷基、Ci-C：6鹵代烷基、芳基、雜芳基、 C3-C8環烷基及CrC8雜環烷基係各自可任意選擇地經1至3個獨立地選自鹵素、-CN，R8，_〇R8 ’-c(o)r8，-oc(o)r8’-c(o)or8，_n(R9)2，-NR8C(〇)R8 - -NR8C(0)0R8,-C(0)N(R9)2 , c3-C8 雜環烷基、-s(0)2R8 ’ -s(o)2N(R9)2 ，- NR9S(〇)2R8 ’ Ci-C6鹵代院基及Ci-Ce鹵代院氧基 t取代基取代；或汉11及R12係各自獨立地Cl-C6烷基且與彼等所連接之 N原子一起形成可任意選擇地經取代之C 3 - C 8雜 -109- 201116294 環烷基環，該c3-c8雜環烷基環可任意選擇地包含一個選自Ν、Ο及S之額外雜原子；各R13係獨立地選自鹵素、-CN，-LR9，-LOR9，-OLR9 ，-LR10，-LOR10，-OLR10，-LR8，-LOR8，-OLR8 > -LSR8，-LSR10，- L C (Ο) R8，- 0 L C (Ο) R8 ，-LC(0)0R8，-LC(0)R10，-L0C(0)0R8，-LC(0)NR9Rm » -LC(0)NR9R8 » -LN(R9)2 > -

LNR9R8，-lnr9r10，-lc(o)n(r9)2，-LS(0)2R8 ，-LS(0)R8 * -LC(0)NR80H，-LNR9C(0)R8，- lnr9c(o)or8，-ls(o)2n(r9)2，-ols(o)2n(r9)2 ， -LNR9S(0)2R8 ， -LC(0)NR9LN(R9)2 ，- lp(o)(or8)2，-lop(o)(or8)2，-lp(o)(or10)2 及-olp(o)(or10)2 ; 各1^ 係獨立地選自-R8，-R7，-OR7，-OR8，-R1Q，-OR10 ， -SR8 ， -N〇2 ， -CN ， -N(R9)2 ，-

nr9c(o)r8，-nr9c(s)r8，-nr9c(o)n(r9)2，-nr9c(s)n(r9)2，-nr9co2r8，-nr9nr9c(o)r8 ’ -nr9nr9c(o)n(r9)2 ， -nr9nr9co2r8 ，- c(o)c(o)r8，-c(o)ch2c(o)r8，-co2r8，- (CH2)nC02R8，-C(0)R8，-C(S)R8，-C(0)N(R9)2 ，-c(s)n(r9)2，-oc(o)n(r9)2，-0C(0)R8，- C(0)N(0R8)R8 ， -C(NOR8)R8 ， -S(0)2R8 > - S(0)3R8 ， -S02N(R9)2 ， -S(0)R8 ， - NR9S02N(R9)2，-nr9so2r8 ，-p(o)(or8)2，- -110- 201116294 0P(0)(0R8)2 - -P(O)(OR10)2 . -OP(O)(OR,0)2 > -N(OR8)R8，-CH = CHC02R8，-C( = NH)-N(R9)2 及-(CH2)nNHC(0)R8 ;或在A環上的二個鄰近之Ra 取代基形成包含至多二個雜原子以爲環成員之5 至6員之環； η在每次出現時獨立地爲0，1，2，3，4，5，6，7或8

各m係獨立地選自1，2，3，4，5及6，且 t係1，2，3，4，5，6，7或8 ; (b)具有下式之化合物

其中：

R4 係選自 Η、鹵素、-(：(0)0117，-<：(0)117，-C(0)N(R"R12) ， -N(R"R12) ， -N(R9)2 ，- NHN(R9)2，-SR7，-(CH2)nOR7，-(CH2)nR7，-LR8，-LR1。，-OLR8，-OLR1。，Ci-Ca 烷基，C,-c6雜烷基，鹵代烷基，c2-c8烯，（：2-(：8炔，匸丨-(：6烷氧基，CrCe鹵代烷氧基，芳基，雜芳基，（：3-<：8環烷基及（：3-(：8雜環烷基，其中R4之 CrQ烷基，CrCe雜烷基，CrQ鹵代烷基、C2-C8烯、C2-C8炔、Κ6烷氧基、Κ6鹵代烷氧 -111 - 201116294 基、芳基、雜芳基、（：3-(：8環烷基及c3-c8雜環烷基係各自可任意選擇地經1至3個獨立選自鹵素 ’ -CN ’ -N〇2，-R7，-〇R8，-C(0)R8，-0C(0)R8 ’ -C(0)0R8 ’ -N(R9)2 ， -P(〇)(〇R8)2 ，- OP(0)(OR8)2，-P(O)(〇R10)2 . -OP(O)(OR10)2，- C(0)N(R9)2，-S(0)2R8，_s(0)R8，-S(0)2N(R9)2 ，及-nr9s(o)2r8之取代基取代；

各L係獨立地選自鍵結、-(ογΗζ)™),-、Ci-Ce烷基、 C2-C6伸烯基及C2-C6伸炔基，其中該L^C^-Ce烷基、C2-C6伸烯基及（：2-(：6伸炔基係各自可任意選擇地經1至4個獨立選自鹵素、-R8，-OR8，- N(R9)2 ’ -P(0)(〇R8)2 ， -〇p(〇)(OR8)2 ， - P(0)(0R1Q)2及- 〇P(〇)(〇R1Q)2之取代基取代；

R7係選自Η、κ6烷基、芳基、雜芳基、c3_c8環烷基、C^-Cii雜烷基、CrCe鹵代烷基、C2-C8烯、 C2-C8炔、C,-C6烷氧基、Ci-Ce鹵代烷氧基及c3-C8雜環烷基’其中該烷基、芳基、雜芳基、C3-C8環烷基、C^-Ce雜烷基、d-Ce鹵代烷基、C2-C8烯、C2-CV炔、C丨-(：6烷氧基、C丨-C6 鹵代烷氧基及c3-c8雜環烷基係各自可任意選擇地經1至3個R 13基團取代；各R8係獨立地選自H、-CH(R1Qh、C,-C8烷基、C2-C8 稀、02-(：8炔、Ci-Ce鹵代院基、（^-(^院氧基、 Ci-C6雜院基、C3-C8環院基' C2-C8雜環院基、 -112- 201116294

Ci-Ce羥基烷基及Cl_c6鹵代烷氧基，其中該R8之 Ci-Cs烷基、c2-C8烯、c2-c8炔、C丨-c6雜烷基、 C丨-c6鹵代烷基、c丨_c6烷氧基、€3-(：8環烷基' CrC8雜環烷基、Cl_c6羥基烷基及Cl_c6鹵代烷氧基係各自可任意選擇地經1至3個獨立選自-CN 1 R11 > -OR11 . -SR11 > -C(0)Rn > -0C(0)Rn > -C(0)N(R9)2 , -C(0)0R" . -NR9C(0)Rn > -

NR9R10 - -NR"R12，-N(R9)2 - -〇R^ , ,〇r>〇 , _ C(0)NR"R12 ， -C(0)NRm0H . -S(0)2Rm > - S(0)R" > -S(〇)2NR''R12 . -nr11s(〇)2r" > - ΡαΚΟίΙ11)】，及- 之取代基取代；各 R9 係獨 Ji 地選自 H、-C(0)R8，-C(〇)〇R8, _ci〇)R·10 ，-C(0)0R1Q ’ -S(0)2R1Q ’ -Crh烷基、雜院基及C3_C：6環烷基，或各R9係獨立地（：1_(：6院基 ’該等R9與彼等所連接之N —起形成c3-C8雜環院基’其中該C3_Cs雜環院基環可任意選擇地包含一個選自Ν、Ο及S之額外雜原子，且其中該R9 之c丨-C6烷基、c^-c：6雜烷基、c3_c6環烷基或 C；s-C8雜環院基係各自可任意選擇地經1至3個獨立選自-CN，R11 ’ -OR"，-SR"，_c(〇)rm，-0C(0)R11 ， -C(0)0R' 1 ， _Nrmri2 ， _ C(0)NR"R12 - -C(0)NR"〇H . -δ(0)2Κη -- S (0) R1 1 ’ - S (0) 2 N R R 1 ’ - N R 11 § (〇) 2 r 1 1，_

PiOKORHh及-〇p(〇)(〇RM)2之取代基取代； -113- 201116294 各R1Q係獨立地選自芳基、（：3-(：8環烷基、c3-c8雜環烷基及雜芳基，其中該芳基、〇3-(：8環烷基、C3-C8 雜環烷基及雜芳基係可任意選擇地經1至3個選自 _素、-118，-0118，-1^9，-1^0119，-]^(119)2’-NR9C(0)R8，-NR9C02R8，-C02R8，-C(0)R8 及-c(o)n(r9)2之取代基取代；

R11及R12係獨立地選自H、CrCe烷基、（:,-(:6雜烷基、 CrQ鹵代烷基、芳基、雜芳基、（：3-08環烷基及 (：3-(：8雜環烷基，其中該R11及RUiCrCe烷基、 CrCe雜烷基、C^-Ce鹵代烷基、芳基、雜芳基、 C3-C8環烷基及（：3-(：8雜環烷基係各自可任意選擇地經1至3個獨立地選自鹵素、-CN，R8，-OR8 ，-C(0)R8，-0C(0)R8，-C(0)0R8，-N(R9)2，-nr8c(o)r8，-nr8c(o)or8，-c(o)n(r9)2，c3-

C8 雜環烷基、-3(0)2118，-3(0)21^(119)2，-NR9S(0)2R8，C^-CU鹵代烷基及鹵代烷氧基之取代基取代；或R11及R1 2係各自獨立地烷基且與彼等所連接之 N原子一起形成可任意選擇地經取代之（：3-(：8雜環烷基環，該C3-C8雜環烷基環可任意選擇地包含一個選自Ν、Ο及S之額外雜原子；各R13係獨立地選自鹵素、-CN，-LR9，-LOR9，-OLR9 ，-LR10，-LOR10 > -OLR10 > -LR8，-LOR8，-OLR8，-LSR8，-LSR10，-LC(0)R8， -0LC(0)R8 -114- 201116294 ，-LC(0)0R8 ， -LC(0)R 丨0，-LOC(0)OR8 ’ - LC(0)NR9Ru ， -LC(0)NR9R8 ’ -LN(R9)2 ，- LNR9R8，-LNR9R10，-LC(0)N(R9)2，-LS(0)2R8 ，-LS(0)R8，-LC(0)NR80H，-LNR9C(0)R8 --LNR9C(0)0R8，-LS(0)2N(R9)2，-ols(o)2n(r9)2 ， -LNR9S(0)2R8 ， -lc(o)nr9ln(r9)2 ， -

LP(0)(0R8)2，-L0P(0)(0R8)2，-LP(0)(0R' °)2 及-OLP(O)(OR10)2 ; 各1^ 係獨立地選自-R8，-R7，-OR7，-OR8，-R1(3，-OR10 ， -SR8 ， -N〇2 ， -CN ， -N(R9)2 ，-NR9C(0)R8，-NR9C(S)R8，-NR9C(0)N(R9)2，-NR9C(S)N(R9)2，-NR9C02R8，-NR9NR9C(0)R8 ’ -NR9NR9C(0)N(R9)2 ， -nr9nr9co2r8 ，- C(0)C(0)R8 ， -C(0)CH2C(0)R8 ， -co2r8 ，- (CH2)nC02R8，-C(0)R8，-C(S)R8，-C(0)N(R9)2 ，-c(s)n(r9)2，-oc(o)n(r9)2，-oc(o)r8，- C(0)N(0R8)R8 ， -C(NOR8)R8 ， -S(0)2R8 ，- S(0)3R8 ， -S02N(R9)2 ， -S(0)R8 ’ - nr9so2n(r9)2，-nr9so2r8，-p(o)(or8)2，-op(o)(or8)2，-p(o)(or10)2，-op(o)(or10)2，-n(or8)r8，-ch = chco2r8，-c( = nh)-n(r9)2及- (CH2)nNHC(0)R8 ; n在每次出現時獨立地爲〇，1，2，3，4，5，6，7或8 115- 201116294 各m係獨立地選自1，2，3 ’ 4，5及6 ’且 t係 1，2，3，4，5，6，7或 8 :或（c) (a)或（b)任一者之醫藥上可接受之鹽。其他苯并萘啶化合物及製備苯并萘啶化合物之方法係描述於WO 2009/1 1 1 33 7。苯并萘啶化合物或彼之鹽可自己單獨地使用或與一或多種其他化合物組合使用。舉例來說，苯并萘啶化合物可與水中油乳劑或含礦物組成物組合使用。在特定實施態樣中，苯并萘啶化合物係與水中油乳劑（例如鯊烯-水乳劑，諸如MF 5 9)或含礦物組成物（例如礦物鹽諸如鋁鹽或鈣鹽）組合使用。 • 硫半卡巴腙化合物，諸如該些在參考文獻94中所揭示者。調製、製造及篩選活性化合物之方法亦描述於參考文獻94。硫半卡巴腙可特別有效地刺激人周邊血液單核細胞以產製細胞介素，諸如 TNF-α。 • 色胺酮化合物，諸如該些在參考文獻95中所揭示者。調製、製造及篩選活性化合物之方法亦描$ 於參考文獻95。硫半卡巴腙可特別有效地刺激Λ 周邊血液單核細胞以產製細胞介素，諸如TNF-a 〇 • 一種核苷類似物，諸如：（a)艾沙托拉賓 (isatorabine) (ANA-245; 7 -噻-8-側氧基鳥苷）：

-116- 201116294 及彼之前藥；（b)ANA9 7 5 ; (c)ANA-02 5 -l ; (d)ANA3 8 0 ; (e)於參考文獻96至98中所揭示之化合物；（f)具有下式之化合物：

Rs r4 其中：

Ri及R2各自獨立地爲Η、鹵基、-NRaRb、-OH、Cm烷氧基、經取代之C^6烷氧基、雜環基、經取代之雜環基、芳基、經取代之芳基、Ci-6院基或經取代之C,_6烷基； R3係不存在、H、烷基、經取代之¢^-6烷基、c6.K 芳基、經取代之C6.1Q芳基、雜環基或經取代之雜環基 R4及Rs各自獨立地爲Η、鹵基、雜環基、經取代之雜環基' -C(0)-Rd、Cm烷基、經取代之Cm烷基或結合在一起以形成如R4-5中之5員環： R4-5 〜x2 R9 該結合在以一標示之鍵結處達成 Χι及X2各自獨立地爲N，C，0，或S;

Rs係H，齒基、-OH、Ci_6院基、C2-6稀基、C2_6炔基、-OH、-NRaRb ' -(CH2)„-0-Rc ' -〇-(<^·6 烷基）、. S(0)pReS-C(0)-Rd; R9係 H’ C1-6垸基、經取代之烷基、雜環基、經取代之雜環基或Rh ’其中R9a係： -117- 201116294

該結合在以一標示之鍵結處達成 R1〇及Ru各自獨立地爲Η、鹵基、Ci-6烷氧基、經取代之匚"烷氧基、-NRaRb或-OH; 各Ra及Rb獨立地爲H、Cu烷基、經取代之C,-6烷基、-C(0)Rd、C6·,。芳基；各R。獨立地爲Η、磷酸鹽 '二磷酸鹽、三磷酸鹽、Ci.6 烷基或經取代之C 6烷基；各Rd獨立地爲Η、鹵基、Cm烷基、經取代之Cm烷基、（^·6烷氧基、經取代之Cm烷氧基、-NH2、-NHICm 烷基）、-NH(經取代之C,.6烷基）、-N(C,.6烷基）2、-N( 經取代之匚^烷基）2、C6.IQ芳基或雜環基；各Re獨立地爲Η、C^.6烷基、經取代之C,_6烷基、c6_l0 芳基、經取代之C6.1Q芳基、雜環基或經取代之雜環基各Rf獨立地爲Η、C,.6烷基、經取代之Cu烷基、-C(0)Rd、磷酸鹽 '二磷酸鹽或三磷酸鹽；各η獨立地爲0，1，2，或3; 各ρ獨立地爲〇，1，或2;或或（g) (a)至（f)中任一項之醫藥上可接受之鹽、（a)至 (0中任一項之互變異構物，或該互變異構物之醫藥上可接受之鹽。 • 洛索立賓（Lox〇ribine)(7-稀丙基-8-側氧基鳥苷） -118- (99)。 201116294 於參考文獻100中揭示之化合物，包括：醯基哌嗪化合物、吲哚二酮化合物、四氫異喹啉（τ Η IQ) 化合物、苯并環二酮化合物、胺基吖乙烯基化合物' 胺基苯并咪唑喹啉酮（ABIQ)化合物（101, 1〇2)、氫酞醯胺化合物、二苯基酮化合物、異惡唑化合物、固醇化合物、喹唑啉酮化合物、吡咯化合物（1 03 )、蒽醌化合物、喹噁啉化合物、三

嗪化合物、吡唑嘧啶化合物及苯并吡咯化合物 (104) ° 於參考文獻105中揭示之化合物。胺基烷基胺基葡糖苷磷酸鹽衍生物，諸如RC-5 2 9 (106，1 07卜磷腈，諸如例如參考文獻1 08及1 09中所述之聚[ 二（羧基苯氧基）磷腈](PCPP)。小分子免疫增強劑（SMIP)諸如：

Ν2-甲基-1-(2-甲基丙基）-1Η-咪唑[4,5-c]喹啉-2,4-二胺 N2，N2-二甲基-1-(2-甲基丙基）-1Η-咪唑[4,5-c] 喹啉-2,4-二胺 N2-乙基- N2-甲基-1-(2-甲基丙基）-1Η-咪唑[4,5-c]唾啉- 2,4-二胺 N2-甲基-1-(2-甲基丙基）-N2-丙基-1H-咪唑[4,5-c]喹啉-2,4-二胺 1-(2 -甲基丙基）-N2-丙基-1H-咪唑[4,5-c]喹啉- -119- 201116294 2.4- 二胺 N2 -丁基-1-(2-甲基丙基）-1Η -咪唑[4,5-c]喹琳- 2.4- 二胺 N2-丁基-N2-甲基-1-(2-甲基丙基）-1Η-咪唑[4,5- c]喹啉-2,4-二胺 N2-甲基-1-(2-甲基丙基）-N2-戊基-1H-咪唑[4,5-c]喹啉-2,4-二胺 N2 -甲基-1-(2 -甲基丙基）-N2-丙-2-烯基-1H-咪唑[4,5-c]唾啉-2,4-二胺 1-(2-甲基丙基）-2-[(苯基甲基）硫基]-1H-咪唑 [4,5-c]喹啉-4-胺 1- (2 -甲基丙基）-2-(丙基硫基）-1Η-咪唑[4,5-c] 喹啉-4-胺 2- [[4-胺基-1-(2 -甲基丙基）-1Η-咪唑[4,5-c]喹啉-2-基](甲基）胺基]乙醇 2-[[4-胺基-1-(2 -甲基丙基）-1Η-咪唑[4,5-c]喹啉-2-基](甲基）胺基]乙基乙酸酯 4-胺基-1-(2-甲基丙基）-1，3-二氫-2H-咪唑[4,5-c]喹啉-2-酮 N2-丁基-1-(2-甲基丙基）-N4，N4-雙（苯基甲基）_ 1H-咪唑[4,5-c]喹啉-2,4-二胺 N2-丁基- N2-甲基·1-(2-甲基丙基）-N4，N4-雙（苯基甲基）-1Η-咪唑[4,5-c]喹啉- 2,4-二胺 N2-甲基-1-(2-甲基丙基）-N4，N4-雙（苯基甲基）_ -120- 201116294 111-咪嗤[4,5-(：]唾啉-2,4-二胺 N2，N2-二甲基-1-(2-甲基丙基）-N4，N4-雙（苯基甲基）-11^咪11坐[4,5-(：]唾啉-2,4-二胺 1-[4 -胺基-2-[甲基（丙基）胺基]-1H-咪唑[4,5-c] 喹啉-1-基]-2-甲基丙-2-醇 1-[4 -胺基- 2- (丙基胺基）-1Η -咪唑[4,5-c]喹啉-1-基]-2-甲基丙-2-醇

Ν4，Ν4·二苯甲基-1-(2 -甲氧基-2-甲基丙基）-N2-丙基-11^-咪唑[4,5-(：]喹啉-2,4-二胺用於本發明之細胞介素誘導劑可爲類鐸受器（TLR)之調節劑及/或協同劑。舉例來說，彼等可能爲一或多種人 TLR1、TLR2 ' TLR3、TLR4、TLR7、TLR8 及/或 TLR9 蛋白之協同劑。較佳之劑係TLR4(例如源自腸內細菌脂多糖、磷脂化合物之經修飾之天然脂質，諸如合成性磷脂二聚體 E6020)、TLR7(例如苯并萘啶、咪唑唾啉）及/或TLR9(例如 CpG寡核苷酸）之協同劑。該些劑可用於活化固有免疫途徑該細胞介素誘導劑可在組成物製備之不同階段被添加。舉例來說，該劑可能在抗原組成物之內，接著此混合物可被添加至水中油乳劑。或者，該劑可能在水中油乳劑之內，其中該劑可在乳化之前被添加至乳劑成分，或該劑可在乳化之後被添加至乳劑。類似地，該劑可被凝聚在乳劑液滴之內。該細胞介素誘導劑在最終組成物之內的位置及分布將依其親水性/親脂性性質而定，例如該劑可位於水 -121 - 201116294 相、油相及/或油-水介面。該細胞介素誘導劑可與分開之劑共軛，諸如抗原（例如CRM197)。有關小分子共轭技術之一般性回顧可見參考文獻1 1 0。或者，該等佐劑可非共價地與其他劑相關，諸如藉由疏水性或離子性交互作用。較佳之細胞介素誘導劑爲（a)苯并萘啶化合物；（b)免疫刺激性寡核苷酸及（c)3dMPL。免疫刺激性寡核苷酸可包括核苷酸修飾/類似物諸如硫代磷酸酯修飾且可爲雙股或（除RNA之外）單股。參考文獻1 1 1，1 12，及1 13揭示可能的類似物取代，例如以2，_去氧-7-脫氮鳥苷取代鳥苷。CpG寡核苷酸之佐劑效應另外討論於參考文獻114至119。CpG序列可能被導向TLR9，諸如模體GTCGTT或TTCGTT(120)。該CpG序歹IJ可能專一性地誘發Thl免疫反應，諸如CpG-A ODN(寡去氧核苷酸），或其可能更專一性地誘導B細胞反應，諸如C p G - Β Ο D N。C p G -A及CpG-B ODN係討論於參考文獻121至123。較佳地，該 CpG係CpG-A ODN。較佳地，該CpG寡核苷酸係經建構以使該5’端可接近以供受體辨識。可任意選擇地，二個CpG 寡核苷酸序列之3'端可被連接以形成「免疫體（immunomer) 」。見例如參考文獻120及124至126。一種有用的CpG佐劑係CpG7909，亦稱爲PROMUNE (TM)(柯里醫藥集團（Coley Pharmaceutical Group, Inc.)) ° 作爲使用CpG序列之替代方案，或除此之外，TpG序列可被使用（1 27)。該些寡核苷酸可能不含未經甲基化之 -122- 201116294

CpG模體。

免疫刺激性寡核苷酸可能富含嘧啶。舉例來說’其可能包含超過一個連續胸腺嘧啶核苷酸（例如TTTT ’如參考文獻127所揭示），及/或其可能爲含有>25%胸腺嘧啶（例如 :> 3 5 %，> 4 0 %，> 5 0 %，> 6 0 %，> 8 0 % 等）之核苷酸組成物。舉例來說，其可能包含超過一個連續胞嘧啶核苷酸（例如 C C C C ，如參考文獻1 2 7所揭示），及/或其可會g爲含有> 2 5 % 胞嘧啶（例如> 3 5 %，> 4 0 %，> 5 0 %，> 6 0 %，> 8 0 %等）之核苷酸組成物。該些寡核苷酸可能不含未經甲基化之CpG模體免疫刺激性寡核苷酸將通常包含至少20個核苷酸。它們可能包含不到1 〇〇個核苷酸。 3dMPL(亦稱爲3 去-Ο -醯基化一磷醯脂質A或3-0-去醯化-4’-—磷醯脂A)係一種其中在一磷醯脂A之還原端葡萄糖胺的位置3處已被去醯基化之佐劑。3dMPL係自明尼蘇達沙氏桿菌（Salmonella minnesota)之無庚糖突變株製備，且化學上類似脂質A但缺乏不耐酸磷醯基及不耐鹼醯基。其活化單核球/巨噬細胞系之細胞，且刺激數種細胞介素之釋放，包括IL-1、IL-12、TNF-α及GM-CSF(亦見參考文獻128)。3dMPL之製備最初描述於參考文獻129。 3 dMPL可呈相關分子之混合物的形式，該等相關分子之醯化不同（例如具有3，4，5或6個鏈，長度可能不同）。該二個葡萄糖胺（亦稱爲2-去氧基-2-胺基-葡萄糖）單糖在彼等之位置2處之碳係經N-醯基化（意即在位置2及2·)， -123- 201116294 在位置^處亦經Ο -醯基化。連接至碳2之基團具有化學式-NH-CO-CHz-CR1!^'。連接至碳2'之基團具有化學式-NH-CO-CH2-CR2R2'。連接至碳3'之基團具有化學式-0-C0-CH2-CR3R3’。代表性結構爲：

基團R1，R2及R3各自獨立地爲-(CH2)n-CH3。η之値係較佳地介於8至16，更佳地介於9至12，且最佳地爲1〇 » 基團，R2’及R3·可各自獨立地爲：（a)-H ; (b)-OH ; 或（c)-O-CO-R4 (該R4爲-Η或- (CHzU-CHO，其中m之値係較佳地介於8至16，且更佳地爲10、12或14。在位置2，m較佳地爲1 4。在位置2 ^ m較佳地爲1 0。在位置3 1，m較佳地爲12。基團R1’，R2'及R3’因此較佳地爲來自十二酸、十四酸或十六酸之-0-醯基。當R1'，R2’及R3’中所有皆爲-H，則該3dMPL僅具有3條醯鏈（位置2，2·及3’各有一條p當R1·，R2·及R3'中只有二者爲-H，則該3dMPL可具有4條醯鏈。當R1'，112’及Rr中只有一者爲-H，則該3dMPL可具有5條醯鏈。當R1'，V及R3' 中沒有一者爲-H，則該3dMPL可具有6條醯鏈。本發明所使用之3dMPL佐劑可爲該些具有3至6條醯鏈之形式的混合物’但較佳爲在該混合物中包括具有6條醯鏈之3dMPL， -124- 201116294 且特定地確保該己醯鏈形式佔該3dMPL總重量之至少10% ，例如> 2 0 %，> 3 0 % ’> 4 0 %，> 5 0 %或更多。具有6條醯鏈之3 dMPL已被發現爲最具佐劑活性之形式。因此包括於本發明之組成物中的3dMPL之最佳形式具有如下顯示之式（IV)。當3 dMPL係以混合物之形式使用時，提到本發明之組成物中的3 d Μ P L之量或濃度係指該混合物中經組合之

3 d Μ P L物種。在水性條件下，3dMPL可形成不同大小之微胞聚集物或顆粒，例如直徑<150奈米或>5 00奈米。該等之任一或二者可被用於本發明，且較佳之顆粒可藉由例行測定加以選擇。本發明適合使用較小之顆粒（例如小至足以呈清澈之 3 dMPL水性懸浮液），因爲彼等之活性較高（130)。較佳之顆粒具有小於2 2 0奈米之平均直徑，更佳地小於2 0 0奈米或小於1 5 0奈米或小於1 2 0奈米’且甚至可具有小於1 〇 0奈米之平均直徑。然而在大部分的情況中，該平均直徑將不會小於50奈米。該等顆粒小到足以適合過濾滅菌。顆粒直徑可利用動態光散射之例行技術檢測’其顯示平均顆粒直徑。當我們說顆粒之直徑爲X奈米’通常將有大約此平均値之顆粒分布，但至少5 〇 %之數量（例如> 6 0 % ’> 7 0 % ’> 8 0 % ，>90%或更多）之顆粒將具有在x + 25%之範圍內的直徑。 3 dMPL可有利地與水中油乳劑組合使用。實質上所有的3dMPL可能位於該乳劑之水相中。該3 dMPL可自己單獨地使用或與一或多種其他化合物 -125- 201116294 組合使用。舉例來說，已知使用3dMPL與QS21皂素之組合 (1 3 1)(包含在水中油乳劑中（1 3 2 ))、與免疫刺激性寡核苷酸之組合、與QS21及免疫刺激性寡核苷酸之組合、與磷酸鋁之組合（133)、與氫氧化鋁之組合（134)或與磷酸鋁及氫氧化鋁二者之組合。

脂肪佐劑可用於本發明之脂肪佐劑包括上述之水中油乳劑’也包括例如： • 式I，II或III之磷脂化合物或彼等之鹽： -126- 201116294

II III

如參考文獻135中所定義，諸如‘ER 803058，，‘ER 803732’ ， ‘ER 804053，， ‘ER 804058，， ‘ER 804059，， 4ER

804442’ ’ ‘ER 804680’ ’ ‘ER 804764，， ER 803022或 ‘ER 8 0 4 0 5 7，例如：

ER804057

ER8〇4〇57亦稱爲E6〇2〇。式I、II或III之磷脂化合物或彼等之鹽可自己單獨地使用或與—或多種其他化合物組合使用。舉例來說，式〗、11或111之化合物可與水中油乳劑或含礦物組成物組合使用。在特定實施態樣中，E602 0係 -127- 201116294 與水中油乳劑（例如鯊烯-水乳劑’諸如M F 5 9)或含礦物組成物（例如礦物鹽諸如鋁鹽或鈣鹽）組合使用。 • 來自大腸桿菌（Escherichia coli)之脂質A的衍生物諸如〇M-174(描述於參考文獻136及137)。 • 陽離子脂質及（通常爲中性）共-脂質之調製劑，諸如胺基丙基-二甲基-肉豆蔻油氧基-四丙基溴化銨-二植醯基磷脂醯基·乙醇胺（“VAXFECTIN (TM)”）或胺基丙基-二甲基-雙-十二烷氧基-四丙基溴化銨-二油醯基磷脂醯基-乙醇胺（“GAP-DLRIE:DOPE，，）。含有（ + )-N-(3-胺基丙基）-N，N-二甲基_2,3-雙（同-9-十四烯基氧基）_1_丙銨鹽類之調製劑係較佳（138)。 • 3-0-去醯基化一磷醯脂A (見上）。 • 包含與含磷酸無環骨架連接之脂質的化合物，諸如 TLR4拮抗劑 E5 5 64 ( 1 3 9，140):

• 脂肽類（意即包含一或多個脂肪酸殘基及二或多個胺基酸殘基之化合物），諸如根據甘油基半胱胺酸之脂肽類。該等肽類之特定實例包括下式之化合物 -128- 201116294

V

R>—CO—O—CH

R^CO—〇—CH CH2 S

I ch2

R2CX>-NH—CH—CO-R -R or

其中R1及R2各自代表具有自8至30個、較佳地11至21 個碳原子之飽和或不飽和、脂肪族或混合之脂肪族-環脂肪族羥基，該碳原子亦可任意選擇地經氧官能基取代，R3 代表氫或殘基Ri-CO-O-CHzJ其中R1具有與上相同之意義 )，且X代表經肽鍵結合且具游離、酯化或醯胺化之羧基之胺基酸，或自2至10個胺基酸之胺基酸序列（其中該末端羧基係呈游離、酯化或醯胺化之形式）。在特定實施態樣中 ’該胺基酸序列包含D -胺基酸，例如D -麩胺酸（D - G 1 u)或 D- r -羧基-麩胺酸（D-Gla)。

細菌性脂肽類通常辨識T L R 2，不需要T L R 6之參與。 (TLR共同作用以提供對各種觸發物之專—性辨識，TLR2 加上TLR6 —起辨識肽聚糖，無TLR6時TLR2辨識脂肽類。）彼等有時候被分類爲天然脂肽類及合成脂肽類。合成脂肽類傾向於類似地作用，主要被T L R 2辨識。適合用來作爲佐劑之脂肽類包括具有下式之化合物： -129- 201116294

其中標示*及標示* * *之掌性中心均呈R構型；標示* *之掌性中心係呈R或S構型；

Rla&Rlb各自獨立地爲具有7至21個碳原子（可任意選擇地經氧官能基取代）之脂肪族或環脂肪族-脂肪族羥基，或1113及11115中之一者（但不可二者）爲Η ; R2爲具有1至21個碳原子且可任意選擇地經氧官能基取代之脂肪族或環脂肪族羥基； η爲0或1 ; 以-O-Kw-CO-或-NH-Kw-CO-表示，其中Kw係具有1至 12個碳原子之脂肪族羥基；

As1爲D-或L- α -胺基酸；

Ζ1及Ζ2各自獨立地代表-ΟΗ或胺基-(低碳數烷）-磺酸或具有至多6個選自D-及L-α胺基羧酸及胺基-低碳數烷基-磺酸之胺基酸的肽之D-或L-α胺基酸的N-端殘基；且 Z3爲Η或-CO-Z4，其中Z4爲-OH或胺基-(低碳數烷）·磺酸或具有至多6個選自D-及L-α胺基羧酸及胺基-低碳數烷基-磺酸之胺基酸的肽之D-或L-α胺基酸的Ν-端殘基；或自該等化合物之羧酸形成之酯或醯胺。適當之醯胺包括-νη2 及ΝΗ(低碳數烷基），適當之酯包括C1-C4烷基酯。（此處所使用之低碳數烷基或低碳數烷係指CrG直鏈或分支烷基 -130- 201116294 該等化合物係更詳細地描述於us 4,666,8 8 6。在一特定實施態樣中，該脂肽具有下式：

脂肽物種之另一實例稱爲LP40，其係TLR2之協同劑〇 Akdis，et al., Eur. J · Immunology, 33·· 2 7 1 7 - 2 6 ( 2 0 0 3 ) 0 彼等與來自大腸桿菌之已知類型之脂肽相關，稱爲胞壁質脂蛋白。該等蛋白之某些部分降解產物稱爲胞壁質脂肽，係描述於1^1111(6,61&1.，五《，.人5/’〇〇/1£7«.，34:284-2 96 ( 1 9 73 )。該等脂肽包含與N-乙醯基胞壁酸連接之肽，因此與胞壁醯基肽有關，其係描述於Baschang, et al., Tetrahedron, 45(20): 6331-6360 (1989) ° 鋁鹽佐劑可使用稱爲「氫氧化鋁」及「磷酸鋁」之佐劑。這些傳統的名稱僅因方便而使用，因爲二者皆不是此處之實際化學化合物之精確描述（例如見參考文獻74之第9章）。本發明可使用通常作爲佐劑使用之任何「氫氧化物」或「磷酸鹽」佐劑該等稱爲「氫氧化鋁」之佐劑通常爲氧氫氧化鋁鹽，通 -131 - 201116294

常至少爲部分結晶。氧氫氧化鋁（以化學式AIO(OH)表示）可藉由紅外（IR)光譜學與其他鋁化合物區別，諸如氫氧化鋁Al(OH)3，具體地由1070cm·1處之吸收帶及3090-3100 cm·1 處之強烈側肩存在加以區別（參考文獻74第9章）。氫氧化鋁佐劑之結晶程度係由繞射帶之半高寬（WHH)反應，結晶不良之顆粒由於結晶體積較小因此顯示較高之譜線變寬。表面積隨著WHH增加而增加，具有高WHH値之佐劑已被顯示具有較高之抗原吸附能力。纖維狀（例如在穿透式電子顯微照片所示）係氫氧化鋁佐劑之典型形態。氫氧化鋁佐劑之pi値通常約爲1 1，也就是該佐劑本身在生理性pH下具有正電表面電荷。氫氧化鋁佐劑據報告在pH 7.4中之吸附能力介於每毫克A1 + + + 1.8至2.6毫克蛋白。

稱爲「磷酸鋁」之佐劑是典型的羥基磷酸鋁，通常亦包含少量之硫酸鹽（意即羥基磷酸硫酸鋁）。彼等可藉由沉澱獲得，且在沉澱期間之反應條件及濃度影響該鹽中以羥基取代磷酸鹽之程度。羥基磷酸鹽類之P04/A1莫耳比通常介於0.3至1.2。羥基磷酸鹽可藉由羥基之存在與嚴格a1P04 區別。舉例來說，在3164cm·1 (例如當加熱至200°C)之IR光譜帶表示結構性羥基存在（參考文獻74之第9章）。磷酸鋁佐劑之Ρ〇4/Α13 +莫耳比通常將介於〇.3至1.2，較佳地介於0.8至1.2，且更佳地爲0.95 + 0.1。磷酸鋁通常將爲非晶形，特別是羥基磷酸鹽類》典型佐劑爲P04/A1莫耳比介於0.84至0.92之非晶形羥基磷酸鋁，包括〇.6毫克 Al3 + /毫升。磷酸鋁通常將爲粒狀物（例如在穿透式電子顯 -132- 201116294 微鏡下顯示之片狀形態）。該粒狀物之典型直徑在任何抗原吸附後係介於〇·5至20微米之範圍（例如約5至10微米）。磷酸鋁佐劑據報告在pH 7.4中之吸附能力介於每毫克A1 + h (〕.7至1.5毫克蛋白。

磷酸鋁之零電荷點（PZC)係與羥基取代磷酸鹽之程度負相關，此取代程度可視用於沉澱製備該鹽之反應條件及反應劑濃度而有所差異。藉由改變溶液中游離磷酸鹽離子之濃度（較多之磷酸鹽=較酸性之P Z C )或藉由添加緩衝劑諸如組胺酸緩衝液（使P z C更鹼性）亦可改變p z C。本發明所使用之磷酸鋁通常將具有介於4.0至7.0、更佳地介於5.0至 6.5(例如約5.7)之PZC。用於製備本發明之組成物的鋁鹽懸浮液可能包含緩衝液（例如磷酸鹽或組胺酸或Tri s緩衝液），但此不是一定必要。該懸浮液係較佳地無菌且不含致熱原。懸浮液可能包括游離之水性磷酸鹽離子，例如以介於1 . 〇至2 0毫莫耳之濃度存在’較佳地介於5至1 5毫莫耳，且更佳地約1 〇毫莫耳。該懸浮液亦可能包含氯化鈉。本發明可使用氫氧化鋁及磷酸鋁之混合物。在此例中 ’憐酸銘相較於氫氧化鋁可能較多，例如重量比至少2 : 1 ，例如>5:1 ， >6:1 ， >7:1 ， >8:1 ， >9:1等。用於對病患投予之組成物中的A1 + + +濃度係較佳地低於 10毫克/毫升’例如<5毫克/毫升、<4毫克/毫升、<3毫克/ 毫升、<2毫克/毫升、<1毫克/毫升等。較佳之範圍係介於 0.3至1毫克/毫升。最高〇·85毫克/劑係較佳。 -133- 201116294 除了包括一或多種鋁鹽佐劑之外，該佐劑成分可能包括一或多種其他佐劑或免疫刺激劑。該額外之成分包括但不限於：苯并萘啶化合物、3-0-去醯基化一磷醯脂A佐劑 (3d-MPL);及/或水中油乳劑。3d-MPL亦稱爲3去-0-醯基化一磷醯脂質A或3-0-去醯化-4’-—磷醯脂A。該名稱顯示在一磷醯脂A之還原端葡萄糖胺的位置3處已被去醯基化。彼係自明尼蘇達沙氏桿菌（S. minnesota)之無庚糖突變株製備，且化學上類似脂質A但缺乏不耐酸磷醯基及不耐鹼醯基。其活化單核球/巨噬細胞系之細胞，且刺激數種細胞介素之釋放，包括 IL-1、IL-12、TNF-α 及 GM-CSF。3d-MPL之製備最初係描述於參考文獻129，該產品已由科里沙（Corixa)公司以MPL(TM)之商品名製造及販售。其他細節可見於參考文獻82至85。氫氧化鋁及/或磷酸鋁佐劑之用途係有用的（特別是在兒童），抗原通常吸附至該些鹽類。鯊烯-於-水乳劑亦爲較佳，特別是在老年人。有用之佐劑組合包括Thl及Th2佐劑之組合，諸如CpG及明礬或雷西莫特（resiquimod)及明礬。磷酸鋁與3dMPL之組合可被使用。其他可被使用之組合包括：明礬與苯并萘啶化合物或SMIP、鯊烯-於-水乳劑（諸如MF59)與苯并萘啶化合物或SMIP，及E6020與鯊烯-於-水乳劑（諸如M F 5 9)或明礬。本發明之組成物可能誘發細胞媒介性免疫反應及體液性免疫反應。二種類型之Τ細胞（CD4及CD8細胞）通常被認爲是啓動 -134- 201116294 及/或增進細胞媒介性免疫及體液免疫所需。c D 8 T細胞可表現CD8共受體且經常被稱爲細胞毒性Τ淋巴細胞（CTL)。 CD8 T細胞能辨識在MHC第一型分子上展示之抗原或與之交互作用。

