NO311223B1

NO311223B1 - Uretaner og ureaer som induserer cytokin-produksjon, fremgangsmåte for fremstilling derav samt farmasöytisk preparatinneholdende slik forbindelse

Info

Publication number: NO311223B1
Application number: NO19941786A
Authority: NO
Inventors: Semiramis Ayral-Kaloustian; Steven R Schow; Mila T Du; Jr James J Gibbons
Original assignee: American Cyanamid Co
Priority date: 1993-05-12
Filing date: 1994-05-11
Publication date: 2001-10-29
Also published as: US5312831A; HU9401444D0; AU6304394A; KR100296543B1; US5658945A; NO941786D0; US5602275A; ZA943266B; CZ98194A3; CN1100413A; HUT67038A; SK49194A3; CN1094943C; DK0652228T3; ES2094004T3; SK281120B6; US5545662A; TW380129B; PH30182A; CZ290445B6

Description

Foreliggende oppfinnelse vedører uretaner og ureaer som induserer cytokin-poduksjon, fremgangsmåte for fremstilling derav samt farmasøytisk preparat inneholdende slik forbindelse.

Cytokiner, så som G-CSF, M-CSF, GM-CSF (kolonistimulerende faktorer) og IL-1, IL-3, IL-6 (interleukiner), kan stimulere hematopoese ved sykdommer forbundet med benmargsvikt, og således fremskynde bedring etter nøyrotropi som beskrevet av Metcalf, D., Science, 529 (1991) og H. G. Klingemann og H. J. Deeg, CIPS, 14,243 (1989), så vel som av G. Mortsyn og A. W. Burgess, Cancer Research 48, 5624 (1988). Deler av naturlig bakterie-cellevegg og syntetiske lipopeptider som etterligner celleveggen, er angitt å ha immunostimulerende egenskaper, som beskrevet av J. Freund, Adv. Tubercl. Res., 1, 130

(1956); F. Ellouz, A. Adam, R. Ciorbaru og E. Lederer, Biochem. Biophys. Res. Commun., 59, 1317 (1974); V. St. Georgiev, Medicinal Res. Rev, 11, 81 (1991) og I. Azuma, Int. J. Immuno-pharmac, 14, 487 (1992). Nærmere bestemt er det identifisert visse forbindelser som synes å fremkalle dannelse av CSF og som kan hjelpe benmarg-gjenoppbygning etter myelo-suppresjon forårsaket av kjemoterapi eller stråling. Disse omfatter forbindelser så som pimelautid (RP-40639) [som beskrevet av F. Floch'h, J. Bouchaudon, C. Fizames, A. Zerial, G. Dutruc-Rosset og G. H. Werner, CIPS, 763 (1984) og i patent FR-2.482.961

(1981)]; muroctasin (Daiichi Seiyaku Co.) [som beskrevet av I. Azuma, Int. J. Immuno-pharmac, 14, 487 (1992); R. Nakajima, Y. Yshida, K. Akahane, M. Sekiguchi og Y. Osada, Arzneim.-Forsch., 41, 60 (1991); Scrip, 22, 1655 (1991); og patent EP-135.788

(1985)]; og FK-156 og FK-565 (Fujisawa) [som beskrevet av S. Izumi, K. Nakahara, T. Gotoh, S. Hashimoto, T. Kino, M. Okuhara, H. Aoki og H. Imanaka, J. Antibiotics, 566

(1983); K. Nakamura, K. Nakahara, H. Aoki, Agric. Biol. Chem., 48, 2579 (1984); H. Keiji, H. Takeno, S. Okada, O. Nakguchi, Y. Kitaura og M. Hashimoto, Tetrahedron Lett., 23, 693 (1982) og US-patenter 4.349.466 og 4.666.890].

US-patent 4.666.890 beskriver et syntetisk tripeptid som er angitt å ha aktivitet som en immunomodulator, for anvendelse som et antitumor-middel, heller enn som hjelpestoff ved kjemoterapi. De beskrevne cellevegg-komponentene og deres syntetiske analoger er alle peptider som omfatter en D-glutaminsyre- (D-Glu) enhet T-bundet til enten lysin (Lys) eller diaminopimelinsyre (A2pm), med ytterligere peptid-bindinger eller fett-acylgrupper som flankerer de to endene.

De nye uretanene og urinstoffene beskrevet ved foreliggende oppfinnelse er de første eksempler på ikke-peptid-analoger av bakterielle cellevegg-komponenter og mangel på D-Glu-enhet som er vanlig innen teknikkens stand. Dessuten, mens det innen teknikkens stand ikke er beskrevet forgrening av peptid-skj el ertet, omfatter foreliggende oppfinnelse forgrenede analoger som opprettholder den ønskede aktivitet når de syntetiseres i en spesifikk konfigurasjon, og en metode for syntese av disse chirale, forgrenede analogene.

Oppfinnelsen angår uretaner og ureaer med formelen:

hvor:

Ri er valgt fra gruppen bestående av hydrogen, usubstituert (Ci-2o)alkyl, substituert cyklo-alkyl, substituert benzyl,

Ra og R3 er uavhengig valgt fra hydrogen, usubstituert (Ci-6)alkyl;

R2, Rb og Rc er uavhengig valgt fra karboksy, metoksykarbonyl, fenyloksykarbonyl, benzyloksykarbonyl;

X er oksygen eller NH;

R4 er H eller en aminobeskyttende gruppe valgt fra t-butyloksykarbonyl og benzyloksykarbonyl;

hvor substituentene i det tidligere nevnte substituerte cykloalkyl og benzyl er grupper valgt fra gruppen bestående av Ci-C6alkyl og Ci-C6alkoksy;

og farmasøytisk akseptable salter derav.

Detaljer vedrørende de forskjellige definisjoner angitt ovenfor og spesifikke eksempler som omfattes av disse definisjonene, er angitt nedenfor: (a) (Ci-2o)alkylgruppen kan være en lineær eller forgrenet lavere alkylgruppe med fra 1

til 20 karbonatomer så som metyl, etyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sek-butyl,

tert-butyl, pentyl, neopentyl, isopentyl, heksyl, isoheksyl osv.

(b) Cykloalkylgruppen kan være en cykloalkylgruppe med fra 3 til 6 karbonatomer, så

som cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl eller cykloheksyl.

Substituentene på de ovennevnte gruppene (a) - (b) kan være en Ci-C6-alkylgruppe, så som metyl, etyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sek-butyl eller tert-butyl; en O-Cealkoksy-gruppe, så som metoksy, etoksy, propoksy, isopropoksy, butoksy, isobutoksy, sek-butoksy eller tert-butoksy.

Som anvendt her betyr "lavere alkyl" en Ci-6alkylgruppe.

En beskyttelsesgruppe for beskyttet karboksy er metyl og benzyl, så som de som er angitt i T. Greene, "Protecting Groups in Organic Synthesis", J. Wiley and Sons, 1981.

En beskyttelsesgruppe for beskyttet amino som rutinemessig anvendes av fagfolk på området peptid- og aminosyrekjemi, er benzyloksykarbonyl og t-butyloksykarbonyl som angitt i T. Greene, supra, s. 218-287. En egnet beskyttelsesgruppe er valgt slik at betingelsene for fjerning av den er kompatible med andre strukturelle trekk ved forbin-delsen.

På bakgrunn av den ovenfor generiske beskrivelse, er foretrukne forbindelser med formel I de hvor: Ri er valgt fra gruppen bestående av en usubstituert (Ci-2o)alkylgruppe, en substituert cykloalkylgruppe og en substituert benzylgruppe;

Ra og R3 er uavhengig valgt fra hydrogen og usubstituert (Ci-6)alkyl;

R2, Rb og Rc er uavhengig valgt fra karboksy eller metyloksykarbonyl, fenyloksykarbonyl og benzyloksykarbonyl;

X er oksygen eller NH og

R4 er H eller en amino-beskyttelsesgruppe valgt fra t-butyloksykarbonyl og benzyloksykarbonyl.

Videre er de mest foretrukne forbindelser med formel I ifølge foreliggende oppfinnelse, de med formel I hvor: Ri er valgt fra gruppen bestående av (C4-i4)alkyl, cykloalkyl, (C2-8)alkyl-substituert cykloalkyl, benzyl og (Ci-6)alkyl- eller alkoksyfenylmetyl;

Ra og R3 er uavhengig valgt fra hydrogen og (Ci-6)alkyl;

R2, Rb og Rc er uavhengig valgt fra karboksy eller metoksykarbonyl, fenyloksykarbonyl og benzyloksykarbonyl;

X er oksygen eller NH og

Forbindelser med formel I som er mest spesielt foretrukket, er de hvor:

Ri er valgt fra gruppen bestående av n-heksyl og 4-n-pentyl-cykloheksyl;

Ra og R3 uavhengig er valgt fra hydrogen eller metyl;

R2, Rb og Rc er karboksy;

X er oksygen eller nitrogen; og

R4 er H.

Spesielt foretrukne er forbindelsene med formel I med D-allo-treonin-konfigurasjon

som følger:

hvor R3 er metyl, og Ri og R2 er som angitt ovenfor.

Også spesielt foretrukket er de forbindelser med den følgende stereokjemi i diaminopimeylyl-alanin-delen av molekylet:

hvor Ra er metyl, og Rb, Rc og R4 er som angitt ovenfor.

Når det gjelder stereokjemien, er de følgende forbindelser med formel I mest spesielt foretrukket:

hvor R3 og Ra er metyl, X er oksygen, Rb, Rc, Ri, R2 og R4 er som ovenfor angitt.

Foreliggende oppfinnelse vedrører videre som angitt farmasøytisk preparat som er nyttig for å fremkalle produksjon av vekst-faktorer (IL-6 og CSF 25) som regulerer nøytrofil produksjon i benmarg hos et pattedyr, kjennetegnet ved at det omfatter en egnet farmasøy-tisk bærer og en effektiv mengde av en forbindelse ifølge krav 1.

Det er videre beskrevet fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge krav 1, kjennetegnet ved at en forbindelse med formelen:

hvor Ri, R2, R3 og X er som angitt i krav 1, omsettes med en aktivert karbonyl-ekvivalent med formelen: hvor Y er en utgående gruppe, hvilket gir en forbindelse med formelen: hvor Ri, R2, R3 og X er som angitt i krav 1, som videre omsettes med en forbindelse med formelen:

hvor Ra, Rb, Rc og R4 er som angitt i krav 1, hvilket gir en forbindelse ifølge krav 1.

Foreliggende oppfinnelse vedrører videre fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge krav 1, kjennetegnet ved at en forbindelse med formelen:

hvor Ra, Rb, Rc og R4 er som angitt i krav 1, omsettes med en aktivert karbonyl-ekvivalent med formelen: hvor Y er en utgående gruppe, hvilket gir en forbindelse med formelen: hvor Ra, Rb, Rc og R4 er som angitt i krav 1, som videre omsettes med en forbindelse med formelen:

hvor Ri, R2, R3 og X er som angitt i krav 1, hvilket gir en forbindelse ifølge krav 1.

Uretanene og urinstoffene ifølge oppfinnelsen konstrueres følgelig ved konvergent syntese, som angitt nedenfor:

Venstre- (X=0, alkohol 2h, eller X = NH, amin 2c) og høyre-(amin 2) fragmentene, som har passende beskyttelsesgrupper (eksempler på vanlig anvendte amin-beskyttelsesgrupper finnes i T. Greene, "Protecting Groups in Organic Synthesis", J. Wiley and Sons, 1981,

s. 218-287) på flere funksjonelle grupper, fremstilles separat. Forbindelse 2 reageres først

med en aktivert karbonylekvivalent, YC(=0)Y, så som fosgen, trifosgen, et fosgen/pyridin-addukt, triklormetyl-klorformiat eller l,r-karbonyldiimidazol, vanligvis ved 0°C, og det resulterende mellomprodukt 2y kobles med 2, hvilket gir henholdsvis uretanet la (X=0) eller urinstoffet lh (X=NH). Alternativt reageres først aminet 2 med YC(=0)Y, og det resulterende mellomprodukt kobles med 2, hvilket gir la eller lh. Når det er aktuelt, fjernes beskyttelsesgruppene under standard betingelser for å oppnå forbindelsene 1 med umaskert funksjonalitet.

Venstre- fragmenter: For syntese av det venstre fragment 2a, oppnås selektiv N-acylering av aminoalkoholene 1 ved anvendelse av et egnet acyleringsmiddel 4 under basiske betingelser. Hvis det ikke er tilgjengelig, fremstilles det ønskede acyleringsmiddel fra den tilsvarende syre åa, som igjen kan fremstilles ved oksydasjon av 6 eller oksydativ nedbrytning av 2c- 1 ved vanlige metoder.

Forbindelsene 2c (2a, hvor R.2 = COOH) omdannes til esteren 2e eller amidet 2f under sure betingelser, under anvendelse av henholdsvis en egnet alkohol (R"OH) eller et amin (R"NH2). Alternativt forestres 2c ved anvendelse av et alkyleringsmiddel R"Y under basiske betingelser.

Alkoholene 2c med forskjellige R3 alkyl-grener fremstilles i henhold til Skjema IV. Alkoholen 2j maskeres med en passende beskyttelsesgruppe (mens NH-gruppen forblir fri, beskyttes som et cyklisk N,0-acetal sammen med OH-gruppen, eller blokkeres med en separat amin-beskyttelses-gruppe), og esteren & reduseres til aldehydet 2 i ett trinn (Garner and Park, J. Org. Chem., 1987, 52, 2361) eller i to trinn ved reduksjon til alkohol og reoksydering, ved anvendelse av Vanlige metoder. Tilsetning av egnede organometalliske reagenser R3M til aldehydet, gir JU som en enkel diastereomer eller en blanding av to diastereomerer, forutsatt at utgangsmaterialet 2j ikke er racemisk. Avblokkering av den primære alkoholen (og NH-gruppen, hvis den er blokkert) for å få 11, fulgt av selektiv oksydasjon (i henhold til Skarzewski et al., Tetrahedron Lett., 1990, 31, 2177), fulgt av standard oksydasjon av det resulterende aldehyd (i henhold til Mehltretter et al., J. Amer. Chem. Soc, 1950, 73, 2424) gir 2c. Alternativt er den sekundære alkohol i IQ beskyttet, og den primære alkohol (og NH-gruppen, hvis blokkert) i den resulterende forbindelse 12 demaskeres selektivt, hvilket gir 13.. Ved konvensjonelle metoder oksyderes sistnevnte til 14. som omdannes til 2c. De primære og sekundære alkohol-funksjoner i 11 beskyttes også sekvensielt, hvilket gir 12 (W = H). Den rene omdannelsen fra 2j til 2c innbefatter inversjon av konfigurasjonen ved karbon-atomet a til karboksylgruppen, ved ombytting av karboksyl- og alkohol-gruppene, og innføring av en R3-gruppe i B-stillingen, med chiralitet. Diastereomerer av IQ, 12 eller 11 kan separeres ved kromatografi. 2j med R-konfigurasjon ved a-stillingen kan således gi 2c diastereomerer med S,R (a,B)- og S,S (a,B)-konfigurasjon og 2j med S-konfigurasjon kan gi 2c-diastereomerer med R,R (a,B)- og R,S (a,B)-konfigurasjon. lternativt kan 11 eller 12 fremstilles fra 5j, i henhold til Skjema V. Aminet blokkeres fullstendig med to beskyttelses-grupper eller en cyklisk beskyttelsesgruppe, for å få Li. Omdannelsen 15. til 16 til 12 til 12 er samme reaksjonssekvens som er beskrevet for & til 2 til IQ til 12 ovenfor. Amin-beskyttelsesgruppene i 1Z eller 12 fjernes for å gi henholdsvis 18 eller 2Q. Sistnevnte acyleres for å oppnå 11 eller 12.

