【発明の詳細な説明】
ＩＬ−８レセプターアンタゴニスト
発明の分野
本発明は、新規グアニジン置換化合物、医薬組成物、その製法ならびにそのＩ
Ｌ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγおよびＮＡＰ−２介在疾患の治療におけ
る使用に関する。
発明の背景
インターロイキン−８（ＩＬ−８）に対し、好中球誘引／活性化蛋白質−１（
ＮＡＰ−１）、単球由来好中球走化性因子（ＭＤＮＣＦ）、好中球活性化因子（
ＮＡＦ）およびＴ−細胞リンパ球走化性因子などの、多数の異なる名称が使われ
ている。インターロイキン−８は、好中球、好塩基球、およびＴ−細胞のサブセ
ットに対する化学誘引物質である。これは、ＴＮＦ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１βま
たはＬＰＳに曝されたマクロファージ、線維芽細胞、内皮細胞および上皮細胞を
含むほとんどの有核細胞、およびＬＰＳまたはＦＭＬＰなどの走化性因子に曝さ
れた場合に好中球その物により産生される。M．Baggioliniら、J ．Clin．Invest .
84，1045(1989)；J.Schroderら、J ．Immunol.139,3474(1987)およびJ ．Immunol ．144
,2223(1990)；Strieterら、Science 243，1467(1989)およびJ ．Biol．Chem ．264
，10621(1989)；Cassatellaら、J ．Immunol．148，3216(1992)。
ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＥＮＡ−７８およびＮＡＰ−２もケモカイン
αファミリーに属する。ＩＬ−８と同様に、これらのケモカインも異なる名称で
呼ばれてきた。例えば、ＧＲＯα、β、γは、各々、ＭＧＳＡα、βおよびγと
称される（黒色腫成長刺激活性）。Richmondら、J．Cell Physiology 129，375(
1986)およびChangら、J ．Immunol 148，451(1992)を参照のこと。ＣＸＣモチー
フの直ぐ前にＥＬＲモチーフを有するα−ファミリーのケモカインは、すべて、
ＩＬ−８βレセプターに結合する。
ＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγおよびＮＡＰ−２はインビトロで多
く
の機能を刺激する。これらはすべて好中球に対して化学誘引性を有することが明
らかにされたが、ＩＬ−８およびＧＲＯαはＴ−リンパ球および好塩基球走化性
を示した。加えて、ＩＬ−８は正常なおよびアトピー個体の両方から由来の好塩
基球からヒスタミン放出を誘発しうる。ＧＲＯαおよびＩＬ−８はさらに、好中
球からのリソソーム酵素放出および呼吸バーストを誘発しうる。ＩＬ−８はさら
に、新たにタンパク質を合成することなく、好中球上でのＭａｃ−１（ＣＤ１１
ｂ／ＣＤ１８）の表面発現を増加させることが明らかにされた。このことは、好
中球の血管内皮細胞への付着の増加に寄与するかもしれない。多くの公知の疾患
が、多量の好中球浸潤により特徴付けられる。ＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、
ＧＲＯγおよびＮＡＰ−２は好中球の蓄積および活性化を促進するので、これら
のケモカインは、乾癬および慢性関節リウマチを含む広範囲の急性および慢性炎
症性障害と関係付けられてきた[Baggioliniら、FEBS Lett ．307，97(1992);Mill
erら、Crit ．Rev．Immunol.12，17(1992)；Oppenheimら、Annu ．Rev．Immunol． 9
，617(1991)；Seitzら、J ．Clin．Invest．87，463(1991);Millerら、Am ．Rev ．Respir．Dis．146
，427(1992);Donnelyら、Lancet 341，643(1993)]。加えて
、ＥＬＲケモカイン（ＣＸＣモチーフの直前にアミノ酸ＥＬＲモチーフを含有す
るもの）は、さらに止血とも関連付けられてきた。Strieterら、Science 258，1
798(1992)。
インビトロで、ＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγおよびＮＡＰ−２は
、７−トランスメンブラン、Ｇ−タンパク結合ファミリーのレセプターと結合し
、活性化することにより、特にＩＬ−８レセプター、最も顕著にはβ−レセプタ
ーと結合することにより、好中球形状変化、走化性、顆粒放出および呼吸バース
トを誘発する。Thomasら、J ．Biol．Chem．266，14839(1991);およびHolmesら、Science 253
，1278(1991)。このレセプターファミリーの要素に対する非ペプチ
ド性小型分子アンタゴニストの開発が進められてきた。総説については、R．Fre
idinger in:Progress in Drug Research，Vol．40，pp．33-98，Birlthauser Ve
rlag，Basel 1993を参照のこと。したがって、ＩＬ−８レセプターは新規抗炎症
剤を開発するための有望な標的を意味する。
２つの高親和性ヒトＩＬ−８レセプター（７７％相同性）：ＩＬ−８のみと高
親
和性で結合するＩＬ−８Ｒa、およびＩＬ−８に対して、ならびにＧＲＯα、Ｇ
ＲＯβ、ＧＲＯγおよびＮＡＰ−２に対して高親和性を有するＩＬ−８Ｒβが特
徴付けられた。Holmesら、前掲;Murphyら、Science 253，1280(1991);Leeら、J. Biol.Chem
．267，16283(1992)；LaRosaら、J ．Biol．Chem．267，25402(1992)；
およびGayleら、J ．Biol．Chem．268，7283(1993)を参照のこと。
当該分野において、ＩＬ−８αまたはβレセプターとの結合能を有する化合物
に対する処理の必要性が依然として存在する。したがって、ＩＬ−８産生の増加
（好中球およびＴ−細胞サブセットの炎症部位中への走化性に関与する）に付随
する症状は、ＩＬ−８レセプター結合の阻害物質である化合物により利益を得る
であろう。発明の要約
本発明は、ケモカインがＩＬ−８ａまたはｂレセプターと結合するものである
ケモカイン介在疾患の治療法であって、有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医
薬上許容される塩を投与することからなる方法を提供する。特に、ケモカインは
ＩＬ−８である。
本発明は、さらに、これを必要とする哺乳動物におけるＩＬ−８のそのレセプ
ターとの結合の阻害法であって、該哺乳動物に有効量の式（Ｉ）の化合物を投与
することからなる方法に関する。
本発明において有用である式（Ｉ）の化合物は、構造式：
［式中、
Ｚはシアノ、ＯＲ11、Ｃ(Ｏ)ＮＲ15Ｒ16、Ｒ18、Ｃ(Ｏ)Ｒ11またはＳ(Ｏ)2Ｒ1 7
であり；
Ａは窒素である；ただし、基Ａのうち１または２個だけが窒素であり、残りは
水素またはＲ1で置換された炭素であり；
Ｒは、ｐＫａが１０またはそれ以下の、イオン化可能な水素を有する官能基で
あり；
Ｒ1は独立して、水素；ハロゲン；ニトロ；シアノ；ハロ置換Ｃ1-10アルキル
；Ｃ1-10アルキル；Ｃ2-10アルケニル；Ｃ1-10アルコキシ；ハロ置換Ｃ1-10アル
コキシ；アジド；(ＣＲ8Ｒ8)qＳ(Ｏ)tＲ4；ヒドロキシ；ヒドロキシＣ1-4アルキ
ル；アリール；アリールＣ1-4アルキル；アリールオキシ；アリールＣ1-4アルキ
ルオキシ；ヘテロアリール；ヘテロアリールアルキル；ヘテロサイクリック、ヘ
テロサイクリックＣ1-4アルキル；ヘテロアリールＣ1-4アルキルオキシ；アリー
ルＣ2-10アルケニル；ヘテロアリールＣ2-10アルケニル；ヘテロサイクリックＣ2-10
アルケニル；(ＣＲ8Ｒ8)qＮＲ4Ｒ5；Ｃ2-10アルケニルＣ(Ｏ)ＮＲ4Ｒ5；(Ｃ
Ｒ8Ｒ8)qＣ(Ｏ)ＮＲ4Ｒ5；(ＣＲ8Ｒ8)qＣ(Ｏ)ＮＲ4Ｒ10；Ｓ(Ｏ)3Ｈ；Ｓ(Ｏ)3Ｒ8
；(ＣＲ8Ｒ8)qＣ(Ｏ)Ｒ11；Ｃ2-10アルケニルＣ(Ｏ)Ｒ11；Ｃ2-10アルケニルＣ
(Ｏ)ＯＲ11；(ＣＲ8Ｒ8)qＣ(Ｏ)ＯＲ12；(ＣＲ8Ｒ8)qＯＣ(Ｏ)Ｒ11；(ＣＲ8Ｒ8)q
ＮＲ4Ｃ(Ｏ)Ｒ11；(ＣＲ8Ｒ8)qＮＨＳ(Ｏ)2Ｒ19；(ＣＲ8Ｒ8)qＳ(Ｏ)2ＮＲ4Ｒ5
から選択されるか；または２つのＲ1基が一緒になってＯ−(ＣＨ2)sＯ−または
５ないし６員飽和または不飽和環を形成し；
ｑは０、または１ないし１０の整数であり；
ｔは０、または１または２の整数であり；
ｓは１ないし３の整数であり；
ｖは０、または１ないし４の整数であり；
Ｒ4およびＲ5は、独立して、水素、所望により置換されていてもよいＣ1-4ア
ルキル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていて
もよいアリールＣ1-4アルキル、所望により置換されていてもよいヘテロアリー
ル、所望により置換されていてもよいヘテロアリールＣ1-4アルキル、ヘテロサ
イクリック、ヘテロサイクリックＣ1-4アルキルであるか、またはＲ4およびＲ5
はそれらが結合している窒素と一緒になって、所望によりＯ／Ｎ／Ｓから選択さ
れるもう１つ
のヘテロ原子を含んでもよい５ないし７員環を形成し；
Ｒ6およびＲ7は、独立して、水素またはＣ1-4アルキル基であるか；またはＲ6
およびＲ7は、それらが結合している窒素と一緒になって、所望により、酸素、
