SE458118B - Foerfarande foer framstaellning av ett injicerbart kondroitinpolysulfat, en produkt som kan erhaallas genom detta foerfarande och en farmaceutisk komposition - Google Patents

Description

15 20 25 UI 'Jl 458118 rakteriserat av att A ratt kondroitinpolysulfat depolymeriseras oxidativt, B det depolymeriserade kondroitinpolysulfatet blekes, vändigt, med perättiksyra, om nöd- C produkten, som erhallits efter A och B, underakstas en eller tva ganger íällning med metanol och/eller ultrafiltrering för íraktionering med avseende på molekylvíkt, D produkten, som erhållits efter C, deminieraliseras, om_ nödvändigt, med katjonutbytare och E produkten, som erhållits efter C eller D, avfärgas, om nödvändigt, med aktivt kol.

Forfarandena, som är kända från teknikens ståndpunkt, som beskrivas i ovan ang t ex de ivna litteraturreíerenser, kan användas för erhållande av ratt kondroitinpolysulfat, som användes sasom utgangsmaterial. Utan att begränsa uppfinningen till denna metod eller till en av ovan angivna metoder att' framställa ratt kondroitinpolysulíat, är det möjligt att utgå från en produkt, som erhålles genom sulíatering av kondroitin- sulíat med pyridin och klorosulfonsyra. med vitt var Kondroitínpolysulfater ierande färgning kan användas. Det är även möjligt a kondroitinpolysulfater, som härstam- mar från steg C i föreliggande förfarande. att använda högmolekylär Följande reagens kan användas för att reglera pH-värdet i förfarandet, som beskrives nedan: syror sasom oorganiska syror, t ex saltsyra, och làgaliïatiska karboxylsyror eller persyror därav, t ex ättiksyra eller perättiksyra, och alkalier, såsom alkalimetallhydroxidlösningar, t ex De indi- viduella stegen i förfarandet utföres lämpligen under normalt natriumhydroxidlösning eller kaliumhydroxidlösning. tryck. Såvida inte annat anges, är procentdata i följande text I föreliggande förfarande ges metanol såsom det fällande medlet för mellanprodukter och slutprodukten.

Andra med vatten blandbara organiska vätskor, "vikt/volym"~data. såsom etano1,A aceton, tetrahydrofuran och dioxan, är ocksa pà liknande sätt lämpliga. Mellanprodukterna, isopropanol, som alstrats i de individuella stegen 1 förfarandet, maste inte nödvändigtvis isoleras såsom torra substanser. Bet år även möjligt'att 1 2 2 b: 0 0 5 LH 458118 ytterligare behandla de lösningsmedelsfuktiga massorna utan att torka dem. Salter i ett koncentrationsomràde fran 0,1 - 10 %, lämpligen 0,5 - S %, tillsättes fördelaktigen under fällningen av kondroitinpolysulfatsubstanserna med med vatten blandbara lösningensmedel. Salter, som är speciellt lämpliga, är natrium- eller kaliumklorid ooh natrium- eller kaliumacetat.

Förhallandena för stegen Atill E i förfarandet enligt föreliggande uppfinning, vilka beskrives mera i detalj i stycke 3 till sid 9, ett väsentligt omrâde. Följaktligen skall para- följande text (sid 3, stycke 1), kan varieras inom ges nedan för de individuella stegen, inte metrarna, som förstås såsom obligatoriska utan endast såsom en fördelaktig utföringsform av föreliggande uppfinning, sa att föreliggande uppfinning inte begränsas till dessa parametrar.

Kondroitinpolysulfat kan depolymeriseras med väteperoxid i franvaro av tunga metaller. Depolymerisationssteget kan utföras i vattenhaltig lösning under följande förhållanden: koncentrationen av rått kondroitinpolysulfat kan vara 2-35 %, lämpligen 10-30 %. koncentrationen av vâteperoxid i reaktions- mediet kan vara 0,3-15 %, lämpligen 1-5 %.

Reaktionstemperaturen kan vara 20-1DO0C, lämpligen 50-1ÜÜoC.

Reaktionstiden är inom omradet från 10 minuter till 24 timmar, lämpligen från SD till 200 minuter. pH-värdet kan hållas konstant vid mellan d och 9 eller kan även förbli oreglerat, och är lämpligen mellan 4,5 och 7.

