SK281120B6 - Močoviny alebo uretány, spôsob ich prípravy a farmaceutické prípravky na ich báze - Google Patents

Abstract

Sú opísané močoviny alebo uretány všeobecného vzorca (I), kde R1 je prípadne substituovaná (C1-C20)alkyl-, (C3-C6)cykloalkyl alebo (C7-C15)aralkylskupina; R2 je prípadne chránená karboxyskupina; R3 je (C1-C6)alkylskupina; R4 je vodík alebo amino-chrániaca skupina; Ra je (C1-C6)alkylskupina; Rb je prípadne chránená karboxyskupina; Rc je prípadne chránená karboxyskupina; a X je kyslík alebo dusík; pričom prípadné substituenty uvedených (C1-C20)alkyl-, (C3-C6)cykloalkyl a (C7-C15)aralkylskupín zahrnujú halogén-, hydroxy-, (C1-C6)-alkyl-, (C1-C6)alkoxy-, amino-, mono- alebo di(C1-C6)alkylamino-, karboxy-, formyl- a (C1-C6)alkoxy)karbonylskupinu; a spôsoby ich prípravy. Farmaceutický prípravok vhodný na indukciu endogénnej produkcie rastových faktorov IL-6 a CSF25, ktoré regulujú produkciu neutrofilov v kostnej dreni cicavcov, ktorý obsahuje vhodný farmaceutický nosič a účinné množstvo uvedenej zlúčeniny.ŕ

Description

Vynález sa týka určitých močovín alebo uretánov, ktoré indukujú produkciu cytokínu, spôsobu ich prípravy a farmaceutických prípravkov na ich báze.

Doterajší stav techniky

Cytokiny, ako je G-CSF, M-CSF, GM-CSF („colony stimulating factor“) a IL-1, IL-3, IL-6 (interleukíny) môžu stimulovať hematopoézu v chorobách spojených s poškodením kostnej drene a urýchľovať tak vyliečenie neutropénie ako opisuje Metcalf D., Science, 529 (1991) a H. G. Klingemann a H. J. Deeg, CIPS, 14, 243 (1989) ako aj G. Mortsyn a A. W. Burgess, Cancer Research 48, 5624 (1988). Podiely prirodzených bakteriálnych bunkových stien a syntetických lipopeptidov, ktoré napodobňujú bunkovú stenu boli označené ako majúce imunostimulačné vlastnosti, ako opísal J. Freund, Adv. Tubercl. Res., 1130 (1956), F. Ellouz, A. Adam, R. Ciobaru e E. Lederer, Biochem. Biophys. Res. Commun., 59, 1317 (1975), V. St. Georgiev, Medicinal Res. Rev., 11,81 (1991) a I. Azuma, Int. J. Immunopharmac., 14, 487 (1992). Špecifickejšie, určité zlúčeniny boli identifikované ako indukujúce tvorbu CSF a môžu vyvolávať reštauráciu kostnej drene po myelosupresii, spôsobenej chemoterapiou alebo žiarením. Tieto zahrnujú zlúčeniny, ako je pimelautide (RP-40639), /ako opisuje F. Floch'h, Bouchaudon, C. Fizames, A. Zerial, G. Dutruc-Rosset a G. H. Wemer, CIPS, 763 (1984) a v patente č. FR-2482961 (1981)/ muroktazín (Daiichi Seiyaku Co.) /ako opisuje I. Azuma, Int. J. Immunopharmac., 14, 487 (1992)Vi R. Nakajima, Y. Yshida, K. Akahane, M. Sekiguchi a Y. Osada, Arzneim.-Forsch., 41,60 (1991); Scrip, 22, 1655 (1991) a patent č. EP-135788 (1985)/ a FK-156 a FK-567 (Fujisawa) /ako uvádza S. Izumi, K. Nakahara, T. Gotoh, S. Hashimoto, T. Kino. M. Okuhara, H. Aoki a H. Imanaka, J. Antibiotics. 566 (1983) K. Nakamura, K. Nakahar a, H. Aoki, Agric. Biol. Chem., 48. 2579 (1984); H. Keiji, H. Takeno, S. Okada, O. Nakguchi, Y. Kitaura a M. Hashimoto, Tetrahedron Lett., 23, 693 (1982) a US patenty č. 4349466 a 4666890/.

US patent 4666890 opisuje syntetické tripeptidy, o ktorých uvádza, že majú aktivitu ako imunomodulátory, na použitie ako antitumorové činidlá skôr než ako prísady k chemoterapii. Uvádzané zložky bunkovej steny a ich syntetické analógy sú všetky peptidy obsahujúce skupinu D-glutámovej kyseliny (D-Glu) γ-pripojenú buď k lyzínu (Lys) alebo kyseline diaminopimelovej (A₂pm), s ďalšími peptidovými väzbami alebo mastnými acylskupinami, lemujúcimi dva konce.

Nové uretány a močoviny opísané v tomto vynáleze sú prvé príklady nepeptidových analógov zložiek bakteriálnych bunkových stien a chýba im D-Glu skupina bežná v predchádzajúcom stave techniky. Ďalej, zatiaľ čo predchádzajúci stav techniky neposkytoval žiadne rozvetvenie na peptidovom reťazci, zahrnuje predložený vynález rozvetvené analógy, ktoré si udržujú požadovanú aktivitu, ak sú syntetizované v špecifickej konfigurácii, a spôsob syntézy týchto chirálnych rozvetvených analógov.

Podstata vynálezu

Predmetom vynálezu sú močoviny alebo uretány všeobecného vzorca (I)

kde

R¹ predstavuje prípadne substituovanú (Ci-C₂₀)alkyl-, (C₃-C₆)cykloalkyl- alebo (C_rC₁₅)aralkylskupinu;

R² predstavuje prípadne chránenú karboxyskupinu; R³ predstavuje (Ci-C₆)alkylskupinu;

R⁴ predstavuje vodík alebo amino-chrániacu skupinu;

R^a predstavuje (Ci-C₆)alkylskupinu;

R^b predstavuje prípadne chránenú karboxyskupinu; R^c predstavuje prípadne chránenú karboxyskupinu; a X predstavuje kyslík alebo dusík;

pričom prípadné substituenty uvedených (Ci-C₂₁₎)alkyl-, (C₃-C₆)cykloalkyl- a (C7-C₁₅)aralkylskupín zahrnujú halogén-, hydroxy-, (Cj-CJalkyl-, (CrC₆)alkoxy-, amino-, mono- alebo di(Ci-C₆)alkylamino-, karboxy-, formyl- a (C j -C₆)alkoxy)karbony lskupinu.

Špecifické príklady, spadajúce do uvedených definícií substituentov sú uvádzané ďalej:

(C|-C₂₀)Alkylová skupina môže byť alkylová skupina s priamym alebo rozvetveným nižším alkylom, majúcim od 1 do 20 atómov uhlíka, ako je metylová skupina, izopropylová skupina, butylová skupina, izobutylová skupina, sek. butylová skupina, terc, butylová skupina, pentylová skupina, neopentylová skupina, izopentylová skupina, hexylová skupina, izohexylová skupina a ďalšie.

(C,-C₆)Cykloalkylová skupina môže byť cyklopropylová skupina, cyklobutylová skupina, cyklopentylová skupina alebo cyklohexylová skupina.

(C₇-C|₅)Aralkylová skupina môže byť napríklad benzylová skupina, 1-naftylmetylová skupina, 2-naftylmetylová skupina, 5,6,7,8-tetrahydro-l-naftylová skupina, 5,6,7,8-tetrahydro-2-naftylová skupina, fenetylová skupina, 3-fenylpropylová skupina alebo 4-fenylbutylová skupina.

Prípadné substituenty v uvedených skupinách môžu byť atóm halogénu, ako je atóm chlóru, atóm fluóru alebo atóm brómu, hydroxylovú skupina, (Cj-CJalkylová skupina, ako je metylová skupina, etylová skupina, propylová skupina, izopropylová skupina, butylová skupina, izobutylová skupina, sek. butylová skupina alebo terc, butylová skupiny; (Ci-C₆)alkoxyskupina, ako je metoxyskupina, etoxyskupina, propoxyskupina, izopropoxyskupina, butoxyskupina, izobutoxyskupina, sek. butoxyskupina alebo terc, butoxyskupina; aminoskupina, mono- alebo di(CrCJalkylaminoskupina, ako je metylaminoskupina, etylaminoskupina, propylaminoskupina, izopropylaminoskupina, butylaminoskupina, sek. butylaminoskupina, izobutylaminoskupina, terc, butylaminoskupina, dimetylaminoskupina alebo dietylaminoskupina; karboxylová skupina; formylová skupina alebo (Ci-C₆) alkoxykarbonylová skupina ako je metoxykarbonylová skupina, etoxykarbonylová skupina, propoxykarbonylová skupina, izopropoxykarbonylová skupina, butoxykarbonylová skupina, sek. butoxykarbonylová skupina, izobutoxykarbonylová skupina alebo terc, butoxykarbonylová skupina.

Chrániaca skupina pre karboxyskupinu zahrnuje akékoľvek konvenčné chrániace skupiny pre karboxyskupiny rutinne používané odborníkmi v odbore peptidov a aminokyselín ako sú tie, ktoré sú uvedené v práci T. Greena, „Protecting Groups in Organic Synthesis“, J. Wiley and Sons, 1981. Tieto zahrnujú silylestery, alifatické estery a aromatické estery, ako je trimetylsilyl, terc, butyldimetylsilyl, acetyl, benzoyl a podobne.

SK 281120 Β6

Chrániaca skupina pre aminoskupinu zahrnuje akúkoľvek obvyklú chrániacu skupinu pre aminoskupiny, aká sa rutinne používa odborníkmi v odbore peptidovej a aminokyselinovej chémie, ako sú uvedené napríklad v práci T. Greena, supra. str. 218 - 287. Vhodná chrániaca skupina je vybraná tak, že podmienky na jej odstránenie sú kompatibilné s inými štruktúrnymi črtami zlúčeniny. Vhodné chrániace skupiny zahrnujú acylskupiny ako je terc, butoxykarbonyl alebo benzyloxykarbonyl a podobne.

Z opísaných zlúčenín so vzorcom (I) sú preferované tie, kde:

R¹ je vybraný zo skupiny zahrnujúcej (C₄-C₁₄)alkylovú skupinu, (C₃-C₆)cykloalkylovú skupinu a benzylovú skupinu, pričom R², R , R⁴, R“, R^b, R^c a X majú uvedený význam.

Zlúčeniny vzorca (I), ktoré sú najvýhodnejšie sú tie, kde:

R¹ je vybraný zo skupiny zahrnujúcej n-hexylovú skupinu,

4-n-pentylcyklohexylovú skupinu,

R² a R³ je metyl, R², R^b a R^c sú karboxy, X je kyslík alebo dusík a R⁴ je H.

Mimoriadne výhodné sú tie zlúčeniny so vzorcom (1), ktoré majú D-allo-treonín konfiguráciu uvedenú ďalej:

o

I⁵ kde R³ je metyl a R¹ a R² majú definovaný význam.

Tiež sú osobitne výhodné tie zlúčeniny, ktoré majú túto stereochémiu v diaminopimelyl-alanínovej časti molekuly:

kde R^a je metyl a ^Rb. R^c a R⁴ majú definovaný význam. Vzhľadom na stereochémiu sú najvýhodnejšie zlúčeniny všeobecného vzorca (II)

kde

R¹ predstavuje n-hexylskupinu alebo 4-n-pentylcyklohexylskupinu;

R¹ a R³ sú nezávisle vybrané z vodíka alebo metylskupiny, R₂, Rb a Rc predstavujú karboxyskupiny,

X predstavuje kyslík a R₄ predstavuje vodík.

Ako špecifické prednostné močoviny a uretány podľa vynálezu možno vymenovať nasledujúce zlúčeniny: [S-(R*,S *)] -N-[(R)-6-karboxy-N²- [ [2-karboxy-1 -metyl-2-[(l-oxoheptyl)amino]etoxy]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanín; [S-(R*,R*)]-N-[(R)-6-karboxy-N²-[[2-karboxy-l-metyl-2-[(l-oxoheptyl)amino]etoxy]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanín; [R-(R*,S*)]-N-[(R)-6-karboxy-N²-[[2-karboxy-l-metyl-2-[(l-oxoheptyl)amino]etoxy]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanín; (R)-N-[(R)-6-karboxy-N²-[[2-karboxy-2-[(l-oxoheptyl)ammo]etoxy]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanín;

[(R)-6-karboxy-N²-[[2-karboxy-l-metyl-2-[[(4-pentylcyklohexyl)karbonyl]amino]etoxy]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanín;

N-[N²-[[2-[[(4-butoxyfenyl)acetyl]amino]-2-karboxy-1 -metyletoxy]karbonyl]-(R)-6-karboxy-L-lysyl]-D-alanín; [R-(R*,R*)]-N-[(R)-6-karboxy-N²-[[l-[karboxy[(l-oxoheptyl)ammo]metyl]propoxy]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanín; [S(R*,S*)]-N-[(R)-6-karboxy-N²-[[l-[karboxy[(l-oxoheptyl)amino]metyl]propoxy]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanín; metylester N-[6-(metoxykarbonyl)-N-[[[3-oxo-2-(l-oxoheptyl)amino]-3-(fenylmetoxy)propyl]amino]karbonyl]-L-lysyl-D-alanínu;

metylester N-[N²-[[[2-karboxy-2-[(l-oxoheptyl)amino]etyljamino]karbonyl]-6-(metoxykarbonyl)-L-lysyl]-D-alanínu;

N-[6-karboxy-N²-[[[karboxy-2-[( 1 -oxoheptyl)amino]etyl]amino]karbonyl]-N⁶-[( 1,1 -dimetyletoxy)karbonyl]-L-lysyl]-D-alanín;

N-[6-karboxy-N²-[[[2-karboxy-2-[(l-oxoheptyl)amino]ety 1] amino] karbonyl] -L-ly syl]-D-alanin;

[S-(R*,S*)]-N-[(R)-6-karboxy-N²-[[[2-karboxy-l-metyl-2-[(l-oxoheptyl)amino]etyl]amino]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanín alebo [R-(R*,R*)]-N-[(R)-6-karboxy-N²-[[[2-karboxy-1 -metyl-2-[(l-oxoheptyl)amino]etyl]amino]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanín.

Predmetom vynálezu je tiež:

spôsob prípravy močoviny alebo definovaného uretánu, podstata ktorého spočíva v tom, že sa zlúčenina všeobecného vzorca (III)

kde R¹, R², R³ a X majú význam definovaný v nároku 1, a Yje chlór, keď X je kyslík alebo Y je imidazolyl, keď X je NH, nechá reagovať so zlúčeninou všeobecného vzorca (IV)

kde R^a, R^b, R^c a R⁴ majú význam definovaný v nároku 1, za vzniku zlúčeniny podľa nároku 1; a spôsob prípravy močoviny alebo definovaného uretánu, podstata ktorého spočíva v tom, že sa zlúčenina všeobecné-

kde R¹, R², R³ a X majú význam definovaný v nároku 1, nechá reagovať so zlúčeninou všeobecného vzorca (VI)

H

kde R“, R^b, R^c a R⁴ majú význam definovaný v nároku 1, a

Y je chlór, keď X je kyslík, alebo Y je imidazolyl, keď X je

SK 281120 Β6

NH, za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1

Ďalej je predmetom vynálezu tiež farmaceutický prípravok vhodný na indukciu endogénnej produkcie rastových faktorov IL-6 a CSF²⁵, ktoré regulujú produkciu neutrofilov v kostnej dreni cicavcov, podstata ktorého spočíva v tom, že obsahuje vhodný farmaceutický nosič a účinné množstvo močoviny alebo definovaného uretánu.

Uretány a močoviny typu 1, ktoré sú subjektom predloženého vynálezu, sú konštruované konvergentnou syntézou opísanou ďalej.

Schéma I

(Y ^a odštiepiteľné skupine;

R skupiny a X eko sú opísané vo vzorci (I))

Fragmenty na ľavej strane (X=O, alkohol 2b, alebo X=NH, amín 2c) a na pravej strene (amín 3), nesúce vhodné chrániace skupiny (príklady obvykle používaných amínchrániacich skupín sú uvedené v práci T. Greena, „Protecting Groups in Organic Synthesis“, J. Wiley and Sons, 1981, str. 218 - 287) na viacerých funkčných skupinách, sa pripravia oddelene. Zlúčenina 2 sa najprv nechá reagovať s aktivovaným karbonylovým ekvivalentom, YC (=O)Y, ako je fosgén; trifosgén, adukt, fosgén/pyridín, trichlórmetylchlórformiát alebo l,ľ-karbonyldiimidazol, obvykle pri 0 °C a výsledný medziprodukt 2y sa kopuluje s 3 za vzniku uretánu la (X=O) alebo močoviny lb (X=NH). Alternatívne sa amín 3 najprv nechá reagovať s YC(=O)Y a výsledný medziprodukt sa kopuluje s 2 za vzniku la alebo lb. Ak sú použité, odstránia sa chrániace skupiny za štandardných podmienok za vzniku zlúčenín typu 1 s nemaskovanými funkčnými skupinami.

