SK287459B6

SK287459B6 - Oligosacharidy, spôsob ich prípravy, farmaceutická kompozícia s ich obsahom a ich použitie

Info

Publication number: SK287459B6
Application number: SK527-2002A
Authority: SK
Inventors: Pierre Mourier; Elisabeth Perrin; Christian Viskov; Jean-Marie Stutzmann; Florence Wahl
Original assignee: Aventis Pharma S. A.
Priority date: 1999-10-22
Filing date: 2000-10-18
Publication date: 2010-10-07
Also published as: SK5272002A3; EP1226148B1; EA200200479A1; NO323409B1; IL149154A; KR20020063881A; HUP0203821A3; CA2388369C; AU7930200A; JP4733329B2; AU781414B2; WO2001029055A3; NZ518539A; CA2388369A1; KR100872215B1; ZA200203102B; PT1226148E; WO2001029055A2; EE05091B1; BR0014939A

Abstract

Vynález sa týka oligosacharidov všeobecného vzorca (I), ich zmesí, ich diastereoizomérov, spôsobu ich prípravy a farmaceutických kompozícií, ktoré tieto oligosacharidy obsahujú ako účinnú látku.

Description

Vynález sa týka oligosacharidov všeobecného vzorca (I)

(I) ich zmesí, ich diastereoizomérov, spôsobu ich prípravy a farmaceutických kompozícií, ktoré tieto oligosacharidy obsahujú.

Doterajší stav techniky

Sulfátované disacharidy, ktoré majú na redukčnom konci 1,6-anhydro- štruktúru boli opísané H. P. Wesselom v J. Carbohydrate Chemistry, 11(8), 1039 - 1052 (1992), pričom v tejto publikácii nebola pre tieto zlúčeniny opísaná žiadna farmakologická účinnosť.

Sulfátované trisacharidy obsahujúce opakujúcu sa štruktúrnu jednotku 1,6-anhydro boli tiež opísané v patente EP 84 999 a autormi Y. Ichikawa a kol. v Carbohydr. Res. 141, 273 - 282 (1985), ako medziprodukty na prípravu vyšších oligosacharidov. Tieto trisacharidy majú slabú účinnosť anti-Xa.

Podstata vynálezu

Predmetom vynálezu sú oligosacharidy všeobecného vzorca (I), v ktorom n označuje celé číslo 0 až 25, R¹, R³, R⁴ a R⁵, ktoré sú rovnaké alebo odlišné, označujú atóm vodíka alebo skupinu SO₃M alebo skupinu COCH₃ a M označuje sodík, vápnik, horčík alebo draslík.

Tieto oligosacharidy takto obsahujú párny počet sacharidov.

Vo všeobecnom vzorci (I) R⁴ výhodne označuje atóm vodíka.

Vo všeobecnom vzorci (I) n výhodne označuje celé číslo 0 až 10, najmä 0 až 6 a obzvlášť 1 až 6.

Oligosacharidy všeobecného vzorca (I) sa dajú pripraviť pôsobením hydroxidu alkalického kovu alebo kvartémeho amóniumhydroxidu na oligosacharidy všeobecného vzorca (II)

v ktorom n označuje celé číslo 0 až 25, R¹, R³, R⁴ a R⁵, ktoré sú rovnaké alebo odlišné, označujú atóm vodíka alebo skupinu SO3M, R² a R⁶, ktoré sú rovnaké alebo odlišné, označujú atóm vodíka alebo skupinu SO3M alebo skupinu COCH₃ a M označuje sodík, vápnik, horčík alebo draslík alebo ich zmes.

Táto reakcia sa uskutočňuje vo vodnom prostredí pri teplote 40 až 80 °C a hodnote pH 10 až 13.

Ako použiteľný hydroxid alkalického kovu je možné uviesť hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid lítny a hydroxid cézny.

Ako použiteľný kvartémy amóniumhydroxid je možné uviesť tetrabutylamóniumhydroxid.

Množstvo hydroxidu alkalického kovu alebo kvartémeho amóniumhydroxidu musí byť dostatočné na to, aby hodnota pH reakčnej zmesi zostala rovnaká v priebehu celej doby trvania reakcie. Je preto nevyhnutné kontinuálne pridávať hydroxid alkalického kovu alebo kvartémy amóniumhydroxid v priebehu reakcie.

Výhodne je hydroxid alkalického kovu alebo kvartémy amóniumhydroxid vo forme 1 až 5 % vodného roztoku.

Výhodne sa reakcia uskutočňuje pri teplote 60 až 70 °C.

Výhodne hodnota pH reakčnej zmesi je 11 až 12,5.

Reakcia sa preruší okyslením reakčnej zmesi, napríklad pridaním kyslej živice, napríklad živice AmberliteIR120^R(Fluka).

Oligosacharidy všeobecného vzorca (I) môžu byť v prípadne potreby prečistené permeačnou gélovou chromatografiou s použitím gélu polyakraylamid-agarózového typu, akým je komerčne dostupný gél Ultrogel ACA202^R (Biosphera), uskutočňovanou postupom, ktorý je ďalej opísaný, na separáciu medziproduktových oligosacharidov všeobecného vzorca (II). Oligosacharidy všeobecného vzorca (I), v ktorom n znamená 0 alebo 1, môžu byť tiež prípadne prečistené na stĺpci aluminy (oxidu hlinitého) použitím elučnej sústavy tvorenej zmesou vody a etanolu.

Medziproduktové oligosacharidy všeobecného vzorca (II) a ich zmesi môžu byť získané chromatografie kou separáciou zmesi oligosacharidov III, získanej enzymatickou depolymerizáciou heparínu alebo bázickou depolymerizáciou benzylesteru heparínu alebo polosyntetického benzylesteru heparínuoligosacharidov III, na géloch.

Táto chromatografia sa uskutočňuje na kolónach naplnených gélom polyakrylamid-agarózového typu, akým je napríklad gél, ktorý je komerčne dostupný pod obchodným označením Ultrogel ACA202^R (Biosepra). Výhodne sa používa batéria kolón naplnených polyakrylamidagarózovým gélom. Počet použitých kolón závisí od objemu, vlastného gélu a od oligosacharidov, ktoré majú byť rozdelené. Zmes sa eluuje roztokom, ktorý obsahuje fosfátový pufer a chlorid sodný. Výhodný je roztok fosfátového pufra obsahujúci 0,02 mol/1 NaH₂PO₄/Na₂HPO₄ (pH 7) a 0,1 mol/1 chloridu sodného. Detekcia jednotlivých frakcií sa uskutočňuje použitím ultrafialovej (254 nm) a iónovej (IBF) spektrometrie. Takto získané frakcie môžu byť potom prípadne prečistené napríklad chromatografiou SAX (strong anión exchange) postupmi, ktoré sú odborníkom známe, hlavne postupmi, ktoré opísali K. G. Rice a R. J. Linhardt v Carbohydrate Research 190, 219 - 233 (1989), A. Lamkjaer, S. H. Hansen a P. B. Ostergaard v Carbohydrate Research, 266, 37 - 52 (1995) a v patente W090/01501 (príklad 2). Tieto frakcie sa potom lyofilizujú a následne odsolia na kolóne naplnenej gélom, ako je napríklad kolóna s gélom Sephadex G10 (Pharmacia Biochemicals).

