TR201815631T4 - Serumsuz kültüre ve süspansiyon kültürüne uyarlanan mdck türevi hücre hatları ve bu hücreleri kullanarak aşı virüsü hazırlamak için yöntem. - Google Patents
Serumsuz kültüre ve süspansiyon kültürüne uyarlanan mdck türevi hücre hatları ve bu hücreleri kullanarak aşı virüsü hazırlamak için yöntem. Download PDFInfo
- Publication number
- TR201815631T4 TR201815631T4 TR2018/15631T TR201815631T TR201815631T4 TR 201815631 T4 TR201815631 T4 TR 201815631T4 TR 2018/15631 T TR2018/15631 T TR 2018/15631T TR 201815631 T TR201815631 T TR 201815631T TR 201815631 T4 TR201815631 T4 TR 201815631T4
- Authority
- TR
- Turkey
- Prior art keywords
- mdck
- cell line
- culture
- cells
- viruses
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 41
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 14
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title abstract description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 19
- 241000282465 Canis Species 0.000 claims abstract description 7
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 22
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 20
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 13
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 12
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 claims description 3
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 claims description 3
- 241000709687 Coxsackievirus Species 0.000 claims description 2
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 claims description 2
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 2
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 claims description 2
- 241000710843 Japanese encephalitis virus group Species 0.000 claims description 2
- 241000712902 Lassa mammarenavirus Species 0.000 claims description 2
- 241001480512 Mammalian orthoreovirus 3 Species 0.000 claims description 2
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 claims description 2
- 241000711386 Mumps virus Species 0.000 claims description 2
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 claims description 2
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 claims description 2
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 claims description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 2
- 241000710772 Yellow fever virus Species 0.000 claims description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 2
- 229940051021 yellow-fever virus Drugs 0.000 claims description 2
- 238000012136 culture method Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 144
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 7
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 5
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 description 5
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 4
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 2
- 102000020897 Formins Human genes 0.000 description 1
- 108091022623 Formins Proteins 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 1
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 description 1
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 description 1
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 description 1
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 231100001221 nontumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000005727 virus proliferation Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0684—Cells of the urinary tract or kidneys
- C12N5/0686—Kidney cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/90—Serum-free medium, which may still contain naturally-sourced components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16151—Methods of production or purification of viral material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16151—Methods of production or purification of viral material
- C12N2760/16152—Methods of production or purification of viral material relating to complementing cells and packaging systems for producing virus or viral particles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16171—Demonstrated in vivo effect
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
- C12N2760/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
- C12N2760/16251—Methods of production or purification of viral material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
- C12N2760/16251—Methods of production or purification of viral material
- C12N2760/16252—Methods of production or purification of viral material relating to complementing cells and packaging systems for producing virus or viral particles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
- C12N2760/16271—Demonstrated in vivo effect
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Buluş, bir Madin-Darby köpek böbreği (MDCK) türevi hücre hattı ile ilgilidir. MDCK türevi hücre hattı ATCC CC-34 erişim numarası altında MDCK hücrelerinden elde edilir. MDCK türevi hücre hattı, serumsuz kültür ve süspansiyon kültürü ile hazırlanabilmektedir. Tercihen MDCK türevi hücre hattının düşük tümörijenisitesi vardır veya tümörijenisitesi yoktur. MDCK türevi hücre hattı tercihen MDCK Sky1023, MDCK Sky10234 ve MDCK Sky3851 arasından seçilir. Buluş ayrıca MDCK türevi hücreleri büyütmek için bir kültür yöntemi ve MDCK türevi hücreleri kullanarak bir aşı virüsü üretmek için bir yöntem ile ilgilidir.
Description
TEKNIK ALAN
Mevcut bulus, tasiyicilara baglanma ihtiyaci olmadan serumsuz kültür ve Süspansiyon
kültürü ile hazirlanabilen yeni bir MDCK türevi hücre hatti, MDCK türevi hücre hattini
hazirlamak için bir yöntem ve MDCK türevi hücre hattini kullanarak bir asi virüsü
üretmek için bir yöntem ile ilgilidir.
TEKNIGIN BILINEN DURUMU
Döllenmis yumurtalar, fare beyinleri, primer hücreler ve olusturulmus hücreler genel
olarak asilarin üretimi için kaynaklar olarak kullanilmaktadir. Ancak bu geleneksel asi
kaynaklarinin çesitli problemleri vardir. Örnegin asi üretimi için döllenmis tavuk
yumurtasi kullanilmasi amaçlandigi zaman tavuklari yetistirmek, asi üretim
programlarina bagli olarak döllenmis yumurtalari yönetmek ve tavuk proteinlerinden
türetilen bilesenleri saflastirmak konusunda zorluklar vardir.
Fetal calf serumu genel olarak hücre kültürü için bir büyüme faktörü olarak
eklenmektedir. Ancak serum prionlar ve virüslerle kontaminasyona karsi dirençli degildir
ve bunun ticari ürünleri kalite açisindan degisiklik gösterebilmektedir. Bunun ötesinde
Avustralya ve Yeni Zelanda buzagilarindan elde edilen yüksek kaliteli fetal calf serumu
ürünleri son derece pahali olup, üretim maliyetinde bir artisla sonuçlanmaktadir.
MDCK hücre hatlari çesitli virüs türlerinin hizla çogalabildigi yerlesik hücre hatlaridir.
MDCK hücre hatlari diger yüzeylere baglanmaya yönelik güçlü bir egilim sergilediginden
ötürü, büyük ölçekli kültür için büyük alanli kültür kaplari ve tasiyicilari gerekli olup,
kayda deger maliyetler getirmektedirler. Spesifik olarak kültür ekipmanina veya
tasiyicilara yönelik yatirim maliyetleri çok fazladir ve tasiyicilara baglanan hücreleri
uzaklastirmak için bir isleme adimi gerekmekte olup, bu da hücre kaybi ve hücre hasari
riski yaratmaktadir. Dolayisiyla serumsuz kültür ve süspansiyon kültürü ile
hazirlanabilen ve dolayisiyla ekonomik ve güvenli bir sekilde hayvan hücre kültürü
araciligiyla bir asinin üretiminde kullanima uygun olan bir hücre hattina yönelik bir
ihtiyaç mevcuttur.
