SK286024B6

SK286024B6 - Farmaceutický prostriedok a použitie tohto prostriedku na prípravu liečiva

Info

Publication number: SK286024B6
Application number: SK673-99A
Authority: SK
Inventors: Andre Uzan; Alain Curaudeau; Robert J. Leadley; Christopher T. Dunwiddie; Mark H. Perrone
Original assignee: Aventis Pharmaceuticals Inc.
Priority date: 1996-11-27
Filing date: 1997-11-24
Publication date: 2008-01-07
Also published as: WO1998023279A1; US20020032214A1; JP4498471B2; CZ298552B6; HUP9903496A2; DE69731763T3; US6103705A; EP0946185A1; CN1121224C; KR100512671B1; HK1023504A1; CN1238693A; ES2230624T3; EP0946185B1; DE69731763D1; PT946185E; AP1390A; OA11049A; AU5454698A; DE69731763T2

Abstract

Farmaceutický prostriedok obsahujúci farmaceuticky prijateľnú nosičovú látku a farmaceuticky účinnémnožstvo heparinoidnej zlúčeniny alebo nízkomolekulárneho heparínu a antagonistickej zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek. Tento prostriedokje vhodný na ošetrovanie alebo prevenciu trombogénnych stavov spojených s trombózou v súvislosti s ischemickou poruchou. Do rozsahu vynálezu tiež patrí použitie tohto farmaceutického prostriedku na prípravu liečiva na liečenie alebo prevenciu fyziologického stavu súvisiaceho s ischemickou poruchou spojenou s trombózou.

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka farmaceutického prostriedku obsahujúceho zlúčeninu majúcu anti-Xa účinnosť, ktorou je heparinoidná zlúčenina alebo nízkomolekulámy heparín, a zlúčeninu pôsobiacu proti zrážaniu doštičiek, ktorý má neočakávanú účinnosť pri liečení a prevencii fyziologického stavu pacienta s ischemickou poruchou súvisiacou s trombózou. Vynález sa tiež týka použitia tohto prostriedku na liečenie alebo prevenciu fyziologického stavu súvisiaceho s ischemickou poruchou spojenou s trombózou.

Doterajší stav techniky

Z doterajšieho stavu techniky je známe, že antagonisty receptora doštičkového fibrinogénu sú účinné činidlá na inhibíciu vytvárania trombu závislého od doštičiek v modeloch koronárnej trombózy pri zvieratách. Podobné výsledky z klinických štúdií ukázali, že antagonisty receptora doštičkového fibrinogénu znižujú dopad hlavných ischemických príhod pri ich podávaní vysoko ohrozeným pacientom prekonávajúcim perkutánnu transluminálnu koronárnu angioplastiku. Ale terapeutický rozsah je pre túto triedu zlúčenín veľmi úzky, čiastočne preto, že vysoký stupeň inhibície zrážania doštičiek ex vivo požadovaný na antitrombotickú účinnosť je často spojený s výrazným predĺžením času krvácania matrice, čo je znak komplikácií nežiaduceho krvácania.

Heparíny s nízkou molekulovou hmotnosťou (low molecular weight heparins LMWH) a heparinoidné zlúčeniny (HC) boli účinne používané v posledných niekoľkých rokoch na prevenciu a liečenie trombózy žíl a súvisiaceho tromboembolizmu. Tieto látky, LMWH a HC teda postupne prenikali do liečebných programov pri indikáciách arteriálnej trombózy. Predbežné výsledky favorizujúce používanie LMWH a HC oproti nefrakcionovanému heparínu pri arteriálnych trombotických indikáciách sú podporované niekoľkými farmakodynamickými, farmakokinetickými a mechanickými rozdielmi medzi týmito dvomi skupinami zlúčenín. Napríklad spoľahlivú a bezpečnú antikoaguláciu možno dosiahnuť s látkami LMWH a HC subkutánnym dávkovaním bez monitorovania. V porovnaní s heparínom majú látky LMWH a HC vyššiu biologickú dostupnosť, pomerne dlhý polčas životnosti a zdá sa, že majú bezpečnejší profil. Navyše sú látky LMWH odolnejšie ako heparín proti neutralizácii doštičkovým faktorom 4, ktorý je uvoľňovaný z aktivovaných doštičiek, pravdepodobne v mieste arteriálnej trombózy.

Hemostáza, biochémia koagulácie krvi, je extrémne zložitý jav, pri ktorom normálna plná krv a telesné tkanivo spontánne zastavia krvácanie z poškodených ciev. Účinná hemostáza vyžaduje kombinovanú činnosť cievnych, doštičkových a plazmových faktorov a rovnako tak kontrolného mechanizmu zabraňujúceho nadmernému zrážaniu. Porucha, nedostatočnosť alebo nadbytok ktorejkoľvek z týchto zložiek môže viesť k hemoragickým alebo trombotickým následkom.

Adhézia doštičiek, rozprestretie a zrážanie na extrabunkových matriciach sú hlavné javy pri vytváraní trombu. Tieto javy sú sprostredkovávané skupinou adhezívnych glykoproteínov, teda fibrinogénom, fibronektínom a von Willebrandovým faktorom. Fibrinogén je spolupôsobiaci faktor pri zrážaní doštičiek, zatiaľ čo fibronektín podporuje reakcie na zachytenie a rozprestretie a Willebrandov faktor je významný na zachytenie a rozprestretie na subendoteliálnych matriciach. Väzbové miesta pre fibrinogén, fibronektín a von Willebrandov faktor boli lokalizované na proteínovom komplexe membrán doštičiek známom pod označením glykoproteín Ilb/IIIa.

Adhezívne glykoproteíny, podobne ako fibrinogén, sa neviažu na normálne pokojové doštičky. Ak je však doštička aktivovaná agonistom, ako je trombin alebo adenozíndifosfát, zmení doštička svoj tvar a pravdepodobne vytvorí väzbové miesto GPIIb/IIIa prístupné fibrinogénu. Blokovanie receptora fibrinogénu teda zabraňuje zrážaniu doštičiek a následnému vytváraniu trombu a je užitočné pri prevencii a liečení patologických trombogénnych stavov, ako sú mŕtvica, periférna arteriálna okluzívna porucha, roztrúsená intravaskulárna koagulácia a akútne koronárne syndrómy, ako je nestabilná angína a infarkt myokardu.

Podstata vy nálezu

Vynález sa týka farmaceutického prostriedku, ktorého podstata spočíva v tom, že obsahuje farmaceutický prijateľnú nosičovú látku a farmaceutický účinné množstvo heparinoidnej zlúčeniny alebo nízkomolckulámeho heparínu a antagonistové zlúčeniny pôsobiace proti zrážaniu doštičiek.

Vo výhodnom uskutočnení tohto farmaceutického prostriedku podľa vynálezu je nízkomolekulárny heparín zvolený zo skupiny zahŕňajúcej enoxaparín, nardroparín, dalteparín, certroparín, pamapa rín, reviparín, ardeparín/RD heparín/RDH alebo tinzaparín. A najvýhodnejšie je týmto nízkomolekulámym heparínom enoxaparín.

Podľa ďalšieho výhodného uskutočnenia tohto farmaceutického prostriedku podľa vynálezu je heparinoidnou zlúčeninou danaparoid.

Podľa ďalšieho výhodného uskutočnenia tohto farmaceutického prostriedku podľa vynálezu je antagonistom zrážania doštičiek abciximab, N-[N-[N-(4-(piperidín-4-yl)butanoyl)-N-etylglycyl]aspartyl]-L-0-cyklohexylalanín, N-[N-[N-4-(piperidín-4-yl)butanoyl)-N-etylglycyl]aspartyl]-L-/5-cyklohexylalanínamid alebo N-(n-butylsulfonyl)-4-(piperidín-4-ylbutyloxy)-L-fenylalanín.

Do rozsahu predmetného vynálezu tiež patrí použitie farmaceutický účinného množstva definovaného farmaceutického prostriedku podľa vynálezu na prípravu liečiva na liečenie alebo prevenciu fyziologického stavu súvisiaceho s ischemickou poruchou spojenou s trombózou.

Týmto fyziologickým stavom je výhodne akútny koronárny syndróm, napríklad nestabilná angína alebo infarkt myokardu.

Výhodné je podľa vynálezu definované použitie, pri ktorom liečenie alebo prevencia prebieha pri chirurgickom zákroku koronárneho arteriálneho bypasu alebo pri transluminálnej koronárnej angioplastike, najlepšie pri perkutánnej transluminálnej angioplastike.

Farmaceutický prostriedok podľa predmetného vynálezu teda obvykle obsahuje farmaceutický vhodnú nosičovú látku, farmaceutický účinné množstvo zlúčeniny majúcej anti-Xa účinok, ktorou je heparinoidná zlúčenina alebo nízkomolekulámy heparín, a antagonistovú zlúčeninu proti zrážaniu doštičiek.

Definovaný farmaceutický prostriedok a použitie je možné uplatniť pri liečení a prevencii trombogénneho stavu spojeného s ischemickou poruchou, vyvolanou trombózou u pacienta, pričom sa pri tomto liečení alebo prevencii pacientovi podáva farmaceutický účinné množstvo zlúčeniny uvedeného farmaceutického prostriedku.