窒素または硫黄から選択されるもう１つのヘテロ原子を含んでもよい５ないし７
員環を形成し；
Ｙは、独立して、水素；ハロゲン；ニトロ；シアノ；ハロ置換Ｃ1-10アルキル
；Ｃ1-10アルキル；Ｃ2-10アルケニル；Ｃ1-10アルコキシ；ハロ置換Ｃ1-10アル
コキシ；アジド；(ＣＲ8Ｒ8)qＳ(Ｏ)tＲ4；ヒドロキシ；ヒドロキシＣ1-4アルキ
ル；アリール；アリールＣ1-4アルキル；アリールオキシ；アリールＣ1-4アルキ
ルオキシ；ヘテロアリール；ヘテロアリールアルキル；ヘテロアリールＣ1-4ア
ルキルオキシ；ヘテロサイクリック；ヘテロサイクリックＣ1-4アルキル；アリ
ールＣ2-10アルケニル；ヘテロアリールＣ2-10アルケニル；ヘテロサイクリック
Ｃ2-10アルケニル；(ＣＲ8Ｒ8)qＮＲ4Ｒ5；Ｃ2-10アルケニルＣ(Ｏ)ＮＲ4Ｒ5；(
ＣＲ8Ｒ8)qＣ(Ｏ)ＮＲ4Ｒ5；(ＣＲ8Ｒ8)qＣ(Ｏ)ＮＲ4Ｒ10；Ｓ(Ｏ)3Ｈ；Ｓ(Ｏ)3
Ｒ8；(ＣＲ8Ｒ8)qＣ(Ｏ)Ｒ11；Ｃ2-10アルケニルＣ(Ｏ)Ｒ11；Ｃ2-10アルケニル
Ｃ(Ｏ)ＯＲ11；Ｃ(Ｏ)Ｒ11；(ＣＲ8Ｒ8)qＣ(Ｏ)ＯＲ12；(ＣＲ8Ｒ8)qＯＣ(Ｏ)Ｒ11
；(ＣＲ8Ｒ8)qＮＲ4Ｃ(Ｏ)Ｒ11；(ＣＲ8Ｒ8)qＮＨＳ(Ｏ)2Ｒd；(ＣＲ8Ｒ8)qＳ
(Ｏ)2ＮＲ4Ｒ5から選択されるか、または２個の基Ｙが一緒になってＯ-(ＣＨ2)s
−Ｏ−または５ないし６員の飽和もしくは不飽和環を形成してもよく；
ｎは１ないし３の整数であり；
ｍは１ないし３の整数であり；
Ｒ8は、独立して、水素またはＣ1-4アルキルから選択され；
Ｒ10はＣ1-10アルキルＣ(Ｏ)2Ｒ8であり；
Ｒ11は、水素、Ｃ1-4アルキル、所望により置換されていてもよいアリール、
所望により置換されていてもよいアリールＣ1-4アルキル、所望により置換され
ていてもよいヘテロアリール、所望により置換されていてもよいヘテロアリール
Ｃ1-4アルキル、所望により置換されていてもよいヘテロサイクリック、または
所望によ
り置換されていてもよいヘテロサイクリックＣ1-4アルキルであり；
Ｒ12は水素、Ｃ1-10アルキル、所望により置換されていてもよいアリールまた
は所望により置換されていてもよいアリールアルキルであり；
Ｒ13およびＲ14は、独立して、水素、所望により置換されていてもよいＣ1-4
アルキルであるか、またはＲ13およびＲ14の一方は所望により置換されていても
よいアリールであり；
Ｒ10およびＲ16は独立して、水素、所望により置換されていてもよいＣ1-4ア
ルキル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換されていて
もよいアリールＣ1-4アルキル、所望により置換されていてもよいヘテロアリー
ル、所望により置換されていてもよいヘテロアリールＣ1-4アルキル、所望によ
り置換されていてもよいヘテロサイクリック、所望により置換されていてもよい
ヘテロサイクリックＣ1-4アルキルであるか、またはＲ15およびＲ16はそれらが
結合している窒素と一緒になって、酸素、窒素または硫黄から選択されるもう１
つのヘテロ原子を所望により含有してもよい５ないし７員環を形成し；
Ｒ17は、Ｃ1-4アルキル、ＮＲ15Ｒ16、ＯＲ11、所望により置換されていても
よいアリール、所望により置換されていてもよいアリールＣ1-4アルキル、所望
により置換されていてもよいヘテロアリール、所望により置換されていてもよい
ヘテロアリールＣ1-4アルキル、所望により置換されていてもよいヘテロサイク
リック、または所望により置換されていてもよいヘテロサイクリックＣ1-4アル
キルであり；
Ｒ18は、所望により置換されていてもよいＣ1-4アルキル、所望により置換さ
れていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアリールＣ1-4アル
キル、所望により置換されていてもよいヘテロアリール、所望により置換されて
いてもよいヘテロアリールＣ1-4アルキル、所望により置換されていてもよいヘ
テロサイクリック、または所望により置換されていてもよいヘテロサイクリック
Ｃ1-4アルキルであり；
Ｒ19は、Ｃ1-4アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘ
テロアリールＣ1-4アルキル、ヘテロサイクリック、またはヘテロサイクリック
Ｃ1-4アルキルであり(ここに、これらの基はすべて所望により置換されていても
よい)；
Ｒdは、ＮＲ6Ｒ7、アルキル、アリールＣ1-4アルキル、アリールＣ2-4アルケ
ニル、ヘテロアリール、ヘテロアリール−Ｃ1-4アルキル、ヘテロアリールＣ2-4
アルケニル、ヘテロサイクリック、ヘテロサイクリックＣ1-4アルキルであり（
ここに、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリ
ールアルキル、ヘテロサイクリック、およびヘテロサイクリックアルキル環は所
望により置換されていてもよい）；
から選択されてもよく、星印＊は環の結合点を示す］
により示される化合物またはその医薬上許容される塩である。発明の詳細な記載
式（Ｉ）の化合物はさらに、ＩＬ−８またはＩＬ−８αおよびβレセプターと
結合する他のケモカインの阻害を必要とするヒト以外の哺乳動物の獣医学的治療
に関連して用いられる。動物における治療または予防的療法に関するケモカイン
介在疾患は、本明細書において治療法の項で列挙するような病態を包含する。
Ｒは、適当には、ｐＫａが１０またはそれ以下、好ましくは約３ないし９、よ
り好ましくは約３ないし７の、イオン化可能な水素を提供するいずれかの官能基
である。このような官能基は、これに限定されないが、ヒドロキシ、カルボン酸
、チオール、-ＳＲ2、-ＯＲ2、-ＮＨ−Ｃ(Ｏ)Ｒa、Ｃ(Ｏ)ＮＲ6’Ｒ7’、式：-
ＮＨＳ(Ｏ)2Ｒb、-Ｓ(Ｏ)2ＮＨＲcの置換スルホンアミド、ＮＨＣ(Ｘ2)ＮＨＲb
またはテトラゾリルを包含する；ここに、Ｘ2は酸素または硫黄、好ましくは酸
素である。好ましくは、官能基はスルホン酸以外の基であり、直接的にまたは置
換基としてＳＲ2またはＯＲ2などにおけるようにアリール、ヘテロアリール、ま
たはヘテロサイクリック環上にある。より好ましくは、ＲはＯＨ、ＳＨ、または
ＮＨＳ(Ｏ)2Ｒbである。
適当には、Ｒ2は置換アリール、ヘテロアリールまたはヘテロサイクリック基
であって、該環は１０またはそれ以下のｐＫａを有するイオン化可能な水素を付
与する官能基を有するものである。
適当には、Ｒ6’およびＲ7’は、水素、Ｃ1-4アルキル、アリール、アリール
Ｃ1-4アルキル、アリールＣ2-4アルケニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールＣ1-4
アルキル、ヘテロアリールＣ2-4アルケニル、ヘテロサイクリック、ヘテロサ
イクリックＣ1-4アルキル、ヘテロサイクリックＣ2-4アルケニル基であり、これ
らはすべて所望により１ないし３回独立して、ハロゲン；ニトロ；ハロ置換Ｃ1- 4
アルキル、例えばＣＦ3；Ｃ1-4アルキル、例えばメチル；Ｃ1-4アルコキシ、例
えばメトキシ；ＮＲ9Ｃ(Ｏ)Ｒa；Ｃ(Ｏ)ＮＲ6Ｒ7；Ｓ(Ｏ)3Ｈ；またはＣ(Ｏ)Ｏ
Ｃ1-4アルキルで置換されていてもよい（ただし、Ｒ6’およびＲ7’の一方だけ
が水素であり、共に水素であってはならない）。
適当には、Ｒ6およびＲ7は、独立して、水素またはＣ1-4アルキル基であるか
、またはＲ6およびＲ7はこれらが結合している窒素と一緒になって、酸素、窒素
または硫黄から選択されるヘテロ原子であるさらにもう１つのヘテロ原子を所望
により含有してもよい５ないし７員環を形成する。このヘテロ環は、本明細書に
おいて定義するように所望により置換されていてもよい。
適当には、Ｒaはアルキル、アリール、アリールＣ1-4アルキル、ヘテロアリー
ル、ヘテロアリールＣ1-4アルキル、ヘテロサイクリック、またはヘテロサイク
リッ
クＣ1-4アルキル基であり、これらのすべては本明細書において以下に定義する
ように所望により置換されていてもよい。
適当には、Ｒbは、ＮＲ6Ｒ7、アルキル、アリール、アリールＣ1-4アルキル、
アリールＣ2-4アルケニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールＣ1-4アルキル、ヘ
テロアリールＣ2-4アルケニル、ヘテロサイクリック、ヘテロサイクリックＣ1-4
アルキル、ヘテロサイクリックＣ2-4アルケニル基、またはカンフルであり、こ
れらはすべて、ハロゲン；ニトロ；ハロ置換Ｃ1-4アルキル、例えばＣＦ3；Ｃ1- 4
アルキル、例えばメチル；Ｃ1-4アルコキシ、例えばメトキシ；ＮＲ9Ｃ(Ｏ)Ｒa
；Ｃ(Ｏ)ＮＲ6Ｒ7；Ｓ(Ｏ)3Ｈ；またはＣ(Ｏ)ＯＣ1-4アルキルで所望により１な
いし３回独立して置換されていてもよい。Ｒbは好ましくは所望により置換され
ていてもよいフェニル、ベンジル、またはスチリルである。Ｒbがヘテロアリー
ルである場合、好ましくはこれは所望により置換されていてもよいチアゾール、
所望により置換されていてもよいチエニル、または所望により置換されていても
よいキノリニル環である。
適当には、Ｒ9は水素またはＣ1-4アルキル、好ましくは水素である。好ましく
は、置換基がＮＲ9Ｃ(Ｏ)Ｒaである場合、Ｒaは好ましくはアルキル基、例えば
メチルである。
適当には、Ｒcは、水素、アルキル、アリール、アリールＣ1-4アルキル、アリ
ールＣ1-4アルケニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールＣ1-4アルキル、ヘテロ