6,825,036 sayili ABD patenti, serumsuz kültürde ve süspansiyon kültüründe bir kati
tasiyici olmadan büyüyebilen bir MDCK türevi hücre hattini açiklamaktadir. Bu ABD
patenti hücre hattinin süspansiyon kültürüne uyarlanmasina yönelik iki yaklasim
kullanmaktadir. Birinci yaklasima göre, MDCK türevi hücre hatti bir döner kap içinde
dogrudan süspansiyon kültürü ile elde edilmektedir. Bu durumda hücre yogunlugu
endüstriyel ölçekte üretim için gerekli bir seviye olan 1,0 x 106 hücre/ml'ye
ulasmaktadir. Ikinci yaklasima göre MDCK türevi hücre hatti orijinal MDCK hücrelerinin
tasiyicilar olarak boncuklar mevcudiyetinde kültürlenmesi, kültür ölçeginin genisletilmesi
ve kültürlenmis hücrelerin tasiyicilar olmadan büyütülmesi yoluyla elde edilmektedir.
Ikinci yaklasimin prosedürün nispeten karmasik olmasi dezavantaji vardir.
tümörijenisiteden bahsetmemektedir. Yine MDCK 33016'nin tümörijenik oldugunu
belirten raporlar vardir (bkz. Rappuoli ve Del Giudice; "Influenza Vaccines of the
Future" Springer Science & Business Media, (2011), syf. 303, orta paragraf).
tümörijenisiteden bahsedilmemektedir ancak - yukarida söylendigi üzere - bu hücre
hattinin tümörijinesitesini ima eden raporlar vardir.
Yukarida belirtildigi gibi, orijinal MDCK hücre hatlarinin tümörijenik olduguna dair çesitli
raporlar vardir. Dolayisiyla orijinal MDCK hücre hatlari asi üretimi için kullanildigi zaman
potansiyel bir tümörijenisite tehlikesi mevcuttur. Bu kosullar altinda serumsuz kültür ve
süspansiyon kültürü ile hazirlanabilen ve tercihen çok düsük tümörijenisitesi olan veya
tümörijenik olmayan yeni bir hücre hatti gelistirmeye yönelik bir Ihtiyaç vardir.
BULU UN A IKLAMASI
Teknik Problem
Mevcut bulus teknigin bilinen durumuna ait problemlerini çözmek için tasarlanmis olup,
dolayisiyla mevcut bulusun bir amaci avantajli olarak serumsuz kültür ve süspansiyon
kültürü ile hazirlanabilen ve asi virüslerini büyütmek için kullanilabilen orijinal MDCK
hücre hatlari ile karsilastirildiginda düsük tümörijenisitesi olan veya tümörijenisitesi
olmayan bir MDCK türevi hücre hatti saglamaktir. Mevcut bulusun baska bir amaci, bu
hücre hattini kullanarak bir virüs, özellikle bir influenza virüsü üretmek için bir yöntem
saglamaktir.
Problemin çözümü
Teknik çözüm
Yukaridaki amaçlari elde etmek için mevcut bulus, ATCC CCL-34 erisim numarasi
altinda saklanan MDCK hücrelerinden türetilen, hücre büyümesi için serum
gerektirmeyen ve tasiyicilara baglanma ihtiyaci olmadan süspansiyon kültürü ile
hazirlanabilen bir özel Madin-Darby köpek böbregi (MDCK) türevi hücre hatti
saglamaktadir. Mevcut bulusun MDCK türevi hücre hatti MDCK Sky1023 (DSM
arasindan seçilmektedir.
Mevcut bulusun MDCK türevi hücre hatti asagidaki adimlarla hazirlanabilmektedir: 51)
bir orijinal MDCK hücre hattinin serumsuz kültüre uyarlanan bir hücre hatti hazirlamak
için serumsuz bir ortama uyarlanmasi ve 52) serumsuz kültüre uyarlanan hücre hattinin
tasiyici uyarlamasina maruz kalmadan süspansiyon kültürüne dogrudan uyarlanmasi ve
istenen hücre hattini taranmasi.
Daha spesifik olarak mevcut bulusun MDCK türevi hücre hatti, (a) ATCC CCL-34 erisim
numarasi altinda saklanan orijinal MDCK hücre hatlarinin hazirlanmasini, (b) orijinal
MDCK hücrelerinin serumsuz ortamda büyümesine olanak saglamak için orijinal MDCK
hücrelerinin kimyasal olarak tanimlanmis serumsuz bir ortama uyarlanmasini ve (c) (b)
adiminda uyarlanan bagli MDCK hücrelerinin, MDCK hücrelerinin tasiyicilar olmadan bir
süspansiyon durumunda büyümesine olanak saglamak üzere tasiyici uyarlanmasina
maruz kalmadan süspansiyon kültürüne dogrudan uyarlanmasinin indüklenmesini
içeren bir yöntemle hazirlanabilmektedir.
Bu yöntemle yeni olusturulan MDCK türevi hücre hatti serumsuz kültür ve süspansiyon
kültürü ile hazirlanabilmektedir. Yukarida belirtildigi gibi mevcut bulusun MDCK türevi
hücre hatti Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ),
arasindan seçilmektedir.
Burada kullanildigi haliyle "serumsuz ortam” terimi serumun büyük ölçüde eklenmedigi
ve mevcut bulusun olusturulan hücre hattinin kültür vasitasiyla hazirlanabildigi bir
ortam anlamina gelmektedir.
tercihen hacimce %0,1 veya daha az, daha da tercihen hacimce %0,01 veya daha az
bir miktarda bulundugu, en çok tercihen hiç bulunmadigi anlamina gelmektedir.
6,825,036 sayili ABD patenti, süspansiyon kültürüyle serumsuz bir ortamda bir MDCK
türevi hücre hatti hazirlamak için iki yaklasimi kullanmaktadir. Birinci yaklasim, bir
döner kapta orijinal bir MDCK hücre hattinin dogrudan süspansiyon kültürünü
denemektedir. Bu durumda hücre yogunlugu endüstriyel ölçekte üretim için gerekli bir
seviye olan 1,0 x 106 hücre/ml'ye erismektedir. Ikinci yaklasima göre MDCK türevi
hücre hatti, orijinal MDCK hücrelerinin tasiyicilar mevcudiyetinde kültürlenmesi ve
kültürlenmis hücrelerin tasiyicilar olmadan büyütülmesi yoluyla elde edilmektedir.
Bunun aksine mevcut bulus, süspansiyon kültürüyle serumsuz bir ortamda
hazirlanabilen yeni olusturulmus bir hücre hattini hazirlamak için tasiyici uyarlanmasina
maruz kalmadan orijinal MDCK hücrelerinin bir döner kapta dogrudan kültürünü
içinde 1,0 x 106 hücre/ml hücre yogunluguna ulasirken, mevcut bulusun olusturulan
hücre hatti yaklasik 3 gün içinde en az 1.0 x 106 hücre/ml hücre yogunluguna ulasarak
daha üstün bir proliferasyon potansiyelini göstermektedir.