Tunga metaller, som är närvarande, kan blockeras genom komplexbildande medel, sasom nitrilotriättiksyra, etylendi~ nitrilotetraättiksyra, 1,2-cyklohexylendinitrilotetraättik- syra, dietylentriaminpentaättiksyra, 3,ó~dioxaoktametylendi- nitrilotetraättiksyra eller blandningar därav eller alkalime- tallsalter därav. Honcentrationen av det komplexbildande medlet i reaktionsmediet halles mellan D,0Dl och 0,5 %, lämpligen mellan 0,ÜOS och 0,15 %. När reaktionen har slutat, kan reaktionsprodukten utfällas med ett överskott av metanol, efter tillsats av ett alkalimetallsalt och antingen utan (_11 l/'I 458 118 -4 kylning eller efter kylning, och isoleras.

Depolymerisationen av kondroitinpolysulfat med väteperoxid kan även utföras 1 närvaro av tungmetallsalter under speciellt milda förhållanden. Depolymerisationen utföres exempelvis pa koncentrationen av ratt kondroitinpolysulfat kan vara 2-35 %, lämpligen 15-30 %. följande sätt: Koncentrationen av väte- peroxid i reaktionslösningen kan vara 0,5-15 X, lämpligen 1-5 %. Reaktionst emperaturen kan vara inom omradet från -1006 till +ao c, lämpligen fran d°c till 3o°c. från 5 minuter till Reaktionstiden kan vara 24 timmar, lämpligen från 30 till 500 mi- nuter. pH-vardet kan vara mellan 3 och 8, lämpligen mellan 4,5 och som har visat sig lämpliga, är oorganiska och organiska salter av järn, kobolt, mangan och vanadin. 7,5. Tungmetallsalter, koppar, hetallerna av dessa salter är lämpligen i följande valensnivaer: järn och kobolt: di- och tri-valenta, koppar: mono- och di-valent, mangan: di-, tri-. tetra~, hexa- och hepta-valent, och vanadin: tr di- och penta-valent. Koncen- ationen av metallsalt regleras till mellan 0,001 och 0,5 %, lämpligen mellan 0,05 och 0 ,2 %. Efter nedbrytning regleras pH-värdet-till inom omradet íran 5 till 14, till 10, lämpligen fran 6 och den depolymeriserade produkten isoleras genom fällning med metanol.

Det oxidativa depolymerisationssteget av kondroitinpolysulfat kan utföras genom oxidativ nedbrytning av kondroitinpolysulfat med perëttiksyra i närvaro av vissa tungmetallsalter med samma resultat som ovanstående metoder. Följande förhållanden har a de under vilka reaktionen kan realiseras pa ett fördelaktigt sätt: koncentr visat sig var atíonen av ratt kondroitinpolysul- sat kan vara 5-35 %, lämpligen 10-25 X. Koncentrationen av perättiksyra i reaktionslösningen kan vara 0,1-7 %, lämpligen 0,5-2 1.

Tungmetallsaltkoncentrationen kan vara inom omradet från 0,001 till 0,5 %, lämpligen 0,005 till 0,2 %. Reaktions- temperaturen kan vara -10°C till +90OC, lämpligen 006 - 3000.

Reaktionstiden kan vara från 5 minuter till 24 timmar, lämpligen fran 15 minuter till 500 minuter. pH-värdet kan vara 10 15 20 25 30 458118 2-12, lämpligen 3-8.

Reaktionen fortgar vid en bra hastighet, t.ex med oorganiska eller organiska salter av följande tungmetaller: järn, kobolt, koppar, mangan och vanadin. Vad beträffar metallernas valens i dessa metallsalter tillämpas uppgifterna, som gjordes ovan för depolymerisaticn med väteperoxid. Det kan vara klokt att stoppa depolymerisationsoperationen med hjälp av ett kelate- ringsmedel, sasom etylendinitrilotetraättiksyra eller andra metall-blockerande medel, speciellt i fallet av relativt korta reaktionstider. Det depolymeriserade kondroitinpolysulfatet kan fällas med metanol, om nödvändigt efter tillsats av ett neutralt salt och reglering av pH-värdet till från 3 till 14, speciellt frän 6 till 10.

Râa kondroitinpolysulfat, som skiljer sig stort i renhet och färgning, är lämpliga för användning i föreliggande förfarande. Trots depolymerisationsoperationen, som i hög grad klarnar färgen, kan det vara nödvändigt att innefatta avfärg- ningssteg eller ett blekningssteg innan ytterligare behand- ling. Blekning utföres med perättiksyra. Följande förhållanden har visat sig vara fördelaktiga: pH-omradet kan vara fran 2,5 till 14, lämpligen fràn 3 till il. kan vara 0,1-10 %, kondroitinpolysulfat kan vara 2-40 %, Perättiksyrakoncentrationen lämpligen 1-5 %. Koncentrationen av ratt lämpligen 5-25 X.

Reaktionen utföres i temperaturomradet fràn 0 till 10UOC, lämpligen fran 15 till 700C. Reáktionstiden kan vara mellan 1 minut och 96 timmar, speciellt mellan 1 och 24 timmar.