Vynález objasňuje, nijako však neobmedzuje, nasledujúci podrobný opis s pripojenými obrázkami.

V opise predmetného vynálezu majú použité pojmy nasledujúci význam:

Výrazom „pacient“ sa myslí človek alebo iný cicavec.

Výrazom „účinné množstvo“ sa mysli množstvo zlúčeniny podľa vynálezu, spôsobilé vyvolať žiaduci terapeutický účinok.

Výrazom „zlúčenina pôsobiaca proti zrážaniu doštičiek“ (PAAC) sa myslí zlúčenina, ktorá sa viaže na receptor GPIIb/IIIa doštičiek (antagonista receptora GPIIb/IIIa) a konkurenčne bráni viazaniu fibrinogénu, fibronektínu a von Willenbranovmu faktoru, pričom tiež inhibuje zrážanie aktivovaných doštičiek.

Výrazom „zlúčenina s anti-Xa účinkom“ sa myslí heparinoidná zlúčenina alebo heparín s nízkou molekulovou hmotnosťou (LMWH) alebo jej syntetický derivát.

Vo výhodnom uskutočnení podľa predmetného vynálezu opisujú ďalej uvedené publikácie vhodné PAAC: Lynch a kol., J. Pharm. Expt. Thera 272 (1)20, (1995); Kereiakes a kol. JACC 27(3) str. 536, 1996; Peerlinkc a kol., Circulation 88(4) str. 1512, 1993; Barrett a kol., Clin. Pharmacol. Ther. 56 (4), str. 377, 1994; Cook a kol., Thromb. Haemostas. 70(5), str. 838, 1993; Plow a kol., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, str. 8057 až 8061 (1985); Ruggeri a kol., Proc. Natl. Acad. Sci. USA str. 57085712 (1986); Ginsberg a kol., J. Biol. Chem. 260, str. 3931 až 3936 (1985); a Gartner a kol. J. Biol. Chem. 260, 11 str. 891 až 894 (1987); Plow E. F. a kol. Proc Natl. Acad. Sci. USA 79, str. 3711 až 3715 (1982); Tjoeng a kol., patenty Spojených štátov amerických č. 5 037 808; 4 897 313 a 4 992 463; Adams a koľ, patent Spojených štátov amerických č. 4 857 508; Haverstick, D. M. a koľ, Blood 66(4), str. 946-952 (1985); Topol a kol., The Lancet 343, str. 881 (1994); francúzska prihláška vynálezu číslo 86/17507; Zimmerman a kol., patent Spojených štátov amerických č. 4 683 291; európska zverejnená prihláška vynálezu číslo 0 319 506; patenty Spojených štátov amerických č. 5 023 233 a 4 952 562; medzinárodná zverejnená prihláška vynálezu číslo WO 91/04746; patent Spojených štátov amerických č. 5 086 069; medzinárodná zverejnená prihláška vynálezu číslo WO 92/13117; patenty Spojených štátov amerických č. 5 053 392; 5 064 814; 5 051 405; európska zverejnená prihláška vynálezu číslo O 479 481 a číslo 0 478 362; patent Spojených štátov amerických č. 5,292,756; medzinárodná zverejnená prihláška vynálezu číslo WO 95/10295; a WO 89/11538. Výhodnejšie PAAC sú opísané v medzinárodných zverejnených prihláškach vynálezu číslo WO 89/11538; WO 95/10295; alebo v patente Spojených štátov amerických č. 5 292 756; pričom ako konkrétne výhodné zlúčeniny sú, tak ako už bolo uvedené, Reopro® (abciximab), N-[N-[N-(4-piperidín-4-yl)butanoyl-N-etylglycyl]asparagyl]-L-/3-cyklohexylalanín, N-[N-[N-(4-(piperidín-4-yl)butanoyl)-N-etylglycyl]asparagyl]L-6-cyklohexylalanínamid (PBGACA) alebo N-(n-butylsulfonyl)-4-(piperidín-4-ylbutyloxy)-L-fenylalanín (BSPBPA).

Vo výhodnom uskutočnení podľa predmetného vynálezu sú v nasledujúcich publikáciách uvedené vhodné LMWH na účely predmetného vynálezu a spôsoby prípravy LMWH: európsky patent č.

0014184; Medical Research Reviews 12(4), str. 373 (1992); Drugs of the Future 12 (1), str. 45 (1987); medzinárodná zverejnená prihláška vynálezu číslo WO 92/19249; patent Spojených štátov amerických č. 4 692 435, Barrowcliffe, Thromb. Res. 12, str. 27 až 36 (1977); európska zverejnená prihláška vynálezu číslo 37319 a 76279; patent Spojených štátov amerických č. 4,804,652; medzinárodná zverejnená prihláška vynálezu číslo WO 81/3276; európska zverejnená prihláška vynálezu číslo 244235 a 244236; patenty Spojených štátov amerických č. 4 486 420; 4 692 435; 4 826 827; 3 766 167; európska zverejnená prihláška vynálezu číslo 40144; 347588 a 380943, patenty Spojených štátov amerických č. 4 533 549; 4 629 699; a európska zverejnená prihláška vynálezu číslo 269981. Napríklad sa môže zlúčenina s anti-Xa účinkom vyrobiť nasledujúcim spôsobom: obohatením frakcionáciou s použitím etanolu a/alebo molekulového sita, napríklad gélovou filtráciou alebo membránovou filtráciou LMWH obsiahnutým v štandardnom heparíne a kontrolovanou chemickou (pomocou kyseliny dusitej, /3-elimináciou alebo oxidáciou jodistanom) alebo enzymatickou (heparinázami) depolymerizáciou. Podmienky depolymerizácie sa starostlivo kontrolujú za získania produktu s požadovanou molekulovou hmotnosťou. Všeobecne sa používa depolymerizácia s použitím kyseliny dusitej. Rovnako sa používa depolymerizácia benzylesteru heparínu β-elimináciou, ktorá poskytuje ten istý typ fragmentov ako enzymatická depolymerizácia pomocou heparináz. LMWH s nízkou protizrážacou aktivitou a zachovávajúci si základnú chemickú štruktúru sa pripraví depolymerizáciou s použitím oxidácie jodistanom alebo odstraňovaním frakcie LMWH viažucej antitrombín, alebo sa pripraví inými spôsobmi, použitím imobilizovaného antitrombínu na absorpciu.

Ďalej je potrebné uviesť, že je výhodný LMWH má priemernú molekulovou hmotnosť približne 3 000 až približne 6 500. Obchodne dostupné LMWH, vhodné na použitie podľa predmetného vynálezu, zahrnujú nasledujúce produkty: Clexane®/Klexane®/Lovenox® (Enoxaparín (ENOX)) s priemernou molekulovou hmotnosťou 4 500 ± 1 000 a s rozdelením molekulovej hmotnosti: zložky <2 000 (16,0 ± 4,0 %) a 2 000 až 8 000 (78,0 ± 10,0 %), anti-Xa účinok (IU/mg vztiahnuté na sušinu) 90 až 125 a pomer anti-Xa/anti-IIa 3,3 až 5,3; Fraxiparin® (Nardroparín) majúci priemernú molekulovú hmotnosť 4 300 ± 700, a s rozdelením molekulovej hmotnosti: zložky <2 000 (<15 %), 2 000 až 4 000 (45 ± 10 %) a 2 000 až 8 000 (85 ± 10 %), anti-Xa účinok (IU/mg vztiahnuté na sušinu) 95 až 130 a pomer anti-Xa/anti-IIa 2,5 až 4,0; Fragmin® (Dalteparín) majúci priemernú molekulovú hmotnosť 6 000 ± 400, s rozdelením molekulovej hmotnosti: zložky <3 000 (5,0 až 13,0 %) a >8 000 (15,0 až 25,0 %), anti-Xa účinok (IU/mg vztiahnuté na sušinu) 110 až 210 a pomer anti-Xa/anti-IIa 1,9 až 3,2; Embolex®/Monoempolex® (Certroparín) majúci priemernú molekulovú hmotnosť 5 200 ± 1 000, s rozdelením molekulovej hmotnosti: zložky <2 000 (10 až 25 %) a <8 000 (75 až 90 %), anti-Xa účinok (IU/mg vztiahnuté na sušinu) 80 až 120 a pomer anti-Xa/anti-IIa 1,5 až 2,5; Fluxum®/Minidalton®/Lowhepa® (Parnaparín) majúci priemernú molekulovú hmotnosť 5 000 ± 1 000, rozdelenie molekulovej hmotnosti: zložky <3 000 (20 až 30 %) a 3 000 až 8 000 (50 až 60 %), anti-Xa účinok (IU/mg vztiahnuté na sušinu) 75 až 110 a pomer anti-Xa/anti-IIa 2,0 až 3,0; Logiparin® (Tinzaparín) majúci priemernú molekulovú hmotnosť 3 400 až 5 600, rozdelenie molekulovej hmotnosti: zložky <2 000 (2,0 až 16 %) a 2 000 až 4 000 (66 ± 6,0 %) a >8 000 (12,0 až 38,0 %), anti-Xa účinok (IU/mg vztiahnuté na sušinu) >70 a pomer anti-Xa/anti-IIa 1,5 až 2,5; Clivarin® (Reviparín) a Normiflo® (ardeparín/RD heparín/RDH). Výhodný LMWH podľa vynálezu sa pripraví spôsobom podľa patentov Spojených štátov amerických č. 4 486 420 a 4 692 435, výhodnejší je však enoxaparín.