Fragmenty na ľavej strane: Na syntézu fragmentu 2a na ľavej strane sa selektívna N-acylácia aminoalkoholov 5 uskutoční použitím vhodného acylačného činidla 4 za bázických podmienok. Ak to nie je možné, pripraví sa požadované acylačné činidlo zo zodpovedajúcej kyseliny 4a, ktorá naopak môže byť pripravená oxidáciou 6 alebo oxidačnou degradáciou 2c-1 konvenčnými metódami.

Zlúčeniny 2c (2a, kde R₂ = CO₂H) sa prevedú na ester 2e alebo amid 2f za kyslých podmienok, použitím vhodného alkoholu (ROH) alebo amínu (RNH₂). Alternatívne sa 2C esterifikuje použitím alkylačného činidla RY za bázických podmienok.

Schéma III o CO,H

P o c°^2R· t i-m-----ζ©_ΝΗ-^γ-ο“

1. (Ϊ-Ο)ϋ³ (Z=0 alebo NH 11 (»-«)

R=H(ak je Z=NH), slkylskupina alebo chránená skupina)

COgR“ n . -----.,<A_niíOn p Y = Cl, Br, I alebo iná odštiepiteľná skupina

Alkoholy 2c s rôznymi R³ alkylovými rozvetveniami sa pripravia podľa schémy IV. Alkohol 2j sa maskuje vhodnou chrániacou skupinou (zatiaľ čo NH zostáva voľný, je chránený ako cyklický Ν,Ο-acetal spolu s OH, alebo je blokovaný separátnou amín chrániacou skupinou) a ester 8 sa redukuje na aldehyd 9 v jednom stupni (Gamer a Park, J. Org. Che., 1957, 52, 2361) alebo v dvoch stupňoch cez redukciu na alkohol a reoxidáciu použitím konvenčných metód. Prídavok vhodných organokovových činidiel R³M k aldehydu poskytne 10 ako jediný diastereomér alebo zmes dvoch diastereomérov, ak východiskový materiál 2j je neracemický.

Odstránenie chrániacej skupiny primárneho alkoholu (a NH, ak je blokovaný) pre zisk 11 s nasledujúcou selektívnou oxidáciou (podľa Skarzewského a spol., Tetrahedron Lett., 1990, 31, 2177) nasledované štandardnou oxidáciou výsledného aldehydu (podľa Mhltrettera a spol., J. Amer. Chem. Soc., 1950, 73, 2424) poskytne 2c. Alternatívne, sekundárny alkohol v 10 je chránený a primárny alkohol (a NH, ak je blokovaný) vo výslednom 12 je pozbavený chrániacej skupiny selektívne za získania 13. Použitím obvyklých techník sa tento posledný uvedený oxiduje na 14, ktorý sa prevedie na 2c. Funkčné skupiny primárneho a sekundárneho alkoholu v 11 sú tiež postupne chránené za vzniku 12 (W=H). Transformácia z 2j na 2c zahrnuje inverziu konfigurácie na uhlíku aifa na karboxylovú skupinu, transpozíciou karboxylovej a alkoholovej skupiny a zavedením R³ skupiny v beta polohe, s chiralitou. Diastereoméry 10, 12 alebo 13 môžu byť oddelené chromatografiou. 2j R konfigurácie v polohe alfa môže poskytnúť 2c diastereoméry S,RR (alfa, beta) a S,S (alfa, beta) konfigurácie a 2j S konfigurácie môže poskytnúť 2c diastereoméry R,R (alfa, beta) a R, S (alfa, beta) konfigurácie.

Schéma II

Schéma IV ⁰ I ⁰ ľ é -©Y . .Z_r“ -----«Ά,,Λγ-· ± Iŕ hŕ

T - C I ,Br .OCOR, r', r*, sŕ, x:

podľa vzorca I

’í [alebo SOClg) t

SK 281120 Β6 (M = Li, MgX alebo iný organoalkyl R, R-neekvivalent. OH chrániace skupiny W=H alebo N chr. sk. alebo R', W=N, O-alkylidén ketal alebo acetal.)

Alternatívne môže byť 11 alebo 12 pripravený z 5j podľa schémy V. Amín je úplne blokovaný dvomi chrániacimi skupinami alebo cyklickou chrániacou skupinou kvôli získaniu 15. Konverzia 15 na 16 na 17 na 19 je rovnaká reakčná sekvencia, ako je opisaná pre 8 na 9 na 10 na 12. Aminové chrániace skupiny v 17 alebo 19 sa odstránia za vzniku 18 alebo 20, naposledy uvedená zlúčenina sa acyluje na 11 alebo 12.

Schéma V

(W,W' =H, rovnaké alebo rozdielne N chr. skupiny alebo spoločne jedna cyklická chr. skupina, alebo R', W=N, O-alkylén, ketal alebo acetal).

Na syntézu ľavostranného fragmentu 2b sa acyláciou amínu 21 za bázických podmienok získa 22. Primárny amid sa preskupí na amín 2b (podľa Loudona a spol., J. Org. Chem., 1984, 49, 4272 Wakiho s spol., Synthesis, 1981, 53, 266; alebo Kosera a spol., J. Org. Chem., 1988,53,5158).

Schéma VI

Zlúčeniny 2g (2b, kde R²=CO₂H) sa prevedú na ester 2h alebo amid 2i (uvedené v Schéme VII) za kyslých podmienok, použitím vhodného alkoholu (ROH) alebo amínu (RNH₂). Alterantívne, amín 2g je chránený ako uretán ako je BOC alebo CBZ; kyselina je prevedená na ester alebo amid za bázických podmienok a chrániaca skupina sa odstráni a ziska sa 2h alebo 2i.

Schéma VII

2I(Z-HH)

2h (Z=O) (Z=KH) (Z=O alebo NH, R=H (ak je Z=NH), alkylskupina alebo chrániaca skupina)

Amíny 2g s rôznymi R³ alkylovými rozvetveniami sa pripravia podľa schémy VIII. Alkohol 10 sa získa podľa schémy IV alebo redukciou vhodnej kyseliny 2c s nasledujúcim chránením vzniknutého primárneho alkoholu 11. Zlúčenina 10 sa potom prevedie konvenčnými metódami na azid 24 cez medziprodukt 23. Azidová skupina sa redukuje na amín (25) katalytickou hydrogenizáciou, a tento sa maskuje na 26. Alterantívne, štandardná oxidácia 10 poskytne 27. Redukčná aminácia ketónu vhodným amínom (W'NH₂) poskytne 28, ktorý sa naopak prevedie na 26 (W = alkyl, W” = alkoxykarbonyl) ďalšou ochranou ako karbamát alebo na 26 (W = alkoxykarbonyl, W=H) deprotekciou (na 25) a reprotekciou. Demaskovanie primárneho alkoholu v 26 (a amidového NH, ak je blokovaný) so získaním 29, nasledované oxidáciou poskytne 30, ako v schéme IV pre konverziu 13 na 14. Amínové chrániace skupiny(a) sa odstránia(i) a získa sa 2g. Diastereoméry z 10 alebo 28 môžu byť oddelené chromatografiou v jednom z medzistupňov (28,26 alebo 29).

(G = Ots, Oms, Otf, halogén alebo éter odštepujúca skupina,· W,W=H, N chr. skúp., W=N chr. skúp, odlišná od W)

Alternatívne, 26 môže byť pripravený zo 17 podľa., schémy IX. Konverzia 17 na 31 na 32 na 33 na 34 alebo 17 . na 35 na 36 na 34 je rovnaká reakčná sekvencia, ako sú o*. písané predtým pre 10 na 23 na 24 na 25 na 26 alebo 10 ná^ 27 na 28 na 26. Tento acyláciou poskytne 26.

Schéma IX

(W=N chrániaca skupina odlišná od W, W')

Pravostranné fragmenty: Fragment 3 sa pripraví kopuláciou kyseliny (alebo chránenej kyseliny) 38 s vhodným amínom 39 s nasledujúcou selektívnou deprotekciou medziproduktu 40.

Schéma X «*

SK 281120 Β6 (W=N, chr. skúp.: R=H, karboxychr. skúp, alebo aktivačná skúp.)

Kyseliny 38 alebo amidy 40 sa pripravia podľa Kolodziejczyka a spol. (Int. J. Pept. Prot. Res., 1992, 39, 382 a uvedené odkazy), Jurgense (Tetrahedron Lett., 1992 33, 4727 a uvedené odkazy), Williamsa (J. Org. Chem., 1992, 33,4727 a uvedené odkazy), Hashimota (Tetrahedron Lett., 1982, 23, 693 a uvedené odkazy) alebo podľa schémy XI. Glutámová kyselina (41, chirálna alebo racemická) je chránená, za štandardných podmienok, pre prechod na 42, 42 kondenzuje s formaldehydom za vzniku 43. Posledný uvedený sa redukuje na aldehyd 44 postupom prebiehajúcim v jednej nádobe. Kondenzácia Witting-Homer-Emmonsovho typu aldehydu s činidlom typu 45 (pripravené podľa Schmidta a spol., Synthesis, 1984, 53) poskytne 46. Reakcia laktónu s vhodným amínom, 39 (ak nie je dostupný, pripraví sa podľa metód zo „Synthesis of Optically Active alfa-Amino Acids“, R. M. Williams, Ed., Pergamen Press, 1989 a uvedené odkazy) so stratou formaldehydu poskytne 47. Katalytická hydrogenizácia dvojitej väzby poskytne 40. Ak sa ako východiskový materiál použije chirálny 41 rozdelia sa diastereoméry 40 frakčnou kryštalizáciou alebo chromatografiou. Pomery diastereomérov, ktoré boli získané, závisia od voľby chrániacich skupín, hydrogenizačného katalyzátora a reakčných podmienok (Knowles, et. al., J. Amer. Chem. Soc., 99, 5947 (1977); Ojima a Suzuki, Tetrahedron Lett., 21, 1239 (1980)). Takto 4L S konfigurácie poskytne diastereoméry 40 nesúce S,S a S,R konfiguráciu na A₂pm a 41 R konfigurácie môže poskytnúť diastereoméry 40 nesúce R,S a R,R konfiguráciu na A₂pm.

Schéma XI

Λα/

Reakcie sa uskutočňujú v rozpúšťadle vhodnom pre reaktanty a získané materiály a vhodnom pre uskutočňovanú transformáciu. Odborníkom v odbore organickej chémie bude zrejmé, že rôzne funkčné skupiny prítomné na molekule musia byť konzistentné s predpokladanými chemickými transformáciami. Často je nevyhnutné zvážiť, čo sa týka stupňa syntézy, chrániacej skupiny, ak sú žiaduce a podmienok ich odstránenia. Substituenty na východiskových materiáloch môžu byť nekompatibilné s niektorými reakčnými podmienkami. Obmedzenie na substituenty, ktoré sú kompatibilné s reakčnými podmienkami bude zrejmé odborníkom v odbore.

Farmaceutický prijateľné soli zahrnujú ako kovové (anorganické soli) tak aj organické soli; ich zoznam je uvedený v Remington's Pharmaceutical Sciences, 17. vyd. str. 1418 (1985). Odborníkom v odbore je zrejmé, že vhodná forma soli sa volí podľa fyzikálnej a chemickej stability, tekutosti, hygroskopickosti a rozpustnosti. Výhodné soli podľa vynálezu na citované účely zahrnujú draselné, sodné, vápenaté, horečnaté a amónne soli.

Niektoré zlúčeniny z predtým uvedených schém majú centrá asymetrie. Predložený vynález zahrnuje všetky stereoizoméry zlúčenín, bez obsahu iných stereoizomérov alebo s ďalšími stereoizomérmi v akomkoľvek pomere a zahrnuje tak, napríklad, racemické zmesi enantiomérov ako aj diastereoméme zmesi izomérov.

Nové zlúčeniny podľa vynálezu sú vhodné pre svoju schopnosť indukovať tvorbu cytokínu a obnovovať kostnú dreň po chemoterapii, ako je ukázané nasledujúcimi testami.

Opis biologických skúšok interleukín 6 (IL-6) skúšky pre štruktúrnu funkčnú analýzu

Testovaná zlúčenina sa rozpustí vo vode a podaná subkutánne v 0,2 ml pre doručenej dávky 0,1 - 10 mg/kg. Menej rozpustné zlúčeniny sa najprv rozpustia v 100 % etanole a potom sa uvedú do vhodnej koncentrácie vo vode. Štyri hodiny po injekcii sa myšiam odoberie krv a získa sa sérum. IL-6 závislá bunková línia 7TD1 sa použije na skúšku sériových riedení séra na obsah IL-6. 7TD1 bunky (L x 10⁴) sa umiestnia do mikrotitračných jamiek a inkubujú sa pri 32 °C 72 rodín so štandardným rekombinantným myšacím IL-6 alebo s riedeniami testovaného séra. Počas posledných 6 hodín sa bunky pulzujú ^!H-Tdr (pci). Bunky sa potom zhromaždia a stanoví sa stupeň proliferácie podľa príjmu ’H-Tdr meraného kvapalinovou scintilačnou spektrometriou. Koncentrácia IL-6 v sére sa vypočíta z kriviek štandardu použitím rekombinantného IL-6 od R and D Systems Inc., a sú tieto koncentrácie uvádzané v jednotkách aktivity, ako je definované výrobcom.

Skúška granulocytovej kolónie stimulujúceho faktora (GCSF)

Uskutoční sa bioskúška na GCSF rovnakým spôsobom ako pre IL-6 s tým rozdielom, že sa použije závislá bunková línia NFS-60 namiesto IL-6 závislej 7TD1 bunkovej línie. Neutralizačná monoklonálna protilátka pre myšací GCSF sa použije na dôkaz špecifity skúšky.

Skúšky kolónie tvoriacich granulocyt-makrofágov (CFUGM)

Myši sa ošetria 150 mg/kg 5-Fu a ošetrenie testovanou zlúčeninou sa začne o 24 hodín neskôr. V nasledujúcich dňoch sa myši usmrtia cervikálnou dislokáciou a femury sa vyberú pri sterilných podmienkach. Femury sa zalejú 1 ml ľadovo studeného média (Iscoveovo, doplneného 20 % FCS, 1 % penicilín-streptomicínu, 1 % glutamínu a 5 x 10 ^sM 2-merkaptoetanolu). Bunky kostnej drene (5 x 10⁵) sa potom umiestnia do 12 x 75 mm tkanivových kultivačných platničiek v 3 ml teplej agarózy (3 %) v Iscoveovom médiu so 100 jednotkami/ml rekombinantného myšacieho GMCSF získaného od Genzyme (Boston, MA). Platničky sa inkubujú 7 dní pri 37 °C v 5 % CO₂. Po 7 dňoch sa spočítajú kolónie s 50 bunkami alebo väčšie, pomocou disekčného mikroskopu.

Sérová skúška kolónie stimulujúceho faktora (CSF)

Skúška, ktorá deteguje aktivitu kolónie stimulujúceho faktora, ale nerozlišuje medzi rôznymi typmi kolónie stimulujúcich faktorov, sa použije na detekciu prítomnosti CSF aktivity v sére myší, injektovanom s testovanými zlúčeninami. Bunky kostnej drene sa pripravia, ako je predtým opísané pre CFU-GM skúšku. Bunky sa potom inkubujú na mäkkom agare s 0,3 % konečnou koncentráciou v sére, odobranom myšiam 4 hodiny po injekcii testovaných zlúčenín. Po 7 dňoch inkubácie pri 37 °C sa stanoví počet kolónie tvoriacich buniek (CFU) na 10⁵ na platničke umies tnených buniek kostnej drene spočítaním kolónií s viac než 50 bunkami pod disekčným mikroskopom. Dáta sa uvádzajú ako CFU/10⁵ bunky kostnej drene.

Skúška cirkulácie neutrofílov

Myši sa ošetria 5-FU (150 mg/kg) a o 24 h neskôr, sa denne ošetrujú testovanou zlúčeninou. Myšiam sa denne odoberá krv retroorbitálnou punktúrou do heparinizovaných kapilárnych skúmaviek. Počty cirkulujúcich WBC sa stanovia Coulter počítačom. Krvné škvrny sa vyfarbia WrightGeimsa roztokom a percentá cirkulujúcich neutrofílov sa stanovia diferenciálnym sčítaním pod mikroskopom.

5-Fluorouracilom (5-FU) indukovaná neutropénia v myšiach

Myši sa ošetria i pomocou 150 mg/kg chemoterapeutického činidla 5-FU, ktoré indukuje ťažkú stratu neutrofilov v periférnej krvi 5 - 6 dní neskôr. 24 hodín po dávke, začne ošetrovanie testovanými zlúčeninami. Účinok testovaných zlúčenín na obnovu neutrofilných progenitorových buniek v kostnej dreni sa stanoví CFU-GM skúškou. Obnovenie cirkulujúcich neutrofílov je nasledované diferenciálnym vyfarbením periférnej krvi.