アリールＣ2-4アルケニル、ヘテロサイクリック、ヘテロサイクリックＣ1-4アル
キル、またはヘテロサイクリックＣ2-4アルケニル基であり、これらはすべて、
所望により、１ないし３回独立して、ハロゲン、ニトロ、ハロ置換Ｃ1-4アルキ
ル、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ＮＲ9Ｃ(Ｏ)Ｒa、Ｃ(Ｏ)ＮＲ6Ｒ7、Ｓ(
Ｏ)3ＨまたはＣ(Ｏ)ＯＣ1-4アルキルで置換されていてもよく、ここでＲ9は水素
またはＣ1-4アルキルである。好ましくは、Ｒcは所望により置換されていてもよ
いフェニルである。
ＲがＯＲ2またはＳＲ2基である場合、したがって当業者であれば、アリール環
は所定のイオン化可能な水素を含有しなければならないことがわかる。アリール
環は
さらに独立して１ないし３個の基で置換されていてもよく、該基はさらにイオン
化可能な基を含有してもよく、これらは、限定されないが、ハロゲン、ニトロ、
ハロ置換Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ヒドロキシ、ＳＨ
、-Ｃ(Ｏ)ＮＲ6'Ｒ7'、-ＮＨＣ(Ｏ)Ｒa、-ＮＨＳ(Ｏ)2Ｒb、Ｓ(Ｏ)2ＮＲ6Ｒ7、
Ｃ(Ｏ)ＯＲ8、またはテトラゾリル環を包含する。
式（Ｉ）の化合物において、適当には、Ｒ1は独立して、水素；ハロゲン；ニ
トロ；シアノ；ハロ置換Ｃ1-10アルキル、例えばＣＦ3；Ｃ1-10アルキル、例え
ばメチル、エチル、イソプロピル、またはｎ−プロピル；Ｃ2-10アルケニル；Ｃ1-10
アルコキシ、例えばメトキシ、またはエトキシ；ハロ置換Ｃ1-10アルコキシ
、例えばトリフルオロメトキシ；アジド；(ＣＲ8Ｒ8)qＳ(Ｏ)tＲ4(ここに、ｔは
０、１または２である）；ヒドロキシ；ヒドロキシＣ1-4アルキル、例えばメタ
ノールまたはエタノール；アリール、例えばフェニルまたはナフチル；アリール
Ｃ1-4アルキル、例えばベンジル；アリールオキシ、例えばフェノキシ；アリー
ルＣ1-4アルキルオキシ、例えばベンジルオキシ；ヘテロアリール；ヘテロアリ
ールアルキル；ヘテロアリールＣ1-4アルキルオキシ；アリールＣ2-10アルケニ
ル；ヘテロアリールＣ2-10アルケニル；ヘテロサイクリックＣ2-10アルケニル；
(ＣＲ8Ｒ8)qＮＲ4Ｒ5；Ｃ2-10アルケニルＣ(Ｏ)ＮＲ4Ｒ5；(ＣＲ8Ｒ8)qＣ(Ｏ)Ｎ
Ｒ4Ｒ5；(ＣＲ8Ｒ8)qＣ(Ｏ)ＮＲ4Ｒ10；Ｓ(Ｏ)3Ｈ；Ｓ(Ｏ)3Ｒ8；(ＣＲ8Ｒ8)qＣ
(Ｏ)Ｒ11；Ｃ2-10アルケニルＣ(Ｏ)Ｒ11；Ｃ2-10アルケニルＣ(Ｏ)ＯＲ11；Ｃ(
Ｏ)Ｒ11；(ＣＲ8Ｒ8)qＣ(Ｏ)ＯＲ12；(ＣＲ8Ｒ8)qＯＣ(Ｏ)Ｒ11；(ＣＲ8Ｒ8)qＮ
Ｒ4Ｃ(Ｏ)Ｒ11；(ＣＲ8Ｒ8)qＮＨＳ(Ｏ)2Ｒ19；または(ＣＲ8Ｒ8)qＳ(Ｏ)2ＮＲ4
Ｒ5から選択されるか；または２つのＲ1基が一緒になって、
Ｏ−(ＣＨ2)sＯ−または５ないし６員飽和または不飽和環を形成し；ｓは１ない
し３の整数である。アリール、ヘテロアリール、およびヘテロサイクリック含有
基は、本明細書において以下に定義するように所望により置換されていてもよい
。
適当には、ｑは０、または１ないし１０の整数である。
Ｒ1がジオキシブリッジを形成する場合、ｓは好ましくは１である。Ｒ1がさら
にもう１つの飽和または不飽和の５ないし６員環を形成する場合、これは好まし
くは
不飽和の６員環であり、ナフチレン環系ができる。このナフチレン環は、独立し
て１ないし３回前記した他のＲ1基により置換されていてもよい。
適当には、Ｒ4およびＲ5は独立して、水素、所望により置換されていてもよい
Ｃ1-4アルキル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置換さ
れていてもよいアリールＣ1-4アルキル、所望により置換されていてもよいヘテ
ロアリール、所望により置換されていてもよいヘテロアリールＣ1-4アルキル、
ヘテロサイクリック、ヘテロサイクリックＣ1-4アルキルであるか、またはＲ4お
よびＲ5はこれらが結合している窒素と一緒になって、Ｏ／Ｎ／Ｓから選択され
るさらにもう１つののヘテロ原子を所望により含んでもよい５ないし７員環を形
成する。
Ｒ8は、適当には独立して、水素またはＣ1-4アルキルから選択される。
Ｒ10は適当には、Ｃ1-10アルキルＣ(Ｏ)2Ｒ8、例えば、ＣＨ2Ｃ(Ｏ)2Ｈまたは
ＣＨ2Ｃ(Ｏ)2ＣＨ3である。
Ｒ11は適当には、水素、Ｃ1-4アルキル、アリール、アリールＣ1-4アルキル、
ヘテロアリール、ヘテロアリールＣ1-4アルキル、ヘテロサイクリック、または
ヘテロサイクリックＣ1-4アルキルである。
Ｒ12は適当には、水素、Ｃ1-10アルキル、所望により置換されていてもよいア
リールまたは所望により置換されていてもよいアリールアルキルである。
Ｒ19は、Ｃ1-4アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘ
テロアリールＣ1-4アルキル、ヘテロサイクリック、またはヘテロサイクリック
Ｃ1-4アルキル（ここに、これらの基はすべて、所望により置換されていてもよ
い）である。
好ましくは、Ｒ1はハロゲン、シアノ、ニトロ、ＣＦ3、Ｃ(Ｏ)ＮＲ4Ｒ5、アル
ケニルＣ(Ｏ)ＮＲ4Ｒ5、Ｃ(Ｏ)Ｒ4Ｒ10、アルケニルＣ(Ｏ)ＯＲ12、ヘテロアリ
ール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、またはＳ(Ｏ)ＮＲ4
Ｒ5であり、好ましくは、Ｒ4およびＲ5は両方とも水素であるかまたは一方がフ
ェニルである。Ｒ1についての好ましい環置換はフェニル環の４−位においてで
ある。
ＲがＯＨ、ＳＨまたはＮＳＯ2Ｒbである場合、Ｒ1は、好ましくは３−位、４
−位にて置換されているか、または３,４−位にて二置換されている。その置換
基は、
適当には電子求引基である。好ましくは、ＲがＯＨ、ＳＨまたはＮＳＯ2Ｒbであ
る場合、Ｒ1はニトロ、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル基、Ｃ(Ｏ)ＮＲ4
Ｒ5である。
Ｒがカルボン酸である場合、Ｒ1は好ましくは水素であるか、またはＲ1は好ま
しくは４−位にて置換されており、より好ましくは、トリフルオロメチルまたは
クロロで置換されている。
式（Ｉ）の化合物において、適当には、Ｒ13およびＲ14は、独立して、水素、
本明細書において定義するような直鎖または分枝鎖の所望により置換されていて
もよいＣ1-4アルキルであるか、またはＲ13およびＲ14の一方は所望により置換
されていてもよいアリールであり；ｖは０、または１ないし４の整数である。
Ｒ13およびＲ14が所望により置換されていてもよいアルキルである場合、その
アルキル部は、１ないし３回、独立して、ハロゲン；ハロ置換Ｃ1-4アルキル、
例えばトリフルオロメチル；ヒドロキシ；ヒドロキシＣ1-4アルキル、Ｃ1-4アル
コキシ；例えばメトキシ、またはエトキシ、ハロ置換Ｃ1-10アルコキシ、Ｓ(Ｏ)t
Ｒ4；アリール；ＮＲ4Ｒ5；ＮＨＣ(Ｏ)Ｒ4；Ｃ(Ｏ)ＮＲ4Ｒ5；またはＣ(Ｏ)Ｏ
Ｒ8で置換されていてもよい。
式（Ｉ）の化合物において、Ｗ1は、適当には、である。
星印（＊）を介する点で結合したＥ含有環があってもよい。該環がないならば
、そのＷ1環は本明細書に示されるようなＹ基で置換されているフェニル基であ
る。Ｅ環は飽和または不飽和のいずれの環においてもＹ基により置換されていて
もよく、本明細書では、不飽和環において置換されている場合のみを示す。
適当には、Ｙは独立して、水素；ハロゲン；ニトロ；シアノ；ハロ置換Ｃ1-10
アルキル；Ｃ1-10アルキル；Ｃ2-10アルケニル；Ｃ1-10アルコキシ；ハロ置換
Ｃ1-10アルコキシ；アジド；(ＣＲ8Ｒ8)qＳ(Ｏ)tＲ4；ヒドロキシ；ヒドロキシ
Ｃ1-4アルキル；アリール；アリールＣ1-4アルキル；アリールオキシ；アリール
Ｃ1-4アルキルオキシ；ヘテロアリール；ヘテロアリールアルキル；ヘテロアリ
ールＣ1-4アルキルオキシ；ヘテロサイクリック；ヘテロサイクリックＣ1-4アル
キル；アリールＣ2-10アルケニル；ヘテロアリールＣ2-10アルケニル；ヘテロサ
イクリックＣ2-10アルケニル；(ＣＲ8Ｒ8)qＮＲ4Ｒ5；Ｃ2-10アルケニルＣ(Ｏ)
ＮＲ4Ｒ5；(ＣＲ8Ｒ8)qＣ(Ｏ)ＮＲ4Ｒ5；(ＣＲ8Ｒ8)qＣ(Ｏ)ＮＲ4Ｒ10；Ｓ(Ｏ)3
Ｈ；Ｓ(Ｏ)3Ｒ8；(ＣＲ8Ｒ8)qＣ(Ｏ)Ｒ11；Ｃ2-10アルケニルＣ(Ｏ)Ｒ11；Ｃ2-1 0
アルケニルＣ(Ｏ)ＯＲ11；(ＣＲ8Ｒ8)qＣ(Ｏ)ＯＲ12；(ＣＲ8Ｒ8)qＯＣ(Ｏ)Ｒ1 1
；(ＣＲ8Ｒ8)qＮＲ4Ｃ(Ｏ)Ｒ11；(ＣＲ8Ｒ8)qＮＨＳ(Ｏ)2Ｒd；または(ＣＲ8Ｒ8
)qＳ(Ｏ)2ＮＲ4Ｒ5から選択されるかまたは２つのＹ基が一緒になってＯ−(Ｃ
Ｈ2)sＯ−または５ないし６員飽和または不飽和環を形成し；ここに、アリール
、ヘテロアリール、ヘテロサイクリック含有基は本明細書において定義するよう
に所望により置換されていてもよい。
Ｙがジオキシブリッジを形成する場合、ｓは好ましくは１である。Ｙがさらに
もう１つの飽和または不飽和環を形成する場合、これは好ましくは６員環であり
、ナフチレン環系ができる。このナフチレン環は１ないし３回、前記した他のＹ
基で置換されてもよい。
上記のアリール、アリールアルキル、アリールアルケニル、ヘテロアリール、
ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロサイクリック、ヘ