Enligt en lämplig utföringsform kan perättiksyrabehandlingen införlivas i den följande molekylära fraktioneringsprocessen.

Såsom redan har angivits ovan kan perättiksyrabehandlingen även utelämnas fullständigt.

Molekylviktomràdet från cirka 5 000 till 15 D00 utfraktioneras av produkten, som erhållits efter bleknings- eller depolymerisationssteget, genom fällning med metanol vid olika koncentrationer. 10 från o till sn°c, 458118 -6 För detta steg kan det depolymeriserade och om nödvändigt blekta kondroitinpolysulfatet behandlas i vattenhaltig lösning alt salt på föjande sätt koncentrationen av det depolyme- riserade kondroitinpolysulíatet i den vattenhalti kan vara 5-3D %, lämpligen 5-20 %. omradet från 2 till 10, med metanol i närvaro av ett neutr (1:a fällning med metanoll: ga lösningen pH-värdet kan vara inom lämpligen från 3,0 till 7,5. Det neu- trala saltinnehàllet kan vara 0,5-10 %, lämpligen 1-5 %._Ett iumklorid. Temperaturen kan vara lämplöigen från 15 :i11 3d°c. mängden metanol kan vara 25-45 volym-%, lämpligt neutralt salt är natr lämpligen 30-40 volym-%, relativt hela reaktionsmediet. Högmolekylärt och högradigt sulíaterat kondroitínpolysulfat utfälles, tillsammans med orenheter, och kan borttagas genom filtrering eller Ta oentriíugering. fu UI bl U! Den metanolinnehallande lösningen, som kvarblir, bringas till en metanolkoncentration av 60-85 volym-%, lämpligen 75-80 volym-%, relativt hela behandlingsmediet, genom ytterligare tillsats av metanol (2 :a íällning med metanol) och en kondroitinpolysulfatfällning från vilken de mycket lagmoleky- lara och làgsulíaterade komponenterna borttages, tillsammans med orenheter, erhålles; dessa komponenter utfälles inte.

Det hela fraktioneringsfërfarandet med metanol eller en del därav kan ersättas med ultrafiltrering. Exempelvis är det genom ultrafiltrering av vattenhältiga lösningar av depolymeriserat kondroitinpolysulfat med membraner med en uteslutningsgräns av 6 000 och över (t ex membraner av cellulosaacetat, polyamid eller polysulfon) möjligt att kvarhalla samma första fraktion som beskrev ovan i det kvarhàllna materialet. Konoentrationen av kondroitinpolysul- fatlösning kan vara 1-10 X, lämpligen 1-5 %. pH-värdet hos lösningen kan vara 2-14, lämpligen 5-10. Den genomträngda vätskan kan befrias från lagmolekylära kondroitinpolysulfat- komponenter genom fällning med metanol såsom beskrevs ovan.

Denna verkan kan även uppnas genom en andra följande ultra- filtrering med mebraner med en uteslutningsgräns av 8 000 och (IW 10 15 in) UI Lz! 'w 458118 -7 lägre. Koncentrationen av kondroitinpolysulíatlösning kan vara 1 till 10 %, vara 2 till 14, lämpligen 1 till 5 %. lämpligen 5 till 10. pH-värdet hos lösningen kan Uteslutningsgränsen för substanser av en viss molekylvikt, som ges av tillverkarna av ultrafiltreringsmembraner, är i de flesta fall inte tillämpbar pa kondroitinpolysulfater. Det lämpliga membranet i ett individuellt fall maste därför fast~ ställas genom experiment, men erfarenheten visar att det är inom de angivna områdena.

Borttagandet av salter, om nödvändigt tunga metalljoner, och orenheter uppnås genom behandling med en katjonbytare.

Metalljonerna bindes genom jonbytarhartserna i den protenerade formen och den fria mukopolysackarid-polysvavelsyran passerar in i filtratet eller elueras.

O temperatur från O till 50 C, ooh fördelaktigt vid Behandlingen kan utföras vid en rumstemperatur. Den kan utföras genom satsmetoden genom omröring i katjonbytaren eller genom kontinuerlig eller diskontinuerlig kolonnteknik. Lämpliga jonbytarhartser är starka syraprodukter, såsom “Lewatit S 100", "Dowex X 50" eller "Amberlite IR 120" i protonerad form.

Satsmetoden utföres i vattenhaltig lösning med kondroitin- pelysulfstkoncentrationer av 2-20 %, särskilt 5-15 %. Mängden jonbytarharts kan vara 2-1D volymdelar, speciellt 3-8 volym- delar, relativt 1 viktdel av torr kondroitinpolysulfatsub- stans. Borttagandet av salter kan även utföras under samma förhållanden under användning av jonbyutare, som hällts 1 kolonner.