For fremstilling av det venstre fragment 2h gir acylering av aminet 21 under basiske betingelser, 22. Det primære amid omleires til aminet 2h (i henhold til Loudon et al., J. Org. Chem., L284,49, 4272; Waki et al., Synthesis, 1981, 53,266; eller Koser et al., J. Org. Chem.,L2M, 53,5158).

Forbindelser 2q (2h, hvor R2 = COOFF) omdannes til esteren 2h eller amidet 2i (vist i Skjema VII) under sure betingelser, ved anvendelse av henholdsvis en passende alkohol (R"OH) eller amin (R"NH2). Alternativt beskyttes aminet 2g som et uretan så som BOC eller CBZ; syren omdannes til esteren eller amidet under basiske betingelser; og beskyttelsesgruppen fjernes for å få 2h eller 21.

Aminer 2g, med forskjellige R3-alkyl-grener fremstilles i henhold til Skjema VIII. Alkoholen IQ oppnås i henhold til Skjema IV, eller ved reduksjon av en tilgjengelig syre 2c, fulgt av beskyttelse av den resulterende primære alkohol 11. Forbindelse IQ omdannes deretter, ved konvensjonelle metoder, til azidet 24 via mellomproduktet 22. Azid-gruppen reduseres til et amin (25) ved katalytisk hydrogenering, og sistnevnte maskeres for å få 26. Alternativt gir standard oksydering av IQ, 22. Reduktiv aminering av ketonet med et egnet amin (W'"NH2) gir 28., som deretter omdannes til 26 (W"'=alkyl, W"=alkoksykarbonyl) ved ytterligere beskyttelse som et karbamat eller til 26 (W -alkoksykarbonyl, W"-H) ved avbeskyttelse (til 25) og ny beskyttelse. Avmaskering av den primære alkohol i 26 (og amidet NH, hvis det er blokkert) for å få 22, fulgt av oksydering, gir 2Q, som i Skjema IV for omdannelse av 12. til 14. Amin-beskyttelsesgruppen(e) fjernes, hvilket gir 2g. Diastereomerene fra IQ eller 28 kan separeres ved kromatografi ved et av mellomtrinnene (28, 26. eller 22).

Alternativt kan 26 fremstilles fra 12 i henhold til Skjema IX. Omdannelsene 12 til 31 til 32 til 33 til 34, eller 12 til IS til 36 til 34 er de samme reaksjonssekvenser som beskrevet ovenfor for henholdsvis JU til 23 til 24 til 25. til 26, eller JU til 22 til 28. til 26. Amin-beskyttelsesgruppene W og W fjernes for å gi 32. Sistnevnte acyleres for å få 26..

HiTiyre fragmenter: Fragment 3 fremstilles ved kobling av syre (eller beskyttet syre) 38. med et egnet amin 39, fulgt av selektiv avbeskyttelse av mellomproduktet 40.. Syrene 18. eller amidene åQ fremstilles i henhold til Kolodziejczyk et al. (Int. J. Pept. Prot. Res., 1992, 39, 382; og referanser der), Jurgens (Tetrahedron Lett., 1992, 33, 4727; og referanser der); Williams (J. Org. Chem., 1992, 33, 4727; og referanser der), Hashimoto (Tetrahedron Lett., 1982, 23, 693; og referanser der), eller i henhold til Skjema XI. Glutaminsyre (ål, chiral eller racemisk) beskyttes under standard betingelser for å få å2, som deretter kondenseres med formaldehyd for å gi ål. Sistnevnte reduseres til aldehydet 44 ved en ett-kar prosedyre. Wittig-Horner-Emmons type kondensasjon av aldehydet med et reagens av typen åi (fremstilt i henhold til Schmidt et al., Synthesis, 1984, 53) gir å6. Omsetning av laktonet med et egnet amin, 39. (når dette ikke er tilgjengelig, fremstilt i henhold til metodene angitt i "Synthesis of Optically Active a-aminosyrer", R.M. Williams, Ed., Pergamon Press, 1989; og referanser der), med samtidig tap av formaldehyd, gir ål. Katalytisk hydrogenering av dobbeltbindingen gir åQ. Når chiralt ål anvendes som utgangsmateriale, separeres diastereomerene av åQ ved fraksjonert krystallisasjon eller kromatografi. Forholdet mellom diastereomerene som oppnås er avhengig av valg av beskyttelses-grupper, hydrogeneringskatalysator og reaksjonsbetingelser [Knowles et al.,

J. Amer. Chem. Soc, 99, 5947 (1977); Ojima og Suzuki, Tetrahedron Lett., 21, 1239

(1980)]. ål med S-konfigurasjon gir således diastereomerer av åQ med S,S- og S,R-konfigurasjon på A2pm, og ål med R-konfigurasjon kan gi diastereomerer av åQ med R,S-og R,R-konfigurasjon på A2pm.

Omsetningene utføres i et oppløsningsmiddel som er hensiktsmessig for reagensene og de anvendte materialer og egnet for omdannelsen som utføres. Det vil forstås av fagfolk på området organisk syntese, at de forskjellige funksjonaliteter til stede på molekylet, må være forenlig med de aktuelle kjemiske omdannelsene. Dette vil ofte nødvendiggjøre vurdering av rekkefølgen av syntese-trinnene, beskyttelsesgrupper, hvis nødvendig, og avbeskyttelsesbetingelser. Substituentene på utgangsmaterialene kan være inkompatible med noen av reaksjons-betingelsene. Slike restriksjoner med hensyn til substituenter som er kompatible med reaksjonsbetingelsene, vil være åpenbare for fagfolk på området.

Farmasøytisk godtagbare salter omfatter både metallsalter (uorganiske) og organiske salter; og en liste over disse er angitt i Remington's Pharmaceutical Sciences, 17. ed., side 1418 (1985). Det er velkjent for fagfolk på området at en passende saltform velges basert på fysisk og kjemisk stabilitet, flyteevne, hygroskopisitet og oppløselighet. Foretrukne salter ifølge oppfinnelsen omfatter, av de ovenfor angitte grunner, kalium-, natrium-, kalsium-, magnesium- og ammonium-salter.

Noen av forbindelsene i de ovenfor beskrevne skjemaene har asymmetrisentere. Foreliggende oppfinnelse omfatter alle stereoisomerer av forbindelsene, enten de er fri for andre stereoisomerer eller i blanding med andre stereoisomerer i et hvilket som helst forhold, og omfatter således f.eks. racemiske blandinger av enantiomerer så vel som den diastereomere blanding av isomerene.

De nye forbindelsene ifølge oppfinnelsen er nyttige på grunn av deres evne til å fremkalle cytokin-dannelse og restituere benmarg etter kjemoterapi, som vist ved de følgende tester. Reskrivpilgp av hiolngiske forsøk Tnterleukin 6 ( TT.-6) forsa k på stniktnr-fiinksjonK-analyse - Testforbindelser oppløses i vann og administreres subkutant med 0,2 ml for å gi en dose på 0,1-10 mg/kg. De mindre oppløselige forbindelsene oppløses først i 100% etanol og bringes deretter til passende konsentrasjon med vann. Fire timer etter injeksjonen, tappes blod fra musene, og serum utvinnes. Den IL-6 avhengige cellelinje 7TD1 anvendes for å undersøke IL-6-innhold i serie-fortynninger av sera. 7TD1 celler (1 x IO<4>) plasseres i mikrotiter-brønner og inkuberes ved 37°C i 72 timer med standard rekombinant IL-6 fra mus eller med fortynninger av serumet som skal undersøkes. De siste 6 timer pulseres cellene med <3>H-Tdr (uci). Cellene høstes deretter og graden av formering bestemmes ved opptak av <3>H-Tdr, målt ved flytende scintillasjons-spektrometri. Konsentrasjonen av IL-6 i serum beregnes fra standard kurver ved anvendelse av rekombinant IL-6 fra R&D Systems Inc. og er angitt i enheter av IL-6 aktivitet som definert av produsenten.

GraniiWytt- knlnni-qtirmilRrenrie faktor "Granulocyte r.oln ny stimnlating far. tor" (GCSF) forseilf - Et bioforsøk på GCSF utføres identisk med IL-6 forsøket, bortsett fra at den GCSF-avhengige cellelinje NFS-60 anvendes istedenfor den IL-6 avhengige 7TD1 cellelinje. Nøytraliserende monoklonalt antistoff for GCSF fra mus anvendes for å vise spesifisiteten ved forsøket.

Kolnni- HannennV fnrscilc graniilorytt-makrofag (CFTT-CtM) - Mus behandles med 150 mg/ kg 5-Fu, og behandling med test-forbindelsen begynner 24 timer senere. På påfølgende dager avlives mus ved halsvridning, og lårbena (femur) fjernes under sterile betingelser. Lårbena skylles med 1 ml iskaldt medium (Iscove's supplert med 20% FCS, 1% penicillin-streptomycin, 1% glutamin og 5 x 10"<5> M 2-merkaptoetanol). Benmargceller (5 x 10<5>) plasseres deretter i 12 x 75 mm vevkultur-plater i 3 ml varm agarose (3%) i Iscove's medium med 100 enheter/ml rekombinant GM-CSF anskaffet fra Genzyme (Boston, MA). Platene inkuberes i 7 dager ved 37°C i 5% CO2. Etter 7 dager opptelles kolonier på 50 celler eller mer under et analyse-mikroskop.

" Senim- koloni- stimnlerenrie faktor" ( CSF) fnrs<p>ik - Et forsøk som detekterer koloni-stimulerende faktor aktivitet, men som ikke skiller mellom forskjellige typer av koloni-stimulerende faktorer anvendes for å detektere tilstedeværelse av CSF-aktivitet i serum fra mus injisert med test-forbindelsene. Benmarg-celler prepareres som beskrevet ovenfor for CFU-GM-forsøket. Cellene inkuberes deretter i myk agar med en 0,3% endelig konsentrasjon av serum tatt fra mus 4 timer etter injeksjon med test-forbindelsene. Etter 7 dagers inkubering ved 37°C, bestemmes antall koloni-dannende (CFU) celler pr. 10<5> benmarg-celler på platen, ved telling av kolonier på mer enn 50 celler under et analysemikroskop. Dataene er angitt som CFU/10<5> benmarg-celler.

Sirkulerende rnaytrn ifl - forsøk - Mus behandles med 5-FU (150 mg/kg) og behandles daglig, første gang etter 24 timer, med test-forbindelsen. Blod tappes fra musene daglig ved retro-orbital punktur i hepariniserte kapillarrør. Sirkulerende WBC tellinger bestemmes med en Coulter teller. Blodflekker merkes med Wright-Geimsa oppløsning, og prosent

sirkulerende nøytrofiler bestemmes ved differensiell-telling under et mikroskop.

5- fluonirar:i1- ( 5- FTT) fremkalt neiytropeni hos mus - Mus behandles i.p. med 150 mg/kg av kjemoterapi-midlet 5-FU som fremkaller alvorlig tap av nøytrofiler i perifert blod 5-6 dager senere. 24 timer etter dosering startes behandling med test-forbindelsene. Virkningen av test-forbindelsene på gjenvinning av nøytrofile progenitorceller i benmargen bestemmes ved CFU-GM-måling. Gjenvinning av sirkulerende nøytrofiler følges av differensiell merking av perifert blod.

Delta- måling - Mus behandles med en enkel dose 5-FU (150 mg/kg i.p.). 24 timer senere fjernes benmarg-celler og deles i 2 alikvoter. En alikvot plasseres umiddelbart på plater i myk agar med 15 ng/ml IL-1 og 250 U/ml GM-CSF. Etter 14 dager bestemmes antall kolonier (CFU-1). Den andre alikvot av celler plasseres i en flytende kultur med enkel vekstfaktor eller medikament eller kombinasjoner av disse for å måle evnen til disse midlene til å utvide den kolonidannende cellekvote. Etter 7 dager i flytende kultur, høstes disse cellene og plasseres på plater i myk agar med IL-1 og GM-CSF, som den første alikvot. Etter 14 dager bestemmes antall kolonier i den andre alikvoat (CFU-2). Forholdet eller delta beregnes som CFU-2/CFU-1, og dette forholdet anvendes for å konstatere evnen til vekstfaktorene og/eller medikamentene anvendt i den flytende fase, til å fremkalle vekst av de koloni.-dannende celler (CFU) eller differensiering av pre-CFU til CFU.

Resultater - Test-forbindelsene kan fremkalle IL-6 produksjon i serum fra mus innen 4 timer etter en enkel subkutan injeksjon (Tabell 1). Likeledes er serum-CSF-aktivitet også registrert med disse forbindelsene på mus (Tabell 2). IL-6-forsøket utføres kvantitativt, og anvendes for å bestemme den relative styrke. CSF-forsøket utføres med én enkel serum-konsentrasjon og er derfor kvalitativt.

En representativ forbindelse (Eksempel 28) er vist også å fremkalle GCSF i serum fra injiserte mus (Tabell 3). Representative forbindelser (Eksempler 28, 32 og 84) er vist å fremkalle nøytrofil restituering hos 5-FU-behandlede mus (Tabell 4). En representativ forbindelse (Eksempel 28) forsterker restituering av nøytrofiler i perifert blod, med forut-gående økning av CFU-GM, idet de nøytrofile forløpere i benmargen (Tabell 5) således viser at test-forbindelsene har en virkning på benmargen.

En representativ forbindelse (Eksempel 28) fremkaller også IL-6 og GCSF produksjon i serum fra 5-FU-behandlede primater (Tabell 6). En representativ forbindelse

(Eksempel 32) akselererer restituering av nøytrofiler hos primater behandlet med det kjemoterapeutiske midlet cytoxan (Tabell 7). Testforbindelse-behandlede grupper restitueres til kontroll-nivå på dag 7, mot restituering på dag 10 for gruppen som bare er behandlet med cytoxan. Test-forbindelsene fremkaller således et tilsvarende spektrum av cytokiner og forsterket nøytrofil restituering både for primater og mus.

En representativ forbindelse (Eksempel 28) virker synergistisk in vitro med den hemopoetiske vekstfaktor c-kit ligand (KL) for å øke vekst av benmarg progenitorceller (Tabell 8). Dette støtter ytterligere påstanden om at disse forbindelsene øker veksten av nøytrofile progenitorceller i benmargen. Test-forbindelsene er også aktive for å akselerere nøytrofil restitusjon hos 5-FU-behandlede mus når de gis oralt (Tabell 9), som vist ved representative forbindelser (Eksempler 28 og 32).

Klinisk betydning - Dataene samlet for de beskrevne test-forbindelsene viser at de kan fremkalle endogen produksjon av vekstfaktorer (IL-6 og GCSF) som er kjent for å regulere nøytrofil produksjon i benmargen. Disse forbindelsene kan anvendes terapeutisk for å restituere nøytrofiler etter cancer-kjemoterapi, strålebehandling, benmargstransplantasjon eller infeksjoner. I tillegg kan forbindelsene anvendes i kombinasjon med rekombinante vekstfaktorer for å forsterke aktiviteten til de rekombinante molekylene. Disse forbindelsene kan også være nyttige for behandling av cancer, AIDS, aplastisk anemi, myelodysplastisk syndrom, infeksjonssykdommer og for forsterkning av immunforsvaret. I motsetning til rekombinante vekst-faktorer, er test-forbindelsene effektive når de administreres oralt.

