SA519402154B1 - مترافقات أوليجومرات تخطي الإكسون للحَثَل العَضَلِيّ - Google Patents

مترافقات أوليجومرات تخطي الإكسون للحَثَل العَضَلِيّ Download PDF

Info

Publication number
SA519402154B1
SA519402154B1 SA519402154A SA519402154A SA519402154B1 SA 519402154 B1 SA519402154 B1 SA 519402154B1 SA 519402154 A SA519402154 A SA 519402154A SA 519402154 A SA519402154 A SA 519402154A SA 519402154 B1 SA519402154 B1 SA 519402154B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
eee
oligomer
rrr
see
err
Prior art date
Application number
SA519402154A
Other languages
English (en)
Inventor
جيه. هانسون جونار
ايه. باسيني ماركو
Original Assignee
ساريبتا ثيرابيوتكس، انك
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ساريبتا ثيرابيوتكس، انك filed Critical ساريبتا ثيرابيوتكس، انك
Publication of SA519402154B1 publication Critical patent/SA519402154B1/ar

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/712—Nucleic acids or oligonucleotides having modified sugars, i.e. other than ribose or 2'-deoxyribose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/645—Polycationic or polyanionic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. polylysine, polyarginine, polyglutamic acid or peptide TAT
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C12N2310/111—Antisense spanning the whole gene, or a large part of it

Abstract

يتعلق الاختراع الحالي بوصف مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ المتممة لموقع مستهدف مختار في جين الديستروفين البشري للحث على تخطي الإكسون 51. شكل 1.

Description

أوليجومرات تخطي الإكسون للحَدّل العَضَلِيْ ‎Exon Skipping Oligomer Conjugates for Muscular Dystrophy‏ الوصف الكامل خلفية الاختراع يتعلق الكشف الحالي بمترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ جديدة ملائمة تخطي الإكسون 1 في جين الديستروفين البشري وتركيبات صيدلية منها. يوفر الكشف أيضًا طرقًا للحث على تخطي الإكسون 51 باستخدام بمترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ الجديدة؛ طركًا لإنتاج الديستروفين في خاضع للعلاج لديه طفرة في جين الديستروفين الذي يكون مُعرْضًا لتخطي الإكسون 51؛ وطرقًا لعلاج خاضع للعلاج لديه طفرة في جين الديستروفين الذي يكون مُعرْضًا لتخطي الإكسون 51. يتم تطوير التقنيات المضادة لاتجاه النسخ باستخدام نطاق من الكيمياء للتأثير على التعبير الوراثي عن الجين عند مجموعة متنوعة من المستويات المختلفة (الاستنساخ؛ الجدل؛ الثبات؛ التحوّر 0 الوراثي). لقد تركز الكثير من هذا البحث على استخدام المركبات المضادة لاتجاه النسخ لتصحيح أو التعويض عن الجينات غير الطبيعية أو المصاحبة للأمراض في نطاق واسع من دواعي الاستعمال. تعتبر الجزيئات المضادة لاتجاه النسخ قادرة على تثبيط التعبير الوراثي عن الجين باستخدام النوعية؛ وبسبب هذاء فقد تركزت العديد من جهود البحث المتعلقة بالأوليجومرات كمعدلات للتعبير ‎sll‏ عن الجين على تثبيط التعبير ‎sl‏ عن الجينات المستهدفة أو وظيفة 5 العناصر العاملة سيس. يتم نمطيًا توجيه الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ ضد ‎(RNA‏ إما الجديلة مع اتجاه النسخ (على سبيل المثال» ‎(MRNA‏ أو الجديلة الناقصة في ‎Ala‏ بعض من أهداف ‎RNA‏ الفيروسية. لتحقيق تأثير مطلوب خاص بالتنظيم التنازلي لجين نوعي؛ تقوم الأوليجومرات بصفة ‎dale‏ إما بتعزيز ‎MRNA (Plas)‏ المستهدف؛ إعاقة التحوّر الوراثي ل ‎MRNA‏ أو إعاقة ‎disk‏ عناصر ‎RNA‏ العاملة سيس»ء وبالتالي منع إما التخليق الجديد البروتين 0 المستهدف أو نسخ ‎RNA‏ الفيروسي بكفاءة.
بالرغم من ذلك؛ لا تعتبر هذه التقنيات مفيدة حيث يتمثل الهدف في تنظيم إنتاج البروتين الأصلي تصاعديًا أو التعويض عن الطفرات التي تحث على الإنهاء السابق لأوانه للتحوؤر الوراثي؛ مثل ‎andl «hill‏ أو الخاصة بإزاحة الإطار. في هذه الحالات؛ لا ينبغي تعريض نسخة الجين المعيبة إلى التحلل المستهدف أو التثبيط الفراغي؛ لذا لا ينبغي أن تُعزز كيمياء الأوليجومر المضاد الاتجاه النسخ انحلال ‎MRNA‏ المستهدف أو تعيق التحوّر الوراثي. في مجموعة متنوعة من الأمراض الجينية؛ يمكن تعديل تأثيرات الطفرات على التعبير النهائي عن جين من خلال عملية خاصة بتخطي الإكسون المستهدف أثناء عملية الجدل. يتم توجيه عملية الجدل بواسطة آلية متعددة المكونات معقدة تجلب وصلات الإكسون-الإنترون المتجاورة في ‎MRNA‏ أولي في ‎dlls‏ تقارب وثيق وتقوم بشطر روابط فوسفو داي إستر عند نهايات الإنترونات 0 مع إعادة تشكيلها ‎Ga‏ فيما بين الإكسونات التي سيتم جدلها معًا. ‎Lam‏ هذه العملية المعقدة وعالية الدقة بواسطة بواعث المتوالية في ‎MRNA‏ الأولي القصيرة ‎Gans‏ مقاطع ‎RNA‏ شبه المتحفظة التي ترتبط بها عوامل الجدل النووي المتنوعة المتضمنة بعد ذلك في تفاعلات الجدل. عن طريق تغيير طريقة قيام آلية الجدل بقراءة أو التعزف على البواعث المتضمنة في معالجة ‎MRNA‏ أولي؛ يصبح من الممكن تكوين جزيئات ‎MRNA‏ مجدولة على نحو تفاضلي. لقد تم الآن إدراك أنه يتم 5 على نحو بديل جدل غالبية الجينات البشرية أثناء التعبير الوراثي عن الجين الطبيعي؛ بالرغم من أنه لم يتم تحديد الآليات المتضمنة. يصف ‎Bennett et al‏ (البراءة الأمريكية رقم 2 التعديل المضاد لاتجاه النسخ لمعالجة ‎MRNA‏ الخلوي من النوع غير المعالج باستخدام نظائر الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ التي لا تحث على الانشطار الناتج عن ‎RNAse H‏ ل ‎RNA‏ المستهدف. تتمثل الفائدة من ذلك في القدرة على توليد ‎MRNAS‏ مجدولة 0 على نحو ‎day‏ تفتقر إلى إكسونات نوعية (انظرء على سبيل المثال؛ كما هو موصوف بواسطة ‎(Sazani, Kole, et al. 2007)‏ لتوليد مستقبلات العائلة العليا من ‎TNF‏ القابلة للذويان التي تفتقر إلى الإكسونات التي تقوم بتشفير نطاقات تمديد الغشاء . في الحالات حيث يتم إنهاء بروتين وظيفي بصورة طبيعية على نحو سابق لأوانه بسبب الطفرات الموجودة فيه؛ تم عرض وسيلة لاستعادة بعض من إنتاج البروتين الوظيفي من خلال التفنية 5 المضادة لاتجاه النسخ باعتبارها ممكنة من خلال التدخل أثناء عمليات الجدل؛ وأنه إذا كان
بالإمكان حذف الإكسونات المصاحبة للمرض المسبب للطفرات بشكل خاص من بعض الجينات؛ فإنه يمكن في بعض الأحيان إنتاج منتج بروتين قصير له خصائص بيولوجية مشابهة للبروتين الأصلي أو له نشاط بيولوجي كافي لتحسين المرض الناتج بواسطة الطفرات المصاحبة للإكسون (انظر على سبيل المثال» ‎Sierakowska, Sambade et al. 1996; Wilton, Lloyd et‏ ‎al. 1999; van Deutekom, Bremmer-Bout et al. 2001; Lu, Mann etal. 5‏
‎Janson et al. 2004‏ ,5ل4ا-811508 :2003). يكشف ‎(Kole et al‏ (البراءات الأمريكية أرقام ¢5,627,274 ¢5,916,808 ¢5,976,879 5 5,665,593( عن طرق لمكافحة الجدل الشاذ باستخدام نظائر الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ المعدلة التي لا تُعزز انحلال ‎MRNA‏ ‏الأولي المستهدف. يصف ‎et al‏ 860068. (البراءة الأمريكية رقم 6,210,892( التعديل المضاد
‏0 الاتجاه النسخ لمعالجة ‎MRNA‏ الخلوي من النوع غير المعالج ‎Waal‏ باستخدام نظائر الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ التي لا تحث على الانشطار الناتج عن ‎RNA 1RNAse H‏ المستهدف. من المحتمل أن تكون عملية تخطي الإكسون المستهدف مفيدة تحديدًا في الجينات الطويلة حيث يوجد العديد من الإكسونات والإنترونات» حيث يوجد وفرة في التشكيل الجيني للإكسونات أو حيث يكون بروتين قادرًا على العمل بدون واحد أو أكثر من الإكسونات المحددة. لقد ركزت الجهود
‏15 لإعادة توجيه ‎dallas‏ الجين لعلاج الأمراض الجينية المصاحبة لحالات الاقتطاع الناتجة بواسطة الطفرات في الجينات المتنوعة على استخدام الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ التي إما: (1) تتراكب بشكل كلي أو جزئي مع العناصر المتضمنة في عملية الجدل؛ أو (2) ترتبط ب ‎MRNA‏ ‏الأولي عند موضع قربب بالقدر ‎(HSH‏ من العنصر لتمزيق ارتباط ووظيفة عوامل الجدل التي من شأنها أن تتسبب بصورة طبيعية في تفاعل جدل بعينه يحدث عند ذلك العنصر.