V prípade, že sa prečistenie neuskutočňuje chromatografiou SAX môžu byť lyofilizáty prečistené jednoduchým alebo fŕakčným vyzrážaním uskutočňovaným postupmi, ktoré sú odborníkom známe, najmä postupom opísaným vo francúzskom patente FR 2 548 672. Vo všeobecnosti sa pracuje podľa nasledujúceho postupu.

Lyofilizovaná frakcia určená na prečistenie sa rozpustí pri teplote asi 25 °C asi v desiatich objemoch destilovanej vody. Prídavkom metanolu alebo etanolu sa vyzráža požadovaný oligosacharid, pričom sa kontroluje jeho čistota vysoko účinnou kvapalinovou chromatografiou (CLHP, Chromatographie Liquide Haute Performance). Prídavok metanolu alebo etanolu sa určí v závislosti od požadovanej čistoty a výťažku uvedeného oligosacharidu. Rovnako môže byť táto operácia uskutočnená v niekoľkých následných stupňoch, pričom sa vychádza z pôvodného roztoku lyofílizátu. Na tento účel sa pridáva nesolubilizujúce činidlo (metanol alebo etanol) v malých dávkach a po každom prídavku uvedeného činidla sa izoluje získaná zrazenina. Takto získané zrazeniny sa analyzujú vysoko účinnou kvapalinovou chromatografiou. Podľa požadovanej čistoty a požadovaného výťažku sa spájajú len tie frakcie zrazeniny, ktoré zaručujú požadovanú čistotu a výťažok.

V prípade medziproduktov všeobecného vzorca (II), v ktorom n = 0, 1 alebo 2 je výhodné vychádzať zo zmesi III získanej enzymatickou depolymerizáciou.

Táto enzymatická depolymerizácia sa uskutočňuje použitím heparínu I (EC 4.5.5.7) v prostredí roztoku fosfátového pufra s pH 7, v prítomnosti chloridu sodného a bovinného sérového albumínu (BSA), pri teplote medzi 10 a 18 °C, výhodne pri teplote 15 °C, počas 8 až 10 dní, výhodne 9 dní. Táto depolymerizácia sa preruší napríklad zahriatím reakčnej zmesi na teplotu 100 °C na dve minúty, potom sa zmes spracuje lyofílizáciou. Je výhodné používať 7 UI haparinázy I na 25 g heparínu. Roztok fosfátového pufra vo všeobecnosti obsahuje 0,05 mol/1 NaH₂PO₄/Na₂HPO₄ (pH 7) v prítomnosti 0,1 mol/1 chloridu sodného. Koncentrácia bovinného sérového albumínu je vo všeobecnosti 2 %.

V prípade medziproduktov všeobecného vzorca (II), v ktorom n = 0, 1, 2, 3 alebo 4, je výhodné vychádzať zo zmesi III získanej depolymerizáciou benzylesteru heparínu.

Benzylester heparínu môže byť pripravený postupmi opísanými v patentoch US 5 389 618, EP 40 144 a

FR 2 548672. Stupeň esterifíkácie je 50 až 100 %, výhodne 70 až 90 %.

Uvedená depolymerizácia sa uskutoční vo vodnom prostredí pomocou hydroxidu alkalického kovu (napríklad hydroxid lítny, hydroxid sodný, hydroxid draselný alebo hydroxid cézny) alebo kvartémeho amóniumhydroxidu (napríklad tetrabutylamónium- hydroxid), výhodne pri molarite 0,1 až 0,2 mol/1, pri teplote 40 až 80 °C a počas 5 až 120 minút. Výhodne sa pracuje počas 5 až 15 minút pri teplote 60 až 70 °C a pri použití roztoku hydroxidu sodného s koncentráciou 0,15 mol/1. Depolymerizačná reakcia sa prerušuje neutralizáciou pridaním kyseliny, ako je napríklad kyselina octová. Po pridaní 10 % hmotn./obj. octanu sodného sa zmes oligosacharidov vyzráža pridaním metanolu, výhodne 2 objemy matanolu na 1 objem reakčnej zmesi, a sfiltruje.

V rámci výhodného uskutočnenia vynálezu sa zmes oligosacharidov, získaná po chemickej depolymerizácii vo forme vodného roztoku, obohatí ultrafiltráciou na membránach s príslušným nominálnym separačným prahom (typ Pellicon z regenerovanej celulózy komerčne dostupný v spoločnosti Millipore), pričom typ membrány je zvolený v závislosti od typu obohateného oligosacharidu, ktorý má byť izolovaný. V prípade oligosacharidov všeobecného vzorca (II), v ktorom n sa rovná 0, sa použije membrána s nominálnym separačným prahom rovnajúcim sa 1 kDa, v prípade oligosacharidov všeobecného vzorca (II), v ktorom n sa rovná 1, sa použije membrána so separačným prahom 1 kDa alebo 3 kDa, v prípade oligosacharidov všeobecného vzorca (II), v ktorom n sa rovná 2, sa použije membrána so separačným prahom 3 kDa, a v prípade oligosacharidov všeobecného vzorca (II), v ktorom n sa rovná 3 alebo 4, sa použije membrána so separačným prahom 5 kDa. Počas tejto operácie sa permeát zachová, kým zadržaný podiel sa považuje za odpad. Takto frakcia obohateného produktu môže predstavovať 50 až 10 % východiskovej zmesi oligosacharidov, pričom sa zachová aspoň 80 % požadovaného oligosacharidu.

V prípade medziproduktov všeobecného vzorca (II), v ktorom sa n rovná 0 až 25, je výhodné vychádzať zo zmesi III získanej depolymerizáciou benzylesteru polosyntetického sulfátovaného polysacharidu. Uvedený benzylester polosyntetického sulfátovaného polysacharidu sa pripraví z polosyntetických sulfátovaných polysacharidov získaných z polysacharidu K5 postupmi opísanými v patentových dokumentoch WO94/29352 a WO96/14425. Esterifikačné, depolymerizačné a izolačné podmienky sú rovnaké, ako podmienky opísané pred týmto pre benzylester heparínu.

Vo všetkých uvedených postupoch môže byť východiskový heparín bravčového, ovčieho, kozieho alebo bovinného pôvodu a môže pochádzať z hlienu, pľúc alebo kože zvierat. Výhodne sa použije heparín z bravčového alebo ovčieho hlienu alebo z hovädzích pľúc a výhodnejšie heparín z bravčového hlienu.