Mus (1 O/gruppe) blir gitt en enkel subkutan injeksjon av testforbindelsen, og blod blir tappet 4 timer senere. GCSF-nivået i serum bestemmes ved biomåling, ved anvendelse av GCSF avhengig cellelinje NFS-60.

Grupper på 5 mus behandles med 5-FU med 150 mg/kg og behandles 24 timer senere daglig med testforbindelsen s.c. med 0,1 mg/kg. De angitte data er fra dag 3 etter 5-FU-behandlingen.

Grupper på 3 "cynomolgous" aper behandles med 5-FU med 125 mg/kg, og behandles 24 timer senere med testforbindelsen s.c. med 0,05 mg/kg. De angitte data er fra sera tatt 4 timer etter behandling med test-forbindelsen.

Grupper på 4 "cynomolgous" aper behandles på dag 1 og dag 0 med cytoxan med 60 mg/kg. 24 timer etter den andre cytoxan-dose, behandles én gruppe daglig s.c. med 50 jig/kg testforbindelse, og den andre bare med bærer (vann),

p < 0,05 mot bare cytoxan, kontroll ved Studenfs t test.

Benmargceller fra 5-FU-behandlede mus anvendes for anrikning med tidlige progenitorceller. Cellene deles i 2 alikvoter som beskrevet under metode-avsnittet for "delta-måling". Fold økning bestemmes ved måling av virkningen av en 7 dagers in vitro inkubering av cellene med vevkultur-medium pluss testforbindelse og/eller vekst-faktor KL på koloni-dannende celler (CFU). Antall CFU sammenlignes deretter med kolonidannelse av friske benmarg-celler som ikke var inkubert in vitro, for å bestemme fold økning. Test-forbindelsen anvendes in vitro med 0,5 ug/ml.

Grupper på 5 mus behandles med 150 mg/kg 5-FU. Én dag senere startes daglig oral administrering med testforbindelsene, og fortsettes i 10 dager. De angitte data er fra dag 6 etter 5-FU-behandling.

Dag 7 etter 5-FU.

Når forbindelsene anvendes for ovenstående formål, kan de kombineres med én eller flere farmasøytisk godtagbare bærere, f.eks. oppløsningsmidler, fortynningsmidler og lignende, og kan administreres oralt i slike former som tabletter, kapsler, dispergerbare pulvere, granuler eller suspensjoner inneholdende f.eks. fra 0,05 til 5% suspenderingsmiddel, siruper inneholdende f.eks. fra 10 til 50% sukker,og eleksirer inneholdende f.eks. fra 20 til 50% etanol og lignende, eller parenteralt i form av sterile, injiserbare oppløsninger eller suspensjoner inneholdende fra 0,05 til 5% suspenderingsmiddel i et isotonisk medium. Slike farmasøytiske preparater kan f.eks. inneholde fra 0,05 opp til 90% aktiv bestanddel sammen med bæreren, mer vanlig mellom 5 og 60 vekt%.

Den effektive dose aktiv bestanddel som anvendes, kan variere avhengig av den spesielle forbindelse som anvendes, administreringsmåten og alvorlighetsgraden av tilstanden som behandles. Generelt oppnås imidlertid tilfredsstillende resultater når forbindelsene ifølge oppfinnelsen administreres i en daglig dose på fra 15 ug til 100 fig/kg kroppsvekt av dyret, fortrinnsvis gitt i oppdelte doser fra to til fire ganger pr. dag, eller i en form med forsinket frigjøring. For de fleste større pattedyr er den totale daglige dose fra 1 til 50 ug, fortrinnsvis fra 1 til 20 ug. Doseformer egnet for innvortes bruk omfatter fra 5 ug til 25 ug av den aktive forbindelsen i intim blanding med en fast eller flytende, farmasøytisk godtagbar bærer. Dette doseområde kan justeres for å gi optimal terapeutisk respons. F.eks. kan mange oppdelte doser administreres daglig, eller dosen kan reduseres forholdsmessig i henhold til det som er nødvendig etter den terapeutiske situasjon.

Disse aktive forbindelsene kan administreres oralt så vel som intravenøst, intramuskulært eller subkutant. Faste bærere omfatter stivelse, laktose, dikalsiumfosfat, mikrokrystallinsk cellulose, sukrose og kaolin, mens flytende bærere omfatter sterilt vann, polyetylenglykoler, ikke-ioniske overflateaktive midler og spiselige oljer, så som mais-, jordnøtt- og sesamolje, etter hva som er egnet for typen av aktiv bestanddel og den spesielle administreringsform som ønskes. Tilsetningsstoffer som normalt anvendes ved fremstilling av farmasøytiske preparater, kan fordelaktig inkluderes, så som smaksgivende midler, farvestoffer, konserveringsmidler og antioksydasjons-midler, f.eks. vitamin E, askorbinsyre, BHT og BHA.

Foretrukne farmasøytiske preparater når det gjelder enkel fremstilling og administrering, er faste preparater, spesielt tabletter og kapsler fylt med harde eller flytende midler. Oral administrering av forbindelsene er foretrukket.

Disse aktive forbindelsene kan også administreres parenteralt eller intrapeirtonealt. Oppløsninger eller suspensjoner av disse aktive forbindelsene som fri base eller et farma-kologisk godtagbart salt, kan fremstilles i vann hensiktsmessig blandet med et overflate-aktivt middel så som hydroksypropylcellulose. Dispersjoner kan også fremstilles i glycerol, flytende polyetylenglykoler og blandinger derav i oljer. Under ordinære betingelser for lagring og anvendelse, inneholder disse preparatene et konserveringsmiddel for å hindre vekst av mikroorganismer.

Farmasøytiske former egnet for injeksjon, omfatter sterile, vandige oppløsninger eller dispersjoner, og sterile pulvere for ekstemporert fremstilling av sterile, injiserbare oppløsninger eller dispersjoner. I alle tilfeller må formen være steril og flytende i den grad at den lett kan sprøytes inn. Den må være stabil under fremstillings- og lagrings-betingelsene og beskyttet mot forurensende virkning av mikroorganismer så som bakterier og sopp. Bæreren kan være et oppløsningsmiddel eller dispersjonsmedium inneholdende f.eks. vann, etanol, polyol (f.eks. glycerol, propylenglykol og flytende polyetylenglykol), egnede blandinger derav og vegetabilske oljer.

Forkortelser:

IL: interleukin

CSF: koloni-stimulerende faktor

G (granulocytt)-, M (makrofag)- og GM (granulocytt-makrofag)-CSF.

Ala: alanin

A2pm: 2,6-diaminopimelinsyre

Lys: lysin

Ser: serin

Thr: treonin

BOC: t-butoksykarbonyl

BOP: benzotriazolyloksytris(dimetylamino)-fosfonium-heksafluorfosfat CBZ: karbobenzyloksy

TFA: trifluoreddiksyre

MS: molekylsikt

TEA: trietylamin

DM AP: dimetylaminopyridin

TFA: trifluoreddiksyre

G (granulocytt)-, M (makrofag)- og GM (granulocytt-makrofag)-CSF

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen og fremstilling derav illustreres ytterligere ved de følgende eksemplene.

I de følgende eksempler, hvis ikke annet er angitt, separeres produktene ved "flash" kromatografi på Silikagel 60 (230-400 mesh). Renheten av produktene bestemmes ved TLC på Silikgal GF (250 mm). Smeltepunkter bestemmes på et Mel-Temp apparat og er ukorrigerte (alle temperaturer i °C). Hvis ikke annet er angitt oppnås 1H NMR (300 MHz) spektra for deutero-kloroform-oppløsninger (1% indre standard, Me4Si; koblingskonstanter er angitt i Hz enheter). Reaksjoner som trenger vannfrie betingelser utføres under argonatmosfære, ved anvendelse av oppløsningsmidler i kolber lukket med skillevegg. Organiske oppløsninger tørres over magnesiumsulfat eller natriumsulfat, og oppløsnings-midlene fjernes i vakuum på en rotasjonsinndamper.

Eksemplene 1-18 angår fremstillingen av mellomprodukter.

Eksempel 1

N-( 1 - nksnhepty1)- D- alln- trennin ( 2c -])

En oppløsning av n-heptanoylklorid (440 ml, 2,83 mmol) i THF (250 ml) settes dråpevis, over en periode på 30 minutter, til en kald (-5 til 0°C), kraftig omrørt blanding av D-allo-Thr (300 mg, 2,51 mmol) og 2N vandig NaOH (3,5 ml, 7,0 mekv.) i THF (4,0 ml). Den resulterende blandingen omrøres i 2 timer ved samme temperatur og natten over ved romtemperatur. De flyktige stoffene fjernes, og residuet fortynnes med vann og surgjøres ved anvendelse av kons. HC1. Blandingen ekstraheres med EtOAc, og den samlede organiske oppløsning vaskes med saltoppløsning, tørres, filtreres og konsentreres, hvilket gir urenset 2c- 1 (420 mg, inneholdende 10% overskudd av heptanoyl-reagens) som stivner ved henstand.

NMR 5 1,28 (d, J=6,5, 3H), 4,20 (m, 1H), 4,61 (dd, J=3,4, 6,6, 1H), 6,56 (br d, J=6,9, 1H); [a]D<26> -38 ± 2 (CHCb).

Eksempel 2

N-( 1 - oksoheprylVD- trennin ( 2c- 2)

D-Thr (2,50 g, 20,99 mmol) omdannes til 2c=2, ved å følge fremgangsmåten beskrevet i Eksempel 1: NMR 8 1,22 (d, J=6,4, 3H), 4,45 (m, 1H), 4,55 (dd, J=l,9, 8,3,1H), 6,30-6,80 (br s, variabel, >2 H), 6,88 (br d, J=8,3,1H);

MS (HR-EI) m/z 321,1939 (M beregnet for C18H27NO4, 321,1940).

Eksempel 3

N-( 1 - oksohepty1)- T -alln-treonin (2c-3)

L-allo-Thr (150 mg, 1,26 mmol) omdannes til 2£=1, ved å følge fremgangsmåten beskrevet i Eksempel 1: NMR er samme som for 2cJ_.

Eksempel 4

N-( 1 - oksnheptyl)-T -trennin (?c-4)

L-Thr (300 mg, 2,51 mmol) omdannes til 2c- 4 ved å følge fremgangsmåten beskrevet i Eksempel 1: NMR er samme som for 2c=2.

Eksempel 5

N-( 1- nksnbepry1)-r)-serin (?.c-5)

D-Ser (6,00 g, 57,09 mmol) omdannes til 2c- 5 ved å følge fremgangsmåten beskrevet i Eksempel 1. Råproduktet renses ved kromatografi (2x21 cm kolonne, gradient 1% CH3OH og 0,5% HOAc til 3% CH3OH og 2% HO Ac i CH2CI2): NMR(CD3OD) 8 0,90 (t, J=6,8, 3H), 1,32 (m, 6H), 1,63 (m, 2H), 2,27 (synlig t, J _ 7,5, 2H), 3,81 og 3,89 (AB av ABX, Jab = 11,2, Jax = 4,1, J BX = 5,0, 2H), 4,49 (X av ABX, J 4,2, 4,8, 1H); MS (CI, NH4) m/z 218 (M+H), 235 (M + NH4); [a]D<26> -8±1 (MeOH).

Eksempel 6

N-[ trans-( 4- pentylryklnheksyl) karhnnyl]- n- alln- trennin ( ?c- 6)

En oppløsning av trans-4-pentylcykloheksan-karboksylsyre (198 mg, 1,0 mmol) i tørr toluen (1 ml) behandles med oksalylklorid (760 mg, 5,9 mmol) ved 0°C, og blandingen omrøres i 2 timer ved samme temperatur og 1 time ved romtemperatur. Overskudd av reagens fjernes i vakuum. En oppløsning av det urensede syreklorid i tørr acetonitril (2 ml) settes til en blanding av D-allo-Thr (100 mg, 0,85 mmol), 2N vandig NaOH (600 ul, 1,20 mekv.) og TEA (85 mg, 0,85 mmol) i THF (1,5 ml), fulgt av fremgangsmåten beskrevet i Eksempel 1. Råproduktet ?c- 6 renses ved kromatografi (1,5 x 18 cm kolonne, 5% CH3OH og 0,4% HOAc i CH2CI2): NMR 8 0,88 (t, J_7, 3H), 4,15 (m, 1H), 4,54 (m, 1H), 6,49 (d, 1H); MS (CI, CH4) m/z 300 (M + H).

Eksempel 7

N-[( 4-hiitnks<y>fen<y>l)ar.pty1]-n-a11n-trennin ( ?c.- 7)

4-butoksyfenyleddiksyre (288 mg, 1,38 mmol) omdannes til syrekloridet og tilsettes til D-allo-Thr (150 mg, 1,26 mmol), hvilket gir 2c- 9 ved fremgangsmåten beskrevet i Eksempel 6. Råproduktet renses ved kromatografi (2,5 x 18 cm kolonne, gradient 4% CH3OH og 0,3% HOAc i CH2CI2): NMR 5 0,96 (t, 5=7A, 3H), 1,14 (d, J=5,8,3H), 1,47 (m, 2H), 1,74 (m,2H), 3,53 (br s, 2H), 3,91 (t, J_6,5, 2H), 4,10 (br s, 1H), 4,53 (br s, 1H), 4,90 (br s, >2 H), 6,76 (br d, J=6,0,1H), 6,84 (d, J=8,4, 2H), 7,13 (d, J=8,4, 2H); MS (HR-EI) m/z 309,1567 (M beregnet for C16H23NO5, 309,1576);

[a]D<26> -26 ± 2 (CHCI3); sm.p. 90-94°C.

Eksempel 8

N-( 1 - nksnheptyl)-D-alln-trennin-fenylmetylester (2e-1)

Urenset ?.r-1 (420 mg, 1,82 mmol) oppløses i DMF (18 ml) og behandles med fast NaHC03 (321 mg, 3,82 mmol), og den resulterende blandingen omrøres i 1 time ved 70-75°C. Blandingen avkjøles til 40-50°C og behandles med benzylbromid (1,13 ml, 9,31 mmol). Omrøring fortsettes i 2 timer ved 40°C og 18 timer ved omgivelsestemperatur. De flyktige stoffene fjernes, og residuet tas opp i H20/EtOAc. Det organiske laget fraskilles, vaskes med saltoppløsning, tørres, filtreres og inndampes. Rensning av råproduktet ved kromatografi (2 x24 cm kolonne, 3:1 heksan/EtOAc) gir et hvitt, fast stoff som karakteriseres som 2e- 1 (506 mg, 1,57 mmol): NMR 5 0,88 (synlig t, J=6,8, 3H), 1,09 (d, J=6,4, 3H), 1,20-1,40 (m, 6H), 1,55-1,74 (m, 2H), 2,27 (synlig t, J_7,5, 2H), 3,20-3,80 (br s, variabel, 1H), 4,21 (dq, J=3,3, 6,4,1H), 4,74 (dd, J=3,3, 6,8, 1H), 5,20 og 5,23 (AB, J=12,2, 2H), 6,43 (br d, J=6,5, 1H), 7,36 (m, 5H); MS (HR-EI) m/z 321,1939 (M beregnet for C18H27NO4, 321,1940); [a}D<26> -29 ± 2 (CHCb); sm.p. 70-73°C.