‏0 - يحدث الحَثّل العَضَلِيْ لدوشين ‎(DMD)‏ بواسطة عيب في التعبير الوراثتي عن ديستروفين البروتين. يحتوي الجين المشفر للبروتين على 79 من الإكسونات المنتشرة على أكثر من 2 مليون من نوكليوتيدات ‎DNA‏ يكون لأية طفرة خاصة بالإكسون ‎ad‏ من إطار القراءة الخاص بالإكسون؛ أو تُدخل رامزة إيقاف» أو يتم تمييزها بواسطة إزالة إكسون أو إكسونات خارج الإطار بأكمله أو بأكملهاء أو تضاعفات واحد أو أكثر من الإكسونات؛ إمكانية لتعطيل إنتاج الديستروفين الوظيفي؛
‏5 مما يؤدي إلى ‎DMD‏
لقد وجد أن صورة أقل حدة من ‎Jal)‏ العَضَلِي؛ ‎Jal)‏ العَضَلِيْ لبيكر ‎(BMD)‏ تظهر حيث تؤدي طفرة؛ نمطيًا حذف واحد أو أكثر من الإكسونات؛ إلى إطار قراءة صحيح على طول نسخة الديستروفين بأكملهاء بحيث لا يتم إنهاء التحوّر الوراثي ل ‎MRNA‏ في البروتين على نحو سابق لأوانه. إذا حافظ ربط الإكسونات السابقة والتالية في عملية معالجة ‎MRNA‏ أولي لديستروفين مطفر على إطار القراءة الصحيح للجين؛ تتمثل النتيجة في تشفير ‎Gig MRNA‏ بحذف داخلي قصير يحافظ على بعض من النشاط؛ مما يؤدي إلى نمط بيكر ظاهري. لعدة سنوات أصبح من المعروف أن عمليات حذف إكسون أو إكسونات لا تغير من إطار القراءة الخاص ببروتين ديستروفين ستؤدي إلى ظهور نمط ‎BMD‏ ظاهري؛ بينما سيؤدي حذف إكسون يتسبب في إزاحة إطار إلى ظهور ‎(Monaco, Bertelson et al. 1988) DMD‏ بشكل عام 0 طفات الديستروفين المتضمنة طفرات نقطية وعمليات حذف للإكسون تُغير من إطار القراءة وبالتالي مقاطعة التحوّر الوراثي للبروتين ‎Dall‏ مما يؤدي إلى ‎DMD‏ ينبغي ملاحظة أن بعض من مرضى 81/0 و01/0 يعانون من عمليات حذف للإكسون تُغطي العديد من الإكسونات. لقد تم توضيح تعديل جدل ‎MRNA‏ الأولي لديستروفين الطفرة باستخدام الأوليجو رببو نوكليوتيدات المضادة لاتجاه النسخ في كل من المعمل وجسم ‎all GASH‏ (انظر على سبيل المثال»
Matsuo, Masumura et al. 19911; Takeshima, Nishio et al. 1995; 5
Pramono, Takeshima et al. 1996; Dunckley, Eperon et al. 1997;
Dunckley, Manoharan et al. 1998; Wilton, Lloyd et al. 1999; Mann, .(Honeyman et al. 2002; Errington, Mann et al. 2003 ‏لقد تم تصميم الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ بشكل نوعي لاستهداف مناطق نوعية من‎ ‎MRNA 20‏ الأولي؛ نمطيًا الإكسونات للحث على تخطي طفرة جين ‎DMD‏ وبالتالي استعادة هذه الطفرات خارج الإطار داخل الإطار للسماح بإنتاج بروتين الديستروفين الوظيفي المقصر داخليًا. لقد عُرفت هذه الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ للاستهداف بشكل تام داخل الإكسون (ما يُطلق عليه المتواليات الداخلية للإكسون) أو عند وصلة واهب جدل أو مستقبل جدل تعبر من الإكسون إلى جزءِ من الإنترون.
لقد كان اكتشاف وتطوير هذه الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ ل ‎DMD‏ جزءًا من البحث السابق. تتضمن هذه التطويرات تلك الواردة من: )1( ‎University of Western Australia‏ ‎and Sarepta Therapeutics‏ (المعين لهذا الطلب) الطلبات الدولية : 000057/2006 048586/2010 057350/2011 1532402014 ‎Academisch Ziekenhuis Leiden/Prosensa (2) 153220/2014 5‏ :(BioMarin Pharmaceutical ‏(الآن‎ Technologies «133105/2007 «112705/2006 083446/2004 083432/2004 24906/02 «050802/2010 «050801/2010 «054725/2009 «139630/2009
Carolinas Medical (3) ‏؛‎ 007620/2014 «112053/2013 3369/2010 ‎:Center 0‏ 109296/2010 ؛ )4( ‎:Royal Holloway‏ البراءات والطلبات التي تستفيد من؛ وتتضمن» الطلبات والبراءات أرقام 096,073/61 و 164978/61 ؛ ‎Jie‏ البراءتين الأمريكيتين رقمي 8,084,601 و2017-0204413 )4( ‎:JCR Pharmaceuticals and Matsuo‏ ‎US 6,653,466‏ البراءات والطلبات التي تستفيد من» وتتضمن» 2000-125448 ‎Jie «JP‏ 7 56ل؛ البراءات والطلبات التي تستفيد من» وتتضمن» 2000-256547 ‎Jie «JP‏ ‎WO :Nippon Shinyaku (5) ‘WO 2004/048570 ‏ذنا؛‎ 6,727,355 5 ‘WO 2015/194520 «WO 2015/137409 «WO 2013/100190 ¢2012/029986
Association Institut de Myologie/Universite Pierre et Marie (6)
Curie/Universitat Bern/Centre national de la Recherche
WO 2013/053928 ‘WO 2010/115993 :Scientifique/Synthena AG ‏20 يعد الإيتيبليرسين أوليجومر فوسفورو داي أميدات مورفولينو ‎(PMO)‏ مصمّم لتخطي الإكسون 51 لجين الديستروفين البشري في مرضى مصابين ب ‎DMD‏ مُعرّضًا لتخطي الإكسون 51 لاستعادة إطار القراءة وإنتاج صورة وظيفية أقصر لبروتين الديستروفين. وقد أجازت إدارة الأغذية والعقاقير الأمريكية ‎(FDA)‏ في 2016 إكسونديس 51"” (إيتيبليرسين) لعلاج ‎JAN‏ العَضَلِيَ لدوشين ‎(DMD)‏ في مرضى ثبت لديهم طفرة من جين ‎DMD‏ مُعرّضًا لتخطي الإكسون 51.
DMD ‏يعد اكتشاف وتطور أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ مترافقة مع ببتيدات مخترقة للخلايا ل‎
Wu, 8. et al., The ‏الدولية 048586/2010 ؛‎ PCT ‏للبحث (انظر نشرة‎ Vise
Wu, R. et 0181080 Journal of Pathology, Vol. 181 (2): 392-400, 2
Mulders, <al., Nucleic Acids Research, Vol. 35 (15): 5182-5191, 2007 5. et al., 19th International Congress of the World Muscle Society, Poster 5
Bestas, B. et al., The Journal of ¢Presentation Berlin, October 2014
Jearawiriyapaisarn, Clinical Investigation, doi: 10.1172/JCI76175, 2014 ¢N. et al., Molecular Therapy, Vol. 16(9): 1624-1629, 2008
Jearawiriyapaisarn, N. et al., Cardiovascular Research, Vol. 85: 444-453,
Moulton, H.M. et al., Biochemical Society Transactions, Vol. 35 ¢2010 10
Yin, H. et al., Molecular Therapy, Vol. 19 (7): ¢(4): 826-828, 2007
Abes, R. et al., J. Pept. Sci., Vol. 14: 455-460, ¢1295-1303, 2011
Lebleu, B. et al., Advanced Drug Delivery Reviews, Vol. 60: 517- ¢2008
McClorey, G. et al., Gene Therapy, Vol. 13: 1373-1381, ¢529, 2008 ‏و‎ ¢Alter, J. et al., Nature Medicine, Vol. 12 (2): 175-177, 2006 ¢2006 5
Youngblood, D. et al., American Chemical Society, Bioconjugate Chem., .(2007, 18 (1), pp 50-60) ‏على سبيل المثال؛ الشق الناقل للبتيدات الغنية‎ (CPP) ‏قد تكون الببتيدات المخترقة للخلايا‎ ‏بالأرجينين؛ فعالة لتحسين اختراق؛ على سبيل المثال؛ مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ مع‎ ‏000)؛ في خلية.‎ 0 ‏للأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ المحسنة التي‎ dala ‏بالرغم من هذه المحاولات؛ تظل هناك‎ ‏تستهدف الإكسون 51 وتركيبات صيدلية مناظرة من المحتمل أن تكون مفيدة للطرق العلاجية‎
DMD ‏لإنتاج الديستروفين وعلاج‎ ‏الوصف العام للاختراع‎
تتضمن مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ الواردة بهذه الوثيقة شق مترافق أوليجومر
مضاد لاتجاه النسخ مع ‎CPP‏ في أحد الجوانب؛ يوفر الكشف مترافقات أوليجومرات مضادة
لاتجاه النسخ تشتمل على:
أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ يبلغ طوله 30 وحدة فرعية يمكنه ريط مستهدف محدد لحث تخطي الإكسونات في جين الديستروفين البشري؛ حيث يشتمل الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ على
متوالية من القواعد متممة لمنطقة الإكسون 51 المستهدفة للديستروفين ‎MRNA‏ الأولي الذي يُطلق
عليه موقع تلدين؛ و
ببتيد مخترق للخلية ‎(CPP)‏ مترافق مع الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ بواسطة شق رابط.