Podľa iného výhodného uskutočnenia vynálezu je zlúčeninou s anti-Xa účinnosťou heparinoidná zlúčenina. V ďalej uvedených publikáciách sú uvedené výhodné heparinoidné zlúčeniny vhodné na účely predmetného vynálezu a spôsoby výroby tejto vhodnej heparinoidnej zlúčeniny: patent Spojených štátov amerických č. 4 438 108; európsky patentový spis číslo EP 66908; Zammit a kol., Thromb. Haemostas. 71(6) 759 (1994); a Gent. A kol., Circulation 93, str. 80 (1996). Výhodnou obchodne dostupnou heparinoidnou zlúčeninou podľa vynálezu je Orgaran® (Danaparoid) majúci priemernú molekulovú hmotnosť približne 6 500, anti-Xa účinok (IU/mg vztiahnuté na sušinu) približne 10 a pomer anti-Xa/anti-IIa približne 28.

Výhodnými trombogénnymi stavmi na liečenie a prevenciu podľa vynálezu sú mŕtvica, ateroskleróza, angiogenéza, trombóza, tromboembolické stavy, ako je trombóza hlbokých žíl, pľúcna embólia alebo tromboflebitída, roztrúsená intravaskulárna koagulácia alebo tromboembolické príznaky spojené s rakovinou, sepsou alebo s pôrodnými komplikáciami, okluzívne ochorenia periférnych artérií a akútne koronárne príznaky, ako je nestabilná angína a infarkt myokardu, hemodialýza alebo potreby mimotelového obehu pri chirurgickom zákroku alebo pri poškodení tkaniva fosfolipázou A2 (PLA₂), najvýhodnejšími stavmi na liečenie sú nestabilná angína a infarkt myokardu.

Vynález sa výhodne používa pri liečení, keď je potenciálna možnosť výskytu patologického trombogénneho starni, ako sú prípady, ktoré sa môžu vyskytnúť v priebehu chirurgie bypasu koronárnej artérie alebo pri perkutánnej transluminálnej koronárnej angioplastike s prípadným umiestnením intrakoronámeho stentu; výhodnejšou aplikáciou vynálezu je použitie pri perkutánnej transluminálnej an gioplastike s prípadným umiestnením intrakoronámeho stentu.

Iným výhodným využitím vynálezu je použitie farmaceutický účinného množstva zlúčeniny s anti-Xa účinnosťou a zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek pri príprave liečiv na ošetrovanie a na prevenciu fyziologických stavov spojených s ischemickou chorobou súvisiacou s trombózou.

Pri liečení a prevencii sa môžu zlúčeniny s anti-Xa aktivitou a zlúčeniny pôsobiace proti zrážaniu doštičiek podávať rôznym spôsobom, ako je napríklad kombinovaná terapia s prípadnými liečebnými postupmi. Napríklad zlúčeniny s anti-Xa účinkom a zlúčeniny pôsobiace proti zrážaniu doštičiek sa môžu podávať pacientovi súčasne alebo v rôznych časoch s tou podmienkou, že sa podávajú tak, aby v určenom časovom intervale boli v tele pacienta prítomné farmaceutický účinné množstvá oboch zlúčenín a aby výsledkom bol terapeutický účinok podľa vynálezu.

Pri uskutočňovaní uvedeného postupu liečenia alebo prevencie je možné použiť kit na liečenie a na prevenciu fyziologických stavov spojených s ischemickou chorobou súvisiacou s trombózou, pričom tento kit (súprava) obsahuje jednotlivé jednotky, z ktorých aspoň jedna obsahuje zlúčeninu s antiXa účinkom a aspoň jedna iná obsahuje zlúčeninu pôsobiacu proti zrážaniu doštičiek a uvedené jednotky obsahujú farmaceutický nosič, pričom je tento kit možno využiť na účinné uskutočňovanie kombinovaných terapií podľa vynálezu. Tento kit môže ďalej obsahovať aspoň jednu jednotku so zlúčeninou s anti-Xa účinkom bez zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek a aspoň jednu jednotku so zlúčeninou pôsobiacou proti zrážaniu doštičiek bez prítomnosti zlúčeniny s anti-Xa účinkom.

V praxi môžu byť zlúčenina s anti-Xa účinkom a zlúčenina pôsobiaca proti zrážaniu doštičiek podávané parenterálne, topicky, rektálne, transdermálne, intrapulmonálne alebo perorálne, výhodne sa však podávajú parenterálne a/alebo orálne.

Vhodné prostriedky obsahujúce zlúčeniny podľa vynálezu sa môžu pripravovať obvyklými spôsobmi. Napríklad zlúčeniny použité podľa vynálezu môžu byť suspendované alebo rozpustené vo vhodnom nosičovom materiáli.

Prostriedky podľa vynálezu majú formu umožňujúcu najvhodnejšie podávanie a vynález sa preto týka farmaceutického prostriedku obsahujúceho zlúčeniny podľa vynálezu, ktorý je vhodný na použitie v humánnej a vo veterinárnej medicíne. Tieto prostriedky sa môžu pripravovať obvyklými spôsobmi s použitím jedného alebo niekoľkých vhodných nosičov, pomocných činidiel alebo excipientov. Ako príklady pomocných činidiel je možné uviesť riedidlá, sterilné vodné prostriedky a rôzne netoxické organické rozpúšťadlá. Farmaceutické prostriedky môžu byť vo forme tabliet, piluliek, kapsúl, pastiliek, tabletiek, tvrdých bonbónov, granúl, práškov, vodných roztokov alebo suspenzii, roztokov pre injekcie, elixírov alebo sirupov, roztokov alebo suspenzií na intrapulmonálne podávanie, pričom môžu obsahovať jedno alebo niekoľko činidiel zo súboru zahŕňajúceho sladidlá, ochucovadlá, farbivá alebo stabilizátory, tak aby bol získaný farmaceutický prijateľný prípravok.

Voľba vehikula a obsahu zlúčenín použitých podľa vynálezu sa riadi rozpustnosťou a chemickými vlastnosťami zlúčenín, obzvlášť spôsobom podávania a farmaceutickou praxou. Napríklad je možné na výrobu tabliet použiť excipienty, ako sú sterilná voda, Ringerov roztok, laktóza, citrát sodný, izotonické soľné roztoky (fosforečnan monosodný alebo disodný, chlorid sodný, draselný, vápenatý alebo horečnatý, alebo zmesi takýchto solí), uhličitan sodný a dezintegračné činidlá, ako je škrob, kyselina algínová a niektoré komplexné silikáty v kombinácii s mazivami, ako je stearát horečnatý, laurylsulfát sodný a mastenec. Na prípravu kapsúl je výhodné použiť laktózu a polyetylénglykoly s vysokou molekulovou hmotnosťou. Vodné suspenzie môžu obsahovať emulgátory alebo činidlá uľahčujúce suspendovanie. Použiť možno tiež riedidlá, ako je sacharóza, etanol, polyetylénglykol, propylénglykol, glycerol a chloroform alebo ich zmesi.

Na parenterálne podávanie sú vhodné emulzie, suspenzie alebo roztoky zlúčenín podľa vynálezu v rastlinnom oleji, napríklad v sezamovom, podzemnicovom alebo olivovom oleji, alebo vo vodno-organických roztokoch, ako je voda a propylénglykol, injektovateľné organické estery, ako je etyloleát i sterilné vodné roztoky farmaceutický vhodných solí. Roztoky solí zlúčenín použitých podľa vynálezu sú obzvlášť vhodné na podávanie intramuskulámymi, intravenóznymi, intraarteriálnymi alebo subkutánnymi injekciami alebo infúziami. Vodné roztoky, zahrnujúce tiež roztoky soli v čistej destilovanej vode, sa môžu používať na intravenózne podávanie za predpokladu, že je ich hodnota pH vhodne nastavená a sú vyvážene pufrované alebo izotonizované vhodným množstvom glukózy alebo chloridu sodného a sú sterilizované teplom, ožiarením alebo mikrofiltráciou.

Zlúčeniny s anti-Xa účinnosťou a zlúčeniny pôsobiace proti zrážaniu doštičiek podľa vynálezu môžu byť formulované spôsobom, ktorý zabraňuje rýchlemu uvoľňovaniu z vaskulámej (tepnovej alebo žilovej) steny konvexiou a/alebo difúziou, čím sa predĺži čas zotrvania prostriedku v mieste žiadaného účinku. Uloženie je možné uskutočniť do kopolymémej matrice, ako je etylénvinylacetát alebo polyvinylalkoholový gél obalený povlakom Silasticu. Alternatívne môžu byť zlúčenina s anti-Xa účinkom a zlúčenina pôsobiaca proti zrážaniu doštičiek uvoľňované lokálne z implantovaného silikónového polyméru.