Eksempel 9

N-( 1 - oksnheptyl)- D- trennin- feny1mety1ester ( 2e- 2)

Benzylering av urenset 2c=2, i henhold til metoden fra Eksempel 10, gir 2e- 2. Det urensede, faste stoff renses ved kromatografi (3,0 x 39 cm kolonne, 3:1 heksan/EtOAc): NMR 5 0,88 (synlig t, J _ 6,8, 3H), 1,20 (d, J=6,4, 3H), 1,23-1,38 (m, 6H), 1,60-1,71 (m, 2H) og 1,55-1,95 (overlappende br s, variabel, > 1H), 2,28 (synlig t, J _ 7,6, 2H), 4,37 (dq, J-2,4, 6,4, 1H), 4,67 (dd, J=2,4, 8,9, 1H), 5,19 og 5,22 (AB, J=12,3, 2H), 6,21 (br d, J_9, 1H), 7,35 (m, 5H).

MS (HR-EI) m/z 322,2011 (M + H beregnet for Ci8H28N04, 322,2019); [a]D<26> +9±1 (CHCb); sm.p. 77-80°C.

Eksempel 10

N-( 1 - oksnhepty1)-T -alln-trermin-fenylmetylester (?e-3)

Benzylering av urenset 7. r.- 33 i henhold til metoden fra Eksempel 10, gir 2e-3. Det urensede, faste stoffet renses ved kromatografi (2,5 x 28 cm kolonne, 4:1 heksan/EtOAc): NMR er samme som for 2e=l; MS (HR-EI) m/z 321,1935 (M beregnet for C18H27NO4, 321,1940); [a]D<26> +25±2 (CHCb); sm.p. 70-73°C.

Eksempel 11

N-( 1 - oksoheptyl)- T - trennin- fenylmetylester ( ?e- 4)

Benzylering av urenset 2c-4, i henhold til metoden fra Eksempel 10, gir 2e-4. Det faste stoffet renses ved kromatografi (2,0 x 20 cm kolonne, gradient av 4:1 til 3:1 heksan/EtOAc): NMR er samme som for 2e=2; MS (HR-EI) m/z 321,1947 (M beregnet for C18H27NO4, 321,1940); [a]D<26> -9±2 (CHCb);

sm.p. 78-80°C.

Eksempel 12

N-( 1 - nksnheptyl- D- serin- fenylmetylester ( 2e- 5)

Benzylering av 2c=5., i henhold til metoden fra Eksempel 10, gir 2e-5.

NMR 5 0,88 (synlig t, J_6,8, 3H), 1,20-1,40 (m, 6H), 1,55-1,70 (m, 2H), 2,25 (synlig t, J_7,7, 2H), 2,45 og 2,80 (br s, 1H), 3,92 og 3,99 (AB av ABX, Jab = 11,2, Jax = 3,4, Jbx = 4,0, 1H), 4,72 (ddd, synlig kvintett, Jx-nh = 7,3, Jax _ Jbx 3,7,1H), 5,21 (synlig s, små AB sidesignaler, 2H), 6,46 (br d, J=7,l, 1H), 7,36 (m, 5H); MS (HR-EI) m/z 307,1792 (M beregnet for C17H25NO4, 307,1801); [a]D<26> -11±1 (CHCI3); sm.p. 62-66°C.

Eksempel 13

N-[ trans( 4- penty1cyk1nheksyl) karbnnyl]- D- a11n- trennin- fenylmerylester ( 2e- 6)

Benzylering av 2c=fi, i henhold til metoden fra Eksempel 10, fulgt av kromatografi (2 x 18 cm kolonne, 0,5% CH3OH i CH2C12), gir 2e=fi.

NMR 8 0,88 (m, 5H), 1,07 (d, 3=6, 4, 3H), 1,10-1,35 (m, 8H), 1,35-1,55 (m, 2H), 1,64 (br s, 1H), 1,64-1,97 (m, 4H), 2,14 (m, 1H), 3,67 (br s, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,73 (dd, J=3,2 og 6,7, 1H), 5,18 og 5,25 (AB, Jab = 12,2, 2H), 6,44 (d, J=6,6, 1H); MS (HR-EI) m/z 389,2566 (M beregnet for C23H35N04, 389,2566); [a]D<26> -24±2 (CHCb); sm.p. 130-34°C.

Eksempel 14

N-[( 4- hiitoksyfeny1) ar. etyl]- D- a11n- trennin- fenylmetyl- ester ( 2e- 7)

Benzylering av 2 c- 7, i henhold til metoden fra Eksempel 10, fulgt av kromatografi (2 x 20 cm kolonne, 3:1 heksan/EtOAc), gir 2e- 7.

NMR 8 1,00 (m, 6H), 1,50 (m, 2H), 1,76 (m, 2H), 3,38 (br s, 1H), 3,56 (synlig s, små AB sidesignaler, 2H), 3,95 (synlig t, J=6,5, 2H), 4,15 (m, 1H), 4,72 (dd, J=7,0 og 3,4,1H), 5,13 og 5,19 (AB, J=12,2, 2H), 6,38 (br d, J=6,8, 1H), 6,87 (d, J=8,7,2H), 7,15 (d, J=8,6, 2H); MS (CI, CH4) m/z 400 (M + H);

[a]D<26> -18±2 (CHCb); sm.p. 80-83°C.

Eksempel 15

( R)- 3-( hyHrnksy- N-( 1- nksnheptyl)- D- nnrvalin- feny1mRty1estRr ( ?e- 8)

Benzylering av 2c=8, fra Eksempel 51, i henhold til metoden fra Eksempel 10, gir 7e- 8

Eksempel 16

( S)- 3-( hydrnksy- N-( 1- nksnhepry1)- D- nnrvalin- fenylmetylester ( 2e- 9)

Benzylering av 2c=2, fra Eksempel 52, i henhold til metoden fra Eksempel 10, gir 7e- 9

Eksempel 17

N-[ N2-[( 1) 1- dimety1etnksy) karhnny1]- N6-[( fenylmetnksy) karhony1]-( R)- 6-[( fenylmetoksy)karhnny1]-T ,-lysy1]-D-a1anin-f eny1merylester ( 40h)

En blanding av N-[N 2 -[(l,l-dimetyletoksy)karbonyl]-N 6-[(fenylmetoksy)-karbonyl]-(R)-6-[(metoksy)-karbonyl]-L-lysyl]-D-alanin-4-nitrofenylmetylester (40a, Kolodziejczyk et al., Int. J. Pept. Prot. Res., 1992, 39, 382; 683 mg, 1,06 mmol), 4Å molekylsikt (2,15 g, knust), THF (10,5 ml) og benzylalkohol (11,0 ml, 105,6 mmol) omrøres i 30 minutter og behandles deretter med titan(IV)isopropoksyd (82 ul, 0,27 mekv.). Den resulterende blandingen oppvarmes i 24 timer ved 85-90°C. Det faste stoffet filtreres gjennom diatoméjord, og oppløsningsmidlet fjernes. Overskudd av benzylalkohol fjernes ved destillasjon på et Kugelrohr apparat (ca. 1000 u trykk, 50-75°C). Den urensede, oransje oljen kromatograferes (2,5 x 31 cm kolonne), gradient på 4:1-2:1 heksan/EtOAc), hvilket gir 4Qh (633 mg, 88% utbytte): NMR 8 1,39 (d, J=7,2, 3H), 1,43 (s, 9H), 1,40-1,67 (m, 4H), 1,84 (br s, 2H), 4,07 (br s, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,58 (synlig kvintett, 1H), 5,0 (br d, 1H), 5,07-5,25 (m, 6H), 5,43 (br d, J=7,9,1H), 6,68 (br d, 1H), 7,33 (m); MS (HR-FAB) m/z 676,3232 (M + H, beregnet for C37H46N3O9, 676,3234).

Eksempel 18

N-[ N6-[( feny1metoksy) karhnnyl]-( R)- 6-[( fen^^ -1ysy1]-n-a1anin-fenylmetylester (3h)

En oppløsning av 40h (251 mg, 0,37 mmol) i TFA (870 pl) omrøres i 30 minutter ved 0°C. TFA fjernes, og oljen tas opp i EtOAc og vaskes med en mettet NaHCC»3-oppløsning. Tørring og fjernelse av oppløsningsmidlet gir 3h (225 mg, lite overskudd), som anvendes ved påfølgende reaksjoner uten ytterligere opparbeidelse: NMR 6 1,39 (d, 3H) og 1,20-1,70 (overlappende m, 4H), 1,82 (br s, 2H), 3,23 (br s, variabel, 2H), 3,33 (br s, 1H), 4,39 (m, 1H), 4,47 (synlig kvintett, 1H), 5,03-5,13 (m, 6H), 5,27 (br d, 1H), 7,35 (m, 15H), 7,95 (br d, 1H); MS (FAB) m/z 576 (M + H), 598 (M + Na).

De følgende eksemplene 19-36 angår fremstillingen av sluttprodukter i henhold til krav 1.

Eksempel 19

R-( R*, R*)]- N-[ N2-[[ 3- nksn- 2-[( 1- fiksnheptyl) aminn]- 1- mety1- 3-( feny1metnksy)-prnpnksy]-karhnny1]- N6-[( feny1metnksy) karbnny1]-( R)- 6-[( feny1metnksy) karhr>ny1]- T,- 1ysyl]- D- alanin-fenylmetyl ester ( 1 a- 1)

En oppløsning av 7e- 1 (173,6 mg, 0,54 mmol) i THF ("Sure/Seal" oppløsnings-middel tørret igjen over 3_ MS, 1,45 ml) settes til overskudd av kald fosgen (1,92 M oppløsning i toluen; 1,40 ml, 2,63 mmol), alternativt med TEA (81 ul, 0,58 mmol) over en periode på 15 minutter ved 0°C. Den resulterende melkeaktige blandingen omrøres i ytterligere 15 min. ved samme temperatur og i 5 timer ved romtemperatur. Blandingen avgasses med argon i 30 minutter og omrøres under aspirator-trykk i 30 minutter. Residuet behandles med en oppløsning av nyfremstilt 3ii (0,37 mmol) i CH3CN (tørret igjen som for THF, 2,9 ml) og deretter TEA (81 ul, 0,58 mmol), begge tilsatt med alt på én gang. Den hvite oppslemningen omrøres natten over ved omgivelsestempeatur. Blandingen tas opp i EtOAcÆhO, og lagene separeres. Den vandige fasen ekstraheres to ganger med EtOAc, og den samlede organiske fase vaskes med saltoppløsning, tørres, filtreres og inndampes. Rensning av produktet ved kromatografi (3 x 30 cm colonne, gradient på 2:1-1:2 heksan/- EtOAc) gir en hvit voks som identifiseres som 1a- 1: NMR 5 0,86 (m, 3H), 1,11 (d, J=6,4, 3H), 1,20-1,40 (m, 8H), 1,42 (d, J=7,3, 3H), 1,50-1,75 (m, 4H, med overlappende H20 signal), 1,75-2,05 (br d, 2H), 2,20 (m, 2H), 4,15 (br s, 1H), 4,47 (br s, 1H), 4,62 (synlig kvintett, 1H), 4,87 (synlig br d, J_6,1H), 5,00-5,20 (m, 9H), 5,23 (m, 1H), 5,37 (br d, 1H), 6,40 (br d, 1H), 7,33 (m, 20H), 7,77 (br d, 1H); MS (HR-FAB) m/z 923,4420 (M + H, beregnet for C51H63N4O12, 923,4442).

Eksempel 70

[ S-( R* S*)]- N- pj2-[[ 3- nkso- 74( 1- oksnh^ propoksy] karhony1]- N6-[( fenylmetoksy) karhony1^^^ 1ysyl]-D-alanin-fenylrnetylester (1 a-2)

Forbindelse 2e>2 (20 mg, 0,062 mmol) kobles med lh (0,043 mmol) ved fremgangsmåten i Eksempel 19. Rensning av råproduktet (1,5 x 21 cm kolonne, 2:1 heksan/EtOAc) gir en hvit voks som karakteriseres som la=2: NMR 5 0,87 (m, 3H), 1,25 og 1,23-1,38 (overlappende d, J=6,2, 3H og m, 8H), 1,40 (d, J=7,2, 3H), 1,55-1,75 (m, 4H, med overlappende H20 signal), 1,75-1,90 (m, 2H), 2,29 (m, 2H), 4,08 (br s, 1H), 4,83 (br s, 1H), 4,58 (synlig kvintett, 1H), 4,83 (br d, 1H), 5,05-5,30 (m, 9H), 5,35 (br s, 1H), 5,68 (br s, 1H), 6,30 (br s, 1H), 6,62 (br s, 1H), 7,33 (m, 20H); MS (HR-FAB) m/z 923,4455 (M + H, beregnet for C51H63N4O12, 923,4442).

Eksempel 21

prnpr) ksy] karhnny1]- N6-[( feny1metnksy) karhnnyl]-( R)- 6-[( feny1metnksy) karhnny1]- I,-1ysy1]- D- alanin- fenylmety1ester ( 1 a- 3)

Forbindelse 2e- 3 (27,4 mg, 0,085 mmol) kobles med 3h (0,06 mmol), ved fremgangsmåten ifølge Eksempel 19. Rensning av råproduktet (1,5 x 16 cm kolonne, 2:1 heksan/EtOAc) gir en hvit voks som identifiseres som 1a- 3-

NMR 8 0,86 (m, 3H), 1,20-1,35 (m, 1H), 1,39 og 1,35-1,57 (overlappende d, J=7,l, 3H og m, 4H), 1,75-1,95 (br s, 2H), 2,10-2,30 (m, 2H), 4,08 (br m, 1H), 4,37 (br s, 1H), 4,57 (synlig kvintett, J=7,3, 1H), 4,70-5,30 (overlappende multipletter, 10H), 5,93 (br d, 1H), 6,50 (br d, 1H), 6,63 (br d, J=7, 1H), 7,05 (m, 1H), 7,34 (m, 20H); MS (HR-FAB) m/z 945,4281 (M + Na, beregnet for C5iH62N40i2Na, 945,4262).

Eksempel 72.

[ R-( R* JS*)]- N- p^ 24[ 3- nksn- 74( 1- nksnhepty1) aminn]- 1- metyl- 3-( feny1metnksy)-prnpoksy] karhnny1]- N -[( feny1metnksy) karhnnyl]-( R)- 6-[( feny1metnksy)- karhnny1]- T-1ysy1]- P- a1anin- feny1metylester ( 1 a- 4)

Forbindelse 7e- 4 (27,6 mg, 0,085 mmol) kobles med 3h (0,06 mmol) i henhold til fremgangsmåten ifølge Eksempel 19. Rensning av råproduktet (1,5 x 16 cm kolonne, gradient 2:1-1:1 heksan/EtOAc) gir en hvit voks som identifiseres som la=4: NMR 8 0,86 (m, 3H), 1,25 og 1,25-1,40 (overlappende d, J=6,5, 3 og m, 11H), 1,42 (d, J=7,0, 3H), 1,53-1,73 (m, 4H, med overlappende H20 signal), 1,73-1,95 (br s, 2H), 2,27 (synlig t, J_7,5, 2H), 4,12 (br s, 1H), 4,38 (br s, fin struktur, 1H), 4,58 (br s, 1H), 4,81 (br d, 1H), 5,03-5,23 (m, 8H), 5,23-5,48 (m, 3H), 6,41 (br d, 1H), 6,71 (br d, 1H), 7,33 (m, 20H);

MS (HR-FAB) m/z 945,4271 (M + Na, beregnet for C5iH62N40i2Na, 945,4262).

