SA519402226B1 - مترافقات أوليجومرات تخطي الإكسون للحَثَل العَضَلِيّ - Google Patents

مترافقات أوليجومرات تخطي الإكسون للحَثَل العَضَلِيّ Download PDF

Info

Publication number
SA519402226B1
SA519402226B1 SA519402226A SA519402226A SA519402226B1 SA 519402226 B1 SA519402226 B1 SA 519402226B1 SA 519402226 A SA519402226 A SA 519402226A SA 519402226 A SA519402226 A SA 519402226A SA 519402226 B1 SA519402226 B1 SA 519402226B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
aaa
rrr
oligomer
dystrophin
exon
Prior art date
Application number
SA519402226A
Other languages
English (en)
Inventor
جيه. هانسون جونار
ايه. باسيني ماركو
Original Assignee
ساريبتا ثيرابيوتكس، انك
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ساريبتا ثيرابيوتكس، انك filed Critical ساريبتا ثيرابيوتكس، انك
Publication of SA519402226B1 publication Critical patent/SA519402226B1/ar

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/645—Polycationic or polyanionic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. polylysine, polyarginine, polyglutamic acid or peptide TAT
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

يتعلق الاختراع الحالي بوصف مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ Antisense oligomer conjugates المتممة لموقع مستهدف مختار في جين الديستروفين dystrophin gene البشري للحث على تخطي الإكسون induce exon 53. شكل 1.