في بعض التجسيدات»؛ يكون موقع التلدين ‎Ble‏ عن (66+95+)151/8.
0 في بعض التجسيدات؛ يتم ربط قواعد الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ ببنيات حلقات مورفولينو فوسفور تقوم بريط إنتروجين مورفولينو لبنية حلقة واحدة بكريون خارج الحلقة 5 "لبنية حلقة متجاورة. في تجسيدات معينة؛ يكون الببتيد المخترق للخلية ‎Ble‏ عن ست وحدات أرجينين ‎(RE)‏ ‏ويكون الشق الرابط ‎Ble‏ عن جليسين. في بعض التجسيدات؛ يشتمل الأوليجومر المضاد لاتجاه
5 النسخ على متوالية من القواعد يُطلق عليها المتوالية رقم:1. في عدة جوانب»؛ يوفر الكشف مترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ يمكنها أن تكون ‎Gy‏ ‏للصيغة (ا):
: ‎OY Nu‏ ‎N‏ ‎od von,‏ } ‎Nu 5‏ 5 1 ‎N‏ ‏سات ‏28 0 ‎Y Nu 3‏ [ ‎N‏ ‎A‏ ‎_x‏ ‏0 لاوط ‎NH‏ 1 = 0 0( أو ملح مقبول صيدليًا ‎(die‏ حيث: تكون كل ‎Ble NU‏ عن قاعدة نووية يتم أخذها لتكوين متوالية استهداف؛ و تكون 1 ‎Ble‏ عن شق يتم اختياره من:
— 1 0 — 0 0 0 NH, HO 3
J
‏1ج‎ ‎| N
O——P——N (CH3)o _
OH | ME
L oY ¢ ‏صورة رجا ؛صورة ¢ وصورة‎ 7 2 ‏الكيل؛‎ C1-C6 ‏عن‎ le R1 ‏تكون‎ ‎£ 2 ‏الأولي‎ MRNA ‏حيث تكون متوالية الاستهداف متممة لموقع تلدين الإكسون 51 في ديستروفين‎ .151/8)+66+95( ‏الذي يُطلق عليه‎ ‏ع‎ ~ (IV) ‏يوفر الكشف مترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ بالصيغة‎ AT ‏في جانب‎ 5 ‏صورة‎ ‏قي + * حي حي انه‎ tg: Ch ald ey ‏فاصل ج فاصل ب فاصل أ‎
Ne 3 8 1,
RN ‏ل سي كي اي اب‎ >. Sey PEN - ‏بحري‎ PE 3 RE Lt 0 i * Laon i 3 ho gl ~ x 8 ‏الإببال‎ TY ory ‏لون‎ ‏نا مان د‎ 3 i 3 0 “> ‏ار يحي اد د تكو "م"‎ 8 SEE Pe
LE ‏رم‎ ١ ‏ياي ا‎ 7 afd PU ‏ا ات اي‎ > yf NE I I Ch ‏ب‎ TI To 0 3 \ > ‏أن ريا‎ 3 i fo 3 i y
SRLS ITLL TL ‏بم مشر‎
NET ‏ا - الح ب 5 0 يب الا هد دمن الى ات ب‎ ٍّ ّ YT 1 0 Te his ta ou EN 4 5 Pa on 3 wi. ‏ب‎ 1 ّّ ‏ل" ل ا بم الح بخص الك‎ bo ‏ليك‎ br” ‏وه ل ري‎ ta _— an ‏د‎ 3 ¥ “ T § 2 ‏مط‎ ry 3 etn, ‏ب‎ ‎0 3 5 ‏ب الاب‎ 5 ony fo, + > ‏ل ا‎ A ‏يج ٍ حم 4 مج‎ [RE ‏ألا‎ 3 a . § ‏ب‎ J ME 8
IB EA jp 1 ‏اليه لمعا‎ haa ‏ل‎ 8 ‏ب‎ T 3 Lr ag Uy Ha ) ‏ا ايسايس‎ 1 i sy . SN nS a ‏يفن‎ A
SR ‏ل لا‎ : FH . FS 3 3 FT r 1 RNC . 1 re ‏اي بحي‎ TYY SNE 4 ‏ب‎ <> : Bn boa + agen SL
Serf et 5 ‏مح‎ 5 ED 24 vo > ‏الا عا‎ ‏ناي ا 7 ا انح‎ ho, 08
NEY YY Try !
N 3 ‏ا‎ . ef - ‏تلم م ا‎ ‏اا‎ =, Tan FE PE FT
Foe Pg AT
HEE od hag iF 8 he ‏ما = ب‎ 3 HE fae ES din ‏الى‎ ‎= ‏بذ لطم يحل‎ i 4 ‏ين رخ : ا‎ > N 5 ٍ ‏ميا م‎ 2: 1 ENA SNS at
NOY Cr RG UY 2 i ‏فاصل ب فاصل أ‎ a ‏فاصل‎ ‎(IV)
أو ملح مقبول صيدليًا منه. في ‎cls‏ آخرء ‎jig‏ الكشف مترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ بالصيغة ‎(IVA)‏ ‏صورة ‎fen il‏ :ات الات 2 ٌ :ل ‎LY dah‏ م 2 ‎J Pea TE CT‏ خم - إل هام ‎ed oy Ea a‏ ~ هدجا ‎ih Li > tea)‏ 5 3 ا 18 ‎o or ! NF ~‏ ; 7 م ‎ee‏ الب ‎Nee ee‏ اير ا الب 1 ‎ud‏ ‎Vlei‏ اي ا ا ال ام رخا ‎TT tJ +7 +3 0‏ د م ‎LC Ye‏ ب ‎Uy wh Coa ee Nop Ge‏ ‎LT TL PEL ed I‏ بحس ‎SYR‏ ‎NY To 1 3‏ ل ‎i Nor xr‏ 0 ‎١‏ كن ل سي ات »ا : ل ل ‎Tk a 2 AE‏ 5 "1 الاي ب ‎i‏ ‎LO‏ ىس الب ته ‎Ym Te ET‏ ةا هعم ‎SRL‏ ‎NYY > i A El N 3 Band frit, Hook Si rr‏ ‎TL A ae‏ 6 الى ف اللا ‎A‏ ‎RUE EY TT‏ حول( ‎NOT ek Ny Ta 0 7 gt .‏ > ا 8 هام ‎A‏ ب" ياد الخ ‎A, . SN i‏ ب ‎if Noetr i Nd ’ ry | op‏ ‎Ry 0 ld‏ ين ري 1 يد ا م ‎“od‏ ‎ord TY‏ الاب ‎wd fo a oi‏ ; ‎SY‏ ا سخ ‎RE oe EE‏ تي امه يلي ‎FEE‏ با ‎Ra‏ ‎Cre‏ بحا بار ‎i : a ’ ay‏ الفاصل ‎a‏ الفاصل ب الفاصل أ ‎(IVA) 5‏ فى جانب آخرء يوفر الكشف تركيبات صيدلية تتضمن مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ ‎casi) lad‏ ومادة حاملة مقبولة صيدليًا . في بعض التجسيدات ¢ تكون المادة الحاملة المقبولة صيدليًا عبارة عن محلول ملحي مركز يتضمن محلول فوسفاتي منظم . \ . م « ‎Tw “on‏ ~ ب ‎1a a on wa‏ > في جانب أ ‎A‏ ء يوفر الكشف طريقة لعلاج الحَثل ‎(shall‏ لدوشين ‎(D M D)‏ في خاضع للعلاج 0 1 بحاجة إليها حيث يكون لدى الخاضع للعلاج طفرة جين الديستروفين مُعرْضًا لتخطى ا لإكسون 1 5 3 حيث تشتمل الطريقة على إعطاء الخاضع للعلاج مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎Lad g‏ للكشف. كما يتعلق الكشف باستخدام مترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ ‎Gy‏ للكشف؛
— 2 1 — لتصنيع دواء لعلاج ‎FA)‏ العَضَلِي لدوشين ‎(DMD)‏ في خاضع للعلاج بحاجة إليه حيث يكون لدى الخاضع للعلاج طفرة جين الديستروفين مُعرْضًا لتخطي الإكسون 51. فى جانب ‎AT‏ » يوفر الكشف طريقة لاستعادة إطار قراءة ‎MRNA‏ لحث إنتاج الديستروفين فى خاضع للعلاج له طفرة جين الديستروفين مُعرْضًا لتخطي الإكسون 51 حيث تشتمل الطريقة على إعطاء الخاضع للعلاج مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎Gag‏ للكشف. فى جانب ‎AT‏ ؛» يوفر الكشف طريقة لاستبعاد الإكسون 51 من ديستروفين ‎MRNA‏ أولى أثناء ‎MRNA dallas‏ فى خاضع للعلاج له طفرة جين الديستروفين مُعرْضًا لتخطي الإكسون 51 حيث تشتمل الطريقة على إعطاء الخاضع للعلاج مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎Gg‏ للكشف. فى جانب ‎AT‏ ؛» يوفر الكشف طريقة لربط الإكسون 51 لديستروفين ‎MRNA‏ الأولي في خاضع للعلاج له طفرة جين الديستروفين مُعرْضًا لتخطي ا لإكسون 51 ¢ ‎Cua‏ تشتمل الطريقة على إعطاء الخاضع للعلاج مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎Gg‏ للكشضف . في جانب آخرء يوفر الكشف مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎Gg‏ للكشف الوارد بهذه الوثيقة لاستخدامه للعلاج. في تجسيدات معينة؛ يوفر ‎CRIS‏ مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎Bag‏ ‏للكشف لاستخدامه في علاج ‎JA‏ العَضَلِيٌ لدوشين. في تجسيدات معينة؛ يوفر الكشف مترافق 5 أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎Gg‏ للكشف لاستخدامه في تصنيع دواء لاستخدامه في العلاج. في تجسيدات معينة؛ يوفر الكشف مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎Gg‏ للكشف لاستخدامه في 3 تصنيع علاج لعلاج ‎Jas‏ الْعَصَ نعَضْلِيٍ لدوشين . في جانب ‎AT‏ ¢ يورد الكشف كذلك أطقم لعلاج ‎(Bad)‏ العَضَلِيَ لدوشين ‎(DMD)‏ في خاضع للعلاج بحاجة إليها حيث يكون لدى الخاضع للعلاج طفرة جين الديستروفين مُعرْضًا لتخطي 0 الإكسون 51 حيث تشتمل الأطقم على على الأقل مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎lady‏ ‏للكشف الحالى؛ ‎ili‏ فى حاوية مناسبة بها تعليمات لاستخدامها. سيتم فهم هذه الأغراض والسمات وغيرها على نحو أتم عند قراءة الوصف التفصيلي للكشف جنبًا إلى جنب مع الأشكال. شرح مختصر للرسومات