Delta skúška

Myši sa ošetria jedinou dávkou 5-FU (150 mg/kg). O 24 hodin neskôr sa odstránia bunky kostnej drene a rozdiely na dve časti. Jedna časť sa umiestni priamo na mäkký agar s 15 ng/ml IL-1 a 250 j/ml GM-CSF. Po 14 dňoch sa Stanovi počet kolónií (CFU-1). Druhá časť buniek sa umiestni do kvapalnej kultúry s jedným rastovým faktorom alebo liečivom alebo ich kombináciou kvôli skúške schopnosti týchto činidiel expandovať kolónie tvoriaci bunkový pool. Po 7 dňoch v kvapalnej kultúre sa tieto bunky zhromaždia a umiestia do mäkkého agaru s IL-1 a GM-CSF ako prvá časť. Po 14 dňoch sa stanoví počet kolónii v druhej časti (CFU-2). Pomer alebo delta je vypočítaný ako CFU-2/CFU-l, a tento pomer sa použije na hodnotenie schopnosti rastových faktorov a/alebo liečiv použitých v kvapalnej fáze indukovať rast kolónie tvoriacich buniek (CFU) alebo diferenciácie pre -CFU na CFU.

Výsledky

Testované zlúčeniny schopné indukovať IL-6 produkciu v sére myši počas 4 hodín po jedinej subkutánnej injekcii (tabuľka 1). Podobne je sérová CSF aktivita tiež delegovaná týmito zlúčeninami v myšiach (tabuľka 2). IL-6 skúška sa uskutočňuje v kvantitatívnom spôsobe a je použitá na stanovenie relatívnej potencie. CSF skúška sa uskutočňuje v jedinej sérovej koncentrácii, a preto má kvalitatívny charakter.

Reprezentatívna zlúčenina (príklad 28) tiež indukuje GCSF v sére injektovanej myši (tabuľka 3). Reprezentatívne zlúčeniny (príklady 28, 32 a 84) sú uvádzané ako indukujúce obnovu neutrofílov v 5-FU ošetrenej myši (tabuľka 4). Reprezentatívna zlúčenina (príklad 28) zvyšuje obnovu periférnych krvných neutrofílov, ktorá je predchádzaná zvýšením CFU-GM, neutrofilné prekurzory v kostnej dreni (tabuľka 5) takto ukazujú, že testované zlúčeniny pôsobia v kostnej dreni.

Reprezentatívna zlúčenina (príklad 28) tiež indukuje IL-6 a GCSF produkciu v sére 5-FU ošetrených primátov (tabuľka 6). Reprezentatívna zlúčenina (príklad 32) urýchľuje obnovu neutrofílov primátov ošetrených chemoterapeutickým činidlom cytoxánom (tabuľka 7). Testovanou zlúčeninou ošetrené skupiny obnovujú kontrolné hladiny 7. deň oproti 10. dňu obnovy v skupine len s cytoxánom. Takto testované zlúčeniny indukujú podobné spektrum cy tokínov a zvýšenú obnovu neutrofílov ako primátov tak aj myší.

Reprezentatívna zlúčenina (príklad 28) pôsobí synergicky in vitro s c-kit ligandom hemopoetického rastového faktora (KL) kvôli zvýšeniu rastu progenitorových buniek kostnej drene (tabuľka 8). To ďalej potvrdzuje nároky na to, že tieto zlúčeniny spôsobujú zvýšenie rastu neutrofilných progenitorových buniek v kostnej dreni. Testované zlúčeniny sú tiež aktívne v urýchlení obnovy neutrofílov v 5-FU ošetrenej myši, ak sú podané orálne (tabuľka 9), ako je to ukázané s reprezentatívnymi zlúčeninami (príklady 28 a 32).

Klinický význam

Hodnoty získané v testoch zlúčenín opísaných predtým ukazujú, že tieto sú schopné indukovať endogénnu produkciu rastových faktorov (IL-6 a GCSF), ktoré sú známe ako regulujúce produkciu neutrofílov v kostnej dreni. Tieto zlúčeniny môžu byť použité terapeuticky na obnovu neutrofilov po rakovinovej terapii, radiačnej terapii, transplantácii kostnej drene alebo infekciách. Ďalej môžu byť zlúčeniny použité v kombinácii s rekombinantnými rastovými faktormi kvôli potenciách aktivity rekombinantných molekúl. Tieto zlúčeniny môžu byť tiež použité pri liečbe rakoviny, AIDS, aplastickej anémie, myelodysplatického syndrómu, infekčných chorôb a zvýšení imunitnej odpovede. Na rozdiel od rekombinantných rastových faktorov sú testované zlúčeniny účinné pri orálnom podaní.

Tabuľka 1
Vplyv testovaných zlúčenín na IL-6 produkciu myší
Príklad č. dávka (mg/kg) IL-6 (j/ml)
28	10,0	1718
	1,0	3844 ±482
	0,1	4802 ±804
29	10,0	537
	1,0	203
	0,1	0
30	10,0	-
	1,0	-
	0,1	328±107
31	10,0	-
	1,0	-
	0,1	294 ±24
32	10,0
	1,0	1797 ±284
	0,1	1340 ±134
33	10,0
	1,0	3767 ±457
	0,1	1651±100
34	10,0
	1,0	5063 ±302
	0,1	3610 ±347
80	10,0	3624 ±611
	1,0	1712±168
	0,1	-
81	10,0	199 ±23
	1,0	56 ±19
	0,1	-
82	10,0	3188 ±345
	1,0 0,1	2181 ±92
83	10,0	1818 ±243
	1,0 0,1	332 ±38
84	10,0	2512 ±209
	1,0	' 3865 ±688
	0,1	1963 ±97

SK 281120 Β6

Tabuľka 2

Vplyv testovaných zlúčenín na CSF produkciu myší

Príklad č. dávka (mg/kg)	CFU/100000 buniek kostnej drene
28	10,0	101 ±8
	1,0	95 ±16
	0,1
29	10,0	101 ±46
	1,0	0±0
	0,1
32	10,0	137 ±15
	1,0	154 ±5
	0,1
80	10,0	121 ±9
	1,0	91 ±3
	0,1
81	10,0	101 ±7
	1,0	69 ±14
	0,1
82	10,0	115 ±3
	1,0	108±ll
	0,1
83	10,0	123 ±22
	1,0	204 ±9
	0,1
84	10,0	131 ±10
	1,0	118 ±15
	0,1	129±14

Tabuľka 3

Vplyv testovaných zlúčenín na GCSF produkciu myší

Príklad č.	dávka	GCSF (pg/ml)
28	50,00	1249 ±138
	25,00	3352 ±907
	12,50	1342 ±289
	6,25	644 ±267
	3,12	470 ±59
	1,56	442 ±52
	0,00	0,00 ±0

Myšiam (10/skupina) sa podá jediná subkutánna injekcia testovanej zlúčeniny a odoberie krv o 4 hodiny neskôr. GCSF hladiny v sére sa stanovia bioskúškou použitím GCSF závislej bunkovej línie NFS-60.

Tabuľka 4

Vplyv testovaných zlúčenín na obnovu neutrofilov 5-FU ošetrených myší

Príklad č.	P&'kg	*neutrofily/cu. mm
28	100,00	2613 ±364
	50,0	1716 ±284
	25,0	1804 ±408
	12,50	1314±267
	6,25	758 ±249
	3,12	424±115
	1,56	722 ±199
	0,00	157 ±52
***32	1000	1892 ±293
	100	982±150
	0	144 ±36
****84	100	2194 ±629
	10	570 ±224
	1	427 ±211
	0	54 ±22

* Dáta od 10 myši/skupina 7 deň po ošetrení 150 mg/kg 5-FU. Od 24 h po 5-FU dávke, myší boli ošetrované denne testovanou zlúčeninou v uvedených koncentráciách. Počet neutrofilov pre normálne myši (n=5) je 3236 ±301.

** Myši ošetrené 5-FU a len vehikulom.

*** 8. deň po 5-FU **** n=6 myši/skupina

Tabuľka 5

Vplyv testovaných zlúčenín na kostnú dreň CFU-GM 5-FU ošetrených myší

Príklad č. skupina CFU-GM/femur normálne myši 30184 ±3677 ošetrené 5-FU 805 ±512

5-FU+pr. 28 6055 ±534

Skupiny 5 myši boli ošetrené 5-FU v dávke 150 mg/kg a o 24 hodín neskôr sa začalo s testovanou zlúčeninou denne s. c. pri 0,1 g/kg. Hodnoty sú z 3 dňa po 5-FU ošetrení.

Tabuľka 6

Vplyv testovaných zlúčenín na sérový IL-6 a GCSF 5-FU ošetrených opíc

Príklad č. skupina IL-6 (j/ml) GCSF (pg/ml) normálna opica 0 0 ošetr. 5-FU 0 0

5-FU+ 28 2579 ±318 3962 ±2178

Skupiny 3 opíc cynomolgus sa ošetria 5-FU v dávke 125 mg/kg a počnúc o 24 hodín neskôr sa ošetria testovanou zlúčeninou s. c. 0,05 mg/kg. Hodnoty, ktoré sú uvedené sú zo séra odobraného 4 hodiny po ošetrení testovanou zlúčeninou.

Tabuľka 7

Vplyv testovaných zlúčenín na obnovu neutrofilov cytoxánom ošetrených primátov

Absolútny počet neutrofilov/Cu.mm krvi

Pr.č.	dni po cytoxáne	cytoxán	cytoxán + pr. 32
32	0	3640 ±1058	3554 ±1194
	1	4900 ±971	7849 ±1592
	2	2689 ±156	4679 ±867
	3	1935 ±126	1080 ±264
	4	1442 ±344	370 ±171
	5	856 ±295	455 ±208
	6	1009 ±292	518 ±218
	7	852 ±301	1304 ±1046
	8	542 ±233	1596 ±1000
	9	441 ±194	2041 ±423*
	10	1244 ±509	3506±1130
	11	2053 ±1002	4576 ±673
	12	1885 ±678	3761 ±1394
	13	3502 ±2297	3751 ±1278
	14	3816 ±1674	3106 ±520

Skupiny 4 opíc cynomolgus sa ošetria 1 deň a 0 deň cytoxánom v dávke 60 mg/kg. 24 hodín po druhej dávke sa jedna skupina ošetrí denne s. c. 50 pg/kg testovanej zlúčenine a druhá len vehikulom (vodou).

* p < 0,05 oproti cytoxánu, kontrola len Študentovým testom.

SK 281120 Β6

Tabuľka 8

Testované zlúčeniny pôsobia synergický s c-kit ligandom (KL) v expanzii progenitorových buniek kostnej drene in vitro

	kultúra in vitro	násobok
Príklad č.		zvýšenia v CFU
28	médium samé	0
	test, zlúčenina	1,3
	KL KL + test, zlúčenina	66 158

Bunky kostnej drene 5-FU ošetrených myší sa použijú na obohatenie skorých progenitorových buniek. Bunky sa rozdelia na dve čisti, ako je opísané v „delta skúške“. Násobok zvýšenia určuje meranie účinku 7 deň in vitro inkubácie buniek s médiom pre tkanivové kultúry plus testovaná zlúčenina a/alebo rastový faktor KL na bunky tvoriace kolónie (CFU). Počet CFLI sa potom porovnáva s tvorbou kolónií z čerstvej kostnej drene, ktoré neboli inkubované in vitro, aby sa stanovil násobok zvýšenia. Testovaná zlúčenina sa použije in vitro pri 0,5pg/ml.

Tabuľka 9

Účinok orálneho dávkovania testovanej zlúčeniny na obnovu neutrofilov 5-FU ošetrenej myši

Príkladč. dávka (mg/kg) neutrofily/cu.mm

28	0	178 ±64
	10	1391 ±350
	1	765 ±209
	0,1	81 ±35
*32	10	1844 ±814

547 ±232

67 ±22

Skupiny 5 myší sa ošetria 150 mg/kg 5-FU. O deň neskôr sa začne s denným orálnym dávkovaním a pokračuje sa počas 10 dní. Uvedené údaje sú zo 6 dňa po ošetrení, 'deň 7. po 5-FU.

Ak sa zlúčeniny používajú na uvedené ciele, môžu byť kombinované s jedným farmaceutický prijateľným nosičom, napríklad, rozpúšťadlami, riedidlami a podobne a môžu byť podávané orálne vo forme tabliet, kapsúl, dispergovateľných práškov, granúl alebo suspenzií, obsahujúcich napríklad od asi 0,05 do 5 % suspendačného činidla, sirupov, obsahujúcich napríklad od asi 10 do 50 % cukru a elixírov, obsahujúcich, napríklad od asi 20 do 50 % etanolu a podobne, alebo parenterálne vo forme sterilných injikovateľných roztokov alebo suspenzií, obsahujúcich od asi 0,05 do 5 % suspendačného činidla v izotonickom médiu. Takéto farmaceutické prípravky môžu obsahovať od, napríklad 0,05 do asi 90 % aktívnej zložky v kombinácii s nosičom, obvyklejšie medzi asi 5 % a 60 % hmotn.

Účinná dávka aktívnej zložky, ktorá je použitá, bude závisieť od určitej použitej zlúčeniny, spôsobu podania a ťažkosti liečeného stavu. Jednako len sa získajú bezpečné výsledky pri podaní zlúčenín podľa vynálezu v dennej dávke od asi 15pg do asi 100 pg/kg telesnej hmotnosti živočícha, výhodne sa podávajú v rozdelených dávkach dva až štyrikrát denne, alebo vo forme s udržovaným uvoľňovaním. Pre väčšinu cicavcov je celková denná dávka od asi 1 do 50 pg, výhodne od asi 1 do 20 pg. Dávkové formy vhodné pre vnútorné podanie obsahujú od asi 5 pg do 25 pg aktívnej zlúčeniny v tesnej zmesi s pevným alebo kvapalným nosičom. Tento dávkový režim môže byť upravený pre poskyt nutie optimálnej terapeutickej odpovede. Napríklad niektoré delené dávky môžu byť podávané denne alebo dávka môže byť zodpovedajúcim spôsobom znížená, ako je indikované podľa terapeutickej situácie.

Tieto aktívne zlúčeniny môžu byť podávané orálne ako aj intravenózne, intramuskuláme alebo subkutánne. Pevné nosiče zahrnujú škrob, laktózu, fosfát vápenatý, mikrokryštalickú celulózu, sacharózu a kaolín, zatiaľ čo kvapalné nosiče zahrnujú sterilnú vodu, polyetylénglykoly, neiónové povrchovo aktívne látky a jedlé oleje, ako je kukuričný, podzemnicový a sezamový olej, podľa vhodnosti pre charakter aktívnej zložky a určitú formu požadovaného podania. Výhodne môžu byť použité prísady bežne používané pri príprave farmaceutických prípravkov, ako sú aromatizujúce činidlá, farbiace činidlá, chrániace činidlá a antioxidanty, napríklad E, kyselina askorbová, BHT a BHA.

Preferované farmaceutické prípravky z hľadiska ľahkosti prípravy a podania sú pevné kompozície, výhodne tablety a tvrdo plnené alebo kvapalinou plnené kapsuly. Orálne podanie zlúčenín je preferované.

Tieto aktívne zlúčeniny môžu byť tiež podávané parenterálne alebo intraperitoneálne. Roztoky alebo suspenzie týchto aktívnych zlúčenín ako voľných báz alebo farmakologicky prijateľných solí môžu byť pripravené vo vode vhodným zmiešaním s povrchovo aktívnou látkou, ako je hydroxypropylcelulóza. Disperzie môžu tiež byť pripravené v glycerole, kvapalných polyetylénglykoloch a ich zmesiach v olejoch. Pri obvyklých podmienkach skladovania a použitia obsahujú tieto prípravky ochranné látky na zabránenie rastu mikroorganizmov.

Farmaceutické formy vhodné pre injekčné použitie zahrnujú sterilné vodné roztoky alebo disperzie a sterilné prášky na prípravu sterilných injekčných roztokov alebo disperzií. Vo všetkých prípadoch musí byť forma sterilná a musí byť kvapalná a umožňovať ľahkú manipuláciu so striekačkou. Musí byť stabilná za podmienok výroby a skladovania a musí byť chránená voči kontaminujúcemu pôsobeniu mikroorganizmov, ako sú baktérie a plesne. Nosič môže byť rozpúšťadlo alebo dispergačné médium, obsahujúce napríklad vodu, etanol, polyol (napr. glycerol, propylénglykol a kvapalné polyetylénglykoly), ich vhodné zmesi a rastlinné oleje.

Skratky:

ÍL: interleukín

CSF: faktor, stimulujúci kolónie (G-granulocytov)-, M(makrofágov)- a GM(granulocytov-makrofágov)- CSF.

Ala: alanín

A₂pm: 2,6-diaminopimelová kyselina

Lys: lyzín Ser: serín Thr: treonín BOC: terc, butoxykarbonyl BOP: benzotriazolyloxytris(dimetylamino)fosfónium-hexafluorofosfát

CBZ: karbobenzyloxy TFA: kyselina trifluóroctová MS: molekulové sitá

TEA: trietylamín DMAP: dimetylaminopyridín TFA: kyselina trifluóroctová G(granulocyty)-, M(makrofágy)- a GM(granulocyty-makrofágy)-CSF

Zlúčeniny podľa vynálezu a ich príprava môžu byť lepšie pochopené z nasledujúcich príkladov, tieto však nie sú myslené v žiadnom ohľade ako obmedzujúce.