CD4 T細胞可表現CD4共受體且經常被稱爲T輔助細胞。CD4 T細胞能辨識與MHC第二型分子結合之抗原肽。與 MHC第二型分子交互作用時，該CD4細胞可分泌因子諸如細胞介素。該等經分泌之細胞介素可活化B細胞、細胞毒性T細胞、巨噬細胞及其他參與免疫反應之細胞。T輔助細胞或CD4 +細胞可被進一步分成二種功能不同之次群：TH1 表現型及TH2表現型，彼等之細胞介素及效應功能不同。經活化之ΤΗ 1細胞增進細胞性免疫（包括增加抗原專一性CTL之產製），因此在回應細胞內感染上特別具有價値。經活化之TH1細胞分泌一或多種IL-2、IFN- r及TNF- /3。 TH1免疫反應可能藉由活化巨噬細胞、NK(天然殺手）細胞及C D 8細胞毒性T細胞（C T L)導致局部發炎反應。Τ Η 1免疫反應亦可能藉由IL-1 2刺激Τ細胞之生長以用來擴張免疫反應。經Τ Η 1剌激之Β細胞可能分泌I g G 2 a。經活化之TH2細胞增進抗體產製’因此在回應細胞外感染上具有價値。經活化之TH2細胞分泌一或多種IL-4、 IL-5、IL-6及IL-10。TH2免疫反應可能導致IgGl ’ IgE’ IgA及記憶B細胞之產製以供未來之保護作用。增強之免疫反應可能包括一或多種增強之ΤΗ 1免疫反應及ΤΗ2免疫反應。 -135- 201116294 TH1免疫反應可能包括一或多項之CTL增加、與TH1免疫反應有關之一或多種細胞介素增加（諸如IL-2，IFN- r及 TNF-召）、經活化之巨噬細胞增力卩、NK活性增加或igG2a 產製增加。較佳地，該經增強之TH1免疫反應將包括igG 2 a 產製增加。 ΤΗ 1免疫反應可利用ΤΗ 1佐劑誘發。相較於不含佐劑之抗原的免疫，TH1佐劑通常將誘發增加之igG2 a產製量。適用於本發明之ΤΗ 1佐劑可能包括例如皂素調製劑、病毒體及病毒樣顆粒、腸內細菌脂多糖（LP S)之非毒性衍生物、免疫刺激性寡核苷酸。免疫刺激性寡核苷酸（諸如含有 CpG模體之寡核苷酸）係適用於本發明之較佳TH1佐劑。 TH2免疫反應可能包括一或多項之與TH2免疫反應有關之一或多種細胞介素（諸如IL-4，IL-5，IL-6及IL-10)之增加或IgG 1，IgE，IgA及記憶B細胞之產製增加。較佳地，該經增強之TH2免疫反應將包括IgGl產製增加。 TH2免疫反應可利用TH2佐劑誘發。相較於不含佐劑之抗原的免疫，TH2佐劑通常將誘發增加之IgGl產製量。適用於本發明之TH2佐劑包括例如含礦物組成物、油-乳劑及ADP-核糖基化毒素及彼之去毒性衍生物。含礦物組成物諸如鋁鹽係適用於本發明之較佳TH2佐劑。組成物可能包括TH1佐劑與TH2佐劑之組合。較佳地，該組成物誘發增強之TH1及增強之TH2反應，也就是相較於不含佐劑之免疫增加IgGl及IgG2a二者之產製。更佳的是，該包含TH1及TH2佐劑之組合的組成物相較於以單 -136- 201116294 一佐劑免疫（也就是相較於以單獨TH1佐劑免疫或單獨TH2 佐劑免疫）誘發增強之TH1及/或增強之TH2免疫反應。該免疫反應可能爲TH1免疫反應及TH2反應之一或二者。較佳地，免疫反應提供增強之ΤΗ 1反應及增強之TH 2 反應之一或二者。

該增強之免疫反應可能爲系統性及黏膜免疫反應之一或二者。較佳地，該免疫反應提供增強之系統性及增強之黏膜免疫反應之一或二者。該黏膜免疫反應較佳地係TH 2 免疫反應。較佳地，該黏膜免疫反應包括IgA產製增加。治療及投予之方法本發明之組成物適合對哺乳動物投予，且本發明提供一種誘導哺乳動物之免疫反應之方法，該方法包含對該哺乳動物投予本發明之組成物（例如免疫原性組成物）之步驟。該組成物（例如免疫原性組成物）可被用於製備供免疫哺乳動物之疫苗調製劑。該哺乳動物通常爲人，且該RSV F 蛋白胞外域通常係人RSV F蛋白胞外域。然而，該哺乳動物可爲任何其他可受RSV感染之哺乳動物，諸如可被牛 RSV感染之牛。舉例來說，該免疫反應可能在投予經純化之RSV F蛋白、阿爾法病毒顆粒或自我複製之RNA後產生本發明亦提供用來作爲藥物之本發明之組成物’例如用於免疫病患以防止R S V感染。本發明亦提供上述之多肽於製造藥物以在病患產生免 -137- 201116294 疫反應之用途。由該等方法及用途所產生之免疫反應通常將包括抗體反應，較佳地保護性抗體反應。在R S V疫苗接種後測量抗體反應之方法係該領域所廣爲周知。本發明之組成物可以多種適當之方式投予，諸如肌肉內注射（例如注射至手臂或腿）、皮下注射、鼻內投予、經口投予、皮內投予、經皮（transcutaneous)投予、經皮 (transdermal)投予及該類似方式。投予之適當途徑將依該哺乳動物之年齡、健康及其他特徵而定。臨床醫師將能根據這些及其他因素決定適當之投予途徑。免疫原性組成物及疫苗調製劑可被用於治療兒童及成人，包括懷孕婦女。因此個體之年齡可能不到1歲、1至5 歲、5至15歲、15至55歲或至少55歲。接受該等疫苗之較佳個體係老年人（例如>50歲、>60歲及較佳>65歲）、兒童（例如<6歲，諸如4至6歲、<5歲）及懷孕婦女。然而該等疫苗不僅適用於該等團體，可被更普遍地用於整個族群。治療可爲單一劑量計畫或多重劑量計畫。多重劑量可被用於基礎免疫計畫及/或補強免疫計畫。在多重劑量計畫中，該不同之劑量可藉由相同或不同之途徑給予，例如非經腸基礎及黏膜補強、黏膜基礎及非經腸補強等。投予超過一劑（通常爲二劑）對於不曾免疫之病患特別有用。多重劑量通常將間隔至少1周地投予（例如約2周、約3周、約 4周、約6周、約8周、約10周、約12周、約16周及該類似方式）。 -138- 201116294 利用本發明之組成物所產製之疫苗調製劑可能與其他疫苗實質上同時地被投予至病患（例如去專門醫療或疫苗中心進行醫療諮詢或門診之相同期間）。本發明之其他態樣

本發明亦提供包含第一結構域及第二結構域之多肽（例如重組多肽），其中（〇該第一結構域包含整體或部份之 RSV F糖蛋白胞外域，及（Π)包含異源性寡聚結構域之第二結構域。其他細節如上提供。若該寡聚結構域包含七重複序列（例如上述之自GCN之序列），則其係較佳地位於該胞外域之HR2序列（若存在）的七重複相中。本發明亦提供編碼該多肽之核酸（例如DNA)，也提供包括該等核酸之載體及包括該等載體之宿主細胞。該等載體可被使用於例如重組表現目的、核酸免疫等。本發明亦提供一種包含含有RSV F糖蛋白胞外域之分子的組成物，其中至少5 0 % (例如5 0 %，6 0 %，7 0 %，8 0 %， 8 5 %，9 0 %，9 5 %或1 〇〇 %)之該等分子的胞外域係以預融合構型存在。其他病毒除了使用人RSV ’本發明可使用肺炎病毒科 (Pneumoviridae)及副黏液病毒科（Paramyxoviridae)之其他成員，包括但不限於牛呼吸道合胞病毒、副流感病毒1、副流感病毒2、副流感病毒3及副流感病毒5。 -139- 201116294 因此本發明提供一種包含來自肺炎病毒科或副黏液病毒科之F糖蛋白的免疫原性組成物，其中該f糖蛋白係呈預融合構型。本發明亦提供包含展示存在於肺炎病毒科或副黏液病毒科之F糖蛋白之預融合但不存在於該糖蛋白之融合後構型中之表位的多肽之免疫原性組成物。本發明亦提供包含第一結構域及第二結構域之多肽，其中（i)該第一結構域包含肺炎病毒科或副黏液病毒科之F 糖蛋白胞外域的整體或部份，及（Π)包含異源性寡聚結構域之第二結構域。本發明亦提供該些用於免疫等之多肽及組成物。本發明亦提供一種包含含有RSV F糖蛋白胞外域之分子的組成物，其中至少50%(例如50%，60%，70%，80%， 8 5%，90%，95%或100%)之該等分子的胞外域係以預融合構型或中間構型存在。 RSV F蛋白胞外域多肽特定之R S V F蛋白胞外域多肽係使用或包括於本發明之一些實施態樣中。某些特定之RSV F蛋白胞外域多肽包含經改變之自約位置100至約位置161處之胺基酸序列。某些RSV F蛋白胞外域多肽自位置1〇〇至位置150處之胺基酸序列係顯示於圖1C。數種特定RSV F蛋白胞外域多肽之胺基酸序列係顯示於此處例如實施例1中。 -140- 201116294

通貝！J 用語「包含」涵蓋「包括」及「組成」及「實質上組成」，例如「包含」X之組成物可能僅由X組成或可能包括額外之物，例如X + Y。用語「實質上」不排除「完全」，例如「實質上不含」Y之組成物可能完全不含Y。需要時，用語「實質上」可自本發明之定義刪除。

與數値X有關之用語「約」表示例如X ± 10 %。除非特地表明，包含混合二種或多種成分之步驟的方法不需要任何特定之混合順序。因此成分可以任何順序混合。若有三個成分，二個成分可彼此組合，然後該組合可與第三成分組合等。在細胞培養中使用動物（特別是牛）物質時，它們應自無傳染性海綿狀腦病（TSE)之來源獲得，特別是無牛海綿狀腦病（BSE)。整體來說，較佳的是在完全沒有動物衍生性物質之存在下培養細胞。若化合物以組成物之部分被投予至身體，該化合物可能替代性地被適當之前藥取代。當細胞受質被用於重配或反向遺傳方法中，較佳的是已被核准用於人疫苗產製者，例如Ph Eur general第5.2.3 章。多肽序列之間的一致性係較佳地如Μ P S R C Η計畫（牛津分子（Oxford Molecular))所執行之史密斯-華特曼（Smith-Waterman)同源性搜尋演算法測定，使用參數設定爲缺口 -141 - 201116294 開放罰分=12及缺口延長罰分=1之仿射（affine)缺口搜尋。表1 磷脂類 DDPC 1，2-二癸醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼 DEPA 1,2-二芥子醯基-sn-甘油-3-磷酸酯 DEPC 1，2-芥子醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼 DEPE 1,2-二芥子醯基-sn-甘油-3-磷脂醯乙醇胺

DEPG 1,2-二芥子醯基-sn-甘油-3[磷脂醯-rac-(l-甘油…) DLOPC 1,2-亞麻醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼 DLPA 1，2-二月桂醯基-sn-甘油-3-磷酸酯 DLPC 1，2-二月桂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼 DLPE 1,2-二月桂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯乙醇胺 DLPG 1,2-二月桂醯基-sn-甘油-3[磷脂醯-rac-U-甘油…） DLPS 1，2-二月桂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯絲胺酸 DMG 1，2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷醢基乙醇胺

DMPA 1，2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酸酯 DMPC 1，2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼 DMPE 1，2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3·磷脂醯乙醇胺 DMPG 1,2-肉豆蔻醯基-sn-甘油-3[磷脂醯-rac-(l-甘油…) DMPS 1，2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷脂醯絲胺酸 DOPA 1，2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸酯 DOPC 1，2-二油醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼 DOPE 1，2-二油醯基-sn-甘油-3-磷脂醯乙醇胺 DOPG 1，2-二油醯基-sn-甘油-3[磷脂醯-rac-(l-甘油…） -142- 201116294 DOPS 1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷脂醯絲胺酸 DPPA 1，2-二棕櫚醯基-sn-甘油-3-磷酸酯 DPPC 1，2-二棕櫚醯基-Sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼 DPPE 1，2-二棕櫚醯基-sn-甘油-3-磷脂醯乙醇胺 DPPG 1,2-二棕櫚醯基-sn-甘油-3 [磷脂醯-rac-(l-甘油…) DPPS 1，2-二棕櫚醯基-sn-甘油-3-磷脂醯絲胺酸 DPyPE 1,2-二植烷醯基-sn-甘油-3-磷醯基乙醇胺 DSPA 1，2-二硬脂醯基411-甘油-3-磷酸酯

DSPC 1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼 DSPE 1，2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯乙醇胺 DSPG 1,2- _硬脂酸基- sn-甘油-3[隣脂酿- rac-(l-甘油...) DSPS 1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯絲胺酸

EPC 卵-PC

HEPC 氯化卵PC

HSPC 高純度氫化大豆PC

HSPC 氫化大豆PC LYSOPC MYRISTIC 1 -肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼 LYSOPC PALMITIC 1 -棕櫚醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼 LYSOPC STEARIC 1 -硬脂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼乳神經鞘磷脂MPPC 1-肉豆蔻醯基，2-棕櫚醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼 MSPC 1-肉豆蔻醯基，2-硬脂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼 PMPC 1-棕櫚醯基，2-肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼 POPC 1-棕櫚醯基，2-油醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼 -143- 201116294 POPE 1-棕櫚醯基-2-油醯基-sii-甘油-3-磷脂醯乙醇胺 POPG 1,2-二油醯基- sn-甘油-3[磷脂醯- rac-(l -甘油…） PSPC 1-棕櫚醯基，2-硬脂醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼 SMPC 1-硬脂醯基，2-肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼 SOPC 1-硬脂醯基，2-油醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼 SPPC 1-硬脂醯基，2_棕櫚醯基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼【實施方式】實施例1 -RSV F多肽此實施例提供一些多肽實例之序列（例如包含信號序列者）及可被用於表現本發明之RSV F多肽的核酸序列。該列示之胺基酸序列包括信號肽且包含可任選之C-端連接子及 His 標記（GGSAGSGHHHHHH(SEQ ID NO:90))。當該等多肽於宿主細胞中產製，該多肽通常將被細胞處理以移除該信號肽，且如此處所述，某些多肽將被切割於例如未經修飾之三呋喃基二氫咪唑切割位點。本發明包括含有此處所揭示之特定RSV F蛋白胞外域多肽之所有形式的組成物，該等形式包括缺乏信號肽之成熟形式、可被切割成包含 F22次單位的形式，及缺乏可任選之C-端His標記之形式。下列實例僅說明本發明之範圍，因此不意圖以任何方式限制該範圍。野生型三呋喃基二氫咪唑切割之實例係RSV F野生型截短 HIS (SEQ ID NO:84)。

可被產製爲單體之多肽實例包括：RSV F Furx (SEQ -144- 201116294 ID NO:45); RSV F舊 furx 截短 HIS (SEQ ID NO:88); RSV F 新 Furx 截短 HIS (SEQ ID NO:89); RSV F delp21 furx 截短 HIS (SEQ ID NO: 47);及 R S V F d el P 2 3 f ur x 截短 Η I S ( S E Q ID NO:48)。

可被產製爲三體之多肽實例包括：RSV F N-端三呋喃基二氫咪唑截短HIS (SEQ ID NO:85); RSV F融合刪除截短 HIS (SEQ ID NO:67);及 RSV F融合刪除 2截短 HIS (SEQ ID NO:68)。

可被產製爲單體或三體之玫瑰花簇之多肽實例包括： RSV F furmt 截短 HIS (SEQ ID NO: 50); RS V F furdel 截短 HIS (SEQ ID NO:51); RSV F delP21 furdel 截短 HIS (SEQ ID NO:86);及 RSV F delP23 fu r d e 1 截短 Η I S ( S E Q ID NO:49)，及 RSV F因子 Xa截短 HIS (SEQ ID NO:52)。可能產生玫瑰花簇形成之野生型切割之實例係RSV F C-端三呋喃基二氫咪唑截短HIS (SEQ ID NO:87)。

全長下列多肽係全長之RSV F多肽。 1 MELLILKANA ITTILTAVTF CFASGQNITE EFYQSTCSAV SKGYLSALRT GWYTSVITIE 61 LSNIKENKCN GTDAKVKLIK QELDKYKNAV TELQLLMQST PATNNRARRE LPRFMNYTLN 121 NAKKTNVTLS KKRKRRFLGF LLGVGSAIAS GVAVSKVLHL EGEVNKIKSA LLSTNKAVVS 181 LSNGVSVLTS KVLDLKNYID KQLLPIVNKQ SCSISNIETV IEFQQKNNRL LEITREFSVN 241 AGVTTPVSTY MLTNSELLSL INDMPITNDQ KKLMSNNVQI VRQQSYSIMS IIKEEVLAYV 301 VQLPLYGVID TPCWKLHTSP LCTTNTKEGS NICLTRTDRG WYCDNAGSVS FFPQAETCKV 361 QSNRVFCDTM NSLTLPSEVN LCNVDIFNPK YDCKIMTSKT DVSSSVITSL GAIVSCYGKT 421 KCTASNKNRG IIKTFSNGCD YVSNKGVDTV SVGNTLYYVN KQEGKSLYVK GEPIINFYDP 481 LVFPSDEFDA SISQVNEKIN QSLAFIRKSD ELLHNVNAGK STTNIMITTI IIVIIVILLS 541 LIAVGLLLYC KARSTPVTLS KDQLSGINNI AFSN (SEQ ID NO: 21) -145- 201116294 下列核酸序列係前述多肽序列之理想化編碼序列。 1 ATGGAACTGC TGATCCTGAA GGCCAACGCC ATCACCACCA TCCTGACCGC CGTGACCTTC 61 TGCTTCGCCA GCGGCCAGAA CATCACCGAG GAATTCTACC AGAGCACCTG CAGCGCCGTG 121 AGCAAGGGCT ACCTGAGCGC CCTGCGGACC GGCTGGTACA CCAGCGTGAT CACCATCGAG 181 CTGTCCAACA TCAAAGAAAA CAAGTGCAAC GGCACCGACG CCAAGGTGAA ACTGATCAAG 241 CAGGAACTGG ACAAGTACAA GAACGCCGTG ACCGAGCTGC AGCTGCTGAT GCAGAGCACC 301 CCCGCCACCA ACAACCGGGC CAGAAGAGAG CTGCCCCGGT TCATGAACTA CACCCTGAAC 361 AACGCCAAGA AAACCAACGT GACCCTGAGC AAGAAGCGGA AGCGGCGGTT CCTGGGCTTC 421 CTGCTGGGCG TGGGCAGCGC CATCGCCAGC GGGGTGGCCG TGTCCAAGGT GCTGCACCTG 481 GAAGGCGAGG TGAACAAGAT CAAGTCCGCC CTGCTGTCCA CCAACAAGGC CGTGGTGTCC 541 CTGAGCAACG GCGTGAGCGT GCTGACCAGC AAGGTGCTGG ATCTGAAGAA CTACATCGAC 601 AAGCAGCTGC TGCCCATCGT GAACAAGCAG AGCTGCAGCA TCAGCAACAT CGAGACCGTG 661 ATCGAGTTCC AGCAGAAGAA CAACCGGCTG CTGGAAATCA CCCGGGAGTT CAGCGTGAAC 721 GCCGGCGTGA CCACCCCCGT GAGCACCTAC ATGCTGACCA ACAGCGAGCT GCTGTCCCTG 781 ATCAATGACA TGCCCATCAC CAACGACCAG AAAAAGCTGA TGAGCAACAA CGTGCAGATC 841 GTGCGGCAGC AGAGCTACTC CATCATGAGC ATCATCAAAG AAGAGGTGCT GGCCTACGTG 901 GTGCAGCTGC CCCTGTACGG CGTGATCGAC ACCCCCTGCT GGAAGCTGCA CACCAGCCCC 961 CTGTGCACCA CCAACACCAA AGAGGGCAGC AACATCTGCC TGACCCGGAC CGACCGGGGC 1021 TGGTACTGCG ACAACGCCGG CAGCGTGAGC TTCTTCCCCC AAGCCGAGAC CTGCAAGGTG 1081 CAGAGCAACC GGGTGTTCTG CGACACCATG AACAGCCTGA CCCTGCCCTC CGAGGTGAAC 1141 CTGTGCAACG TGGACATCTT CAACCCCAAG TACGACTGCA AGATCATGAC CTCCAAGACC 1201 GACGTGAGCA GCTCCGTGAT CACCTCCCTG GGCGCCATCG TGAGCTGCTA CGGCAAGACC 1261 AAGTGCACCG CCAGCAACAA GAACCGGGGC ATCATCAAGA CCTTCAGCAA CGGCTGCGAC 1321 TACGTGAGCA ACAAGGGCGT GGACACCGTG AGCGTGGGCA ACACACTGTA CTACGTGAAT 1381 AAGCAGGAAG GCAAGAGCCT GTACGTGAAG GGCGAGCCCA TCATCAACTT CTACGACCCC 1441 CTGGTGTTCC CCAGCGACGA GTTCGACGCC AGCATCAGCC AGGTCAACGA GAAGATCAAC 1501 CAGAGCCTGG CCTTCATCCG GAAGAGCGAC GAGCTGCTGC ACAATGTGAA TGCCGGCAAG 1561 AGCACCACCA ATATCATGAT CACCACAATC ATCATCGTGA TCATTGTGAT CCTGCTGTCT 1621 CTGATTGCCG TGGGCCTGCT GCTGTACTGC AAGGCCCGCA GCACCCCTGT GACCCTGTCC 1681 AAGGACCAGC TGTCCGGCAT CAACAATATC GCCTTCTCCA ACTGAAG (SEQ ID NO: 22)

全長HIS 下列多肽包括全長RSV F多肽與其後之六-組胺酸標記

1 MELLILKANA ITTILTAVTF CFASGQNITE EFYQSTCSAV SKGYLSALRT GWYTSVITIE 61 LSNIKENKCN GTDAKVKLIK QELDKYKNAV TELQLLMQST PATNNRARRE LPRFMNYTLN 121 NAKKTNVTLS KKRKRRFLGF LLGVGSAIAS GVAVSKVLHL EGEVNKIKSA LLSTNKAVVS -146- 201116294

LEITREFSVN IIKEEVLAYV FFPQAETCKV GAIVSCYGKT GEPIINFYDP IIVIIVILLS

IEFQQKNNRL VRQQSYSIMS WYCDNAGSVS DVSSSVITSL KQEGKSLYVK STTNIMITTI SGHHHHHH 181 LSNGVSVLTS KVLDLKNYID KQLLPIVNKQ SCSISNIETV 241 AGVTTPVSTY MLTNSELLSL INDMPITNDQ KKLMSNNVQI 301 VQLPLYGVID TPCWKLHTSP LCTTNTKEGS NICLTRTDRG 361 QSNRVFCDTM NSLTLPSEVN LCNVDIFNPK YDCKIMTSKT 421 KCTASNKNRG IIKTFSNGCD YVSNKGVDTV SVGNTLYYVN 481 LVFPSDEFDA SISQVNEKIN QSLAFIRKSD ELLHNVNAGK 541 LIAVGLLLYC KARSTPVTLS KDQLSGINNI AFSNSGGSAG (SEQ ID N〇：23) 下列核酸序列係前述多肽序列之理想化編碼序列。

1 ATGGAACTGC TGATCCTGAA GGCCAACGCC ATCACCACCA TCCTGACCGC CGTGACCTTC 61 TGCTTCGCCA GCGGCCAGAA CATCACCGAG GAATTCTACC AGAGCACCTG CAGCGCCGTG 121 AGCAAGGGCT ACCTGAGCGC CCTGCGGACC GGCTGGTACA CCAGCGTGAT CACCATCGAG 181 CTGTCCAACA TCAAAGAAAA CAAGTGCAAC GGCACCGACG CCAAGGTGAA ACTGATCAAG 241 CAGGAACTGG ACAAGTACAA GAACGCCGTG ACCGAGCTGC AGCTGCTGAT GCAGAGCACC 301 CCCGCCACCA ACAACCGGGC CAGAAGAGAG CTGCCCCGGT TCATGAACTA CACCCTGAAC 361 AACGCCAAGA AAACCAACGT GACCCTGAGC AAGAAGCGGA AGCGGCGGTT CCTGGGCTTC 421 CTGCTGGGCG TGGGCAGCGC CATCGCCAGC GGGGTGGCCG TGTCCAAGGT GCTGCACCTG 481 GAAGGCGAGG TGAACAAGAT CAAGTCCGCC CTGCTGTCCA CCAACAAGGC CGTGGTGTCC 541 CTGAGCAACG GCGTGAGCGT GCTGACCAGC AAGGTGCTGG ATCTGAAGAA CTACATCGAC 601 AAGCAGCTGC TGCCCATCGT GAACAAGCAG AGCTGCAGCA TCAGCAACAT CGAGACCGTG 661 ATCGAGTTCC AGCAGAAGAA CAACCGGCTG CTGGAAATCA CCCGGGAGTT CAGCGTGAAC 721 GCCGGCGTGA CCACCCCCGT GAGCACCTAC ATGCTGACCA ACAGCGAGCT GCTGTCCCTG 781 ATCAATGACA TGCCCATCAC CAACGACCAG AAAAAGCTGA TGAGCAACAA CGTGCAGATC 341 GTGCGGCAGC AGAGCTACTC CATCATGAGC ATCATCAAAG AAGAGGTGCT GGCCTACGTG 901 GTGCAGCTGC CCCTGTACGG CGTGATCGAC ACCCCCTGCT GGAAGCTGCA CACCAGCCCC 961 CTGTGCACCA CCAACACCAA AGAGGGCAGC AACATCTGCC TGACCCGGAC CGACCGGGGC 1021 TGGTACTGCG ACAACGCCGG CAGCGTGAGC TTCTTCCCCC AAGCCGAGAC CTGCAAGGTG 1081 CAGAGCAACC GGGTGTTCTG CGACACCATG AACAGCCTGA CCCTGCCCTC CGAGGTGAAC 1141 CTGTGCAACG TGGACATCTT CAACCCCAAG TACGACTGCA AGATCATGAC CTCCAAGACC 1201 GACGTGAGCA GCTCCGTGAT CACCTCCCTG GGCGCCATCG TGAGCTGCTA CGGCAAGACC 1261 AAGTGCACCG CCAGCAACAA GAACCGGGGC ATCATCAAGA CCTTCAGCAA CGGCTGCGAC 1321 TACGTGAGCA ACAAGGGCGT GGACACCGTG AGCGTGGGCA ACACACTGTA CTACGTGAAT 1381 AAGCAGGAAG GCAAGAGCCT GTACGTGAAG GGCGAGCCCA TCATCAACTT CTACGACCCC 1441 CTGGTGTTCC CCAGCGACGA GTTCGACGCC AGCATCAGCC AGGTCAACGA GAAGATCAAC 1501 CAGAGCCTGG CCTTCATCCG GAAGAGCGAC GAGCTGCTGC ACAATGTGAA TGCCGGCAAG 1561 AGCACCACCA ATATCATGAT CACCACAATC ATCATCGTGA TCATTGTGAT CCTGCTGTCT 1621 CTGATTGCCG TGGGCCTGCT GCTGTACTGC AAGGCCCGCA GCACCCCTGT GACCCTGTCC 1681 AAGGACCAGC TGTCCGGCAT CAACAATATC GCCTTCTCCA ACAGCGGCGG CAGCGCCGGC 1741 TCTGGCCACC ACCACCATCA CCACTGAAG (SEQ ID NO: 24) -147- 201116294

全長前HIS 下列多肽包括全長RSV F多肽與其後之六-組胺酸標記，該全長RSV F多肽具有與該RSV F多肽之C端連接之 GCN4三聚結構域（畫底線）。

1 MELLILKANA ITTILTAVTF CFASGQNITE EFYQSTCSAV SKGYLSALRT GWYTSVITIE

61 LSNIKENKCN GTDAKVKLIK QELDKYKNAV TELQLLMQST PATNNRARRE LPRFMNYTLN

121 NAKKTNVTLS KKRKRRFLGF LLGVGSAIAS GVAVSKVLHL EGEVNKIKSA LLSTNKAVVS

181 LSNGVSVLTS KVLDLKNYID KQLLPIVNKQ SCSISNIETV IEFQQKNNRL LEITREFSVN

241 AGVTTPVSTY MLTNSELLSL INDMPITNDQ KKLMSNNVQI VRQQSYSIMS IIKEEVLAYV

301 VQLPLYGVID TPCWKLHTSP LCTTNTKEGS NICLTRTDRG WYCDNAGSVS FFPQAETCKV

361 QSNRVFCDTM NSLTLPSEVN LCNVDIFNPK YDCKIMTSKT DVSSSVITSL GAIVSCYGKT

421 KCTASNKNRG IIKTFSNGCD YVSNKGVDTV SVGNTLYYVN KQEGKSLYVK GEPIINFYDP

481 LVFPSDEFDA SISQVNEKIN QSLAFIRKSD ELLHNVNAGK STTNIMITTI IIVIIVILLS

541 LIAVGLLLYC KARSTPVTLS KDQLSGINNI AFSNGSSGRM KQIEDKIEEI LSKIYHIENE 601 IARIKKLIGE SGGSAGSGHH HHHH (SEQ ID NO: 25) 下列核酸序列係前述多肽序列之理想化編碼序列。

1 ATGGAACTGC TGATCCTGAA GGCCAACGCC ATCACCACCA TCCTGACCGC CGTGACCTTC 61 TGCTTCGCCA GCGGCCAGAA CATCACCGAG GAATTCTACC AGAGCACCTG CAGCGCCGTG 121 AGCAAGGGCT ACCTGAGCGC CCTGCGGACC GGCTGGTACA CCAGCGTGAT CACCATCGAG 181 CTGTCCAACA TCAAAGAAAA CAAGTGCAAC GGCACCGACG CCAAGGTGAA ACTGATCAAG 241 CAGGAACTGG ACAAGTACAA GAACGCCGTG ACCGAGCTGC AGCTGCTGAT GCAGAGCACC 301 CCCGCCACCA ACAACCGGGC CAGAAGAGAG CTGCCCCGGT TCATGAACTA CACCCTGAAC 361 AACGCCAAGA AAACCAACGT GACCCTGAGC AAGAAGCGGA AGCGGCGGTT CCTGGGCTTC 421 CTGCTGGGCG TGGGCAGCGC CATCGCCAGC GGGGTGGCCG TGTCCAAGGT GCTGCACCTG 481 GAAGGCGAGG TGAACAAGAT CAAGTCCGCC CTGCTGTCCA CCAACAAGGC CGTGGTGTCC 541 CTGAGCAACG GCGTGAGCGT GCTGACCAGC AAGGTGCTGG ATCTGAAGAA CTACATCGAC 601 AAGCAGCTGC TGCCCATCGT GAACAAGCAG AGCTGCAGCA TCAGCAACAT CGAGACCGTG 661 ATCGAGTTCC AGCAGAAGAA CAACCGGCTG CTGGA7^ATCA CCCGGGAGTT CAGCGTGAAC 721 GCCGGCGTGA CCACCCCCGT GAGCACCTAC ATGCTGACCA ACAGCGAGCT GCTGTCCCTG 781 ATCAATGACA TGCCCATCAC CAACGACCAG AAAAAGCTGA TGAGCAACAA CGTGCAGATC 841 GTGCGGCAGC AGAGCTACTC CATCATGAGC ATCATCAAAG AAGAGGTGCT GGCCTACGTG 901 GTGCAGCTGC CCCTGTACGG CGTGATCGAC ACCCCCTGCT GGAAGCTGCA CACCAGCCCC 961 CTGTGCACCA CCAACACCAA AGAGGGCAGC AACATCTGCC TGACCCGGAC CGACCGGGGC 1021 TGGTACTGCG ACAACGCCGG CAGCGTGAGC TTCTTCCCCC AAGCCGAGAC CTGCAAGGTG 1081 CAGAGCAACC GGGTGTTCTG CGACACCATG AACAGCCTGA CCCTGCCCTC CGAGGTGAAC -148- 201116294 1141 CTGTGCAACG TGGACATCTT CAACCCCAAG TACGACTGCA AGATCATGAC CTCCAAGACC 1201 GACGTGAGCA GCTCCGTGAT CACCTCCCTG GGCGCCATCG TGAGCTGCTA CGGCAAGACC 1261 AAGTGCACCG CCAGCAACAA GAACCGGGGC ATCATCAAGA CCTTCAGCAA CGGCTGCGAC 1321 TACGTGAGCA ACAAGGGCGT GGACACCGTG AGCGTGGGCA ACACACTGTA CTACGTGAAT 1381 AAGCAGGAAG GCAAGAGCCT GTACGTGAAG GGCGAGCCCA TCATCAACTT CTACGACCCC 1441 CTGGTGTTCC CCAGCGACGA GTTCGACGCC AGCATCAGCC AGGTCAACGA GAAGATCAAC 1501 CAGAGCCTGG CCTTCATCCG GAAGAGCGAC GAGCTGCTGC ACAATGTGAA TGCCGGCAAG 1561 AGCACCACCA ATATCATGAT CACCACAATC ATCATCGTGA TCATTGTGAT CCTGCTGTCT 1621 CTGATTGCCG TGGGCCTGCT GCTGTACTGC AAGGCCCGCA GCACCCCTGT GACCCTGTCC 1681 AAGGACCAGC TGTCCGGCAT CAACAATATC GCCTTCTCCA ACGGCAGCAG CGGCCGGATG 1741 AAGCAGATCG AGGACAAGAT CGAGGAAATC CTGAGCAAGA TCTACCACAT CGAGAACGAG Ί801 ATCGCCCGGA TCAAGAAGCT GATCGGCGAA AGCGGCGGCT CTGCCGGAAG CGGCCACCAC 1861 CACCATCACC ACTGAAG (SEQ ID NO: 26) Φ 全長前HIS 2 下列多肽包括全長RSV F多肽與其後之六·組胺酸標記，該全長RSV F多肽具有與該RSV F多肽之C端連接之 GCN4三聚結構域（畫底線）。

1 MELLILKANA ITTILTAVTF CFASGQNITE EFYQSTCSAV SKGYLSALRT GWYTSVITIE

61 LSNIKENKCN GTDAKVKLIK QELDKYKNAV TELQLLMQST PATNNRARRE LPRFMNYTLN

121 NAKKTNVTLS KKRKRRFLGF LLGVGSAIAS GVAVSP<VLHL EGEVNKIKSA LLSTNKAVVS

181 LSNGVSVLTS KVLDLKNYID KQLLPIVNKQ SCSISNIETV IEFQQKNNRL LEITREFSVN

241 AGVTTPVSTY MLTNSELLSL INDMPITNDQ KKLMSNNVQI VRQQSYSIMS IIKEEVLAYV

301 VQLPLYGVID TPCWKLHTSP LCTTNTKEGS NICLTRTDRG WYCDNAGSVS FFPQAETCKV

361 QSNRVFCDTM NSLTLPSEVN LCNVDIFNPK YDCKIMTSKT DVSSSVITSL GAIVSCYGKT

421 KCTASNKNRG IIKTFSNGCD YVSNKGVDTV SVGNTLYYVN KQEGKSLYVK GEPIINFYDP

481 LVFPSDEFDA SISQVNEKIN QSLAFIRKSD ELLHNVNAGK STTNIMITTI XIVIIVILLS

541 LIAVGLLLYC KARSTPVTLS KDQLSGINNI AFSNGSSGSG RMKQIEDKIE EILSKIYHIE 601 NEIARIKKLI GESGGSAGSG HHHHHH (SEQ ID NO: 27) 下列核酸序列係前述多肽序列之理想化編碼序列。

1 ATGGAACTGC TGATCCTGAA GGCCAACGCC ATCACCACCA TCCTGACCGC CGTGACCTTC 61 TGCTTCGCCA GCGGCCAGAA CATCACCGAG GAATTCTACC AGAGCACCTG CAGCGCCGTG 121 AGCAAGGGCT ACCTGAGCGC CCTGCGGACC GGCTGGTACA CCAGCGTGAT CACCATCGAG 131 CTGTCCAACA TCAAAGAAAA CAAGTGCAAC GGCACCGACG CCAAGGTGAA ACTGATCAAG 241 CAGGAACTGG ACAAGTACAA GAACGCCGTG ACCGAGCTGC AGCTGCTGAT GCAGAGCACC 301 CCCGCCACCA ACAACCGGGC CAGAAGAGAG CTGCCCCGGT TCATGAACTA CACCCTGAAC -149- 201116294 361 421 481 541 601 661 721 781 841 901 961 1021 1081 1141 1201 1261 1321 1381 1441 1501 1561 1621 1681 1741 1801 1861

AACGCCAAGA CTGCTGGGCG GAAGGCGAGG CTGAGCAACG AAGCAGCTGC ATCGAGTTCC GCCGGCGTGA ATCAATGACA GTGCGGCAGC GTGCAGCTGC CTGTGCACCA TGGTACTGCG CAGAGCAACC CTGTGCAACG GACGTGAGCA AAGTGCACCG TACGTGAGCA AAGCAGGAAG CTGGTGTTCC CAGAGCCTGG AGCACCACCA CTGATTGCCG AAGGACCAGC CGGATGAAGC AACGAGATCG CACCACCACC

AAACCAACGT TGGGCAGCGC TGAACAAGAT GCGTGAGCGT TGCCCATCGT AGCAGAAGAA CCACCCCCGT TGCCCATCAC AGAGCTACTC CCCTGTACGG CCAACACCAA ACAACGCCGG GGGTGTTCTG TGGACATCTT GCTCCGTGAT CCAGCAACAA ACAAGGGCGT GCAAGAGCCT CCAGCGACGA CCTTCATCCG ATATCATGAT TGGGCCTGCT TGTCCGGCAT AGATCGAGGA CCCGGATCAA ATCACCACTG GACCCTGAGC AAGAAGCGGA CATCGCCAGC GGGGTGGCCG CAAGTCCGCC CTGCTGTCCA GCTGACCAGC AAGGTGCTGG GhACAAGCAG AGCTGCAGCA CAACCGGCTG CTGGAAATCA GAGCACCTAC ATGCTGACCA CAACGACCAG AAAAAGCTGA CATCATGAGC ATCATCAAAG CGTGATCGAC ACCCCCTGCT AGAGGGCAGC AACATCTGCC CAGCGTGAGC TTCTTCCCCC CGACACCATG AACAGCCTGA CAACCCCAAG TACGACTGCA CACCTCCCTG GGCGCCATCG GAACCGGGGC ATCATCAAGA GGACACCGTG AGCGTGGGCA GTACGTGAAG GGCGAGCCCA GTTCGACGCC AGCATCAGCC GAAGAGCGAC GAGCTGCTGC CACCACAATC ATCATCGTGA GCTGTACTGC AAGGCCCGCA CAACAATATC GCCTTCTCCA CAAGATCGAG GAAATCCTGA GAAGCTGATC GGCGAAAGCG AAG (SEQ ID NO: 28)

AGCGGCGGTT TGTCCAAGGT CCAACAAGGC ATCTGAAGAA TCAGCAACAT CCCGGGAGTT ACAGCGAGCT TGAGCAACAA AAGAGGTGCT GGAAGCTGCA TGACCCGGAC AAGCCGAGAC CCCTGCCCTC AGATCATGAC TGAGCTGCTA CCTTCAGCAA ACACACTGTA TCATCAACTT AGGTCAACGA ACAATGTGAA TCATTGTGAT GCACCCCTGT ACGGCAGCAG GCAAGATCTA GCGGCTCTGC

CCTGGGCTTC GCTGCACCTG CGTGGTGTCC CTACATCGAC CGAGACCGTG CAGCGTGAAC GCTGTCCCTG CGTGCAGATC GGCCTACGTG CACCAGCCCC CGACCGGGGC CTGCAAGGTG CGAGGTGAAC CTCCAAGACC CGGCAAGACC CGGCTGCGAC CTACGTGAAT CTACGACCCC GAAGATCAAC TGCCGGCAAG CCTGCTGTCT GACCCTGTCC CGGCAGCGGC CCACATCGAG CGGAAGCGGC

胞外HIS 下列多肽包括RSV F多肽之胞外域與其後之六-組胺酸標記。 1 MELLILKANA ITTILTAVTF CFASGQNITE EFYQSTCSAV SKGYLSALRT GWYTSVITIE 61 LSNIKENKCN GTDAKVKLIK QELDKYKNAV TELQLLMQST PATNNRARRE LPRFMNYTLN 121 NAKKTNVTLS KKRKRRFLGF LLGVGSAIAS GVAVSKVLHL EGEVNKIKSA LLSTNKAVVS 181 LSNGVSVLTS KVLDLKNYID KQLLPIVNKQ SCSISNIETV IEFQQKNNRL LEITREFSVN 241 AGVTTPVSTY MLTNSELLSL INDMPITNDQ KKLMSNNVQI VRQQSYSIMS IIKEEVLAYV 301 VQLPLYGVID TPCWKLHTSP LCTTNTKEGS NICLTRTDRG WYCDNAGSVS FFPQAETCKV 361 QSNRVFCDTM NSLTLPSEVN LCNVDIFNPK YDCKIMTSKT DVSSSVITSL GAIVSCYGKT 421 KCTASNKNRG IIKTFSNGCD YVSNKGVDTV SVGNTLYYVN KQEGKSLYVK GEPIINFYDP 481 LVFPSDEFDA SISQVNEKIN QSLAFIRKSD ELLHNVNSGG SAGSGHHHHH Η -150- 201116294 (SEQ ID NO: 29) 下列核酸序列係前述多肽序列之理想化編碼序列。