Det starkt sura filtratet eller eluatet fran demineraliseringssteget underkastas fällning med 2,5-6 volymdelar, metanol 0,5-5 % av ett neutralt salt, lämpligen 3-4 volymdelar, 1 närvaro av speciellt 0,5-3 % natriumklorid.

Under fällningen från ett surt medium förblir fri svavelsyra och lagmolekylära kondroitinpolysulfatkomponenter så väl som orenheter i lösning. Efter det att kondroitinpolysvavelsyra- fallningen har avseparerats, kan den antingen ateríällas från 10 15 458118 -a neutral lösning eller vidare direkt användas för följande processteg medan den ännu är metanolfuktig.

Demineralisering kan utelämnas om ultrafiltrering har utförts under användning av ett ultrafiltreringsmembran med en lag uteslutningsgrâne C2:a ultraíiltrering), i vilket íall det kvarhallna materialet ytterligare bearbetas.

För ytterligare klarning av färgen och för att uppna en speciellt god färgstabilitet under värme sterilisering av ratt kondroítinpoly sulíat kan demineraliseringen följas av ett ytterligare reningssteg.

Behandling av kondroitinpolysulíatlösningar med aktivt träkol och fullständigt borttagande av adsorbatet ger en kondroitin- polysulfatlösning fran vilken, efter det att pH har reglerats, produkten fälles med metanol i närvaro av ett neutralt salt. koncentrationen av den vattennaltiga kondroitinpolysulfat- lösningen, som skall behandlas, är 5-25 %, speciellt 10-20 %.

Dess pH~värde är 4-10, speciellt 5-8. 0,1-3 viktdelar av aktivt träkol (relativt en viktdel av kondroitinpolysulíat) användes. Temperaturen kan vara 20-1D00C. Behandlingstiden är 10-180 minuter.

Aktivt träkol franskiljes. Fin filtrering genom ett membranfilter är sedan klokt för att erhålla en fullständigt träkolsfri lösning. pH-värdet regleras till 6-10, speciellt 7-8, och slutprodukten utfälles med metanol i när neutralt salt, varo av ett t ex natriumklorid i en koncentration av 0,5-5 %, speciellt l-2 %. Den slutliga koncentrationen av metanol regleras till 60-85 volymprocent, lämpligen 75-BD volymprocent. Exempel på lämpliga aktiva träkol är "Brilonit normal" íLurgi), aktivt rent träkol, kat. nr. 2183 (Merck), aktivt rent trâkol, pulver, kat. nr. 18003 (Riedel de Haen).

Om avfärgning med aktivt träkol utföres beror pa kondr polysulíatet, oitin- som användes såsom utgàngsmaterial.

Det kan vara fördelaktigt att utföra íâllningen av det renade kondroitinpolysulfatet med metanol i närvaro av ett'komplex- 15 458 178 -9 bildande medel och/eller natriumpyrosulíit. Denna behandling är speciellt lämplig i fallet av slutprodukten. Sasom ett resultat därav återstår injektionslösningar, som innehåller kondroitinpolysulfat och vilka, när de lagras, är fria från grumlighet och efteråt mörknar endast omärkligt. Exempel pa komplexbildande medel, som användes, är nitrilotriättiksyra, etylendinitrilotetraättiksyra, l,2-oyklohexylendínitrilotetra- ättiksyra, dietylentriaminpentaättiksyra och 3,b-dioxaokta- metylendinitrilotetraättiksyra, i koncentrationer av 0,01-0,5 %. Koncentrationer av 0,05-0,35 % användes lämpligen.

Koncentrationen av natriumpyrosulíit, som kan användas under fällningen med metanol, kan vara 0,01-0,5 %.

Beskrivet kondroitinpolysulíat är av terapeutisk betydelse hos människor och djur. Substansen har en antikoagulemisk, trombo- lytisk, tromboproíylaktisk (speciellt på djup ventrombos), antiaterosklerotisk, antilipemisk, antiinflammatorisk, anti- svettnings~, antiartrotisk och virustatisk verkan.

En karakteristisk ny substans, som kännetecknas av en överraskande lag toxioitet, erhalles genom det speciella förloppet och naturen av behandlingarna i förfarandet enligt föreliggande uppfinning.