— 3 1 — الشكل 1 وصف لأحد قطاعات ديستروفين ‎MRNA‏ أولي عادي 5 ‎MRNA‏ ناضج. الشكل 2 وصف لأحد قطاعات ديستروفين ‎MRNA‏ أولي غير عادي (على سبيل المثال ‎(DMD‏ ‏وديستروفين ناتج غير وظيفي وغير مستقر. الشكل 3 وصف لإيتيبليرسين ¢ مصمّم لتخطى الإكسون 1 ولاستعادة القراءة ‎I"‏ لإطارية الداخلية" ل ‎MRNA 5‏ أولي لإنتاج ديستروفين محذوف داخليًا. الشكل 4 يوفر مخطط أعمدة للنسبة المئوية لتخطى الإكسون 51 فى خلايا عضلية بشرية متمايزة بواسطة ‎PMO‏ رقم 1 ‎PPMO‏ رقم 1 بتركيزات متنوعة بعد 96 ‎del‏ من العلاج؛ حسب قياس ‎RT-PCR‏ ‏الأشكال 35-15 توفر صورًا توضيحية لتحليل بقعة وبسترن يقيس بروتين ديستروفين في العضلة 0 رباعية الرؤوس لفئران ‎mdx‏ معالج ب ‎(PMO4225) PMO‏ أو ‎(PPMO4225) PPMO‏ لمختلف النقاط الزمنية [7 أيام )15(« 30 ‎Lass‏ (5كب)؛ 60 ‎Gs:‏ (5ج)؛ و90 ‎Ls‏ (كد)]. يوفر الشكل 16 ‎Glad Lily Lay‏ يصف النسبة المئوية للديستروفين من النوع غير المعالج والذي يستحثه ‎(PMO4225) PMO‏ أو ‎(PPMO4225) PPMO‏ في العضلة رباعية الرؤوس لفئران ‎mdx‏ بعد 90 ‎Lg‏ من الحقن ¢ حسب تحديد تحليل بفعة ويسترن . يوفر الشكل 6ب رسمًا ‎Ghd Wily‏ يصف النسبة المئوية لإكسون 23 للتخطي والذي يستحثه ‎(PMO4225) PMO‏ أو ‎(PPMO4225) PPMO‏ في العضلة رباعية الرؤوس لفئران ‎mx‏ ‏بعد 90 يومًا من ‎all‏ حسب تحديد ‎RT-PCR‏ ‏توفر الأشكال 7-17د صورًا توضيحية لتحليل بقعة ويسترن يقيس بروتين ديستروفين في الحجاب الحاجز لفئران ‎mdx‏ معالج ب ‎(PMO4225) PMO‏ أو ‎PPMO‏ (001/04225) لمختلف 0 النقاط الزمنية [7 أيام (17)» 30 يومًا (7ب)» 60 ‎as‏ (7ج) و90 يومًا (7د)]. الشكل 18 يوفر ‎Glad Lily Lowy‏ يصف النسبة المئوية للديستروفين من النوع غير المعالج والذي يستحثه ‎(PMO4225) PMO‏ أو ‎(PPMO4225) PPMO‏ في الحجاب الحاجز ‎mdx oll‏ بعد 90 يومًا من الحقن» حسب تحديد تحليل بقعة ويسترن.
— 4 1 — يوفر الشكل 18 ‎Lily Law,‏ خطيًا يصف النسبة المئوية لإكسون 23 للتخطى والذي يستحثه ‎PMO‏ ‎(PMO4225)‏ أو ‎(PPMO4225) PPMO‏ في الحجاب الحاجز ‎max hdl‏ بعد 90 ‎Lesa‏ من الحقن» حسب تحديد ‎RT-PCR‏ ‏توفر الأشكال 9-19 ‎gem‏ توضيحية لتحليل بقعة وبسترن يقيس بروتين ديستروفين في قلب فئران ‎mdx 5‏ معالج ب ‎(PMO4225) PMO‏ أو ‎(PPMO4225) PPMO‏ لمختلف النقاط الزمنية على مدار ]7 أيام )19(« 30 ‎Lg‏ (9ب)؛ 60 ‎Lg‏ (9ج) و90 ‎Lg‏ (9د)] . يوفر الشكل 110 ‎Wily Law‏ خطيًا يصف النسبة المئوية للديستروفين من النوع غير المعالج والذي يستحثه ‎(PMO4225) PMO‏ أو ‎(PPMO4225) PPMO‏ في قلب ‎mdx ols‏ بعد 90 ‎Ls‏ ‏من الحقن؛ حسب تحديد تحليل بقعة ويسترن. يوفر الشكل 0 1[ب رسمًا بيانيًا خطيًا يصف النسبة المئوية لإكسون 23 للتخطي والذي يستحثه ‎(PMO4225) PMO‏ أو ‎(PPMO4225) PPMO‏ في قلب فتران ‎mdx‏ بعد 90 يومًا من الحقن» حسب تحديد ‎RT-PCR‏ ‏يوفر الشكل 11 تحليل الكيمياء الهيستولوجية المناعية الذي يوضح الديستروفين في ‎MAX‏ العضلة ‎.(PPM0O4225) 5‏ يوفر الشكل 12 رسومات بيانية خطية توضح النسبة المئوية لتخطي الإكسون 51 في معالجة الأوليات غير البشرية ب ‎PMO‏ رقم 1 أو ‎PPMO‏ رقم 1 أسبوعيًا لمدة أربعة أسابيع بجرعات مختلفة. تم قياس النسبة المئوية لتخطي الإكسون 51 من عينات عضلات للحجاب الحاجز (الأيسر) وعضلة رباعية الرؤوس (اليمنى)؛ حسب تحديد ‎RT-PCR‏ ‏0 يوفر الشكل 13 رسومات بيانية خطية توضح النسبة المئوية لتخطي الإكسون 51 في معالجة الأوليات غير البشرية ب ‎PMO‏ رقم 1 أو ‎PPMO‏ رقم 1 أسبوعيًا لمدة أربعة أسابيع بجرعات مختلفة. تم قياس النسبة المئوية لتخطي الإكسون 51 من عينات عضلات القلب (الأيسر) والإثنا عشر (الأيمن)؛ حسب تحديد ‎RT-PCR‏
— 5 1 — يوفر الشكل 14 رسومات بيانية خطية توضح النسبة المئوية لتخطي الإكسون 51 في معالجة الأوليات غير البشرية ب ‎PMO‏ رقم 1 أو ‎PPMO‏ رقم 1 أسبوعيًا لمدة أربعة أسابيع بجرعات مختلفة. تم قياس النسبة المئوية لتخطي الإكسون 51 من عينات عضلات ذات الرأسين (اليسرى) والعضلة الدالية (اليمنى)؛ حسب تحديد ‎RT-PCR‏ ‏5 يوفر الشكل 15 رسومات بيانية خطية توضح النسبة المئوية لتخطي الإكسون 51 في معالجة الأوليات غير البشرية ب ‎PMO‏ رقم 1 أو ‎PPMO‏ رقم 1 أسبوعيًا لمدة أربعة أسابيع بجرعات مختلفة. تم قياس النسبة المئوية لتخطي الإكسون 51 من عينات عضلات المَريء (الأيسر) والأورطى (الأيمن)؛ حسب تحديد ‎RT-PCR‏ ‏توفر الأشكال 16أ-ب صورًا توضيحية لتحليل بقعة ويسترن يقيس بروتين ديستروفين في قلب ‎mdx oh 0‏ معالج ب 1/0 ‎(PMO4225)‏ أو ‎(PPMO4225) PPMO‏ بجرعات مختلفة: 40 مجم/كجم؛ 80 مجم/كجم؛ و120 مجم/كجم. يوفر الشكل 17 مخطط أعمدة يصف النسبة المئوية للديستروفين من النوع غير المعالج والذي يستحثه ‎(PMO4225) PMO‏ أو ‎(PPMO4225) PPMO‏ في قلب فئران ‎MAX‏ حسب تحديد تحليل بفعة ويسترن بعد 30 ‎Lg‏ من الحقن بجرعات مختلفة: 40 مجم/كجم « 80 مجم/كجم 1 و120 مجم/كجم. توفر الأشكال 118 صورًا توضيحية لتحليل بقعة ويسترن يقيس بروتين ديستروفين في الحجاب الحاجز لفئران ‎mdx‏ معالج ب ‎(PMO4225) PMO‏ أو ‎(PPMO4225) PPMO‏ بجرعات مختلفة 40 مجم/كجم « 80 مجم/كجم ¢ و20 1 مجم/كجم . يوفر الشكل 19 مخطط أعمدة يصف النسبة المئوية للديستروفين من النوع غير المعالج والذي 0 يستحثه ‎(PMO4225) PMO‏ أو ‎(PPMO4225) PPMO‏ في الحجاب الحاجز لفئران ‎mdx‏ ‏حسب تحديد تحليل بقعة ويسترن بعد 30 ‎gr‏ من الحقن بجرعات مختلفة: 40 مجم/كجم» 80 مجم/كجم ¢ و20 1 مجم/كجم .