1 ATGGAACTGC TGATCCTGAA GGCCAACGCC ATCACCACCA TCCTGACCGC CGTGACCTTC 61 TGCTTCGCCA GCGGCCAGAA CATCACCGAG GAATTCTACC AGAGCACCTG CAGCGCCGTG 121 AGCAAGGGCT ACCTGAGCGC CCTGCGGACC GGCTGGTACA CCAGCGTGAT CACCATCGAG 181 CTGTCCAACA TCAAAGAAAA CAAGTGCAAC GGCACCGACG CCAAGGTGAA ACTGATCAAG 241 CAGGAACTGG ACAAGTACAA GAACGCCGTG ACCGAGCTGC AGCTGCTGAT GCAGAGCACC 301 CCCGCCACCA ACAACCGGGC CAGAAGAGAG CTGCCCCGGT TCATGAACTA CACCCTGAAC 361 AACGCCAAGA AAACCAACGT GACCCTGAGC AAGAAGCGGA AGCGGCGGTT CCTGGGCTTC 421 CTGCTGGGCG TGGGCAGCGC CATCGCCAGC GGGGTGGCCG TGTCCAAGGT GCTGCACCTG 481 GAAGGCGAGG TGAACAAGAT CAAGTCCGCC CTGCTGTCCA CCAACAAGGC CGTGGTGTCC 541 CTGAGCAACG GCGTGAGCGT GCTGACCAGC AAGGTGCTGG ATCTGAAGAA CTACATCGAC 601 AAGCAGCTGC TGCCCATCGT GAACAAGCAG AGCTGCAGCA TCAGCAACAT CGAGACCGTG 661 ATCGAGTTCC AGCAGAAGAA CAACCGGCTG CTGGAAATCA CCCGGGAGTT CAGCGTGAAC 721 GCCGGCGTGA CCACCCCCGT GAGCACCTAC ATGCTGACCA ACAGCGAGCT GCTGTCCCTG 781 ATCAATGACA TGCCCATCAC CAACGACCAG AAAAAGCTGA TGAGCAACAA CGTGCAGATC 841 GTGCGGCAGC AGAGCTACTC CATCATGAGC ATCATCAAAG AAGAGGTGCT GGCCTACGTG 901 GTGCAGCTGC CCCTGTACGG CGTGATCGAC ACCCCCTGCT GGAAGCTGCA CACCAGCCCC 961 CTGTGCACCA CCAACACCAA AGAGGGCAGC AACATCTGCC TGACCCGGAC CGACCGGGGC 1021 TGGTACTGCG ACAACGCCGG CAGCGTGAGC TTCTTCCCCC AAGCCGAGAC CTGCAAGGTG 1081 CAGAGCAACC GGGTGTTCTG CGACACCATG AACAGCCTGA CCCTGCCCTC CGAGGTGAAC 1141 CTGTGCAACG TGGACATCTT CAACCCCAAG TACGACTGCA AGATCATGAC CTCCAAGACC 1201 GACGTGAGCA GCTCCGTGAT CACCTCCCTG GGCGCCATCG TGAGCTGCTA CGGCAAGACC 1261 AAGTGCACCG CCAGCAACAA GAACCGGGGC ATCATCAAGA CCTTCAGCAA CGGCTGCGAC 1321 TACGTGAGCA ACAAGGGCGT GGACACCGTG AGCGTGGGCA ACACACTGTA CTACGTGAAT 1381 AAGCAGGAAG GCAAGAGCCT GTACGTGAAG GGCGAGCCCA TCATCAACTT CTACGACCCC 1441 CTGGTGTTCC CCAGCGACGA GTTCGACGCC AGCATCAGCC AGGTCAACGA GT^AGATCAAC 1501 CAGAGCCTGG CCTTCATCCG GAAGAGCGAC GAGCTGCTGC ACAATGTGAA TAGCGGCGGC 1561 AGCGCCGGCT CTGGCCACCA CCACCATCAC CACTGAAG (SEQ ID NO: 30)

胞外前Η I S 下列多肽包括RSV F多肽之胞外域與其後之六-組胺酸標記，該RSV F多肽之胞外域具有被插入至該RSV F多肽中應爲該RSV蛋白之TM結構域上游處（始於胺基酸51 7)的 GCN4三聚結構域（畫底線）。 5 -151 - 201116294 1 MELLILKANA ITTILTAVTF CFASGQNITE EFYQSTCSAV SKGYLSALRT GWYTSVITIE 61 LSNIKENKCN GTDAKVKLIK QELDKYKNAV TELQLLMQST PATNNRARRE LPRFMNYTLN 121 NAKKTNVTLS KKRKRRFLGF LLGVGSAIAS GVAVSKVLHL EGEVNKIKSA LLSTNKAVVS 181 LSNGVSVLTS KVLDLKNYID KQLLPIVNKQ SCSISNIETV IEFQQKNNRL LEITREFSVN 241 AGVTTPVSTY MLTNSELLSL INDMPITNDQ KKLMSNNVQI VRQQSYSIMS IIKEEVLAYV 301 VQLPLYGVID TPCWKLHTSP LCTTNTKEGS NICLTRTDRG WYCDNAGSVS FFPQAETCKV 361 QSNRVFCDTM NSLTLPSEVN LCNVDIFNPK YDCKIMTSKT DVSSSVITSL GAIVSCYGKT 421 KCTASNKNRG IIKTFSNGCD YVSNKGVDTV SVGNTLYYVN KQEGKSLYVK GEPIINFYDP 481 LVFPSDEFDA SISQVNEKIN QSLAFIRKSD ELLHNVNDKI EEILSKIYHI ENEIARIKKL 541 IGESGGSAGS GHHHHHH {SEQ ID NO: 31) 下列核酸序列係前述多肽序列之理想化編碼序列。

1 ATGGAACTGC TGATCCTGAA GGCCAACGCC ATCACCACCA TCCTGACCGC CGTGACCTTC 61 TGCTTCGCCA GCGGCCAGAA CATCACCGAG GAATTCTACC AGAGCACCTG CAGCGCCGTG 121 AGCAAGGGCT ACCTGAGCGC CCTGCGGACC GGCTGGTACA CCAGCGTGAT CACCATCGAG 181 CTGTCCAACA TCAAAGAAAA CAAGTGCAAC GGCACCGACG CCAAGGTGAA ACTGATCAAG 241 CAGGAACTGG ACAAGTACAA GAACGCCGTG ACCGAGCTGC AGCTGCTGAT GCAGAGCACC 301 CCCGCCACCA ACAACCGGGC CAGAAGAGAG CTGCCCCGGT TCATGAACTA CACCCTGAAC 361 AACGCCAAGA AAACCAACGT GACCCTGAGC AAGAAGCGGA AGCGGCGGTT CCTGGGCTTC 421 CTGCTGGGCG TGGGCAGCGC CATCGCCAGC GGGGTGGCCG TGTCCAAGGT GCTGCACCTG 481 GAAGGCGAGG TGAACAAGAT CAAGTCCGCC CTGCTGTCCA CCAACAAGGC CGTGGTGTCC 541 CTGAGCAACG GCGTGAGCGT GCTGACCAGC AAGGTGCTGG ATCTGAAGAA CTACATCGAC 601 AAGCAGCTGC TGCCCATCGT GAACAAGCAG AGCTGCAGCA TCAGCAACAT CGAGACCGTG 661 ATCGAGTTCC AGCAGAAGAA CAACCGGCTG CTGGAAATCA CCCGGGAGTT CAGCGTGAAC 721 GCCGGCGTGA CCACCCCCGT GAGCACCTAC ATGCTGACCA ACAGCGAGCT GCTGTCCCTG 781 ATCAATGACA TGCCCATCAC CAACGACCAG AAAAAGCTGA TGAGCAACAA CGTGCAGATC 841 GTGCGGCAGC AGAGCTACTC CATCATGAGC ATCATCAAAG AAGAGGTGCT GGCCTACGTG 901 GTGCAGCTGC CCCTGTACGG CGTGATCGAC ACCCCCTGCT GGAAGCTGCA CACCAGCCCC 961 CTGTGCACCA CCAACACCAA AGAGGGCAGC AACATCTGCC TGACCCGGAC CGACCGGGGC 1021 TGGTACTGCG ACAACGCCGG CAGCGTGAGC TTCTTCCCCC AAGCCGAGAC CTGCAAGGTG 1081 CAGAGCAACC GGGTGTTCTG CGACACCATG AACAGCCTGA CCCTGCCCTC CGAGGTGAAC 1141 CTGTGCAACG TGGACATCTT CAACCCCAAG TACGACTGCA AGATCATGAC CTCCAAGACC 1201 GACGTGAGCA GCTCCGTGAT CACCTCCCTG GGCGCCATCG TGAGCTGCTA CGGCAAGACC 1261 AAGTGCACCG CCAGCAACAA GAACCGGGGC ATCATCAAGA CCTTCAGCAA CGGCTGCGAC 1321 TACGTGAGCA ACAAGGGCGT GGACACCGTG AGCGTGGGCA ACACACTGTA CTACGTGAAT 1381 AAGCAGGAAG GCAAGAGCCT GTACGTGAAG GGCGAGCCCA TCATCAACTT CTACGACCCC 1441 CTGGTGTTCC CCAGCGACGA GTTCGACGCC AGCATCAGCC AGGTCAACGA GAAGATCAAC 1501 CAGAGCCTGG CCTTCATCCG GAAGAGCGAC GAGCTGCTGC ACAATGTGAA TGACAAGATC 1561 GAGGAAATCC TGAGCAAGAT CTACCACATC GAGAACGAGA TCGCCCGGAT CAAGAAGCTG -152- 201116294 1621 ATCGGCGAAA GCGGCGGCTC TGCCGGAAGC GGCCACCACC ACCATCACCA CTGAAG (SEQ ID NO: 32)

全長前HA HIS 下列多肽包括全長RSV F多肽與其後之六-組胺酸標記，該全長RSV F多肽具有與該RSV F多肽之C端連接之流感血球凝集素多肽的融合後三聚結構域（畫底線）。

1 MELLILKANA ITTILTAVTF CFASGQNITE EFYQSTCSAV SKGYLSALRT GWYTSVITIE 61 LSNIKENKCN GTDAKVKLIK QELDKYKNAV TELQLLMQST PATNNRARRE LPRFMNYTLN 121 NAKKTNVTLS KKRKRRFLGF LLGVGSAIAS GVAVSKVLHL EGEVNKIKSA LLSTNKAVVS 181 LSNGVSVLTS KVLDLKNYID KQLLPIVNKQ SCSISNIETV IEFQQKNNRL LEITREFSVN 241 AGVTTPVSTY MLTNSELLSL INDMPITNDQ KKLMSNNVQI VRQQSYSIMS IIKEEVLAYV 301 VQLPLYGVID TPCWKLHTSP LCTTNTKEGS NICLTRTDRG WYCDNAGSVS FFPQAETCKV 361 QSNRVFCDTM NSLTLPSEVN LCNVDIFNPK YDCKIMTSKT DVSSSVITSL GAIVSCYGKT 421 KCTASNKNRG IIKTFSNGCD YVSNKGVDTV SVGNTLYYVN KQEGKSLYVK GEPIINFYDP 481 LVFPSDEFDA SISQVNEKIN QSLAFIRKSD ELLHNVNAGK STTNIMITTI IIVIIVILLS 541 LIAVGLLLYC KARSTPVTLS KDQLSGINNI AFSNGSSGNE KFHQIEKEFS EVEGRIQDLE 601 KSGGSAGSGH HHHHH (SEQ ID NO: 33) 下列核酸序列係前述多肽序列之理想化編碼序列。

1 ATGGAACTGC TGATCCTGAA GGCCAACGCC ATCACCACCA TCCTGACCGC CGTGACCTTC 61 TGCTTCGCCA GCGGCCAGAA CATCACCGAG GAATTCTACC AGAGCACCTG CAGCGCCGTG 121 AGCAAGGGCT ACCTGAGCGC CCTGCGGACC GGCTGGTACA CCAGCGTGAT CACCATCGAG 181 CTGTCCAACA TCAAAGAAAA CAAGTGCAAC GGCACCGACG CCAAGGTGAA ACTGATCAAG 241 CAGGAACTGG ACAAGTACAA GAACGCCGTG ACCGAGCTGC AGCTGCTGAT GCAGAGCACC 301 CCCGCCACCA ACAACCGGGC CAGAAGAGAG CTGCCCCGGT TCATGAACTA CACCCTGAAC 361 AACGCCAAGA AAACCAACGT GACCCTGAGC AAGAAGCGGA AGCGGCGGTT CCTGGGCTTC 421 CTGCTGGGCG TGGGCAGCGC CATCGCCAGC GGGGTGGCCG TGTCCAAGGT GCTGCACCTG 481 GAAGGCGAGG TGAACAAGAT CAAGTCCGCC CTGCTGTCCA CCAACAAGGC CGTGGTGTCC 541 CTGAGCAACG GCGTGAGCGT GCTGACCAGC AAGGTGCTGG ATCTGAAGAA CTACATCGAC 601 AAGCAGCTGC TGCCCATCGT GAACAAGCAG AGCTGCAGCA TCAGCAACAT CGAGACCGTG 661 ATCGAGTTCC AGCAGAAGAA CAACCGGCTG CTGGAAATCA CCCGGGAGTT CAGCGTGAAC 721 GCCGGCGTGA CCACCCCCGT GAGCACCTAC ATGCTGACCA ACAGCGAGCT GCTGTCCCTG 781 ATCAATGACA TGCCCATCAC CAACGACCAG AAAAAGCTGA TGAGCAACAA CGTGCAGATC 841 GTGCGGCAGC AGAGCTACTC CATCATGAGC ATCATCAAAG AAGAGGTGCT GGCCTACGTG 901 GTGCAGCTGC CCCTGTACGG CGTGATCGAC ACCCCCTGCT GGAAGCTGCA CACCAGCCCC 961 CTGTGCACCA CCAACACCAA AGAGGGCAGC AACATCTGCC TGACCCGGAC CGACCGGGGC -153- 201116294 1021 TGGTACTGCG ACAACGCCGG CAGCGTGAGC TTCTTCCCCC AAGCCGAGAC CTGCAAGGTG 1081 CAGAGCAACC GGGTGTTCTG CGACACCATG AACAGCCTGA CCCTGCCCTC CGAGGTGAAC 1141 CTGTGCAACG TGGACATCTT CAACCCCAAG TACGACTGCA AGATCATGAC CTCCAAGACC 1201 GACGTGAGCA GCTCCGTGAT CACCTCCCTG GGCGCCATCG TGAGCTGCTA CGGCAAGACC 1261 AAGTGCACCG CCAGCAACAA GAACCGGGGC ATCATCAAGA CCTTCAGCAA CGGCTGCGAC 1321 TACGTGAGCA ACAAGGGCGT GGACACCGTG AGCGTGGGCA ACACACTGTA CTACGTGAAT 1381 AAGCAGGAAG GCAAGAGCCT GTACGTGAAG GGCGAGCCCA TCATCAACTT CTACGACCCC 1441 CTGGTGTTCC CCAGCGACGA GTTCGACGCC AGCATCAGCC AGGTCAACGA GAAGATCAAC 1501 CAGAGCCTGG CCTTCATCCG GAAGAGCGAC GAGCTGCTGC ACAATGTGAA TGCCGGCAAG 1561 AGCACCACCA ATATCATGAT CACCACAATC ATCATCGTGA TCATTGTGAT CCTGCTGTCT 1621 CTGATTGCCG TGGGCCTGCT GCTGTACTGC AAGGCCCGCA GCACCCCTGT GACCCTGTCC 1681 AAGGACCAGC TGTCCGGCAT CAACAATATC GCCTTCTCCA ACGGCAGCAG CGGCAATGAG 1741 AAGTTCCACC AGATCGAGAA AGAATTCAGC GAGGTGGAGG GCCGGATCCA GGACCTGGAA 1801 AAGAGCGGCG GCTCTGCCGG AAGCGGCCAC CACCACCATC ACCACTGAAG (SEQ ID NO: 34)

胞外前HA HIS 下列多肽包括RSV F多肽之胞外域與其後之六-組胺酸標記，該RSV F多肽之胞外域具有被插入至該RSV F多肽中應爲該RSV蛋白之TM結構域上游處（始於胺基酸51 7)的流感血球凝集素多肽之融合後三聚結構域（畫底線）。

1 MELLILKANA ITTILTAVTF CFASGQNITE EFYQSTCSAV SKGYLSALRT GWYTSVITIE

61 LSNIKENKCN GTDAKVKLIK QELDKYKNAV TELQLLMQST PATNNRARRE LPRFMNYTLN

121 NAKKTNVTLS KKRKRRFLGF LLGVGSAIAS GVAVSKVLHL EGEVNKIKSA LLSTNKAVVS

181 LSNGVSVLTS KVLDLKNYID KQLLPIVNKQ SCSISNIETV IEFQQKNNRL LEITREFSVN

241 AGVTTPVSTY MLTNSELLSL INDMPITNDQ KKLMSNNVQI VRQQSYSIMS IIKEEVLAYV

301 VQLPLYGVID TPCWKLHTSP LCTTNTKEGS NICLTRTDRG WYCDNAGSVS FFPQAETCKV

361 QSNRVFCDTM NSLTLPSEVN LCNVDIFNPK YDCKIMTSKT DVSSSVITSL GAIVSCYGKT

421 KCTASNKNRG IIKTFSNGCD YVSNKGVDTV SVGNTLYYVN KQEGKSLYVK GEPIINFYDP

481 LVFPSDEFDA SISQVNEKIN QSLAFIRKSD ELLHNVNEKF HQIEKEFSEV EGRIQDLEKS 541 GGSAGSGHHH HHH (SEQ ID NO: 35) 下列核酸序列係前述多肽序列之理想化編碼序列。

1 ATGGAACTGC TGATCCTGAA GGCCAACGCC ATCACCACCA TCCTGACCGC CGTGACCTTC 61 TGCTTCGCCA GCGGCCAGAA CATCACCGAG GAATTCTACC AGAGCACCTG CAGCGCCGTG 121 AGCAAGGGCT ACCTGAGCGC CCTGCGGACC GGCTGGTACA CCAGCGTGAT CACCATCGAG 181 CTGTCCAACA TCAAAGAAAA CAAGTGCAAC GGCACCGACG CCAAGGTGAA ACTGATCAAG -154- 201116294

241 CAGGAACTGG ACAAGTACAA GAACGCCGTG ACCGAGCTGC AGCTGCTGAT GCAGAGCACC 301 CCCGCCACCA ACAACCGGGC CAGAAGAGAG CTGCCCCGGT TCATGAACTA CACCCTGAAC 361 AACGCCAAGA AAACCAACGT GACCCTGAGC AAGAAGCGGA AGCGGCGGTT CCTGGGCTTC 421 CTGCTGGGCG TGGGCAGCGC CATCGCCAGC GGGGTGGCCG TGTCCAAGGT GCTGCACCTG 481 GAAGGCGAGG TGAACAAGAT CAAGTCCGCC CTGCTGTCCA CCAACAAGGC CGTGGTGTCC 541 CTGAGCAACG GCGTGAGCGT GCTGACCAGC AAGGTGCTGG ATCTGT^GAA CTACATCGAC 601 AAGCAGCTGC TGCCCATCGT GAACAAGCAG AGCTGCAGCA TCAGCAACAT CGAGACCGTG 661 ATCGAGTTCC AGCAGAAGAA CAACCGGCTG CTGGAAATCA CCCGGGAGTT CAGCGTGAAC 721 GCCGGCGTGA CCACCCCCGT GAGCACCTAC ATGCTGACCA ACAGCGAGCT GCTGTCCCTG 781 ATCAATGACA TGCCCATCAC CAACGACCAG AAAAAGCTGA TGAGCAACAA CGTGCAGATC 841 GTGCGGCAGC AGAGCTACTC CATCATGAGC ATCATCAAAG AAGAGGTGCT GGCCTACGTG 901 GTGCAGCTGC CCCTGTACGG CGTGATCGAC ACCCCCTGCT GGAAGCTGCA CACCAGCCCC 961 CTGTGCACCA CCAACACCAA AGAGGGCAGC AACATCTGCC TGACCCGGAC CGACCGGGGC 1021 TGGTACTGCG ACAACGCCGG CAGCGTGAGC TTCTTCCCCC AAGCCGAGAC CTGCAAGGTG 1081 CAGAGCAACC GGGTGTTCTG CGACACCATG AACAGCCTGA CCCTGCCCTC CGAGGTGAAC 1141 CTGTGCAACG TGGACATCTT CAACCCCAAG TACGACTGCA AGATCATGAC CTCCAAGACC 1201 GACGTGAGCA GCTCCGTGAT CACCTCCCTG GGCGCCATCG TGAGCTGCTA CGGCAAGACC 1261 AAGTGCACCG CCAGCAACAA GAACCGGGGC ATCATC7^AGA CCTTCAGCAA CGGCTGCGAC 1321 TACGTGAGCA ACAAGGGCGT GGACACCGTG AGCGTGGGCA ACACACTGTA CTACGTGAAT 1381 AAGCAGGAAG GCAAGAGCCT GTACGTGAAG GGCGAGCCCA TCATCAACTT CTACGACCCC 1441 CTGGTGTTCC CCAGCGACGA GTTCGACGCC AGCATCAGCC AGGTCAACGA GAAGATCAAC 1501 CAGAGCCTGG CCTTCATCCG GAAGAGCGAC GAGCTGCTGC ACAATGTGAA TGAGAAGTTC 1561 CACCAGATCG AGAAAG/^ATT CAGCGAGGTG GAGGGCCGGA TCCAGGACCT GGAAAAGAGC 1621 GGCGGCTCTG CCGGAAGCGG CCACCACCAC CATCACCACT GAAG (SEQ ID NO: 36)

全長△ HRB HIS 下列多肽包括HRB結構域經刪除之全長RSV F多肽與其後之六-組胺酸標記。 1 MELLILKANA 61 LSNIKENKCN 121 NAKKTNVTLS 181 LSNGVSVLTS 241 AGVTTPVSTY 301 VQLPLYGVID 361 QSNRVFCDTM 421 KCTASNKNRG 481 IIVIIVILLS (SEQ ID NO: 37)

ITTILTAVTF

GTDAKVKLIK

KKRKRRFLGF

KVLDLKNYID

MLTNSELLSL

TPCWKLHTSP

NSLTLPSEVN

IIKTFSNGCD

LIAVGLLLYC

CFASGQNITE

QELDKYKNAV

LLGVGSAIAS

KQLLPIVNKQ

INDMPITNDQ

LCTTNTKEGS

LCNVDIFNPK

YVSNKGVDTV

KARSTPVTLS

EFYQSTCSAV TELQLLMQST GVAVSKVLHL SCSISNIETV KKLMSNNVQ工 NICLTRTDRG YDCKIMTSKT SVGNTLYYVN KDQLSGINNI

SKGYLSALRT

PATNNRARRE

EGEVNKIKSA

IEFQQKNNRL

VRQQSYSIMS

WYCDNAGSVS

DVSSSVITSL

KQEGKSLYVK

AFSNMGGSHH

GWYTSVITIE

LPRFMNYTLN

LLSTNKAVVS

LEITREFSVM

IIKEEVLAYV

FFPQAETCKV

GAIVSCYGKT

GEPNIMITTI

HHHH r~- tel -155- 201116294 下列核酸序列係前述多肽序列之理想化編碼序列。

1 ATGGAACTGC TGATCCTGAA GGCCAACGCC ATCACCACCA TCCTGACCGC CGTGACCTTC 61 TGCTTCGCCA GCGGCCAGAA CATCACCGAG GAATTCTACC AGAGCACCTG CAGCGCCGTG 121 AGCAAGGGCT ACCTGAGCGC CCTGCGGACC GGCTGGTACA CCAGCGTGAT CACCATCGAG 181 CTGTCCAACA TCAAAGAAAA CAAGTGCAAC GGCACCGACG CCAAGGTGAA ACTGATCAAG 241 CAGGAACTGG ACAAGTACAA GAACGCCGTG ACCGAGCTGC AGCTGCTGAT GCAGAGCACC 301 CCCGCCACCA ACAACCGGGC CAGAAGAGAG CTGCCCCGGT TCATGAACTA CACCCTGAAC 361 AACGCCAAGA AAACCAACGT GACCCTGAGC AAGAAGCGGA AGCGGCGGTT CCTGGGCTTC 421 CTGCTGGGCG TGGGCAGCGC CATCGCCAGC GGGGTGGCCG TGTCCAAGGT GCTGCACCTG 481 GAAGGCGAGG TGAACAAGAT CAAGTCCGCC CTGCTGTCCA CCAACAAGGC CGTGGTGTCC 541 CTGAGCAACG GCGTGAGCGT GCTGACCAGC AAGGTGCTGG ATCTGAAGAA CTACATCGAC 601 AAGCAGCTGC TGCCCATCGT GAACAAGCAG AGCTGCAGCA TCAGCAACAT CGAGACCGTG 661 ATCGAGTTCC AGCAGAAGAA CAACCGGCTG CTGGAAATCA CCCGGGAGTT CAGCGTGAAC 721 GCCGGCGTGA CCACCCCCGT GAGCACCTAC ATGCTGACCA ACAGCGAGCT GCTGTCCCTG 781 ATCAATGACA TGCCCATCAC CAACGACCAG AAAAAGCTGA TGAGCAACAA CGTGCAGATC 841 GTGCGGCAGC AGAGCTACTC CATCATGAGC ATCATCAAAG AAGAGGTGCT GGCCTACGTG 901 GTGCAGCTGC CCCTGTACGG CGTGATCGAC ACCCCCTGCT GGAAGCTGCA CACCAGCCCC 961 CTGTGCACCA CCAACACCAA AGAGGGCAGC AACATCTGCC TGACCCGGAC CGACCGGGGC 1021 TGGTACTGCG ACAACGCCGG CAGCGTGAGC TTCTTCCCCC AAGCCGAGAC CTGCAAGGTG 1081 CAGAGCAACC GGGTGTTCTG CGACACCATG AACAGCCTGA CCCTGCCCTC CGAGGTGAAC 1141 CTGTGCAACG TGGACATCTT CAACCCCAAG TACGACTGCA AGATCATGAC CTCCAAGACC 1201 GACGTGAGCA GCTCCGTGAT CACCTCCCTG GGCGCCATCG TGAGCTGCTA CGGCAAGACC 1261 AAGTGCACCG CCAGCAACAA GAACCGGGGC ATCATCAAGA CCTTCAGCAA CGGCTGCGAC 1321 TACGTGAGCA ACAAGGGCGT GGACACCGTG AGCGTGGGCA ACACACTGTA CTACGTGAAT 1381 AAGCAGGAAG GCAAGAGCCT GTACGTGAAG GGCGAGCCCA ATATCATGAT CACCACAATC 1441 ATCATCGTGA TCATTGTGAT CCTGCTGTCT CTGATTGCCG TGGGCCTGCT GCTGTACTGC 1501 AAGGCCCGCA GCACCCCTGT GACCCTGTCC AAGGACCAGC TGTCCGGCAT CAACAATATC 1561 GCCTTCTCCA ACATGGGGGG TTCTCATCAT CATCATCATC ATTGAAG (SEQ ID NO: 38) 胞外下列多肽僅包括RSV F多肽之胞外域。

1 MELLILKANA ITTILTAVTF CFASGQNITE EFYQSTCSAV SKGYLSALRT GWYTSVITIE

61 LSNIKENKCN GTDAKVKLIK QELDKYKNAV TELQLLMQST PATNNRARRE LPRFMNYTLN

121 NAKKTNVTLS KKRKRRFLGF LLGVGSAIAS GVAVSKVLHL EGEVNKIKSA LLSTNKAVVS

181 LSNGVSVLTS KVLDLKNYID KQLLPIVNKQ SCSISNIETV IEFQQKNNRL LEITREFSVN

241 AGVTTPVSTY MLTNSELLSL IMDMPITNDQ KKLMSNNVQI VRQQSYSIMS IIKEEVLAYV

301 VQLPLYGVID TPCWKLHTSP LCTTNTKEGS NICLTRTDRG WYCDNAGSVS FFPQAETCKV

361 QSNRVFCDTM NSLTLPSEVN LCNVDIFNPK YDCKIMTSKT DVSSSVITSL GAIVSCYGKT -156- 201116294 421 KCTASNKNRG IIKTFSNGCD YVSNKGVDTV SVGNTLYYVN KQEGKSLYVK GEPIINFYDP 481 LVFPSDEFDA SISQVNEKIN QSLAFIRKSD ELLHNVNAGK STTN (SEQ ID NO: 39) 下列核酸序列係前述多肽序列之理想化編碼序列。

1 ATGGAACTGC TGATCCTGAA GGCCAACGCC ATCACCACCA TCCTGACCGC CGTGACCTTC 61 TGCTTCGCCA GCGGCCAGAA CATCACCGAG GAATTCTACC AGAGCACCTG CAGCGCCGTG 121 AGCAAGGGCT ACCTGAGCGC CCTGCGGACC GGCTGGTACA CCAGCGTGAT CACCATCGAG 181 CTGTCCAACA TCAAAGAAAA CAAGTGCAAC GGCACCGACG CCAAGGTGAA ACTGATCAAG 241 CAGGAACTGG ACAAGTACAA GAACGCCGTG ACCGAGCTGC AGCTGCTGAT GCAGAGCACC 301 CCCGCCACCA ACAACCGGGC CAGhAGAGAG CTGCCCCGGT TCATGAACTA CACCCTGAAC 361 AACGCCAAGA AAACCAACGT GACCCTGAGC AAGAAGCGGA AGCGGCGGTT CCTGGGCTTC 421 CTGCTGGGCG TGGGCAGCGC CATCGCCAGC GGGGTGGCCG TGTCCAAGGT GCTGCACCTG 481 GAAGGCGAGG TGAACAAGAT CAAGTCCGCC CTGCTGTCCA CCAACAAGGC CGTGGTGTCC 541 CTGAGCAACG GCGTGAGCGT GCTGACCAGC AAGGTGCTGG ATCTGAAGAA CTACATCGAC 601 AAGCAGCTGC TGCCCATCGT GAACAAGCAG AGCTGCAGCA TCAGCAACAT CGAGACCGTG 661 ATCGAGTTCC AGCAGAAGAA CAACCGGCTG CTGGAAATCA CCCGGGAGTT CAGCGTGAAC 721 GCCGGCGTGA CCACCCCCGT GAGCACCTAC ATGCTGACCA ACAGCGAGCT GCTGTCCCTG 781 ATCAATGACA TGCCCATCAC CAACGACCAG AAAAAGCTGA TGAGCAACAA CGTGCAGATC 841 GTGCGGCAGC AGAGCTACTC CATCATGAGC ATCATCAAAG AAGAGGTGCT GGCCTACGTG 901 GTGCAGCTGC CCCTGTACGG CGTGATCGAC ACCCCCTGCT GGAAGCTGCA CACCAGCCCC 961 CTGTGCACCA CCAACACCAA AGAGGGCAGC AACATCTGCC TGACCCGGAC CGACCGGGGC 1021 TGGTACTGCG ACAACGCCGG CAGCGTGAGC TTCTTCCCCC AAGCCGAGAC CTGCAAGGTG 1081 CAGAGCAACC GGGTGTTCTG CGACACCATG AACAGCCTGA CCCTGCCCTC CGAGGTGAAC 1141 CTGTGCAACG TGGACATCTT CAACCCCAAG TACGACTGCA AGATCATGAC CTCCAAGACC 1201 GACGTGAGCA GCTCCGTGAT CACCTCCCTG GGCGCCATCG TGAGCTGCTA CGGCAAGACC 1261 AAGTGCACCG CCAGCAACAA GAACCGGGGC ATCATCAAGA CCTTCAGCAA CGGCTGCGAC 1321 TACGTGAGCA ACAAGGGCGT GGACACCGTG AGCGTGGGCA ACACACTGTA CTACGTGAAT 1381 AAGCAGGAAG GCAAGAGCCT GTACGTGAAG GGCGAGCCCA TCATCAACTT CTACGACCCC 1441 CTGGTGTTCC CCAGCGACGA GTTCGACGCC AGCATCAGCC AGGTCAACGA GAAGATCAAC 1501 CAGAGCCTGG CCTTCATCCG GAAGAGCGAC GAGCTGCTGC ACAATGTGAA TGCCGGCAAG 1561 AGCACCACCA ATTGAAG (SEQ ID NO: 40) RSV F全長 MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENK CWGTDAJCVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNRARRELPRFMNYTLNNAKKTNVTLSKKRKRR FLGFLLGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLL P:[VNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRliLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSIJNDMPITNDQKK LMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEVLAyWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRG WYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVIT εΐΑΑΐνεσϊσκτκοτΜΝΚΝί^ιικτΓει^ογνΒΝκσνοτνβνσΝΊΧγγνΝκοΕακ^γνκσΕΡίΐΝ ΡΥΟΡΙΛ^ΡΡεΟΕΡΌΑβΙβΟνΝΕΚΙΝζ^ΙΑΡΙΙ^ϋΕΜϋΝνΝΑαΚδΤΤΝΙΜΙΤΤΙΙΐνΐΐνη^ΕΙΑν GliLLYCKARSTPVTLSKDQLSGINNIAFSN (SEQ ID NO :41) -157- 201116294 RSV F切割腸激酶理想化 MELLILKANAITTIIiTAVTFCPASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENK CNGTDAKVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNRARRELPRFMNYTLNNAKKTNVTLSKKRKRR FLGFLLGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLL PIVNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKK Ι^ΝΝνΟίνΐΙΟζ^ΥΞΙΜβΙΪΚΕΕνίΑΥννΟΙιΡΙ/ΪΟνίΙίΤΡαϊίΐαϊΠ^ΡΙ^ΤΤΝΤΚΕαβΝΙίΤΙ/ΠαΌΚσ WYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCTDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVIT SLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPI IN FYDPLVFPSDEFDASISQINEKINQILAFIRKIDELLHNINAGKSTTNGSGSGDDDDDKGSGSGIMIT ΤΙIIVIIVILLSLIAVGLLLYCKARSTPVTLSKDQLSGINNIAPSN (SEQ ID NO:42) RSV F切割凝血酶理想化

MELLILKANAITTILTAVTFCPASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENK

CNGTDAKVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNRARRELPRFMNYTLNNAKKTNVTLSKKRKRR

FLGFLLGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLL

ΡίνΝΚί^βΙβΝΙΕΤνίΕΡΟΟΚΝΝϋϋΕΙΤΙΙΕΓβνΝΑσνΤΤΡνβΤΥΜυΤΝβΕΙιΙ^ΙΝΟΜΡΙΤΝηΟΚΚ

LMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEVLAYWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRG

WYCDNAG SLGAIVS rlVGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVIT VSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIIN FyDPLVFPSDEFDASISQINEKINQILAFIRKIDELLHNINAGKSTTNGSGSGLVPRGSGSGIMITTI IIVIIVILLSLIAVGLLLYCKARSTPVTLSKDQLSGINNIAFSN (SEQ ID NO:43) RSV F切割因子Xa理想化 MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENK CNGTDAKVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNRARRELPRFMNYTLNNAKKTNVTLSKKRKRR ΡΙ^Ι^νσ5ΑΙΑ5〇νΑν5ΚνΐίΗΙίΕσΕνΝΚΙΙ^Αυ^ΤΝΚΑνν5Ι^Νσν3νΐίΤ3Κν3^ΚΝΥΙΟΚζ3Ι^ PXVNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKK LMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEVLAYWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRG WYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVIT SLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGI IKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPI IN FYDPLVFPSDEFDASISQINEKINQILAFIRKIDELLHNINAGKSTTNGSGSGIEGRGSGSGIMITTI IIVIIVILLSLIAVGLLLYCKARSTPVTLSKDQLSGINNIAFSN (SEQ ID NO:44)

RS V F furx 截短 HIS MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDA iCVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNQAQNELPRFMNYTLNNAKKTNVTLSQNQNQNFLGFLLGVGSAI ΑεανΑνβΚνωΐ^ΕνΝΚΙΚΒΑΙ^ΤΝΚΑννεΐ^Νσνενί^Κνί^ΚΝΥΙϋΚΟΙ^ΡίνΝΚζ^βίεΝΙΕΤνίΕ FQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEV LAYWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTM NSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSN KGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELIiHNVNA GKSTTNGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO:45)

RSV F furx R113Q，K123N，K124N 截短 HIS -158- 201116294 MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDA ΚνκυΚΟΕΙ^ΚΥΚΝΑνΤΕΙ^Ι^Μζ^ΤΡΑΤΝΝΟΑΟΝΕΕΡζ^ΜΝΥΤυ^ΝΑΝΝΤΝνΤΙ^ΟΝΟΝΟΝΡΙ^ΡΙιΙ^νσεΑΙ ASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIE FQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEV LAYWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTM NSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSN KGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVNA GKSTTNGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO：46)

RSV F furx R113Q, K123Q，K124Q截短 HIS

MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNXTEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDA KVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNQAQNELPQFMNYTLNNAQQTNVTLSQNQNQNFLGFLLGVGSAI ΑβΘνΑνΞΚνί^ΕΟΕνΝΚΙΚ^ΑΙ^ΤΝΚΑννεΐ^ΝανβνΐιΤβΚνίιΟΙιΚΝΥΙΟΚςίΙ^ΡίνΝΚζ^βΙβΝΙΕΤνίΕ FQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTyMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSXMSIIKEEV LAYWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTM NSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSN KGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVNA GKSTTNGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO:93)

RSV F delP21 furx截短 HIS MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDA ：KVKL IKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNQAQN---------------------

QtJQNQNFLGFLLGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLIi

:PIVNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNV

QIVRQQSYSIMSIIKEEVLAYWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPIiCTnmCEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFF

PQAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASN

1CNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKIN QSLAFIRKSDELLHNVNAGKSTTNGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO:47) (符號 M·*'表示在該位置之胺基酸係經刪除）

RS V F delP23 furx 截短 HIS

MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVXTIELSNIKENKCNGTDA KVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNQAQN.......................

QNQNFLGFLLGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKXKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPI

VNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQI

VRQQSYSIMSIIKEEVLAYWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQ

AETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKN

RGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQS LAPXRKSDELLHNVNAGKSTTNGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO: 48) (符號”表示在該位置之胺基酸係經刪除）

RSV F delP23 furdel 截短 HIS -159- 201116294

MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDA KVKLIKQELDKyKNAVTELQLLMQSTPATNNRARQ....................... ΟΟζ^Ι^ΙιΙΛναεΑΙΑεσνΑνΒΚνίιΗΙ^ΕνΝΚΙΚβΑΙ^ΤΝΚΑννΒΙ^ΝσνενίίΤεκνίιΟΙ^ΚΝΥΙϋΚΟΙΧΡΙ VNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTWLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQI VRQQSYSIMSIIKEEVLAYWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQ AETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKN ιιοιικτρεΝοεϋγνβΝκανοτνβναΝτχιΥΥνΝΚΟΕακεΐίΥνκσΕΡίΐΝΡΥϋΡΐινρρεοΕΡΟΑβίΒονΝΕκίΝς^ ΙΑΡΊΙΙΚβϋΕΙιϋΙΝνΝΑαΚβΤΤΝΟσεΑΟεαΗΗΗΗΗΗ (SEQ ID NO:49) (符號"·" 表示在該位置之胺基酸係經刪除）

RSV F furmt截短 HIS

MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEPYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDA KVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNRARKELPRFMNYTLNNAKKTNVTLSKKRKKKFLGFLLGVGSAI ASGVAVSKVLHIiEGEVNKIKSAUiSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIE ΡΜΚΝΝΙ^ΙιΕΙΤΚΕΡβνΝΑΟνΤΤΡνβΤΥΜΙ^ΤΝβΕυ^ΙΝΟΜΡΙΤΝΟΟΚΚυ^ΝΝνΟίνΚί^ϊ^ΙΜβΙΙΚΕΕν LAYWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTM NSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCyGKTKCTASNKNRGIIKTPSNGCDYVSN KGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLyVKGEPIINPYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVNA GKSTTNGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO: 50)

RS V F furdel 截短 HIS

MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDA KVKLIKQELDKyKNAVTELQLLMQSTPATNNRARQELPRFMNYTIiNNAKKTNVTLSKK--- RFLGFLLGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNK ζ^βΙβΝΙΕΤνίΕΓΟΟΚΝΝΗΙΛΕΙΤΙΙΕΡβνΝΑανΤΤΡνβΤΥΜυΠ^ΕΙ^ΙΙΝΠΜΡΙΤΝΟΟΚΚυ^ΝΝνΟίνΗΟ ζ^γβίΜειιΚΕΕνίΑΥννοι^γσνιοτρενίκι^ΗΤΒΡί^ττΝΤΚΕσεΝία^Έτηι^νίγαοΝΑαβνΒΓΡΕΌΑΕΤ CKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGI IKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINPYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAF IRKSDELLHNVNAGKSTTNGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO: 51)(符號” 表示在該位置之胺基酸係經刪除）

RSV F 因子Xa截短HIS

MELLILKANAITTILTAVTFCPASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDA KVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNIEGRELPRFMNYTLNNAKKTNVTLSKKXEGRFLGFLLGVGSAI ΑββνΑνβΚνωΐιΕαΕνΝΚΙΚβΑΙιΙ^ΤΝΚΑννβΙ^ΝσνενυΓεκνί^ΚΝΥΙΟΚΟΙΧΡίνΝΚΟΒΟβΙδΝΙΕΤνίΕ FQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEV LAyWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPXiCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVPCDTM NSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGXIKTFSNGCDYVSN KGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVNA GKSTTNGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO:52)

RSV F短連接子摺疊子HIS ΜΕΙ^ΐυΚΑΝΑΙΤΤΙΙΪΓΑνΤΓαΕΆβΟΟΝΙΤΕΕΡΥζ^Ί^ΑνΒΚσΥΙ^ΑΙίΙΠΌνίΥΤβνίΤΙΕΙ^ΝΙΚΕΝΚΟΝΟΤΟΑ ΚνίαΐΚΟΕΙιΟΚΥΚΝΑνΤΕΙ^Ι^ΜΟβΤΡΑΤΝΝΗΑΗΗΕΙ^ΡΜΝΥΤΙιΝΝΑΚΚΤΝνΤΙ^ΚΚΚΚΗΙ^αΡΙ^νσεΑΙ ASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIE ΡΟΟΚΝΝΚΙιΙιΕΙΤΙΙΕΡβνΝΑΟνΤΤΡνβΤΥΜΙ/ΓΝβΕΙ^ΙιΙΝΟΜΡΙΤΝϋΟΚΚυ^ΝΝνΟΙ VRQQSYSIMSIIKEEV LAYWQLPLyGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTM NSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTPSNGCDYVSN KGVDTVSVGNTLYyVNKQEGKSLYVKGEPIXNFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSIiAFIRKSDELLHNVNA GKSTTNGSGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFLGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO :53) -160- 201116294

RSV F長連接子摺疊子HIS ΜΕΙΛΙΙ^ΚΑΝΑΙΤΤΙΙ/ΓΑνΤΡΟΡΜΟΟΝΙΤΕΕΡΥζ^Ί^ΑνεκσΥΙ^ΑΙιΐηΌνίΥΤβνίΤΙΕΙ^ΝΙΚΕΝΚαΝΟΤϋΑ KVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNRARRELPRFMNYTLNNAKKTNVTLSKKRKRRFLGFLLGVGSAI ASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIE FQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYS IMS 11KEEV LAYWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTM NSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSN KGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVNA GKSTTNNKNDDKGSGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFLGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO:54) RS V_F」包外_前_his

MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDA KVKLIKQEIiDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNRARRELPRFMNYTLNNAKKTNVTLSKKRKRRFLGFLLGVGSAI ASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIE FQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEV LAYWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTM NSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSN ΚσνϋΤνβνΟΝΊΧΥΥνΝΚζϊΕαΚ^ΙΛΓνΚΏΕΡΙΙΝΡΥΒΡΙΑ^ΡβΟΕΡΌΑΒίεονΝΕΚΙΝΟΒΙΑΡΙΗΚβΟΕΙ^ΗΝνΝΟ KIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGESGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO:55)

胞外前HA HIS ΜΕΙ^ΙΙϋΚΑΝΑΙΤΤΙΙιΤΑνΤΡΟΡΆεΟΟΝΙΤΕΕΡΥζ^Ί^ΑνεκσΥΙ^ΑΙΛΤαίίΥΤβνίΤΙΕΙ^ΝΙΚΕΝΚΟΝσΤϋΑ CTKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNRARRELPRFMNYTLNNAKKTNVTLSKKRKRRFLGFLLGVGSAI ASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNyiDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIE FQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEV ηΑΥννΟΕΡΙ^νίΟΤΡΟίίΚΙιΗΤΗΡΙ^ΤΤΝΤΚΕσεΝΙΟΤΙ/ΓϋΤΟΚΟϊίΥΟΕϊΝΑσβνβΡΤΡΟΑΕΤαζνζ^ΝΗνΡαΟΤΜ NSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSN KGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVNE KFHQIEKEFSEVEGRIQDLEKSGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO:56>

RSV F 胞外 Furx GCN HIS ΜΕΙΛΙΙ^ΚΑΝΑΙΤΤΙΙΤΑνΤΡΐΡΑεσΟΝΙΤΕΕΡΥΟβΤ^ΑνβΚΟΥΙ^ΑΙ^ΠΌνϊΥΤΒνίΤΙΕΙ^ΝΙΚΕΝΚΟΝαΤΟΑ

K.VKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNQAQNELPQFMNYTLNNANNTNVTLSQNQNQNFLGFLLGVGSAI

ASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIE

FQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEV

LAyWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTM

NSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAXVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSN

KGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVN DKIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGESGGSAGSGHHHHHH {SEQ ID NO:57)

RSV F胞外 delp2 1 GCN HIS -161 - 201116294 MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFyQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDA ICVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNQAQN-...................- QNQNQNFLGFLLGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLL ΡίνΝΚζ^βΙβΝΙΕΤνίΕΡζίΟΚΝΝΚΙΛΕΙΤΙ^ΕΡ^νΝΑανΤΤΡνεΤΥΜΙ/ΓΝβΕΙ^ΙιΙΝϋΜΡΙΤΝΟςΚΚΙ^ΝΝν QIVRQQSYSIMSIIKEEVLAYWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFF PQAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNliCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASN KNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKIN QSLAFIRKSDELLHNVN DKIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGESGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO:58) (符號，随之胺基酸係經刪除） :表示在該位圃

RSV F 胞外 delp23 Furx GCN HIS MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDA KVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNQAQN.......................

QNQNFLGFLLGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVIiDLKNYIDKQLLPI νΝΚ(^3Ι5ΝΙΕΤνΐΕΡ〇ζ3ΚΝΝΚΙιΙ>ΕΙΤΗΕΡ3νΝΑανΤΤΡν3ΤΥΜΙι™5ΕΙΛ3ΙιΙΝΟΜΡΙΤΝΕΚ3ΚΚΙιΜ5ΝΝν〇Ι VRQQSYS IMS 11 ΚΕΕνίΑΥννζ^ΡΕΥσνίΌΤΡαίΚυΓΓβΡΙΧΤΓΤΝΤΚΕΟβΝΙί^ΤΚΤΟΙ^ΚΥΟΟΝΑαβνβΡΤΕΌ AETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKN RGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGICSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQS LAFIRKSDELLHNVN DKIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGESGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO:59) (符號"·n表示在該位置之胺基酸係經刪除）

RSV F胞外 delp23 Furdel GCN HIS MELLILKANAITTILTAVTPCPASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITXELSNIKENKCNGTDA KVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNRARQ....................... VNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRliLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQI νκς^ΥΞΙΜβΙΙΚΕΕνίιΑΥννΟΙίΡΙίΥανίϋΤΡανίίαΗΤβΡΙΧΤΤΝΤΚΕσΒΝΚ^ΤϋΤΟΙ^ΙΐΥαΟΝΑαβνΒΡΡΡΟ AETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKN RGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLyVKGEPIINFyDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQS LAPIRKSDELLHNVN DKIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGESGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO: 60) (符號表示在該位置之胺基酸係經刪除） RS V F全長 Furx

ΜΕΙ^ΙΙίΚΑΝΑΙΤΤΙΙίΤΑνΤΡεΡΑ50ζ3ΝΙΤΕΕΡΥ〇3Τα3Αν3ΚαΥ1^ΑΙΛΤσνΐΥΤ3νΐΤΙΕΙί5ΝΙΚΕΝΚΟΝ6ΤΟΑ ΚνϊαΐΚΟΕΙ^ΚΥΚΝΑνΤΕΙιΟΙ^Μζ^ΤΡΑΤΝΝΟΑΟΝΕΙ^ΡΜΝΥΤυΛΝΑΝΝΤΝνΤΧ^ΟΝΟΝΟΝΡΙΛ^ΧιανΟβΑΙ

ASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIE

FQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEV

LAYWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTM ΝεΕΊΧΡβΕνΝΙ^ΟΝνΡΙΕΝΡΚΥΟίΓΚΙΜΤΒϊαΌνββενίΙ^Ι^ΑΐνβΟΥαΚΤΚΟΤΑΒΝΚΝΙ^ΙΙίαΤΒϋΚΪΟΟΥνεΝ

KGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVN AGKSTTNIMITTIIIVIIVILLSLIAVGLLLYCKARSTPVTLSKDQLSGINNIAFSN (SEQ ID NO :61) RSV F全長 delp21 -162- 201116294 MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDA KVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNQAQN---------------------

PIVNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREPSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNV <3ΐνΚ(ί〇3Υ8ΙΜ3ΙΙΚΕΕνΐΑΥννζ^ΡΙ^νΐΟΤΡαίΐαΗΤ3Ε^(：ΤΤΝΤΚΕα3ΝΐαϋΤΗΤϋΙΚ3νίΥ〇ηΝΑ05ν3Ρ*Γ

PQAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASN

KNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKIN

QSLAFIRKSDELLHNVN AGKSTTNIMITTIIIVIIVILLSLIAVGLLLYCKARSTPVTLSKDQLSGINNIAFSN (SEQ ID NO： 62) (符號表示在該位置之胺基酸係經刪除）

RSV F 全長 p23 Furx GCN HIS ΜΕΧ^ΙΙιΚΑΝΑΙΤΤίΙ/ΓΑνΤΡαΡΑεσΟΝΙΤΕΕΡΥζ^Ί^ΑνεΚΟΥΙ^ΑΙΛΤσνίΥΤενίΤΙΕΙ^ΝΙΚΕΝΚΟΝΟΤηΑ KVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNQAQN.......................

QNQNFLGFLLGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPI νΝΚζ^είβΝΙΕΤνίΕΡΟΟΚΝΝΚΙΛΕΙΤΚΕΡβνΝΑΟνΤΤΡνβΤΥΜΙ/η^ΕΙ^Ι^ΙΝΟΜΡΙΤΝϋΟΚΚυ^ΝΝνΟΙ νΗΟζ^ΥείΜΒΙΙΚΕΕνίΑΥννς^ΡΙ^ΥΟνίΟΤΡαίΚΙίΗΤβΡΒσΓΤΝΤΚΕΟβΝίανΠΠΌΙ^ϊίΥΟΟΝΑΟενπΡΡΟ AETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKyDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKN RGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQS ΙΑΡΙϋΚεϋΕΕΙιΗΝνΝ AGKSTTNIMITTIIIVIIVlLLSLIAVGLLIiYCKARSTPVTLSKDQLSGINNIAFSN (SEQ ID NO:63)(符號表示在該位置之胺基酸係經刪除）

RSV F 全長 p23 Furdel GCN HIS MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFyQSTCSAVSKGyLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDA ]iCVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNRARQ-----------------------

QQQRFLGFLLGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPI

^/NKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQI

VRQQSYSIMSIIKEEVLAYWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQ

AETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKN

RGIIKTFSNGCDyVSNKGVDTVSVGNTLyYVNKQEGKSLYVKGEPIINFyDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQS

IAFIRKSDELLHNVN AGKSTTNIMITTIIIVIIVILLSLIAVGLLLYCKARSTPVTLSKDQLSGINNIAFSN (SEQ ID NO:64> (符號表示在該位置之胺基酸係經刪除）

RSV F N-端三呋喃基二氫咪唑Furx截短HIS MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDA ΚνίαΐΚΟΕΙ^ΚΥΚΝΑνΤΕΙιΟϋΜζ^ΤΡΑΤΝΝΟΑΟΝΕΙ^ΟΡΉΝΥΤυΝΝΑΟΟΤΝνΤΙιβΚΚΚΚΚΙ^ΙιαΡΙ^ναβΑΙ ASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIE FQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEV ΙΑΥνν〇Ι^ΙΛΌνΐΟΤΡΟίΚΧΗΤ3ΡΙ^ΤΤΝΤΚΕα3ΝΙΟΪΓΗΤΟΙ^ΜΥΟΟΝΑσ5ν5ΓΡΡ〇ΑΕΤί：Κν〇3ΝΚνΡαη·Μ NSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSN KGVDTVSVGNTLyyVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASlSQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVNA GKSTTNGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO:65)

RSV F C-端三呋喃基二氫咪唑Furx截短HIS -163- 201116294 MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDA KVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNRARRELPQFMNYTLNNAQQTNVTLSQNQNQNFLGFLLGVGSAI ASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIE FQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTyMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEV LAYWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTM NSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSN KGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSIAFIRKSDELLHNVNA GKSTTNGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO:66)

RSV F融合刪除1截短HIS

MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDA KVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNRARRELPRFMNYTLNNAKKTNVTLSKKRKRRSAIASGVAVSKV LHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLL EITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEVLAYVVQLPL γανιοτρανίκΐιΗτερι^ττΝΤΚΕσεΝίοχτιΠΌΐ^νη^ΝΑοβνβρρροΑΕτςτκνζ^ΝκνΓαϋΤΜΝβι^τι^Εν NLCNVDIFNPKYDCKXMTSKTDVSSSVITSLGAXVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVG NTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVNAGKSTTNGGS AGSGHHHHHH (SEQ ID NO:67)

RSV F融合刪除2截短HIS MELLILKT^NAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDA ΚνΚΙ^ΚΟΕΙ^ΚΥΚΝΑνΤΕΙ^ΙίΜζ^ΤΡΑΤΝΝΗΑΗΙΙΕΙιΡΙΙΡΜΝΥΤΟίΝΑΚΚΤΝνΤΙ^ΚΚΗΚΗΙ^ναβΑΙΑεΟνΑν βΚνί^ΕΟΕνΝΚΙΚβΑΙ^ΤΝΚΑννβΙ^ΝΟνβνΚ^Κνυ^ΚΝΥΙΟΚΟΙιΙίΡίνΝΚΟεεβπΝΙΕΤνίΕΡΟΟΚΝΝ ΗΙΛΕΙΤΗΕΓβνΝΑΟνΤΤΡνΒΤΥΜΙιΤΝβΕΙ^ΙίΙΝϋΜΡΙΤΝΟΟΚΚυ^ΝΝνΟίνϊΙΟΟΒΥβΙΜείΙΚΕΕνίΑΥννΟ ΐιΡί^σνίΏΤΡονίκΐίΗτβΡίισΓΓΝΤκΕσεΝία^πιτοκοϊίγοοΝΑοενβρρίΌΑΕταα^ΝκνραοτΜΝβι/ηϋΡ SEVNLCNVDIFNPKYDCKXMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTV 3νσΝΤΙίΥΥνΝΚ〇ΕαΚ5ΙίΥνκσΕΡΙΙΝΕΎϋ£>ΙινΡΡ30ΕΡϋΑ3Ι3ί3νΝΕΚΙΝ〇3ΙΑΡΙΗΚ50ΕΙιΙίΗΝνΝΜΚ5ΤΤΝ GGSAGSGHHHHHH (SEQ ID ΝΟ:68)

RS V F Furx 截短 HIS

MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDA JCVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNQAQNELPQFMNYTLNNAQQTNVTLSQNQNQNFLGFLLGVGSAI ASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIE FQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEV liAYWQLPLyGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSPPPQAETCKVQSNRVFCDTM NSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSN KGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVNA GKSTTNGGSAGSGHHHHHH {SEQ ID NO:69) RS V F Furx 截短 MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNXKENKCNGTDA KVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNQAQNELPQFMNYTLNNAQQTNVTLSQNQNQNFLGFLLGVGSAI ASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIE FQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEV ΐΑΥννζ^ρι^νΐϋΤΕ^νίκΐιΗτβΡί^ττΝτκΕοεΝίαϊΠϊτοι^νίΥαηΝΑσΒνερρροΑΕταο^ϊ^νρεοτΜ NSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSN ΚΟνΡΤνβναΝΊΈΥΥνΝΚΟΕσΚΞΙίΥνΚΟΕΡΙΙΝΓΥΟΡΙΛ^ΡεΟΕΡΟΜΙΒςϊνΝΕΚΙΝί^ΙΑΡΙΙΙΙ^ΕΙ^ΗΝνΝΑ GKSTTN (SEQ ID NO:70) RSV F delP23 furdel 截短無 HIS(用於 CHO細胞） -164- 201116294 MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENKCNGTDA KVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNRARQ----------------------- QQQRFLGFLLGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLLPI VNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKKLMSNNVQI VRQQSYSIMSIIKEEVLAYWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQ AETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKN RGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLyYVNKQEGKSLYVKGEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQS LAFXRKSDELLHNVNAGKSTTN {SEQ ID NO :71)(符號表示在該位置之胺基酸係經刪除）

RS V F (Wt)截短 HIS

MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENK ΟΝΟΤΟΑΚνίαΐΚΟΕΙ^ΚΥΚΝΑνΤΕΙ^Ι^Μζ^ΤΡΑΤΝΝΚΑΗΚΕΙιΡϋΡΜΝΥΊΧΝΝΑΚΚΤΝνΤΙ^ΚΚΗΚΚίΙ

FLGFLLGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLL

PIVNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKK

LMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEVLAYWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRG

WYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVIT

SLGAIVSCyGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPXIN

FYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVNAGKSTTNGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO: 84)

RS V F舊 furx 截短 HIS MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENK ΟΝΘΤϋΑΚνΚ^ΙΚΟΕΙ^ΚΥΚΝΑνΤΕΙ^Ι^Μζ^ΤΡΑΤΝΝΟΑΟΝΕΙ^Ι^ΜΝΥΤΙ^ΝΝΑΝΝΤΝνί^ΟΝΟΝΟΝ li'LGFLLGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLL PIVNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMIiTNSELLSLINDMPITNDQKK ΙιΜβΝΝνΟίνΗΟζ^ΥβΙΜβΙΙΚΕΕνίΑΥννΟυΡΙ^ΥΟνίΟΤΡΟίίΚυΠ^ΡΙΧΤΤΝΤΚΕσΒΝΙΏ/ΓΙΙΤΟΪ^ ViYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVIT SLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPI IN FYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVNAGKSTTNGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO:88)

RS V F新 Furx截短 HIS ΜΕΙ^ΙΒΚΑΝΑΙΤΤΙΕΤΑνΤΡΌΡΆεΟΟΝΙΤΕΕΡΥζ^Ί^ΑνβΚσΥΙ^ΑΙΛΤΟνίΥΤενίΤΙΕΙ^ΝΙΚΕΝΚ

CNGTDAKVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNQAQNELPQFMNYTLNNAQQTNVTLSQNQNQN ΡΙΛΡΙ^νΟβΑΙΑεσνΑνβΚνί^ΕΟΕνΝΚΙΚΒΑυ^ΤΝΚΑννβΙ^ΝανενίϊΓβΚνί^ΒΚΝΥΙΟΚΟΙΛ

PIVNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKK ΙιΡ^ΝΝνΟίνΚζΚ^ΥβΙΜβΙΙΚΕΕνίχΑΥννΟΙ^ΥσνίΟΤΡΟνηαΗΤεΡΙ^ΤΤΝΤΚΕαβΝίεΐ/ΓΚΤΟΙ^

WYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVIT

SLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYyVNKQEGKSLYVKGEPIIN

ΓΥΟΡΙΛ^Ε^ΕΓΟΑβΙβΟνΝΕΚΙΝζ^ΙΑΡΙϋΚβΟΕΙ^ΗΝνΝΜΚδΤΤΝσαΕΑΟβαΗΗΗΗΗΗ {SEQ ID NO：89)

RSV F N-端三呋喃基二氫咪唑截短HIS -165- 201116294 MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENK CNGTDAKVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNRARRELPQFMNYTLNNAQQTNVTLSQNQNQN FLGFLLGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVIiDLKNyiDKQI.Ii PIVNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKK ΙιΜεΝΝνΟίνΚζΧ^ΥβΙΜβΙΙΚΕΕνίΑΥννΟΙιΡΙιΥΟνίΟΤΡΟνίΚΙιΗΤεΡΙ^ΤΤΝΤΚΕαεΝίαιΤΚΤΟΙ^ WYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVIT SLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPI IN FYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVNAGKSTTNGGSAGSGHHHHHH (SE〇 ID NO:85)

RSV F delP21 furdel 截短 HIS

MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENK CNGTDAKVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNRARQ....................-

QNQQQRFLGFLliGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNY

IDKQLLPIVNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPI

TNDQKKLMSNNVQIVRQQSYSIMSIIKEEVLAYWQLPIiTCVIDTPCWKLHTSPIiCTTNTKEGSNICL

TRTDRGWYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDV

SSSVITSLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGXXKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVK

GEPIINFYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVMAGKSTTNGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO:86)

RSV F C-端三呋喃基二氫咪唑截短HIS

MELLILKANAITTILTAVTFCFASGQNITEEFYQSTCSAVSKGYLSALRTGWYTSVITIELSNIKENK

CNGTDAKVKLIKQELDKYKNAVTELQLLMQSTPATNNQAQNELPQFMNYTLNNAQQTNVTLSKKRKRR

FLGFLLGVGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKSALLSTNKAWSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKQLL

PIVNKQSCSISNIETVIEFQQKNNRLLEITREFSVNAGVTTPVSTYMLTNSELLSLINDMPITNDQKK

LMSNNVQlVRQQSySIMSIIKEEVLAYWQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTNTKEGSNICLTRTDRG

WYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPSEVNLCNVDIFNPKYDCKIMTSKTDVSSSVIT

SLGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKQEGKSLYVKGEPIIN

FYDPLVFPSDEFDASISQVNEKINQSLAFIRKSDELLHNVNAGKSTTNGGSAGSGHHHHHH (SEQ ID NO :87)

實施例2 - RSV F建構物之表現及純化該等RSV F胞外及截短建構物（缺乏跨膜結構域及細胞質尾區域，具有野生型三呋喃基二氫咪唑切割位點或在三呋喃基二氫咪唑切割位點獲得基因剔除突變且具有或不具預融合穩定突變）係經選殖至pFastBac桿狀病毒表現載體（英維特基（Invitrogen)公司）。一些該等建構物包含C-端可彎折之連接子及其後用於螯合純化之Hi s6-標記序列。所產製之高力價桿狀病毒保存液於Sf9昆蟲細胞中繼代。蛋白質之表現係藉由該所需之桿狀病毒感染Sf9、Τη 5或High -166- 201116294

Five昆蟲細胞，在感染後二或三天收集培養基上清液，並利用抗-HSV F或抗-6HIS抗體進行西方墨點監測。

大規模表現之培養基藉由二種常見策略中之一種加以濃縮/純化’以清除存在於昆蟲細胞培養基中之鐵蛋白腐蝕該螯合樹脂之有害作用。第一種方法使用GE醫療集團之 Hollotube纖維濃縮管柱將大約1 〇至20公升之昆蟲表現培養基濃縮至大約3 00毫升。在此經濃縮之混合物中添加硫酸銅至終濃度5 00微莫耳，該形成之溶液被裝載至5毫升 HiTrap螯合管柱。該經結合之HIS-標記蛋白接著利用25 毫莫耳Tris pH 7.5、300毫莫耳NaCl及咪唑梯度自該管柱洗脫。在第二種純化策略中，添加C u C 12至培養基上清液至終濃度500微莫耳。在每丨公升之培養基中添加4毫升之螯合樹脂（螯合樹脂，BioRad公司），在攝氏4度搖動該漿液至少3 0分鐘’以重力管柱分離該樹脂及培養基。該樹脂以 1〇倍管柱體積之平衡緩衝液沖洗（25毫莫耳Tris pH 7.5， 3 〇〇毫莫耳NaCl)，並以10倍管柱體積之洗脫緩衝液（25〇毫莫耳咪唑平衡緩衝液）洗脫該F蛋白。該洗脫液以25毫莫耳 Tris緩衝液pH 7.5進行透析，將所得到之溶液裝載至經 NiS04充電之5毫升Hitrap螯合管柱，並以25毫莫耳Tris pH 7·5，300毫莫耳NaCl及咪唑梯度進行洗脫。在二例中來自咪唑梯度之洗脫液使用抗-6HIS目$ & 考馬斯膠體評估。收集含有純建構物之組分，以不同之，緩衝液/鹽水溶液進行透析，接著利用密里博（MiUip(^e) -167- 201116294 C e n t r i p r e p濃縮器及/或V i V a s p i η離心單位濃縮以供後續分析。我們亦已發展出能進一步自玫瑰花簇純化單分散RSV 三體之大小排除純化方法（見下）。 SEC分析RS V F蛋白：以彼等之預融合構型穩定存在之其他副黏液病毒融合蛋白的記載特徵在於，即使經切割以使該融合肽暴露，彼等不會形成在融合後構型所觀察到之玫瑰花簇。簡單的大小排除層析分析允許辨識蛋白及決定蛋白是否形成玫瑰花簇。二種方法HPLC-SEC及FPLC-SEC被發展，亦作爲有效之純化步驟。 HPLC-SEC係利用Biorad SEC管柱（18毫米）及25毫莫耳 Tris pH 7.5，300毫莫耳NaCl移動相進行。使用Biorad HPLC-SEC標準物校正該系統，我們發現該RSV玫瑰花簇（代表經切割之融合後構型）洗脫於該分析之管柱空體積，而RSV單分散三體（後續EM分析之假定三體）以大約1〇〇千道爾頓之表觀分子量洗脫。 FPLC-SEC係於GE醫療集團之FPLC上進行，使用16/60 Superdex 200管柱及 25 毫莫耳 Tris pH 7.5，300毫莫耳 NaCl 移動相。使用GE醫療集團高分子量標準物校正該系統，我們發現該RSV玫瑰花簇洗脫於該分析之管柱空體積，而 RSV單分散三體以大約100千道爾頓之表觀分子量洗脫。 RSV F蛋白之電子顯微分析（EM) -168- 201116294 每毫升大約50毫克RSV F建構物之蛋白溶液被吸附至經光輝放電之塗碳格柵，以2%磷鎢酸鈉（pH 7.0)或0.75% 甲酸鈾（未經定量之低pH)負染色。該格柵係於Technai Spirit或JOEL 1 23 0穿透式電子顯微鏡上觀察，根據所需解析度，操作電壓介於80至120千伏，放大倍數介於20,000 至 150,000。

表2 建構物由EM測定之構型 RSVF胞外 HIS 主要爲玫瑰花簇 RSV F Furdel胞外（未經切割）單分散三體 RSV F Furdel胞外（純化前切割-含蛋白質之培養基在純化前儲存1星期）主要爲玫瑰花簇 RSV F Furdel胞外（純化後切割-經純化之蛋白質在EM前儲存2星期）主要爲單分散三體，少量玫瑰花簇 RSVFDelpM截短（未經切割）主要爲三體 RSV F Delp23 Furdel截短（未經切割）三體及玫瑰花簇 RSV F Delp23 Furdel截短（純化後以胰蛋白酶切割）主要爲玫瑰花簇及一些三體 RSV F Delp23 Furdel截短（純化後在玫瑰花簇中心有明顯奈脂片之不對稱奈脂片存在時以胰蛋白酶切割）玫瑰花簇

實施例3 -偵測預融合及融合後之RSV F 多種方法可被用於測定RSV F蛋白之構型，以評估 RSV F多肽之修飾或添加之分子是否不利於該融合後構型。實例包括脂質體結合、構型專一性單株抗體（包括用於 FACS, ELISA等）、電子顯微鏡、不同構型間之蛋白酶活性差異、膠體過濾層析、分析性超離心、動態光散射、氘交 •169- 201116294 換NMR實驗、質譜分析、圓二色光譜、等溫滴定微量熱法、色胺酸光譜學及X-光結晶學。脂質體結合脂質體結合可被用於檢測該RSV F蛋白之構型。預融合構型之RSV F蛋白的可溶性形式將不與脂質體結合，然而融合後構型將與脂質體結合。脂質體可如下製備：以8:2:5之莫耳比混合丨_棕櫚醯基-2-油醯基- sn -甘油-3-磷醯基膽驗、1-棕櫚醯基-2 -油醯基-sn-甘油-3-磷醯基乙醇胺及氯仿中之膽固醇（得自阿凡提公司（Avanti Polar Lipids))»在氬氣中蒸發氯仿。脂質膜將在真空中隔夜乾燥形成並以40毫莫耳總脂質重懸於 PBS中。經過五次冷凍-解凍循環之後，將該脂質震盪並通過微擠出機之（購自阿凡提極性脂質公司（Avanti Polar Lipids))兩個100-微米過濾器21次擠出。一旦脂質體經製備後，可進行脂質體結合試驗。在每個欲經測定之樣本中，2微克待測之RSV F多肽係於100毫莫耳磷酸鹽緩衝液中（pH 7.1)於25 t經25毫單位之胰蛋白酶（購自沃辛頓（Worthington)生化公司）切割30分鐘。切割後，在每個樣本中加入40皮克大豆胰蛋白酶抑制劑（購自沃辛頓生化公司）以結束該反應。該等樣本於6(TC預處理 3〇分鐘，以誘發天然經分離之RSV F蛋白自預融合構型轉移至融合後形式。加入脂質體（每樣本40微升）及PBS(至終體積80微升），於60°C培養該樣本30分鐘。添加蔗糖至50% -170- 201116294 之終濃度（終體積500微升）。該等樣本被覆蓋上各5 00微升之40%蔗糖、25%蔗糖及？83，於25艽中以丁1^55轉子每分鐘49,000轉離心3小時。自該梯度之頂端收集組分（500微升 )。蛋白質被溶解於0.5%氚核X-1 00，利用12.5%體積/體積三氯乙酸沉澱。多肽利用SDS/PAGE分離，並轉移至PVDF 膜。墨點以抗-RSV F單株抗體偵測。

電子顯微學利用電子顯微鏡檢測RSV F多肽之構型分布。呈預融合形式之RSV F多肽具有「球及突柄」之形狀及約12奈米之蔑度。相反的，呈融合後形式之RSV F多肽具有「高爾夫球釘」之形狀及約1 6奈米之長度。此外，在該「高丨爾夫球釘」窄端之融合肽聚集以形成玫瑰花簇結構。因此，由於這些輕易可辨別之形狀，可利用電子顯微鏡檢測RSV F多肽樣本中之構型分布。實施例4 RSV F胞外域三體及玫瑰花簇該等RSV F蛋白胞外域建構物（編碼缺乏跨膜結構域及絍丨胞質尾區域及具有野生型三呋喃基二氫咪唑切割位點或在:Ξ呋喃基二氫咪唑切割位點獲得基因剔除突變及/或融合肽突變之多肽）係經選殖至pFastBac桿狀病毒表現載體（央維特基（Invitrogen)公司）。一些該等建構物包含C -端可 _折之連接子及其後用於螯合純化之HIS6-標記序列。高 Λ »桿狀病毒保存液之產製係藉由在Sf9昆蟲細胞中繼代 -171 - 201116294 獲得。蛋白質之表現係藉由該所需之桿狀病毒感染Sf9、 T115或High Five昆蟲細胞，在感染後二或三天收集該條件培養基上清液。蛋白質之產製藉由使用抗-RSV F或抗-HIS6抗體之西方墨點監測。大規模表現之培養基利用二種常見策略中之一種加以濃縮/純化，以清除存在於昆蟲細胞培養基中之鐵蛋白腐蝕該螯合樹脂之有害作用。第一種方法使用GE醫療集團之 Hollotube纖維濃縮管柱將大約1〇至20公升之昆蟲表現培養基濃縮至大約3 00毫升。在此經濃縮之混合物中添加硫酸銅至終濃度500微莫耳，該形成之溶液被裝載至5毫升 HiTrap螯合管柱。該經結合之HIS-標記蛋白接著利用25 毫莫耳Tris pH 7·5、3 00毫莫耳NaCl及咪唑梯度自該管柱洗脫。在第二種純化策略中，添加CuCl2至培養基上清液至終濃度5〇〇微莫耳。在每1公升之培養基中添加大約4至10 毫升之螯合樹脂（螯合樹脂，BioRad公司），在攝氏4度搖動該漿液至少30分鐘’利用重力管柱分離該樹脂及培養基。該樹脂以大約10倍管柱體積之平衡緩衝液沖洗（2 5毫莫耳Tris pH 7.5，300毫莫耳NaCl)，並以大約1〇倍管柱體積之洗脫緩衝液（250毫莫耳咪唑平衡緩衝液）洗脫該ρ蛋白胞外域。該洗脫液以25毫莫耳Tris緩衝液pH 7.5進行透析，將所得到之溶液裝載至經NiS〇4充電之5毫升Hitrap螯合管柱。經結合之蛋白利用25毫莫耳Tris pH 7.5、300毫莫耳 NaCl及咪唑梯度洗脫。 -172- 201116294 在二例中來自咪唑梯度之洗脫液使用抗-H IS6西方墨點及/或考馬斯染色SDS-PAGE膠體評估。收集含有純建構物之組分，以不同之緩衝液/鹽水溶液進行透析，接著利用密里博（Millipore)Centriprep濃縮器及/或Vivaspin離心單位濃縮以供後續分析。在一些情況中，單體、三體或玫瑰花簇利用大小排除層析進一步純化。

RSV F胞外域之SEC分析及純化利用大小排除層析純化及分析RSV F蛋白胞外域單體、.三體及玫瑰花簇。此方法亦允許將未經切割之RSV F蛋白胞外域自源於宿主細胞或培養基之脂質及脂蛋白污染物純化。二種方法HPLC-SEC及FPLC-SEC被發展，亦可作爲有效之純化步驟。 HPLC-SEC係利用Biorad SEC管柱（18毫米）及25毫莫耳 Tris pH 7.5，3 00毫莫耳NaCl移動相進行。使用Biorad HPLC-SEC標準物校正該系統，我們發現該RSV玫瑰花簇（代表經切割之融合後構型）洗脫於該分析之管柱空體積，而RSV F單體（後續EM分析之假定三體）以大約75至85千道爾頓之表觀分子量洗脫。 FPLC-SEC係於GE醫療集團之FPLC上進行，使用16/60 Superdex 200管柱及 25毫莫耳 Tris pH 7.5，300毫莫耳 NaCl 作爲移動相。使用GE醫療集團高分子量標準物校正該系統，我們發現該RSV玫瑰花簇洗脫於該分析之管柱空體積，而RSV單分散三體以大約140至160千道爾頓之表觀分子量 -173- 201116294 洗脫且RSV F單體以大約75至85千道爾頓之表觀分子量洗脫。以純化而言，使用FPLC-SEC方法及收集1毫升之組分胰蛋白酶切割 Furdel或Delp23 Furdel建構物以形成融合後玫瑰花簇

—般來說，胰蛋白酶消化Delp23 Furdel單體係以 1 :1000重量比之胰蛋白酶：RSV F進行，或1毫克之RSV F 抗原以10至15 BAEE單位之胰蛋白酶消化。在典型反應中，來自牛血漿之胰蛋白酶（西格瑪奧德里奇（Sigma Aldrich) 公司，T8 802: 1 0,000- 1 5,000 BAEE單位/毫克胰蛋白酶）於

25毫莫耳Tris pH 7.5，3 00毫莫耳NaCl中被稀釋至1毫克/ 毫升濃度。每毫升1毫克之RSV F蛋白胞外域多肽溶液（稀釋於25毫莫耳Tris pH 7.5，3 00毫莫耳NaCl)係以1微升之胰蛋白酶溶液（胰蛋白酶：RSV F之終質量比爲0.001:1或每毫克之RSV F使用大約10至15 BAEE單位之胰蛋白酶）於 3 7°C中處理1小時。通常，該切割反應之進行係以SDS-P AGE膠體監測。該切割反應利用胰蛋白酶抑制劑停止。該經切割之RSV F蛋白藉由大小排除層析進一步純化。有時添加1:1 00體積之固定化胰蛋白酶抑制劑（西格瑪 (Sigma)公司）或1微升之大豆胰蛋白酶抑制劑至該切割溶液，於室溫中輕晃培養該混合物大約1 5至3 0分鐘以停止該胰蛋白酶反應。利用微離心管柱將該抑制劑樹脂自該蛋白溶 -174- 201116294 液分離。該形成之溶液利用s E C法加以純化。 RSV F蛋白之電子顯微分析（Em)

RSV F蛋白胞外域多肽（每毫升大約50毫克）被吸附至經光輝放電之塗碳格栅，以2%磷鎢酸鈉（pH 7.0)或0.75% 甲酸鈾（未經定量之低pH)負染色。該格栅係於Technai Spirit或】OEL 1 23 0穿透式電子顯微鏡上觀察，根據所需解析度’操作電壓介於80至12〇千伏，放大倍數介於20,0 00 至 1 5 0,0 0 0 ° 磷脂測定該測定係以和光純藥工業株式會社（Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)之憐脂C膽鹼氧化酶-DAOS檢測方法爲根據（目錄編號43 3 -3 620 1)。該檢測方法相較於供應商所提供之一般性方法係經修飾只爲了減少該檢測所使用之物質的量，並減少該反應中之樣本稀釋。爲了測定R S V F樣本中之脂質含量，用一瓶緩衝液溶解一瓶色劑以產生該顏色試劑（顏色試劑於4°C穩定1周）。用蒸餾水稀釋該300 毫克/100毫升（3毫克/毫升）之磷脂標準物至1.5，1.0，0.75 ，0.5及0.25毫克/毫升。以各標準物而言，在含有1〇微升之顏色試劑及2微升各種標準物之微離心管中添加蒸餾水 (0毫克/毫升標準物）（水空白）或樣本（樣本反應物）。簡短地離心反應物以確保適當混合及於3 7 °c培養該試管1 5分鐘。紀錄於59 5奈米處各標準點之吸光度’產生標準曲線。記 -175- 201116294 錄各樣本於595奈米處之吸光値，自該準備之校正曲線計算磷脂質濃度。對棉鼠之免疫原性呈單體（未經切割之delp21 furx)、三體之玫瑰花簇（經切割之delp23 furdel)及三體（融合肽刪除）形式之RSV F蛋白胞外域多肽的免疫原性係於二個試驗之棉鼠（剛毛棉鼠 (Sigmodon hispidus))中測試。在試驗1中（圖8A及8B)，每組10隻棉鼠在第〇及21天接受10微克單體或玫瑰花簇（各吸附於氫氧化鋁）之肌肉內免疫注射。血清抗-RSV F蛋白 IgG及RSV中和抗體力價係於第一次免疫接種後2周（2wpl) 及第二次免疫接種後2周（2wp2)測量，或第一次免疫接種後3周（3wpl)及第二次免疫接種後2周（2wp2)測量。抗-RSV F蛋白IgG (圖8A)係藉由ELISA測量，使用RSV F蛋白包覆板及馬辣根過氧化酶共軛之雞抗棉鼠IgG偵測抗體。資料以各別棉鼠之log1Q幾何平均力價（GMT) +標準差表示。RSV 中和力價（圖8 B )係以病毒斑減少中和試驗（p rn T)測量。簡言之，熱不活化血清之稀釋液係與RSV長（Long)預先培養，接著接種於12孔板中之HEp-2細胞。經2小時感染後，該接種物被移除，細胞被覆上洋菜糖。5天後以中性紅染色 I十算病毒斑。中和力價係定義爲相較於對照組（無血清）產生每孔病毒斑數至少減少6 0 %之血清稀釋倍數的倒數。資料以每組2群5隻棉鼠之l〇gl() GMT +標準誤顯示。在試驗2中（圖8C)，每組9隻棉鼠係接受所示劑量之單 -176- 201116294 體、三體或玫瑰花簇（各吸附至氫氧化鋁）經肌肉注射免疫接種。血清抗-R S V F蛋白I g G力價如上述之2 w p 1測量。結果

可溶性RSV F胞外域（具有未經突變之三呋喃基二氫咪唑切割位點）係經表現，但是無法利用大小排除層析自源於該宿主細胞或培養基之脂質與脂蛋白雜質純化。該等 RSV F胞外域多肽與脂質及脂蛋白污染物一起洗脫至SEC 管柱空體積。數種建構物係經製備以產製在三呋喃基二氫咪唑切割位點包含突變之RSV F胞外域多肽，包括Furdel建構物。見圖1。藉由表現Furdel建構物所產製之多肽係自細胞以大約65千道爾頓未經切割之蛋白分泌。該Furdel突變亦防止融合肽暴露，因此預防玫瑰花簇形成。結果是，可溶性 RSV F Furdel移動至Superdex 200製備管柱之包括體積，導致與脂質碎片（洗脫至空體積）及昆蟲蛋白雜質之分離。該等結果顯示三呋喃基二氫咪唑切割位點經突變之RSV F 胞外域多肽係以可藉由SEC純化之未經切割之多肽產製。此外，該未經切割之RSV F滯留時間分析與單體多肽但非三體多肽一致。不論該RSV F furdel多肽係爲單體、三體或單體與三體之混合物，彼等進一步利用分析性超離心檢測。分析性超離心試驗利用自SEC純化之單體波峰所純化之蛋白質進行。未經切割之RSV F的沉降速度資料顯示建議二種蛋白 -177- 201116294 存在於溶液中之步驟模式。分析該沉降速度實驗顯示’該未經切割之RSV F胞外域於溶液中具有大量之單體及少量之表觀三體。收集平衡流洗資料’並進行使資料契合理想單體模型或單體-三體平衡模型之嘗試。然而’該契合之殘差不佳，特別是向蛋白質濃度較高之細胞底部。這些觀察顯示，該未經切割之RSV F胞外域多肽主要是單體，有少部分在高濃度時會自我連接（可能如同三體）或聚集。進一步分析經選擇之RSV F蛋白胞外域多肽係利用大小排除（SEC)層析進行。圖6A至6D。包含單體、三體或三體之玫瑰花簇之主要波峰係以星號表示於圖6A至6D中，其於Superdex P200 1 6/60管柱（GE醫療集團）之滯留時間係以毫升數顯示。在經校正之管柱中，該47毫升、65毫升及 77毫升之大約滯留時間分別對應管柱空體積、F三體滯留及單體滯留《在圖6A中，該未經切割之Delp23 Furdel (Δρ23 Furd el)建構物係自該單體波峰純化。當該未經切割之 DelP23 Furdel RSV F抗原經胰蛋白酶處理，該蛋白形成在 SEC上移動至大約47毫升之空體積的玫瑰花簇（圖6B)。該 RSV F融合肽刪除之經切割之三體蛋白係自大約65毫升滯留時間之三體波峰純化（圖6C)，然而該未經切割之Delp21 Furx建構物（△ P21 Furx)係自大約77毫升之單體波峰純化（圖 6D)。多種呈未經切割形式或經胰蛋白酶切割後之r S V F蛋白胞外域多肽係利用EM檢測。該RSV F Furdel及delp23 Fur del建構物具有留存在三呋喃基二氫咪唑切割位點之精 -178- 201116294

胺酸殘基。該等精胺酸可被胰蛋白酶切割。切割時，該未經切割之F〇蛋白被轉換成FWF2蛋白，其中該融合肽係經暴露。E Μ分析證實在胰蛋白酶切割之後，該未經切割之R S V 胞外域藉由彼等之融合肽形成三體之玫瑰花簇，如同在相關融合蛋白所觀察到的。該等結果呈現於表3，顯示未經切割之R S V F蛋白胞外域多肽可被切割以形成三體之玫瑰花簇。該融合肽經刪除之建構物（其被三呋喃基二氫咪唑切割）形成單分散之三體。亦見圖7Α至7D。有利的是，以此方式所產製之三體之玫瑰花簇導致實質上不含脂質碎片及脂蛋白之三體之玫瑰花簇。該等免疫原性試驗之結果顯示，呈單體（未經切割之 delp21 furx)、三體之玫瑰花簇（經切割之delp23 furdel)及三體（融合肽刪除）形式之RSV F蛋白胞外域多肽對棉鼠（剛毛棉鼠（Sigmodon hispidus))具有免疫原性且誘發中和抗體。表 8 A-8C。表3 建構物由EM測定之構型 RSV F野生型胞外域(在宿主細胞表現時切割）與脂質碎片相連之三體之玫瑰花簇胰蛋白酶可切割之Furdd(經純化之單體波峰-未經切割）不一定。有些製劑顯示單分散三體；其他在EM負染色物質中很難看得到物質胰蛋白酶可切割之FUrdel(經純化之單體波峰-純化後經胰蛋白酶切割）三體之玫瑰花簇胰蛋白酶可切割之delp23 ilirdel(經純化之單體波峰-未經切割）不一定。有些製劑顯示單分散三體；其他在EM負染色物質中很難看得到物質胰蛋白酶可切割之delp23 FUrdel(經純化之單體波峰-純化後經胰蛋白酶切割）三體之玫瑰花簇經切割之融合肽刪除(經純化之單體波峰）單分散三體 -179- 201116294 實施例5 -於昆蟲或CHO細胞中製備rsv F次單位抗原之方法自昆蟲細胞純化RSV F抗原： RSV F 胞外域次單位（包括 Delp21 Furx，Delp23 Furdel 及融合肽刪除建構物）係於HiFive昆蟲細胞中（英維特基 (Invitrogen)公司）利用pFAST Bac桿狀病毒系統表現。該 RSV F次單位係經兩步驟螯合方法自大規模表現（1〇至25公升）中純化’該方法減少存在於昆蟲細胞培養基中之鐵蛋白污染物腐蝕該螯合樹脂之有害作用。添加CuS04至培養基上清液至終濃度500微莫耳。在每1公升之培養基中添加大約10至20毫升之螯合樹脂（螯合樹脂，BioRad公司），在 4°C搖動該漿液至少30分鐘，以重力管柱分離該樹脂及培養基。該樹脂以大約2倍樹脂體積之平衡緩衝液沖洗（25毫莫耳Tris pH 7.5，300毫莫耳NaCM)，並以大約2倍管柱體積之洗脫緩衝液（25 0毫莫耳咪唑平衡緩衝液）洗脫該f蛋白胞外域。該洗脫液以25毫莫耳Tris緩衝液pH 7.5，300毫莫耳NaCl進行透析，將所得到之溶液裝載至經NiS04充電之5 毫升Hitrap螯合管柱（GE醫療集團）。經結合之蛋白利用25 毫莫耳Tris pH 7.5、3 00毫莫耳NaCl及咪唑梯度洗脫。在二例中來自咪唑梯度之洗脫液使用抗-HIS6西方墨點及/或考馬斯染色SDS-P AGE膠體評估。包含純建構物之組分係利用密里博（Millip〇re)Centriprep濃縮器及/或 Vivaspin濃縮單位收集及濃縮至大約1毫克/毫升以供後續大小排除層析之分析/純化。 -180- 201116294 RSV F胞外域之SEC分析及純化