Alternatívnym prístupom k minimalizácii vymývania zlúčeniny s anti-Xa účinkom a zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek v priebehu perkutánneho, transvaskulámeho uvoľňovania je použitie nedifundovateľných, liečivo uvoľňujúcich mikročastíc. Tieto mikročastice môžu obsahovať najrôznejšie syntetické polyméry napríklad polylaktid, alebo prírodné látky, vrátane proteínov alebo polysacharidov. Takéto mikročastice umožňujú upravovať také faktory, ako je celková dávka liečiva a kinetika jej uvoľňovania. Mikročastice môžu byť účinne injektované do arteriálnej alebo žilovej steny poréznym balónovým katétrom alebo balónovým stentom a zadržiavané v stene žily a v penadvencitiálnom tkanive počas najmenej dvoch týždňov. Formulácia a metodológia na lokálne intravaskuláme uvoľňovanie terapeutických činidiel na špecifickom mieste sú opísané v publikácii Reissen a kol (J. Am. Col. Cardiol. 23, str. 1234 až 1244 (1994).

Ako médium pre zlúčeninu s anti-Xa účinkom a zlúčeninu pôsobiacu proti zrážaniu doštičiek je rovnako možné použiť hydrogél, ktorý je pripravený z akéhokoľvek biokompatibilného necytotoxického homopolyméru alebo heteropolyméru, ako je hydrofilný polymér na báze polyakrylovej kyseliny, ktorý môže pôsobiť ako huba absorbujúca liečivo. Takéto polyméry boli opísané napríklad v medzinárodnej zverejnenej patentovej prihláške č. WO 93/08845. Niektoré z nich, ako najmä médiá na báze etylénoxidu a/alebo proplylénoxidu sú obchodne dostupné.

Okrem toho zlúčeninu s anti-Xa účinkom a zlúčeninu proti zrážaniu doštičiek možno podávať priamo do steny krvnej cievy pomocou angioplastového balónika, ktorý je potiahnutý hydrofilným filmom (napríklad hydrogélom) alebo pomocou iného katétra obsahujúceho infúznu komôrku pre zlúčeninu, ktorá tak môže byť aplikovaná presným spôsobom do ošetrovaného miesta.

Percento zlúčeniny s anti-Xa účinkom a zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, použitých podľa vynálezu, možno meniť. Tieto zlúčeniny majú byť v takom vzájomnom pomere, aby bola dosiahnutá vhodná dávka. Je však možné podávať niekoľko jednotkových dávok. Použitú dávku určuje lekár v závislosti od požadovaného terapeutického účinku, od cesty podávania, od trvania ošetrovania a od stavu pacienta. V každom jednotlivom prípade sa dávka určuje podľa charakteristík ošetrovaného jedinca, ako je vek, hmotnosť, celkový zdravotný stav a iné charakteristiky, ktoré môžu ovplyvniť účinnosť liečiva.

U dospelých sú dávky PAAC obvykle približne 0,0001 až približne 50, výhodne 0,0001 až približne 5 mg/kg telesnej hmotnosti denne pri inhalácii, približne 0,001 až približne 100, výhodne približne 0,01 až 70, výhodnejšie približne 0,05 až približne 10 mg/kg telesnej hmotnosti denne pri orálnom podávaní a približne 0,0001 až približne 10, výhodne 0,001 až 1 mg/kg telesnej hmotnosti denne pri intravenóznom podávaní.

U dospelých sú dávky zlúčeniny s anti-Xa aktivitou podľa vynálezu obzvlášť približne 10 až približne 25 000 medzinárodných jednotiek anti-Xa účinnosti.

Zlúčeniny s anti-Xa účinkom a zlúčeniny pôsobiace proti zrážaniu doštičiek, použité podľa vynálezu, možno podávať tak často, ako j c to potrebné na dosiahnutie žiaduceho terapeutického účinku. Dávkovacie režimy podľa vynálezu sú také, aby bola zaručená maximálna terapeutická odozva, dokiaľ sa nedostaví zlepšenie, a udržaná minimálna účinná hladina, ktorá prináša úľavu. Niektorí pacienti majú rýchlejšiu odozvu na vyššiu alebo nižšiu dávku a stačí im udržiavanie značne nižších dávok. Použitie podľa vynálezu zahŕňa tak krátkodobé, ako dlhodobé režimy. Používa sa približne jedna až približne štyri dávky denne podľa fyziologických potrieb každého jedinca, pričom sa voľba primeraných dávok v každom špecifickom prípade riadi hmotnosťou pacienta, jeho všeobecným zdravotným stavom, vekom a ostatnými okolnosťami, ktoré môžu ovplyvňovať odozvu na toto liečivo. Preto sa niektorým pacientom predpisuje len jedna alebo najviac dve dávky denne.

Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť tiež formulované na použitie spolu s inými terapeutickými činidlami alebo na využitie terapeutických techník zameraných na farmakologické podmienky, ktoré môžu byť vylepšené aplikáciou zlúčeniny všeobecného vzorca (I), napríklad je možné použiť nasledujúce režimy.

Zlúčeniny podľa vynálezu možno použiť na ošetrovanie stavu po angioplastike pomocou akéhokoľvek zariadenia, ako je technika využívajúca balónik, ablácie alebo laser. Zlúčeniny podľa vynálezu možno použiť pri ošetrovaní restenózy nasledujúcej po umiestnení stentu do vaskulatúry ako (1) primáme liečenie vaskulárnej blokády. (2) v prípade, keď angioplastika pomocou akéhokoľvek zariadenia nevedie k arteriálnej priechodnosti. Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť použité buď perorálne, parenterálne alebo môže byť zlúčenia aplikovaná zvonka pomocou špecifického zariadenia alebo vhodne formulovaným povlakom na stente.

Zlúčeniny podľa vynálezu možno použiť pri ošetrovaní restenózy v spojení s antikoagulačným, antidoštičkovým, antitrombotickým alebo profibrolytickým činidlom, často sú pacienti liečení súbežne pred intervenčnými procesmi, v priebehu nich alebo po nich činidlami týchto tried na bezpečné uskutočnenie intervenčného zásahu alebo na prevenciu škodlivých účinkov vytvárania trombu. Niektoré príklady tried činidiel, o ktorých je známe, že sú antikoagulačnými, antidoštičkovými, antitrom botickými alebo profibrinolytickými činidlami zahrnujú akúkoľvek formuláciu inhibítorov trombínu alebo inhibítorov faktora Vila. Ako príklady tried činidiel s antikoagulačnými, antidoštičkovými, antitrombotickými alebo profibrinolytickými vlastnosťami je možné uviesť akékoľvek formulácie aspirínu, priamych inhibítorov trombínu, priamych inhibítorov faktora Xa alebo faktora Vila.

Zlúčeniny podľa vynálezu je možné použiť v kombinácii s ktorýmkoľvek činidlom pôsobiacim proti vysokému tlaku alebo činidlom regulujúcim cholesterol, alebo lipid pri liečení restenóz, alebo aterosklerózy súbežne s liečením vysokého krvného tlaku, alebo aterosklerózy. Ako niektoré príklady činidiel, ktoré sú vhodné na liečenie vysokého krvného tlaku je možné uviesť zlúčeniny nasledujúcich tried: /3-blokátory, inhibítory ACE, antagonisty vápnikových kanálikov a agonisty α-receptora. Ako niektoré príklady činidiel, ktoré sú vhodné na liečenie zvýšenej hladiny cholesterolu alebo neriadenej úrovne lipidov, je možné uviesť, zlúčeniny známe pod označením inhibítory HMGCoA reduktázy, zlúčeniny fibrátovej triedy.

Prehľad obrázkov na výkresoch

Na obr. 1 sú graficky znázornené informácie týkajúce sa usporiadania vzoriek krvi pri hemodynamických meraniach, v priebehu podávania rôznych koncentrácií zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, N-(n-butylsulfonyl)-4-(piperidin-4-ylbutyloxy)-L-fenylalanínu (BSPBPA) a prostriedku, ktorý ich obsahuje, v závislosti od Času.

Vysvetlivky: Diagram sa týka enoxaparínu, heparínu alebo nosiča (bolus + infúzia); šípka platí pre BSPBPA alebo nosič.

Odber krvi/hemodynamika;

arteriálne vzorky pri -5, 5, 10, 30, 60 minútach;

ošetrované skupiny (n=5 na skupinu);

plus BSPBPA (30 gg/kg);

plus BSPBPA (300 gg/kg).

Obr. 2 predstavuje graf počtu redukcií cyklických prietokov (CFR) pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinnosťou, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, BSPBPA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, v závislosti od času.

Vysvetlivky: Na diagrame je vplyv súčasného podávania enoxaparínu a heparínu s BSPBPA na CFR. Na osi y je CFR za 20 minút, na osi x sú: BSPBPA (30 gg/kg), BSPBPA (300 gg/kg); ENOX (0,5 mg/kg + 5 gg/kg/min.), ENOX + BSPBPA (30 gg/kg), heparín (60 U/kg + 0,7 U/kg/min.), heparín + BSPBPA (30 jug/kg);

* p < 0,05 vs enoxaparín + BSPBPA.

Prázdny stĺpec kontrola, pravé šrafovanie 0-20', plný stĺpec 20-40', ľavé šrafovanie 40-60'.

Na obr. 3 je graf aktivovaného parciálneho tromboplastínového času (APTT) pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek a prostriedku, ktorý ich obsahuje, v závislosti od času.

Vysvetlivky: Na diagrame je vplyv súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s BSPBPA na APTT.