Eksempel 73

( R)- N.[ N 2 -[[ 3- nkso- 7-[( 1 - nksnhepty1) aminn]- 3-( fenylrne.tnk«;y)-prnpnlcsy]Warhnny1]-N 6-[( fenylmetnks<y>) karhnnyl]-(R)-6-[(fen<y>1mRtnks<y>)karrtnn<y>1]-T .-1<y>s<y>l]-T)-a1anin-fenyl-metylest er ( 1a- 5)

Forbindelse 2e- 5 (99 mg, 0,32 mmol) kobles med 3h (0,21 mmol) ved fremgangsmåten ifølge Eksempel 19. Rensning av råproduktet (2 x 21 cm kolonne, gradient 2:1-1:1 toluen/eter) gir en hvit voks som karakteriseres som la- 5: NMR 5 0,88 (m, 3H), 1,20-1,38 (m, 8H), 1,39 (d, J=7,2, 3H), 1,50-1,66 (m, 4H), 1,85 (br s, 2H), 2,21 (synlig t, J_7,6, 2H), 4,09 (br s, 1H), 4,23-4,51 (m, 3H), 4,58 (synlig kvintett, J=7,3,1H), 4,90 (br s, 1H), 5,05-5,25 (m, 9H), 5,55 (br t, 1H), 6,55 (br d, 1H), 6,90 (br d, 1H), 7,33 (m, 20H);

MS (HR-FAB) m/z 909,4270 (M + H, beregnet for C50H61N4O12, 909,4285).

Eksempel 74

[ R-( R* R*)]- N-[ N2-[[ 1- mefy1- 3- nksn- 74[( 4- pentylr.yklnhe ksyl)- karhnny1] aminn]- 3-( fenylmetnksy) propnksy] karhony1]- N -[( fenylmetnksy) karbnnyl]-( R)- 6-[( fenylmetnksy)-karbnnyl]- T .- lysyl]- D- a1anin- feny1mety1ester ( 1 a- 6)

Forbindelse 7e- 6 (33 mg, 0,085 mmol) kobles med 3h (0,06 mmol) i henhold til fremgangsmåten ifølge Eksempel 19. Rensning av råproduktet (1,5 x 17 cm kolonne, 2:1 heksan/EtOAc) gir en hvit voks som karakteriseres som 1a- 6: NMR 8 0,87 (m, 5H), 1,10 (d, J=6,6, 3H), 1,10-1,43 (m,15H), 1,43 (d, J=7,3, 3H), 1,70-2,20 (m, 7H), 4,15 (m, 1H), 4,37 (m, 1H), 4,64 (m,lH), 4,89 (br d, J=8,3, 1H), 5,03-5,30 (m, 9H), 5,37 (br d, 1H), 6,43 (br d, 1H), 7,33 (m, 20H), 7,34 (br d, 1H); MS (HR-FAB) m/z 1013,4903 (M+Na, beregnet for C56H7oN4Oi2Na, 1013,4888).

Eksempel 75

[ R-( R* R*)]- N-[ N24[7 4[( 4- hiitnksyfenyl) ar. etyl] aminn]- 1- metyl- 3- nksn- 3-( feny1-metoksy) propnksy] karhonyl ] - N6- [( fenylmetoksy)karhnnyl ]-( R )- 6- [( fenylmetnksy)-karhnnyl]- T.- lysyl]- D- alanin- fenylmetylester ( 1 a- 7)

Forbindelse 7. e- 7 (34 mg, 0,085 mmol) kobles med lh (0,06 mmol), i henhold til fremgangsmåten ifølge Eksempel 19. Rensning av råproduktet (1,5 x 14 cm kolonne, 2:1 heksan/EtOAc) gir en hvit voks som karakteriseres som 1a- 7: NMR 8 0,97 (m, 6H), 1,10-1,60 (m, overlappende d, J=7,3, 9H), 1,65-2,03 (m, 4H), 3,45 (m, 2H), 3,92 (synlig t, J=6,5, 2H), 4,15 (m, 1H), 4,38 (m,lH), 4,62 (synlig kvintett, J=7,3, 1H), 4,86 (br d, J=8,0, 1H), 5,05-5,25 (m, 9H), 5,42 (br d, J=7,5, 1H), 6,33 (br d, 1H), 6,84 (d, J=8,5, 2H), 7,13 (d, J=8,5, 2H), 7,33 (m, 20H), 7,89 (br d, 1H); MS (HR-FAB) m/z 1023,4368 (M + Na, beregnet for C56H64N4Oi2Na, 1023,4368).

Eksempel 76

[R-(R *3R *)]-N-[N2-[[ l - ety1- 3- okso- 2-[( l - nksohepryl) amino]- 3-(fRnylmetoksy)prnpnksy]-karhonyl]- N6-[( feny1metnksy) karhony1]^^

Forbindelse 7e- R (99 mg, 0,32 mmol) kobles med lh (0,21 mmol) ved fremgangsmåten ifølge Eksempel 19.

Eksempel 77

[S-(R*S*)]- N-[ >I2-[[1-etyl-3-nkso-7-[(1^^^ karhnnyl]-N<6->[(fen <y>lmetnks<y>) karhonyl]-(R)-6-[(feny1metnksy)karhnn<y>l]-T,-1<y>syl]-r)-a1anin

am

Forbindelse 2e- 9 (99 mg, 0,32 mmol) kobles med lh (0,21 mmol) ved fremgangsmåten ifølge Eksempel 19.

F.ksempel 7 R

[R-(R^R*)]-N-[(R)-if-k arhnksy- N2-[ p^^ karhnnyl]- T.- lysyl]- n- alanin ( la- 11)

En oppløsning av laJ. (140 mg, 0,15 mmol) i EtOAc/EtOH (5 ml: 15 ml) hydrogeneres over Pd(OH)2 (Pearlman's katalysator, 20% på C, 100 mg) ved anvendelse av et Parr apparat med et opprinnelig trykk på 4,9 kg/cm . Etter 5,5 timer gir filtrering og inndampning et farveløst glass. Sistnevnte utgnis med eter, og sidene på kolben skrapes for å gi et hvitt, krystallinsk pulver. Eter-oppløsningen fjernes med en sprøyte, og det faste stoffet vaskes med ytterligere to porsjoner eter, tørres og karakteriseres som la- 11-NMR (CD3OD) 5 0,89 (m, 3H), 1,22 (d, J=6,5, 3H), 1,24-1,39 (m, 6H), 1,42 (d, J=7,3, 3H), 1,45-1,99 (m, 8H), 2,26 (t, J_7,5, 2H), 3,62 (m, 1H), 4,06 (m, 1H), 4,41 (m, 1H), 4,89 (br s for OH, NH; et skjult CH-signal), 5,14 (m, 1H); MS (HR-FAB) m/z 519,2671 (M + H beregnet for C22H39N4O10, 519,2666).

Eksempel 79

[S-rR*1S*)]-N4(R)-6-karhnksy-N24[7-karhnksy-1-mefy1-7-[(1- nksnhepty1) aminn] etnksy] karhnnyl]- T - lysylJ- D- alanin ( 1 a- 17.)

Hydrogenolyse av forbindelse 1a- 7 (37,0 mg, 0,04 mmol) i henhold til metoden ifølge Eksempel 28, gir 1 a-12: NMR (CD3OD) 5 0,90 (m, 3H), 1,26 (d, J=6,3, 3H), 1,2-1,38 (m, 6H), 1,40 (d, J=7,2, 3H), 1,44-1,73 (m, 5H), 1,73-2,05 (m, 3H), 2,33 (synlig t, J_ 7,3, 2H), 3,92 (m, 1H), 4,16 (br s, 1H), 4,38 (m, 1H), 4,64 (m, 1H), 5,31 (m, 1H);

MS (HR-FAB) m/z 519,2671 (M+H beregnet for C22H39N4Oio, 519,2666).

Eksempel 30

[ S-( R » R *)]-N-[(R)-6-karhnksy-N2-[[ 7- karhnksy- 1 - meryl- 7-[( 1 - nksnhepryl) ammn] etnksy]-karhrmy1]- T,- 1ysyl]- T)- a1anin ( 1 a- 13)

Hydrogenolyse av forbindelse 1a- 3 (22,0 mg, 0,024 mmol) i henhold til metoden ifølge Eksempel 28, gir 1a- 13: NMR (CD3OD) 8 0,91 (m, 3H), 1,19-1,45 [overlappende d (J=6,5, ved 1,25 d), m og d (J=7,3, ved 1,39 d), 12H], 1,47-1,72 (m, 5H), 1,72-2,10 (m, 3H), 2,29 (synlig t, J=7,5,2H), 3,68 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 5,17 (m, 1H); MS (HR-FAB) m/z 519,2651 (M + H beregnet for C22H39N4O10, 519,2666).

Eksempel 31

[ R-( R »] S*)]- N-[( R)- fi- karhnlcsy- N2-[[ 7- lfar>inVsy- 1 - metyl- 7-[( 1 - nksnhepty1) aminn] etnksy]-karhony1]- T,- lysy1]- n- alanin ( 1 a- 14)

Hydrogenolyse av forbindelse la- 4 (36,6 mg, 0,04 mmol) i henhold til metoden ifølge Eksempel 28, gir 1a- 14-

NMR (CD3OD) 8 0,90 (m, 3H), 1,22-1,36 [overlappende d (J=6,2, ved 1,24 d) og m, 12H], 1,36-2,02 (m, 8H), 2,32 (m, 2H), 3,60-3,80 (m,lH), 4,09 (m, 1H), 4,36 (m, 1H), 4,61 (m, 1H), 5,30 (br s, 1H); MS (HR-FAB) m/z 519,2667 (M + H beregnet for C22H39N4O10, 519,2666).

Eksempel 37

( R)- N-[( R)- 6- karbnksy- N2-[[ 7.- karbnksy- 7-[( 1- nksnhepty1) aminn] etnksy] karhr>nyl]- T,-lysy1]- D- a1anin ( 1 a- 1 5)

Hydrogenolyse av forbindelse 1a- 5 (247 mg, 0,27 mmol) i henhold til metoden ifølge Eksempel 28, gir 1a- 15: NMR (CD3OD) 8 0,90 (m, 3H), 1,16-1,46 [overlappende d (J=7,0, ved 1,40 d) og m, 9H], 1,46-2,05 (m, 8H), 2,25 (m, 2H), 3,69 (br s, 1H), 4,11 (br s, 1H), 4,36 (m, 3H), 4,63 (br s, 1H);

MS (HR-FAB) m/z 505,2505 (M +H beregnet for C21H37N4O10, 505,2509).

Eksempel 33

[ R-( R* JR*) 3- N-[( R)- 6- karhnksy- N2-[[ 7- karhnksy- 1- metyl- 7-[[( 4- penryleyk1nheksyl)-karbnny1] aminn] etnksy] karhnny1- T.- 1ysy1]- D- a1anin ( 1 a- 16)

Hydrogenolyse av forbindelse 1a- 6 (17 mg, 0,017 mmol) i henhold til metoden ifølge Eksempel 28, gir 1a- 16-

NMR (CD3OD) 8 0,90 (m, 5H), 1,10-1,75 [m, 19H, med overlappende 1,23 (d, J=6,6) og 1,45 (d, J=7,4)], 1,75-2,05 (m, 8H), 2,24 (m, 1H), 3,60 (m, 1H), 4,07 (m, 1H), 4,44 (m, 1H), 4,90 (m, 1H, under OH signal), 5,14 (m, 1H); MS (HR-FAB) m/z 609,3099 (M + Na, beregnet for C27H46N4OioNa, 609,3112).

Eksempel 34

[ R-( R <*> R *)]- N-[( R)- 6- karhnksy]-[^ 2-[[?-[[( 4^ - mety1etnksy]karho nyl]- T.- lysyl]- D- alanin ( 1 a- 17)

Hydrogenolyse av forbindelse 1a- 7 (33 mg, 0,034 mmol) i henhold til metoden ifølge Eksempel 28, gir 1 a- 17: NMR (CDsOD) 5 0,99 (m, 3H), 1,10-2,05 (m, 16H), 3,55 (m, 2H), 3,65 (m, 1H), 3,96 (m, 2H), 4,07 (m, 1H), 4,38 (m, 1H), 4,90 (m, 1H, under OH-signal), 5,18 (m, 1H), 6,85 (m, J=8,6, 2H), 7,22 (m, J=8,6, 2H); MS (HR-FAB) m/z 597,2757 (M + H, beregnet for C27H41N4O1,, 597,2772).

Eksempel 35

[ R-( R * ;R *)]- N-[( R)- 6- karbnksy- N2-[[ 2-[ karhnksy[(1 -oksnhep tyl) amino] mety1] propnksy]-karhnnyl]- T,- 1ysy1]- D- a. 1anin ( 1 a- 1 8)

Hydrogenolyse av forbindelse 1a- 8 (247 mg, 0,27 mmol) i henhold til metoden ifølge Eksempel 28, gir 1a- 18

Eksempel 36

[ S-( R* JS*)]- N-[( R)- 6- karhnksy- N2-[[ 7-[ karhnksy[ ri- nksnhepfyl) aminn] mery1] prnpnksy]-karhnny1]- T,- 1ysy1]- D- a1anin ( 1a- 19)

Hydrogenolyse av forbindelse 1a-9 (247 mg, 0,27 mmol) i henhold til metoden ifølge Eksempel 28, gir la=19_.

De etterfølgende eksemplene 37-78 beskriver fremstilling av mellomprodukter.

Eksempel 37

N-(1 -oksoheptyl)-T -serin-metylester (7j)

L-serin-metylester-hydroklorid omdannes til 2j. i henhold til fremgangsmåten beskrevet i Eksempel 1: NMR 5 0,89 (t, J=6,9, 3H), 1,30 (m, 6H), 1,65 (m, 2H), 2,28 (synlig t, J_ 7,5, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,96 (m, 2H), 4,69 (m, 1H), 6,80 (br s, 1H); MS (HR-EI) m/z 231,1465 (M beregnet for C11H21NO4, 231,1459); [a]D<26>+22±l (CHCI3).

Eksempel 38

( S)- 2] 7- dimety1- 3-( 1 - nksohepty1)- 4- oksa?oliHinkarhnksylsyre- mety1fistflr ( 8a)

Forbindelse 2j. (320 mg, 1,38 mmol) og p-TSA (40 mg) oppløses i tørr aceton (2 ml) og 2,2-dimetoksypropan (2 ml). Den resulterende oppløsningen oppvarmes natten over under tilbakeløp. Fast K2CO3 tilsettes, og de flyktige stoffene fjernes i vakuum, hvilket gir et residuum. "Flash" kromatografi (2x21 cm kolonne, 6:1 heksan/EtOAc) av residuet gir Sa som en olje: NMR 5 0,88 (m,3H), 1,29 (m, 6H), 1,57 (s, 3H), 1,62 (m, 2H), 1,70 (s, 3H), 2,15 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 4,20 (m, 2H), 4,46 (m, 1H); [a]D<26> = -47±1 (CHCb).

Eksempel 39

( R)- ?] ?- Himftty1- 3-( 1- nlcsnhRpty1)-4-nksa7n1iflinmRtannl

En oppløsning av 8a (296 mg, 1,09 mmol) i tørr eter (1 ml) behandles med litiumborhydrid (2M oppløsning i THF, 0,55 ml, 1,09 mekv.) under en argonatmosfære. Blandingen omrøres i 3 timer ved tilbakeløp og 18 timer ved romtemperatur. Den resulterende blandingen fortynnes med eter og behandles med metanol. De flyktige stoffene fjernes, og residuet opptas i EtOAcÆkO. Opparbeidelse gir den urensede alkohol som renses ved kromatografi (2:1 heksan/EtOAc): NMR 5 0,88 (m, 3H), 1,30 (m, 6H), 1,54 (s, 3H), 1,62 (s, 3H), 2,35 (m, 2H), 3,30-4,40 (kompleks m, 6H); MS (HR-EI) m/z 243,1837 (M beregnet for C13H25NO3 243,1840);

[a]D<26> = -5±l (CHCb).