Birçok rapor önceden bilinen MDCK hücre hatlarinin tümörijenik oldugunu
belirtmektedir. Bunun aksine, mevcut bulusun olusturulan hücre hattinin bilinen MDCK
hücre hatlariyla karsilastirildigi zaman düsük tümörijenisitesi vardir veya tümörijenisitesi
yoktur. Spesifik olarak, çiplak farelerdeki hücre hatlarini, hücre lizatlarini ve hücre
DNA'Iarini kullanan testlerle Örnekler bölümünde hazirlanan yeni olusturulmus MDCK
türevi hücre hatlarinin, mevcut MDCK hücre hatlari ile karsilastirildiginda düsük
tümörijenisitesi oldugu veya tümörijenisitesi olmadigi onaylanmistir. Bu test
sonuçlarindan mevcut bulusun MDCK türevi hücre hattinin asi üretimi için kullanilacak
kadar stabil oldugu sonucu çikarilabilmektedir. Daha da tercihen mevcut bulusun MDCK
türevi hücre hatti serumsuz kültür ve süspansiyon kültürü ile hazirlanabilmektedir.
Mevcut bulus ayrica, bulusun MDCK türevi hücre hattini kullanarak bir asi virüsü
üretmek için bir yöntem saglamaktadir. Bulusun MDCK türevi hücre hattini kullanarak
büyütülebilen virüs örnekleri influenza virüslerini, kizamik virüslerini, Japon ansefalit
virüslerini, kabakulak virüslerini, kizamikçik virüslerini, polio virüslerini, HSV-1, HSV-2,
kuduz virüslerini, RS virüslerini, reovirüs tip 3'ü, sarihumma virüsünü, parvovirüslerini,
coxsackie virüslerini, adenovirüs tip 1 ila 47'yi, Lassa virüslerini ve vaksiniya virüslerini
içermektedir. Mevcut bulusun MDCK türevi hücre hatti en çok influenza virüslerinin
Daha spesifik olarak mevcut bulus, bir hücre kültüründen bir influenza virüsü üretmek
için bir yöntem saglamakta olup, yöntem sunlari içermektedir: (a) serumsuz bir kültür
ortaminin yaklasik 1 x 104 ila yaklasik 1 x 106 hücre/ml konsantrasyonda MDCK türevi
hücrelerle asilanmasi; (b) yaklasik 40 ila yaklasik 100 rpm karistirma hizi, yaklasik 6.5
ila yaklasik
konsantrasyonundan olusan gruptan seçilen bir veya daha fazla kültür kosulunu
korurken MDCK türevi hücrelerin kültürlenmesi de dahil olmak üzere hücre yogunlugu
en az yaklasik 5 x 106 hücre/ml'ye ulasana kadar MDCK türevi hücrelerin tek
kullanimlik bir biyoreaktör sisteminde büyümesine olanak saglanmasi, (c) büyümüs
MDCK türevi hücrelerin bir influenza virüsü ile enfekte edilmesi; (d) enfekte büyümüs
MDCK türevi hücrelerin influenza virüsünün klonlanmasina olanak saglayan kosullar
altinda kültürlenmesi ve (e) influenza virüsünün hücre kültürü bilesiminden izole
edilmesi. Tercihen mevcut bulusun influenza virüsü üretim yöntemi ayrica hücre
kültürüne bir taze ortam eklenmesini veya ortamin bir kisminin (b) adiminda taze bir
ortamla degistirilmesini içermektedir.
Mevcut bulus ayrica virüs üretim yöntemi ile üretilen bir virüsü veya bir virüs antijenini
açiklamaktadir. Mevcut bulus ayrica virüs antijenini içeren bir immünojenik farmasötik
bilesimi açiklamaktadir.
Bulusun Avantajli Etkileri
Mevcut bulusun yeni MDCK türevi hücre hatti serumsuz kültür ve süspansiyon kültürü
ile hazirlanabilmektedir ve düsük tümörijenisitesi olmasi veya tümörijenisitesi olmamasi
avantajina sahiptir. Ek olarak mevcut bulusun yeni MDCK türevi hücre hatti virüs
proliferasyonu için etkili bir sekilde kullanilabilmektedir. Ayrica mevcut bulusun yeni
MDCK türevi hücre hatti bir virüsün, özellikle bir influenza virüsünün üretiminde
kullanim için uygundur.
SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI
Ekli sekiller bulusun tercih edilen uygulamalarini göstermekte ve yukaridaki açiklama ile
birlikte bulusun daha iyi anlasilmasini saglama islevi görmektedir.
SEKIL 1, döner kaplarda süspansiyon kültürü sirasinda MDCK türevi hücre
hatlarinin hücre büyüme profillerini göstermektedir;
SEKIL 2, bir influenza virüsünün bir temsili saflastirma islemini gösteren bir akis
diyagramidir ve
SEKIL 3, MDCK türevi hücre hatlarinda büyüyen virüslerin saflastirilmis
örneklerini kullanarak hayvan deneylerinde elde edilen HI serum test sonuçlarini
göstermektedir.
BULUSU UYGULAMA SEKLI
Asagidaki örnekler bulusun daha iyi anlasilmasina yardimci olmak için saglanmaktadir.
Bu örnekler bulusun ait oldugu teknikte siradan bilgiye sahip kisilere bulusu tam olarak
<Örnek 1> Serumsuz Kültür ve Süspansiyon Kültürü ile MDCK Türevi Hücre
Hatlarinin Hazirlanmasi
Bir MDCK hücre hatti olan CCL-34 A'ITC'den tedarik edilmistir. CCL-34, 37°C'de ve %5
COz'de bir T-25 kabinda %10 serum ile takviye edilmis bir EMEM ortaminda
kültürlenmistir. Hücreler genisledikten sonra bunlar EMEM ortamindan ve serumsuz bir
ortamdan (%50) olusan bir ortamda kültürlenmistir. Hücrelerin büyümesinin kültür
sirasinda normal olup olmadigi dogrulanmistir. Hücrelerin büyümesinin normal oldugu
dogrulandigi zaman büyümüs hücreler serumsuz bir ortam (%75) içeren bir ortamda
kültürlenmistir. Bu prosedür serumsuz bir ortama (%100) uyarlanan bir hücre hatti
elde etmek için tekrarlanmistir. EX-CELL MDCK (Sigma), UItraMDCK (Lonza) ve VP-SFM
(Invitrogen) serumsuz kültür için ortam olarak kullanilabilmektedir.
Serumsuz ortama uyarlanan hücre hatti bir T-kapta yeterli sekilde genisletilmistir.