Description

مترافقات أوليجومرات تخطي الإكسون للحَتّل ‎AE‏ ‎Exon Skipping Oligomer Conjugates for Muscular Dystrophy‏ الوصف الكامل خلفية الاختراع يتعلق الكشف الحالي بمترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ ‎antisense oligomer‏ 45 جديدة ملائمة ‎ads‏ الإكسون ‎exon‏ 53 في جين الديستروفين البشري ‎human‏ ‎dystrophin gene‏ وتركيبات صيدلية منها. يوفر الكشف أيضًا ‎Call Bla‏ على تخطي الإكسون 53 باستخدام بمترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ الجديدة؛ طرقًا لإنتاج الديستروفين ‎dystrophin‏ في خاضع للعلاج لديه طفرة ‎mutation‏ في جين الديستروفين ‎dystrophin gene‏ الذي يكون مُعرّْضًا لتخطي الإكسون 53؛ وطرقًا لعلاج خاضع للعلاج لديه طفرة في جين الديستروفين الذي يكون مُعرْضًا لتخطي الإكسون ‎exon‏ 53. يتم تطوير التقنيات المضادة لاتجاه النسخ باستخدام نطاق من الكيمياء للتأثير على التعبير الوراثي 0 عن الجين عند مجموعة متنوعة من المستويات المختلفة الاستنساخ ‎transcription‏ ؛ الجدل ‎splicing‏ الثبات ‎«stability‏ التحوّر الوراثي ‎translation‏ لقد تركز الكثير من هذا البحث على استخدام المركبات المضادة لاتجاه النسخ لتصحيح أو التعويض عن الجينات غير الطبيعية أو المصاحبة للأمراض في نطاق واسع من دواعي الاستعمال. تعتبر الجزيئات المضادة لاتجاه النسخ قادرة على تثبيط التعبير الوراثي عن الجين باستخدام النوعية؛ وبسبب هذاء فقد تركزت العديد 5 من جهود البحث المتعلقة بالأوليجومرات كمعدلات للتعبير الوراثئي عن الجين على تثبيط التعبير الوراثي عن الجينات المستهدفة أو وظيفة العناصر العاملة سيس. يتم نمطيًا توجيه الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ ضد ‎(RNA‏ إما الجديلة مع اتجاه النسخ (على سبيل المثال» ‎(MRNA‏ ‏الجديلة الناقصة في ‎Ala‏ بعض من أهداف ‎RNA‏ الفيروسية. لتحقيق تأثير مطلوب خاص بالتنظيم التنازلي لجين نوعي» تقوم الأوليجومرات بصفة عامة إما بتعزيز انحلال ‎MRNA‏ ‏0 المستهدف؛ إعاقة التحوّر الوراثي ل ‎MRNA‏ أو إعاقة وظيفة عناصر ‎RNA‏ العاملة سيس؛ وبالتالي منع إما التخليق الجديد البروتين المستهدف أو نسخ ‎RNA‏ الفيروسي بكفاءة.
بالرغم من ذلك؛ لا تعتبر هذه التقنيات مفيدة حيث يتمثل الهدف في تنظيم إنتاج البروتين الأصلي تصاعديًا أو التعويض عن الطفرات التي تحث على الإنهاء السابق لأوانه للتحوؤر الوراثي؛ مثل ‎andl «hill‏ أو الخاصة بإزاحة الإطار. في هذه الحالات؛ لا ينبغي تعريض نسخة الجين المعيبة إلى التحلل المستهدف أو التثبيط الفراغي؛ لذا لا ينبغي أن تُعزز كيمياء الأوليجومر المضاد الاتجاه النسخ انحلال ‎MRNA‏ المستهدف أو تعيق التحوّر الوراثي ‎translation‏ ‏في مجموعة متنوعة من الأمراض الجينية؛ يمكن تعديل تأثيرات الطفرات على التعبير النهائي عن جين من خلال عملية خاصة بتخطي الإكسون المستهدف أثناء عملية الجدل. يتم توجيه عملية الجدل بواسطة آلية متعددة المكونات معقدة تجلب وصلات الإكسون-الإنترون المتجاورة في ‎MRNA‏ أولي في ‎dlls‏ تقارب وثيق وتقوم بشطر روابط فوسفو داي إستر عند نهايات الإنترونات 0 مع إعادة تشكيلها ‎Ga‏ فيما بين الإكسونات التي سيتم جدلها معًا. ‎Lam‏ هذه العملية المعقدة وعالية الدقة بواسطة بواعث المتوالية في ‎MRNA‏ الأولي القصيرة ‎Gans‏ مقاطع ‎RNA‏ شبه المتحفظة التي ترتبط بها عوامل الجدل النووي المتنوعة المتضمنة بعد ذلك في تفاعلات الجدل. عن طريق تغيير طريقة قيام آلية الجدل بقراءة أو التعزف على البواعث المتضمنة في معالجة ‎MRNA‏ أولي؛ يصبح من الممكن تكوين جزيئات ‎MRNA‏ مجدولة على نحو تفاضلي. لقد تم الآن إدراك أنه يتم 5 على نحو بديل جدل غالبية الجينات البشرية أثناء التعبير الوراتي عن الجين الطبيعي؛ بالرغم من أنه لم يتم تحديد الآليات المتضمنة. يصف ‎Bennett et al‏ (البراءة الأمريكية رقم 2 التتعديل المضاد لاتجاه النسخ لمعالجة ‎MRNA‏ الخلوي من النوع غير المعالج باستخدام نظائر الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ التي لا تحث على الانشطار الناتج عن ‎RNAse H‏ ل ‎RNA‏ المستهدف. تتمثل الفائدة من ذلك في القدرة على توليد ‎MRNAS‏ مجدولة 0 على نحو ‎day‏ تفتقر إلى إكسونات نوعية (انظرء على سبيل المثال؛ كما هو موصوف بواسطة ‎(Sazani, Kole, et al. 2007)‏ لتوليد مستقبلات العائلة العليا من ‎TNF‏ القابلة للذويان التي تفتقر إلى الإكسونات التي تقوم بتشفير نطاقات تمديد الغشاء . في الحالات حيث يتم إنهاء بروتين وظيفي بصورة طبيعية على نحو سابق لأوانه بسبب الطفرات الموجودة فيه؛ تم عرض وسيلة لاستعادة بعض من إنتاج البروتين الوظيفي من خلال التقنية 5 المضادة لاتجاه النسخ باعتبارها ممكنة من خلال التدخل أثناء عمليات الجدل؛ وأنه إذا كان
بالإمكان حذف الإكسونات المصاحبة للمرض المسبب للطفرات بشكل خاص من بعض الجينات؛ فإنه يمكن في بعض الأحيان إنتاج منتج بروتين قصير له خصائص بيولوجية مشابهة للبروتين الأصلي أو له نشاط بيولوجي كافي لتحسين المرض الناتج بواسطة الطفرات المصاحبة للإكسون (انظر على سبيل المثال» ‎Sierakowska, Sambade et al. 1996; Wilton, Lloyd et‏ ‎al. 1999; van Deutekom, Bremmer-Bout et al. 2001; Lu, Mann etal. 5‏ ‎Janson et al. 2004‏ ,5ل4ا-811508 :2003). يكشف ‎(Kole et al‏ (البراءات الأمريكية أرقام ¢5,627,274 ¢5,916,808 ¢5,976,879 5 5,665,593( عن طرق لمكافحة الجدل الشاذ باستخدام نظائر الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ المعدلة التي لا تُعزز انحلال ‎MRNA‏ ‏الأولي المستهدف. يصف ‎et al‏ 860068. (البراءة الأمريكية رقم 6,210,892( التعديل المضاد 0 الاتجاه النسخ لمعالجة ‎MRNA‏ الخلوي من النوع غير المعالج ‎Waal‏ باستخدام نظائر الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ التي لا تحث على الانشطار الناتج عن ‎H‏ 41856 ل ‎RNA‏ المستهدف. من المحتمل أن تكون عملية تخطي الإكسون 67007 المستهدف مفيدة تحديدًا في الجينات الطويلة ‎Cua long genes‏ يوجد العديد من الإكسونات ‎exons‏ والإنترونات ‎Cua ¢ introns‏ يوجد وفرة في التشكيل الجيني للإكسونات أو حيث يكون البروتين قادرًا على العمل بدون واحد أو أكثر 15 .من الإكسونات المحددة. لقد ركزت الجهود لإعادة توجيه معالجة الجين لعلاج الأمراض الجينية المصاحبة لحالات الاقتطاع الناتجة بواسطة الطفرات في الجينات المتنوعة على استخدام الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ التي إما: (1) تتراكب بشكل كلي أو جزئي مع العناصر المتضمنة في عملية الجدل؛ أو (2) ترتبط ب ‎MRNA‏ الأولي عند موضع قريب بالقدر ‎SE‏ ‏من العنصر لتمزيق ارتباط ووظيفة عوامل الجدل التي من شأنها أن تتسبب بصورة طبيعية في 0 تفاعل جدل بعينه يحدث عند ذلك العنصر. يحدث ‎JER‏ الْعَضَلِيٌ لدوشين ‎(DMD) Duchenne muscular dystrophy‏ بواسطة عيب في التعبير الوراثي عن ديستروفين البروتين. يحتوي الجين المشفر للبروتين على 79 من الإكسونات المنتشرة على أكثر من 2 مليون من نوكليوتيدات ‎DNA‏ يكون لأية طفرة خاصة بالإكسون غير من إطار القراءة الخاص بالإكسون» أو تُدخل رامزة إيقاف» أو يتم تمييزها بواسطة إزالة إكسون أو
إكسونات خارج الإطار بأكمله أو بأكملهاء أو تضاعفات واحد أو أكثر من الإكسونات؛ إمكانية لتعطيل إنتاج الديستروفين الوظيفي؛ مما يؤدي إلى ‎DMD‏ ‏لقد تبين أن صورة أقل حدة من ‎Jal‏ العَضَلِيْ؛ ‎(Jal)‏ العَضَلِيٍ لبيكر ‎Becker muscular‏ ‎(BMD) dystrophy‏ تظهر ‎Cua‏ تؤدي طفرة؛ نمطيًا حذف واحد أو أكثر من الإكسونات؛ إلى إطار قراءة صحيح على طول نسخة الديستروفين بأكملهاء بحيث لا يتم إنهاء التحوّر الوراثي ل ‎MRNA‏ في البروتين على نحو سابق لأوانه. إذا حافظ ربط الإكسونات السابقة والتالية في عملية معالجة ‎MRNA‏ أولي لديستروفين مطفر على إطار القراءة الصحيح للجين؛ تتمثل النتيجة في تشفير ‎MRNA‏ للبروتين بحذف داخلي قصير يحافظ على بعض من النشاط مما يؤدي إلى نمط بيكر ظاهري. 0 لعدة سنوات أصبح من المعروف أن عمليات حذف إكسون أو إكسونات لا تغير من إطار القراءة الخاص ببروتين ديستروفين ستؤدي إلى ظهور نمط ‎BMD‏ ظاهري؛ بينما سيؤدي حذف إكسون يتسبب في إزاحة إطار إلى ظهور 1988 ‎DMD ((Monaco, Bertelson et al.‏ بشكل عام؛ طفرات الديستروفين المتضمنة طفرات نقطية وعمليات حذف للإكسون تُغير من إطار القراءة وبالتالي مقاطعة التحوّر الوراثي للبروتين ‎Dall‏ مما يؤدي إلى ‎DMD‏ ينبغي ملاحظة أن بعض 5 من مرضى ‎BMD‏ و0/ا0 يعانون من عمليات حذف للإكسون تُغطي العديد من الإكسونات. لقد تم توضيح تعديل جدل ‎MRNA‏ الأولي لديستروفين الطفرة باستخدام الأوليجو رببو نوكليوتيدات المضادة لاتجاه النسخ في كل من المعمل وجسم الكائن الحي (انظر على سبيل المثال؛ ‎Matsuo, Masumura et al. 19911; Takeshima, Nishio et al. 1995;‏ ‎Pramono, Takeshima et al. 1996; Dunckley, Eperon et al. 1997;‏ ‎Dunckley, Manoharan et al. 1998; Wilton, Lloyd et al. 1999; Mann, 20‏ ‎.(Honeyman et al. 2002; Errington, Mann et al. 2003‏ لقد تم تصميم الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ بشكل نوعي لاستهداف مناطق نوعية من ‎MRNA‏ الأولي؛ نمطيًا الإكسونات للحث على تخطي طفرة جين ‎DMD‏ وبالتالي استعادة هذه الطفرات خارج الإطار داخل الإطار للسماح بإنتاج بروتين الديستروفين الوظيفي المقصر داخليًا.
لقد عُرفت هذه الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ للإستهداف بشكل تام داخل الإكسون (ما يُطلق عليه المتواليات الداخلية للإكسون) أو عند وصلة واهب جدل أو مستقبل جدل تعبر من الإكسون إلى ‎oa‏ من الإنترون. لقد كان اكتشاف وتطوير هذه الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ ل ‎DMD‏ جزءًا من البحث السابق. تتضمن هذه التطويرات تلك الواردة من: )1( ‎University of Western Australia‏ ‎:and Sarepta Therapeutics‏ الطلبات الدولية التالية : 000057/2006«¢ ¢048586/2010 057350/2011؛ 100714/2014؛ ¢153240/2014 ¢153220/2014 ‎BioMarin oY) Academisch Ziekenhuis Leiden/Prosensa Technologies (2) 0‏ ‎(Ph armaceutical‏ : ¢24906/02 ¢083432/2004 ¢083446/2004 ¢112705/2006 ¢133105/2007 ¢139630/2009 ¢054725/2009 ¢050801/2010 ¢050802/2010 ‎Carolinas Medical Center (3) ¢:007620/2014 ¢112053/2013 ¢123369/2010‏ ‎:Royal Holloway (4) ¢109296/2012 : 5‏ البراءات والطلبات التي تستفيد من؛ وتتضمن؛ الطلبات والبراءات أرقام 096,073/61 5 €164,978/61 ‎Jie‏ البراءتين الأمريكيتين رقمي ‎JCR Pharmaceuticals and Matsuo: (4) 0204413-2017 5 8,084,601‏ 6 البراءات والطلبات التي تستفيد من» وتتضمن الطلب الياباني 2000- 8 يعد اكتشاف وتطور أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ مترافقة مع ببتيدات مخترقة للخلايا 0 ل ‎Visa DMD‏ للبحث (انظر نشرة ‎PCT‏ الدولية 2010/048586 ؛ ‎Wu, 8. et al., The‏ ‎Wu, R. et 00811680 Journal of Pathology, Vol. 181 (2): 392-400, 2‏ ‎Mulders, <al., Nucleic Acids Research, Vol. 35 (15): 5182-5191, 2007‏ ‎S. et al., 19th International Congress of the World Muscle Society, Poster‏ ‎Bestas, B. et al., The Journal of ¢Presentation Berlin, October 2014‏
‎Investigation, doi: 10.1172/JCI76175, 2014‏ ل0168ا؛ ‎Jearawiriyapaisarn,‏ ‎¢N. et al., Molecular Therapy, Vol. 16(9): 1624-1629, 2008‏ ‎Jearawiriyapaisarn, N. et al., Cardiovascular Research, Vol. 85: 444-453,‏ ‎Moulton, H.M. et al., Biochemical Society Transactions, Vol. 35 ¢2010‏ ‎Yin, H. et al., Molecular Therapy, Vol. 19 (7): ¢4): 826-828, 2007 5‏ ‎Abes, R. et al., J.
Pept.
Sci., Vol. 14: 455-460, ¢1295-1303, 2011‏ ‎Lebleu, B. et al., Advanced Drug Delivery Reviews, Vol. 60: 517- ¢2008‏ ‎McClorey, G. et al., Gene Therapy, Vol. 13: 1373-1381, ¢529, 2008‏ ‎‘Alter, J. et al., Nature Medicine, Vol. 12 (2): 175-177, 2006 ¢2006‏ و ‎Youngblood, D. et al., American Chemical Society, Bioconjugate Chem., 10‏ ‎pp 50-60‏ ,)1( 18 ,2007((. قد تكون الببتيدات المخترقة للخلايا ‎(CPP) Cell-penetrating peptides‏ على سبيل المثال» الشق الناقل للبتيدات الغنية بالأرجينين؛ ‎Ela‏ لتحسين اختراق» على سبيل المثال» مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ مع ‎CPP‏ في خلية. بالرغم من هذه المحاولات؛ تظل هناك ‎dala‏ للأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ المحسنة التي تستهدف الإكسون 53 وتركيبات صيدلية مناظرة من المحتمل أن تكون مفيدة للطرق العلاجية لإنتاج الديستروفين وعلاج ‎DMD‏ ‏الوصف العام للاختراع تتضمن مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ الواردة بهذه الوثيقة شق مترافق أوليجومر 0 مضاد لاتجاه النسخ مع ‎OPP‏ في أحد الجوانب؛ يوفر الكشف مترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ تشتمل على: أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ يبلغ طوله 25 وحدة فرعية يمكنه ربط مستهدف محدد لحث تخطي الإكسونات في جين الديستروفين البشري؛ حيث يشتمل الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ على متوالية من القواعد متممة لمنطقة الإكسون 53 المستهدفة للديستروفين ‎MRNA‏ الأولي الذي يُطلق
عليه موضع تلدين؛ وببتيد مخترق للخلية ‎(CPP) Cell-penetrating peptides‏ مترافق مع الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ بواسطة شق رابط. في بعض التجسيدات؛ يكون موضع التلدين ‎Ble‏ عن (36+60+)/153. في بعض التجسيدات؛ يتم ربط قواعد الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ ببنيات حلقات مورفولينو ‎morpholino ring structures 5‏ « حيث يتم توصيل بنيات حلقات المورفولينو بواسطة وصلات وحدات فرعية متداخلة محتوية على فوسفور ‎phosphorous‏ تقوم بريط إنتروجين مورفولينو ‎dud morpholino nitrogen‏ حلقة واحدة بكريون خارج الحلقة 5 ‎Lol‏ حلقة متجاورة. في تجسيدات معينة؛ يكون الببتيد المخترق للخلية عبارةً عن ست وحدات أرجينين ‎arginine units‏ ‎(RE)‏ ويكون الشق الرابط ‎Ble‏ عن جليسين. في بعض التجسيدات؛ يشتمل الأوليجومر المضاد 0 الاتجاه النسخ على متوالية من القواعد يُطلق عليها المتوالية رقم:1.في عدة جوانب؛ يوفر الكشف مترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ يمكنها أن تكون وفقًا للصيغة ‎:)١(‏ ‏1 ‎NG Nu‏ ‎J‏ ‎A‏ ‏; ‎i Nu 5‏ ‎J‏ ‏مسبت ‏28 9 3 مح [ ‎N‏ ‎A‏ ‎HN 0‏ ل 0 لاوا ‎NH‏ ‎T +‏ 0
(0 : Cua (dia Lay ‏أو ملح مقبول صيد‎ ‏لتكوين متوالية استهداف؛ و‎ AA] ‏يتم‎ nucleobase ‏عن قاعدة نووية‎ Blue NU ‏تكون كل‎ ‏عن شق يتم اختياره من:‎ Ble 1 ‏تكون‎ ‎0 0 0 NH, HO 3 0 ْ ‏1ج‎ ‏ب‎ 0 ]
O=——P——N(CHs),
O——P——N(CH;)
OH | | 3)2
LTTE ‏؛“صورة ب‎ Yoga 5 ‏ألكيل؛‎ C1-C6 ‏تكون 1+ عبارة عن‎ dystrophin ‏حيث تكون متوالية الاستهداف متممة لموقع تلدين الإكسون 53 في ديستروفين‎
HS3A(+36+60) ‏الأولي الذي يُطلق عليه‎ mRNA (IV) ‏الكشف مترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ بالصيغة‎ jig ‏في جانب آخرء‎ § oy ‏واي اع ييا‎ 0 oa ‏لفاصل ب‎ : c Su : { 3 3% ِ - i i a gre, i Co
See Sone ‏ا كي‎ TE } . i i J I” ks ‏الال‎ -
Tome ‏اليا ابا‎ Tee ‏ب‎ ‎Choy ‏ملا الب خط 400000000 مط‎ ٠ ‏ب :ا 5 اا 5 ال اا اللي يي المي ال بح‎ ‏اللا‎ de Feel RN Pihpneiet 8
Coed SI Ls hey ‏يخ ا اليك‎ ‏ب‎ rr 5 ped a od IY Sp: ‏ا‎ PY > ‏جاربا | جاربا على الب‎ ry
Lod Se ‏الي‎ de ‏ريا‎ oy? Sy RY i 3 1 *, i 4 3 ‏ب‎ 5 0 he ‏ل 5 ماري‎ Poy ‏ل‎ 0 Ee 1 ‏لض‎ Ns ‏ما : يض با‎ Wo {
ROTEL 1 ‏يي‎ VFL nt ‏بج‎ ha > ‏يا مح اق‎ Ks EN
A ‏لبا‎ ey TRE ea TA ~~ . he ٠ ‏ال‎ me 0 ‏ال ا ب‎ 0 Ea
VE ‏لير ل"‎ 1 oF ‏ب‎ vy 3 1 Ye Hem Hosen, ‏ب‎ ‏نلا‎ TY 1 <5 0 . 8 “he Y ‏اح مر‎ Eo ‏الل ال‎ wre TUL ATT
Se 0 ‏يحم‎ ky : ‏ا‎ 50 v T em Eni i ‏ياي ب‎ he 2 7 1 1 ‏حرصي‎ A ‏سب‎ ١ Sea na ‏ال‎ TEN RAS ot 5 3 : ay PY RR Hap 3 0 ‏ما‎ | Lene ‏مب با‎ <3 1 A i. ry 7# a ‏ب‎ ُ 2 bm A fy al ‏التاصل اج‎ YT Te ¥ Shah wh a He, Jn,
— 0 1 — ‎(IV)‏ ‏أو ملح مقبول صيدليًا منه. في جانب ‎«aT‏ يوفر الكشف مترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ بالصيغة (8/ا): ‎ap Nr Soh la IE‏ ب ب الم اش ال ‎Ba LA A‏ . 3 = 3{ ال ليا ا ‎nn 1 aA tb‏ ‎UY 03 CN‏ نبجب 5 ل ‎iy - Ha EY i ed EY LS‏ = 0 ا مي :1 ‎XY 1 ْ |‏ "م ‎i SN vy NY‏ ميلم : ‎mh‏ ! 8 ‎whe TL NE‏ ٍ 3 ضايح 8 ‎Tele TR‏ ري ‎Na Ae‏ ‎No . oF ht 1 fe a LJ font’ 0 & 35‏ ‎ON LLY‏ ا ‎Lome rE Yr YY‏ ‎BS‏ الي ‎Tred Co‏ الت اهل :0 ‎TE‏ م المح 3 ب ‎i‏ ‎eA‏ ال كايا يض الجا ‎bo 3 he 5 ON i se‏ ابابا ‎hme ST‏ ام ‎NT Yh‏ ‎oy‏ ا ‎EY SY et ag TY >< J BN‏ ‎YT‏ 7ت ‎ry‏ ‏: و ‎DY A EL oY > 8 Yr‏ ااي ‎Pee Lr LE‏ ب ا . يل 72 ‎Rd 8 " oC Ln ww i‏ ما ال التاصلاج ‎i‏ ال ‎(IVA) 5‏ فى جانب آخرء يوفر الكشف تركيبات صيدلية تتضمن مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ وفقًا للكشف؛ ومادة حاملة مقبولة صيدليًا. في بعض التجسيدات؛ تكون المادة الحاملة المقبولة صيدليًا عبارة عن محلول ملحي مركز يتضمن محلول فوسفاتي منظم . فى جانب ‎AT‏ يوفر الكشف طريقة لعلاج ‎Jia)‏ العَضَلِيٌ لدوشين ‎Duchenne muscular‏ ‎(DMD) dystrophy | 0‏ في خاضع للعلاج بحاجة إليها حيث يكون لدى الخاضع للعلاج طفرة جين الديستروفين مُعرْضًا لتخطي الإكسون 53« حيث تشتمل الطريقة على إعطاء الخاضع للعلاج مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎Gg‏ للكشف. كما يتعلق ‎CRASH‏ باستخدام مترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ ‎Gg‏ للكشضف ¢ لتصنيع دواء لعلاج ‎(hall Jas‏ لدوشين ‎(DMD)‏ في خاضع للعلاج بحاجة إليه حيث يكون لدى الخاضع للعلاج طفرة جين الديستروفين 5 مُعرْضًا لتخطى الإكسون 53.
في جانب آخرء يوفر الكشف طريقة لاستعادة إطار قراءة ‎MRNA‏ لحث إنتاج الديستروفين في خاضع للعلاج له طفرة جين الديستروفين مُعرْضًا لتخطي الإكسون 53؛ حيث تشتمل الطريقة على إعطاء الخاضع للعلاج مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎Gg‏ للكشف. في جانب آخرء يوفر الكشف طريقة لاستبعاد الإكسون 53 من ديستروفين ‎MRNA‏ أولي أثناء معالجة ‎MRNA‏ في
خاضع للعلاج له طفرة جين الديستروفين مُعرّضًا لتخطي الإكسون 53 حيث تشتمل الطريقة على إعطاء الخاضع للعلاج مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎Gg‏ للكشف. في جانب آخرء يوفر الكشف طريقة لربط الإكسون 53 لديستروفين ‎MRNA‏ الأولي في خاضع للعلاج له طفرة جين الديستروفين ‎Laas‏ لتخطي الإكسون 53؛ حيث تشتمل الطريقة على إعطاء الخاضع للعلاج مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎Gg‏ للكشف.
0 في جانب ‎AT‏ يوفر الكشف مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎by‏ للكشف الوارد بهذه الوثيقة لاستخدامه للعلاج. في تجسيدات معينة؛ يوفر ‎CRIS‏ مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎Bag‏ ‏للكشف لاستخدامه في علاج ‎Al‏ العَضَلِيَ لدوشين. في تجسيدات معينة؛ يوفر الكشف مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ وفقًا للكشف لاستخدامه في تصنيع دواء لاستخدامه في العلاج. في تجسيدات معينة؛ يوفر الكشف مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎Eg‏ للكشف لاستخدامه في
5 تصنيع علاج لعلاج ‎(Aaa Jal‏ لدوشين. في جانب آخرء يورد الكشف كذلك أطقم لعلاج ‎Fall‏ العَضَلِيٌ لدوشين ‎Duchenne‏ ‎(DMD) muscular dystrophy‏ في خاضع للعلاج بحاجة إليها حيث يكون لدى الخاضع للعلاج طفرة جين الديستروفين مُعرْضًا لتخطي الإكسون 53( حيث تشتمل الأطقم على على الأقل مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎Ug‏ للكشف الحالي؛ مغلّفة في حاوية مناسبة بها تعليمات
0 الاستخدامها. سيتم فهم هذه الأغراض والسمات وغيرها على نحو أتم عند ‎sel‏ الوصف التفصيلي للكشف جنبًا إلى جنب مع الأشكال. شرح مختصر للرسومات الشكل 1 وصف لأحد قطاعات ديستروفين ‎MRNA‏ أولي عادي 5 ‎MRNA‏ ناضج.
— 2 1 — الشكل 2 وصف لأحد قطاعات ديستروفين ‎MRNA‏ أولي غير عادي (على سبيل المثال ‎(DMD‏ ‏وديستروفين ناتج غير وظيفي وغير مستقر. الشكل 3 وصف لإيتيبليرسين ¢ مصمّم لتخطى الإكسون 1 ولاستعادة القراءة ‎I"‏ لإطارية الداخلية" ل ‎MRNA‏ أولى. الشكل 4 يوفر مخطط أعمدة للنسبة المئوية لتخطي الإكسون 53 في ‎WIA‏ عضلية بشرية صحيحة بواسطة ‎PMO‏ رقم 1 ‎PPMO‏ رقم 1 بتركيزات متنوعة بعد 96 ساعة من العلاج؛ حسب قياس ‎RT-PCR‏ تمثل أشرطة الخطأ متوسط الانحراف المعياري +. الشكل 15 يوفر صورة توضيحية لتحليل بقعة ويسترن يقيس بروتين ديستروفين في العضلة رياعية الرؤوس لفئران ‎mdx‏ معالج ب ‎PMO (PMO4225)‏ أو ‎PPMO (PPMO4225)‏ 70 أيام. 0 الشكل 5 يوفر صورة توضيحية لتحليل بقعة ويسترن يقيس بروتين ديستروفين في العضلة رباعية الرؤوس ‎mdX (lial‏ معالج ب ‎PMO (PMO4225)‏ أى ‎PPMO (PPMO4225)‏ 300 يوماً. الشكل 5ب يوفر صورة توضيحية لتحليل بقعة ويسترن يقيس بروتين ديستروفين في العضلة رباعية الرؤوس ‎mdX (lial‏ معالج ب ‎PMO (PMO4225)‏ أى ‎PPMO (PPMO4225)‏ 5 ل30 يوماً. الشكل 5ج يوفر صورة توضيحية لتحليل بقعة ويسترن يقيس بروتين ديستروفين في العضلة رباعية الرؤوس ‎mdX (lial‏ معالج ب ‎PMO (PMO4225)‏ أى ‎PPMO (PPMO4225)‏ 600 يوماً. الشكل 5د يوفر صورة توضيحية لتحليل بقعة ويسترن يقيس بروتين ديستروفين في العضلة رباعية 0 الرؤوس لفتران *«010 معالج ب ‎PMO (PMO4225)‏ أو ‎Ls 904 PPMO (PPMO4225)‏ يوفر الشكل 16 ‎Glad Lily Lay‏ يصف النسبة المئوية للديستروفين من النوع غير المعالج والذي يستحثه ‎PMO (PMO4225)‏ أو ‎PPMO (PPMO4225)‏ في العضلة رباعية الرؤوس لفئران بعد 90 يومًا من الحقن» حسب تحديد تحليل بقعة ويسترن ‎Western Blot analysis‏
يوفر الشكل 6ب رسمًا ‎Ghd Wily‏ يصف النسبة المئوية لإكسون 23 للتخطى والذي يستحثه ‎PMO (PMO4225)‏ أو ‎PPMO (PPMO4225)‏ في العضلة ‎Lely)‏ الرؤوس لفئران ‎MdX‏ ‏بعد 90 يومًا من الحقن؛ حسب تحديد ‎RT-PCR‏ ‏يوفر الشكل 7آ صورة توضيحية لتحليل بقعة ويسترن يقيس بروتين ديستروفين في الحجاب الحاجز لفئران ‎mdx‏ معالج ب ‎PMO (PMO4225)‏ أو ‎PPMO (PPMO4225)‏ ل7 أيام.
يوفر الشكل 7ب صورة توضيحية لتحليل بقعة ويسترن يقيس بروتين ديستروفين في الحجاب الحاجز لفئران ‎mdx‏ معالج ب ‎PMO (PMO4225)‏ أو ‎PPMO (PPMO4225)‏ ل30 يوماً. يوفر الشكل 7ج صورة توضيحية لتحليل بقعة ويسترن يقيس بروتين ديستروفين في الحجاب الحاجز لفئران ‎mdx‏ معالج ب ‎PMO (PMO4225)‏ أو ‎PPMO (PPMO4225)‏ ل60 ‎Ls‏
0 يوفر الشكل 7د صورة توضيحية لتحليل بقعة ويسترن يقيس بروتين ديستروفين في الحجاب الحاجز لفئران ‎mdx‏ معالج ب ‎PMO (PMO4225)‏ أو ‎PPMO (PPMO4225)‏ ل90 ‎Ls‏ ‏الشكل 18 يوفر ‎Loss)‏ بيانيًا خطيًا يصف النسبة المئوية للديستروفين من النوع غير المعالج والذي يستحثه ‎PMO (PMO4225)‏ أو ‎PPMO (PPMO4225)‏ في الحجاب الحاجز لفئران ‎mdx‏ ‏بعد 90 ‎lag‏ من الحقنء حسب تحديد تحليل بقعة ويسترن ‎Western Blot analysis‏
يوفر الشكل 8#ب رسمًا ‎Ghd Wily‏ يصف النسبة المئوية لإكسون 23 للتخطي والذي يستحثه ‎PMO (PMO4225)‏ أو ‎PPMO (PPMO4225)‏ في الحجاب الحاجز لفئران ‎mdx‏ بعد 90 ‎Lg‏ من الحقنء حسب تحديد ‎RT-PCR‏ ‏يوفر الشكل 19 صورة توضيحية لتحليل بقعة وبسترن يقيس بروتين ديستروفين في قلب فئران ‎MAX‏ ‏معالج ب ‎PMO (PMO4225)‏ أو ‎PPMO (PPMO4225)‏ _ل7 أيام.
0 يوفر الشكل 9ب صورة توضيحية لتحليل بقعة ويسترن يفيس بروتين ديستروفين في قلب ‎Ob‏ ‏معالج ب ‎PMO (PMO4225)‏ أو ‎PPMO (PPMO4225)‏ _ل30 يوماً.
— 4 1 — يوفر الشكل 9ج صورة توضيحية لتحليل بقعة ويسترن ‎Western Blot analysis‏ يقيس بروتين ديستروفين في قلب فتئران ‎MdX‏ معالج ب ‎PMO (PMO4225)‏ أر (001/04225) ‎PPMO‏ ‏ل60 يوماً. يوفر الشكل 9د صورة توضيحية لتحليل بقعة ويسترن يقيس بروتين ديستروفين في قلب ‎Obi‏ ‎mdx 5‏ معالج ب ‎PMO (PMO4225)‏ أو ‎PPMO (PPMO4225)‏ 904 يوماً. يوفر الشكل 110 ‎Wily Law‏ خطيًا يصف النسبة المئوية للديستروفين من النوع غير المعالج والذي يستحثه ‎PMO (PMO4225)‏ أو ‎PPMO (PPMO4225)‏ في قلب فتئران ‎mdx‏ بعد 90 يومًا من الحقن؛ حسب تحديد تحليل بقعة ويسترن. يوفر الشكل 0 1[ب رسمًا بيانيًا خطيًا يصف النسبة المئوية لإكسون 23 للتخطي والذي يستحثه ‎PMO )01004225( 0‏ أو (001/04225) ‎PPMO‏ في قلب ‎mdx oly‏ بعد 90 ‎Lage‏ من الحقن» حسب تحديد ‎RT-PCR‏ ‏يوفر الشكل 11 تحليل الكيمياء الهيستولوجية المناعية الذي يوضح الديستروفين في ‎MAX‏ العضلة اليسرى رباعية الرؤوس للفأر والذي يستحثه ‎PPMO i PMO (PMO4225)‏ (001/04225). يوفر الشكل 112 صورة توضيحية لتحليل بقعة ويسترن يقيس بروتين ديستروفين في قلب ‎Olid‏ ‏* معالج ب ‎PMO (PMO4225)‏ أو ‎PPMO (PPMO4225)‏ بجرعات مختلفة: 40 مجم/كجم؛ 80 مجم/كجم؛ و120 مجم/كجم. ‎jig‏ الشكل 12[ب صورة توضيحية لتحليل بقعة وبسترن ‎Western Blot analysis‏ يقيس بروتين ديستروفين فى ‎ls‏ فثران ‎mdx‏ معالج 2 ‎PPMO (PPMO4225)‏ بجرعات مختلفة: 40 مجم/كجم « 80 مجم/كجم؛ و120 مجم/كجم . يوفر الشكل 13 مخطط أعمدة يصف النسبة المئوية للديستروفين من النوع غير المعالج والذي يستحثه ‎PMO (PMO4225)‏ أو ‎PPMO (PPMO4225)‏ في قلب ‎MAX ol‏ حسب تحديد
— 5 1 — تحليل بفعة وبسترن بعد 30 ‎Lg‏ من الحقن بجرعات مختلفة: 40 مجم/كجم « 80 مجم/كجم ¢ و120 مجم/كجم. يوفر الشكل 114 صورة توضيحية لتحليل بقعة ويسترن يقيس بروتين ديستروفين في الحجاب الحاجز لفئران ‎mdx‏ معالج ب ‎PMO (PMO4225)‏ بجرعات مختلفة 40 مجم/كجم؛ 80 مجم/كجم؛ و120 مجم/كجم. يوفر الشكل 14[ب صورة توضيحية لتحليل بقعة ويسترن يقيس بروتين ديستروفين في الحجاب الحاجز لفئران ‎mdx‏ معالج ب ‎PPMO (PPMO4225)‏ بجرعات مختلفة 40 مجم/كجم؛ 80 مجم/كجم؛ و120 مجم/كجم. يوفر الشكل 15 مخطط أعمدة يصف النسبة المئوية للديستروفين من النوع غير المعالج والذي 0 يستحثه ‎PMO (PMO4225)‏ أو ‎PPMO (PPMO4225)‏ في الحجاب الحاجز لفئران ‎mdx‏ ‏حسب تحديد تحليل بقعة ويسترن بعد 30 ‎gs‏ من الحقن بجرعات مختلفة: 40 مجم/كجم» 80 مجم/كجم؛ و120 مجم/كجم. يوفر الشكل 116 صورة توضيحية لتحليل بقعة وبسترن يقيس بروتين ديستروفين في العضلة رباعية الرؤوس لفئران *«010 معالج ب ‎PPMO (PPMO4225)‏ بجرعات مختلفة: 40 مجم/كجم؛ 80 5 1 مجم/كجم؛ و20 1 مجم/كجم ‎٠‏ ‏يوفر الشكل ‎G16‏ صورة توضيحية لتحليل بقعة ويسترن يقيس بروتين ديستروفين في العضلة ‎del‏ الرؤوس تفئران ‎mdx‏ معالج 2 ‎PMO (PMO4225)‏ بجرعات مختلفة: 40 مجم/كجم؛ 80 مجم/كجم؛ و20 1 مجم/كجم ‎٠‏ ‏يوفر الشكل 17 مخطط أعمدة يصف النسبة المئوية للديستروفين من النوع غير المعالج والذي 0 يستحثه ‎PMO (PMO4225)‏ أو ‎PPMO (PPMO4225)‏ في العضلة رباعية الرؤوس لفئران ‎M dx‏ حسب تحديد تحليل بفعة ويسترن يعد 0 3 ‎Lg‏ من الحقن بجرعات مختلفة: 40 مجم/كجم 80 مجم/كجم؛ و20 1 مجم/كجم ‎٠‏ ‏يوفر الشكل 18 دورات الإقران التي تجريها الطريقة ب لتخليق ‎PMO‏
يوفر الشكل 19 تحليل الكيمياء الهيستولوجية المناعية الذي يوضح الديستروفين ولامينين في الحجاب الحاجز وقلب فأر ‎mdx‏ والذي يستحثه ‎PPMO (PPMO4225)‏ مقارنة بمحلول ملحي مركز في ‎Oly mdX (lid‏ غير معالجة. يوفر الشكل 20 مخطط أعمدة للنسبة المئوية لتخطي الإكسون 53 في نبيبات بشرية صحيحة بواسطة ‎PMO‏ رقم 1 ‎PPMO‏ رقم 1 بتركيزات متنوعة بعد 96 ساعة من العلاج؛ حسب قياس
.+ ‏تشير أعمدة الأخطاء إلى متوسط الانحراف المعياري‎ RT-PCR ‏الوصف التفصيلي:‎ ‏تتعلق التجسيدات الخاصة بالكشف الحالي بصفة عامة بمترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ‎ ‏على تخطي الإكسون في جين‎ all ‏محسنة؛ وطرق لاستخدامها؛ تم تصميمها بشكل خاص‎
0 الديستروفين البشري. يلعب الديستروفين دورًا حيويًا في وظيفة العضلات؛ وبتم تمييز الأمراض المتنوعة ذات الصلة بالعضلات بواسطة صور مطفرة من هذا الجين. ومن ثَم؛ في تجسيدات معينة؛ تحث مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ المحسنة الموصوفة هنا على تخطي الإكسون في صور مطفرة من جين الديستروفين البشري؛ مثل جينات الديستروفين المطفرة الموجودة في ‎ART Jaa‏ لدوشين ‎ART Jilly (DMD) Duchenne muscular dystrophy‏
5 لبيكر ‎.(BMD) Becker muscular dystrophy‏ بسبب أحداث جدل ‎MRNA‏ الشاذة الناتجة بواسطة الطفرات؛ تعبر جينات الديستروفين البشري المطفرة هذه إما عن بروتين ديستروفين معيب أو لا تعبر عن ديستروفين قابل للقياس على ‎Als (DULY‏ تؤدي إلى صور متنوعة من ‎JA‏ العَضَلِي. لعلاج هذه الحالة؛ تهجن مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بالكشف الحالي مناطق مختارة من ‎MRNA‏ معالج
مسبقًا خاص بجين ديستروفين بشري مطفر؛ تحث على تخطي الإكسون والجدل التفاضلي في ‎MRNA‏ الديستروفين المجدول على نحو شاذ؛ وبالتالي تسمح لخلايا العضلات بإنتاج نسخة ‎MRNA‏ تقوم بتشفير بروتين ديستروفين وظيفي. في تجسيدات معينة؛ ليس بالضرورة أن يكون بروتين الديستروفين الناتج هو الصورة "غير المعالجة' من الديستروفين؛ ولكن بدلاً من ذلك يكون ‎Ble‏ عن صورة مقتطعة؛ ولكنها وظيفية من الديستروفين.
— 7 1 — عن طريق زيادة مستويات بروتين الديستروفين الوظيفى فى خلايا العضلات؛ تكون هذه التجسيدات والتجسيدات ذات الصلة مفيدة في الوقاية من وعلاج ‎lanl JAY‏ بخاصة تلك الصور من ‎Jas‏ الْعَضَلِىْ؛ متل ‎«BM Dg, DMD‏ التى يتم تمييزها بواسطة التعبير ‎el!‏ عن بروتينات الديستروفين المعيبة بسبب جدل ‎MRNA‏ الشاذ. توفر مترافقات الأوليجومرات ‎doc gill‏ مضادة لاتجاه النسخ الموصوفة هنا ‎Jeu‏ إضافي استهداف نوعي لديستروفين -إكسون محسن عن
الأوليجومرات الأخرى؛ وبالتالي توفر فوائد مهمة وعملية مقارنة بالطرق البديلة لعلاج الصور ذات الصلة من ‎(BA‏ العَضَلِئُ. من ثَم» يتعلق الكشف بمترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ تشتمل على: أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ يبلغ طوله 25 وحدة فرعية يمكنه ربط مستهدف محدد لحث تخطي
0 الإكسونات في جين الديستروفين البشري؛ حيث يشتمل الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ على متوالية من القواعد متممة لمنطقة الإكسون 53 المستهدفة للديستروفين ‎IY MRNA‏ الذي يُطلق عليه موقع تلدين؛ و ببتيد مخترق للخلية ‎(CPP) cell-penetrating peptide‏ مترافق مع الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ بواسطة شق رابط.
5 في بعض التجسيدات»؛ يكون موقع التلدين ‎Ble‏ عن ‎H53A(+36+60)‏ ‏في بعض التجسيدات؛ يتم ربط قواعد الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ ببنيات حلقات مورفولينو فوسفور تقوم بريط إنتروجين مورفولينو لبنية حلقة واحدة بكريون خارج الحلقة 5 "لبنية حلقة متجاورة. في تجسيدات معينة؛ يكون الببتيد المخترق للخلية ‎Hlae‏ عن ‎RO‏ ويكون الشق الرابط
‎Ble 0‏ عن جليسين. في بعض التجسيدات؛ يشتمل الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ على متوالية قواعد يُطلق عليها المتوالية رقم:1؛ حيث تكون كل قاعدة ثايمين (1) اختياربًا ‎Ble‏ عن قاعدة يوراسيل (لا). ما لم يتم التعريف ‎Lay‏ يُخالف ذلك؛ يكون لكل المصطلحات التقنية والعلمية المستخدمة هنا نفس المعنى كما يُدرك على نحو شائع هؤلاء من ذوي المهارة العادية في المجال الذي ينتمي إليه
الكشف. بالرغم من أنه يمكن استخدام أية طرق ومواد مشابهة أو مكافئة لتلك الموصوفة هنا في تطبيق أو اختبار الكشف الحالي؛ يتم وصف الطرق والمواد المفضلة. للأغراض الخاصة بالكشف الحالي؛ يتم فيما يلي تعريف المصطلحات التالية. 1- التعريفات يُعنى ب "حوالي" كمية؛ مستوى؛ قيمة؛ عدد؛ ‎«ISH‏ نسبة مئوية؛ بُعد؛ ‎lie cana‏ وزن أو طول يتنوع بمقدار يصل إلى 30 25 20 15 10 9 8 7 6»؛ 5 4 3 2 أو %1 بالسنبة لكمية مرجعية؛ مستوى؛ قيمة؛ عدد؛ تكرار؛ نسبة متوية؛ ‎cad‏ حجم؛ ‎lake‏ وزن أو طول. يشير المصطلح ‎alkyl JS‏ على النحو المستخدم بهذه الوثيقة؛ ما لم ‎HE‏ غير ذلك؛ إلى هيدروكربون مشبعة مستقيمة أو متفرعة. في تجسيدات ‎cline‏ تكون مجموعة الألكيل ‎Ble alkyl‏ 0 عن هيدروكربون أولية » أو ثانوية؛ أو ثالقية ‎primary, secondary, or tertiary‏ ‎hydrocarbon‏ في تجسيدات معينة؛ تتضمن مجموعة الألكيل واحدة إلى عشر ذرات كريون ؛ أي؛ 1© إلى 610 ألكيل. في تجسيدات معينة؛ تتضمن مجموعة الألكيل واحدة إلى ست ذرات كربون؛ أي 1© إلى 66 ألكيل. في تجسيدات معينة؛ يتم اختيار مجموعة الألكيل من المجموعة المشتملة على ميقل ‎«CH2CF3 (i «CF2CI 07012 0013 073 « methyl‏ 5 0720+73؛ ‎propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, t-butyl, pentyl,‏ ‎isopentyl, neopentyl, hexyl, isohexyl, 3—-methylpentyl, 2,2-dimethylbutyl,‏ ‎.and 2,3-dimethylbutyl‏ يتضمن المصطلح مجموعات ألكيل بها أو ليس بها استبدال؛ بما في ذلك مجموعات ألكيل معالجة بالهالوجين ‎halogenated alkyl‏ . في تجسيدات معينة؛ تكون مجموعة الألكيل ‎Ble‏ عن مجموعة ألكيل معالجة بالفلور ‎fluorinated alkyl‏ . يتم اختيار 0 الأمثلة غير الحصرية للشقوق التي يتم استبدال مجموعة الألكيل بها من المجموعة المشتملة على هالوجين ‎halogen‏ « فلورو ‎fluoro‏ ؛ كلورو ‎ChlOro‏ ؛ برومو 020070 » أو يودو 1000 هيدروكسيل ‎hydroxyl‏ ؛ أمينو ‎amino‏ ؛ ألكيل أمينو ‎alkylamino‏ » أريل أمينو ‎arylamino‏ ¢ ألكوكسي ‎alkoxy‏ ؛ أريل أوكسي ‎@ryloxy‏ ؛ نيترو ‎Nitro‏ ؛ سيانو ‎CYANO‏ ؛ حمض سلفونيك ‎sulfonic acid‏ ؛ سلفات رء؛ حمض فوسفوريك ‎phosphonic acid‏ ؛ فوسفات ‎phosphate‏ « 5 أو فوسفونات ‎phosphonate‏ ؛ محميةً كانت أو غير محمية حسب الضرورة؛ وحسبما هو
معروف لأولئك المتمرسين في المجال؛ على سبيل المثال؛ حسبما ورد في ‎Greene, et al.,‏ ‎Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second‏ ‎«Edition, 1991‏ والتي أدرجت ضمن المراجع . يُقصد أن يتضمن ‎Lad‏ لتخطي الإكسون 53" كما يُستخدم هنا ‎Led‏ يتعلق بخاضع للعلاج أو مريض الخاضعين للعلاج والمرضى الذي لديهم واحدة أو أكثر من الطفرات في جين الديستروفين الذي؛ بدون تخطي الإكسون 53 الخاص بديستروفين ‎MRNA‏ الأولي؛ يتسبب في أن يكون إطار القراءة خارج الإطار وبالتالي مقاطعة التحوّر الوراثي ل ‎MRNA‏ الأولي مما يؤدي إلى عدم قدرة الخاضع للعلاج أو المربيض على إنتاج الديستروفين وظيفي أوشبه وظيفي. تتضمن الأمثلة على الطفرات في جين الديستروفين الذي يكون مُعرّضًا لتخطي الإكسون 53؛ على سبيل المثال» على سببيل المثال ؛ حذف: إكسونات 42 إلى 52؛ إكسونات 45 إلى 52؛ إكسونات 47 إلى ‎S52‏ ‏إكسونات 48 إلى 52؛ إكسونات 49 إلى 52؛ إكسونات 50 إلى 52؛ أو إكسون 52. يمكن لذي المهارة في المجال تحديد ما إذا كان مريض لديه طفرة في جين الديستروفين المُعرّضًا لتخطي الإكسونالإكسونات (انظر؛ على سبيل المثالء ‎Aartsma-Rus et al. (2009) Hum‏ 30:293-299 .أقاناا؛ 2009 ‎¢«Gurvich et al., Hum Mutat.‏ 633-640 (30)4؛ ‎.(-and Fletcher et al. (2010) Molecular Therapy 18(6) 1218-1223 5‏ يشير المصطلح "أوليجومر” على النحو المستخدم بهذه الوثيقة إلى متوالية وحدات فرعية متصلة بواسطة وصلات وحدات فرعية متداخلة. في أمثلة معينة؛ يتم استخدام المصطلح "أوليجومر" للإشارة إلى "أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ”. ‎Lad‏ يتعلق ب "أوليجومرات مضادة لاتجاه ‎gall‏ ‏تتألف كل وحدة فرعية من: (1) سكر ريبوز أو مشتق منه؛ و(2) قاعدة نووية مرتبطة به؛ بحيث 0 يُكوْن ترتيب الأشطار المتزاوجة مع القاعدة متوالية قاعدة تكون متممة لمتوالية مستهدفة في حمض نووي (نمطيًا ‎(RNA‏ بواسطة إزدواج القاعدة ا81500-60110//ا؛ لتكوين مضاعف متغاير من حمض نووي :أوليجومر داخل المتوالية المستهدفة. بشرط أن تكون الوحدة الفرعية أو وصلات وحدات فرعية متداخلة أو كلاهما لا يحدث بشكل طبيعي. في تجسيدات معينة؛ يكون الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ هو ‎.PMO‏ في تجسيدات أخرى؛ يكون الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ هو 5 0-2 -ميثيل فوسفورو ثيوات. في تجسيدات أخرى؛ يكون الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ
الخاص بالكشف هو حمض نووي لببتيد ‎(PNA) peptide nucleic acid‏ حمض نووي مقفل ‎«(LNA) locked nucleic acid‏ أو حمض نووي ‎(BNA) bridged nucleic acid juss‏ مثل حمض نووي مجسر ب 4:0-2'-0 -إيثيلين ‎2'-0,4'-C-ethylene-bridged (ENA)‏ 0 001616 . تم وصف تجسيدات نموذجية إضافية.
يشير المصطلحان "مكمل" و'تكامل" إلى اثنين أو أكثر من الأوليجومرات (أي يشتمل كل أوليجومر على متوالية قاعدة نووية) يرتبطان معًا ‎Bg‏ لقواعد إزدواج كربك-واتسون ‎\Watson—Crick‏ على سبيل المثال» تكون متوالية قاعدة نووية ‎T-G-A"‏ )3°05"(" متممة لمتوالية قاعدة نووية: 0-1)-م/ ‎(C5 703)‏ قد تكون "التكامل الجزئي” التي يتم فيها مطابقة أقل من جميع قواعد نووية متوالية قاعدة نووية بعينها مع متوالية قاعدة نووية الأخرى وفنا لقوانين إزدواج القواعد. على سبيل المثال؛
0 في بعض التجسيدات؛ قد تبلغ التكامل بين متوالية قاعدة نووية ما ومتوالية قاعدة نووية أخرى حوالي 9670؛ حوالي 9675؛ حوالي 9680؛ حوالي 9685؛ حوالي 9690 أو حوالي 9695. أو قد يكون هناك تكامل "كامل" أو "تام" (96100) بين متوالية قاعدة نووية ومتوالية قاعدة نووية أخرى في مثال آخر. يكون لدرجة التكامل بين متواليات قواعد النووية تأثيرات كبيرة على فاعلية وقوة التهجين بين المتواليات.
5 يتم استخدام المصطلحين 'مقدار فعال" و 'مقدار فعال علاجيًا" إلى في هذه الوثيقة بدلا من بعضهما البعض للإشارة إلى مقدار من مركب علاجي؛ مثل أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ؛ مُعطى إلى خاضع للعلاج ثديي» إما في صورة جرعة فردية أو كجزء من سلسلة من الجرعات؛ تكون فعالة لإنتاج تأثير علاجي مطلوب. لأوليجومر مضاد لاتجاه النسخ؛ يتم تحقيق هذا التأثير نمطيًا عن طريق تثبيط التحوّر الوراثي أو
0 معالجة الجدل الطبيعي لمتوالية هدف مختارة؛ أو إنتاج مقدار ذي مغزى إكلينيكيًا من الديستروفين (أهمية إحصائية). في بعض التجسيدات؛ يبلغ المقدار الفعال على الأقل 10 مجم/كجم أو 20 مجم/كجم من تركيبة متضمنة أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ لفترة زمنية لعلاج الخاضع للعلاج. في بعض التجسيدات؛ يبلغ مقدار فعال على الأقل 20 مجم/كجم من تركيبة متضمنة أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ
لزيادة عدد ألياف الديستروفين الإيجابية في خاضع للعلاج وصولاً إلى على الأقل 9620 من الطبيعي. في تجسيدات معينة؛ يبلغ مقدار فعال على الأقل 10 مجم/كجم أو 20 مجم/كجم من تركيبة متضمنة أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ لتثبيت؛ الحفاظ على؛ أو تحسين المسافة ‎Hos‏ على الأقدام من عيب 9620؛ على سبيل المثال في 6 410/1 في مربض؛, بالنسبة لنظير مُعافى. في تجسيدات متنوعة؛ يبلغ مقدار فعال على الأقل من حوالي 10 مجم/كجم/حوالي 30 مجم/كجم؛ على الأقل 20 مجم/كجم إلى حوالي 30 مجم/كجم؛ من حوالي 25 مجم/كجم إلى حوالي 30 مجم/كجم؛ أو من حوالي 30 مجم/كجم إلى حوالي 50 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يبلغ مقدار فعال حوالي 10 مجم/كجم/حوالي 20 مجم/كجم؛ حوالي 30 مجم/كجم أو حوالي 50 مجم/كجم. في جانب آخرء يبلغ المقدار الفعال على ‎Jom SHI‏ 10 مجم/كجم؛ حوالي 20
0 _ مجم/كجم؛ حوالي 25 مجم/كجم؛ حوالي 30 مجم/كجم؛ أو من حوالي 30 مجم/كجم إلى حوالي مجم/كجم؛ لمدة على الأقل 24 أسبوع؛ على الأقل 36 أسبوع؛ أو على الأقل 48 أسبوع؛ وبالتالي لزيادة عدد ألياف الديستروفين الإيجابية في خاضع للعلاج وصولاً إلى على الأقل 9620؛ حوالي 9630؛ حوالي %40 حوالي 9650؛ حوالي 9660؛ حوالي 9670؛ حوالي 9680؛ حوالي 0 حوالي 1695 من الطبيعي؛ وتثبيت أو تحسين المسافة سيرًا على الأقدام من عيب 9620؛
5 على سبيل المثال في 6 10/1 في المريض بالنسبة لنظير مُعافى. في بعض التجسيدات؛ يزيد العلاج من عدد ألياف الديستروفين الإيجابية وصولاً إلى 9660-20؛ أو 9650-30 من الطبيعي في المريض. تشير ُعزز" أو ' تعزيز» أو "يزيد أو 'زيادة"؛ أو 'يحفز' أو ‎"in‏ بصفة عامة إلى قدرة واحد أو أكثر من مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ أو التركيبات الصيدلية على إنتاج أو
0 التسبب في استجابة فسيولوجية أكبر (أي» التأثيرات التالية) في خلية أو خاضع للعلاج؛ مقارنة بالاستجابة الناتجة بواسطة إما عدم وجود مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ أو مركب مقارنة. قد تتضمن استجابة فسيولوجية أكبر ‎Baad‏ متزايدًا عن صورة وظيفية من بروتين ديستروفين» أو نشاط بيولوجي ذي علاقة بالديستروفين متزايد في النسيج العضلي؛ من بين الاستجابات الأخرى الووضحة من الاستيعاب في المجال والوصف الوارد هنا. يمكن ‎Load‏ قياس وظيفة العضلات
5 المتزايدة؛ ‎Lo‏ في ذلك الزيادات أو التحسينات في وظيفة العضلات بمقدار حوالي 961 962؛
3 94 دكت 6ك لق ؤفك وى 10ت 911 912 313 9014 9615 6+ للف قلت 19ت %20 %25 %30 935 940 45م %50 دذدمك 0» 9665» 9670 9675 9680 9685 9690 9695؛ أو 96100. يمكن ‎Und‏ قياس النسبة المئوية الخاصة بالألياف العضلية التي تعبر عن ديستروفين وظيفي؛ بما في ذلك التعبير المتزايد عن الديستروفين بنسبة حوالي 961» %2 % 9615 9616 9617 9618 9619 %20 %25 %30 %35 %40 %45 %50 %55 960 965 970 93675 0 %85« 9690 9695؛ أو 96100 من الألياف الطبيعية. على سبيل المثال؛ لقد تم إظهار أنه يمكن أن يحدث تحسين بنسبة حوالي 9640 من وظيفة العضلات إذا كان 1630-25 من الألياف يعبر عن الديستروفين (انظرء؛ على سبيل ‎DelloRusso et al, Proc Natl «Jill‏ ‎(Acad Sci USA 99: 12979-12984, 2002 0‏ يعتبر مقدار 'متزايد' أو 'معزز" نمطيًا هو مقدار 'مؤثر إحصائيًا"؛ وقد يتضمن ‎sl)‏ تبلغ 1مك 02 3 3 4 ¢5 6 7 8 9 10 5 0 30 40 50 ضعف أو أكثر (على سبيل ‎«Jal‏ 500؛ 1000 ضعف) ‎Le)‏ في ذلك كل الأعداد الصحيحة والعلامات العشرية فيما بين وأعلى من 1)؛ على سبيل المثال؛ 1,5؛ 6 ¢1,7 1,8» إلى غير ذلك) المقدار المنتج عن طريق عدم وجود مترافق أوليجومر مضاد 5 الاتجاه النسخ (عدم وجود عامل) أو مركب مقارنة. كما يُستخدم ‎cls‏ يشير المصطلحان 'وظيفة' و'وظيفي" وما شابه إلى وظيفة بيولوجية؛ إنزيمية؛ أو علاجية. يشير بروتين ديستروفين 'وظيفي" بصفة ‎dele‏ إلى بروتين ديستروفين له نشاط بيولوجي كافي لتقليل التحلل المتواصل للنسيج العضلي الذي يكون بخلاف ذلك مميزًا ‎cg baal Al‏ نمطيًا 0 مقارنة بالصورة المتغيرة أو "المعيبة' من بروتين ديستروفين الذي يكون موجودًا في خاضعين للعلاج بعينهم يعانون من ‎DMD‏ أو ‎.BMD‏ في تجسيدات معينة؛ قد يحتوي بروتين ديستروفين وظيفي على حوالي 9610» %20 %30 %40 9650 9660 9670 9680 9690؛ أو 0 (متضمنة كل الأعداد الصحيحة فيما بينها) من النشاط البيولوجي المعملي أو في جسم الكائن الحي الخاص بالديستروفين من النوع غير المعالج؛ كما هو مُقاس ‎By‏ للتقنيات الروتينية 5 في المجال. كمثال واحد؛ يمكن قياس النشاط ذي الصلة بالديستروفين في مزارع العضلات في
المعمل ‎Bay‏ لحجم ‎CE‏ عَضَلِي» تنظيم (أو عدم انتظام) ‎AE‏ الْعَصَليَّة» نشاط القابلية للانقباض؛ والتجميع الفوري لمستقبلات أسيتيل كولين (انظرء على سبيل ‎Brown et al., Journal (Jul)‏ ‎(of Cell Science. 112:209-216, 1999‏ تعتبر أيضًا النماذج الحيوانية موارد قيمة ‎dud‏ الإمراض الخاص بمرض؛ وتوفر وسيلة لاختبار النشاط ذي الصلة بالديستروفين. يتمثل اثنان من النماذج الحيوانية الأوسع استخدامًا للبحث الخاص ب ‎DMD‏ في ‎ial‏ العَضَلِي لفأر 7 والحَثل العَضَلِي لكلب الصيد الذهبي ‎(GRMD)‏ كلاهما يكون سالبًا للديستروفين (انظرء على سبيل ‎.(Collins & Morgan, Int J Exp Pathol 84: 165-172, 2003 «Jal‏ يمكن استخدام هذه النماذج الحيوانية وغيرها لقياس النشاط الوظيفي لبروتينات الديستروفين المتنوعة. يتم تضمين صور مقتطعة من الديستروفين؛ مثل تلك الصور التي يتم إنتاجها بعد إعطاء 0 مركبات معينة من مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ المتخطية للإكسون الخاصة بالكشف الحالي. يشير المصطلحان "عدم التوافق” أو "حالات عدم التوافق" إلى واحدة أو أكثر من قاعدة نووية (سواء المجاورة أو المنفصلة) في متوالية قاعدة نووية أوليجومر غير متطابقة مع ‎MRNA‏ أولي مستهدف ‎Gy‏ لأحكام ازدواج القواعد. بينما تكون التتامّية المثالية مطلوية في ‎ele)‏ يمكن أن 5 يتضمن بعض التجسيدات واحدة أو أكثر من ولكن يُفضل 6؛ 5؛ 4؛ 3؛ 2؛ أو 1 من حالات عدم التوافق ‎Lad‏ يتعلق ب ‎MRNA‏ الأولي المستهدف. يتم تضمين التغييرات عند أي موقع داخل الأوليجومر. في تجسيدات معينة؛ تتضمن مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بالكشف التغييرات في متوالية قاعدة نووية بالقرب من تغييرات النهايات في الجزء الداخلي؛ ‎Os‏ ‏وجدت تكون نمطيًا واقعة ضمن محوالي 6؛ 5؛ 4؛ 3؛ 2؛ أو 1 من الوحدات الفرعية عند الطرف 0 5 و/أو الطرف 3'. تشير المصطلحات ‎ MoOrpholino gigs) ed‏ "مورقوليتو أوليجومر ‎morpholino oligomer‏ ‎"PMO" 5 7‏ إلى أوليجومر من فوسفورو داي أميدات مورفولينو ‎phosphorodiamidate‏ ‎morpholino oligomer‏ بالصيغة البنائية العامة التالية:
— 4 2 — ‎Tr‏ . ‎N‏ ‎H,C_ |‏ ‎NTP=0‏ ‎H,C 0‏ ‎Xr"‏ ‎N‏ ‎WS‏ يوصف فى الشكل 2 من ‎Summerton, J., et al., Antisense & Nucleic Acid‏ ‎Drug Development, 7: 187-195 (1997)‏ يُقصد أن تُغطي مركبات المورفولينو كما يوصف هنا كل الأيزومرات الفراغية ‎stereoisomers‏ والمماثلات الكيميائية ‎tautomers‏ ‏5 الخاصة بالصيغة البنائية العامة السابقة. يتم ذكر السمات المميزة للتخليق» الصيغ البناثية؛ ‎dolly‏ ‏الخاصة بالأوليجومرات من المورفولينو بالتفصيل في البراءات الأمريكية أرقام 5,217,466 3,142,047 5,034,506 ¢5,166,315 5,521,063« 5,506,337 8,076,476< و8,299,206؛ التي يتم تضمينها كلها هنا كمراجع. في تجسيدات معينة؛ يتم ترافق مورفولينو عند الطرف 5 ”أو الطرف 3 "من الأوليجومر مع شطر 0 لذنبي" لزيادة ثباته و/أو قابليته للذويان. تتضمن الأذناب النموذجية: 0 0 ‎NH, HO 3‏ 0 ‎Y‏ ‎HaC‏ ‎N‏ ) اه ‎O==P—"N(CHs)‏ ‎OH | | 3/2‏ 0 صورة ‎oY‏ ¢ صورة ‎oY‏ ¢ وصورة . من بين الأشطار الذيلية النموذجية السابقة؛ يشير ‎“TEG”‏ أو "63 إلى الشطر الذيلى التالى:
— 2 5 — hr
HO 3
N
0
A
} صورة ‎oY‏ . من بين الأشطار الذيلية النموذجية السابقة؛ يشير ‎“CT‏ الشطر الذيلى التالى: 0 NH,
H3C J
Te 0 . oY ‏صورة‎ ‏على النحو المستخدم بهذه الوثيقة؛ يتم استخدام المصطلحين '6-76-" و80/-6-46-" بدلا‎
Gy ‏.من بعضهما البعض للإشارة إلى شطر ببتيد مترافق مع أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ‎ 5 ‏بواسطة رابطة‎ “RE” ‏بنائية مترافقة مع‎ Sang ‏يمثل جليسين‎ “CG” ‏للكشف. في تجسيدات متنوعة؛‎ ‏تعني ست‎ RE” ‏بواسطة رابطة أميد بحيث‎ lie ‏يمثل وحدة أرجينين بنائية مترافقة‎ “RUS cad ‏بواسطة روابط أميد. قد يكون لدى وحدات الأرجينين البنائية‎ ae ‏وحدات أرجينين بنائية مترافقة‎ (6) ‏عن وحدات ا-‎ Ble ‏تشكيلات فراغية؛ على سبيل المثال؛ قد تكون وحدات الأرجينين البنائية‎ ‏وحدات 00-أرجينين بنائية؛ أو خليط من وحدات 00- وا- أرجينين بنائية. في‎ ily ‏أرجينين‎ 0 ‏عن مترافق مع حلقة إنتروجين‎ Ble "-6-/46-/80' ‏تجسيدات معينة؛ يكون '6-146-" أو‎ lady ‏لاتجاه النسخ‎ alias PMO ‏مورفولين لوحدة المورفولينو الفرعية عند الطرف 3" لأوليجومر‎ ‏عن مترافق مع‎ Ble '“G-RE-AC' ‏للكشف. في بعض التجسيدات»؛ يكون '6-46-" أو‎ ‏أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ عند الطرف 3” وفقًا للكشف وله الصيغة التالية:‎
— 6 2 — ‎he Tk Nye Nye‏ ‎I NH NH NH‏ ‎J J‏ 0 = 0 ‎H = H 3 H 38‏ ‎N A N 2 N :‏ ‎N‏ ‏0 0 0 ‎HN HN‏ "0 صورة ‎NH Se a‏ )أو ‎Nye Ne ye‏ ‎I NH NH NH‏ ‎J J‏ 0 = 0 ‎H 3 H 3 H °F‏ ‎N 7 N 2 N 2‏ ‎N‏ ‏ا ‎YY‏ ‎.6HC1‏ ‎HN HN HN‏ ‎A H .‏ لاوا ‎HN A H HN Aw‏ صورة . يتم استخدام المصطلحات "قاعدة نووية " ‎(NU) nucleobase‏ 'شطر ازدواج قواعد ‎base‏ ‎pairing moiety‏ ' أو 'قاعدة” بدلا من بعضها البعض للإشارة إلى قاعدة بيورين ‎purine‏ أو بيريميدين ‎pyrimidine‏ موجودة فى ‎DNA‏ أو ‎RNA‏ طبيعى الحدوث؛ أو ‎"Lal‏ على سبيل المثال» يوراسيل ‎uracil‏ ¢ ثايمين ‎thymine‏ ؛ أدينين ‎adenine‏ « سيتوزين ‎cytosine‏ « وجوانين ‎guanine‏ ؛ وكذلك نظائر من مركبات البيورين والبيريميدين هذه طبيعية الحدوث. يمكن أن تضفى هذه النظائر خواصًا محسنة؛ مثل ألفة الارتباط بالأوليجومر. تتضمن النظائر النموذجية هيبوكسانثين ‎hypoxanthine‏ (مكون قاعدة إينوزين)؛ 2 6-داي أمينو بيورين ‎2,6—diaminopurine 0‏ ؛ 5-ميثيل سيتوزين ‎5-methyl cytosine‏ ؛ مركبات بيربميدين معدلة ب 05-بروبينيل؛ 10-(9- (أمينو إيثوكسي)فينوكسازبنيل) ‎C5-propynyl-modified‏ ‏5 (قامطة 6) وما شابه. تتضمن الأمثلة الإضافية أشطار إزدواج القواعد؛ على سبيل المثال لا الحصرء يوراسيل؛ ثايمين» أدينين» سيتوزين» جوانين وهيبوكسانثين (إينوزين) بها مجموعات أمينو مناظرة محمية بمجموعات 5 أسيل حامية؛ نظائر 2-فلورو يوراسيل» 2-فلورو سيتوزين» 5- برومو يوراسيل» 5-يودو يوراسيل؛
2( 6-داي ‎sual‏ بيورين» ‎Bl‏ سيتوزين» بيربميدين مثل أشباه أيزو سيتوزين وأشباه يوراسيل وقواعد أنوية معدلة ‎Jie (AT‏ مركبات بيورين بها استبدال عند الموضع 8؛ ‎(oil)‏ أو هيبوكسانثين (يكون الأخيران منتجي تحلل طبيعيين). تم ‎Ladd‏ ذكر القواعد النووية المعدلة التي ورد الكشف فيها: ‎Limbach et al. Nucleic Acids ¢Chiu and Rana, RNA, 2003, 9, 1034-1048‏ ‎¢Research, 1994, 22, 2183-2196 5‏ و ‎Revankar and Rao, Comprehensive‏ ‎«Natural Products Chemistry, vol. 7, 313‏ والتي أدرجت محتوياتها ضمن مراجع هذه الوثيقة. تتضمن الأمثلة الإضافية لأشطار إزدواج القواعد؛ على سبيل المثال لا الحصرء قواعد نووية ممتدة الحجم تم فيها إضافة واحدة أو أكثر من حلقات البنزين. وقد ورد وصف بهذه الوثيقة لاستبدالات 0 قواعد الأحماض النووية في: كتالوج ‎¢tGlen Research (www.glenresearch.com)‏ ‎Kool, ET, Acc. ¢Krueger AT et al., Acc. Chem. Res., 2007, 40, 141-150‏ ‎Benner S.A., et al., Nat. Rev. Genet., «Chem. Res., 2002, 35, 936-943‏ ‎Romesberg, F.E., et al., Curr. Opin. Chem. Biol., ¢2005, 6, 553-543‏ ‎Hirao, ٠٠, Curr. Opin. Chem. Biol., 2006, 10, 622-4 ¢2003, 7, 723-733‏ $627 والتي أدرجت محتوياتها ضمن مراجع هذه الوثيقة؛ والتي تعد مفيدةً في مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ. من بين أمثلة القواعد النووية ممتدة الحجم تلك الموضحة ‎coli‏ وكذلك صورها الصنوية.
[087] [086] "Hz ار ال بح 0 0 ‏ا‎ ]085[
NH Oy
Lr ‏ضع‎
— 8 2 — ‎bi NH:‏ ]090[ ‎N SN SN‏ مل ‎A‏ ‎N [088]‏ 1 ‎N™ NH la, [089]‏ ‎N‏ ‏الم ‏0 0 1 ‎HN” “NH ao HN NH‏ ‎Sa‏ 77 ]091[ ]092[ ® ]093[ ‎bd‏ ]095[ ]096[ ‎TN‏ ‏7 ‏]094[ ‏تعنى العبارتان "الإعطاء بالحقن غير المعوي ‎aed 3" parenteral administration‏ بطريق الحقن غير المعوي ‎administered parenterally‏ " كما يُستخدم هنا أنماط الإعطاء بخلاف ‎J‏ لإعطاء المعوي ‎(ra sally‏ عادة بالحقن وتتضمنا دون ‎RINE‏ الحقن والتسريب داخل الوريد ‎intravenous‏ ¢ فى العضل ‎Jala » intramuscular‏ الشريان ‎intraarterial‏ ¢ داخل الغمد ‎intrathecal 5‏ ¢ داخل ‎Jabs ¢ intracapsular aad)‏ الحجاج ‎intraorbital‏ ؛ ‎Jala‏ القلب ‎intracardiac‏ ¢ داخل الأدمة ‎intradermal‏ » داخل الغشاء البريتونىي ‎intraperitoneal‏ « عبر الرغامى ‎transtracheal‏ ؛ تحت الجلد ‎subcutaneous‏ ؛ تحت البشرة ‎subcuticular‏ « داخل المفصل ‎intraarticular‏ ؛ تحت المحفظة ‎subcapsular‏ ؛ تحت العنكبوتية ‎subarachnoid‏ « داخل ‎stall‏ القْقرية ‎intrasternal injection‏ وداخل ‎infusion all‏ .
hg ‏متصلة من‎ (IV) ‏للإيضاح؛ تعد البنيات وفقًا للكشف التي تتضمن؛ على سبيل المثال؛ الصيغة‎ ‏إلى 73« ولسهولة وصف البنية الكلية في صورة محكمة؛ تم تضمين عدة فواصل يُطلق عليها‎ 5 ‏"الفاصل أ 'الفاصل ب"؛ و"الفاصل ج". على النحو الذي يفهمهه ذو المهارة في المجال؛ على‎ ‏لشرح البنية عند هذه النقاط. يفهم ذو المهارة أن‎ Lan ‏سبيل المثال» توضح كل إشارة "الفاصل أ"‎ ‏نفس الأمر ينطبق على كل مثال في "الفاصل ب" و'"الفاصل ج" في البنيات السابقة. على الرغم‎ 5 من ذلك» لا يفهم ذو المهارة في المجال أن أي فواصل في الشرح تشير إلى انقطاع فعلي للبنية السابقة. على النحو المستخدم بهذه الوثيقة؛ تشير مجموعة من الأقواس المستخدمة داخل صيغة بنائية إلى أن الميزة البنائية بين الأقواس مكررة. في بعض التجسيدات؛ قد تكون الأقواس المستخدمة ‎Ble‏ 0 عن ل و]؛ وفي تجسيدات معينة؛ قد تكون الأقواس المستخدمة للإشارة إلى تكرار الميزات البنائية ‎Ble‏ عن "(” و*)". في بعض التجسيدات؛ يمثل عدد تكرارات السمات البنائية بين الأقواس العدد المشار ‎ad)‏ خارج الأقواس ‎Jie‏ 32 4؛ 5؛ 6؛ 7 وهكذا. في تجسيدات متنوعة؛ يتم الإشارة إلى عدد تكرارات الميزة البنائية بين الأقواس من خلال المتغير المشار إليه خارج الأقواس مثل ‎“Zz‏ على النحو المستخدم بهذه الوثيقة؛ تشير الرابطة المستقيمة أو المتعرجة المرسومة على ذرة كريون أو فوسفور استقطابية داخل الصيغة البنائية إلى أن الكيمياء الفراغية لذرة الكربون أو الفوسفور الاستقطابية غير محددة ‎dally‏ بها تضمين جميع صور المركز الاستقطابي. تم وصف أمثلة لهذه الإيضاحات فيما بعد. or Yr 0 | Nu
TT Oy “ho ot om N 100 nL ةروص‎ A ‏صورة‎ 0 تعني العبارة ‎Joi‏ صيدليًا" أنه يتحتم أن تكون المادة أو التركيبة متوافقة؛ كيميائيًا و/أو على نحو سام؛ مع المكونات الأخرى المشتملة على صيغة؛ و/أو الخاضع للعلاج الذي يتم علاجه بها.
تعني العبارة 'مادة حاملة مقبولة صيدليًا" كما يُستخدم هنا مادة صلبة غير سامة خاملة؛ ‎sale‏ مالئة شبه صلبة أو سائلة؛ مادة مخففة؛ مادة ممحفظة أو مادة مساعدة للصياغة من أي نوع. تتمثل بعض الأمثلة الخاصة بالمواد التي يمكن أن تعمل كمواد حاملة مقبولة صيدليًا في مواد سكرية مثل لاكتوز ‎lactose‏ ؛ جلوكوز ‎glucose‏ وسكروز 5001056 ؛ يمكن أيضًا أن توجد أنواع النشا ‎Jie‏ ‏5 نشا الذرة ونشا البطاطس؛ السيليلوز ومشتقاته ‎Jie‏ صوديوم كريبوكسي ‎fie‏ سيليلوز ‎sodium‏ cellulose ‏وسيليلوز أسيتات‎ ethyl cellulose ‏سيليلوز‎ (i « carboxymethyl cellulose ¢ talc ‏؛ التالك‎ gelatin ‏صمغ كثيراء في صورة مسحوق؛ الشعير؛ الجيلاتين‎ ¢ acetate ‏زيت الفول السوداني؛‎ Jie ‏زيدة الكاكاو وأنواع شمع التحاميل؛ الزيوت‎ Jie excipients ‏السواغات‎ ‏فول الصويا؛‎ cay ‏زيت بذر القطن؛ زيت العُصْفُر؛ زيت السمسم؛ زيت الزيتون» زيت الذرة‎