Na osi y je APTT (združený nárast) a na osi x sú BSPBPA (30 gg/kg), BSPBPA (300 gg/kg), ENOX (0,5 mg/kg + 5 gg/kg/min.), ENOX + BSPBPA (30 gg/kg), heparín (60 U/kg + 0,7 U/kg/min.), heparin + BSPBPA (30 gg/kg);

*p <0,05 vs enoxaparín + BSPBPA.

Bodkovaný stĺpec O', prázdny stĺpec 5', pravé šrafovanie 10', plný stĺpec 30', ľavé šrafovanie 60'.

Na obr. 4 je graf protrombínového času (PT) pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, BSPBPA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, v závislosti od času.

Vysvetlivky: Na diagrame je vplyv súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s BSPBPA na PT.

Na osi y je PT (združený nárast) a na osi x sú: BSPBPA (30 gg/kg), BSPBPA (300 gg/kg), ENOX (0,5 mg/kg + 5 gg/kg/min.), ENOX + BSPBPA (30 gg/kg), heparín (60 U/kg + 0,7 U/kg/min.), heparín + BSPBPA (30 gg/kg).

Na obr. 5 je graf znázorňujúci závislosť účinku zlúčeniny s anti-Xa účinnosťou pre rôzne koncentrácie tejto zlúčeniny s anti-Xa účinnosťou, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, BSPBPA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, od času.

Vysvetlivky: Na diagrame je vplyv súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s BSPBPA na účinnosť zlúčeniny s anti-Xa účinkom.

Na osi y je zlúčenina s anti-Xa účinnosťou (IU/ml) a na osi x sú: BSPBPA (30 Mg/kg), BSPBPA (300 Mg/kg), ENOX (0,5 mg/kg + 5 Mg/kg/min.), ENOX + BSPBPA (30 Mg/kg), heparín (60 U/kg + 0,7 U/kg/min), heparín + BSPBPA (30 Mg/kg):

* p <0,05 vs enoxaparín + BSPBPA.

Na obr. 6 je graf závislosti anti-IIa účinku pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, BSPBPA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, od času.

Vysvetlivky: Na diagrame je vplyv súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s BSPBPA na účinnosť zlúčeniny s anti-IIa účinkom. Na osi y je zlúčenina s anti-Iia účinkom (IU/ml) a na osi x sú: BSPBPA (30 /tg/kg), BSPBPA (300 pg/kg), ENOX (0,5 mg/kg + 5 pg/kg/min.), ENOX + BSPBPA (30 Mg/kg), heparín (60 U/kg + 0,7 U/kg/min.), heparín + BSPBPA (30 Mg'kg);

* p < 0,05 vs enoxaparín + BSPBPA.

Na obr. 7 je graf času krvácania matrice pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, BSPBPA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, v závislosti od času.

Vysvetlivky: Na diagrame je vplyv súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s BSPBPA na čas krvácania matrice;

na osi y je čas krvácania matrice a na osi x sú: BSPBPA (30 Mg/kg), BSPBPA (300 Mg/kg), ENOX (0,5 mg/kg + 5 Mg/kg/min.), ENOX + BSPBPA (30 Mg/kg), heparín (60 U/kg + 0,7 U/kg/min.), heparín + BSPBPA (30 Mg/kg);

* p <0,05 vs enoxaparín + BSPBPA.

Na obr. 8 je graf počtu doštičiek pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinnosťou, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, BSPBPA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, v závislosti od času.

Vysvetlivky: Na diagrame je vplyv súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s BSPBPA na počet doštičiek.

Na osi y je počet doštičiek a na osi x sú: BSPBPA (30 Mg/kg), BSPBPA (300 Mg/kg), ENOX (0,5 mg/kg t 5 Mg/kg/min.), ENOX + BSPBPA (30 Mg/kg), heparín (60 U/kg + 0,7 U/kg/min.), heparín + + BSPBPA (30 Mg/kg).

Prázdny hrubo orámovaný stĺpec 5', pravé šrafovanie 10', plný stĺpec 30', ľavé šrafovanie 60'.

Na obr. 9 je graf kolagénom vyvolaného zrážania doštičiek ex vivo pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, BSPBPA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, v závislosti od času.

Vysvetlivky: Na diagrame je vplyv súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s BSPBPA na kolagénom vyvolané zrážanie doštičiek ex vivo.

Na osi y je zrážanie doštičiek vyvolané kolagénom (% zmeny) a na osi x sú: BSPBPA (30 Mg/kg)· BSPBPA (300 Mg/kg), ENOX (0,5 mg/kg + 5 Mg/kg/min.), ENOX + BSPBPA (30 Mg/kg), heparín (60 U/kg + 0,7 IJ/kg/min.), heparín + BSPBPA (30 pg/kg):

* p <0,05 vs enoxaparín + BSPBPA.

Prázdny hrubo orámovaný stĺpec 5', pravé šrafovanie 10', plný stĺpec 30', ľavé šrafovanie 60’.

Na obr. 10 je graf ADP vyvolaného zrážania doštičiek ex vivo pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, BSPBPA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, v závislosti od času.

Vysvetlivky: Na diagrame je vplyv súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s BSPBPA na ADP-vyvolané zrážanie doštičiek ex vivo.

Na osi y je zrážanie doštičiek vyvolané ADP (% zmeny) a na osi x sú: BSPBPA (30 Mg/kg), BSPBPA (300 gg/kg), ENOX (0,5 mg/kg + 5 Mg/kg/min.), ENOX + BSPBPA (30 pg/kg), heparín (60 U/kg + 0,7 U/kg/min.), heparín + BSPBPA (30 pg/kg)·, * p <0,05 vs enoxaparín + BSPBPA.

Na obr. 11 je graf zrážania doštičiek ex vivo vyvolaného kyselinou arachidónovou pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, BSPBPA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, v závislosti od času.

Vysvetlivky: Na diagrame je vplyv súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s BSPBPA na zrážanie doštičiek vyvolané kyselinou arachidónovou.

Na osi y je zrážanie doštičiek vyvolané kyselinou arachidónovou (% zmeny) a na osi x sú: BSPBPA (30 Mg/kg), BSPBPA (300 Mg/kg), ENOX (0,5 mg/kg + 5 Mg/kg/min.), ENOX + BSPBPA (30 Mg/kg), heparín (60 U/kg + 0,7 U/kg/min.), heparín + BSPBPA (30 Jíg/kg);

* p <0,05 vs enoxaparín + BSPBPA.

Na obr. 12 je graf zrážania doštičiek ex vivo vyvolaného trombínom ρτε rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, BSPBPA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, v závislosti od času.

Vysvetlivky: Na diagrame je vplyv súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s BSPBPA na zrážanie doštičiek ex vivo vyvolané trombínom.

Na osi y je zrážanie doštičiek vyvolané trombínom (% zmeny) a na osi x sú: BSPBPA (30 /tg/kg), BSPBPA (300 gg/kg), ENOX (0,5 mg/kg + 5 μg/kg/min.), ENOX + BSPBPA (30 gg/kg), heparín (60 U/kg + 0,7 U/kg/min.), heparín + BSPBPA (30 gg/kg);

* p <0,05 vs enoxaparín + BSPBPA.

Na obr. 13 sú graficky znázornené informácie týkajúce sa usporiadania vzoriek krvi pri hemodynamických meraniach v priebehu podávania rôznych koncentrácií zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, N-[N-[N-(4-(piperidín-4-yl)butanoyl)-N-etylglycyl]asparagyl]-L-/3-cyklohexyl-alanínamidu (PBGACA) a prostriedku, ktorý ich obsahuje, v závislosti od času.

Vysvetlivky: Diagram sa týka enoxaparínu, heparínu alebo nosiča (bolus + infúzia); PBGACA alebo nosič (Bolus + infúzia).

Odber krvi/hemodynamika.

Arteriálne vzorky pri -5, 5, 10, 30, 60 minút.

Ošetrované skupiny (n=5 na skupinu);

plus PBGACA nízka;

plus PBGACA nízke.

Obr. 14 predstavuje graf počtu redukcií cyklického prietoku (CFR) pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, PBGACA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, v závislosti od času.

Vysvetlivky: Na diagrame je vplyv súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s PBGACA na CFR.

Na osi y je CFR za 20 minút, na osi x sú: vehikulum, PBGACA nízka, PBGACA vysoká, ENOXAPARÍN (0,5 mg/kg + 5 jtg/kg/'min.), ENOXAPARÍN + PBGACA nízka, heparín (60 U/kg + + 0,7 U/kg/min.), heparín + PBGACA nízka;

* p <0,05 vs enoxaparín + PBGACA.

Na obr. 15 je graf aktivovaného parciálneho tromboplastínového času (APTT) pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, PBGACA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, v závislosti od času.

Vysvetlivky: Na diagrame je vplyv súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s PBGACA na APTT. Na osi y je APTT (združený nárast) a na osi x sú: vehikulum, PBGACA nízka, PBGACA vysoká, ENOXAPARÍN (0,5 mg/kg + 5 mg/kg/min.), ENOXAPARÍN + PBGACA nízka, heparín (60 U/kg + 0,7 U/kg/min.), heparín + PBGACA nízka;

* p <0,05 vs enoxaparín + PBGACA.

Bodkovaný stĺpec 0', prázdny stĺpec 5', pravé šrafovanie 10', plný stĺpec 30', ľavé šrafovanie 60'.