Bunun üzerine, genisletilmis hücre hatti 37°C'de %5 COz'de bir döner kapta (Coming)
40-80 rpm'lik bir hizda karistirma ile süspansiyon kültürüne uyarlanmistir. Kültür
ortaminin pH'i azaltildigi zaman veya hücreler önceden belirlenen bir seviye üzerinde
büyütüldügü zaman, ortam yeni ortamla degistirilmistir veya hücreler alt
kültürlenmistir. 3-6 ay boyunca süspansiyon kültürüne uyarlamanin ardindan hücre
konsantrasyonu 2 x 106 hücre/ml'ye veya daha fazlasina ulasmistir. Hücre
yasayabilirligi %95 veya üstünde olmustur ve tekli hücreler içine dogru süspansiyon
kültürü gözlemlenmistir. EX-CELL ve SMIF-6
(Invitrogen) süspansiyon kültürü için ortam olarak kullanilabilmektedir. Serumsuz
kültürün ve süspansiyon kültürünün bir sonucu olarak üç tür MDCK türevi hücre hatti
adlandirilmistir.
<Örnek 2> Hücre Hatlarinin Proliferasyon Potansiyellerinin Degerlendirmesi
Serumsuz ortamda kültürle hazirlanan MDCK türevi hücre hatlari Tablo 1'de belirtilen
kosullar altinda kültürlenmistir. MDCK türevi hücre hatlarinin proliferasyon potansiyelleri
degerlendirilmistir. Bir kontrol olarak MDCK hücre hatti (ATCC CCL-34) %10 serum ile
takviye edilmis bir ortamda büyütülmüstür.
MDCK türevi hücre hatlari Kontrol (ATCC CCL-34)
Kültür ortami EX-CELL MDCK (Sigma),UltraMDCK EMEM (Lonza)
(Lonza), VP-SFM (Invitrogen)
Katki maddeleri L-Glutamin (Lonza) %2 v/v L-Glutamin (Lonza)
serumu (Lonza) %10
Kültür kosullari 37 °C, %5 (:02, nem 37 °C, %5 COz, nem
Kültür hacmi T-75 kap (15 ml) T-75 kap (15 ml)
Hücre konsantrasyonlari kültürün baslangicinda yaklasik 1,0 x 105 hücre/ml olmustur.
Hücre konsantrasyonu yaklasik 1 x 106 hücre/ml'ye ulastigi zaman veya kültürden 3-4
gün sonra hücreler alt kültürlenmistir. Alt kültürün baslangicinda hücre
konsantrasyonlari 1 x 105 hücre/ml'ye ayarlanmistir.
Serumsuz ortamda büyüyen MDCK türevi hücre hatlarinin her biri serum ortaminda
büyüyen MDCK hücre hattininki ile karsilastirilabilen bir hücre büyüme orani
göstermistir.
<Örnek 3> Hücre Hatlarinin Proliferasyon Profillerinin ve Alt Kültür
Stabilitesinin Degerlendirilmesi
Serumsuz kültüre ve süspansiyon kültürüne uyarlanan üç tür hücre hatti kesintisiz
olarak ilgili döner kaplarda kültürlendikten sonra, bunlarin proliferasyon profilleri ve alt
kültür stabilitesi degerlendirilmistir. Kültürün baslangicindaki hücre konsantrasyonu
yaklasik 4 x 105 hücre/ml'ye ayarlanmistir. Kültürden yaklasik 3-4 gün sonra hücre
konsantrasyonlari yaklasik 2 x 106 hücre/ml'ye veya daha fazlasina ulasmistir. Kültür
asagidaki kosullar altinda gerçeklestirilmistir. Sonuçlar SEKIL 1'de gösterilmektedir.
Baslangiç hücre konsantrasyonu: 4 x 105 hücre/ml
Spinner dönme hizi: 60 rpm
Kültür kosullari: 37 °C, %5 COz, nem
Alt kültür kosulu: Kültürden sonra 3-4 gün
<Örnek 4> Virüs Proliferasyonunun Degerlendirmesi
2010/2011 mevsimsel influenza asi suslari asagidaki süspansiyon kültürü kosullari
altinda MDCK türevi hücreler kullanilarak büyütülmüstür:
Hücre konsantrasyonu: 2 x 106 hücre/ml
Kültür ölçegi: 1,000 ml döner kap
Spinner dönme hizi: 60 rpm
Kültür kosullari: 34 °C, %5 COz, nem
Kültür süresi: 3 gün
Influenza virüslerinin 37 °C'de degil de 34 °C'de kültürlenme sirasinda daha iyi
büyüdügü yaygin olarak bilinmekte olup, bu durum deneysel olarak dogrulanmistir.
Hücre hatlarini kültür sirasinda influenza virüsleri ile enfekte etmek için kültür ortamina
tripsin dahil edilmistir. Influenza virüslerinin titreleri hemaglütinasyon analizi ile
ölçülmüstür. 3 gün boyunca kültürün ardindan hücrelerin çogu ölmüstür. Kültür
süpernatantlari toplanmis ve virüslerin titreleri ölçülmüstür. Sonuçlar Tablo 2'de
gösterilmektedir. Tablo 2'deki sonuçlardan görülebildigi üzere virüslerin çogu 1024 veya
daha fazla olan HA titreleri göstermistir. Virüslerin büyüme seviyeleri %10 FBS içeren
ortamda kültürlenen yumurtalarinkine veya MDCK hücrelerininkine benzer olmustur. Bu
sonuçlar MDCK türevi hücre hatlarinin serumsuz kültür ve süspansiyon kültürü kosullari
altinda virüslerin etkili üretimi için uygun oldugunu kanitlamistir.
Virüs MDCK MDCK MDCK
<Örnek 5> Büyümüs Virüslerin Antikor Olusturma Kabiliyetinin
Tanimlanmasi
MDCK türevi hücrelerde büyütülmüs influenza virüslerinin antikorlar olusturma
kabiliyetini tanimlamak için virüsler kültür çözeltilerinden saflastirilmis ve farelere
asilanmistir. Virüslerin antikor degerleri ölçülmüstür. Saflastirma islemine iliskin bir akis
diyagrami SEKIL 2'de gösterilmekted'ir ve kisa bir açiklama asagida verilmektedir.