0 مركبات جليكول؛ مثل بروييلين جليكول ‎propylene glycol‏ ؛ إسترات ‎esters‏ مثل إيثيل أوليات ‎ethyl oleate‏ وإيثيل لورات ‎ethyl laurate‏ ؛ ‎agar laf‏ ؛ عوامل منظمة مثل مجنسيوم هيدروكسيد وألومينيوم هيدروكسيد ‎magnesium hydroxide and aluminum hydroxide‏ ؛ حمض ألجينيك ‎alginic acid‏ ؛ ماء خالي من مولد حمى؛ محلول ملحي متساوي التوتر ؛ محلول ‎Ringer‏ كحول إيثيلي ‎ethyl alcohol‏ ؛ محاليل منظمة بالفوسفات ‎phosphate buffer‏
‎solutions 5‏ ؛ المزلقات المتوافقة غير السامة ‎Jie‏ صوديوم لوريل سلفات ‎sodium lauryl‏ ‎sulfate‏ ومجنسيوم ستيارات ‎magnesium stearate‏ ؛ العوامل الملونة ‎coloring agents‏ « عوامل الإطلاق ‎releasing agents‏ « عوامل التغليف ‎coating agents‏ ¢ عوامل التحلية ‎sweetening agents‏ « إكساب النكهة والتعطير ‎flavoring agents‏ ؛ المواد الحافظة ‎preservatives‏ ومضادات الأكسدة ‎Gig « antioxidants‏ لقرار القائم بالصياغة.
‏20 يشير المصطلح "استعادة" تخليق أو إنتاج الديستروفين بصفة عامة إلى إنتاج بروتين ديستروفين متضمن صور مقتطعة من الديستروفين في مريض يعاني من ‎BAN‏ العَضَلِيٌ بعد العلاج باستخدام مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ كما يوصف هنا. في بعض التجسيدات؛ نتائج العلاج في زيادة في إنتاج ديستروفين جديد في مريض ‎hia‏ 961؛ 965 9610 9620 9630 9640 0+ 9660 9670 9680 9690 أو 96100 (متضمنة كل الأعداد الصحيحة ‎Lad‏ بينها).
‏5 في بعض التجسيدات؛ يزيد العلاج من عدد ألياف الديستروفين الإيجابية وصولاً إلى على الأقل
حوالي 9620؛ حوالي 9630؛ ‎sa‏ %40 حوالي 9650؛ ‎sa‏ 9660؛ حوالي ‎ATO‏ حوالي 0 حوالي 90 96 أو حوالي 9695 إلى 96100 من الطبيعي في الخاضع للعلاج. في تجسيدات أخرى؛ يزيد العلاج من عدد ألياف الديستروفين الإيجابية وصولاً إلى نسبة من حوالي 0 إلى حوالي 9660؛ أو حوالي 9630 إلى حوالي 9650 من الطبيعي في الخاضع للعلاج. يمكن تحديد النسبة الخاصة بألياف الديستروفين الإيجابية في مريض بعد العلاج بواسطة عينة فحص عضلية باستخدام تقنيات معروفة. على سبيل المثال؛ قد يتم أخذ عينة فحص عضلية من عضلة ملائمة؛ مثل العضلة ذات الرأسين العضدية في مريض. قد يتم تنفيذ تحليل النسبة المئوية لألياف الديستروفين ‎dystrophin fibers‏ الإيجابية قبل العلاج و/أو بعد العلاج أو عند نقاط زمنية خلال سياق العلاج. في بعض التجسيدات؛ يتم أخذ عينة 0 فحص بعد العلاج من عضلة الجانب المقابل من عينة الفحص قبل العلاج. قد يتم إجراء تحليل التعبير عن الديستروفين قبل وبعد العلاج باستخدام أية تجرية ملائمة للديستروفين. في بعض التجسيدات؛ يتم تنفيذ الكشف الكيميائي الهيستولوجي المناعي على قطاعات نسيجية من عينة فحص العضلة باستخدام جسم مضاد يمثل علامة محددة للديستروفين» ‎Jie‏ جسم مضاد أحادي النسيلة أو متعدد النسائل. على سبيل المثال؛ يمكن استخدام الجسم المضاد ‎MANDYS106‏ ‏5 الذي يعتبر علامة محددة عالية الحساسية للديستروفين. قد يتم استخدام أي جسم مضاد ثانوي ملائم. في بعض التجسيدات؛ يتم حساب النسبة المئوية لألياف الديستروفين الإيجابية عن طريق قسمة عدد الألياف الإيجابية على إجمالي الألياف التي تم عدها. تشتمل عينات العضلة الطبيعية على 0 من ألياف الديستروفين الإيجابية. لهذاء يمكن التعبير عن النسبة المئوية ‎GLY‏ ‏0 الديستروفين الإيجابية باعتبارها نسبة مئوية للألياف الطبيعية. للتحكم في وجود مستويات ضئيلة من الديستروفين في العضلة قبل العلاج إضافة إلى الألياف المعكوسة يمكن ضبط قيمة قاعدية باستخدام قطاعات من العضلات قبل العلاج من كل مريض عند عد ألياف الديستروفين الإيجابية في العضلات بعد العلاج. قد يتم استخدام هذا كقيمة حدية لعد ألياف الديستروفين الإيجابية في قطاعات من العضلة بعد العلاج في ذلك المريض. في تجسيدات ‎cal‏ يمكن ‎Lal‏ استخدام 5 قطاعات نسيجية ملونة بالجسم المضاد لتحديد كم الديستروفين باستخدام برنامج تحليل الصورة
‎Image Analysis Corporation, Nashville, TN) Bioquant‏ 81000801). يمكن إيضاح إجمالي شدة إشارة فلورة الديستروفين ‎dystrophin fluorescence‏ كنسبة مئوية للطبيعي. بالإضافة إلى ذلك؛ يمكن استخدام تحليل لطخة ويسترن باستخدام أجسام مضادة أحادية النسيلة أو متعددة النسائل مضادة للديستروفين لتحديد النسبة المئوية لألياف الديستروفين الإيجابية. على
‏5 سبيل المثال؛ قد يتم استخدام الجسم المضاد الذي يكون مضادًا للديستروفين ‎NCL-Dys1‏ من ‎(Leica Biosystems‏ يمكن أيضًا تحليل النسبة المئوية لألياف الديستروفين الإيجابية عن ‎Gob‏ ‏تحديد التعبير الوراثي عن مكونات معقد ساركوجليكان ‎sarcoglycan complex‏ )000( و/أو ‎LIAL NOS‏ العصبية ‎.neuronal‏ ‏في بعض التجسيدات»؛ يؤدي العلاج باستخدام مترافقات أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص
‏0 بالكشف إلى إبطاء أو تقليل الخلل الوظيفي و/أو الإخفاق في عضلة الجهاز النفسي المتقدم في المرضى الذين يعانون من ‎DMD‏ الذي سيكون متوقعًا من دون العلاج. في بعض التجسيدات؛ قد يُقلل العلاج باستخدام مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف من أو يُزيل الحاجة لمساعدة في التنفس التي قد تكون متوقعة بدون العلاج. في بعض التجسيدات؛ تتضمن قياسات الوظيفة التنفسية لتتبع مسار المرض؛ إضافة إلى تقييم التدخلال العلاجية المحتملة ‎Li Sl‏
‏5 الشَهِيقِيَ الأقصى ‎maximum inspiratory pressure‏ (010/ا)؛ الضّغْط 583( الأقصى
‎forced vital ‏والسعة الحيوية القسرية‎ (MEP)maximum expiratory pressure
‎.(FVC) capacity‏ يقيس ‎(s5ius MEPs MIP‏ الضغط الذي يمكن لشخص إنتاجه أثناء الشهيق والزفير» على التوالي؛ وتعتبر قياسات حساسة لقوة العضلة التنفسية. يمثل ‎MIP‏ قيامًا لضعف عضلة الحجاب الحاجز.
‏0 في بعض التجسيدات؛ قد يتراجع ‎MEP‏ قبل التغييرات في اختبارات الوظيفة الرئوية الأخرى؛ متضمنة ‎MIP‏ و0/اا. في تجسيدات معينة؛ قد يمثل ‎Base MEP‏ مبكرًا على خلل وظيفي تنفسي. في تجسيدات معينة؛ قد يتم استخدام ‎FVC‏ لقياس إجمالي حجم الهواء المخرج أثناء الزفير القسري بعد عملية شهيق قصوى. في المرضى الذين يعانون من ‎(DMD‏ تزداد 1/0 على نحو مصاحب للنمو الفيزيائي حتى بدايات المراهقة. بالرغم من ذلك؛ عند تباطء النمو أو عندما تتم
‏5 إعاقته بتفاقم المرض؛ وتفاقم ضعف العضلات؛ تدخل السعة الحيوية طورًا تنازليًا وتتراجع بمعدل
متوسط يبلغ من حوالي 8 إلى 8,5 بالمائة في العام بعد من 10 إلى 12 سنة من العمر. في تجسيدات معينة؛ يعتبر ‎MIP‏ بالمائة المتنباً به ‎MIP)‏ المضبوط للوزن)؛ ‎MEP‏ بالمائة المتنبأ به ‎MEP)‏ المضبوط للعمر) 5 ‎FVC‏ بالمائة المتنباً به ‎FVC)‏ المضبوط للعمر والطول) تحليلات داعمة. يتضمن المصطلحان "خاضع للعلاج" و'مريض" كما يُستخدم هناء أي حيوان يُظهر عرضًاء أو
يكون على خطر أن يُظهر عرضًاء؛ يمكن علاجه باستخدام مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف؛ مثل خاضع للعلاج (أو ‎(ane‏ يعاني من أو على خطر أن يعاني من ‎DMD‏ ‏أو ‎BMD‏ أو أي من الأعراض المصاحبة لهذه الحالات (على سبيل المثال؛ فقد الألياف العضلية). يتضمن الخاضعون للعلاج الملائمون (أو المرضى) الحيوانات المعملية (مثل ‎Ol‏
0 الجرذء الأرنب»؛ أو خنزير ‎(Lie‏ حيوانات المزارع» والحيوانات الداجنة أو الحيوانات الأليفة ‎Jie)‏ ‏قط أو كلب). يتم تضمين الحيوانات الرئيسة غير البشرية؛ وُفضل؛ المرضى (أو الخاضعون للعلاج) من البشر. كذلك يتم تضمين طرق لإنتاج الديستروفين في خاضع للعلاج (أو مريض) لديه طفرة في جين الديستروفين الذي يكون مُعرْضًا لتخطي الإكسون ‎ST‏ ‏تعني العبارات "الإعطاء المجموعي" ‎aed‏ على نحو مجموعي" 'الإعطاء الطرفي” واعطى
5 على نحو طرفي" كما يُستخدم هنا إعطاء مركب»؛ عقار أو ‎sale‏ أخرى بخلاف ذلك على نحو مباشر في الجهاز العصبي المركزي؛ بحيث تدخل إلى جهاز المريض وء بالتالي؛ تكون معرضة للأيض والعمليات الأخرى المشابهة؛ على سبيل المثال؛ الإعطاء تحت الجلد. يشير العبارة 'متوالية استهداف" إلى متوالية قواعد نووية أوليجومر متممة لمتوالية نوكليوتيدات في ‎MRNA‏ أولي مستهدف. في بعض التجسيدات ‎Gy‏ للكشف؛ تمثل متوالية النوكليوتيدات في
‎MRNA 20‏ الأولي المستهدف موقع تلدين الإكسون 53 في ديستروفين ‎MRNA‏ الأولي الذي يُطلق عليه ‎H53A(+36+60)‏ ‏يمثل 'علاج” خاضع للعلاج (على سبيل المثال؛ كائن ثديي؛ مثل إنسان) أو خلية أي نوع من التدخل المستخدم في محاولة لتغيير السياق الطبيعي للخاضع للعلاج أو الخلية. يتضمن العلاج؛ إلا أن الأمر ليس قاصرًا على» إعطاء أوليجومر أو تركيبة صيدلية منه؛ وقد يتم التنفيذ إما على
نحو وقائي أو لاحق لبدء حدث مسبب للمرض أو التلامس مع عَامِل سَبَبِي. يتضمن العلاج أي تأثير مطلوب على الأعراض أو مسببات الأمراض الخاصة بمرض أو حالة مصاحبة لبروتين الديستروفين» كما في صور معينة من ‎co Lal) BAY‏ وقد تتضمن؛ على سبيل المثال؛ التغييرات أو التحسينات الدنيا في واحد أو أكثر من العلامات القابلة للقياس الخاصة بالمرض الذي يتم علاجه أو الحالية التي يتم علاجها. كذلك يتم تضمين علاجات ‎CABS‏ يمكن توجيهها إلى ‎JE‏ ‏معدل تقدم المرض الذي يتم علاجه أو الحالة التي يتم علاجها؛ تأخير بدء ظهور ذلك المرض أو تلك الحالة؛ أو تقليل حدة بدء ظهوره/ظهورها. ليس بالضرورة أن يشير "العلاج” أو 'الوقاية" إلى استئصال ‎cali‏ علاج؛ أو منع المرض أو الحالة؛ أو الأعراض المصاحبة لها. في بعض التجسيدات؛ يزيد العلاج باستخدام مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف 0 من إنتاج ديستروفين جديد؛ يؤخر تقدم المرض؛ يُبطئ أو يقلل من فقد السيرء يُقلل من التهاب العضلات؛ ‎JIB)‏ من تلف العضلات؛ يُحسن من وظيفة العضلات؛ يُقلل من فقد الوظيفة الرئوية؛ و/أو يُعزز من تجدد العضلات الذي سيكون متوقعًا بدون علاج. في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على؛ يؤخرء أو يُبطئ تقدم المرض. في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على السير أو يُقلل من فقد السير. في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على الوظيفة الرثوية أو يُقلل من فقد 5 الوظيفة الرئوية. في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على أو يُزيد مسافة سير على الأقدام ثابتة في مريض؛ كما هو مُقاس بواسطة؛ على سبيل المثال؛ اختبار السير ‎saad‏ 6 دقائق ‎(OMWT)‏ ‏في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على أو يُقلل من الزمن إلى السير/الجري 10 أمتار (أي؛ اختبار السير/الجري 10 أمتار). في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على أو يُقلل من الزمن إلى الوقوف من الاستلقاء (أي؛ اختبار الزمن إلى الوقوف). في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على 0 أو يقل من الزمن إلى ارتقاء أريع درجات من درجات السلّم التقليدية (أي؛ اختبار ارتقاء أربع درجات من السلّم). في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على أو يُقلل من التهاب العضلات في المريض؛ كما هو مُقاس بواسطة؛ على سبيل ‎le) MRI JU‏ سبيل المثال؛ ‎MRI‏ لعضلات الساق). في بعض التجسيدات؛ يقوم ‎MRI‏ بقياس 12 و/أو ‎gia‏ الدهون لتحديد ضمور العضلات. يمكن أن يُحدد ‎MRI‏ التغييرات في بنية العضلات والتركيبة الناتجة بواسطة الالتهاب؛ الاستسقاء؛ 5 تلف العضلات وارتشاح الدهون.
في بعض التجسيدات؛ يزيد العلاج باستخدام مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف من إنتاج ديستروفين جديد ويُبطئ أو يُقلل من فقد السير الذي سيكون متوقعًا بدون العلاج. على سبيل المثال؛ قد يؤدي العلاج إلى تثبيت؛ الحفاظ على؛ تحسين أو زيادة القدرة على المشي (على سبيل المثال؛ تثبيت السير) في الخاضع للعلاج. في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على أو
يُزيد مسافة سير على الأقدام ثابتة في مريض؛ كما هو مُقاس بواسطة؛ على سبيل المثال؛ اختبار السير لمدة 6 دقائق (61/1//1)؛ الموصوف بواسطة ‎Muscle Nerve, ) .McDonald, et al‏ 42:966-74 ;2010 المتضمن هنا كمرجع). قد يتم التعبير عن تغير في مسافة السير لمدة 6 دقائق ‎(GMWD)‏ في صورة قيمة مطلقة؛ تغير بنسبة مئوية أو تغير في 96 للقيمة المتنباً بها في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على أو يُحسّن من مسافة سير على الأقدام ثابتة في ‎OMWT‏
0 من ‎Jae‏ بنسبة 9620 في الخاضع للعلاج بالنسبة لنظير مُعافى. يمكن تحديد أداء مريض ‎DMD‏ ‏في ‎GMWT‏ بالنسبة إلى الأداء النمطي لنظير مُعافى عن طريق حساب 96 لقيمة ‎Lite‏ بها. على سبيل المثال؛ قد يتم حساب 96 ل ‎GMWD‏ المتنباً به باستخدام المعادلة التالية للذكور: 196,72 ‎x 39,81) +‏ العمر) - (1,36 ‎X‏ العمر2) + (132,28 ‎x‏ الارتفاع بالأمتار). للإناث؛ قد يتم حساب 96 ل ‎Lill GMWD‏ به باستخدام المعادلة التالية: 188,61 + (51,50 ‎x‏ العمر) -
‎x 1,86( 5‏ العمر2) + )86,10 ‎x‏ الارتفاع بالأمتار) ) ‎Henricson et al.
PLoS Curr.,‏ ‎version 2‏ ,2012( المتضمن هنا كمرجع). في بعض التجسيدات؛ يزيد العلاج باستخدام أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ من مسافة السير على الأقدام الثابتة في المريض من ‎dad‏ قاعدية إلى أكبر من 3 5» 6» 7. 8» 9< 10 15 20» 25 30 أو 0 متر (بما في ذلك كل الأعداد الصحيحة فيما بينها).
‏0 .قد يحدث فقد وظيفة العضلات في المرضى الذين يعانون من ‎DMD‏ ضد الخلفية الخاصة بالنمو والتطور الطبيعي في الطفولة. بالفعل؛ قد يُظهر الأطفال الأصغر ‎Ba‏ الذين يعانون من ‎DMD‏ ‏زيادة في المسافة التي يتم سيرها أثناء 61///1 على مدار حوالي 1 عام بالرغم من ضعف العضلات المتقدم. في بعض التجسيدات؛ تتم مقارنة 10//ا61 من المرضى الذين يعانون من ‎DMD‏ بالخاضعين للعلاج من عينة المقارنة المتطورة نمطيًا وبالبيانات المعيارية الموجودة من
‏5 الخاضعين للعلاج متطابقي العمر والجنس. في بعض التجسيدات؛ يمكن تفسير النمو والتطور
الطبيعيين باستخدام معادلة معتمدة على العمر والارتفاع المتواءمة مع البيانات المعيارية. يمكن
استخدام هذه المعادلة لتحويل 61/10/10 إلى ‎dad‏ بالنسبة ‎saad)‏ )%( متنباً بها في الخاضعين
للعلاج الذين يعانون من ‎DMD‏ في تجسيدات معينة؛ يقدم تحليل بيانات 61/1//00 بالنسبة المئوية
‎Lindl)‏ بها طريقة لتفسير النمو والتطور الطبيعيين؛ وقد يُظهر هذا أن قيم الكسب في الوظيفة عند
‏5 الأعمار المبكرة (على سبيل المثال؛ أقل من أو يساوي العمر 7) تمثل قدرات ثابتة بدلاً من كونها
‎Henricson et al.
PLoS Curr., 2012, ( DMD ‏محسنة في المرضى الذين يعانون من‎
‎version 2‏ المتضمن هنا كمرجع).
‏تم اقتراح نظام تسمية جزيء مضاد لاتجاه النسخ ونشره للتمييز فيما بين الجزيئات المضادة لاتجاه
‏النسخ النمختلفة (انظر 644-654 ,4 ‎(Mann ©] al., (2002) J Gen Med‏ تصبح هذه 0 التسمية ذات ‎dla‏ بخاصة عند اختبار العديد من الجزيئات المضادة لاتجاه النسخ المختلفة بشكل
‏طفيف؛ الموجهة كلها لنفس المنطقة المستهدفة؛ كما يُعرض فيما يلي:
‎H#A/D(x:y)
‏يُدلل الحرف الأول على النوع (على سبيل المثال» ‎tH‏ إنسان» ‎LM‏ ©: كلب). '#' يُدلل على
‏عدد الإكسون للديستروفين المستهدف. ‎"AD"‏ تشير إلى موقع جدل مستقبل أو مانح عند بداية ونهاية الإكسون؛ على التوالي. ‎(XY)‏ تمثل إحداثيات التلدين حيث "-” أو "+" يشيرا إلى متواليات
‏الإنترون والإكسون على التوالي. على سبيل المثال؛ سيشير (6+18-)8 إلى ‎AT‏ 6 قواعد من
‏الإنترون التي تسبق الإكسون المستهدف وأول 18 قاعدة من الإكسون المستهدف. سيكون موقع
‏الجدل الأقرب هو المستقبل بحيث تكون هذه الإحداثيات ب ‎SAT‏ يمكن أن يكون وصف إحداثيات
‏التلدين عند موقع جدل المانح هو ‎D(+2-18)‏ حيث آخر 2 قاعدة من القواعد الخاصة بالإكسون ‎Jos 0‏ 18 قاعدة من قواعد الإنترون تناظر موقع التلدين للجزيء المضاد لاتجاه النسخ. إحداثيات
‏التلدين الخاصة بالإكسون بالكامل التي سيتم تمثيلها بواسطة (65+85+)8؛ أي الموقع فيما بين
‏النوكليوتيد 65 والنوكليوتيد 85 من بداية ذلك الإكسون.
‏2- الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ
‏أ) مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ المصممة ‎Call‏ على تخطي الإكسون 53
في تجسيدات معينة؛ تعد مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ وفقًا للكشف متممة لمنطقة الإكسون 53 المستهدفة لجين الديستروفين وتعمل على حث تخطي الإكسون 53. على نحو محدد؛ يتعلق الكشف بمترافقات أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎adie‏ منطقة الإكسون 53 المستهدفة للديستروفين ‎MRNA‏ الأولي الذي يُطلق عليه موقع تلدين. في بعض التجسيدات؛ يكون موقع التلدين ‎Sle‏ عن (36+60+)153/8.
تستهدف مترافقات أوليجومر مضادة لاتجاه النسخ ‎Gh‏ للكشف ديستروفين ‎MRNA‏ الأولي وتستحث ‎ads‏ الإكسون 53 لذا يتم استبعاده أو تخطيه من نسخة ‎MRNA‏ الناضجة المجدولة. من خلال تخطي الإكسون 53؛ يتم استعادة إطار القراءة الممزق إلى طفرة إطارية داخلية. في حين أن ‎DMD‏ يتألف من عدة أنماط فرعية جينية؛ تم خصيصًا تصميم مترافقات أوليجومر مضادة
0 الاتجاه النسخ وفقًا للكشف لتخطي الإكسون 53 لديستروفين ‎MRNA‏ الأولي. تتألف طفرات ‎DMD‏ ‏التي تكون مُعرْضًا لتخطي الإكسون 53 من مجموعة فرعية من مرضى ‎DMD‏ (965). تم تصميم متوالية قاعدة نووية مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ يستحث تخطي الإكسون 53 بحيث تكون متممة لمستهدف متوالية محدد داخل الإكسون 53 لديستروفين ‎MRNA‏ الأولي. في بعض التجسيدات؛ يكون الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ لمترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه
5 النسخ ‎Ble‏ عن ‎PMO‏ حيث يتم ربط كل حلقة مورفولينو في ‎PMO‏ بقاعدة نووية تتضمن؛ على سبيل المثال؛ قواعد نووية موجودة في ‎DNA‏ (أدينين»؛ سيتوزين؛ جوانين؛ وثايمين). ب) السمات المميزة لكيمياء الأوليجومر يمكن أن تستخدم مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بالكشف مجموعة متنوعة من الكيمياء المضادة لاتجاه النسخ. تتضمن الأمثلة على كيمياء الأوليجومر؛ دون تحديد؛
0 أوليجومرات من مورفولينو» أوليجومرات ‎OligOMeErs‏ معدلة من فوسفورو ثيوات 00500010110216 أوليجومرات معدلة من 02”-ميثيل ‎O—methyl modified‏ :2 065 0 ؛ حمض نووي لببتيد ‎(PNA) peptide nucleic acid‏ حمض نووي مقفل ‎(LNA)‏ أوليجومرات من فوسفورو ثيوات؛ أوليجومرات معدلة من ‎(MOE="02‏ أوليجومر معدل ب 2”-فلورو» الأحماض النووية المجسرة ب 02 ".64 '-إيثيلين ‎(ENAs)‏ -20,40
‎cethylene—bridged nucleic acids (ENAs)‏ تراي سيكلو ‎(DNAs‏ وحدات تراي سيكلو - ‎DNA‏ فوسفورو ثيوات فرعية ‎tricyclo-DNA phosphorothioate subunits‏ » أوليجومرات معدلة من 0-2-[2-(ل١-ميثيل‏ كريامويل)إيثيل] ‎2'-0O-[2-(N-methylcarbamoyl)ethyl]‏ ‎Modified oligomers‏ « متضمنة توليفات من أي مما سبق. يمكن دمج الكيمياء المعدلة بفوسفورو ثيوات ‎Phosphorothioate‏ و2:-16-0// للحصول على مكوؤن ‎-١/16-:02‏
فوسفورو ثيوات رئيسي ‎backbone‏ 270-1/6-01105010101710816. انظرء على سبيل المثال» نشرات الطلبات الدولية أرقام 112053/2013 5 008725/2009« التي يتم تضمينها هنا كمرجع بأكملها. يتم بشكل إضافي وصف التجسيدات النموذجية الخاصة بكيمياء الأوليجومر الخاصة بالكشف فيما يلي.
0 1) الأحماض النووية ‎(PNAs) Peptide nucleic acids aml‏ تعتبر الأحماض النووية لببتيد ‎(PNAS)‏ نظائر ل ‎DNA‏ حيث يكون المكون الرئيسي متجائمًا هيكليًا مع مكون رئيسي من ديوكسي رببوز» متكون من وحدات ل١-(2-أمينو‏ إيثيل) جليسين يتم إلحاق قواعد بيريميدين أو بيورين بها. تهجن ‎PNAS‏ المحتوية على قواعد بيريميدين وبيورين الطبيعية الأوليجومرات المتممة الخاضعة لأحكام ازدواج القواعد واطسون-كربك؛ وتحاكي ‎DNA‏
5 فيما يتعلق بالتعرف على زوج القواعد )1993 ‎Buchardt et al.‏ ,590010). يتم تكوين المكون الرئيسي من ‎PNAS‏ بواسطة روابط ببتيد بدلاً من روابط فوسفو داي إسترء مما يجعلها ملائمة جيدًا للتطبيقات المضادة لاتجاه النسخ (انظر الصيغة البنائية التالية). يكون المكون الرئيسي بدون شحنة؛ مما يؤدي إلى مضاعفات ‎PNA/DNA‏ أو ‎PNA/RNA‏ التي تُظهر ‎Bla‏ حراريًا أكبر من الثبات الحراري الطبيعي. لا يتم التعرف على ‎PNAS‏ بواسطة إنزيمات نيوكلياز أو إنزيمات
0 بروتياز. يتم فيما يلي إيضاح مثال غير حصري على ‎PNA‏
— 9 3 — ‎Wo‏ ‎{J‏ ‎ve,‏ ‎ny‏ ‎Rang L J‏ تكرار 3 مدي ب لهي ‎SS‏ > ‎Bhi‏ ‏بالرغم من تغير هيكلى جذري فى الصيغة البنائية الطبيعية ؛» تكون ‎PNAs‏ قادرة على ارتباط متوالية نوعى فى صورة حلزونية ب ‎DNA‏ أو ‎[RNA‏ تتضمن السمات المميزة ل ‎PNAS‏ ألفة ربط عالية ب ‎DNA‏ أو ‎RNA‏ متمم؛ تأثير عدم ثبات ناتج بواسطة عدم توافق قاعدة فردية»؛ مقاومة إنزيمات نيوكلياز وإنزيمات بروتياز» التهجين باستخدام ‎DNA‏ أو ‎RNA‏ المستقلة عن تركيز الملح والتكوين الثلاثي باستخدام ‎DNA‏ بيورين متجانس. لقد طورت ‎PANAGENE™‏ مونومرات 815 ‎PNA‏ المملوكة لها (815؛ مجموعة بنزو ثيازول-2-سلفونيل) وعملية التحويل إلى أوليجومر المسجلة لها. تتكون عملية تحويل ‎PNA‏ إلى أوليجومر باستخدام مونومرات ‎PNA‏ 815 من دورات متكررة من نزع الحماية؛ الإقران والتغطية. يمكن إنتاج ‎PNAS‏ تخليقيًا باستخدام أية تقنية معروفة 0 في المجال. ‎«lil‏ على سبيل المثال» طلبات براءات الاختراع الأمريكية أرقام 6,969,766؛ 7,211,668« 7,022,851 7,125,994« 7,145,006 و7,179,896. انظر أيضًا طلبات براءات الاختراع الأمريكية أرقام 5,539,082؛ 5,714,331؛ و5,719,262 لتحضير ‎PNAS‏ ‏يمكن إيجاد التعاليم الإضافية الخاصة بمركبات ملا فى ‎Nielsen et al., Science,‏ 1 ,254:1497-1500. تم تضمين كل مما سبق كمرجع بأكمله. 5 2( الأحماض النووية المقفلة ‎(LNAs)Locked Nucleic Acids‏ قد تحتوي مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ أيضًا على وحدات فرعية من ‎ana’‏ نووي مقفل" ‎Locked Nucleic Acids‏ (5/لا). تمثل "258لا" عددًا من فئة تعديلات يُطلق عليها حمض نووي ‎bridged nucleic 8600 juss‏ (5/لا8). يتم تمييز ‎BNA‏ بواسطة رابط تساهمي يقفل هيئة حلقة الريبوز في تجعية سكر 0030-إندو (شمالي). ل ‎(LNA‏ يتم تكوين الجسر
— 0 4 — من ميثيلين فيما بين الموضعين 0-72 و04-”. يعزز ‎LNA‏ من التنظيم المسبق للمكون الرئيسي وتراص القواعد لزيادة التهجين والثبات الحراري ‎thermal stability‏ يمكن إيجاد الصيغ البنائية الخاصة ب 85لا على سبيل المثال» في ‎Wengel, et al.,‏ ‎Chemical Communications (1998) 455; Koshkin et al., Tetrahedron‏ ‎Jesper Wengel, Accounts of Chem.
Research (1999) 5‏ ;54:3607 )1998( ‎Obika, et al., Tetrahedron Letters (1997) 38:8735; Obika, et al.,‏ ;32:301 ‎«Tetrahedron Letters (1998) 39:5401‏ و ‎Obika, et al., Bioorganic‏ ‎(Medicinal Chemistry (2008) 16:9230‏ التي تم تضمينها هنا كمرجع بأكملها. يتم فيما 10 ال 5 مل واد ‎D0 :‏ ]7 مم0 ٍ تََ & ون شع قد تتضمن مترافقات أوليجومر مضادة لاتجاه النسخ وفقًا للكشف واحدًا أو أكثر من 85ل ا؛ في بعض ‎cal)‏ قد تكون مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ مكونة بالكامل من ‎LNAS‏ ‏يتم وصف الطرق لتخليق الوحدات الفرعية ل ‎LNA‏ نوكليوزيد الفردية وتضمينها في الأوليجومرات؛ على سبيل المثال» في طلبات براءات الاختراع الأمريكية أرقام :
— 1 4 — 1,572,582 71,569,575 7,084,125« 7,060,809« 7,053,207 7,034,133 06,794,499 5 66,670,461 التي تم تضمين كل منها كمرجع بأكملها. تتضمن روابط الوحدة الفرعية الداخلية النمطية أشطار فوسفو داي إستر وفوسفورو ثيوات؛ على نحو بديل؛ قد يتم استخدام روابط غير محتوية على فوسفور. تتضمن تجسيدات إضافية مترافق أوليجومر مضاد الاتجاه النسخ محتوي على ‎LNA‏ حيث يتم فصل كل وحدة ‎LNA‏ فرعية بواسطة وحدة ‎DNA‏ ‏فرعية. يتم تكوين مترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ معينة من وحدات ‎DNA 5 LNA‏ فرعية متعاقبة حيث يكون رابط الوحدة الفرعية الداخلية هو فوسفورو ثيوات. تمثل الأحماض النووية المجسرة ب 02 64 'إيثيلين ‎2'0,4'C-ethylene- (ENAs)‏ ‎bridged nucleic acids‏ عضوًا ‎AT‏ من فئة ‎.BNAS‏ يتم فيما يلي إيضاح مثال غير 0 1 حصري : ٍ قاعدة ‎Lh,‏ ‎J i‏ ‎a‏ ‎ENA‏ ’ يتم وصف أوليجومرات ‎ENA‏ وتحضيرها في )1997( ‎Obika et al., Tetrahedron Lett‏ 8735 :)50( 38( التي تم تضمينها هنا كمرجع بأكملها. قد تتضمن مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بالكشف واحدة أو أكثر من وحدات ‎ENA‏ الفرعية. 5 3.حمض نووي مفتوح ‎(UNA) Unlocked nucleic acid‏ كما يمكن أن تحتوي مترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ على وحدات حمض نووي مفتوح ‎(UNA)‏ فرعية. تعد أوليجومرات ‎UNA 3 UNAS‏ نظيرًا ل ‎RNA‏ يتم فيها شطر رابطة '63-/02 للوحدة الفرعية. في حين يتم تقييد ‎LNA‏ تشاكليًا (بالنسبة ل ‎(RNA 3 DNA‏ يكون ‎UNA‏ شديد المرونة. يتم الكشف عن ‎(UNAS‏ على سبيل المثال» في 2016/070166 0/0ا. ورد أدناه وصف غير حصري ‎UNA J‏ .
— 2 4 — قاعدةٌ ] ‎Ow‏ ‏م ‎OH‏ ان ‎ot‏ ‏تاحدةٌ | ‎EN‏ ‎Ow‏ £3 يبب ‎OH‏ 0 / ‎Osp‏ ‏9 م صورة لت تتضمن روابط الوحدات الفرعية الداخلية النمطية أشطار فوسفو داي إستر وفوسفورو ثيوات؛ ‎Va‏ ‏من ذلك؛ يمكن استخدام روابط محتوية على غير الفوسفور. 3. مركبات فوسفورو ثيوات ‎Phosphorothioates‏ ‏5 تعتبر 'مركبات فوسفورو ثيوات " (أو ‎(S—0ligos‏ صورة مغايرة من ‎DNA‏ طبيعي حيث يتم استبدال واحدة من ذرات الأكسجين غير المجسرة بذرى سلفر. يتم فيما يلي إيضاح مثال غير حصري على فوسفورو ثيوات: قاعدة ‎wal |‏ ‎Sen,‏ سأ ‎fant‏ 1 ‎bt‏ جد تقلل معالجة روابط النوكليوتيد الداخلي بالسلفر من تأثير إنزيمات النيوكلياز الداخلية والخارجية 0 المضتمنة من 5 "إلى 3 "ومن 3" إلى 5" إنزيم نيوكلياز خارجي 1 ‎DNA POL‏ إنزيمات نيوكلياز 51 ‎(RNases (P1‏ إنزيمات نيوكلياز المصل وفوسفو داي إسترياز سم الحية. يتم تكوين مركبات فوسفورو ثيوات بواسطة اثنتين من الطرق الأساسية: بواسطة تأثير محلول من سلفر
عنصري في كربون داي سلفيد على هيدروجين فوسفونات» أو بواسطة طريقة سلفرة فوسفيت تراي إسترات باستخدام إما تترا ‎Ji)‏ ثيورام داي سلفيد ‎either tetraethylthiuram disulfide‏ ‎(TETD)‏ أو 1-31 2-بنزو داي ثيول-3-أون 1« 1-داي أكسيد -2 ,31-1 ‎(BDTD) bensodithiol-3—-one 1, 1-dioxide‏ (انظرء على سبيل ‎lyer et al., «Jud‏ ‎oJ.
Org.
Chem. 55, 4693-4699, 1990 5‏ التي تم تضمينها هنا كمرجع بأكملها). تتجنب الطرق الأخيرة مشكلة عدم ثبات السلفر العنصري في معظم المذيبات العضوية وسشمية كربون داي سلفيد. تُنتج أيضًا طرق ‎TETD‏ و8010 مركبات فوسفورو ثيوات عالية ‎celal‏ ‏5. وحدات فرعية من تراي سليكلو ‎DNAS‏ وتراي سيكلو -فوسفورو ثيوات نوكليوتيدات ‎Jia‏ مركبات تراي سيكلو-0118 ‎(tc-DNA)‏ فئة من نظائر ‎DNA‏ مقيدة حيث يتم تعديل كل 0 نوكليوتيد عن طريق إدخال حلقة سيكلو برويان لتقييد المرونة الهيئية الخاصة بالمكون الرئيسي وللوصول بالشكل الهندسي للمكون الرئيسي الخاص بزاوية اللي 7 إلى المستوى الأمثل. تقترن ‎Tc-DNAs‏ المحتوية على أدنين وثايمين القاعدية المتجانسة من قاعدة ‎AT‏ الثابتة على نحو استثنائي ب ‎RNAS‏ متممة. يتم وصف مركبات تراي سيكلو -01085 وتخليقها في نشرة الطلب الدولي رقم 2010/115993 ‎(WO‏ التي تم تضمينها هنا كمرجع بأكملها. قد تتضمن مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف واحدًا أو أكثر من وحدات ‎DNA‏ فرعية ثلاثية الحلقات؛ في بعض الحالات؛ قد تكون مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ مكونة بالكامل من وحدات ‎DNA‏ فرعية ثلاثية الحلقات. تكون وحدات التراي سيكلو -فوسفورو ثيوات الفرعية عبارة عن وحدات تراي سيكلو ‎DNA‏ فرعية بروابط وحدة فرعية داخلية من فوسفورو ثيوات. يتم وصف وحدات تراي سيكلو -فوسفورو ثيوات 0 فرعية وتخليقها في نشرة الطلب الدولي رقم 053928/2013؛ التي تم تضمينها هنا كمرجع بأكملها. قد تتضمن مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف واحدًا أو أكثر من وحدات ‎DNA‏ فرعية ثلاثية الحلقات؛ في بعض الحالات؛ قد تكون مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ مكونة بالكامل من وحدات ‎DNA‏ فرعية ثلاثية الحلقات. يتم فيما يلي إيضاح مثال غير حصري على وحدة ‎DNA‏ فرعية ثلاثية الحلقات/فوسفورو ثيوات ثلاثي الحلقات:
— 4 4 — ‎Op ~ {3‏ ‎i it 8‏ قاعدة اسملا 7 م ٍ أن تايا 2 تراي سيكلو 1014 6. أوليجومرات 02”-ميقيلء ‎MOE—02‏ و2:-ح تحمل جزيئات 'أوليجومر ‎"O-Me—"2‏ مجموعة ميثيل عند الوحدة البنائية 011-72 من جزيء الريبوز. يُظهر ‎Me—RNAS=0-"2‏ نفس السلوك ‎of)‏ السلوك المشابه) الخاص ب ‎(DNA‏ ولكنها تكون محمية ‎dia‏ تحلل إنزيم نيوكلياز . يمكن ‎Lad‏ دمج ‎Me-RNAs-0O-"2‏ مع أوليجومرات من فوسفورو ثيوات للتثبيت بشكل إضافي. يمكن تخليق أوليجومرات 146-702 (فوسفو داي إستر أو فوسفو ثيوات) ‎La, 270-1/6 oligomers (phosphodiester or phosphothioate)‏ للتقنيات الروتينية في المجال (انظرء على سبيل المثال ‎Yoo et al., Nucleic Acids Res.‏ 4 ,32:2008-16؛ التي تم تضمينها هنا كمرجع بأكملها). يتم فيما يلي إيضاح مثال غير 0 1 حصري على أوليجومر 02 ‎:Me-’‏ ‏3 ‎BF‏ و ا ‎CL]‏ ‏ل ‏ا ‏با ‎a B‏ = ‎CY‏ ‎“aes,‏ : ‎Me-> O2‏ تحمل أوليجومرات 2 "-ميثوكسي إيثيل ‎(O MOE-"2)‏ مجموعة ميثوكسي إيثيل عند الوحدة ‎dali)‏ 011-72 من جزيء الريبوز وتتم مناقشتها في ‎Martin et al., Helv.
Chim.
Acta,‏
— 5 4 — 1995 ,486-504 ,78( التي تم تضمينها هنا كمرجع بأكملها. يتم فيما يلي إيضاح مثال غير حصري على وحدة 02 ‎MOE-’‏ فرعية: : ‎B‏ 0 7 \ ‎Onome‏ 9 ‎MOE‏ ‏تتضمن أوليجومرات 2”-فلورو ‎(F="2)‏ شق فلورو عند الموضع 2” ‎Yau‏ من ‎27OH‏ تم أدناه وصف مثال غير حصري لأوليجومر ‎F=2‏ ‏8 1 ب ‎OH‏ ‏8 & ‎QO H‏ ‎Om‏ ‏& ‎F-"2‏ ‏تم أيضًا وصف 2”-فلورو أوليجومرات في 2004043977 ‎WO‏ والذي أدرج بالكامل ضمن مراجع هذه الوثيقة. 0 كما تشتمل أوليجومرات 02”-ميثيل» 02 ‎F725 (MOE="‏ على واحدة أو ‎ST‏ من وصلات الفوسفورو ثيوات ‎(PS)‏ على النحو الموصوف أدناه.
—_ 4 6 —_ 3 5 3 0 F ? ‏روم‎ " oh 0-8 0-0-9 3 0-8 ‏ا‎ ‎07 9 ‏م0‎ 0 OCH, 2 1 2 3 2 . ‏صورة صورة صورة‎
F PS-"2 MOE PS-"02 PS ‏--ميثيل‎ 2 ‏وحدة‎ PS ‏على روابط‎ F-’ 24¢ MOE-"02 ‏يبشكل إضافى ¢ قد تشتمل أوليجومرات 2 -ميقيل»‎ -'02 ‏فرعية داخلية خلال الأوليجومر؛ على سبيل المثال؛ كما في درايسابرسين من أوليجومر‎ : ‏الموضح فيما يلي‎ PS ‏ميثيل‎ 5 8 N 8 8 8 ‏مرا 8 ا‎ a 3 uh hn ‏رن لوخي‎ 8 4 a a 5 A yd > fox 1: ue! on kL» 3 0 ‏ل‎ pe HY
JAH CEH CGH SL NTH ‏م‎ il 0
OR - SEAR 5 ana ovo Led Sod . Fo a FB ‏وات‎ ‎1 8 3 oT & 1 ped | a a b 8 0 ‏يك 1 8 ا‎ of or 0 1 ad 3 MN RM la RL Phe PR = 3 ‏اج مدي‎ oN ‏ل‎ 8 Lf 8 Te
N 3 3 8 He 28 ‏الي لإ ا 1 بال م رجاب ا‎ 5 ‏ب“‎ dos oH we, Jae STA
A N 2 : 0 8 0 = NO 8 : Ny 0 8 il 8 1 0 1 ln ‏ولق او‎ ad oy ad ey 1 8 n ~8 ny = 5 ~8 "ny ~3 5 a 8 8 i 1 7 8 ‏أ‎ 8
Jl. ‏ليل‎ a Th, ‏ليث‎ ‏ا لوأو‎ a a ‏ام و‎ oT Ran Sd GU ‏م 85 8 ب مع حا‎ | Se fie af " ‏و و1‎ by on b He i 8 © Sad 1 ‏ييا اال‎ =k ‏ب‎ ‎8 wo NE 8 ‏أ دق‎ ae 0 i ! 1 i : ‏ريع ا‎ 0 Ho A 1 ‏لبا خض كل لجل ذل‎ ‏ل‎ L170 ‏الإ ا‎ avy 1,
LaprB8, ta prQ8 ‏ا 8 وا ةققحها‎ ul 8 0 i o ‏من ل‎ i a Q I 0 Hy 3 i 5 ‏ل‎ ed het ‏بد ل‎ ‏ل م07 ل 9 ل‎ hy = 0
على نحو بديل؛ قد تشتمل أوليجومرات 02”-ميثيل» ‎(MOE="02‏ و/أو 7-2 على روابط ‎PS‏ ‏عند نهايات الأوليجومر كما يوضح فيما يلي: ‎HY |‏ ‎Nr‏ ‎Lod‏ ‎ST‏ ‎Dh 8‏ يب ‎So‏ ‏ا ‏م 8 ‎dq‏ ‏راقبا : : يه ‎a‏ 8 قبا © ‎J‏ { ‎J‏ © ‎EN 4‏ ان ‎NO‏ ‎o “‏ ا ‎i‏ ّ > 3< ‎oo |‏ 8% ‎rt‏ ‏| رسلا ‎we‏ ‎Jz‏ . حيث: تكون ‎Ble R‏ عن 0112011206113 (ميثوكسي إيثيل أو ‎¢(MOE‏ و ‎Xun‏ لاء و2 إلى عدد من النوكليوتيدات المتضمنة داخل واحدة مما يُطلق عليه مناطق الجناح 5 والفجوة المركزية؛ والجناح 3 على الترتيب . يمكن أن تدمج مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ وفقًا للكشف واحدة أو أكثر من وحدات ‎(Jie 2‏ 02 4065-7 و2”-] الفرعية ويمكن أن ‎Warsi‏ من وصلات الوحدات 0 الفرعية المتداخلة ‎All‏ ورد وصفها بهذه الوثيقة. فى بعض ‎(BY)‏ يمكن أن يتألف مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ وفقًا للكشف ‎LIS‏ من وحدات 02”-ميثيل» 02 ‎(MOE="‏ أو
— 8 4 — 5-2 الفرعية. يتألف أحد تجسيدات مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ وفقًا للكشف ‎GS‏ من وحدات 02”-ميثيل الفرعية. 7 أوليجومرات 0-2-[2-(10-ميثيل كربامويل)إيثيل ] -0)-2]-2-0 ‎(MCEs) methylcarbamoyl)ethyl] Oligomers‏ تعتبر ‎MCEs‏ مثالاً آخر على رببونوكليوزيدات ‎ribonucleosides‏ معدلة ب ‎"O02‏ مفيدة في مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف. هناء يتم اشتقاق 0112" لشطر 2-(10-ميثيل كريامويل)إيثيل ‎2—(N-methylcarbamoyl)ethyl moiety‏ لزيادة مقاومة إنزيم النيوكلياز. يتم فيما يلي إيضاح مثال غير حصري على أوليجومر 4065/ا: 0 ‎C NH‏ ‎N Ko‏ ‎HO Lo‏ ‎O._~_. NHCH,‏ 0 "0 8 : ‎Cw‏ ‏و8 = ‎ee‏ ‏| ° ماده * 0 لاس ‎Q‏ ‏1 4" ‎NH‏ { ; ‎vo‏ اذه ب * و61 .9 ‎OH‏ ‏0 ‎MCE 0‏ يتم وصف ‎MCES‏ وتخليقها في )2011( ‎Yamada et al., J.
Org.
Chem.‏ 76(9):3042-53( التي تم تضمينها هنا كمرجع بأكملها. قد تتضمن مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف واحدة أو ‎SST‏ من وحدات ‎MCE‏ الفرعية. 8. الأوليجومرات النوعية الفراغية
— 9 4 — تعتبر الأوليجومرات النوعية الفراغية هي تلك التي يتم تثبيت الكيمياء الفراغية الخاصة بكل رابط محتوي على فوسفور بواسطة طريقة تخليق بحيث يتم إنتاج أوليجومر فراغي نقي إلى حدٍ كبير. يتم فيما يلي إيضاح مثال غير حصري على أوليجومر نوعي فراغي: 8 0 ‎R‏ ‏>< ‏> ‏8 00 0 = ‎n‏ ‏5 في المثال السابق؛ يكون لكل فوسفور خاص بالأوليجومر نفس التشكيل الفراغي. تتضمن الأمثلة الإضافية الأوليجومرات الموصوفة فيما سبق. على سبيل المثال» يمكن تحضير الأوليجومرات التي أساسها ‎(ENAS (LNAS‏ مركبات تراي سيكلرو-قلات ‎(MCEs‏ 02 ”-مييل 02:-0]6ايا 2-2 ومورفولينو باستخدام روابط نوكليوزيد داخلي محتوية فوسفور نوعي فراغي مثل؛ على سبيل المثال؛ فوسفورو ثيوات؛ فوسفو داي إسترء فوسفورواميدات؛ فوسفورو داي أميدات؛ أو روابط 0 النوكليوزيد الداخلية المحتوية على الفوسفور الأخرى. يتم ذكر الأوليجومرات النوعية الفراغية» طرق التحضير تخليق استقطابي متحكم فيه؛ تصميم استقطابي ¢ ومواد مساعدة استقطابية للاستخدام في تحضير هذه الأوليجومرات بالتفصيل؛ على سبيل المثال؛ في 2017192664 2017192679 2017062862 2017015575 2017015555 2015107425 2015108048 2015108046 2015108047 2012039446 2010064146 2011034072« 2014010250 2014012081 20130127858« و2011005761؛ التي تم تضمين كل منها هنا كمرجع بأكملها.
قد يكون للأوليجومرات النوعية الفراغية وصلات نوكليوتيد داخلي محتوية على فوسفور في تشكيلة ‎RP‏ أو 50. تعد الوصلات الاستقطابية المحتوية على فوسفور التي يتم فيها مقارنة التشكلية الفراغية للوصلات 'نقية فراغيًا؛ في حين أن الوصلات الاستقطابية المحتوية على فوسفور التي لا يتم فيها مقارنة التشكلية الفراغية للوصلات يُطلق عليها "عشوائية فراغيًا". في تجسيدات معينة؛
تشتمل الأوليجومرات ‎Gy‏ للكشف على مجموعة من الوصلات النقية والعشوائية ‎(Gals‏ بحيث يكون للأوليجومر الناتج وحدات فرعية تقية فراغيًا عند المواضع المحددة مسبقًا من الأوليجومر. وقد ورد مثال لموقع الوحدات الفرعية النقية فراغيًا في نشرة طلب البراءة الدولية 2 -<2ا في الشكلين 17 و7ب. في أحد التجسيدات؛ تعد جميع الوصلات الاستقطابية المحتوية على فوسفور في الأوليجومر عشوائية فراغيًا. في أحد التجسيدات؛ تكون
0 جميع الوصلات الاستقطابية المحتوية على فوسفور في الأوليجومر نقية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎N‏ ‏رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو ‎(OS‏ تكون كل ‎٠‏ في الوصلات الاستقطابية المحتوية على فوسفور في الأوليجومر عشوائية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎Nn‏ رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ تكون كل ‎٠‏ في الوصلات
5 الاستقطابية المحتوية على فوسفور في الأوليجومر نقية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات 0 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎Nn‏ رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ تكون على الأقل 9610 (إلى أقرب رقم صحيح) لوصلات ‎N‏ المحتوية على فوسفور في الأوليجومر نقية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎٠‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 0 ‎Ud)‏ صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ تكون على الأقل 1620 ‎Jl)‏ أقرب رقم
0 صحيح) لوصلات ‎N‏ المحتوية على فوسفور في الأوليجومر نقية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات 1 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 7 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ تكون على الأقل 9630 ‎J)‏ أقرب رقم صحيح) لوصلات ‎ginal nN‏ على فوسفور في الأوليجومر نقية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 0 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ تكون على الأقل 9640 (إلى أقرب
5 رقم صحيح) لوصلات ‎Nn‏ المحتوية على فوسفور في الأوليجومر نقية فراغيًا. في أحد تجسيدات
الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 7 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ تكون على الأقل 9650 ‎J)‏ أقرب رقم صحيح) لوصلات ‎ginal nN‏ على فوسفور في الأوليجومر نقية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 0 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ تكون على الأقل 9660 (إلى أقرب رقم صحيح) لوصلات « المحتوية على فوسفور في الأوليجومر نقية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات 1 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 7 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ تكون على الأقل 9670 ‎J)‏ أقرب رقم صحيح) لوصلات ‎nN‏ المحتوية على فوسفور في الأوليجومر نقية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 0 ‎Wd)‏ صحيحًا يبلغ 1 أو ‎(LST‏ تكون على الأقل 9680 (إلى أقرب 0 رقم ‎(maa‏ لوصلات « المحتوية على فوسفور في الأوليجومر نقية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات 1 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 7 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ تكون على الأقل 9690 ‎J)‏ أقرب رقم صحيح) لوصلات ‎ginal nN‏ على فوسفور في الأوليجومر نقية فاغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎N‏ ‏5 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)» يحتوي الأوليجومر على على الأقل 2 وصلات متجاورة نقية ‎Gals‏ ‏محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من 50 أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات 1 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 7 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 3 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها 0 وصلات « استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 0 ‎Ud)‏ صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)» يحتوي الأوليجومر على على الأقل 4 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎nN‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎Nn‏ رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 5 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ ‏5 أو ط©8). في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور
(حيث تكون ‎Wyn‏ صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 6 وصلات متجاورة نقية ‎Geld‏ محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎Nn‏ رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو ‎(LST‏ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 7 وصلات متجاورة نقية ‎Gal‏ ‏5 محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات
الأوليجومر التي لها وصلات 1 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 7 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 8 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات 0 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎WN‏ صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي
0 الأوليجومر على على الأقل 9 وصلات متجاورة نقية ‎ahd‏ محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎Nn‏ رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 10 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ ‏أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور
(حيث تكون ‎Wyn‏ صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 11 وصلات متجاورة نقية ‎Geld‏ محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎Nn‏ رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)» يحتوي الأوليجومر على على الأقل 12 وصلات متجاورة نقية ‎Gah‏ ‏محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات
0 الأوليجومر التي لها وصلات ‎٠‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‏ رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 13 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات 0 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎WN‏ صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 14 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس
5 الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎nN‏ ‏استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎Nn‏ رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر
على على الأقل 15 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي
(أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على
فوسفور (حيث تكون ‏ رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 16
وصلات متجاورة نقية ‎Ga)‏ محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏
في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎nN‏
رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 17 وصلات متجاورة نقية
فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات
الأوليجومر التي لها وصلات 1 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 7 رقمًا صحيحًا يبلغ
1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 18 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على 0 فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها
وصلات 0 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎WN‏ صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي
الأوليجومر على على الأقل 19 وصلات متجاورة نقية ‎Ud‏ محتوية على فوسفور لها نفس
الاتجاه الفراغي (أي من ‎(RP SP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎nN‏
استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎Nn‏ رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر 5 على على الأقل 20 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي
(أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏
9.أوليجومر مورفولينو ات
تتعلق التجسيدات النموذجية للكشف بأوليجومر فوسفورو داي أميدات مورفولينو ات له الصيغة
البنائية التالية:
— 4 5 — ‎Tr‏ 1 ‎N‏ ‎H,C_ |‏ ‎_N—P=0‏ ‏هم ‎HC‏ ‎Xr"‏ ‎N‏ ‏وكما يوصف فى الشكل 12 ‎Summerton, J., et al., Antisense & Nucleic Acid‏ ‎Drug Development, 7: 187-195 (1997)‏ يُقصد أن تُغطي مركبات المورفولينو كما يوصف هنا كل الأيزومرات الفراغية والمماثلات الكيميائية الخاصة بالصيغة البنائية العامة السابقة. يتم ذكر السمات المميزة للتخليق؛ الصيغ البنائية؛ والريط الخاصة بالأوليجومرات من المورفولينو بالتفصيل في طلبات براءات الاختراع الأمريكية أرقام : 5 5,217,866« 5,142,047 5,034,506 ¢5,166,315 5,521,063« 5,506,337 8,076,476< و8,299,206؛ التي يتم تضمينها كلها هنا كمراجع. في تجسيدات معينة؛ يتم ترافق مورفولينو عند الطرف 5 ”أو الطرف 3 "من الأوليجومر مع شطر ‎LY 0‏ لزيادة ثباته و/أو قابليته للذويان. تتضمن الأذناب النموذجية: ‎HO‏ ‏3 ‎N‏ ‏0 ‏سات ‏0 ‏صورة ‎oY‏ ¢
_— 5 5 _— ‎NH,‏ 0 ‎J‏ ‎oem,‏ ‏} ‏صورة ب ؛و ‎OH‏ ‎dogs‏ ‏في تجسيدات متنوعة؛ يكون يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ وفقًا للكشف ‎ay‏ ‏للصيغة )1( ٍ ‎Nu‏ بحب ‎TT‏ ‎Nu 5‏ <> ‎N‏ ‏»اه ‏8 >" ‎J Nu 3‏ ‎N‏ ‎A‏ ‎HN 0‏ ‎HoN 0:‏ ‎NH‏ 1 ‎PY‏ ' صورة 0
— 6 5 — 0( أو ملح مقبول صيدليًا ‎(die‏ حيث: تكون كل نالا ‎Ble‏ عن قاعدة نووية يتم أخذها لتكوين متوالية استهداف؛ تكون 1 ‎Ble‏ عن شق يتم اختياره من: ‎NH, 1 0 0‏ 0 3 ‎N‏ ‏1ج ‎N‏ ‎O=—=P——N(CHa), |‏ ‎O=—=P——N(CHa),‏ ‎OH |‏ ‎A‏ ‏5 صورة ‎NY‏ ¢ صورة ‎NY‏ ¢ وصورة ¢ تكون ‎R1‏ عبار عن ‎C1-C6‏ ألكيل؛ ‎Cun‏ تكون متوالية الاستهداف ‎Lacie‏ لموقع تلدين الإكسون 53 في ديستروفين ‎MRNA‏ الأولي الذي يُطلق عليه (36+60+)153/8. ‎hr‏ ‎HO‏ ‏3 ‏0 ‏ ‎Te‏ ‏0 ‏في تجسيدات متنوعة؛ تكون ‎T‏ عبارةً عن صورة ب : 0 فى تجسيدات متنوعة؛ تكون ‎RI‏ عبار عن ميثيل» ‎«Jal «CF2CI (CFCI2 (CCI3 (CF3‏ ‎propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, t-butyl, 2073 » 3‏
— 7 5 — ‎pentyl, isopentyl, neopentyl, hexyl, isohexyl, 3—methylpentyl, 2,2-‏ ‎.dimethylbutyl, or 2,3—-dimethylbutyl‏ في بعض التجسيدات؛ يكون مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ له الصيغة )1( ‎Ble‏ عن حمض هيدروكلوريك ‎(HCI) hydrochloric acid‏ أو ملح منه. في تجسيدات معينة؛ يكون ملح ‎Bie 10 5‏ عن ملح ‎H6HCI‏ ‏في بعض التجسيدات؛ يتم اختيار كل نالآ على حدة من ‎cytosine (C), guanine (G),‏ ‎thymine (T), adenine (A), 5-methylcytosine (SmC), uracil (V), and‏ ‎-hypoxanthine (I)‏ في بعض التجسيدات»؛ تكون متوالية الاستهداف هي المتوالية رقم: 1 )-5° ‎((GTTGCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTC-3" 0‏ حيث تكون كل ثايمين (1) ‎Ble‏ عن اختياريًا يوراسيل (لا). ‎hr‏ ‎HO‏ ‏3 ‎N‏ ‏@ ‎A‏ ‏} ‏في تجسيدات متنوعة؛ تكون ‎hae ble T‏ 7# ؛ وتكون متوالية الاستهداف هي المتوالية رقم:1 ‎«(5’-GTTGCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTC-37)‏ ‏حيث تكون كل ثايمين (1) ‎Ble‏ عن اختياريًا يوراسيل (لا). ‎hr‏ ‎HO‏ ‏3 ‎N‏ ‏9 ‎A‏ ‏} ‏5 في تجسيدات متنوعة؛ تكون 1 عبارةً عن صورة ‎oY‏
— 8 5 — ¢ وتكون متوالية الاستهداف هي المتوالية رقم:1 ‎(5’-GTTGCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTC-3)‏ ‏في يعض التجسيدات؛ بما في ذلك على سبيل المثال؛ يعض التجسيدات التي لها الصيغة 10 يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ وفقًا للكشف وفقًا للصيغة (اا): ‎A X‏ :8 "1# ااا ارج ‎my a‏ > ° ‎u u‏ 0 ‎U0 @ 0 1 Jo H J H J‏ ‎N...O 1 N 8 N 58 g‏ 0 - 0 ‎Tr rT‏ ‎HC op, 30 en,‏ ‎HN HN HN‏ 24 بور سمي ‎nS oS‏ ‎(I‏ ‏أو ملح مقبول ‎Wana‏ منه؛ حيث: تكون كل ‎Ble NU‏ عن قاعدة نووية يتم أخذها لتكوين متوالية استهداف متممة لموقع تلدين الإكسون 53 في ديستروفين ‎MRNA‏ الأولي الذي يُطلق عليه ‎H53A(+36+60)‏ ‏10 في بعض التجسيدات؛ يتم اختيار كل ‎Nu‏ على حدة من سيتوزين ‎«(C)‏ جوانين ‎«(G)‏ ثايمين ‎«(T)‏ ‏أدينين ‎«(A)‏ 5-ميثيل سيتوزين ‎(SMC)‏ يوراسيل (لا)؛ وهيبوكسانثين )1( في تجسيدات متنوعة؛ تكون كل ‎NU‏ من 1 إلى 25 و5" إلى 3" عبارةً عن (المتوالية رقم:1): ]097[ | 09[ | ]099[ 1 101021 ]01[ |]0104[ | 01[ | [0106] | 01[ ]8 ]01 ]03 ]05 ]07 رقم رقم رقم رقم رقم لموضع ‎Nu‏ | لموضع ‎Nu‏ | لموضع ‎Nu‏ | لموضع ‎١١ Nu‏ لموضع ‎Nu‏ ‏1’5 1’5 1°5 1’5 إلى ]0100 إلى إلى إلى 3 3 3 3
‏إلى‎ 5 3 ]01 ]0116[ |) [O01 | [0114] [01 | ]0112[| [01 | ]0110[ [O01 | [0108] 17] 15] 13] 11] 09] 21 16 11 6 1
X G G 0 6 ]01 [0126] | [01 | ]0124[ | [01 | ]0122[| [01 | ]0120[ [01 | [0118] 27] 25] 23] 21] 19] 22 17 12 7 2 6 ‏م‎ ‎[01 | [0136] | [01 | ]0134[ | [01 | ]0132[ | [01 | ]0130[ [01 | [0128] 37] 35] 33] 31] 29] 23 18 13 8 3
X A X 0
— 0 6 — ]0138[ | 01[ ]01401[ | 01[ ]0142[ | 01[ | ]0144[ | 01[ ]0146[ | 01[ ]39 ]41 ]43 ]45 ]47 4 9 14 19 24 ‎X G C C G‏ ]0148[ | 01[ ]01501[ | 01[ ]0152[ | 01[ | ]0154[ | 01[ ]0156[ | 01[ ]49 ]51 ]53 ]55 ]57
‎C G X G C‏ ‎NH, HoN‏ .2 0 ‎N‏ 5 ملس حيث تكون ه ‎Ble‏ عن صورة ‎me‏ تكون © ‎ble‏ عن صورة ‎whe‏ ؛ تكون 6 ‎Ble‏ ‏0 0 0 ‎NH N je‏ ضر دم \ / ‎Pn So 5 N ’‏ عن صورة سل , وتكون ‎Ble X‏ عن صورة ‏ سل أو صورة ‎٠ whe‏ في 0 حك مض تجسيدات معينة؛ تكون ‎XK‏ عبارة عن صورة سلس على حدة. في بعض التجسيدات؛ يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة )1( يكون ‎Ble 5‏ عن حمض ‎HCl‏ (هيدروكلوربك) أو ملح منه. في تجسيدات معينة؛ يكون ملح ‎HCl‏ عبارة عن ملح ‎6HCI‏ ‏في يعض التجسيدات؛ بما في ذلك على سبيل المثال؛ يعض التجسيدات التي لها الصيغة ‎«(Il‏ ‏يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ ‎Gay‏ للكشف ‎By‏ للصيغة (هاا):
— 1 6 — ‎Ny Ny Ny‏ !3 > 5 ‎Nu Nu‏ 0 ‎doy IAN TAN pL A‏ الل بكب بحب ‎Nw‏ د ميا ‎rol J‏ ‎o " o " 5 A 6HCI‏ " ° اعد | تاي ‎HN HN HN‏ 24 ‎aS HS NN‏ ‎(IIA)‏ ‏حيث تكون كل ‎Ble NU‏ عن قاعدة نووية يتم أخذها لتكوين متوالية استهداف متممة لموقع تلدين الإكسون 53 في ديستروفين ‎MRNA‏ الأولي الذي يُطلق عليه ‎H53A(+36+60)‏ ‏5 في بعض التجسيدات؛ يتم اختيار كل ‎Nu‏ على حدة من سيتوزين ‎«(C)‏ جوانين ‎«(G)‏ ثايمين ‎«(T)‏ ‏أدينين ‎«(A)‏ 5-ميثيل سيتوزين ‎(SMC)‏ يوراسيل (لا)؛ وهيبوكسانثين )1( في تجسيدات متنوعة؛ تكون كل نالا من 1 إلى 25 و5” إلى 3" ‎Ble‏ عن (المتوالية رقم:1): ‎]01١ ]0160[ | [01 | [0158]‏ | [0162] | 01[ | ]0164[ | 01[ | ]0166[ ]01[ ]59 ]61 ]63 ]65 ]67 رقم رقم رقم رقم رقم الموضع | نال | الموضع | ‎NU‏ | الموضع | نالا | الموضع | ‎NU‏ | الموضع | ‎NU‏ ‏5 إلى 5 إلى 5 إلى 5 إلى 5 إلى 3 3 3 3 3 ]0168[ | 01[ |]0170[ |ا01] |]0172[ 0174[|]01] |0176[|]01] ]01[ ]69 ]71 ]73 ]75 ]77 1 6 11 16 21 ‎X G G Cc G‏
]01١ [0186] | ]01 | ]0184[ | [01 | ]0182[ [01 | ]0160[ [01 | [0178] 87] 85] 83] 81] 79] 22 17 12 7 2 6 ‏م‎ ‎]01١ [0196] | ]01 | [0194] | [01 | ]0192[ | ]01 | ]0190[ [01 | [0188] 97] 95] 93] 91] 89] 23 18 13 8 3
X A X 0
[02] [0206] | [02 | [0204] | [02] [0202] | [02 | [0200] | [01 | [0198] 07] 05] 03] 01] 99] 24 19 14 9 4
X G 0 0 6
[02] [0216] | [02] [0214] | [02 | ]0212[ | [02 | [0210] | [02 | [0208] 17] 15] 13] 11] 09] 20 15 10 5 0 6 6 0
— 6 3 —
NH, HN ® oP 4
No 5 N
Ble 6 ‏؛ تكون‎ whe ةروص ‏عن‎ ble © ‏تكون‎ me ‏عن صورة‎ le A ‏حيث تكون‎ 0 0 9 ‏رض‎ NH N je / \ ‏ده‎ ‎oP So 8 N : ‏عن صورة سل أو صورة سل .في‎ le X ‏وتكون‎ » le ‏عن صورة‎ 0 ‏حك‎ ‎No تجسيدات معينة؛ تكون كل ‎Ble X‏ عن صورة سلب . فى بعض التجسيدات بما فى ذلك؛ على سبيل ‎(JU‏ تجسيدات مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ والتي لها الصيغة )11( والصيغة ‎(IIA)‏ تكون متوالية الاستهداف هي المتوالية رقم:1
Hle )1( ‏حيث تكون كل ثايمين‎ (5°-GTTGCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTC-3’) عن اختياريًا يوراسيل (لا). فى تجسيدات متنوعة بما فى ذلك؛ على سبيل ‎(JU‏ تجسيدات مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ والتي لها الصيغة ‎(I)‏ والصيغة (هاا)؛ تكون متوالية الاستهداف هي المتوالية رقم:1 .)5:-611600100661101686616116-3(( 0 فى بعض التجسيدات؛ بما فى ذلك؛ على سبيل المثال» تجسيدات مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ والتي لها الصيغة (ا)؛ يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ وفقًا للكشف وفقًا للصيغة (!١اا):‏
_— 4 6 _— اتفاسل ‎Cal T‏ ب ‎ny Rr‏ هن ‎ped‏ ‎A : 4 <0 nb, = ,‏ ~ ب 3 0 . 1 { اهرك ‎by LLY RLY‏ ب ‎T ¥ 4 To‏ 7 قوتي ميا ‎t‏ بخ } يح ‎A, “‏ ا ُ ا ‎TEND ag‏ ‎i or >‏ الا الا ل ا ال هر ‎el‏ ال ‎srs Fort‏ ‎PN i NY 3 Ne Sr <3 ِ‏ لشي 1 ‎i 2 >‏ ٍ 7 " > انح ‎Noy‏ ~ ناض ‎LRA SR eee EN ee Ty‏ ‎ake de TG TRY et‏ 0 1 ب لد ‎on™ Spt‏ نآ ‎i SE‏ ‎pe eT‏ 27 ع ‎“dy‏ كب ا ‎pe &‏ ا ‎TE Hg Coney‏ - ا لا ‎Vee LE‏ ‎ca‏ نع ‎sy A Ry oh‏ خا ‎Pd‏ ‎hme TLE Lele Ty‏ ا اهمسا ترما بن 8 با ‎EE AE‏ اد ا 5 ‎a A A ~~ ar‏ ب “ ‎J‏ 1 ‎oe Te Le he 1 “ort Tp su hem, 0‏ : ا ةك آلا لي ال آل لان + 0 ا 0 ل ب 5 3 ¥ 1 ‎oh‏ 4 5 1 ملم : مايه اط ‎Le‏ 07 بارا ارد سن ‎i. 0 £ oo ~r‏ 5 . + مرب ‎La g cht Ty‏ ا 0 أو ملح مقبول صيدليًا منه. في يعض التجسيدات ¢ يكون مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ له الصيغة ) )| { عبارة عن ‎HCI 5‏ (حمض الهيدروكلوريك) أو ملح منه. في تجسيدات معينة؛ يكون ملح ‎HCI‏ عبارة عن ملح ‎.6HCI‏ ‏فى بعض التجسيدات » ‎La‏ فى ‎eld‏ على سبيل المتال؛ تجسيدات مترافقات ‎J‏ لأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ ‎ally‏ لها الصيغة (!ا!)؛ يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ ‎Gy‏ للكشف ‎Gs,‏ للصيغة (ذااا):
— 6 5 — ‏ا ااا ا لكا هنا 2 ا‎ : Jad [an ‏ل الفأصل‎ = est z on w > 1 3 ‏ا نم > 4 > لا حوب ا :0 ا‎ 2 3 2 ‏4ع‎ tr 0: 3 a A he ‏اليا لي الا‎ 1: a ‏قا"‎ TY YR ie t, ‏ان ل‎ i A ~ LA 8 pd hs “
CF Tog” ‏ا اش‎ min : = I] ms ‏لام‎ kN ‏مب اا ملا لس‎ TAT ٠8 ‏را ا‎ (J ‏اميك ما‎ © 5 " pee 1 ْ Jes i Po 0 ‏الم اي 1 ما‎ EN LN hE 8 ٍ 1 hs ) - ‏حي‎ gst UE pr ~ me gt FY, 01 Tr 1 * ‏مع يي ام 7ت ال‎ 3 T Fond LA Nee ‏اك‎ 1: 0 ‏ل“ ص مب‎ ee > : 4 3 wi =, 8 Sofie : = = ep te 837 3 2: 1 ‏لل‎ ‎EU ‏ااا‎ AE 8 Toy hed ‏هد‎ ;
Yo Ny | ‏ب‎ ‏بحر ا ب ايكيا : ب‎ 8 0 I ~~. A - ho i 4 4 i 0 $e ‏ا‎ 0 OY i 0 T
EY UTE ad gab 0 y T tT LJ } ‏ب اا سن بح الي ب 1 :0 بت ّ 1 ا‎ ‏الخ‎ in Ng Sarl ‏لآ اضر‎ sin on ‏ا‎ shy ‏محا ا ا ل يم ُو ان‎ 2 EE : ) 1 ¥ et oy + ¥ = { ¥ i oe i 5 ae wn