Eksempel 40

( S)- 7] 2- Himetyl- 3-( 1- nksnheptyl)- 4- nksa7nlidi n- karhnlcsaldehyH ( 9a)

En oppløsning av oksalylklorid (105 ul, 1,23 mmol) i CH2CI2 (2,75 ml) avkjøles til

-60°C. En oppløsning av DMSO (192 ul) i CH2CI2 (0,55 ml) tilsettes i løpet av en periode på 5 minutter, og den resulterende, melkeaktige blandingen omrøres i 15 minutter ved -60°C. Alkoholen fra Eksempel 39 (133 mg, 0,55 mmol) i CH2CI2 (0,55 ml) settes til blandingen i løpet av 5 minutter. Badet får oppvarmes til -20°C (20 min.), og den klare oppløsningen omrøres i 20 minutter ved -20°C. Trietylamin (0,77 ml) og H2O (3,4 ml) tilsettes, og blandingen omrøres i 5 minutter ved omgivelsestemperatur. Opparbeidelse med CH2CI2 gir en rå olje som renses ved kromatografi (1,5 x 20 cm, 3:1 sammen), hvilket gir 9a: NMR 5 0,85 (m, 3H), 1,30 (m, 6H), 1,60 (s, 3H), 1,60-1,70 (m, 2H), 1,70 (s, 3H), 2,00-2,40 (m, 2H), 4,00-4,30 (m, 3H), 9,65 (d, J_l, 1H).

Eksempel 41

( 4S)- n- eryl- ?J7- Himetyl-3-(1 - oksnhepty1)- 4- r>ksazoliriinmetanol ( 1 Oa)

En oppløsning av 9a (108 mg, 0,44 mmol) i eter (1 ml) settes dråpevis til en kald (5°) oppløsning av EtMgBr (3M i eter, 0,36 ml). Det kalde badet fjernes, ett krystall jod tilsettes til blandingen, og omrøring fortsettes i 1,5 time ved romtemperatur. Den resulterende blandingen fortynnes med EtOAc og vaskes med en mettet, vandig NH4CI-0PP-løsning. Den vandige fasen ekstraheres på ny, og den samlede, organiske oppløsning tørres og inndampes, hvilket gir urenset 10a: NMR 5 0,88 (m, 3H), 1,05 (m, 3H), 1,30 (m, 6H), 1,45 (m, 2H), 1,57 (s, 3H), 1,50-1,75 (m, 5H), 2,10-2,60 (m, 2H), 3,50-4,50 (m, 4H); MS (EI) m/z 271 (M).

Eksempel 42

R-( R* S*) ng S-( R* JR*)- N-[ 7- hyHrnksy- 1-( hydrnksymRtyl) hiityl- heptananiiH

Urenset 10a (107 mg, 0,39 mmol) oppløses i kald TFA (0,38 ml) inneholdende H2O (_1%), og oppløsningen omrøres i 45 minutter ved 0°. De flyktige stoffene fjernes, og residuet opptas i EtOAc og vaskes med mettet NaHC03 og saltoppløsning. Etter tørring og fjernelse av oppløsningsmidlet, isoleres 1 la (2:1 blanding av diastereomerer) ved kromatografi (1,5 x 18 cm, 2% MeOH i CH2CI2): NMR 0,85-1,05 (m, 6H), 1,30 (m, 6H), 2,23 (m, 2H), 3,65-4,05 (m, 4H), 6,20 og 6,40 (to bred d, henholdsvis 2:1 forhold, 1H); MS (HR-EI) m/z 231,1887 (M beregnet for C12H25NO3, 231,1940).

Eksempel 43

[ S-( R* , R*)]- N-[ 1-[[[( 1 ] 1- Himetyletyl) difenylsi1y1] nksy] metyl]- 7- hyHrnksyhiityl] heptanamiH am

En blanding av lia (1,0 mmol), t-butyldifenyl-silylklorid (1,2 mmol), TEA (1,2 mmol) og DMAP (0,04 mmol) i CH2CI2 (1,5 ml) omrøres i 20 timer ved romtemperatur i henhold til S. K. Chaudhary og O. Hernandez (Tetrahedron Lett., 1979, 99). Den resulterende blandingen fordeles mellom CH2CI2 og H2O. Lagene separeres, og den organiske fasen vaskes med en mettet NH4Cl-oppløsning og tørres. Fjernelse av oppløsningsmidlet gir en blanding som renses ved kromatografi. Det mindre polare produkt identifiseres som 10c.

Eksempel 44

[ R-( R* S*)]- N-[ 1-[[[( 1 J- dimety1ety1) Hifenykilyl] oksy] mety1]- 7- hyHrnksyhiity1] heptanamiH am

Den mer polare isomer isolert i Eksempel 43 karakteriseres som lOd.

Eksempel 45

[ S- rR* R*)]- N-[ 1-[[[( 1J1- HimetyletynHlfenylsl1y1] nksy] mety1]- 7-( fenylmetnksy heptanamid ( 12c)

En oppløsning av 10c (1 mmol) i DMF (0,60 ml) og BnBr (0,96 ml, 8 mmol) behandles med n-Bu4N<+>I" (37 mg, 0,1 mmol). En dispersjon av NaH (60% iolje, 1,3 mekv.) tilsettes porsjonsvis til oppløsningen over en periode på 1 time. Blandingen omrøres natten over ved romtemperatur. Eter-opparbeidelse gir en rå olje som renses ved kromatografi. Hovedproduktet karakteriseres som 12c.

Eksempel 46

[ R-( R* S*)]- N-[ 14[[( 11- Him^ heptanamid (17H)

Forbindelse 17d fremstilles fra 10d ved fremgangsmåten ifølge Eksempel 45.

Eksempel 47

[S-(R* R*)]- N-[ 1 -( hydmksymetyl)-7-(fenylmetnksy)hntyl]heptanamiH (1 V)

Forbindelse 12c (1 mmol) oppløses i THF (1,1 ml) og behandles med en n-BvuN<+>F" oppløsning (IN i THF, 3,0 ml) (i henhold til E. J. Corey og A. Venkateswarlu, J. Amer. Chem. Soc, 1972, 94, 6190). Etter 40 minutter ved romtemperatur, bråkjøles reaksjonsblandingen med is, og blandingen fordeles mellom eter og vann. Det vandige laget ekstraheres påny med eter, og de samlede organiske lag vaskes med saltoppløsning, tørres, og oppløsningsmidlet fjernes, hvilket gir 13c som renses ved kromatografi.

Eksempel 48

[ R-( R* S*)]- N-[ 1 -( hydrnksymetyl)-7-(fenylmetnksy)-hiityl]heptanamiH (1 3H)

Forbindelse 13H fremstilles fra 17d i henhold til fremgangsmåten beskrevet i Eksempel 47.

Eksempel 40.

N-(1 -oksnhepty1)-3-(feny1metoksy)-treo-D-norva1in (14c)

Alkoholen Lic (1 mmol) i DMF (4 ml) behandles med pyridinium-dikromat (3,5 mekv.) i henhold til fremgangsmåten ifølge (Corey og Schmidt, Tetrahedron Lett., 1979, 399). Etter 18 timer helles blandingen over is. Eter-opparbeidelse gir 14c som renses ved kromatografi.

Eksempel ^ 0

N-( 1 - oksr>hepty1)- 3-( fenylmetoksy)- erytro- D- norvalin ( 14d)

Forbindelse 14d fremstilles fra 13d ved fremgangsmåten ifølge Eksempel 49.

Eksempel ^1

3- hydroksy- N-( 1 - oksohepty1)- treo- D- norva1in ( 7c- 8)

En oppløsning av 14c i EtOAc/EtOH hydrogeneres i henhold til fremgangsmåten ifølge Eksempel 28. Råproduktet identifiseres som 2c- 8 og anvendes i Eksempel 15.

Eksempel S7.

3- hydroksy- N-( 1 - oksohepfy1)- erytro- P- norvalin ( 7c- Q)

Forbindelse 7c- Q fremstilles fra 14d ved fremgangsmåten ifølge Eksempel 51. Råproduktet anvendes i Eksempel 16.

Eksempel 53

N2-( 1 - oksyhepryl)- D- asparagin ( 22a)

D-asparagin 21a (4,5 g, 29,9 mmol) omdannes til 22a ved fremgangsmåten ifølge Eksempel 1. En blanding av vann og THF anvendes som oppløsningsmiddel, og 2N vandig NaOH erstattes med en blanding av trietylamin og 0,5N NaHCCb. Det urensede, faste stoff renses ved omkrystallisering fra metylalkoholeter.

NMR (CD3OD) 5 0,90 (t, 3H), 1,61 (m, 2H), 2,23 (t, 2H), 2,75 (m, 2H), 4,71 (dd, 1H); MS (LR-CI) m/z 245 (M+H) beregnet for O1H21N2O4 245.

Eksempel 54

3- aminn- N-( 1 - nksohepty1)- D- alanin ( 2g- 1)

Forbindelse 22a (2,21 g, 9,0 mmol) settes til en oppløsning av bis(trifluoracetoksy)-jodbenzen (5,83 g, 13,57 mmol) i 51 ml N,N-dimetylformamid og 41 ml vann. Blandingen omrøres i 15 minutter og behandles med pyridin (1,46 ml, 18,09 mmol). Den resulterende oppløsning omrøres i 18 timer ved romtemperatur. De flyktige stoffene fjernes, og residuet fortynnes med 90 ml vann. Blandingen vaskes med 3 x 50 ml eter. Det vandige lag fraskilles og inndampes. Utgnidning av den resulterende væske med eter gir et hvitt, fast stoff som karakteriseres som 2g-1: NMR (CD3OH) 5 0,61 (t, 3H), 1,35 (m, 2H), 2,05 (t, 2H), 3,0-3,2 (m, 2H), 4,40 (m, 1H): MS (HR-FAB) m/z 217,1555 (M+H, beregnet for C10H21N2O3, 217,1552).

Eksempel 55

3- amino- N-( 1 - nksnhepty1)- D- a1anin-feny1m efylester- mnnnhydrnklnrid (?.h-1)

Acetylklorid (3,05 ml, 42,87 ml) settes dråpevis over en periode på 10 minutter til en isavkjølt oppløsning av benzylalkohol (10 ml, 96,63 mmol). Den resulterende oppløs-ning omrøres i ytterligere 30 minutter. Isbadet fjernes deretter, og forbindelse 2g- 1 (1,32 g, 6,12 mmol) tilsettes. Oppløsningen omrøres natten over ved romtemperatur, og de flyktige stoffene fjernes ved Kugelrohr destillasjon. Residuet utgnis med eter og omkrystalliseres deretter fra etylalkohol, hvilket gir et hvitt, fast stoff som identifiseres som 2h- 1: NMR (CDCb) 5 0,75 (t, 3H), 1,45 (m, 2H), 2,20 (t, 2H), 3,40 (m, 2H), 4,80 (br s, 1H), 5,10 (s, 2H), 7,62 (br s, 1H);

MS (HR-FAB) m/z 307,2017 (M+H, beregnet for C17H27N2O3 307,2022).

Eksempel 56

[ S-( R* ;R*)]- N-[ 7- hyHrnksy- l-( hyirrnksymetyl) prnpyl]- heptanamiH ( 1 le)

Til en oppløsning av ( 2e- 2) (1,0 g, 3,11 mmol) i eter, settes under oppvarmning dråpevis ved romtemperatur, en oppløsning av litiumborhydrid (1,60 ml, 3,2 mmol) i tetrahydrofuran. Reaksjonsblandingen tilbakeløpsbehandles i 3 timer, fortynnes med eter og behandles langsomt med metanol inntil brusingen stanser. De flyktige stoffene fjernes, hvilket gir et residuum som fordeles mellom vann og etylacetat. De organiske lag fraskilles, vaskes med saltoppløsning, tørres og filtreres. Filtratet inndampes til en gjenværende olje som renses ved kromatografi under eluering med 3:1 etylacetat-heksaner, hvilket gir 560 mg av det ønskede produkt som en olje.

NMR 5 1,20 (d, 3H), 1,65 (m,2H), 2,26 (t, 2H), 4,19 (q, 1H), 6,23 (br d, 1H), MS (CI) m/z 218 (M+H, beregnet for C11H24NO3 218).

Eksempel 57

[ S-( R* JR*)]- N-[ 1-[[[( 1 l- Himptylpfy^HjmptykilylJnksyjTnetylj^-hyHrnksyprnpyl]-heptanamid (10c)

En blanding av lic, (1,945 g), t-butyldimetylsilylklorid, (1,4165 g), trietylamin (951 mg, 1,31 ml) og 4-dimetylaminopyridin (42,76 mg) i 13 ml metylenklorid omrøres under argon ved romtemperatur i 18 timer. Reaksjonsblandingen fortynnes med metylenklorid, og vann tilsettes. Det organiske laget fraskilles, vaskes med vann, tørres og inndampes, hvilket gir 3,25 g av en gjenværende olje som renses ved kromatografi ved eluering med 1:5 etylacetat/heksan, hvilket gir 2,30 g av det ønskede produkt som en olje. NMR 5 0,08 (d,6H), 0,89 (t, 3H), 0,90 (s, 9H), 1,16 (d, 3H), 1,65 (m, 2H), 2,24 (t, 2H), 3,47 (s, 1H), 3,84 (m,lH), 3,85 (s,2H), 4,28 (q,lH), 6,13 (br d, 1H); MS (FAB) m/z 332 (M+H beregnet for Ci7H38N03Si 332).

Eksempel 58

( S)- N-[ 1 -[[[( 131 - dimety1p;ty1) Hirnetylsily1] oksy] rne1yl]- 2- nksnprnpyl]- heptariarnid ( 77r.)

En blanding av (10c) (2,30 g, 6,94 mmol) og pyridinium-dikromat (10,62 g, 28,2 mmol) i 20 ml N,N-dimetylformamid omrøres under argon i 18 timer. Reaksjonsblandingen fortynnes med 100 ml vann og ekstraheres med etylacetat (3 x 40 ml). Det organiske laget fraskilles, vaskes med vann og saltoppløsning, tørres og inndampes, hvilket gir 1,87 g av en gjenværende, brun væske. Væsken renses ved kromatografi ved anvendelse av 1:6 etylacetat/heksan, hvilket gir 997 mg av det ønskede produkt som en olje. NMR 5 0,83 (s, 9H), 1,61 (m, 2H), 2,22 (t, 2H), 2,23 (s, 3H), 3,82 (dd, 1H), 4,09 (dd, 1H), 4,57 (m, 1H), 6,42 (brd, 1H);

MS (FAB) m/z 330 (M+H beregnet for CnHseNCbSi 330).

Eksempel 59

[ R-( R* S*)]- N-[ 1-[[[( 1] 1-Himety1etyl)Himety1si1y13nksy]mery1]-9-[(feny1^ propyljheptanamid (7.8c)

En blanding av 22c (960 mg, 2,91 mmol) i 5 ml metylalkohol inneholdende molekylsikt omrøres ved romtemperatur i 30 minutter. Under omrøring tilsettes natrium-cyanoborhydrid (365 mg), og reaksjonsblandingen omrøres under argon i 18 timer. Reaksjonsblandingen filtreres og inndampes til et residuum som fordeles mellom etylacetat og vandig natriumbikarbonat. Det organiske lag fraskilles, vaskes med saltoppløsning, tørres og inndampes, hvilket gir 1,224 g av en gjenværende gul væske. Residuet renses ved kromatografi ved anvendelse av 2:5 etylacetat/heksan, hvilket gir 561,2 mg av det ønskede produkt 2&c som en olje.