V nasledujúcich príkladoch, ak nie je uvedené inak, sa produkty separujú rýchlou chromatografiou na silikagéli 60 (230 - 400 mesh). Čistota produktov sa stanoví pomocou TLC na silikagéli GF (250 mm). Teploty topenia boli získané na Mel- Temp aparáte a sú nekorigované (všetky teploty v °C). Ak nie je uvedené inak, 1H NMR (300 MHz) spektra sa získajú z deuterochloroformových roztokov (1 % vnútorný štandard, Me₄Si; kopulačné konštanty sú uvádzané v Hz jednotkách). Reakcie, vyžadujúce bezvodé podmienky sú uskutočňované pod atmosférou argónu použitím rozpúšťadiel v uzáverom zatvorených fľaštičkách. Organické roztoky sú sušené nad síranom horečnatým alebo síranom sodným a rozpúšťadlá sa odstránia vo vákuu na rotačnej odparke.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklady 1 N-(l-Oxoheptyl)-D-allo-treonín (2c-l)

Roztok n-heptanoylchloridu.(440 ml, 2,83 mmol) v THF (250 ml) sa prikvapká počas 30 minút do studenej (-5 až 0 °C), intenzívne miešanej zmesi D-allo-Thr (300 mg, 2,51 mmol) a 2N vod. NaOH (3,5 ml, 7,0 mekv.) v THF (4,0 ml). Výsledná zmes sa mieša 2 h pri tej istej teplote a cez noc pri teplote miestnosti. Prchavé látky sa odstránia a zvyšok sa zriedi vodou a okyslí sa, použije sa kone. HC1. Zmes sa extrahuje EtOAc a spojený organický roztok sa premyje soľankou, suší sa, filtruje a zahustením sa získa surový 2c-1 (420 mg, obsahujúci 10 % prebytok heptanoylového činidla), ktorý státím tuhne.

NMR δ 1,28 (d, J = 6,5, 3H), 4,20 (m, 1H), 4,61 (dd, J = = 3,4, 6,6, 1H), 6,56 (š. d., J = 6,9, 1H); (a²⁶) = -38 ± 2 (CHClj).

Príklad 2

N-(l-Oxoheptyl)-D-treonín (2c-2)

D-Thr (2,50 g, 20,99 mmol) sa konvertuje na. 2c-2 podľa postupu opísaného v príklade 1: NMR δ 1,22 (d, J = = 6,4, 3H), 4,45 (m, 1H), 4,55 (dd, J = 1,9, 8,3, 1H), 6,30 - 6,80 (š s, variabil., 2H), 6,88 (š d, J = 8,3, 1H); MS (HR-EI) m/z 321, 1939 (M vypoč. pre C|8H₂₇NO₄, 321, 1940).

Príklad 3

N-(l-Oxoheptyl)-L-allo-treonín (2c-3)

L-allo-Thr (150 mg, 1,26 mmol) sa prevedie na 2c-3 postupom opísaným v príklade 1: NMR rovnaká ako pre 2c-l.

Príklad 4

N-(l-Oxoheptyl)-L-treonín (2c-4)

L-Thr (300 mg, 2,51 mmol) sa prevedie na 2c-4 postupom podľa príkladu 1: NMR rovnaká ako pre 2c-2.

Príklad 5

N-(l-Oxoheptyl)-D-serín (2c-5)

D-ser (6,00 g, 57,09 mmol) sa prevedie na 2c-5 postupom podľa príkladu 1. Surový produkt sa čistí chromatografiou (2 x 21 cm, kolóna, gradient 1 % CH₃OH a 0,5 % HOAc až 3 % CH₃OH a 2 % HOAc v CH₂C1₂): NMR (CD₃OD) δ 0,90 (t, J = 6,8, 3H), 1,32 (m, 6H), 1,63 (m, 2H), 2,27 (zjavný t, J = 7,5, 2H), 3,81 a 3,89 (AB z ABX, Jab = 11,2, Jax = 4,1, J BX = 5,0, 2H), 4,49 (X z ABX, J 4,2, 4,8, 1H), MS (Cl, NH₄) m/z 218 (M + H), 235 (M+ NH₄), (ap)=-8±l(MeOH).

Príklad 6

N-/trans-(4-pentylcyklohexyl)karbonyl/-D-allo-treonín (2c-6)

Roztok kyseliny trans-4-pentylcyklohexánkarboxylovej (198 mg, 1,0 mmol) v suchom toluéne (1 ml) sa spracuje s oxachloridom (760 mg, 5,9 mmol) pri 0 °C a zmes sa mieša počas 2 h pri tej istej teplote a 1 h pri teplote miestnosti. Prebytok činidla sa odstráni vo vákuu. Roztok surového chloridu kyseliny v suchom acetonitrile (2 ml) sa pridá do zmesi D-allo-Thr (100 mg, 0,85 mmol), 2N vod. NaOH (600 μΐ, 1,20 mekv.) a TEA (85 mg, 0,85 mmol) v THF (1,5 ml), ďalej sa postupuje podľa príkladu 1. Surový produkt 2c-6 sa čistí chromatograficky (1,5 x 18 cm kolóna, 5 % CH₃OH a 0,4 % HOAc v CH₂C12): NMR δ 0,88 (t, J s = 7,3H), 4,15 (m, 1H), 4,54 (m, 1H), 6,49 (d, 1H); MS (Cl, CH₄) m/z 300 (M + H).

Príklad 7

N-/(4-Butoxyfenyl)acetyl/-D-allo-treonín (2c-7)

Kyselina 4-butoxyfenyloctová (288 mg, 1,38 mmol) sa prevedie na chlorid kyseliny a pridá sa do D-allo-Thr (150 mg, 1,26 mmol) a získa sa 2c-9, postupom podľa príkladu 6. Surový produkt sa čistí chromatografiou (2,5 x 18 cm kolóna, gradient 4 % CH₃OH a 0,3 % HOAc v CH₂C1₂): NMR δ 0,96 (t, J = 7,4, 3H), 1,14 (d, J = 5,8, 3H), 1,47 (m, 2H), 1,74 (m, 2H), 3,53 (šs, 2H), 3,91 (t, J = 6,5, 2H), 4,10 (šs, 1H), 4,53 (šs, 1H), 4,90 (šs, > 2H), 6,76 (š d, J = 6,0, 1H), 6,84 (d, J = 8,4, 2H), 7,13 (d, J = 8,4, 2H); MS (HR-EI) m/z 309,1567 (m vyp. pre C₁₆H₂₃NO₅ 309, 1576), (a” ) -26 ±2 (CHClj), 1.1.90 - 94 °C.

Príklad 8

N-(l-Oxoheptyl)-D-allo-treonín, fenylmetylester (2e-l)

Surový 2c-l (420 mg, 1,82 mmol) sa rozpustí v DMF (18 ml) a spracuje sa s pevným NaHCO₃ (321 mg, 3,82 mmol) a výsledná zmes sa mieša 1 h pri 70 - 75 °C. Zmes sa ochladí na 40 - 50 °C a spracuje sa s benzylbromidom (1,13 ml, 9,31 mmol). V miešaní sa pokračuje 2 h pri 40 °C s 18 h pri teplote okolia. Prchavé látky sa odstránia a zvyšok sa vyberie do O/EtOAc. Organická vrstva sa oddelí, premyje sa soľankou, suší sa, filtruje zahustí. Čistením surového produktu sa pomocou chromatografie (2 x 24 cm kolóna) (3 : 1 rexány/EtOAc) získa bieli pevná látka, ktorá je charakterizovaná ako 2e-l (506 mg, 1,57 mmol): NMR δ 0,88 (zjavný t, J = 6,8, 3H), 1,20 -1,40 (m, 6H), 1,55 - 1,74 (m, 2H), 2,27 (zjavný t, J s 7,5, 2H), 3,20 - 3,80 (šs, variabil., 1H), 4,21 (dq, J = 3,3, 6,4, 1H), 4,74 (dd, J = 3,3, 6,8, 1H), 5,20 a 5,23 (AB, J = 12,2, 2H), 6,43 (šd, J = 6,5,1H), 7,36 (m, 5H); MS (HR-EI) m/z 321, 1939 (M vypoč. pre C₁₈H₂₇NO₄ 321, 1940), (a²⁶) -29±2 (CHC13), 1.1. 70 - 73 °C.

Príklad 9

Fenylmetylester N-(l-oxoheptyl)-D-treonínu

Benzyláciou surového 2c-2 metódou podľa príkladu 10 sa získa 2e-2. Surová látka pevná sa čistí chromatografiou (3,0 x 39 cm kolóna, 3 : 1 hexán/EtOAc): NMR δ 0,88 (zjavný t, J s 6,8, 3H), 1,20 (d, J = 6,4, 3H), 1,23 -1,38 (m, 6H), 1,60 - 1,71 (m, 2H), a 1,55 - 1,95 (presah, š. s, variabil. > 1H), 2,28 (zjavný t, J = 7,6, 2H), 4,37 (dq, J = 2,4, 6,4, 1H), 4,67 (dd, J = 2,4, 8,9, 1H), 5,19 a 5,22 (AB, J = 12,3, 2H), 6,21 (šd, J = 9, 1H), 7,35 (m, 5H). MS (HR-EI) m/z 322, 2011 (M + H vypoč. pre CisH^NO^ 322, 2019), (a“) +9 ± 1 (CHC1₃), 1.1. 77 až 80 °C.

SK 281120 Β6

Príklad 10

Fenylmetylester N-(l-oxoheptyl)-L-allo-treonínu (2e-3)

Benzylácia surového 2c-3 postupom podľa príkladu 10 poskytne 2e-3. Surová pevná látka sa čistí chromatografiou (2,5 x 28 cm kolóna, 4 : 1 hexán/EtOAc): NMR rovnaké ako pre 2e-l, MS (HR-EI) m/z 321, 1935 (M vypoč. pre C₁₈H₂₇NO₄, 321, 1940), (a²⁶) +25 ± 2 (CHClj), 1.1. 70 - 73 °C.

Príkladll

Fenylmetylester N-(l-oxoheptyl)-L-treonmu (2e-4)

Benzylácia surového 2c-4 podľa metódy z príkladu 10 poskytne 2e-4. Pevná látka sa čistí chromatografiou (2,0 x 20 cm kolóna, gradient 4 : 1 až 3 : 1 hexán/EtOAc): NMR rovnaké ako pre 2e-2, MS (HR-EI) m/z 321, 1947 (M vypoč. pre C₁₈H₂₇NO₄, 321,1940), (a²⁶) -9 ±2 (CHC1₃), 1.1. 78 - 80 °C.

Príklad 12

Fenylmetylester N-(l-oxoheptyl)-D-serínu (2e-5)

Benzyláciou 2c-5 postupom podľa metódy z príkladu 10 sa získa 2e-5. NMR δ 0,88 (zjavný t, J = 6,8, 3H), 1,20 -1,40 (m, 6H), 1,55 - 1,70 (m, 2H), 2,25 (zjavný t, J s 7,7, 2H), 2,45 a 2,80 (Ss, 1H), 3,92 a 3,99 (AB z ABX, Jab = = 11,2, J_AX = 3,4, J_BX = 4,0, 1H), 4,72 (ddd, zjavný kvitent, Jx-nh = 7,3, Jax s J_BX 3,7, 1H), 5,21 (zjavný s, malé AB postranné signály, 2H), 6,46 (šd, J = 7,1, 1H), 7,36 (m, 5H), MS(HR-EI) m/z 307,1992 (M vypoč. pre C₁₇H₂₅NO₄, 307, 1801), (a“) -11 ±1 (CHClj), 1.1.62 až66 °C.

Príklad 13

Fenylmetylester N-/trans(4-pentylcyklohexyl)karbonyl/-D-allo-treonínu (2e-6)

Benzyláciou 2c-6 podľa metódy z príkladu 10 nasledovanou chromatografiou (2 x 18 cm kolóna, 0,5 % CH₃OH v CH₂C1₂) sa získa 2e-6. NMR δ 0,88 (m, 5H), 1,07 (d, J = = 6,4, 3H), 1,10 - 1,35 (m, 8H), 1,35 - 1,55 (m, 2H), 1,64 (šs, 1,97 (m, 4H), 2,14 (m, 1H), 3,67 (šs, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,73 (dd, J = 3,2 a 6,7, 1H), 5,18 a 5,25 (AB, Jab = = 12,2, 2H), 6,44 (d, J = 6,6, 1H), MS (HR-EI) m/z 389, 2566 (M vypoč. pre C₂₃3H₃₅NO₄, 389, 2566), (a²⁶) - 24 ±2 (CHCI,) 11130 až 34 °C.

Príklad 14

Fenylmetylester N-/(4-butoxyfenyl)acetyl/-D-allo-treonínu (2e-7)

Benzyláciou 2c-7 sa postupom podľa príkladu 10 nasledovanou chromatografiou (2 x 20 cm kolóna, 3 : 1 hexén/EtOAc) získa 2e-7. NMR δ 1,00 (m, 6H) 1,50 (m, 2H), 1,76 (m, 2H), 3,38 (šs, 1H), 3,56 (zjavný s, malé AB postranné signály, 2H), 3,95 (zjavný t, J = 6,5, 2H), 4,15 (m, 1H), 4,72 (dd, J = 7,0 a 3,4,1H), 5,13 a 5,19 (AB, J = 12,2, 2H), 6,38 (šd, J = 6,8, 1H), 6,87 (d, J = 8,7, 2H), 7,15 (d, J = 8,6, 2H), MS (CI, CH|) m/z 400 (M + H), (αθ ) -18 ±2 (CHClj), 1.1. 80 - 83 °C.

Príklad 15

Fenylmetylester (R)-3-(hydroxy-N-(l-oxoheptyl)-D-norvalínu (2e-8)

Benzyláciou 2c-8 z príkladu 51 sa metódou podľa príkladu 10 získa 2e-8.

Príklad 16

Fenylmetylester (S)-3-(hydroxy-N-(l-oxoheptyl)-D-norvalínu (2e-9)

Benzyláciou 2c-9 z príkladu 52 sa metódou podľa príkladu 10 získa 2e-9.

Príklad 17

Fenylmetylester N-/N²-/(l,l-dimetyletoxy)karbonyl/-N⁶-/(fenylmetoxy)karbonyl/-(R)-6-/(fenylmetoxy)karbonyl/-L-lysyl/-D-alanínu (40b)

Zmes 4-nitrofenylmetylesteru N-/N²-/(l,l-dimetyletoxy)karbonyl/-N^<’-/(fenylmetoxy)-karbonyl/-(R)-6-/(metoxy)karbonyl/-L-lysyl/-D-alanínu (40a, Kolodziejczyk a spol., Int. J. Pept. Prot. Res., 1992, 39, 382, 683 mg, 1,06 mmol), 4 molekulové sitá (2,15 g, lámané), THF (10,5 ml) a benzylalkohol (11,0 ml, 105,6 mmol) sa mieša 30 min. a potom sa spracuje s izoprooxidom titaničitým (82 μΐ, 0,27 mekv.). Výsledná zmes sa zahrieva 24 hodín na 85 až 90 °C. Pevné látky sa odfiltrujú cez diatomickú hlinku a rozpúšťadlo sa odstráni. Prebytok benzylalkoholu sa odstráni destiláciou na Kugelrohr-aparáte (približne 1000 μ tlak, 50 - 75 °C). Surový oranžový olej sa chromatograíuje (2,5 x 31 cm kolóna), gradient 4 : 1 - 2 : 1 hexán/EtOAc) a získa sa 40b (633 mg, 88 % výťažok): MMR δ 1,39 (d, J = 7,2, 3H), 1,43 (s, 9H), 1,40 - 1,67 (m, 4H),

1,84 (šs, 2H), 4,07 (šs, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,58 (zjavný kvintet, 1H), 5,0 (šd, 1H), 5,07 - 5,25 (m, 6H), 5,43 (šd, J = = 7,9, 1H), 6,68 (šd, 1H), 7,33 (m), MS (HR-FAB) m/z 676,3232 (M + H, vypoč. pre C^H^NjO,, 676, 3234).

Príklad 18

Fenylmetylester N-/N⁶-(fenylmetoxy)karbonyl/-(R)-6-/(fenylmetoxy)karbonyl/-L-lysyl-D-alanínu (3b)

Roztok 40b (251 mg, 0,37 mmol) v TFA (870 μΐ) sa mieša 30 min. pri 0 °C. TFA sa odstráni a olej sa vyberie do EtOAc a premyje sa nasýteným roztokom NaHCO₃. Sušením a odstránením rozpúšťadla sa získa 3b (225 mg, slabý prebytok), ktorý sa použije v nasledujúcej reakcii bež’ ďalšieho čistenia: NMR δ 1,39 (d, 3H), a 1,20 -1,70 (presahuj, m, 4H), 1,82 (šs, 2H), 3,23 (šs, variabil., 2H), 3,33 (šs, 1H) 4,39 (m, 1H), 4,47 (zjavný kvintet, 1H), 5,03 - 5,13 (m, 6H), 5,27 (šd, 1H), 7,35 (m, 15H), 7,95 (šd, 1H), MS (FAB m/z (M + H), 598 (M + Na).