Ss 7 yr T 3 a 8 : ‏ا ل‎ 0 a cob ‏اال حي‎ ٍ 3 Sp ey SN Sy 1 © Ae 8 ‏ا لان كه ماما‎ RON SCENE ‏ل‎ 83
E50 ‏ا ادا‎ Ae 1 Y ١ 3 ‏ا اح‎
I T 1 1 ‏با 3 ل‎ ’ A : pra A
TT CL SE 0 ‏الي‎ 5
FE, ‏الفأصل ب‎ Tas T ¥ ‏التتاصيل ؟‎ (IIIA) ‏ع‎ . . . on Z. - . a ‏التجسيد ات وفقا للكشفء بما فى ذلك يعض تجسيد ات مترافقات ا لأوليجومر المضادة‎ any ‏فى‎ ‏ع‎ ‏لأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ والتى‎ J ‏لاتجاه النسخ والتى لها الصيغة ) 1 ( وتجسيدات مترافقات‎ ٍِ ‏ع‎ ‎(IV) ‏للصيغة‎ lady ‏الصبغة )1( ن مترافق الأ المضاد لاتجاه النسخ‎ 5 = ‏و‎ ٍ Dal ol Re ‏يحول‎ = $ si, mi ng EN Rat > -
So ‏ب‎ WUE Tt ٠ 2 To i Ty | LA Nee” .
Pool A ey Ia oo 3 or . rE ‏ا‎ 0 i : ed ‏ال‎ Mey eb Ee ‏لخبي‎ oo ep pt vo 3 ‏بح نا‎ Tog TE 4 Ei 0 ‏ا جرال‎ 2 x A
SH a LA] a ning 0. ‏كت‎ Ur Tey LIT , pt : ‏أي ب‎ : 8 1 Eo 0 EN } i = ‏ما‎ * Soi ‏ار‎ NE Ra sa 5 4 1 I > eh - PUR ‏إن ال‎ Ee Lt X= 1 ‏اي لاد لاب‎ ‏ا بلي شح‎ YS or ‏لا‎ ‎- + 7 3 0 Ho, wide . ng; a 3 0 1 7 ٍْ he 0 ‏بض‎ : ; 3 { ِ ~ oy 3° ‏را‎ ‎won ‏الخ ات ذا ا لد امي الهم‎ 1 4 % Ly ‏الاب‎ Ly Ve tJ EE i
Sat ‏ب‎ Spe md aren: ow we Jo ‏ب‎ A sn Toy a Ade LS Aft 0 1 ‏يخا ا‎ Tr CTL ‏امات‎ ‎T Y hy go ~ 8 Ry = A ‏اما‎ ‎Need ie ng “ofa ‏اج‎ Ion “, he nga UL elt A ! bots Hog Rw wo T ‏لان لتخم ا ام‎ 0 ‏ال ا ا‎ CY { 8 1 ‏ز‎ 1 3 . J 4 + ‏ن‎ w= ee ; 0 ‏د ان‎ TLL et ae ye : ] + > - ‏ا‎ FA > ّ oy ‏ا 03 ل > م‎ ley Ls ‏3ب‎ SE ‏اليا‎ ‎Set = ! } ati . sg : ny . TT ‏ب‎ ' Gay ‏الفاصل ا‎ ge Ai, 1 be aid (IV) 0 - ‏ع‎ ‏أو ملح مقبول صيدليًا منه.‎
— 6 6 — في بعض التجسيدات؛ يكون مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ له الصيغة ‎Ble (IV)‏ عن ‎HCI‏ (حمض الهيدروكلوريك) أو ملح منه. في تجسيدات معينة؛ يكون ملح ‎HCI‏ عبارة عن ملح ‎.6HCI‏ ‏فى بعض التجسيدات؛ بما فى ذلك؛ على سبيل المثال» تجسيدات مترافقات الأوليجومرات المضادة الاتجاه النسخ والتي لها الصيغة ‎(IV)‏ يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ وفقًا للكشف ‎Gg‏ للصيغة ‎(IVA)‏ : الفاصل ج ‎ui‏ ب بلول )0 ‎eR‏ ‏2 بخ 7 ‎Poy vd . oY‏ ل لب ‎NY ¥ LS wy 0‏ ص ‎YY‏ جاب ‎x,‏ اام حو الم[ ‎ore‏ ل جلي ‎LA fag‏ ‎Sr Piet RCN‏ 1 ما لم الى الب ال ‎UN oC‏ ‎rd 8‏ ا ‎TT NEL LS TELL‏ ‎TYG yl LI i‏ ا ‎NTE hE i iy A pn << 1‏ 5 " ابا ‎“of EO SE TL Fmd o‏ ‎be ry % Lyd‏ لقي دايا الحم باح ل الي لت ‎rE SN‏ ‎she‏ ا ‎EE Ce‏ ار لضا ‎TY Ir WN‏ الوا ب الاب نا ‎eee TELL‏ انا : ‎LF To a nh‏ : ًِ 0 ¥ :2 5 8 + ‎IY OY NTR‏ 1 ان ‎wl‏ كبا ب 8 حب ‎Ao FL iY‏ 2 . يدل أل 3ب ا ىل ل ‎hail‏ ج الفاصل ب ا ا ‎(IVA)‏ ‏0. تعديلات واستبدالات القاعدة النووية 0 في تجسيدات معينة؛ يتم تكوين مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بالكشف من قواعد نووية ل ‎RNA‏ وقواعد نووية ل ‎DNA‏ (غالبًا ما تتم الإشارة إليها في المجال على نحو مبسط باعتبارها 'قاعدة"). تُعرف قواعد ‎RNA‏ على نحو شائع باعتبارها أدنين ()؛ يوراسيل (لا)؛ سيتوزين (©) وجوانين (6). تُعرف قواعد ‎DNA‏ على نحو شائع باعتبارها أدنين ‎(A)‏ ثايمين ‎«(T)‏ سيتوزين ‎(C)‏ وجوانين (©). في تجسيدات متنوعة؛ تتألف مترافقات الأوليجومر المضادة ‎olay 5‏ النسخ ‎Gg‏ للكشف من سيتوزين ‎«(C)‏ جوانين ‎«(G)‏ ثايمين ‎«(T)‏ أدينين ‎«(A)‏ 5-ميفل سيتوزين ‎«(SMC)‏ يوراسيل (لا)؛ وهيبوكسانثين )1(
— 7 6 — في تجسيدات معينة؛ قد يتم تعديل واحدة أو أكثر من قواعد ‎of RNA‏ قواعد ‎DNA‏ فى أوليجومر أو استبدالها بقاعدة بخلاف قاعدة ‎RNA‏ أو قاعدة ‎[DNA‏ تتضمن الأوليجومرات المحتوية على قاعدة معدلة أو مستبدلة الأوليجومرات حيث يتم استبدال واحدة أو أكثر من قواعد البيورين أو البيريميدين الموجودة على الأغلب في الأحماض النووية بقواعد أقل شيوعًا أو غير طبيعية. تشتمل القواعد من البيورين على ‎Cpa yu dala‏ مدمجة مع حلقة إيميد ازول » كما يوصف بواسطة الصيغة العامة التالية: ‎CI‏ ‏اوكا ‎FERN‏ ‏ويح فصي - ‎H‏ 3 يعتبر الأدنين والجوانين هما اثنين من قواعد البيورين النووية الموجودة على النحو الأكثر شيوعًا في 0 1 ا لأحماض النووية . تتضمن مركبات البيورين طبيعية الحدوث ‎J‏ لأخرى دون قصر ‎J‏ لأمر على 6-ميثيل أدنين» ‎dine N2‏ جوانين» هيبوكسانثين» و7-ميثيل جوانين. تشتمل القواعد من البيربميدين على حلقة بيربميدين مكونة من ست ذرات كما يوصف بواسطة الصيغة العامة التالية: ‎H‏ ‎H aN PR‏ ‎Ce Cn‏ ‎HH “aN “H‏ 1 بيريميدين ‎Jia‏ سيتوزين؛ يوراسيل؛ وثايمين قواعد من البيريميدين موجودة على النحو الأكثر شيوعًا في الأحماض النووية. تتضمن مركبات البيريميدين طبيعية الحدوث الأخرى؛ دون قصر الأمر على؛
5-ميثيل سيتوزين» 5-هيدروكسي ميثيل سيتوزين» يوراسيل ‎cil)‏ و4-ثيو يوراسيل. في أحد التجسيدات؛ تحتوي الأوليجومرات الموصوفة هنا على قواعد من الثايمين بدلاً من يوراسيل. تتضمن القواعد الأخرى المناسبة؛ إلا أنها ليست قاصرة ‎(lo‏ 2 6-داي أمينو بيورين» حمض أوروتيك؛ أجماتيدين؛ ليزبدين» 2- ثيو بيريميدين (على سبيل المثال» 2-ثيو ‎cabs‏ 2-ثيو ثايمين)» ‎G-Clamp‏ ومشتقاتهاء 5-بيريميدين به استبدال (على سبيل المثال» 5-هالو يوراسيل؛
5-بروبينيل يوراسيل» 5-بروبينيل سيتوزين» 5-أمينو ميثيل يوراسيل» 5-هيدروكسي ميثيل يوراسيل» 5-أمينو ميثيل سيتوزين» 5-هيدروكسي ميثيل سيتوزين» ‎«(Super T‏ 7-دي ‎BI‏ ‏جوانين» 7-دي آزا أدنين» 7-آزا-2» 6-داي أمينو بيورين» 8-آزا-7-دي آزا جوانين» 8-آزا-7- دي آزا أدنين» 8-آزا-7-دي ‎BI‏ -2؛ 6-داي أمينو بيورين 6 ‎Super A (Super‏ رو4ل١-‏
‎Jil 0‏ سيتوزين؛ أو مشتقات منها؛ 112-سيكلو بنيل جوانين (©-60601)؛ 112-سيكلو بنيل-2- أمينو بيورين (80/-60801)؛ و2ل1-بروبيل-2- أمينو بيورين ‎«(Pr=AP)‏ يوراسيل زائف أو مشتقات منها؛ وناتج الانحلال أو القواعد العالمية؛ ‎Jie‏ 2 6-داي فلورو تولوين أو القواعد غير الموجودة مثل مواقع عدم القدرة على المشي (على سبيل المثال» 1-ديوكسي ‎el Gy‏ 2-داي ديوكسي رببوز» 1-ديوكسي-0-2-ميثيل رببوز؛ أو مشتقات بيروليدين حيث قد تم استبدال
‏5 أكسجين الحلقة بنيتروجين ‎BY)‏ ريبوز)). يمكن إيجاد الأمثلة على مشتقات ‎Super G (Super A‏ و1 ‎Super‏ في البراءة الأمريكية 173 ,6,683 ‎«(Epoch Biosciences)‏ التي يتم تضمينها هنا كمرجع بأكملها. تم إظهار أن ‎Pr-AP 5 cPenT-AP «cPenT-G‏ تُقلل من التأثيرات المحفزة للمناعة عند التضمين في ‎Peacock H. et al.
J.
Am.
Chem.
Soc. ) siRNA‏ 9200 ,133 ,2011( يعتبر اليوراسيل الزائف نسخة تمت أزمرتها طبيعية الحدوث من يوراسيل؛
‏0 ب ©-جليكوزيد ‎Yay‏ من لا١-جليكوزيد‏ المعتاد كما في يوريدين. قد يكون لليوريدين الزائف المحتوي على ‎MRNA‏ تخليقي مواصفة أمان محسنة مقارنة باليوريدين المحتوي على ‎WO ( mPVNA‏ 0 المتضمن هنا بأكمله كمرجع). هناك قواعد نووية معينة مفيدة بشكل محدد لزيادة ألفة الارتباط الخاصة بمترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بالكشف. وهي تتضمن مركبات 5- بيريميدين به استبدال» مركبات
‏5 6-آزا بيريميدين ومركبات ‎2-N‏ 6-1 و6-0 بيورين به استبدال؛ بما في ذلك 2-أمينو بروييل
أدنين» 5-بروبينيل يوراسيل و5-بروبينيل سيتوزين. لقد تم إظهار أن مجموعات استبدال 5-ميثيل سيتوزين تزيد من ثبات مضاعف الحمض النووي بمقدار 1,2-0,6 درجة مئوية وتعتبر حاليًا مجموعات استبدال القواعد المفضلة؛ على نحو أكثر تحديدًا عند الدمج مع مجموعات تعديل السكر 0-2-ميثوكسي إيثيل. تتضمن القواعد النووية التوضيحية الإضافية المعدلة تلك التي يتم فيها
استبدال ذرة هيدروجين واحدة على الأقل من القاعدة النووية بذرة فلور. 1. أملاح مقبولة صيدليًا من مترافقات أوليجومر مضادة لاتجاه النسخ قد تحتوي تجسيدات معينة خاصة بمترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والموصوفة بهذه الوثيقة على مجموعة وظيفية قاعدية؛ مثل أمينو أو ألكيل أمينو» وبالتالي؛ تكون قادرة على تكوين أملاح مقبولة صيدليًا باستخدام أحماض مقبولة صيدليًا. يشير المصطلح "أملاح مقبولة ‎"Wasa‏
0 في هذا الصدد؛ إلى أملاح إضافة الحمض العضوي وغير العضوية غير السامة نسبيًا من مترافقات أوليجومر مضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف الحالي. يمكن تحضير هذه الأملاح في الموقع في مادة الإعطاء الناقلة أو عملية تصنيع صورة الجرعة؛ أو عن طريق تفاعل على نحو منفصل مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ منقى خاص بالكشف في صورة القاعدة الحرة منه مع حمض عضوي أو غير عضوي ملائم؛ وعزل الملح المتكون أثناء عملية التنقية اللاحقة.
5 تتضمن الأملاح التوضيحية أملاح الهيدرو بروميد» هيدرو كلوريد» سلفات؛ مترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ لاكتات؛ توسيلات؛ سيترات؛ ماليات؛ فيومارات؛ سكسينات؛ طرطرات؛ نافثيلات؛ مسيلات؛ جلوكو هبتونات؛ لاكتوبيونات؛ ولوريل سلفونات وما شابه. (انظر؛ على سبيل المثال» —66:1 ‎Berge et al. (1977) "Pharmaceutical Salts’, J.
Pharm.
Sci.‏ 19(
تتضمن الأملاح المقبولة صيدليًا الخاصة بمترافقات أوليجومر مضادة لاتجاه النسخ موضوع الطلب الأملاح غير السامة التقليدية أو أملاح الأمونيوم الرباعية من مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ؛ على سبيل المثال؛ من الأحماض العضوية أو غير العضوية غير السامة. على سبيل المثال؛ تتضمن هذه الأملاح غير السامة التقليدية تلك المشتقة من الأحماض غير العضوية مثل هيدرو كلوريد؛ هيدرو بروميك؛ سلفربك»؛ سلفاميك»؛ فوسفوريك؛ نيتريك؛ وما شابه؛ والأملاح التي تم
5 تحضيرها من الأحماض العضوية ‎Jie‏ أسيتيك؛ بروبيونيك» سكسينيك» جليكوليك؛ ستياريك؛
لاكتيك» ماليك» طرطريك؛ سيتريك؛ أسكوربيك؛ بالميتيك؛ مالييك؛ هيدروكسي مالييك؛ فنيل أسيتيك؛ جلوتاميك» بنزويك» ساليسيليك؛ سلفانيليك» 2-أسيتوكسي بنزويك» فيوماريك؛ تولوين سلفونيك؛ ميثان سلفونيك؛ إيثان ‎(gla‏ سلفونيك؛ أوكساليك؛ أيزو ثيونيك؛ وما شابه. في تجسيدات معينة؛ قد تحتوي مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف الحالي على واحدة أو أكثر من المجموعات الوظيفية الحمضية وء بالتالي؛ تكون قادرة على تكوين أملاح مقبولة صيدليًا باستخدام قواعد مقبولة صيدليًا. يشير المصطلح 'أملاح مقبولة صيدليًا" في هذه الحالات إلى أملاح إضافة القاعدة غير السامة نسبيًا غير العضوية والعضوية من مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف الحالي. يمكن بالمثل تحضير هذه الأملاح في الموقع في مادة الإعطاء الناقلة أو عملية تصنيع صورة الجرعة»؛ أو عن طريق تفاعل على 0 نحو منفصل مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والمنقى في صورة الحمض الحر الخاصة به مع قاعدة ملائمة؛ ‎Jie‏ الهيدروكسيد؛ الكربونات أو البيكريونات من كاتيون فلز مقبول ‎Wana‏ مع أمونياء أو مع أمين رئيسي؛ ثانوي أو ثلاثي عضوي مقبول صيدليًا. تتضمن الأملاح القلوية أو القلوية الأرضية التوضيحية أملاح الليثيوم» الصوديوم؛ البوتاسيوم؛ الكالسيوم؛ المجنسيوم؛ والألومينيوم وما شابه. تتضمن مركبات الأمين العضوية التوضيحية المفيدة لتكوين أملاح إضافة 5 القاعدة إيثيل أمين؛ داي إيثيل أمين؛ داي إيثيلين داي أمين؛ إيثانول أمين؛ داي إيثانول أمين» بيبرازين وما شابه. (انظرء على سبيل المثال؛ ‎Berge et al‏ المذكور ‎Lad‏ سبق). 3- الصيغ وأنماط الإعطاء في تجسيدات معينة؛ يوفر الكشف الحالي ‎bua‏ أو تركيبات صيدلية ملائمة للتوصيل العلاجي لمترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ المضادة ‎slat‏ النسخ؛ كما يوصف هنا. ومن ثم؛ في 0 تجسيدات معينة؛ يوفر الكشف الحالي تركيبات مقبولة صيدليًا تشتمل على مقدار فعال ‎Bade‏ من واحد أو أكثر من مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ الموصوفة هناء ‎Elias‏ مع واحدة أو أكثر من المواد الحاملة المقبولة صيدليًا (مواد الإضافة) و/أو المواد المخففة. بينما يكون من الممكن إعطاء مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف الحالي بمفرده؛ يُفضل إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ في صورة صيغة صيدلية (تركيبة). في أحد التجسيدات؛ 5 يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ بالصيغة )1(
يتم وصف طرق توصيل جزيئات الحمض النووي؛ والتي يمكن تطبيقها على مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ ‎By‏ للكشف الحالي؛ على سبيل المثال» في ]6 ‎Akhtar‏ al., 1992, Trends Cell Bio., 2:139; Delivery Strategies for Antisense
Oligonucleotide Therapeutics, ed. Akhtar, 1995, CRC Press; and Sullivan ‏يمكن استخدام هذه البروتوكولات وغيرها لتوصيل أي جزيء‎ wet al, PCT WO 94/02595 5 حمض نووي ‎Bled‏ مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ وفقًا للكشف الحالي. قد تتم صياغة التركيبات الصيدلية الخاصة بالكشف الحالي بشكل خاص للإعطاء في صورة صلبة أو سائلة؛ متضمنة تلك المكيفة لما يلي: (1) الإعطاء عن طريق الفم؛ على سبيل ‎(Jaa‏ جرعات (محاليل أو معلقات مائية أو غير مائية)؛ ‎(al fl‏ تلك المخصصة للشدق؛ تحت اللسان؛ 0 والامتصاص الجهازي؛ الجرعات الكبيرة؛ المساحيق؛ الحبيبات؛ المعاجين للاستخدام على اللسان؛ (2) الإعطاء بالحقن غير المعوي؛ على سبيل المثال؛ بواسطة الحقن تحت الجلد؛ في العضل؛ داخل الوريد أو فوق الجافية في صورة؛ على سبيل المثال؛ محلول أو معلق معقم؛ أو صيغة بإطلاق مستديم؛ (3) التطبيق الموضعي؛ على سبيل المثال» في صورة ‎pi‏ مرهم؛ أو لاصقة بإطلاق متحكم فيه أو إسبراي يتم استخدامه على الجلد؛ (4) مهبليًا أو عبر المستقيم؛ على سبيل المثال»؛ في صورة فرزجة؛ كريم أو رغوة؛ (5) تحت اللسان؛ (6) عبر العين؛ (7) عبر الأدمة؛ أو (8) عبر الأنف. تتضمن بعض الأمثلة الخاصة بالمواد التي يمكنها أن تعمل كمواد حاملة مقبولة صيدليًا؛ دون تحديد: )1( مواد سكرية؛ مثل لاكتوز» جلوكوز وسكروز؛ (2) أنواع النشاء ‎Jie‏ نشا الذرة ونشا البطاطس؛ )3( سيليلوز» ومشتقاتهاء ‎Jie‏ صوديوم كريوكسي ميثيل سيليلوز» إيثيل سيليلوز 0 وسيليلوز أسيتات؛ (4) صمغ كثيراء في صورة مسحوق؛ (5) الشعير؛ (6) الجيلاتين؛ (7) التالك؛ )8( السواغات؛ مثل زيدة الكاكاو وأنواع شمع التحاميل؛ (9) زيوت؛ ‎uy Jie‏ الفول السوداني؛ زيت بذر القطن؛ زيت العُصْفُر؛ زيت السمسم؛ زيت الزيتون» زيت الذرة وزبت فول الصويا؛ (10) مركبات جليكول؛ مثل بروبيلين جليكول؛ (11) مركبات بولي أول؛ مثل جليسيرين» سوربيتول» مانيتول وبولي إيثيلين جليكول؛ )12( إسترات؛ مثل إيثيل أوليات وإيثيل لورات؛ )13( آجار؛ (14) 5 عوامل منظمة؛ مثل مجنسيوم هيدروكسيد وألومينيوم هيدروكسيد؛ (15) حمض ألجينيك؛ (16) ماء
خالي من مولد حمى؛ )17( محلول ملحي متساوي التوتر؛ )18( محلول ‎«Ringer‏ (19) كحول إيثيلي؛ (20) محاليل منظمة للرقم الهيدروجيني؛ (21) بولي إسترات؛ مركبات بولي كربونات و/أو مركبات بولي أنهيدريد؛ و(22) المواد المتوافقة غير السامة الأخرى المستخدمة في الصيغ الصيدلية. تتضمن الأمثلة غير الحصرية الإضافية على العوامل الملائمة للصياغة مع مترافقات الأوليجومر
المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف الحالي: الأحماض النووية المترافقة مع ‎PEG‏ الأحماض النووية المترافقة مع الشحم الفوسفوري؛ الأحماض النووية المحتوية على أشطار آلفة للشحم؛ مركبات فوسفورو ثيوات؛ متبطات ا-جليكو بروتين (مثل ‎(Pluronic PBS‏ التي يمكنها تعزيز دخول العقاقير في الأنسجة المتنوعة؛ البوليمرات القابلة للتحلل بيولوجيًاء مثل كريات دقيقة من
0 بولي (ا,0-لاكتيد-جليكوليد مشترك) للتوصيل بالإطلاق المستديم بعد الغرس ‎(Emerich, DF‏ ‎al., 1999, Cell Transplant, 8, 47-58) Alkermes, Inc.
Cambridge, Mass‏ آ6.؛ وجسيمات بحجم النانو محملة؛ مثل تلك المكونة من بولي بيوتيل سيانو أكريلات؛ التي يمكنها توصيل العقاقير عبر الحائل الذَّمَوِي ‎Ld‏ ويمكنها تغيير آليات الامتصاص الخاصة بالخلايا العصبية )1999 ,941-949 ,23 ‎.(Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry,‏
5 يُظهر الكشف ‎Wal‏ استخدام التركيبة المشتملة على جسيمات شحمية معدلة السطح محتوية على شحوم من بولي ‎onli)‏ جليكول) ‎poly(ethylene glycol)‏ (06) (معدلة ب ‎(PEG‏ متفرعة وغير متفرعة أو توليفات من ذلك؛ أو جسيمات شحمية دوارة طويلة أو جسيمات شحمية انسلالية). يمكن أيضًا أن تشتمل مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف على جزيئات 6 ملحقة تساهميًا بأوزان جزيئية متنوعة. توفر هذه الصيغ طريقة لزيادة تراكم العقاقير في
0 الأنسجة المستهدفة. تقاوم هذه الفئة من المواد الحاملة للعقاقير الطهايّة والإزالة بواسطة جُمْلَة البلْعمِيّاتَ والوّحيدات ‎MPS)‏ أو ‎«(RES‏ وبالتالي تسمح بأزمنة دورة دموية أطول وتعرض نسيج محسن للعقار المغلف ( :2601-2627 ,95 ,1995 ‎Lasic et al.
Chem.
Rev.‏ ‎(Ishiwata et al., Chem.
Pharm.
Bull. 1995, 43, 1005-1‏ لقد تم إظهار أن بعضًا من الجسيمات الشحمية يتراكم انتقائيًا في ‎cabg¥)‏ من المفترض عن طريق ‎Cail‏
5 والاحتجاز في الأنسجة المستهدفة حديثة التوعي ( ,267 ,1995 ‎Lasic et al., Science‏
.)1275-1276: Oku et al., 1995, Biochim.
Biophys.
Acta, 1238, 86-0
تُعزز الجسيمات الشحمية الدؤارة الطويلة من الحركيات الدوائية والحركيات الديناميكية الخاصة ب
‎(RNA 5 DNA‏ مقارنة تحديدًا بالجسيمات الشحمية الكاتيونية التقليدية المعروفة بالتراكم في أنسجة
‎«Liu et al., J.
Biol.
Chem. 1995, 42, 24864-24870; Choi et al) MPS‏ نشرة الطلب الدولي رقم 10391/96؛ ‎«Ansell et al‏ نشرة الطلب الدولي رقم ¢10390/96
‎«Holland et al‏ نشرة الطلب الدولي رقم 10392/96). من المحتمل أيضًا أن تحمي
‏الجسيمات الشحمية الدوارة الطويلة العقاقير من تحلل إنزيم نيوكلياز إلى حدٍ أكبر مقارنة
‏بالجسيمات الشحمية الكاتيونية؛ اعتمادًا على قدرتها على تجنب التراكم في أنسجة ‎MPS‏ العدوانية
‏أيضيًا ‎Jie‏ الكبد والطحال.
‏0 في تجسيد إضافي؛ يتضمن الكشف الحالي أوليجومر تركيبات صيدلية من مترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ تم تحضيرها للتوصيل كما وصف في طلبات براءات الاختراع الأمريكية أرقام 6,692,911« 7,163,695 و7,070,807. في هذا الصدد؛ في أحد التجسيدات؛ يوفر الكشف الحالي مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف الحالي في تركيبة مشتملة على بوليمرات مشتركة من ليزين وهيستيدين ‎(HK) lysine and histidine‏ كما وصف في طلبات
‏5 براءات الاختراع الأمريكية أرقام 5 7,070,807 و 6,692,911 إما بمفردها أو في توليفة مع ‎PEG‏ (على سبيل ‎PEG (Jill‏ متفرع أو غير متفرع أو خليط من كلاهما)؛ في توليفة مع ‎PEG‏ وشطر استهداف أو أي مما سبق في توليفة مع عامل مرتبط تبادليًا. في تجسيدات معينة؛ يوفر الكشف الحالي مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ في تركيبات صيدلية مشتملة على بولي هيستيدين معدل بحمض جلوكونيك أو بولي هيستيدين/ترانسفيرين-بولي ليزين
‏20 معالج بجلوكونيل. سيدرك أحد ذوي المهارة في المجال أنه قد يتم استبدال الأحماض الأمينية بالخصائص المشابهة ل ‎His‏ و5لاا داخل التركيبة. يمكن أيضًا أن توجد عوامل الترطيب؛ المستحلبات والمزلقات»)مثل صوديوم لوريل سلفات ومجنسيوم ستيارات)؛ إضافة إلى العوامل الملونة؛ عوامل الإطلاق»؛ عوامل التغليف؛ عوامل التحلية؛ إكساب النكهة والتعطير؛ المواد الحافظة ومضادات الأكسدة في التركيبات.
تتضمن الأمثلة على مضادات الأكسدة المقبولة صيدليًا: (1) مضادات الأكسدة ‎ALG‏ للذويان في الماء؛ ‎Jie‏ حمض أسكورييك؛ سيستيين هيدرو كلوريد؛ صوديوم ‎«lila‏ صوديوم ميتا بيسلفيت؛ صوديوم سلفيت وما شابه؛ (2) مضادات الأكسدة ‎ALG‏ للذويان في الزيت؛ مثل أسكورييل بالميتات» هيدروكسي أنيزول معالج بالبيوتيل ‎«(BHA) butylated hydroxyanisole‏
هيدروكسي تولوين معالج بالبيوتيل ‎butylated hydroxytoluene‏ (8111)؛ ليستين؛ بروبيل جالات؛ ألفا-توكوفيرول» وما شابه؛ و(3) العوامل الخلابية الفلزية؛ ‎Jie‏ حمض سيتريك؛ حمض داي إيثيلين داي أمين تترا أسيتيك ‎«((EDTA) ethylenediamine tetraacetic acid‏ سوربيتول» حمض طرطريك؛ حمض فوسفوريك؛ وما شابه. تتضمن الصيغ الخاصة بالكشف الحالي تلك الملائمة للإعطاء عن طريق الفم؛ الأنف؛ موضييًا
0 (بما في ذلك الشدق وتحت اللسان)؛ المستقيم؛ المهبل و/أو الإعطاء بالحقن غير المعوي. قد يتم تقديم الصيغ على نحوملائم في صورة وحدة جرعة وقد يتم تحضيرها بواسطة أية طرق معروفة جيدًا في مجال الصيدلة. سيتنوع مقدار المكون الفعال الذي يمكن دمجه مع مادة حاملة لإنتاج صورة جرعة فردية اعتمادًا على الخاضع للعلاج الذي يتم علاجه؛ نمط الإعطاء المحدد. سيكون مقدار المكون الفعال الذي يمكن دمجه مع مادة حاملة لإنتاج صورة جرعة فردية بصفة عامة هو
5 مقدار المكون الفعال الذي يُنتج تأثيرًا علاجيًا. بصفة ‎dale‏ سيتراوح هذا المقدار من حوالي 0,1 بالماثة إلى ‎Moa‏ تسع وتسعين بالمائة من المكون الفعال؛ يُفضل من حوالي 5 ‎BLL‏ حوالي 0 بالمائة؛ الأكثر تفضيلاً من حوالي 10 بالمائة إلى حوالي 30 بالمائة. في تجسيدات معينة؛ تشتمل صيغة خاصة بالكشف الحالي على سواغ مختار من مركبات سيكلو ديكسترين؛ مركبات سيليلوز؛ جسيمات شحمية؛ عوامل مكونة للمذيلة؛ على سبيل المثال؛
0 الأحماض الصفراوية؛ والمواد الحاملة البوليمرية؛ على سبيل المثال؛ بولي إسترات ومركبات بولي أنهيدريد؛ ومترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف الحالي. في أحد التجسيدات؛ يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ بالصيغة (!اا). في تجسيدات معينة؛ تؤدي الصيغة السابقة إلى الحصول على مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ وفقًا للكشف الحالي يكون متاحًا بيولوجيًّا عن طريق الفم.
تتضمن طرق تحضير هذه الصيغ أو التركيبات الصيدلية خطوة تضمين مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ وفقًا للكشف الحالي مع المادة الحاملة و اختياريًا؛ واحد أو أكثر من المكونات الإضافية. بشكل عام؛ يتم تحضير الصيغ عن طريق تضمين مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ وفقًا للكشف الحالي على نحو منتظم ووثيق مع المواد الحاملة السائلة؛ أو المواد الحاملة الصلبة المقسمة على نحو دقيق؛ أو كلاهماء ثم؛ إذا لزم الأمرء تشكيل المنتج. قد تكون الصيغ الخاصة بالكشف الملائمة للإعطاء عن طريق الفم في صورة كبسولات؛ برشام؛ حبوب»؛ ‎«all‏ أقراص للمص (باستخدام قاعدة ذات نكهة؛ ‎Bale‏ ما تكون سكروز وسنط أو صمغ الكثيراء)؛ مساحيق؛ حبيبات؛ أو كمحلول أو معلق في مستحلب سائل مائي أو غير مائي؛ أو مستحلب سائل زيت في ماء أو ماء في زبت»؛ أو في صورة إكسير أو شراب»؛ أو في صورة أقراص محلاة للمص (باستخدام قاعدة خاملة؛ مثل الجيلاتين وجليسيرين؛ أو سكروز والسنط) و/أو في صورة محاليل غسول للفم وما شابه؛ كل يحتوي على مقدار محدد مسبقًا من مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎Gy‏ للكشف الحالي في صورة مكون فعال. قد يتم أيضًا إعطاء مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ وفقًا للكشف الحالي في صورة جرعة كبيرة؛ ‎Boal‏ أو معجون. في صور الجرعة الصلبة من الكشف للإعطاء عن طريق الفم (كبسولات؛ ‎abil‏ حبوب؛ حبوب 5 مسكرة؛ مساحيق؛ حبيبات»؛ أقراص استحلاب وما شابه)؛ قد يتم خلط المكون الفعال مع واحدة أو أكثر من المواد الحاملة المقبولة صيدليًا؛ ‎Jie‏ صوديوم سيترات أو داي كالسيوم فوسفات؛ و/أو أي مما يلي: )1( مواد مالئة أو مواد باسطة؛ مثل أنواع ‎(Lal‏ اللاكتوز؛ السكروز» الجلوكوز؛ المانيتول» و/أو حمض سيليسيك؛ )2( عوامل ربط مثل؛ على سبيل المثال» كريوكسي ميثيل سيليلوز؛ مركبات ألجينات؛ جيلاتين؛ بولي فينيل بيروليدون» سكروز و/أو سنط؛ )3( مواد مرطبة؛ مثل جليسرول؛ (4) عوامل تفكيك؛ ‎Jie‏ آجار-آجار؛ كالسيوم كريونات؛ نشا البطاطس أو التابيوكاء حمض ألجينيك؛ مركبات سيليكات معينة؛ وصوديوم كربونات؛ (5) ‎alge‏ تأخير للمحلول» ‎die‏ بارافين؛ (6) عوامل تعجيل الامتصاص؛ مثل مركبات أمونيوم رياعي وعوامل خافضة للتوتر السطحي؛ مثل بولوكسامير وصوديوم لوريل سلفات؛ (7) عوامل ترطيب؛ مثل؛ على سبيل المثال؛ كحول سيتيل؛ جليسرول مونو ستيارات؛ وعوامل خافضة للتوتر السطحي غير 5 أيونية؛ (8) مواد ماصة؛ ‎Jie‏ كاولين وطفل بنتونيت؛ (9) مزلقات؛ مثل التالك؛ كالسيوم ستيارات؛
مجنسيوم ستيارات؛ مركبات بولي إيثيلين جليكول صلبة؛ صوديوم لوريل سلفات؛ زنك ستيارات؛ صوديوم ‎clin‏ حمض ستياربك؛ وخلائط من ذلك؛ )10( عوامل ملونة؛ و(11) عوامل بإطلاق متحكم فيه مثل كروس بوفيدون أو إيثيل سيليلوز. في حالة الكبسولات؛ الأقراص والحبوب؛ قد تشتمل التركيبات الصيدلية ‎Lad‏ على عوامل منظمة. قد يتم ‎Lal‏ استخدام التركيبات الصيدلية الصلبة ذات النوع المشابه في صورة مواد مالئة في كبسولات بغلاف من الجيلاتين اللين والصلب باستخدام هذه السواغات مثل اللاكتوز أو مواد سكر اللبن؛ إضافة إلى مركبات بولي إيثيلين جليكول ذات الوزن الجزيئي العالي وما شابه. قد يتم إعداد قرص عن طريق الضغط أو القولبة؛ اختياريًا باستخدام واحد أو أكثر من المكونات الإضافية. قد يتم تحضير الأقراص المضغوطة باستخدام مادة ربط ‎le)‏ سبيل ‎(JU)‏ جيلاتين أو 0 هيدروكسي بروبيل ميثيل سيليلوز)» مزلق» مادة مخففة خاملة؛ ‎sale‏ حافظة؛ مادة مفككة (على سبيل المثال» صوديوم جليكولات النشا أو صوديوم كربوكسي ميثيل سيليلوز مرتبط ‎(Wali‏ عامل نشط السطح أو مشتت. قد يتم إعداد أقراص مقولبة عن طريق قولبة خليط من المركب في صورة المسحوق المرطب باستخدام مادة مخففة سائلة خاملة في آلة ملائمة. قد يتم اختياريًا تحزيز الأقراص» وصور الجرعة الصلبة ‎GAY)‏ من التركيبات الصيدلية الخاصة 5 بالكشف الحالي؛ ‎die‏ حبوب مسكرة؛ كبسولات؛ حبوب والحبيبات؛ أو تحضيرها باستخدام طلاءات ‎dite]‏ مثل الأغلفة المعوية والأغلفة الأخرى المعروفة جيدًا في مجال الصياغة الصيدلية. قد تتم ‎Lia‏ صياغتها بحيث يتم توفير المكون الفعال ذي الإطلاق البطيء أو المتحكم فيه فيها باستخدام؛ على سبيل المثال؛ هيدروكسي بروبيل ميثيل سيليلوز بنسب متغيرة لتوفير مواصفة الإطلاق المطلوية؛ قوالب البوليمر ‎(GAY)‏ الجسيمات الشحمية و/أو الكريات الدقيقة. قد تتم صياغتها للإطلاق السريع؛ على سبيل المثال؛ التجفيف بالتجميد. قد يتم تعقيمها بواسطة؛ على سبيل المثال؛ الترشيح من خلال مرشح محتجز للبكتيرياء أو عن طريق تضمين عوامل تعقيم في صورة تركيبات صيدلية صلبة معقمة يمكن إذابتها في ماء معقم؛ أو وسط آخر قابل للحقن معقم قبل الاستخدام مباشرة. قد تحتوي أيضًا هذه التركيبات الصيدلية اختياريًا على عوامل إعتام وقد تكون بتركيبة تُطلق المكون الفعال(المكونات الفعالة) فقط أو على نحو مميز؛ في جزءِ معين من 5 القناة المعدية المعوية» ‎(Byles)‏ بطريقة متأخرة. تتضمن الأمثلة على تضمين تركيبات يمكن
استخدامها مواد بوليمرية وأنواع شمع. يمكن أيضًا أن يكون المكون الفعال في صورة مغلفة على نحو دقيق؛ إن كان الأمر ‎(Ele‏ باستخدام واحد أو أكثر من السواغات الموصوفة فيما سبق. تتضمن صور الجرعة السائلة لإعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف عن طريق الفم مستحلبات مقبول ‎(Wana‏ مستحلبات دقيقة؛ محاليل؛ معلقات؛ أنواع شراب وأكاسير. بالإضافة إلى المكون الفعال» قد تحتوي صور الجرعة السائلة على مواد مخففة خاملة مستخدمة على نحو شائع في المجال؛ مثل؛ على سبيل المثال؛ الماء أو المذيبات الأخرى؛ العوامل القابلة للذوبان والمستحلبات؛ ‎Jie‏ كحول إيثيلي؛ كحول أيزو بروبيل؛ ‎dil‏ كربونات؛ إيثيل أسيتات؛ كحول بنزيل؛ بنزيل بنزوات؛ بروبيلين جليكول؛ 1؛ 3-بيوتيلين جليكول؛ زيوت (بشكل محدد؛ بذور القطن؛ المكسرات المجروشة؛ الذرة؛ جنين القمح؛ ‎(gal‏ زبوت الخروع والسمسم)؛ جليسرول؛
0 كحول تترا هيدرو فيوريل» مركبات بولي إيثيلين جليكول وإسترات حمض دهني من سوربيتان» وخلائط من ذلك. إلى جانب المواد المخففة الخاملة؛ يمكن أيضًا أن تتضمن التركيبات الصيدلية الفموية مواد مساعدة ‎alse Jie‏ ترطيب»؛ عوامل استحلاب وتعليق؛ عوامل تحلية؛ إكساب نكهة؛ تلوين» تعطير وعوامل حافظة.
5 قد تحتوي المعلقات؛ بالإضافة إلى المركبات الفعالة. على عوامل تعليق مثل؛ على سبيل المثال؛ مركبات كحول أيزو ستياريل معالجة بالإيثوكسيل» بولي أوكسي إيثيلين سوربيتول وسوربيتان إسترات؛ سيليلوز دقيق ‎lal‏ ألومينيوم ميتا هيدروكسيد؛ بنتونيت»؛ آجار-آجار وصمغ الكثيراء؛ وخلائط من ذلك. قد يتم تقديم الصيغ للإعطاء عن طريق المستقيم أو المهبل في صورة قمع؛ قد يتم تحضيره عن
0 طريق خلط واحد أو أكثر من مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف مع واحد أو أكثر من السواغات غير المهيجة الملائمة أو المواد الحاملة المشتملة على؛ على سبيل ‎Jal)‏ زيدة الكاكاو» بولي إيثيلين جليكول؛ شمع لقمع أو ساليسيلات؛ ‎(Ally‏ تكون صلبة عند درجة حرارة الغرفة؛ ولكنها سائلة عند درجة حرارة الجسم و» لهذاء ستنصهر في المستقيم أو تجويف المهبل وتُطلق المركب الفعال.
تتضمن الصيغ أو صور الجرعة لإعطاء أوليجومر موضعيًا أو عبر الأدمة كما يتوفر هنا
مساحيق» أنواع إسبراي» ‎cathe‏ معاجين؛ كريمات؛ أنواع غسول» أنواع هلام؛ محاليل؛ رقع لاصقة
ومستنشقات. قد يتم خلط مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ النشطة في ظل ظروف
معقمة مع مادة حاملة مقبولة صيدليًا؛ ومع أية مواد حافظة؛ محاليل منظمة؛ أو مواد دفع قد تكون مطلوية. قد تحتوي المراهم؛ المعاجين» الكريمات وأنواع الهلام على» بالإضافة إلى مركب فعال
خاص بهذا الكشف» سواغات» مثل الدهون الحيوانية والنباتية؛ الزيوت؛ أنواع الشمعء البارافينات؛
‎Lil‏ صمغ الكثيراء؛ مشتقات السيليلوز؛ مركبات بولي إيثيلين جليكول؛ مركبات سيليكون؛ مركبات
‏بنتونيت» حمض سيليسيك؛ التالك وأكسيد الزنك؛ أو خلائط من ذلك.
‏يمكن أن تحتوي المساحيق وأنواع الإسبراي على بالإضافة إلى مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه
‏0 النسخ خاص بالكشف الحالي؛ سواغات مثل لاكتوز؛ تالك؛ حمض سيليسيك؛ ألومينيوم هيدروكسيد؛ مركبات كالسيوم سيليكات ومسحوق بولي أميد؛ أو خلائط من هذه المواد. يمكن أن تحتوي أنواع الإسبراي بشكل إضافي على مواد الدفع المعتادة؛. ‎Jie‏ مركبات كلورو فلورو هيدرو كربون ومركبات الهيدرو كريون التي ليس بها استبدال الطيّارة؛ ‎die‏ بيوتان ويرويان. يكون للرقع اللاصقة عبر الأدمة الفائدة المضافة الخاصة بتوفير توصيل متحكم فيه لمترافق
‏5 أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف الحالي إلى الجسم. يمكن إعداد صور الجرعة هذه عن طريق إذابة أو تشتيت الأوليجومر في الوسط الملائم. يمكن أيضًا استخدام معززات الامتصاص لزيادة دفق العامل عبر الجلد. يمكن التحكم في معدل هذا الدفق إما عن طريق توفير معدل تحكم في الغشاء أو تشتيت العامل في قالب بوليمر أو هلام؛ من بين الطرق الأخرى المعروفة في المجال.
‏0 قد تشتمل التركيبات الصيدلية الملائمة للإعطاء بالحقن غير المعوي على واحد أو أكثر من مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بالكشف في توليفة مع واحد أو أكثر من المحاليل المائية أو غير المائية متساوية التوتر المعقمة المقبولة صيدليًا؛ المشتتات؛ المعلقات أو المستحلبات؛ أو المساحيق المعقمة اليت قد تتم ‎sale)‏ تكوينها في في محاليل أو مشتتات قابلة للحقن معقمة قبل الاستخدام مباشرة؛ قد تحتوي على مواد سكرية؛ مواد كحولية؛ مضادات أكسدة؛
‏5 محاليل منظمة؛ مواد كابحة للبكتيرياء مواد مذابة تجعل الصيغة متساوية التوتر مع دم المتلقي
المقصود أو عوامل التعليق أو إكساب الثخانة. تتضمن الأمثلة على المواد الحاملة المائية وغير المائية الملائمة التي قد يتم استخدامها في التركيبات الصيدلية الخاصة بالكشف الماء؛ ‎(Jl)‏ ‏مركبات بولي ‎Jol‏ (مثل جليسرول؛ بروبيلين جليكول؛ بولي إيثيلين ‎«Jia‏ وما شابه)؛ وخلائط ملائمة من ذلك؛ زيوت نباتية؛ ‎Jie‏ زيت الزبتون؛ وإسترات عضوية ‎ALE‏ للحقن؛ مثل إيثيل أوليات. يمكن الحفاظ على الميوعة ‎(dad)‏ على سبيل ‎(JU‏ عن طريق استخدام مواد مغلفة؛ ‎Jie‏ ‏ليستين» عن طريق الحفاظ على حجم الجسيم المطلوب في حالة المشتتات؛ وعن طريق استخدام عوامل خافضة للتوتر السطحي. في أحد التجسيدات؛ يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ للتركيبة الصيدلية بالصيغة ‎(I)‏ ‏قد تحتوي أيضًاً هذه التركيبات الصيدلية على مواد مساعدة مثل المواد الحافظة؛ عوامل الترطيب؛ 0 عوامل الاستحلاب وعوامل التشتيت. قد يتم ضمان منع تأثير الكائنات ‎dal)‏ الدقيقة على مترافقات الأوليجومر موضوع الطلب عن طريق تضمين عوامل مضادة للبكتيريا ومضادة للفطريات متنوعة؛ على سبيل المثال؛ بارابين؛ كلورو بيوتانول»؛ حمض فينول سوربيك؛ وما شابه. قد يكون من المطلوب ‎Lad‏ تضمين عوامل متساوية التوتر» ‎die‏ مواد سكرية؛ صوديوم كلوريد؛ وما شابه في التركيبات. بالإضافة إلى ذلك؛ قد يتم تحقيق الامتصاص المطوّل للصورة الصيدلية القابلة للحقن 5 عن طريق تضمين العوامل التي تؤخر الامتصاص مثل ألومينيوم مونو ستيارات والجيلاتين. في بعض الحالات؛ من أجل إطالة تأثير عقار؛ يكون من المطلوب إبطاء امتصاص العقار من الحقن تحت الجلد أو في العضل. قد يتم إتمام هذا عن طريق استخدام معلق سائل من مادة متبارة أو غير ‎pla‏ لها ‎ALG‏ للذويان في الماء ضعيفة؛ من بين الطرق الأخرى المعروفة في المجال. بعد ذلك يعتمد معدل امتصاص العقار على معدل ذويانه الذي؛ بدوره؛ قد يعتمد على حجم البلورة 0 والصورة المتبلرة. على نحو ‎cay‏ يتم تنفيذ الامتصاص المتأخر لصورة عقار معطاة بطريق الحقن غير المعوي عن طريق إذابة أو تعليق العقار في مادة ناقلة ‎Ain)‏ ‏قد يتم إعداد الصور المدخرة القابلة للحقن عن طريق تكوين قوالب تضمين دقيق من مترافقات الأوليجومر موضوع الطلب في بوليمرات قابلة للتحلل بيولوجيًا ‎Jie‏ بولي لاكتيد-بولي جليكوليد. اعتمادًا على نسبة الأوليجومر إلى البوليمر؛ وطبيعة البوليمر المحدد المستخدم؛ يمكن التحكم في معدل إطلاق الأوليجومر. تتضمن الأمثلة على البوليمرات الأخرى القابلة للتحلل بيولوجيًا بولي
— 8 0 —
(أورثو إسترات) وبولي (أنهيدريدات). قد يتم ‎Load‏ تحضير الصيغ المدخرة القابلة للحقن عن طريق احتجاز العقار في جسيمات شحمية أو مستحلبات دقيقة تكون متوافقة مع أنسجة الجسم. عندما يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف الحالي في صورة مواد صيدلية؛ إلى الإنسان والحيوانات؛ يمكن إعطائها فى حد ذاتها أو كتركيبة صيدلية تحوي؛
على سبيل المثال» من 0,1 إلأأى 9699 (الأفضل» من 10 إلى %30( من مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ في توليفة مع مادة حاملة مقبولة صيدليًا. قد يتم إعطاء صيغ أو مستحضرات من الكشف الحالي عن طريق الفم؛ بطريق الحقن غير المعوي؛ موضعيًا؛ أو عبر المستقيم. يتم إعطائها نمطيًا في صور ملائمة لكل طريقة إعطاء. على سبيل المثال؛ يتم إعطائها في صورة أقراص أو كبسولات؛ بالحقن؛ الاستنشاق؛ غسول للعين»
0 1 مرهم قمع التسريب ¢ أو موضعيًا بواسطة غسول أو مرهم ¢ وعن طريق المستقيم بواسطة أقماع. بغض النظر عن طريقة الإعطاء المختارة؛ قد تتم صياغة مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بالكشف الحالي؛ التي قد يتم استخدامها في صورة مميأة ملائمة؛ و/أو التركيبات الصيدلية الخاصة بالكشف الحالى» فى صور جرعة مقبولة صيدليًا بواسطة الطرق التقليدية المعروفة لهؤلاء من ذوي المهارة في المجال. قد تتنوع مستويات الجرعة الفعلية من المكونات
5 الفعالة في التركيبات الصيدلية الخاصة بهذا الكشف بحيث يتم الحصول على مقدار من المكون الفعال يكون فعالاً لتحقيق الاستجابة العلاجية المطلوية لمريض بعينه؛ تركيبة؛ ونمط إعطاء؛ دون سيعتمد مستوى الجرعة المختار على مجموعة متنوعة من العوامل متضمنة نشاط مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ المحدد الخاص بالكشف الحالي المستخدم؛ أو الإسترء الملح أو الأميد ‎(die‏
0 طريقة الإعطاء؛ توقيت الإعطاء؛ معدل الإفراز أو أيض الأوليجومر المحدد الذي يتم استخدامه؛ معدل ومدى الامتصاص؛ مدة العلاج: العقاقير الأخرى؛ المركبات و/أو المواد المستخدمة في توليفة مع الأوليجومر المحدد المستخدم؛ العمر؛ الجنسء الوزن الحالة؛ الصحة العامة والتاريخ الطبي السابق للمريض الذي يتم ‎candle‏ والعوامل المشابهة المعروفة جيدًا في المجالات الطبية.
يمكن لطبيب بشري أو طبيب بيطري يتمتع بمهارة عادية في المجال أن يُحدد بسهولة ويصف المقدار الفعال من التركيبة الصيدلية المطلوب. على سبيل ‎(JE‏ يمكن أن يبدأ الطبيب البشري أو الطبيب البيطري بجرعات من مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف المستخدمة في التركيبة الصيدلية عند مستويات أقل من تلك المطلوية من أجل تحقيق التأثير العلاجي المطلوب ويزيد تدريجيًا من الجرعة حتى يتم تحقيق التأثير المطلوب. بشكل عام؛ يتكون
جرعة يومية ملائمة من مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف هي ذلك المقدار من مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ الذي يمثل الجرعة الأقل الفعالة لإنتاج تأثير علاجي. ستكون هذه الجرعة الفعالة معتمدة بصفة عامة على العوامل الموصوفة بهذه الوثيقة. بصفة عامة؛ ستتراوح الجرعات الفموية؛ داخل الوريد؛ داخل بطين المخ وتحت الجلد من مترافقات الأوليجومر
0 المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بهذا الكشف لمريض؛ عند الاستخدام للتأثيرات الموضحة؛ من حوالي 0,0001 إلى حوالي 100 مجم لكل كجم من وزن الجسم في اليوم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ وفقًا للكشف الحالي بجرعات تبلغ ‎dale‏ حوالي 160-10 مجم/كجم أو 160-20 مجم/كجم. في بعض الحالات؛ قد تكون الجرعات التي تتجاوز 160 مجم/كجم ضرورية. في بعض التجسيدات؛ تتراوح الجرعات التي
5 تعطى داخل الوريد من حوالي 0.5 مجم إلى 160 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ بجرعات تبلغ حوالي 0.5 مجم/كجم؛ 1 مجم/كجم؛ 2 مجم/كجم؛ 3 مجم/كجم؛ 4 مجم/كجم؛ 5 مجم/كجم؛ 6 مجم/كجم؛ 7 مجم/كجم؛ 8 مجم/كجم؛ 9 مجم/كجم؛ أو 10 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ بجرعات تبلغ حوالي 10 مجم/كجم» 11 مجم/كجم» 12 مجم/كجم» 15 مجم/كجم؛
0 18 مجم/كجم؛ 20 مجم/كجم؛ 21 مجم/كجم؛ 25 مجم/كجم؛ 26 مجم/كجم؛ 27 مجم/كجم 28 مجم/كجم؛ 29 مجم/كجم؛ 30 مجم/كجم؛ 31 مجم/كجم؛ 32 مجم/كجم؛ 33 مجم/كجم؛ 34 مجم/كجم؛ 35 مجم/كجم؛ 36 مجم/كجم؛ 37 مجم/كجم؛ 38 مجم/كجم؛ 39 مجم/كجم؛ 40 مجم/كجم؛ 41 مجم/كجم؛ 42 مجم/كجم؛ 43 مجم/كجم؛ 44 مجم/كجم؛ 45 مجم/كجم؛ 46 مجم/كجم؛ 47 مجم/كجم؛ 48 مجم/كجم؛ 49 مجم/كجم 50 مجم/كجم؛ ‎ST‏ مجم/كجم؛ 52
5 . مجم/كجم؛ 53 مجم/كجم؛ 54 مجم/كجم؛ 55 مجم/كجم؛ 56 مجم/كجم؛ ‎ST‏ مجم/كجم؛ 58
مجم/كجم؛ 59 مجم/كجم؛ 60 مجم/كجم؛ 65 مجم/كجم؛ 70 مجم/كجم؛ 75 مجم/كجم؛ 80 مجم/كجم؛ 85 مجم/كجم؛ 90 مجم/كجم؛ 95 مجم/كجم؛ 100 مجم/كجم؛ 105 مجم/كجم؛ 110 مجم/كجم؛ 115 مجم/كجم» 120 مجم/كجم؛ 125 مجم/كجم؛ 130 مجم/كجم؛ 135 مجم/كجم 0 مجم/كجم؛ 145 مجم/كجم؛ 150 مجم/كجم؛ 155 مجم/كجم؛ 160 مجم/كجم؛ بما في ذلك جميع الأرقام الصحيحة التي بينها. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء الأوليجومر عند 10
مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء الأوليجومر عند 20 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء الأوليجومر عند 30 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء الأوليجومر عند 40 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء الأوليجومر عند 60 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء الأوليجومر عند 80 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم
‎elas) 0‏ الأوليجومر عند 160 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء الأوليجومر عند 50 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة )111( بجرعات تبلغ ‎dale‏ حوالي 160-10 مجم/كجم أو 160-20 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ تتراوح جرعات مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ لها الصيغة )11( للإعطاء داخل الوريد من
‏5 حوالي 0.5 مجم إلى 160 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة (!!ا) بجرعات تبلغ حوالي 0.5 مجم/كجم؛ 1 مجم/كجم؛ 2 مجم/كجم؛ 3 مجم/كجم؛ 4 مجم/كجم؛ 5 مجم/كجم؛ 6 مجم/كجم؛ 7 مجم/كجم؛ 8 مجم/كجم؛ 9 مجم/كجم؛ أو 10 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة )1( بجرعات تبلغ حوالي 10 مجم/كجم؛ 11 مجم/كجم؛ 12 مجم/كجم؛
‏0 15 مجم/كجم؛ 18 مجم/كجم؛ 20 مجم/كجم؛ 21 مجم/كجم؛ 25 مجم/كجم؛ 26 مجم/كجم 27 مجم/كجم؛ 28 مجم/كجم؛ 29 مجم/كجم؛ 30 مجم/كجم؛ 31 مجم/كجم؛ 32 مجم/كجم؛ 33 مجم/كجم؛ 34 مجم/كجم؛ 35 مجم/كجم؛ 36 مجم/كجم؛ 37 مجم/كجم؛ 38 مجم/كجم 39 مجم/كجم؛ 40 مجم/كجم؛ 41 مجم/كجم؛ 42 مجم/كجم؛ 43 مجم/كجم؛ 44 مجم/كجم؛ 45 مجم/كجم؛ 46 مجم/كجم؛ 47 مجم/كجم؛ 48 مجم/كجم؛ 49 مجم/كجم 50 مجم/كجم؛ 51
‏5 . مجم/كجم؛ 52 مجم/كجم؛ 53 مجم/كجم؛ 54 مجم/كجم؛ 55 مجم/كجم؛ 56 مجم/كجم؛ ‎ST‏
مجم/كجم؛ 58 مجم/كجم؛ 59 مجم/كجم؛ 60 مجم/كجم؛ 65 مجم/كجم؛ 70 مجم/كجم؛ 75 مجم/كجم؛ 80 مجم/كجم؛ 85 مجم/كجم؛ 90 مجم/كجم؛ 95 مجم/كجم؛ 100 مجم/كجم؛ 105 مجم/كجم؛ 110 مجم/كجم» 115 مجم/كجم؛ 120 مجم/كجم؛ 125 مجم/كجم؛ 130 مجم/كجم مجم/كجم» 140 مجم/كجم» 145 مجم/كجم» 150 مجم/كجم» 155 مجمإ/كجم؛ 160
5 مجم/كجم؛ بما في ذلك جميع الأرقام الصحيحة التي بينها. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة ‎(Hl)‏ عند 10 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة ‎(I)‏ عند 20 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة )11( عند 30 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد
0 الاتجاه النسخ والذي له الصيغة )111( عند 40 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة ‎(Ill)‏ عند 60 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة ‎(Ill)‏ عند 80 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة ‎(I)‏ عند 160 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد
5 الاتجاه النسخ والذي له الصيغة )111( عند 50 مجم/كجم. إن كان مطلوبًاء قد يتم إعطاء الجرعة اليومية الفعالة من المركب الفعال في صورة اثنتين؛ ثلاث؛ أريع» ‎cued‏ ست أو ‎SST‏ من الجرعات الفرعية المعطاة على نحو منفصل عند فواصل ملائمة خلال ‎aad)‏ اختياريًا في صور وحدة جرعة. في مواقف بعينهاء تمثل الجرعة مرة إعطاء واحدة في اليوم. في تجسيدات معينة؛ تمثل الجرعة واحدة أو أكثر من مرات الإعطاء كل 2؛ 3 4؛ 5؛ 6؛
0 1201110987 13 14 يري ‎US sl‏ 303201 4« 5< 6« 7 8 ق 10 12:11 أسبوع؛ أو كل 1ء 2؛ 3 ¢4 5؛ 6« 7 8؛ 9 10 11 12 شهرء حسب الحاجة؛ للحفاظ على التعبير المطلوب عن بروتين ديستروفين وظيفي. في تجسيدات معينة؛ يتم تحديد الجرعات مرة أو أكثر كل أسبوعين. في بعض التجسيدات؛ يتم تحديد الجرعات مرة كل أسبوعين. في تجسيدات متنوعة؛ يتم تحديد الجرعات مرة أو أكثر كل شهر. في تجسيدات معينة؛ يتم تحديد الجرعات مرة
5 كل شهر.
في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ أسبوعيًا عند 10 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ أسبوعيًا عند 20 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ أسبوعيًا عند 30 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة الاتجاه النسخ أسبوعيًا عند 40 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ أسبوعيًا عند 60 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ أسبوعيًا عند 80 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ أسبوعيًا عند 100 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ أسبوعيًا عند 160 مجم/كجم. على النحو 0 المستخدم بهذه الوثيقة؛ معنى أسبوعيًا كل أسبوع ‎bg‏ لما هو معروف في المجال. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل أسبوعين عند 0 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل أسبوعين عند 20 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة»؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل أسبوعين عند 30 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات 5 الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل أسبوعين عند 40 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل أسبوعين عند 60 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل أسبوعين عند 80 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل أسبوعين عند 100 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة 0 الاتجاه النسخ كل أسبوعين عند 160 مجم/كجم. على النحو المستخدم بهذه الوثيقة؛ معنى كل أسبوعين ‎lg‏ لما هو معروف في المجال. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل ثلاثة أسابيع عند 0 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل ثلاثة أسابيع عند 20 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة 5 الاتجاه النسخ كل ثلاثة أسابيع عند 30 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات
— 8 5 —
الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل ثلاثة أسابيع عند 40 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم
إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل ثلاثة أسابيع عند 60 مجم/كجم. في بعض
التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل ثلاثة أسابيع عند 80
مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل ثلاثة أسابيع عند 100 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة
لاتجاه النسخ كل ثلاثة أسابيع عند 160 مجم/كجم. على النحو المستخدم بهذه الوثيقة؛ معنى كل
ثلاثة أسابيع ‎Bre‏ كل ثلاثة أسابيع حسبما هو معروف في المجال.
في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ شهريًا عند 10
مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ شهريًا
0 عند 20 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ شهريًا عند 30 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ شهريًا عند 40 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ شهريًا عند 60 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ شهريًا عند 80 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات
5 الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ شهريًا عند 100 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ شهريًا عند 160 مجم/كجم. على النحو المستخدم بهذه ‎(adsl‏ معنى شهريًا كل شهر حسبما هو معروف في المجال. حسبما هو مفهوم في المجال؛ يتم الإعطاء أسبوعيًا؛ كل أسبوعين؛ كل ثلاثة أسابيع؛ أو شهريًا من جرعة أو أكثر أو جرعات مقسمة ورد شرحها بهذه الوثيقة .
يمكن إعطاء جزيئات الحمض النووي ومترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والموصوفة بهذه الوثيقة للخلايا بواسطة مجموعة متنوعة من الطرق المعروفة لهؤلاء من المتالفين مع المجال ‎Ly‏ في ذلك؛ دون تقييد؛ التغليف فى جسيمات شحمية؛ عن ‎JB) Gob‏ الأيونى؛ أو عن طريق التضمين فى مواد ناقلة أخرى » مثل أنواع الهلام ‎kal!‏ » مركبات سيكلو ديكسترين » كبسولات بحجم النانو قابلة للتحلل بيولوجيّاء وكريات دقيقة قابلة للالتصاق ‎(ladon‏ كما يوصف هنا ومعروف فى
5 المجال. في تجسيدات معينة؛ قد يتم استخدام تقنية الاستحلاب الدقيق لتحسين الإتاحة الحيوية
للعوامل الصيدلية الآلفة للشحم (غير ‎ALG‏ للذويان في الماء). تتضمن الأمثلة ترايمترين
Dordunoo, 5. K., et al., Drug Development and Industrial Pharmacy, ) 17(12), 1685-1713, 1991 and REV 5901 (Sheen, ©. C., etal., J Pharm ‎(Sci 80(7), 712-714, 1991‏ من بين فوائد ‎gal‏ يوفر الاستحلاب الدقيق ‎Liga dali)‏ معززة عن طريق توجيه الامتصاص على نحو مميز إلى الجهاز اللمفاوي بدلاً من الجهاز الدوري؛ ‏الذي بالتالي يتجاوز ‎ASH‏ ويمنع تلف المركبات في الدورة ‎Ball‏ الصُفْراوثَة. ‏في أحد جوانب الكشف؛ تحتوي الصيغ على مذيلات متكونة من أوليجومر كما يتوفر هنا ومادة ‏حاملة مزدوجة الألفة واحدة على الأقل؛ حيث يكون للمذيلات متوسط قطر يبلغ أقل من حوالي ‏0 نانو متر. توفر التجسيدات الأكثر تفضيلاً مذيلات لها متوسط قطر أقل من حوالي 50 نانو ‏0 -مترء وتوفر التجسيدات الأكثر تفضيلاً أيضًا مذيلات لها متوسط قطر أقل من حوالي 30 نانو مترء أو حتى أقل من حوالي 20 نانو متر. بينما تتم دراسة كل المواد الحاملة مزدوجة الألفة الملائمة؛ تكون المواد الحاملة المفضلة حاليًا بصفة عامة هي تلك التي لها بصفة عامة حالة ‎Generally-Recognized-as—-Safe‏ ‎(GRAS)‏ والتي يمكن أن تذيب مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والخاص بالكشف ‏5 الحالي وجري استحلابًا دقيقًا له عند مرحلة لاحقة عندما يتلامس المحلول مع طور ماء معقد ‎(ia)‏ طور موجود في القناة المعدية المعوية البشرية). عادةً؛ يكون للمكونات مزدوجة الألفة التي تفي بهذه المتطلبات قيم ‎HLB‏ (توازن ألفة للماء إلى ألفة للشحم) تبلغ 20-2؛ وتحتوي الهياكل الخاصة بها على شقوق أليفاتية بسلسلة مستقيمة في النطاق البالغ من 6-6 إلى 0-20. تتضمن الأمثلة مركبات جليسيريد دهنية ‎dallas‏ ببولي إيثيلين -جليكول ومركبات بولي إيثيلين جليكول. ‏0 تتضمن الأمثلة على المواد الحاملة مزدوجة الألفة مركبات جليسيريد دهنية معالجة ببولي إيثيلين جليكول مشبعة أو أحادية غير مشبعة؛ مثل تلك التي تم الحصول عليها من الزيوت النباتية المتنوعة المهدرجة بشكل كلي أو جزئي. قد تتكون هذه الزيوت على نحو مفيد من مركبات جليسيريد لحمض ‎(msl‏ داي-» وإسترات مونو - دهني وداي- ومونو-بولي (إيثيلين جليكول) من الأحماض الدهنية المناظرة؛ مع تفضيل تحديدًا تركيبة حمض دهني متضمنة حمض كابريك 4- ‎H10 5‏ حمض كابريك 969-3؛ حمض لوريك 9650-40 حمض ‎diye‏ 9624-14 حمض
بالميتيك 9614-4 وحمض ستياربك 9615-5. تتضمن فئة أخرى مفيدة من المواد الحاملة مزدوجة الألفة سوربيتان و/أو سوربيتول تمت أسترته ‎(hs‏ باستخدام أحماض دهنية مشبعة أو أحادية غير مشبعة (سلسلة ‎(SPAN‏ أو نظائر معالجة بإيثوكسيل مناظرة (سلسلة ‎(TWEEN‏ ‏قد تكون المواد الحاملة مزدوجة الألفة المتاحة ‎Glad‏ مفيدة تحديدًاء متضمنة سلسلة ‎«Gelucire‏
‎cLabrasol cLabrafil 5‏ أو ‎Lauroglycol‏ (المصنعة والموزعة كلها بواسطة 81610556 ‎(Corporation, Saint Priest, France‏ 06 -مونو-أوليات» 06 -داي -أوليات؛ 6 -مونو-لورات وداي-لورات»؛ ليستين» بولي سوريات 80؛ إلى غير ذلك (المنتجة والموزعة بواسطة عدد من الشركات في الولايات المتحدة الأمريكية وفي كل أنحاء العالم). في تجسيدات معينة؛ قد يحدث التوصيل عن طريق استخدام جسيمات شحمية؛ كبسولات بحجم
‏0 النانوء جسيمات دقيقة؛ كريات دقيقة؛ جسيمات شحمية؛ حويصلات؛ وما شابه؛ لإدخال التركيبات الصيدلية الخاصة بالكشف الحالي في خلايا العائل الملائمة. بشكل محدد؛ قد تتم صياغة التركيبات الصيدلية الخاصة بالكشف الحالي للتوصيل إما مغلفة في جسيم دهني؛ جسيم شحمي؛ حوبصلة؛ كرية بحجم النانو؛ جسيم بحجم النانو أو ما شابه. قد يتم إجراء صياغة واستخدام المواد الناقلة المستخدمة للنقل هذه باستخدام التقنيات المعروفة والتقليدية.
‏5 تعتبر البوليمرات الآلفة للماء الملائمة للاستخدام في الكشف الحالي هي تلك التي تكون قابلة للذويان في الماء بسهولة؛ يمكن إلحاقها تساهميًا بشحم مكون لحويصلة؛ وتكون محتملة في جسم ‎CAS‏ الحي بدون تأثيرات سامة (أي؛ تكون متوافقة بيولوجيًا). تتضمن البوليمرات الملائمة بولي (إيثيلين جليكول) (056)؛ بولي لاكتيك (يُطلق عليه أيضًا بولي لاكتيد)؛. حمض بولي جليكوليك (يُطلق عليه أيضًا بولي جليكوليد)؛ بوليمر مشترك من حمض بولي لاكتيك-بولي جليكوليك؛
‏0 وكحول بولي فينيل. في تجسيدات معينة؛ يكون للبوليمرات متوسط وزن جزيئي يبلغ من حوالي 0 أو 120 دالتون حتى حوالي 5,000 أو 10,000 دالتون؛ أو من حوالي 300 دالتون إلى حوالي 5,000 دالتون. في تجسيدات ‎al‏ يكون البوليمر هو بولي (إيثيلين جليكول) له وزن جزيئي متوسط يبلغ من حوالي 100 إلى حوالي 5,000 دالتون» أو له وزن جزيئي يبلغ من حوالي 0 إلى حوالي 5,000 دالتون. في تجسيدات معينة؛ يكون البوليمر هو بولي (إيثيلين جليكول)
‏5 له وزن جزيئي متوسط يبلغ حوالي 750 دالتون (على سبيل المثال ‎(PEG(750)‏ قد يتم تحديد
البوليمرات ‎Waal‏ بواسطة عدد المونومرات فيها؛ يستخدم تجسيد مفضل خاص بالكشف الحالي بوليمرات من حوالي ثلاث مونومرات على الأقل؛ ‎Jie‏ بوليمرات ‎PEG‏ المتكونة من ثلاث مونومرات (يبلغ وزنها الجزيئي المتوسط تقريبًا 132 دالتون). تتضمن البوليمرات الأخرى الآلفة للماء التي قد تكون ملائمة للاستخدام في الكشف الحالي بولي فينيل بيروليدون؛ بولي ميثوكسازولين» بولي إيثيل أوكسازولين؛ بولي هيدروكسي بروبيل ميثاكريلاميد؛ بولي ميثاكريلاميد؛ بولي داي ميثيل أكريلاميد. ومركبات سيليلوز مشتقة ‎ie‏ ‏هيدروكسي ميثيل سيليلوز أو هيدروكسي إيثيل سيليلوز. في تجسيدات معينة؛ تشتمل صيغة خاصة بالكشف الحالي على بوليمر متوافق بيولوجيًا مختار من المجموعة المكونة من مركبات بولي ‎canal‏ مركبات بولي كربونات؛ مركبات بولي ألكيلين» بوليمرات 0 من أكريليك وميثاكربليك إسترات؛ بوليمرات بولي ‎cdi‏ مركبات بولي جليكوليد؛ مركبات بولي سيلوكسان؛ مركبات بولي يوربثان وبوليمرات مشتركة منهاء مركبات سيليلوز؛ بولي بروبيلين؛ مركبات بولي إيثيلين؛ بولي ستايرين؛ بوليمرات من حمض لاكتيك وحمض ‎(sila‏ مركبات بولي أنهيدريد؛ بولي (أورثو)إسترات؛ بولي (حمض بيوتيك)؛ بولي (حمض فاليريك)؛ بولي (لاكتيد-كابرولاكتون مشترك)؛ مركبات بولي سكاريد؛ بروتينات؛ أحماض بولي هيالورونيك؛ 5 مركبات بولي سيانو أكريلات؛ ومزائج؛ خلائط» أو بوليمرات مشتركة منها. تكون مركبات سيكلو ديكسترين عبارة عن مركبات أوليجو سكاريد حلقية؛ تتكون من 6؛ 7 أو 8 ‎clang‏ جلوكوز؛ يتم التدليل عليها بواسطة الحرف اليوناني ‎of ear‏ أو ‎oy‏ على التوالي. يتم ريط وحدات الجلوكوز بواسطة روابط 1-0 4-جلوكوزيديك. كتسلسل من هيئة المقعد الخاصة بوحدات السكر؛ يتم وضع كل مجموعات الهيدروكسيل الثانوية (عند 0-2 0-3) على جانب واحد من 0 الحلقة؛ بينما يتم وضع كل مجموعات الهيدروكسيل الرئيسية عند 0-6 على الجانب الآخر. كنتيجة؛ تكون الأسطح الخارجية آلفة للماء؛ مما يجعل مركبات سيكلو ديكسترين قابلة للذويان في الماء. على النقيض» تكون التجاويف الخاصة بمركبات سيكلو ديكسترين غير آلفة ‎Cun coll‏ إنها تكون مرتبطة بواسطة الهيدروجين الخاص ‎why‏ 0-3 و0-5؛ وبواسطة ذرات أكسجين تشبه الإيثر. تسمح هذه القوالب بالتعقيد باستخدام مجموعة متنوعة من المركبات غير الآلفة للماء نسبيًاء 5 متضمنة؛ على سبيل المثال؛ المركبات الستيرويدية ‎Jie‏ 017-إيستراديّول (انظر؛ على سبيل