NMR 8 0,84 (s, 9H), 1,09 (d, 3H), 1,61 (m, 2H), 2,20 (t, 2H), 3,08 (m, 1H), 6,22 (br d, 1H), 7,32 (m, 5H); MS (HR-FAB) m/z 421,3245 (M+H beregnet for C24H44N202Si 421,3250).

Eksempel 60

[ R-( R* R*)]- N-[ 1 -[[[(] 1 -Himetyletyl)Himetylsilyl]nksy]mefyl]-7-[(fenylmetyl)ammn]-propyljheptanamiri ( ?. Rd)

Ytterligere eluering av kromatografi-kolonnen i Eksempel 59 gir 239,4 av det ønskede produkt 28d som en olje.

NMR 8 0,84 (s, 9H), 1,18 (d, 3H), 1,61 (m, 2H), 2,18 (t, 2H), 2,80 (m,lH), 6,47 (br d, 1H), 7,31 (m, 5H);

MS (HR-FAB) m/z 421,3253 (M+H beregnet for C24H44N202Si 4213250).

Eksempel 61

[ R-( R* JS*)]- N-[ ?.- amino- 1-[[[( 1, 1- dimetyleryl)- dimetylsily l] oksy] metyl] propyl] heptanamid (25c)

En blanding av 2Sc (208,6 g, 0,50 mmol) og 104 mg Pd(OH)2 i 15 ml metylalkohol rystes i et Parr apparat under hydrogentrykk i 18 timer. Reaksjonsblandingen filtreres gjennom diatoméjord og filtratet konsentreres, hvilket gir 169 mg av det ønskede produkt 25x som en olje.

NMR 8 0,84 (s, 9H), 1,05 (d, 3H), 1,60 (m, 2H), 2,10 (t, 2H), 3,31 (m, 1H), 6,47 (br d, 1H).

Eksempel 67

[ R-( R*, R*)]- N-[ 7- aminn- 1-[[[( 1 ;1- Himetyletyl) dimetylsi1y l] oksy] metyl] prnpyl]- heptan-amiri (7,5d)

Forbindelse 25d fremstilles fra 7. 8d ved fremgangsmåten anvendt for å fremstille 25c

Eksempel 63

[ S-( R* S*)]-[ 3-[[( 1 1 - dimety1ety1) dimetylsi1y1] oksy]- 1 - mety1- 7-[( 1 - nksoheptyl)aminn-propyl] feny1- metylester- karhaminsyre ( 76c)

Til en oppløsning av 25c (164 mg, 0,496 mmol) i l ml metylenklorid ved 0°C under argon, settes trietylamin (201 mg, 276,5 ul, 1,98 mmol), fulgt av dråpevis tilsetning av benzylklorformiat (169 mg, 142 ul, 0,992 mmol). Reaksjonsblandingen får oppvarmes til romtemperatur og omrøres deretter i 18 timer. Reaksjonsblandingen fortynnes med metylenklorid, og vann tilsettes. Det organiske laget fraskilles, vaskes med saltoppløsning, tørres og konsentreres, hvilket gir 230 mg av en gjenværende, blekgul olje. Residuet renses ved kromatografi ved anvendelse av 1:5 etylacetat/heksan, hvilket gir 92 mg av det ønskede produkt 26c.

NMR 8 0,90 (s, 9H), 1,21 (d, 3H), 1,56 (m, 2H), 1,09 (t, 2H), 3,69 (2 dd, 2H), 3,84 (m, 1H), 3,93 (m, 1H), 5,07 (q, 2H), 5,17 (d, 1H), 6,15 (br d, 1H), 7,34 (m, 5H),

MS (FAB): m/z 465 (M+H beregnet for C25H45N204Si 465).

Eksempel 64

[ R-( R* JR*)] 43-[[( 1J1- dimety1ery1) dimerylsilyl] nksy]-1-mety l- 74( 1- oksnhepty1) aminn^^ propyl ] fenylm ety 1 ester-karham i n syre(7 6d)

Forbindelse ?. 5d beskyttes i henhold fremgangsmåten anvendt for fremstilling av 26c, hvilket gir 26d.

Eksempel 65

[ S-( R* JS*)]-[ 3- hyHroksy- 1- metyl- 7-[( 1- oksoheptyl) amino] propyl]- karhaminsyre- fenylm etyl ester ( 29c)

Forbindelse 26c desilyleres i henhold til metoden ifølge Eksempel 47, hvilket gir 29c.

Eksempel 66

[ R-( R* ;R*)]-[ 3- hydroksy- 1- metyl- 2-[( 1- oksoheptyl) amino] propyl]- karhaminsyre- fenylmetylester ( 79H)

Forbindelse 26d desilyleres som i Eksempel 65, hvilket gir 22d.

Eksempel 67

[ S-( R* 3S*)]-7-[( 1- oksoheptyl) amino]- 3-[[( fenylmetoksy) karhnnyl] amino] hi] tansyrR ( 30c)

Oksydasjon av forbindelse 22c i henhold til metoden ifølge Eksempel 49 gir 30c.

Eksempel 68

[ R-( R * 3R*)]- 7-[( 1 - oksoheptyl) amino]- 3-[[( fenylmetoksy) karhnnyl] amino]- hntansyre ( 30H)

Forbindelse 7. 9d omdannes til 30d i henhold til fremgangsmåten ifølge Eksempel 67.

Eksempel 69

[ R-( R* 3S*)]- 3- arninn- 7-[( 1 - oksnhepty1) arnino]- hiitansyre ( 2g- 2)

Hydrogenolyse av 3Jk i henhold til Eksempel 28 gir forbindelse 2g=2.

Eksempel 70

[ R-( R* 3R*)]- 3- aminr>-7-[(1 -oksnhepty1)aminn]hiitansyre (2g-3)

Forbindelse 30d omdannes til 2g- 3 i henhold til Eksempel 69.

Eksempel 71

[ R -( R * 3 S * )] - 3 - am i nn- 7- [( 1 - nksoheptyl ) am inn] - hi itan syre- m etyl ester

Forestring av 2g=2 i henhold til Eksempel 55, ved anvendelse av MeOH som alkohol, gir 2b- 7 som hydroklorid-saltet.

Eksempel 72

[ R-( R* 3R*)]- l- aminr)- 7-[( 1- nksohepty1) aminn] hutansyre- metylester ( 2h- 3)

Forbindelse 2g- 3 forestres som i Eksempel 71, hvilket gir 2h=3. som hydroklorid-saltet.

Eksempel 73

( S)- iS- nksn- 3-[( fenylmetr) ksy) karhnnyl]- 4- nksa7. nlidinprnpansyre ( 43c)

En blanding av 100 g (355 mmol) N-benzyloksykarbonyl-L-Glu (42 c) og 213 g paraformaldehyd oppvarmes under tilbakeløp i toluen (1 1). Etter 4 timer avkjøles den resulterende oppløsningen til romtemperatur og ekstraheres med meitet natriumbikarbonat-oppløsning (5 x 150 ml). De vandige lagene samles, fordeles med 400 ml etylacetat og surgjøres med fast natriumbisulfat. Lagene separeres, og det organiske lag tørres over magnesiumsulfat og konsentreres deretter, hvilket gir 89.72 g av den urensede syren som en viskøs, gul olje: NMR 5 7,38 (m, 5H), 5,6 (br s, 1H), 5,21 (d, J=4,7 Hz, 1H), 5,19 (s, 2H), 4,41 (t, J=6 Hz, 1H), 2,6-2,1 (m, 4H).

Eksempel 74

( S)- 5- oksn- 3-[( fenylmetnksy) karbnnyl]- 4- nksa7r) liflin- prnpannl ( 44c)

En oppløsning av 27 g (92,7 mmol) av den urensede syren (43c) i 200 ml THF avkjøles til 0°C, og 13 ml (10,7 g, 141 mmol) boran-metylsulfid-kompleks tilsettes dråpevis via en tilsetningstrakt. Reaksjonen får oppvarmes gradvis til romtemperatur og omrøres i 12 timer. Den resulterende blandingen konsentreres i vakuum, hvilket gir et hvitt, glassaktig materiale som opptas i 500 ml metylenklorid og behandles med pyridinium-klorkromat (61 g, 281 mmol) ved 0°C i nærvær av 3Å molekylsikt. Blandingen får oppvarmes til romtemperatur og omrøres i 3 timer. Blandingen filtreres gjennom diatoméjord med eter (200 ml) og konsentreres deretter. Residuet opptas i eter og filtreres igjen gjennom diatoméjord med eter og konsentreres, hvilket gir 13,22 g av urenset aldehyd som en lysegrønn olje;

NMR 5 9,80 (br s, 1H), 7,40 (m, 5H), 5,55 (br s, 1H), 5,20 (m, 3H), 4,38 (t, J=6,0 Hz, 1H), 2,6-2,1 (m, 4H).

Eksempel 7S

4-[4-[[(111 -dimety letf>ksy) karhnnyl] amino]- 5- metnksy- 5- nksn- 3- pentenyl]-5-nksn-3-nksa7.nlidi n- karhnksylsyre- fenylmerylester ( 46c)

Til en oppløsning av 15,1 g av fosfonatet 45 i 300 ml metylenklorid ved -78°C settes dråpevis 102 ml 0,5M kalium-heksametyldisylylamid-THF-oppløsning. Reaksjonsblandingen omrøres i 10 minutter, og 18 g urenset aldehyd (44c) i 30 ml metylenklorid tilsettes til enolat-oppløsningen. Blandingen omrøresi 3 timer under oppvarmning til romtemperatur. Reaksjonsblandingen behandles med 100 ml vann og ekstraheres med 2x300 ml eter. De organiske ekstraktene samles og vaskes med 200 ml vann og 50 ml salt-oppløsning. Etter tørring over magnesiumsulfat reduseres volumet. Residuet kromatograferes under anvendelse av en variabel gradient av heksan/etylacetat. E-isomeren (2,4 g) elueres først, fulgt av 15,4 g av den ønskede Z-isomer 46c

NMR 5 1,45 (s, 9H), 2,00-2,40 (M, 4H), 3,74 (s, 3H), 4,36 (b t,lH), 5,20 (M, 4H), 5,54 (b s, 1H), 6,43 (b t, 1H), 7,37 (m, 5H).

IR (ren) cm"<1>: 3350 (s), 1800 (s), 1740 (s); MS (CI): m/z 466 (M + NH4): 410 (M-C4H8)<+>; 349 (M-C4H8C02+H)<+>; [a]D<26> +68 ± 1.

Eksempel 76

( 7,)- N-[ 5 6- HirlehyHrn- N 6 -[( 1 Jl- Himetyletnksy)- karhnnyl]- 6-( metnksykarhnnyl)-N 2-[(fenylmetnksy)ka rhnnyl]- T ,- lysy1]- D- alanin- metylester ( 47c)

En blanding av 3,3 g D-alanin-metylester og 7,1 g 46c oppvarmes til 140°C i 10 minutter, hvoretter ytterligere 1,6 g D-alanin-metylester tilsettes. Oppvarmning fortsettes ved 140°C i ytterligere 10 minutter. Etter avkjøling til omgivelsestemperatur kromatograferes råproduktet på silikagel ved anvendelse av variabel gradient heksan/etylacetat. Renset produkt (6,7 g) utvinnes. Materialet krystalliseres fra heksanereter, hvilket gir 5,8 g av det ønskede produkt 42c som et fast stoff.

NMR 5 1,43 (s, d, 12H); 1,80-2,10 (m, 2H); 2,23-2,36 (m, 2H); 3,72 (s, 3H); 3,76 (s, 3H); 4,15-4,27 (m, 1H); 4,50-4,60 (m, 1H); 5,11 (b s, 2H); 5,76 (b s, 1H); 6,38 (b s,lH); 6,47 (b t, 1H); 6,81 (b s, 1H); 7,34 (m, 5H);

<13>C-NMR: 17,82 (-CH£H3); 24,33 (-CH2-CH2); 28,02 (C(CH3)3); 30,99 (-CH2CH=C); 47,94 (-CHCH3); 52,17 (-OCH3); 52,29 (-OCH3); 54,28 (OCCHNH); 66,93 (-CH2Ar); 80,43 (-OC(CH3)3); 126,57 (-HNC=C); 127,86 (fenylring-karbon); 127,94 (fenylring-karbon); 128,12 (fenylring-karbon); 128,28 (fenylring-karbon); 135,98 (fenylring-karbon);

153,45 (OCONH); 156,21 (OCONH-); 165,13 (-C.ONH-); 171,04 (-C.O2-); 172,99 (-CO2-). IR (KBr, cm"<1>) 3300 (s); 1720 (s); 1690 (s); 1650 (s); 1510 (s);

MS(CI) m/z 522 (MH)<+>; 466 (MH-C4H8)<+>; 422 (MH-C4H8C02)<+.>

MS (FAB) m/z 544 (M+Na)<+>; 522 (MH)<+>; 466 (MH-C4H8)<+>;

Analyse, beregnet: C 57,57; H 6,76; N 8,06;

funnet: C 56,98; H 6,66; N 7,88.

[a]D26 -7±l;sm.p. 120-121°C.

Eksempel 77

N-[ N6-[( 1; 1 - mmetyletnksy) karhf) nyl]-( R)- 6-( mRtnksykarhonyl)-N2-[(feny1metnksy)-karhonyl]- T - 1ysyl]- D- alanin- metylester ( 40c)

En oppløsning av 8,5 g 47c i 25 ml eddiksyre og 250 ml THF hydrogeneres ved 3,36 kg/cm2 hydrogen på 0,5 g (bicyklo(2.2.1)hepta-2,5-dien[2S,3S]bis(difenylfosfino)-butan)rhodium(I)perklorat i 18 timer. Reaksjonsblandingen filtreres og inndampes til et residuum. Residuet kromatograferes under anvendelse av en variabel gradient av heksanetylacetat, hvilket gir 7,9 g av redusert produkt som et residuum. Flere krystalliseringer gir 2,6 g diastereomert ren 40c.

NMR (CDCb) 5 1,40 (d, J=6 Hz,3H); 1,43 (s, 9H); 1,60-1,97 (m, 6H); 3,73 (s,3H); 3,74 (s, 3H); 4,12-4,37 (m,2H); 4,52-4,61 (m,lH); 5,12 (bs, 3H); 5,44-5,55 (b s, 1H); 6,73 (b s, 1H); 7,36 (b s, 5H); <13>C-NMR: 5 18,02 (CH-CH3); 21,12 (CH2-CH2-CH2); 28,23 (-OC(CH3)3); 31,87 (-CH2-CH2-); 32,29 (-CH2CH2-); 47,99 (-CHCH3); 52,23 (-OCH3); 52,38 (-OCH3); 52,75 (OCCHN); 54,41 (OCCHN); 67,01 (-OCH2Ar); 79,97 (-OC(CH3)3); 127,99 (fenylring-karbon); 128,09 (fenylring-karbon); 128,44 (ArCH); 136,13 (ArCC); 155,48 (OCONH); 156,23 (OCONH); 171,10 (-CONH-); 173,03 (-C02-2X);

IR(KBr) (cm"<1>): 3340 (s); 1760 (s); 1740 (s); 1680 (s); 1660 (s); 1660 (s); 1520 (s);

MS (FAB) m/z 546 (M+Na)<+>; 524 (MH)<+>; 424 (MH-C4H8C02)<+>;

Analyse, beregnet: C 57,35; H 7,12; N 8,03

funnet: C 57,23; H 7,27; N 8,03

rotasjon [a]D<25> -9±1; sm.p. 120-121°C.