Oligosacharidy všeobecného vzorca (I) majú protizápalové vlastnosti a môžu byť takto použité na prevenciu alebo liečenie ochorení spojených so zápalovými procesmi zahrnujúcimi produkciu cytotoxických látok, akou je napríklad oxid dusnatý (NO), ktorého indukovateľná forma je uvoľňovaná najmä neutrofilmi alebo makrofágmi v prípade, že migrujú a sú aktivované v úrovni tkaniva. Aktivácia, migrácia, adhézia a infiltrácia neutrofilov prebieha v úrovni tkanivových zón ischemizovaných následkom oklúzie alebo spazmu vaskularizujúcej tepny uvedeného tkaniva. K týmto ischémiám môže dochádzať buď na cerebrálnej úrovni (vaskuláma mozgová príhoda), alebo na úrovni myokardu (infarkt myokardu), alebo na úrovni dolných končatín (takzvané periférne ischémie).

Oligosacharidy všeobecného vzorca (I) môžu byť takto použité na prevenciu a/alebo liečenie neurodegeneratívnych ochorení, pri ktorých cerebrálny zápal hrá zhubnú úlohu spôsobujúcu prípadne smrť, pričom z týchto ochorení je možné uviesť cerebrálne ischémie, srdcové ischémie (infarkt myokardu), periférne ischémie, poranenia centrálnej nervovej sústavy a najmä poranenia lebky, chrbtice alebo kombinované poranenia lebky a chrbtice, roztrúsená skleróza, neuropatické bolesti a periférna neuropatia, choroby motorických neurónov a z nich najmä amyotrofhú laterálnu sklerózu, neuro-AIDS, Alzheimerovu chorobu, Parkinsonovu chorobu a Huntingtonovu choreu a niektoré formy osteoartritíd, najmä v úrovni kĺbov.

Protizápalová účinnosť uvedených produktov je demonštrovaná in vivo v rámci testu produkcie NO_x(dusitan a dusičnan) indukovanej lipopolysacharidom (LPS) pochádzajúcim z Escherichia Coli, pričom tento test sa uskutočňuje podľa protokolu opísaného autormi M. Yamashita a kol. v Eur. J. Pharmacol., 338,2, 151 až 158 (1997) alebo autormi J. E. Shellito a kol. v Am. J. Respir. Celí Mol. Biol., 13, 1,45 - 53 (1995).

Samčekom myší CDI (Charles River) s telesnou hmotnosťou medzi 25 a 35 g sa v čase TO intravenózne injikuje bolus 0,5 mg/kg oligosacharidu, následne sa im v čase T+15 minút subkutánne injikuje 1 alebo 2 mg/kg oligosacharidu. V čase T+30 minút sa im podá 100 mg/kg lipopolysacharidu (LPS) pochádzajúceho z Escherichia coli (Sigma L3129, sérotyp 0127:B8). V čase T+3 hodiny sa pokusným zvieratám opätovne subkutánne injikuje 1 alebo 2 mg/kg oligosacharidu. V čase T+5 hodín a 30 minút sa pokusným zvieratám očnou punkciou odoberie vzorka krvi a v plazme krvnej vzorky sa stanoví koncentrácia NO_X (dusitan a dusičnan) Griessovou kolorimetrickou metódou po redukcii dusičnanu na dusitan nitrátreduktázou použitím nasledujúceho postupu: 12 μΐ vzorky plazmy sa zmieša s 88 μΐ deionizovanej vody a získaná zmes sa inkubuje za tmy počas jednej hodiny pri izbovej teplote v prítomnosti 40 μΐ fosfátového pufra (0,31 M, pH 7,5), 20 μΐ β-NADPH (redukovaný nikotínamidadeníndinukleotidfosfát) (0,86 mM), 20 μΐ FDA (flavínadeníndinukleotid) (0,11 mM) a 20 μΐ nitrátreduktázy (2U/ml) (Boehringer Mannheim). K zmesi sa potom pridá 10 μΐ ZnSO₄ (IM) na vyzrážanie proteínov a po premiešaní sa vzorky odstredia pri 20 OOOg počas 5 minút. Nakoniec sa 50 μΐ supematantu inkubuje počas 10 minút pri izbovej teplote v prítomnosti 100 μΐ Griessovho reakčného činidla (1 % sulfanilamid v 0,1 % zmesi kyseliny fosforečnej a naftyletyléndiamínu v deionizovanej vode (obj./obj.)). Odčítajú sa optické hodnoty pri 540 nm použitím mikrodoskového spektrofotometra. Každá hodnota sa stanovuje dvakrát. Ako štandard pre kolorimetrickú metódu sa použije KNO₃ a NaNO₂.

Pri tomto teste oligosacharidy podľa vynálezu inhibujú viac ako 50 % tvorby NO_X.

Ako výhodné oligosacharidy všeobecného vzorca (I) je možné uviesť najmä oligosacharidy všeobecného vzorca (I), v ktorom:

- n sa rovná 0,

R¹ a R⁶ označujú skupinu SO₃Na a

M označuje sodík a zmes jeho diastereoizomérov;

- n sa rovná 1,

R¹, R², R³, R⁵ a R⁶ označujú skupinu SO₃Na,

R⁴ označuje atóm vodíka a

M označuje sodík a zmes jeho diastereoizomérov;

- n sa rovná 2,

R¹, R², R³, R⁵ a R⁶ označujú skupinu SO₃Na,

R⁴ označuje atóm vodíka a

M označuje sodík a zmes jeho diastereoizomérov;

- n sa rovná 2,

R¹, R², R³, R⁶ označujú skupinu SO₃Na,

R⁵ označuje atóm vodíka alebo skupinu SO₃Na,

R⁴ označuje atóm vodíka a

M označuje sodík a zmes jeho diastereoizomérov (derivát 1,6 anhydro AIs-Is-IIs).

Nasledujúce príklady ilustrujú prípravu oligosacharidov všeobecného vzorca (I) a príslušných medziproduktov.