Tabell 1 Djurarter Administrering LD50,7d NNRI-möss i.v. > 3 500 mg/kg Wistar-råttor 1.v. > 3 ÜDO mg/kg íattor 1.v. > 1 ÜÜÜ mg/kg Hundar i.v. > 1 DOD mg/kg Föreliggande uppfinning avser även ett kondroitinpolysulfat med en akut toxicitet, som motsvarar en dëdlig dos, vid intravenös administrering, av >3 500 mg/kg i NNRI-möss, av 458118 Un 10 LH fw FJ Po U! -10 >3 000 mg/kg i Mister-råttor och av >1 ODD mg/kg i katter och hundar. En lämplig produkt enligt föreliggande uppfinning har en akut toxicitet, som motsvarar en dödlig dos, vid intravenös administrering, av >4 000 mg/kg i NMRI- möss, av >3 500 mg/kg i Nistar-råttor, av >1 500 mg/kg i katter och av >1 000 mg/kg i hundar.

Kondroitinpolysulíater med ett LD 50 (möss, i.v.J pa endast 1 000 mg/kg har sa långt beskrivits i litteraturen.

Föríarandet enligt föreliggande uppfinning tillåter sålunda kondroitinpolysulfat med ett askilligt vidare terapeutiskt område. framställningen av Sne F ciellt utvecklar kcndroitinpolysulfatet, genom förfarandet enligt för som framställts eliggande uppfinning, följande parametrar: kväve 1,65 - 2,00 % svavel 12,5 - 14,5 % hexuronsyra 0,98 - 1,22 mmol/g hexosamin 0,96 - 1,24 mmol/g Slutligen avser föreliggande uppfinning en íarmaceutisk komposition, som är karakteriserad av att den innehåller ett kondroitinpolysulíat, som kan framställas genom förfarandet enligt föreliggande uppfinning, eller ett kondroitinpolysulfat såsom det som har definierats ovån.

Experiment har visat, att enstaka doser av mellan 20 och 250 mg, speciellt mellan 30 och 150 mg, ml, speciellt 0,2 per individ i 0,2 - M ,0 - 1,0 ml har en terapeutisk verkan hos manniskor och är väl tolererade. Dagliga doser pà upp till S00 mg visar sig vara terapeutiskt fördelaktiga. Injektionen kan vara intramuskulär, intraartikulär, subkutan eller intravenös, utan att läkaren knytes speciellt till endast dessa ingektionstyper. Terapeutiskt användbara lösningar av den aktiva föreningen kan exempelvis packas i ampuller, sprutor färdiga att användas, genomträngbara flaskor, glasílaskor för injektionsoistoler eller andra för injektion lämpliga primära U! 10 __; 'Jl 458118 *il íörpackningssätt. Andra administreringsmetoder är peroral, perkutan, rektal, sublingual eller buckal administrering. Den lämpliga dosen motsvarar den för administrering genom injektion.

Hondroitinpolysulfatet, som erhållits enligt föreliggande uppfíning, är även lämpligt för användning i veternarmedioi- Dosen för nen, i vilket det visar beskrivna verkningar. hundar är mellan 0,1 och 5 mg/kg kroppsvikt och dag, lämpligen 0,5 till 1,5 mg/kg, 1,0 ml. l fallet av hästar visar sig exempelvis enstaka i en volym av 0,1 -10 ml, speciellt 0,5 - lämpligen 150 ~ 500 mg, i 0,1 Kondroitinpolysulfa- dagliga doser av 100 -1 000 mg, -20 ml, speciellt l -5 ml, vara lampliga. tet kan administreras pà samma sätt som till människa.

Följande metod användes för att bestamma medelmolekylvikten: Ett 20 mg prov kromatograferas i E N natriumkloridlësning pa en "Biogel F 10" kolonn (50 g; H 100 sm, ß = 2 cm). hondroi- tinpolysulfatet påvisas i uppsamlade 10 ml fraktioner med hexuronsyra och bestämmes i enlighet med metoden enligt Z.

Disohe: J. Biol.

Aron.

Chem. ló7, 1ê9 51547) modifierad av J. D.

Gregory: Bioonem. Eiophys. å§, 157 íl950). Kondroitin- polysulíatfraktioner, vari molekylvikten har ultracentriíugering, användes så Medelmolekylvikten beräknas från volymen eluat vari Ed den totala mängden hexuronsyra,! elueras.

Följande exempel belyser föreliggande uppfinning.

Exempel la (steg A) 7,5 g rått hondroitinpolysulfat Cerhållbart enligt tyska patentskriften B70 094l löses i 75 liter hett vatten och 2,25 kg natriumklorid och 2 ml oktan-l~ol tillsättes. En lösning av 75 g etylendinitrilotetraattiksyra i 750 ml 1 N natriumhydroxidlösning tillsättes nu. Blandningen upphettes 458118 15 20 PJ u! -la till 95°C och 7,5 liter 30-prooentig stark väteperoxi dlösning iröres sedan.