Príklad 19

Fenylmetylester R-(R^X, R^x)/-N-/N²-//3-oxo-2-/(l-oxohepty l)-amino/-1 -metyl-3 -(fény lmctoxyj-propoxy/karbonyl-N⁶-/(fenylmetoxy)-propoxy/karbonyl/-N⁶-/(fenylmetoxy)karbonyl/-(R)-6-/(fenylmetoxy)karbonyl/-L-lysyl/-D-alanínu (la-1)

Roztok 2e-l (173,6 mg, 0,54 mmol) v THF (spoľahlivo uzatvorené rozpúšťadlo presušené nad 3-MS, 1,45 ml) sa pridá k prebytku studeného fosgénu (1,9 M roztok v toluéne, 1,40 ml, 2,63 mmol), alternatívne s TEA (81 μΐ, 0,58 mmol) počas 15 min. pri 0 °C. Výsledná mliečna zmes sa mieša ďalších 15 min. pri tej istej teplote a 5 h pri teplote miestnosti. Zmes sa odplyní argónom počas 30 min. a mieša sa pod aspirátorovým tlakom počas 30 min. Zvyšok sa spracuje s roztokom čerstvo pripraveného 3b (0,37 mmol) v CH₃CN (presušený ako pre THF, 2,9 ml) a potom TEA (81 μΐ, 0,58 mmol), obidva sa pridajú naraz. Biela kaša sa mieša cez noc pri teplote okolia. Zmes sa vyberie do EtOAc/H₂O a vrstvy sa oddelia. Vodná fáza sa extrahuje dvakrát EtOAc a spojené organické fázy sa premyjú soľankou, sušia sa, filtrujú a odparia. Čistením produktu chromatografiou (3 x 30 cm kolóna, gradient 2:1-1:2 hexán/EtOAc) sa získa biely vosk, ktoiý je identifikovaný ako la-1: NMR δ 0,86 (m, 3H), 1,11 (d, J = 6,4, 3H), 1,20 - 1,40 (m, 8H), 1,42 (d, J = 7,3, 3H), 1,50 - 1,75 (m, 4H, s presahom H₂O signálu), 1,75 - 2,05 (šd, 2H), 2,20 (m, 2H), 4,15 (šs, IH), 4,47 (šs, IH), 4,62 (zjavný kvintet, IH), 4,87 (zjavný šd, J = 6, IH) 5,00 - 5,20 (m, 9H), 5,23 (m, IH), 5,37 (šd, IH), 6,40 (šd, IH), 7,33 (m, 20H), 7,77 (šd, IH), MS (HR-FAB) m/z 923, 4420 (M + H, vypoč. pre C₅|H₆₃N₄0i₂, 923, 4442).

Príklad 20

Fenylmetylester /S-(R^X, S^x)/-N-/N²-//3-oxo-2-/(l-oxoheptyl)amino/-1 -metyl-3 -(fény lmetoxyj-propoxy/karbonyl/-N^s-/(fenylmetoxy)karbonyl/-(R)-6-/(fenylmetoxy)karbonyl/-L-lysyl/-D-alanínu (le-2)

Zlúčenina 2e-2 (20 mg, 0,062 mmol) sa kopuluje s 3b (0,043 mmol) postupom podľa príkladu 19. Čistením surového produktu (1,5 x 21 cm kolóna, 2 : 1 hexán/F, EtOAc) sa získa biely vosk, ktorý je charakterizovaný ako la-2: NMR δ 0,87 (m, 3H), 1,25 a 1,23 -1,38 (presah, d, J = 6,2, 3H a m, 8H), 1,40 (d, J = 7,2, 3H), 1,55 -1,75 (m, 4H, s prahom H₂O signálu), 1,75 - 1,90 (m, 2H), 2,29 (m, 2H), 4,08 (šs, IH), 4,83 (šs, IH), 4,58 (zjavný kvintet, IH), 4,83 (šd, IH), 5,05 - 5,30 (m, 9H), 5,35 (šs, IH), 5,68 (šs, IH), 6,30 (šs, IH), 6,62 (šs, IH), 7,33 (m, 20H), MS (HR-FAB) m/z 923, 4455 (M + H, vypoč. pre C₅|H₆₃N4O₁₂, 923, 4442).

Príklad 21

Fenylmetylester /S-(R^X, R^x)/-N-/N²-//3-oxo-2-/(l-oxoheptyl)amino/-1 -metyl-3-(fenylmetoxy)-propoxy/karbonyl/-N⁶-/(feny lmetoxy)karbonyl/-(R)-6-/(fenyl metoxyjkarbonyl/-L-lysyl/-D-alanínu (la-3)

Zlúčenina 2e-3 (27,4 mg, 0,085 mmol) sa kopuluje s 3b (0,06 mmol) postupom podľa príkladu 19. Čistením surového produktu (1,5 x 16 cm kolóna, 2 : 1 hexán/EtOAc) sa získa biely vosk, ktorý je identifikovaný ako la-3: NMR δ 0,86 (m, 3H), 1,20 -1,35 (m, IH), 1,39 a 1,35 -1,57 (presah, d, J = 7,1, 3H a m, 4H), 1,75 - 1,95 (šs, 2H), 2,10 - 2,30 (m, 2H), 4,08 (šm, IH), 4,37 (šs, IH), 4,57 (zjavný kvintet, J = = 7,3, IH), 4,70 - 5,30 (presah, multiplety, 10H), 5,93 (šd, IH), 6,50 (šd, IH), 6,63 (šd, J = 7, IH), 7,05 (m, IH), 7,34 (m, 20H), MS (HR-FAB) m/z 945, 4281 (M + Na, vypoč. pre C₅₁H₆₂N₄O₁₂Na, 945, 4262).

Príklad 22

Fenylmetylester /R-(R^X, S^x)/-N-/N²-//3-oxo-2-/(l-oxoheptyl)amino/-l-metyl-3-(fenylmetoxy)-propoxy/karbonyl/-N⁶-/(fenylmetoxy)karbonyl/-(R)-6-/(fenylmetoxy)karbonyl/-L-lysyl/-L-alanínu (la-4)

Zlúčenina 2e-4 (27,6 mg, 0,085 mmol) sa kopuluje s 3b (0,06 mmol) postupom podľa príkladu 19. Čistením surového produktu (1,5 x 16 cm kolóna, gradient 2 :1 -1: 1 hexán/EtOAc) sa získa biely vosk, ktorý je identický s la-4: NMR: δ 0,86 (m, 3H), 1,25 a 1,25 - 1,40 (presah, d, J = 6,5 a 3 am, 11 H), 1,42 (d, J = 7,0, 3H), 1,53 - 1,73 (m, 4H, s presahujúcim H₂O signálom), 1,73 - 1,95 (šs, 2H), 2,27 (zjavný t. J = 7,5, 2H), 4,12 (šs, IH), 4,38 (šs, jemná štruktúra, IH), 4,58 (šs, IH), 4,81 (šd, IH), 5,03 - 7,23 (m, 8H), 6,41 (šd, IH), 6,71 (šd, IH), 7,33 (m, 20H), MS (HR-FAB) m/z 945, 4271 (M + Na vypoč. pre C₅₁H₆₂N₄O₁₂Na 945, 4262).

Príklad 23

Fenylmetylester (R)-N-/N²-//3 -oxo-2-/(l-oxoheptyl)amino/-3-(fcnylmctoxy)propoxy/karbonyl/-N⁶-/(fenylmetoxy)karbonyl/-(R)-/(fenylmetoxy)karbonyl/-L-lysyl/-D-alanínu(la-5)

Zlúčenina 2e-5 (99 mg, 0,32 mmol) sa kopuluje s 3b (0,21 mmol) postupom podľa príkladu 19. Čistením surového produktu (2x21 cm kolóna, gradient 2:1-1:1 toluén/éter) sa získa biely vosk, ktorý je charakterizovaný ako la-5: NMR δ 0,88 (m, 3H), 1,20 -1,38 (m, 8H), 1,39 (d, J = = 7,2, 3H), 1,50 -1,66 (m, 4H), 1,85 (šs, 2H), 2,21 (zjavný t, J = 7,6, 2H), 4,09 (šs, IH), 4,23 - 4,51 (m, 3H), 4,58 (zjavný kvintet, J = 7,3, IH), 4,90 (šs, IH), 5,05 - 5,25 (m, 9H), 5,55 (šd, IH), 6,55 (šd, IH), 6,90 (šd, IH), 7,33 (m, 20H), MS (HR-FAB) m/z 909, 4270 (M + H vypoč. pre C₅₀H₆₁N₄O₁₂ 909, 4285).

Príklad 24

Fenylmetylester /R-(R^X, R^x)/-N-/N²-//l-metyl-3-oxo-2-//(4-pentylcyklohexyl)karbonyl/amino/-3-(fenylmetoxy)-propoxy/karbonyl/-N⁶-/(fenylmetoxy)karbonyl/-(R)-6-/(fenylmetoxy)karbonyl/-L-lysyl/-D-alanínu (la-6)

Zlúčenina 2e-6 (33 mg, 0,085 mmol) sa kopuluje s 3b (0,06 mmol) postupom podľa príkladu 19. Čistením surového produktu (1,5 x 17 cm kolóna, 2 : 1 hexán/EtOAc) sa získa biely pevný vosk, ktorý je charakterizovaný ako la-6: NMR δ 0,87 (m, 5H), 1,10 (d, J = 6,6, 3H), 1,10 -1,43 (m, 15H), 1,43 (d, D, J = 7,3, 3H), 1,70 - 2,20 (m, 7H), 4,15 (m, IH), 4,37 (m, IH), 4,64 (m, IH), 4,89 (šd, J = 8,3, IH), 5,03 - 5,30 (m, 9H), 5,37 (šd, IH), 6,43 (šd, IH), 7,33 (m, 20H), 7,34 (šd, IH), MS (HR-FAB) m/z 1013, 4903 (M + + Na, vypoč. pre C₅₆H₇₀N₄Oi₂Na, 1013,4888).

Príklad 25

Fenylmetylester /R-(R*, R^x)/-N-/N²-//2-//(4-butylfenyl)acety 1/am ino/-1 -metyl-3 -oxo-3 -(fény lmetoxy)propoxy/karbonyl/-N⁶-/(fenylmetoxy)karbonyl/-(R)-6-/(fenylmetoxy)karbonyl/-L-lysyl/-D-alanínu

Zlúčenina 2e-7 (34 mg, 0,085 mmol) sa kopuluje s 3b (0,06 mmol) postupom podľa príkladu 19. Čistením surového produktu (1,5 x 14 cm kolóna, 2 : 1 hexán/EtOAc) sa získa biely vosk, ktorý je charakterizovaný ako le-7: NMR δ 0,97 (m, 6H), 1,10 -1,60 (m, presah, d. J = 7,3, 9H), 1,65 - 2,03 (m, 4H), 3,45 (m, 2H), 3,92 (zjavný t, J = 6,5, 2H), 4,15 (m, IH), 4,38 (m, IH), 4,62 (zjavný kvintet, J = 7,3, IH), 4,86 (šd, J = 8,0, IH), 5,05 - 5,25 (m, 9H), 5,42 (šd, J = 7,5, IH), 6,33 (šd, IH), 6,84 (d, J = 8,5, 2H), 7,13 (d, J = = 8,5, 2H), 7,33 (m, 20H), 7,89 (šd, IH), MS (HR-FAB) m/z 1023, 4368 (M + Na, vypoč. pre C₅₆H_MN₄O₁₂Na, 1023,4368).

Príklad 26

Fenylmetylester /R-(R^X, R^x)/-N-/N²-//l-etyl-3-oxo-2-/(l-oxoheptyl)amino/-3-(fenylmetoxy)propoxy/karbonyl/-N⁶-/(fenylmetoxy)karbonyl/-(R)-/(fenylmetoxy)karbonyl/-L-tyzyV-D-alanínu (la-8)

Zlúčenina 2e-8 (99 mg, 0,32 mmol) sa kopuluje s 3b (0,21 mmol) postupom podľa príkladu 19.

Príklad 27 Fenylmetylester /S-(R^X, S^x)/-N-/N²-//l-etyl-3-oxo-2-/(l-oxoheptyl)amino/-3-(fenylmetoxy)propoxy/karbonyl/-N⁶-/(fenylmetoxy)karbonyl/-(R)-6-/(fenylmetoxy)karbonyl/· -L-tyzyl/-D-alanínu (la-9)

Zlúčenina 2e-9 (99 mg, 0,32 mmol) sa kopuluje s 3b (0,21 mmol) postupom podľa príkladu 19.

Príklad 28 /R-(R^X, R^x)/-N-/(R)-6-karboxy-N²-//2-karboxy-1 -metyl-2-/(l-oxoheptyl)amino/etoxy/karbonyV-L-lysyl/-D-alanln (la-11)

Roztok la-1 (140 mg, 0,15 mmol) v EtOAc/EtOH (5 ml:

: 15 ml) sa hydrogenizuje nad Pd(OH)₂ (Pearlmanov kata12

SK 281120 Β6 lyzátor, 20 % na C) použitím Parrovej aparatúry pri začiatočnom tlaku 490 kPa. Po 5,5 hodinách, filtrácii a odparení sa získa bezfarebné sklo. To sa trituruje s éterom a steny banky sa poškriabu a získa sa biely kryštalický prášok. Éterový roztok sa odstráni striekačkou a pevná látka sa premyje dvomi podielmi éteru, suší sa a charakterizuje ako la-11: NMR (CD₃OD) δ 0,89 (m, 3H), 1,22 (d, J = 6,5, 3H),

1,24 - 1,39 (m, 6H), 1,42 (d, J = 7,3, 3H), 1,45 -1,99 (m, 8H), 2,26 (t, J = 7,5, 2H), 3,62 (m, 1H), 4,06 (m, 1H), 4,41 (m, 1H), 4,89 (šs pre OH, NH, jeden skrytý CH signál), 5,14 (m, 1H), MS (HR-FAB) m/z 519, 2671 (M+H vypoč. pre C₂₂H₃₉N₄O_l0, 519,2666).

Príklad 29 /S-(R^X, S^x)/-N-/(R)-6-karboxy-N²-//2-karboxy-l-metyl-2-/(l-oxohepty l)amino/etoxy/karbony F-L-lysy V-D-alanín (1 a-12)

Hydrogenolýzou zlúčeniny la-2 (37,0 mg, 0,04 mmol), postupom podľa príkladu 28 sa získa ls-12: NMR (CD₃OD) δ 0,90 (m, 3H), 1,26 (d, J = 6,3, 3H) 1,2 - 1,38 (m, 6H), l, 40 (d, J = 7,2, 3H), 1,44 - 1,73 (m, 5H), 1,73 - 2,05 (m, 3H), 2,33 (zjavný t. J = 7,3, 2H), 3,92 (m, 1H), 4,16 (šs, 1H), 4,38 (m, 1H), 4,64 (m, 1H), 5,31 (m, 1H); MS (HR-FAB) m/z 519,2671 (M+H vypoč. pre C^H^NfOm, 519,2666).

Príklad 30 /S-(R^X, R^x)/-N-/(R)-6-karboxy-N²-//2-karboxy-l-mety 1-2-/( 1 -oxoheptyl)amino/etoxy/karbonyl/-L-lysyl/-D-alanín (la-13)

Hydrogenolýza zlúčeniny la-3 (22,0 mg, 0,024 mmol) postupom podľa metódy z príkladu 28 poskytne la-13: NMR (CD₃OD) δ 0,91 (m, 3H), 1,1 -1,45 /presah, d (J = 6,5 pri 1,25 d), m a d (J = 7,3, pri 1,39 d), 12H/, 1,47 -1,72 (m, 5H), 1,72 - 2,10 (m, 3H), 2,29 (zjavný t, J = 7,5, 2H), 3,68 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 5,17 (m, 1H); MS (HR-FAB) m/z 519,2651 (M + H vypoč. pre C_HH_3i)N₄O₁₍₎, 519,2666).

Príklad 31 /R-(R^X, S^x)/-N-/(R)-6-karboxy-N²-//2-karboxy-1 -mety 1-2-/(1-oxoheptyl)amino/etoxy/karbonyl/-L-lysyl/-D-alanín (1 a-14)

Hydrogenolýzou zlúčeniny la-4 (36,6 mg, 0,14 mmol) podľa metódy z príkladu 28 sa získa la-14: NMR (CD₃OD) δ 0,90 (m, 3H), 1,22 - 1,36 /presah d (J = 6,2, pri 1,24 d) a m, 12H/, 1,36 - 2,02 (m, 8H), 2,32 (m, 2H), 3,60 - 3,80 (m, 1H), 4,09 (m, 1H), 4,36 (m, 1H), 4,61 (m, 1H), 5,30 (šs, 1H), MS (HR-FAB) m/z 519, 2667 (M + H vypoč. pre C₂₂H₃₉N₄Oio, 519,2666).

Príklad 32 (R)-N-/(R)-6-karboxy-N²-//2-karboxy-2-/(l-oxoheptyl)amino/etoxy/karbonyl/-L-lysyl/-D-alanín (la-15)

Hydrogenolýza zlúčeniny la-5 (247 mg, 0,27 mmol) podľa metódy z príkladu 28 poskytne la-15: NMR (CDjOD) δ 0,90 (m, 3Η), 1,16 - 1,46 /presah, d (J = 7,0, pri 1,40 d) a m, 9Η/, 1,46 - 2,05 (m, 8H), 2,25 (m, 2H), 3,69 (šs, 1H), 4,11 (šs, 1H), 4,36 (m, 3H), 4,63 (šs, 1H), MS (HR-FAB) m/z 505, 2505 (M + H vypoč. pre C₂iH₃₇N₄Oi₀ 505,2509).