Ilk olarak virüs kültür çözeltilerinin her biri Iizatlari buradan uzaklastirmak için
santrifüjlenmis ve 0,45 pm filtre araciligiyla filtrelenmistir. Filtrat, 300 kDa kesme
kartusu kullanarak ultrafiltrasyon vasitasiyla konsantre edilmistir ve virüs formalinle
Inaktive edilmistir. Bunun üzerine, virüs bir sükroz konsantrasyon gradyani araciligiyla
ultrasantrifügasyon vasitasiyla kültür çözeltisinden izole edilmistir. Virüs Triton X-100 ile
islemle kesilmistir, deterjani uzaklastirmak için ultrafiltrasyonla konsantre edilmistir, 0,2
pm filtre araciligiyla filtrelenmis ve bir asi çözeltisi saglamistir.
kullanilarak büyütülen virüs susu A/California/07/2009'un (H1N1) saflastirilmis
çözeltileri virüs susunun etkisini tanimlamak için hayvan deneylerine yönelik
kullanilmistir. Bir kontrol olarak bir 08/09 mevsimsel influenza asisi (NR-148, NYMC X-
175C, B/ Florida/4/2006) kullanilmistir. Toplam alti test grubu kullanilmis olup, bunlarin
her biri bes fareye asilanmistir. Bes fareden serum örnekleri toplanmistir. Bir
hemaglütinasyon inhibisyon (HI) testi virüsün antikor degerini ölçmek için toplanan
serum üzerinde gerçeklestirilmistir.
Serum, test grubunun farelere enjeksiyonundan önce (0. hafta) bir kapiler tüp
kullanilarak farelerin retro-orbital pleksusundan kanin alinmasi yoluyla elde edilmistir.
Kanin alinmasindan sonra toplam 200 ul'lik bir test grubu her bir farenin arka
bacaklarina (her bacak için 100 pl) IM yoluyla enjekte edilmistir. Enjeksiyondan iki
hafta sonra serum yukarida açiklananla ayni sekilde Retro-orbital pleksustan kan
alinmasi yoluyla elde edilmistir. 0. haftada enjekte edilenle ayni miktarda test grubu
antikorlar olusturma kabiliyetini arttirmak için farelerin her birine asilanmistir.
Enjeksiyondan dört hafta sonra serum yukarida açiklananla ayni sekilde retro-orbital
pleksustan kari alinmasi yoluyla elde edilmistir.
Elde edilen serum örnekleri asagidaki prosedürle islenmistir. Farelerden çalinan serum
örnekleri toplanmis ve 30 ul'lik örneklere bölünmüstür. Her bir 30 pl örnege 90 ul RDE
eklenmistir ve en az 18 saat boyunca 37°C'de beklemeye birakilmistir. Karisim en az 30
dakika daha 56 °C'de beklemeye birakilarak RDE inaktive edilmistir. Sonrasinda 120 ul
alyuvari sonradan eklenmistir, yeterli sekilde süspansiyon haline getirilmistir ve 1 saat
boyunca 4 °C'de beklemeye birakilmistir. Çöken kan hücreleri 30 dakikalik araliklarda
yeninden süspansiyon haline getirilmistir. Bunun üzerine, serumu ayirmak için 10
dakika boyunca 1,200 rpm'de süspansiyon santrifüjlenmistir. Serumun antikor degerini
ölçmek için serum üzerinde HI testi gerçeklestirilmistir. Ölçülen sonuçlar Tablo 3'te
gösterilmektedir. Bütün deney gruplarinin 40 veya daha fazla HI titresine sahip oldugu
ölçülmüstür. Yani MDCK türevi hücrelerden kültürlenen virüs hayvanlara enjekte edildigi
zaman, mevcut asiya benzer sekilde virüse karsi antikorlarin olustugu dogrulanmistir.
Bu sonuçlardan MDCK türevi hücre hatlarinin virüs asilarinin üretimi için faydali oldugu
sonucu çikarilabilmektedir.
Deney grubu Hücre hatti Asilanan antijen miktari HI titresi
1 MDCK Sky1023 15 ug/fare 80
4 MDCK Sky3851 15 ug/fare 80
MDCK Sky3851 7,5 ug/fare 80
6 Referans asi 320
<Örnek 6> Çiplak Farelerdeki Hücre Hatlarinin Tümörijenisitesinin
Tanimlanmasi
Hücre hatlari MDCK Sky1203 ve MDCK Sky3851'nin tümörijenisitesini degerlendirmek
için MDCK türevi hücre hatlari ve bunlardan türetilen maddeler (hücre Iizatlari ve hücre
DNA'Iari dahil olmak üzere) Tablo 4'te belirtildigi gibi test hayvanlari olarak BALE/C-
nu/nu farelerinin hipodermisine nakledilmistir. Tümörlerin 12 hafta boyunca olusturulup
olusturulmadigini belirlemek için bir gözlem yapilmistir. Hücreler 101, 103, 105 ve
107 hücre dozlarinda asilanmistir, hücre lizatlari 105 ve 107 hücre dozlarinda asilanmistir
ve hücre DNA'Iari 105 ve 107 hücre dozlarinda asilanmistir. Gruplarin her biri 5-10
fareye asilanmistir. Deney sonuçlari Tablo 4'te gösterilmektedir. Bir dahili kontrol olarak
orijinal MDCK (ATCC) hücre hattiyla karsilastirildiginda MDCK Sky1023 ve MDCK
Sky3851 hücre hatlarinin düsük tümörijenisitesi oldugu veya tümörijenisitesi olmadigi
dog rulanmistir.