V týchto príkladoch majú nasledujúce skratky tieto významy:

AIs: (kyselina 4-deoxy-2-0-sulfo-a-L-treo-hex-4-enopyranozylurónová)-(l->4)-2-deoxy-2-sulfoamino-6-0-sulfo-a-D-glukopyranóza, štvorsodná soľ alebo tiež AUAp2S-(l->4)-a-D-GlcNp2S6S;

Is: (kyselina 2-sulfo-a-L-idopyranozylurónová)-(l->4)-2-deoxy-2-sulfoamino-6-0-sulfo-a-D-glukopyranóza, štvorsodná soľ alebo tiež a-L-IdoAp2S-(l->4)-a-D-GlcNp2S6S;

lis: (kyselina a-L-idopyranozylurónová)-(l->4)-2-deoxy-2-sulfoamino-6-0-sulfo-o!-D-glukopyranóza, trojsodná soľ alebo tiež a-L-IdoAp-( l->4)-a-D-GlcN/?2S6S;

IIIs: (kyselina 2-sulfo-a-L-idopyranozylurónová)-(l->4)-2-deoxy-2-sulfoamino-a-D-glukopyranóza, trojsodná soľ alebo tiež a-L-IdoAp2S-(l->4)-a-D-GlcNp2S;

IdoA/>: kyselina idopyranozylurónová;

GlcNp: 2-deoxy-2-aminoglukopyranóza;

AUAp: kyselina 4-deoxy-a-L-treo-hex-enopyranozylurónová;

S: sulfát.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad A

Príprava oligosacharidov všeobecného vzorca (II), v ktorom n sa rovná 0, 1 a 2 enzymatickou depolymerizáciou a separáciou.

g heparínu sa rozpustí v 250 ml roztoku fosfátového pufŕa obsahujúceho 0,05 mol/1 NaH₂PO4/Na₂HPO₄(pH = 7), 0,2 mol/1 chloridu sodného a 2 % bovinného sérového albumínu. Do tejto zmesi sa pridá 7 Ul heparinázy I (EC 4.2.2.2.7) a získaný roztok sa ochladí na teplotu 15 C a potom sa udržuje na tejto teplote počas celej depolymerizačnej reakcie. Priebeh tejto reakcie sa sleduje odoberaním alikvotných vzoriek reakčnej zmesi a ich permeačnou gélovou analýzou. Po deviatich dňoch sa enzymatická reakcia preruší zahrievaním reakčnej zmesi na teplotu 100 °C počas dvoch minút. Ochladená reakčná zmes sa potom lyofílizuje. Takto sa získa zmes oligosacharidov III.

Získaná zmes oligosacharidov III sa potom chromatografuje nasledujúcim postupom.

Chromatografia sa uskutočňuje na kolónach naplnených polyakrylamidagarózovým gélom známym pod obchodným označením Ultrogel ACA 202 a uvedená zmes sa eluuje roztokom obsahujúcim fosfátový pufer (0,02 mol/1 NaH₂PO₄/Na₂HPO₄) s pH = 7 a 0,1 mol/1 chloridu sodného. Deteguje sa ultrafialovou (254 nm) a iónovou (IBF) spektrometriou. Získané produkty môžu byť v prípade potreby prečistené chromatografiou SAX (strong anión exchange) alebo frakčným zrážaním podľa postupu opísaného v patentovom dokumente FR 2 548 672. Izolované frakcie produktu sa lyofilizujú a potom odsolia na kolóne naplnenej gélom Sephadex G10^r (Pharmacia Biochemicals).

Uvedeným postupom sa získajú 3 g disacharidu Is, 1100 mg zmesi hexasacharidu typicky obsahujúceho 55 % derivátu AIs-Is-IIs a 10 % AIs-Is-IIIs. Táto posledne uvedená zmes môže byť buď prečistená postupmi, ktoré sú odborníkom známe, s cieľom rozdelenia všetkých zložiek zmesi alebo použitá sama osebe na premenu na 1,6-anhydro derivát všeobecného vzorca (I). Je treba poznamenať, že počas tejto premeny hexasacharid AIs-Is-IIIs neposkytuje zlúčeniny všeobecného vzorca (I).

Príklad B

Príprava oligosacharidov všeobecného vzorca (II), v ktorom n sa rovná 0, 1, 2, 3 alebo 4 depolymerizáciou benzylesteru heparínu a separáciou

a) Príprava benzylesteru heparínu

Benzylester heparínu sa pripraví postupom opísaným v príklade 3 patentu US 5,389,618.

b) Depolymerizácia

100 g benzylesteru heparínu sa rozpustí v 1,9 1 demineralizovanej vody. Zmes sa zahreje za miešania na teplotu 60 °C. Po získaní homogénneho roztoku sa do tohto roztoku pridá naraz asi 35 ml 23 % roztoku hydroxidu sodného. Po 10 minútach sa roztok ochladí a neutralizuje 80 ml asi 2N roztoku kyseliny octovej. K tomuto roztoku sa pridá 10 % (hmotn./obj.) octanu sodného. Zmes oligosacharidov sa vyzráža pridaním asi 2 objemov metanolu. Zrazenina sa izoluje filtráciou, dvakrát premyje metanolom a potom vysuší za zníženého tlaku pri teplote 50 °C. Po vysušení sa získa 73,8 g zmesi oligosacharidov II.

c) Obohatenie oligosacharidom, v ktorom n = 1 g uvedeným spôsobom získanej zmesi oligosacharidov sa rozpustí v asi 35 objemoch vody. Tento roztok sa podrobí ultrafiltrácii cez membránu 3 kDa (Pellicon). Keď sa odtiahne 600 ml permeátu tento sa zriedi 500 ml vody. V operácii sa pokračuje až do okamihu, keď sa odtiahne ďalších 450 ml dodatočného permeátu. Obidve frakcie permeátu sa zlúčia a potom zahustia do sucha za zníženého tlaku. Získa sa 6,1 g žlto-bieleho produktu. Analýza tohto pevného produktu uskutočnená permeačnou gélovou chromatografiou ukazuje, že tento produkt obsahuje asi 30 % oligosacharidu všeobecného vzorca (II), v ktorom n sa rovná 1.

d) Frakcionácia zmesi oligosacharidov podrobených ultrafiltrácii

Obohatená zmes sa frakcionuje na kolónach naplnených polyakrylamidagarózovým gélom, ktorý je známy pod označeným Ultrogel ACA 202 (použijú sa štyri kolóny v sérii, pričom priemer kolón je 10 cm a výška kolón je 50 cm). 5 g zmesi obohatenej ultrafiltráciou sa rozpustí v 25 ml vody a eluuje roztokom chloridu sodného s koncentráciou 0,2 mol/1 pri prietoku 5 ml/min. Na spodku kolóny sa zberajú 25 ml frakcie eluátu. Detekcia produktov sa robí ultrafialovou (254 nm) a iónovou (IBF) spektrometriou. Frakcie produktu, pre ktorý n = 1 sa izolujú, lyofilizujú a potom odsolia na kolóne naplnenej gélom Sephadex G10. Po lyofilizácii sa získa 1 g tetrasacharidu obsahujúceho typicky 70 % derivátu AIs-Is vzorca (II) (R¹, R², R³, R⁵, R⁶= SO₃Na a M = Na). Tento derivát AIs-Is môže byť v prípade potreby prečistený chromatografiou SAX (strong anión exchange), alebo výhodne frakčným zrážaním uskutočneným postupom opísaným v patente FR 2 548 672.