Na obr. 16 je graf protrombínového času (PT) pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, PBGACA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, v závislosti od času.

Na osi y je PT (združený nárast) a na osi x sú: vehikulum, PBGACA nízka, PBGACA vysoká, ENOXAPARÍN (0,5 mg/kg + 5 gg/kg/min.), ENOXAPARÍN + PBGACA nízke, heparín (60 U/kg + 0,7 U/kg/min.), heparín + PBGACA nízka.

Bodkovaný stĺpec 0, prázdny stĺpec 5', pravé šrafovanie 10', plný stĺpec 30', ľavé šrafovanie 60'.

Na obr. 17 je graf závislosti anti-Xa účinku pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, PBGACA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, od času.

Vysvetlivky: Na diagrame je vplyv' súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s PBGACA na účinnosť zlúčeniny s anti-Xa účinkom.

Na osi y je zlúčenina s anti-Xa aktivitou (IU/ml) a na osi x sú: vehikulum, PBGACA nízka, PBGACA vysoká, ENOXAPARÍN (0,5 mg/kg + 5 gg/kg/min.), ENOXAPARÍN + PBGACA nízka, heparín (60 U/kg + 0,7 U/kg/min.), heparín + PBGACA nízka.

* p <0,05 vs enoxaparín + PBGACA;

Na obr. 18 je graf závislosti anti-IIa účinku pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, PBGACA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, od času.

Vysvetlivky: Na diagrame je vplyv súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s PBGACA na účinnosť zlúčeniny s anti-IIa účinkom.

Na osi y je zlúčenina s anti-IIa aktivitou (IU/ml) a na osi x sú: vehikulum, PBGACA nízka, PBGACA vysoká, ENOXAPARÍN (0,5 mg/kg + 5 gg/kg/min.), ENOXAPARÍN + PBGACA nízka, PBGACA vysoká, ENOXAPARÍN (0,5 mg/kg + 5 gg/kg/min.), ENOXAPARÍN + PBGACA nízka, heparín (60 U/kg + 0,7 U/kg/min.), heparín + PBGACA nízka;

* p <0,05 vs enoxaparín + BSPBPA.

Na obr. 19 je graf závislosti času krvácania matrice pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, PBGACA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, od času.

Vysvetlivky: Účinok súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s PBGACA na čas krvácania matrice.

Na osi y je čas krvácania matrice a na osi x sú: vehikulum, PBGACA nízka, PBGACA vysoká, ENOXAPARÍN (0,5 mg/kg + 5 gg/kg/min.), ENOXAPARÍN + PBGACA nízka, heparín (60 U/kg + 0,7 U/kg/min.), heparín + PBGACA nízka.

* p <0,05 vs enoxaparín + PBGACA.

Na obr. 20 je graf závislosti počtu doštičiek pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, PBGACA a prostriedku, ktorých ich obsahuje, od času.

Vysvetlivky: Na diagrame je vplyv súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s PBGACA na počet doštičiek.

Na osi y je počet doštičiek (% zmeny) a na osi x sú: vehikulum, PBGACA nízka, PBGACA vysoká, ENOXAPARÍN (0,5 mg/kg + 5 gg/kg/min.), ENOXAPARÍN + PBGACA nízka, heparín (60 U/kg + + 0,7 U/kg/min.), heparín + PBGACA nízka.

Na obr. 21 je graf závislosti kolagénom vyvolaného zrážania doštičiek ex vivo pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, PBGACA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, od času.

Vysvetlivky: Na diagrame je vplyv súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s PBGACA na kolagénom vyvolané zrážanie doštičiek ex vivo.

Na osi y je zrážanie doštičiek vyvolané kolagénom (% zmeny) a na osi x sú: vehikulum, PBGACA nízka, PBGACA vysoká, ENOXAPARÍN (0,5 mg/kg + 5 gg/kg/min.), ENOXAPARÍN + PBGACA nízka, heparín (60 U/kg - 0,7 U/kg/min.), heparín + PBGACA nízka;

* p <0,05 vs enoxaparín + PBGACA.

Na obr. 22 je graf závislosti ADP-vyvolaného zrážania doštičiek ex vivo pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, PBGACA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, od času.

Vysvetlivky: Účinok súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s PBGACA na ADP-vyvolané zrážanie doštičiek ex vivo.

Na osi y je zrážanie doštičiek vyvolané ADP (% zmeny) a na osi x sú: vehikulum, PBGACA nízka, PBGACA vysoká, ENOXAPARÍN (0,5 mg/kg + 5 gg/kg/min.), ENOXAPARÍN PBGACA nízka, PBGACA vysoká, ENOXAPARÍN (0,5 mg/kg + 5 gg/kg/min.), ENOXAPARÍN - PBGACA nízka, heparín (60 U/kg + 0,7 U/kg/min), heparín + PBGACA nízka;

* p <0,05 vs enoxaparín + PBGACA.

Na obr. 23 je graf závislosti zrážania doštičiek ex vivo vyvolaného kyselinou arachidónovou pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, PBGACA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, od času.

Vysvetlivky: Na diagrame je vplyv súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s PBGACA na zrážanie doštičiek ex vivo vyvolané kyselinou arachidónovou.

Na osi y je zrážanie doštičiek vyvolané kyselinou arachidónovou (% zmeny) a na osi x sú: vehikulum, PBGACA nízka, PBGACA vysoká, ENOXAPARÍN (0,5 mg/kg + 5 gg/kg/min.), ENOXAPARÍN + + PBGACA nízka, heparin (60 U/kg + 0,7 U/kg/min.), heparin + PBGACA nízka;

* p <0,05 vs enoxaparín + PBGACA.

Prázdny hrubo orámovaný stĺpec 5', pravé šrafovanie 10', plný stĺpec 30’, ľavé šrafovanie 60'.

Na obr. 24 je graf závislosti zrážania doštičiek ex vivo vyvolaného trombínom pre rôzne koncentrácie zlúčeniny s anti-Xa účinkom, enoxaparínu, zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek, PBGACA a prostriedku, ktorý ich obsahuje, od času.

Vysvetlivky: Na diagrame je vplyv súčasného podávania enoxaparínu alebo heparínu s PBGACA na zrážanie doštičiek ex vivo vyvolané trombínom.

Na osi y je zrážanie doštičiek vyvolané trombínom (% zmeny) a na osi x sú: vehikulum, PBGACA nízka, PBGACA vysoká, ENOXAPARÍN (0,5 mg/kg + 5 ^g/kg/min.), ENOXAPARÍN + PBGACA nízka, heparin (60 U/kg + 0,7 U/kg/min.), heparin + PBGACA nízka;

* p <0,05 vs enoxaparín + PBGACA.

Prázdny hrubo orámovaný stĺpec 5', pravé šrafovanie 10’, plný stĺpec 30', ľavé šrafovanie 60'.

Zlúčeniny s anti-Xa účinkom a zlúčeniny pôsobiace proti zrážaniu doštičiek použité podľa vynálezu, majú výrazné farmakologické pôsobenie na základe testov opísaných v literatúre, pričom výsledky týchto testov sa vzťahujú na farmakologickú účinnosť u ľudí a ostatných cicavcov. Nasledujúce výsledky farmakologických testov sú typickými charakteristikami zlúčenín s antí-Xa účinkom a zlúčenín pôsobiacich proti zrážaniu doštičiek použitých podľa vynálezu.

Nasledujúce farmakologické testy vyhodnocujú účinnosť zlúčenín s anti-Xa účinkom a zlúčenín pôsobiacich proti zrážaniu doštičiek podľa vynálezu. Tieto testy zahŕňajú hemodynamické merania v priebehu podávania rôznych koncentrácií zlúčenín s anti-Xa účinkom a zlúčenín pôsobiacich proti zrážaniu doštičiek a prostriedkov pripravených s použitím týchto látok v závislosti od času (obr. 1 až 13). Pri týchto testoch sa meralo zníženie cyklického prietoku (obr. 2 a 14), čas aktivovaného parciálneho tromboplastínu (obr. 3 a 15), protrombínový čas (obr. 4 a 16), anti-Xa účinok (obr. 5 a 17), anti-Ila účinok (obr. 6 a 18), čas krvácania matrice (obr. 7 a 19), počet doštičiek (obr. 8 a 20), zrážanie doštičiek vyvolané kolagénom ex-vivo (obr. 9 a 21), zrážanie doštičiek vyvolané ADP ex-vivo (obr. 10 a 22), zrážanie doštičiek vyvolané kyselinou arachidónovou ex-vivo (obr. 11a 23) a zrážanie doštičiek vyvolané trombínom ex-vivo (obr. 12 a 24).

Zlúčeniny podľa vynálezu mali významný účinok v týchto testoch, a preto sa pokladajú za užitočné pri prevencii a liečení trombózy spojenej s určitými chorobnými stavmi. Antitrombotické pôsobenie v teste zrážania doštičiek psov ex-vivo predvída rovnaké správanie u ľudí (pozri napríklad Catafalmo, J. L. a Dodds, W. Jean, „Isolation of Plateletfrom Laboratory Animals, Methods Enzymol. 169, diel A, str. 27(1989)).