المثال» )1994( 38:1-3-113 ‎.(van Uden et al.
Plant Cell Tiss.
Org.
Cult.‏ يحدث التعقيد بواسطة تفاعلات ‎Van der Waals‏ وعن طريق تكوين رابطة هيدروجين. لاستعراض عام لكيمياء مركبات سيكلو ديكسترين؛ انظنء ‎Wenz Wenz, Agnew.
Chem.‏ ‎Int.
Ed.
Engl., 33:803-822 (1994)‏ تعتمد الخصائص الفيزيائية-الكيميائية لمشتقات السيكلو ديكسترين بقوة على نوع ودرجة الاستبدال. على سبيل المثال؛ قابليتها للذويان في نطاقات الماء من غير قابلة للذوبان (على سبيل ‎(Jaa‏ ‏تراي أسيتيل-بيتا -سيكلو ديكسترين) إلى قابلة للذويان بنسبة 16147 (وزن/حجم) (2-6-بيتا- سيكلو ديكسترين). بالإضافة إلى ذلك؛ فإنها تكون ‎ALE‏ للذويان في العديد من المذيبات العضوية. تسمح خصائص مركبات السيكلو ديكسترين بالتحكم في القابلية للذويان الخاصة بمكونات الصيغة 0 المتنوعة عن طريق زيادة أو تقليل قابليتها للذويان. لقد تم وصف العديد من مركبات سيكلو ديكسترين وطرق لتحضيرها. على سبيل ‎Chay (Jbl‏ ‎(Parmeter (1), et al‏ (ابراءة الاختراع الأمريكية رقم 3,453,259) واة ‎et‏ ,638071818 . (براءة الاختراع الأمريكية رقم 3,459,731) مركبات سيكلو ديكسترين كهروطبيعية. تتضمن المشتقات الأخرى مركبات سيكلو ديكسترين ذات الخصائص الكاتيونية [اا) ‎«(Parmeter‏ براءة الاختراع 5 الأمريكية رقم 3,453,257[ مركبات سيكلو ديكسترين المرتبطة تبادليًا غير ‎ALG‏ للذوبان (501005؛ براءة الاختراع الأمريكية رقم 3,420,788)؛ ومركبات سيكلو ديكسترين ذات الخصائص الأنيونية ]11( ‎(Parmeter‏ براءة الاختراع الأمريكية رقم 3,426,011]. من بين مشتقات السيكلو ديكسترين ذات الخصائص الأنيونية؛ الأحماض الكربوكسيلية؛ أحماض الفسوفورء أحماض الفوسفين» أحماض فوسفونيك؛ أحماض ‎celsius‏ أحماض ثيو فوسفونيك؛ أحماض ثيو 0 سلفينيك؛ وأحماض سلفونيك قد تم إلحاقها بالسيكلو ديكسترين الرئيسي [انظن ‎Parmeter‏ )11( ‎Lad‏ سبق]. علاوة على ذلك؛ فقد تم وصف مشتقات سلفو ألكيل إيثر سيكلو ديكسترين بواسطة ‎(Stella, et al‏ (براءة الاختراع الأمريكية رقم 5,134,127). تتكون الجسيمات الشحمية من غشاء شحمي ثنائي الطبقات واحد على الأقل يُغلف حجيرة داخلية مائية. قد يتم تمييز الجسيمات الشحمية بنوع الغشاء وبالحجم. تشتمل حويصلات صغيرة أحادية 5 الصفائح ‎(SUVS) Small unilamellar vesicles‏ على غشاء فردي ونمطيًا بقطر يتراوح ‎Lad‏
بين 0,02 و0,05 ميكرو ‎jie‏ ؛ تكون الحويصلات الكبيرة أحادية الصفائح ‎large unilamellar‏ ‎(LUVS) vesicles‏ أكبر نمطيًا من 0,05 ميكرو متر. تشتمل الحويصلات الكبيرة قليلة الصفائح والحويصلات متعددة الصفائح على طبقات غشاء متعددة؛ ‎Bale‏ ما تكون متحدة المركز وتكون نمطيًا أكبر من 0,1 ميكرو متر. يُطلق على الجسيمات الشحمية ذات الأغشية المتعددة غير
متحدة المركزء أي؛ الحويصلات الأصغر المتعددة المتضمنة في حوصيلة أكبر؛ مسمى حويصلات متعددة الحويصلات. يتعلق أحد جوانب الكشف الحالي بالصيغ المشتملة على الجسيمات الشحمية المحتوية على مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف الحالي؛ حيث تتم صياغة غشاء الجسيم الشحمي لتوفير جسيم شحمي بسعة حمل متزايدة. على نحو بديل أو بالإضافة إلى ذلك؛ قد يتم تضمين
0 مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والخاص بالكشف الحالي في» أو امتزازه على» الطبقة الثنائية للجسيم الشحمي الخاصة بالجسيم الشحمي. قد يتكتل مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف ‎Jad)‏ مع عامل خافض للتوتر السطحي شحمي وبتم ‎ales‏ داخل الحيز الداخلي للجسيم الشحمي؛ في هذه الحالات؛ تتم صياغة غشاء الجسيم الشحمي لمقاومة التأثيرات التمزيقية الخاصة بتكتل العامل الفعال-العامل الخافض للتوتر السطحي.
‎Gy 5‏ لأحد تجسيدات الكشف الحالي؛ تحتوي الطبقة الثنائية للجسيم الشحمي الخاصة بجسيم شحمي على شحوم مشتقة باستخدام بولي ‎onli)‏ جليكول) ‎poly(ethylene glycol)‏ ‎(PEG)‏ بحيث تمتد سلاسل ‎PEG‏ من السطح الداخلي للطبقة الثنائية للجسيم الشحمي إلى الحيز الداخلي المغلف بواسطة الجسيم الشحمي؛ وتمتد من ‎gad)‏ الخارجي للطبقة الثنائية للجسيم الشحمي إلى البيئة المحيطة.
‏0 تكون العوامل الفعالة المتضمنة داخل الجسيمات الشحمية الخاصة بالكشف الحالي في صورة مذابة. قد يتم احتجاز تكتلات من العامل الخافض للتوتر السطحي والعامل الفعال (مثل المستحلبات أو المذيلات المحتوية على العامل الفعال محل الاهتمام) داخل الحيز الداخلي من الجسيمات الشحمية وفقًا للكشف الحالي. يعمل عامل خافض للتوتر السطحي لتشتيت وإذابة العامل الفعال؛ وقد يتم اختياره من أي عامل خافض للتوتر السطحي أليفاتي؛ أليفاتي حلقي أو
‏5 عطري ملائم؛ بما في ذلك دون قصر الأمر على مركبات ليزوفوسفاتيديل كولين متوافقة بيولوجيًا
‎(LPGs) lysophosphatidylcholines‏ بأطوال سلسلة متنوعة (على سبيل ‎JB‏ من حوالي 4 إلى حوالي 020). قد يتم استخدام شحوم مشتقة من البوليمر ‎Jie‏ شحوم ‎PEG‏ لتكوين مُذيلَة إذ أنها ستعمل لتثبيط اندماج المذيلة/الغشاء» وحيث إن إضافة بوليمر إلى العامل الخافض للتوتر السطحي جزيئات ‎JIE‏ من ‎CMC‏ الخاص بالعامل الخافض للتوتر السطحي وتساعد في تكوين ‎ALY‏ يتم تفضيل عوامل خافضة للتوتر السطحي لها ‎CMOs‏ في نطاق الميكرو مولار؛ قد يتم استخدام عوامل خافضة للتوتر السطحي ب ‎CMC‏ أعلى لتحضير مذيلات محتجزة داخل الجسيمات الشحمية الخاصة بالكشف الحالي. قد يتم تحضير الجسيمات الشحمية وفقًا للكشف الحالي بواسطة أي من مجموعة متنوعة من التقنيات المعروفة في المجال. انظرء على سبيل ‎(Jal‏ براءة الاختراع الأمريكية رقم 0 ¢4,235,871 طلبات الطلب الدولي المنشورة ¢14057/96 ‎New RRC, Liposomes: A‏ ‎practical approach, IRL Press, Oxford (1990), pages 33-104: Lasic DD,‏ ‎Liposomes from physics to applications, Elsevier Science Publishers BY,‏ ‎Amsterdam, 1993‏ على سبيل المثال؛ قد يتم تحضير الجسيمات الشحمية الخاصة بالكشف الحالي عن طريق نشر شحم مشتق باستخدام بوليمر آلف للماء في جسيمات شحمية مشكلة مسبقًاء مثل عن طريق تعريض جسيمات شحمية مشكلة مسبقًا إلى مذيلات مكونة من بوليمرات مطعمة بالشحم» بتركيزات شحم تناظر النسبة المئوية بالمول النهائية للشحم المشتق الذي يكون مطلوبًا في الجسيم الشحمي. يمكن أيضًا تكوين الجسيمات الشحمية المحتوية على بوليمر آلف للماء عن طريق التجانس؛ تميه مجال الشحم؛ أو تقنيات البثق؛ كما يُعرف في المجال. في إجراء صياغة توضيحي آخر» يتم أولاً تشتيت العامل الفعال بواسطة المعالجة بالموجات 0 الصوتية في ليزوفوسفاتيديل كولين أو عامل خافض للتوتر السطحي آخر منخفض ‎CMC‏ (بما في ذلك الشحوم المطعمة ببوليمر) يذيب بالفعل الجزيئات غير الآلفة للماء. يتم بعد ذلك استخدام المعلق الناتج من المذيلات الخاص بالعامل الفعال لإعادة تميه عينة شحم مجففة تحتوي على نسبة مئوية بالمول ملائمة من شحم مطعم ببوليمر؛ أو كوليسترول. ثم يتم تشكيل المعلق من الشحم والعامل الفعال في جسيمات شحمية باستخدام تقنيات البثق كما يُعرف في المجال؛
والجسيمات الشحمية الناتجة المفصولة عن المحلول غير الممحفظ عن طريق فصل العمود القياسي. في أحد جوانب الكشف الحالي؛ يتم تحضير الجسيمات الشحمية ليكون لها أحجام متجانسة إلى حدٍ كبير في نطاق حجم مختار. تنطوي إحدى طرق تشكيل الحجم الفعالة على بثق معلق مائي من الجسيمات الشحمية خلال سلسلة من أغشية البولي كريونات التي لها حجم مسام منتظم مختار؛
سيناظر حجم المسام الخاص بالغشاء بالتقريب أحجام الجسيمات الشحمية الأكبر المنتجة عن طريق البثق من خلال ذلك الغشاء . انظر على سبيل المثال» براءة الاختراع الأمريكية رقم 3 (12 أبريلء 1988). في تجسيدات معينة؛ قد يتم استخدام مواد كاشفة مثل ‎DharmaFECT®‏ و ‎Lipofectamine®‏ لإدخال البولي نوكليوتيدات أو البروتينات في الخلايا.
0 تعتمد السمات المميزة للإطلاق لصيغة خاصة بالكشف الحالي على المادة الممحفظة؛ تركيز العقار الممحفظ» ووجود عوامل معدلة للإطلاق. على سبيل المثال» يمكن معالجة الإطلاق ليكون معتمدًا على الرقم الهيدروجيني؛ على سبيل ‎(JU‏ باستخدام غلاف حساس للرقم الهيدروجيني يُطلق فقط عند رقم هيدروجيني منخفض؛ كما في المعدة؛ أو رقم هيدروجيني أعلى؛ كما في الأمعاء. يمكن استخدام غلاف معوي لمنع حدوث الإطلاق حتى بعد المرور خلال المعدة. يمكن
5 استخدام أغلفة أو خلائط متعددة من سياناميد ممحفظة في مواد مختلفة للحصول على إطلاق أولي في المعدة؛ متبوعًا بإطلاق لاحق في الأمعاء. يمكن معالجة الإطلاق ‎Wal‏ عن طريق تضمين أملاح أو عوامل مكونة للمسام؛ يمكنها زيادة امتصاص الماء أو إطلاق العقار عن طريق الانتشار من الكبسولة. يمكن ‎Lal‏ استخدام السواغات التي تُعدل القابلية للذويان الخاصة بالعقار للتحكم في معدل الإطلاق. يمكن أيضًا تضمين العوامل التي تعزز من انحلال القالب أو الإطلاق من القالب.
‎(Sa 0‏ إضافتها إلى العقار؛ إضافتها في صورة طور منفصل (أي؛ في صورة جسيمات دقائقية)؛ أو يمكن إذابتها على نحو مشترك في طور البوليمر اعتمادًا على المركب. في غالبية الحالات ينبغي أن يبلغ المقدار فيما بين 0,1 وثلاثين بالمائة (وزن/وزن من البوليمر). تتضمن أنواع العوامل المعززة للانحلال الأملاح غير العضوية ‎(ie‏ أمونيوم سلفات وأمونيوم كلوريد؛ الأحماض العضوية مثل حمض سيتريك؛ حمض بنزويك؛ وحمض أسكوربيك؛ القواعد غير العضوية مثل صوديوم
‎(clip 5‏ البوتاسيوم كريونات؛ كالسيوم كريونات؛ زنك كربونات؛ وزنك هيدروكسيد؛ والقواعد
العضوية مثل بروتامين سلفات؛ سبيرمين؛ كولين؛ إيثانول أمين» داي إيثانول أمين» وتراي إيثانول أمين وعوامل خافضة للتوتر السطحي ‎Tween® (ie‏ و ‎.Pluronic®‏ تتم إضافة عوامل مكونة للمسام ‎Canal‏ بنية دقيقة إلى القوالب ‎ol)‏ المركبات القابلة للذوبان في الماء مثل الأملاح غير العضوية والمواد السكرية) في صورة جسيمات دقائقية. يكون النطاق نمطيًا فيما بين واحد بالمائة وثلاثين بالمائة (وزن/وزن بوليمر). يمكن أيضًا معالجة الامتصاص عن ‎Gob‏ تغيير زمن البقاء الخاص بالجسيمات في المعي. يمكن تحقيق هذاء على سبيل المثال» عن طريق تغليف الجسيم باستخدام» أو اختياره باعتباره المادة الممحفظة؛ بوليمر لاصق مخاطي. تتضمن الأمثلة غالبية البوليمرات ذات مجموعات الكريوكسيل الحرة؛ ‎Jia‏ كيتوزان» مركبات سيليلوز» وبخاصة مركبات بولي أكريلات (كما يُستخدم هناء تشير 0 مركبات بولي أكريلات إلى بوليمرات تتضمن مجموعات أكريلات ومجموعات أكريلات معدلة مثل مركبات سيانو أكريلات ومركيات ميثاكريلات). قد تتم صياغة مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ليكون متضمئًا داخل؛ أو؛ متكيفًا للإطلاق بواسطة جهاز جراحي أو طبي أو غرس. في جوانب معينة؛ قد يتم تغليف أو معالجة غرس باستخدام مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ. على سبيل المثال؛ قد يتم استخدام أنواع الهلام 5 المائيء أو البوليمرات الأخرى» مثل البوليمرات المتوافقة بيولوجيًا و/أو القابلة للتحلل بيولوجيًا؛ لتغليف غرس بالتركيبات الصيدلية الخاصة بالكشف الحالي (أي؛ قد يتم تكييف التركيبة للاستخدام مع جهاز طبي عن طريق استخدام هلام مائي أو بوليمر آخر). تكون البوليمرات والبوليمرات المشتركة لتغليف الأجهزة الطبية باستخدام عامل معروفة جيدًا في المجال. تتضمن الأمثلة على أنواع ‎(ual‏ إلا أنها ليست قاصرة ‎(le‏ واقيات طعم؛ واقيات ‎pads‏ لفصل العقار ‎Ga‏ غرز؛ ‎ly 0‏ قساطر وعائية؛ قساطر ‎shally‏ طعوم ‎(Ailey‏ صمامات قلب ترقيعية؛ أجهزة ضبط نبضات القلب» مزيلات الرجفان القابلة للزرع؛ إبر الاستخدام داخل الوريد؛ أجهزة لتنضيد وتكوين العظام؛ مثل المسامير» المسامير الملولبة؛ الصفائح» والأجهزة ‎(AY)‏ وقوالب النسيج الصناعية ‎AY‏ ‏الجروح. ‏بالإضافة إلى الطرق المتوفرة هناء قد تتم صياغة مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ لاستخدام ‎By‏ للكشف للإعطاء بأية طريقة ملائمة للاستخدام في الطب البشري أو البيطري؛ عن
طريق التناظر مع المواد الصيدلية الأخرى. قد يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والصيغ المناظرة الخاصة بها بمفردها أو في توليفة مع استراتيجيات هلاجية أخرى في علاج ‎Jia‏ العَضَلِي؛ ‎die‏ زرع أرومة عضلية؛ العلاجات بالخلايا الجذعية؛ إعطاء مضادات حيوية من أمينو جليكوزيد؛ مثبطات البروتيزوم؛ والعلاجات بالتنظيم التصاعدي(على سبيل المثال؛ التنظيم التصاعدي للأوتروفين» نظير بارا للصبغ الجسدي خاص بالديستروفين). في بعض التجسيدات؛ قد يتم إعطاء العامل العلاجي الإضافي قبل؛ على نحو متزامن مع؛ أو على نحو تالي لإعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والخاص بالكشف الحالي. على سبيل المثال؛ قد يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ في توليفة مع ستيرويد و/أو مضاد حيوي. في تجسيدات بعينها؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ لمربض 0 بركيزة ذات علاقة بالستيرويد (على سبيل ‎(Jal‏ العلاج بالستيرويد ذي الركيزة المتقطعة أو المزمنة/المستمرة. على سبيل المثال» في بعض التجسيدات تم علاج المريض باستخدام كورتيكوستيرويد قبل إعطاء أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ويستمر في تلقي العلاج بالستيرويد. في بعض التجسيدات؛ يكون الستيرويد هو كورتيكويد سكري أو بربدنيزون. تكون طرق الإعطاء الموصوفة مخصصة فقط كدليل حيث سيكون أحد الممارسين من ذوي المهارة 5 قادرًا على تحديد طريقة الإعطاء المثلى وأية جرعة أي حيوان محدد وحالة محددة بسهولة. لقد تمت محاولة أساليب متعددة لإدخال مادة جينية جديدة وظيفية في ‎(LAN‏ في المعمل وفي جسم الكائن الحي (244:1275-1280 ‎(Friedmann (1989) Science,‏ تتضمن هذه الأساليب تكامل الجين الذي سيتم التعبير عنه في فَيْرْوْسَات £238 معدلة ( ‎Friedmann (1989) supra;‏ ‎¢(Rosenberg (1991) Cancer Research 51(18), suppl.: 50745-5‏ التكامل في نواقل لغير ‎lad Ball‏ 2000000 (على سبيل المثال؛ نواقل فيروسية مصاحبة للفيروس الغدي) ( ‎Rosenfeld, et al. (1992) Cell, 68:143-155; Rosenfeld, et al.‏ ‎Science, 252:431-434‏ (1991))؛ أو توصيل جين محوّر مرتبط بعنصر معزز-محسن غير متجانس عبر الجسيمات الشحمية ((1989) ‎(Friedmann‏ المذكور ‎Lad‏ سبق؛ ‎Brigham, et al. (1989) Am.
J.
Med.
Sci., 298:278-281; Nabel, et al.‏ ‎Science, 249:1285-1288; Hazinski, et al. (1991) Am.
J.
Resp. 5‏ )1990(
Wang and Huang (1987) Proc. Natl. ‏ى‎ «Cell Molec. Biol., 4:206-9 ‏مقترن بنظم نقل معتمدة على كاتيون نوعية لمركب‎ ¢(Acad. Sci. (USA), 84:7851-7855 ‏أو استخدام‎ (Wu and Wu (1988) J. Biol. Chem., 263:14621-14624) aj;
Wolff et al. ‏المذكور فيما سبق)؛‎ (Nabel et al. (1990) ‏مجرد؛ نواقل تعبير وراثي‎ DNA ‏يُنتج الحقن المباشر للجينات المحورة في النسيج‎ .))1990( Science, 247:1465-1468 5
Rosenfeld et al. ‏سبق)؛‎ Lud ‏المذكور‎ Rosenfeld )1992(( ‏تعبيرًا وراثيًا موضعيًا فقط‎
Nabel (1990) ‏المذكور فيما سبق؛‎ Brigham et al. (1989) ‏سبق؛‎ Lad ‏المذكور‎ (1991) de gana ‏سبق). أوضحت‎ Lad ‏المذكور‎ Hazinski et al. (1991) 5 ‏سبق؛‎ Lad ‏المذكور‎ ‎Am. J. Med. Sci. (1989) 298:278-281 and Clinical ) .Brigham et al ‎Research (1991) 39 0‏ (الملخص)) نقل العدوى في جسم الكائن الحي فقط لرئتي افئران بعد إما إعطاء معقد من جسيم شحمي ل ‎DNA‏ داخل الوريد أو داخل القصبة. يكمن مثال على مقالة مراجعة لإجراءات العلاج الجيني البشري في: -256:508 )1992( ‎Anderson, Science‏ 813. في تجسيد إضافي؛ يمكن أن تشتمل التركيبات الصيدلية ‎Uy‏ للكشف؛ إضافة إلى ذلك؛ على ‏5 كربوهيدرات على النحو الوارد في )2016( 10981 ,7 ‎et al., Nat. Comms.‏ 1180 والذي أدرج بالكامل ضمن مراجع هذه الوثيقة. في بعض التجسيدات؛ يمكن أن تشتمل التركيبات الصيدلية ‎Us‏ للكشف على 965 هكسوز كريوهيدرات. على سبيل المثال» يمكن أن تشتمل التركيبة الصيدلية ‎By‏ للكشف على 965 جلوكوز؛ 965 فركتوز؛ أو 965 مانوز. في تجسيدات معينة؛ يمكن أن تشتمل التركيبات الصيدلية وفقًا للكشف على 962.5 جلوكوز و962.5 فركتوز. في بعض ‏0 التجسيدات؛ يمكن أن تشتمل التركيبات الصيدلية ‎Ey‏ للكشف على كريوهيدرات يتم اختياره من: أربينوزن يوجد بكمية تبلغ 965 ‎anally‏ جلوكوز يوجد بكمية تبلغ 965 بالحجم؛ سوربيتول يوجد بكمية تبلغ 765 بالحجم؛ جالاكتوز يوجد بكمية تبلغ 7065 بالحجم؛ فركتوز يوجد بكمية تبلغ 765 بالحجم؛ زبليتول يوجد بكمية تبلغ 765 بالحجم؛ مانوز يوجد بكمية تبلغ 765 بالحجم؛ توليفة من جلوكوز وفركتوز يوجد كل منهما بكمية تبلغ 962.5 بالحجم؛ وتوليفة من جلوكوز يوجد بكمية تبلغ
— 6 9 — 7 بالحجم؛ فركتوز يوجد بكمية تبلغ 962.86 بالحجم» وزبليتول يوجد بكمية تبلغ 961.4 بالحجم. 4 طرق الاستخدام استعادة إطار قراءة الديستروفين باستخدام ‎hdd‏ الإكسون يتم اقتراح أسلوب علاجي محتمل لعلاج ‎DMD‏ الناتج بواسطة طفرات خارج الإطار في جين الديستروفين بواسطة الصورة الأخف من أمراض الحثل العضلى المعروفة باعتبارها ‎BMD‏ التى تكون ناتجة بواسطة الطفرات داخل الإطار. ستؤدي القدرة على تحويل طفرة خارج الإطار إلى طفرة داخل الإطار افتراضيًا إلى الحفاظ على إطار قراءة ‎MRNA‏ وإنتاج بروتين ديستروفين مقصر داخليًا ولكنه وظيفي. تم تصميم مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ الخاصة 0 بالكشف لإتمام هذا. يتداخل تهجين ‎PMO‏ باستخدام متوالية ‎MRNA‏ الأولي المستهدف مع تكوين معقد جدل ‎MRNA‏ ‏الأولي ويحذف الإكسون 53 من ‎MRNA‏ الناضج. ‎mans‏ الصيغة البنائية والهيئة الخاصتان بمترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بالكشف بازدواج القواعد النوعي للمتوالية مع المتوالية المتممة. بواسطة آلية مشابهة؛ يسمح إيتيبليرسين ¢ على سبيل ‎Jad‏ الذي يعتبر ‎PMO‏ ‏5 .تم تصميمه لتخطي الإكسون 51 من ‎MRNA‏ الأولي للديستروفين بازدواج القواعد النوعي للمتوالية مع المتوالية المتممة المتضمنة في الإكسون 51 من ‎MRNA‏ الأولي للديستروفين. سينتج ‎MRNA‏ الديستروفين الطبيعي المحتوي على كل 79 إكسونات بروتين ديستروفين طبيعي. يوضح الرسم البياني في الشكل 1 قطاعًا صغيرًا من ‎MRNA‏ الأولي للديستروفين 5 ‎MRNA‏ ‏الناضج؛ من الإكسون 47 إلى الإكسون 53. يوضح شكل كل إكسون كيفية تقسيم الروامز ‎Lad‏ ‏0 بين الإكسونات؛ جدير بالملاحظة؛ تتكون رامزة واحدة من ثلاثة نوكليوتيدات. تبداً الإكسونات المشكلة على شكل مستطيل وتنتهي بروامز كاملة. تبداً الإكسونات المشكلة على شكل سهم برامزة كاملة ولكن تنتهي برامزة مقسمة؛ محتوية فقط على نوكليوتيد 1# من الرامزة. يتم تضمين النوكليوتيدين 2# و3# من هذه الرامزة في الإكسون التالي الذي سيبداً بشكل شيفرون.
يؤدي ‎MRNA‏ الديستروفين المفتقر إلى إكسونات كاملة من جين الديستروفين نمطيًا إلى ‎DMD‏ ‏يبين الرسم البياني في الشكل 2 نوعًا من الطفرة الجينية (حذف الإكسون 50) المعروفة بأنها تتسبب ‎DMD‏ حيث إن الإكسون 49 ينتهي برامزة كاملة ‎Tang‏ الإكسون 51 بالنوكليوتيد الثاني من رامزة»؛ تتم إزاحة إطار القراءة بعد الإكسون 49؛ مما يؤدي إلى إطار قراءة ‎MRNA‏ ‏5 خارج الإطار وتضمين الأحماض الأمينية غير الصحيحة بعد الطفرة. يؤدي الغياب التالي لنطاق ربط ديستروجليكان وظيفي عند الطرف © إلى إنتاج بروتين ديستروفين غير ثابت. يتخطي الإيتيبليرسين الإكسون 51 لاستعادة إطار قراءة ‎MRNA‏ حيث إن الإكسون 49 ينتهي برامزة كاملة والإكسون 52 يبداً بالنوكليوتيد الأول من رامزة؛ يؤدي حذف الإكسون 51 إلى استعادة إطار القراءة؛ مما يؤدي إلى إنتاج بروتين ديستروفين تم تقصيره داخليًا بموقع ريط ديستروجليكان 0 سليم؛ مشابه لطفرة ‎BMD‏ 'في الإطار” (الشكل 3). يتم دعم جدوى تحسين النمط الظاهري ل ‎DMD‏ باستخدام تخطي الإكسون لاستعادة إطار القراءة المفتوح ل ‎MRNA‏ الديستروفين بواسطة البحث غير الإكلينيكي. لقد أظهرت العديد من الدراسات في النماذج الحيوانية المتعلقة بالخثل العضلي ل ‎DMD‏ أن استعادة الديستروفين بواسطة تخطي الإكسون تؤدي إلى تحسينات يمكن الوثوق بها في قوة ووظيفة العضلات ( :2011 ‎Sharp‏ ‎Yokota 2009; Wu 2008; Wu 2011; Barton—-Davis 1999; Goyenvalle 2004: 15‏ ‎Gregorevic 2006; Yue 2006; Welch 2007; Kawano 2008; Reay 2008; van‏ ‎Lay (Putten 2012‏ مثال إجباري على هذا من دراسة حيث تمت مقارنة مستويات الديستروفين بعد العلاج بتخطي الإكسون (باستخدام ‎(PMO‏ بوظيفة العضلات في النفس النسيج. في فأر ‎ald mdx‏ بالحثل؛ حافظت العضلات الظْنْبُوبيَّة الأماميّة ‎(TA) tibialis anterior‏ المعالجة 0 باستخدام ‎PMO‏ نوعي لفأر على -9675 من سعة القدرة القصوى لها بعد الانقباضات الحاثة على الإجهاد؛ ‎Lay‏ حافظت عضلات ‎TA‏ للجانب المقابل فقط على ~%25 من سعة القدرة القصوى لها (م > 0,05( )2011 ‎(Sharp‏ في دراسة أخرى؛ تلقى 3 من كلاب ‎CXMD‏ ذات الحثل؛ عند ‎jee‏ يبلغ 5-2 شهور؛ العلاج بتخطي الإكسون باستخدام ‎PMO‏ نوعي للطفرة الجينية الخاصة بها مرة في الأسبوع لمدة من 5 إلى 7 أسابيع أو أسبوع بعد الآخر لمدة 22 أسبوع. بعد العلاج بتخطي الإكسون»؛ أظهر كل الكلاب الثلاثة تعبير ‎Jy‏ شامل في كل أنحاء الجسم عن
الديستروفين في العضلة الهيكلية؛ إضافة إلى الحفاظ على أو تحسين السير (اختبار الجري لمسافة
متر) بالنسبة إلى القيمة القاعدية. على النقيض» أظهرت كلاب ‎CXMD‏ من نفس العمر غير
المعالجة انخفاضًا ملحوظًا في السير على مدار الدراسة )2009 ‎(Yokota‏
تم إظهار أن 01/005 لها نشاط تخطي للإكسون أكثر عند تركيزات متساوية المولية من مركبات 5 فوسفورو ثيوات في كل من ‎MAX Of‏ وفي نموذج الفأر ل ‎DMD‏ المتوافق مع البشر
.(Heemskirk 2009) ‏البشرية‎ DMD ‏التي تعبر عن كامل نسخة‎ ((hDMD) humanized
في التجارب المعملية يؤدي استخدام تفاعل سلسلة بوليميراز للنسخ العكسي ‎(RT-PCR)‏ ولطخة
‎(WB) Western‏ في خلايا العضلات الهيكلية البشرية العادية أو خلايا العضلات من مرضى
‎eteplirsen ‏إلى تحديد الإيتيبليرسين‎ ST ‏بطفرات مختلفة مُعرْضًا لتخطي الإكسون‎ DMD
‎(PMO) 0‏ كعامل حاث فعال لتخطي الإكسون 51. لقد تم تأكيد تخطي الإكسون 51 المستحث بالإيتيبليرسين في جسم الكائن الحي في نموذج الفأر ل ‎Arechavala-Gomeza ) hDMD‏ 007). تتضمن النتائج الإكلينيكية لتحليل تأثير مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ يكون متممًا لمنطقة مستهدفة من الإكسون 53 الخاصة ب ‎MRNA‏ الأولي للديستروفين البشري وبحث على تخطي
‏5 الإكسون 53: نسبة مئوية من الألياف الإيجابية للديستروفين ‎percent dystrophin positive‏ ‎«(PDPF) fibers‏ اختبار السير لمدة ست دقائق (60/1//1)؛ فقد السير ‎loss of‏
‎((NSAA) North Star Ambulatory Assessment (LOA) ambulation‏ اختبارات الوظيفة الرئوية ‎(PFT) pulmonary function tests‏ القدرة على النهوض (من وضع استلقاء) بدون دعم ‎(ala‏ إنتاج الديستروفين الجديد والقياسات الوظيفية الأخرى.
‏0 في بعض التجسيدات؛ يوفر الكشف الحالي ‎Bla‏ لإنتاج الديستروفين في خاضع للعلاج لديه طفرة في جين الديستروفين الذي يكون مُعرّضًا لتخطي الإكسون ¢53 تشتمل الطريقة على إعطاء الخاضع للعلاج مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ؛ أو ملح مقبول ‎Wana‏ منه؛ كما يوصف هنا. في تجسيدات معينة؛ يوفر الكشف الحالي ‎Bla‏ لاستعادة إطار قراءة ‎MRNA‏ للحث على إنتاج بروتين ديستروفين في خاضع للعلاج يعاني من ‎Fall‏ العَضَلِي لدوشين ‎Duchenne‏
‎(DMD) muscular dystrophy 25‏ لديه طفرة جين الديستروفين الذي يكون مُعرْضًا لتخطي
الإكسون 53. يمكن قياس إنتاج البروتين عن طريق تفاعل سلسلة بوليميراز للنسخ العكسي
‎«(RT-PCR) polymerase chain reaction‏ تحليل لطخة ‎(Western‏ أو الكيثياء
‎.(IHC) immunohistochemistry ‏الهيستولوجية المَناعِيّة‎
‏في بعض التجسيدات؛ يوفر الكشف الحالي طرقًا لعلاج ‎DMD‏ في خاضع للعلاج في حاجة لذلك؛ حيث يكون لدى الخاضع للعلاج طفرة لجين الديستروفين الذي يكون مُعرّضًا لتخطي الإكسون
‏¢53 تشتمل الطريقة على إعطاء الخاضع للعلاج مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ؛ أو ملح
‏مقبول ‎Baa‏ منه؛ كما يوصف هنا. في تجسيدات متنوعة؛ يتم قياس علاج الخاضع للعلاج
‏بواسطة تأخير تقدم المريض. في بعض التجسيدات؛ يتم قياس علاج الخاضع للعلاج عن ‎Gob‏
‏الحفاظ على السير في الخاضع للعلاج أو خفض فقد السير في الخاضع للعلاج. في بعض
‏0 التجسيدات؛ يتم قياس السير باستخدام اختبار السير لمدة 6 دقائق (61/1/0/1). في تجسيدات معينة؛ يتم قياس السير باستخدام ‎.(NSAA) North Start Ambulatory Assessment‏ في تجسيدات متنوعة؛ يوفر الكشف الحالي طرقًا للحفاظ على الوظيفة الرئوية أو تقليل فقد الوظيفة الرثوية في خاضع للعلاج يعاني من ‎(DMD‏ حيث يكون لدى الخاضع للعلاج طفرة لجين ‎DMD‏ ‏يكون مُعرضًا لتخطي الإكسون 53؛ تشتمل الطريقة على إعطاء الخاضع للعلاج مترافق أوليجومر
‏5 مضاد لاتجاه النسخ؛ أو ملح مقبول ‎die Wana‏ كما يوصف هنا. في بعض التجسيدات؛ يتم قياس الوظيفة الرئوية باعتبارها الضًّغْط ‎(5x83)‏ الأقصى ‎Maximum Expiratory Pressure‏ ‎(MEP)‏ تجسيدات معينة؛ يتم قياس الوظيفة الرئوية باعتبارها الضَّغْط ‎(ag Bl‏ الأقصى ‎-(MIP) Maximum Inspiratory Pressure‏ في بعض التجسيدات؛ يتم قياس الوظيفة الرثوية باعتبارها السعة الحيوية القسرية ‎.(FVC) Forced Vital Capacity‏
‏0 في تجسيد إضافي؛ يمكن إعطاء التركيبات الصيدلية ‎By‏ للكشف مع كربوهيدرات في طرق الكشف؛ إما في نفس الصيغة أو صيغة منفصلة؛ على النحو الوارد في ‎Han et al., Nat.‏ ‎Comms. 7, 10981 (2016)‏ والذي أدرج بالكامل ضمن مراجع هذه الوثيقة. في بعض التجسيدات؛ يمكن إعطاء التركيبات الصيدلية الخاصة بالكشف مع 965 هكسوز كريوهيدرات. على سبيل المثال؛ يمكن إعطاء التركيبات الصيدلية الخاصة بالكشف مع 965 ‎«Sela‏ 965 فركتوز؛
‏5 أو 965 مانوز. في تجسيدات معينة؛ يمكن إعطاء التركيبات الصيدلية الخاصة بالكشف مع
جلوكوز و962.5 فركتوز. في بعض التجسيدات؛ يمكن إعطاء التركيبة الصيدلية الخاصة بالكشف مع كربوهيدرات يتم اختياره من: أربينوز يوجد بكمية تبلغ 965 بالحجم؛ جلوكوز يوجد بكمية تبلغ 7065 بالحجم؛ سورييتول يوجد بكمية تبلغ 7065 بالحجم؛ جالاكتوز يوجد بكمية تبلغ 7065 بالحجم؛ فركتوز يوجد بكمية تبلغ 765 بالحجم؛ ‎Jol)‏ يوجد بكمية تبلغ 765 بالحجم؛ مانوز يوجد 5 بكمية تبلغ 765 بالحجم؛ توليفة من جلوكوز وفركتوز يوجد كل منهما بكمية تبلغ 7062.5 بالحجم؛ وتوليفة من جلوكوز يوجد بكمية تبلغ 765.7 بالحجم؛ فركتوز يوجد بكمية تبلغ 702.86 بالحجم؛ وزبليتول يوجد بكمية تبلغ 701.4 بالحجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎By‏ للكشف مع كمية فعالة علاجيًا من مركب غير سترويدي مضاد للالتهاب. في بعض التجسيدات؛ يكون المركب غير 0 السترويدي المضاد للالتهاب ‎Ble‏ عن مثبط ‎NF-KB‏ على سبيل ‎JE‏ في بعض التجسيدات؛ قد يكون مثبط ‎NFkB‏ عبارةً عن 087-1004 أو ملح مقبول صيدليًا منه. في تجسيدات متنوعة؛ قد يكون متبط ‎NF-KB‏ عبارةً عن مترافق من ساليسيلات و18انا. في بعض التجسيدات؛ يكون مثبط ‎lke NF-KB‏ عن 087-1041 أو ملح مقبول صيدليًا منه. في تجسيدات معينة؛ يكون متبط ‎Ble NF-KB‏ عن مترافق من ساليسيلات و0/5. في تجسيدات 5 متنوعة؛ يكون ‎Ble NF-KB Lis‏ عن ‎H‏ 0 ‎CLAN‏ ‎H‏ ‏> > ا 0 ‎oH‏ » أو ملم مقبول ‎Waa‏ منه. في بعض التجسيدات؛ يكون المركب غير السترويدي المضاد للالتهاب عبارةً عن مثبط ‎TGF-b‏ ‏على سبيل المثال؛ في تجسيدات معينة؛ يكون متبط ‎TGF-b‏ عبارةً عن ‎HT-100‏ ‏0 في تجسيدات معينة؛ تم وصف مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ على النحو الموصوف والوارد بهذه الوثيقة لاستخدامه للعلاج. في تجسيدات معينة؛ تم وصف مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ على النحو الموصوف بهذه الوثيقة لاستخدامه في علاج ‎JR‏ العَضَلِيَ لدوشين. في
تجسيدات معينة؛ تم وصف مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ على النحو الموصوف بهذه الوثيقة لاستخدامه في تصنيع دواء لاستخدامه في العلاج. في تجسيدات ‎dime‏ تم وصف مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ على النحو الموصوف بهذه الوثيقة لاستخدامه في تصنيع علاج لعلاج ‎(a)‏ العَصَّلِيَ لدوشين. 5. الأطقم يوفر الكشف ‎aka Lad‏ لعلاج مريض يعاني من مرض جيني يشتمل الطقم على جزيء مضاد لاتجاه النسخ على الأقل (على سبيل ‎(JU)‏ مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ يشتمل على مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ موضح في المتوالية رقم: 1)؛ ‎Lae‏ في حاوية ملائمة؛ مع تعلميات لاستخدامه. قد تحتوي ‎١‏ لأطقم أيضًا على مواد كاشفة طرفية ‎Jie‏ محاليل منظمة؛ مثبتاتء 0 إلى غير ذلك. ‎aw‏ أن يدرك هؤلاء من ذوي المهارة فى المجال أن التطبيقات الخاصة بالطريقة السابقة لها استخدام واسع النطاق لتحديد الجزيئات المضادة لاتجاه النسخ الملائمة للاستخدام في علاج العديد من الأمراض الأخرى. في أحد التجسيدات؛ يشتمل الطقم على مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎Gy‏ للصيغة )1( الأمثلة 5 بالرغم من أنه قد تم وصف الكشف السابق ببعض من التفصيل على سبيل الإيضاح وإفراد أمثلة لأغراض تتعلق بوضوح الاستيعاب؛ سيتضح بالفعل لأحد ذوي المهارة العادية في المجال في ضوء تعاليم هذا الكشف أنه قد يتم إجراء تغييرات وتعديلات معينة عليها دون الخروج عن فحوى ونطاق عناصر الحماية الملحقة. يتم توفير الأمثلة التالية على سبيل الإيضاح فقط وليس على سبيل التحديد. سيدرك هؤلاء من ذوي المهارة في المجال بسهولة مجموعة متنوعة من المتغيرات غير 0 المهمة التي يمكن تغييرها أو تعديلها للحصول على نتائج متشابهة بشكل أساسي. المواد والطرق ظروف معالجة الخلايا ومزارع النسيج
تم استخدام ‎WIA‏ عضلية بشرية متمايزة ‎Inc)‏ ,260810.) لقياس تخطي الإكسونات. على نحو محدد؛ تم زراعة أرومات عضلية ‎(ZenBio, Inc., SKB-F)‏ إلى تجمع 9690-80 عند 37 درجة مئوية 5 %5 ‎CO2‏ في أوساط نمو ‎ZenBio, Inc)‏ :/5148-1.). تم بدء التمايز باستبدال أوساط النمو أوساط تمايز ‎Inc)‏ ,260810 :00-/ل4ا5.). لاختبار تخطي الإكسون 53؛ تم وضع 1 104 خلية متمايزة في أطباق بها 24 عيئًا و1 ملليلتر أوساط تمايز ( ‎SKM-D; ZenBio,‏ 6ا.) تحتوي على تركيزات مختلفة من ‎PMO‏ أو تم إضافة ‎PPMO‏ إلى كل عين وحضانتها لمدة 96 ساعة. تحليل بقعة ويسترن ‎Lah‏ يتعلق بتحليل بقعة وبسترن؛ تم مجانسة النسيج محلول مجانسة منظم (964 ‎(SDS‏ 4 مولار 0 يوريباء 125 ‎Me‏ مولار تريس-ا10! (برقم هيدروجيني 6.8)) بنسبة 9 إلى 18 ‎x‏ 20-ميكرو متر من قطاعات من النسيج بقطر يبلغ تقريبًا 5 مم في 133 ميكرو لتر محلول منظم. تم تجميع ناتج التحلل المناظر وإخضاعه احتساب كمية البروتين باستخدام طقم تجربة بروتين ‎Bag RC DC‏ لتعليمات الشركة المصنعة )500-0122 ‎(BioRad Cat.‏ تم تخفيف عينات النسيج المستخلصة بنسبة 10:1 باستخدام محلول مجانسة منظم بحيث تبلغ نطاق منحنى ‎BSA‏ القياسي. 5 تم تحضير العينات بحيث يحتوي 35 ميكرو لتر من العينة على المقدار المطلوب من البروتين باستخدام 25 ميكرو لتر من بروتين ناتج ‎eat‏ 7 ميكرو لتر من محلول ‎NUPAGE LDS due‏ منظم ‎«(Life Technologies Cat.
NPO0O0OS8, Carlsbad, California, USA)‏ و3 ميكرو لتر من عامل ‎NUPAGE‏ مختزل (مركز 10 مرات) ‎.(Life Technologies Cat.
NPO0O4)‏ بعد تسخين عينات البروتين لمدة 5 دقائق عند 95 درجة مثوية؛ تم طرد العينات مركزيًا وتحميل 0 المادة الطافية على عين 10 ‎(NUPAGE Novex‏ 1 مم؛ ‎ue‏ 9068-3 جل بولي أكريل أميد تريس-أسيتات ‎(Life Technologies Cat.
EAQ375)‏ عند حد أقصى يبلغ 50 ميكرو جرام من حمل البروتين الكلي لكل جزء. تم تدوير الجل عند 150 فولت عند درجة حرارة الغرفة إلى أن نضحت واجهة الصبغ من الجل. تم نقل جلات البروتين الناتجة إلى أغشية ‎Life ( PVDF‏ ‎(Technologies Cat.
LC2007‏ لمدة 75 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة عند 30 فولت
باستخدام محلول نقل ‎NUPAGE‏ منظم ‎«(Life Technologies NPOO6-1)‏ 9610 ميثانول %0.1 مضاد أكسدة ‎.(Life Technologies NPOO0O5) NuPAGE‏ بعد نقل البروتين» تم غمر أغشية ‎PVDF‏ في محلول ‎TTBS‏ منظم ‎TBS)‏ مركز مرةً واحدة ‎((Amresco Cat.
J640-4L)‏ 960.1 (حجم/حجم) 004/660-20). تم نقل الأغشية إلى 5 محلول إعاقة منظم )%5 (وزن/حجم) ‎Gla ula‏ ليس به دهون ( ‎Lab Scientific Cat.‏ 1) في ‎(TTBS‏ ونقعها طوال الليل عند 4 درجة مئوية مع الرج الخفيف. بعد الإعاقة؛ تم حضانة الأغشية إما لمدة 60 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة في 0751 ‎Leica Cat.
NCL-)‏ 1) مخفف بنسبة 20:1 باستخدام محلول إعاقة منظم» أو 20 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة في جسم ألفا-أكتينين مضاد ‎(Sigma-Aldrich Cat.
NA931V)‏ مخفف بنسبة 100000:1 0 باستخدام محلول إعاقة منظم؛ متبوعًا بالغسل ست مرات (خمس دقائق لكل منها مع ‎(TTBS‏ تم تخفيف مترافق 96ا فأري مضاد مع بيروكسيداز الجرجار الحار ( ‎GE Healthcare Cat.‏ ‎(NA93LV‏ بنسبة 40000:1 باستخدام محلول إعاقة منظم وإضافته إلى الأغشية لمدة 45 دقيقة (0751) أو 15 دقيقة (لا-أكتينين)؛ متبوعًا بالغسل ست مرات. باستخدام طقم اكتشاف ‎ECL‏ ‎(GE Healthcare Cat.
RPN2232) Prime Western‏ تم تعريض الطبقة الغشائية للجل 5 وتحميضها وفقًا لذلك. تم فحص الطبقة الغشائية المحمضة وتحليلها باستخدام برنامج صورة ‎ImageQuant TL Plus‏ (الإصدار 8.1( وإجراء تحليل بالتقهقر الخطي باستخدام برنامج ‎.Graphpad‏ ‏يتضمن كل جل بقعة وسترن منحنى ديستروفين قياسي مكون من 4 أو 5 يتم تحضيره باستخدام البروتين الكلي المستخلص من نسيج عادي (عضلة الفأر رباعية ‎«Gags ll‏ الحجاب الحاجزء أو 0 القلب) مخفف؛ على سبيل المثال؛ إلى %64 9616 964؛ 961؛ 5 %0.25 (انظر. على سبيل المثال. الأشكال 15 و5ب) وزيادته إلى نسيج ‎DMD‏ (على سبيل المثال» خلاصة عضلة الفأر رباعية الرؤوس ‎amdX‏ الحجاب الحاجزء أو القلب؛ أو عضلة رباعية الرؤوس ‎(NHP‏ الحجاب الحاجزء أو العضلة الملساء ‎smooth muscle‏ (ا6)). تم معالجة عينات ‎Sand)‏ القياسي على ‎gail‏ الموصوف أعلاه. تم تحديد مستويات بروتين الديستروفين بالنسبة المئوية للديستروفين من
النوع غير المعالج ‎(WT%)‏ من خلال مقارنة قيم شدة نطاق الديستروفين إلى منحنى الجل القياسي. تحليل ‎RT-PCR‏ ‏فيما يتعلق تحليل ‎(RT-PCR‏ تم ‎RNA Jie‏ من الخلايا باستخدام طقم تدوير ‎lllustra GE‏ باتباع بروتوكول الشركة المصنعة. تم تحديد تركيز ونقاء ‎RNA‏ باستخدام ‎.NanoDrop‏ تم قياس تخطى الإكسون 53 من خلال ‎RT-PCR‏ له مادة بادئة أمامية تريط وصلة إكسون 52/51 و54 المتوالية رقم:5 (:3- ‎CATCAAGCAGAAGGCAACAA‏ -:5) ومادة بادئة خلفية تريط إكسون 52 المتوالية رقم:6 (:3- ‎GAAGTTTCAGGGCCAAGTCA‏ -:5). وقد أدى الإكسون 53 المتخطى إلى أمبليكون 201 زوج قاعدة وقد أدى الإكسون 53 غير المتخطى إلى ‎j 10‏ 2 مبليكون 413 زوج قاعحدة. تم قياس تخطى الإكسون الفأري 23 باستخدام ‎RT-PCR‏ له بادئة أمامية- المتوالية رقم:7 (-:5 ‎(CACATCTTTGATGGTGTGAGG-3’‏ وبادئة خلفية المتوالية رقم:8 ( -:5 ‎.(CAACTTCAGCCATCCATTTCTG -3’‏ بعد إخضاع ‎(RT-PCR J RNA‏ تم تحليل العينات باستخدام ماكينة ‎(Caliper‏ استخدمت 5 رحلان الجل الشعري الكهربي. تم احتساب النسبة المئوية لتخطي الإكسونات بالمعادلة التالية: (المساحة ‎Jad‏ منحنى النطاقات المتخطاة)/(إجمالي المساحة أسفل منحنى النطاقات المتخطاة وغير المتخطاة)*«100. الكيمياء الهيستولوجية المناعية: تبقيع الديستروفين: تم استخدام 10 ميكرون من القطاعات المجمدة من نسيج عضلة الفأر ‎Lely‏ الرؤوس لاكتشاف ديستروفين بواسطة ديستروفين جسم مضاد أولي (تخفيف 1: 250 ‎Abcam « yl‏ رقم الكتالوج 7 ) في %10 مصل ماعز + %1 ‎BSA‏ في ‎PBS‏ وجسم مضاد ثانوي 1678/-فلورو 8 مضاد مشتق من أرنب وماعز (نسبة التخفيف 1000:1) في 9610 مصل ماعز + 961 ‎.BSA‏
تحضير وحدات مورفولينو فرعية ‎MeOH .}‏ :400 (ماني) ‎os HERD Yay‏ : حي - 3 ‎Hi‏ : متحي الصو 1 ‎J‏ إٍ الس ‎HO CJ‏ ‎mo NC‏ بورانستراي ‎om a SH‏ ; ‎Sd git LSA t 0 8‏ ‎١ {HCI ¢ p-TsOH} 2‏ صورة ‎IL N i [‏ 0 ‎=Pp— 0=p—N‏ يف 5 حي ب ‎HO‏ ‏مما »)© مم مسي .. لال ‎ -‏ مخزلا ‎ -<‏ ل يي ‎I‏ ‎x 0 1 0‏ سمس ‎on‏ ل 2 لح ‎(p-TsOH or HCI)‏ نح 3 2 1 5 المخطط 1: طريقة التخليق العامة لوحدات ‎PMO‏ الفرعية 5 بالإشارة إلى المخطط 1؛ حيث 8 تمثل شطر ازدواج القاعدة ؛ قد يتم تحضير وحدات المورفولينو ‎dae jill‏ من الريبونوكليوزيد ‎ribinucleoside‏ المناظر (1) كما يُعرض. قد تتم ‎les‏ وحدة المورفولينو الفرعية (2) اختياريًا بواسطة التفاعل مع مادة منتجة ‎de sana‏ حماية ملائمة؛ على سبيل المثال ترايتيل كلوريد. تتم إزالة مجموعة الحماية عند الموضع 3 ‎daa)’‏ عامة أثناء تخليق الأوليجومر في الحالة الصلبة كما يوصف بمزيد من التفصيل فيما يلي. قد تتم على نحو ملائم 0 حماية شطر ازدواج القاعدة لتخليق الأوليجومر في الحالة الصلبة. تتضمن مجموعات الحماية الملائمة بنزويل لأدنين وسيتوزين» فنيل أسيتيل لجوانين» وبيفالويل أوكسي ميثيل لهيبوكسانثين )1( يمكن إدخال مجموعة البيفالويل أوكسي ميثيل على الموضع ‎NT‏ من قاعدة الهيبوكسانثين الحلقية غير المتجانسة. بالرغم من أنه قد يتم استخدام وحدة هيبوكسانثين فرعية غير محمية؛ فإن حصائل تفاعلات التنشيط تكون فائقة للغاية عندما تكون القاعدة محمية. تتضمن مجموعات الحماية 5 الملائمة الأخرى تلك التي تم الكشف عنها في براءة الاختراع الأمريكية رقم 8,076,476؛ التي تم تضمينها هنا كمرجع بأكملها.
يؤدي تفاعل 3 مع مركب الفوسفور المنشط 4 إلى وحدات مورفولينو فرعية بها شطر الرابط المطلوب 5. يمكن تحضير المركبات بالصيغة البنائية 4 باستخدام أي عدد من الطرق المعروفة لهؤلاء من ذوي المهارة في المجال. ثم يستمر الإقران بشطر المورفولينو كما هو موضح فيما سبق.
يمكن استخدام المركبات بالصيغة البنائية 5 في تخليق الأوليجومر في الحالة الصلبة لتحضير الأوليجومرات المشتملة على روابط الوحدة الفرعية الداخلية. تكون هذه الطرق معروفة جيدًا في المجال. باختصار؛ قد يتم تعديل مركب بالصيغة البنائية 5 عند الطرف 5 "ليحتوي على رابط بمادة حاملة صلبة ‎٠.‏ بمجرد تحميلها ‘ تتم إزالة المجموعة المحمية الخاصة ب 5 (على سبيل المثتال؛ ترايتيل عند الطرف 3)) وبتم تفاعل الأمين ‎all‏ مع شطر فوسفور منشط لمركب ثان بالصيغة
0 البنائية 5. يتم تكرار هذه المتوالية حتى يتم الحصول على طول الأوليجو المطلوب. قد تتم إما إزالة المجموعة المحمية فى الطرف النهائى 3 ”أو تركها إذا كانت هناك رغبة فى حدوث تعديل عند الطرف 3 يمكن إزالة الأوليجو من المادة الحاملة الصلبة باستخدام أي عدد من الطرق؛ أو العلاج النموذجي باستخدام قاعدة لشطر الرابط بالمادة الحاملة الصلبة. يتم وصف تحضير الأوليجومرات من المورفولينو بشكل عام والأوليجومرات من المورفولينو النوعية 5 الخاصة بالكشف بمزيد من التفصيل فى الأمثلة. تحضير أوليجومرات من مورفولينو يتم تنفيذ تحضير مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف باستخدام البروتوكول التالي ‎Lg‏ لالمخطط 2 .
‎de‏ كلوز فور با ا ال 2 مشت > 28 ~~ 8 تراتي إيتيثين ‎Sid‏ . : : ‎SOLO Tm A FOTO EER ACEO‏ سكسيتيك ‎DMAP! Nw‏ { | 0 م دوجة ملوية ‎He‏ ‎Y‏ ‎oF Con 0]‏ ‎i‏ اله ‎A‏ يدن ل . ‎FOO = Le‏ عن ‎TET Te‏ ‎au‏ صل ‎A‏ ‎N= ry‏ . ‎rN TA‏ أل - 1 1 2 - . ِ . ذيلي ‎ae‏ ] تحضير ترايتيل بيبرازين فنيل كريامات ‎trityl piperazine phenyl carbamate‏ 35: إلى معلق مبرد من المركب 11 في داي كلورو ميثان (6 ملليلتر/جم 11) تمت إضافة محلول من بوتاسيوم كريونات ‎potassium carbonate‏ )3,2 مكافئ) في ماء )4 ملليلتر/جم بوتاسيوم كريونات). إلى هذا الخليط ثنائي الأطوار تمت ببطء إضافة محلول من فنيل كلورو فورمات ‎phenyl chloroformate‏ )1,03 مكافئ) في داي كلورو ميثان ‎dichloromethane‏ )2 جم/جم فنيل كلورو فورمات). تمت تدفئة خليط التفاعل وصولاً إلى 20 درجة مئوية. عند إتمام التفاعل )2-1 ساعة)؛ تم فصل الطبقات. تم غسيل الطبقة العضوية باستخدام الماء؛ وتجفيفه 0 على بوتاسيوم كربونات لامائية. تم ‎Jie‏ المنتج 35 عن طريق التبلّر من أسيتو نيتريل ‎acetonitrile‏ . تحضير كحول كريامات ‎carbamate alcohol‏ 36: تم تعليق صوديوم هيدريد ‎Sodium‏ ‏6م, مكافئ) في 1-ميثيل-2-بيروليدينون ‎1-methyl-2-pyrrolidinone‏ )32 ملليلتر/جم صوديوم هيدريد ‎(sodium hydride‏ إلى هذا المعلق تمت إضافة تراي إيثيلين 5 جليكول ‎triethylene glycol‏ (10,0 مكافئ) والمركب 35 (1,0 مكافئ). تم تسخين الملاط الناتج وصولاً إلى 95 درجة مئوية. عند إتمام التفاعل (2-1 ساعة)؛ تم تبريد الخليط وصولاً إلى 0 درجة ‎Lush‏ إلى هذا الخليط تمت إضافة 9630 من داي كلورو ميثان/ميثيل 1-بيوتيل إيثر ‎dichloromethane /methyl tert-butyl ether‏ (حجم:حجم) والماء. تم غسيل الطبقة
العضوية المحتوية على المنتج تتابعيًا باستخدام ‎«le NaOH‏ حمض سكسينيك مائي؛ وصوديوم كلوريد مائي مشبع. تم عزل المنتج 36 عن طريق التبّر عن داي كلورو ميثان/ميثيل ١-بيوتيل‏ إيثر /هبتان. تحضير الحمض الذيلي 37: إلى محلول من المركب 36 في تترا هيدرو فيوران (7 ملليلتر/جم 36) تمت إضافة سكسينيك أنهيدريد (2,0 مكافئ) و ‎DMAP‏ (0,5 مكافئ). تم تسخين الخليط وصولاً إلى 50 درجة ‎gis‏ عند ‎ala)‏ التفاعل (5 ساعات)؛ تم تبريد الخليط وصولاً إلى 20 ‎da)‏ مئوية وضبطه على الرقم الهيدروجيني 8,5 باستخدام 81811003 مائية. تمت إضافة ‎ise‏ ‏آ-بيوتيل إيثر؛ وتم استخلاص المنتج في الطبقة المائية. تمت إضافة داي كلورو ميثان؛ وتم ضبط الخليط على الرقم الهيدروجيني 3 باستخدام حمض سيتربك مائي. تم غسيل الطبقة العضوية 0 المحتوية على المنتج باستخدام خليط من محلول منظم بسيترات وصوديوم كلوريد مائي مشبع برقم هيدروجيني = 3. تم استخدام محلول الداي كلورو ميثان هذا الخاص ب 37 بدون عزل في تحضير المركب 38 تحضير 38: إلى المحلول من المركب 37 تمت إضافة إيميد حمض لا-هيدروكسي -5- نوربورنين-2؛ 3- ثنائي الكريوكسيل ‎(HONBY)‏ (1,02 مكافئ)؛ 4-داي ميثيل أمينو بيريدين ‎(DMAP) 5‏ )0,34 مكافئ)؛ ثم 1-(3-داي ميثيل أمينو بروييل)-لا”-إيثيل كربو داي إيميد هيدرو كلوريد ‎(EDC)‏ (1,1 مكافئ). تم تسخين الخليط وصولاً إلى 55 درجة مئوية. عند إتمام التفاعل (5-4 ساعات)؛ تم تبريد الخليط وصولاً إلى 20 درجة ‎sie‏ وغسيله تتابعًا باستخدام 1: 1 مولار من حمض سيتريك/براين ويراين. خضع محلول الداي كلورو ميثان ‎Jalal‏ المذيب مع أسيتون ثم مع لا ‎Glo N‏ ميثيل فورماميد» وتم عزل المنتج عن طريق الترسيب من أسيتون/ 0 لاا ل١-داي‏ ميثيل فورماميد في صوديوم كلوريد مائي مشبع. تم تحويل المنتج الخام إلى ملاط ‎sae‏ ‏مرات في الماء لإزالة لا ل١١-داي‏ ميثيل فورماميد المتبقي والأملاح. طربقة تخليق ‎PMO‏ أ: استخدام مثبت داي سلفيد تم تنفيذ إدخال "حمض ذيلي" منشط على الراتنج المحمل على مثبت في داي ميثيل إيميدازوليدينون ‎(DMI)‏ بواسطة الإجراء المستخدم لتضمين الوحدات الفرعية أثناء تخليق الطور الصلب.
‎or Le SR Qa g }‏ ‎NT Te 1 5 Amat 58 3‏ ‎LY‏ 7 © هلد ني ب 1 7 ‎SHEE er‏ ا " 3 ا مص 0 8 اا = بذ 0 8 م 1 ‎A‏ 1 3 ب 3 ل با ‎do‏ ‏المخطط 3: تحضير المادة الحاملة الصلبة لتخليق أوليجومرات من مورفولينو تم تنفيذ هذا الإجراء في وعاء ببتيد مغلف معالج بالسيلان ‎(ChemGilass, NJ, USA)‏ بوسيلة تقليب علوية من فريت زجاجي بمسامية خشنة )60-40 ميكرو متر)؛ ومحبس ثلاثي الاتجاهات من التيفلون للسماح بإدخال فقاعات من ‎N2‏ لأعلى خلال الفريت أو استخلاص خوائي. تتكون خطوات معالجة الراتنج/الغسيل في الإجراء التالي من اثنتين من العمليات الأساسية: تميع الراتنج أو مفاعل بطبقة تقليب واستخلاص للمذيب/المحلول. لتميع الراتنج؛ تم وضع المحبس للسماح بتدفق ‎N2‏ لأعلى خلال الفريت وتمت إضافة محلول معالجة/غسيل ‎Fuh‏ المخصص إلى المفاعل والسماح بإنفاذ وترطيب ‎El‏ بشكل تام. ثم تم بدء الخلط وتم خلط ملاط الراتنج للمدة 0 الزمنية المحددة. لاستخلاص للمذيب/المحلول؛ تم إيقاف الخلط وتدفق ‎N2‏ وتم بدء تشغيل المضخة الخوائية ثم تم وضع المحبس للسماح بتفريغ محلول معالجة/غسيل الراتنج في المخلفات. بلغت كل أحجام محلول معالجة/غسيل الراتنج 15 ملليلتر/جم من الراتنج ما لم يُذكر ما يُخالف ذلك. إلى راتنج من أمينو ميثيل بولي ستايرين (200-100 مش؛ حمل ~1,0 مللي مول/جم معتمد 5 على مجموعة استبدال بالنيتروجين؛ 75 ‎can‏ 1 مكافئ -81464 ‎Polymer Labs, UK, part‏ 59) في وعاء ببتيد مغلف معالج بالسيلان تمت إضافة 1-ميثيل-2-بيروليدينون ‎NMP)‏ 20 ملليلتر/جم من الراتنج) وتم السناح بانتفاخ الراتنج باستخدام الخلط لمدة 2-1 ساعة. بعد تفريغ المذيب المنتفخ» تم غسيل الراتنج باستخدام داي كلورو ميثان (2 ‎(dada 2-1 X‏ 965 من داي
أيزو بروبيل إيثيل أمين في 9625 من أيزو برويانول/داي كلورو ميثان )2 ‎X‏ 4-3 دقائق) وداي كلورو ميثان )2 ‎X‏ 2-1 دقيقة). بعد تفريغ محلول الغسيل الأخير؛ تمت معالجة الراتنج باستخدام محلول من مثبت من داي سلفيد 34 في 1-ميثيل-2-بيروليدينون (0,17 مولار؛ 15 ملليلتر/,جم من الراتنج» -2,5 مكافئ) وتم تسخين خليط الراتنج/المادة الكاشفة عند 45 درجة مئوية لمدة 60 ساعة. عند إتمام التفاعل؛ تم إيقاف التسخين وتم تفريغ محلول المثبت وغسيل الراتنج باستخدام 1-ميثيل-2-بيروليدينون (4 ‎X‏ 4-3 دقائق) وداي كلورو ميثان )6 ‎X‏ 2-1 دقيقة). تمت معالجة الراتنج باستخدام محلول من 7610 (حجم/حجم) من داي إيثيل داي كربونات في داي كلورو ميثان )16 ملليلتر/جم؛ 2 ‎X‏ 6-5 دقائق) ثم غسيله باستخدام داي كلورو ميثان (6 ‎X‏ 2-1 دقيقة). تم تجفيف الراتنج 39 في ظل تيار من ‎N2‏ لمدة 3-1 ساعات ثم في وسط مفرغ وصولاً إلى وزن 0 ثابت )+ %2( الحصيلة: 916150-110 من وزن الراتنج الأصلي. تحديد حمل الراتنج من أمينو ميثيل بولي ستايرين-داي سلفيد: يتم تحديد حمل الراتنج (عدد المواقع المتفاعلة المتاحة على نحو محتمل) بواسطة تجرية قياس طيف لعدد من مجموعات تراي فنيل ميثيل (ترايتيل) لكل جرام من الراتنج. يتم نقل وزن معروف من راتنج مجفف (25 + 3 مجم) إلى قارورة حجمية سعة 25 ملليلتر 5 معالجة بسيلان وتتم إضافة -5 ملليلتر من 962 (حجم/حجم) حمض تراي فلورو أسيتيك في داي كلورو ميثان. يتم خلط المحتويات عن طريق التدويم المعتدل ثم السماح باستقرارها لمدة 30 دقيقة. يتم توصيل الحجم إلى 25 ‎le‏ باستخدام 962 (حجم/حجم) إضافية من حمض تراي فلورو أسيتيك في داي كلورو ميثان وخلط المحتويات بشكل تام. باستخدام ماصة إزاحة إيجابية؛ يتم نقل جزه متساوي من المحلول المحتوي على ترايتيل (500 ميكرو لتر) إلى قارورة حجمية سعة 10 مليلتر وتم توصيل الحجم إلى 10 مليلتر باستخدام حمض ميثان سلفونيك. يتم قياس محتوى كاتيون الترايتيل في المحلول النهائي بواسطة الامتصاص بالأشعة فوق البنفسجية عند 431,7 نانو متر وحمل الراتنج المحسوب في مجموعات الترايتيل لكل جرام من الراتنج (ميكرو مول/جم) باستخدام الأحجام الملائمة؛ عمليات تخفيف؛ مُعامل الانطفاء (©: 41 ميكرو مول-1 سم-1) ووزن الراتنج. يتم تنفيذ التجرية ثلاث مرات وحساب متوسط الحمل.
سيوفر إجراء تحميل الراتنج في هذا المثال راتنج بتحميل يبلغ تقريبًا 500 ميكرو مول/جم. تم الحصول على حمل يبلغ 400-300 في ميكرو مول/جم إذا تم تنفيذ خطوة تضمين المثبت من داي سلفيد لمدة 24 ساعة عند درجة حرارة الغرفة. الحمل الذيلي: باستخدام نفس الإعداد والأحجام مثل تحضير الراتنج من أمينو ميثيل بولي ستايرين-داي سلفيد؛ يمكن إدخال الحمل الذيلي في المادة الحاملة الصلبة. تم أولاً نزع الحماية من الراتنج المحمل بالمثبت في ظل ظروف حمضية ومعادلة المادة الناتجة قبل الإقران. لخطوة الإقران؛ تم استخدام محلول من 38 )0,2 مولار) في ‎DMI‏ محتوي على 4-إيثيل مورفولين ‎(NEM)‏ 0,4 مولار) بدلاً من محلول المثبت من داي سلفيد. بعد 2 ساعة عند 45 درجة ‎Asie‏ ‏تم غسيل الراتنج 39 مرتين باستخدام 965 من داي أيزو ‎did dug‏ أمين في 9625 من أيزو 0 بروبانول/داي كلورو ميثان ومرة باستخدام ‎DCM‏ إلى الراتنج تمت إضافة محلول من بنزويك أنهيدريد (0,4 مولار) 5 ‎NEM‏ )0,4 مولار). بعد 25 دقيقة؛ تم تبريد ‎CDE‏ المفاعل وصولاً إلى درجة حرارة الغرفة؛ وغسيل الراتنج مرتين باستخدام 965 من داي أيزو بروبيل إيثيل أمين في 5 من أيزو برويانول/داي كلورو ميثان وثمان مرات باستخدام ‎DCM‏ تم ترشيح الراتتج 40 وتجفيفه في وسط ‎Me‏ التفريغ. تم تحديد الحمل للراتنج 40 ليكون حمل الراتنج الأصلي من أمينو ميثيل بولي ستايرين-داي سلفيد 39 المستخدم في الحمل الذيلي. تخليق الطور الصلب: تم تحضير الأوليجومرات من المورفولينو على 81/15-422 ‎Gilson‏ ‎Automated Peptide Synthesizer‏ في أعمدة تفاعل بولي بروبيلين من نوع ‎Gilson‏ سعة 2 ملليلتر )3980270 # ‎(Part‏ .23 وضع كتلة ألومينيوم بقنوات لتدفق الماء حول الأعمدة عند ارتكازها على وحدة التخليق. سيضيف ‎AMS-422‏ على نحو بديل المادة الكاشفة/محاليل 0 الغسيل؛ الحفاظ عليها بفترة زمنية محددة؛ وتفريغ الأعمدة باستخدام وسط خوائي. للأوليجومرات في النطاق بالطول الذي يصل حتى حوالي 25 من الوحدات الفرعية؛ يتم تفضيل راتنج من أمينو ميثيل بولي ستايرين-داي سلفيد بحمل يُقارب 500 ميكرو مول/جم من الراتنج. للأوليجومرات الأكبر؛ يتم تفضيل راتنج من أمينو ميثيل بولي ستايرين-داي سلفيد بحمل يبلغ 400-300 ميكرو مول/جم من الراتنج. إذا كان جزيء بحمل ذيلي عند الطرف 5" مطلويًا؛ يتم 5 اختيار الراتنج الذي تم تحميله بحمل ذيلي باستخدام نفس إرشادات التحميل.
تم تحضير محائيل المادة الكاشفة التالية: محلول نزع الترايتيل: 9610 من حمض سيانو أسيتيك (وزن/حجم) في 4: 1 داي كلورو ميثان/أسيتو نيتريل؛ ل محلول المعادلة: 965 من داي أيزو بروبيل إيثيل أمين في 3: 1 داي كلورو ميثان/أيزو برويانول؛ و 1 محلول الإقران: 0,18 مولار (أو 0,24 مولار للأوليجومرات التي نمت لما يزيد عن طول من 20 وحدة فرعية) من وحدة مورفولينو فرعية منشطة بالقاعدة ونوع الرابط المطلويين و0,4 مولار من لا إيثيل مورفولين» في 1 3-داي ميثيل إيميدازوليدينون. تم استخدام داي كلورو ميثان ‎(DOM)‏ كمحلول غسيل انتقالي يفصل نواتج غسيل محلول المادة 0 الكاشفة المختلفة. على وحدة ‎lal‏ مع ضبط الكتلة على 42 درجة مئوية؛ إلى كل عمود محتوي على 30 مجم من راتنج من أمينو ميثيل بولي ستايرين-داي سلفيد (أو الراتنج الذيلي) تمت إضافة 2 ملليلتر من 1-ميثيل-2-بيروليدينون والسماح بالترسيب عند درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. بعد الغسيل 2 مرة باستخدام 2 ملليلتر من ‎(gla‏ كلورو ميثان؛ تم استخدام دورة التخليق التالية: 5 الخطوة الحجم التوصيل زمن الاحتجاز نزع الترايتيل 5 ملليلتر مُشعب 5 ثانية نزع الترايتيل 5 ملليلتر مُشعب 5 ثانية نزع الترايتيل 5 ملليلتر مُشعب 5 ثانية نزع الترايتيل 5 ملليلتر مُشعب 5 ثانية 0 نزع الترايتيل 5 ملليلتر مُشعب 5 ثانية نزع الترايتيل 5 ملليلتر مُشعب 5 ثانية
نزع الترايتيل 5 ملليلتر مُشعب 5 ثانية
‎DCM‏ 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية
‏معادلة 5 ملليلتر مُشعب 30 ‎aut‏
‏معادلة 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية
‏5 معادلة 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية
‏معادلة 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية
‏معادلة 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية
‏معادلة 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية
‎DCM‏ 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية
‏0 الإقران 500-0 ميكرو لتر محقنة 0 دقيقة
‎DCM‏ 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية
‏معادلة 5 ملليلتر مُشعب 30 ‎aut‏
‏معادلة 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية
‎DCM‏ 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية
‎DCM 5‏ 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية
‎DCM‏ 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية
‏تمت برمجة متواليات الأوليجومرات الفردية في وحدة التخليق بحيث يستقبل كل عمود محلول
‏الإقران الملاتم (ا,8,0,5,1) في المتوالية الملائمة. عندما يُتم الأوليجومر الموجود في عمود تضمين الوحدة الفرعية النهائية الخاصة ‎cy‏ تمت ‎A)‏ من العمود الكتلة وتنفيذ دورة نهائية يدوتاً
باستخدام محلول إقران مُكوّن من 4-ميثوكسي تراي فنيل ميثيل كلوريد )0,32 مولار في ‎(DMI‏ ‏محتوي على 0,89 مولار 4-إيثيل مورفولين. الانشطار عن الراتنج ‎Aly‏ القواعد ومجموعات الحماية الأساسية: بعد المعالجة بميثوكسي ترايتيل؛ تم غسيل الراتنج 8 مرات باستخدام 2 ملليلتر من 1-ميثيل-2-بيروليدينون. تمت إضافة واحد ملليلتر من محلول انشطار متكون من 0,1 مولار 1 4-داي ثيو ثريتول ‎1,4-dithiothreitol‏ ‎(DTT)‏ و0,73 مولار تراي إيثيل أمين في 1-ميثيل-2-بيروليدينون» تمت تغطية العمود؛ والسماح له بالاستقرار عند درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك الوقت؛ تم تصريف المحلول في قنينة ‎Wheaton‏ سعة 12 ملليلتر. تم غسل الراتنج المنكمش بصورة كبيرة مرتين باستخدام 300 ميكرو لتر من محلول الانشطار. إلى المحلول تمت إضافة 4,0 ملليلتر من أمونيا 0 مائية مركزة (مخزنة عند -20 درجة مثوية)؛ تمت تغطية القنينة بإحكام (باستخدام غطاء ملولب مبطن بالتيفلون)؛ وتم تدويم الخليط لمزج المحلول. تم وضع القنينة في فرن عند 45 درجة مثوية لمدة 24-16 ساعة لتفيعل انشطار القاعدة ومجموعات الحماية الأساسية. تنقية المنتج الخام: تمت إزالة محلول التفكيك بإقحام الأمونيا المعباً في قنينات من الفرن والسماح له بالتبريد وصولاً إلى درجة حرارة الغرفة. تم تخفيف المحلول باستخدام 20 ملليلتر من 960,28 5 أمونيا مائية وتمريره من خلال عمود 2,5 ‎X‏ 10 سم محتوي على راتنج ‎Macroprep HQ‏ ‎(BioRad)‏ تم استخدام تدرج ملح ‎:A)‏ 160,28 أمونيا مع 8: 1 مولار صوديوم كلوريد في 8 أمونيا؛ صفر-96100 8 في 60 دقيقة) لفصل الذروة المحتوية على ميثوكسي ترايتيل تتابعيًا. تم تبريد الأجزاء المدمجة ومعالجتها بشكل إضافي اعتمادًا على المنتج المطلوب. عملية نزع ميثوكسي ترايتيل لأوليجومرات من مورفولينو: تمت معالجة الأجزاء المجمعة من عملية 0 التنقية ‎Macroprep‏ باستخدام 1 مولار ‎H3PO4‏ لخفض الرقم الهيدروجيني وصولاً إلى 2,5. بعد الخلط الأولي؛ تم وضع العينات عند درجة حرارة الغرفة لمدة 4 دقائق؛ في ذلك الوقت تمت معادلتها وصولاً للرقم الهيدروجيني 11-10 باستخدام 962,8 أمونيا/الماء. تمت تثقية المنتجات بواسطة استخلاص طور صلب ‎.(SPE) solid phase extraction‏