Temperaturen halles mellan 90 och 9500 under 100 minuter och blandningen kyles sedan snabbt till rumstempe- ratur. 1,5 kg natriumklorid löses i reaktionsblandningen, S50 liter metanol iröres och efter 30 minuter avdekanteras den klara överskiktede vätskan och fällningen avfiltreras över ett_ sugíilter. Materialet på filtret tvättas med metanol och torkas vid en temperatur under ó0°C. Cirka 7 kg depolymerise- rat kondroitinpolysulfat erhålles.

Exempel lb (steg AJ 7, 5 kg ratt kondroitinpolysulfat läses i 22,5 och först tillsättes 1,5 kg natriumklorid och sedan en 'ösning av 37,5 kg kdpparilllsulfat-pentahydrat i 750 ml vatten. 3 liter 30-procentig stark väteperofiid tillsättes under kylning och blandningen hàlles vid 2506 i 5 timmar. Den regleras sedan till pH 10,5 med 30-procentig stark natriumhydroxidlfisníng, fallning utföres med 132 liter metanol under emrëring, den överskiktade vätskan avdekanteras och íâllningen avíiltre med sugning. Materialet pà filtret ras tvättas med metanol och torkas vid en temperatur under 6006. Cirka 6,6 kg depolymeriseret kondroitinpeíysulfat erhålles Exempel lo (steg A) 9 kg ratt kondroitinpolysulfat löses i 45 liter vatten, en losning av 8,57 g koboltilllklorid-hexahydrat i 1 liter tillsattes och blandningen kompletteras upp till 67 liter med vatten. 1,35 liter 40-procentig stark perâttiksyra tillsattes vid rumstemperatur under loppet av 2 timmar under kontinuerlig omrdring. En läsning av 27 g dinatriumetylendi- nitrildtetraacetat-dihydrat i 1 liter vatten tillsattes sedan. pH regleras nu till ll med 30-procentig stark natriumnydroxidlösning, 2,2 kg natriumklorid tillsattes ooh vatten 10 k) Un 458118 -13 íällning utföres med 290 liter metanol under dmröring. Efter en timma avdekanteras den överskiktade vätskan, íällningen aviltreras pà ett sugfilter och materialet pa filtret tvättas med metanol och torkas vid en temperatur under 6000. Cirka 8,4 kg depolymeriserat kondroitínpelysulfat erhålles.

Exempel 2 (steg B) 8,0 kg depalymeriserat kondroitinpdlysulfat löses i 74 liter vatten, lösningen blandas med 2 liter 40-prdcentig stark perättiksyra, pH-värdet regleras till 8 med 30-procentig stark natriumhydroxidlösning och blandningen lämnas att sta vid rumstempratur under 24 timmar. 0,4 kg natriumklorid läses i blandningen och fällning utföres med ëåü liter metanol. Fäll- ningen avfiltreras, tvättas med metanol och torkas. Cirka 7,9 kg vitt material erhålles.

Exempel Ba (steg C) b,3 kg depolymeriserat kondrditinpolysulíat löses i 27,1 liter hett vatten, 3,15 liter 40-prncentig stark perättiksyre tillsättes, komponenterna blandas och blandningen lämnas att sta i 4 timmar. 45,4 liter vatten tillsattes sedan, 2,1 kg natriumklorid läses i blandningen och pH-värdet regleras till 10,5 med 30-procentig stark natniumhydrnxidlösning. För att erhålla en metandlkoncentration av 36,5 vdlymproeent i blandningen iróres sedan 0,574ß liter metanol per liter lösning, dvs exempelvis 48,6 liter metanol. Fällningsbland- ningen lamnas ett sta över natten och den överskiktade vätskan avdekanteras sedan och den semivätskeíormiga fëllningen av- centriíugeras. Den klara óverskiktade vätskan, t ex 128,5 liter, omröres med 2,175 liter metanol per liter lösning, dvs_ exempelvis 279,5 liter metanol, sa att en slutlig metanelkon- centratien av BD volymprccent uppnås. Fallningen får satta sig under 1 timma, den överskiktade vatskan avdekanteras Den återstående suspension filtreras med sugning. Fallningen , . - O_ tvattas med metanol och torkas vid en temperatur under eQ L. 458118 15 20 Lu O -14 Cirka 5,6 kg mellanprodukt erhàlle= Exempel Bb (steg C) 2 kg depolymeriserat kondroítinpolyeulfat löses i 200 liter vatten och lösningen filtreras genom ett sterilt filter och underkastas ultracentrifugering under ett tryck av 0,28 MPa vid SZOC under användning av en platt-ultraíiltrerin gsapparet uteslutningsgräns angiven för cellulo- eaacetatmembranet: molekylvikt 15 0003. Lösningen pumpas runt med en flódeshastighet av 6,5 m3/h. När volymen av kvarhallet material är cirka 20 liter, underkastas detta materiel ultra- centrifugering 3 gånger efter att ha blandats med S0 liter vatten var gäng.