Príklad 33

Hydrogenolýzou zlúčeniny la-6 (17 mg, 0,017 mmol) sa postupom podľa metódy z príkladu 28 získa la-16: NMR (CD₃OD) δ 0,90 (m, 5H), 1,10 -1,75 /m, 19H, s presahom

1.23 (d, J = 6,6) a 1,45 (d, J = 7,4)/, 1,75 - 2,05 (m, 8H),

2.24 (m, 1H), 3,60 (m, 1H), 4,07 (m, 1H), 4,44 (m, 1H), 4,90 (m, 1H), pod. OH signálom), 5,14 (m, 1H); MS (HR-FAB) m/z 609, 3099 (M + Na vypoč. pre C₂₇H₄₆N₄Oi₀Na 609,3112).

Príklad 34

N-/N²-//2-//(4-Butoxyfenyl)acetyl/amino/-2-karboxy-1 -metyletoxy/karbony l/-(R)-6-karboxy-L-lysyl/-D-alanín (1 a-1) Hydrogenolýza zlúčeniny la-7 (33 mg, 0,034 mmol) postupom podľa metódy z príkladu 28, poskytne la-17: NMR (CD₃OD) δ 0,99 (m, 3H), 1,10 - 2,05 (m, 16H), 3,55 (m, 2H), 3,65 (m, 1H), 3,96 (m, 2H), 4,07 (m, 1H), 4,38 (m, 1H), 4,90 (m, 1H, pod OH signálom), 5,18 (m, 1H),

6,85 (m, J = 8,6, 2H), 7,22 (m, J = 8,6, 2H), MS (HR-FAB) m/z 597, 2757 (M + H, vypoč. pre C₂₇H₄₁N₄O_n 597, 2772).

Príklad 35 /R-(R^X, R^x)/-N-/(R)-6-karboxy-N²-//l-/karboxyl(l-oxoheptyl)amino/metyl/propoxy/karbony l/-L-lysy l/-D-alanín (1 a-18) Hydrogenolýza zlúčeniny la-8 (247 mg, 0,27 mmol) podľa metódy z príkladu 28 poskytne la-18.

Príklad 36 /S-(R^X, S^x)/-N-/(R)-6-karboxy-N²-//l-/karboxyl(l-oxoheptyl)amino/mety l/propoxy/karbonyl/-L-lysy l/-D-alanín (1 a-19) Hydrogenolýza zlúčeniny la-9 (247 mg, 0,27 mmol) podľa metódy z príkladu 28 poskytne la-19.

Príklad 37

Metylester N-(l-oxo-heptyl)-L-serínu (2j)

Hydrochlorid metylesteru L-serínu sa prevedie na 2j postupom podľa príkladu 1: NMR δ 0,89 (t, J = 6,9, 3H), 1,30 (m, 6H), 1,65 (m, 2H), 2,28 (zjavný t, J = 7,5, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,96 (m, 2H), 4,96 (m, 1H), 6,80 (šs, 1H); MS (HR-E1) m/z 231, 1465 (M vypoč. pre CnH₂iNO₄ 231, 1459); (α²⁶)+22 + 1 (CHCI,).

Príklad 38

Metylester (S)-2,2-dimetyl-3-(l-oxoheptyl)-4-oxazolidínkarboxylovej kyseliny (8a)

Zlúčenina 2j (320 mg, 1,38 mmol) a p-TSA (40 mg) sa* rozpustí v suchom acetóne (2 ml) a 2,2-dimetoxypropáne(2 ml). Výsledný roztok sa zahrieva cez noc pod refluxomr Pridá sa pevný K₂CO₃ a prchavé látky sa odstránia vo vá->^ľ kuu, získa sa zvyšok. Rýchla chromatografia (2x21 cm kolóna, 6 : 1 hexán/EtOAc) zvyšku poskytne 8a ako olej: NMR δ 0,88 (m, 3H), 1,29 (m, 6H), 1,57 (s, 3H), 1,62 (m, 2H), 1,70 (s, 3H), 2,15 (m, 2H), 3,81 (s, 3H)„ 4,20 (m, 2H), 4,46 (m, 1H); (α²⁶) =-47± 1 (CHC1₃).

Príklad 39 (R) -2,2-Dimetyl-3-(l-oxoheptyl)-4-oxazolidínmetanol Roztok 8a (296 mg, 1,09 mmol) v suchom éteri (1 ml) sa spracuje s lítiumborohydridom (2M roztok v THF, 0,55 ml, 1,09 mekv.) pod argónom. Zmes sa mieša 3 h pod refluxom a 18 h pri teplote miestnosti. Výsledná zmes sa zriedi éterom a rozruší metanolom. Prchavé látky sa odstránia a zvyšok sa vyberie do EtOAc/H₂O. Spracovanie poskytne surový alkohol, ktorý sa čistí chromatografiou (2 : 1 hexán/EtOAc): NMR δ 0,88 (m, 3H), 1,30 (m, 6H), 1,54 (s, 3H), 1,62 (s, 3H), 2,35 (m, 2H), 3,30 - 4,40 (komplex m, 6H); MS (HR-E1) m/z 243, 1837 (M vypoč. pre C₁₃H₂₅NO₃ 243,1840), (a²⁶) = -5 ±1 (CHClj).

Príklad 40 (S) -2,2-Dimetyl-3-(l-oxoheptyl)-4-oxazolidín-karboxaldehyd (9a)

Roztok oxalylchloridu (105 μί, 1,23 mmol) v CH₂C1₂ (275 ml) sa ochladí na -60 °C. Roztok DMSO (192 μί) v

CH₂C1₂ (0,55 ml) sa pridá počas 5 min. a výsledná mliečna zmes sa mieša 15 min. pri -60 °C. Do zmesi sa pridá alkohol počas 5 min. (alkohol z príkladu 39 -133 mg, 0,55 mmol) v CH₂C1₂ (0,55 ml)). Kúpeľ sa nechá ohriať na -20 °C (20 min) a číry roztok sa mieša 20 min. pri -20 °C. Pridá sa trietylamín (0,77 ml) a voda (3,4 ml) a zmes sa mieša 5 min. pri teplote okolia. Spracovanie s CH₂C1₂ poskytne surový olej, ktorý sa čistí chromatografiou (1,5 x 20 cm, 3 : 1 spolu) kvôli získaniu 9a: NMR 5 (m, 3H), 1,30 (m, 6Η), 1,60 (s, 3H), 1,60 -1,70 (m, 2H), 1,70 (s, 3H), 2 - 2,40 (m, 2H), 4,00 - 4,30 (m, 3H), 9,65 (d, J s 1,1 H).

Príklad 41 (4S)-a[-Etyl-2,2-dimetyl-3-(l-oxoheptyl)-4-oxazolidínmetanol (10a)

Roztok 9a (108 mg, 0,44 mmol) v éteri (1 ml) sa prikvapká do studeného (5 °C) roztoku EtMgBr (3 M v éteri, 0,36 ml). Studený kúpeľ sa odstráni, pridá sa kryštalický jód do zmesi a v miešaní sa pokračuje 1,5 h pri teplote miestnosti. Výsledná zmes sa zriedi EtOAc a premyje sa nasýteným vodným NH₄C1 roztokom. Vodná fáza sa reextrahuje a spojený organický roztok sa suší a odparením sa získa surový výťažok 10a: NMR δ 0,88 (m, 3H), 1,05 (m, 3H), 1,30 (m, 6H), 1,45 (m, 2H), 1,57 (s, 3H), 1,50 -1,75 (m, 5H), 2,10 - 2,60 (m, 2H), 3,5 - 4,50 (m, 4H); MS (EI) m/z 271 (M).

Príklad 42

R-(R^X, S^x) a S-(R^X, R*)-N-/2-hydroxy-l-(hydroxymetyl)butyl-heptánamid

Surový 10a (107 mg, 0,39 mmol) sa rozpustí v studenom TFA (0,38 ml), obsahujúcom vodu (« 1 %) a roztok sa mieša 45 min. pri 0 °C. Prchavé látky sa odstránia a zvyšok sa vyberie do EtOAv a premyje sa nasýteným NaHCO₃ a soľankou. Po sušení a odstránení rozpúšťadla sa izoluje 11a (2 : 1 zmes diastereoizomérov) chromatogarfiou (1,5 x N 18 cm, 2 % MeOH v CH₂C1₂): NMR 0,85 - 1,07 (m, 6H), 1,30 (m, 6H), 2,23 (m, 2H), 3,65 - 4,05 (m, 4H), 6,20 a 6,40 (dva široké d, 2 : 1 pomer, 1H); MS (HR-E1) m/z 231, 1887 (M vypoč. pre C,₂H₂₅NO₃ 231,1940).

Príklad 43 /S-(R^X, R^x)/-N-/l-///(l,l-dimetyletyl)difenylsilyl/oxy/metyl/-2-hydroxybutyl/hepténamid (10c)

Zmes 11a (1,0 mmol), terc, butyldifcnylsilylchloridu (1,2 mmol), TEA (1,2 mol) a DMAP (0,04 mmol) v CH₂C1₂ (1,5 ml) sa mieša 20 h pri teplote miestnosti podľa S. K. Chaudharya a O. Hemandeza (Tetrahedron Lett., 1979, 99). Výsledná zmes sa rozdelí medzi CH₂C1₂ a vodu. Vrstvy sa oddelia a organická fáza sa premyje nasýteným vodným roztokom NH₄C1 a suší sa. Odstránením rozpúšťadla sa získa zmes ktorá sa čistí chromatografiou. Menej polárny produkt je identifikovaný ako 10c.

Príklad 44 /R-(R^X, S^x)/-N-/1-///) 1,1 -dimetyletyl)difenylsilyl/oxy/metyl/-2-hydroxybutyl/heptánamid (1 Od)

Polámejší izomér izolovaný v príklade 43 je charakterizovaný ako lOd.

Príklad 45 /S-(R^X, R^x)/-N-/1 -///(1,1 -dimetyletyl)difenylsilyl/oxy/mety l/-2-(fenylmetoxy)buty 1-heptánamid (12c)

Roztok 10c (1 mmol) v DMF (0,60 ml) a BnBr (0,96 ml, 8 mmol) sa spracuje s n-Bu₄N⁺ľ (37 mg, 0,1 mmol). Disperzia NaH (60 % v oleji, 1,3 mekv.) sa pridá po častiach do roztoku počas 1 h. Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti. Éterové spracovanie poskytne surový olej, ktorý sa čistí chromatografiou. Hlavný produkt je charakterizovaný ako 12c.

Príklad 46 /R-(R^X, S^x)/-N-/1 -///(1,1 -dimetyletyl)difenylsilyl/oxy/mety l/-2-(fenylmetoxy)buty 1-heptánamid (12d)

Zlúčenina 12d sa pripraví z lOd použitím postupu z príkladu 45.

Príklad 47 /S-(R^X, R^x)/-N-(/l-(hydroxymetyl)-2-(fenylmetoxy)butyl/heptánamid (13c)

Zlúčenina 12 c (1 mmol) sa rozpustí v THF (1,1 ml) a spracuje sa s roztokom n-Bu₄N⁺F' (IN v THF, 3,0 ml); (podľa E. J. Coreya a A. Venkateswarla, J. Amer. Chem. Soc., 1972, 94, 6190). Po 40 min. pri teplote miestnosti sa reakcia preruší ľadom a zmes sa rozdelí medzi éter a vodu. Vodná vrstva sa reextrahuje éterom a spojené organické vrstvy sa premyjú soľankou, sušia sa a rozpúšťadlo sa odstráni, čím sa získa 13c, ktorá sa čisti chromatografiou.

Príklad 48

R-(R^X, S^x)/-N-/l-(Hydroxymetyl)-2-(fenylmetoxy)butyl/heptánamid (13d)

Zlúčenina 13d sa pripraví z 12d postupom podľa spôsobu opísaného v príklade 47.

Príklad 49 N-(l-Oxoheptyl)-3-(fenylmetoxy)-threo-D-norvalín (14c)

Alkohol 13c (1 mmol) v DMF (4 ml) sa spracuje s pyridíniumdichromátom (3,5 mekv.) (metódou podľa Coreya a Schmodta, Tetrahedron Lett., 1979,399). Po 18 h sa zmes naleje na ľad. Spracovaním s éterom sa získa 14c, ktorý sa čistí chromatografiou.

Príklad 50 Td-(l-Oxoheptyl)-3-(ténylmetoxy)-erythro-D-norvalín(14d)

Zlúčenina 14d sa pripraví z 13d postupom podľa príkladu 49.

Príklad 51 3-Hydroxy-N-(l-oxoheptyl)-threo-D-norvalín(2c-8)

Roztok 14c v EtOAc/EtOH sa hydrogenizuje postupom podľa príkladu 28. Surový produkt je identifikovaný ako 2c-8 a použitý v príklade 15.

Príklad 52 3-Hydroxy-N-(l-oxoheptyl)-erythro-D-norvalín(2c-9)

Zlúčenina 2c-9 sa pripraví zo 14d postupom podľa príkladu 51. Surový produkt sa použije v príklade 16.

Príklad 53

N²-(l-Oxyheptyl)-D-asparagín (22a)

D-asparagín 21a (4,5 g, 29,9 mmol) sa prevedie na 22a postupom podľa príkladu L Zmes vody a THF sa použije ako rozpúšťadlo a 2N vodný NaOH sa nahradí zmesou trietylamínu a 0,5N NaHCO₃. Surová pevná látka sa čistí rekryštalizáciou z metylalkoholu. éteru. NMR (CD₃OD) δ 0,90 (ζ 3H), 1,61 (m, 2H), 2,23 (t, 2H), 2,75 (m, 2H), 4,71 (dd, 1H); MS (LR-CI) m/z 245 (M+H) vypoč. pre C_hH_2IN₂O₄ 245.

Príklad 54

3-Amino-N-(l-oxoheptyl)-D-alanín(2g-l)

Zlúčenina 22a (221 g, 9,0 mmol) sa pridá do roztoku bis-(trifluóracetoxy)jódbenzénu (5,83 g, 13,57 mmol) v 51 ml Ν,Ν-dimetylformamidu a 41 ml vody. Zmes sa mieša

SK 281120 Β6 min. a spracuje sa s pyridínom (1,46 ml, 18,09 mmol). Výsledný roztok sa mieša 18 h pri teplote miestnosti. Prchavé látky sa odstránia a zvyšok sa zriedi 90 ml vody. Zmes sa premyje 3 x 50 ml éteru. Vodná vrstva sa oddelí a odparí sa. Trituráciou výslednej kvapaliny s éterom sa ziska biela pevná látka, ktorá je charakterizovaná ako 2g-l: NMR (CDjOH) δ 0,61 (t, 3H), 1,35 (m, 2H), 2,05 (t, 2H), 3,0 až

3,2 (m, 2H), 4,40 (m, 11H): MS (HR-FAB) m/z 217,155 (M + H, vypoč. pre C_l0H_2lN₂O₃ 217,1552).

Príklad 55

Monohydrochlorid fenylmetylesteru 3-amino-N-(l-oxoheptyl)-D-alanínu (2h-l)

Acetylchlorid (3,05 ml, 42,87 ml) sa pridá po kvapkách počas 10 min. do ľadového studeného roztoku benzylalkoholu (10, ml, 96,63 mmol). Výsledný roztok sa mieša d’alšíčh 30 min. Ľadový kúpeľ sa potom odstráni a pridá sa zlúčenina 2g-l (1,32 g, 6,12 mmol). Roztok sa mieša cez noc pri teplote miestnosti a prchavé látky sa odstránia Kugelrohr destiláciou. Zvyšok sa trituruje s éterom a potom sa rekryštalizuje z etylalkoholu a získa sa biela pevná látka, ktorá sa identifikuje ako 2h-l: NMR (CDC1₃) δ 0,75 (t, 3H), 1,45 (m, 2H), 2,20 (t, 2H), 3,40 (m, 2H), 4,80 (še, 1H), 5,10 (s, 2H), 7,62 (šs, 1H); MS (HR-FAB) m/z 307, 2017 (M + H vypoč. pre C₁₇H₂₇N₂O₃ 307, 2022).

Príklad 56 /S-(R^X, R^x)/-N-/2-hydroxy-1 -(hydroxymetyl)propyl/heptánamid(llc)

Do roztoku (2e-2) (1,0 g, 3,11 mmol) v éteri za zahriatia sa prikvapká roztok lítiumborohydridu (1,60 ml, 3,2 mmol) v tetrahydrofuráne. Reakčná zmes sa refluxuje 3 hodiny, zriedi sa éterom a pomaly sa spracuje s metanolom až do ukončenia bublania. Prchavé látky sa odstránia a získa sa zvyšok, ktorý sa rozdelí medzi vodu a etylacetát. Organická vrstva sa oddelí, premyje sa soľankou, suší a filtruje. Filtrát sa odparí a získa sa olej, ktorý sa čistí chromatografiou za elúcie 3 : 1 etylacetátom-hexánmi a získa sa 560 mg požadovaného produktu ako olej. NMR δ 1,20 (d, 3H), 1,65 (m, 2H), 2,26 (t, 2H), 4,19 (q, 1H), 6,23 (šd, 1H), MS (Cl) m/z 218 (M + H vypoč. pre C_nH₂₄NO₃ 218).