Deney grubu
Negatif kontrol
Pozitif kontroller
Dahili gruplar
MDCK Sky1023
MDCK Sky3851
Deney örnegi
HeLa Hücreleri
HeLa Hücreleri
Hücreler
Hücre Iizatlari
DNA'Iar
Hücreler
Hücre Iizatlari
DNA'Iar
Tümör bulunan hayvanlarin sayisi
/10
/10
Hücre yogunlugu (hücre/ml)
MDCK Sky1023
4.D±+ûê
3. D Hjiê
9. 0306
LOS*ûêuwvaw JK
g 5413506
2; 3.Ü?+Üö
3% 9 Üz+w^
>gî T .ÜTHJL 1
MOCK Sky3851
î 5.0305
L ' 1* l:«
443).: [I
“ .7. Ü“ +ÜC
â 1.ÜE+ÜE
38') 1
Virüs hasati
Aritma
Virüs inaktivasyonu
Ultrasa ntrifüjieme
Ultrasantrifüjien-ie
AYirma
Steril filtrasyOn
9', 5% ask& .9 '925 23
wmmagf *üßâwsa*
MonOVaIan Yigin
.405,
Claims (1)
- ISTEMLER . ATCC CCL-34 erisim numarasi altinda saklanan MDCK hücrelerinden elde edilen, hücre büyümesi için serum gerektirmeyen ve tasiyicilara baglanma ihtiyaci olmadan süspansiyon kültürü ile hazirlanan bir Madin-Darby köpek böbregi (MDCK) türevi hücre hatti olup, özelligi Madin-Darby köpek böbregi (MDCK) türevi hücre hattinin, DSM ACC3112 erisim numarasi altinda DSMZ'de saklanan MDCK Sky1023 olmasidir. . ATCC CCL-34 erisim numarasi altinda saklanan MDCK hücrelerinden elde edilen, hücre büyümesi için serum gerektirmeyen ve tasiyicilara baglanma ihtiyaci olmadan süspansiyon kültürü ile hazirlanan bir Madin-Darby köpek böbregi (MDCK) türevi hücre hatti olup, özelligi Madin-Darby köpek böbregi (MDCK) türevi hücre hattinin, DSM ACC3114 erisim numarasi altinda DSMZ'de saklanan MDCK Sky10234 olmasidir. . ATCC CCL-34 erisim numarasi altinda saklanan MDCK hücrelerinden elde edilen, hücre büyümesi için serum gerektirmeyen ve tasiyicilara baglanma ihtiyaci olmadan süspansiyon kültürü ile hazirlanan bir Madin-Darby köpek böbregi (MDCK) türevi hücre hatti olup, özelligi Madin-Darby köpek böbregi (MDCK) türevi hücre hattinin, DSM ACC3113 erisim numarasi altinda DSMZ'de saklanan MDCK Sky3851 olmasidir. . Istem 1 ila 3'ten herhangi birine göre MDCK türevi hücre hattini kullanarak bir asi virüsü üretmek için bir yöntem. . Istem 4'e göre yöntem olup, özelligi virüsün influenza virüsleri, kizamik virüsleri, Japon ansefalit virüsleri, kabakulak virüsleri, kizamikçik virüsleri, polio virüsleri, HSV-l, HSV-2, kuduz virüsleri, RS virüsleri, reovirüs tip 3, sarihumma virüsü, parvovirüsleri, coxsackie virüsleri, adenovirüs tip 1 ila 47, Lassa virüsleri ve vaksiniya virüslerinden olusan gruptan seçilmesidir. . Istem 5'e göre yöntem olup, özelligi virüsün bir influenza virüsü olmasidir. . Bir hücre kültüründen bir influenza virüsü üretmek için bir yöntem olup, yöntem asagidakileri içerir: (a) istem 1 ila 3'ten herhangi birine göre MDCK türevi hücre ile serumsuz bir kültür ortaminin 1 x 104 ila 1 x 106 hücre/ml konsantrasyonda asilanmasi; (DO) konsantrasyonundan olusan gruptan seçilen bir veya daha fazla kültür kosulu korunurken MDCK türevi hücrelerin kültürlenmesini içerecek sekilde hücre yogunlugu en az 5 x 106 hücre/ml'ye ulasana kadar MDCK türevi hücrelerin tek kullanimlik bir biyoreaktör sisteminde büyümesine olanak saglanmasi; (c) büyümüs MDCK türevi hücrelerin bir influenza virüsü ile enfekte edilmesi; (d) büyümüs MDCK türevi hücrelerin influenza virüsünün klonlanmasina olanak saglayan kosullar altinda kültürlenmesi ve (e) influenza virüsünün hücre kültürü bilesiminden izole edilmesi. . Istem 7'ye göre yöntem olup, özelligi ayrica hücre kültürüne bir taze ortam eklenmesini veya ortamin bir kisminin (b) adimindaki taze ortamla degistirilmesini içermesidir. . Istem 1'e göre Madin-Darby köpek böbregi (MDCK) türevi hücre hatti olup, özelligi DSM ACC3112 erisim numarasi altinda DSMZ'de saklanan MDCK Sky1023'ün, orijinal MDCK hücre hattiyla karsilastirildiginda düsük tümörijenisitesinin olmasi veya tümörijenisitesinin olmamasidir. 10.Istem 3'e göre Madin-Darby köpek böbregi (MDCK) türevi hücre hatti olup, özelligi DSM ACC3113 erisim numarasi altinda DSMZ'de saklanan MDCK Sky3851'in, orijinal MDCK hücre hattiyla karsilastirildiginda düsük tümörijenisitesinin olmasi veya tümörijenisitesinin olmamasidir.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/KR2010/006041 WO2012033236A1 (ko) | 2010-09-06 | 2010-09-06 | 무혈청 배양 및 부유 배양에 적응된 ｍｄｃｋ 세포주 및 상기 세포를 사용하여 백신용 바이러스를 제조하는 방법 |
| KR1020110085902A KR20120024464A (ko) | 2010-09-06 | 2011-08-26 | 무혈청 배양 및 부유 배양에 적응된 ｍｄｃｋ 세포주 및 상기 세포를 사용하여 백신용 바이러스를 제조하는 방법 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TR201815631T4 true TR201815631T4 (tr) | 2018-11-21 |
Family
ID=45810820
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TR2018/15631T TR201815631T4 (tr) | 2010-09-06 | 2011-09-06 | Serumsuz kültüre ve süspansiyon kültürüne uyarlanan mdck türevi hücre hatları ve bu hücreleri kullanarak aşı virüsü hazırlamak için yöntem. |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20130183741A1 (tr) |
| EP (1) | EP2614140B8 (tr) |
| JP (1) | JP6067560B2 (tr) |
| KR (2) | KR20120024464A (tr) |
| CN (2) | CN104862267B (tr) |
| AU (1) | AU2011299761B2 (tr) |
| BR (1) | BR112013005298A2 (tr) |
| CY (1) | CY1120911T1 (tr) |