De kombinerade genomträngda vätskorna underkaetas ultraoent- riíugerinq under användning av ett cellulosaecetatmembran med angiven molekylkviktuteslutningsgrâns av 6 DOD, men i övrigt under identiska förhållanden till de ovan. Det kvarhàllna ialet koncentreras ned till en'konoentrati natriumklorid tilleä mater on av 10 %, ttes upp till en koncentration av 0,5 %, pH-värdet regleras till 7,5 och fållning utíëres med 4 volym- delar metanol under omröring. Efter tvättning av íällningen, som har avíiltrerats med eugning, torkas den. šrhállen mellan- produkt vager 1,76 kg.

Exempel Ga (steg Dh 5,4 kg mellanprodukt från föríarandesteg 3 l" vatten, wow» ses i 54 liter o 21,6 liter starkt sur katjonbytare it ex "Lewatit S 1 protonerad form íröres ooh blandningen omröres vid rumstemperatur i 1 timma. Katjonbytaren avfiltreras med sugning och skbljes tva ganger med 8,1 li ter vatten var gang och íiltraten kombineras. 2,19 kg natriumkloríd sattes till filtratet och íällning utfbres med 292 liter metanol under omröring.

Fällningssatsen lämnas att stå över natten och den overskiütade vätskan avdekanteras sedan, suspensionen, som 10 458118 -ls aterstar, filtreras med sugning och materialet pá filtret tvättas ut noggrant med metanol. Fällningen löses i 43,2 liter vatten, pH-värdet regleras till 7,5 med 30-procentig stark natriumhydroxidlösning, 700 g natriumklorid tillsättes och fällning utföres med 139,2 liter metanol under omröring. Den klara överskiktade vätskan avdekanteras, återstående suspension filtreras genom ett sugíilter och materialet pa filtret tvättas med metanol. Efter torkning erhålles 3,6 kg demineraliserat kondroitinpolysulfat.

Exempel 4b (steg DJ Q kg mellanproduht, som erhàllits efter förfarandesteget, eller den ännu metanolíuktiga fällningen från detta steg, löses i en mängd vatten, sedan att 90 liter lösning erhalles= Denna lösning tillates att köras genom en jonbytarekolonn fylld med 36 liter av katjonbytaren ”Amberlite IR 120" i H _ form. Förhållandet av höjden, till vilken kolonnen íylles, till diametern är t er cirka 2,5:l. När substenslösningen har runnit igenom, saöljes kolonnen med 33,3 liter vatten. 3,7 kg natriumnlorid sättes till de kombinerade filtraten, som innehåller substansen, och íällning utföres genom tillsats av 492 liter metanol. Fëllningen avfiltreras med sugning och tvättas med metanol och den ännu lüsninssmedelsíuktigs fällningen löses i pyrogeniritt vatten får att ge en total volym av 72 liter. 1,15 kg natríbmklorid tillsättes, pH-värdet regleras till 7,5 med 30-procentig stark natriumhydroxidlöe~ ning och íällning utföres med 219 liter metanol. Fällningen avfiltreras med sugning, tvättas med metanol ooh torkas. Cirka 6 kg demineraliseret kondroitinpolysulíat erhålles.

Exempel 5 (steg EJ 30 kg demineraliserat kondroitinpolysulíat löses 1 190 liter pyrogeníritt vatten. Lösningen upphettas till ?ÜOC ooh #9 kg aktivt trakol tillsättes ifiiedel de Haen nr 180031.

Temperaturen halles vid QGOC i 50 minuter och blandningen 458118 TO 15 20 -1 .s filtreras sedan under det att den ännu är het under användning av ett tryckíilter. Träkolaterstoden tvättas tvâ gånger med 40 liter var gäng av pyrngenfritt vatten och íiltraten kombineras. 3 kg natriumklorid och 660 g dinatriumetylendi- nitrilotetraacetat-di till 7,5. hydrat tillsättes. pH-värdet regleras Blandningen filtreras sedan genom ett förtvâttat membranfilter (pordiameter: 0,2 pml. Den fullständigt klara lösningen underkastas fällning med 720 liter metanol under omröring. Fällningen avfiltreras med sugning, tvättas med metanol och torkas vid en temperatur under SÛOC. Cirka 15 kg vitt, finpartikelíormigt, rent, injícerbart kondrditinpoly- sulfat erhålles. Undersökning med kemisk analys gav följande substansvärden: N: 1,77 % s; 12,96 if. hexuronsyra: 1,Ü& mmnllg hexosamin: 1,12 mmulig Exempel 6 (framställning 5,25 kg, beräknat relativt vattenfri substans, rent kendrei- tinpolysulíat och 0,325 kg natriumklorid löses i cirka SG liter vatten för injektion under emröring och lösningen kompletteras upp till 65 liter. Efter det att pH~värdet har reglerats till 8,4 med N natriumhydroxidläsning och lösningen har underkastats steril filtrering genem ett mebranfiilter, iylles losningen i ampuller under sterila försiktighetsmått på kant satt. De íörseglade ampullerna utsättes för varmebehandling i ett kmkande vattenbad under 60 minuter.