تعبئة وتكييف عمود ‎:SPE‏ تتم تعبئة ‎Rohm) Amberchrome CG-300M‏ و1885 ؛ ‎(PA «Philadelphia‏ )3 ملليلتر) فى أعمدة من الفريت سعة 20 ملليلتر ‎BioRad Econo-)‏ ‎(Pac Chromatography Columns (732-1011)‏ وشطف الراتنج باستخدام 3 ملليلتر مما يلي: 960,28 من ‎%80/NHAOH‏ من أسيتو نيتريل؛ 0,5 مولار ‎%20/NaOH‏ من إيثانول؛ الماء؛ 50 مللي مولار ‎%80H3PO4/‏ من أسيتو نيتريل؛ الماء؛ 0,5 من ‎%20/NaOH‏ من إيثانول؛ الماء؛ 960,28 من ‎NH4O0H‏ ‏تنقية ‎:SPE‏ تم تحميل المحلول من خطوة نزع ميثوكسي ترايتيل على العمود وشطف الراتنج ثلاث مرات باستخدام 6-3 ملليلتر من 960,28 أمونيا مائية. تم وضع قنينة ‎Wheaton‏ )12 ملليلتر) تحت العمود وفصل المنتج تتابعيًا بواسطة مرتي غسيل باستخدام 2 ملليلتر من 1645 أسيتو 0 تيتريل في 960,28 أمونيا مائية. أبيض خفيف. تمت إذابة العينات في الماء؛ ترشيحها من خلال مرشح 0,22 ميكرون ( ‎Pall‏ ‏5 ع#اآناء مرشح بمحقنة سعة 25 ‎(Ale‏ مولار من نوع 8000056 بغشاء 0,2 ميكرون 5 ضوئي بالأشعة فوق البنفسجية لتحديد وحدات ‎OD‏ للأوليجومر الموجود؛ إضافة إلى عينة توزيع للتحليل. ثم تم وضع المحاليل مرة أخرى في قنينات ‎Wheaton‏ للتجفيف بالتبريد. تحليل الأوليجومرات من المورفولينو بواسطة ‎:MALDI‏ تم استخدام قياس الطيف الكتلي ‎MALDI-‏ ‎TOF‏ لتحديد تركيبة الأجزاء في عمليات التنقية إضافة إلى توفير دليل لتحديد (الوزن الجزيئي) الأوليجومرات ‎٠‏ تم تشغيل العينات بعد التخفيف باستخدام محلول من حمض 3( 5-داي مينوكسي- 0 4-هيدروكسي سيناميك (حمض سينابينيك)» 3» 4 5-تراي هيدروكسي أسيتوفينون ‎(THAP)‏ أو حمض ألفا-سيانو-4-هيدروكسي سيناميك ‎(HCCA)‏ كقوالب. الطريقة ب لتخليق ‎:PMO‏ استخدام مثبت ‎NCP2‏ ‏تخليق مثبت ‎:NCP2‏ ‏1. تحضير ميثيل 4-فلورو -3-نيترو بنزوات ‎Methyl 4-Fluoro-3-Nitrobenzoate‏ )1(
‎OCH Ox__OMe‏ > — ‎ON‏ و0 ‎F F‏ صورة 1 إلى دورق 100 ملليلتر تم شحن 12.7 كجم حمض 4-فلورو -3-نيترو بنزويك وإضافة 40 كجم ميثانول و2.82 كجم حمض سلفوريك مركز. تم تقليب الخليط عند الارتجاع )65 درجة ‎(Logi‏ لمدة 36 ساعة. تم تبريد خليط التفاعل إلى صفر درجة مثوية. تم احتجاز البلورات المتكونة عند 38 درجة متوية. تم بعد ذلك ترشيح الخليط عند صفر درجة مئوية لمدة 4 ساعات في جو من الإنتروجين. تم غسل دورق 100 لتر وغسل عجينة الترشيح ب 10 كجم ميثانول تم تبريده إلى صفر درجة مئوية. تم تجفيف عجينة الترشيح الصلبة على القمع لمدة 1 ساعة؛ ونقلها إلى صينيات؛ وتجفيفها في فرن تفريغ عند درجة حرارة الغرفة إلى وزن ثابت يبلغ 13.695 كجم ميثيل 4-فلورو -3-نيترو بنزوات )%100 حصيلة؛ ‎HPLC‏ 9699). 0 2. تحضير حمض 3-نيترو -4-(2-أوكسو بروبيل) بنزويك -2)-3-1:00-4 ‎oxopropyl)benzoic Acid‏ 0 (2)-ميثيل 4-(3-هيدروكسي -1-ميثوكسي -1-أوكسو بت-2-ين-2-يل)-3-نيترو ‎(Z)-Methyl 4-(3-Hydroxy—1-Methoxy—1-Oxobut-2-en-2-yl)—-3-cs‏ ‎Nitrobenzoate‏ )2( 01/6 0 ‎OMe‏ 0 ‎ON‏ > ‎O,N AON‏ ‎F OH ©‏ 5 1 صورة 2 1
إلى دورق 100 ملليلتر تم شحن 3.98 كجم ميثيل 4-فلورو -3-نيترو بنزوات -4 ‎methyl‏ ‎fluoro-3-nitrobenzoate‏ )1( من الخطوة السابقة 9.8 كجم ‎(DMF‏ 2.81 كجم ميثيل أسيتو أسيتات. تم تقليب الخليط وتبريده إلى صفر درجة مثوية. إلى ذلك تم إضافة 3.66 كجم ‎DBU‏ ‏لمدة حوالي 4 ساعات مع الإبقاء على درجة الحرارة عند 5 درجة ‎Agia‏ أو أقل. تم تقليب الخليط لمدة 1 ساعة إضافية. إلى دورق التفاعل تم إضافة محلول من 8.15 كجم حمض سيتريك في 5 كجم ماء نقي مع الإبقاء على درجة حرارة التفاعل عند 15 درجة مئوية أو أقل. بعد الإضافة؛ تم تقليب خليط التفاعل لمدة 30 دقيقة إضافية ثم ترشحه في جو من الإنتروجين. تم إعادة عجينة الترشيح الرطبة إلى دورق 100 لتر مع 14.8 كجم ماء نقي. تم تقليب الملاط لمدة 0 دقائق ثم ترشيحه. تم ‎Ba‏ أخرى إعادة العجينة الرطبة إلى دورق 100 لتر؛ وتمليطها مع 0 14.8 كجم ماء نقي ‎sad‏ 10 دقائق؛ وترشيحها إلى (2)-ميثيل 4-(3-هيدروكسي -1-ميثوكسي -1-أوكسو بت-2-ين-2-يل)-3-نيترو بنزوات خام. 8. حمض 3-نيترو -4-(2-أوكسو بروبيل) بنزويك ‎3-Nitro-4—(2-oxopropyl)benzoic‏ ‎Acid‏ ‎Os OMe O. _OH‏ ‎O2N O,N‏ 0 ‎OH O 0‏ صورة 3 2 5 .تم شحن (2)-ميثيل 4-(3-هيدروكسي -1-ميثوكسي -1-أوكسو بت-2-ين-2-يل)-3-نيترو بنزوات ‎(Z)-methyl 4-(3-hydroxy—1-methoxy—1-oxobut-2-en—-2-yl)-3—‏ ‎ola nitrobenzoate‏ إلى دورق تفاعل 100 لتر في جو من الإنتروجين ‎nitrogen‏ . إلى ذلك تم ‎dil)‏ 14.2 كجم 1 4-دايوكسان ثم تمليطه. إلى الخليط تم إضافة محلول من 16.655 كجم ‎HC‏ مركز و13.33 كجم ماء نقي (6 مولار ‎(HCI‏ على مدار ساعتين في حين أن درجة حرارة 0 خليط التفاعل تم الإبقاء عليها أقل من 15 درجة مئوية. عند اكتمال الإضافة؛ تم تسخين خليط
التفاعل عند الارتجاع )80 درجة مثوية) لمدة 24 ساعة؛ وتبريده إلى درجة حرارة الغرفة؛ وترشيحه في جو من الإنتروجين. تم معالجة عجينة الترشيح الصلبة بتربتيوم مع 14.8 كجم ماء نقي؛ وترشيحهاء؛ ومعالجتها بتريتيوم ‎Bre‏ أخرى مع 14.8 كجم ماء نقي؛ وترشيحها. تم إعادة المادة الصلبة إلى الدورق 100 لتر مع 39.9 كجم ‎DCM‏ وإرجاعها بالتقليب لمدة 1 ساعة. تم إضافة 1.5 كجم ماء نقي لإذابة المواد الصلبة المتبقية. تم شطر الطبقة العضوية المترسبة إلى دورق 72 لتر مسخن مسبقًاء ثم إعادتها إلى دورق نظيف ‎Gils‏ 100 لتر. تم تبريد المحلول إلى صفر درجة مئوية؛ والإبقاء عليه لمدة 1 ساعة؛ ثم ترشيحه. تم غسل عجينة الترشيح الصلبة مرتين كل مرة بمحلول 9.8 كجم ‎DCM‏ و5 كجم هبتان» ثم تجفيفها على القمع. تم نقل المادة الصلبة إلى صينيات وتجفيفها إلى وزن ثابت يبلغ 1.855 كجم حمض 3-نيترو -4-(2-أوكسو بروبيل) 0 بنزوبك. الحصيلة الكلية 9642 من مركب 1. ‎HPLC‏ 1699.45. 3. تحضير لا-تريتيل بيبرازين سكسينات ‎(NTP) N-Tritylpiperazine Succinate‏ ‎NH,"‏ 1 ‎C‏ ‏تحن — ‎J C0)‏ ‎N‏ ‎oom‏ 0 : 5 إلى دورق مبطن سعته 72 لتر تم شحنه في جو من الإنتروجين ‎nitrogen‏ 1.805 كجم بتراي ‎iid‏ ميثيل كلوربد و8.3 كجم تولوين (محلول ‎(TPC‏ تم تقليب الخليط حتى ذوبان المواد 5 الصلبة. إلى دورق التفاعل المبطن الذي سعته 100 لتر تم إضافة في جو من الإنتروجين 5.61 كجم بيبرازين» 19.9 كجم تولوين» و3.72 كجم ميثانول. تم تقليب الخليط وتبريده إلى صفر درجة مثوية. إلى ذلك تم وببطء إضافة أجزاء من محلول ‎TPC‏ على مدار 4 ساعات مع الإبقاء على درجة حرارة التفاعل عند أو أقل من 10 درجة ‎dogs‏ تم تقليب الخليط لمدة 1.5 ساعة عند 10 درجة مئوية؛ ثم السماح بتدفئته إلى 14 درجة مئوية. تم شحن 32.6 كجم ماء نقي إلى دورق 72 0 تلترء ثم نقله إلى الدورق 100 لتر إلى أن تم المحافظة على درجة حرارة الدفعة الداخلية عند 20 /+- 5 درجة مئوية. تم السماح بتقسيم الطبقات وفصل الطبقة المائية السفلية وتخزينها. تم
استخلاص الطبقة العضوية ثلاث مرات كل مرة ب 32 كجم ماء نقي؛ وفصل الطبقات المائية وتجمعها مع المحلول المائي المخزن. تم تبريد الطبقة العضوية المتبقية إلى 18 درجة مئوية وإضافة محلول 547 جم من حمض سكسينيك في 10.87 كجم ماء نقي ببطء في أجزاء إلى الطبقة العضوية. تم تقليب الخليط لمدة 1.75 ساعة عند 20 /+- 53 درجة مثئوية. تم ترشيح الخليط» وغسل المواد الصلبة ب 2 كجم ‎TBME‏ و2 كجم أسيتون ثم تجفيفها على القمع . تم طحن عجينة الترشيح مرتين ب 5.7 كجم » كل ‏مرة بأسيتون وترشيحها وغسلها ب 1 كجم أسيتون بين مرات الطحن. تم تجفيف المادة الصلبة على ‏القمع؛ ثم نقلها إلى صينيات وتجفيفها في فرن مفرغ عند درجة حرارة الغرفة إلى وزن ثابت يبلغ ‏2 كجم 10 ل. حصيلة %80 ‏0 4. تحضير (4-(2-هيدروكسي بروبيل)-3-نيترو فينيل)(4-تريتيل بيبرازين -1-يل) ميثانون ‎(4-(2-Hydroxypropyl)-3-Nitrophenyl)(4-Tritylpiperazin—1-yl)Methanone‏ ‏أ. تحضير 1-(2-نيترو -4(4-تريتيل بيبرازين -1-كريونيل) فينيل) بروبان -2-أون -2)-1 ‎Nitro—4(4-Tritylpiperazine—1-Carbonyl)Phenyl)Propan—2-one‏ ‎Oy OH 0 ‏ا‎ 0 —
O,N O,N 0 0 3 4 ‏صورة‎ ‏5 إلى دورق مبطن سعته 100 لتر تم شحن في جو من الإنتروجين 2 كجم بحمض 3-نيترو -4- (2-أوكسو بروبيل) بنزويك ‎Acid‏ 0602016 (الام2-0«*0010)-3-10100-4 )3(¢ 18.3 كجم ‎«DCM‏ و6845. 1 كجم لا1-(3-داي ميثيل أمينو بروييل)- 'ل١-‏ إيثيل كربو داي ‎Lan‏ هيدرو كلوريد ‎N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride‏ ‎.(EDC.HCI)‏ تم تقليب المحلول إلى أن تكوّن خليط متجانس. تم إضافة 3.048 كجم ‎NTP‏
على مدار 30 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة وتقليبه لمدة 8 ساعات. تم إضافة 5.44 كجم ماء نقي إلى خليط التفاعل وتقليبه لمدة 30 دقيقة. تم السماح بفصل الطبقات وتفريغ الطبقة العضوية السفلية المحتوية على المنتج وتخزينها. تم استخلاص الطبقة المائية مرتين ب 5.65 كجم ‎DCM‏ ‏تم غسل الطبقات العضوية المجمعة بمحلول من 1.08 كجم صوديوم كلوريد في 4.08 كجم ماء نقي . تم تجفيف الطبقات العضوية فوق 068 . 1 كجم صوديوم سلفات وترشيحها . تم غسل الصوديوم سلفات 2 1.3 كجم ‎.DCM‏ تم تمليط الطبقات العضوية المجمعة 2 222 جم سيليكا جل وترشيحها من خلال قمع ترشيح له طبقة 252 جم جل سيليكا. تم غسل طبقة جل السيليكا ب 2 كجم ‎.DCM‏ تم تبخير الطبقات العضوية المجمعة على مبخر دوار . تم إضافة 4.8 كجم ‎THF‏ ‏إلى الوحدة البنائية ثم تبخيرها على المبخر الدوار إلى أن تم الحصول على 2.5 حجم من 1-(2- 0 نيترو -4(4-تريتيل بيبرازين -1-كربونيل) ‎(did‏ بروبان -2-أون -2-0100-4)4)-1 ‎tritylpiperazine—1-carbonyl)phenyl)propan-2-one‏ الخام في ‎THF‏ ‏ب. تحضير (4-(2-هيدروكسي بروييل)-3-نيترو فينيل)(4-تريتيل بيبرازين -1-يل) ميثانون ‎(4-(2—-Hydroxypropyl)-3-Nitrophenyl)(4-Tritylpiperazin—1-yl)Methanone‏ ‏)5( ‏جه ل ‎ON NTN 02‏ ~ ارج ‎Oo OJ‏ ‎ON O,N‏ ‎S OH‏ 5 صورة 5 4 إلى دورق مبطن سعته 100 لتر تم شحن في جو من الإنتروجين 3600 جم 4 من الخطوة السابقة و9800 جم ‎THF‏ تم تبريد المحلول المقلّب إلى أكبر من أو يساوي 5 درجة مئوية. تم تخفيف المحلول = 525 1 1 جم إيثانول وإضافة94 1 جم صوديوم بورو هيدريد على مدار حوالي ساعتين عند أكبر من أو يساوي 5 درجة مئوية. تم تقليب خليط التفاعل ساعتين إضافيتين عند
أكبر من أو يساوي 5 درجة مئوية. تم ‎sled)‏ التفاعل بمحلول به حوالي 1.1 كجم أمونيوم كلوريد في حوالي 3 كجم ماء مع الإضافة البطيئة للإبقاء على درجة الحرارة عند أكبر من أو يساوي 10 درجة مئوية. تم تقليب خليط التفاعل 30 دقيقة إضافية؛ وترشيحه لإزالة المواد غير العضوية؛ وشحنها إلى دورق مبطن سعته 100 لتر واستخلاصها ب 23 كجم ‎.DCM‏ تم فصل الطبقة العضوية واستخلاص الطقة المائية مرتين ‎ual‏ كل مرة ب 4.7 كجم ‎DCM‏ تم غسل الطبقات العضوية المجمعة بمحلول به حوالي 800 جم صوديوم كلوريد في حوالي 3 كجم ماء؛ ثم تجفيفها فوق 2.7 كجم صوديوم سلفات. تم ترشيح المعلق ‎Judy‏ عجينة الترشيح ب 2 كجم ‎DCM‏ تم تركيز نواتج الترشيح المجمعة إلى 2.0 ‎oan‏ وتجفيفها بحوالي 360 جم إيثيل أسيتات؛ وتبخيرها. تم شحن المنتج الخام على حجم جل سيليكا و4 كجم سيليكا مغلف ب ‎DOM‏ في جو من 0 الإنتروجين وتصفيته تتابعيًا ب 2.3 كجم ‎Ji)‏ أسيتات في 7.2 كجم ‎DOM‏ تم تبخير الأجزاء المجمعة واستهلاك المتبقي في 11.7 كجم تولوين. تم ترشيح محلول تولوين وغسل عجينة الترشيح مرتين كل مرة ب 2 كجم تولوين. تم تجفيف عجينة الترشيح إلى وزن ثابت 2.275 كجم من المركب 5 )%46 حصيلة من مركب 3( ‎HPLC‏ 7696.99. 5. تحضير 2؛ 5-داي أوكسو بيروليدين-1-يل(1-(2-نيترو -4-(4-تراي فينيل ميثيل بيبرازين 5 -1 كربونيل) فينيل) بروبان 2 يل) كربونات
2,5-Dioxopyrrolidin—1-yl(1-(2-Nitro—4-(4-triphenylmethylpiperazine-1 (NCP2 ‏(مثبت‎ Carbonyl)Phenyl)Propan-2-yl) Carbonate ‏صورة‎
‎Om SI, 3‏ مر
‏7 في مالي ب ب ا ‎i? ony‏ & م 0 ض ‎Du A Sy‏ ف ¥ ‎of‏ ‏مثبث 2002 8
إلى دورق مبطن سعته 100 لتر تم شحن في جو من الإنتروجين 4.3 كجم مركب 5 (تم ضبط الوزن بناءً على التولوين المتبقي بواسطة ‎¢H1 NMR‏ تم تقشير جميع المواد الكاشفة فيما بعد وفقًا لذلك) و12.7 كجم بيريدين. إلى ذلك تم شحن 3.160 كجم ‎DSC‏ )78.91 وزن % بواسطة ‎(HI NMR‏ مع الإبقاء على درجة الحرارة الداخلية عند أكبر من أو يساوي 35 درجة مئوية. تم تعتيق خليط التفاعل لمدة حوالي 22 ساعة عند درجة حرارة الغرفة ثم ترشيحه. تم غسل عجينة الترشيح ب 200 جم بيريدين. في دفعتين تشتمل كل منهما على نصف حجم الترشيح» وشحن ناتج غسل الترشيح ببطء إلى دورق مبطن سعته 100 لتر به محلول من حوالي 11 كجم حمض سيتريك في حوالي 50 كجم ماء وتقليبه لمدة 30 دقيقة للسماح بترسيب المواد الصلبة. تم تجميع المادة الصلبة باستخدام قمع ترشيح؛ وغسلها مرتين ب 4.3 كجم ماء لكل غسلة؛ وتجفيفها على قمع 0 الترشيح في جو من التفريغ. تم شحن المواد الصلبة المجمعة إلى دورق مبطن سعته 100 لتر وإذابتها في 28 كجم ‎DCM‏ ‏وغسلها بمحلول من 900 جم بوتاسيوم كربونات في 4.3 كجم ماء. بعد 1 ساعة؛ تم السماح بفصل الطبقات وإزالة الطبقة المائية. تم غسل الطبقة العضوية ب 10 كجم ‎cole‏ وفصلهاء؛ وتجفيفها فوق 3.5 كجم صوديوم سلفات. تم ترشيح ‎(DCM‏ وتبخيره؛ وتجفيفه مع التفريغ إلى 6.16 كجم 5 مثبت ‎NCP2‏ )%114 حصيلة). تخليق راتنج محمل بمثبت ‎NCP2‏ ‏إلى 75 لتر تم شحن مفاعل تخليق في الطور الصلب له سدادة تيفلون 5100 ‎Teflon‏ بحوالي 2 لتر ‎NMP‏ و2300 جم راتنج أمينو ميثيل بولي ستيرين ‎aminomethyl polystyrene‏ ‎resin‏ تم تقليب الراتنج في ‎NMP‏ لنفخه لمدة حوالي ساعتين ثم نزحه. تم غسل الراتنج مرتين 0 بحوالي 4 لتر ‎JIDCM‏ غسلة؛ ثم مرتين ب 39 لتر محلول تعادل لكل غسلة؛ ثم مرتين ب 39 لتر 0014 لكل غسلة. تم وببطء إضافة محلول مثبت ‎NOP2‏ إلى محلول الراتنج المقلب؛ وتقليبه لمدة 24 ساعة عند درجة حرارة الغرفة؛ ونزحه. تم غسل الراتنج أريع مرات ب 39 لتر 101/10 لكل غسلة» وست مرات ب 39 لتر 001 لكل غسلة. تم معالجة الراتنج وتقليبه 2/1 محلول سدادة ‎DEDC‏ لمدة 30 دقيقة؛ ونزحه؛ ومعالجته وتقليبه بالنصف الثاني من 2/1 محلول سدادة ‎DEDC‏
لمدة 30 دقيقة ونزحه. تم غسل الراتنج ست مرات ب 39 لتر /001] لكل غسلة ثم تجفيفه في فرن إلى وزن ثابت يبلغ 3573.71 جم راتنج محمل على مثبت. تحضير أوليجومر مورفولينو باستخدام مثبت ‎NCP2‏ ‏50 لتر تخليق الجولوديرسين ‎Golodirsen‏ في الطور الصلب ‎PMO) Solid-phase‏ رقم 1( مادة عقار خام 1. المواد الجدول 2: المواد البادئة اسم الاسم ‎Slash‏ رقم الصيغة المادة ‎CAS‏ الكيميائية الوزن الجزيني ‎C38H37 11 Phosphoramidochloridic | A sas‏ | ]0227 الفرعية | ‎CIN7O4P | -55373 ١ acid, N,N-dimethyl-,[6-[6—‏ [ المنشطة | ‎(benzoylamino)-9H-purin—‏ | 0-30 ‎9-yl]-4—(triphenylmethyl)-‏ 722.2 ‎2-morpholinyllmethyl ester‏ ‎C37H37 11 Phosphoramidochloridic | C sas‏ | ]0232 الفرعية | ‎CINSO5P | -55373 ١ acid, N,N-dimethyl-,[6-[4-‏ [ المنشطة | ‎(benzoylamino)—2-oxo—‏ 1-31 ‎1(2H)-pyrimidinyl]-4-‏ 698.2 ‎(triphenylmethyl)-2-‏ ‎morpholinyllmethyl ester‏
0237١ 3 11 Propanoic Acid, 2,2- ‏وحدة‎ ‎[ CIN7O7P | -55309 dimethyl-,4-[[[9-[6- | DPG 9-89 | [[[chloro(dimethylamino)ph | ‏الفرعيبة‎ ‎942.2 osphinylJoxy]methyl]-4— | ‏المنشطة‎ (triphenylmethyl)-2- morpholinyl]-2-[(2- phenylacetyl)amino]-9H- purin—6-— ylloxy]methyl]phenyl ester
C31H34 11 Phosphoramidochloridic | T ‏وحدة‎ ‎609.1 CIN4O5P | -55373 acid, N,N-dimethyl-,[6- | ‏الفرعية‎ ‎4-34 (3,4—dihydro—-5-methyl- | ‏المنشطة‎ 2,4-dioxo—-1(2H)- pyrimidinyl)]-4- (triphenylmethyl)-2- morpholinyllmethyl ester
C43H47 13 Butanedioic acid, 1- ‏ذيل‎ ‎765.9 N3010| -80600 [3aR,4S,7R,7aS)- | EG3 5-06 | 1,3,3a,4,7,7a—hexahydro- | ‏المنشط‎ 1,3-dioxo-4,7-methano- 2H-isoindol-2-yl] 4-]2- [2-[2-[[[4- (triphenylmethyl)-1- piperazinyl]carbonyl]oxy]et hoxylethoxy]ethyl] ester
البنيات الكيميائية للمواد البادئة: أ. ذيل 63ح ‎Lid‏ ‏0 0 ‎H‏ ‎ON ONAN ON NN \‏ ‎N 0‏ ‎(J Tn‏ ‎J i»‏ ب. وحدة © الفرعية المنشطة (للتحضير» انظر البراءة الأمريكية رقم 8,067,571( صورة ‎١‏ ‏مي ل ~~ ‎SC oN‏ ‎N Ne‏ 0 ‎J :‏ ‎CL =O‏ _ ج. وحدة ‎A‏ الفرعية المنشطة ‎juzaaill)‏ ¢ انظر البراءة الأمريكية رقم 8,067,571( صورة ‎f‏ \ ‎N—h=0‏ ‎H 0‏ لاحم 0 / ‎a‏ 0 ‎T Ne"‏ د. وحدة ‎DPG‏ الفرعية المنشطة (للتحضير؛ انظر الطلب الدولي 064471/2009(
0 0 ب ب“ ‎N—P=0‏ ‏° احم ل / ‎a‏ 0 ‎J,‏ ‏) لبا ‎J i»‏ ه. وحدة ‎T‏ الفرعية المنشطة (للتحضير؛ انظر الطلب الدولي 082551/2013( ب“ ‎N—P=0‏ ‏مم ‎d‏ / الا" ب ل صورة و. راتنج محمل على مثبت 0 0 > ‎N‏ ‏© 7 ‎١ CC‏ ‎NH‏ 2 من ب حيث تكون 1+ عبارةً عن حامل-وسط. الجدول 3: وصف محاليل لتخليق أوليجومرات في الطور الثابت لمادة عقار جولوديرسين خام
محلول مثبت ‎NCP2‏ 5 نثتر ‎NMP‏ و1292 جم مثبت ‎NCP2‏ ‏محلول انسداد 6 لتر داي إيثيل ‎(gla‏ كريونات ‎Diethyl Dicarbonate‏ ‎«(DEDC) DEDC‏ 3.64 لتر ‎«NEM‏ و33.8 لتر ‎DCM‏ ‏محلول 2 كجم 4-سيانو بيريدين ‎4-cyanopyridine‏ « 158 ‎CYTFA‏ لتر ‎.DCM‏ 1.42 لتر ‎(TFA‏ 39 لتر ‎TFE‏ و2 لتر ماء نقى 3 لتر ‎PA‏ 7.5 لتر ‎(PEA sla‏ 106.55 لتر ‎DCM‏ ‏محلول 1« 4 جم ‎DTT‏ 6.96 لتر ‎(NMP‏ و2.98 لتر انشطار ‎DBU‏ ‏2 . تخليق مادة عقار جولوديرسين خام أ. انتفاخ الراتنج وتقليبه لمدة 3 ساعات. تم نزح ‎NMP‏ وتم غسل الراتنج المحمل على مثبت مرتين كل مرة ب 5.5 لتر ‎DCM‏ ومرتين ب 5.5 لتر كل 9630 ‎.TFE/DCM‏ ‏ب. الدورة صفر: إقران ‎EG3 (Ld‏ تم غسل الراتنج المحمل على مثبت ثلاث مرات كل مرة ب 5.5 لتر 9630 ‎TFE/DCM‏ ونزحه؛ وغسله ب 5.5 لتر محلول ‎CYFTA‏ لمدة 15 دقيقة ونزحه»؛ وغسله ‎pe‏ أخرى ب 5.5 لتر محلول ‎CYTFA‏ لمدة 15 دقيقة دون نزح مع شحن 122 ملليلتر 1:1 ‎NEM/DCM‏ وتقليب المعلق ‎sad 0‏ دقيقتين ونزحه. تم غسل الراتنج مرتين ب 5.5 لتر محلول تعادل لمدة 5 دقائق ونزحه؛ ثم مرتين ب 5.5 لتر كل ‎DOM‏ ونزحه. تم شحن محلول من 706.2 جم ذيل 563 المنشّط (الوزن الجزبئي 765.85) و234 ملليلتر ‎NEM‏ في 3 لتر ‎DMI‏ إلى الراتنج وتقليبه لمدة 3 ساعات عند درجة حرارة الغرفة ونزحه. تم غسل الراتنج مرتين مرة ب 5.5 لتر محلول تعادل لمدة 5 دقائق لكل
غسله؛ ومرة ب 5.5 لتر ‎DCM‏ ونزحه. تم شحن محلول من 374.8 جم بنزوبك أنهيدريد و195
ملليلتر ‎NEM‏ في 2680 ملليلتر ‎NMP‏ وتقليبه لمدة 15 دقيقة ونزحه. تم تقليب الراتنج ب 5.5
لتر محلول تعادل لمدة 5 دقائق؛ ثم غسله مرةً ب 5.5 لتر ‎DCM‏ ومرتين ب 5.5 لتر 9630
‎TFE/DCM‏ . تم تعليق ‎mull‏ في 5.5 لتر 9630 ‎TFE/DCM‏ واحتجازه لمدة 14 ساعة.
‏5 ج. دورات إقران الوحدة الفرعية 30-1
‏1. علاجات الإقران المسبق
‏قبل كل دورة إقران على النحو الموصوف في الشكل ¢18 تم غسل الراتنج: 1) ب %30
‎¢TFE/DCM‏ 2) أ) معالجته بمحلول ‎CYTFA‏ لمدة 15 دقيقة ونزحه؛ وب) معالجته بمحلول
‎CYTFA‏ لمدة 15 ‎dass‏ واليه تم إضافة 1:1 ‎NEM/DCM‏ وتقليبه؛ ونزحه؛ 3) تقليبه ثلاث 0 مرات بمحلول تعادل؛ و4) غسله مرتين ب ‎DCM‏ انظر الشكل 18.
‏2. علاجات الإقران البعدية
‏بعد نزح كل محلول وحدة فرعية على النحو الموصوف في الشكل 18« ثم غسل الراتنج :1 ( =
‏/004؛ و2) غسله مرتين ب 9630 ‎TFE/DCM‏ إذا تم احتجاز الراتنج لفترة زمنية قبل دورة
‏الإقران التالية؛ لم يتم نزح محلول غسل ‎TFE/DCM‏ الثاني واحتجاز الراتنج في محلول غسل ‎TFE/DCM 5‏ المذكور. انظر الشكل 18.
‏3. دورات إقران الوحدة الفرعية المنشطة
‏تم إجراء دورات الإقران على النحو الموصوف في الشكل 18.
‏4 محلول غسل ‎IPA‏ النهائي
‏بعد خطوة الإقران النهائية على النحو الموصوف في الشكل 18؛ تم غسل الراتنج 8 مرات ب 19.5 لتر كل ‎IPA‏ وتجفيفه تحت التفريغ عند درجة حرارة الغرفة لمدة حوالي 63.5 ساعة إلى وزن
‏مجفف يبلغ 4857.9 جم.
‏ج. الانشطار
تم تقسيم مادة ‎lie‏ جولوديرسين خام مرتبط بالراتنج السابق إلى دفعتين؛ ومعالجة كل دفعة على النحو التالي. تم تقليب الدفعة 1619.3 جم راتنج: 1) ب 10 لتر ‎NMP‏ لمدة ساعتين؛ ثم نزح ‎NMP‏ 2) غسله ثلاث مرات ب 10 لقر 9630 /15/001؛ 3( معالجته ب 10 لتر محلول ‎sad CYTFA‏ 15 دقيقة؛ و4) 10 لتر محلول ‎CYTFA‏ لمدة 15 دقيقة تم إليه إضافة 130
مليلتر 1:1 ‎NEM/DCM‏ وتقليبه لمدة دقيقتين ونزحه. تم ‎dallas‏ الراتنج ثلاث مرات ب 10 لتر محلول تعادل؛ وغسله ست مرات ب 10 لتر ‎(DCM‏ وثمان مرات ب 10 لتر ‎NMP‏ تم معالجة ‎mul)‏ بمحلول انشطار 1530.4 جم ‎DTT‏ و2980 ‎DBU‏ في 6.96 لتر ‎NMP‏ لمدة ساعتين لفصل مادة عقار الإيتيبليرسين الخام عن الراتنج. تم نزح محلول الانشطار واحتجازه في وعاء منتفصل. تم غسل المفاعل والراتنج ب 4.97 لتر ‎NMP‏ تم دمجه مع محلول الانشطار.
0 د. إزالة الحماية تم نقل محلول الانشطار المدمج وغسول ‎NMP‏ إلى وعاء مضغوط تم إليه إضافة 39.8 لتر ‎(NH3°H20) NH4OH‏ تم تبريده إلى درجة حرارة -10 درجة ‎Augie‏ إلى -25 درجة مئوية في مجمد. تم منع تسريب وعاء الضغط وتسخينه إلى 45 درجة مئوية ‎sad‏ 16 ساعة ثم السماح بتبريده إلى 25 درجة ‎Augie‏ تم تخفيف محلول إزالة الحماية هذا والمحتوي على مادة عقار
5 الجولوديرسين الخام ب 1:3 ماء نقي وضبط رقمه الهيدروجيني إلى 3.0 ب 2 مولار حمض فوسفوربك» ثم إلى رقم هيدروجيني 8.03 ب ‎C18 :HPLC .NH4OH‏ 1677.552 و ‎SCX-‏ ‏10 71673.768. تنقية ‎sale‏ عقار الجولوديرسين ‎PMO)‏ رقم 1) الخام تم تحميل محلول إزالة الحماية من الجزء د السابق؛ والمحتوي على مادة عقار الجولوديرسين الخام
0 على عمود راتنج تبادل أنيوني 5 ‎(Tosoh Bioscience) ToyoPearl Super-Q‏ وتصفيته تتابعيًا بتدرج 9635-0 ب فوق حجم عمود 17 (محلول منظم أ: 10 مللي مولار صوديوم هيدروكسيد؛ محلول منظم ب: 1 مولار صوديوم كلوريد في 10 مللي مولار صوديوم هيدروكسيد) وتجميع أجزاء ذات نقاء مقبول ‎(SCX HPLC 5 C18)‏ إلى محلول منتج عقار نقي. ‎(SCX) 988.270 (C18) 93.571 :HPLC‏
تم إزالة الملح من محلول مادة العقار النقي وتجفيده إلى 1450.72 جم مادة عقار جولوديرسين ‎Al‏ . حصيلة 9654.56؛ ‎(SCX) 1688.354 (C18) 9693.531 :HPLC‏ الجدول 5. الاختصارات ترافق ‎CPP‏
صورة تاي ‎gg LO‏ تي “وير ص ”© . عر الم الم ‎T ES‏ حا ييح ايه لي ‎HOT‏ ‎a‏ مضق لصوم مج مهد ,. ب ‎DIFES, DISD PII‏ ب ‎is‏ 0 ‎OH 4‏ 0 0 ‎gs Ph Osan‏ ‎Nps HERI | : 1 es‏ ب ‎ho poh OH‏ ‎Lp pr” fetta‏ ب , ‎oo SHH‏ 80ج ا بو ياي 2 3 ترقيح ‎FWEX‏ ‏8 من خلال استبدال أيونات الكلوريد الإجراءات التحليلية: تم تسجيل أطياف كتلة زمن الانتقال بالتآين والمج بالليزر المساعّد على مصفوفة ‎(MALDI-TOF-MS)‏ على جهاز ‎«Bruker AutoflexTM Speed‏ باستخدام مصفوفة حمض سينابينيك ‎sinapinic acid‏ (/5). تم إجراء ‎SCX-HPLC‏ على جهاز ‎Thermo Dionex UltiMate 3000‏ مزود بكاشف مصفوفات 3000 دايود وعمود ‎x 250) ProPacTM 50-0‏ 4 مم) ‎Jaa‏ تدفق 1.0 ملليلتر/دقيقة (برقم هيدروجيني = 2؛ درجة حرارة العمود 30 درجة مئوية). الأطوار المتحركة أ )%25 أسيتو نيتريل في ماء يحتوي على 24 مللي مولار ‎(H3PO4‏ وب )%25 أسيتو نيتريل في ماء يحتوي على 1 ‎KCI se‏ 0 و24 مللي ‎(H3PO4 Nee‏ تم استخدام التصغية التتابعية للتدرج: صفر ‎dad‏ 9635 ب؛ 2 ‎dada‏ 90635 ب؛ 22 ‎«dada‏ 90680 ب؛ 25 ‎«dasa‏ %80 ب؛ 25.1 دقيقة %35 ب؛ 30 ‎dass‏ 97035 ب. إلى خليط ‎PMO‏ رقم 1 )32 .1 جم؛ 0.177 مللي مولء مجفف خامًا بالتجفيد لمدة يومين)؛ ‎Luss OH-Gly-Arg-L-Arg-L-Arg-L-Arg-L-Arg-L-Arg-L-Ac‏ تراي فلورو 5 أسيتات )614.7 ‎Ae 0.354 cane‏ مول)؛ و1- [بيس (داي ميثيل أمينو)ميثيلين ‎«1-1H-[‏ 2 3-تريازولو [4؛ 0-5]بيريدينيوم 3-أكسيد هكسا فلورو فوسفات ‎(HATU)‏ 134.4 مجم؛ 0.354 ‎Ale‏ مول) تم إضافة داي ميثيل سلفوكسيد ‎(DMSO)‏ 20 ملليلتر). تم تقليب الخليط عند درجة حرارة الغرفة لمدة 3 دقائق»؛ ثم إضافة ‎(N‏ ل١-داي‏ أيزو بروبيل إيثيل أمين ‎DIPEA)‏ 68.5
مجم؛ 0.530 مللي مول). بعد 5 دقائق؛ أصبح الخليط المغبر محلولًا شفافًا. تم مراقبة التفاعل بواسطة ‎.SCX-HPLC‏ بعد ساعتين؛ تم إضافة 20 ملليلتر 9610 أمونيوم هيدروكسيد محلول ‎(NH3 962.8(‏ .23 تقليب الخليط عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين إضافيتين. تم إنهاء التفاعل بإضافة 400 ملليلتر ماء. تم إضافة تراي فلورو إيثانول (2.0 ملليلتر) إلى المحلول.
تم تقسيم المحلول إلى ‎Oa‏ وتنقية كل جزء بواسطة عمود ‎WCX‏ )0 1 جم راتنج لكل عمود ( . تم ‎Vf‏ غسل كل عمود ‎WCX‏ 2 9620 أسيتو نيتريل في ‎elo‏ (حجم/حجم) لإزالة ‎PMO sale‏ البادئة رقم 1. تم إيقاف عمليات الغسل (225 ملليلتر لكل عمود) عندما أظهر تحليل طيف كتلة ‎MALDI-TOF‏ غياب إشارة ‎PMO‏ رقم 1. تم بعد ذلك غسل كل عمود بماء )100 ملليلتر لكل عمود) . تم تصفية المنتج المطلوب؛ ‎PPMO‏ رقم 1 تتابعيًا بواسطة 2.0 مولار جواندين ‎HCI‏
0 (140 ملليلتر لكل عمود). تم تجميع محاليل ‎PPMO‏ رقم 1 المجمعة ‎Ge‏ ثم تقسيمها إلى جزئين وإزالة الملح منهما بواسطة عمود ‎PE‏ 5 )0 1 جم راتنج لكل عمود ( . تم أولا غسل عمود ‎SPE‏ ب 1.0 مولار محلول ‎NaCl‏ مائي )100 ملليلتر لكل عمود) لتوليد ملح هكسا هيدرو كلوريد من ‎PPMO‏ رقم 1 . تم بعد ذلك غسل كل عمود ‎SPE‏ بماء (200 ملليلتر لكل عمود). تم تصفية ‎PPMO‏ رقم 1 النهائي الذي تم إزالة الملح ‎die‏ بواسطة 9650 أسيتو 5 1 نيتريل في ماء (حجم/حجم 50 1 ملليلتر لكل عمود) . تم إزالة ا لأسيتو نيتريل بالتفريغ عند درجة حرارة منخفضة. تم تجفيد المحلول المائي الناتج للحصول على مترافق هكسا هيدرو كلوريد ‎PPMO‏ رقم 1 الناتج (93. 1 جم؛ %94.5 حصيلة). المثال 1: ‎PMO‏ رقم 1 باستخدام الطريقة ب لتخليق بروتوكول ‎PMO‏ الموصوف أعلاه؛ تم تخليق ‎PMO‏ رقم 1: ]3[ ]5[ ‎Nu Nu‏ 0 ‎AN | A‏ ‎N‏ 0 ‎No pC NH‏ مم © | 0 ‎A / No‏ 3 الس ‎N 0 H‏ ‎H,C cH, 3 CH, ,‏ صورة 9
‎PMO‏ رقم 1 حيث تكون كل ‎Nu‏ من 1 إلى 25 و5 إلى 73 ‎Ble‏ عن: الموضع | ‎Nu | ١ | NU‏ | | | نالا رقم 5 لموضع | نالا | لموضع لموضع | نالا | لموضع إلى 3 رقم 5 رقم 5 رقم 5 رقم 5 إلى 3 إلى 3 إلى 3 إلى 3 ‎se ee] ue oe‏ ‎T T‏ ‎G 221 A 17 12 7| T 2‏ ‎C‏ ‎T 231 A 18] T 13 T 3‏ ‎G G‏ ‎T 24 19| © 14| © 4‏ 0 ‎20١ 7 15| G 10| © 5‏ 6 |25
‎NH, HN‏ ‎oP‏ ® 4 ‎No 4 N‏ حيث تكون ‎le A‏ عن صورة ‎me‏ تكون © ‎ble‏ عن صورة ‎whe‏ ؛ تكون 6 ‎Ble‏ ‏0 0 ‎N je‏ ا ني \ / ‎NE‏ ,4 ولس عن صورة سل , وتكون 7 ‎ble‏ عن صورة صلم . ‎:HPLC‏ 9671.85؛ الظروف: ‎DNX)Dionex DNAPac‏ رقم97) « التدرج: 5 + 0ب + 2%5 عند صفر دقيقة؛ 1%50 عند 20 دقيقة ؛ 1%25 + 9675 عند 21 دقيقة ؛ الطور المتحرك أ: 10 مللي مولار ‎20/NaOH‏ مللي مولار ‎«NaCl‏ ج: 10 مللي مولار ‎0.5/NaOH‏ مولار ‎.NaCL‏ درجة حرارة العمود: 45 درجة مئوية؛ معدل التدفق 1.0 ملليلتر/دقيقة. المثال 2: ‎PPMO‏ رقم 1 باستخدام البروتوكول الموصوف أعلاه؛ تم تخليق ‎PPMO‏ رقم 1 من ‎PMO‏ رقم 1: صورة ‎HN NH; ~~ HNG NH, HNg NH,‏ 3— 5 ‎Nu Nu SF 1 1‏ 0 ‎LO 0 5 0 NN grog J Pp‏ ‎HO Ne Nips N N A NA NA‏ ‎EST OY ye‏ ‎.6HCI‏ ور ‎em, 3١‏ 3 ‎HN HN HN‏ ‎HS aS nS‏ ‎PPMO‏ رقم 1 حيث تكون كل ‎NU‏ من 1 إلى 25 و5" إلى 3" ‎Ble‏ عن:
Nu ‏الموضع‎ | NU | ‏الموضع‎ | NU | ‏الموضع‎ | NU | ‏الموضع‎ | NU | ‏الموضع‎ ‎Sd 5S ‏رقم‎ 5S ‏رقم‎ 5S ‏رقم‎ 5S ‏رقم‎ ‎3 3 3A 3A 3S 21 G Cc
T G 16 11 G 1
T A
23 18 T 13| © T 3 0 4 1 24 © 19 14 C 6
Cc G 200 T 15| G 10| © 5
NH, HN 0 0
N Ao 4, N
Ble G ‏؛ تكون‎ wh ‏عن صورة‎ Ble © ‏؛ تكون‎ mb gpm ‏عن‎ Ble A ‏حيث تكون‎ 0 0
Cr ‏ا‎ ‎No 4, NE . ‏عن صورة صلم‎ ble 7 ‏عن صورة سل , وتكون‎ ‏تخطي الإكسون 53 في المعمل (أرومات عضلية)‎ :3 Jal
تم تقييم مركبين يستهدفان ديستروفين ‎(DMD) target human dystrophin‏ الإكسون 53 البشري على النحو الموصوف في الجدول التالي « ‎PMO‏ رقم 1 و0 ‎PPM‏ رقم 1 وبحتوي كل منهما على نفس المتوالية لتخطى ‎DMD‏ إكسون 53 فى أرومات عضلية صحيحة. متواليات ‎PMO‏ رقم 41 ‎PPMO‏ رقم 1 ل ‎DMD‏ إكسون 53 البشري متوالية استهداف (15) متوالية 5 الاسم 15 3 ‎GTTGCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTC‏ 1 ‎H| EG PMO‏ رقم 1 3 ‎GTTGCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTC‏ 1 ‎-G-| EG PPM‏ © رقم 3 ‎R6‏ ‏1 ‏5 على نحو محدد ¢ تم وضع أرومات عضلية بشرية صحيحة (الممر 6-5( ‎SKB-F-SL‏ يباع لدى ‎Inc.‏ ,260-810) على أطباق عند تجمع ~%40 عند معالجتها ب ‎PMO‏ رقم 1 أو ‎PPMO‏ رقم 1 بتركيزات متنوعة (أي ؛ 40 ميكرو متر ؛ 20 ميكرو متر ؛ 10 ميكرو متر ؛ 5 ميكرو متر 3 5 .2 ميكرو متر 3 و25. 1 ميكرو متر ( في أوساط ‎SKM-M‏ ) ,607-10 ”2 .©0)). بعد ست وتسعين ساعة من الحضانة ؛ تم غسل الأرومات العضلية ب ‎PBS‏ وتحليلها 0 بواسطة محلول ‎RAL‏ منظم في طقم 96 ‎lllustra GE RNAspin‏ (رقم الكتالوج 055-25- ‎.(GE Healthcare Bio-Sciences (75‏ تم عزل ‎RNA‏ الكلى ‎Gig‏ لتوصيات الشركة المصنعة ؛ باستثناء استخدام 40 ميكرو لتر ماء خالٍ من ‎RNase‏ لتصفية ‎RNA‏ تتابعيًا. لتحديد تخطي الإكسون 53 بواسطة كلا المركبين ¢ تم إجراء ‎RT-PCR‏ عند النقطة الأخيرة والمكون من خطوتين. على نحو محدد ؛ تم أولا نسخ أحد عشر ميكرو لتر من ‎SIRNA‏ نسحًا عكسيًا إلى ‎DNA‏ بواسطة طقم تخليق جدائل ‎SuperScript IV‏ أول (رقم الكتالوج
‎(Invitrogen (18091200‏ باستخدام وحدات الهكسامير العشوائية ‎ag‏ لتعليمات الشركة المصنعة. تم إجراء ‎PCR‏ بإضافة 9 ميكرى لتر ‎cDNA‏ في ‎PCR Supermix High Fidelity‏ لبوليميراز ‎Platinum Taq DNA‏ (رقم الكتالوج 12532024« ‎(Invitrogen‏ ببادئات استهدفت إكسوني ‎DMD‏ البشريين» وصلة 52/51 و54 [بادئة أمامية (المتوالية رقم:5) :
‎CATCAAGCAGAAGGCAACAA 5‏ ؛ بادئة عكسية (المتوالية رقم:6) : ‎J[GAAGTTTCAGGGCCAAGTCA‏ تم إجراء تضخيم ‎PCR‏ باستخدام برنامج دوران حراري في الزمن الفعلي من نوع ‎BioRad CFX96‏ باستخدام البرنامج الموضح في الجدول 2. تم تقييم تعبير منتجات ‎POR‏ المتخطاة وغير المتخطاة بتحميل 32 ميكرو لتر من منتج ‎PCR‏ على جهاز ‎LabChip GX‏ باستخدام طقم ‎DNA High Sensitivity Reagent‏ ) ,05760672
‎(Perkin Elmer 10‏ تم احتساب النسبة المئوية تخطي الإكسون ‎DMD‏ 53 بالنسبة المئوية للمولارية (نانو مولار/لتر ) لنطاق الإكسون 53 المتخطى (201 زوج قاعدة ) مقارنة بالمولارية الكلية للنطاقات المتخطاة ) 201 زوج قاحدة ( وغير المتخطاة )3 41 زوج قاحدة ( . تم استخدام اختبار آ للطلاب غير مقرون ثنائي الأطراف لتقييم ما إذا كان متوسط المجموعتين يختلف إحصائيًا عن بعضهما البعض عند كل جرعة. تم اعتبار القيمة © أقل من 20.05 ‎Glas) 5‏ برنامج الدوران الحراري المستخدم لتضخيم أمليكونات ‎DMD‏ مع أو بدون تخطي الإكسون 53. ‎ee = =‏ ‎ee = = :‏
قن | ‎wees‏ ‏تم عرض النتائج في الجدول أدناه و في الشكل 4. وفي الشكل 4 تمثل أشرطة الخطأ متوسط متوسط الانحراف المعياري + وبشير لالرقم] *' ‎el‏ الأشرطة إلى التغير النسبي المضاعف في النسبة المئوية لتخطي الإكسون عن طريق ‎PPMO‏ رقم 1 مقارنة ب ‎PMO‏ رقم 1 عند كل تركيز « وبشير ”*“ إلى الفارق الدال إحصائيًا بين ‎PMO‏ رقم 1 ‎PPMO‏ رقم 1 حيث تكون ‎dad‏ م أقل من 0.05. النسبة المئوية لتخطي إكسون ‎DMD‏ 53 عن طريق ‎PMO‏ رقم 1 ‎PPMO,‏ رقم 1 في أرومات النسبة المئوية لتخطي الإكسونات (متوسط الانحراف المعياري +) الجرعة .1 .2 (ميكرو 5 10 20 40 . 25 5 متر) .1 .2 .3 11 19 ‎PMO‏ |27+ 19+ 58+ 6 | .06+ .57+ رقم 1 0.24 0.44 0.91 1.32156 | 2.08 4.23 .2 .3 .6 10 17 ‎PPMO‏ ‏03+ 73+ 57+ .27+ .08+ 0+ رقم 1 0.48 0.70 1.47 2.78 4.61 4.8 تظهر البيانات في الجدول أعلاه وفي الشكل 4 على نحو مدهش التخطي الأعلى على نحو ‎Ja‏ ‏إحصائيًا للإكسون 53 في أرومات عضلية عند ‎dallas‏ الخلايا ب ‎PPMO‏ رقم 1 مقارنةً ب ‎PMO‏ ‏0 رقم 1 عند جميع التركيزات ؛ والتي يُتوقع درجتها. ويحتمل إيضاح هذا التحسن الكبير في اختبار ‎laze‏ مقارن ‎die‏ دراسة أوليات غير ‎(NHP) non-human primate Ld‏ وفقًا للمثال 5
حيث يتم ‎dallas‏ 10/105 ب 001/0 رقم 1 أو ‎PMO‏ رقم 1 و يتم قياس تخطي الإكسون 53 في عدة ‎dal‏ عضلية ذات صلة (انظر المثال 5 للتفاصيل). علاوةً على ذلك؛ نظرًا لتحلل ‎PPMO‏ ‏رقم 1 في أوساط ‎SKM-M‏ يتم استخدامها في هذا المثال (البيانات غير موضحة) وقت قياس ‎au)‏ هذه الدراسة ؛ حيث قد تشير دراسة ‎NHP‏ إلى تحسن أكبر بكثير من ذلك الموضح في هذا المثال. المثال 4: دراسة ‎MDX la‏ يعد فأر ‎MAX‏ نموذجًا مقبولًا من الحيوانات ومعروف جيدًا بإصابته بالحَكّل العَضَلِئَ لدوشين ‎(DMD) Duchene muscular dystrophy (Duchene)‏ ويحتوي على طفرة في إكسون 3 بجين الديستروفين. من المعروف أن متوالية ‎M23D‏ المضادة لاتجاه النسخ (المتوالية رقم:2) تقوم بحث تخطي إكسون 23 وتستعيد تعبير الديستروفين الوظيفي ‎٠‏ ثم إعطاء فثران ‎MDX‏ عمرها 7-6 أسابيع ‎Lika‏ واحدة في وربد الذيل من ‎PPMO4225‏ أو ‎PMO4225‏ وفقًا للجدول التالي عند جرعة 40 مجم /كجم ¢ أو مع محلول ملحي مركز . الاسم متوالية الاستهداف (15) رقم 5 ,9 3 ,9 متوالية
‎PMO4225‏ ]0472[ ‎H| EG 2 | GGCCAAACCTCGGCTTACCT‏ ‎GAAAT‏ 3 ‎PPMO4225‏ ]0477[ ‎EG 2 | GGCCAAACCTCGGCTTACCT‏ |- ‎G| 3 GAAAT‏
تم تحضير كل من 01/104225 ‎PPMO4225‏ بالطريقة ‎PMO‏ أ وطرق ‎CPP ily‏
الموصوفة أعلاه ‎٠‏
تم ذبح الفتران المعالجة عند بعد 7 30 60 و90 يومًا من إعطاء حقنة واحدة ‎Nn)‏ = 6 لكل
مجموعة). تم معالجة الحجاب الحاجز؛ القلب والعضلة ‎due by‏ الرؤوس اليمنى لتحليل ‎dads‏ ويسترن لقياس إنتاج بروتين ديستروفين ودرجة حرارة الغرفة من خلال تحليل ‎RT-PCR‏ لقياس النسبة
المئوية لتخطى الإكسونات؛ ومعالجة العضلة رباعية الرؤوس اليسرى لتحديد الكيمياء الهيستولوجية
المناعية وتبقيع ‎H/E‏ على النحو الموصوف أعلاه .
تم احتساب كمية استعادة بروتين الديستروفين ببقعة ويسترن؛ وقياس النسبة المئوية لتخطي إكسون
23 من خلال ‎RT-PCR‏ على النحو الموصوف أعلاه.
0 تم عرض نتائج ‎RT-PCR‏ وبقعة ويسترن في الأشكال 5أ-10ب وفي الجداول التالية. على نحو ‎(ae‏ أدى ‎PPMO4225‏ إلى حث مستويات أعلى ومستدامة على نحو دال إحصائيًا من استعادة الديستروفين وتخطي الإكسون 23 مقارنة ب ‎(PMO4225‏ مع وجود أعلى المستويات بعد ‎lag 30‏ من الحقن. والمدهش أكثر أن ‎PPMO4225‏ قد أدى إلى زيادة مستويات الديستروفين فى القلب بينما لم يؤدي 04225 ‎PM‏ إلى ذلك؛ لم يلاحظط الديستروفين وتخطى ‎J‏ لإكسونات فى
5 القلب عند جميع النقاط الزمنية باستخدام ‎PMO4225‏
كمية بروتين ديستروفين باعتباره النسبة المثوية للبروتين غير المعالج ‎(WT%)‏ ببقعة ويسترن ‎PPMO4225 [0485]| PMO4225 [0484]‏ اليوم 7 30 7 30
1.1 ‏العضلة‎ ‎8.2] 20.8] 28.1 20.7| 0.7] 1.663 ‏الرؤوس‎ dae ly)
الحجاب الحاجز 1.4 ]1.9 ]1.3 14.5 |15.2 2.3
القلب
2.0 1.0 0.1 النسبة المئوية لتخطي الإكسونات حسب قياس ‎RT-PCR‏ ‎MO4225‏ 45 اليوم 7 30 7 30
العضلة ‎Lely‏ 7.9 5 42.02 الرؤوس 21.2 5.51 2.8 28.8
51.6 2.6 | 29.9 | alll ‏الحجاب‎
0.5 6 3.05 القلب 13.15 2.64 تم عرض تتائج الكيمياء الهيستولوجية المناعية في الشكل 11 ‎cla‏ أدى ‎PPMO4225‏ إلى استعادة الديستروفين في العضلة رباعية الرؤوس؛ في حين أن 4225 أدى إلى إنتاج نمط تعبير
مرقع. يشير التوزيع المنتظم للديستروفين من خلال علاج ‎PPMO4225‏ إلى انتشار استهداف العضلة الهيكلية. وقد أدى ‎PPMO4225‏ ويدرجة كبيرة إلى تحسين الإعطاء ‎jie‏ 01/104225 فى الخلية الحية. المثال 5: ‎ads‏ الإكسون 53 في ‎NHP‏ ‏5 لإيضاح فاعلية ‎ads‏ إكسونات أوليجومرات ‎PPMO‏ المضادة لاتجاه النسخ؛ تم استخدام أوليات غير بشرية . على نحو محدد؛ يتم حقن قرود رياح ذات أنسجة عضلية سليمة؛ ب ‎PPMO‏ رقم 1 ‎PMO‏ رقم 1 (من المثال 2)؛ أو محلول ملحي مركز وفقًا لجدول الإعطاء في الجدول التالي: جدول إعطاء الرياح الجرعة قم كل المجموعة المركب ل استراتيجية الإعطاء ‎(pe)‏ مجموعة
‎PPMO‏ رقم 1 20 3
‎1
‎PPMO‏ رقم 2 40 3 1
‎1
‎PPMO‏ رقم 3 3 3
‎1
‎4 ‏رقم‎ PPMO 3 160 4
‎SAC 1 1 ‏ملل‎
54 أسبوعيًا؛ بإجمالي 4 جرعات تم ذبح الحيوانات بعد 48 ساعة من اخر ‎(dea‏ في اليوم 22 1 ‎SAC‏ ‎Ls 30‏
‎PPMO‏ رقم
‎2 40 7
‏1 ‎de >‏ واحدة في اليوم 1 مع الاستعادة لمدة 4 أسابيع 1 ‎Lge 60‏
‎PPMO‏ رقم
‎SAC 2 40 1
‎de >‏ واحدة في اليوم 1 مع الاستعادة لمدة 8 أسابيع
سيتم ملاحظة الحيوانات على مدار الدراسة؛ بما في ذلك الملاحظات الإكلينيكية (على سبيل المثال» الجلد والفراء؛ والتأثيرات التنفسية) وقياسات وزن الجسم. سيتم أخذ عينات من الدم والبول قبل بدء الاختبار على الأقل» وبعد 24 ساعة من الجرعة الأولى والجرعة الأخيرة (إذا كان ذلك ‎(ae‏
في كل مرة تشريح؛ أو تخدير وقت الاحتضار مجدولة؛ تم تجميع قطاعات من الحجاب الحاجزء العضلة الملساء للإثنا عشرء المَريء؛ والأووطى؛ العضلة رياعية الرؤوس؛ العضلة الدالية؛ العضلة ذات الرأسين؛ والقلب وتجميدها في الحال. تم تحديد النسبة المئوية لتخطي الإكسون 51 باستخدام ‎RT-PCR‏ على النحو الموصوف أعلاه. المثال 6: دراسة استجابة فأر ‎MDX‏ للجرعات
0 .تم إعطاء فئران ‎MDX‏ عمرها 7-6 أسابيع حقنة واحدة في وربد الذيل من ‎PPMO4225‏ أو 5 الموصوف أعلاه عند جرعة 40 مجم/كجم؛ 80 مجم/كجم؛ أو 120 مجم/كجم ‎N)‏ ‏= 6 لكل مجموعة) ‎٠‏ ‏تم ذبح الحيوانات المعالجة عند 30 يومًا من الحقن. تم معالجة الحجاب الحاجز؛ العضلة رباعية الرؤوس» والقلب لتحليل بقعة ويسترن لقياس إنتاج بروتين الديستروفين بناءً على بروتوكول بقعة وبسترن السابق وصفه (المستخدم؛ على سبيل المثال؛ في المثال 4( مع التعديلات التالية: المؤثر بروتوكول ‎dads‏ ويسترن في | تعديلات بروتوكول بقعة المثال 4 ويسترن حساب البروتين تجرية طقم بروتين طريقة ‎BCA‏ ‎RC DC‏
خطوة الإيقاف طوال الليل عند 4 1 ساعة عند درجة حرارة درجة مئوية الغرفة حضانة الجسم 1 ساعة عند درجة طوال الليل عند 4 المضاد الأولي حرارة الغرفة درجة حرارة الغرفة تركيز الجسم المضاد 20:1 500:1 الأولي تم عرض استعادة بروتين ديستروفين بالنسبة المئوية للنوع غير المعالج 96 في الجدول التالي وفي الأشكال 15-12. احتساب بروتين الديستروفين بالنسبة المئوية للبروتين غير المعالج ‎(WT)‏ ببقعة ويسترن الجرعة (مجم/كجم) 40 0 ‎40١‏ 120 الحجاب الحاجز 8.0 0.80 0.97 | 1.83 26.03 42.7771 2 القلب 6 6.34/7 0.13 |0.24 0.34 19.48 1
العضلة رباعية الرؤوس 3.5 3.0 2.6 43 144 على نحو مدهش»؛ توضح البيانات أن جرعةٌ واحدة من ‎PPMO4225‏ قد أدت إلى زيادة مستويات الديستروفين بصورة معتمدة على الجرعة في فثران ‎mdx‏ إلى مدى أكبر بكثر على نحو دال المثال 7: دراسة ‎IHC‏ للحجاب الحاجز والقلب لدى ‎MDX jy‏
تم إعطاء ‎MDX yi‏ عمرها 7-6 أسابيع حقنة واحدة في وريد ذيل ‎PPMO4225‏ تبلغ 80 مجم/كجم أو محلول ملحي مركز ¢ وإعطاء فثران غير معالجة عمرها 7-6 أسابيع حفنة من محلول ملحي مركز . تم ذبح ‎mdX Gh‏ غير المعالجة»؛ ‎MAX Gy‏ تم إعطاؤها ‎deja‏ واحدة محلول ملحي مركز؛ وفتران غير معالجة بعد 30 يومًا ‎N)‏ = 4 لكل مجموعة). تم إيضاح نتائج الكيمياء الهيستولوجية المناعية في الشكل 19. هناء توضح النتائج ‎Bal)‏ منتظمة في الديستروفين في
0 الأنسجة المرتبطة بالمرض والوفاة فى ‎DMD‏ فى فتران ‎mdx‏ المعالجة ب ‎PPMO4225‏ ‎JU‏ 8: تخطي الإكسون 53 في المعمل (نبيبات عضلية) تم تقييم اثنين من المركبات يستهدفان ديستروفين ‎(DMD) target human dystrophin‏ يحتوي كل منهما على نفس المتوالية؛ لتحديد تخطي الإكسون ‎DMD‏ 53 في نبيبات عضلية متواليات ‎PMO‏ رقم 1 4 ‎PPMO‏ رقم 1 لإكسون ‎DMD‏ 53 البشري. الاسم | متوالية المركب رقم متوالية 5 3 الاستهداف
‎H| EG | H53( GTT GCC TCC GGT TCT PMO‏ يك ‎TT]‏ ‎GTT GCC TCC GGT TCT‏ )153 ‎GR6A | EG +36+60 GAA GGT 611 C| PPM‏ 0 رقم ‎c| 3 R6G)‏ 1 على نحو محدد؛ تم استزراع أرومات عضلية بشرية صحيحة (الممر 6-5« ‎SKB-F-SL‏ يباع لدى ‎Inc‏ ,260-810.) للوصول إلى تجمع 9690-80 في أوساط ‎SKM-M‏ قبل بدء التمايز من خلال الحضانة في أوساط مصلية منخفضة ‎In)‏ ,280-810 ,0-/ل514).). بعد خمسة أيام من التمايز» تم حضانة النبيبات الناضجة مع المركبات السابقة بتركيزات متنوعة (أي؛ 40 ميكرو 5 .مترء؛ 20 ميكرو ‎jie‏ ¢ 10 ميكرو مترء؛ 5 ميكرو ‎jie‏ ¢ 2.5 ميكرو متر؛ و1.25 ميكرو متر). بعد ست وتسعين ساعة من الحضانة؛ تم غسل النبيبات ب ‎PBS‏ وتحليلها بمحلول تحليل ‎RLT‏ ‏منظم من طقم ‎RNeasy Micro‏ (رقم الكتالوج 74004« 018960). تم عزل ‎RNA‏ الكلي ‎Bay‏ ‏لتوصيات الشركة المصنعة؛ باستثناء استخدام 20 ميكرو لتر ماء خالٍ من ‎RNase‏ لتصفية ‎RNA‏ تتابعيًا. 0 تتحديد ‎DMD‏ تخطي الإكسون 53 بواسطة كلا المركبين ¢ تم إجراء ‎RT-PCR‏ عند النقطة الأخيرة والمكون من خطوتين. على نحو محدد؛ تم ألا نسخ سبعة ميكرو لتر من ‎RNA‏ الكلي نسحًا عكسيًا إلى ‎CDNA‏ بواسطة طقم تخليق جدائل ‎SuperScript IV‏ أول (رقم الكتالوج ‎(Invitrogen (18091200‏ باستخدام وحدات الهكسامير العشوائية ‎ag‏ لتعليمات الشركة المصنعة. تم إجراء ‎PCR‏ بإضافة 9 ميكرى لتر ‎PCR Supermix High Fidelity cDNA‏ ليوليميراز ‎Platinum Taq DNA‏ (رقم الكتالوج 12532024( ‎(Invitrogen‏ ببادثئات استهدفت وصلة إكسوني 01/0 البشريين 52/51 و[54 (بادئة أمامية ‎GAA 611 TCA GGG CCA‏ ‎[AGT CA‏ تم إجراء تضخيم ‎PCR‏ باستخدام برنامج دوران حراري في الزمن الفعلي من نوع ‎BioRad 6‏ باستخدام البرنامج الموضح في الجدول 2. تم تقييم تعبير منتجات ‎PCR‏ ‏المتخطاة أوغير المتخطاة بتحميل 32 ميكرو لتر من منتج ‎PCR‏ على جهاز ‎LabChip GX‏
باستخدام طتم ‎Perkin Elmer) DNA High Sensitivity Reagent‏ ,015760672). تم احتساب النسبة المثوية تخطي الإكسون ‎DMD‏ 53 بالنسبة المئوية للمولارية (نانو مولار/لتر) لنطاق الإكسون 53 المتخطى (201 زوج قاعدة) مقارنة مقارنة بالمولارية الكلية للنطاقات المتخطاة ) 201 زوج قاعدة) وغبر المتخطاة )3 41 زوج قاعدة) .
5 .تم استخدام اختبار ) للطلاب غير مقرون ثنائي الأطراف (متجانس التباين) لتقييم ما إذا كان متوسط المجموعتين يختلف إحصائيًا عن بعضهما البعض عند كل جرعة. تم اعتبار القيمة © أقل من 0.05 42 إحصائيًا. برنامج الدوران الحراري المستخدم لتضخيم أمليكونات ‎DMD‏ مع أو بدون تخطي الإكسون 53.
8.نزع الخواص 4 درجة ‎Lge‏ 2 دقيقة الطبيعية 9.نزع الخواص 4 درجة ‎Lge‏ 0 ثانية الطبيعية ’ | | = 2 : : > > - ‎oe = | ’‏ ‎ee > | | ’‏ تم عرض النتائج في الجدول أدناه وفي الشكل 20 وفي الشكل 20؛ ؛ تمثل أشرطة الخطأ متوسط 0 الانحراف المعيارس + ؛ وبشير (الرقم] #” ‎def‏ الأشرطة إلى التغير النسبي المضاعف في النسبة المثوية لتخطي الإكسون عن طريق ‎PPMO‏ رقم 1 مقارنةً ب ‎PMO‏ رقم 1 عند كل تركيز ؛
وبشير و*“ ؛”**" ” إلى الفارق الدال إحصائيًا بين ‎PMO‏ رقم 1 و ‎PPMO‏ رقم 1 حيث تكون ‎das‏ م أقل من 0.05 أو 0.005؛ على الترتيب. النسبة المئوية لتخطي إكسون ‎DMD‏ 53 بواسطة ‎PMO‏ رقم 1 ‎PPMO‏ رقم 1 في نبيبات بشرية. ]0675[ النسبة المئوية لتخطي الإكسونات (متوسط الاتحراف ]0674[ المعياري +) المركب/الجد | ]0676[ ]06771[ | ]0678[ ]0679[ | ]0680[ ]06811[ عة (ميكرو متر) 2 4 1.25 2.5 5 10 0 0 ]0683[ | ]0684[ | ]0685[ | [0686] ]0687[ | ]0688[ ]0682[ 1.45 |2.63 ]3.23 | 4.78 8 1 ‎PMO‏ رقم 1 + + + + .40 + 2.98 + 0.39 |0.50 |0.47 |0.88 |0.53 1.21 ]0690[ ]0691[ | ]0692[ | ]0693[ ]0689[ ]0694[ | ]0695[ ‎&,PPMO‏ |3.10 ]2.45 |4.73 |7.08 9 1 1 + + + + .45 + | 2.08 + 1.67 ]0.52 1.01 |0.48 |1.03 1.30 تظهر البيانات في الجدول أعلاه وفي الشكل 20 على نحو مدهش نتائج التخطي الأعلى على نحو دالٍ إحصائيًا للإكسون 53 في النبيبات عند معالجة ‎LA‏ ب ‎PPMO‏ رقم 1 مقارنة ب ‎PMO‏ رقم 1 بتركيزات بلغت على الأقل عند 5 ميكرو متر و 10 ميكرو متر ؛ حيث كانت هذه الدرجة غير ‎dad gia‏ . يُحتمل وضوح هذا التحسن الدال إحصائثيًا في اختبار حيوي مقارن في دراسة
NHPs dallas ‏للمتال 5 عند‎ Gig (NHP) non-human primate ‏الكائن الأولى غير البشري‎ ‏الإكسون 53 في عدة أنسجة عضلية ذات‎ dads ‏رقم 1 و تم قياس‎ PMO ‏ب 001/0 رقم 1 أو‎ ‏رقم 1 في‎ PPMO ‏صلة (انظر المثال 5 للاطلاع على التفاصيل). علاوةً على ذلك؛ نظرًا لتحلل‎ ‏المستخدمة في هذا المثال (البيانات غير واضحة) وقت هذه الدراسة ؛ يمكن أن‎ SKM-M ‏أوساط‎ ‏من ذلك الموضح في هذا المثال.‎ Wad ‏أكبر‎ Guns NHP ‏تظهر دراسة‎ 5 ‏يتم هنا تضمين كل النشرات وطلبات البراءات المذكورة في هذه المواصفة كمرجع كما لو أنه تم‎ ‏نحو متفرد ليتم تضمينها|إتضمينه‎ log ‏إيضاح كل نشرة فردية أو طلب براءة فردي بشكل خاص‎ ‏كمرجع.‎ ‏المراجع‎ ‎Aartsma—Rus, A., A. A. Janson, et al. (2004). "Antisense—induced 10 multiexon skipping for Duchenne muscular dystrophy makes more sense.’
Am J Hum Genet 74(1): 83-92.
Abes, R., et al. (2008). "Arginine-rich cell penetrating peptides: design, structure—activity, and applications to alter pre-mRNA splicing by steric— .block oligonucleotides." J Pept. Sci. 14: 455-460 15
Alter, J., et al. (2000). "Systemic delivery of morpholino oligonucleotide restores dystrophin expression bodywide and improves dystrophic .pathology.” Nat. Med. 12(2): 175-177
Bestas, B., et al. (2014). "Splice-Correcting ligonucleotides restore BTK function in X-linked agammaglobulinemia model." J. Clin. Invest 20
Cirak, S., V. Arechavala—Gomeza, et al. (201 1). "Exon skipping and dystrophin restoration in patients with Duchenne muscular dystrophy after systemic phosphorodiamidate morpholino oligomer treatment: an open— label, phase 2, dose-escalation study." Lancet 378(9791): 595-605
Dunckley, M. G., ٠١ C. Eperon, et al. (1997). "Modulation of splicing in the
DMD gene by antisense oligoribonucleotides." Nucleosides & Nucleotides 1665-1668 :(7-9)16 5
Dunckley, M. G., M. Manoharan, et al. (1998). "Modification of splicing in the dystrophin gene in cultured Mdx muscle cells by antisense .oligoribonucleotides.” Hum Mol Genet 7(7): 1083-90
Errington, S. J., C. J. Mann, et al. (2003). "Target selection for antisense oligonucleotide induced exon skipping in the dystrophin gene." J Gene 10
Med 5(6): 518-27
Goemans, N. M., M. Tulinius, et al. (201 1). "Systemic Administration of .PROQ51 in Duchenne's Muscular Dystrophy." N Engl J Med
Jearawiriyapaisarn, N., H. M. Moulton, et al. (2008). "Sustained
Dystrophin Expression Induced by Peptide—Conjugated Morpholino 15 .Oligomers in the Muscles of mdx Mice." Mol Ther
Jearawiriyapaisarn, N., et al. (2010). "Long-term improvement in mdx cardiomyopathy after therapy with peptide—Conjugated morpholino .oligomers." Cardiovascular Research 85: 444-453
Kinali, M., V. Arechavala—Gomeza, et al. (2009). "Local restoration of 20 dystrophin expression with the morpholino oligomer AVI-4658 in
Duchenne muscular dystrophy: a single-blind, placebo-Controlled, dose- .escalation, proof-of-Concept study.” Lancet Neurol 8(10): 918-28
Leblue, B., et al. (2008). "Cell penetrating peptide conjugates of steric .block oligonucleotides." Adv. Drug Deliv. Rev. 60: 517-529
Lu, Q. L., C. J. Mann, et al. (2003). "Functional amounts of dystrophin produced by skipping the mutated exon in the mdx dystrophic mouse." Nat
Med 9(8): 1009-14 5
Mann, C. J., K. Honeyman, et al. (2002). "Improved antisense oligonucleotide induced exon skipping in the mdx mouse model of .muscular dystrophy." J Gene Med 4(6): 644-54
Marshall, N. B., S. K. Oda, et al. (2007). "Arginine-rich cell-penetrating peptides facilitate delivery of antisense oligomers into murine leukocytes 0 and alter pre-mRNA splicing." Journal of Immunological Methods 325)1- 114-126 :)2
Matsuo, M., T. Masumura, et al. (1991). "Exon skipping during splicing of dystrophin mRNA precursor due to an intraexon deletion in the dystrophin gene of Duchenne muscular dystrophy kobe." J Clin Invest 87(6): 2127- 5 31
McClory, G., et al. (2006). "Antisense oligonucleotide-induced exon skipping restored dystrophin expression in vitro in a canine model of .DMD." Gene Therapy 13: 1373-1381
Monaco, A. P., C. J. Bertelson, et al. (1988). "An explanation for the 20 phenotypic differences between patients bearing partial deletions of the .DMD locus." Genomics 2(1): 90-5
Moulton, H.M., (2007). "Cell-penetrating peptide-morpholino conjugates alter pre-mRNA splicing of DMD (Duchenne muscular dystrophy) and inhibit murine coronavirus replication in vivo." Biochem. Society Trans .826-828 :(4)35
Pramono, Z. A., Y. Takeshima, et al. (1996). "Induction of exon skipping 5 of the dystrophin transcript in lymphoblastoid cells by transfecting an antisense oligodeoxynucleotide complementary to an exon recognition sequence.’ Biochem Biophys Res Commun 226(2): 445-9.
Sazani, P., R. Kole, et al. (2007). Splice switching oligomers for the TNF superfamily receptors and their use in treatment of disease. PCT 0
WO2007058894, University of North Carolina
Sierakowska, H., M. J. Sambade, et al. (1996). "Repair of thalassemic human beta-globin mRNA in mammalian cells by antisense .oligonucleotides." Proc Natl Acad Sci ‏ل‎ 5 A 93(23): 12840-4
Summerton, J. and ‏.نا‎ Weller (1997). "Morpholino antisense oligomers: 5 design, preparation, and properties.” Antisense Nucleic Acid Drug Dev 187-95 :(3)7
Takeshima, Y., H. Nishio, et al. (1995). "Modulation of in vitro splicing of the upstream intron by modifying an intra—exon sequence which is deleted from the dystrophin gene in dystrophin Kobe." J Clin Invest 95(2): 515- 0 .20 van Deutekom, J. C., M. Bremmer—Bout, et al. (2001). "Antisense— induced exon skipping restores dystrophin expression in DMD patient .derived muscle cells.” Hum Mol Genet 10(15): 1547-54 van Deutekom, J. C., A. A. Janson, et al. (2007). "Local dystrophin restoration with antisense oligonucleotide 040051. N Engl J Med 2677-86 :(26)357
Wilton, S. D., A. M. Fall, et al. (2007). "Antisense oligonucleotide— induced exon skipping across the human dystrophin gene transcript." Mol 5
Ther 15(7): 1288-96
Wilton, S. D., F. Lloyd, et al. (1999). "Specific removal of the nonsense mutation from the mdx dystrophin mRNA using antisense .oligonucleotides." Neuromuscul Disord 9(5): 330-8
Wu, B., H. M. Moulton, et al. (2008). "Effective rescue of dystrophin 0 improves cardiac function in dystrophin—deficient mice by a modified .morpholino oligomer." Proc Natl Acad Sci U S A 105(39): 14814-9
Wu, B., et al. (2012). "Long-term rescue of dystrophin expression and improvement in muscle pathology and function in dystrophic mdx mice by .peptide—Conjugated morpholino.” The Am. J. Pathol. 181(2): 392-400 5
Wu, P., et al. (2007) "Cell-penetrating peptides as transporters for morpholino oligomers: effects of amino acid composition on intracellular .delivery and cytotoxicity." Nucleic Acids Research 35(15): 5182-5191
Yin, H., H. M. Moulton, et al. (2008). "Cell-penetrating peptide—
Conjugated antisense oligonucleotides restore systemic muscle and 20 cardiac dystrophin expression and function." Hum Mol Genet 17(24): 3909-18
Yin, H., et al. (2011). "Pip5 transduction peptides direct high efficiency oligonucleotide-mediated dystrophin exon skipping in heart and -phenotypic correction in mdx mice." Mol. Ther 19(7): 1295-1303
Youngblood, D., et al. (2006). "Stability of cell-penetrating peptide- morpholino oligomer conjugates in human serum and in cells." Am. Chem. 5 .Soc ‏قائمة المتواليات‎ متوالية 5" إلى 3 أو الطرف لا إلى الطرف ‎C‏ المتوالية رقم 1 H53A(+36+6
GTTGCCTCCGGTTCTGAAGGTGTTC 0)
GGCCAAACCTCGGCTTACCTGAAAT | mdx4225 ‏بادئة ربط وصلة‎ أمامية لإكسون 54552/51
CATCAAGCAGAAGGCAACAA ‏بشري‎ بادئة ربط وصلة امامية لإكسون 54552/51
GAAGTTTCAGGGCCAAGTCA ‏بشري‎
‏بادئة ربط أمامية‎ ‏بادئة ريط عكسية‎ ere ‏قائمة المتواليات‎ <110> SAREPTA THERAPEUTICS, INC.
PASSINI, Marco A.
HANSON, Gunnar J. hall Fall ‏مترافقات أوليجومرات تخطي الإكسون‎ <120> 5 <130> AVN-028-4 <140> PCT/US2017/066509 <141> 2017-12-14 <150> US 62/436,223 <151> 2016-12-19 10 <150> US 62/443,484 <151> 2017-01-06 <150> US 62/479,178 <151> 2017-03-30 <150> US 62/562,146 15
<151> 2017-09-22 <160> 8 3.5 ‏<170>الإصدار‎ Patentin <210> 1 <211> 25 5 <212> DNA ‏<213>المتوالية الاصطناعية‎ <220> : H53A(+36+60) de lila) ‏<223>المتوالية‎ ‎<400> 1 10 gttgcctceg gttctgaagg tgttc 25 <210> 2 <211> 25 <212> DNA ‏<213>المتوالية الاصطناعية‎ 15 <220> : ‏<223>المتوالية الاصطناعية010*4225‎ >400< 2 ggccaaacct cggcttacct gaaat 25
<210> 3 <211> 6 <212> PRT <213>المتوالية الاصطناعية <220> 5 <223>المتوالية الاصطناعية6» : 3 <400>
Arg Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 <210> 4 10 <211> 17 <212> PRT <213>المتوالية الاصطناعية >220< <223 > المتوالية الاصطناعية6©-6> : >400< 4
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Gly 1 5 <210> 5
20 >211< ‎DNA‏ >212< <213>المتوالية الاصطناعية >220< <223>المتوالية الاصطناعية: وصلة 52/51 لإكسون بشري وبادئة ربط أمامية 54 5 >400< ‎catcaagcag aaggcaacaa 20‏ 6 >210< >211< ‎DNA 10‏ >212< <213>المتوالية الاصطناعية >220< <223>المتوالية الاصطناعية: وصلة 52/51 لإكسون بشري وبادئة ربط أمامية 54 6 <400> ‎gaagtttcag ggccaagtca 20 5‏ 7 >210< 21 >211< ‎DNA‏ >212< <213>المتوالية الاصطناعية
<220>
<223>المتوالية الاصطناعية: بادئة ربط أمامية ل 23 إكسون فأري 7 >400< ‎cacatctttg atggtgtgag g 21‏
210> 8 5
<211> 22 <212> DNA
<213>المتوالية الاصطناعية >220<
0 | <223>المتوالية الاصطناعية: بادئة ربط عكسية ل 23 إكسون فأري 8 >400< ‎caacttcagc catccatttc tg 22‏