Príklad 1

Do reaktora udržiavaného pri teplote 66 °C sa pridá 5 ml roztoku hydroxidu sodného s koncentráciou 0,0063 mol/1. Hodnota roztoku sa potom zmeria a stanoví ako cieľová hodnota (pH = 11,35). Za miešania sa naraz pridá 30 mg oligosacharidu vzorca (II), v ktorom n sa rovná 0, R¹ a R⁶ označujú skupinu SO3Na a M označuje sodík. Hodnota pH sa potom kontroluje a udržiava na hodnote pH = 11,35 kontinuálnym pridávaním roztoku hydroxidu sodného s koncentráciou 0,5 mol/1. Po desiatich hodinách sa preruší pridávanie hydroxidu sodného a reakčná zmes sa ochladí na teplotu 25 °C. Hodnota pH roztoku sa potom nastaví na hodnotu medzi 6 a 7 pridaním živice Amberlite IR120. Zmes sa prefiltruje cez membránu Whatman GF/B a potom zahustí za zníženého tlaku (2,7 kPa) pri teplote blízkej 25 °C. Produkt sa vymyje 0,5 ml destilovanej vody a potom lyofilizuje. Takto sa získa 29 mg zmesi diastereoizomérov oligosacharidu vzorca (I), v ktorom n sa rovná 0, R¹ a R⁶ označujú skupinu SO3Na a M označuje sodík [kyselina 4-deoxy-2-O-sulfo-a-L-treo-hex-4-enopyranozylurónová-( 1 ->4)-1,6-anhydro-2-deoxy-2-sulfoamino-/3-D-manopyranóza, trojsodná soľ, protónové spektrum (D₂O, 400 MHz, T=298 K, delta v ppm):

3,15(lH,s,H2),

3,75(2H,m,H6 a H3),

3,88(lH,m,H4),

4,20(lH,d,J=8Hz,H6), 4,22(lH,t,J=5Hz,H3'), 4,58(lH,m,H2'),

4,75(lH,m,H5), 5,53(lH,s,Hl),

5,60(lH,dd,J=6 a lHz.Hľ),

6,03(lH,d,J=5Hz,H4');

kyselina 4-deoxy-2-O-sulfo-a-L-treo-hex-4-enopyranozylurónová)-( 1 ->4)-1,6-anhydro-2-deoxy-2-sulfoamino-/3-D-glukopyranóza, trojsodná soľ, protónové spektrum (D₂O, 400 MHz, T=298 K, delta v ppm):

3,34(lH,dd,J=7 a 2Hz,H2),

3,72(lH,t,J=8Hz,H6),

3,90(lH,m,H3), 4,03(lH,s,H4), 4,20(lH,d,J=8Hz,H6), 4,23(lH,t,J=5Hz,H3'),

4,58(lH,m,H2'),

4,78(lH,m,H5), 5,50(lH,s,Hl), 5,60(lH,dd,J=6 a ΙΗζ,ΗΙ'), 6,03(lH,d,J=5Hz,H4')J.

Príklad 2

Do reaktora udržiavaného pri teplote 62 °C sa pridá 33,3 ml roztoku hydroxidu sodného s koncentráciou 0,0063 mol/1. Hodnota roztoku sa potom zmeria a stanoví ako cieľová hodnota (pH = 11,15). Za miešania sa naraz pridá 200 mg oligosacharidu vzorca (II), v ktorom n sa rovná 1, R¹, R², R³, R⁵ a R⁶ označujú skupinu SO3Na, R⁴ označuje atóm vodíka a M označuje sodík. Hodnota pH sa potom kontroluje a udržiava na hodnote pH = 11,15 kontinuálnym pridávaním roztoku hydroxidu sodného s koncentráciou 0,5 mol/1. Po 12 hodinách sa preruší pridávanie hydroxidu sodného a reakčná zmes sa ochladí na teplotu 25 °C. Hodnota pH roztoku sa nastaví na hodnotu medzi 6 a 7 pridaním živice Amberlite IR120. Zmes sa prefiltruje cez membránu Whatman GF/B a potom zahustí za zníženého tlaku (2,7 kPa) pri teplote blízkej 25 °C. Produkt sa vymyje 3 ml destilovanej vody a potom lyofílizuje. Takto sa získa 230 mg oligosacharidu vzorca (I), v ktorom n sa rovná 1, R¹, R², R³, R⁵ a R⁶ označujú skupinu SO3Na, R⁴ označuje atóm vodíka a M označuje sodík, vo forme zmesi diastereoizomérov [kyselina 4-deoxy-2-O-sulfo-a-L-treo-hex-4—enopyranozylurónová-(l->4)-2-deoxy-2-sulfoamino-6-<9-sulfo-a-D-glukopyranozyI-(l->4)-kyselina 2-<9-sulfó-a-L-idopyranozylurónová-(1 ->4)-1,6-anhydro-2-deoxy-2-sulfbamino-/3-D-manopyranóza, heptasodná soľ: protónové spektrum (D₂O, 400 MHz, T=298 K, delta v ppm):

3,15(lH,s,H2),

3,25(lH,m,H2),

3,60(lH,m,H3), medzi 3,70 a 4,70( 14H, blok,H3/H4/H6, H2 7H3 7H4 7H5', H4'7H5'7H6'H2 7H3 '), 4,75(lH,m,H5), medzi 5,20 a 5,40(2H,m,Hl 'a Hl),

5,45(lH,m,Hľ), 5,56(lH,m,Hl),

5,94(lH,d,J=5Hz,H4), kyselina 4-deoxy-2-C*-sulfo-a-L-treo-hex-4-enopyranozylurónová)-(l->4)-2-deoxy-2-sulfoamino-a-D-glukopyranozyl-( 1 ->4)-kyselina-2-O-sulfo-o:-L-idopyranozylurónová-( 1 ->4)-1,6-anhydro-2-deoxy-2-sulfoamino-β-D-glukopyranóza, heptasodná soľ, protónové spektrum (D₂O, 400 MHz, T=298 K, delta v ppm):

3,25( lH,m,H2),

3,42(lH,dd,J=4H a lHz,H2),

3,60(lH,m,H3), medzi 3,70 a 4,70( 14H, blok, H3/H4/H6, H2 7H3 '/H4 '/H5', H4'7H5'7H6, H2 7H3 '), 4,75(lH,m,H5), medzi 5,20 a 5,40(2H,m,Hl 'a Hl),

5,45(lH,m,Hľ),

5,52(lH,m,Hl),

5,94(lH,d,J=5Hz,H4)J.