Claims (18)

458118 Patentkrav

1. Förfarande för framställning av ett injicerbart kon- droitinpolysulfat, k ä n n e t e c k n a t därav, att A ratt kondroitinpolysulfat depolymeriaeras oxidativt, B det depolymeriserade kondroítinpolysulfatet blekee, om så är nödvändigt, med perättikayra, C produkten, som erhållits efter A och B, underkaetas en eller tva ganger fällning med metanol och/eller ultrafiltrering för fraktionering med avseende pa molekylvikt, D produkten, som erhållits efter C, demineralieeras, om så är nödvändigt, med katjonbytare, och E produkten, som erhållits efter C oh D, avfärgas, om aa är nödvändigt, med aktivt träkol.

2. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t därav, att den oxidativa depolymerisationen A utföres med väteperoxid i närvaro av tunga metaller.

3. Förfarande enligt krav 2, k Ä n n e t e c k n a t därav, att det utföres i närvaro av ett komplexbildande medel.

4. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t därav, att den oxidatíva depolymerieationen A utföres med väteperoxid i närvaro av tungmetalljoner.,

5. Förfarande enligt krav 4, k ä n n e t e c k n a t därav, att det utföres i närvaro av salter av järn, kobolt, koppar, mangan och/eller vanadin.

6. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t därav, att den oxidativa-polymerieationen A utföres med per- ättikeyra i närvaro av tungmetalljoner.

7. Förfarande enligt krav 6, k ä n n e t e c k n a t därav, att det utföres i närvaro av salter av järn, kobolt och/eller mangan.

8. Förfarande enligt krav 5 och 7, k ä n n e t e c k- n a t därav, att koncentrationen av tungmetallsalterna i re- aktionsmediet hàlles mellan 0,001 och 0,5 X (vikt/volym).

9. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t_ därav, att perättikayrabehandlingen B införlivas i det mole~ kylära fraktioneringsförfarandet C.

10. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t därav, att den företa metanolfraktioneringen i steg C utföres vid en koncentration mellan 25 och 45 volymprocent metanol. 458118

11. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t att den andra metanolfraktioneringen i steg C utföres vid en koncentration mellan 60 och 80 volymprocent metanol.

12. Förfarande enligt krav 1, därav, k ä n n e t e c k n a t att i stället för den företa metanolfraktioneringen i steg C ultrafiltrering med ett membran med en uteslutninge- gräns av minst 6 000 utföres. därav,

13. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t 6 C k n a t att i stället för den andra metanolfraktioneringen i steg C ultrafiltrering med ett membran med en uteelutnings- gräns av minst 8 000 utföres. därav,

14. Förfarande enligt krav 11 eller 12, t e c k n a t därav, k ä n n e- att det rena kondroitinpolysulfatet ut- fällee med metanol i närvaro av 0,01 - 0,5 X av ett komplex- bildande medel.

15. Förfarande enligt krav 3 eller 14, k ä n n e- t e c k n a t därav, att nitrilotriättiksyra, etylendinitri- lotetraättiksyra, 1,2-cyklohexylendinitrilotetraättikeyra, dietylentriaminpentaättikayra, 3,6-dioxaoktametylendinitri- lotetraättikayra eller en blandning därav användes såsom det komplexbildande medlet.

16. Förfarande enligt krav 11, 13, 14 eller 15, n e t e c k n a t k ä n- därav, att det renade kondroitinpolysulfa- tet utfällee med metanol i närvaro av 0,01 pyroeulfit. 0,5 X natrium-

17. Kondroitinpolyeulfat framställt enligt nagot av kra- ven 1 - 16, k ä n n e t e c k n a t därav, att det innehal- ler: kväve 1,65 - 2,00 Z svavel 12,5 - 14,5 I hexuroneyra 0,98 ~ 1,22 mmol/g hexosamin 0,96 - 1,24 mmol/g.

18. Farmaceutiek komposition för human- och veterinärme- dicin, k ä n n e t e c k n a d därav, att den innehåller sa- _' som aktiv förening ett kondroitinpolyeulfat, enligt krav 1 till 16. som framställts