— 6 1 — توفر الأشكال 120 صورًا توضيحية لتحليل بقعة ويسترن يقيس بروتين ديستروفين في العضلة رباعية الرؤوس لفثران ‎mdX‏ معالج ب ‎(PMO4225) PMO‏ أو ‎(PPMO4225) PPMO‏ بجرعات مختلفة: 40 مجم/كجم « 80 مجم/كجم ‘ و20 1 مجم/كجم . يوفر الشكل 21 مخطط أعمدة يصف النسبة المئوية للديستروفين من النوع غير المعالج والذي يستحثه ‎(PMO4225) PMO‏ أو ‎(PPMO4225) PPMO‏ في العضلة رباعية الرؤوس لفئران ‎M dx‏ حسب تحديد تحليل بفعة ويسترن يعد 0 3 ‎Lg‏ من الحقن بجرعات مختلفة: 40 مجم/كجم 80 مجم/كجم؛ و20 1 مجم/كجم ‎٠‏ ‏يوفر الشكل 22 مخططات أعمدة توضح النسبة المئوية لتخطي الإكسون 51 في أوليات غير بشرية معالجة بجرعة فردية تبلغ 40 مجم/كجم من ‎PPMO‏ رقم 1 بعد 30 60 ‎Lg‏ من الحقن . 0 تتم قياس النسبة المئوية ‎adil‏ الإكسون 51 من عينات عضلات العضلة رباعية الرؤوس؛ الحجاب الحاجزء ‎call‏ وجهاز ‎(Gl‏ حسب تحديد ‎RT-PCR‏ ‏يوفر الشكل 23 دورات الإقران التي تجريها الطريقة ب لتخليق ‎PMO‏ ‏يوفر الشكل 24 تحليل الكيمياء الهيستولوجية المناعية الذي يوضح الديستروفين ولامينين في الحجاب الحاجز وقلب فأر ‎max‏ والذي يستحثه ‎(PPMO4225) PPMO‏ مقارنة بمحلول ملحي 5 مركز في فثران ‎Olds mdx‏ غير معالجة. يوفر الشكل 25 مخطط أعمدة للنسبة المئوية لتخطي الإكسون 51 في أرومات عضلية بشرية صحيحة بواسطة ‎PMO‏ رقم 1 ‎PPMO‏ رقم 1 بتركيزات متنوعة بعد 6 ساعة من العلاج؛ حسب قياس ‎RT-PCR‏ تشير أعمدة الأخطاء إلى متوسط الانحراف المعياري +. الشكل 26 يوفر مخطط أعمدة للنسبة المئوية لتخطي الإكسون 51 في نبيبات بشرية صحيحة بواسطة ‎PMO‏ رقم 1 ‎PPMO‏ رقم 1 بتركيزات متنوعة بعد 6 ساعة من العلاج؛ حسب قياس ‎RT-PCR‏ تشير أعمدة الأخطاء إلى متوسط الانحراف المعياري +. الوصف التفصيلي:
تتعلق التجسيدات الخاصة بالكشف الحالي بصفة عامة بمترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ محسنة؛ وطرق لاستخدامها؛ تم تصميمها بشكل خاص ‎all‏ على تخطي الإكسون في جين الديستروفين البشري. يلعب الديستروفين دورًا حيويًا في وظيفة العضلات؛ وبتم تمييز الأمراض المتنوعة ذات الصلة بالعضلات بواسطة صور مطفرة من هذا الجين. ومن ثَم؛ في تجسيدات معينة؛ تحث مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ المحسنة الموصوفة هنا على تخطي
الإكسون في صور مطفرة من جين الديستروفين البشري؛ مثل جينات الديستروفين المطفرة الموجودة في ‎Load) Fal)‏ لدوشين ‎(DMD)‏ والحَتّل العَضَلِيٌ لبيكر (810/0). بسبب أحداث ‎MRNA Jas‏ الشاذة الناتجة بواسطة الطفرات؛ تعبر جينات الديستروفين البشري المطفرة هذه إما عن بروتين ديستروفين معيب أو لا تعبر عن ديستروفين قابل للقياس على
0 الإطلاق؛ ‎Alls‏ تؤدي إلى صور متنوعة من ‎JAY‏ العَضَلِي. لعلاج هذه الحالة؛ تهجن مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بالكشف الحالي مناطق مختارة من ‎MRNA‏ معالج مسبقًا خاص بجين ديستروفين بشري مطفر؛ تحث على تخطي الإكسون والجدل التفاضلي في ‎MRNA‏ الديستروفين المجدول على نحو شاذء وبالتالي تسمح لخلايا العضلات بإنتاج نسخة ‎MRNA‏ تقوم بتشفير بروتين ديستروفين وظيفي. في تجسيدات معينة؛ ليس بالضرورة أن يكون
5 بروتين الديستروفين الناتج هو الصورة "غير المعالجة" من الديستروفين؛ ولكن بدلاً من ذلك يكون ‎Ble‏ عن صورة مقتطعة؛ ولكنها وظيفية من الديستروفين. عن طريق زيادة مستويات بروتين الديستروفين الوظيفي في خلايا العضلات؛ تكون هذه التجسيدات والتجسيدات ذات الصلة مفيدة في الوقاية من وعلاج ‎lial Bal‏ بخاصة تلك الصور من ‎fis‏ العَضَلِيَ؛ ‎DMD (Jie‏ و81/0؛ التي يتم تمييزها بواسطة التعبير ‎(Shs‏ عن بروتينات
0 الديستروفين المعيبة بسبب جدل ‎MRNA‏ الشاذ. توفر مترافقات الأوليجومرات النوعية مضادة لاتجاه النسخ الموصوفة هنا بشكل إضافي استهداف نوعي لديستروفين-إكسون محسن عن الأوليجومرات الأخرى؛ وبالتالي توفر فوائد مهمة وعملية مقارنة بالطرق البديلة لعلاج الصور ذات الصلة من ‎a)‏ العَضَلِي. من ثَم» يتعلق ‎CRASH‏ بمترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ تشتمل على:
— 8 1 — أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ يبلغ طوله 30 وحدة فرعية يمكنه ريط مستهدف محدد لحث تخطي الإكسونات في جين الديستروفين البشري؛ حيث يشتمل الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ على متوالية من القواعد متممة لمنطقة الإكسون 51 المستهدفة للديستروفين ‎IY MRNA‏ الذي يُطلق عليه موقع تلدين؛ و ببتيد مخترق للخلية ‎(CPP)‏ مترافق مع الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ بواسطة شق رابط.