| DK (1) | DK2614140T3 (tr) |
| ES (1) | ES2695044T3 (tr) |
| HR (1) | HRP20181422T1 (tr) |
| HU (1) | HUE040534T2 (tr) |
| LT (1) | LT2614140T (tr) |
| PL (1) | PL2614140T3 (tr) |
| PT (1) | PT2614140T (tr) |
| RS (1) | RS57656B1 (tr) |
| SI (1) | SI2614140T1 (tr) |
| TR (1) | TR201815631T4 (tr) |
| WO (2) | WO2012033236A1 (tr) |
Families Citing this family (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101472941B (zh) | 2006-03-31 | 2017-08-08 | 沃弗-威斯康星校友研究基金会 | 用于疫苗的高滴度重组流感病毒 |
| WO2008156778A2 (en) | 2007-06-18 | 2008-12-24 | Tokiko Watanabe | Influenza m2 protein mutant viruses as live influenza attenuated vaccines |
| ES2813347T3 (es) | 2009-10-26 | 2021-03-23 | Wisconsin Alumni Res Found | Virus recombinantes de la influenza de alto título con replicación mejorada en células Vero |
| US10130697B2 (en) | 2010-03-23 | 2018-11-20 | Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) | Vaccines comprising mutant attenuated influenza viruses |
| WO2012033236A1 (ko) * | 2010-09-06 | 2012-03-15 | 에스케이케미칼 주식회사 | 무혈청 배양 및 부유 배양에 적응된 ｍｄｃｋ 세포주 및 상기 세포를 사용하여 백신용 바이러스를 제조하는 방법 |
| JP6152535B2 (ja) * | 2012-04-16 | 2017-06-28 | 公益財団法人ヒューマンサイエンス振興財団 | 細胞培養組成物及びインフルエンザウイルスの生産方法 |
| CN104059873B (zh) * | 2013-03-20 | 2016-09-28 | 上海生物制品研究所有限责任公司 | 用于扩增流感病毒的非致瘤性mdck细胞系及其筛选方法 |
| KR101370512B1 (ko) * | 2013-06-07 | 2014-03-06 | 재단법인 목암생명공학연구소 | 무단백 배지에서 부유 배양되는 mdck 유래 세포주 및 상기 세포주를 이용하여 바이러스를 증식시키는 방법 |
| WO2015009743A1 (en) | 2013-07-15 | 2015-01-22 | Wisconsin Alumni Research Foundation | High titer recombinant influenza viruses with enhanced replication in mdck or vero cells or eggs |
| CN104726392B (zh) * | 2013-12-18 | 2018-09-28 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 一种制备无血清培养的悬浮哺乳动物细胞系的方法、及其制备的细胞系和应用 |
| US10053671B2 (en) | 2014-06-20 | 2018-08-21 | Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) | Mutations that confer genetic stability to additional genes in influenza viruses |
| US10633422B2 (en) | 2015-06-01 | 2020-04-28 | Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) | Influenza virus replication by inhibiting microRNA lec7C binding to influenza viral cRNA and mRNA |
| WO2017007839A1 (en) | 2015-07-06 | 2017-01-12 | Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) | Improved influenza virus replication for vaccine development |
| TWI781915B (zh) | 2015-10-30 | 2022-11-01 | 財團法人國家衛生研究院 | 用於疫苗製備之於無血清、化學性界定培養基中之mdck懸浮細胞株 |
| EP3417056A1 (en) | 2016-02-19 | 2018-12-26 | Wisconsin Alumni Research Foundation (WARF) | Improved influenza b virus replication for vaccine development |
| CN107460156B (zh) * | 2016-06-03 | 2022-03-11 | 兆丰华生物科技(南京)有限公司北京生物医药科技中心 | 无血清全悬浮mdck细胞株及其在生产流感病毒中的应用 |
| CN105861422B (zh) * | 2016-06-24 | 2019-05-24 | 肇庆大华农生物药品有限公司 | 一种适应无血清全悬浮培养的mdck细胞系的制备方法及通过该制备方法获得的mdck细胞系 |
| EP3299454A1 (en) * | 2016-09-21 | 2018-03-28 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Optimized method for large scale production of parvovirus h-1 in an essentially serum-free medium |
| CN106884003A (zh) * | 2017-01-22 | 2017-06-23 | 西北民族大学 | 无成瘤性mdck细胞克隆株 |
| CN106801031A (zh) * | 2017-01-22 | 2017-06-06 | 西北民族大学 | 无成瘤性mdck细胞克隆株 |
| KR101831284B1 (ko) * | 2017-06-26 | 2018-02-22 | 에스케이케미칼 주식회사 | 무혈청 배지에서 부유배양 되는 Vero 세포주 및 상기 세포를 사용하여 백신용 바이러스를 제조하는 방법 |
| KR102453351B1 (ko) * | 2017-07-05 | 2022-10-07 | 에스케이바이오사이언스(주) | 인플루엔자 백신용 바이러스 씨드 스톡의 제조 방법 |
| CN108277199B (zh) * | 2018-01-17 | 2021-06-25 | 武汉生物制品研究所有限责任公司 | 广谱低致瘤性mdck细胞系及其应用 |
| EP3914295A2 (en) | 2019-01-23 | 2021-12-01 | Yoshihiro Kawaoka | Mutations that confer genetic stability to additional genes in influenza viruses |
| EP3921413A1 (en) | 2019-02-08 | 2021-12-15 | Wisconsin Alumni Research Foundation (WARF) | Humanized cell line |
| CN109852579A (zh) * | 2019-03-27 | 2019-06-07 | 西北民族大学 | 无血清悬浮培养型mdck细胞株及其应用 |
| CN109852580A (zh) * | 2019-03-27 | 2019-06-07 | 西北民族大学 | 无血清悬浮培养型mdck细胞株及其应用 |
| CN114929269A (zh) | 2019-05-01 | 2022-08-19 | 威斯康星校友研究基金会(Warf) | 用于疫苗开发的改进的流感病毒复制 |
| US11807872B2 (en) | 2019-08-27 | 2023-11-07 | Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) | Recombinant influenza viruses with stabilized HA for replication in eggs |
| CN110669722A (zh) * | 2019-10-23 | 2020-01-10 | 长春生物制品研究所有限责任公司 | 一种用于mdck细胞的无血清全悬浮驯化方法 |
| US20230212230A1 (en) | 2020-04-29 | 2023-07-06 | Sk Bioscience Co., Ltd. | Influenza virus production method using single-use culture process system and rapid confirmation test of influenza virus antigen purification condition |
| KR102444684B1 (ko) * | 2020-04-29 | 2022-09-16 | 에스케이바이오사이언스(주) | 일회용 배양 공정 시스템을 이용한 인플루엔자 바이러스 생산 방법 |
| CN112195148B (zh) * | 2020-08-17 | 2023-01-03 | 上海生物制品研究所有限责任公司 | 无血清悬浮适应的mdck细胞及其在制备流感病毒疫苗中的应用 |
| CN112410305A (zh) * | 2020-11-26 | 2021-02-26 | 中国医学科学院病原生物学研究所 | 一种高产的流感病毒制备体系及制备方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2401117C (en) * | 2000-03-03 | 2010-06-29 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Cell usable in serum-free culture and suspension culture and process for producing virus for vaccine by using the cell |