Príklad 57 /S-(R^X, R^x)/-N-/1-///( 1,1 -Dimetyletyl)dimetylsilyl/oxy/metyl/-2-hydroxypropyl/heptánamid (10c)

Zmes 11c (1,945 g) terc, butyldimetylsilylchloridu (1,4165 g) trietylamínu (951 mg, 1,31 ml) a 4-dimetylaminopyridínu (42,76 mg) v 13 ml metylénchloridu sa mieša pod argónom pri teplote miestnosti 18 h. Reakčná zmes sa zriedi metylénchloridom a pridá sa voda. Organická vrstva sa oddelí, premyje sa vodou, suší sa a odparením sa získa

3,25 g zvyškového oleja, ktorý sa čistí chromatogarfiou za elúcie 1 : 5 etylacetát/hexán a získa sa 2,30 g požadovaného produktu ako olej. NMR δ 0,08 (d, 6H), 0,89 (t, 3H), 0,90 (s, 9H), 1,16 (d, 3H), 1,65 (m, 2H), 2,24 (t, 2H), 3,47 (s, 1H), 3,84 (m, 1H), 3,85 (s, 2H), 4,28 (q, 1H), 6,13 (šd, 1H), MS (FAB) m/z = 332 (M + H vypoč. pre C₁₇H₃₈NO₃Si 332).

Príklad 58 (S)-N-/l-///) 1, l-Dimetyletyl)dimetylsilyl/oxy/metyl/-2-oxopropyl/-heptánamid

Zmes (10c) (2,30 g, 6,94 mmol) a pyridíniumchromátu (10,62 g, 28,2 mmol) v 20 ml Ν,Ν-dimetylformamidu sa mieša pod argónom 18 h. Reakčná zmes sa zriedi 100 ml vody a extrahuje sa etylacetátom (3 x 40 ml). Organická vrstva sa oddelí, premyje sa vodou a soľankou, suší sa a odparením sa získa 1,87 g zvyškovej hnedej kvapaliny. Kvapalina sa čistí chromatografiou použitím 1 : 6 etylacetátu/hexánu a získa sa 997 mg požadovaného produktu ako olej. NMR δ 0,83 (s, 9H), 1,61 (m, 2H), 2,22 (t, 2H), 2,23 (s, 3H), 3,82 (dd, 1H), 4,09 (dd, 1H), 4,57 (m, 1H), 6,42 (šd, 1H), MS (FAB) m/z 330 (M + H vypoč. pre C₁₇H₃₆NO₃Si 330).

Príklad 59 /R-(R^X, S^x)/-N-/l-///(l,l-Dimetyletyl)dimetylsilyl/oxy/metyl/-2-/(fenylmetyl)amino/propyl/heptánamid (28c)

Zmes 27c (960 mg, 2,91 mmol) v 5 ml metylalkoholu, obsahujúceho molekulové sitá sa mieša pri teplote miestnosti 30 min. Za miešania sa pridá kyanidborohydrid sodný (365 mg) a reakčná zmes sa mieša pod argónom 18 h. Reakčná zmes sa filtruje a odparí sa na zvyšok, ktorý sa rozdelí medzi etylacetát a vodný hydrogenuhličitan sodný. Organická vrstva sa oddelí, premyje sa soľankou a suší sa, odparením sa získa 1,224 g zvyškovej žltej kvapaliny. Zvyšok sa čistí chromatograficky použitím 2 : 5 etylacetátu/hexánu a získa sa 561,2 mg požadovaného produktu 28c ako olej. NMR δ 0,84 (s, 9H), 1,09 (d, 3H), 1,61 (m, 2H),

2,20 (t, 2H), 3,08 (m, 1H), 6,22 (šd, 1H), 7,32 (m, 5H); MS (HR-FAB) 421, 3245 (M + H vypoč. pre C₂₄H44N₂O₂Si 421, 3250).

Príklad 60 /R-(R^X, R^x)/-N-///(l,l-dimetyletyl)dimetylsilyl/oxy/metyl/-2-/(fenylmetyl)amino/propyl/-heptánamid (28d)

Ďalšou elúciou chromatografickej kolóny z príkladu 59sa získa 239,4 g požadovaného produktu 28d ako olej, NMR δ 0,84 (s, 9H), 1,18 (d, 3H), 1,61 (m, 2H), 2,18 (U 2H), 2,80 (m, 1H), 6,47 (šd, 1H), 7,31 (m, 5H); MS (HR_r -FAB) m/z 421, 3253 (M + H vypoč. pre C^NjOiSi 421, 3250).

Príklad 61 /R-(R^X, S^x)/-N-/2-Amino-1 -///(1,1 -dimetyletyljdimetylsi-. lyl/oxy/metyl/propyl/-heptánamid (25c)

Zmes 28c (208,6 g, 0,50 mmol) a 104 mg Pd(OH)₂ v 15 ml metylalkoholu sa trepe v Parrovej aparatúre pod tlakom vodíka 18 h. Reakčná zmes sa filtruje cez diatomickú hlinku a zahustením filtrátu sa získa 169 mg požadovaného produktu 25c ako olej. NMR δ 0,84 (s, 9H), 1,05 (d, 3H), 1,60 (m, 2H), 2,10 (t, 2H), 3,31 (m, 1H), 6,47 (šd, 1H).

Príklad 62 /R-(R^X, R^x)/-N-/2-Amino-1 -///(1, l-dimetyetyl)dimetylsilyl/oxy/metyl/propyl/-heptánamid (25 c)

Zlúčenina 25d sa pripraví z 28d postupom použitým na prípravu 25c.

Príklad 63

Fenylmetylester kyseliny /S-(R^X, S^x)/-/3-//(l,l-dimetyletyl)dimety lsi ly 1/oxy/-1 -metyl-2-/( 1 -oxoheptyl)aminopropyl-karbámovej (26c)

Do roztoku 25c (164 mg, 0,496 mmol) v 1 ml metylénchloridu pri 0 °C pod argónom sa pridá trietylamín (201 mg, 276,5 μ1, 1,98 mmol) a potom sa prikvapká benzylchloroformiát (169 mg, 142 μΐ, 0,992 mmol). Reakčná zmes sa nechá ohriať na teplotu miestnosti a potom sa mieša 18 h. Reakčná zmes sa zriedi metylénchloridom a pridá sa voda. Organická vrstva sa oddelí, premyje sa soľankou, suší a zahustením sa získa 230 mg zvyškového svetložltého oleja. Zvyšok sa čistí chromatografiou použitím 1 : 5 etylacetátu/hexánu za vzniku 92 mg požadovaného produktu 26c. NMR δ 0,90 (s, 9H), 1,21 (d, 3H), 1,56 (m, 2H), 2,09

SK 281120 Β6 (t, 2H), 3,69 (2dd, 2H), 3,84 (m, IH), 3,93 (m, IH), 5,07 (q, 2H), 5,17 (d, IH), 6,15 (šd, IH), 7,34 (m, 5H), MS (FAB): m/z 564 (M + H vypoč. pre CyúsNjC^Si 465).

Príklad 64

Fenylmetylester kyseliny /R-(R^X, R^x)/-/3-//(l,l-dimetyletyl)dimetylsilyl/oxy/-l -metyl-2-/( 1 -oxoheptyl)aminopropyl/karbámovej (26d)

Zlúčenina 25 d sa chráni postupom použitým na prípravu 26c a získa sa 26d.

Príklad 65

Fenylmetylester kyseliny /S-(R^X, S*)/-/3-hydroxy-l-metyl-2-/(1 -oxoheptyl)amino/propyl/-karbámovej (29c)

Zlúčenina 26c sa desilyluje postupom podľa príkladu 47 a získa sa 29c.

Príklad 66

Fenylmetylester kyseliny /R-(R^X, R^x)/-/3-hydroxy-l-mefyl-2-/(l-oxoheptyl)amino/propyl/-karbámovej (29d)

Zlúčenina 26d sa desilyluje postupom podľa príkladu 65 a získa sa 29d.

Príklad 67

Kyselina /S-(R^X, S^x)/-2-/(l-oxoheptyl)amino/-3-//(fenylmetoxy)karbonyl/amino/-butánová (30c)

Oxidáciou zlúčeniny 29c postupom podľa príkladu 49 sa získa 30c.

Príklad 68 Kyselina /R-(R^X, R^x)/-2-/(l-oxoheptyl)amino/-3-//(fenylmetoxy)karbonyl/amino/-butánová (30d)

Zlúčenina 29d sa prevedie na 30d postupom podľa príkladu 67.

Príklad 69

Kyselina /R-(R^X, S^x)/-3-amino-2-/(l-oxoheptyl)amino/-butánová (2g-2)

Hydrogenolýzou 30c podľa príkladu 28 sa získa zlúčenina 2g-2.

Príklad 70

Kyselina /R-(R^X, R^x)/-3-amino-2-/(l-oxoheptyl)amino/-butáová (2g-3)

Zlúčenine 30d sa prevedie na 2g-3 postupom podľa príkladu 69.

Príklad 71

Metylester kyseliny /R-(R^X, S^x)/-3-amino-2-/(l-oxoheptyl)amino/-butánovej (2h-2)

Esterifikáciou 2g-2 postupom podľa príkladu 55 pri použití MeOH ako alkoholu s2 získa 2h-2 ako jeho hydrochloridová soľ.

Príklad 72

Metylester kyseliny /R-(R^X, R^x)/-3-amino-2-/(l-oxoheptyl)amino/-butánovej (2h-3)

Zlúčenina 3g-3 sa esterifikuje ako v príklade 71a získa sa jej hydrochloridová soľ.

Príklad 73

Kyselina (S)-5-oxo-3-/(fenylmetoxy)karbonyl/-4-oxazolidínpropánová (43 c)

Zmes 100 g (355 mmol) N-benzyloxykarbonyl-L-Glu (42c) a 213 g paraformaldehydu sa zahrieva pod refluxom v toluéne (1 : 1). Po 4 hodinách sa výsledný roztok ochladí na teplotu miestnosti a extrahuje sa nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (5 x 150 ml). Vodné vrstvy sa spoja, potom sa rozdelia medzi 400 ml etylacetátu a okyslia sa pevným hydrogénsíranom sodným. Vrstvy sa oddelia a organická vrstva sa suší nad síranom horečnatým, potom sa zahustí a získa sa 89,72 g surovej kyseliny ako viskózny žltý olej : NMR δ 7,38 (m, 5H), 5,6 (šs, IH), 5,21 (d, J = = 4,7 Hz, IH), 5,19 (s, 2H), 4,41 (t, J = 6 Hz, IH), 2,6 - 2,1 (m, 4H).

Príklad 74 (S)-5-Oxo-3-/(fenylmetoxy)karbonyl/-4-oxazolidín-propanal (44c)

Roztok 27 g (92,7 mmol) surovej kyseliny (43c) v 200 ml THF sa ochladí na 0 °C a pomocou kvapkacieho lievika sa prikvapká 13 ml (10,7 g, 141 mmol) komplexu boránmetylsulfid. Reakcia sa postupne nechá ohriať na teplotu miestnosti a mieša sa 12 h. Výsledná zmes sa zahustí vo vákuu a získa sa biely sklovitý materiál, ktorý sa vyberie do 500 ml metylénchloridu a spracuje sa s pyridíniumchloroformiátom (61 g, 281 mmol) pri 0 °C za prítomnosti 3-molekulového sita. Zmes sa nechá ohriať na teplotu miestnosti a mieša sa 3 h. Zmes sa sfiltruje cez diatomickú hlinku s éterom (200 ml), potom sa zahusti. Zvyšok sa vyberie do éteru a sfiltruje sa opäť cez diatomickú hlinku s éterom a potom sa zahustí a ziska sa 13,22 surového aldehydu ako svetlozelený olej: NMR δ 9,80 (šs, IH), 7,40 (m, 5H), 5,55 (šs, IH), 5,20 (m, 3H), 4,38 (t, J = = 6,0 Hz, IH), 2,6-2,1 (m, 4H).

Príklad 75 Fenylmetylester kyseliny 4-/4-//( 1,1 -dimetyletoxy)karbonyl/amino/-5-metoxy-5-oxo-3-pentenyl/-5-oxo-3-oxazolidín-karboxylovej (46c)

Do roztoku 15,1 g fosfonátu 45 v 300 ml metylénchloridu sa pri -78 °C pridá po kvapkách 102 ml 0,5M hexametyldisilylamidu draselného v THF. Reakčná zmes sa mieša 10 min. a do enolátovému roztoku sa pridá 18 g surového aldehydu v 30 ml metylénchloridu. Zmes sa mieša 3 h zatiaľ čo sa ohrieva na teplotu miestnosti. Reakčná zmes sa rozloží 100 ml vody a extrahuje sa 2 x 300 ml éteru. Organické extrakty sa spoja a premyjú sa 200 ml vody a 50 ml soľanky. Po usušení nad síranom horečnatým sa redukuje objem. Zvyšok sa chromatografuje použitím premenlivého gradientu hexán/etylacetát. E-izomér (2,4 g) eluuje ako prvý a je nasledovaný 15,4 g požadovaného Z izoméru 46c. NMR δ 1,45 (s, 9H), 2,00 - 2,40 (M, 4H), 3,74 (s, 3H),

4.36 (št, IH), 5,20 (m, 4H), 5,54 (šs, IH), 6,43 (št, IH),

7.37 (m, 5H). IR (neriedený) cm'¹: 3350 (s), 1800 (s), 1740 (s), MS(CI): m/z 466(N + NH4), 410 (M-C4H8)⁺, 349 (M-C4H₈CO₂ + H)⁺, (a“)+6»±L

Príklad 76

Metylester (Z)-N-/'5,6-didehydro-N⁶-/( 1,1 -dimetyletoxy)karbonyl/-6-(metoxykarbonyl)-N²-/(fenylmetoxy)karbonyl/-L-lysyl/-D-alanínu (47c)

Zmes 3,3 g metylesteru D-alanínu a 7,1 g 46c sa zahrieva na 140 °C 10 min, potom sa pridá ďalších 1,6 g metylesteru D-alanínu. V zahrievaní sa pokračuje pri 140 °C počas ďalších 10 min. Po ochladení na teplotu miestnosti sa surový produkt chromatogarfiije na silikagéli pri použití premenlivého gradientu hexán/etylacetát. Čistený produkt (6,7 g) je získaný. Materiál sa kryštalizuje z rexánov-éteru a získa sa 5,8 g požadovaného produktu 47c ako pevná látka. NMR δ 1,43 (s, d, 12H), 1,80-2,10 (m, 2H), 2,23 - 2,36 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 4,15 až 4,27 (m, IH), 4,50 - 4,60 (m, IH), 5,11 (šs, 2H), 5,76 (šs,

SK 281120 Β6

1H), 6,38 (šs, 1H), 6,47 (št, 1H), 6,81 (šs, 1H), 7,34 (m, 5H); ^UC-NMR: 17,82 (-CHCH₃, 24,33 (-CH₂-CH₂), 28,02 (C(CH₃)₃), 30,99 (-CH₂CH=C), 47,94 (-CHCH₃, 52,17 (-OCH₃), 52,29 (-OCH₃), 54,28 (OCCHNH), 66,93 (-CH₂Ar), 80,43 (-OC(CH₃)₃), 126,7 (-HNC=C), 127,86 (uhlík fenylového kruhu), 127,94 (uhlík fenylového kruhu),

128,28 (uhlík fenylového kruhu), 135,98 (uhlík fenylového kruhu), 153,45 (OCONH), 156,21 (OCONH·), 165,13 (-CONH), 165,13 (-CONH-), 171,04 (-OCO₂-), 172,99 (-CO₂-). IR (KBr cm·') 3300 (s), 1720 (s), 1690 (s), 1650 (s), 1510 (s), MS (CI) m/z 522 (MH⁺), 466 (MH-C4H8)⁺, 422 (MH-C4H_s+CO₂)⁺. MS(FAB) m/z 544 (M + Na)⁺, 522 (MH)⁺, 466 (MH-C^s)⁴, elementárna analýza: vypočítané: 57,57 % C, 6,76 % H, 8,06 % zistené 56,98 % C, 6,66 % H, 7,88 % N.

(a“)-7±l,tt 120 až 121 “C.