في بعض التجسيدات؛ يكون موقع التلدين ‎Ble‏ عن (66+95+)1518. في بعض التجسيدات؛ يتم ربط قواعد الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ ببنيات حلقات مورفولينو فوسفور تقوم بريط إنتروجين مورفولينو لبنية حلقة واحدة بكريون خارج الحلقة 5 "لبنية حلقة
0 متجاورة. في تجسيدات معينة؛ يكون الببتيد المخترق للخلية عبارة عن ‎RO‏ ويكون الشق الرابط ‎Ble‏ عن جليسين. في بعض التجسيدات؛ يشتمل الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ على متوالية قواعد يُطلق عليها المتوالية رقم:1؛ حيث تكون كل قاعدة ثايمين (1) اختياربًا ‎Ble‏ عن قاعدة يوراسيل (لا). ما لم يتم التعريف بما يُخالف ذلك؛ يكون لكل المصطلحات التقنية والعلمية المستخدمة هنا نفس
5 المعنى كما يُدرك على نحو شائع هؤلاء من ذوي المهارة العادية في المجال الذي ينتمي إليه الكشف. بالرغم من أنه يمكن استخدام أية طرق ومواد مشابهة أو مكافئة لتلك الموصوفة هنا في تطبيق أو اختبار الكشف الحالى؛ يتم وصف الطرق والمواد المفضلة. للأغراض الخاصة بالكشف الحالى» يتم ‎Lad‏ يلى تعريف المصطلحات التالية. 1 "- التعريفات
يُعنى 2 ‎"lea‏ كمية؛ مستوى ¢ ‎ce (dad‏ تكرار « نسبة مثوية؛ بعد ؛ حجم؛ مقدار © ‎Og‏ أو طول يتنوع بمقدار يصل إلى 30 25 20 15 10 9 8 7 6»؛ 5 4 3 2 أو %1 بالسنبة لكمية مرجعية؛ مستوى؛ قيمة؛ عدد؛ تكرارء نسبة مثوية؛ بعد ؛ حجم « مقدارء وزن أو طول.
يشير المصطلح ‎US‏ على النحو المستخدم بهذه الوثيقة؛ ما لم يُدّر غير ذلك؛ إلى هيدروكريون مشبعة مستقيمة أو متفرعة. في تجسيدات معينة؛ تكون مجموعة الألكيل ‎Ble‏ عن هيدروكريون أولية؛ أو ثانوية؛ أو ثالثية. في تجسيدات معينة؛ تتضمن مجموعة الألكيل واحدة إلى عشر ذرات كربون؛ أي؛ 1© إلى 010 ألكيل. في تجسيدات معينة؛ تتضمن مجموعة الألكيل ‎Bandy‏ إلى ست ذرات كربون؛ أي؛ ‎CL‏ إلى 66 ألكيل. في تجسيدات معينة؛ يتم اختيار مجموعة الألكيل من المجموعة المشتملة على ‎(CCI3 073 (Lin‏ 0702 0726 ؛ ‎«CH2CF3 (i‏ 3 . بروبيل» أيزو ‎«dug‏ بيوتيل؛ أيزو بيوتيل» سيك- بيوتيل» 1- بيوتيل؛ بنتيل؛ أيزو ‎Jim‏ نيو بنتيل» هكسيل؛ أيزو هكسيل؛ 3-ميثيل بنتيل» 2 2-داي ميثيل بيوتيل» و2 3-داي ميثيل بيوتيل. يتضمن المصطلح مجموعات ألكيل بها أو ليس بها استبدال؛ بما في ذلك مجموعات 0 ألكيل معالجة بالهالوجين. في تجسيدات معينة؛ تكون مجموعة الألكيل ‎Ble‏ عن مجموعة ألكيل ‎dalle‏ بالفلور. يتم اختيار الأمثلة غير الحصرية للشقوق التي يتم استبدال مجموعة الألكيل بها من المجموعة المشتملة على هالوجين (فلورو؛ كلورو؛ برومو؛ أو يودو)؛ هيدروكسيل. أمينو؛ ألكيل ‎«snd‏ أريل أمينو؛ ألكوكسيء أريل أوكسي؛ نيتروء ‎gil‏ حمض سلفونيك؛ سلفات؛ حمض فوسفوريك؛ فوسفات؛ أو فوسفونات؛ محمية كانت أو غير محمية حسب الضرورة؛ وحسبما هو 5 معروف لأولئك المتمرسين في المجال؛ على سبيل المثال؛ حسبما ورد في ‎Greene, et al.,‏ ‎Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second‏ ‎«Edition, 1991‏ والتي أدرجت ضمن المراجع يُقصد أن يتضمن "مُعرّضًا لتخطي الإكسون 51" كما يُستخدم هنا فيما يتعلق بخاضع للعلاج أو مريض الخاضعين للعلاج والمرضى الذي لديهم واحدة أو أكثر من الطفرات في جين الديستروفين 0 الذيء؛ بدون تخطي الإكسون 51 الخاص بديستروفين ‎MRNA‏ الأولي؛ يتسبب في أن يكون إطار القراءة خارج الإطار وبالتالي مقاطعة التحوّر الوراثي ل ‎MRNA‏ الأولي مما يؤدي إلى عدم قدرة الخاضع للعلاج أو المريض على إنتاج الديستروفين وظيفي أوشبه وظيفي. تتضمن الأمثلة على الطفرات في جين الديستروفين الذي يكون مُعرْضًا لتخطي الإكسون 51؛ على سبيل المثال» طفرات في الإكسونات 50-45 50-47 50-48 50-49« 50« 52؛ و63-52 (قاعدة 5 بيانات طفرة ‎Jal‏ العَضَلِي لدوشين لليدين ) ‎Leiden Duchenne muscular dystrophy‏
‎.((mutation database, Leiden University Medical Center, The Netherlands‏ يمكن لذي المهارة في المجال تحديد ما إذا كان مريض لديه طفرة في جين الديستروفين المُعرّضًا لتخطي الإكسونالإكسونات (انظر؛ على سبيل المثال» ‎Aartsma-Rus et al. (2009) Hum‏ ‎¢«Gurvich et al., Hum Mutat. 2009 ¢«Mutat. 30:293-299‏ 633-640 (30)4؛ ‎.(-and Fletcher et al. (2010) Molecular Therapy 18(6) 1218-1223 5‏ يشير المصطلح 'أوليجومر” على النحو المستخدم بهذه الوثيقة إلى متوالية وحدات فرعية متصلة بواسطة وصلات وحدات فرعية متداخلة. في أمثلة معينة؛ يتم استخدام المصطلح "أوليجومر" للإشارة إلى "أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ”. ‎Lad‏ يتعلق ب "أوليجومرات مضادة لاتجاه ‎gall‏ ‏تتألف كل ‎sang‏ فرعية من: (1) سكر ريبوز أو مشتق منه؛ و(2) قاعدة نووية مرتبطة به؛ بحيث 0 يُكوّن ترتيب الأشطار المتزاوجة مع القاعدة متوالية قاعدة تكون متممة لمتوالية مستهدفة في حمض نووي (نمطيًا ‎(RNA‏ بواسطة إزدواج القاعدة ا81500-60110//ا؛ لتكوين مضاعف متغاير من حمض نووي :أوليجومر داخل المتوالية المستهدفة. بشرط أن تكون الوحدة الفرعية أو وصلات وحدات فرعية متداخلة أو كلاهما لا يحدث بشكل طبيعي. في تجسيدات معينة؛ يكون الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ هو ‎.PMO‏ في تجسيدات أخرى؛ يكون الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ هو 0-2 -ميثيل فوسفورو ثيوات. في تجسيدات ‎coal‏ يكون الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ الخاص بالكشف هو حمض نووي لببتيد ‎(PNA)‏ حمض نووي مقفل ‎(LNA)‏ أو حمض نووي مجسر ‎(BNA)‏ مثل حمض نووي مجسر ب 4:0-2'-0-إيثيلين ‎(ENA)‏ تم وصف تجسيدات نموذجية إضافية. يشير المصطلحان "مكمل" و'تكامل" إلى اثنين أو أكثر من الأوليجومرات (أي يشتمل كل أوليجومر 0 على متوالية قاعدة نووية) يرتبطان ‎Gg le‏ لقواعد إزدواج كريك-واتسون ‎(Watson—Crick)‏ ‏على سبيل المثال» تكون متوالية قاعدة نووية ‎(P3705) T-G-A"‏ متممة لمتوالية قاعدة نووية:-/ ‎C-T‏ (103” 75). قد تكون "التكامل الجزئي" التي يتم فيها مطابقة أقل من جميع قواعد نووية متوالية قاعدة نووية بعينها مع متوالية قاعدة نووية الأخرى ‎By‏ لقوانين إزدواج القواعد. على سبيل المثال» في بعض التجسيدات؛ قد تبلغ التكامل بين متوالية قاعدة نووية ما ومتوالية قاعدة نووية 5 أخرى حوالي ‎NTO‏ حوالي ‎«NTS‏ حوالي 9080؛ حوالي 9085 حوالي 0 أو حوالي 7095.