利用大小排除層析（SEC)純化及分析RSV F蛋白胞外域未經切割之單體及經切割之三體。此方法亦允許將未經切割之RSV F蛋白胞外域自源於宿主細胞或培養基之脂質及脂蛋白污染物純化。在乾淨-玫瑰花簇產製之情況中，該未經切割之Delp23 Furdel建構物最初係以單體被純化，接著蛋白酶處理及使用SEC再純化以純化均質性玫瑰花簇（見下）。二種方法HPLC-SEC及FPLC-SEC被發展以分析RSV F 寡聚化，該等方法亦可作爲有效之純化步驟。 HPLC-SEC係利用Biorad SEC管柱（18毫米）及25毫莫耳 Tris pH 7.5，3 00毫莫耳NaCl移動相進行。使用Biorad HPLC-SEC標準物校正該系統，我們發現該RSV玫瑰花簇（代表經切割之融合後構型）洗脫於該分析之管柱空體積，而RSV F單體（後續EM分析之假定三體）以大約75至85千道爾頓之表觀分子量洗脫。 FPLC-SEC係於GE醫療集團之FPLC上進行，使用16/60 Superdex 200 管柱及 25 毫莫耳 Tris pH 7.5，300 毫莫耳 NaCl 作爲移動相。使用GE醫療集團高分子量標準物校正該系統，我們發現該RSV玫瑰花簇洗脫於該分析之管柱空體積，而RSV單分散三體以大約140至160千道爾頓之表觀分子量洗脫且RSV F單體以大約75至85千道爾頓之表觀分子量洗脫。爲了純化RSV未經切割之Delp21 Furx或Delp23 Furdel (單體）或融合肽刪除（三體），將0.5至2毫升之大約1毫克/毫升螯合純化物質裝載至經平衡之Superdex P200 1 6/60管柱 -181 - 201116294 ，流速介於0.5至2毫升/分鐘且收集相關組分。胰蛋白酶切割Delp23 Furdel建構物以形成融合後玫瑰花簇來自牛血漿之胰蛋白酶（西格瑪奧德里奇（Sigma Aldrich)公司，T8 802: 1 0,000- 1 5,000 BAEE 單位 / 毫克胰蛋白酶）於25毫莫耳Tris pH 7.5，300毫莫耳NaCl中被稀釋至 1毫克/毫升濃度。每毫升1毫克之RSV F蛋白胞外域多肽溶液（稀釋於25毫莫耳Tris pH 7.5，300毫莫耳NaCl)係以1微升之胰蛋白酶溶液（胰蛋白酶：RSV F之終質量比爲0.001:1 或每毫克之RSV F使用大約10至15 BAEE單位之胰蛋白酶）於37°C中處理1小時。該切割反應之進行係以SDS-PAGE膠體監測。該切割反應係利用胰蛋白酶抑制劑停止（吉布可 (Gib co)公司大豆胰蛋白酶抑制劑，使用與胰蛋白酶等質量之抑制劑）。結果發現在切割步驟與後續玫瑰花簇純化之間需要培養時間，以允許較高之單體至玫瑰花簇轉換效率。於37°C培養1至6小時以提供較高之玫瑰花簇形成效率。該經切割之RSV F蛋白利用大小排除層析（如上述）自未經轉換之單體形式進一步純化，其中均質性玫瑰花簇可於管柱空體積中收集。自CHO細胞純化RSV F抗原： RSV F融合肽刪除建構物（不包含HIS-標記）係由陽離子純化加以純化。包含經表現之RSV F三體抗原之CHO物 -182- 201116294

質係於G E醫療集團中空纖維卡式管濃縮系統（μ w C Ο 1 0,0 00千道爾頓）濃縮至大約原本體積之十分之—。該經濃縮之溶液接著與等體積之25毫莫耳醋酸鈉ρΗ 6.0, 25毫莫耳NaCl緩衝交換4次。所得到之溶液（包含經濃縮之RSV ρ 三體於醋酸鹽/鹽水緩衝液）被裝載至預先充電之經醋酸鹽/ 鹽水緩衝液平衡之GE醫療集團HiTrap CM管柱。該蛋白利用包含25，150，2 5 0，500或1 000毫莫耳NaCl之25毫莫耳醋酸鹽緩衝液的階段梯度自管柱洗脫（該2 5 0毫莫耳及500毫莫耳之N a C 1組分含有大量該經洗脫之物質）。該物質可利用類似上述程序之SEC純化進一步純化。實施例6 - RSV F次單位於棉鼠之免疫原性該RSV-F三體（RSV-F-融合-肽-刪除-截短）及玫瑰花簇 (RSV-F-delp23-furdel-截短’經切割）次單位（各以明礬或 M F 5 9調製）之免疫原性及保護力係於棉鼠模型中評估。用於此試驗中ELISA之抗原係RSV-F-融合-肽-刪除-截短（表4) 。中和作用係拮抗感染性R S V長株（表5)。所有組合均具有免疫原性，誘導高力價之RSV-F -專一性IgG及RSV中和抗體反應，並由第二次免疫接種補強，提供對抗鼻腔RSV攻毒之保護作用。方法棉鼠之免疫接種及攻毒母棉鼠（剛毛棉鼠（Sigmodon hispidus))購自哈倫實驗 -183- 201116294 室（Harlan Laboratories卜經分組之動物於第〇及21天接受所示疫苗之肌肉注射（i.m·，100微升）免疫接種。血清樣本於第一次免疫接種後3周（3 wpl)及第二次免疫接種後2周 (2wp2)收集。經免疫接種或未經免疫接種之對照動物係於最後免疫接種後4周以lxlO5 pfu RSV長株經鼻內（i.n.)攻毒。抽血及RSV攻毒係於使用精準汽化器之3%異氟烷 (isoflurane)麻醉下進行。

RSV F -專一性 ELISA 個別血清樣本藉由酵素免疫測定法（ELISA)檢測RSV F-專一性 IgG之存在。ELISA 板（MaxiSorp 96-孔板，Nunc 公司）於4°C以1微克/毫升經純化之RSV F(融合-肽刪除-截短）於PBS中包覆隔夜。在清洗後（PBS含0.1 %吐溫-20)，該板以Superblock封閉緩衝液於PBS中（賽默科技（Thermo Scientific)公司）於37t封閉至少1.5小時。該板接著被清洗，添加來自實驗或對照棉鼠之連續血清稀釋液於測定稀釋劑中（？63含0.1%吐溫-20及5%山羊血清），該板於37°(：培養2小時。清洗後，該板與馬辣根過氧化酶（HRP)-共軛之雞抗-棉鼠IgG(免疫諮詢實驗室公司（Immunology Consultants Laboratory, Inc)，以 1:5,000於測定稀釋劑中稀釋）於37 °C培養1小時。最後，該板經過清洗並於每孔加入100微升之TMB過氧化酶受質溶液（克爾凱戈及培力實驗室公司（Kirkegaard & Perry Laboratories, Inc))。反應藉由添加100微升之1莫耳H3P〇4停止，並利用孔板讀取儀讀取 -184- 201116294 於4 5 0奈米處之吸光値。以各血清樣本而言’以光密度 (OD)對倒數血清稀釋對數値作圖係由非線性回歸產生（格飛派德公司（GraphPad Prism))。力價被定義爲於〇D大約 0.5時之倒數血清稀釋（對包含於各板中之標準物正常化’ 標準物係來自R S V感染棉鼠之具有1 : 2 5 0 0定義力價之混合血清）。

微中和測定血清樣本藉由微中和測定以測試中和抗體之存在。二倍連續稀釋之熱不活化（HI)-血清（於含5%HI-胎牛血清 (FBS)之PBS中）被加至等體積之先前經滴定以得到大約1 15 PFU/25微升的RSV長株。血清/病毒混合物於37°C及5%C02 中培養2小時以允許病毒中和發生，接著取2 5微升之該混合物（含大約1 1 5 P F U )接種於9 6孔板中Η E p - 2細胞之重複雙孔中。在37°C及5%C〇2中培養2小時後，該等細胞被覆上 0.7 5 %甲基纖維素/ Ε Μ E Μ 5 % Η I - F B S且培養4 2小時。感染性病毒顆粒之數量係藉由免疫染色偵測合胞形成隨後自動計算加以測定。中和力價係定義爲相較於對照組（無血清）產生每孔合胞數至少減少60%之血清稀釋倍數的倒數。病毒載量肺中之病毒載量係由病毒斑檢測加以測定。具體地說，在RSV感染後5天取出肺，將一右葉置於含25%蔗糖之 2.5毫升之達爾柏克改良伊格爾培養基（Dulbecco's -185- 201116294

Modified Eagle Medium) (DMEM，英維特基（Invitrogen)公司）中，並以組織均質機破碎。源自該等樣本之不含細胞之上清液係儲存於-8(TC。要檢測感染性病毒，將澄清肺均質液之稀釋液（於含5%HI-FBS之PBS中）以每孔200微升之體積接種於長滿HEp-2細胞單層之12_孔板。經2小時週期性輕微搖晃後（37°C，5%C02)，該接種液被移除，細胞被覆上1.5毫升之1.25%SeaPlaque洋菜糖（龍沙（Lonza)公司）於添加5%HI-FBS、麩醯胺酸及抗生素之伊格爾式基本成分培養基（EMEM，龍沙（Lonza)公司）。經3至4天之培養後，細胞再次被覆上1毫升之1.25 %洋菜糖於含有0.1 %中性紅（西格瑪（Sigma)公司）之EMEM(西格瑪（Sigma)公司）。一天後利用光箱計算病毒斑。另一種測定病毒載量之方法係定量即時PCR(qRT-PCR)。病毒載量可利用對如所述之RSV-F基因（I. Borg et al，Eur Respir J 2003; 2 1:944-5 1 )具專一性並加上若千修飾之寡核苷酸引子藉由qRT-PCR測定。簡言之，RNA係自 140微升之澄清肺均質液或已知數量之病毒斑形成單位 (PFU)之RSV(經病毒斑測定檢測並由未經感染之動物的肺均質液稀釋）分離，使用RNeasy套組（凱杰（Qiagen)公司）及 100微升H20之終提取體積。cDNA合成及PCR係於單一支試管中利用Superscript III鈾單一步驟定量RT-PCR套組（英維特基（Invitrogen)公司）及5微升之提取RNA、10微莫耳之各引子及50微莫耳之探針（引子及探針購自整合DNA技術 (Integrated DNA Technologies)公司）進行。前置引子： -186- 201116294 TTGGATCTGCAATCGCCA (SEQ ID NO:72)。反置引子： CTTTTGATCTTGTTCACTTCTCCTTCT (SEQ ID NO:73)。探針： 5’-羧基螢光素（FAM)-TGGCACTGCTGTATCTAAGGTCCTGCACT-

四甲基羧基若丹明（TAM RA )-3’（SEQ ID NO:74)。放大及偵測係於ABI Prism 7900HT或7 5 00 (應用生物系統（Applied Biosystems)公司）中進行。定義各樣本之閥値循環値（Ct)爲螢光信號首先變得在設定値之上可偵測之循環數。各樣本之PFU等値接著根據Ct與經定義之病毒RNA拷貝數之對數的標準曲線決定。結果棉鼠模型已被廣泛地用於RSV病理學及免疫學之硏究，因爲RSV在棉鼠與人所誘發之疾病之間有許多類似性。二個重要的相似性爲中和抗體之療效，以及與福馬林不活化之RSV免疫有關的改善之肺組織病理學。棉鼠也比其他小動物諸如小鼠更容易受到RSV感染。爲了評估我們的RSV-F次單位疫苗之免疫原性，不同組別之母棉鼠接受不同劑量之三體（RSV-F-融合-肽-刪除-截短）或玫瑰花簇（RSV-F-delP23-furdel-截短，經切割）之肌肉注射免疫接種（各經明礬或MF59調製）。在所有情況中，單次免疫足以在第一次免疫接種後3周（3wpl)測量時在血清中誘導F-專一性及中和抗體二者。所有棉鼠在第一次免疫接種後3周被給予同源性增強免疫，此導致在2周後測量時（2wp2)F-專一性IgG及中和抗體顯著增加。一般來說 -187- 201116294 ，玫瑰花簇之免疫原性等於或高於三體，MF59調製劑所提高之力價高於明礬調製劑及較高之蛋白劑量產生較高力價，雖然有些例外。爲了測定該次單位疫苗之保護力，所有棉鼠在第二次免疫接種後4周藉由鼻腔途徑感染RSV且肺中之病毒載量係於5天後以病毒斑測定測量。在所有情況中，次單位免疫接種給予攻毒之保護，因爲經免疫接種之棉鼠的肺病毒載量相較於未經免疫但經攻毒之對照動物高出3個數量級

表4 : F-專一性血清IgG力價血清收集蛋白劑量 (微克） F-專一性血清IgG力價a 明礬 MF59 三體玫瑰花簇三體玫瑰花簇 3wpl 10 20276 36841 10251 22415 1 18341 20802 3712 28610 0.1 2698 6896 1065 8293 2wp2 10 103670 97174 130016 156144 1 142331 102405 177441 299501 0.1 11581 34354 50238 111099 a個別棉鼠之幾何平均力價(每組7至8隻）三體免疫原爲RSV-F-融合-肽-刪除-截短玫瑰花簇免疫原爲RSV-F-delp23-furdel-截短，經切割。 -188- 201116294 表4A : RSV攻毒後5天之肺病毒力價a 免疫接種蛋白劑量 (微克）病毒力價13 Μ - 822760 三體/明礬 10 546 1 636 0.1 903 玫瑰花簇/明礬 10 305 1 341 0.1 548 三體/MF59 10 360 1 301 0.1 456 玫瑰花簇/MF59 10 244 1 257 0.1 716

a WlxlO5病毒斑形成單位(pfu)之RSV長株進行鼻內攻毒 b攻毒後5天每克肺之pfu 每組7至8隻個別棉鼠的幾何平均力價。若個別動物具有<203之力價(偵測限制），其以100之力價表示。

表5 : RSV血清中和力價收集血清蛋白劑量 (微克） RSV血清中和力價a 明礬 MF59 三體玫瑰花簇三體玫瑰花簇 3wpl 10 628 1050 578 229 1 208 633 165 205 0.1 57 200 51 65 2wp2 10 3669 4015 3983 3436 1 3369 2844 5728 3940 0.1 744 1902 2414 2093 a 60%合胞減少中和力價二群每組3至4隻棉鼠之幾何平均力價 -189- 201116294 實施例7 - RSV RNA疫苗 RNA合成編碼阿爾法病毒複製子之質體DNA(圖4，SEQ ID NO :77)被用來作爲活體外合成A之模板。這些實驗使用 RSV之全長表面融合糖蛋白（RSV_F)(圖4)。在遞送該複製子至真核細胞時，該正股RN A被轉譯以產生4個非結構性蛋白，彼等一起複製該基因組RN A且轉錄編碼該異源性基因產物之豐富次基因組mRNA。由於缺乏表現該阿爾法病毒之結構性蛋白，複製子無法誘導感染性顆粒之產生。阿爾法病毒cDNA上游之噬菌體（T7或SP6)啓動子有助於該複製子RNA於活體外合成，及緊接在該多（A)尾下游之D型肝炎病毒（HDV)核糖酵素經由彼之自我切割能力產生正確之 3’-端。在以適當之限制內切酶線性化該HDV核糖酵素下游之質體DNA後，利用T7或SP6噬菌體衍生性DNA-依賴性RNA 聚合酶在活體外合成失控轉錄物。轉錄在7.5毫莫耳（T 7 RNA聚合酶）或5毫莫耳（SP6 RNA聚合酶）之各種核苷三磷酸（ATP，CTP，GTP及UTP)存在時於37°C按照製造商（德州奧斯汀市安比（Ambion)公司）提供之指示進行2小時。在轉錄後，該模板DNA經TURBO DNase(德州奧斯汀市安比 (Ambion)公司）消化。該複製子RNA以LiCl沉澱，並重構於不含核酸酶之水中。未加蓋之RNA利用牛痘加蓋酵素 (VCE)以ScriptCap m7G加蓋系統（威斯康辛州麥迪遜市震源生物科技公司（Epicentre Biotechnologies))如使用手冊之 -190- 201116294 說明在轉錄後加蓋。轉錄後之加蓋RNA以LiCl沉澱，並重構於不含核酸酶之水中。該RN A樣本之濃度藉由測量於 2 6 0奈米處之光密度決定。活體外轉錄物之完整性藉由變性洋菜糖膠體電泳證實。脂質奈米粒子（脂質體）調製劑RV0 1(01)

1,2-二亞麻油基氧基-Ν,Ν -二甲基-3 -胺基丙烷 (DlinDMA)係利用先前公開之方法合成[Heyes, J.，Palmer， L., Bremner，K., MacLachlan，I. Cationic lipid saturation influences intracellular delivery of encapsulated nucleic acids. Journal of Controlled Release, 1 07: 2 76-2 8 7 (2005)]。1,2-二硬脂醯基- sn-甘油-3-磷醯基膽鹼（DSPC)係購自健贊（Genzyme)公司。膽固醇係購自西格瑪奧德里奇 (Sigma Aldrich)公司（密蘇里州聖路易斯市）。1，2 -二肉豆蔻醯基- sn-甘油-3-磷醯基乙醇胺-N-[甲氧基（聚乙二醇）-2000](銨鹽）（PEG DMG 2000)，1，2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷醯基乙醇胺-N-[甲氧基（聚乙二醇）-2000](銨鹽）係購自阿凡提極性脂質公司（Avanti Polar Lipids)(阿拉巴馬州阿拉巴斯特市）。製備新鮮的脂質乙醇原液。37毫克之DlinDMA、11.8 毫克之DSPC、27.8毫克之膽固醇及8.07毫克之PEG DMG 2 0 00被秤重及溶解於7.55毫升之乙醇。該新鮮製備之脂質原液於3 7 °C輕搖大約1 5分鐘以形成均質混合物。接著， 755微升之該原液被加至1.245毫升之乙醇以製成2毫升之 -191 - 201116294 工作脂質原液》此量之脂質被用於形成含有250微克RN A 之8:1 N:P(氮對磷酸鹽）之比的LNP。在DlinDMA(陽離子脂質）上之可質子化氮及該RN A上之磷酸被用於該計算。每微克之自我複製之RN A分子假設包含3奈莫耳之陰離子磷酸，每微克之DlinDMA被假設包含1.6奈莫耳之陽離子氮。

2毫升之RNA工作溶液亦從原液製備成約1微克/微升於1〇〇毫莫耳檸檬酸鹽緩衝液（pH 6)(加州霍利斯特市天諾華 (Teknova)公司）。三個20毫升玻璃瓶（含攪拌子）以去RNA 酶溶液（加州聖地牙哥市分子生物產品（Molecular B i ο P r 〇 d u c t s)公司）潤洗，使用前以大量M i 11 i Q水沖洗以去除瓶中之RNA酶。其中的一個玻璃瓶用於盛裝RNA工作溶液’其他用於收集脂質及RNA混合物（如下所述）》該工作脂質及RNA溶液於37 °C加熱1〇分鐘，接著被裝入3毫升之魯爾鎖式（luer-lok)針筒（新澤西州富蘭克林拉克斯市BD醫學（BD Medical)公司2毫升之檸檬酸鹽緩衝液（pH 6)被裝於另一支3毫升針筒。含有RN A及該些脂質之針筒與T混合器（PEEKTM 5 00微米ID接頭，華盛頓州奧克哈伯市英達克斯健康科技（Idex Health Science)公司）利用FEP管（[氟化乙烯-丙烯]2毫米ID X 3毫米OD，華盛頓州奧克哈伯市英達克斯健康科技（Idex Health Science)公司）連接。該T混合器之出口亦爲FEP管（2毫米ID X 3毫米）。含有檸檬酸緩衝液之第三支針筒與另一條分開之管（2毫米ID X 3毫OD)連接。所有針筒接著以7毫升/分鐘之流速利用針筒幫浦（麻州何利斯頓市kd科技（kdScientific)公司，型號KDS-220)注射。管 -192- 201116294 子出口之放置能讓該混合物收集於20毫升玻璃瓶（攪拌時）。拿出攪拌子，使該乙醇/水性溶液於室溫中平衡1小時。

4毫升之該混合物被裝入與一根FEP管（2毫米ID X 3毫米OD ，華盛頓州奧克哈伯市英達克斯健康科技（Idex Health Science)公司）連接之5毫升針筒（BD醫學（BD Medical)公司），在另一支與等長FEP管連接之5毫升針筒中裝入等量之 ]! 0 0毫莫耳檸檬酸緩衝液（p Η 6)。該二支針筒以7毫升/分鐘之流速利用針筒幫浦注射，終混合物收集於20毫升玻璃瓶 (攪拌中）。接著，使自第二混合步驟收集之混合物（脂質體 )通過Mustang Q膜（結合與移除陰離子分子之陰離子交換支持，購自美國密西根州安亞伯市頗爾（Pall)公司）。在通過脂質體之前，使4毫升之1莫耳NaOH、4毫升之1莫耳NaCl 及10毫升之1〇〇毫莫耳檸檬酸緩衝液（pH 6)連續通過該 Mustang膜。在通過Mustang過濾膜之前，脂質體於37t：加熱1 〇分鐘。接著，脂質體被濃縮至2毫升並在收集終產物之前以10至15倍體積之IX PBS(購自天諾華（Teknova)公司）利用切向流過濾（TFF)系統透析。該TFF系統及中空纖維過爐膜係購自斯貝克強實驗室（Spectrum Labs)(加州牧場多明格斯市）且根據廠商說明使用。使用1 〇〇千道爾頓孔徑大小截止及8平方公分表面積之聚颯中空纖維過濾膜（部品編號P/N: X1AB- 1 00-2 0P)。在活體外及活體內實驗中，調製劑以IX PBS (購自天諾華（Teknova)公司）稀釋至所需之RNA 濃度。 -193- 201116294 製備陽離子乳劑17(CNE17)之方法鯊烯、去水山梨糖醇三油酸酯（司盤85)及聚氧-乙烯去水山梨糖醇單油酸酯（吐溫80)係購自西格瑪（Sigma)公司（美國密蘇里州聖路易斯市）。1，2-二油醯基-3-三甲基銨-丙烷（DOTAP)係購自利普以德（Lipoid)公司（德國路德維希港）。陽離子奈米乳劑（CNE)以類似如前所述帶電MF59加上少量修飾之方式製備Ott，et al. Journal of Controlled Release，79( 1 -3 ):1 -5 (2002))。簡言之，油溶性成分（意即鯊烯、司盤85、陽離子脂質、脂質界面活性劑）係於燒杯中組合，脂質成分係溶解於氯仿（CHC13)或二氯甲烷（DCM) 。所得到之脂質溶液被直接添加至油加司盤8 5。允許溶劑在通風櫥於室溫中蒸發2小時，接著與該含水相組合，利用ΙΚΑ T25均質機以24K RPM均質化該樣本以提供均質化之進料。原始乳劑通過有冰浴冷卻線圈及大約1 5 k至2 Ok PSI之均質壓力之微射流機M110S或M110PS均質機3至5次（麻州牛頓市微流體（Micro fluidics)公司）。自該單位取出20 毫升之批次樣本並儲存於。下表描述CNE17之組成物表6 : CNE17之組成物 CNE 陽離子脂質 (+) 毫克/毫升 +脂質界面活性劑鯊烯緩衝液/水 CNE17 DOTAP (於DCM中） 1.40 0.5%司盤85 0.5%吐溫80 4.3% 10毫莫耳檸檬酸緩衝液pH 6.5 -194- 201116294 RNA複合

溶液中氮的數目係自該陽離子脂質濃度計算’舉例來說DOTAP每分子具有1個可被質子化之氮原子。該RNA濃度被用於計算溶液中磷酸鹽之量，利用每微克之RNA有3 奈莫耳之磷酸鹽估計。藉由改變RNA :脂質之量，可修飾 N/P之比。RNA以10:1之氮/磷酸比（N/P)與CNE17複合。利用該些數値’ RN A係經不含rn A酶之水稀釋至適當濃度並直接添加至輕微震盪中之等體積乳劑。使該溶液於室溫中靜置大約2小時。待複合後，該形成之溶液在投予前經稀釋至所需濃度。電穿孔電穿孔是一種非常有效的遞送pDNA疫苗之方法，此技術被用於遞送自我複製之RNA。小鼠利用異氟烷 (isofluorane)麻醉，二隻後腳仔細刹毛以暴露出腳上將被處理之區域。利用1 /2毫升之胰島素針筒將一劑3 0微升之疫苗注射至後腳之腓肌。該肌肉利用Eigen® DNA遞送系統（聖地牙哥因諾維爾（Inovio)公司）加以電穿孔。該機器參數如下：60伏特，2次脈衝各爲60毫秒。另一劑被類似地遞送至第二隻腳，之後進行電穿孔。病毒複製子顆粒（VRP) 爲了比較RN A疫苗與傳統RN A載體方式達到活體內表現報告基因或抗原，我們利用在BHK細胞中藉由如Perri et -195- 201116294 al所述之方法所產製之病毒複製子顆粒（viral replicon particlesKVRPs)。在該系統中，由源自委內瑞拉馬腦炎病毒（Venezuelan equine encephalitis virus)(VEEV)之基因組的阿爾法病毒嵌合性複製子（alphavirus chimeric replicons (VCR))所組成之抗原（或報告基因）複製子係經工程化以包含辛德比斯病毒（Sindbis virus)之3’端序列（3，UTR)及辛德比斯病毒包裝信號（PS)(見Perri et al中之圖2)。該等複製子藉由與編碼辛德比斯病毒殻體及糖蛋白基因之缺陷輔助 RNA共-電穿孔至嬰兒倉鼠腎（BHK)細胞以被包裝成VRP (見 Perri et al之圖2)。該等VRP接著以標準方法收集及滴定，且於培養液或其他等張緩衝液中被接種至動物》Perri S， Greer CE, Thudium K, Doe B，Legg H，Liu H，Romero RE, Tang Z， Bin Q, Dubensky T W, Jr. et al (2003) An alphavirus replicon particle chimera derived from Venezuelan equine encephalitis and sindbis viruses is a potent gene-based vaccine delivery vector. J Virol 77: 10394-10403 » RSV F三體次單位疫苗 RSV F三體係包含RSV F胞外域之重組蛋白，其融合肽區刪除以防止與其他三體相連。所得到之建構物形成均質三體（如大小排除層析中觀察到的），且具有與如電子顯微鏡觀察到之融合後F構型一致之期待表現型。該蛋白係於昆蟲細胞表現，藉由與該建構物之C端融合之HIS-標記 -196- 201116294

純化，之後利用習知技術進行大小排除層析。該得到之蛋白樣本具有高於95%之純度。以活體內評估該F-次單位疫苗而言，100微克/毫升之三體蛋白利用10毫莫耳組胺酸緩衝液pH 6.3被吸附於2毫克/毫升之明礬及以氯化鈉調整張力至150毫莫耳。F-次單位蛋白於2至8 °C輕柔攪拌隔夜以吸附在明礬上。該終疫苗之pH及滲透壓目標爲6.5至7.5及 240至360毫滲/公斤。該疫苗以SDS-PAGE之蛋白吸附（美國英維特基（Invitrogen)公司）及LAL測定之內毒素含量（美國查爾斯河實驗室（Charles River Laboratories))加以特徵化。該疫苗在免疫接種前輕輕反轉以混合。鼠免疫原性試驗每組10隻8至10周齡及體重約20克之BALB/C母鼠係於第〇天及第21天免疫接種，於第14，35及49天採血。所有動物以等量疫苗（每個部位50微升）注射在二隻後腳的四頭肌，總共1 〇〇微升遞送1 〇微克之抗原劑量。若需要測量T細胞反應，於第35或49天採集脾臟。棉鼠之免疫接種及攻毒母棉鼠（剛毛棉鼠（Sigmodon hispidus))購自哈倫實驗室（Harlan Laboratories)。所有實驗係經諾華動物保健及使用委員會核准及監督執行。經分組之動物於第〇及2 1天接受所示疫苗之肌肉注射（i.m.，100微升）免疫接種。每次免疫接種後2周收集血清樣本。經免疫接種或未經免疫接種 -197- 201116294 之對照動物係於最後免疫接種後4周以lxlO5 PFU RSV經鼻內（i.n.)攻毒。抽血及RSV攻毒係於使用精準汽化器之3% 異氟院（isoflurane)麻醉下進行。小鼠T細胞功能測定細胞內細胞介素免疫螢光測定二至五個來自相同免疫接種之BALB/c小鼠的脾臟被混合，並製備單一細胞懸浮液以供培養。每個脾細胞池建立二個經抗原刺激之培養及二個未經刺激之培養。經抗原刺激之培養包含lxl〇6脾細胞、RSV F肽85-93(lxl0·6莫耳）、 RSV F 狀 249-25 8(lxl0·6 莫耳）、RSV F肽 51-66(lxl〇-6 莫耳）、抗-CD28單株抗體（1微克/毫升）及布雷菲德菌素A (Brefeldin A)(l:1 000)。未經刺激之培養不包含RSV F肽，其他方面則與經刺激之培養相同。在3 7 °C培養6小時後，培養物經處理以進行免疫螢光測定。清洗細胞，接著以經螢光標記之抗-CD4及抗-CD8單株抗體（mAb)染色。再次清洗細胞，接著以Cytofix/cytoperm固定20分鐘。該經固定之細胞接著以Perm-wash緩衝液清洗，然後以對IFN-g， TNF-a , IL-2及IL-5具專一性之螢光標記單株抗體染色。清洗經染色之細胞，接著在LSR II流式細胞儀上分析。 FlowJo軟體被用於該需求之資料。CD4 + 8-及CD8 + 4- T細胞次群分開分析。在給定樣本之每個次群中，測定細胞介素陽性細胞之百分比。該RSV F抗原專一性T細胞之百分比係以經抗原刺激之培養中的細胞介素陽性細胞百分比與未經 -198 - 201116294 剌激之培養中的細胞介素陽性細胞百分比之間的差異計算。該抗原專一性細胞百分比的95%信賴界限係利用標準方法測定（Statistical Methods，7th Edition, G.W. Snedecor and W. G . Cochran)。細胞介素分泌測定

用於細胞介素分泌測定之培養與該些用於細胞內細胞介素免疫螢光測定者類似，除了省略布雷菲德菌素A (Brefeldin A)。於37°C隔夜培養後收集培養上清液，利用購自美索尺度發現（Meso Scale Discovery)公司之小鼠 Th 1 /Th2細胞介素套組分析多種細胞介素。每個培養之各種細胞介素之量係由標準曲線決定，該標準曲線利用製造商所提供之經純化之重組細胞介素產生。

RSV F -專一性 ELISA 個別血清樣本藉由酵素免疫測定法（E L I S A )檢測R S V F-專一性 IgG之存在。ELISA 板（MaxiSorp 96-孔板，Nunc 公司）於4°C以1微克/毫升經純化之RSV F(delp23-furde卜截短未經切割）於PBS中包覆隔夜。在清洗後（PBS含0.1 %吐溫-20)，該板以Superblock封閉緩衝液於PBS中（賽默科技 (Thermo Scientific)公司）於37°C封閉至少1.5小時。該板接著被清洗，添加來自實驗或對照棉鼠之連續血清稀釋液於測定稀釋劑中（PBS含0.1 %吐溫-20及5%山羊血清），該板於 37 °C培養2小時。清洗後，該板與馬辣根過氧化酶（HRP)- -199- 201116294 共軛之雞抗-棉鼠IgG(免疫諮詢實驗室公司（Immunology Consultants Laboratory, Inc)，以 1:5,000於測定稀釋劑中稀釋）於37 °C培養1小時。最後，該板經過清洗並於每孔加入100微升之TMB過氧化酶受質溶液（克爾凱戈及培力實驗室公司（Kirkegaard & Perry Laboratories, Inc))。反應藉由添加100微升之1莫耳H3P〇4停止，並利用孔板讀取儀讀取於450奈米處之吸光値。以各血清樣本而言，以光密度 (OD)對倒數血清稀釋對數値作圖係由非線性回歸產生（格飛派德公司（GraphPad Prism))。力價被定義爲於OD大約 0.5時之倒數血清稀釋（對包含於各板中之標準物正常化，標準物係來自RSV感染棉鼠之具有1:25 00定義力價之混合血清）。微中和測定血清樣本藉由病毒斑減少中和試驗（P RN T )以測試中和抗體之存在。二倍連續稀釋之HI-血清（於含5%HI-FBS之 PBS中）被加至等體積之先前經滴定以得到大約1 1 5 PFU/25 微升的RSV長株。血清/病毒混合物於37°C及5%C02中培養 2小時以允許病毒中和發生，接著取25微升之該混合物（含大約115 PFU)接種於96孔板中HEp-2細胞之重複雙孔中。在37°C及5%C02中培養2小時後，該等細胞被覆上0.75%甲基纖維·素/EMEM 5%HI-FBS且培養42小時。感染性病毒顆粒之數量係藉由免疫染色偵測合胞形成隨後自動計算加以測定。中和力價係定義爲相較於對照組（無血清）產生每孔 -200- 201116294 合胞數至少減少60 %之血清稀釋倍數的倒數。病毒載量

肺中之病毒載量係由病毒斑檢測加以測定。具體地說，在RSV感染後5天取出肺，將一右葉置於含25 %蔗糖之 2.5毫升之達爾柏克改良伊格爾培養基（Dulbecco's Modified Eagle Medium)(DMEM，英維特基（Invitrogen)公司）中，並以組織均質機破碎。源自該等樣本之不含細胞之上清液係儲存於-8 0 °C。要檢測感染性病毒，將澄清肺均質液之稀釋液（於含5%熱不活化胎牛血清（HI-FBS)之PBS 中）以每孔200微升之體積接種於長滿ΗΕρ·2細胞單層之12-孔板。經2小時週期性輕微搖晃後（37 t，5%C02)，該接種液被移除，細胞被覆上1.5毫升之1.25%SeaPlaque洋菜糖（龍沙（Lonza)公司）於添加5%HI-FBS、麩醯胺酸及抗生素之伊格爾式基本成分培養基（EMEM，龍沙（Lonza)公司）。經3至4天之培養後，細胞再次被覆上1毫升之1.25 %洋菜糖於含有0.1 %中性紅（西格瑪（Sigma)公司）之EMEM (西格瑪 (Sigma)公司）。一天後利用光箱計算病毒斑。棉鼠肺病理學在RSV攻毒後5天採集肺，收集每隻動物的4個肺葉並以平緩氣管內滴入然後浸入1 0%中性緩衝福馬林（NBF)固定。定期處理組織以製備蘇木精及伊紅染色切片以供顯微鏡檢查。利用先前公開之標準[Prince GA，et al·, 200 1 ]的 -201 - 201116294 改良版評估下列參數：細支氣管周圍炎、肺泡炎、支氣管炎、血管周圍細胞浸潤及間質性肺炎。病灶以4分半定量量表分級。最小（+ )變化包含一或數個小型病灶；輕微（+ + ) 變化包含小型至中型病灶；中等（ + + + )變化包含頻繁及/或中等大小病灶；明顯（ + + + + )變化顯示影響大部分/所有組織之廣泛至匯流性病灶。實施例7

A-棉鼠RSV攻毒試驗（CRIS14)

表現113¥之表面融合糖蛋白（113¥-?)的八317複製子被用於本試驗。每組8隻棉鼠（剛毛棉鼠（Sigmodon hispidus)) 於第〇及21天給予裸自我複製之RNA(A317，1微克或10微克）、調製成LNP之自我複製之RNA[RV01(01)，A317，0.1 微克或1微克）、表現RSV-F之VRP(5xl06 IU)、F-三體/明礬次單位（10微克）或福馬林不活化之RSV疫苗（5200 FI-pfu) 的雙側肌肉內免疫注射（每隻腳50微升）。第14(2wpl)及35 (2 wp2)天收集血清以供抗體分析。所有動物於第49天以 lxlO5 pfu RSV鼻內供毒，在第54天（5dpc)收集肺以測定病毒載量及肺病理學。結果 -202- 201116294 表7 :第14及35天之F-專一性血清IgG力價 F-專一性IgG F-專一性IgG 疫苗劑量 2wpl 2wp2 A317 10微克 198 1599 A317 1微克 78 526 CNE17 1微克 408 4918 CNE17 0.1微克 325 2512 RVOl(Ol) 1微克 531 4351 RV0H01) 0.1微克 134 1033 VRP 5xl06IU 961 5864 F-三體/明礬 10微克 3526 111893 FI-RSV 5200 FI-pfu 17 2074 Μ /\\\ 5 5

表7。在第〇及21天之肌肉內免疫後，棉鼠(岡！J毛棉鼠(Sigmodon hispidus))(每組8 隻動物)之F-專一性血清IgG力價。收集第14(2wpl)及35(2wP2)天之血清以供抗體分析，所有動物於第49天以lxlO5 pfu RSV經鼻內攻毒。第54(5dpc)天收集肺以測定病毒載量及肺病理學。資料以每組8隻獨立棉鼠的幾何平均力價表示。若個別動物具有<25之力價(偵測限制），其以5之力價表示。表8 :第14及35天之RSV血清中和力價

疫苗劑量 PRNT60 2wpl PRNT60 2wp2 A317 10微克 78 240 A317 1微克 58 70 CNE17 1微克 91 269 CNE17 o.l微克 63 145 RV01(01) 1微克 103 667 RV01(01) 0.1微克 46 130 VRP 5xl〇6IU 149 683 F-三體/明礬 10微克 142 >5120 fi-rsv 5200 FI-pfu 28 38 Js 30 <20 表8。在第〇及21天之肌肉內免疫後，棉鼠(岡丨】毛棉鼠(Sigmodon hispidus))(每組8 隻動物)之RSV血清中和力價。第M(2wpl)及35(；2wp2)天收集血清以供分析。資料以60%病毒斑減少中和力價表示。二群每組4隻棉鼠之幾何平均力價。若個別動物具有<25之力價(偵測限制），其以5之力價表示。 -203- 201116294 表9 : RSV攻毒後5天之肺病毒力價疫苗劑量 pfu/g lung 5dpc A317 10微竞 397 A317 1微克 659 CNE17 1微克 414 CNE17 0.1微克 572 RV01(01) 1微克 445 RV01(01) 0.1微克 716 VRP 5xl06IU 359 F-三體/明礬 10微克 190 FI-RSV 5200 FI-pfu 5248 無(攻毒） 728618

表9 :在第0及21天之肌肉內免疫後，棉鼠(岡！1毛棉鼠(Sigmodon hispidus)X每組8 隻動物)於RSV攻毒後5天之肺病毒力價。所有動物於第49天以lxlO5 pfu RSV經鼻內攻毒。第54(5dpc>天收集肺以測定病毒載量及肺病理學。資料以每克肺之病毒斑形成單位顯示，由病毒斑試驗測定。每組8隻個別棉鼠的幾何平均力價。若個別動物具有<200之力價(偵測限制），其以100之力價表示。表10 : RSV攻毒後5天之肺泡炎評分疫苗劑量標示肺泡炎分數之棉鼠數量 0 12 3 4 A3171 10 微克 A3171 1微克 CNE17 1微克 CNE17 〇.1 微克 RV01(01) 1 微克 RV01(01) o.i 微克 VRP 5xl〇6 IU F-三體/明礬 10微克 FI-RSV 5200 FI-pfu 無(攻毒） 8 8 8 7 1 6 2 8 3 4 1 7 1 1 4 3 5 3

表10。在第〇及21天之肌肉內免疫後，棉鼠(剛毛棉鼠(Sigm〇d〇n hispidus))侮組 8隻動物)於RSV攻毒後5天之肺泡炎。所有動物於第49天以lxl〇5 pfu RSV經鼻內攻毒。第54(5dpc)天收集肺以測定病毒載量及肺病理學。病灶以4分之半定量量表分級。最小(1)變化包含一或數個小型病灶；輕微(2)變化包含小型至中型病灶；中等(3)變化包含頻繁及/或中等大小病灶；及明顯(4)變化顯示影響大部分/所有組織之廣泛至匯流性病灶。 -204- 201116294 結論