Príklad 77

Metylester N-/N⁶-/( 1,1 -dimetyletoxy)karbonyl/-(R)-6-(metoxykarbonyl)-N²-/(fenylmetoxy)karbonyl/-L-lysyl/-D-alanínu (40c)

Roztok 8,5 g 47c v 25 ml kyseliny octovej a 250 ml THF sa hydrogenizuje pri 336 kPa vodíka nad 0,5 g (bi -cyklo(2.2.1)hepta-2,5-dién/2S, 3S/bis(difenylfosfmo)bután)ródium(I)pcrchlorátu počas 18 h. Reakčná zmes sa odfiltruje a odparí sa na zvyšok. Zvyšok sa chromatografuje použitím premenného gradientu hexán-etylacetát a získa sa 7,9 g redukovaného produktu ako zvyšok. Viacnásobnou kryštalizáciou sa získa 2,6 g diastereomémeho čistého 40c. NMR (CDClj) δ 1,40 L(d, J = 6 Hz, 3H), 1,43 (s, 9H), 1,60 - l,97(m, 6H), 3,73 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 4,12 - 4,37 (m, 2H), 4,52 - 4,61 (m, 1H), 5,12(šs, 3H), 5,44 - 5,55(šs, 1H), 6,73 (šs, 1H), 7,36 (šs, 5H); ⁿCNMR: δ 18,02(CH-CH₃), 21,12 (CH₂-CH₂-CH₂), 28,23 (-OC(CH₃)₃), 31,87 (-CH₂-CH₂-), 32,29(-CH2CH₂-), 47,99(-CHCH₃), 52,23 (-OCHj), 52,38 (-OCH₃), 52,75 (OCCHN), 54,41 (OCCHN), 67,01 (-OCH₂Ar), 79,97(-OC(CH₃)₃), 127,99 (uhlík fenylového kruhu), 128,09 (uhlík fenylového kruhu), 128,44 (ArCH), 136,13 (ArCC), 155,48 (OCONH), 156,23 (-OCONH), 171,10 (-CONH-), 173,03 (-CO₂-2X),

IR(KBr)(cm ‘): 3340 (s), 1760 (s)a 1680 (s), 1660 (s), 1660 (s), 1520 (s); MS(FAB) m/z 546 (M + Na)⁺, 524 (MH)⁺, 424 (MH-C₄H₈CO₂)⁺, elementárna analýza vypočítané 57,35 % C, 7,12 % H, 8,03 %N zistené 57,23 % C, 7,27 % H, 8,03 % N optická otáčavosť ) -9 ±1,1.1.120 až 121 °C.

Príklad 78

Metylester N-/N⁶-/( 1,1 -dimetyletoxy)karbony l/-R-6-(metoxykarbonyl)-L-lysyl/-D-alanínu (3 c)

Roztok 40c (248 mg 0,47 mmol) v metanole (8 ml) sa hydrogenizuje nad Pd(OH)₂ postupom podľa príkladu 28. Po 3 hodinách filtrácii a oparení sa získa bezfarebné sklo. NMR(CDC1₃) δ 3,50 (m, 1H), 3,80 (s, 6H), 4,30 (m, 1H), 4,55 (m, 1H), 5,15 (d, 1H), 7,85 (šs, 1H).

Príklad 79 N-/N⁶-/l,l-Dimetyletoxy)karbonyl/-6-(metoxykarbonyl)-N²-///3-oxo-2-/(l-oxoheptyl)amino/-3-(fenylmetoxy)propyl/amino/karbonyl/-L-lysyl/-D-alanm (lb-1)

Roztok 30 (94,5 mg, 0,24 mmol) v sušenom THF (3A sito 0,8 ml) sa prikvapká pod argónom do zmesi 1,1'-karbonyldiimidazolu (39,34 mg, 0,24 mmol, sušený nad P₂O₅) v 1,8 ml sušeného THF. Zmes sa mieša 2 h a pridá sa 2h-l (83,3 mg, 0,24 mmol) a TEA (34 μΐ, 0,24 mm). Výsledná zmes sa mieša 18 h pri teplote okolia. Zmes sa zriedi vodou a extrahuje sa etylacetátom. Organická vrstva sa oddelí, premyje sa soľankou, suší sa, filtruje a odparením sa získa zvyšok. Zvyšok sa čistí chromatografiou za elúcie metanolu v chloroforme a získa sa 109,3 mg lb-1 ako špinavo biela pevná látka. NMR δ 0,88 (t, 3H), 2,22 (t, 2H), 3,59 (m, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 4,26 (m, 1H), 4,52 (t, 1H), 4,63 (m, 1H), 5,32 (d, 2H), 5,63 (d, 1H), 7,07 (d, 1H),7,2O (d, 1H); MS (HR-FAB) m/z 722, 3980 (M + H, vypoč. pre CjjHkNAi 722, 3976).

Príklad 80

Metylester N-/6-(metoxykarbonyl)-N²-///3-oxo-2-/l-oxoheptyl(amino/-3-(fenylmetoxy)propyl/amino/karbonyl/-L-lysyl/-D-alanínu (lb-2)

Do 16 mg lb-1 pod argónom pri 0 °C sa pridá 100 μΐ TFA s následným miešaním počas 1 hodiny. Prchavé látky sa odparia a získa sa 11,1 mg lb-2. NMR (CD₃OD) δ 0,80 (t, 3H), 1,30 (d, 3H), 2,15 (ζ 2Η), 3,32 (m, 1H), 3,56 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 3,95 (m, 1H), 4,15 (m, 1H), 4,30 (q, 1H), 4,38 (m, 1H), 5,07 (D, 2H), 7,28 (m, 5H); MS (HR-FAB) m/z 622, 3435 (M + H, vypoč. pre C₃₀H₄₈N₅O₉ 622, 3452).

Príklad 81

Metylester N-/N²-///2-karboxy-2-/( 1 -oxoheptyl)amino/-etyl/amino/karbonyl/-N⁶-/(l,l-dimetyletoxy)karbonyl/-6-(metoxykarbonyl)-L-lysy 1-D-alanínu (lb-3)

Do 70 mg lb-1 v 7 ml metylalkoholu sa pridá 31 mg Pd(OH)₂ na uhlí a reakčná zmes sa hydrogenizuje počas 4 hodín podľa príkladu 28. Reakčná zmes sa sfiltruje cez stípček diatomickej hlinky. Filtrát sa zahustí a získa sa 53₃8 mg lb-3 ako sklo. NMR(CD₃OD) δ 0,80 (t, 3H), 2,15 (t, 2H), 3,32 (m, 1H), 3,56 (m, 1H), 3,60 (s, 6H), 3,95 (m, 1H), 4,15 (m, 1H), 4,30 (q, 1H), 4,38 (m, 1H); MS (HR-FAB) m/z 632, 3493 (M + H vypoč, pre (^Η^Ο,) 632, 3506).

Príklad 82

Metylester N-/N²-///2-karboxy-2-/(l-oxoheptyl)amino/‘ -etyl/amino/karbonyl/-6-(metoxykarbonyl)-L-lysyl/-D-alanínu (lb-4)

Do 40,2 mg lb-3 pod argónom pri 0 °C sa pridá 300 μΐ TFA a potom sa postupuje podľa príkladu 80. Prchavé látky sa odstránia odparením a koncentrát sa súši cez noc. Získa sa 47 mg lb-4. NMR(CD₃OD) δ 0,80 (t, 3H), 1,30 (d, 3H), 2,15 (t, 2H), 3,28 (m, 1H), 3,56 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,95 (m, 1H), 4,13 (m, 1H), 4,31 (q, 1H), 4,43 (m, 1H); MS (HR-FAB) m/z 532, 2972 (M + H, vypoč. pre C₂₃H«N₅O₉ 532,2983).

Príklad 83 N-/6-Karboxy-N²-///karboxy-2-/(l-oxoheptyl)amino/etyl/-amino/karbony l/-N⁶-/( 1,1 -dimety letoxy)karbony l/-L-lysy 1-D-alanín (lb-5)

Do roztoku 135,9 mg lb-1 v 2,7 ml metylalkoholu sa pridá 104 mg uhličitanu draselného a 0,9 ml vody a mieša sa pri teplote miestnosti 20 hodín. Reakčná zmes sa odparí a zvyšok sa rozpustí v 1 ml vody a okyslí sa IN HC1 na pH

2. Reakčná zmes sa 5 min. mieša a extrahuje sa 2 x etylacetátom. Spojene organické extrakty sa premyjú soľankou, sušia sa a odparením sa získa 106 mg zvyšku. Zvyšok sa trituruje s 3 x 5 ml éteru a éter sa dekantuje. Pevný zvyšok sa suší a získa sa 91,7 mg produktu lb-5 ako biela pevná látka. NMR(CD₃OD) δ 0,80 (t, 3H), 2,1 5(t, 2H), 3,32 (m, 1H), 3,56 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,15 (m, 1H), 4,30 (q, 1H), 4,38 (m, 1H); MS (HR-FAB) m/z 604, 3200 (M + H vypoč. preC_2SH₄₆N₅O₁₁604,3194).

Príklad 84 N-/6-Karboxy-N²-///2-karboxy-2-/(l-oxoheptyl)amino/etyl/amino/karbonyl/-L-lysyl/-D-alanín (lb-11)

Do 85,9 mg lb-5 pod argónom sa pridá 500 μΐ TFA a spracuje sa ako v príklade 80. Prchavé látky sa odparia a zvyšok sa trituruje s éterom 3x a éter sa zleje. Sušením zvyšku sa získa 77,9 mg lm-11 ako biela pevná látka. NMR (CD₃OD) δ 0,80 (t, 3H), 2,16 (ζ 2H), 3,22 (šs, 5H), 3,58 (m, 2H), 3,85 (m, 2H), 4,15 (m, 1H), 4,30 (d, 1H), 4,40 (m, 1H), MS (HR-FAB) m/z 526, 2482 (M + H vypoč. pre C₂|H_3SN₅O₉ 526,2489).

Príklad 85 /S-(R^X, S^x)/-N-/N⁶-/(l,l-Dimetyletoxy)karbonyl-N²-///3-metoxy- l-metyl-3-oxo-2-/( 1 -oxoheptyl)amino/propyl/amino/karbonyl/-(R)-6-(metoxykarbonyl)-L-lysyl/-D-alanín(lb-6)

Amín 2h-2 sa kopuluje s amínom 3c postupom opísaným v príklade 79. Močovina sa čistí chromatografiou a je identifikovaná, ako lb-6.

Príklad 86 Metylester /R-(R^X, R^x)/-N-/N⁶-/(l,l-dimetyletoxy)karbonyl/-N²-//3-metoxy-l-metyl-3-oxo-2-/(l-oxoheptyl)amino/propyl/aminokarbonyl/-(R)-6-(metoxykarbonyl)-L-lyzyl-D-alanínu (lb-7)

Amín 2h-3 sa prevedie na močovinu lb-7 podľa príkladu 85. Príklad 87 /S-(R^X, S^x)/-N-/(R)-6-karboxy-N²-///2-karboxy-1 -metyl-2-/(l-oxoheptyl)amino/etyl/amino/karbonyl/-N⁶-/( 1,1 -dimetyletoxy)karbonyl/-L-lysyl/-D = alanín (lb-8)

Hydrolýzou lb-6 po_dľa postupu uvedeného v príklade 83 sa získa lb-8.

Príklad 88 /R-(R^X, R^x)/-N-/(R-6-karboxy-N²-///2-karboxy-l-metyl-2-/(l-oxoheptyl)amino/ety 1/amino/karbony 1/-N⁶-/ (1,1 -dimetyletoxy)karbonyl/-L-lysyl-D-alanín (lb-9)

Hydrolýzou lb-7 podľa príkladu 87 sa získa lb-9.

Príklad 89 /S-(R^X, S^x)/-N-/(R)-karboxy-N²-///2-karboxy-l-mety 1-2-/(1-oxoheptyl)amino/etyl/amino/karbonyl/-L-lysyl-D-alanín (lb-12)

Deblokovaním aminoskupiny v lb-8 s TFA sa postupom podľa príkladu 84 získa lb-12.

Príklad 90 /R-(R^X, R^x)/-N-/(R)-6-karboxy-N²-///2-karboxy-1 -metyl-2-/(l-oxoheptyl)amino/etyl/amino/karbonyl/-L-lysyl/-D-alanín (lb-13)

Zlúčenina lb-9 sa zbaví chrániacej skupiny postupom podľa príkladu 89 a získa sa lb-13.

Claims (6)

1. Močoviny alebo uretány všeobecného vzorca (I)

R¹ predstavuje prípadne substituovanú (C_rC2o)alkyl-, (C₃-C₆)cykloalkyl- alebo (Cv-Cujaralkylskupinu;

R² predstavuje prípadne chránenú karboxyskupinu;

R³ predstavuje (C|-C₆)alkylskupinu;

R⁴ predstavuje vodík alebo amino-chrániacu skupinu;

R^a predstavuje (C_rC₆)alkylskupinu;

R^b predstavuje prípadne chránenú karboxyskupinu;

R^c predstavuje prípadne chránenú karboxyskupinu; a

X predstavuje kyslík alebo dusík; pričom prípadné substituenty uvedených (CrC₂₀)alkyl-, (C₃-C₆)cykloalkyl- a (Cj-Cujaralkylskupín zahrnujú halogén-, hydroxy-, (CpCJalkyl-, (C_rC₆)alkoxy-, amino-, mono- alebo di(C|-C₆)alkylamino-, karboxy-, formyl- a (C i-C₆)alkoxy)karbonylskupinu.

2. Uretán podľa nároku 1, všeobecného vzorca (II) kde

R¹ predstavuje n-hexylskupinu alebo 4-n-pentylcyklohexylskupinu;

R^a a R³ sú nezávisle vybrané z vodíka alebo metylskupiny, R², R^b a R^c predstavujú karboxyskupiny,

X predstavuje kyslík a

R⁴ predstavuje vodík.

3. Močovina alebo uretán podľa nároku 1, ktorým je [S-(R*,S*)]-N-[(R)-6-karboxy-N²-[[2-karboxy-l-metyl-2-[(l-oxoheptyl)amino]etoxy]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanín; [S-(R*,R*)]-N-[(R)-6-karboxy-N²-[[2-karboxy-l-metyl-2- [(1 -oxohepty l)amino] etoxy] karbonyl] -L-lysy l]-D-alanín; [R-(R*,S*)]-N-[(R)-6-karboxy-N²-[[2-karboxy-l-metyl-2-[(l-oxoheptyl)amino]etoxy]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanín; (R)-N-[(R)-6-karboxy-N²-[[2-karboxy-2-[(l-oxoheptyl)-amino] etoxy] karbonyl] -L-ly sy 1] -D-alanín; [(R)-6-karboxy-N²-[[2-karboxy-l-metyl-2-[[(4-pentyl-cyklohexy ljkarbonyl] amino] etoxy] karbonyl] -L-lysy 1]-D-alanín; N-[N²-[[2-[[(4-butoxyfenyl)acetyl]amino]-2-karboxy-l-metyletoxy]karbonyl]-(R)-6-karboxy-L-lysyl]-D-alanín; [R-(R*,R*)]-N-[(R)-6-karboxy-N²-[[l-[karboxy[(l-oxoheptyl)amino]metyl]propoxy]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanín; [S(R*,S*)]-N-[(R)-6-karboxy-N²-[[l-[karboxy[(l-oxoheptyl)amino]metyl]propoxy]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanín; metylester N-[6-(metoxykarbonyl)-N-[[[3-oxo-2-(l-oxoheptyl)amino]-3-(fenylmetoxy)propyl]amino]karbonyl]-L-lysyl-D-alanínu;

metylester N-[N²-[[[2-karboxy-2-[(l-oxoheptyl)amino]etyl]amino]karbonyl]-6-(metoxykarbonyl)-L-lysyl]-D-alanínu; N-[6-karboxy-N²-[[[karboxy-2-[(l-oxoheptyl)amino]etyl]-amino]karbonyl]-N⁶-[( 1,1 -dimetyletoxy)karbonyl]-L-lysyl-D-alanín;

N-[6-karboxy-N²-[[[2-karboxy-2-[(l-oxoheptyl)amino]etyl]amino]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanín;

[S-(R*,S*)]-N-[(R)-6-karboxy-N²-[[[2-karboxy-l-metyl-2-[(1 -oxoheptyl)amino]etyl]amino]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanín alebo [R-(R*,R*)]-N-[(R)-6-karboxy-N²-[[[2-karboxy-l-metyl-2-[(l-oxoheptyl)amino]etyl]amino]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanín.

4. Spôsob prípravy močoviny alebo uretánu podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sa zlúčenina všeobecného vzorca (III) zlúčeninou všeobecného vzorca

NHR⁴ (IV), kde R¹, R², R³ a X majú význam definovaný v nároku 1 a Y je chlór, keď X je kyslík, alebo Y je imidazolyl, keď X je NH, nechá reagovať so (IV)

-J kde R¹, R^b, R^c a R⁴ majú význam definovaný v nároku 1, za vzniku zlúčeniny podľa nároku 1.

5. Spôsob prípravy močoviny alebo uretánu podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sa zlúčenina všeobecného vzorca (V) (V) kde R¹, R², R³ a X majú význam definovaný v nároku 1, nechá reagovať so zlúčeninou všeobecného vzorca (VI) kde R*, R^b, R^c a R⁴ majú význam definovaný v nároku 1 a Y je chlór, keď X je kyslík, alebo Y je imidazolyl, keď X je NH, za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1.

6. Farmaceutický prípravok vhodný na indukciu endogénnej produkcie rastových faktorov IL-6 a CSF²⁵, ktoré regulujú produkciu neutrofilov v kostnej dreni cicavcov, vyznačujúci sa tým, že obsahuje vhodný farmaceutický nosič a účinné množstvo močoviny alebo uretánu podľa nároku 1.