テロサイクリックアルキルおよびヘテロサイクリックアルケニル基はすべて所望
により本明細書に記載されているように置換されていてもよい。
適当には、Ｒdは、ＮＲ6Ｒ7、アルキル、アリールＣ1-4アルキル、アリールＣ2-4
アルケニル、ヘテロアリール、ヘテロアリール−Ｃ1-4アルキル、ヘテロアリ
ールＣ2-4アルケニル、ヘテロサイクリック、ヘテロサイクリックＣ1-4アルキル
、またはヘテロサイクリックＣ2-4アルケニル基であり、ここに、前記のアリー
ル、アリールアルキル、アリールアルケニル、ヘテロアリール、ヘテロアリール
アルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロサイクリック、ヘテロサイクリッ
クアルキ
ルおよびヘテロサイクリックアルケニル基は、すべて前記したように所望により
置換されていてもよい。
Ｙは好ましくは、ハロゲン、Ｃ1-4アルコキシ、所望により置換されていても
よいアリール、所望により置換されていてもよいアリールオキシまたはアリール
アルコキシ、メチレンジオキシ、ＮＲ4Ｒ5；チオＣ1-4アルキル、チオアリール
、ハロ置換アルコキシ、所望により置換されていてもよいＣ1-4アルキル、また
はヒドロキシアルキルである。Ｙは、より好ましくは、一置換ハロゲン、二置換
ハロゲン、一置換アルコキシ、二置換アルコキシ、メチレンジオキシ、アリール
、またはアルキルであり、より好ましくは、これらの基は、２’一位または２’
,３’一位で一または二置換されている。
Ｙは５つの環位置のいずれで置換されていてもよいが、Ｙは好ましくは、２’
−位または３’一位で一置換され、４’一位は置換されていないことが好ましい
；より好ましくは、ＲはＯＨ、ＳＨまたはＮＳＯ2Ｒbである。環が二置換されて
いるならば、好ましくはＲがＯＨ、ＳＨまたはＮＳＯ2Ｒbである場合で、置換基
は単環式環の２’または３’位にあることが好ましい。Ｒ1およびＹの両方とも
水素であり得るが、少なくとも一方の環が置換されているのが好ましく、両方の
環が置換されているのが好ましい。
式（Ｉ）の化合物において、Ａは、適当には、シアノ、ＯＲ11、Ｃ(Ｏ)ＮＲ15
Ｒ16、Ｒ18、Ｃ(Ｏ)Ｒ11またはＳ(Ｏ)2Ｒ17である。
適当には、Ｒ15およびＲ16は、独立して、水素、所望により置換されていても
よいＣ1-4アルキル、所望により置換されていてもよいアリール、所望により置
換されていてもよいアリールＣ1-4アルキル、所望により置換されていてもよい
ヘテロアリール、所望により置換されていてもよいヘテロアリールＣ1-4アルキ
ル、所望により置換されていてもよいヘテロサイクリック、所望により置換され
ていてもよいヘテロサイクリックＣ1-4アルキルであるか、またはＲ15およびＲ1 6
はそれらが結合している窒素と一緒になって、酸素、窒素または硫黄から選択
されるもう１つのヘテロ原子を所望により含有してもよい５ないし７員環を形成
する。
適当には、Ｒ17はＣ1-4アルキル、ＮＲ15Ｒ16、ＯＲ11、所望により置換され
ていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアリールＣ1-4アルキ
ル、所望により置換されていてもよいヘテロアリール、所望により置換されてい
てもよいヘテロアリールＣ1-4アルキル、所望により置換されていてもよいヘテ
ロサイクリック、または所望により置換されていてもよいヘテロサイクリックＣ1-4
アルキルである。
適当には、Ｒ18は所望により置換されていてもよいＣ1-4アルキル、所望によ
り置換されていてもよいアリール、所望により置換されていてもよいアリールＣ1-4
アルキル、所望により置換されていてもよいヘテロアリール、所望により置
換されていてもよいヘテロアリールＣ1-4アルキル、所望により置換されていて
もよいへテロサイクリック、または所望により置換されていてもよいへテロサイ
クリックＣ1-4アルキルである。
下記に示すＡ含有環は置換ピリジルまたはピリミジン環を意味する。 例えば、Ａ基のうち１または２個だけが窒素である場合、３、４、５または６
−ピリジル環あるいは２,４−または３,５−ピリミジン環が形成される。この環
は前記したＲ1で置換されていてもよく、２,４−ジヒドロキシ−３,５−ピリミ
ジル；２−ヒドロキシ−４−スルファニルアミド−３,５−ピリミジル；２−ヒ
ドロキシ−４−スルフヒドリル−６−アミノ−３,５−ピリミジル；３−ヒドロ
キシピリジン−２−イル；２−ヒドロキシ−３−ピリジル；２,４−ジヒドロキ
シ−６−メチル−５−ピリジル；２−ヒドロキシ−５−ピリジルまたは２−スル
フヒドリル−５−ピリジルのような環が得られる。
本明細書において用いる場合、「所望により置換されていてもよい」とは、特
記しないかぎり、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素などのハロゲン；ヒドロキシ
；ヒドロキシ置換Ｃ1-10アルキル；メトキシまたはエトキシなどのＣ1-10アルコ
キシ；
Ｓ(Ｏ)m'Ｃ1-10アルキル（ここに、ｍ’は、０、１または２である）、例えばメ
チルチオ、メチルスルフィニルまたはメチルスルホニル；アミノ、一および二置
換アミノ、例えばＮＲ4Ｒ5基；ＮＨＣ(Ｏ)Ｒ4；Ｃ(Ｏ)ＮＲ4Ｒ5；Ｃ(Ｏ)ＯＨ；
Ｓ(Ｏ)2ＮＲ4Ｒ5；ＮＨＳ(Ｏ)2Ｒ21、Ｃ1-10アルキル、例えば、メチル、エチル
、プロピル、イソプロピル、またはｔ−ブチル；ハロ置換Ｃ1-10アルキル、例え
ばＣＦ3；所望により置換されていてもよいアリール、例えばフェニル、または
所望により置換されていてもよいアリールアルキル、例えばベンジルまたはフェ
ネチル、所望により置換されていてもよいヘテロサイクリック、所望により置換
されていてもよいヘテロサイクリックアルキル、所望により置換されていてもよ
いヘテロアリール、所望により置換されていてもよいヘテロアリールアルキル(
ここに、これらのアリール、へテロアリールまたはへテロサイクリック部分は１
または２回、ハロゲン；ヒドロキシ；ヒドロキシ置換アルキル；Ｃ1-10アルコキ
シ；Ｓ(Ｏ)m'Ｃ1-10アルキル；アミノ、一および二置換アミノ、例えば、ＮＲ4
Ｒ5基；Ｃ1-10アルキル、またはハロ置換Ｃ1-10アルキル、例えばＣＦ3により置
換されていてもよい)を意味する。
Ｒ21は、適当には、Ｃ1-4アルキル、アリール、アリールＣ1-4アルキル、ヘテ
ロアリール、ヘテロアリールＣ1-4アルキル、ヘテロサイクリックまたはヘテロ
サイクリックＣ1-4アルキルである。
適当な医薬上許容される塩は、当業者に周知のものであり、塩酸、臭化水素酸
、硫酸、燐酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、酢酸、リンゴ酸、酒石酸
、クエン酸、乳酸、シュウ酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、安息香酸、サ
リチル酸、フェニル酢酸およびマンデル酸などの無機および有機酸の塩基性塩を
包含する。加えて、式（Ｉ）の化合物の医薬上許容される塩はさらに、例えば置
換基がカルボキシ基を含む場合、医薬上許容されるカチオンと一緒に形成されて
いてもよい。適当な医薬上許容されるカチオンは当業者に周知であり、アルカリ
金属、アルカリ土類金属、アンモニウムおよび第４アンモニウムカチオンを包含
する。
以下の用語は本明細書において用いる場合、次のものを意味する：
・「ハロ」 − あらゆるハロゲン、即ち、塩素、フッ素、臭素およびヨウ素
を
いう。
・「Ｃ1-10アルキル」または「アルキル」 − 鎖長が限定されていない場合
、炭素数１ないし１０の直鎖および分枝鎖基であり、メチル、エチル、ｎ−プロ
ピル、ｉｓｏ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル、ｔｅ
ｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチルなどを包含するが、これに限定されない。
・「シクロアルキル」なる用語は、本明細書において用いる場合、好ましくは
３ないし８個の炭素原子を有する環状ラジカルを意味し、シクロプロピル、シク
ロペンチル、シクロヘキシルなどを包含するがこれに限定されない。
・「アルケニル」なる用語は本明細書において用いる場合、あらゆる場合にお
いて、鎖長が限定されない限り、２ないし１０個の炭素原子を有する直鎖または
分枝鎖基を意味し、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、２−メチル−
１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニルなどを包含するが、これに限定さ
れない。
・「アリール」 − フェニルおよびナフチルをいう。
・「ヘテロアリール」（それ自身または「ヘテロアリールオキシ」または「ヘ
テロアリールアルキル」などの組合せにおいて）− ピロール、ピラゾール、フ
ラン、チオフェン、キノリン、イソキノリン、キナゾリニル、ピリジン、ピリミ
ジン、オキサゾール、チアゾール、チアジアゾール、トリアゾール、イミダゾー
ル、またはベンズイミダゾールなど（これに限定されない）の、１個またはそれ
以上の環がＮ、ＯまたはＳからなる群から選択される１個またはそれ以上のヘテ
ロ原子を含む５ないし１０員芳香族環系をいう。
・「ヘテロサイクリック」（それ自身または「ヘテロサイクリルアルキル」な
どの組合せにおいて）− ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、