此試驗的一個目的爲測定複製子RNA於棉鼠RSV模型之免疫原性及保護力。另—目的在於評估脂質體及CNE17 調製劑對於疫苗免疫原性及療效之效應。未經調製之複製子RNA在一次免疫後誘發血清F-專一性IgG及RSV中和抗體，此反應被第二次免疫補強。脂質體及CNE 17調製劑在此模型中類似地有效，在第二次免疫接種後補強F -專一性 IgG力價至1微克複製子RNA大約8倍及中和力價4至10倍（分別爲CNE 17及脂質體）。所有複製子RNA疫苗提供對鼻腔 R S V攻毒之保護作用，在5天後測量減少超過3個數量級之肺病毒載量。由1微克之複製子RNA調製成脂質體所產生之免疫反應之程度及保護力在由5xl〇6 VRP所誘發之反應的2倍以內。含明礬佐劑之三體次單位相較於此試驗中所測試之任何疫苗製劑誘發最高之總抗-F IgG ELISA力價、誘發最高之中和力價及誘發最高之程度對肺中RSV力價的保護作用。實施例7B - RSV-F免疫原性試驗（10-1 001) 表現RSV之表面融合糖蛋白（RSV-F)的A317複製子被用於本試驗.。BALB/c小鼠（每組10隻）於第0及21天給予表現,RSV-F 之 VRP (1 xl 06 IU)、裸自我複製之 RNA(A3 1 7，1 微克）、利用電穿孔遞送之自我複製之RN A (A3 17，10微克）、調製成脂質體之自我複製之RNA[RV01(01)，A317，0.1 微克或1微克）及以CNE17調製之自我複製之RNA(A317， -205- 201116294 0.1微克或1微克）的雙側肌肉內免疫注射（每隻腳50^^} 第14(2wpl)、35(2wp2)及49(4wp2)天收集血清以供抗體分析。第49(4wp2)天自每組5隻小鼠收集脾臟以供丁細胞分析結果表11 :第14天之F-專一性血清IgG力

GMT 198U | 1J731 --------------ΤσΓτ^1 僭㈣峨肌_麵後Η天，小鼠(每，隻)之F·專—飾。資料以刪小鼠之力廳每組1Q隻酬祕之節稍力綱示。若個腳物具有<25之力價(偵測限制），其以5之力價表示。 -206- 201116294 表12 :第35天之F-專一性血清IgG力價 1微克 A317 0.1微克 RV01(01) 1微克 RV01(01) 0.1微克 CNE17 1微克 CNE17 10微克 A317 + EP 1E6IU VRP 958 128208 227021 48079 8473 14612 813045 12518 191729 212911 17589 58556 22805 365485 4839 315786 303987 8522 12053 32156 961601 10128 218147 335071 10985 20395 24090 349215 18451 225622 155893 30801 51514 31053 297526 9805 182693 519162 13372 26348 18105 207652 19154 185342 169332 5137 80686 23918 1580066 4490 82744 489441 47173 21014 9091 900889 14674 190010 131361 78232 61076 21006 822285 15223 553164 254500 24135 25499 9835 587121 GMT 8532 201892 253687 20767 29111 19117 579033 表12。（10-1001)在第0及21天之肌肉內免疫後，小鼠(每組10隻)之F-專一性血清 IgG力價。第35(2wP2)天收集血清以供抗體分析。資料以個別小鼠之力價及每組10隻個別小鼠之幾何平均力價顯示。若個別動物具有<25之力價(偵測限制) ，其以5之力價表示。表13 :第49天之F-專一性血清IgG力價 1微克 A317 0.1微克 RV01(01) 1微克 RV01(01) 0.1微克 CNE17 1微克 CNE17 10微克 A317 + EP 1E6 IU VRP 1248 140407 133787 52747 34245 30388 366771 12441 155669 182995 29352 128030 20768 209400 4967 203059 211020 10857 17016 53763 360615 14536 134253 488698 28800 57250 28373 191475 31556 370726 158816 44613 76576 34318 139148 13815 184738 185184 20314 42357 35736 63839 20495 141644 103026 4546 101445 34611 192101 4800 76711 312096 27476 47285 10138 177858 19159 143275 139811 68386 55865 23958 130218 26836 479594 230331 24360 52871 13624 174378 | GMT 10947 177168 194350 24891 53615 25888 180420

表13。（10-1001)在第0及21天之肌肉內免疫後，小鼠侮組10隻)之F-專一性血清 IgG力價。第49(4wp2)天收集血清以供抗體分析。資料以個別小鼠之力價及每組10隻個別小鼠之幾何平均力價顯示。若個別動物具有<25之力價(偵測限制) ，其以5之力價表示。 -207- 201116294 A317， 1微克 RV01(01) 〇·1微克 RV01(01) 1微克 CNE17 〇·1微克 CNE17 1微克 VRP 1E6IU 2wp2 2wp2 2wp2 2wp2 2wp2 2wp2 ΝΑ 143 106 ΝΑ ΝΑ 265 ΝΑ 272 62 ΝΑ ΝΑ 73 ΝΑ 294 <40 ΝΑ ΝΑ 77 ΝΑ 814 334 ΝΑ ΝΑ 140 ΝΑ 67 86 ΝΑ ΝΑ 290 ΝΑ 420 125 ΝΑ ΝΑ 134 ΝΑ <40 566 ΝΑ ΝΑ 466 ΝΑ 104 292 ΝΑ ΝΑ 127 ΝΑ 241 <40 ΝΑ ΝΑ 75 ΝΑ 223 44 ΝΑ ΝΑ 77 GMT ΝΑ 176 96 ΝΑ ΝΑ 139 表14 :第35天之RSV血清中和力價表14 : (10-1001)在第〇及21天之肌肉內免疫後，小鼠(每組1〇隻)之RSV血清中和力價。第35(2wp2)天收集血清以供分析。資料以個別小鼠之60%病毒斑減少中和力價及每組1〇隻個別小鼠之幾何平均力價顯示。若個別動物具有<40之力價( 偵測限制），其以2〇之力價表示。NA=未檢測表15 :第49天之RSV血清中和力價 A317， 1微克 RV01(01) o.l微克 RV01(01) 1微克 CNE17 o.l微克 CNE17 1微克 VRP 1E6 IU 4wp2 4wp2 4wp2 4wp2 4wp2 4wp2 <40 194 82 <40 <40 161 <40 272 165 <40 70 64 <40 142 <40 <40 <40 126 <40 881 442 <40 76 151 <40 61 108 42 57 194 <40 426 156 52 <40 123 <40 78 814 <40 <40 1033 <40 <40 291 173 <40 174 <40 246 103 <40 <40 122 <40 574 396 <40 <40 76 [gmt <40 231 215 29 29 155 表15 : (10-1001)在第〇及21天之肌肉內免疫後，小鼠(每組10隻)之RSV血清中和力價。第49(4wp2)天收集血清以供分析。資料以個別小鼠之60%病毒斑減少中和力價及每組1〇隻個別小鼠之幾何平均力價顯示。若個別動物具有<40之力價( 偵測限制），其以2〇之力價表示。NA=未檢測 -208- 201116294

表16 :第49天之T細胞反應 4wp2脾CD4 T細胞反應 CD4+CD8-脾 T細胞：細胞介素陽性及對RSV FM-66肽具專一性之百分比 IFNg+ IL2+ IL5+ TNFa+ VRP 1E6IU 0.07 士 0.06 0.04 士 0.05 0.00 士 0.02 0.10 士 0.04 1微克A317 0.00 士 0.05 0.05 士 0.04 0.00 士 0.01 0.03 士 0.02 RV01(01) 1 微克 0.04 士 0.06 0.07 ± 0.05 0.00 土 0.01 0.09 士 0.03 RV01(01)0.1 微克 0.06 土 0.05 0.08 土 0.04 0.00 土 0.01 0.10 土 0.03 CNE17 1微克 0.00 土 0.05 0.04 土 0.04 0.00 土 0.01 0.05 士 0.02 CNE17 0.1 微克 0.00 ± 0.05 0.02 士 0.04 0.00 士 0.01 0.02 土 0.02 10 微克 VA317 + EP 0.02 士 0.06 0.04 土 0.04 0.01 土 0.01 0.05 士 0.03 mi：〆k、N 0.04 土 0.06 0.00 dr 0.05 0.00 士 0.02 0.00 土 0.01 表16。（10-1001)第49(4wP2)天RSV F專一性CD4+脾T細胞之頻率。顯示淨(抗原專一性)細胞介素陽性頻率(％)±95%信賴半區間。以粗體顯示之淨頻率表示統計學上顯著> 〇之刺激反應。表17 :第49天之T細胞反應 4wp2脾CD8 T細胞 CD8+CD4-脾T細胞：細胞介 F249-258具裹素陽性及對RSV F肽類F85-93及 :一性之百分比反應 IFNg+ IL2+ IL5+ TNFa+ VRP 1E6IU 3.48 土 0.29 1.21 士 0.18 -0.03 士 0.05 3.31 士 0.28 1微克A317 0.74 土 0.15 0.46 ± 0.11 -0.03 土 0.04 0.70 士 0.14 RV01(01) 1 微克 3.69 土 0.28 1.43 土 0.18 -0.01 士 0.04 3.44 士 0.27 RV01(01)0_1 微克 2.52 土 0.23 1.10 士 0.15 0.03 士 0.03 2.31 士 0.22 CNE17 1微克 1.25 土 0.17 0.60 土 0.12 0.01 土 0.03 1.15 土 0.16 CNE17 0.1 微克 0.89 士 0.15 0.49 ± 0.11 -0.03 士 0.04 0.83 土 0.14 10 微克 A317 + EP 0.85 土 0.15 0.53 ± 0.11 0.01 土 0.04 0.7?, + 0.15 Μ 0.01 土 0.07 0.00 士 0.05 -0.02 士 0.05 0.02 士 _ 一 0.06 表17。（10-1001)第49(4wP2)天RSV F專一性〇38+脾7細胞之頻率。顯示淨(抗原專一性)細胞介素陽性頻率(％)±95%信賴半區間。以粗體顯示之淨頻率表示統計學上顯著>〇之刺激反應。 -209- 201116294 結論脂質體調製劑相較於裸RNA對照組顯著增進免疫原性，如F-專一性IgG力價（增加8-30倍）、中和力價及CD4及 CD8 T細胞反應增加所示。意外的是，〇.1及1·〇微克劑量之RV01(01)的F-專一性IgG力價及中和力價與VRP(lxl06 IU)相等。較高劑量之LNP調製劑所引起的T細胞反應與 VRP(lxl06 IU)相等。自我複製之RNA與CNE17之調製劑相較於裸RNA對照組顯著增進免疫原性，如F-專一性IgG力價（增加2-5倍）、中和力價及CD4及CD8 T細胞反應增加所示。RNA之電穿孔相較於裸RNA對照組增進免疫原性，但是顯著低於脂質體遞送。實施例7C - RSV-F免疫原性試驗（10-1018) 表現RSV之表面融合糖蛋白（RSV-F)的A317複製子被用於本試驗。BALB/c小鼠（每組8隻）於第0及21天給予表現 RSV-F 之 VRP(lxl06 IU)、裸自我複製之 RNA(A306，1' 0.1 、0.01微克）及利用方法1調製成脂質體之自我複製之RNA (RV01(01)，A317，10_0、1.0、0.1、0_01 微克）的雙側肌肉內免疫注射（每隻腳50微升）》第14(2wpl)及（2wp2)天收集血清以供抗體分析。第49(4wp2)天自每組5隻小鼠收集脾臟以供T細胞分析。結果 RV01(01)脂質體調製劑之Z平均粒子直徑爲158奈米， -210- 201116294 多分散指數爲〇_14，包覆效率爲96%。第I4及35天之F -專 —性血清IgG力價顯示於表18及19，第49天之T細胞反應顯示於表20及21。表18 :第14及35天之F-專一性血清IgG力價 VRP A317 1E6IU 11 o.l微克 0.01^ 烫克 2wpl 2wp2 2wpl 2wp2 2wpl 2wp2 2wpl 2wp2 6334 39539 772 4687 5 2334 143 1377 1500 14895 5 142 5 161 5 333 5450 38252 109 2972 5 145 5 5 1835 12831 5 3674 5 97 5 5 2277 30326 5 5003 5 1077 5 175 2818 33437 663 8258 221 457 5 5 2405 22551 257 845 5 1558 5 456 2137 19179 5 1765 5 5 5 180 GMT 2735 24427 41 2144 8 259 8 73

表18 : (10-1018)在第0及21天之肌肉內免疫後，小鼠(每組8隻)之F-專一性血清 IgG力價。第14(2wpl)及35(2wP2)天收集血清以供抗體分析。資料以個別小鼠及每組8隻個別棉鼠之幾何平均力價顯示。若個別動物具有<25之力價(偵測限制），其以5之力價表示。 -211 - 201116294 表19 :第14及35天之F-專一性血清IgG力價 RV 9K01) 10微克 1微克 0.1微克 0.01微克 2wpl 2wp2 2wpl 2wp2 2wpl 2wp2 2wpl 2wp2 5880 82689 7255 45018 4072 22174 619 2872 6126 42529 3009 22288 3974 27730 474 3603 8069 76263 5385 23561 3272 15328 914 2692 5966 108234 4148 53675 3968 24456 2011 11542 8590 57912 4210 37004 4950 13014 903 4684 7172 74162 2179 24179 2856 13694 1575 6720 8072 122796 1640 5994 4073 17849 438 16514 8706 83601 5725 28760 3797 17342 1058 13665 GMT 7235 77338 3783 25790 3826 18325 879 6235 表19 :接續23A。（10-1018)在第0及21天之肌肉內免疫後’小鼠(每組8隻)之F-專一性血清IgG力價。第14(2wpl)及35(2wp2)天收集血清以供抗體分析。資料以個別動物及每組8隻個別棉鼠之幾何平均力價(GMT)顯示。若個別動物具有 <25之力價(偵測限制），其以5之力價表示。表20 :第49天之T細胞反應 4wp2脾T細胞反應 CD4+CD8-脾Τ細胞 :細胞介素陽性及對RSVF51-66肽具專 —性之百分比 IFNg+ IL2+ IL5+ TNFa+ VRP 1E6 IU 0.00 ±0.02 0.07 ±0.02 0.00 ± 0.01 0.07 士 0.03 1微克A317 0.01 ±0.01 0.03 ± 0.02 0.00 ± 0.01 0.03 士 0.02 0.1 微克 A317 0.00 ± 0_01 0.01 ±0.01 0.00 ± 0_00 0.01 士 0.01 〇·〇1微克 A317 0.00 ±0.00 0.01 ± 0.01 0.01 ±0.01 0.00 士 0.01 RVOl(Ol), 10微克 0.02 ±0.01 0.05 士 0.02 0.00 ±0.00 0.06 士 0.02 RV01(01), 1微克 0.03 ±0.02 0.08 ±0.02 0.00 ±0.01 0.09 土 0.02 RV01(01), 0.1微克 0.02 ±0.01 0.03 ±0.01 0.00 ±0.01 0.03 土 0.02 RV01(01), 0.01微克 0.00 ±0.00 0.02 ±0.02 0.01 ± 0.01 0.02 土 0.02 4rrt. Μ 0.00 ±0.00 0.00 ±0.01 0.00 ± 0.01 0.01 土 0.01 表20。第49(試驗ΙΟ-lOlMwp2)天RSV F專一性CDO脾τ細胞之頻率。顯示淨( 抗原專一性)細胞介素陽性頻率(％)±95%信賴半區間。以粗體顯示之淨頻率表示統計學上顯著>〇之刺激反應。 -212- 201116294 表21 :第49天之T細胞反應 4wp2脾T細胞反應 CD8+CD4-脾T細胞：細胞介素陽性及對RSVF肽類F85-93及 F249-258具專一性之百分比 IFNg+ IL2+ IL5+ TNFa+ VRP 1E6 IU 2.45 士 0.21 0.58 土 0.10 0.00 士 0.01 2.64 土 0.21 1微克A317 1.68 士 0.17 0.45 土 0.09 0.00 士 0.02 1.75 土 0.18 0.1微克 A317 0.21 士 0.07 0.08 士 0.04 0.01 士 0.02 0.30 土 0.08 0.01微克 A317 0.06 士 0.05 0.05 士 0.03 0.01 士 0.02 0.16 土 0.06 RV01(01), 10微克 3.32 土 0.23 0.69 土 0.11 0.00 士 0.02 3.90 土 0.25 RV01(01), 1微克 1.81 土 0.17 0.59 土 0.10 0.00 土 0.02 2.04 土 0.20 RV01(01), 0.1微克 0.91 士 0.12 0.32 士 0.07 0.00 士 0.01 1.06 土 0.14 RV01(01), 〇_〇1微克 0.58 士 0.10 0.33 土 0.08 0.00 士 0.01 0.64 土 0.11 無 0.01 土 0.02 0.01 土 0.01 0.00 士 0.01 0.00 土 0.05

表21。第49(試驗10-1018,4wp2)天F專一性脾CD8+ Τ細胞之頻率。顯示淨(抗原專一性)細胞介素陽性頻率(％)±95%信賴半區間。以粗體顯示之淨頻率表示統計學上顯著> 〇之刺激反應。結論脂質體調製劑相較於裸RNA對照組顯著增進免疫原性，如F -專一性I g G力價及T細胞頻率增加所示。R V 〇 1 (〇 1 )之 1 〇微克RN A劑量的F -專一性I g G力價及c D 8 T細胞頻率相較於 VRP 組（lxlO6 IU)增加。【圖式簡單說明】圖1爲野生型R s V F (圖1 A)及其中跨膜結構域及細胞質尾已被移除且在C端加上可任意選擇之HIS 6-標記之胞外域

建構物（FIG 1B)之圖示。明白地說，殘基編號係與始於N 端信號肽之野生型A2株RSV F有關且在含有胺基酸刪除之 -213- 201116294

建構物中不被改變。圖中標示的是信號序列或信號肽（sp) 。圖1 A係RSV F蛋白之簡圖，該圖顯示信號序列或信號肽 (SP)、p27連接子區域、融合肽（FP)、HRA結構域（HRA)、 HRB結構域（HRB)、跨膜區（TM)及細胞質尾（CT)。該胞外域之C端邊界可以不同。圖1B係RSV F胞外域建構物之一般示意圖，描繪與圖1A之示意圖共享之特徵且包括可任意選擇之HIS6-標記（HIS TAG)。三呋喃基二氫咪唑切割未點係存在於胺基酸位置109/110及13 6/ 137處。圖1C亦顯示 RSV F(野生型）之胺基酸1 00- 1 5 0(SEQ ID NO:108)及數種蛋白質（Furmt-SEQ ID NO:3; Furdel-SEQ ID NO:4; Furx-SEQ ID NO:6; Furx R113Q, K123N, K124N-SEQ ID NO:5; Furx R113Q, K123Q, K124Q-SEQ ID NO:92; Delp21 furx-SEQ ID NO:7; Delp23 furx-SEQ ID NO:8; Delp23 furdel-SEQ ID NO:9; N-端三呋喃基二氫咪唑- SEQ ID NO:10; C-端三呋喃基二氫咪唑- SEQ ID NO:ll ;融合肽刪除1-SEQ ID NO:12;及因子Xa-SEQ ID NO:13)之胺基酸序列，其中該 —或二個三呋喃基二氫咪唑切割位點及/或融合肽區域係經突變或刪除。在圖1 c中，符號“”表示在該位置之胺基酸係經刪除。圖2顯示RSV F (野生型）自胺基酸位置48 8至TM區起始處之羧基端（SEQ ID NO:94)及數種包含添加之蛋白酶切割位點之蛋白（SEQ ID NOS:95-100)的胺基酸序列。在圖2中，符號表示在該位置無胺基酸。圖3係層析圖及電泳膠體之圖片顯示RSV F單體（3)利 -214- 201116294 用大小排除層析之純化。圖 4A至 4F顯示編碼 PT7-TC83R-FL.RSVF(A317)自我複製之RNA分子之質體的核苷酸序列（SEQ ID NO:101)’ 該RNA分子編碼呼吸道合胞病毒F糖蛋白（RSV-F)。編碼 RSV-F之核苷酸序列係以畫底線表示。圖5係來自數株RSV之F蛋白的胺基酸序列之排比。該

排比係利用.Corpet，Nucleic Acids Research，1998，16(22): 10881-10890所揭示之演算法準備，使用內建參數 (Blossum 62符號比較表、空位開放罰分：12、空位延伸罰分：A2，A2 株（登錄號 AF035006)之 F蛋白（SEQ ID NO:102) ;CP52，CP52 株（登錄號 AFO 1 325 5)之 F 蛋白（SEQ ID NO:1〇3) ; B，B 株（登錄號 AF0 1 3 2 54)之 F 蛋白（SEQ ID NO:1〇4); long，長株（登錄號 AY911262)之 F蛋白（SEQ ID N Ο··1〇5)，及 18537 株，18537 株（登錄號 Swiss Prot P13843) 之F蛋白（SEQ ID NO: 106)。亦顯示F蛋白共識序列（SEQ ID NO: 1 07)。圖6顯示來自經選擇之RSV F抗原純化的大小排除 (SEC)層析圖之重要區域。含有所示抗原之主要波峰係以星號標示，Superdex P200 1 6/60管柱（GE醫療集團）之滯留時間係以毫升顯示。在經校正之管柱中，該4*7毫升、65毫升及7 7毫升之大約滯留時間分別對應管柱空體積、R S V F 三體之滞留及RSV F單體之滯留。在圖6A中，該未經切割之Delp23 Furdel(Ap23 Furdel)建構物係自大約77毫升之單體波峰純化。當該未經切割之Delp23 Furdel RSV F抗原 -215- 201116294 經胰蛋白酶處理，該蛋白可形成玫瑰花簇，該玫瑰花簇現在在SEC上移動至大約47毫升之空體積的（圖6B)。該RSVF 融合肽刪除之經切割之三體蛋白係自大約65毫升滯留時間之三體波峰純化（圖6C)，然而該未經切割之Delp21 Furx建構物（△ p2 1 Furx)係自大約77毫升之單體波峰純化（圖6D) 〇圖7顯示經選擇之RSV F抗原之代表性EM圖片。圖7A 顯示RSV F Δρ23(ϋ6ΐρ23)在胰蛋白酶處理前之EM圖片。在圖7Α中之拐杖形狀，與融合後三體構型一致，不一定總是可在未經切割之^?23(〇61?23)?111*(^1建構物中觀察到》當該△ p23(Delp23)Furdel建構物係經胰蛋白酶處理，自 SEC管柱之空體積中純化並在EM下觀察時，該蛋白被發現具有經適應之玫瑰花簇構型（圖7B)。當該RSV F融合肽刪除建構物係自SEC管柱之三體波峰純化，觀察到與融合後三體一致之單分散之拐杖形狀（圖7C)。圖7D所顯示的是△ p21 (Delp21) furx RSV F(標示爲單體）、融合肽刪除RSV F(標示三體之二行）及經純化之RSV F玫瑰花簇（標示爲玫瑰花簇）之三種製劑。該膠體包含數行GE全系列標準物（分子量標準物係標示於膠體左側），RSV F片段之大約滯留時間係顯示於膠體右側。圖8A至8C顯示RSV F胞外域多肽之單體（未經切割之 △ p2 1(Delp2 1)furx)、三體之玫瑰花簇（經切割之△ p23 (D elp2 3) Fur del)及三體（融合肽刪除）對棉鼠具免疫原性。抗-RSV F IgG及中和抗-RSV抗體之血清力價係於第—次免 -216- 201116294 疫接種後2周（2wpl)、第一次免疫接種後3周（3wpl)及/或第二次免疫接種後2周（2 wp2)測量。其他參考文獻下列參考文獻以參照方式就彼等所揭示之整體納入此處。 1. Fields Virology. 4th edition, 2001.

2. Snell et al (1997) Virus Genes 14:63-72. 3. Bembridge et al (1999) J Virol 73: 10086-10094. 4. Li ¢/^/. (1998)7^^^ 188:681-688 5. US Patent No. 6,060,308. 6. Yin et al. (2006) Nature 439:38-45. 7. Kim et al (2007) JMed Virol 79: 820-828. 3. TmetaL (2005) Proc Natl Acad Sci USA. 102(26):9288-93. 9. Chen et al. (2004) J Virol 78:4508-16. 10. Yang et at. (2002) J Virol 76:4634-42. 11. Harbury et al (1993) Science 262:140M407. 12. Stevens et al (2004) Science 303:1866-70. 13. Burkhard et al (2001) Trends Cell Biol 11:82-88. 14. Section 5.5.2 of Proteins by Creighton (ISBN 0-7167-2317-4). 15. Yu (2002) Adv Drug Deliv Rev 54:1113-1129. 16. Muller et al. (2000) Methods Enzymol 328:261-282. 17. Beck & Brodsky (199S) J Struct Biol 122:17-29. 18. Lupas (1996) Trends Biochem Sci 21:375-382. 19. Adamson et al. (1993) Curr Opin Biotechnol 4:428-347. 20. Kammcrtr (1991) Matrix Biol 15:555-568. 21. Chao et al. (\99S) JChromatog B BiomedSci715:307-329. 22. Arndt et al (2002) Structure 10:1235-1248. -217- 201116294 23. Liu & Lu (2002)75/0/ Chem 277:48708-48713. 24. W02006/011060. 25. Section 5.5.3 of Proteins by Creighton (ISBN 0-7167-2317-4). 26. Zhang & Chen (1999) JBiol Chem 274:22409-22413. 27. Slovic e/ a/. (2003) Protein Sci 12:337-348 28. Gardner & Dutch (2007) J Virol 8 1:8303-14. 29. Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th edition, ISBN: 0683306472. 30. Nony et al (2001) Vaccine 27:3645-51. 31. Greenbaum et al. (2004) Vaccine 22:2566-77.

32. Zurbriggen et al. (2003) Expert Rev Vaccines 2:295-304. 33. Piascik (2003) JAm Pharm Assoc (Wash DC). 43:728-30. 34. Mann et al (2004) Vaccine 22:2425-9. 35. Halperin et al {1919) Am J Public Health 69:1247-50. 36. Herberts a/. (1979) J Infect Dis 140:234-8. 37. Chen et al (2003) Vaccine 21:2830-6. 38. US Patent No.6355271. 39. WOOO/23105. 40. US Patent No. 5,057,540. 41. W096/33739.

42. EP-A-0109942. 43. W096/11711. 44. WO00/07621. 45. Barr et al. (1998) Advanced Drug Delivery Reviews 32:247-271. 46· Sjolanderet ei a/. (1998) Drug Z)e//ve/>» 32:321-338. -218- 201116294 47. Pizza et al (2000) Int J Med Microbiol 290:455-461. 48. W095/17211. 49. W098/42375. 50. Singh et al (2001) J Cont Release 70:267-276. 51. WO99/27960. 52. US Patent No. 6,090,406. 53. US Patent No. 5,916,588. 54. EP-A-0626169. 55. W099/52549.

56. W001/21207. 57. WOOl/21152. 58. Dyakonova et ah (2004) Int Immunopharmacol 4(13):1615-23. 59. FR-2859633. 60. Signorelli & Hadden (2003) Int Immunopharmacol 3(8): 1177-86. 61. W02004/064715. 62. De Libero et al, (2005) Nature Reviews Immunology 5:485-496 63. US Patent N〇.5,936,076. 64. Old et al, J Clin Investig, 113:1631 -1640 65. US2005/0192248 66. Yang et al. {200A)Angew Chem //7/^43:3818-3822 67. W02005/102049. 68. Goffet et al {2Q0A)Am Chem Soc 126:13602-13603 69. WO03/105769. 70. Cooper (1995) Pharm Biotechnol 6:559-80. 201116294 71. WO90/14837. 72. Podda & Del Giudice (2003) Expert Rev Vaccines 2:197-203. 73. Podda(2001) Vaccine 19: 2673-2680. 74. Vaccine Desist: The Subunit and Adjuvant Approach (eds. Powell & Newman) Plenum Press 1995 (ISBN 0-306-44867-X). 75. Vaccine Adjuvants: Preparation Methods and Research Protocols (Volume 42 οϊMethods in Molecular Medicine series). ISBN: 1-59259-083-7. Ed. Oliagan. 76. Allison & Byars (1992) Res Immunol 143:519-25. 77. Hariharan et aL (1995) Cancer Res 55:3486-9. 78. W095/1 1700.

79. US Patent No.6,080,725. 80. W02005/0971 81. 81. Tassignon et aL (2005) JImmunol Meth 305:188-98. 82. Myers et aL (1990) pages 145-156 of Cellular and molecular aspects of endotoxin reactions. 83. Ulrich (2000) Chapter 16 (pages 273-282) of reference 75. 84. Johnson et aL (1999) J Med Chem 42:4640-9. 85. Baldrick et aL (2002) Regulatory Toxicol Pharmacol 35:398-413. 86. US Patent No. 4,680,338. 87. US Patent No. 4,988,815.

88· W092/15582. 89. Stanley (2002) Clin Exp Dermatol 27:57 1-577. 90. Wu etal (2〇m) Antiviral Res. 64(2):79-83. 91. Vasilakos et aL (2000) Cell Immunol 204(1):64-74. -220- 201116294 92. US Patent Nos. 4689338, 4929624, 5238944, 5266575, 5268376, 5346905， 5352784, 5389640, 5395937, 5482936, 5494916, 5525612,6083505, 6440992, 6627640, 6664264, 6664265, 6667312, 6677347, 6677348,6677349, 6683088, 6703402, 6743920, 6800624, 6809203, 6888000, and 6924293. 93. Jones (2003) Curr Opin Investig Drugs 4:214-218. 94. W02004/060308. 95. W02004/064759. 96. US Patent No. 6,924,271. 97. US2005/0070556. 98. US Patent No. 5,658,731.

99. US Patent No. 5,011,828. 100. W02004/87 153. 101. US Patent No. 6,605,617. 102. WO02/18383. 103. W02004/018455. 104. WO03/082272. 105. W02006/002422. 106. Johnson et al. (1999) BioorgMed Chem Lett 9:2273-2278. 107. Evans et aL (2003) Expert Rev Vaccines 2:219-229. 108. Andrianov et aL (1998) Biomaterials 19:109-115. 109. Payne et aL (1998) Adv Drug Delivery Review 31:185-196. 110. Thompson et aL (2003) Methods in Molecular Medicine 94:255-266. 111. Kandimalla et al. (2003) Nucleic Acids Research 31:2393-2400. 112. WO02/26757. 113. W099/62923. #«： a -221 - 201116294 114. Krieg (2003) Nature Medicine 9:831-835. 115. McCIuskie et ah (2002) FEMS Immunology and Medical Microbiology 32:179-185· 116. W098/40100. 117. US Patent No. 6,207,646. 118. US Patent No. 6,239,116. 119. US Patent No. 6,429,199. 120. Kandimalla et al (2003) Biochemical Society Transactions 31 (part 3): 654-658. 121. Blackwell et al. (2003) JImmunol 170:4061-4068.

122. Krieg (2002) Trends Immunol 23:64-65. 123. WOOl/95935. 124. Kandimalla et al (2003) BBRC 306:948-953. 125. Bhagat et al (2003) BBRC 300:853-861. 126. WO03/035836. 127. WOOl/22972. 128. Thompson et aL (2005) JLeukoc Biol 78: *The low-toxicity versions of LPS, MPL® adjuvant and RC529, are efficient adjuvants for CD4+ T cells’· 129. UK patent application GB-A-22202 11. 130. W094/21292.

131· W094/00153. 132. WO95/17210. 133. W096/26741. 134. WO93/19780. 135. W003/011223. 136. Meraldi etal (2003) Vaccine 21:2485-249 1. 137. Pajak etal (2003) Vaccine 21:836-842. 138. US Patent No. 6,586,409. 139. Wong et aL (2003) J Clin Pharmacol 43(7):735-42. 140. US2005/0215517. -222- 201116294 此處引述之所有文獻的整體揭示藉此以參照方式納入此處。

-223- 201116294 序列表 <11〇>諾華股份有限公司 <120>呼吸道合胞病毒(RSV)F蛋白組成物及製造彼之方法 <140:> TW 099123300 <141:> 2010-07-15 <150：> US 61/294,426 <151;> 2010-01-12 <150> US 61/225,805 <151> 2009-07-15 <160> 112 <170> Patent In 版本 3.5

<210> 1 <211> 574 <212〉 PRT <213>人呼吸道合胞病毒 <400> 1

Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60

Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 80

Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

Met Gin Ser Thr Pro Pro Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro 100 105 110

Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr 115 120 125

Leu Ser Lys Lys Arg Lys Arg Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140

Gly Ser Ala lie Ala Ser Gly Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu 145 150 155 160

Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175

Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190 201116294

Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie Asp Lys Gin Leu Leu Pro lie Val Asn 195 200 205

Lys Gin Ser Cys Ser lie Ser Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin 210 215 220

Gin Lys Asn Asa Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240

Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu 245 250 255

Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320

Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335

Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350

Pro Gin Ala Glu Thr Cys Lys Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp 355 360 365

Thr Met Asn Ser Leu Tlir Leu Pro Ser Glu lie Asn Leu Cys Asn Val 370 375 380

Asp lie Phe Asn Pro Lys Tyr Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr 385 390 395 400

Asp Val Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys 405 410 415

Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430

Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Met Asp 435 440 445

Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly 450 455 460

Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro 465 470 475 480

Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser He Ser Gin Val Asn 485 490 495 201116294

Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu Leu 500 505 510

Leu His Asn Val Asn Ala Gly Lys Ser Thr Thr Asn He Met lie Thr 515 520 525

Thr He lie lie Val lie lie Val lie Leu Leu Ser Leu lie Ala Val :530 535 540

Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Arg Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser 545 550 555 560

Lys Asp Gin Leu Ser Gly lie Asn Asn lie Ala Phe Ser Asn 565 570

<210> 2 <211> 574 <212> PRT <213>·人呼吸道合胞病毒 <400> 2

Met Glu Leu Leu He His Arg Ser Ser Ala lie Phe Leu Thr Leu Ala 15 10 15

Val Asn Ala Leu Tyr Leu Thr Ser Ser Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Arg Gly Tyr Phe Ser Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60

Lys Glu Thr Lys Cys Asn Gly Thr Asp Thr Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 80

Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

Met Gin Asn Thr Pro Ala Ala Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Ala Pro 100 105 110

Gin Tyr Met Asn Tyr Thr lie Asn Thr Thr Lys Asn Leu Asn Val Ser 115 120 125 lie Ser Lys Lys Arg Lys Arg Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140

Gly Ser Ala lie Ala Ser Gly He Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu 145 150 155 160

Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Asn Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175

Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie Asn Asn Arg Leu Leu Pro He Val Asn 195 200 205

Gin Gin Ser Cys Arg lie Ser Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin 210 215 220

Gin Met Asn Ser Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240

Ala Gly Val Thr Thr Pro Leu Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu 245 250 255

Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Ser Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300 lie Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320

Leu Cys Thr Thr Asn lie Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335

Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350

Pro Gin Ala Asp Thr Cys Lys Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp 355 360 365

Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu Val Ser Leu Cys Asn Thr 370 375 380

Asp lie Phe Asn Ser Lys Tyr Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr 385 390 395 400

Asp lie Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys 405 410 415

Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430

Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445

Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Leu Glu Gly 450 455 460

Lys Asn Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Tyr Tyr Asp Pro 465 470 475 480

Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn 485 490 495

-4 - 201116294

Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Arg Ser Asp Glu Leu 500 505 510

Leu His Asn Val Asn Thr Gly Lys Ser Thr Thr Asn lie Met lie Thr 515 520 525

Thr lie lie lie Val lie lie Val Val Leu Leu Ser Leu lie Ala He 530 535 540

Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Lys Asn Thr Pro Val Thr Leu Ser 545 550 555 560

Lys Asp Gin Leu Ser Gly lie Asn Asn lie Ala Phe Ser Lys 565 570

<210> 3 <211> 51 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400〉 3

Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Lys Glu Leu Pro Arg Phe Met 15 10 15

Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr Leu Ser Lys 20 25 30

Lys Arg Lys Lys Lys Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val Gly Ser Ala 35 40 45

He Ala Ser 50 <210〉 4 <211> 48

•<212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 4

Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Gin Glu Leu Pro Arg Phe Met 15 10 15

Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr Leu Ser Lys 20 25 30

Lys Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val Gly Ser Ala lie Ala Ser 35 40 45 <210> .5 <211> 51 <212> PRT <213>人工序列 201116294 人工序列說明：合成性多肽 <400> 5

Thr Pro Ala Thr Asn Asn Gin Ala Gin Asn Glu Leu Pro Gin Phe Met 15 10 15

Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Asn Asn Thr Asn Val Thr Leu Ser Gin 20 25 30

Asn Gin Asn Gin Asn Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val Gly Ser Ala 35 40 45 lie Ala Ser 50 <210〉 6 <211> 51 <212> PRT <213>人工序列

<220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 6

Thr Pro Ala Thr Asn Asn Gin Ala Gin Asn Glu Leu Pro Arg Phe Met 15 10 15

Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr Leu Ser Gin 20 25 30

Asn Gin Asn Gin Asn Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val Gly Ser Ala 35 40 45 lie Ala Ser 50

<210> 7 <211> 30 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 7

Thr Pro Ala Thr Asn Asn Gin Ala Gin Asn Gin Asn Gin Asn Gin Asn 15 10 15

Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val Gly Ser Ala lie Ala Ser 20 25 30 <210> 8 <211> 28 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性肽 <400> 8 201116294

Thr Pro Ala Thr Asn Asn Gin Ala Gin Asn Gin Asn Gin Asn Phe Leu 15 10 15

Gly Phe Leu Leu Gly Val Gly Ser Ala lie Ala Ser 20 25 <210> 9 <211> 28 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性肽 <400:> 9

Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Gin Gin Gin Gin Arg Phe Leu 15 10 15

Gly Phe Leu Leu Gly Val Gly Ser Ala lie Ala Ser 20 25

<210> 10 <211> 51 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 10

Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro Gin Phe Met 15 10 15

Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Gin Gin Thr Asn Val Thr Leu Ser Gin 20 25 30

<211> 51 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 11

Thr Pro Ala Thr Asn Asn Gin Ala Gin Asn Glu Leu Pro Gin Phe Met 15 10 15

Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Gin Gin Thr Asn Val Thr Leu Ser Lys 20 25 30

Lys Arg Lys Arg Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val Gly Ser Ala 35 40 45 lie Ala Ser 201116294 50 <210> 12 <211> 42 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 12

Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro Arg Phe Met 15 10 15

Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr Leu Ser Lys 20 25 30

Lys Arg Lys Arg Arg Ser Ala lie Ala Ser 35 40 <210> 13 <211> 51 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 13

Thr Pro Ala Thr Asn Asn lie Glu Gly Arg Glu Leu Pro Arg Phe Met 15 10 15

Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr Leu Ser Lys 20 25 30

Lys lie Glu Gly Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val Gly Ser Ala 35 40 45 lie Ala Ser 50 <210> 14 <211> 64 <212〉 PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明··合成性多肽 <400> 14

Pro Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val 15 10 15

Asn Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu 20 25 30

Leu Leu His Asn Val Asn Asp Lys lie Glu Glu lie Leu Ser Lys lie 35 40 45

Tyr His lie Glu Asn Glu lie Ala Arg lie Lys Lys Leu He Gly Glu 50 55 60 201116294 <210> 15 <211〉 60 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 15

Pro Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val 15 10 15

Asn Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu 20 25 30

Leu Leu His Asn Val Asn Glu Lys Phe His Gin lie Glu Lys Glu Phe 35 40 45

Ser Glu Val Glu Gly Arg lie Gin Asp Leu Glu Lys 50 55 60 <210> 16 <211> 38 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 16

Pro Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin lie 15 10 15

Asn Glu Lys lie Asn Gin lie Leu Ala Phe lie Arg Lys lie Asp Glu 20 25 30

Leu Leu His Asn lie Asn 35

<210> 17 <211> 67 <212> PRT <213>人工序列人工序列說明：合成性多肽 <400> 17

Pro Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val 15 10 15

Asn Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu 20 25 30

Leu Leu His Asn Val Asn Gly Ser Gly Tyr lie Pro Glu Ala Pro Arg 35 40 45

Asp Gly Gin Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser 50 55 60 5 201116294

Thr Phe Leu 65 <210> 18 <211> 73 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 18

Pro Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val 15 10 15

Asn Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu 20 25 30

Leu Leu His Asn Val Asn Asn Lys Asn Asp Asp Lys Gly Ser Gly Tyr 35 40 45

lie Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gin Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly 50 55 60

Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu 65 70 <210> 19 <211> 29 <212> PRT <213>未知 <220> <223>未知說明：趣菌體T4纖維蛋白序列 <400> 19

Gly Ser Gly Tyr lie Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gin Ala Tyr Val 15 10 15

Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu

20 25 <210> 20 <211> 31 <212> PRT <213>人工序列 <220> * <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 20

Lys Gin lie Glu Asp Lys lie Glu Glu lie Leu Ser Lys lie Tyr His 15 10 15 lie Glu Asn Glu lie Ala Arg lie Lys Lys Leu lie Gly Glu Ala 20 25 30

<210> 21 <211> 574 <212> PRT <213>人呼吸道合胞病毒 201116294 <400> 21

Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60

Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 80

Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

Met Gin Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro 100 105 110

Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr 115 120 125

Leu Ser Lys Lys Arg Lys Arg Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140

Gly Ser Ala lie Ala Ser Gly Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu 145 150 155 160

Glu Gly Glu Val Asn Lys He Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175

Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190

Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie Asp Lys Gin Leu Leu Pro lie Val Asn 195 200 205

Lys Gin Ser Cys Ser lie Ser Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin 210 215 220

Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240

Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu 245 250 255

Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro -11 - 201116294 290 295 300

Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320

Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335

Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350

Pro Gin Ala Glu Thr Cys Lys Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp 355 360 365

Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu Val Asn Leu Cys Asn Val 370 375 380

Asp lie Phe Asn Pro Lys Tyr Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr 385 390 395 400

Asp Val Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys 405 410 415

Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430

Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445

Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly 450 455 460

Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro 465 470 475 480

Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn 485 490 495

Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu Leu 500 505 510

Leu His Asn Val Asn Ala Gly Lys Ser Thr Thr Asn lie Met lie Thr 515 520 525

Thr lie lie lie Val lie lie Val lie Leu Leu Ser Leu lie Ala Val 530 535 540

Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Arg Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser 545 550 555 560