Príklad 3

Do reaktora udržiavaného pri teplote 62 °C sa pridá 16,7 ml roztoku hydroxidu sodného s koncentráciou 0,0063 mol/1. Hodnota roztoku sa potom zmeria a stanoví ako cieľová hodnota (pH = 11,7). Za miešania sa naraz pridá 100 mg oligosacharidu vzorca (II), v ktorom n sa rovná 2, R¹, R², R³, R⁵ a R⁶ označujú skupinu SO3Na, R⁴ označuje atóm vodíka a M označuje sodík. Hodnota pH sa potom kontroluje a udržiava na hodnote pH = 11,7 kontinuálnym pridávaním roztoku hydroxidu sodného s koncentráciou 0,5 mol/1. Po 10 hodinách sa preruší pridávanie hydroxidu sodného a reakčná zmes sa ochladí na teplotu 25 °C. Hodnota pH roztoku sa nastaví na hodnotu medzi 6 a 7 pridaním živice Amberlite IR120. Zmes sa prefiltruje cez membránu Whatman GF/B a potom zahustí za zníženého tlaku (2,7 kPa) pri teplote blízkej 25 °C. Produkt sa vymyje 3 ml destilovanej vody a potom lyofilizuje. Takto sa získa 108 mg oligosacharidu vzorca (I), v ktorom n sa rovná 2, R¹, R², R³, R⁵ a R⁶ označujú skupinu SO3Na, R⁴ označuje atóm vodíka a M označuje sodík, vo forme zmesi diastereoizomérov; ako A až F sa označujú konštitučné cukry hexasacharidov, pričom A označuje zvyšok 1,6-anhydro a F označuje zvyšok nenasýtenej kyseliny uránovej [kyselina 4-deoxy-2-0-sulfo-Cŕ-L-treo-hex-4-enopyranozylurónová-(l->4)-2-deoxy-2-sulfoamino-6-(2-sulfo-a-D-glukopyranozyl-(l->4)-kyselina 2-O-sulfo-a-L-idopyranozylurónová-(l->4)-kyselina 2-0-sulfo-a-L-idopyranozylurónová-(l->4)-l,6-anhydro-2-deoxy-2-sulfoamino-/3-D-manopyranóza, undekasodná soľ: protónové spektrum (D₂O, 600 MHz, T=298 K, delta v ppm):

3,15(lH,s,H2(A)),

3,25(2H,m,H2(C+E)), 3,60(2H,m,H3(C+E)), medzi 3,65 a 4,50(19H,blok,H2(B+D)/H3(A+B+D+F)/H4(A+B+C+D+E)/H5(C+E)/H6(A+C+E)), 4,60(1 H,s,H2(F)),

4,80(3H,m,H5(A+B+D)),

5,18(lH,s,Hl(D)), 5,30(lH,s,Hl(B)), 5,34(IH,d,Hl(C)), 5,36(lH,d,HI(E)), 5,46(lH,s,Hl(F)), 5,57(lH,s,Hl(A)), 5,95(lH,d,J=5Hz,H4(F));

kyselina 4-deoxy-2-0-sulfo-a-L-treo-hex-4-enopyranozylurónová)-(l->4)-2-deoxy-2-sulfoamino-6-0-sulfo-OÍ-D-glukopyranozyl-(l->4)-kyselina 2-0-sulfo-a-L-idopyranozylurónová-(l->4)-2-deoxy-2-sulfoamino-6-O-sulfb-a-D-glukopyranozyl-( 1 ->4)-kyselina 2-O-sulfo-a-L-idopyranozylurónová-( 1 ->4)-1,6-anhydro-2-deoxy-2-sulfoamino-/5-D-glukopyranóza, undekasodná soľ:

protónové spektrum (D₂O, 600 MHz, T=298 K, delta v ppm):

3,25(2H,m,H2(C+E)),

3,42(lH,m,H2(A)),

3,60(2H,m,H3(C+E)), medzi 3,65 a 4,50(19H,blok,H2(B+D)/H3(A+B+D+F)/H4(A+B+C+D+E)/H5(C+E)/H6(A+C+E)), 4,60(lH,s,H2(F)),

4,80(3H,m,H5(A+B+D)),

5,18(lH,s,Hl(D)),

5,31(lH,s,Hl(B)),

5,34(lH,d,Hl(C)),

5,36(lH,d,HI(E)), 5,46(IH,s,Hl(F)), 5,52(lH,s,HI(A)), 5,95(lH,d,J=5Hz,H4(F)).

Príklad 4

Do reaktora udržiavaného pri teplote 62 °C sa pridajú 4 ml roztoku hydroxidu sodného s koncentráciou 0,0316 mol/1. Hodnota roztoku sa potom zmeria a stanoví ako cieľová hodnota (pH = 11,8). Za miešania sa naraz pridá 100,8 mg oligosacharidu vzorca (II), v ktorom n sa rovná 2, obsahujúceho 55 % derivátu AIs-IsIs (R¹, R², R³, R⁵ a R⁶ označujú skupinu SO3Na, R⁴ označuje atóm vodíka a M označuje sodík), 35 % derivátu AIs-Is-IIs (R¹, R², R³, a R⁶ označujú skupinu SO3Na, R⁵ označuje buď skupinu SO3Na alebo atóm kyslíka, R⁴ označuje atóm vodíka a M označuje sodík) a 10 % derivátu AIs-Is-IIIs (R¹, R², R³, R⁵ a R⁶ označujú skupinu SO3Na, R⁴ označuje atóm vodíka a M označuje sodík, pričom skupina SO₃M na uhlíku C6 je nahradená atómom vodíka). Hodnota pH sa potom kontroluje a udržiava na hodnote pH = 11,8 kontinuálnym pridávaním roztoku hydroxidu sodného s koncentráciou 0,5 mol/1. Po 11 hodinách sa preruší pridávanie hydroxidu sodného a rekčná zmes sa ochladí na teplotu 25 °C. Hodnota pH roztoku sa nastaví na hodnotu medzi 6 a 7 pridaním živice Amberlite IR12O. Zmes sa prefiltruje cez membránu Whatman GF/B a potom zahustí za zníženého tlaku (2,7 kPa) pri teplote blízkej 25 °C. Produkt sa vymyje 1,5 ml destilovanej vody a potom lyofílizuje. Takto sa získa 110 mg oligosacharidu vzorca (I), v ktorom n sa rovná 2, obsahujúceho najmä derivát

1,6-anhydro-AIs-Is-Is (R¹, R², R³, R⁵ a R⁶ označujú skupinu SO3Na, R⁴ označuje atóm vodíka a M označuje sodík) a derivát l,6-anhydro-AIs-Is-IIs (R¹, R², R³, a R⁶ označujú skupinu SO3Na, R⁵ označuje buď skupinu SO₃Na, alebo atóm vodíka, R⁴ označuje atóm vodíka a M označuje sodík). Analýza uskutočnená vysoko účinnou kvapalinovou chromatografiou v móde iónových párov (ionpárová chromatografía) umožňuje sledovať transformáciu na derivát všeobecného vzorca (I). V tomto prípade vysoko účinná kvapalinová chromatografia ukazuje, že prebehla transformácia v prípade derivátov AIs-Is-Is, AIs-Is-IIs.