テトラヒドロピラン、またはイミダゾリジンなど（これに限定されない）の、１
個またはそれ以上の環がＮ、ＯまたはＳからなる群より選択される１個またはそ
れ以上のヘテロ原子を含む、飽和または部分的に不飽和の４ないし１０員環系を
いう。
「アリールアルキル」または「ヘテロアリールアルキル」または「ヘテロサイ
クリックアルキル」なる用語は、本明細書において用いて、特記しない限り前記
したアリール、ヘテロアリールまたはヘテロサイクリック基に結合した前記した
Ｃ1-1 0
アルキルを意味する。
・「スルフィニル」 − 対応するスルフィドのオキシドＳ(Ｏ)をいい、「チ
オ」なる用語はスルフィドを意味し、「スルホニル」なる用語は完全に酸化され
たＳ(Ｏ)2基を意味する。
・「２個のＲ1基（または２個のＹ基）が一緒になって５または６員の飽和ま
たは不飽和環を形成」なる用語は、本明細書において、Ｃ6シクロアルケニル、
すなわちヘキセンなどの６員の部分不飽和環、またはＣ5シクロアルケニル部、
すなわち、シクロペンテンが結合したナフチレン環系またはフェニル基の形成を
意味する。
本発明の化合物は、立体異性体、レジオ異性体、またはジアステレオマーとし
て存在すると考えられる。これらの化合物は、１個またはそれ以上の不斉炭素原
子を含み、ラセミおよび光学活性な形態で存在し得る。これらの化合物はすべて
本発明の範囲内に含まれる。
式（Ｉ）の化合物は、以下のスキームにその一部を示した合成法を用いて得ら
れる。これらのスキームで用いた合成法は、種々の異なるＲ、Ｒ1、およびアリ
ール基を有する式（Ｉ）の化合物の製造に適用可能であり、これらを適宜保護さ
れた任意の置換基を利用して反応させて、本明細書に概要を記載した反応と適合
させる。これらの場合、その後に脱保護し、その性質が一般的に開示されている
化合物を得る。いったん尿素核が確立されると、これらの式のさらに別の化合物
を当該分野で周知の官能基転換用の標準的技術を用いて調製できる。スキームは
式（Ｉ）の化合物に関してのみ示すが、これは単に例示目的にすぎない。
調製法
標記化合物は、チオウロニウム塩（２、スキーム１）から合成できる。Ｒ’は
、式（Ｉ）の化合物において定義したような−(Ｒ13Ｒ14)V−Ｗ結合を表す。
スキーム１
ａ）Ｎａ、ＥｔＯＨ、シアナミド ｂ）ＥＤＣ・ＨＣｌ
チオウロニウム塩（２、スキーム１）は、ナトリウムシアナミドを市販のイソ
チオシアネート１（イソチオシアネートが商業的に入手できなければ、望ましい
アミンをチオホスゲンと、炭酸水素ナトリウムのような塩基の存在下で反応させ
ることにより合成できる）と反応させることにより合成できる。チオウロニウム
塩（２）を次に適宜置換されたアニリンと、ＥＤＣ・ＨＣｌなどのカップリング
剤の存在下で縮合させるか、または酸性化して、シアノチオ尿素を形成し、次に
反応させることができる。
別法として、４は市販（Aldrich Chem.Co.）のジフェニルシアノカルボジイミデ
ート（５、スキーム２）をアミンと反応させて、中間体Ｏ−フェニルイソ尿素６
を形成し、これを次に適宜置換されたアニリンとトリメチルアルミニウムの存在
下で、Atwalの方法（Atwal,K.S.、Tetrahedron Lett，35,8085(1994)）により反
応させることにより合成できる。Ｒ’がアルキルである化合物は、適宜置換され
たアルキルアミンと共に、ただし触媒の非存在下で加熱することにより調製され
る。
スキーム２
ａ）アセトニトリル、加熱 ｂ）ＡｌＭｅ3
別法として、標記化合物は、保護オルト置換アニリン（８、スキーム３）を用
いて合成できる。ＵＳ仮出願ＵＳＳＮ６０／０２０６５５ １９９６年６月２７
日出願、代理人整理番号：Ｐ５０４６７Ｐ；ＷＯ９６／２５１５７ １９９６年
８月２２日出願、Ｗｉｄｄｏｗｓｏｎら（代理人整理番号：Ｐ５０３２４−１）
；およびＵＳＳＮ０８／７０１２９９、１９９６年８月２１日出願（代理人整理
番号：Ｐ５０３２４−２）（その開示はすべて出典明示により本発明の一部とす
る）に記載の合成法を参照のこと。オルト置換アニリン（７、スキーム３）を適
当なアルキルまたはシリルハライドと、適当な塩基（すなわち、炭酸セシウム、
炭酸カリウムまたはイミダゾール）の存在下で非プロトン性溶媒中反応させるこ
とにより、まず保護（すなわち、tert−ブチルジメチルシリル、アリル、ベンジ
ルたは他の適当な保護基を用いて保護）する。保護オルト置換アニリンはさらに
、オルト置換ニトロベンゼン（９）から、これを保護基と当該分野で周知の条件
下で反応させることによっても合成される(Greene,T、Protecting Groups in Or ganic Synthesis
，Wiley&Sons,New York，1981を参照のこと）。この保護オルト
置換ニトロ化合物を次にＥｔＯ
Ｈ中ＳｎＣｌ2または代わりに非プロトン性溶媒中Ｈ2／ＰdまたはＬｉＡｌＨ4を
用いて還元して、対応するアニリンにする。
スキーム３
ａ）アルキルまたはハライド、塩基 ｂ）還元剤
この保護オルト置換アニリン（８）は、次にチオホスゲンを用いてイソチオシ
アネートに変換でき、次にアニオンＺＮＨ-（ＺＮＨ2とＮａＨなどの塩基との反
応から形成）と反応させる。Ｚは式（Ｉ）の化合物において定義した通りである
。得られたチオアニオンを次にヨウ化メチルなどのアルキル化剤でアルキル化し
て、チオイミデート、例えば１０（スキーム４）を形成できる。
スキーム４
ａ）ＣｌＣＳＣｌ、ＮａＨＣＯ3 ｂ）ＺＮＨ- ｃ）ＭｅＩ
チオイミデート（１０、スキーム５）は、アミンＲ’ＮＨ2との反応により標
記
化合物４に変換できる。この反応は、硫黄に対して高い親和性を有する金属塩、
例えば酸化水銀または酢酸銀を添加するかまたは硫黄をジメチルオキシランで酸
化してより良好な脱離基を形成することにより促進できる。最終的に、フェノー
ル保護を標準法により除去して、標記化合物４を形成する。
スキーム５
ａ）Ｒ’ＮＨ2 ｂ）脱保護
別法として、標記化合物は、保護カルボジイミド（１１、スキーム６）をアニ
オンＮＨ−Ｚ（ＮＨ2ＺとＮａＨなどの塩基との反応から形成）または中性化合
物ＮＨ2Ｚ（Ｚ＝ＣＮ）および第３アミン塩基、例えば、Hunigの塩基またはトリ
エチルアミンと、求核試薬が大過剰に存在し、反応の完了を注意深くモニターす
ることによりできるだけ反応時間を短く維持する条件下で反応させ、続いて脱保
護することにより合成できる。
スキーム６ ａ）Ｚ＝ＯＲ、ＣＯＯＥｔ、ＣＨＯ、ＲＮＨＳＯ2、ＡｒＮＨＳＯ2では、ＺＮ
Ｈ-（ＺＮＨ2＋ＮａＨ）；ｂ）Ｚ＝ＯＨでは、ＺＮＨ2・ＨＣｌ ｃ）Ｚ＝ＣＮ
では、
ＺＮＨ2およびＮＲ3 ｄ）脱保護
カルボジイミド１１を、ホスゲンおよび第３アミンでの処理によりチオ尿素（
１２ａ、スキーム７）から、またはトリフェニルホスフィン、四塩化炭素および
トリエチルアミンとの反応によりチオ尿素（１２ａ）または尿素（１２ｂ）から
調製する。カルボジイミドはさらに、チオ尿素（１２ｂ）をメタンスルホニルク
ロリドおよびFellおよびCoppola(Fell,J.B.、Coppola,J.B.、Syn Communication
s 25,43,(1995))に記載されているトリエチルアミンのような第３アミン塩基と
反応させることにより調製することもできる。
スキーム７
ａ）ホスゲン、Ｅｔ3Ｎ、ｂ）Ｐｈ3Ｐ、ＣＣｌ4、Ｅｔ3Ｎ；
ｃ）ＭｓＣｌ、Ｅｔ3Ｎ
チオ尿素または尿素は、ＵＳ仮出願ＵＳＳＮ６０／０２０６５５（１９９６年
６月２７日出願、代理人整理番号Ｐ５Ｏ４６７Ｐ）および前掲の代理人整理番号
Ｐ５０３２４−２Ｐに記載されているようにして合成する。チオ尿素（１２ａ、
スキーム８）はさらに、保護オルト置換アニリンを２当量の適当な塩基、例えば
ＮａＨまたはＫＨと反応させ、このアニオンを市販のイソチオシアネートと反応
させることにより調製される。望ましいイソチオシアネートが商業的に入手でき
ない場合、これは、対応するアニリンとチオホスゲンおよび適当な塩基、例えば
炭酸水素ナトリウムとの反応により調製してもよい。
スキーム８
ａ）塩基、ｂ）Ｒ’ＮＣＳ
式（Ｉ）の化合物の医薬上許容される塩は、公知の方法、例えば、これを適当
な溶媒の存在下、適量の酸または塩基で処理することにより得られる。
実施例において、温度はすべて、摂氏（℃）である。質量分析は、特記しない
限り、高速原子衝撃を用いるＶＧ Ｚａｂ質量分析機上で行った。1Ｈ−ＮＭＲ
（以下、「ＮＭＲ」という）スペクトルは、Bruker ＡＭ２５０またはＡＭ４０
０スペクトロメーターを用い、各々、２５０ＭＨｚまたは４００ＭＨｚで記録し
た。示されている多重線は、Ｓ＝一重線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｑ＝四重線
、ｍ＝多重線であり、ｂｒは広範なシグナルを示す。飽和は飽和溶液であり、当
量は試薬の主な反応体に対するモル当量の割合を示す。
フラッシュクロマトグラフィーは、Merck Silicaゲル６０（２３０−４００メ
ッシュ）で操作する。
治療法
式（Ｉ）の化合物、またはその医薬上許容される塩は、ヒト、または他の哺乳
動物における、このような哺乳動物の細胞、例えば、単球および／またはマクロ
ファージ、またはＩＬ−８αまたはβレセプター（Ｉ型またはＩＩ型レセプター
とも称する）と結合する他のケモカイン（これに限定されない）による過剰また
は未調整のＩＬ−８サイトカイン産生により悪化または引き起こされる病態の予
防的または治療的処置用医薬の製造において用いることができる。
したがって、本発明は、ケモカインがＩＬ−８αまたはβレセプターと結合す