أو قد يكون هناك تكامل "كامل" أو "تام" )%100( بين متوالية قاعدة نووية ومتوالية قاعدة نووية أخرى في مثال ‎AT‏ يكون لدرجة التكامل بين متواليات قواعد النووية تأثيرات كبيرة على ‎etd‏ ‏وقوة التهجين بين المتواليات. يتم استخدام المصطلحين 'مقدار فعال” و 'مقدار فعال علاجيًا" إلى في هذه الوثيقة بدلا من بعضهما البعض للإشارة إلى مقدار من مركب ‎(ade‏ مثل أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ؛ مُعطى إلى خاضع للعلاج ثديي» إما في صورة جرعة فردية أو كجزء من سلسلة من الجرعات؛ تكون فعالة لإنتاج تأثير علاجي مطلوب. لأوليجومر مضاد لاتجاه النسخ؛ يتم تحقيق هذا التأثير ‎Glas‏ عن طريق تثبيط التحر الوراثي أو معالجة الجدل الطبيعي لمتوالية هدف مختارة؛ أو إنتاج مقدار ذي مغزى إكلينيكيًا من الديستروفين 0 (أهمية إحصائية). في بعض التجسيدات؛ يبلغ المقدار الفعال على الأقل 10 مجم/كجم أو 20 مجم/كجم من تركيبة متضمنة أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ لفترة زمنية لعلاج الخاضع للعلاج. في بعض التجسيدات؛ يبلغ مقدار فعال على الأقل 20 مجم/كجم من تركيبة متضمنة أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ لزيادة عدد ألياف الديستروفين الإيجابية في خاضع للعلاج وصؤولاً إلى على الأقل 9620 من 5 الطبيعي. في تجسيدات معينة؛ يبلغ مقدار فعال على الأقل 10 مجم/كجم أو 20 مجم/كجم من تركيبة متضمنة أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ لتثبيت؛ الحفاظ على؛ أو تحسين المسافة ‎Hos‏ على الأقدام من عيب 9620؛ على سبيل المثال في 6 410/1 في مربض؛, بالنسبة لنظير مُعافى. في تجسيدات متنوعة؛ يبلغ مقدار فعال على الأقل من حوالي 10 مجم/كجم/حوالي 30 مجم/كجم؛ على الأقل 20 مجم/كجم إلى حوالي 30 مجم/كجم؛ من حوالي 25 مجم/كجم إلى حوالي 30 0 مجم/كجم؛ أو من حوالي 30 مجم/كجم إلى حوالي 50 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يبلغ مقدار فعال حوالي 10 مجم/كجم/حوالي 20 مجم/كجم؛ حوالي 30 مجم/كجم أو حوالي 50 مجم/كجم. في جانب آخرء يبلغ المقدار الفعال على ‎Jom SHI‏ 10 مجم/كجم؛ حوالي 20 مجم/كجم؛ حوالي 25 مجم/كجم؛ حوالي 30 مجم/كجم؛ أو من حوالي 30 مجم/كجم إلى حوالي مجم/كجم؛ لمدة على الأقل 24 أسبوع؛ على الأقل 36 أسبوع؛ أو على الأقل 48 أسبوع؛ ‎July 5‏ لزيادة عدد ألياف الديستروفين الإيجابية في خاضع للعلاج وصولاً إلى على الأقل 9620؛
‎isa‏ 9630؛ حوالي %40 ‎sa‏ 9650؛ حوالي 9660» ‎isa‏ 9670 حوالي 9680» حوالي 0 حوالي 1695 من الطبيعي؛ وتثبيت أو تحسين المسافة سيرًا على الأقدام من عيب 9620؛ على سبيل المثال في 6 ‎MWT‏ في المريض بالنسبة لنظير مُعافى. في بعض التجسيدات؛ يزيد العلاج من عدد ألياف الديستروفين الإيجابية وصولاً إلى 9660-20؛ أو 9650-30 من الطبيعي في المريض. تشير "عزز” أو " تعزيز” أو 'يزيد' أو 'زيادة» أو 'يحفز” أو 'تحفيز" بصفة عامة إلى قدرة واحد أو أكثر من مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ أو التركيبات الصيدلية على إنتاج أو التسبب في استجابة فسيولوجية أكبر ‎gl)‏ التأثيرات التالية) في خلية أو خاضع للعلاج؛ مقارنة بالاستجابة الناتجة بواسطة إما عدم وجود مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ أو مركب مقارنة. 0 قد تتضمن استجابة فسيولوجية أكبر تعبيرًا متزايدًا عن صورة وظيفية من بروتين ديستروفين» أو نشاط بيولوجي ذي علاقة بالديستروفين متزايد في النسيج العضلي؛ من بين الاستجابات الأخرى الووضحة من الاستيعاب في المجال والوصف الوارد هنا. يمكن ‎Load‏ قياس وظيفة العضلات المتزايدة؛ بما في ذلك الزيادات أو التحسينات في وظيفة العضلات بمقدار حوالي 961 962؛ ‎HS Yd 3‏ 6ك ‎%T‏ %8 وى 910 911 912 913 93614 9615 5 %16 %17 %18 %19 %20 %25 %30 %35 %40 %45 950 %55« 0 %65« 9670 9675 %80 9685 9690 %95< أو 96100. يمكن أيضًا قياس النسبة المئوية الخاصة بالألياف العضلية التي تعبر عن ديستروفين وظيفي؛ بما في ذلك التعبير المتزايد عن الديستروفين بنسبة حوالي 961» 962؛ 96 9615 9616 9617 9618 9619 0 925 930 %35 940 %45 %50 %55 %60 9665 9670 9675 0 9680 9685؛ 9690 9695؛ أو 96100 من الألياف الطبيعية. على سبيل المثال؛ لقد تم إظهار أنه يمكن أن يحدث تحسين بنسبة حوالي 9640 من وظيفة العضلات إذا كان 1630-25 من الألياف يعبر عن الديستروفين (انظرء؛ على سبيل ‎DelloRusso et al, Proc Natl «Jill‏ ‎(Acad Sci USA 99: 12979-12984, 2002‏ يعتبر مقدار 'متزايد" أو 'معزز" نمطيًا هو مقدار 'مؤثر ‎Milan)‏ وقد يتضمن زيادة تبلغ امل 2ل ف 3 4 65 7 8 9 10 ‎١15 5‏ 20؛ 30؛ 40؛ 50 ضعف أو أكثر (على سبيل المثال. 500؛ 1000 ضعف) (بما في
— 3 2 — ذلك كل الأعداد الصحيحة والعلامات العشرية فيما بين وأعلى من 1)؛ على سبيل المثال» 1,5 6 ¢1,7 1,8» إلى غير ذلك) المقدار المنتج عن طريق عدم وجود مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ (عدم وجود عامل) أو مركب مقارنة ‎٠‏ ‏كما يُستخدم ‎cls‏ يشير المصطلحان 'وظيفة' و'وظيفي" وما شابه إلى وظيفة بيولوجية؛ إنزيمية؛ أو علاجية. يشير بروتين ديستروفين 'وظيفي" بصفة ‎dale‏ إلى بروتين ديستروفين له نشاط بيولوجي كافي لتقليل التحلل المتواصل للنسيج العضلي الذي يكون بخلاف ذلك مميدًا ‎Fall‏ العَضَلِي؛ نمطيًا مقارنة بالصورة المتغيرة أو ‎"mall‏ من بروتين ديستروفين الذي يكون موجودًا في خاضعين للعلاج بعينهم يعانون من ‎DMD‏ أو ‎BMD‏ في تجسيدات معينة؛ قد يحتوي بروتين ديستروفين ‎aks 0‏ على ‎Je‏ 9610» 9620» %30 9640 9650 9660 9670 9680 9690 أو 0 (متضمنة كل الأعداد الصحيحة فيما بينها) من النشاط البيولوجي المعملي أو في جسم الكائن الحي الخاص بالديستروفين من النوع غير المعالج؛ كما هو مُقاس ‎Gy‏ للتقنيات الروتينية في المجال. كمثال واحد؛ يمكن قياس النشاط ذي الصلة بالديستروفين في مزارع العضلات في المعمل ‎Bay‏ لحجم ‎CE‏ عَضَلِي» تنظيم (أو عدم انتظام) ‎AE‏ الْعَصَليَّة» نشاط القابلية للانقباض؛ 5 والتجميع الفوري لمستقبلات أسيتيل كولين (انظرء على سبيل ‎Brown et al., Journal (Jt)‏ ‎(of Cell Science. 112:209-216, 1999‏ تعتبر أيضًا النماذج الحيوانية موارد قيمة لدراسة الإمراض الخاص ‎ape‏ وتوفر وسيلة لاختبار النشاط ذي الصلة بالديستروفين. يتمثل اثنان من النماذج الحيوانية الأوسع استخدامًا للبحث الخاص ب ‎DMD‏ في ‎Laat all‏ لفأر 7 والحَتّل العَضَلِي لكلب الصيد ‎((GRMD) sal‏ كلاهما يكون ‎Wha‏ للديستروفين ‎hail)‏ ‏0 على سبيل المثال» 2003 ,165-172 :84 ‎.(Collins & Morgan, Int J Exp Pathol‏ يمكن استخدام هذه النماذج الحيوانية وغيرها لقياس النشاط الوظيفي لبروتينات الديستروفين المتنوعة. يتم تضمين صور مقتطعة من الديستروفين؛ مثل تلك الصور التي يتم إنتاجها بعد إعطاء مركبات معينة من مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ المتخطية للإكسون الخاصة بالكشف الحالى.
يشير المصطلحان "عدم التوافق” أو "حالات عدم التوافق" إلى واحدة أو أكثر من قاعدة نووية (سواء المجاورة أو المنفصلة) في متوالية قاعدة نووية أوليجومر غير متطابقة مع ‎MRNA‏ أولي مستهدف ‎Gy‏ لأحكام ازدواج القواعد. بينما تكون التتامّية المثالية مطلوية في ‎ele)‏ يمكن أن يتضمن بعض التجسيدات واحدة أو أكثر من ولكن يُفضل 6؛ 5؛ ‎ed‏ 3؛ 2؛ أو 1 من حالات عدم التوافق فيما يتعلق ب ‎MRNA‏ الأولي المستهدف. يتم تضمين التغييرات عند أي موقع داخل الأوليجومر. في تجسيدات معينة؛ تتضمن مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بالكشف التغييرات في متوالية قاعدة نووية بالقرب من تغييرات النهايات في الجزء الداخلي؛ وإن وجدت تكون نمطيًا واقعة ضمن محوالي 6؛ 5؛ 4؛ 3؛ 2؛ أو 1 من الوحدات الفرعية عند الطرف 5' و/أو الطرف 3'. 0 _تشير المصطلحات 'مورفولينو"؛ 'مورفولينو أوليجومرء" و'01/0" إلى أوليجومر من فوسفورو داي أميدات مورفولينو بالصيغة البنائية العامة التالية: ‎Nu‏ ب ‎J‏ ‎HC,‏ ‎_N—P=0‏ ‏هم ‎HC‏ ‎Nu‏ ب ‎J‏ ‏وكما يوصف في الشكل 2 من ‎Summerton, J., et al., Antisense & Nucleic Acid‏ ‎Drug Development, 7: 187-195 (1997)‏ يُقصد أن تُغطي مركبات المورفولينو كما 5 يوصف هنا كل الأيزومرات الفراغية والمماثئلات الكيميائية الخاصة بالصيغة البنائية العامة السابقة. يتم ذكر السمات المميزة للتخليق؛ الصيغ البنائية؛ والريط الخاصة بالأوليجومرات من المورفولينو بالتفصيل في البراءات الأمريكية أرقام 5,698,685 5,217,866 5,142,047 6 5.166.315 5,521,063 5,506,337 8,076,476 5 8,299,206« التي يتم تضمينها كلها هنا كمراجع.