Claims (1)

  1. عناصر الحماية
    ‎.١‏ مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎antisense oligomer conjugate‏ بالصيغة (/ا): الفاصل = نفاص ب ‎fat‏ ا ا اا ا ‎Ay‏ الأ الب 3 3 ‎RLY Pee‏ ات الم« 1 ‎Toh EN‏ لضو ‎Pome‏ ‏© سملا ‎Nort " : wd‏ ‎TLE <‏ ااا ‎YOY‏ الا تام ‎Ld 8 . AS‏ الما ل ب ¥ 2 >< لب :1 ‎TEL‏ 3 ‎T Y wi . ds oe 0 i : oh -‏ 31 ب ‎ode phe Peni eA CARY 8‏ ‎Fd 4‏ ب ‎TEN He A‏ + ل 1 $2 انييس 1 ‎LT he ny‏ ليا 0 ‎EN‏ ‎«EN LLY‏ ات ‎CU‏ كلا ال ‎Se 4 NE Sete, 4 TY‏ احج ‎yd UN 7 7‏ الى ‎shee RL ee‏ + ا ان حي أن ام 7 نان أي ‎٠‏ ا م الاب لاض باب اال ‎f 1 . Le Te © 0 Sean dl‏ © لاا ‎wo Te Lede 7‏ حيبي الب 8 م اص يات ‎VE dl <2 1 xr For”‏ ‎Se 0 J he EE‏ ; وح ال حي و 5 ‎bd‏ ‎woody TWA Te Lo‏ ‎bn A‏ . © 0 حب + ‎Nor ¥ ul‏ ‎YY‏ الفاصل ج الفاصل ب ‎SL‏ ‎(IV) 5‏ أو ملح مقبول صيدليًا منه.
    ". مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ ‎antisense oligomer conjugate‏ وفقًا لعنصر الحماية ‎٠‏ حيث يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ ‎antisense oligomer‏ ‎cOnjugate 0‏ في صورة ملح مقبول صيدلانيًا.
    ". مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ ‎antisense oligomer conjugate‏ وفقًا لعنصر الحماية 7 حيث يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ ‎antisense oligomer‏ ‎conjugate‏ في شكل ملح مقبول صيدلانيًا بالصيغة ‎(IVA)‏
    4 ا ابي اماي يي لني ‎i ELE As twa‏ ا ا ادي > ‎PR‏ ‎Le nad Sot . ES Citi‏ 3 و 5 ‎Nd NE 2 io 2 4‏ ا ‎od wooo YELL er FY‏ بت ‎ES * rata‏ الاي الي * ب تي تن الام ‎CR‏ ‎YY * TOYO Me E‏ 1 م الح ا لا 5 3 - الم مي ااا لالع ان 0 الا ايا ‎YM > + “if =x, 5,‏ اال ا ‎A oo 4 * LE Seok =,‏ د رح ‎NS 3‏ ال - ‎Si ean‏ الات :. ‎Jy‏ ‎TE = & ve FO 1‏ + 3 الخ اا ف 6 ‎SiS ~‏ ¥ حلي الا ال اا اي ا ‎a3 be wef >. Na 4: 3‏ يا > 8 > ‎T Sy‏ 5 ا 3 6 ; ب ‎No‏ 3 ال ب 0 ‎RS A‏ ا ‎UN be Ley‏ ا 0 ‎i,‏ م تح ا لاه د ‎Los‏ ب ‎١‏ الي سلس ‎Lod Lo SL‏ ‎Aw 3‏ ا ا ب 3 ‎Ea‏ 3 جد ‎Nast JS 3 i, a‏ 4 > مين 1 8 ‎of‏ يبح ‎v‏ لا >< 2 ¥ :1 0 3 5 ال ‎Ia‏ ما ‎Nae! La‏ م اليد يح 2 ا ص 0 ‎wp 33 3 has,‏ ‎Sting . Sage en‏ .5 ارين 8 1 ‎Re at oi Shp‏ ان الت ‎CE‏ % 1 ‎FA CL i wo A‏ يا ‎ne Ty 8 7 1 CE‏ رايبا يأل تا ‎Boh ele Hed‏ ‎X FEE‏ ا يي ‎١‏ ؟ ‎POET rt OE‏ ‎aa LE Cr LEE‏ ‎Sig ey § nd § 3‏ ‎SE Negi oo . es -‏ تحب > ‎LI‏ 2 الي ‎LS ea‏ اخ اع باك الات ب 7 تي يي اتا يي بن ‎ingen‏ ا خم ل ‎x ad Sag” no Ny Ng‏ قل التي يا > ‎YY 3 1“ 1 ot co‏ ‎SHOE‏ الى ‎se A, no,‏ بن 3 § 4 ‎RE‏ ‎eu = a pS A AIA‏ تيم ‎Ra‏ 3 ‎FT aod A i Ln dnt Le‏ 8 واج 8 بح الي لما تا ‎FU age 3 3 VOY ONL‏ ‎Sed eT 8‏ 4 ل لح : 1 ب ب § 3 ل ‎rm aN Nai 3 > aE Ey‏ 0 8 ‎Nags Sng FL FY TY SY she‏ ‎SW Crt TN ¥‏ ا نح § ‎Y > > 70 LF x iS‏ .3 اح احاح ا > ‎x‏ الجخ الال ا اي :: + ‎Seti‏ :ع 7 م ‎i‏ مي التامل 2 ‎{SBE‏ فيا 33 3 ‎i‏ ‎(IVA)‏ ‎ant li 1 1‏ اا ا اسع ترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎oligomer‏ 156756
    ًً. تركيبة صيدلة؛ تشتمل ملز ونب ‎To‏ ا ل لصبغة ‎(IV)‏ ‎conjugate 5‏ بالصيغة ‎:(IV)‏ ‎st ٍ‏ يي اا ‎eed PT‏ ب ‎[FS NE‏ ا ‎IY .‏ ; : 0 ا : ‎et arin‏ بحلا الا مح اا > ‎JH‏ اص اع ا الي مل ‎BS‏ ‏خ انل ‎Ne‏ ا ‎Nd: ; PALE iy‏ ‎(ENE NES bh 1‏ لي لاب الس تي ‎FE rag VT NY ITTF UY LL “‏ ‎ad -.‏ راك ا آي ‎AL Sop‏ ب ‎Y‏ ‎ES on 5 3 Ra, 5‏ مهد ‎Ss‏ ‎A‏ 1 ب ب ‎Toa‏ ااي ب اال 7 ‎Noir Sl 2 0‏ ال ‎i ¥ es TR PNY JOE BE‏ £[ ‎Po 52 1 1 5 Ya | RS -‏ ; 2 = 0 اح رط اد ا ‎Sue Se LENCE Le‏ ‎of 1 1 F UP EL ¥ 7 8 ِ‏ ل 1 اليا د ‎i‏ ال اللي ‎IN Ta a‏ 3 ; ; 0 § 1 0 ‎Fe‏ باه لبا 1 الع ‎Ne‏ ب ا + - ‎N,‏ ‎A BR pet RE ew CE SNE ِ‏ 0 3 1 ا ‎do Pe i > FAL A ve Ln‏ جعي اذ ‎woot a AS VOT IL yey YT *%‏ ‎TTY " Lael Nate iodo A 3‏ 0 ‎hei No 5 01‏ ‎NTR i SE Sgr‏ م الي رحا 3 1 ‎LM‏ اا ‎CEL Mn HR‏ "0 اا الها وبحي الا ىأني ريا م اك | اب“ ‎Se 1 :‏ 7 تسل ل اي د ‎Cyd og‏ ب نا ا 3 ‎Beg‏ ا م ص ‎Lo 4‏ . ارم لكاي ام بحي 2 ا * ‎TH‏ & م اا ‎ER‏ امار الأ ‎Seah iH 72 a‏ ‎EE 5 TY SOR ae xX‏ ‎a Er‏ ب ‎ey - Y‏ مي 7 م >< ‎N i‏ الى ير اس الي ‎fo, Fe‏ % 3 3 الب ‎Ra Sn me oS SEIT Re‏ \ 3 اتات ‎r 2 Be fA RE‏ ل 8 8 ‎aA‏ ‏ا ‎T I‏ م تي ‎hl‏ ¥ 0 21 ب ‎gt‏ م ‎i T X A Sage‏ تب ‎Bh‏ ‏ا 5 ‎LA 5 3 fg‏ ا اا - ‎ele gn‏ ا الحلا ا ‎usr 7‏ م رات ‎heey SY A‏ ا ‎wo‏ حصي # ‎Los‏ ةك 3 1 83 ‎A,‏ الك بحي يله م 8 > ب 5 اليا 0 ‎TaN‏ الناصل ج الفأسل ب تسل 3 بن - : = ‎ier 4‏ قبولة ‎Waa‏ ‏£ = اه ‎J 2 J‏ صدلتًا ‎die‏ ومادة حاملة ‎carrier‏ 9200 1 يدليا . و مفبواٍ ندند
    ‏حيث يكون مترافق الا المضاد لاتجاه‎ of ‏لعنصر الحماية‎ Bag ‏التركيبة الصيدلانية‎ Lo : ‏يت يدول مدرافق أ وليجومر‎ kK ‏وذ‎ And ‏في صورة ملح مقبول صيدلانيًا.‎ antisense oligomer conjugate ‏النسخ‎ ‏بالصيغة وفقا‎ antisense oligomer conjugate ‏مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ‎ .١ antisense ‏يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ‎ Cua © ‏لعنصر الحماية‎ 5 (IVA) ‏في صورة ملح مقبول صيدلانيًا بالصيغة‎ 0100008١ conjugate pees TE a hail ‏القأستدج‎ ٍ 1 3 ‏م‎ a ns he i 0 ‏ب الله اي‎ by TL EY it LT Are, Novy 3 5 RE ‏م ال ا ا‎ Xe - [ENE NY x Cy i OT a NS why ee ‏الل‎ me YELL eT + BLA Le i? Sey 3 a : ‏ايا‎ .ٍ ‏ب‎ i = Ld Ee ‏نيا‎ St ha Se? 2 1 ٍ 0 > ‏ا‎ Yo ‏ل‎ ‎1 ‏طم ميد‎ PE Ne i ‏ب لاي كرابا‎ + 0 ‏ا‎ Lt A LL 1 ~ ‏ب‎ thang ‏لا‎ 7 [3 ] CLT Y Na mains 1 ‏يم الاب‎ < 8 NR ‏الاقم‎ : RE ERC Ty oA ‏غم‎ rE Te Ny rv ‏الم كا غات‎ 4 ‏الما ا ا‎ RENEE 0 ‏سما‎ ‎3 Oy ‏ب‎ TY ry Pet ” EY 2 ‏اللا الي مد‎ en A SR or . NEC Pel ‏ل‎ ‎HE . oY . 3 A og ty Ting i ged hg T ¥ ‏ل‎ 6 ~ . i 5 . 5 . Som ‏اا‎ ‎nh ‏ام‎ NLL 2 ‏ايب‎ Ty pe Nore 3 3 5 ‏ا‎ ‎Th ‏أ آلا7 0 للج لتاصلب‎ (IVA)
    اك ‎BE‏ ‎2X ! ©.‏ اليا بم 3 ا ‎a |r‏ لا ‎E‏ ‏المح : أ ل 10 3 الم -:؟ ‎ay.‏ ‎a‏ 3 8 , ‎x ied‏ ‎Fr hs | ]‏ % ‎Re t‏ 3 %= ‎BEY 0 | i 3‏ ‎i £%‏ جنا ال ا ‎LN‏ ‎TR‏ : ‎Vow‏ 3 ‎ve :‏ | 3 الت هيية ‎G boa‏ ‎a |‏ 3 ‎wy Seaman‏ ‎UL‏ + ‎Ea‏ ‎ioe of‏ ص ‎a‏ ‏3 ‎ay ae‏ لما : 2 —- ‎yo TR‏ سلا ] ‎a‏ 0 8“ ‎Va‏ ‎led‏ اب ‎Caan STIR‏ 3 } ‎or‏ بس ‎Vom od‏ ; \ | = ‎Ferrand‏ ‎Poe‏ <> ‎i‏ { ‎v8‏ 3* ‎Fed‏ % ات 4 ‎od‏ اح . ‎Vow‏ + اك الى . 0 4 ‎oe ITY‏ »م - الل خا ‎Hh‏ ‎Sed‏ . اكد الك ‎saa 8‏ ؟ ‎By‏ ‏3 § ; الاج حت لح ‎fom‏ ‎i‏ § ‎NE }‏ ‎Eo‏ ‎Lowe‏ ‎TF‏ x ‎i | 8‏ ‎pee‏ 4 ا 2 4 ذا * ' حدم ‎i‏ ‏ايسا 44
    ‎% bow
    ‏نت 3 الا 4 9
    ‏ب ‎Ne‏ خضي 7 8 با ‎A } rr‏ + | ٍِ ب ‎To - Fo‏ ‎sem Be‏ ا 1 وس ات ‎Ny i‏ 0 ا ‎Toot yg‏ 1 لا ذ ‎pwd‏ ‏— 3 ٍ] ا | ‎Ty‏ ‎oy SEB !‏ و 3 يه ليها
    ‏ب‎ ‏سلا‎ ‎+ ‏مثا‎ ‎4 i ey 3 37) ad aE | ‏ع‎ ‎| w 1 ‏ا‎ ‎3 Se : 1 2 2 =< 4 oil § be iste 0 اةههب‎ + ‏ا‎
    ‎. ‏اام عي‎ ‏اق ااي‎ Ted g 3 =% ‏عك‎ 0 © ' od ‏لمعب‎
    ‎3. Vow ’ re oe ‏سس سا‎ 3 fepky ‏م‎ ‏لاملا بها‎ x 5 1 A ae XK & 4, Fi ey > : | a i ‏و8‎ ‏الب‎ : 0 ٍ ‏اما‎ ‏لاو‎ ‎a ‏اا‎ ~ 5 i = ¢ 3 ‏العا ب"‎ #4 3 08 Yo © ‏جد ال‎ = ‏لد‎ {ood :
    > 3 2# 0 QC = = 0 a a ed ‏بين‎ 0 0 ‏مي الم‎ ‏الام‎ ‎Cu < "| 3 “+3 Safi . ‏ا‎ ‎wR 4 oni ‏سا‎ 1 ¥ 5 nl k 0 ‏ليد‎ 2 «pe 7 he | ee ‏ض ْ الله‎ : a : : ‏سل‎ ‎> x gf = * 8 ‏ب‎ ‎0 5 * ‏ال‎ 4 - - ~ * ‏تج‎ Na oF Be ‏حي‎ ‎% reer ‏كنسه‎ QING ‏ب‎
    TE ‏ا ا ا ا ل ا ا ا ات رات الحا‎ ‏ل ا الا‎ RE ‏ل ل ل ا ا ل‎ i 4 HS A ‏ل‎ SIS i i nn RR ‏الات‎ Re i tr Sr Ese ET ‏ل‎ ane RT ‏ا‎ RR EE i Re ‏ا ل‎ Re Wh Tn BNE ‏ا‎ nl eT 0 ‏جا ا ل ا ا‎ An TE Lhe AREER RE UN RIN RR SE ee RR ‏ل‎ ‎wn CEERI Se ERRORS ER se OR Re rr NNT I TT ‏الل‎ a Tg ne ne EE ‏الت ا‎ SEAR SE SER SETI PENI a ‏ا الا ا ا ا ا‎ a A I nn 7 I Re Ri a nr Ts nm! RET J a i I Fr Be ‏حل ا‎ a Ne Sh tion Sie ‏ا ا‎ a se Ue i a See a ae he ‏ا ا ا ا ا ا ا ال و ل 3 الج‎ en : he ‏ا ل ال الا بم‎ Rar ‏ال ا ا الوق‎ A ‏ا‎ me a ‏ا ا‎ ~ 5 wo A a ‏ل‎ DI RR a ‏اا‎ ‏ل ا ا ال ا الم ا ل لات £5 + سم‎ i Ts I ‏ا ا ا ا ا ات ا‎ GL RR ‏ا‎ ‏ا ل ات ا‎ : ‏لاه‎ ETE ‏ل ا ال ا‎ a i, Ss ae pi 1 seer ‏ل ا ل‎ i Ne << ‏ا ل لأ ا لخاد ا اله‎ 8" 5 ‏ا‎ ‎FF ‏ل ا ال ا اا لاا حي‎ I RR 1 a I Se I SS ee ec . he. oe STE I a SN 0 na CRETE RII IE a oe Re Ry CRN SELENE RE REE et A Ae ‏ا ل ا ل ال اله جه‎ ‏ا ل ل ال ال تايا ا‎ LE ‏ل ا ان الات مدت امات‎ Sn ne ‏ل‎ a ‏ا و ا‎ Re ‏ا ل ل الا اللي‎ SER To > ‏ا ا‎ URE ‏ات الت‎ eh ‏دج لج‎ I i ‏ل حي ال د‎ NR a 3 ERE TE ‏ا اا‎ A ‏ل ل‎ I SO AN ER LR Ee TTI RR I LE EI ‏م ا ا‎ SCR We Ea Ea ‏ا‎ ‎1 0 CERRINA RR SR AEs ENN RA a etn ‏ا ا‎ RN SE SOR RR ROE ST SRI SER Ba ‏ل‎ RR ‏ا الل ال ا‎ ‏الل ل ل ا ا 1 ا‎ i hn ‏ل‎ ‎id Fe ERT Ee RRR RI ee ee ae Re 0 RE ERR hn eA SERIE RE Sr SSD CENA SEE % sig ma ‏ا‎ SLANE RSet ERE RN 1 ‏ا هخ ل ا ل الح ب‎ a) ole LEI ER nn RNIN Tn RRR ‏اذا‎ gt me 88 ‏سي ال حي ال ا‎ RI x pina > ‏ا ل 0 ل ا‎ A AR +3 FERRET RRR ENS ‏اط‎ a ‏ااام له‎ a Ce a rae a rT ‏ا‎ Sea ra nan Sg sn 2 a - ‏ا‎ Tr NL: ‏الج اجا‎ Teas ‏...جم امت‎ ٠٠٠م‎ TAT La aL haa ol ae Te Le X RN ERR RA RRR ey 4 ‏ات‎ EN ER SR RRR TR RE A SNR ‏ا ا د الى اال[‎ fe Rosas ‏ل ل ال ا ا ل‎ DR RR SR NEA AIRES ‏شه ار الات ات ال اا اله ا اا‎ hr RRR So hr Sh ‏ا لإ ل ا ال ل ا‎ ae
    £3. ‏ا ل ال تت‎ RR ‏ا ال نت ال ا‎ RE LN ‏ا‎ ‏ا ال ل‎ RS . mT ‏ا أ أ‎ ia Em A RBA Ln i ‏ل ل ل ا اا ع ا ا ا ا‎ i Re he ‏ل الا الا ل ا ل‎ i De i ‏ا ل ا ا وا ال ل ا ا ا ا ا ا ا ا ل رج«‎ Neal, ‏ا ل ا ل‎ ER Sl ee ‏الما لت ات ال ا ا‎ a a TR Eo Ross a Se A RR A Sn RA 0 ‏ا ل ب‎ ois ae ene ‏ا ا ل ا لاا ا الا اا تيا‎ TN RE 5 % : ‏ا الت ات اتات لت ا ا‎ Re RE Se ‏ل‎ EER 7: 3 ia mi. 1 ee ‏ا ل ل‎ : ‏و‎ op a] - A RT RR ‏ا ل ا ا‎ > I ER RE a A RR I Sn TR RR SR ‏ا ل ا ال ا ا ا ا ال ل ا ال ا ااا 1# ب‎ * ‏ا ا ا ااا #5 حي‎ ‏ال ا ا ا ال‎ i ‏ا ل‎ + ‏ال الج‎ 7 SE ‏ل ل‎ 7 ‏ا ل ا ال ا الا ال ا ل‎ 2 ‏ا ل ا ل ل ا ا ا ال ل احج‎ nor: ‏ا ل ا اي‎ A ‏م‎ ‎L Ea eR Tn SR ‏ا‎ ‏ا ل ل‎ EE AR ‏ال ل ا ا ل ا‎ I + |g RE RE ‏ا الل‎ a ee SERRA Sr GN oR DER TE RR ‏ا ال ال ال ا تا الا اي ال‎ 5 9 ‏ل ام أ ا خا ل ل ا ل‎ ‏ب‎ sores ‏ا ا‎ ‏ل ل له الا ال ل الا‎ wna ‏ا اي‎ SI HE SEER ‏ا ال‎ RR i ERR RN LT LT RR SR a RR TO Li we ‏الا اد اله الا ا‎ RR Th ne RS ‏امت اا ال ل ب‎ ae TREE EN ‏و أ‎ RR EEE
    Fal. TI OVERS eT LNT I EY a BR hy TAR NE RE SC TR RRR SU RAN NE 3 FSR Re I RRR I ‏ا‎ SNR ‏8ن‎ 2 A EE ‏ل هه ا ل أ‎ NC Lon SRR RRNA I EN RR Er INR RAR aie
    ‎Mr a rae‏ ا ل ا حت ا اا حت ‎A A‏ 0 ور .ا ‎I A et PNR ad‏ الت الور ‎or, ETE‏ ‎SEER SLSR RRR SE I SEE, NT SERRE RE SE A RNR‏ ‎RNR ER A TR a ERR RR RR TR A RG AT‏ اتا ا اا ‎a‏ ‎nee‏ ل ا ل ا ا ل ا ا ا ‎WE‏ ل 1 ل ال و ا ا ا ‎RR‏ ‎ER RN NE AR RN a‏ ‎EERE RE NR‏ الجا ا ‎SRR ER I IE SE EY‏ 4 ل ل ا ا ل ا ال ‎RN‏ ا ا ماب ل ‎ny RNA a‏ ا ا ال ا الخ ‎Sra een SRR ER ae‏ ال ا ا ا ال ا ل ‎ee‏ ا ا الع ا ا ا ل اانا ‎ee‏ ويه رج وجي ‎ER TR‏ ا ل ل ا الا اا ا ا ل ا ل ‎AN ATR NR‏ ا ا ا ا ال ا ‎RR‏ اا ل ال ا را 3 ‎TR RE ET i i‏ ا ال ا ال ‎RR ES SRR RRR RC NO yO RR I‏ ال ‎RR I‏ ل ات اا ال اا ا ب ‎rR a‏ ا الا لاه ا ال © الات ا ا اط ال 3 ‎fe A SR Re a Ree‏ * 8 ا ل ل ام الم ال ‎AR‏ ل ال ّ 3 ‎J‏ ‏ا ‎Re‏ ا ا الا اا ‎en‏ ار تب ّ ‎ergy‏ ا ا ا ا ا ل ا ا الب ‎Ey‏ ‎iE RS IRSA RE A SU RRNA SERRA RR AT‏ 5 > 1 ‎a Re ® * A I ES et EE‏ تا ا ا ا ا سا ا ا ا الا ات ا اتا ا اا 3 يد ‎i ® feminist Tel Eee I ie i al See Un de ee eg‏ امب ‎RRA‏ ل ‎ES REA‏ ااا ‎i]‏ ¥ 8 ‎SE‏ ا ا ا مالسا ل > ¥ ‎RR ER‏ ا ‎ER RR RE Re RR‏ اط ال ‎A‏ ‎ee AR SI ne ne‏ ا ‎at 1 FE‏ ‎EERE NS‏ وا ‎pice Srna i a RENEE ESI‏ 1 ال اتا للا ا ل تن ا ا ا 3 ‎Tr‏ ‎SEER EEE OER RI ER BR ER I SBIR a‏ § ‎A CER‏ ا ا ا ا ااا الجا ال ا لش اا ا 3 ا ا ا ا ال لا و ل ا ا ا ل ل ل ا لت ال ل ا الا 8 ‎a RR HN NES a ae‏ ا ‎Ty‏ = ‎ERR SH i COR I SE NE a‏ ا ‎ol‏ ‎Wye.
    FRR NAR ER EE ENT ES RE RE er‏ ‎Sv‏ ا ها ا اا ا ا الا ا جا ا ا ا ير ات الا اا ل ا ا ل جد ا ‎he iE RN a RR‏ الت ‎EE RI‏ = ‎a rr‏ ووه ‎da‏ ل و ل ا الت ا و ا ‎aN Sr Bn‏ ا ا الل تا اش ا اا اي المحم ال ا ل ال ‎UN‏ ال ‎aH‏ ‎Sa SEE DOR Nea‏ ل ا ‎ERR‏ ا ‎nf EEE I‏ 0 8 ا ا ا ا ‎RN TE‏ المي 0 ‎Poe.‏ ‎Ras oR Bena ERE CEE Ne 0 NE‏ حي ‎ea ERE SRE REN‏ ا ‎RR BRAY‏ ‎SE ee A‏ ا ا ا ا مه اا ا 1 ‎BR‏ ل ‎RE‏ ا ‎RRR‏ ا ‎oy‏ ‏امإ إ إ ‎SA A‏ ا ل ا ا ا ‎A‏ ل ‎Ce‏ ‎ENN‏ ال ا ا ‎NEN‏ ادا عفنا ‎OR ER‏ ا ل ال 5 ‎NRE pg an ROSIER en‏ اتات ‎ge hE BEE‏ واي ‎RR RRS ONAN ro MERRY‏ ال ا ل ا * ا 0 ال 7 اس ‎i‏ تا اا 8 ةن د ‎Re ie PY‏ ار ‎Nar 0 We‏ ا الي را الت يي ا اج ‎ARN SR SN‏ ا عت ‎nce RR ERAN‏ ‎Se‏ ا ا ااا اح اح تا ‎A RR SS TR‏ ل ل ال اي اج جا ا ا ا ا ا ا ل ال ا ‎SERRE INNES GT Sa A EE iB ee‏ £3 ‎an‏ ال رات ا ا ا ا ‎rat‏ ال ‎SEER CaN BE‏ ل ‎SAE alg RR RN ER‏ ا ‎Boo‏ ‏ال ا ‎CEREUS NEI i VP i‏ = ‎Ne‏ سه ا ‎NR RE‏ ات ‎NRL‏ ا ‎AER‏ : 9 ا ا ‎RSS ET‏ ست ماع مخ ‎a Granta a a se Tee ARERR Ri Rm iin BS nnn‏ ‎Re a SN AR‏ ا ‎ROR mma RE Re ee‏ ‎ARERR I SR I I te OR‏ ‎A SN Se RR ol‏ ا لا ا ا اجا ا حي تي م ا أ ‎RT‏ ال ا ا ال ل ا ا ا ‎EE‏ ا ل ‎SEER‏ ‎EE I ee Sen Sa ey‏ ا ا ‎ENG‏ ‎AR LL RSE‏ ا ااا ال ا ‎pS RO‏ ‎RR Re I SS HS RN‏ 3 3 + ‎HI Ln LER AN Si‏ ل ال ‎ag EN TER RO‏ ‎TR Ne‏ ل ا ا ا ‎eT‏ لوا ا ا ‎SA‏ ا ال ا لاا عا ل ‎RR RB en‏ ا ‎RR‏ ل ‎fa SR TE A‏ ّ 1 ا ‎AT‏ ا لكا ا ل ا تت ا 0 ‎pail 9 a‏ الت ا ا نا ا ل ا ريم : ‎OR‏ مي التي ل لا تالالا اا الما تي ب ‎ER ER‏ لا ‎A CE‏ اا ان لله ‎ks EE OE RE‏ اي ‎heen‏ جحي :1 ‎LT EE ER Ra NR Te‏ ا ‎ae‏ ا ‎a‏ ا ا ‎i‏ ‎a pan Bn EA ET TE TI SE STN I RT RTT LT RR a Ra Rn‏ ‎ER I RG EE i a ee‏ ا ‎hi‏ .] : £5 اس ا ل ا اا ا ا ال ل ا لا ‎EY‏ ا ات را ال حجن ‎ei‏ ‏ا ‎Ie Ce‏ ل ا ا ا ا وا 8 م 3 : ال ا ‎RE RR‏ ا ا ‎RAR TE‏ ا ا ا احم ا ج* ‎I SE‏ ا ‎I SR, SR‏ اي ‎kB‏ : ا ا ال ا ال الا ا م ا ا ال ‎RIE ER‏ ا ‎at‏ ‎a‏ ا ا لت ‎an‏ لج تت ل ا اا وا ا ال ا ا ل ا ا ‎I‏ ل ‎a EN RD rR‏ ل ا ال ‎I‏ 3 ‎EER SRN RRR SR I SS A SS SR i RR SRR BR SRR SR Re‏ . ‎Ee‏ ا ا ل ا ا الا ا ا الما ال ‎RB‏ ‎ER‏ ل ل ‎DEAE Lh‏ اي اا ‎SR‏ ا ا ‎A‏ ا اله اج ا ‎J EI RR A RB TR ERE‏ ‎ae a ae Tr‏ ل ا بق ‎Fe EE ORR SE SR NR a er RR‏ = ا ا ‎RRR ER‏ ا ا ال ااا ا ل ا المحم ‎CE er HB‏ ل ‎RR‏ الت ‎re SER SR‏ ا ل ا ل ا ل ال ‎Se‏ 2 ‎EER A aR :‏ ل ال ل ا ‎SE gg‏ & ا ل ‎RE A RRR RE A‏ الت ‎SEG‏ ‎ay NER RN.
    A NRE CIN NRE‏ ‎Sh SEN SE A Ra‏ لها ‎X‏ ‎OBIE i La Na‏ ل ال ‎ord‏ ‎oR Se hn RNR eT SN‏ اا اخ ‎wnt‏ ‎SE Ee NR A a‏ ا ا ال ا و yo Ne a ‏خا‎ ‎Sirs ‎§ lps ‏ال‎ ‎3 8 ¥ ¥ § Fa © of GP + 2 ‏ايل الى‎ as SE ‏مم‎
    ‎=. 0 ‏ا‎ 1 4 ; a id PoE fuk ‏نا | آل‎ { be 7 2 : + ‏د‎ i » a 8 8 if 3 { & [3 bl i I : = 4 i ‏و ا‎ 9 ‏ير‎ | a 44 { td 1 ‏ل‎ ٍ Ey ‏ا« ا‎ w HN & Fe + > 4 & 1 of TE > 3 I 2 J 5 i FU 2 i ‏م ب‎ 7 Uw 2 sie Bei r ‏ب‎ ‏اما م اك ابن ةلمع ل نوه‎ = ‏ب‎ 9 * & > * - 8 ‏لوا‎ ‏ين‎ j 3 : ‏العم‎ ‏ا : الا‎ 3 o - ‏ابي‎ ‏ذل 47 ليم اس‎ {% 5 0) 3 } ‏ب‎ ‎Be ‎BoE ‎g 2 Ey & fod wl & = : NOH - : 8 om ‏ا‎ ge Son 5 0 1 $ 8 ‏بو‎ : i i 8 5 i Je co ‏ل 1 و‎ J HH & Che « ; Lr 1 PU TE aie Se a 0 1 . ‏واي اتا ا‎ * & 1 + ‏؟ ض‎ Toa 4 3 * a 4 nN = 4 oa aq 2 / 1 ‏ب 0 3 والصي‎ : . ‏ب‎ 0 Le 3 ‏أ ال‎ Ld 3 N 23 ‏ا‎ Lye * ‏ب مج‎ + waft : 3 > x ¢ EXER gee + % HT © LE 5 ‏سا1‎ ‎gh Hh ‏هي‎ 8 i 1 ¥ 2 ‏ا مات‎ + 4 88 "8 ‏لف حي حي‎ <ٍ 3 : | 0 ‏ابيا ولعي وتو سه ب سي مي‎ SRE ‏جا‎ ‏ب‎ 8 5 ٍ " 4 ‏ليم ل م ب‎ ‏يي‎ 3- Fe ao 3 Far ram ‏ما سح‎ {94 £1) 3 LAR Te
    ‎ey‏ ووو واه حا هااا لوت حتت ‎NER mL nt TU PERT‏ ا نير اج ‎SE TRS LPR‏ ‎CT RR TEE Sa FRR‏ ل ‎Ox ER Rn RE‏ ااا ا ل ا اللا اا ال ل ‎RE‏ التي الا ات الوا اا اوج ‎COTTER RN er, ROR ie te‏ ‎TS‏ ا ل اي ل ا ع ‎Bate 07 I RU‏ ا اسه ا لاا الت شهدت اا نواد وا ‎ER ETN REY CRE‏ الي اا ‎ELT Ene‏ ا ‎er SR re a ER SS‏ = ‎RR Se RT SNR TS‏ ا ا ل ‎EE SSN‏ ‎RRR HE RE SR EN Nadi‏ ا 1 ‎ae Ne‏ ا ‎SR Se AN ASE NR AN ka‏ ‎NE Dn‏ ا ‎A ERA‏ ا لا لاا ا ‎RN SER‏ لت ا ‎RAL RES‏ ات عر لاي لما اياي اد ال ‎LR‏ ال ا ا ال ا اا ا ‎EE ST‏ ال ا 0 ‎RR RI RR I GEST‏ ا ا ‎NR‏ اه لا الت ‎NE RA‏ ا ‎pe EAT‏ اج الح ل ‎wo ORT Le RE ER RE Edin Sd‏ الم ‎RE‏ ا ات ‎al sili SE RR RA IR‏ ‎IEE RR RE‏ اا ا لا لا ا ا ا ‎EN‏ 8 1 ‎CEE ER nn‏ مت ‎RE LR‏ ال ‎Reb RAR‏ ; تي ا ل ا ‎EE a‏ - ‎ne Ae ARE Tn‏ ا ‎RR‏ ل اله لي ري رح ا ‎Cie RI‏ ‎A ERS‏ ا ا ا الا ا ا لح اا اح نل ا > 1 7 اياي لخر ا ‎I‏ مضي ا ام ا ا ا ‎I EER‏ موا ‎id i uae CRE‏ ال ا ‎RR I “ER ERE a‏ ل ا ‎a > TR IS AE‏ 1 ‎STEER Ry RR en Tn BIE BIRR a‏ تا لف ‎CEE LR‏ : . ‎en‏ تا ال وو ا الجا ‎ee SRR‏ اا + ‎je‏ ‎RE I‏ ا ‎SRS Ra‏ 6 ل را ‎SRE EE ee SEE ER Te SEE SE‏ 3 ل« ‎a‏ ‏ا ا ل ا ‎A REE‏ ات ل ل ‎LE LER‏ الا ا ل ‎TLE‏ 1 اا ‎Sina : Sa ERR‏ ااا ‎ge EE SER‏ * ‎he‏ ا ل ا ل ‎wn‏ ‏ات ا ا ا ا ال اش ا اا تت ا اا ا ا ااا اا ا تعد ا ‎serve Ser Se‏ م ‎Ee NE‏ 5 ‎SEE TERR SR‏ اما لج ا اا لاا ا ‎RAR Fg‏ ب ‎onion EARNS AR a‏ اشح ‎$F‏ ‎EE po TE‏ ال ام تت ااا ا "لمن اموا الا ا ا ا ا ا الس ا الى اا ال ‎Ty TELE SR‏ ا اا وسو ‎IE SRNR RINE I RN RN TRI NEA‏ ‎CEE RR‏ ات ‎RRO‏ ا الم ا ا الا ار يق ال ‎ASTER RR SR RISE SN A NS‏ ‎RR EER RR‏ ال ‎EE‏ ‏ا ا ا ‎Te SEER‏ ا ‎ose‏ ‏اع ا ‎wu SF Bl NE‏ ا ا ‎aw‏ لت الت لا ‎gp:‏ ‎ERA RN TA‏ تت ‎en Ne ERAN I‏ ال تت ‎se TE RN‏ ا ‎Fe STR Boao Beem‏ ا خط ‎ST‏ ا ا الا مما و ا ا ا ا ‎PRE 7 0 8 0 9 Be NN‏ ا الهاي ال ل ا ال ل د > °* ‎aw‏ ‏يس ‎SE‏ ا ا ا ا ا ا ا ل اا ا م ‎HA NR‏ امت ‎AR‏ اا وا ‎Toman NE HERE‏ ااا ‎CREE ET RE IR‏ ات ا ا ا لي ا ا ا اا اا ا ‎CEE‏ ‏0 ل ‎SEU a‏ ا ا ا ا ا 01 ‎En Re na TAO Sn ae SEITE Na HEE‏ المج ‎pas IT RRS‏ ا اند ‎Sha RE‏ ات ل ‎EE ER‏ = ااا للا و ا ا ‎A ER SY SAI‏ ا الت ا و ‎RR‏ ‎٠‏ ته الا ا مستي 6 ‎EY‏ ل ا 3 ‎Se LENS ER‏ ا ‎EI SR ChE‏ ااا اال ‎BS Tn‏ ل ‎rt NG SL‏ ل ‎TT RT‏ اا ‎I‏ ا ‎RN‏ ل ‎Sha ES‏ ‎apr SS Ln‏ 1 ال يت ا ا ‎LE‏ ا ا ا ‎Cn‏ ‎SEIN PERI EEE RE Ch SE Ho‏ ‎ANN Re en Sr NAN Rn SRR a Re‏ ال ل ‎NN Ir RON RGR ea RX‏ الما يا اا اا يرا لا رام ا اا يت ا ‎I‏ المي ‎RE‏ ‎SEER‏ ا مايه ل ‎REA ENR ERE En‏ > : ‎RR‏ ا لي ا الي ا ااا ا م ا ‎nn i‏ 0 3 ‎TR‏ ا ةلاد اتات ال ‎we AMER‏ 5 ‎I‏ ل ا مج 3 ال ل اا ‎an‏ لا التو مو اا ل ل ا الا ال ايا اا و ل ‎INIT‏ تا الا اق 5 ‎ee SEI a SEER EE EES‏ 3 ‎aT SOIL TRE‏ ل ا ل بجر 1 ‎١‏ ‏الا ‎IRE IY SEER i‏ ات ‎RIN‏ ند ‎ER‏ ا ‎Ra RE‏ توه ل شا ااي ‎IE RE CRE RR‏ الال اا ‎WET ER en SR‏ م ا م ا ‎FER‏ ا ا سي ‎SE‏ اما اي ل تا ا اا ا 8 اتات ‎CR eM LR RE‏ ا 8 " ‎ERS‏ ل ا ا ل ل ا اا ‎en‏ ا لا الاب ‎Tip anes‏ اج ا لاا ا ات ا ‎SER‏ لما لو امسن اج ع لوا ل ‎A‏ لاا اا ‎IR CER ee‏ ااا اتا ليما ا ا :“8 د ا ا ا حجر ‎EER RR‏ اتا متا ‎Re‏ الام ‎ERR FAN Sms‏ ب تا تاي ‎EE‏ ليه الا اي مرا لاا لت ل اا لاا ا ا ا ‎I‏ ل ا ا لوا ان 8 ‎fn SR REEL ER EI I BE‏ المج ين ‎EE RE‏ ‎MR SR EE eR Tn CEERI Sa A ARIE‏ ات هه لا ال ته ا ا 0 اد سهد 20 ‎Hoge‏ ‏اتا ا ا الا ا ال ا ‎SR‏ ا ا ا تن الاي ع ال ا ا ل ا لا ا ا ال ا ل ا ات ‎gee‏ ال ‎Sh‏ ا ا ‎RR SR a TER NE Eh‏ و ا ا ا ‎Gee TT‏ حا لاا الل ا ا مجم الا ا اا ا ا ان وا د ااا اد الخ ‎RN I TT‏ ا ‎ER A‏ ا ا ال ا لات ال الا ‎RR‏ ا ‎TERS RN Ne Se‏ ال ل ‎Qu‏ ‎Po A COREE Crane RNS.
    Ene li Ge‏ ‎TR NR) a A DN ei 8 0‏ ا لح ‎SINR‏ الس د ا 0 م بي اليج
    ا ل ا ا
    ‎BO DOSE‏ ا ‎oN TR Re ERR‏ ‎ef iI EEE Sai iia‏ ‎TE‏ الأ 0 ‎Mg I SEE Sh a i‏ ‎hi 0‏ ا ‎Bees RIED ROE ORE RE RLS‏ ‎FI eee Pian 2‏ ل ب ‎RN‏ ا ل ل ‎ee‏ ا 3 ‎fi TERR TN SR SHOR ER OE SERRE‏ ‎ERE‏ م ‎Ra RR‏ ا اتا ‎CU‏ ‏ال ‎Eh‏ د ال م لا اج ااا اد يا تا ‎Sn‏ ‏واساتات ‎EF‏ 0 ‎Re SER OE‏ ا الا ‎RR I‏ ل ‎te.
    CARRERA‏ ‎LF aaa Bas Be Ra‏ الل ل ا 0000 الب ‎SRR RS OR SEER SRR‏ الا ‎CAT AR Sn‏ ‎SEEN EERE NINE SHR TE 0‏ ا ا للا ا ل ا ان لأا ل ل ا ا ل اا ا الت ا ال ‎EE Gn IE ae a‏ 55 ‎mame a te eine ieee nn Cia ee‏ : م ل ل ل 0 ا ا ‎Ree‏ ل ل ات الت ا ا اليو : ا ل ‎DI Come‏ ات ا 0 الت ل ال ا ا ا ‎SF‏ 3 ا ا ل جا مااي ليا ‎ER‏ ا ل لد ل ال ا ‎A‏ :1 ‎TE ey‏ ا ل ا ا ل ا م ‎SER‏ ‎ERR REY‏ ا ل ‎SR ROSE RENE De he‏ ® * 1 ‎ns‏ ال رح ل ا ‎i‏ ا ا ل ل ل ‎TR‏ 8 3 ‎ESE‏ ا ل ال لا اما م ل ا داج رب ااا ديا ل ل ل ‎a * he SIE I REC‏ ‎Ws sgh Wee SE EI Re ety SRE‏ ِ ال ا ‎SAT RE I‏ ل ل 0 1 ‎FIERA NS‏ م ل ال ل ل وح 1 ‎SUSIE Sane‏ ال ‎oe a‏ ‎at al AN RE Sh ne hy ER TET‏ 0 اساسا ام ل ‎IRN Ne SER‏ اا 1 ‎y‏ ‏ا ات ل اا را ‎SIRT‏ ات اش ااا ‎CA‏ را الو اليا ا قا ا ااا اا ا ا اي ا ا ‎RA‏ = ‎dos ia ten Eilat‏ 8 ب ‎i Sr SR EI SE HORN Pacing EET‏ و ‎IF FURIE Sh GR CERI eR ah ER ANE‏ ا 0 ا ال ا ال ا ا ال ا ا ‎edi‏ ‏ال ا ‎om‏ ل ا ا ب ‎a ag NSA ESR ES RR A A‏ ا ‎wr STR Soa EIN 1 [ee i‏ £3 ‎STE SI SIRE 5‏ ِ ‎ag a‏ ل ‎EY en SE LL‏ ‎Sine EE ER RRR‏ ا ل ‎Ty‏
    ‎=k
    ‎) ‏اتات تا تو اا‎ TE NE TE ea An NE i Tn EN RR LAR ER pn A ‏اد أ‎ SET RE ‏كع لد ال ل ال ا ا ال ل‎ & Chime a Lm ‏ا‎ he EE Ao Bak = : ‏الس هي ااا‎ Sana lL CRN ‏الحا‎ TA I SR CERNE EE ‏ا الا لا شت سا ل ا‎ £3: Sar ‏الم‎ Hi RN Ta CR aR = x ELIE LIT RT RR NR RR £35 RR ‏ا‎ Sn TEE EE EE ‏ال ا ال ا‎ ELE SRR ‏ا‎ JERI sas SEER LE ARR RE RIS SERRE rn SEE ERR SA ER EE RN ERE TEAR RR RRS ERE SAE ERR RR EAR RT ER A = OE RR ON OER Ry Re a + No WR ‏ا ا ا ا امار و ل ل ا ا اا لا ال ا الا اط يا ل ا ا ا ا‎ " ‏اتا لاج لوا ارت اتوي اا ا ااا امت لاا ال ا ا ل يخ‎ ٍّ * ‏ل اح الل ا الل‎ le ‏ل ل ا ا الم تا ل ل ا ا و ا ا ا ا و‎ 1 ‏ل ا ا ل لت تح الت ال ا ا سن ب سورع ب‎ : Fr a Eri ‏الت‎ i a 0 osh ‏ا ا لت لا ا ل ا ل :ِ يد“‎ ENR ‏ات ل لج ا ل ا ا ل‎ 0 + X ON I ‏ال ل ل‎ IE ‏ا ل ال ال ا‎ od + ‏ا ل ل ل ل ا‎ TS IE I TET I Toes od SERRE RRS Res RR ‏ا ا‎ ‏ايب‎ BY + ‏ا اج ل ا ا ا ا ا ا ا ل‎ 9 3 TH ‏ل ا ا أ يق‎ ARE ‏ا ل أ ا ل ا ل ما ال اش ا‎ ‏جد‎ he NEE ‏ا ا ال‎ I ‏ل ا‎ Nn ‏احم‎ ITE SR ES SE CEE Lo TERI SA mE SEI 0 2 ‏ا اع‎ NEE Rt ‏ال ل ال ل ا ل ا ا هك‎ 8 ‏ا ل‎ ‏ل ل اد‎ EEA EA AN ‏ل‎ i ‏ا ا ات‎ RR ‏ااا صا الوه ا ا ال الس‎ ‏ا ا ل ا ا أ او‎ SY ‏ال ا ل ا‎ ‏ل ا الات تر او ري الا عت‎ RN ‏ا ل ل‎ ASI ‏الل ا‎ A RR SR RR FE RRR ‏ادح ا‎ ‏ااا اا‎ UE tee ha EEA ‏ا ا ا ا‎ ‏ل ا اح‎ RR NERA BN ge EN EU Ne EE REN ‏ا‎ ‎7 ET RN RA EE RR RE ‏ا‎ RRR : ‏ل ل : ال ال ل‎ ‏الل ل ال اا ا اله‎ I NR TR Fe EEL ERE So ERAN Sn SEN TONER es ‏هه ليا‎ EL ‏اااي اد‎
    ‎3 : = 5 2 = 7:
    ‎a
    Lo 35d 1 De ua ¥ 3 ow 3 ‏م‎ ‏ا‎ ‎11 ow * 1: ‏ب ار‎ Ag 8 8 ‏ود ا‎ pe Ba & Hon 4 ‏احا ب‎ Be & 1 ‏اا له‎ ‏م ب‎ i : / ‏3م‎ ‎FS ‏اا‎ ‏ها 5 اا اب‎ > ‏ا حم ا‎ Fe " 3 wg Ld ‏ا‎ ‎4 ‏ا 7 آى ؟‎ 5 8 8 Be 3 hi § 0 vow r § $ Boo ‏ا حسم 8 نين‎ 31 - \ J ‏م‎ * 8 ® a = = = > Lc] Be = J - $x ey . ‏م‎ x a gr 6 ‏اليد‎ FY rer ‏مسار‎ gu {% OT) us & ‏ق‎ ‎8% A gf fd fe ‏ةا لج‎ i > ‏ا ا ع‎ ‏؟ د المي ل[‎ ‏لمج‎ © © ‏ا قا‎ OW, TE it - ‏ام‎ re & iF ‏ب‎ ٍ i ‏د‎ ‎3 J 1 N ‏و‎ i 1 ‏ل اا‎ i { # - ‏بلكهم‎ Sel bs & Sr “gu od i 8 4 Fi Fle 3 4 J : 3 8 J 7 / I ; & ‏م‎ Dh F ¥ A 4 i b oy ; ‏ا اا‎ i { ER ‏ةك‎ ‏ب‎ > pele © a Cw X ‏؟‎ ‎: : 2 r To | LL ‏ل‎ + : A] ‏ا ال‎ ; ‏اص‎ 3 PL > Si rR 0 1 ‏ب‎ ‏اي + ا‎ 1 = 5 3 . ‏ل ا ا ل‎ ‏حر 1 *& > » ل‎ ‏س3 ا‎ Be - Bred Fa ‏اجاح م‎ ‏ل 8 86 تك الحا‎
    ‎Ee‏ اح و وات الها ‎aaa‏ ا ال©.© ‎ee‏ ا ا ‎a‏ اتاد لوت اتا ‎Sha‏ ‎Ti CER ETRE SE CEREAL REE ee‏ ‎SY hie le‏ ا ا اح ‎bin‏ مشا ‎Stet‏ ‎me i ee de ee‏ ل د 0 ج = ل ل ل د د الا ةد ب لا ف ‎J ' grams‏ ‎ou 3% 4d « CE DT I I‏ ‎Sills Bie‏ لات اا ‎HL heidi‏ 5« . ا ل ل ا ‎A‏ : ‎LF Be FEELS Re BS RR A Ln‏ ‎OR GEESE Ra Re CS Se‏ : ‎Be eee‏ ل ‎SET ae BE Te‏ 3 * ‎aa eT a‏ الا د ا ‎Loo‏ ‎ST BY eee he gisele Sen gee‏ م “8 ا ا ا ل اا ‎Wow‏ ‏ع ا م ل ا ا ال اا اال ‎I‏ ‏ا لا ‎ary‏ مر رااان ا ل الو ل ل ا ‎RRR‏ ل ال ا هئ ا ‎al lle‏ الما ‎٠‏ يي 3 ا ا ات ااا اا اا اك او اي ااا تاي لاا وا التي لطا ااا ااا ااا حي ا ل ا ل حا اا ‎ETHERS‏ الم ‎Ha -‏ ا ب ‎El EL BEE wi sn : 5 Co‏ ل 8 8 ‎fos Se 3 EE SE‏ 5 لخ ال هوا اد و د ل ا اا ‎i che cE NER ERG TLD ein Sale hel‏ ا ‎ee ee‏ ا ا ا 1 ‎RE aN‏ ا ا ا يي ا ل ا ا د ل م اج ‎pe Ra EE‏ : ا ا لع اسح ) ‎a‏ ‎Di ee SE a Be Ee Ee‏ سس ‎i‏ ‎LE‏ ل ‎RB CAL SURG GE a‏ ا ل اا ل 1 ‎DIULE ORDRDD ERR TT maaan‏ ل اال ا ال ا ا لاله لاا للد ذا ا !د ‎gn‏ تمي ند ‎i ee i‏ ا ل 1 ‎E er ae‏ ا ال ل 3 ا ‎a oR‏ ا ‎Woe OF‏ ‎Star WEEE eee Sete‏ . ‎en ETRE Co ER‏ ل ‎a‏ ‎oF SLES TE TE IRE RNR‏ ا ا اا 2 أ لاا اش ا ااه الت ‎am FT ROA‏ 3 اليب
    ال ‎es ANNI SANE A‏ مي ‎MSR‏ لج اجاج عاجوا ا ال ا الا اج لاجر ‎Rd‏ م ا ا ااه الات لا لا ل ‎ANRINR ERLE ER eR BR NE‏ ا ل ‎SRR ER‏ ا ‎RL RN SR‏ ا ا ‎oN ARS‏ ‎I TI TY‏ اي ‎eT‏ ا ا ا ‎I‏ لهب ‎TRE TE Eh CINE NR i RRR SR NR RS ANE a Sy‏ ‎SERIA SE eR‏ 3 ‎I‏ ل ‎RRR SER SRR A SR RR‏ ا £3 ‎fa EE CATT CR REN‏ ‎I RL Se‏ ل ‎bed NT DRS RO‏ ‎SACRA RE ERT SR A SE RR A Re‏ ‎A TTA I Sn A RT a‏ ‎RRL‏ اا ‎IR Sr IA RA RE A RR a RR RR SARI Sa‏ ل ال ا ‎EERE ER IR RG Tn RR CR RE Rie EE RRR ER‏ ال ‎Bh‏ ‎GARR IASG I RR A A I SR LR RS‏ ا ‎SER‏ = اح ال ل ل ‎ne‏ ل ‎Ae.‏ : ‎edie de eda nent ey‏ ال لات لاا الات الا ‎fr.‏ ‏ا ا ا ‎ed EER RR BR‏ ‎i em‏ ال ا ‎RT‏ ا ال ا ا ا اا ا ا ‎RR‏ ال ا لاا يي د ال لش ال ا شا ا ال لت ا لا الا لال جع ا لاا ااا الا الجر ‎SOR tT ei‏ الات ‎w FEI I a i‏ .ب ‎a‏ ِ ا ا ا ا ال ا ا 00 الول ‎Re‏ ‏ا ا ا ل ا ‎IR‏ ا ا 1 “ل ال تتا ل الا الا ا ا الات ل ا ال م ا ب 5 ِ تت ‎UR‏ ال ا الى لير حي 2 اي ال ا ‎III LIT nL 0 DR LT I nn Sn RIT‏ 2 1 ملاتا ل ال ا ا ® ٍُ 7 امد ات ‎RE‏ اما م ا ل ‎RR SR‏ ا تا اتا ‎١‏ دب :7 ا له ا ل ‎Soi‏ 0 ل ‎I‏ م ل جم ا ا اج ا ‎RN‏ ال ا ا ‎be) Hh CENTRE Fem HTN‏ ‎a SEER WEA ge ht‏ ا 0 1 4 سكا ال ل ل ااا لمان تا ا اا مر لم ‎Lal Re‏ ‎fy sles RRR‏ 0 ل ل ‎SOT‏ ا + ‎A‏ انما الوا ‎EN SERRE ei, RE a‏ ‎RR‏ ل ‎SERGE‏ ل ا الت ‎SER UR IRA‏ % ‎sii‏ ا ل ل ‎HY we‏ ا ا ال ‎PR TR‏ ا انيد ات ات ‎RN i RR OR‏ ا ‎ad EERE A‏ ‎Selle‏ الت لت ا ا اتات سات ل 8 ‎IR ne‏ الل ل ‎a DOERR SEN rE‏ ‎Rr hn‏ ا وا ‎AR SS‏ اا ‎a Te AN SEI‏ 1 : ل ا ‎EE aR IT RR Ns‏ # متها ان الاي ال ا ا الي ‎RRR LE RRR‏ اا ‎we‏ يا ‎ry‏ ‏+ ‏ل ا الا اي اواج ا ‎A‏ وك را الاي الوا الا ا ‎SARE‏ ال ا الا الا ا ا الا ا ا ل ان ا ا ا ين ‎LL‏ اا لا لا اا مرا أ ا ‎EL‏ لاا ا ‎a‏ ‏ل ل ا ل ا ا ‎RR RR‏ الات ل ‎a‏ ا الما 0 ا ال ا الا ا 1 ‎SE AIL SE A TT‏ ال ‎SE‏ ” ‎pI‏ ل الل ل الت ل ل أ أ ‎Ar‏ ‎LD I RA LS‏ ال الا يا ا مي الح رح ا اليم ا ل ‎Ep‏ الي ال ل ا الات الوا اه الما ا الت ‎Heke BESET‏ ‎TE‏ ل ال ل اح الح ‎rT he‏ ال ‎I EE LE Tn EN I i‏ ‎ETE ARE Se RR RR SR Rn eR‏ ‎nT HR TU Rn TN Th‏ ا الا ا ا الا لا يا بجا لاي ا ا لا ان اه يي ‎CE RI RE‏ الاي ب الت ‎i‏ ال الا ‎ERE RRL I‏ = ‎a TE eg LA ns TO BT a eT SE Cen nT LE‏ ا ‎J‏ ‏ا ا ال ‎RR ERS‏ ا ا ال ‎LEAR RE ITER SL IR SER‏ = ‎ET Te‏ عا لا الات ‎EE RE‏ يخ ا ‎ERE Rn I I‏ الل ‎SR‏ ا متو ‎or i LERNER LAREN ERR‏ 5 ال ا ‎TR‏ ا د ا ا ‎TT‏ ا ل ل ‎Fe‏ * 8" = ‎hn Sn‏ ا ‎a‏ ا ال ات الا ا ا ا #* مي ‎Bs i‏ ا ا ‎ELI EE PSL Cm‏ ©“ ‎pes Sw EEE TAT a RP Ta De‏ ا ‎RE A Ne SI ty TT‏ الي ا ‎EE RP‏ ‎RA Ray‏ ا ‎RI I‏ اا ‎TT‏ ال ا ‎OLA IA‏ لش ا £5 3 ¥ » ‎A I Te nT eI LE mn‏ ا ا ا ا ا ا ال ‎Fe‏ 5 ‎SR‏ ا ‎a TE I A‏ اتا ا ‎He i TR Be‏ ا ‎I lS RI‏ ا ‎iE Fy‏ ‎la en Te‏ الجاع ‎NT‏ ل ا الس ا م ‎A A TTY‏ > ‎AR‏ ل ‎ERLE‏ ا ا # § ‎w=‏ ‎x LEER RT BR Cn Rn RR mn‏ 1 ‎any‏ ا ‎nT AR‏ ل ا ا ‎en‏ ا ا ‎Tr‏ ا ا الا ا ا ايا ا اه 0 ‎i‏ ا ‎I RE‏ تا ا ‎So.
    TE A‏ ‎a‏ ا ا ا ‎RE LE‏ الت نت تا 5 : ‎ER‏ ا ههه ‎ne RR EE‏ ال ل ‎Re AN‏ ال ا ‎en TR SN‏ ل ‎Bs ARR pe NR‏ ل ‎ER‏ ان ‎LL Ln I‏ الت أن ‎PE Sh I RR‏ 00% ل ‎I‏ ‎ee HEE SR BE RO Sn I i A RS‏ ‎re RR i oR se EER © prog‏ = : ا ل ا ا تاي اا هي > ا ‎ENE TE EE‏ ا ‎i FEE Sr bs‏ ‎We RRR Nn NE BEES TN BES‏ ‎nd SEEDER ORRIN IE ITE Een EE ER Ee‏ ‎a 3 sa : 7‏ % 5 } ا
    لبن 1 8 ‎Low‏ ‎we‏ { 3 ‎fA *‏
    ‎Sa.‏ 3 ‎b -‏
    ‎Lo.‏ ‎dn ee‏ ‎EY‏ ¥ 88 ‎x 3 3‏ ‎oe 3‏ ب ‎L £% 3‏ 2 ب ‎Ee i‏ ‎j i =‏ 1 مها ‎i‏ = 3 ا ‎MY‏ ® § 3 8 8 سي ‎CAREY‏ ‏3 ا ‎Fy b‏ 0 ‎WER Fea § *‏ ‎wo 3 Eo‏ £ 1 ‎a Poe‏ * » عي اخ ‎a‏ * 1 0 امس اس 27 ‎i‏ « & ‎Pra pr AE ged ١0#‏ 2 & ا ا م ‎a‏ ‏يجبي حي لحب حب ©" ‎jo‏ 3 ‎pm %‏ مق 0 ‎E ES a‏ ‎FT) x‏ 3{ ين ‎Te eT‏ ‎oa‏ ‏5 8 ا« ‎WY‏ ا ‎a‏ ‎Co Noa‏ ا بغ ‎NW‏ 3 ‎FF 8 ¥‏ ‎fps‏ ‎fobs‏ ‏حي 8 3 و ا“ د ‎Lo‏ اا ‎ad‏ جا الت ا ‎x‏ 2 3 ‎I NS‏ 8 3 ‎Wi Sd Vow 3‏ ‎jd » £ i 5 i‏ ‎i bo‏ د 4 ا اج 3 ‎N 3 ٌ oY‏ ‎ROLLER Be‏ ع ‎ow EEL‏ ىن ار ‎a "i Lo‏ ‎Fo‏ 3 & 1 ‎Lo‏ ّ 8 نا اا 5 0 ماه 0 & ل 4 ميو ‎Fo ae -‏ هد لا ‎rhea $0 {94 FT)‏ . ‎Be a‏
    ‎ei‏ ا ‎St‏ ل ‎I‏ لحي .الحا ا ا ا ‎Be‏ ‏ا ‎I‏ ا ا ا اا الا ا ا ا ل ع ل ‎SR a a‏ لا ا ا ل ا ل ل ل ل
    ال .الا ل ا ل ‎i a‏ . ال ب ل ا ‎ER‏ ‏اح اي ال اس ا ا اتح د مرتحت متا حا تت وسور :الودج أجلم جوت مح لتر ال لاي ا ا ا ل ‎ee‏ ل ال ‎CR‏ م ل ات لي .لتحا ل ا 7 ‎i‏ 5 ‎=F" RY NE ET RR‏ ‎na a‏ ا له ‎y Sails aE‏ ‎Xf eT aE Ll a‏ ‎Ee ai SER Ea CNG CINE TR‏ 1 ‎TR NT a‏ ل ا ا ‎eR‏ ا 2 ‎A‏ ل ا و ‎Sie By EEL a‏ ل ‎RN Te RRA ee‏ ‎A A BR a ets Rao‏ ا ل ا ل ا ا ار اا ا ا ا ا ا ا ‎BE St‏ 5 الا لم الات ا ل ‎RE IRA Rs A RR,‏ الا . اج ير ار مر ل ا ا ‎ARG‏ ا ا ا ل 8 ‎Sa SRNR TR SR RE I‏ ‎a ER‏ ال ‎RR RT NE‏ ا ا ‎RBIS EN INSTAR LIRR i‏ ع ل ‎BE A I ol on GT‏ ل ‎ER‏ ال ‎SR SER ES ESSN SRNODE‏ ا ل ل ‎pa BERRA ATRIA SASS‏ ا رج يي ‎EN i Re, ER‏ ل ‎Le LRN a LI TN a‏ ‎Ty‏ ا ات تت الت د ع حا ال اه حا ال ا ا ‎Se‏ ا الأ ال ا ‎CT‏ ‏ا با ا و ا مم حي لي ل ل 5 ‎aa‏ ل ا ل + ‎dR ER‏ ا ل ا ل اا ا اخ ‎a aE‏ الا ا ا ل ا ا ا ا ِ م ‎PA‏ ال م ا ‎Fe‏ ال ‎Be‏ 0 ا ‎ERE‏ عع 3 ‎See‏ ا ل ا ال ل ا ل ل اي ل ل ل ‎A‏ ال الل 1 1 ‎or ERE‏ الما الا را ا ل لجل ا تا ا ا ‎Ee‏ اديه ‎En‏ ييا ات ورا لوي ا ا لي ا ال ا ل الت ات ا اي الا ا ال ل ل ‎re‏ ال ا ل ل ا ل كي م مج الي اوت ا ا ا ل ل ا ا ا ا ا لت اليا ا سحا ‎A‏ ا ا : ل ل ‎ER SR‏ ا ا مي ل ‎Tr‏ وو لحاس الل ‎RE TEN‏ ل ل تت ل ا الت ل ا ل ‎Ng:‏ ل لومب مضا ري + ‎NS EH‏ مان لوالا لا ‎ee‏ ل ا م ال ا اس ا ا حت ا ا ‎PAT‏ ا ا ا ل ا ا ا 0 ‎fe HERR‏ ال ‎TE‏ ا ا ‎ee‏ . ال ل ل ل ا ل ال ا ا ا ‎I a‏ الت م ال ل ل ب ا ل ل لال ا م ل ‎ORE CR‏ ‎Sia a HE a 2‏ ان ‎EE‏ ال ل ل ‎x‏ ‏> ا ا لل ل ا ا لت ال ا ‎RO a Bs Sos SRE OSU. JRE SAA SE BER‏ ‎IK RN a‏ ل ‎BR i‏ ‎PL aa Pan RE‏ ا [ 2 ‎RR A A RRR HR RE‏ الات حت ميس و وجو حا حت و لماي ال ااي يي لمي ل ا ‎Rs‏ تت ل ل ا ‎OSI‏ ات ‎RE‏ ل ل ل ال ل و ا ‎RRS‏ ست و ل .المي ا ل الا الم ا ا ‎RR RR NE es‏ 3 ا 0 ‎ps‏ ا ال ا ل ا ‎LE nn‏ ...الخ ل ا ا ا ا ‎Ta IR SR‏ . .امم م ا و ا ا ل الا الا اا ‎I I ne‏ ا الل مات رت اا ا ا ‎Be Ne‏ ‎SR ER‏ ل ال ا 8 ‎a Baal‏ ‎EN‏ ‎JSR RI A He SS RRR D RRS‏ | ا ‎AE‏ ما ا اس ا ا ا ‎nee a Sa‏ ل ل ‎ER‏ اا ا ل ل ا ا ب د ال لالد ‎She SR sa‏ ا ‎LR‏ ‎i ol Ea ha‏ ع ال ‎RE‏ لا ‎Sees‏ ‏:ال ‎GRRE‏ الج ل ‎BCR‏ ‏اتات يعات يعت باتعا تن رياني تبعت يجاوب حم حت ا ل م ‎A‏ ل ا ‎J A Op SOLAN PIO ERI‏ الل اي ‎A RSI‏ ل لح ‎I i‏ ا لح ا ل الا ا ل يت تا ا الا ا ا ا ا ل ا ا ا ا ل ا ل ل ا الا ا و ا ا ل ا ال ا ا ل ا اا ا ا ا ‎a RR‏ حال ل ل ‎freee) Ry RS I‏ ‎SS‏ اي اا لت ايا ات ات ‎a Re Re EE 0 Bn‏ + ‎ET‏ 0 ل ‎IR I‏ ل ل ل 5 ا ل ل ا أن لد م ا ا ل ا ال ل ا ‎hs‏ ‎aso ean 3 8 RR‏ 2 3 1 د ‎a‏ ا ات اا ‎rN‏ ‎nN By BR NeE ean‏ 0 _ أ اا 4 3 # ‎Te‏ إل ال : ‎Te Te‏ او اج اا ا ‎A A RAR.‏ الا ‎ARs Ss]‏ ين ا م ال نا ‎TT‏ ا عد لاح ال ‎RRR a‏ ‎Bona‏ د § لنت سا ل ل 7 ‎Bo‏ ‏ل ل 0 | ‎tal‏ ا ا ‎BE SURE RI Se‏ 1 ‎ee‏ ا ا ‎SRA SATA‏ ا ا ا ‎SN ey‏ ل و - ‎AR EE Ee EE Ey 3 3 RRR ERS Rn:‏ ا 3 ‎RA‏ ا لاد ا ‎a‏
    العا ات ا ب 0 ا اا 10 0 8 ‎RE‏ ال ‎=X,‏ ‎Lon eR‏ : ‎Eg‏ ‏ا : ‎pide‏ |{ 4 ‎Mood‏ 5 ‎Toes‏ - ‎AE 3‏ : ‎jo} CERRY‏ ‎W ; RE‏ ‎Shinn‏ = حب ل ‎ed 5 w‏ أ ‎Fd‏ ! ‎COR aaa‏ % ‎B= a Fl 0‏ ‎i Sona‏ ‎Pr i LITRE‏ الل صل وج اا ااا ا ب اا ٍ ا 1 ‎Je‏ ‎ea wg Tia‏ ااام 3 تت ا« ا ‎Es‏ ال ‎i LE al SE‏ ‎oy i. a aN‏ ‎Tek TREE‏ ‎Eanes‏ ‎PE‏ ‎Co higene‏ ‎ais‏ ‎RSNA NE‏ ‎Ena‏ ‏1 ا ‎Lay‏ ‏ا | ب ا 4 اي ‎a 23 { el‏ ‎i sais‏ + ا ان ‎z‏ ‎Thieme‏ اد ‎SR‏ الى 3 ‎Fo‏ ‏الا : ‎Poo Erma‏ 3 3 ‎Go a oN nn‏ 5 ا لا ‎a‏ ‎J Chin‏ ‎EE “num‏ ‎spon oe‏ ات ب 3 ‎We‏ 1 انو لا ‎SIREN‏ 3 اج ا : ادوج ا كا ال ا ا ا ال ا 4 ‎ERE 3‏ ‎Con ear‏ ‎sii‏
    : ‏جو وو و‎ 1 ‏امهل ا سمج‎ 1 3 8 a VESTRY ‏جضي‎ ‎ٍ ‏ا‎ a ‏خخ‎ | i Nl > = | ‏نسي اا ا‎ ‏اج‎ Ra ‏ب‎ ‏لج‎ WR 8 : ٍْ 8 > ‏ا‎ : ] i 5 ِ ] > a 8 ‏اك‎ ; X Ey ] RE 0. Fo 8 tag, TN 3 ٍْ 0 ‏مل‎ ‎g | I= ; id 1 ‏؟‎ ‎: Fa ; i ; i PE Rp ap “ Py - * Fe ‏اب حر‎ 8 ‏الام م‎ omy 3 ‏)متو ]يسم‎ £10) ; Rs 8 4 ‏ا‎ ‎*
    - Tt 3 ‏ل‎ ‎3 | we ‏و للك‎ "8 ‏ا‎ ‎1 1.1 . ¥ Lb : _- te ‏ا 34 أ‎ 2 on 2: ‏ل‎ ‎4 11 ‏اا‎ ‎jd ١ ‏إلا‎ ‎- Q wo 3 = Cosa Bu Tt
    I . Twa oma Ea Bi Sam Rei Fo i rm 5 Bok a rr “oN 88 ‏ا‎ ‏ل ا‎ TY ‏ا‎ ‏اي‎ ‎Sol ia = ‏لا‎ vimans 1 i 0" # 1 6 0 ¥ ood Ena Bo ‏د ل الج‎ ‏يي‎ 7 By ‏ا ند به‎ ‏الت ات 1 ين‎ . ‏ا‎ ‏غة © سيان‎ ‏د الل‎
    SSO. CRE ‏داح ا‎ ‏ا ال‎ ‏ا أ‎ ‏ب‎ 3
    : AR we : © ‏ع ل ا‎ ; Ses EAR a ; : ‏حب ا ل‎ ay ey | FTI... | Fok = 1 : YE ‏اا‎ ‎a 1 EEE 8 4 ١ ‏جسم‎ "
    و + .0 ; ٍ: ‎Ros LF‏ 1 اج ا | 4 ai teen,
    ei ‏ل‎
    ‎i‏ ا 0 1 ٍ ايج ممص اح سا 1 ‎BN Ea‏ ل لحر ‎O | 3 1‏ ‎i 8 : \ > : -‏ 3 ا 2 ‎z |‏ ما ال إ ‎١ ٍ 7‏ ببست & # * حي ال مد ‎hat‏ ‎a {or £0 0‏ رسع اماج 0 ‎CORTE Ry‏ ا - ‎Pes‏ ‏4 ‏> 1 ‎ge‏ ‎A‏
    ٍِ ‏جا احا‎ 3 oan FREE : $700 ar ‏اتا ا‎ aie 3 TY Eek s Pon 8 - Fd Chart Gee 9 8 ‏ا ا‎ A 3 ax Li ‏الهم‎ 1 ‏ا‎ 3 Sanh he 3 sn re 3 nx ; : 3 ; g ‏؟‎ ‎oe ; a 2 i * : ELE ‏ل ا‎ 1 5 ‏ا‎ ‏وم‎ 1 Lg 4 Pot EE = Soe an a. 0 ‏ل‎ ‎TE ‎Tow na 2X LALIT ‏اا‎ ‎WE ‏ات‎ ‎Ee ‎WE onan nn En i A ‏متشا‎ ‎BE RR SA WERE so ‏ا‎ ‎Yoo ‏مسد‎ ‎1 ‏اما‎ ‎TF ‏ا ا‎ ‏ال ل ل ل‎ 5 (aE FERRY EDEN 5 ‏ا ا‎ os RENE . ote ‏تر‎ = EEO x Hie : ‏اال‎ ‎i Cn yr . 3 EE RO ‏تت ا 8 ل م‎ 3 ‏اتا ا‎ ‏ا ل‎ 2 + Lan ‏ا تح ات‎ are 3 ‏ا : ال‎ = 3 ‏ا ا‎ ‏ا 8 ل‎ g > ‏ل‎
    ‎. Eda 3 ‏ا‎ ‏الاب‎ ’ en — ¢ JERR
    2 1. 2 aa ‏ل + الب‎ ne ‏ا‎ ‏ا 1 م‎ ‏مي ا مج‎ ‏ان الا ب ا ات اللي ل‎ Taam We Ea ‏ل لها ا‎ ‏ل‎ ‎hl ETE i ia Sn NOIR ‏ا‎ ‏ااي وا‎
    . امو سي لس ‎Cnn Ne‏ 3 ‎aay‏ ‏ ‎oO :‏ ‎RR‏ 0 سب ‎:;E =‏ = ‎FI ANN a‏ ‎FEE AN >‏ مط . \ ا م 3 تون ا الس 1 قي ل بع ‎SA PRT ve‏ ‎aad K A * *‏ 2 1 احا ‎Re‏ 3 1 7 ‎Ls]‏ , ‎a 8 a‏ : 1 . ‎“i‏ | 0 ‎Ea‏ + = ) ٍْ إ ‎goo.‏ ‎Ca‏ ‎Te‏ ‏3 § & * ع ‎ar‏ - © * 4 # ‎open fd dere y‏ = - )0 يه { ‎pia FY‏ ‎«TR‏ ‎apn‏ ‏= ‎RE‏ ‏4 ‎J‏ ‎TEX:‏ ‎HOR‏ ‏— ‎Thy‏ ‏2 ‎oF‏
    2 ! EE ET 3 si RAE Coad EB ‏العلا بس‎ aly | SE OE ‏العلاج‎ Vol ‏دورة‎ OLE ‏بعد‎ a = ‏قر ان إٍْ : ين‎ ٠ ‏د 3 بج { = > اليب العلاج فين‎ ‏ا ا الدورة؟‎ gy ١ 3 } i : 7 : % i ‏ا‎ : 7 i + 3 1 { 8 3 i ‏ا ا اق ا ات أ ااا‎ i I A II. She oly | ! 1 : ‏أ 2 ب‎ sn gar ‏اليه‎ : 1 et | ‏إْ‎ ] لشكلرتفم‎ | NE RTE eg SPOR adr ce Load Are | ‏موحي | عضول‎ sy ‏اال‎ ha a ‏ال‎ Ee ‏كرا‎ ‎Bap ‏لد رع ا‎ dee 56 ‏وج سول‎ | Re ‏الول وح عر‎ TOC ‏اا‎ ‎ST A se | CETTE } RR aed : ‏7ق‎ Porte ‏لبوق : الات‎ { 2 ‏ريو عر 1 [ #ر004 0 المح عضي‎ | BER ١ ‏اح‎ : i } : 3 NS : i ! ٠: i } i 3 : : 1 8 ‏ا‎ ‎{su} 3 1 ‏ا‎ ‎> ‏حم م تمي ل تتم ممتي ل يمي سيت وح امح حو‎ Se Sh: th ‏أل‎ ‎TERRE 8 : 1000 ‏تج‎ 3 Poa 5 i whew ] ‏وا‎ : PREG ‏وات‎ i Lod Pex ‏الاج‎ | Mew | i a Vader boas aod \ : ‏مغ‎ ad ‏مي | ني‎ ; {ows « vie { : FR : ‏لم‎ #85 | : osama | | i i Po Coes i 3 Sha wi : 1 i i i 3:4 A fad i 3 ot 5 : 1 3 { pe & fo 1 i 3 ‏ممتي‎ i i : Volare | ! 1 ‏ا ال لوي‎ i 1 ; ‏ا‎ ٍْ i ‏ب"‎ | ; : 1 } i 3 i i : \ ; | | i | ‏ب‎ ‏لا 1 مآ ا يإ لالب ل لل اا ئ ”7ح‎ SLT } 4 ‏عد‎ ّ } VEE aan i a ang 4 ‏مالس‎ ew ‏لالش | ل‎ Cl ‏لالش | #نثر | # 3ق ا »ار ماق‎ © : 1 ‏لش الإ يح كرا‎ ٌ i 3 { i i { i poet 45 i ‏كسمتت :؟:‎ i i i : ‏ا‎ Nb al } i FRR : i {oad Fiat | i ‏؟‎ avis |] ‏ا‎ i \ i HE 17 8 i 3 RR i i i } i ion 1 i : ‏لوي‎ i i i : ‏ا‎ oe i : 3 TT : i Uoadetag | i 1 mE | \ ‏د‎ : 1 \ i 3 : ‏ا‎ i } i i { : 3 i { i { i i { : 3 i { i { i i i i i i i 3 i : i i i 3 : 1 8 1 ‏تس ا د تت ا اا‎ FF i EE 1 : : ae ost £3 : ‏الا سوج لجن : ب ا الها اد‎ 31 | ‏,تب | الكش‎ | Alam ‏لق دد]‎ PLETE ‏اس ا‎ : * 3 od ‏ال‎ + \ : cow 4 i : {ea { i i 1 ‏إْ | ميد‎ ; ; Us fe ; Vo mae | : A fe Vo ْ: ١ i Vee | : 1 neawme | \ ; : Lasday { os | { : \ i i { : 3 i { i { i i i i i i i i i i { : 3 i { i i | i i A i | i BET ge r Fe od 5 3 { HE a i { Ss 3 BU i As i at } Lo ‏ا‎ aA ‏ا‎ i v4 { 3 i wid + ‏لك‎ } 4 RPG 1 ‏ا من : ابا سن إٍْ 1 5 إٍْ مي‎ 3 er | > ‏إٍْ‎ A 3 iad Posy | pom | ‏ل‎ : HG Ca i : 3 BIE i i i } : ‏ا‎ : i ANS : i i i Vogts : 1 ‏ا | معد‎ ; : ‏ل‎ { i : ‏تراحم‎ : i i { i i Ze ¥ } i 3 SEE i { 5 } : ْ : | : i i { : 3 i { i { } } : : 1 2 mr ——————— esse — es ‏امس سسا ست‎ TEE Ty EP } : 0 Pha 0 : ‏ل حم ]دكين © ا الل‎ ‏لد‎ | es ‏سم كر ا‎ ERASER ‏لي‎ Te ‏اليج 4ك كر‎ i Lo ‏اجاج اح 8 ما‎ : > 3 { 1 ‏الا‎ go ‏مج‎ 1 {waded i i i i PASE { i i 1 MEME : i i { : HE } : 3 EY i i i i : ‏ات‎ sft } : 3 ‏يي‎ : i i { i LARA i i 8 i i } Vn { i 3 i 1 i i PRE \ : i 1 i i i i ‏ل‎ ‎TE +3 i Vatis ® lay 8 Pog wa) Ate | ‏ناتش‎ wy ‏اتاج‎ skye | Cl Ser ‏نال‎ 8# DAs ve xy i VST ‏الما‎ i 3 { { i } 1 ‏ل لي‎ i 1 1 wads |: ‏ا‎ i v oe \ i 0 ‏ا‎ : + a i alk Le {it i i {SEAR te \ ; i i 35 1 i i abe gd 1 i { : ‏إْ إٍْ وا 1 : : يلا‎ : ‏إٍْ ل‎ : i | : i } } i 3 i { i { : 1 } i i : { 8 1 a ‏ا ات‎ sissies } TUITE Py } ne VE ew 1 ‏اجاج | الع‎ SCR ‏ا‎ ‎En F i & 4 ‏ا‎ pe HAS } JRE rx i ‏سكع جود 5 لل نم‎ | § xt ‏ا‎ i SY 3 i A 8 i HEE i ad : ‏ا ]| مكعم جنا‎ ; \ : Vary ified i HER i i i 1 |= Lag ! : 1 ‏إٍْ ل‎ ; : ‏اا ا‎ } i 3 { i i ‏ا‎ ‎SR 4# ‏شكل‎ ‎5 A; LI 3 ; = 8 ‏ودج اج 0 ا‎
    ; . dake 3 aA ‏د‎ ‎NEMVDCE 1:01 ‏يشير إلى فقداي‎ da
    اس ا 7 : حم > جمدي : ا : لتحي ‎om dal 2 i i x 1 Fa 3 Rade a 4 > Ah 3‏ 3 & ! ; § 8 1 9 : نج قم ‎Py | 1‏ احج ممح حم ممح ماج ماحد الايد ' 1 18 3 8 3 5 + % : :5 0 5 ب مع ف علا ‎iA‏ § > ض ‎i‏ ‎tras aaa |‏ 3 : ض ) : ‎ganna‏ يي ‎Ry :‏ العم ؟ : : + : ‎a‏ يب ا = ‎i‏ ‏ض ‎a | hb‏ : : العامة > ‎LL‏ : ‎FETE 3‏ امور ل 2 § ‎{sad SU Spal‏ ا 3 3 ٍ 1 : ض ‎on‏ ض 0 ‎J‏ ‎A { 3‏ يُ 1 : 1 8 ُ يبه ا توي تبي ْ 5 : ' 1 ; 8 ب ‎eo‏ ض دا ل عون تف 0 . ‎g Pa Spd NEA GE‏ 3 ‎ade ES 3‏ 0 ض | 9 3 0 ض ‎on‏ + ض 5 3 الا > لا مد ا اا جع كيج 1 ض | ض 1 1 1 1 ل ل ل ‎rims : 7‏ ا : ض ِ ا ض ا ض الع ض ‎ND‏ | | - ا ض ض | | ‎Se‏ مج 0] ‎i oe ER J Ty { > wn ETRE : . :‏ ا ‎i Ca SS 4 ْ: |‏ : : 8 { ا“ 1 3 ‎١ ١‏ ل لل لل :ْ حم ا ض 3 يح ‎dirassssassasasas:‏ ‎Ty‏ : الجحجج لاي 0 3 5 3 : ب > : ‎SER‏ ‏,5 الي 1 | | 3 ض ض 0 الي 3 ان ‎i ROE‏ : الج ا ‎١‏ ا > 3 ‎TERETE on | | - |‏ ‎Re : { } =» y a0 |‏ ب > ‎Lh‏ ‎Say ; & Ua 5 i i 3‏ ا * ‎FEY‏ > - ‎SY A wx fi 3 & 5 ; 2 So |‏ 3 ل - 3 : لاا ود : لتحت اي ‎١‏ . ‎amma ] :‏ ‎maaan : | 1‏ 3 ض ا ض ض ض | ٍ< 2 + ‎aaa]‏
    ‏: . : صتمي 3د : ْ من | : 6 ‎on : . :‏ . 1 0 ‎yi F airy { £3 3 ARAN :‏ ‎UY Xx : Hr ¥ ad A TE : : i‏ ‘ ‎SIA 4 |‏ 3 ض ‎Sa { ad A y iy‏ 3 ادح جح هي ‎i‏ 0 : ‎rfid‏ ’ ّ ا اميق ا ا 08 ‎x i‏ + الم ‎a‏ 1 اج ¥ ¥ & كي ‎k Eyl‏ ض ٍ ذ ض | ض ض 0س | : ا ‎P + 2 Bo 3 Se Ea RR Hi : . :‏ 3 1 ‎t Lp Td 1 > 81 ¥ ~ {! 0 SE NT 3 % 3‏ 1 ا ع ‎a YT oR GUYER‏ 3 ض - § 3 ل لتحت ات ٍ ا 0 ‎i Li‏ لت جاتحت جتحت تحت ‎Se Coe‏ ض ض : ‎overs < :‏ لاتحت ات ” | 3 3 : الح ‎re‏ ‎RR i | | 1‏ ; 7 تا ض 0س ‎aa‏ ‎ae ap : . :‏ | :
    : . : ا © 0 0 2 الأ ‎TT‏ ام ‎a‏ 1 ل ا ‎Fo Ll vd 5 |‏ : 0 3 ‎F 3 { Ro LE VER . LE : > | {‏ لتحت يي : حي 3 = ٍ تت ااي ض ‎i 2 : = : : ;‏ ‎asasasssasassaiaaas : | 31‏ ‎a LR 3‏ : > 5 0 - - ل وو اج ا او 0 3 3 ‎Fat‏ 3 8 5< ض ‎anna] om N‏ ‎or SH a 3 HR ee 3 % 3‏ ‎Annan: |‏ ‎at dE iE a . ne = citi | i 3‏ 6 1 ‎LL % |‏ } ض ب نر الى ‎i ; 43% LE fod i‏ الع 3 : | 3 : : ‎٠‏ لل ل لع عل ا د يا 5 ‎EE‏ : 3 | ا + مج 3 2 . ’ لاع ‎Aye‏ اح 7 2 1 2 ض | + ا 3 = ص % 3 ‎ad 3 | Na Car‏ 0 3 ‎Or ; ot 4 5 wr , TAT : . :‏ ‎i i‏ : تح ‎CE X * َ % > : ES Aye‏ ‎to je, Sp : . :‏ = ّ' 3 | 3 ا | ‎ort oS SENS‏ { 1 % اندر 8 ‎ree 3‏ > : : يم 0 ‎FPP‏ ‏ ‎wy & & } & &‏ 2 { : ‎{A ;‏ للع
    J | ad SAY ER 1 1 ‏اتح ل‎ eq | ‏العلا الك له‎ :
    العلاج بعد الإقران ‏ دورة ‎COA‏ العلاج قبل الإقران ا ‎R i \ 3 \‏ : :قي ا ا ‎br i rp rr rr rd‏ للق د ‎VER‏ ‏1 ب 8 ‎HE a 3 3 ¢ 3 Po T 3 \ y‏ ‎١‏ ا الا ‎LY iy r‏ \ ‎Dens Sati fe dt :‏ : | | الوجدة ‎Uo‏ ‏| الاين عا 1 ‎LNT al‏ عند النتمية يج ‎i aad‏ ل 1 : انان ‎Co‏ الوحدة ‎i‏ ‏: دكي ‎SE ship‏ لمحي دي ‎a‏ لل » ‎i = Ev ROSEY‏ ل ‎Ped‏ ا ‎oe Wy bg‏ ‎ded lll‏ ا لرجة ‎Ea hl mete dee DOME yaa | RA‏ ‎lac SAR | 2708 |‏ ا ‎OVERA | DEMS‏ ا ‎coping‏ *# ا ‎FR ;‏ مد ‎{su} ; CRS‏ ; : إٍْ ‎I‏ : | | : إْ ا د 1 ‎Pos‏ : ا ٍ ا ا ‎seed‏ مح محم مم ا مما ةم وياد ممع و لمي لم م يم لالح ل انق عل :قي الو اا 1 ا ‎i i ood AY Pom ig TIF aad : i i‏ 1 ‎i Lay be av fag i Pale NERY : PAYER |‏ 1 ‎Toe ih : FI Pe 3‏ 3 ل ‎Le 7 wh‏ 3 } إٍْ ا ‎oT t ! SEE AE 8 ١‏ : { ‎I ْ 8 | ٍْ |‏ اا أت ا ]| ‎Frommers‏ ‏اد ‎SEs | La 1 "0.0 AL EE LEE‏ الي ‎wt Lox | 585 Fo‏ الحا ‎١ ١‏ ‎I Naa Pope‏ الاج ‎Vora‏ ‎a : i |‏ كع م ا ‎gee AEE‏ انا رض فى ‎i i i ci 1 i i HR : i i‏ ‎ake : PC : : ;‏ ; الح زر ‎Cm es‏ ‎i‏ 7ع : ‎Doel‏ #»؟ ‎Pee‏ ا | لمج ‎VATE Lowey ob‏ إٍْ ‎pond | 83 1 #5 0: ١‏ ! \ ‎BAY‏ : ٍ ل ا : ‎Vani | a‏ | إٍْ ‎FE‏ : مور لدم [ اا 1 ‎jo He | FE‏ ‎i i HEY i ’ i i ; i |‏ ‎Doar 1 i fits : ;‏ ا 1 ‎Voda ones os . . ; Lay : Ww‏ ‎١‏ سبحا #ثية اووس ‎Po Bik LR TELE Sg ١ Ly‏ ‎wy i : 1 Sam : i TE‏ ! ماع 5 ا ا ا الك ها : : ‎ER i i‏ ل ‎i i {oA‏ ‎ses El 'ِ ٍ |‏ ا لمحكئش ‎gee‏ :ْ 0 ايروش حراش ‎CI‏ ‏ا 17000 ‎Smee‏ جر 1 ‎I‏ الصو ‎EA‏ ٍ ا ا ا أ ادا ٍ! ‎Lakes Lo TR EERE we : :‏ ْ الل ‎eT‏ يلت ااا لوخت : تصن إٍْ ‎See ER ¥Y Vom ft i x i ws LR‏ ا ‎ee RTT egies : : xr‏ اللي ا ‎i‏ لي : : ‎{oss WF fo | A YR i oe XY : As‏ 17ت ‎Foe i i 3 : i‏ } { { ‎Lowe Pe : : ْ‏ ٍْ ‎gre RIX : BE‏ | مسحي ] ‎wr Foxe‏ لاتير ‎DIRT Lae‏ ‎١ : EW Gay LEY ake ١ La‏ ا" : ! ‎Uwe a Po Anime‏ | : ا 8# ‎RET‏ لفسا بير ‎Ve Lane‏ الا ‎mae 0 xx‏ لا ‎Ups | PARRY aft | Eo fie ea 1 i 1‏ ‎aes Poses‏ هو لطاع ‎AYER vy‏ 3 تالت ل ‎Ll So 1 sis Ia‏ : ‎i | LE ETE i i 5 i i i‏ ‎i Voge sw | i i i i i‏ 1 ‎Lomb? : ٍِْ ْ :‏
    A § A I
    ١ ‏د‎ { RF Yi
    ال ست ا ا اا :| ‎oad‏
    : Fa i 2 yr 7 : 3 ‏احاح ججح‎ IIIa ‏الح‎ ‏ا‎ i RE ‏العلا سس« نا ا‎ i Wy ‏ل ا ااا 1 اا‎ : ‏ذم لحن لوال اللا ]| وخ ا ان‎ i Sik 25 % Voy 1 : ‏الا ل 5 ا ا‎ i ‏ل 1 ال ا 85 ل‎ I ‏اسك تت يت‎ A ‏دورة‎ OUR ‏العلاج بع‎ : : } ¥ > ‏امس ل ااا لاا‎ i i i i ¥ i ¥ i i َ ‏حم ااا‎ fase i pag es * Ty | pp : Hay | 1 ¥ ‏الخ عع لا عع عع ع عي‎ 3 S : ‏الوحدة‎ ْ Fo fb LT Poa Donk i 3 § I] i ty ao As ed ena ‏ددمي ممم ممم ممم ما لمي مقي‎ Fag ‏اق‎ elena SAS ‏ا‎ | fan ‏تيع‎ dpe BAY Gi ; PONTE renal | RWEE i . ‏الحون مها‎ seas | Ede he sly coh ead dow ; {su ‏امعد يمس‎ | mew ‏م | اين‎ sn sinem ‏شف الول‎ HT : ةةاكئاث1١[‎ | i i ? i Vp Void ‏الت كتج‎ 8 i 1 ‏إٍْ إٍْ‎ i pA pan ‏القرقة سلف‎ § YPEDINE nnd i i i } 1 To i i 8 i i i : i i i ‏ممساتايسس‎ ; : : i : i i : ‏ااا ااا ا اا الا اع وا ا‎ i i 1 ‏ا‎ i i Poona ‏ا‎ { 3 Te ss esses : ! HR 1 1 : COT RE ‏ا لت اا الات ات نا ا‎ i ‏انق‎ 1 | i : Poste HE & ‏ا 3 ل ان‎ : ssh i i : : i 3 ‏لتحت ححا د } } ا : الجاع‎ i i bo od : Pood } ‏دبا » ا‎ Ua i ‏ا ا‎ a SEE ‏انه إكركاض 2# 2 إْ إٍْ‎ : i ive 1 ‏ل‎ A i Sa YE La EE ‏أ ايها‎ | : * : RY ah Pr ‏ال‎ i Foard ; 1 i AER i Essien | i i A i i dager : i ‏ب‎ i i : } : i SEE i } SA i i i : ‏د إٍْ إٍْ إٍْ‎ i i DRE i } 3 i Briss i i } i i i : Eodary | 1 : ‏لجح ليح تح تا ل تي‎ 4 1 i i : ‏ا‎ wig 5. 4 3 ‏اا اا ا لاا‎ i : i * i ps Yd § : i } rm ffs : i i i i Ea Pow i Voges | 8 ‏الست‎ ‏إٍْ‎ ْ Poa : Po ! ORNS mwa DosR AEA Ves Ler sans HE a «# : i EN 0 1 ‏إْ ا ال‎ ; : : PoE 3 fi i {oo ‏م‎ PE ‏لمحتا‎ i | POA i IN ! 0 | 10 883400 ‏#كغهل ا إٍْ إٍْ‎ : : Vos | ‏إٍْ ل‎ : ‏إٍْ‎ | i { i \ i ; : ‏تسق ااا اا‎ 8 i i ‏ا‎ i i ; ERTL sss i | \ : Posse : is | i i rs i : i : i PE : i { } ‏لمحتت تدج أو‎ : bogs : &¥ few | DORE na i { Poe od Poe ‏ا‎ amas ‏إٍْ‎ ‎i i i ‏وال‎ Loge d ek i Leavin ‏اي‎ } i Ri i : : Poa 3 ‏ب‎ ; SAA Posy jibe BN ‏مر : إْ اا‎ i i } i : 1 } ‏اليه‎ ١ i : ; ; Coat ved hd {RSA 1 ‏لكل‎ i 1 i ha 3 i i i ‏ا‎ 3 i BS + i ْ: ْ ْ ‏إْ إٍْ : ل‎ Ll ‏ا إْ‎ i i ‏لا لأ‎ i i 3 i 3 3 i RE AR : : { i i : ‏ات اتات أ اي‎ | { i i
    ‎wo x 5‏ 3 كل م١‏ سس د كا ا
    Baan RRR x ‏ل ل‎ Waa 3 rnin Lay FEN RE EE tues Ros RR RR BY Be: ‏ا‎ REA, RRR TR oan: ae Na Nee 3 . TR ‏ل‎ ARR See aE EAN ANE Nr RRS SEERA * 0 ‏ل‎ ZANE Re Na ane ‏ا ل‎ 8 ‏ا‎ Ta RN SERN AAA I RAR A NER ‏ل‎ ‏ا‎ RNAS Ne ON 5 ‏ا 8 ل‎ BN SB NE Non La CL a aa NSN RR Rg a ‏ل‎ | Sa Noe ae eee aR Ne LL Ny SERN DNR AE RS aN aS EA ay SN RENE 5 ‏ا‎ ‎0 SRNR INT RETA ARON 1 ‏ل‎ CNR ay Aaa Lah Es NE RA RR ated daa Lo A RNR NN Nate . ‏ا‎ Raa RENE | Rae Lo Ea NL a RRR RENAN 1 RRR RE BE Re) a NE ae . 0 ‏ل ا ا ا ل‎ ‏م‎ DEE BA Bostik: are 4 ae Ts ms vp Pus Ra SEE NN aaa Fi ‏ا ل ا‎ ae ‏م‎ Bnei Ea Elan at a 3 ‏ا‎ ME ae 2 3 ‏اا ا ا ا‎ = ‏الى‎ HEE Ee FR aN Ne Satta Ra Ste SERA SE I i hae Ga BR
    & +. Po RR SERRE 5 Es OE ] See he Sa RANA ae He he Buia a REA SAREE KER PRR ea REE Ra Bette) De RA RRR ESE Leto ‏ا‎ ‏ا ل 0 ال ا‎ ‏ا 0 ا ا ل‎ 0 0 0 ‏ا‎ ENR EY ne ng SEEGER RE 88 ‏ا‎ ‏ل ا‎ Ra ‏ا ل‎ ‏ل ل‎ Sp SE NER a nas RARE ony 0 ‏ا‎ Ha ‏ا ا ا‎ ‏وه وى سس‎ ee SE Sala ‏لاا‎ TE RR Cares 0 RR I he Se 3 RNa Sa oy BF mn Nahe aaa F BL LE NEN NNR BY CEN ps nae : ‏ل ل‎ ‏ل‎ SERRE ERR 3 RRS Say ea ¥ Be ORE Sa 4 Eh aaa Seana : fe NEN NRE NEN ‏؟‎ | AR AEE TR aS REY 8 BRE re SRE a RR Sha WR ERR RRNA FRU Rat Jar BEE SHEN a a 2 ‏ا ل ل ا‎ ‏الى‎ Ea ‏ااا ال ل ا‎ To ‏لب‎ Ta ‏ا ا مت ل‎ ‏ا ل‎ RE aa ‏ا‎ ay fo CE ER Na ‏ا ا ل‎ a ‏ا‎ ‏ا ل ل‎ ‏ل م ا‎ ae ‏ل قي‎ SE aaa ENTE NN be ae ‏ال ا‎ 3 Lo ‏ال‎ ana ‏ل ل‎ ‏ل‎ Shae ‏جو‎ ERR SEEN AE ! we GF j ‏حي‎ 481 2 25 3 x Se hh M S a 3 ‏تلا‎ i 3 7 7 oe : a Sn a re SR ene na i 3 Rnd Sy FERRY Be he IR AE : Fae ‏د ل 5 ا ا ل ا‎ : GE ae Sat ‏ال‎ NEN . ra Bal Nae Sn Sha Dd ena En AE ’ ed] SER TaN See oF BE a ‏ل ال ا‎ Ra :
    3. JERE NE aa 8 ‏ا‎ ' 2 a ae RCEAR TORRE Sr RRR: LENA Rs 0 o Shae Eee DERE RIOT RE Res Bt RRR: 4 Sie ERY ‏ل‎ AR Rea SR AE CEERI Rah ER NES Sl aa ana a REE aR he ea Fae Boa Sada ‏ا ال ل اال‎ Laan Rha ae METER he Le i aes 8 maa 0 ‏ا م ا ل ا‎ ‏ل ل‎ Ba ER 8" ‏ل 5 ل‎ REECE Po BE BRA RR Rea Ca i, Ti SERN SORES SENSE
    +. RE Beene ‏ل‎ a ‏الح مجو ما‎ ‏ا اا لا ا الا ال ا‎ 0 4 : Sa Sn TEAS RA Ra pe ‏د‎ wh EERE Nae . NN § ERE Re ‏ا ا‎ Mh as FERRI Sa ET ‏لحي‎ A RR RE ER a CR frase oft RRR ‏ل‎ RS SRS ‏ل‎ Raa : ‏ا‎ Ses ‏ااا ا‎ ٍ ‏ا ل ل ا‎ ِ 3 SRE Spon | 0 ERRAND BRADY a Sa ; : Fe Bond ae 8 ‏ل ا‎ hs ca LE 8 ‏ال ل ا ا‎ So ES IR Poet nin Fue Sad Biases SE Fa | ‏ل ل‎ Se Fe SEE SR ‏ا ل ل‎ ER SR RE 0 ‏ل‎ ‏ل‎ : SA Et EE gE Reade le a ea iid pa BR : Ra ER SSR Ge SU ‏و وجني اه‎ 0 ‏ل‎ 5 5 2 Ha a ‏ا‎ ZN ee ER Lame ‏ا‎ Na Es 8 BN EE a SRN - - ena ‏الا ا‎ NEY pl SR EAR NE ENN She Saas 3 "BS SPER a ‏ا‎ Ea 8 0 ‏ل‎ oc aN pT Rt. GENCE Ruste Ro Sanaa 3: Ean Set Ee I Naa : SERS RETR FREY a aE : Bien Rs Jha RR en Nas Coma ibs EN a gn Ea Sh EEE SEE rsa ‏ال‎ ‎BRA RAR RR BERRY SRA es BC SER NE RR +) 8 ‏ا ل ا‎ PEE ‏ا‎ ‎= ea a Sel BR Ee a ‏ا م‎ . Ch aE ERs asa aE Ee ea Ee ERE aaa pai eal SEEN RHO a, J RRR Reel
    = QO ooo 2 ,/ ‏ل‎ - 8 ‏ل‎ * ِ ‏اه‎ Po 38 - 3 v suf 3 * =f 2 ‏جد سلا‎ 1 i 2 3 ba 2 x ‏يتا‎ ‎© ‎pi “ § > FE © ‏إ‎ : - Be
    © . * hat hd - % rye (sO QA as
    الحاضهة الهيلة السعودية الملضية الفكرية ‎Swed Authority for intallentual Property pW‏ ‎RE‏ .¥ + \ ا 0 § ام 5 + < ‎Ne‏ ‎ge‏ ”بن اج > عي كي الج دا لي ايام ‎TEE‏ ‏ببح ةا ‎Nase eg‏ + ‎Ed - 2 -‏ 3 .++ .* وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها ‎of‏ سقوطها لمخالفتها ع لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف ع النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية. »> صادرة عن + ب ب ‎٠.‏ ب الهيئة السعودية للملكية الفكرية > > > ”+ ص ب ‎101١‏ .| لريا ‎1*١ uo‏ ؛ المملكة | لعربية | لسعودية ‎SAIP@SAIP.GOV.SA‏
SA519402226A 2016-12-19 2019-06-17 مترافقات أوليجومرات تخطي الإكسون للحَثَل العَضَلِيّ SA519402226B1 (ar)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662436223P 2016-12-19 2016-12-19
US201762443484P 2017-01-06 2017-01-06
US201762479178P 2017-03-30 2017-03-30
US201762562146P 2017-09-22 2017-09-22