Lys Asp Gin Leu Ser Gly lie Asn Asn lie Ala Phe Ser Asn 565 570

<210> 22 <211> 1727 <212> DNA <213>人呼吸道合胞病毒

-12 -

201116294 <400> 22 atggaactgc tgatcctgaa ggccaacgcc atcaccacca tcctgaccgc cgtgaccttc tgcttcgcca gcggccagaa catcaccgag gaattctacc agagcacctg cagcgccgtg agcaagggct acctgagcgc cctgcggacc ggctggtaca ccagcgtgat caccatcgag ctgtccaaca tcaaagaaaa caagtgcaac ggcaccgacg ccaaggtgaa actgatcaag caggaactgg acaagtacaa gaacgccgtg accgagctgc agctgctgat gcagagcacc cccgccacca acaaccgggc cagaagagag ctgccccggt tcatgaacta caccctgaac aacgccaaga aaaccaacgt gaccctgagc aagaagcgga agcggcggtt cctgggcttc ctgctgggcg tgggcagcgc catcgccagc ggggtggccg tgtccaaggt gctgcacctg gaaggcgagg tgaacaagat caagtccgcc ctgctgtcca ccaacaaggc cgtggtgtcc ctgagcaacg gcgtgagcgt gctgaccagc aaggtgctgg atctgaagaa ctacatcgac aagcagctgc tgcccatcgt gaacaagcag agctgcagca tcagcaacat cgagaccgtg atcgagttcc agcagaagaa caaccggctg ctggaaatca cccgggagtt cagcgtgaac gccggcgtga ccacccccgt gagcacctac atgctgacca acagcgagct gctgtccctg atcaatgaca tgcccatcac caacgaccag aaaaagctga tgagcaacaa cgtgcagatc gtgcggcagc agagctactc catcatgagc atcatcaaag aagaggtgct ggcctacgtg gtgcagctgc ccctgtacgg cgtgatcgac accccctgct ggaagctgca caccagcccc ctgtgcacca ccaacaccaa agagggcagc aacatctgcc tgacccggac cgaccggggc tggtactgcg acaacgccgg cagcgtgagc ttcttccccc aagccgagac ctgcaaggtg cagagcaacc gggtgttctg cgacaccatg aacagcctga ccctgccctc cgaggtgaac ctgtgcaacg tggacatctt caaccccaag tacgactgca agatcatgac ctccaagacc gacgtgagca gctccgtgat cacctccctg ggcgccatcg tgagctgcta cggcaagacc aagtgcaccg ccagcaacaa gaaccggggc atcatcaaga ccttcagcaa cggctgcgac tacgtgagca acaagggcgt ggacaccgtg agcgtgggca acacactgta ctacgtgaat aagcaggaag gcaagagcct gtacgtgaag ggcgagccca tcatcaactt ctacgacccc ctggtgttcc ccagcgacga gttcgacgcc agcatcagcc aggtcaacga gaagatcaac cagagcctgg ccttcatccg gaagagcgac gagctgctgc acaatgtgaa tgccggcaag agcaccacca atatcatgat caccacaatc atcatcgtga tcattgtgat cctgctgtct ctgattgccg tgggcctgct gctgtactgc aaggcccgca gcacccctgt gaccctgtcc aaggaccagc tgtccggcat caacaatatc gccttctcca actgaag <210> 23 <211> 588 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 23

Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1727 -13 - 201116294

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val He Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60

Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 80

Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

Met Gin Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro 100 105 110

Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr 115 120 125

Leu Ser Lys Lys Arg Lys Arg Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140

Gly Ser Ala lie Ala Ser Gly Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu 145 150 155 160

Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175

Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Scr Lys Val 180 185 190

Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie Asp Lys Gin Leu Leu Pro lie Val Asn 195 200 205

Lys Gin Ser Cys Ser lie Ser Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin 210 215 220

Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240

Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu 245 250 255

Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320

-14 - 201116294

Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335

Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350

Pro Gin Ala Glu Thr Cys Lys Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp 355 360 365

Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu Val Asn Leu Cys Asn Val 370 375 380

Asp lie Phe Asn Pro Lys Tyr Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr 385 390 395 400

Asp Val Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys 405 410 415

Tyr (Sly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430

Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445

Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly 450 455 460

Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro 465 470 475 480

Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn 485 490 495

Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu Leu 500 505 510

Leu His Asn Val Asn Ala Gly Lys Ser Thr Thr Asn He Met lie Thr 515 520 525

Thr He lie lie Val lie lie Val lie Leu Leu Ser Leu lie Ala Val 530 535 540

Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Arg Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser 545 550 555 560

Lys Asp Gin Leu Ser Gly lie Asn Asn lie Ala Phe Ser Asn Ser Gly 565 570 575

Gly Ser Ala Gly Ser Gly His His His His His His 580 585 <210> 24 <211> 1769 <212> ：DNA <213>人工序列 -15 - <220> 201116294 <223>人工序列說明：合成性多核昔酸 <400> 24 atggaactgc tgatcctgaa ggccaacgcc atcaccacca tcctgaccgc cgtgaccttc 60 tgcttcgcca gcggccagaa catcaccgag gaattctacc agagcacctg cagcgccgtg 120 agcaagggct acctgagcgc cctgcggacc ggctggtaca ccagcgtgat caccatcgag 180 ctgtccaaca tcaaagaaaa caagtgcaac ggcaccgacg ccaaggtgaa actgatcaag 240 caggaactgg acaagtacaa gaacgccgtg accgagctgc agctgctgat gcagagcacc 300 cccgccacca acaaccgggc cagaagagag ctgccccggt tcatgaacta caccctgaac 360 aacgccaaga aaaccaacgt gaccctgagc aagaagcgga agcggcggtt cctgggcttc 420 ctgctgggcg tgggcagcgc catcgccagc ggggtggccg tgtccaaggt gctgcacctg 480 gaaggcgagg tgaacaagat caagtccgcc ctgctgtcca ccaacaaggc cgtggtgtcc 540 ctgagcaacg gcgtgagcgt gctgaccagc aaggtgctgg atctgaagaa ctacatcgac 600

aagcagctgc tgcccatcgt gaacaagcag agctgcagca tcagcaacat cgagaccgtg 660 atcgagttcc agcagaagaa caaccggctg ctggaaatca cccgggagtt cagcgtgaac 720 gccggcgtga ccacccccgt gagcacctac atgctgacca acagcgagct gctgtccctg 780 atcaatgaca tgcccatcac caacgaccag aaaaagctga tgagcaacaa cgtgcagatc 840 gtgcggcagc agagctactc catcatgagc atcatcaaag aagaggtgct ggcctacgtg 900 gtgcagctgc ccctgtacgg cgtgatcgac accccctgct ggaagctgca caccagcccc 960 ctgtgcacca ccaacaccaa agagggcagc aacatctgcc tgacccggac cgaccggggc 1020 tggtactgcg acaacgccgg cagcgtgagc ttcttccccc aagccgagac ctgcaaggtg 1080 cagagcaacc gggtgttctg cgacaccatg aacagcctga ccctgccctc cgaggtgaac 1140 ctgtgcaacg tggacatctt caaccccaag tacgactgca agatcatgac ctccaagacc 1200 gacgtgagca gctccgtgat cacctccctg ggcgccatcg tgagctgcta cggcaagacc 1260 aagtgcaccg ccagcaacaa gaaccggggc atcatcaaga ccttcagcaa cggctgcgac 1320 tacgtgagca acaagggcgt ggacaccgtg agcgtgggca acacactgta ctacgtgaat 1380

aagcaggaag gcaagagcct gtacgtgaag ggcgagccca tcatcaactt ctacgacccc 1440 ctggtgttcc ccagcgacga gttcgacgcc agcatcagcc aggtcaacga gaagatcaac 1500 cagagcctgg ccttcatccg gaagagcgac gagctgctgc acaatgtgaa tgccggcaag 1560 agcaccacca atatcatgat caccacaatc atcatcgtga tcattgtgat cctgctgtct 1620 ctgattgccg tgggcctgct gctgtactgc aaggcccgca gcacccctgt gaccctgtcc 1680 aaggaccagc tgtccggcat caacaatatc gccttctcca acagcggcgg cagcgccggc 1740 tctggccacc accaccatca ccactgaag 1769 <210> 25 <211> 624 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 25 -16 - 201116294

Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60

Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 80

Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

Met Gin Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro 100 105 110

Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr 115 120 125

Leu Ser Lys Lys Arg Lys Arg Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140

Gly Ser Ala lie Ala Ser Gly Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu 145 150 155 160

Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175

Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190

Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie Asp Lys Gin Leu Leu Pro lie Val Asn 195 200 205

Lys Gin Ser Cys Ser He Ser Asn He Glu Thr Val lie Glu Phe Gin 210 215 220

Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240

Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu 245 250 255

Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Asn Asn Val Gin He Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300 -17 - 201116294

Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320

Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335

Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350

Pro Gin Ala Glu Thr Cys Lys Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp 355 360 365

Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu Val Asn Leu Cys Asn Val 370 375 380

Asp lie Phe Asn Pro Lys Tyr Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr 385 390 395 400

Asp Val Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys 405 410 415

Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430

Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445

Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly 450 455 460

Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro 465 470 475 480

Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn 485 490 495

Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu Leu 500 505 510

Leu His Asn Val Asn Ala Gly Lys Ser Thr Thr Asn lie Met He Thr 515 520 525

Thr lie lie lie Val lie lie Val lie Leu Leu Ser Leu lie Ala Val 530 535 540

Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Arg Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser 545 550 555 560

Lys Asp Gin Leu Ser Gly lie Asn Asn lie Ala Phe Ser Asn Gly Ser 565 570 575

Ser Gly Arg Met Lys Gin lie Glu Asp Lys lie Glu Glu lie Leu Ser 580 585 590

Lys lie Tyr His lie Glu Asn Glu lie Ala Arg lie Lys Lys Leu lie 595 600 605

-18 -

201116294

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-24 -

201116294

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Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320

Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335

Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350

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Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430

Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445

Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly 450 455 460

Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro 465 470 475 480

Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn 485 490 495

Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu Leu 500 505 510

Leu His Asn Val Asn Ala Gly Lys Ser Thr Thr Asn lie Met lie Thr 515 520 525

Thr lie lie lie Val lie lie Val lie Leu Leu Ser Leu lie Ala Val 530 535 540

-30 -

201116294

Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Arg Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser 545 550 555 560

Lys Asp Gin Leu Ser Gly lie Asn Asn lie Ala Phe Ser Asn Gly Ser 565 570 575

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<400> 35

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Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

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Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430

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Glu Val Glu Gly Arg He Gin Asp Leu Glu Lys Ser Gly Gly Ser Ala 530 535 540

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<223>人工序列說明：合成性多核苷酸 <400> 36 atggaactgc tgatcctgaa ggccaacgcc atcaccacca tcctgaccgc cgtgaccttc 60 tgcttcgcca gcggccagaa catcaccgag gaattctacc agagcacctg cagcgccgtg 120 agcaagggct acctgagcgc cctgcggacc ggctggtaca ccagcgtgat caccatcgag 180 ctgtccaaca tcaaagaaaa caagtgcaac ggcaccgacg ccaaggtgaa actgatcaag 240 caggaactgg acaagtacaa gaacgccgtg accgagctgc agctgctgat gcagagcacc 300 cccgccacca acaaccgggc cagaagagag ctgccccggt icatgaacta caccctgaac 360 aacgccaaga aaaccaacgt gaccctgagc aagaagcgga agcggcggtt cctgggcttc 420 ctgctgggcg tgggcagcgc catcgccagc ggggtggccg tgtccaaggt gctgcacctg 480 gaaggcgagg tgaacaagat caagtccgcc ctgctgtcca ccaacaaggc cgtggtgtcc 540 ctgagcaacg gcgtgagcgt gctgaccagc aaggtgctgg atctgaagaa ctacatcgac 600 aagcagctgc tgcccatcgt gaacaagcag agctgcagca tcagcaacat cgagaccgtg 660

atcgagttcc agcagaagaa caaccggctg ctggaaatca cccgggagtt cagcgtgaac 720 gccggcgtga ccacccccgt gagcacctac atgctgacca acagcgagct gctgtccctg 780 atcaatgaca tgcccatcac caacgaccag aaaaagctga tgagcaacaa cgtgcagatc 840 gtgcggcagc agagctactc catcatgagc atcatcaaag aagaggtgct ggcctacgtg 900 gtgcagctgc ccctgtacgg cgtgatcgac accccctgct ggaagctgca caccagcccc 960 ctgtgcacca ccaacaccaa agagggcagc aacatctgcc tgacccggac cgaccggggc 1020 tggtactgcg acaacgccgg cagcgtgagc ttcttccccc aagccgagac ctgcaaggtg 1080 cagagcaacc gggtgttctg cgacaccatg aacagcctga ccctgccctc cgaggtgaac 1140 ctgtgcaacg tggacatctt caaccccaag tacgactgca agatcatgac ctccaagacc 1200 gacgtgagca gctccgtgat cacctccctg ggcgccatcg tgagctgcta cggcaagacc 1260 aagtgcaccg ccagcaacaa gaaccggggc atcatcaaga ccttcagcaa cggctgcgac 1320 tacgtgagca acaagggcgt ggacaccgtg agcgtgggca acacactgta ctacgtgaat 1380 aagcaggaag gcaagagcct gtacgtgaag ggcgagccca tcatcaactt ctacgacccc -34 - 1440 201116294 ctgKtgttcc ccagcgacga gttcgacgcc agcatcagcc aggtcaacga gaagatcaac cagagcctgg ccttcatccg gaagagcgac gagctgctgc acaatgtgaa tgagaagttc caccagatcg agaaagaatt cagcgaggtg gagggccgga tccaggacct ggaaaagagc ggcggctctg ccggaagcgg ccaccaccac catcaccact gaag <210> 37 <211> 534 <212> PRT <213>人工序列 <220:> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400;> 37

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Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240

Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu 245 250 255

Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser He 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

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Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Arg Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser Lys Asp 500 505 510

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-36 - 201116294

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<400:> 38 atggaactgc tgcttcgcca agcaagggct ctgtccaaca caggaactgg cccgccacca aacgccaaga ctgctgggcg gaaggcgagg ctgagcaacg aagcagctgc atcgagttcc gccggcgtga atcaatgaca gtgcggcagc gtgcagctgc ctgtgcacca tggtactgcg cagagcaacc ctgtgcaacg gacgtgagca aagtgcaccg tacgtgagca aagcaggaag atcatcgtga aaggcccgca gccttctcca tgatcctgaa gcggccagaa acctgagcgc tcaaagaaaa acaagtacaa acaaccgggc aaaccaacgt tgggcagcgc tgaacaagat gcgtgagcgt tgcccatcgt agcagaagaa ccacccccgt tgcccatcac agagctactc ccctgtacgg ccaacaccaa acaacgccgg gggtgttctg tggacatctt gctccgtgat ccagcaacaa acaagggcgt gcaagagcct tcattgtgat gcacccctgt acatgggggg ggccaacgcc catcaccgag cctgcggacc caagtgcaac gaacgccgtg cagaagagag gaccctgagc catcgccagc caagtccgcc gctgaccagc gaacaagcag caaccggctg gagcacctac caacgaccag catcatgagc cgtgatcgac agagggcagc cagcgtgagc cgacaccatg caaccccaag cacctccctg gaaccggggc ggacaccgtg gtacgtgaag cctgctgtct gaccctgtcc ttctcatcat atcaccacca gaattctacc ggctggtaca ggcaccgacg accgagctgc ctgccccggt aagaagcgga ggggtggccg ctgctgtcca aaggtgctgg agctgcagca ctggaaatca atgctgacca aaaaagctga atcatcaaag accccctgct aacatctgcc ttcttccccc aacagcctga tacgactgca ggcgccatcg atcatcaaga agcgtgggca ggcgagccca ctgattgccg aaggaccagc catcatcatc tcctgaccgc agagcacctg ccagcgtgat ccaaggtgaa agctgctgat tcatgaacta agcggcggtt tgtccaaggt ccaacaaggc atctgaagaa tcagcaacat cccgggagtt acagcgagct tgagcaacaa aagaggtgct ggaagctgca tgacccggac aagccgagac ccctgccctc agatcatgac tgagctgcta ccttcagcaa acacactgta atatcatgat tgggcctgct tgtccggcat attgaag cgtgaccttc cagcgccgtg caccatcgag actgatcaag gcagagcacc caccctgaac cctgggcttc gctgcacctg cgtggtgtcc ctacatcgac cgagaccgtg cagcgtgaac gctgtccctg cgtgcagatc ggcctacgtg caccagcccc cgaccggggc ctgcaaggtg cgaggtgaac ctccaagacc cggcaagacc cggctgcgac ctacgtgaat caccacaatc gctgtactgc caacaatatc 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1607 <210> 39 <211> 524 <212> PRT <213>人工序列 -37 - 201116294 艺毯人工序列說明：合成性多肽 <400> 39

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gtgcggcagc agagctactc catcatgagc atcatcaaag aagaggtgct ggcctacgtg 900 gtgcagctgc ccctgtacgg cgtgatcgac accccctgct ggaagctgca caccagcccc 960 ctgtgcacca ccaacaccaa agagggcagc aacatctgcc tgacccggac cgaccggggc 1020 tggtactgcg acaacgccgg cagcgtgagc ttcttccccc aagccgagac ctgcaaggtg 1080 cagagcaacc gggtgttctg cgacaccatg aacagcctga ccctgccctc cgaggtgaac 1140 ctgtgcaacg tggacatctt caaccccaag tacgactgca agatcatgac ctccaagacc 1200 gacgtgagca gctccgtgat cacctccctg ggcgccatcg tgagctgcta cggcaagacc 1260 aagtgcaccg ccagcaacaa gaaccggggc atcatcaaga ccttcagcaa cggctgcgac 1320 tacgtgagca acaagggcgt ggacaccgtg agcgtgggca acacactgta ctacgtgaat 1380 aagcaggaag gcaagagcct gtacgtgaag ggcgagccca tcatcaactt ctacgacccc 1440 ctggtgttcc ccagcgacga gttcgacgcc agcatcagcc aggtcaacga gaagatcaac 1500

cagagcctgg ccttcatccg gaagagcgac gagctgctgc acaatgtgaa tgccggcaag 1560 agcaccacca attgaag 1577

<210> 41 <211> 574 <212> PRT <213〉人呼吸道合胞病毒 <400> 41

Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn He Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

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-42 201116294

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Met Gin Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro 100 105 110

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Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

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-44 - 201116294

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Met Gin Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro 100 105 110

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Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser He 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320 -45 - 201116294

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Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285 -47 - 201116294

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

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Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin lie Asn 485 490 495

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Leu Met Scr Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

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Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro He Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270 -51 - 201116294

Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser He 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320

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Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn 485 490 495

Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe He Arg Lys Ser Asp Glu Leu 500 505 510

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-52 - <220> 201116294 <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 47

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Tyr lie Asp Lys Gin Leu Leu Pro lie Val Asn Lys Gin Ser Cys Ser 180 185 190 lie Ser Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin Gin Lys Asn Asn Arg 195 200 205

Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn Ala Gly Val Thr Thr 210 215 220

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Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro Leu Tyr Gly Val He 275 280 285 -53 - 201116294

Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro Leu Cys Thr Thr Asn 290 295 300

Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg Thr Asp Arg Gly Trp 305 310 315 320

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Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asd Arg Gly lie lie Lys Thr Phe Ser Asn 405 410 415

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-54 - 201116294

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

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Gin (jIu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

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Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu 195 200 205

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-56 - 201116294

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-58 - 201116294

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-60 - 201116294

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.62 - 201116294

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Gly !5er Ala lie Ala Ser Gly Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu 145 150 155 160

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Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie Asp Lys Gin Leu Leu Pro lie Val Asn 195 200 205

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Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240

Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu 245 250 255

Leu Leu Ser Leu He Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

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-64 - 201116294

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Gly Ser Ala He Ala Ser Gly Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu 145 150 155 160

Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175

Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190

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Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

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Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

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Met Gin Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro 100 105 110

-66 - 201116294

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Leu Ser Lys Lys Arg Lys Arg Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140

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Asp Val Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys 405 410 415 -67 - 201116294

Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430

Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445

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Gly Ser Ala Gly Ser Gly His His His His His His 565 570 <210> 55 <211> 557 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 55

Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

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Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

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Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

-68 - 201116294

Met Gin Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro 100 105 110

Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr 115 120 125

Leu Ser Lys Lys Arg Lys Arg Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140

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Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175

Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190

Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie Asp Lys Gin Leu Leu Pro lie Val Asn 195 200 205

Lys Gin Ser Cys Ser lie Ser Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin 210 215 220

Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240

Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu 245 250 255

Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Ser He lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320

Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335

Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350

Pro Gin Ala Glu Thr Cys Lys Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp 355 360 365

Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu Val Asn Leu Cys Asn Val 370 375 380

Asp lie Phe Asn Pro Lys Tyr Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr 385 390 395 400 -69 - 201116294

Asp Val Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys 405 410 415

Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie He 420 425 430

Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445

Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly 450 455 460

Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro 465 470 475 480

Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn 485 490 495

Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu Leu 500 505 510

Leu His Asn Val Asn Asp Lys lie Glu Glu lie Leu Ser Lys lie Tyr 515 520 525

His lie Glu Asn Glu lie Ala Arg lie Lys Lys Leu lie Gly Glu Ser 530 535 540

Gly Gly Ser Ala Gly Ser Gly His His His His His His <210> 56 <211> 553 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 56

Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60

Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 80

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-70 - 201116294

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Leu Ser Lys Lys Arg Lys Arg Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140

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Lys Gin Ser Cys Ser lie Ser Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin 210 215 220

Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240

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Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser He 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

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Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335

Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350

Pro Gin Ala Glu Thr Cys Lys Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp 355 360 365

Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu Val Asn Leu Cys Asn Val 370 375 380

Asp lie Phe Asn Pro Lys Tyr Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr 385 390 395 400 -71 - 201116294

Asp Val Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala He Val Ser Cys 405 410 415

Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430

Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445

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Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro 465 470 475 480

Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn 485 490 495

Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu Leu 500 505 510

Leu His Asn Val Asn Glu Lys Phe His Gin lie Glu Lys Glu Phe Ser 515 520 525

Glu Val Glu Gly Arg lie Gin Asp Leu Glu Lys Ser Gly Gly Ser Ala 530 535 540

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<400> 57

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Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60

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Asp Val Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys 405 410 415

Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430

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Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro 465 470 475 480

Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn 485 490 495

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His lie Glu Asn Glu lie Ala Arg He Lys Lys Leu lie Gly Glu Ser 530 535 540

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<400> 58

Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60

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Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95 -74 - 201116294

Met Gin Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Gin Ala Gin Asn Gin Asn Gin 100 105 110

Asn Gin Asn Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val Gly Ser Ala lie Ala 115 120 125

Ser Gly Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu Glu Gly Glu Val Asn 130 135 140

Lys lie Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys Ala Val Val Ser Leu 145 150 155 160

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Val lie Thr Ser Leu Gly Ala He Val Ser Cys Tyr Gly Lys Thr Lys 385 390 395 400 -75 - 201116294

Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly He lie Lys Thr Phe Ser Asn 405 410 415

Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp Thr Val Ser Val Gly 420 425 430

Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly Lys Ser Leu Tyr Val 435 440 445

Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro Leu Val Phe Pro Ser 450 455 460

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Asp Lys lie Glu Glu lie Leu Ser Lys lie Tyr His lie Glu Asn Glu 500 505 510 lie Ala Arg lie Lys Lys Leu lie Gly Glu Ser Gly Gly Ser Ala Gly 515 520 525

Ser Gly His His His His His His 530 535 <210> 59 <211> 534 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 59

Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Scr Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60

Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 80

Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asa Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

Met Gin Ser Tbr Pro Ala Thr Asn Asn Gin Ala Gin Asn Gin Asn Gin 100 105 110

• 76 - 201116294

Asn Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val Gly Ser Ala lie Ala Ser Gly 115 120 125

Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu Glu Gly Glu Val Asn Lys lie 130 135 140

Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys Ala Val Val Ser Leu Ser Asn 145 150 155 160

Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie 165 170 175

Asp Lys Gin Leu Leu Pro lie Val Asn Lys Gin Ser Cys Ser lie Ser 180 185 190

Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu 195 200 205

Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn Ala Gly Val Thr Thr Pro Val 210 215 220

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Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro Leu Tyr Gly Val He Asp Thr 275 280 285

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Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe Pro Gin Ala Glu Thr Cys Lys 325 330 335

Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu 340 345 350

Pro Ser Glu Val Asn Leu Cys Asn Val Asp lie Phe Asn Pro Lys Tyr 355 360 365

Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr Asp Val Ser Ser Ser Val lie 370 375 380

Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr 385 390 395 400

Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys 405 410 415 -77 - 201116294

Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp Thr Val Ser Val Gly Asn Thr 420 425 430

Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin GIu Gly Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly 435 440 445

Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu 450 455 460

Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu 465 470 475 480

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Arg lie Lys Lys Leu lie Gly Glu Ser Gly Gly Ser Ala Gly Ser Gly 515 520 525

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Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala He Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60

Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu He Lys 65 70 75 80

Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

Met Gin Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Gin Gin Gin Gin 100 105 110

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• 78 - 201116294

Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu Glu Gly Glu Val Asn Lys lie 130 135 140

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Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie 165 170 175

Asp Lys Gin Leu Leu Pro He Val Asn Lys Gin Ser Cys Ser lie Ser 180 185 190

Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu 195 200 205

Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn Ala Gly Val Thr Thr Pro Val 210 215 220

Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp 225 230 235 240

Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro Leu Tyr Gly Val He Asp Thr 275 280 285

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Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys 305 310 315 320

Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe Pro Gin Ala Glu Thr Cys Lys 325 330 335

Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu 340 345 350

Pro Sor Glu Val Asn Leu Cys Asn Val Asp lie Phe Asn Pro Lys Tyr 355 360 365

Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr Asp Val Ser Ser Ser Val lie 370 375 380

Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr 385 390 395 400

Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys 405 410 415

Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp Thr Val Ser Val Gly Asn Thr 420 425 430 5 -79 - 201116294

Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly 435 440 445

Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu 450 455 460

Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu 465 470 475 480

Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu Leu Leu His Asn Val Asn Asp Lys 485 490 495 lie Glu Glu lie Leu Ser Lys lie Tyr His lie Glu Asn Glu lie Ala 500 505 510

Arg lie Lys Lys Leu lie Gly Glu Ser Gly Gly Ser Ala Gly Ser Gly 515 520 525

His His His His His His 530 <210> 61 <211> 574 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 61

Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Scr Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60

Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 80

Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

Met Gin Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Gin Ala Gin Asn Glu Leu Pro 100 105 110

Gin Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Asn Asn Thr Asn Val Thr 115 120 125

Leu Ser Gin Asn Gin Asn Gin Asn Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140

-80 - 201116294

Gly Ser Ala lie Ala Ser Gly Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu 145 150 155 160

Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175

Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190

Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie Asp Lys Gin Leu Leu Pro lie Val Asn 195 200 205

Lys Gin Ser Cys Ser lie Ser Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin 210 215 220

Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240

Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu 245 250 255

Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320

Leu Cvs Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335

Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350

Pro Gin Ala Glu Thr Cys Lys Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp 355 360 365

Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu Val Asn Leu Cys Asn Val 370 375 380

Asp lie Phe Asn Pro Lys Tyr Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr 385 390 395 400

Asp Val Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys 405 410 415

Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly He lie 420 425 430

Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445 -81 - 201116294

Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly 450 455 460

Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro 465 470 475 480

Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn 485 490 495

Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu Leu 500 505 510

Leu His Asn Val Asn Ala Gly Lys Ser Thr Thr Asn He Met lie Thr 515 520 525

Thr lie lie lie Val He lie Val He Leu Leu Ser Leu lie Ala Val 530 535 540

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Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn He Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60

Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 80

Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

Met Gin Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Gin Ala Gin Asn Gin Asn Gin 100 105 110

Asn Gin Asn Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val Gly Ser Ala lie Ala 115 120 125

-82 - 201116294

Ser Gly Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu Glu Gly Glu Val Asn 130 135 140

Lys lie Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys Ala Val Val Ser Leu 145 150 155 160

Ser Asn Giy Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val Leu Asp Leu Lys Asn 165 170 175

Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn Ala Gly Val Thr Thr 210 215 220

Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu Leu Leu Ser Leu lie 225 230 235 240

Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys Leu Met Ser Asn Asn 245 250 255

Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie Met Ser lie lie Lys 260 265 270

Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro Leu Tyr Gly Val lie 275 280 285

Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro Leu Cys Thr Thr Asn 290 295 300

Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg Thr Asp Arg Gly Trp 305 310 315 320

Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe Pro Gin Ala Glu Thr 325 330 335

Cys Lvs Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp Thr Met Asn Ser Leu 340 345 350

Thr Leu Pro Ser Glu Val Asn Leu Cys Asn Val Asp lie Phe Asn Pro 355 360 365

Lys Tyr Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr Asp Val Ser Ser Ser 370 375 380

Val lie Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys Tyr Gly Lys Thr Lys 385 390 395 400

Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie Lys Thr Phe Ser Asn 405 410 415

Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp Thr Val Ser Val Gly 420 425 430 • 83 - 201116294

Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly Lys Ser Leu Tyr Val 435 440 445

Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro Leu Val Phe Pro Ser 450 455 460

Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn Glu Lys lie Asn Gin 465 470 475 480

Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu Leu Leu His Asn Val Asn 485 490 495

Ala Gly Lys Ser Thr Thr Asn lie Met lie Thr Thr lie lie lie Val 500 505 510 lie lie Val lie Leu Leu Ser Leu He Ala Val Gly Leu Leu Leu Tyr 515 520 525

Cys Lys Ala Arg Scr Thr Pro Val Thr Leu Ser Lys Asp Gin Leu Ser 530 535 540

Gly lie Asn Asn lie Ala Phe Ser Asn 545 550 <210> 63 <211> 551 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 63

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Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

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-84 - 201116294

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Met Gin Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Gin Gin Gin Gin 100 105 110

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-86 - 201116294

Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu Glu Gly Glu Val Asn Lys lie 130 135 140

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Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie 165 170 175

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Asn Asn lie Ala Phe Ser Asn 545 550 <210> 65 <211> 537 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 65

Met Glu Leu Leu He Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

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-88 - 201116294

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Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

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Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 80

Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

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Leu Ser Gin Asn Gin Asn Gin Asn Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140

-90 - 201116294

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Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175

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Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445 -91 - 201116294

Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly 450 455 460

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Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60

Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 80

Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

Met Gin Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro 100 105 110

Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr 115 120 125

Leu Ser Lys Lys Arg Lys Arg Arg Ser Ala lie Ala Ser Gly Val Ala 130 135 140

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-92 - 201116294

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Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro 450 455 460 -93 - 201116294 lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp 465 470 475 480

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Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn He 50 55 60

Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 80

Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

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-94 - 201116294

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Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro Leu Tyr Gly Val lie Asp 290 295 300

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Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp Thr Val Ser Val Gly Asn 435 440 445

Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly Lys Ser Leu Tyr Val Lys 450 455 460

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Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn Glu Lys lie Asn Gin Ser 485 490 495 -95 - 201116294

Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu Leu Leu His Asn Val Asn Ala 500 505 510

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Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60

Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 80

Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

Met Gin Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Gin Ala Gin Asn Glu Leu Pro 100 105 110

Gin Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Gin Gin Thr Asn Val Thr 115 120 125

Leu Ser Gin Asn Gin Asn Gin Asn Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140

Gly Ser Ala lie Ala Ser Gly Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu 145 150 155 160

Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175

Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190

Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie Asp Lys Gin Leu Leu Pro lie Val Asn 195 200 205

-96 - 201116294

Lys Gin Ser Cys Ser lie Ser Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin 210 215 220

Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240

Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu 245 250 255

Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320

Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335

Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350

Pro Gin Ala Glu Thr Cys Lys Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp 355 360 365

Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu Val Asn Leu Cys Asn Val 370 375 380

Asp lie Phe Asn Pro Lys Tyr Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr 385 390 395 400

Asp Val Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys 405 410 415

Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430

Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445

Thr Va.l Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly 450 455 460

Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro 465 470 475 480

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Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu Leu 500 505 510 -97 - 201116294

Leu His Asn Val Asn Ala Gly Lys Ser Thr Thr Asn Gly Gly Ser Ala 515 520 525

Gly Ser Gly His His His His His His 530 535 <210> 70 <211> 524 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 70

Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

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Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 80

Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

Met Gin Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Gin Ala Gin Asn Glu Leu Pro 100 105 110

Gin Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Gin Gin Thr Asn Val Thr 115 120 125

Leu Ser Gin Asn Gin Asn Gin Asn Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140

Gly Ser Ala lie Ala Ser Gly Val Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu 145 150 155 160

Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175

Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190

Leu Asp Leu Lys Asn Tyr He Asp Lys Gin Leu Leu Pro lie Val Asn 195 200 205

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-98 - 201116294

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Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

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Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430

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Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

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Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240

Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu • 104 - 201116294 245 250 255

Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser He 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320

Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn He Cys Leu Thr Arg 325 330 335

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Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys -106 -

201116294 260 265 270

Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320

Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335

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Lys Tlir Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445

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Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro 465 470 475 480

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Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

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Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser He 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro .110 - 201116294 305 310 315 320

Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn He Cys Leu Thr Arg 325 330 335

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Met Gin Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Gin Ala Gin Asn Glu Leu Gin 100 105 110

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Leu Ser Gin Asn Gin Asn Gin Asn Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140

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Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240

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Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320

Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg • 112 - 201116294 325 330 335

Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350

Pro Gin Ala Glu Thr Cys Lys Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp 355 360 365

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Asp Val Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys 405 410 415

Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430

Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445

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Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Thr 15 10 15

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Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45 113 - 201116294

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Met Gin Ser Thr Pro Ala Thr Asn Asn Gin Ala Gin Asn Glu Leu Pro 100 105 110

Gin Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Gin Gin Thr Asn Val Thr 115 120 125

Leu Ser Gin Asn Gin Asn Gin Asn Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140

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Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190

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Lys Gin Ser Cys Ser lie Ser Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin 210 215 220

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Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu 245 250 255

Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

Leu Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320

Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335

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201116294 340 345 350

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Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430

Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445

Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly 450 455 460

Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro 465 470 475 480

Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn 485 490 495

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Leu His Asn Val Asn Ala Gly Lys Ser Thr Thr Asn Gly Gly Ser Ala 515 520 525

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Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190

Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie Asp Lys Gin Leu Leu Pro lie Val Asn 195 200 205

Lys Gin Ser Cys Ser lie Ser Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin 210 215 220

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Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

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Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335

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S -117 - 201116294

Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430

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Lys Ser Thr Thr Asn 35

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Ser Gly Ser Gly -118 - 201116294 50 <210〉 96 <211> 71 <212> PRT <21:3>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 96

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Gly Ser Gly 50 <210> 100 <211> 70 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 100

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201116294 acaaagatcg actaacccaa tcattgaacc atttgctgac agctttagac accactgatg cagatgtagc catatactgc agggacaaga aatgggaaat gactctcaag gaagcagtgg ctaggagaga agcagtggag gagatatgca tatccgacga ctcttcagtg acagaacctg atgcagagct ggtgagggtg catccgaaga gttctttggc tggaaggaag ggctacagca caagcgatgg caaaactttc tcatatttgg aagggaccaa gtttcaccag gcggccaagg atatagcaga aattaatgcc atgtggcccg ttgcaacgga ggccaatgag caggtatgca tgtatatcct cggagaaagc atgagcagta ttaggtcgaa atgccccgtc gaagagtcgg aagcctccac accacctagc acgctgcctt gcttgtgcat ccatgccatg actccagaaa gagtacagcg cctaaaagcc tcacgtccag aacaaattac tgtgtgctca tcctttccat tgccgaagta tagaatcact ggtgtgcaga agatccaatg ctcccagcct atattgttct caccgaaagt gcctgcgtat attcatccaa ggaagtatct cgtggaaaca ccaccggtag acgagactcc ggagccatcg gcagagaacc aatccacaga ggggacacct gaacaaccac cacUataac cgaggatgag accaggacta gaacgcctga gccgatcatc atcgaagagg aagaagagga tagcataagt ttgctgtcag atggcccgac ccaccaggtg ctgcaagtcg aggcagacat tcacgggccg ccctctgtat ctagctcatc ctggtccatt cctcatgcat ccgactttga tgtggacagt ttatccatac ttgacaccct ggagggagct agcgtgacca gcggggcaac gtcagccgag actaactctt acttcgcaaa gagtatggag tttctggcgc gaccggtgcc tgcgcctcga acagtattca ggaaccctcc acatcccgct ccgcgcacaa gaacaccgtc acttgcaccc agcagggcct gctcgagaac cagcctagtt tccaccccgc caggcgtgaa tagggtgatc actagagagg agctcgaggc gcttaccccg tcacgcactc ctagcaggtc ggtctcgaga accagcctgg tctccaaccc gccaggcgta aatagggtga ttacaagaga ggagtttgag gcgttcgtag cacaacaaca atgacggttt gatgcgggtg catacatctt ttcctccgac accggtcaag ggcatttaca acaaaaatca gtaaggcaaa cggtgctatc cgaagtggtg ttggagagga ccgaattgga gatttcgtat gccccgcgcc tcgaccaaga aaaagaagaa ttactacgca agaaattaca gttaaatccc acacctgcta acagaagcag ataccagtcc aggaaggtgg agaacatgaa agccataaca gctagacgta ttctgcaagg cctagggcat tatttgaagg cagaaggaaa agtggagtgc taccgaaccc tgcatcctgt tcctttgtat tcatctagtg tgaaccgtgc cttttcaagc cccaaggtcg cagtgKaagc ctgtaacgcc atgttgaaag agaactttcc gactgtggct tcttactgta ttattccaga gtacgatgcc tatttggaca tggttgacgg agcttcatgc tgcttagaca ctgccagttt ttgccctgca aagctgcgca gctttccaaa gaaacactcc tatttggaac ccacaatacg atcggcagtg ccttcagcga tccagaacac gctccagaac gtcctggcag ctgccacaaa aagaaattgc aatgtcacgc aaatgagaga attgcccgta ttggattcgg cggcctttaa tgtggaatgc ttcaagaaat atgcgtgtaa taatgaatat tgggaaacgt ttaaagaaaa ccccatcagg cttactgaag aaaacgtggt aaattacatt accaaattaa aaggaccaaa agctgctgct ctttttgcga agacacataa tttgaatatg ttgcaggaca taccaatgga caggtttgta atggacttaa agagagacgt gaaagtgact ccaggaacaa 4440 4500 4560 4620 4680 4740 4800 4860 4920 4980 5040 5100 5160 5220 5280 5340 5400 5460 5520 5580 5640 5700 5760 5820 5880 5940 6000 6060 6120 6180 6240 6300 6360 6420 6480 6540 6600 -123 - 201116294 aacatactga agaacggccc aaggtacagg tgatccaggc tgccgatccg ctagcaacag 6660 cgtatctgtg cggaatccac cgagagctgg ttaggagatt aaatgcggtc ctgcttccga 6720 acattcatac actgtttgat atgtcggctg aagactttga cgctattata gccgagcact 6780 tccagcctgg ggattgtgtt ctggaaactg acatcgcgtc gtttgataaa agtgaggacg 6840 acgccatggc tctgaccgcg ttaatgattc tggaagactt aggtgtggac gcagagctgt 6900 tgacgctgat tgaggcggct ttcggcgaaa tttcatcaat acatttgccc actaaaacta 6960 aatttaaatt cggagccatg atgaaatctg gaatgttcct cacactgttt gtgaacacag 7020 tcattaacat tgtaatcgca agcagagtgt tgagagaacg gctaaccgga tcaccatgtg 7080 cagcattcat tggagatgac aatatcgtga aaggagtcaa atcggacaaa ttaatggcag 7140 acaggtgcgc cacctggttg aatatggaag tcaagattat agatgctgtg gtgggcgaga 7200 aagcgcctta tttctgtgga gggtttattt tgtgtgactc cgtgaccggc acagcgtgcc 7260 gtgtggcaga ccccctaaaa aggctgttta agcttggcaa acctctggca gcagacgatg 7320 aacatgatga tgacaggaga agggcattgc atgaagagtc aacacgctgg aaccgagtgg 7380 gtattctttc agagctgtgc aaggcagtag aatcaaggta tgaaaccgta ggaacttcca 7440 tcatagttat ggccatgact actctagcta gcagtgttaa atcattcagc tacctgagag 7500 gggcccctat aactctctac ggctaacctg aatggactac gacatagtct agtcgacgcc 7560 accatggaac tgctgatcct gaaggccaac gccatcacca ccatcctgac cgccgtgacc 7620 ttctgcttcg ccagcggcca gaacatcacc gaggaattct accagagcac ctgcagcgcc 7680 gtgagcaagg gctacctgag cgccctgcgg accggctggt acaccagcgt gatcaccatc 7740 gagctgtcca acatcaaaga aaacaagtgc aacggcaccg acgccaaggt gaaactgatc 7800 aagcaggaac tggacaagta caagaacgcc gtgaccgagc tgcagctgct gatgcagagc 7860 acccccgcca ccaacaaccg ggccagaaga gagctgcccc ggttcatgaa ctacaccctg 7920 aacaacgcca agaaaaccaa cgtgaccctg agcaagaagc ggaagcggcg gttcctgggc 7980 ttcctgctgg gcgtgggcag cgccatcgcc agcggggtgg ccgtgtccaa ggtgctgcac 8040 ctggaaggcg aggtgaacaa gatcaagtcc gccctgctgt ccaccaacaa ggccgtggtg 8100 tccctgagca acggcgtgag cgtgctgacc agcaaggtgc tggatctgaa gaactacatc 8160 gacaagcagc tgctgcccat cgtgaacaag cagagctgca gcatcagcaa catcgagacc 8220 gtgatcgagt tccagcagaa gaacaaccgg ctgctggaaa tcacccggga gttcagcgtg 8280 aacgccggcg tgaccacccc cgtgagcacc tacatgctga ccaacagcga gctgctgtcc 8340 ctgatcaatg acatgcccat caccaacgac cagaaaaagc tgatgagcaa caacgtgcag 8400 atcgtgcggc agcagagcta ctccatcatg agcatcatca aagaagaggt gctggcctac 8460 gtggtgcagc tgcccctgta cggcgtgatc gacaccccct gctggaagct gcacaccagc 8520 cccctgtgca ccaccaacac caaagagggc agcaacatct gcctgacccg gaccgaccgg 8580 ggctggtact gcgacaacgc cggcagcgtg agcttcttcc cccaagccga gacctgcaag 8640 gtgcagagca accgggtgtt ctgcgacacc atgaacagcc tgaccctgcc ctccgaggtg 8700 aacctgtgca acgtggacat cttcaacccc aagtacgact gcaagatcat gacctccaag 8760 accgacgtga gcagctccgt gatcacctcc ctgggcgcca tcgtgagctg ctacggcaag 8820 accaagtgca ccgccagcaa caagaaccgg ggcatcatca agaccttcag caacggctgc 8880 -124 -