Príklad 5

Do reaktora udržiavaného pri teplote 66 °C sa pridá 8,6 ml roztoku hydroxidu litného s koncentráciou 0,025 mol/1. Hodnota roztoku sa potom zmeria a stanoví ako cieľová hodnota (pH = 11,68). Za miešania sa naraz pridá 50 mg oligosacharidu vzorca (II), v ktorom n sa rovná 0, R¹ a R⁶ označujú skupinu SO3Na a M označuje sodík. Hodnota pH sa potom kontroluje a udržiava na hodnote pH = 11,68 kontinuálnym pridávaním roztoku hydroxidu litného s koncentráciou 0,466 mol/1. Po 8 hodinách sa preruší pridávanie hydroxidu litného a reakčná zmes sa ochladí na teplotu 25 °C. Analýza uskutočnená vysoko účinnou kvapalinovou chromatografiou v móde iónových párov umožňuje sledovať transformáciu na derivát všeobecného vzorca (I), v ktorom n sa rovná 0, R¹ a R⁶ označujú skupinu SO3Na a M označuje sodík alebo lítium. V tomto prípade vysoko účinná kvapalinová chromatografía ukazuje, že uvedená transformácia prebehla na 100 %. Výťažok stanovený použitím vonkajšieho štandardu je 81,2 %.

Príklad 6

Do reaktora udržiavaného pri teplote 66 °C sa pridá 8,3 ml roztoku hydroxidu draselného s koncentráciou 0,0063 mol/1. Hodnota roztoku sa potom zmeria a stanoví ako cieľová hodnota (pH = 11,1). Za miešania sa naraz pridá 50 mg oligosacharidu vzorca (II), v ktorom n sa rovná 0, R¹ a R⁶ označujú skupinu SO3Na a M označuje sodík. Hodnota pH sa potom kontroluje a udržiava na 11,1 kontinuálnym pridávaním roztoku hydroxidu draselného s koncentráciou 0,515 mol/1. Po 24 hodinách sa preruší pridávanie hydroxidu draselného a reakčná zmes sa ochladí na teplotu 25 °C. Analýza uskutočnená vysoko účinnou kvapalinovou chromatografiou v móde iónových párov umožňuje sledovať transformáciu na derivát všeobecného vzorca (I), v ktorom n sa rovná 0, R¹ a R⁶ označujú skupinu SO3Na a M označuje sodík alebo draslík. V tomto prípade vysoko účinná kvapalinová chromatografía ukazuje, že uvedená transformácia prebehla na 100 %. Výťažok stanovený použitím vonkajšieho štandardu je 75,6 %.

Príklad 7

Do reaktora udržiavaného pri teplote 66 °C sa pridajú 8,6 ml roztoku hydroxidu cézneho s koncentráciou 0,025 mol/1. Hodnota roztoku sa potom zmeria a stanoví ako cieľová hodnota (pH = 10,75). Za miešania sa naraz pridá 50 mg oligosacharidu vzorca (II), v ktorom n sa rovná 0, R¹ a R⁶ označujú skupinu SO3Na a M označuje sodík. Hodnota pH sa potom kontroluje a udržiava na hodnote pH = 10,75 kontinuálnym pridávaním roztoku hydroxidu cézneho s koncentráciou 0,476 mol/1. Po 20 hodinách sa preruší pridávanie hydroxidu cézneho a reakčná zmes sa ochladí na teplotu 25 °C. Analýza uskutočnená vysoko účinnou kvapalinovou chromatografiou v móde iónových párov umožňuje sledovať transformáciu na derivát všeobecného vzorca (I), v ktorom n sa rovná 0, R¹ a R⁶ označujú skupinu SO3Na a M označuje sodík alebo cézium. V tomto prípade vysoko účinná kvapalinová chromatografía ukazuje, že uvedená transformácia prebehla na 90,3 %. Výťažok stanovený použitím vonkajšieho štandardu je 73 %.

Príklad 8

Do reaktora udržiavaného pri teplote 66 °C sa pridajú 8,6 ml roztoku tetrabutylamóniumhydroxidu s koncentráciou 0,0063 mol/1. Hodnota roztoku sa potom zmeria a stanoví ako cieľová hodnota (pH = 10,95). Za miešania sa naraz pridá 50 mg oligosacharidu vzorca (II), v ktorom n sa rovná 0, R¹ a R⁶ označujú skupinu SO3Na a M označuje sodík. Hodnota pH sa potom kontroluje a udržiava na 10,95 kontinuálnym pridávaním roztoku tetrabutylamóniumhydroxidu s koncentráciou 0,521 mol/1. Po 16 hodinách sa preruší pridávanie tetrabutylamóniumhydroxidu a reakčná zmes sa ochladí na teplotu 25 °C. Analýza uskutočnená vysoko účinnou kvapalinovou chromatografiou v móde iónových párov umožňuje sledovať transformáciu na derivát všeobecného vzorca (I), v ktorom n sa rovná 0, R¹ a R⁶ označujú skupinu SO3Na a M označuje sodík alebo tetrabutylamónium. V tomto prípade vysoko účinná kvapalinová chromatografía ukazuje, že uvedená transformácia prebehla na 96,7 %. Výťažok stanovený použitím vonkajšieho štandardu je 65 %.

Liečivá podľa vynálezu obsahujú ako účinnú látku aspoň jeden oligosacharid všeobecného vzorca (I) alebo zmes oligosacharidov všeobecného vzorca (I) vo forme kompozície, v ktorej sú uvedený oligosacharid alebo uvedená zmes oligosacharidov obsiahnuté v kombinácii s ľubovoľným iným farmaceutický kompati9 bilným produktom, ktorý môže byť inertný alebo fyziologicky účinný. Liečivá podľa vynálezu môžu byť aplikované intravenóznym, subkutánnym, orálnym, rektálnym, topickým alebo inhalačným podaním.

Sterilnými kompozíciami na intravenózne alebo subkutánne podanie sú všeobecne vodné roztoky. Tieto kompozície môžu tiež obsahovať prísady, najmä zmáčacie činidlá, izotonizujúce činidlá, emulgačné činidlá, dispergačné činidlá a stabilizačné činidlá. Sterilizácia kompozícií môže byť uskutočnená niekoľkými spôsobmi, napríklad sterilizujúcou filtráciou, ožiarením alebo pridaním sterilizujúcich činidiel ku kompozícii. Uvedené kompozície môžu byť tak isto pripravené vo forme pevných kompozícií, ktoré môžu byť rozpustené bezprostredne pred použitím v sterilnej vode alebo v ľubovoľnom inom sterilnom injikovateľnom prostredí.

Ako pevné kompozície na orálne podanie môžu byť použité tablety, pilulky, prášky (želatínové kapsuly, kapsuly) alebo granuly. V týchto kompozíciách je účinná látka zmiešaná pod prúdom argónu s jedným alebo niekoľkými inertnými riedidlami, ako sú škrob, celulóza, sacharóza, laktóza alebo silika. Tieto kompozície môžu tiež obsahovať látky iné ako riedidlá, a to napríklad jedno alebo viac mazív, akými sú najmä stearát horečnatý alebo mastenec, činidlo podporujúce orálnu absorpciu, farbivo, zapuzdrovací materiál (dražé) alebo lak.