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA519402226B1 true SA519402226B1 (ar) 2023-01-22

Family

ID=60953960

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA519402226A SA519402226B1 (ar) 2016-12-19 2019-06-17 مترافقات أوليجومرات تخطي الإكسون للحَثَل العَضَلِيّ

Country Status (25)

Country Link
US (2) US11000600B2 (ar)
EP (2) EP4115908A1 (ar)
JP (3) JP7160807B2 (ar)
KR (2) KR20240006057A (ar)
CN (1) CN110636866A (ar)
AU (1) AU2017382773A1 (ar)
BR (1) BR112019012664A2 (ar)
CA (1) CA3047010A1 (ar)
CO (1) CO2019007399A2 (ar)
DK (1) DK3554552T3 (ar)
ES (1) ES2928486T3 (ar)
HR (1) HRP20221155T1 (ar)
HU (1) HUE059905T2 (ar)
IL (2) IL267246B2 (ar)
LT (1) LT3554552T (ar)
MD (1) MD3554552T2 (ar)
MX (1) MX2019006879A (ar)
NZ (1) NZ755438A (ar)
PL (1) PL3554552T3 (ar)
PT (1) PT3554552T (ar)
RS (1) RS63621B1 (ar)
SA (1) SA519402226B1 (ar)
SG (1) SG10202100557UA (ar)
TW (2) TWI794197B (ar)
WO (1) WO2018118662A1 (ar)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI541024B (zh) 2010-09-01 2016-07-11 日本新藥股份有限公司 反義核酸
US11472824B2 (en) 2016-05-24 2022-10-18 Sarepta Therapeutics, Inc. Processes for preparing phosphorodiamidate morpholino oligomers
EP3564248A1 (en) 2016-05-24 2019-11-06 Sarepta Therapeutics, Inc. Processes for preparing phosphorodiamidate morpholino oligomers
MX2019006879A (es) 2016-12-19 2019-08-01 Sarepta Therapeutics Inc Conjugados de oligomeros de omision de exon para distrofia muscular.
KR102639633B1 (ko) 2016-12-19 2024-02-26 사렙타 쎄러퓨틱스 인코퍼레이티드 근육 이상증에 대한 엑손 스킵핑 올리고머 결합체
EA201991450A1 (ru) * 2017-09-22 2019-12-30 Сарепта Терапьютикс, Инк. Конъюгаты олигомеров для пропуска экзона при мышечной дистрофии
US10758629B2 (en) 2018-05-29 2020-09-01 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
GB201821269D0 (en) 2018-12-28 2019-02-13 Nippon Shinyaku Co Ltd Myostatin signal inhibitor
WO2020257489A1 (en) * 2019-06-19 2020-12-24 Sarepta Therapeutics, Inc. Methods for treating muscular dystrophy
US20230174979A1 (en) * 2019-10-09 2023-06-08 Children’S Medical Center Corporation Methods and compositions for treating ataxia telangiectasia
WO2021132591A1 (ja) 2019-12-26 2021-07-01 日本新薬株式会社 エクソン５０のスキッピングを誘導するアンチセンス核酸
JPWO2021172498A1 (ar) 2020-02-28 2021-09-02
CN117940564A (zh) 2021-06-23 2024-04-26 日本新药株式会社 反义低聚物的组合
WO2023282344A1 (ja) 2021-07-08 2023-01-12 日本新薬株式会社 腎毒性軽減剤
WO2023282345A1 (ja) 2021-07-08 2023-01-12 日本新薬株式会社 腎毒性軽減剤
CA3225573A1 (en) 2021-07-08 2023-01-12 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Precipitation suppressing agent
WO2023178230A1 (en) 2022-03-17 2023-09-21 Sarepta Therapeutics, Inc. Phosphorodiamidate morpholino oligomer conjugates

Family Cites Families (105)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH445129A (fr) 1964-04-29 1967-10-15 Nestle Sa Procédé pour la préparation de composés d'inclusion à poids moléculaire élevé
US3459731A (en) 1966-12-16 1969-08-05 Corn Products Co Cyclodextrin polyethers and their production
US3426011A (en) 1967-02-13 1969-02-04 Corn Products Co Cyclodextrins with anionic properties
US3453257A (en) 1967-02-13 1969-07-01 Corn Products Co Cyclodextrin with cationic properties
US3453259A (en) 1967-03-22 1969-07-01 Corn Products Co Cyclodextrin polyol ethers and their oxidation products
US4235871A (en) 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
US5506337A (en) 1985-03-15 1996-04-09 Antivirals Inc. Morpholino-subunit combinatorial library and method
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
DE3650349T2 (de) 1985-03-15 1995-12-14 Antivirals Inc Immunotestmittel für polynukleotid und verfahren.
US5521063A (en) 1985-03-15 1996-05-28 Antivirals Inc. Polynucleotide reagent containing chiral subunits and methods of use
US5217866A (en) 1985-03-15 1993-06-08 Anti-Gene Development Group Polynucleotide assay reagent and method
US4737323A (en) 1986-02-13 1988-04-12 Liposome Technology, Inc. Liposome extrusion method
KR0166088B1 (ko) 1990-01-23 1999-01-15 . 수용해도가 증가된 시클로덱스트린 유도체 및 이의 용도
US5719262A (en) 1993-11-22 1998-02-17 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having amino acid side chains
US5539082A (en) 1993-04-26 1996-07-23 Nielsen; Peter E. Peptide nucleic acids
US5714331A (en) 1991-05-24 1998-02-03 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility
JPH07509133A (ja) 1992-07-17 1995-10-12 リボザイム・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 動物疾患の処置のための方法および剤
NZ266386A (en) 1993-05-11 1997-11-24 Univ North Carolina Use of antisense rna oligonucleotides in regulating gene expression
US5753613A (en) 1994-09-30 1998-05-19 Inex Pharmaceuticals Corporation Compositions for the introduction of polyanionic materials into cells
US5885613A (en) 1994-09-30 1999-03-23 The University Of British Columbia Bilayer stabilizing components and their use in forming programmable fusogenic liposomes
US5820873A (en) 1994-09-30 1998-10-13 The University Of British Columbia Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof
IL115849A0 (en) 1994-11-03 1996-01-31 Merz & Co Gmbh & Co Tangential filtration preparation of liposomal drugs and liposome product thereof
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US7572582B2 (en) 1997-09-12 2009-08-11 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
WO1999042091A2 (en) 1998-02-19 1999-08-26 Massachusetts Institute Of Technology Use of polycations as endosomolytic agents
US6683173B2 (en) 1998-04-03 2004-01-27 Epoch Biosciences, Inc. Tm leveling methods
US6210892B1 (en) 1998-10-07 2001-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Alteration of cellular behavior by antisense modulation of mRNA processing
JP2000125448A (ja) 1998-10-14 2000-04-28 Yazaki Corp 電気接続箱
JP2000256547A (ja) 1999-03-10 2000-09-19 Sumitomo Dow Ltd 耐熱性プラスチックカード用樹脂組成物
US7084125B2 (en) 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
AU776362B2 (en) 1999-05-04 2004-09-09 Roche Innovation Center Copenhagen A/S L-ribo-LNA analogues
JP2000325085A (ja) 1999-05-21 2000-11-28 Masafumi Matsuo デュシェンヌ型筋ジストロフィー治療剤
EP1242052A4 (en) 1999-12-29 2003-07-02 A James Mixson HISTIDIN COPOLYMER AND METHODS OF USE THEREOF
US7070807B2 (en) 1999-12-29 2006-07-04 Mixson A James Branched histidine copolymers and methods for using same
US6653467B1 (en) 2000-04-26 2003-11-25 Jcr Pharmaceutical Co., Ltd. Medicament for treatment of Duchenne muscular dystrophy
US6727355B2 (en) 2000-08-25 2004-04-27 Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. Pharmaceutical composition for treatment of Duchenne muscular dystrophy
EP1191097A1 (en) 2000-09-21 2002-03-27 Leids Universitair Medisch Centrum Induction of exon skipping in eukaryotic cells
CA2459347C (en) 2001-09-04 2012-10-09 Exiqon A/S Locked nucleic acid (lna) compositions and uses thereof
KR100464261B1 (ko) 2002-01-24 2005-01-03 주식회사 파나진 Ｐｎａ 올리고머를 합성하기 위한 신규한 단량체 및 그의제조방법
KR20030084444A (ko) 2002-04-26 2003-11-01 주식회사 파나진 Ｐｎａ 올리고머를 합성하기 위한 신규한 단량체 및 그의제조방법
US7569575B2 (en) 2002-05-08 2009-08-04 Santaris Pharma A/S Synthesis of locked nucleic acid derivatives
AU2003291682A1 (en) 2002-11-05 2004-06-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-methoxy substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations
ES2561851T3 (es) 2002-11-25 2016-03-01 Masafumi Matsuo Fármacos de ácido nucleico ENA que modifican el corte y empalme en precursores de ARNm
CA2524255C (en) 2003-03-21 2014-02-11 Academisch Ziekenhuis Leiden Modulation of exon recognition in pre-mrna by interfering with the secondary rna structure
DK2351844T3 (da) 2003-04-29 2014-09-22 Sarepta Therapeutics Inc Præparater til forøgelse af transport- og antisense-effektivitet af nukleinsyreanalog i celler
US7211668B2 (en) 2003-07-28 2007-05-01 Panagene, Inc. PNA monomer and precursor
USRE47769E1 (en) 2004-06-28 2019-12-17 The University Of Western Australia Antisense oligonucleotides for inducing exon skipping and methods of use thereof
CN101184841A (zh) 2005-04-22 2008-05-21 莱顿教学医院 通过干扰SR蛋白的结合以及干扰RNA二级结构调节前mRNA中的外显子识别
US8067571B2 (en) 2005-07-13 2011-11-29 Avi Biopharma, Inc. Antibacterial antisense oligonucleotide and method
MX2008006089A (es) 2005-11-10 2009-05-28 Santaris Pharma As Oligomeros de conmutacion de empalme para los receptores de la super-familia de tnf y su uso en el tratamiento de enfermedades.
JP3151554U (ja) 2006-05-17 2009-07-02 スヴェトラナ アナトレフナ ソコロヴァ 輸送手段
JP5864100B2 (ja) 2007-06-29 2016-02-17 サレプタ セラピューティクス インコーポレイテッド 組織特異的ペプチドコンジュゲートおよび方法
US20100016215A1 (en) 2007-06-29 2010-01-21 Avi Biopharma, Inc. Compound and method for treating myotonic dystrophy
JP2010533170A (ja) 2007-07-12 2010-10-21 プロセンサ テクノロジーズ ビー．ブイ． 化合物を種々の選択された臓器、組織又は腫瘍細胞に標的化するための分子
AU2008317566B2 (en) 2007-10-26 2014-05-01 Academisch Ziekenhuis Leiden Means and methods for counteracting muscle disorders
KR101617472B1 (ko) 2007-11-15 2016-05-02 사렙타 쎄러퓨틱스 인코퍼레이티드 모르폴리노 올리고머의 합성 방법
US8299206B2 (en) 2007-11-15 2012-10-30 Avi Biopharma, Inc. Method of synthesis of morpholino oligomers
US8076476B2 (en) 2007-11-15 2011-12-13 Avi Biopharma, Inc. Synthesis of morpholino oligomers using doubly protected guanine morpholino subunits
WO2009127230A1 (en) 2008-04-16 2009-10-22 Curevac Gmbh MODIFIED (m)RNA FOR SUPPRESSING OR AVOIDING AN IMMUNOSTIMULATORY RESPONSE AND IMMUNOSUPPRESSIVE COMPOSITION
EP2119783A1 (en) 2008-05-14 2009-11-18 Prosensa Technologies B.V. Method for efficient exon (44) skipping in Duchenne Muscular Dystrophy and associated means
US8084601B2 (en) 2008-09-11 2011-12-27 Royal Holloway And Bedford New College Royal Holloway, University Of London Oligomers
KR20190079702A (ko) 2008-10-24 2019-07-05 사렙타 쎄러퓨틱스 인코퍼레이티드 Dmd를 위한 다중 엑손 스키핑 조성물
DK2607484T3 (en) 2008-10-27 2016-03-07 Biomarin Technologies B V Methods and means for efficient skipping of exon 45 in Duchenne muscular dystrophy pre-MRNA
SG171914A1 (en) 2008-12-02 2011-07-28 Chiralgen Ltd Method for the synthesis of phosphorus atom modified nucleic acids
DK2417257T3 (da) 2009-04-10 2016-06-06 Ass Inst De Myologie Tricyclo-dna-antisense-oligonukleotider, sammensætninger, og fremgangsmåder til behandlingen af sygdom
ES2593836T3 (es) 2009-04-24 2016-12-13 Biomarin Technologies B.V. Oligonucleótido que comprende una inosina para tratar la DMD
AU2010270714B2 (en) 2009-07-06 2015-08-13 Wave Life Sciences Ltd. Novel nucleic acid prodrugs and methods use thereof
CN102574888A (zh) 2009-09-16 2012-07-11 株式会社启拉坚 用于rna及其衍生物的合成的新型保护基
DK2499249T3 (en) 2009-11-12 2018-12-03 Univ Western Australia ANTISENCE MOLECULES AND PROCEDURES FOR TREATING PATHOLOGIES
TWI541024B (zh) * 2010-09-01 2016-07-11 日本新藥股份有限公司 反義核酸
US10428019B2 (en) 2010-09-24 2019-10-01 Wave Life Sciences Ltd. Chiral auxiliaries
CN103501793A (zh) 2011-02-08 2014-01-08 夏洛特-梅克伦堡医院(商业用名:卡罗来纳保健系统) 反义寡核苷酸
EP2704749A1 (en) * 2011-05-05 2014-03-12 Sarepta Therapeutics, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
US9161948B2 (en) * 2011-05-05 2015-10-20 Sarepta Therapeutics, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
US9607308B2 (en) 2011-06-29 2017-03-28 American Express Travel Related Services Company, Inc. Spend based digital ad targeting and measurement
ES2535654T3 (es) 2011-10-13 2015-05-13 Association Institut De Myologie ADN triciclo-fosforotioato
ES2727481T3 (es) 2011-11-30 2019-10-16 Sarepta Therapeutics Inc Inclusión inducida de exón en atrofia muscular espinal
CN110055243B (zh) 2011-12-28 2024-03-26 日本新药株式会社 反义核酸
AU2013212758A1 (en) 2012-01-27 2014-08-14 Biomarin Technologies B.V. RNA modulating oligonucleotides with improved characteristics for the treatment of Duchenne and Becker muscular dystrophy
DE102012101676A1 (de) 2012-02-29 2013-08-29 Klaus-Dieter Rösler Verfahren und Vorrichtung zum Bearbeiten von Formularen mit einer Datenverarbeitungsanlage
WO2014007620A2 (en) 2012-07-03 2014-01-09 Prosensa Technologies B.V. Oligonucleotide for the treatment of muscular dystrophy patients
SG11201500232UA (en) 2012-07-13 2015-04-29 Wave Life Sciences Pte Ltd Chiral control
US9598458B2 (en) 2012-07-13 2017-03-21 Wave Life Sciences Japan, Inc. Asymmetric auxiliary group
EP2900835A4 (en) 2012-09-27 2016-05-11 Population Diagnotics Inc METHODS AND COMPOSITIONS FOR DETECTING AND TREATING DEVELOPMENTAL DISORDERS
EA201591178A1 (ru) 2012-12-20 2015-11-30 Сарепта Терапьютикс, Инк. Улучшенные композиции для пропускания экзона для лечения мышечной дистрофии
CN117844807A (zh) 2013-03-14 2024-04-09 萨勒普塔医疗公司 用于治疗肌营养不良的外显子跳跃组合物
KR20210006516A (ko) * 2013-03-14 2021-01-18 사렙타 쎄러퓨틱스 인코퍼레이티드 근육 이영양증의 치료를 위한 엑손 스키핑 조성물
MX2015013117A (es) * 2013-03-15 2016-07-14 Sarepta Therapeutics Inc Composiciones mejoradas para tratar distrofia muscular.
JPWO2015108048A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤
EP3095460A4 (en) 2014-01-15 2017-08-23 Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. Chiral nucleic acid adjuvant having anti-allergic activity, and anti-allergic agent
JPWO2015108047A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 免疫誘導活性を有するキラル核酸アジュバンド及び免疫誘導活性剤
US10160969B2 (en) 2014-01-16 2018-12-25 Wave Life Sciences Ltd. Chiral design
US20150329609A1 (en) 2014-03-03 2015-11-19 Sujata Acharjee Chimeric dystrophin proteins to treat dystrophinopathies
SI3118311T1 (sl) 2014-03-12 2019-05-31 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Protismiselna nukleinska kislina
PL3159409T3 (pl) 2014-06-17 2020-05-18 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Antysensowne kwasy nukleinowe do zastosowania do leczenia dystrofii mięśniowej duchenne'a
JP6728156B2 (ja) 2014-11-02 2020-07-22 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッドＡｒｃｔｕｒｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． メッセンジャーｕｎａ分子およびその使用
MA43072A (fr) 2015-07-22 2018-05-30 Wave Life Sciences Ltd Compositions d'oligonucléotides et procédés associés
AU2016334232B2 (en) 2015-10-09 2022-05-26 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods thereof
CN108699555A (zh) * 2015-10-09 2018-10-23 萨勒普塔医疗公司 用于治疗杜兴肌营养不良和相关病症的组合物和方法
MA45290A (fr) 2016-05-04 2019-03-13 Wave Life Sciences Ltd Procédés et compositions d'agents biologiquement actifs
MA45270A (fr) 2016-05-04 2017-11-09 Wave Life Sciences Ltd Compositions d'oligonucléotides et procédés associés
MX2019006879A (es) 2016-12-19 2019-08-01 Sarepta Therapeutics Inc Conjugados de oligomeros de omision de exon para distrofia muscular.
KR102552428B1 (ko) * 2016-12-19 2023-07-06 사렙타 쎄러퓨틱스 인코퍼레이티드 근육 이상증에 대한 엑손 스킵핑 올리고머 결합체
EA201991450A1 (ru) * 2017-09-22 2019-12-30 Сарепта Терапьютикс, Инк. Конъюгаты олигомеров для пропуска экзона при мышечной дистрофии

Also Published As

Publication number Publication date
US20210338830A1 (en) 2021-11-04
MD3554552T2 (ro) 2022-12-31
EP3554552A1 (en) 2019-10-23
IL267246B2 (en) 2023-03-01
JP7160807B2 (ja) 2022-10-25
TWI794197B (zh) 2023-03-01
DK3554552T3 (da) 2022-10-24
EP3554552B1 (en) 2022-08-17
JP2023171961A (ja) 2023-12-05
KR102646318B1 (ko) 2024-03-12
NZ755438A (en) 2023-05-26
WO2018118662A1 (en) 2018-06-28
IL267246A (en) 2019-08-29
JP2022185140A (ja) 2022-12-13
PT3554552T (pt) 2022-10-03
KR20190099002A (ko) 2019-08-23
HUE059905T2 (hu) 2023-01-28
KR20240006057A (ko) 2024-01-12
US11395855B2 (en) 2022-07-26
RS63621B1 (sr) 2022-10-31
CA3047010A1 (en) 2018-06-28
EP4115908A1 (en) 2023-01-11
TW201828995A (zh) 2018-08-16
US20180271993A1 (en) 2018-09-27
IL297528A (en) 2022-12-01
JP7465320B2 (ja) 2024-04-10
AU2017382773A1 (en) 2019-08-01
MX2019006879A (es) 2019-08-01
IL267246B (en) 2022-11-01
BR112019012664A2 (pt) 2020-01-21
PL3554552T3 (pl) 2022-11-21
ES2928486T3 (es) 2022-11-18
CO2019007399A2 (es) 2019-10-09
JP2020511943A (ja) 2020-04-23
US11000600B2 (en) 2021-05-11
TW202332470A (zh) 2023-08-16
CN110636866A (zh) 2019-12-31
HRP20221155T1 (hr) 2022-12-09
SG10202100557UA (en) 2021-02-25
LT3554552T (lt) 2022-10-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA519402226B1 (ar) مترافقات أوليجومرات تخطي الإكسون للحَثَل العَضَلِيّ
JP7506601B2 (ja) 筋萎縮症と筋緊張性ジストロフィーを処置するための組成物および方法
SA519402154B1 (ar) مترافقات أوليجومرات تخطي الإكسون للحَثَل العَضَلِيّ
TWI780095B (zh) 用於肌肉萎縮症之外顯子跳躍寡聚物結合物
SA515361121B1 (ar) تركيبات تخطي للأكسون خاصة بمعالجة الحَثَل العَضَلِيّ
CN109757108A (zh) 具有治疗遗传疾病的改善特征的包含双环支架部分的前体mRNA剪接转换或调节寡核苷酸
SA515361125B1 (ar) تركيبــــات تخطي للأكسون خاصة بمعالجة الحثل العضلي
JP2020537501A (ja) 筋ジストロフィーのためのエクソンスキッピングオリゴマーコンジュゲート
CN112384222B (zh) 用于肌营养不良的外显子跳跃寡聚物缀合物
JP2020536057A (ja) 筋ジストロフィーを処置するための併用療法
JP2020536058A (ja) 筋ジストロフィーを処置するための併用療法
US20210220386A1 (en) Exon skipping oligomers and oligomer conjugates for muscular dystrophy
TW202020153A (zh) 用於肌肉萎縮症之外顯子跳躍寡聚物
EP4219717A2 (en) Exon skipping oligomers for muscular dystrophy
EA044076B1 (ru) Конъюгаты олигомеров для пропуска экзона при мышечной дистрофии