るものであるケモカイン介在疾患の治療法であって、有効量の式（Ｉ）の化合物
またはその医薬上許容される塩を投与することからなる方法を提供する。特に、
ケモカインは、ＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＥＮＡ−７８または
ＮＡＰ−２である。
式（Ｉ）の化合物はサイトカイン機能、特に、ＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ
、ＧＲＯγ、ＥＮＡ−７８またはＮＡＰ−２を阻害し、生理学的機能を正常なレ
ベルに生物学的にダウンレギュレーションするか、または場合によっては正常な
レベル以下に下げて病態を改善するのに有効な量で投与される。例えば、本発明
に関するＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＥＮＡ−７８またはＮＡＰ
−２の異常なレベルとは、（ｉ）１ピコグラム／ｍＬ以上の遊離ＩＬ−８のレベ
ル；（ｉｉ）正常な生理学的レベルより高いいずれかの細胞性ＩＬ−８、ＧＲＯ
α、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ,.ＥＮＡ−７８およびＮＡＰ−２；または（ｉｉｉ）Ｉ
Ｌ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＥＮＡ−７８または、ＡＰ−２の各々
を産生する細胞または組織における基底レベル以上のＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲ
Ｏβ、ＧＲＯγ、ＥＮＡ−７８またはＮＡＰ−２の存在である。
過度または未調整のＩＬ−８産生がその増悪および／または発生に関与する多
くの病気がある。ケモカイン介在疾患は、乾癬、アトピー性皮膚炎、関節炎、喘
息、慢性閉塞性肺病、成人呼吸窮迫症候群、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性
大腸炎、卒中、敗血症性ショック、内毒素ショック、グラム陰性敗血症、毒性シ
ョック症候群、心臓および腎臓再潅流傷害、糸球体腎炎、血栓症、対宿主移植片
反応、アルツハイマー病、同種移植片拒絶反応、マラリア、再狭窄、血管形成ま
たは望ましくない造血幹細胞放出を包含する。
これらの病態は、多量の好中球浸潤、Ｔ−細胞浸潤、または新生血管成長によ
り特徴付けられ、炎症部位への好中球の走化性または内皮細胞の方向性成長の原
因であるＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγまたはＮＡＰ−２産生の増加
に関連付けられる。他の炎症性サイトカイン（ＩＬ−１、ＴＮＦおよびＩＬ−６
）とは対照的に、ＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγまたはＮＡＰ−２は
、好中球化
学走性、エラスターゼ放出を包含するがこれに限定されない酵素放出ならびにス
ーパーオキシド産生および活性化を促進する独特の性質を有する。特に、ＩＬ−
８ＩまたはＩＩ型レセプターにより作用するＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγまた
はＮＡＰ−２であるが、α−ケモカインは、内皮細胞の方向依存性成長の促進に
より腫瘍の新生血管生成を促進しうる。したがって、ＩＬ−８誘発化学走性また
は活性化の阻害は好中球浸潤の直接的減少をもたらす。
近年、ＨＩＶ感染症の治療におけるケモカインの役割も実証されているLittle
manら、Nature 381,pp661(1996)およびKoupら、Nature 381,pp 667(1996)。
本発明はさらに、式（Ｉ）のケモカインレセプターアンタゴニスト化合物によ
るＣＮＳ傷害に対して感受的と思われる個体における急性条件での治療ならびに
予防手段を提供する。
本明細書において定義するＣＮＳ傷害は、例えば手術などによる開放性または
貫通性頭部外傷、または頭部領域への損傷などによる閉鎖性頭部外傷の両方を包
含する。特に脳部分への虚血性卒中もこの定義に包含される。
虚血性卒中は、通常、塞栓、血栓または血管の局所的アテローム性閉塞の結果
として、特定の脳領域への血液供給が不十分な結果起こる局部的神経障害と定義
される。この領域での炎症性サイトカインの役割が明らかにされており、本発明
はこれらの傷害の潜在的な治療手段を提供する。これらのような急性傷害に関し
て利用可能な治療法は比較的少ない。
ＴＮＦ−αは、内皮白血球付着分子発現を包含するプロ炎症性作用を有するサ
イトカインである。白血球は虚血脳病変中に侵入するため、ＴＮＦのレベルを阻
害するかまたは減少させる化合物は虚血性脳傷害を治療するのに有用である。Li
uら、Stoke,Vo1.25.,No.7,pp 1481-88(1994)（その開示は出典明示により本発明
の一部とする）参照。
閉鎖性頭部傷害のモデルおよび５−ＬＯ／ＣＯ混合剤での治療が、Shohamiら
、J.of Vaisc & CIinical Physiology and Pharmacology,Vol.3,No.2,pp.99-107
(1992)（その開示は出典明示により本発明の一部とする）で検討されている。浮
腫形成を減少させる治療は、これらの治療される動物における機能的結果を向上
させることが判明
した。
式（Ｉ）の化合物を、ＩＬ−８アルファまたはベータレセプターと結合するＩ
Ｌ−８の、例えば好中球走化性および活性化の減少により証明される、これらの
レセプターとの結合を阻害するのに十分な量で投与する。式（Ｉ）の化合物がＩ
Ｌ−８結合の阻害物質であるという知見は、本明細書において記載するインビト
ロレセプター結合検定における式（Ｉ）の化合物の効果に基づく。式（Ｉ）の化
合物は、ＩＩ型ＩＬ−８レセプターの阻害物質であることが判明している。
本明細書において用いる場合、「ＩＬ−８介在疾患または病態」なる用語は、
ＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＥＮＡ−７８またはＮＡＰ−２が、
ＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＥＮＡ−７８またはＮＡＰ−２その
物の産生、またはＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＥＮＡ−７８また
はＮＡＰ−２が別のモノカイン、例えばＩＬ−１、ＩＬ−６またはＴＮＦ（これ
に限定されない）の放出を惹起することで関与する、いずれかおよびすべての病
態を意味する。したがって、例えば、ＩＬ−１が主成分であり、その産生または
作用がＩＬ−８に応答して悪化または分泌される病態は、ＩＬ−８により媒介さ
れる病態であると考えられる。
本明細書において用いる場合、「ケモカイン介在疾患または病態」なる用語は
、ＩＬ−８αまたはβレセプターと結合するケモカイン、例えばＩＬ−８、ＧＲ
Ｏα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＥＮＡ−７８またはＮＡＰ−２（これに限定されな
い）が関与するいずれかおよびすべての病態を意味する。これは、ＩＬ−８その
物の産生、またはＩＬ-８が別のモノカイン、例えばＩＬ−１、ＩＬ−６または
ＴＮＦ（これに限定されない）の放出を惹起することでＩＬ−８が関与する病態
を包含する。したがって、例えば、ＩＬ−１が主成分であり、その産生または作
用がＩＬ−８に応答して悪化または分泌される病態は、ＩＬ−８により媒介され
る病態であると考えられる。
本明細書において用いる場合、「サイトカイン」なる用語は、細胞の機能に影
響を与え、免疫、炎症または造血応答における細胞間の相互作用を変調する分子
である、分泌されるポリペプチドを意味する。サイトカインは、どの細胞がこれ
を産生
するかにかかわらず、モノカインおよびリンホカインを包含するが、これに限定
されない。例えば、モノカインは、一般に、単核細胞、例えばマクロファージお
よび／または単球により産生され、分泌されるものをいう。しかしながら、多く
の他の細胞もまた、ナチュラルキラー細胞、線維芽細胞、好塩基球、好中球、内
皮細胞、脳星状細胞、骨髄基質細胞、表皮性ケラチノサイトおよびＢ−リンパ球
などのモノカインを産生する。リンホカインは、一般に、リンパ球により産生さ
れるものをいう。サイトカインの例としては、インターロイキン−１（ＩＬ−１
）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、
腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）および腫瘍壊死因子ベータ（ＴＮＦ−β
）を包含するがこれに限定されない。
本明細書において用いる場合、「ケモカイン」なる用語は、前記した「サイト
カイン」と同様に、細胞の機能に影響し、免疫、炎症または造血応答における細
胞間の相互作用を調節する分子であるいずれかの分泌ポリペプチドを意味する。
ケモカインは主に細胞トランスメンブランから分泌され、特定の白血球、好中球
、単球、マクロファージ、Ｔ−細胞、Ｂ−細胞、内皮細胞および平滑筋細胞の走
化性および活性化を引き起こす。ケモカインの例は、ＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲ
Ｏβ、ＧＲＯγ、ＥＮＡ−７８，ＮＡＰ−２、ＩＰ−１０、ＭＩＰ−１α、ＭＩ