Ako kvapalné kompozície na orálne podanie môžu byť použité farmaceutický prijateľné roztoky, suspenzie, emulzie, sirupy a elixíry obsahujúce inertné riedidlá, akými sú najmä voda, etanol, glycerol, rastlinné oleje alebo parafínový olej. Tieto kompozície môžu obsahovať aj iné látky ako riedidlá, a to napríklad zmáčadlá, sladidlá, zhutňovadlá, aromatizačné látky alebo stabilizátory.

Kompozície na rektálne podanie sú čapíky alebo rektálne kapsuly, ktoré okrem účinnej látky obsahujú pomocné látky, akými sú kakaové maslo, polosyntetické glyceridy alebo polyetylénglykoly.

Kompozíciami na topické podanie môžu byť napríklad krémy, lotiony, náplasti, kolýriá, kolutóriá, nosné kvapky alebo aerosóly.

Dávky účinných látok podľa vynálezu závisia od požadovaného účinku, od času liečenia a od zvoleného spôsobu podania; tieto dávky sa všeobecne pohybujú medzi 0,5 a 10 mg na kilogram telesnej hmotnosti pacienta a deň pri subkutánnom podaní, t. j. 3 až 60 mg denne pre dospelého pacienta s telesnou hmotnosťou 60 kg.

Vhodné dávkovanie vo všeobecnosti stanoví ošetrujúci lekár v závislosti od veku, telesnej hmotnosti a ostatných individuálnych faktorov pacienta.

Vynález sa tiež týka spôsobu prevencie alebo liečenia ochorení spojených so zápalovým procesom zahrnujúcim produkciu cytotoxických látok, medzi ktoré patrí najmä oxid dusnatý (NO). Oligosacharidy všeobecného vzorca (I) môžu byť takto použité na prevenciu a/alebo liečenie neurodegeneratívnych chorôb, pri ktorých cerebrálny zápal hrá zhubnú úlohu, ktoré môžu viesť k smrti a z ktorých možno uviesť ischémiu centrálnej nervovej sústavy, mozgovú ischémiu, ischémiu sietnice a kochley, srdcovú ischémiu (infarkt myokardu), periférnu ischémiu, poruchy centrálnej nervovej sústavy a najmä úrazy lebky, chrbtice a kombinované úrazy lebky a chrbtice, poškodenie sietnice a kochley, roztrúsenú sklerózu, neuropatické bolesti a periférnu neuropatiu, ochorenia motorických neurónov a z nich amyotrofnú laterálnu sklerózu, neuro-AIDS, Alzheimerovu chorobu, Parkinsonovu chorobu, Huntingtonovu choreu a niektoré formy osteortritídy, najmä na úrovni kĺbov.

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. Oligosacharidy všeobecného vzorca (I) (I), v ktorom n je celé číslo 0 až 25, R¹, R³, R⁴ a R⁵, ktoré sú rovnaké alebo odlišné, označujú atóm vodíka alebo skupinu SO3M, R² a R⁶, ktoré sú rovnaké alebo odlišné, označujú atóm vodíka alebo skupinu SO3M alebo skupinu COCH₃ a M označuje sodík, vápnik, horčík alebo draslík a zmes týchto oligosacharidov.

2. Oligosacharidy všeobecného vzorca (I), podľa nároku 1, v ktorom R⁴ znamená atóm vodíka a zmes týchto oligosacharidov.

3. Oligosacharidy všeobecného vzorca (I), podľa niektorého z nárokov 1 alebo 2, v ktorom n je celé číslo 0 až 10 a zmes týchto oligosacharidov.

4. Oligosacharidy všeobecného vzorca (I), podľa niektorého z nárokov 1 alebo 2, v ktorom n je celé číslo 0 až 6 a zmes týchto oligosacharidov.

5. Oligosacharidy všeobecného vzorca (I), podľa niektorého z nárokov 1 alebo 2, v ktorom n je celé číslo 1 až 6 a zmes týchto oligosacharidov.

6. Spôsob prípravy oligosacharidov všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sa pôsobí hydroxidom alkalického kovu alebo kvartémym amóniumhydroxidom na oligosacharidy všeobecného vzorca (II) (Π), v ktorom n je celé číslo 0 až 25, R¹, R³, R⁴ a R⁵, ktoré sú rovnaké alebo odlišné, označujú atóm vodíka alebo skupinu SO3M, R² a R⁶, ktoré sú rovnaké alebo odlišné, označujú atóm vodíka alebo skupinu SO3M alebo COCH₃ a M označuje sodík, vápnik, horčík alebo draslík, alebo na ich zmes, a potom sa získané oligosacharidy alebo ich zmesi izolujú.

7. Spôsob podľa nároku 6, vyznačujúci sa tým, že sa reakcia uskutočňuje vo vodnom prostredí pri teplote 40 až 80 °C a hodnote pH 10 až 13.

8. Spôsob podľa niektorého z nárokov 6 alebo 7, vyznačujúci sa tým, že sa použije 1 až 5 % vodný roztok hydroxidu alkalického kovu alebo kvartémeho amóniumhydroxidu.

9. Spôsob podľa niektorého z nárokov 6 až 8, vyznačujúci sa tým, že sa reakcia uskutočňuje pri teplote 60 až 70 °C

10. Spôsob podľa nárokov 6 až 9, vyznačujúci sa tým, že reakčná hodnota pH je od 11 do 12,5.

11. Spôsob podľa nárokov 6 až 10, vyznačujúci sa tým, že hydroxidom alkalického kovu alebo kvartémym amóniumhydroxidom je hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid lítny, hydroxid cézny alebo tetrabutylamóniumhydroxid.

12. Farmaceutická kompozícia, ktorá obsahuje ako účinnú látku aspoň jeden oligosacharid podľa nároku 1.

13. Farmaceutická kompozícia, ktorá obsahuje ako účinnú látku aspoň jeden oligosacharid podľa niektorého z nárokov 1 až 5.

14. Použitie oligosacharidov všeobecného vzorca (I) na prípravu liečiva určeného na prevenciu a liečenie cerebrálnych, srdcových alebo vaskulámych periférnych ischémií, osteoartritíd, poranenia centrálnej nervovej sústavy, poranenia lebky, poranenia chrbtice a kombinovaného poranenia lebky a chrbtice, roztrúsenej sklerózy, neuropatických bolestí, periférnych neuropatií, ochorení motorických neorónov, amyotrofnej laterálnej sklerózy, neuro-AIDS, Alzheimerovej choroby, Parkinsonovej choroby a Huntingtonovej chorey.