Eksempel 78

N-[N6-[(1 1 -dime tyletnksy) karhonyl]- R- 6-( metnksykarhnnyl)- T - 1ysyl]- r)- alaninmetylester

En oppløsning av 40c (248 mg, 0,47 mmol) i metanol (8 ml) hydrogeneres over Pd(OH)2 i henhold til Eksempel 28. Etter 3 timer gir filtrering og inndampning et farveløst glass.

NMR (CDCb) 5 3,50 (m,lH), 3,80 (s, 6H), 4,30 (m, 1H), 4,55 (m, 1H), 5,15 (d, 1H), 7,85 (br s, 1H).

De etterfølgende eksemplene 79-90 angår fremstillingen av sluttprodukter I henhold til krav 1.

Eksempel 79

N-[ N6-[ 131 - dimRtyletnksy) karhnnyl]- 6-( metnksykarhnnyl)- N2-[[[ 3- nkso- 7.-[( 1 - oksoheptyl)-aminn]- 3-( feny1metoksy) propyl] amino]karhonyl^ 0 h-1)

En oppløsning av 3x (94,5 mg, 0,24 mmol) i tørr THF (3Å sikt, 0,8 ml) settes dråpevis under argon til en blanding av l,r-karbonyldiimidazol (39,34 mg, 0,24 mmol, tørret over P2O5) i 1,8 ml THF. Blandingen omrøres i 2 timer og 2h-1 (83,3 mg, 0,24 mmol) og TEA (34 ul, 0,24 mm) tilsettes. Den resulterende blandingen omrøres i 18 timer ved omgivelsestemperatur. Blandingen fortynnes med vann og ekstraheres med etylacetat. Det organiske laget fraskilles, vaskes med saltoppløsning, tørres, filtreres og inndampes til et residuum. Residuet renses ved kromatografi med eluering med 1-2% metanol i kloro-form, hvilket gir 109.3 mg 1h- a som et gråhvitt, fast stoff.

NMR 8 0,88 (t, 3H), 2,22 (t, 2H), 3,59 (m, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 4,26 (m, 1H), 4,52 (t, 1H), 4,63 (m, 1H), 5,32 (d, 2H), 5,63 (d, 1H), 7,07 (d, 1H), 7,20 (d, 1H);

MS (HR-FAB) m/z 722,3980 (M+H, beregnet for C35H56N5O11 722,3976).

Eksempel 80

N-[ 6-( metnksykarhnnyl)- N2-[[[ 3- nksr)- ?-[ l- nksn- hepry1) am»nn]-3-(fenylmetnksy)prnpyl]-amino] karhony1]- T ,- lysyl]- D- alanin- metylester ( 1 h- 2)

Til 16 mg 1b- 1 under argon ved 0°C settes 100 ul TFA, fulgt av omrøring i 1 time. De flyktige stoffene avdampes, hvilket gir 11,1 mg 1 h- 2.

NMR (CD3OD) 5 0,80 (t, 3H), 1,30 (d, 3H), 2,15 (t, 2H), 3,32 (m, 1H), 3,56 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 3,95 (m, 1H), 4,15 (m, 1H), 4,30 (q, 1H), 4,38 (m, 1H), 5,07 (d, 2H), 7,28 (m, 5H);

MS (HR-FAB) m/z 622,3435 (M+H, beregnet for C30H48N5O9 622,3452).

Eksempel 81

N-[ N -[[[ 7- karhoksy- 2-[( 1 - oksoheptyl) amino] etyl] amino] karhony1]- N -[( 1J - dimetyl-etoksy) karhony1]- 6-( metoksykarhony1)- T ,- lysyl- D- alanin- metylester ( 1 h- 3)

Til 70 mg 1b- 1 i 7 ml metylalkohol settes 31 mg Pd(OH)2 på karbon, og reaksjonsblandingen hydrogeneres i 4 timer i henhold til Eksempel 28. Reaksjonsblandingen filtreres gjennom en pute av diatoméjord. Filtratet konsentreres, hvilket gir 53,8 mg 1 h-3 som glass.

NMR (CD3OD) 6 0,80 (t, 3H), 2,15 (t, 2H), 3,32 (m, 1H), 3,56 (m, 1H), 3,60 (s, 6H), 3,95 (m, 1H), 4,15 (m, 1H), 4,30 (q, 1H), 4,38 (m, 1H);

MS (HR-FAB) m/z 632,3493 (M+H, beregnet for C28H50N5O11 632,3506).

Eksempel 87

N-[^ 2-[[[ 7- karhoksy- 7-[( 1- oksohepryl) aminofo T ,- lysyl]- n- a1anin- metylester ( 1 h- 4)

Til 40,2 mg lh- 3 under argon ved 0°C settes 300 (il TFA fulgt: av fremgangsmåten ifølge Eksempel 80. De flyktige stoffene avdampes, og konsentratet tørres natten over, hvilket gir 47 mg av lh- 4.

NMR (CD3OD) 6 0,80 (t, 3H), 1,30 (d, 3H), 2,15 (t, 2H), 3,28 (m, 1H), 3,56 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,95 (m, 1H), 4,13 (m, 1H), 4,31 (q, 1H), 4,43 (m, 1H); MS(HR-FAB) m/z 532,2972 (M+H, beregnet for C23H42N5O9 532,2983).

Eksempel 83

( R)- N-[( R) 6- karhoksy- N 2 -[[[ 7- karhoksy- 7-[( 1 - oksohepty1) ammn] etyl] aminn] karhonyl]- N 6-[( 1 > 1 - Himetyletoksy) karhnny1]- T ,- lysyl- D- alanin ( 1 b- 5)

Til en oppløsning av 135,9 mg av lh-1 i 2,7 ml metylalkohol settes 104 mg kalium-karbonat og 0,9 ml vann, fulgt av omrøring ved romtemperatur i 20 timer. Reaksjonsblandingen inndampes til et residuum som oppløses i 1 ml vann og surgjøres med IN HC1 til pH 2. Reaksjonsblandingen omrøres i 5 minutter og ekstraheres 2 x med etylacetat. De samlede organiske ekstrakter vaskes med saltoppløsning, tørres og inndampes, hvilket gir 106 mg av et residuum. Residuet utgnis med 3 x 5 ml eter, og eteren dekanteres. Det faste residuum tørres, hvilket gir 91,7 mg av produktet 1h- 5 som et hvitt, fast stoff.

NMR (CD3OD) 5 0,80 (t, 3H), 2,15 (t, 2H), 3,32 (m, 1H), 3,56 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,15 (m, 1H), 4,30 (q, 1H), 4,38 (m, 1H); MS (HR-FAB) m/z 604,3200 (M+H, beregnet for C26H46N5O11 604,3194).

Eksempel 84

( R)- N-[( R) 6- karbnksy- N2-[[[ 2- karhnksy- 7-[( 1- r>ksnheptyl) aminn] etyl] aminn] karhnny1]- T .-1ysyl]- n- alamn ( 1h- 11)

85,9 mg av lh- 5 under argon behandles med 500 ul TFA i henhold til Eksempel 80. De flyktige stoffene avdampes, hvilket gir et residuum som utgnis med eter 3 x, og eteren dekanteres. Residuet tørres, hvilket gir 77,9 mg 1h- 11 som et hvitt, fast stoff. NMR (CD3OD) 6 0,80 (t, 3H), 2,16 (t, 2H), 3,22 (br s, 5H), 3,58 (m, 2H), 3,85 (m, 1H), 4,15 (m, 1H), 4,30 (d, 1H), 4,40 (m, 1H); MS (HR-FAB) m/z 526,2482 (M+H, beregnet for C2iH38N509 526,2489).

Eksempel 85

[ S-( R* S*)]- N-[ N6-[( 1 s \ - dimety1etnksy) karhnnyl- N2-[[[ 3- metoksy- 1 - mety1- 3- okso- 7-[( 1 - nksnhepty1) aminn] prnpy1] aminn] karhnnyl]-( R)- 6-(metnksykarhnnyl)-T -1ysy1]-D-alanin

(1b-6)

Aminet 2h=2 kobles med aminet 2c i henhold til fremgangsmåten beskrevet i Eksempel 79. Urinstoffet renses ved kromatografi og identifiseres som 1h-6.

Eksempel 86

[ R-( R* R*)]- N- psI^[( 11- Himety1e^^ oksohepty1) aminn] prnpy1] aminokarhony1]-( R)- 6-( metnksykarbony1)-T.-lysyl]-n-alanin-m etyl ester ( 1b- 7)

Aminet 2h- 3 omdannes til urinstoffet 1h- 7 i henhold til Eksempel 85.

Eksempel R7

[ S-( R^ S*)]- N-[( R)- 6- karhnksy- N2-[^ aminn] karhony1]- N6-[( 1 ;1 - Himety1etoksy) karbony1]-T -lysyl]-D-alanin (1h-8)

Hydrolyse av 1h- 6 i henhold til fremgangsmåten ifølge Eksempel 83, gir 1h-8.

Eksempel RR

[ R-( R* JR*)]-N 4( R)- 6- karhnksy- N2-[[ P- karboksy- 1- mety1- 7-[( 1-nksoherty1)aminn]etyl]-amino] karhonyl]- N6-[( 1} 1 - Himetyletnksy) karhonyl]- T - lysy1]- D- alanin ( 1 h- 9)

Hydrolyse av 1h- 7 i henhold til Eksempel 87, gir 1h- 9.

Eksempel 89

[^^♦^♦^^-[( RVfi- karhoksy-^^ tp- karhoksy- l- metyl-^^ ri- oksoheptynaminnjetyl]-amino] karhonyl]- T ,- lysy1]- D- a1anin

( 1h- 17)

Avblokkering av amingruppen i 1h- R med TFA, i henhold til fremgangsmåten ifølge Eksempel 84, gir lh- 17.

Eksempel 90

[ R-( R*] R*)]- N-[( R)- 6- karhoksy- N2-[[[ 7- karhnksy- 1- mety1- 7-[( 1- oksoheptyl) amino] etyl]-aminn] karhonyl]- T ,- 1ysy1]- D- alanin

LLbJl)

Forbindelse 1h- 9 avbeskyttes i henhold til fremgangsmåten ifølge Eksempel 89, hvilket gir 1h- 13

Claims

1. Forbindelse, karakterisert ved formel I: hvor: Ri er valgt fra gruppen bestående av hydrogen, en usubstituert (Ci-C2o)alkyl-gruppe, en substituert cykloalkylgruppe og en substituert benzylgruppe; Ra og R3 er uavhengig valgt fra hydrogen og usubstituert (Ci-C6)alkyl; R2, Rb og Rc er uavhengig valgt fra karboksy eller en metoksykarbonyl, fenoksykarbonyl eller benzyloksykarbonylgruppe; X er oksygen eller NH; og R4 er H eller en aminobeskyttende gruppe valgt fra t-butyloksykarbonyl og benzyloksykarbonyl; hvor substituentene i det tidligere nevnte substituerte cykloalkyl og benzyl er grupper valgt fra gruppen bestående av Ci-Céalkyl og Ci-C6alkoksy; og farmasøytisk akseptable salter derav.

2. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved formelen: hvor Ri er valgt fra gruppen bestående av n-heksyl og 4-n-pentylcykloheksyl; Ra og R3 er uavhengig valgt fra hydrogen og metyl; R2, Rb og Rc er karboksy; X er oksygen; og R4erH.

3. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den er valgt fra gruppen bestående av [S-(R<*>,S<*>)]-N-[(R)-6-karboksy-N<2->[[2-karboksy-l-metyl-2-[(l-oksoheptyl)amino]etoksy]-karbonyl]-L-lysyl]-D-alanin; [S-(R<*>,R<*>)]-N-[(R)-6-karboksy-N<2->[[2-karboksy-1 -metyl-2-[(l -oksoheptyl)amino]etoksy]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanin; [R-(R<*>,S<*>)]-N-[(R)-6-karboksy-N<2->[[2-karboksy-l-metyl-2-[(l-okso-heptyl)amino]-etoksy]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanin; (R)-N-[(R)-6-karboksy-N2-[[2-karboksy-2-[(l-oksoheptyl)amino]-etoksy]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanin; [R-(R*,R*)]-N-[(R)-6-karboksy-N2-[[2-karboksy-1 -metyl-2- [ [(4-pentylcykloheksyl)karbonyl] amino] -etoksy]karbonyl] -L-lysyl]-D-alanin; [R-(R<*>,R<*>)]-N-[(R)-6-karboksy-N-[N<2->[[2-[[(4-butoksyfenyl)acetyl]amino]-2-karboksy-1 -metyletoksy]karbonyl]]-(R)-6-karboksy-L-lysyl]-D-alanin; [R-(R<*>,R<*>)]-N-[(R)-6-karboksy-N2-[[ 1 -[karboksy[( 1 -oksoheptyl)amino]metyl]propoksy]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanin; [S-(R<*>,S<*>)]-N-[(R)-6-karboksy-N<2->[[l-[karboksy[(l-oksoheptyl)-amino]metyl]propoksy]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanin; N-[6-(metoksykarbonyl)-N -[[[3-okso-2-[(l-okso-heptyl)amino]-3-(fenylmetoksy)-propyl]amino]karbonyl]-L-lysyl-D-alanin-metylester; N-[N<2->[[[2-karboksy-2-[(l-oksoheptyl)amino]etyl]amino]karbonyl]-6-(metoksykarbonyl)-L-lysyl]-D-alanin-metylester; (R)-N-[(R)-6-karboksy-N -[[[2-karboksy-2-[( 1 -oksoheptyl)amino]etyl]-amino]karbonyl]-N6-[( 1,1 -dimetyl-etoksy)-karbonyl]-L-lysyl-D-alanin; (R)-N-[(R)-6-karboksy-N<2->[[[2-karboksy-2-[(l-oksoheptyl)-amino]etyl]amino]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanin; [S-(R<*>,S<*>)]-N-[(R)-6-karboksy-N<2->[[[2-karboksy-l-metyl-2-[(l-oksoheptyl)amino]etyl]amino]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanin; [R-(R<*>,R<*>)]-N-[(R)-6-karboksy-N<2->[[[2-karboksy-l-metyl-2-[(l-oksoheptyl)amino]etyl]-amino]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanin; [R-(R<*>,R<*>)]-N-(R)-6-karboksy-N<2->[[2-karboksy-l-metyl-2-[(l-oksoheptyl)-amino]etoksy]karbonyl]-L-lysyl]-D-alanin.

4. Farmasøytisk preparat som er nyttig for å fremkalle produksjon av vekst-faktorer (IL-6 og CSF ) som regulerer nøytrofil produksjon i benmarg hos et pattedyr, karakterisert ved at det omfatter en egnet farmasøytisk bærer og en effektiv mengde av en forbindelse ifølge krav 1.

5. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at en forbindelse med formelen: hvor Ri, R2, R3 og X er som angitt i krav 1, omsettes med en aktivert karbonyl-ekvivalent med formelen: hvor Y er en utgående eruppe, hvilket gir en forbindelse med formelen: hvor Ri, R2, R3 og X er som angitt i krav 1, som videre omsettes med en forbindelse med formelen: hvor Ra, Rb, Rc og R4 er som angitt i krav 1, hvilket gir en forbindelse ifølge krav 1.

6. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at en forbindelse med formelen: hvor Ra, Rb, Rc og Rt er som angitt i krav 1, omsettes med en aktivert karbonyl-ekvivalent med formelen: hvor Y er en utgående gruppe, hvilket gir en forbindelse med formelen: hvor Ra, Rb, Rc og R» er som angitt i krav 1, som videre omsettes med en forbindelse med formelen: hvor Ri, R2, R3 og X er som angitt i krav 1, hvilket gir en forbindelse ifølge krav 1.