Ｐ−β、ＰＦ４、およびＭＣＰ１、２、および３を包含するが、これに限定され
ない。
式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩を療法において用いるために
、通常これを標準的製薬慣習にしたがって医薬組成物に処方する。したがって、
本発明はさらに、有効かつ非毒性量の式（Ｉ）の化合物と医薬上許容される担体
または希釈剤とを含んでなる医薬組成物に関する。
式（Ｉ）の化合物、その医薬上許容される塩およびこれを配合した医薬組成物
は、薬剤投与に通常用いられるいかなる適当な経路、例えば経口、局所、非経口
または吸入によっても都合よく投与される。式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ）の化
合物を常法にしたがって標準的医薬担体と組み合わせることにより調製される通
常の投与形態で投与される。式（Ｉ）の化合物はさらに、公知の第二の治療上活
性な化合物と組合せて通常の投与形態で投与できる。これらの方法は、成分を、
所望の調製物が
得られるように、適宜、混合し、造粒して圧縮し、または溶解させることからな
る。医薬上許容される担体または希釈剤の形態および特性は、組合せる活性成分
の量、投与経路および他の公知の要因に依存すると考えられる。担体は、処方の
他の成分と適合し、摂取者に有害でないという意味で「許容され」なければなら
ない。
用いられる医薬担体は、例えば固体または液体のいずれでもよい。固体担体の
例はラクトース、白土、シュークロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、
アカシア、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸などである。液体担体の例
は、シロップ、ピーナツ油、オリーブ油、水などである。同様に、担体または希
釈剤は、グリセリルモノステアラートまたはグリセリルジステアラートなどの当
該分野で周知の遅延性物質を単独でまたはワックスと共に含んでもよい。
広範囲に及ぶ医薬形態を用いることができる。したがって、固体担体を用いる
場合、製剤は、錠剤にしたり、粉末またはペレット形態でハードゼラチンカプセ
ル中に入れたり、トローチまたはロゼンジの形態にできる。固体担体の量は広範
囲に及ぶが、好ましくは約２５ｍｇないし約１ｇである。液体担体を用いる場合
、製剤はシロップ、乳剤、ソフトゼラチンカプセル、アンプルなどの滅菌注射可
能な液体または非水性懸濁剤の形態にされる。
式（Ｉ）の化合物は局所的に、即ち非全身性投与により投与される。これは、
式（Ｉ）の化合物の外部から表皮へまたは口腔内への投与、およびこのような化
合物の耳、目および鼻への点滴注入を包含し、化合物が著しく血流に入らないよ
うにする。これに対して、全身性投与は、経口、静脈内、腹膜組織内および筋肉
内投与を意味する。
局所投与に適した処方は、炎症部位へ皮膚を通して浸透するのに適した液体ま
たは半液体製剤、例えばリニメント、ローション、クリーム、軟膏またはペース
ト、ならびに目、耳または鼻への投与に適した滴剤を包含する。活性成分は、局
所投与の場合、処方の０.００１％ないし１０％ｗ／ｗ、例えば１％ないし２重
量％を有してなる。しかしながら、処方の１０％ｗ／ｗを含んでもよいが、好ま
しくは５％ｗ／ｗ未満、より好ましくは０.１％ないし１％ｗ／ｗを含む。
本発明のローションは、皮膚または目への適用に適したものを包含する。点眼
ロー
ションは所望により殺菌剤を含んでもよい滅菌水溶液を含み、滴剤の調製と類似
の方法により調製される。皮膚へ適用するためのローションまたはリニメントは
さらにアルコールまたはアセトンなどの皮膚の乾燥を促進し、冷却する薬剤およ
び／またはグリセロールなどの保湿剤またはヒマシ油もしくは落花生油などどの
油を含んでもよい。
本発明のクリーム、軟膏またはペーストは外部適用するための活性成分の半固
体処方である。これらは、活性成分を微粉末または粉末形態で、単独または水性
または非水性流体中溶液または懸濁液の形態で、適当な機械を用いて、グリース
状または非グリース状基剤と混合することにより調製される。基剤は、炭化水素
、例えば、固型、軟または流動パラフィン、グリセロール、ミツロウ、金属石鹸
；漿剤；アーモンド油、トウモロコシ油、落花生油、ヒマシ油またはオリーブ油
などの天然源の油；羊毛脂またはその誘導体あるいはステアリン酸またはオレイ
ン酸などの脂肪酸などをアルコール、例えばプロピレングリコールまたはマクロ
ゲルとともに含んでもよい。処方はいずれの適当な界面活性剤、例えばアニオン
、カチオンまたは非イオン性界面活性剤、例えばソルビタンエステルまたはその
ポリオキシエチレン誘導体を配合してもよい。懸濁化剤、例えば天然ガム、セル
ロース誘導体または無機物質、例えばケイソウ土、および他の成分、例えばラノ
リンを配合してもよい。
本発明の滴剤は、滅菌水性または油性溶液または懸濁液を含んでもよく、活性
成分を殺菌剤および／または殺真菌剤および／または他の適当な保存剤の適当な
水溶液に溶かし、好ましくは界面活性剤を配合することにより調製される。得ら
れた溶液を次に濾過により清澄化し、適当な容器に移し、これを密封し、加圧殺
菌または９８〜１００℃に半時間維持することにより殺菌する。別法として、溶
液を濾過により滅菌し、無菌技術により容器に移す。滴剤に配合するのに適した
殺菌剤および殺真菌剤の例は、硝酸または酢酸フェニル水銀（０.００２％）、
ベンズアルコニウムクロリド（０.０１％）および酢酸クロルヘキシジン（０.０
１％）である。油性溶液の調製に適した溶媒は、グリセロール、希釈アルコール
およびプロピレングリコールを包含する。
式（Ｉ）の化合物は、非経口的、即ち、静脈内、筋肉内、皮下、鼻腔内、直腸
内、
膣内または腹膜内投与により投与される。皮下および筋肉内形態の非経口投与が
一般に好ましい。このような投与に適する形態は通常の技術により調製される。
式（Ｉ）の化合物はさらに、吸入、即ち鼻腔内または経口吸入投与によっても投
与できる。エアロゾル処方または計量器付吸入器などのこのような投与に適した
投与形態は、通常の技術により調製される。
式（Ｉ）の化合物に関して明細書において開示されるあらゆる使用法に関して
、一日の経口投与量は、好ましくは全体重１ｋｇあたり約０.０１ないし約８０
ｍｇである。一日の非経口投与量は全体重１ｋｇあたり約０.００１ないし約８
０ｍｇである。一日の局所投与量は好ましくは０.１ｍｇないし１５０ｍｇであ
り、一日につき１ないし４回、好ましくは２または３回投与する。一日の吸入量
は、好ましくは一日につき約０.０１ｍｇ／ｋｇないし約１ｍｇ／ｋｇである。
式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩の最適量および各投与の間隔は
、治療する症状の性質および程度、投与形態、経路および部位、ならびに治療す
る個々の患者により決定され、このような最適値は通常の技術により決定できる
ことも当業者には理解できるであろう。また、最適の治療法、即ち、特定の日数
の間、一日につき投与される式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩の
投与回数は、通常の治療決定試験を用いて当業者により確認できることも、当業
者には理解できるであろう。
本発明を以下の生物学的実施例を参照して記載するが、これらは単に例示的な
ものであって、本発明の範囲を限定するものではない。
生物学的実施例
本発明の化合物のＩＬ−８、およびＧＲＯ−αケモカイン阻害効果を以下のイ
ンビトロ検定により測定する：
レセプター結合検定
比活性が２０００Ｃｉ／ミリモルである[125Ｉ]ＩＬ−８(ヒト組換体)をAmersha
m Corp.、Arlington Heights、ILから入手する。ＧＲＯ−αをNEN-New England
Nuclearから入手する。他の薬品はすべて分析用である。高レベルの組換えヒト
ＩＬ−８αおよびβ型レセプターを、各々、チャイニーズハムスター卵巣細胞に
おいてすでに
記載されているようにして発現させた［Holmesら、Science,1991，253，1278］
。
チャイニーズハムスター卵巣膜をすでに記載されているプロトコルにしたがって
均質化した［Holmesら、Science，1991，253，1278］。ただし、均質化緩衝液を
１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ、１ｍＭ ＭｇＳＯ4、０.５ｍＭ ＥＤＴＡ（エチ
レンジアミン四酢酸）、１ｍＭ ＰＭＳＦ（α−トルエンスルホニルフルオリド
）、０.５ｍｇ／Ｌ ロイペプチン、ｐＨ７.５に変更する。膜タンパク濃度を、
Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｏ．ミクロ分析キットを用いて、ウシ血清アルブミンを標体と
して用いて測定する。すべての試験は、９６−ウェルマイクロプレート様式で行
う。各反応混合物は、１.２ｍＭ ＭｇＳＯ4、０.１ｍＭ ＥＤＴＡ、２５ｍＭ
ＮａＣｌおよび０.０３％ ＣＨＡＰＳを含有する２０ｍＭ ビス−トリスプ
ロパンおよび０.４ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８.０）中125Ｉ ＩＬ
−８（０.２５ｎＭ）または125Ｉ ＧＲＯ−αおよび０.５μｇ／ｍＬのＩＬ−
８Ｒαまたは１.０μｇ／ｍＬのＩＬ−８Ｒβ膜を含有する。加えて、あらかじ
めＤＭＳＯ中に溶解させた問題の薬物または化合物を添加して、最終濃度が０.