Materiály a metódy

Všetky postupy v tejto štúdii boli uskutočnené v súlade so zákonmi na ochranu zvierat Animal iVelfare Act Regulations a Guide for Čare and Use of Laboratory Animals (DHEW publikácia číslo NIH 85-23, 1985).

Nasledujúci protokol je experimentálny model nestabilnej angíny.

Psy Mongred rôzneho pohlavia (15 až 21 kg) sa uspia pentobarbitalom sodným (30 mg/kg i. v., s doplnkami podľa potreby), intubujú sa a zavedie sa dýchanie Harvardovým respirátorom (Harvard Apparatus, S. Natick, MAA). Do pravej femorálnej žily sa zavedie trojcestný katéter (SAFEDWELLplus, Becton Dickinson, Sandy, UT) na podávanie testovaných činidiel a k doplňujúcej anestézii. Pravá femorálna artéria sa vybaví kanylou na meranie arteriálneho tlaku krvi a na odber krvných vzoriek.

Uskutoční sa torakotómia v 5. medzirebrovom mieste a srdce sa zavesí do perikardiálnej kolísky. Ľavá obvodová koronárna artéria (LCX) sa izoluje a otvorí v dĺžke 2 cm s podviazaním bočných ramien podľa potreby. Na cievu sa nasadí elektromagnetická prietoková sonda (Carolina Medical Electronics, 50ID) na sledovanie koronárneho prietoku krvi a na distálnu časť cievy sa nasadí očko na vytvorenie dočasnej mechanickej oklúzie, ktorá sa použije na nastavenie stupňa stenózy a na pomoc pri vyhodnotení merania nulového prietoku.

Na vytvorenie kritickej stenózy, ktorá je potvrdená vymiznutím hyperemickej odozvy na 10 sekundovú mechanickú oklúziu cievy sa nasadí distálne od prietokovej sondy Lexan® oklúzor. Endotélium a bunky hladkého svalstva cievy sa poškodia zovretím cievy cievnou svorkou. Výsledkom tohto stavu je prilipnutie a zrážanie krvných doštičiek v poškodenej oblasti, čo vyvolá postupný pokles koronárneho prietoku krvi. Keď prietok dosiahne nulu, pohybuje sa s oklúzorom dopredu a späť cez poškodenú oblasť k mechanickému premiestneniu trombu bohatého na doštičky, čím sa obnoví prietok krvi. Tento opakovací model znižovania prietoku krvi, ktorý je obnovovaný mechanickým rozrušením doštičkového trombu, sa označuje ako cyklické znižovanie prietoku (cyclic flow reduction, CFR). Protitrombický účinok testovaných činidiel sa kvantifikuje porovnaním počtu CFR, ku ktorému dôjde v 20-minútovej kontrolnej perióde, s počtom CFR za 20 minút po tri sebe nasledujúce 20-minútové periódy po podaní liečiva. Významné zníženie počtu CFR sa považuje za reprezentanta antitrombického účinku.

Experimentálny protokol

a) Protokol s použitím BSPBPA

Tridsať psov bolo určených do jednej z pomocných šiestich ošetrovaných skupín. Zlúčeniny boli podávané len ako intravenózny bolus (pre N-(n-butylsulfonyl)-4-(piperidín-4-ylbutyloxy)-L-fenylalanín (BSPBPA) alebo soľný roztok ako vehikulum) alebo ako intravenózne bolus plus konštantné infúzie (pre heparín, enoxaparín (ENOX), alebo soľný roztok ako vehikulum. Ošetrovanými skupinami boli: (I) BSPBPA (30 Mg/kg); (II) BSPBPA (300 /rg/kg), (III) ENOX (0,5 mg/kg + + 5 Mg/kg/min.); (IV) ENOX (0,5 mg/kg + 5 Mg/kg/min.) plus BSPBPA (30 Mg/kg); (V) heparín (60 U/kg + 0,7 U/kg/min.); a (VI) heparín (60 U/kg + 0,7 U/kg/min.) plus BSPBPA (30 Mg/kg). Všetky zlúčeniny boli zriedené soľným roztokom a bolus bol injekčné aplikovaný v objeme 5 ml, pričom konštantné infúzie boli uskutočňované použitím objemu 22 ml.

b) Protokol používajúci PBGACA

Tridsať psov bolo určených do jednej z pomocných šiestich ošetrovaných skupín. Použitie zlúčenín na tieto pokusy zahrnovalo podávanie nasledujúcich činidiel ako bolus a ako konštantná infúzia (pre N-[N-[N-(4-(piperidín-4-yl)butanoyl)-N-etylglycyl]asparagyl]-L-/3-cyklohexylalanínamid (PBGACA) alebo soľný roztok ako vehikulum) alebo ako intravenózny bolus plus konštantná intravenózna infúzia (pre heparín, enoxaparín (ENOX), alebo soľný roztok ako vehikulum. Ošetrovanými skupinami boli: (I) PBGACA (10 Mg/kg + 0,15 Mg/kg/min.; (II) PBGACA (30 Mg/kg + 0,15 Mg/kg/min.; (III) ENOX (0,5 mg/kg + 5 Mg/kg/min.); (IV) ENOX (0,5 mg/kg + 5 Mg/kg/min.) plus PBGACA (10 Mg/kg + + 0,15 Mg/kg/min.); (V) heparín (60 U/kg + 0,7 U/kg/min.); a (VI) heparín (60 U/kg) plus PBGACA (10 Mg/kg + 0,15 Mg/kg/min.). Všetky zlúčeniny boli zriedené soľným roztokom a bolus bol injekčné aplikovaný v objeme 5 ml, pričom konštantné iníuzie boli uskutočňované použitím objemu 22 ml.

Po nastavení CFR na čas aspoň 20 minút boli podávané zlúčeniny opísaným spôsobom, pričom bol monitorovaný prietok krvi počas jednej hodiny infúznej periódy. Odobraté boli vzorky arteriálnej krvi pred podaním skúšaných činidiel (kontrolná vzorka) a 5, 10, 30 a 60 minút po podaní testovanej zlúčeniny. Vzorky krvi boli odobraté do 1/10 objemu 3,8 % trinátriumcitrátu a použité na stanovenie ex vivo agregácie doštičiek, počtu doštičiek, hladiny anti-Xa, hladiny anti-IIa a testu času koagulácie (aktivovaný parciálny tromboplastínový čas, APTT a protrombínový čas, PT). Vzorky krvi (4,5 ml), získané na analýzu hladiny anti-Xa a anti-IIa, boli zhromaždené do chladenej striekačky obsahujúcej 0,5 ml trinátriumcitrátu a ihneď boli umiestnené na ľad. Zaznamenaný bol stredný arteriálny tlak krvi, tep srdca a EKG počas trvania testu (polygraf Grass, Model 7D, Grass Instruments, MA).

Časy koagulácie a čas krvácania matrice. Meraný bol aktivovaný parciálny tromboplastínový čas (APTT) a protrombínový čas (PT) s použitím analyzátora Microsample Coagulation Analyzer (MCA210, Bio Data Corp, Horsham, P A) a činidiel Dade® (Thromboplastin-C Plus a Actin® FS aktivované PTT činidlo, Baxter Diagnostics, Inc., Deerfield, IL).

APTT je najčastejšie používaným spôsob na monitorovanie intravenóznej heparínovej antikoagulačnej terapie. Je tiež základným skríningovým testom pre deficit alebo abnormalitu vnútorných koagulačných faktorov: VII, IX, XI, XII a faktorov spoločných pre vnútorné a vonkajšie dráhy: I (fibrinogén), II, V, X. Pri použití spolu s deficitným substrátom plazmy poskytuje APTT základ pre kvantifikáciu koagulačných faktorov.

Vnútorná schopnosť krvi vytvárať fibrínové zrazeniny vyžaduje koagulačné faktory XII, XI, IX, VIII, X, V, II (protrombín), fibrinogén, doštičkový lipid a vápnik.

Pridaním zlúčeniny na aktiváciu faktorov XII a XI, kontaktných faktorov sa parciálny tromboplastínový čas stane „aktivovaným“ parciálnym tromboplastínovým časom (APTT). Keďže sú konečné koagulačné body kratšie a ostrejšie ako s PTT, osvedčuje sa APTT ako jednoduché a vysoko spoľahlivé meranie vnútorného koagulačného mechanizmu.

Testovací postup

1. Predbežne sa inkubuje 0,025 M chlorid vápenatý pri teplote 37 °C.

2. Odpipetuje sa 0,1 ml rekonštituovaného APTT reakčného činidla do testovacej kyvety.

3. Pridá sa 0,1 ml testovanej alebo kontrolnej plazmy.

4. Inkubuje sa pri 37 °C presne 5 minút.

5. Pridá sa 0,1 ml predinkubovaného chloridu vápenatého súčasne s naštartovaním časomerača.

6. Zaznamenáva sa čas zrážania.

Protrombínový čas je spôsob monitorovania orálnej antikoagulačnej terapie. Je to tiež základný skríningový test pre deficit alebo abnormalitu vnútorného koagulačného faktora VII a faktorov spoločných pre vnútorné a vonkajšie hemostatické dráhy: fibrinogén, II, V a X. Pri použití spolu s deficitnou substrátovou plazmou poskytuje PT základ pre kvantifikáciu špecifických koagulačných faktorov.