| DE10144906B4 (de) * | 2001-09-12 | 2013-11-28 | Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh | Verfahren zur großtechnischen Herstellung von Impfstoffen |
| DK2368975T3 (en) * | 2004-12-23 | 2015-01-05 | Medimmune Llc | Non-tumorigenic MDCK cell line for the propagation of viruses |
| CA3016948A1 (en) * | 2006-09-11 | 2008-03-20 | Seqirus UK Limited | Making influenza virus vaccines without using eggs |
| US8202726B2 (en) * | 2008-09-24 | 2012-06-19 | Medimmune, Llc | Methods for cultivating cells, propagating and purifying viruses |
| WO2012033236A1 (ko) * | 2010-09-06 | 2012-03-15 | 에스케이케미칼 주식회사 | 무혈청 배양 및 부유 배양에 적응된 ｍｄｃｋ 세포주 및 상기 세포를 사용하여 백신용 바이러스를 제조하는 방법 |
-
2010
- 2010-09-06 WO PCT/KR2010/006041 patent/WO2012033236A1/ko active Application Filing
-
2011
- 2011-08-26 KR KR1020110085902A patent/KR20120024464A/ko not_active Application Discontinuation
- 2011-09-06 PT PT11823761T patent/PT2614140T/pt unknown
- 2011-09-06 JP JP2013527024A patent/JP6067560B2/ja active Active
- 2011-09-06 TR TR2018/15631T patent/TR201815631T4/tr unknown
- 2011-09-06 DK DK11823761.9T patent/DK2614140T3/en active
- 2011-09-06 EP EP11823761.9A patent/EP2614140B8/en active Active
- 2011-09-06 ES ES11823761.9T patent/ES2695044T3/es active Active
- 2011-09-06 PL PL11823761T patent/PL2614140T3/pl unknown
- 2011-09-06 WO PCT/KR2011/006589 patent/WO2012033328A2/en active Application Filing
- 2011-09-06 CN CN201510201640.3A patent/CN104862267B/zh active Active
- 2011-09-06 CN CN2011800429238A patent/CN103154238A/zh active Pending
- 2011-09-06 SI SI201131565T patent/SI2614140T1/sl unknown
- 2011-09-06 AU AU2011299761A patent/AU2011299761B2/en active Active
- 2011-09-06 HU HUE11823761A patent/HUE040534T2/hu unknown
- 2011-09-06 BR BR112013005298-8A patent/BR112013005298A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2011-09-06 RS RS20181032A patent/RS57656B1/sr unknown
- 2011-09-06 LT LTEP11823761.9T patent/LT2614140T/lt unknown
-
2013
- 2013-03-05 US US13/785,757 patent/US20130183741A1/en not_active Abandoned
-
2015
- 2015-05-07 KR KR1020150063976A patent/KR101577745B1/ko active IP Right Grant
- 2015-05-13 US US14/711,489 patent/US9447383B2/en active Active
-
2018
- 2018-09-05 HR HRP20181422TT patent/HRP20181422T1/hr unknown
- 2018-10-16 CY CY181101058T patent/CY1120911T1/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2012033328A3 (en) | 2012-06-28 |
| WO2012033328A2 (en) | 2012-03-15 |
| AU2011299761A1 (en) | 2013-03-21 |
| ES2695044T3 (es) | 2018-12-28 |
| KR101577745B1 (ko) | 2015-12-16 |
| HRP20181422T1 (hr) | 2018-10-19 |
| EP2614140A2 (en) | 2013-07-17 |
| EP2614140B8 (en) | 2018-10-17 |
| DK2614140T3 (en) | 2018-10-22 |
| EP2614140A4 (en) | 2014-03-05 |
| LT2614140T (lt) | 2018-10-25 |
| US20130183741A1 (en) | 2013-07-18 |
| SI2614140T1 (sl) | 2018-11-30 |
| BR112013005298A2 (pt) | 2020-01-07 |
| PT2614140T (pt) | 2018-11-22 |
| JP2013540431A (ja) | 2013-11-07 |
| PL2614140T3 (pl) | 2019-02-28 |
| KR20150056519A (ko) | 2015-05-26 |
| KR20120024464A (ko) | 2012-03-14 |
| AU2011299761B2 (en) | 2017-01-05 |
| EP2614140B1 (en) | 2018-08-08 |
| RS57656B1 (sr) | 2018-11-30 |
| CN104862267B (zh) | 2019-07-12 |
| CY1120911T1 (el) | 2019-12-11 |
| HUE040534T2 (hu) | 2019-03-28 |
| US20150247128A1 (en) | 2015-09-03 |
| CN103154238A (zh) | 2013-06-12 |
| US9447383B2 (en) | 2016-09-20 |
| CN104862267A (zh) | 2015-08-26 |
| JP6067560B2 (ja) | 2017-01-25 |
| WO2012033236A1 (ko) | 2012-03-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TR201815631T4 (tr) | Serumsuz kültüre ve süspansiyon kültürüne uyarlanan mdck türevi hücre hatları ve bu hücreleri kullanarak aşı virüsü hazırlamak için yöntem. | |
| JP4243349B2 (ja) | インフルエンザウイルスの複製のための動物細胞および方法 | |
| JP5264843B2 (ja) | 細胞培養におけるインフルエンザウイルスの複製の方法、および本方法によって入手可能なインフルエンザウイルス | |
| CN107312746B (zh) | 一种猪圆环病毒2型的大规模全悬浮培养方法 | |
| CN102260649B (zh) | 传染性法氏囊病毒及用鸡胚细胞系和生物反应器繁殖法氏囊病毒制备灭活疫苗和联苗的方法 | |
| CN109913404A (zh) | 鸡传染性法氏囊病毒活疫苗的制备方法 | |
| CN110257344A (zh) | 无动物源性和人源性成分的狂犬病疫苗的制备方法 | |
| CN109136199A (zh) | 一种表达h5亚型ha的复制缺陷型重组h9n2禽流感病毒 | |
| ES2778928T3 (es) | Producción a gran escala de virus en cultivos celulares | |
| CN105396129A (zh) | 一种利用脊髓灰质炎减毒株生产的灭活疫苗 | |
| MX2010013937A (es) | Metodo de reproduccion de virus en cultivos de suspension de celulas de riñon de perro. | |
| WO2004110484A1 (fr) | Procede de production d'un vaccin vivant de culture contre le virus de la grippe | |
| CN105396128A (zh) | 一种纯化脊髓灰质炎病毒液的方法 | |
| KR20120027381A (ko) | 일본뇌염 백신 및 그것의 제조 방법 | |
| CN102858961A (zh) | 新方法 | |
| CN108261543B (zh) | 传代细胞源nd、ib、ai三联灭活疫苗的制备方法及其应用 | |
| CN104651233B (zh) | 一种新的重组禽流感病毒h5n1抗原制备的病毒维持液 | |
| CN112870343A (zh) | 一种基于人造新冠病毒孵化细胞的灭活疫苗制备方法 | |
| Yu et al. | Reproduction of Strain Sof'in Forest-Spring Encephalitis in Vero Cell Line Cultured on Microcarrier under Pseudo-submerged Conditions | |
| CN104404004A (zh) | 鸡新型新城疫疫苗病毒毒株rClone30-chIL15及其应用 |