０１ｎＭと１００ｕＭの間になるようにする。検定を、125Ｉ−ＩＬ−８の添加
により開始する。室温で１時間後、Ｔｏｍｔｅｃ９６−ウェルハーベスターを用
いて１％ポリエチレンイミン／０.５％ ＢＳＡでブロックしたガラス繊維フィ
ルターマット上にプレートを収穫し、２５ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ
ＨＣｌ、１ｍＭ ＭｇＳＯ4、０.５ｍＭ ＥＤＴＡ、０.０３％ＣＨＡＰＳ（
Ｈ７.４）で３回洗浄する。フィルターを次に乾燥し、Ｂｅｔａｐｌａｔｅ液体
シンチレーションカウンターで計数する。組換えＩＬ−８Ｒα（またはＩ型）レ
セプターはさらに、本明細書において非許容レセプターとも称され、組換えＩＬ
−８Ｒβ（またはＩＩ型）レセプターは許容レセプターと称される。
走化性検定：
これらの化合物のインビトロ阻害特性は、Current Protocols in Immnunology
,vol I，Suppl 1,Unit 6.12.3.（その開示は全体として出典明示により本発明の
一部とする）に記載されているように好中球走化性検定で測定する。好中球をCu
rrent Protocols in Immunology Vol I，Suppl 1 Unit 7.23.1（その開示は全体
として出
典明示により本発明の一部とする）に開示されているようにしてヒト血液から単
離した。化学誘引物質ＩＬ−８、ＧＲＯ−α、ＧＲＯ−β、ＧＲＯ−γおよびＮ
ＡＰ−２を０.１と１００ｎＭの間の濃度で４８マルチウエルチャンバー(Neuro
Probe，Cabin John，MD）の底部チャンバーに入れる。２つのチャンバーは５ｕ
ｍポリカーボネートフィルターで分離されている。本発明の化合物を試験する場
合、これらを、細胞を上部チャンバーに添加する直前に、細胞（０.００１−１
０００ｎＭ）と混合する。インキュベーションは、約４５と９０分の間で、約３
７℃で、５％ＣＯ2の加湿インキュベータ中で行う。インキュベーション期間の
最後に、ポリカーボネート膜を除去し、頂上部を洗浄し、膜を次に、Diff Quick
染色法（Baxter Products、McGaw Park，IL，USA）を用いて染色する。ケモカイ
ンに対して走化性を示す細胞を顕微鏡を用いて目視により計数する。一般に、４
つのフィールドを各サンプルについて計数し、これらの数を平均して、移動した
細胞の平均数を求める。各サンプルを三重試験で試験し、各化合物を少なくとも
４回繰り返し試験する。特定の細胞（正の対照細胞）には化合物を添加せず、こ
れらの細胞は細胞の最大の走化性応答を示す。負の対照（刺激しない）が望まし
い場合、ケモカインを底部チャンバーに添加しない。正の対照と負の対照間の違
いは、細胞の走化性活性を表す。
エラスターゼ放出検定：
本発明の化合物を、ヒト好中球からのエラスターゼ放出を防止する能力につい
て試験する。好中球は、Current Protocols in Immunology Vol I,Suppl 1 Unit
7.23.1.に記載されているようにしてヒト血液から単離する。リンゲル溶液（Ｎ
ａＣｌ １１８、ＫＣｌ、４.５６、ＮａＨＣＯ3 ２５、ＫＨ2ＰＯ4 １.０３
、グルコース１１.１、ＨＥＰＥＳ ５ｍＭ、ｐＨ７.４）中に懸濁したＰＭＮ０
.８８×１０6個の細胞を、５０ｕｌの容量で９６ウェルプレートの各ウェルに入
れる。このプレートに、５０ｕｌの容量の試験化合物（０.００１−１０００ｎ
Ｍ）、５０ｕｌ（２０ｕｇ／ｍｌ）の体積のシトカラシンＢおよび５０ｕｌの容
量のリンゲル緩衝液を添加する。これらの細胞を、最終濃度０.０１−１０００
ｎＭのＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯ-γまたはＮＡＰ−２を添加する
前に５分間暖める（３７℃、
５％ ＣＯ2、９５％ ＲＨ）。反応を、９６ウェルプレートの遠心分離（８０
０×ｇ５分）および１００ｕｌの上清の除去前４５分間進行させる。この上清を
別の９６ウェルプレートに添加し、続いて人造エラスターゼ基質（ＭｅＯＳｕｃ
−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ＡＭＣ、Ｎｏｖａ Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｌａ
Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を燐酸緩衝セイラインに溶かし、最終濃度６ｕｇ／ｍｌに
なるように添加する。直ちに、プレートを蛍光９６−ウェルプレートリーダー(C
ytof1uor 2350、Millipore,Bedford、MA）に入れ、データをNakajimaらの方法（
J.Biol Chem 2544027(1979)）にしたがって３分間隔で集める。ＰＭＮから放出
されたエラスターゼの量を、ＭｅＯＳｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−
ＡＭＣ分解速度を測定することにより計算する。
ＴＮＦ−α外傷性脳傷害検定
この試験は、ラットにおいて実験的に誘発した側液衝撃外傷性脳傷害（ＴＢＩ
）の後に起こる特定の脳領域における腫瘍壊死因子ｍＲＮＡの発現を調べるため
に行う。成体スプレーグ−ドーリーラット(Sprague-Dawley)（ｎ＝４２）をペン
トバルビタールナトリウム（６０ｍｇ／ｋｇ、ｉ.ｐ.）で麻酔し、左側頭頂皮質
（ｎ＝１８）に集中させた中程度（２.４atm）の側液衝撃脳傷害に供するか、ま
たは「疑似」治療（傷害なしで麻酔および手術を施した、ｎ＝１８）に供した。
動物を傷害の１、６および２４時間後に断頭により殺し、脳を摘出し、左（損傷
）頭頂皮質（ＬＣ）、対側性右皮質（ＲＣ）の対応する部分、損傷を受けた頭頂
皮質に隣接する皮質（ＬＡ）、右皮質における対応する隣接領域（ＲＡ）、左海
馬（ＬＨ）および右海馬（ＲＨ）の組織サンプルを調製する。全ＲＮＡを単離し
、ノザンブロットハイブリダイゼーションを行い、ＴＮＦ−α正対照ＲＮＡに対
して定量した(マクロファージ＝１００％)。外傷を受けた半球において損傷の１
時間後に、ＴＮＦ−αｍＲＮＡ発現の著しい増加がＬＨ（正対照の１０４±１７
％、疑似に比較してｐ＜０.０５）、ＬＣ（１０５±２１％、ｐ＜０.０5）およ
びＬＡ（６９±８％、ｐ＜０.０１）において観察される。ＬＨ（４６±８％、
ｐ＜０.０５）、ＬＣ（３０±３％、ｐ＜０.０１）およびＬＡ（３２±３％、ｐ
＜０.０１）においても増加したＴＮＦ
−αｍＲＮＡ発現が６時間で観察され、これは損傷の２４時間後に消散する。対
側性半球において、ＴＮＦ−αｍＲＮＡの発現は、損傷後１時間で、ＲＨ（４６
±２％、ｐ＜０.０１）、ＲＣ（４±３％）およびＲＡ（２２±８％）において
増加し、６時間で、ＲＨ（２８±１１％）、ＲＣ（７±５％）およびＲＡ（２６
±６％、ｐ＜０.０５）において増加するが、２４時間後には増加しない。疑似
（損傷なしの手術）または実験を受けていない動物において、ＴＮＦ−αｍＲＮ
Ａの発現における一貫した変化は、いずれの半球におけるいずれの６つの脳領域
においても、いずれの時点でも観察されない。これらの結果は、副矢状液衝撃脳
傷害の後に、ＴＮＦ−α ｍＲＮＡの一時的発現が外傷を受けていない半球部分
を含む特定の脳領域で変化することを示す。ＴＮＦ−αは神経成長因子（ＮＧＦ
）を誘発でき、他のサイトカインの活性化星状細胞からの放出を刺激するので、
ＴＮＦ−αの遺伝子発現における外傷後の変化はＣＮＳ外傷に対する急性および
再生性応答の両方において重要な役割を果たす。
ＩＬ−βｍＲＮＡについてのＣＮＳ傷害モデル
この検定は、ラットにおいて実験的側液衝撃外傷性脳障害（ＴＢＩ）後の特定
の脳領域におけるインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）ｍＲＮＡの局所的発現
を特徴付ける。成体スプレーグ−ドーリーラット（ｎ＝４２）をペントバルビタ
ールナトリウム（６０ｍｇ／ｋｇ、ｉ.ｐ.）で麻酔し、左側頭頂皮質（ｎ＝１８
）に集中した中程度（２.４気圧）の側液衝撃脳傷害を受けさせるかまたは「疑
似」治療（傷害のない麻酔および手術）を施した。動物を傷害の１、６および２
４時間後に殺し、脳を取り出し、左（損傷）頭頂皮質（ＬＣ）、対側性右皮質（
ＲＣ）における対応領域、損傷を受けた頭頂皮質に隣接する皮質（ＬＡ）、右皮
質における対応する隣接領域（ＲＡ）、左海馬（ＬＨ）および右海馬（ＲＨ）の
組織サンプルを調製する。全ＲＮＡを単離し、ノザンブロットハイブリダイゼー
ションを行い、脳組織ＩＬ−１βｍＲＮＡの量を、同ゲル上に負荷したＩＬ−１
β正マクロファージＲＮＡの相対的放射活性％として表す。脳傷害後１時間で、
外傷を受けた半球において、ＩＬ−１βｍＲＮＡ発現の著しいかつ有意な増加が
ＬＣ（正対照の２０.０±０.７％、
ｎ＝６、疑似動物に比較してｐ＜０.０５）、ＬＨ（２４.５±０.９％、ｐ＜０.
０５）およびＬＡ（２１.５±３.１％、ｐ＜０.０５）において観察され、これ
は傷害の６時間後まで、ＬＣ（４.０±０.４％、ｎ＝６、ｐ＜０.０５）および
ＬＨ（５.０±１.３％、ｐ＜０.０５）において高いままであった。疑似または
実験を受けていない動物において、ＩＬ−１β ｍＲＮＡの発現はいずれの各脳
領域においても見られない。これらの結果は、ＴＢＩの後に、ＩＬ−１β ｍＲ
ＮＡの一時的発現が脳の特定の領域において局部的に刺激されることを示す。Ｉ
Ｌ−１βなどのサイトカインにおけるこれらの局部的変化は脳傷害後において重
要な役割を果たす。
上記の記載事項はその好ましい具体例を含む本発明を完全に開示するものであ
る。本明細書に開示した具体例の修飾および改良は以下の請求の範囲の範囲内で
ある。さらに工夫することなく、当業者は上記の記載事項を用いて本発明を最大
限に利用することができると考えられる。したがって、本明細書の実施例は単に
例示的であって、本発明の範囲をなんら制限するものでないと考えられる。排他
的性質または優先権を主張する本発明の具体例を以下のように定義する。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 ウィドーソン，キャサリン・エル
アメリカ合衆国19406ペンシルベニア州キ
ング・オブ・プルシア、オールド・バレ
ー・フォージ・ロード1047番