Schopnosť krvi vytvárať fibrínovú zrazeninu vonkajšou hemostatickou cestou vyžaduje tkanivový tromboplastín, vápnik, faktor VII, faktor V, faktor X, faktor II (protrombín) a faktor I (fibrinogén). Ak sa pridajú tkanivový tromboplastín a vápnik do vzorky citrátovej plazmy, vnútorné faktory sa obídu a reakcia sa stane špecifická pre koagulačné faktory zapojené vo vonkajšej a bežnej ceste.

Testovací postup

1. Predbežne sa inkubuje rekonštituované činidlo pri 37 °C.

2. Odpipetuje sa 0,1 ml testovanej alebo kontrolnej plazmy do testovacej kyvety.

3. Inkubuje sa pri 37 °C počas aspoň dvoch minút, nie však dlhšie ako 10 minút.

4. Injikuje sa 0,1 ml predinkubovaného reakčného činidla súčasne s naštartovaním časomerača.

6. Zaznamenáva sa čas zrážania.

Namerané hodnoty času krvácania matrice sa získajú v rovnakých časových bodoch ako v prípade krvných vzoriek, ako je uvedené. Meranie času krvácania matrice sa uskutočňuje po rovnomernom narezaní svalovej membrány na vnútornom hornom pysku automatickým zariadením Surgicutt® (ITC, Edison, NJ). Krv sa odsáva nasávacím papierom Surgicutt® každých 30 sekúnd, pričom sa dbá na to, aby sa nenarušilo miesto rezu. Meria sa čas krvácania matrice od chvíle reznutia až do chvíle, keď krv už nezafarbí nasávaci papier. Čas krvácania 10 minút sa považuje za maximálny.

Anti-Xa a anti-IIa účinok

Vzorky boli odstreďované pri 1 500 x g počas 10 minút pri teplote 4 °C. Plazma bola odstránená a uchovávaná pri teplote -70 °C až do času testu. Analyzovaný bol anti-Xa a anti-IIa účinok chromogenickými spôsobmi s použitím kitu (Američan Diagnostica, antichrome® Heparin and antichrome® Heparin anti IIA, Geenwich, CT) s malými modifikáciami. Inkubácie a reakcie boli uskutočňované pri teplote 37 °C. Amidolytická aktivita (jednotky „millioptical“ alebo mOD) bola stanovená s použitím spektrofotometra s mikrotitrovacím platom SPECTRAmax a softvéru Sopfmax Pro (Molecular Devices Corp., Sunnyvale CA). Na vytvorenie štandardných kriviek na meranie heparínu a ENOX anti-Xa a anti-IIa účinku bol použitý lst Intemational LMWH Štandard (National Inštitúte for Biological Standards and Control, London; anti-Xa účinok 168 IU/mg a anti-IIa účinok 66,4 lU/mg). Krivky boli skonštruované s použitím štyroch parametrov modelu krivka-skúška (Softmax Pro, Molecular Devices, Sunnyvale, CA). Hodnoty pre anti-Xa a anti-IIa účinok heparínu a ENOX sa uvádzajú v medzinárodných jednotkách.

Agregácia doštičiek

Test na inhibíciu ex-vivo agregácie doštičiek sa uskutočnil podľa metódy opísanej v publikácii Zucker „Platelet Aggregation Measu-red by the Photoelectric Method“, Methods in Enzymology 169, str. 117 až 133 (1989).

Plazma obohatená doštičkami (PRP) bola pripravená odstreďovaním vzoriek krvi pri 150 x g počas 10 minút. Po odstránení supematantu obsahujúceho PRP bola plazma chudobná na doštičky (PPP) pripravená odstreďovaním zvyšnej vzorky pri 1 000 x g počas 10 minút. Počet doštičiek bol stanovený s použitím čítača častíc Coulter ZM alebo Coulter ZBI (Coulter Instruments, Hialeah, FL). V prípade potreby bol počet doštičiek nastavený na 3 x 10⁸ doštičiek/ml s použitím PPP. PRP (250 μί) bol inkubovaný pri teplote 37 °C pri miešaní pri 1 200 otáčkach/minútu. Po predinkubácii epinefrínom počas jednej minúty (1 μΜ, Chrono-par 393, Chrono-log Corp. Havertown, PA) bola vyvolaná agregácia doštičiek adenozíndifosfátom (ADP, 10 μΜ, Chrono-par 384, Chrono-log Corp., Havertown, PA), kolagénom (zo šľachy koňa, 10 fig/ml, Chrono-par 384, Chrono-log Corp., Havertown, PA), arachidónovou kyselinou (1 mM, Blodata Corp. Horsham, PA) alebo trombínom (4 jednotky/ml, Enzýme Research Inštitúte, South Bend, IN; plus Gly-Pro-Arg-Pro, inhibítor polymerizácie fibrínu, 2 mM, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO). Agregácia doštičiek bola monitorovaná spektrofotometricky s použitím agregátora doštičiek PAP-4C (Bio Data Corp. Horsham, PA). Výsledky boli vyjadrené ako percento inhibícic miery zrážania v porovnaní s odozvou na zrážanie uskutočnené predbežne liečivom.

Štatistika

Hodnoty získané pri všetkých testoch boli analyzované dvakrát opakovaným meraním s prihliad13 nútim na odchýlky. Dodatočné porovnanie priemeru s kontrolnými hodnotami v rámci ošetrovanej skupiny a porovnanie hodnôt ENOX s inými ošetrovanými skupinami bolo uskutočnené s použitím diferenčného testu. Za významnú bola považovaná p-hodnota menšia ako 0,5.

Výsledky

Kombinované použitie anti-Xa zlúčeniny a antagonistu agregácie doštičiek podľa vynálezu v dávkach, ktoré by boli pri použití jednotlivých zlúčenín neúčinné, efektívne bránia opakovanému vytváraniu doštičkových trombov v rovnakej miere ako vysoké dávky antagonistu zrážania doštičiek bez výrazného vzrastu času krvácania matrice (v porovnaní s viac ako päťnásobným vzrastom času krvácania matrice spôsobeným vysokou dávkou antagonism zrážania doštičiek BSPBPA a približne trojnásobným vzrastom času krvácania matrice spôsobeným vysokou dávkou antagonista zrážania doštičiek PBGACA).

Kombinácia nízkej dávky antagonistu zrážania doštičiek s heparínom v dávke, ktorá zvyšuje APTT 2,0 až 2,5-krát oproti základnej hodnote, neinhibovala opakované vytváranie trombu doštičiek.

Predmetný vynález je možné využiť i v iných špecifických uskutočneniach bez toho, aby to znamenalo odchýlenie sa od podstaty predmetného vynálezu.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje farmaceutický prijateľnú nosičovú látku a farmaceutický účinné množstvo heparinoidnej zlúčeniny alebo nízkomolekulárneho heparínu a antagonistovej zlúčeniny pôsobiacej proti zrážaniu doštičiek.
2. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že nízkomolekulámy heparin je zvolený zo skupiny zahŕňajúcej enoxaparin, nardroparín, dalteparín, certroparín, pamaparín, reviparín, ardeparín/RD heparín/RDH alebo tinzaparín.
3. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 1, lekulámym heparínom je enoxaparin.
4. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 1, idnou zlúčeninou je danaparoid.
5. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 1, tom zrážania doštičiek je abciximad, N-[N-[N-(4-(piperidín-4-yl)butanoyl)-N-etylglycyl]aspartyl]-L-/3-cyklohexylalanín, N-[N-[N-(4-(piperidín-4-yl)butanoyl)-N-etylglycyl]aspartyl]-L-/3-cyklohexylalanínamid alebo N-(n-butylsulfonyl)-4-(piperidm-4-ylbutyloxy)-L-fenylalanín.
6. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 5, vyznačujúci sa tom zrážania doštičiek je abciximad.
7. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 5, vyznačujúci sa vyznačujúci tým, tým, že nízkomože heparinože antagonistým, že antagonistým, že antagonistom zrážania doštičiek je N-[N-[N-(4-(piperidín-4-yl)butanoyl)-N-etylglycyl]aspartyl]-L-_l8-cyklohexylalanín.
8. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že antagonistom zrážania doštičiek je N-[N-[N-(4-(piperidín-4-yl)butanoyl)-N-etylglycyl]aspartyl]-L-_l3-cyklohexylalanínamid.
9. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že antagonistom zrážania doštičiek je N-(n-butylsulfonyl)-4-(piperidm-4-ylbutyloxy)-L-fenylalanín.
10. Použitie farmaceutický účinného množstva farmaceutického prostriedku podľa nároku 1 na prípravu liečiva na liečenie alebo prevenciu fyziologického stavu súvisiaceho s ischemickou poruchou spojenou s trombózou.
11. Použitie podľa nároku 10, pri ktorom je fyziologickým stavom akútny koronárny syndróm.
12. Použitie podľa nároku 11, pri ktorom je akútnym koronárnym syndrómom nestabilná angína alebo infarkt myokardu.
13. Použitie podľa nároku 10, pri ktorom liečenie alebo prevencia prebieha pri chirurgickom zákroku koronárneho arteriálneho bypasu alebo pri transluminálnej koronárnej angioplastike.
14. Použitie podľa nároku 10, pri ktorom liečenie alebo prevencia prebieha pri perkutánnej transluminálnej angioplastike.