201116294 gactacgtga gcaacaaggg cgtggacacc gtgagcgtgg gcaacacact gtactacgtg aataagcagg aaggcaagag cctgtacgtg aagggcgagc ccatcatcaa cttctacgac cccctggtgt tccccagcga cgagttcgac gccagcatca gccaggtcaa cgagaagatc aaccagagcc tggccttcat ccggaagagc gacgagctgc tgcacaatgt gaatgccggc aagagcacca ccaatatcat gatcaccaca atcatcatcg tgatcattgt gatcctgctg tctctgattg ccgtgggcct gctgctgtac tgcaaggccc gcagcacccc tgtgaccctg tccaaggacc agctgtccgg catcaacaat atcgccttct ccaactgaag tctagacggc gcgcccaccc agcggccgca tacagcagca attggcaagc tgcttacata gaactcgcgg cgattggcat gccgccttaa aatttttatt ttatttttct tttcttttcc gaatcggatt ttgtttttaa tatttcaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa agggtcggca tggcatctcc acctcctcgc ggtccgacct gggcatccga aggaggacgc acgtccactc ggatggctaa gggagagcca cgtttaaacc agctccaatt cgccctatag tgagtcgtat tacgcgcgct cactggccgt cgttttacaa cgtcgtgact gggaaaaccc tggcgttacc caacttaatc gccttgcagc acatccccct ttcgccagct ggcgtaatag cgaagaggcc cgcaccgatc gcccttccca acagttgcgc agcctgaatg gcgaatggga cgcgccctgt agcggcgcat taagcgcggc gggtgtggtg gttacgcgca gcgtgaccgc tacacttgcc agcgccctag cgcccgctcc tttcgctttc ttcccttcct ttctcgccac gttcgccggc tttccccgtc aagctctaaa tcgggggctc cctttagggt tccgatttag tgctttacgg cacctcgacc ccaaaaaact tgattagggt gatggttcac gtagtgggcc atcgccctga tagacggttt ttcgcccttt gacgttggag tccacgttct ttaatagtgg actcttgttc caaactggaa caacactcaa ccctatctcg gtctattctt ttgatttata agggattttg ccgatttcgg cctattggtt aaaaaatgag ctgatttaac aaaaatttaa cgcgaatttt aacaaaatat taacgcttac aatttaggtg gcacttttcg gggaaatgtg cgcggaaccc ctatttgttt atttttctaa atacattcaa atatgtatcc gctcatgaga caataaccct gataaatgct tcaataatat tgaaaaagga agagtatgag tattcaacat ttccgtgtcg cccttattcc cttttttgcg gcattttgcc ttcctgtttt tgctcaccca gaaacgctgg tgaaagtaaa agatgctgaa gatcagttgg gtgcacgagt gggttacatc gaactggatc tcaacagcgg taagatcctt gagagttttc gccccgaaga acgttttcca atgatgagca cttttaaagt tctgctatgt ggcgcggtat tatcccgtat tgacgccggg caagagcaac tcggtcgccg catacactat tctcagaatg acttggttga gtactcacca gtcacagaaa agcatcttac ggatggcatg acagtaagag aattatgcag tgctgccata accatgagtg ataacactgc ggccaactta cttctgacaa cgatcggagg accgaaggag ctaaccgctt ttttgcacaa catgggggat catgtaactc gccttgatcg ttgggaaccg gagctgaatg aagccatacc aaacgacgag cgtgacacca cgatgcctgt agcaatggca acaacgttgc gcaaactatt aactggcgaa ctacttactc tagcttcccg gcaacaatta atagactgga tggaggcgga taaagttgca ggaccacttc tgcgctcggc ccttccggct ggctggttta ttgctgataa atctggagcc ggtgagcgtg ggtctcgcgg tatcattgca gcactggggc 8940 9000 9060 9120 9180 9240 9300 9360 9420 9480 9540 9600 9660 9720 9780 9840 9900 9960 10020 10080 10140 10200 10260 10320 10380 10440 10500 10560 10620 10680 10740 10800 10860 10920 10980 11040 11100 .125 - 201116294 cagatggtaa gccctcccgt atcgtagtta tctacacgac ggggagtcag gcaactatgg 11160 atgaacgaaa tagacagatc gctgagatag gtgcctcact gattaagcat tggtaactgt 11220 cagaccaagt ttactcatat atactttaga ttgatttaaa acttcatttt taatttaaaa 11280 ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa aatcccttaa cgtgagtttt 11340 cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga gatccttttt 11400 ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg gtggtttgtt 11460 tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga 11520 taccaaatac tgttcttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag aactctgtag 11580 caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata 11640 agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg cagcggtcgg 11700 gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac accgaactga 11760 gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca 11820 ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt ccagggggaa 11880

acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt 11940 tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg gcctttttac 12000 ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt tcctgcgtta tcccctgatt 12060 ctgtggataa ccgtattacc gcctttgagt gagctgatac cgctcgccgc agccgaacga 12120 ccgagcgcag cgagtcagtg agcgaggaag cggaagagcg cccaatacgc aaaccgcctc 12180 tccccgcgcg ttggccgatt cattaatgca gctggcacga caggtttccc gactggaaag 12240 cgggcagtga gcgcaacgca attaatgtga gttagctcac tcattaggca ccccaggctt 12300 tacactttat gctcccggct cgtatgttgt gtggaattgt gagcggataa caatttcaca 12360 caggaaacag ctatgaccat gattacgcca agcgcgcaat taaccctcac taaagggaac 12420 aaaagctggg taccgggccc acgcgtaata cgactcacta tag 12463

<210> 102 <211> 574 <212> PRT

<213>人呼吸道合胞病毒 <400> 102

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Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175

Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190

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Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

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Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430

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Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro 465 470 475 480

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<210> 103 <211> 574 <212> PRT <213>人呼吸道合胞病毒 <400> 103

Met Glu Leu Leu lie His Arg Leu Ser Ala lie Phe Leu Thr Leu Ala 15 10 15 lie Asn Ala Leu Tyr Leu Thr Ser Ser Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Arg Gly Tyr Phe Ser Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60

Lys Glu Thr Lys Cys Asn Gly Thr Asp Thr Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 80

Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

-128 - 201116294

Met Gin Asn Thr Pro Ala Ala Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Ala Pro 100 105 110

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Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Asn Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175

Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190

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Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Ser Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Scr lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300 lie Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320

Leu Cys Thr Thr Asn lie Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335

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Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly He lie 420 425 430

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<210> 104 <211> 574 <212> PRT <213>人呼吸道合胞病毒 <400> 104

Met Giu Leu Leu lie His Arg Leu Ser Ala lie Phe Leu Tbr Leu Ala 15 10 15 lie Asn Ala Leu Tyr Leu Thr Ser Ser Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Tbr Cys Scr Ala Val Ser Arg Gly Tyr Phe Ser Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60

Lys Glu Thr Lys Cys Asn Gly Thr Asp Thr Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 SO

Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

-130 - 201116294

Met Gin Asn Thr Pro Ala Ala Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Ala Pro 100 105 110

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Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Asn Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175

Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190

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Gin Gin Ser Cys Arg lie Ser Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin 210 215 220

Gin Lys Asn Ser Arg Leu Leu Glu lie Asn Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240

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Leu Leu Ser Leu He Asn Asp Met Pro He Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Ser Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300 lie Tvr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320

Leu Cys Thr Thr Asn lie Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335

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Asp lie Phe Asn Ser Lys Tyr Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr -131 - 201116294 385 390 395 400

Asp lie Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys 405 410 415

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Leu His Asn Val Asn Thr Gly Lys Ser Thr Thr Asn lie Met lie Thr 515 520 525

Thr lie He lie Val lie lie Val Val Leu Leu Ser Leu He Ala lie 530 535 540

Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Lys Asn Thr Pro Val Thr Leu Ser 545 550 555 560

Lys Asp Gin Leu Ser Gly lie Asn Asn lie Ala Phe Ser Lys 565 570

<210> 105 <211> 574 <212> PRT <213>人呼吸道合胞病毒 <400> 105

Met Glu Leu Leu lie Leu Lys Ala Asn Ala lie Thr Thr lie Leu Ala 15 10 15

Ala Val Thr Phe Cys Phe Ala Ser Ser Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Lys Gly Tyr Leu Ser Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60

Lys Glu Asn Lys Cys Asn Gly Thr Asp Ala Lys Val Lys Leu lie Asn 65 70 75 80

Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

-132 - 201116294

Met Gin Ser Thr Thr Ala Ala Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro 100 105 110

Arg Phe Met Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Thr Lys Lys Thr Asn Val Thr 115 120 125

Leu Ser Lys Lys Arg Lys Arg Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 130 135 140

Gly Ser Ala lie Ala Ser Gly lie Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu 145 150 155 160

Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Ser Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175

Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190

Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie Asp Lys Gin Leu Leu Pro lie Val Asn 195 200 205

Lys Gin Ser Cys Arg lie Ser Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin 210 215 220

Gin Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240

Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu 245 250 255

Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Asn Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Met Sisr lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

Leu Tvr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320

Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335

Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350

Pro Gin Ala Glu Thr Cys Lys Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp 355 360 365

Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu Val Asn Leu Cys Asn Val 370 375 380

Asp lie Phe Asn Pro Lys Tyr Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr -133 - 201116294 385 390 395 400

Asp Val Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala He Val Ser Cys 405 410 415

Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430

Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445

Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Gin Glu Gly 450 455 460

Lys Ser Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro lie lie Asn Phe Tyr Asp Pro 465 470 475 480

Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn 485 490 495

Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Lys Ser Asp Glu Leu 500 505 510

Leu His His Val Asn Ala Gly Lys Ser Thr Thr Asn lie Met lie Thr 515 520 525

Thr lie lie lie Val lie lie Val lie Leu Leu Ser Leu lie Ala Val 530 535 540

Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Arg Ser Thr Pro Val Thr Leu Ser 545 550 555 560

Lys Asp Gin Leu Ser Gly lie Asn Asn lie Ala Phe Ser Asn 565 570

<210> 106 <211> 574 <212> PRT <213>人呼吸道合胞病毒 <400> 106

Met Glu Leu Leu lie His Arg Ser Ser Ala lie Phe Leu Thr Leu Ala 15 10 15

Val Asn Ala Leu Tyr Leu Thr Ser Ser Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Arg Gly Tyr Phe Ser Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60

Lys Glu Thr Lys Cys Asn Gly Thr Asp Thr Lys Val Lys Leu lie Lys 65 70 75 80

Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

• 134 - 201116294

Met Gin Asn Thr Pro Ala Ala Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Ala Pro 100 105 110

Gly Ser Ala lie Ala Ser Gly He Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu 145 150 155 160

Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Asn Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175

Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190

Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie Asn Asn Arg Leu Leu Pro lie Val Asn 195 200 205

Gin Gin Ser Cys Arg lie Ser Asn lie Glu Thr Val lie Glu Phe Gin 210 215 220

Gin Met Asn Ser Arg Leu Leu Glu lie Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240

Ala Gly Val Thr Thr Pro Leu Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu 245 250 255

Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Ser Asn Val Gin lie Val Arg Gin Gin Ser Tyr Ser lie 275 280 285

Leu Cys Thr Thr Asn lie Lys Glu Gly Ser Asn He Cys Leu Thr Arg 325 330 335

Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350

Pro Gin Ala Asp Thr Cys Lys Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp 355 360 365

Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu Val Ser Leu Cys Asn Thr 370 375 380

Asp lie Phe Asn Ser Lys Tyr Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr -135 - 201116294 385 390 395 400

Asp lie Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala He Val Ser Cys 405 410 415

Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie He 420 425 430

Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445

Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Leu Glu Gly 450 455 460

Lys Asn Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro He lie Asn Tyr Tyr Asp Pro 465 470 475 480

Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn 485 490 495

Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Arg Ser Asp Glu Leu 500 505 510

Leu His Asn Val Asn Thr Gly Lys Ser Thr Thr Asn lie Met lie Thr 515 520 525

Thr lie lie lie Val lie lie Val Val Leu Leu Ser Leu lie Ala lie 530 535 540

Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Lys Asn Thr Pro Val Thr Leu Ser 545 550 555 560

Lys Asp Gin Leu Ser Gly lie Asn Asn lie Ala Phe Ser Lys 565 570 <210> 107 <211> 574 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性共識序列 <220> <221> M0D.RES <222> (4)..(4) <223> Leu or Pro <220>

<221> M0D.RES <222> (6)..(6) <223> His or Leu <220> <221> M0D.RES <222> (7)..(7) <223> Arg or Lys <220>

<221> MOD-RES

<222> (8)..(8) -136 - 201116294 <223> Leu， Ser or Ala <220> <221> M0D_RES <222> (9)..(9) <223> Ser or Asn <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> Phe or Thr <220> <221> MOD RES <222> (13)..(13) <223> Leu or Thr <220> <221> MOD RES <222> (14)..(14) <223> Thr or lie <220>

<221> MOD.RES <222> (16)..(16) <223:> Ala or Thr <220：> <221：> MOD_RES <222> (17)..(17) <223> lie, Val or Ala <220> <221> MOD_RES <222> (18)..(18) <223> Asn or Val <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> Ala or Thr <220> <221> MOD.RES <222> (20)..(20) <223> Leu or Phe <220> <221> MOD.RES <222> (21)..(21) <223> Tyr or Cys <220> <221> MOD.RES <222> (22)..(22) <223> Leu or Phe <220> <221> MOD RES <222> (23)..(23) <223> Thr or Ala <220> <221> MOD.RES <222> (25)..(25) <223> Ser or Gly <220> <221> MOD_RES <222> (42)..(42) <223> Arg or Lys <220> <221> MOD.RES <222> (45)..(45) 201116294 <223> Phe or Leu <220> <221> MOD RES <222> (67)..(67) <223> Thr or Asn <220> <221> MOD.RES <222> (74)..(74) <223> Thr or Ala <220> <221> MOD-RES <222> (80)..(80) <223> Lys or Asn <220> <221> M0D_RES <222> (99)..(99) <223> Asn or Ser <220>

<221> MOD.RES <222> (101)..(101) <223> Pro or Thr <220> <221> MOD RES <222> (103)..(103) <223> Ala or Thr <220> <221> MOD RES <222> (111)..(111) <223> Ala or Leu <220> <221> MOD-RES <222> (113)..(113) <223> Gin or Arg <220> <221> M0D_RES <222> (114)..(114) <223> Tyr or Phe <220> <221> M0D_RES <222> (119)..(119)

<223> lie or Leu <220>

<221> MOD.RES <222> (121)..(121) <223> Thr or Asn <220>

<221> MOD-RES <222> (122)..(122) <223> Thr or Ala <220> <221> MOD RES <222> (124)..(124) <223> Asn or Lys <220> <221> MOD-RES <222> (125)..(125) <223> Leu or Thr <220> <221> MOD.RES <222> (128)..(128) • 138 - 201116294 <223> Ser or Thr <220> <221> M0D_RES <22：2> (129)..(129) <223> lie or Leu <220> <221> MOD RES <222> (152)..(152) <223> lie or Val <220> <22 】> MOD RES <222> (169)..(169) <223> Asn or Ser <220> <221> MOD.RES <222> (200)..(200) <223> Asn or 人sp <220:>

<221:> MOD.RES <222;> (201)..(201) <223> Asn or Lys <220:> <221；> MOD.RES <222> (202)..(202) <223> Gin or Arg <220> <221> M0D_RES <222> (209)..(209) <223> Gin or Lys <220〉 <221〉MOD RES <222> (213)..(213) <223> Arg or Ser <220> <221> MOD.RES <222> (218)..(218) <223> Gly, Glu or Ala <220> <221> MOD.RES <222> (226)..(226) <223> Lys or Met <220> <221> MOD.RES <222> (228)..(228) <223> Ser or Asn <220〉 <221> MOD RES <222> (234)..(234) <223> Asn or Thr <220> <221> MOD.RES <222> (247)..(247) <223> Leu or Val <220> <221> M0D_RES <222> (276)..(276) <223> Ser or Asn <220> <221> MOD.RES <222> (305)..(305) 201116294 <223> He or Leu <220> <221> MOD RES <222> (326)..(326) <223> lie or Thr <220> <221> MOD.RES <222> (356)..(356) <223> Asp or Glu <220> <221> MOD.RES <222> (380)..(380) <223> Ser or Asn <220> <221〉 MOD_RES <222> (384)..(384) <223> Thr or Val <220〉

<221> MOD RES <222> (389)..(389) <223> Ser or Pro <220> <221> MODJES <222> (402)..(402) <223> He or Val <220> <221> MOD RES <222> (462)..(462) <223> Leu or Gin <220> <221> MOD RES <222> (466)..(466) <223> Asn or Ser <220> <221> MOD RES <222> (477)..(477) <223> Tyr or Phe <220>

<221> MOD.RES <222> (508)..(508) <223> Arg or Lys <220> <221> MOD-RES <222> (515)..(515) <223> Asn or His <220> <221> MOD.RES <222> (518)..(518) <223> Thr or Ala <220> <221> MOD.RES <222> (523)..(523) <223> Thr or lie <220> <221> MOD.RES <222> (537)..(537) <223> Val or lie <220> <221> MOD RES <222> (544)..(544) -140 - 201116294 <223> lie or Val <220> <221> MOD.RES <22：2> (553)..(553) <223> Lys or Arg <220> <221> MOD RES <222> (554)..(554) <223> Asn or Ser <220> <221> MOD-RES <222> (574)..(574) <223> Lys or Asn <400> 107

Met Glu Leu Xaa lie Xaa Xaa Xaa Xaa Ala lie Xaa Xaa Xaa Leu Xaa 15 10 15

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Gin Asn lie Thr Glu Glu Phe 20 25 30

Tyr Gin Ser Thr Cys Ser Ala Val Ser Xaa Gly Tyr Xaa Ser Ala Leu 35 40 45

Arg Thr Gly Trp Tyr Thr Ser Val lie Thr lie Glu Leu Ser Asn lie 50 55 60

Lys Glu Xaa Lys Cys Asn Gly Thr Asp Xaa Lys Val Lys Leu lie Xaa 65 70 75 80

Gin Glu Leu Asp Lys Tyr Lys Asn Ala Val Thr Glu Leu Gin Leu Leu 85 90 95

Met Gin Xaa Thr Xaa Ala Xaa Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Xaa Pro 100 105 110

Xaa Xaa Met Asn Tyr Thr Xaa Asn Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Asn Val Xaa 115 120 125

Xaa Ser Lys Lys Arg Lys Arg Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val 1:30 135 140

Gly Ser Ala lie Ala Ser Gly Xaa Ala Val Ser Lys Val Leu His Leu 145 150 155 160

Glu Gly Glu Val Asn Lys lie Lys Xaa Ala Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175

Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190

Leu Asp Leu Lys Asn Tyr lie Xaa Xaa Xaa Leu Leu Pro lie Val Asn 195 200 205

Xaa Gla Ser Cys Xaa lie Ser Asn lie Xaa Thr Val lie Glu Phe Gin 210 215 220

Gin Xaa Asn Xaa Arg Leu Leu Glu lie Xaa Arg Glu Phe Ser Val Asn -141 - 201116294 225 230 235 240

Ala Gly Val Thr Thr Pro Xaa Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu 245 250 255

Leu Leu Ser Leu lie Asn Asp Met Pro lie Thr Asn Asp Gin Lys Lys 260 265 270

Leu Met Ser Xaa Asn Val Gin He Val Arg Gin Gin Ser Tyr Scr lie 275 280 285

Met Ser lie lie Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gin Leu Pro 290 295 300

Xaa Tyr Gly Val lie Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320

Leu Cys Thr Thr Asn Xaa Lys Glu Gly Ser Asn lie Cys Leu Thr Arg 325 330 335

Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350

Pro Gin Ala Xaa Thr Cys Lys Val Gin Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp 355 360 365

Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu Val Xaa Leu Cys Asn Xaa 370 375 380

Asp lie Phe Asn Xaa Lys Tyr Asp Cys Lys lie Met Thr Ser Lys Thr 385 390 395 400

Asp Xaa Ser Ser Ser Val lie Thr Ser Leu Gly Ala lie Val Ser Cys 405 410 415

Tyr Gly Lys Thr Lys Cys Thr Ala Ser Asn Lys Asn Arg Gly lie lie 420 425 430

Lys Thr Phe Ser Asn Gly Cys Asp Tyr Val Ser Asn Lys Gly Val Asp 435 440 445

Thr Val Ser Val Gly Asn Thr Leu Tyr Tyr Val Asn Lys Xaa Glu Gly 450 455 460

Lys Xaa Leu Tyr Val Lys Gly Glu Pro He lie Asn Xaa Tyr Asp Pro 465 470 475 480

Leu Val Phe Pro Ser Asp Glu Phe Asp Ala Ser lie Ser Gin Val Asn 485 490 495

Glu Lys lie Asn Gin Ser Leu Ala Phe lie Arg Xaa Ser Asp Glu Leu 500 505 510

Leu His Xaa Val Asn Xaa Gly Lys Ser Thr Xaa Asa lie Met lie Thr 515 520 525

-142 - 201116294

Thr lie lie lie Val lie lie Val Xaa Leu Leu Ser Leu lie Ala Xaa 530 535 540

Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Xaa Xaa Thr Pro Val Thr Leu Ser 545 550 555 560

Lys Asp Gin Leu Ser Gly lie Asn Asn lie Ala Phe Ser Xaa 565 570

<210> 108 <2H> 51 <212> PRT <213>人呼吸道合胞病毒 <400> 108

Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Arg Glu Leu Pro Arg Phe Met 15 10 15

Asn Tyr Thr Leu Asn Asn Ala Lys Lys Thr Asn Val Thr Leu Ser Lys 20 25 30

Lys Arg Lys Arg Arg Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val Gly Ser Ala 35 40 45 lie Ala Ser ：50 <210> 109 <211> 30 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性多肽 <400> 109

Thr Pro Ala Thr Asn Asn Arg Ala Arg Gin Gin Asn Gin Gin Gin Arg 15 10 15

Phe Leu Gly Phe Leu Leu Gly Val Gly Ser Ala lie Ala Ser 20 25 30 <210> 110 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>人工序列說明：合成性6xHis標籤 <400> 110

His His His His His His 1 5 <210> 111 <211> 100 <212> PRT <213>人工序列 <220〉 <223>人工序列說明：合成性多肽 143 - 201116294 <220> <221> raise feature <222> (1)..(100) <223> it序歹丨)可能包含3-100個Lys殘基 <400> 111

Lys Lys Lys Lys Lys Lys. Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 15 10 15

Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 20 25 30

Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 35 40 45

Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 50 55 60

Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 65 70 75 80

Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 85 90 95

Lys Lys Lys Lys 100 <210> 112 <211> 50 <212> PRT <213>人工序列人工序列說明：合成性多肽 <400> 112 lie Met lie Thr Thr lie He He Val lie lie Val lie Leu Leu Ser 15 10 15

Leu lie Ala Val Gly Leu Leu Leu Tyr Cys Lys Ala Arg Ser Thr Pro

Val Thr Leu Ser Lys Asp Gin Leu Ser Gly lie Asn Asn lie Ala Phe 35 40 45

Ser Asn 50 -144 -

Claims

201116294 七、申請專利範圍： 1 · 一種免疫原性組成物，其包含一或多種呼吸道合胞病毒F (RSV F)多肽，該等多肽之胺基酸100至150係經SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、 SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:1〇、SEQ ID NO:ll、SEQ ID NO:13、 SEQ ID NO:9 1或SEQ ID NO:92之胺基酸序列取代。

2 .如申請專利範圍第1項之免疫原性組成物，其中該 RSV F之胺基酸100至150係經SEQ ID NO:12之胺基酸序列取代。 3 .如申請專利範圍第1項之免疫原性組成物，其中該 RSV F之胺基酸 100至 150係經 SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:3 ' SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6' SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:ll、 SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:92之胺基酸序列取代。 4 ·如申請專利範圍第1項之免疫原性組成物，其中胺基酸100至150係經SEQ ID NO: 9之胺基酸序列取代。 5 ·如申請專利範圍第1項之免疫原性組成物，其中該 RSV F係呈單體、三體或單體與三體之組合的形式。 6 .如申請專利範圍第3項之免疫原性組成物，其中R S V F係呈單體、三體、玫瑰花簇或任何彼等之組合的形式。 7 ·如申請專利範圍第1至6項中任一項之免疫原性組成物，其中該R S V F多肽係包含該R S V · F胞外域之可溶性多 201116294 8 .如申請專利範圍第1至6項中任一項之免疫原性組成物，其中該RSV F包含SEQ ID ΝΟ:1或SEQ ID NO:2之胺基酸23至99及151至524。 9. —種免疫原性組成物，其包含選自SEQ ID NO:49、 SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:71、SEQ ID N〇:25、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、 SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID N〇：37 > SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、 SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46 ' SEQ ID NO：48 ' SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、 SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID N〇:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、 SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:69、 SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:93 之多肽、任何上述序列中信號肽及/或HIS標記係經刪除之多肽或彼等之組合之多肽。 10. 如申請專利範圍第9項之免疫原性組成物，其中該多肽係SEQ ID NO: 68或SEQ ID NO: 68中信號肽及可任意選擇之HIS標記係經刪除者❶ 1 1 .如申請專利範圍第9項之免疫原性組成物，其中該多肽係選自SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:71或任何上述序列中信號肽及可任意選擇之HIS標記係經刪除者。 201116294 1 2 .如申請專利範圍第丨至5及9至丨丨項中任一項之免疫原性組成物，其另包含佐劑。 1 3 ·如申請專利範圍第1 2項之免疫原性組成物，其中該佐劑係選自鋁鹽、水包鯊烯乳劑、苯并萘啶化合物、磷脂化合物、小分子免疫增強劑或任何前述之組合。

14.—種重組呼吸道合胞病毒ρ多肽（RSV F)，其中胺基酸 100 至 150 係經 SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10' SEQ ID NO： 1 l 、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:91 或 SEQ ID NO:92之胺基酸序列取代。 1 5 ·如申請專利範圍第1 4項之重組R S V F，其中該R S V F之胺基酸1 0 〇至1 5 0係經S E Q ID N Ο : 1 2之胺基酸序列取代如申請專利範圍第15項之重組RSV F，其中該RSV F之胺基酸 100 至 150 係經 SEQ ID NO:9、SEQ ID ΝΟ:3、 SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:ll、 SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:92之胺基酸序列取代。 1 7 ·如申請專利範圍第1 4項之重組R S V F，其中胺基酸 100至150係經SEQ ID NO: 9之胺基酸序列取代。 1 8 ·如申請專利範圍第1 4或1 5項之重組R S V F，其中該 RSV F係呈單體' 三體或單體與三體之組合的形式。 1 9 ·如申請專利範圍第1 6或1 7項之重組R S V F，其中該 -3- 201116294 RSV F係呈單體、三體、三體之玫瑰花簇或彼等之組合的形式。

20·—種重組多肽，其係選自SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO: 27、 SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:3 1 ' SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:41、 SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、 SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51 ' SEQ ID NO:52 ' SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:57、 SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、 SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86、 SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO: 93、任何上述序列中信號肽及/或HIS標記係經刪除者或彼等之組合。 21.如申請專利範圍第14至17及20項中任一項之重組多肽，其另包含異源性寡聚結構域、表位或信號肽。 22 .如申請專利範圍第2 1項之重組多肽，其中該異源性寡聚結構域係選自流感血球凝集素、SARS刺突蛋白、 HIV gp41、HIV NadA、HIV經修飾之 GCN4或 HIV ATC 酶之三聚化結構域。 23.—種經分離之核酸，其編碼如申請專利範圍第14 -4-

201116294 至2 1項中任—項之多肽。 24·如申請專利範圍第23項之經分離我複製之RNA分子。 2 5 . —種免疫原性組成物，其包含如 2 4項之自我複製之RN A分子。 2 6.如申請專利範圍第25項之免疫原包含遞送系統。 2 7 . —種如申請專利範圍第1至1 3項中性組成物用於製備供誘導個體對RSV F之上之用途。 28. —種如申請專利範圍第25項之免於製備供誘導個體對RSV F之免疫反應的| 29. —種供製備包含經切割之RSV F蛋組成物之方法，該方法包含： a) 提供含有當經切割時產生？！及F2& 割位點之未經切割之RSV F蛋白胞外域多之可溶性R S V F蛋白胞外域多肽之胺基酸j 109及133至136處包含經改變之三咲喃基位，且該未經切割之可溶性RSV F蛋白胞以未經切割形式產製彼等之細胞；及 b) 以切割該蛋白酶切割位點之蛋白酶溶性R S V F蛋白胞外域多肽’藉此產製包性RSV F蛋白胞外域多肽之組成物。 3〇·如申請專利範圍第29項之方法’其之核酸，其係自申請專利範圍第性組成物，其另任一項之免疫原免疫反應的藥物疫原性組成物用藉物上之用途。白胞外域多肽之單位之蛋白酶切肽，該未經切割多列在位置106至二氫咪唑切割部外域多肽係得自切割所提供之可含經切割之可溶中在步驟b)中， 201116294 所提供之未經切割之RSV F蛋白胞外域多狀係於一或多個介於約位置1 0 1至約位置1 6 1之位置處經切割。 3 1 ·如申請專利範圍第3 〇項之方法，其中所提供之未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係於一或多個介於約位置 106至約位置142之位置處經切割。 3 2 ·如申請專利範圍第2 9至3 1項中任一項之方法，其中在步驟a)中所提供之未經切割之rSV f蛋白胞外域多肽係經純化。 33. 如申請專利範圍第29至31項中任一項之方法，其中在步驟a)中所提供之未經切割之RSV ρ蛋白胞外域多狀包含完整之融合肽。 34. 如申請專利範圍第33項之方法，其中在步驟b)中之切割導致形成三體之玫瑰花簇。 3 5 ·如申請專利範圍第3 4項之方法，其另包含c)純化該三體之玫瑰花族。 3 6 .如申請專利範圍第3 5項之方法，其中純化該三體之玫瑰花簇包含大小排除層析。 37.如申請專利範圍第29至31項中任一項之方法，其中在步驟a)中所提供之未經切割之Rsv f蛋白胞外域多肽包含經改變之融合肽。 3 8 .如申請專利範圍第3 7項之方法，其中在該未經切割之R S V F蛋白胞外域多肽中至少—部分之融合肽係經刪除。 39·如申請專利範圍第37項之方法，其中胺基酸！37至 201116294 153'胺基酸137至146、胺基酸137至145或胺基酸137至 142係自該融合肽中删除。 40.如申請專利範圍第37項之方法，其中在步驟b)中之切割導致三體之形成。 4 1 .如申請專利範圍第4 0項之方法，其另包含c)純化該三體。

42 ·如申請專利範圍第4 1項之方法，其中純化該三體包含大小排除層析。 43 .如申請專利範圍第29至3 1項中任一項之方法，其中在步驟a)中所提供之未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係於昆蟲細胞、哺乳動物細胞、鳥類細胞、酵母菌細胞、四膜蟲（Tetrahymena)細胞或彼等之組合中表現。 44.如申請專利範圍第29至31項中任一項之方法，其中在步驟a)中所提供之未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽係於細胞培養條件培養基中提供。 45 .如申請專利範圍第44項之方法，其中該細胞培養條件培養基係選自昆蟲細胞培養條件培養基、哺乳動物細胞培養條件培養基或彼等之組合。 46. 如申請專利範圍第29至31項中任一項之方法，其中該三體之玫瑰花簇包含至少一種選自Furdel或DelP23 furdel之多狀的Fi及F2片段。 47. 如申請專利範圍第29至31項中任一項之方法，其中該經切割之RSV F蛋白胞外域多肽實質上不含脂質及脂蛋白。 201116294 48·—種包含經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之組成物 ’其係利用如申請專利範圍第29至47項中任一項之方法製備。 49.如申請專利範圍第48項之組成物，其中該組成物係免疫原性組成物。 5〇·—種供製備包含未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體、三體或單體與三體之組合之組成物之方法，該方法包含： a) 提供含有未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之生物性物質，該未經切割之可溶性RSV F蛋白胞外域多肽之胺基酸序列在位置106至109及133至136處包含經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位置，且該未經切割之可溶性RSV F蛋白胞外域多肽係自以未經切割形式產製彼等之細胞分泌；及 b) 自該生物性物質純化未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體或三體，藉此產製該組成物。 5 1.如申請專利範圍第50項之方法，其中該生物性物質係選自昆蟲細胞培養條件培養基或細胞裂解液、哺乳動物細胞培養條件培養基或細胞裂解液、鳥類細胞培養條件培養基或細胞裂解液、酵母菌細胞條件培養基或細胞裂解液、四膜蟲（Tetrahymena)細胞培養條件培養基或細胞裂解液或彼等之組合。 52.如申請專利範圍第50項之方法，其中在b)中未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽三體係經純化。 201116294 5 3 .如申請專利範圍第5 〇項之方法，其中在b)中未經切割之R S V F蛋白胞外域多肽單體係經純化。 5 4.如申請專利範圍第50項之方法，其中在b)中之純化包含大小排除層析。 55.如申請專利範圍第5〇至54項中任一項之方法，其中該未經切割之R S V F蛋白胞外域多肽另包含經改變之融合肽。

5 6 .如申請專利範圍第5 〇項之方法，其中該未經切割之可溶性RSV F蛋白胞外域多肽包含至少一種選自furmt、 furdel、 Delp21 furx、Delp23 furx、Delp21 furdel、 Delp23 furdel或因子Xa建構物之多肽。 5 7.如申請專利範圍第50至54及56項中任一項之方法，其中該包含未經切割之R S V F蛋白胞外域多肽之組成物實質上不含脂質及脂蛋白。 58.—種包含未經切割之可溶性RSV F蛋白胞外域多肽單體或三體之組成物，其係利用如申請專利範圍第50至57 項中任一項之方法製備。 5 9 .如申請專利範圍第5 8項之組成物，其中該組成物係免疫原性組成物。 60.—種供製備包含未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體、三體或單體與三體之組合之組成物之方法，該方法包含： a)提供含有未經切割之R S V F蛋白胞外域多肽之生物性物質，其中該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之胺基 -9 - 201116294 酸序列含有經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位置，且介於約位置1 〇 1至約位置1 6 1之間的離胺酸及精胺酸殘基係經刪除或由非離胺酸或精胺酸之胺基酸取代，該RSV F蛋白胞外域多肽係得自以在約位置1 〇 1至約位置1 6 1之間未經切割形式產製彼等之宿主細胞，且該RSV F蛋白胞外域多肽在約位置1 0 1至約位置1 6 1之間係未經切割；及 b)自該生物性物質純化未經切割之RSV F蛋白胞外域多狀單體或三體或單體與三體之組合。

61. 如申請專利範圍第60項之方法，其中該生物性物質係選自昆蟲細胞培養條件培養基或細胞裂解液、哺乳動物細胞培養條件培養基或細胞裂解液、鳥類細胞培養條件培養基或細胞裂解液、酵母菌細胞條件培養基或細胞裂解液、四膜蟲細胞培養條件培養基或細胞裂解液或彼等之組合。

62. 如申請專利範圍第60項之方法，其中在b)中未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽三體係經純化。 63 ·如申請專利範圍第60項之方法，其中在b)中未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體係經純化。 6 4 .如申請專利範圍第6 0項之方法，其中在b)中未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體與未經切割之RSV ρ蛋白胞外域多肽三體係經純化。 65. 如申請專利範圍第60至64項中任一項之方法，其中在b)中之純化包含大小排除層析。 66. 如申請專利範圍第6〇至64項中任一項之方法，其 -10- 201116294 中該未經切割之R S V F蛋白胞外域多肽另包含經改變之融合肽。 6 7 .如申請專利範圍第6 0項之方法’其中該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽包含至少一種選自Furx、Furx R113Q K123N KI24N、Delp21 furx或 Delp23 furx之多肽。 68.如申請專利範圍第60至64及67項中任一項之方法，其中該包含未經切割之R S V F蛋白胞外域多狀之組成物

實質上不含脂質及脂蛋白。 69.—種包含未經切割之可溶性RSV F蛋白胞外域多肽之組成物，其係利用如申請專利範圍第60至68項中任一項之方法製備。 7 〇 .如申請專利範圍第6 9項之組成物，其中該組成物係免疫原性組成物。 7 1.—種供製備包含經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體、三體或單體與三體之組合之組成物之方法，該方法包 a) 提供含有經切割之R S V F蛋白胞外域多肽之生物性物質，該經切割之R S V F蛋白胞外域多肽含有經改變之融合肽；及 b) 自該生物性物質純化經切割之RSV F蛋白胞外域多肽。 72.如申請專利範圍第71項之方法，其中該RSV f蛋白胞外域多肽包含胺基酸序列，其中約胺基酸1 3 7至1 5 2係經刪除、約胺基酸1 3 7至1 5 3係經刪除、約胺基酸】3 7至1 4 5係 -11 - 201116294 經刪除、約胺基酸137至146係經刪除或約胺基酸137至142 係經刪除。

73 .如申請專利範圍第7 1項之方法，其中該生物性物質係選自昆蟲細胞培養條件培養基或細胞裂解液、哺乳動物細胞培養條件培養基或細胞裂解液、鳥類細胞培養條件培養基或細胞裂解液、酵母菌細胞條件培養基或細胞裂解液、四膜蟲細胞培養條件培養基或細胞裂解液或彼等之組合。 7 4.如申請專利範圍第71至73項中任一項之方法’其中在b)中經切割之RSV F蛋白胞外域多肽三體係經純化。 75 .如申請專利範圍第7 1至73項中任一項之方法，其中在b)中經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體係經純化。 7 6.如申請專利範圍第71至73項中任一項之方法，其中在b)中經切割之RSV F蛋白胞外域多肽單體與經切割之 RSV F蛋白胞外域多肽三體係經純化。

77. 如申請專利範圍第71至73項中任一項之方法，其中在b)中之純化包含大小排除層析。 78. 如申請專利範圍第71項之方法，其中該未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽包含至少該融合肽刪除多肽。 79_如申請專利範圍第71至73及78項中任一項之方法，其中該包含未經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之組成物實質上不含脂質及脂蛋白。 80.—種包含未經切割之可溶性RSV F蛋白胞外域多肽之組成物，其係利用如申請專利範圍第7 1至79項中任一項 -12- 201116294 之方法製備。 8 1 .如申請專利範圍第8 0項之組成物，其中該組成物係免疫原性組成物。 82.—種供製備包含RSV F蛋白胞外域多肽之組成物之方法，該方法包含：

a) 提供在位置133至136處包含經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位置之RSV F蛋白胞外域多肽，且該可溶性RSV F蛋白胞外域多肽係自以F2片段之形式產製彼等之細胞分泌，該F2片段與包含次單位相關但在位置1 3 6/ 1 37處未經切割；及 b) 以蛋白酶切割所提供之RSV F蛋白胞外域多肽，該蛋白酶切割RSV F蛋白胞外域介於位置處係位於101至161 之間之位點，藉此產製該組成物。 8 3.如申請專利範圍第82項之方法，其中在a)中所提供之RSV F蛋白胞外域多肽係經純化。 84.如申請專利範圍第82項之方法，其中在步驟a)中所提供之RSV F蛋白胞外域多肽係於昆蟲細胞、哺乳動物細胞、鳥類細胞、酵母菌細胞、四膜蟲（Tetrahymena)細胞或彼等之組合中表現。 8 5 ·如申請專利範圍第8 2至8 4項中任一項之方法，其中在步驟a)中所提供之R S V F蛋白胞外域多肽係於細胞培養條件培養基、細胞萃取物或彼等之組合中提供。 86.如申請專利範圍第85項之方法，其中該RSV F蛋白胞外域多肽係於細胞培養條件培養基中提供，該培養基選 -13- 201116294 自昆蟲細胞培養條件培養基、哺乳動物細胞培養條件培養基、鳥類細胞培養條件培養基、酵母菌細胞培養條件培養基、四膜蟲細胞培養條件培養基或彼等之組合。 87.如申請專利範圍第82至84項中任一項之方法，其中該RSV F蛋白胞外域多肽包括至少C端三呋喃基二氫咪唑多肽。

8 8.如申請專利範圍第82至84項中任一項之方法，其中在b)中所產製之經切割之R S V F蛋白胞外域多肽實質上不含脂質及脂蛋白。 89. —種包含經切割之RSV F蛋白胞外域多肽之組成物，其係利用如申請專利範圍第82至8 8項中任一項之方法製備。 90. 如申請專利範圍第89項之組成物，其中該組成物係免疫原性組成物。

91. —種供產製包含RSV F蛋白胞外域多肽之組成物之方法，該方法包含： a) 提供含有RSV F蛋白胞外域多肽之生物性物質，該 RSV F蛋白胞外域多肽在位置133至136處包含經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位置，且該可溶性RSV F蛋白胞外域多肽係自以F2片段形式產製彼等之細胞分泌，該F2片段與包含次單位相關但在位置1 3 6/ 1 3 7處未經切割，唯其該經改變之三呋喃基二氫咪唑切割位置不刪除胺基酸1 3 1至 134 ;及 b) 自該生物性物質純化該RSV F蛋白胞外域多肽，藉 -14 - 201116294 此產製該組成物。 9 2.如申請專利範圍第9〗項之方法，其中該生物性物質係選自昆蟲細胞培養條件培養基或細胞裂解液、哺乳動物細胞培養條件培養基或細胞裂解液、鳥類細胞培養條件培養基或細胞裂解液、酵母菌細胞條件培養基或細胞裂解液、四膜蟲細胞培養條件培養基或細胞裂解液或彼等之組合。

9 3.如申請專利範圍第91項之方法，其中在b)中RSV F 蛋白胞外域多肽單體、三體或單體與三體之組合係經純化 9 4 .如申請專利範圍第9 3項之方法，其中在b)中之純化包含大小排除層析。 95.如申請專利範圍第91至94項中任一項之方法，其中該RSV F蛋白胞外域多肽包括至少C端三呋喃基二氫咪唑多肽。 9 6.如申請專利範圍第91至94項中任一項之方法，其中該包含RSV F蛋白胞外域多肽之組成物實質上不含脂質及脂蛋白。 97.—種包含RSV F蛋白胞外域多肽之組成物，其係利用如申請專利範圍第9 1至96項中任一項之方法製備。 9 8 ·如申請專利範圍第9 7項之組成物，其中該組成物係免疫原性組成物。 -15-