— 5 2 — في تجسيدات معينة؛ يتم ترافق مورفولينو عند الطرف 5 ”أو الطرف 3 "من الأوليجومر مع شطر 'ذنبى” لزيادة ثباته و/أو قابليته للذويان. تتضمن الأذناب النموذجية: 0 0 ‎NH, HO 3‏ 0 ‎J‏ ‎HC‏ ‎N‏ ‎O=——=P——N(CHa)‏ ‎OH | O=——P——N(CH3),‏ ‎A‏ ‏5 رج ¢ صورة ‎oY‏ ¢ وصورة . من بين الأشطار الذيلية النموذجية السابقة؛ يشير ‎“TEG”‏ أو "63 إلى الشطر الذيلى التالى: ‎HO‏ ‏3 ‎N‏ ‏9 ‎A‏ ‏} ‏5 صورة ‎NY‏ . من بين الأشطار الذيلية النموذجية السابقة؛ يشير ‎“CT‏ الشطر الذيلى التالى: ‎NH,‏ 0 ‎HaC J‏ 7 3 ا 0 صورة رجا ‎٠‏ ‏على النحو المستخدم بهذه الوثيقة؛ يتم استخدام المصطلحين "6-46" 5 ‎'=G-R6-Ac'‏ بدلا من بعضهما البعض للإشارة إلى شطر ببتيد مترافق مع أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎Gy‏ ‏0 للكشف. في تجسيدات متنوعة»؛ ”©“ يمثل جليسين وحدة بنائية مترافقة مع ‎“RE”‏ بواسطة رابطة
— 6 2 — أميد؛ وكل ‎“RY‏ يمثل وحدة أرجينين بنائية مترافقة معًا بواسطة رابطة أميد بحيث ‎“RE”‏ تعني ست )6( وحدات أرجينين بنائية مترافقة ‎ae‏ بواسطة روابط أميد. قد يكون لدى وحدات الأرجينين البنائية تشكيلات فراغية؛ على سبيل المثال؛ قد تكون وحدات الأرجينين البنائية ‎Ble‏ عن وحدات ا- أرجينين بنائية؛ وحدات (0-أرجينين بنائية؛ أو خليط من وحدات 0- وا- أرجينين بنائية. في تجسيدات معينة؛ يكون '6-86-" أو '6-86-80-" ‎Ble‏ عن مترافق مع حلقة إنتروجين مورفولين لوحدة المورفولينو الفرعية عند الطرف 3" لأوليجومر ‎alias PMO‏ لاتجاه النسخ ‎lady‏ ‏للكشف. في بعض التجسيدات»؛ يكون '6-46-" أو ‎Ble '“G-RE-AC'‏ عن مترافق مع أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ عند الطرف 3” وفقًا للكشف وله الصيغة التالية: ‎Ne Np Ne He‏ ‎J NH NH NH‏ ‎J.
J.‏ م > 0 ‎H zg H 39 H z‏ ‎N A N x N z‏ ‎N‏ ‏0 0 0 ‎"L HN HN‏ صورة ‎NS‏ بوك يديه ال لوط » أو ‎ye ye Ne‏ ‎I NH NH NH‏ ‎J.
J‏ وه > 0 ‎H 3 H H F‏ ‎N A N 2 N 8 J‏ ‎N N‏ ب ‎YY‏ را رت ‎OY‏ ‎.6HCI‏ ‎L HN HN‏ صورة ‎A HN Aw H‏ يار ‎HN NH‏ يتم استخدام المصطلحات "قاعدة نووية " ‎(NU)‏ "شطر ازدواج قواعد" أو ‎"sae‏ بدلا من بعضها البعض للإشارة إلى قاعدة بيورين أو بيريميدين موجودة في ‎DNA‏ أو ‎RNA‏ طبيعي الحدوث ¢ أو ‎"ual‏ (على سبيل المثال» يوراسيل؛ ثايمين؛ أدينين» سيتوزين» وجوانين)؛ وكذلك نظائر من مركبات البيورين والبيريميدين هذه طبيعية الحدوث. يمكن أن تضفي هذه النظائر خواصًا محسنة؛ 5 مثل ألفة الارتباط بالأوليجومر. تتضمن النظائر النموذجية هيبوكسانثين (مكون قاعدة إينوزين)؛
2 6-داي أمينو بيورين؛ 5-ميثيل سيتوزين؛ مركبات بيريميدين معدلة ب 5©-برويينيل؛ 10-(9- (أمينو إيتوكسي)فينوكسازينيل) (قامطة 6) وما شابه. تتضمن الأمثلة الإضافية أشطار إزدواج القواعد؛ على سبيل المثال لا الحصرء يوراسيل؛ ثايمين» أدينين» سيتوزين» جوانين وهيبوكسانثين (إينوزين) بها مجموعات أمينو مناظرة محمية بمجموعات أسيل حامية؛ نظائر 2-فلورو يوراسيل؛ 2-فلورو سيتوزين» 5- برومو يوراسيل» 5-يودو يوراسيل؛ 2( 515-6( أمينو بيورين؛ ‎Bl‏ سيتوزين» بيربميدين مثل أشباه أيزو سيتوزين وأشباه يوراسيل وقواعد أنوية معدلة ‎AT‏ مثل مركبات بيورين بها استبدال عند الموضع 8؛ زانثين؛ أو هيبوكسانثين (يكون الأخيران منتجي تحلل طبيعيين). تم ‎Ladd‏ ذكر القواعد النووية المعدلة التي ورد الكشف فيها: ‎Limbach et al.
Nucleic Acids ¢Chiu and Rana, RNA, 2003, 9, 1034-1048‏ ‎Revankar and Rao, Comprehensive 4 ¢Research, 1994, 22, 2183-2196 0‏ ‎«Natural Products Chemistry, vol. 7, 313‏ والتي أدرجت محتوياتها ضمن مراجع هذه الوثيقة. تتضمن الأمثلة الإضافية لأشطار إزدواج القواعد؛ على سبيل المثال لا الحصرء قواعد نووية ممتدة الحجم تم فيها إضافة واحدة أو أكثر من حلقات البنزين. وقد ورد وصف بهذه الوثيقة لاستبدالات 5 قواعد الأحماض النووية في: كتالوج ‎¢tGlen Research (www.glenresearch.com)‏ ‎Kool, ET, Acc. ¢Krueger AT et al., Acc.
Chem.
Res., 2007, 40, 141-150‏ ‎Benner S.A., et al., Nat.
Rev.
Genet., «Chem.
Res., 2002, 35, 936-943‏ ‎Romesberg, F.E., et al., Curr.
Opin.
Chem.
Biol., ¢2005, 6, 553-543‏ ‎Hirao, ٠٠, Curr.
Opin.
Chem.
Biol., 2006, 10, 622-4 ¢2003, 7, 723-733‏ 627؛ والتي أدرجت محتوياتها ضمن مراجع هذه الوثيقة؛ والتي تعد ‎Bue‏ في مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ. من بين أمثلة القواعد النووية ممتدة الحجم تلك الموضحة ‎coli‏ وكذلك صورها الصنوية.
— 8 2 — ‎NH‏ ]086[ ]087[ ‎N NS N‏ ‎Tr‏ 6 ]085[ الس 0 0 ‎N‏ ‎NH ; NH‏ ‎x Sry‏ ‎“NH,‏ لا ل 0 ‎CL,‏ ‏و ‎N‏ و ‎N‏ [090] ‎N A N ~N‏ ‎ee Ao‏ ]088[ \ 2 ‎N NH ~~, [089]‏ ‎N‏ ‏اله ‏0 0 0 ‎HN NH ao HNN‏ ‎Sa‏ 0 77 > ‎oo1‏ 000 ® ]093[ ‎NH‏ ]095[ ]096[ 0 و2
[094] تعني العبارتان "الإعطاء بالحقن غير المعوي" و'مُعطى بطريق الحقن غير المعوي" كما يُستخدم هنا أنماط الإعطاء بخلاف الإعطاء المعوي والموضعي؛ ‎Bale‏ بالحقن؛ وتتضمناء دون تحديد؛ الحقن والتسريب داخل الوريد؛ فى العضل؛ داخل الشريان؛ داخل الغمد؛ داخل المِحْفَظّة؛ داخل الحجاج؛ داخل القلبء داخل الأدمة؛ داخل الغشاء البريتوني؛ عبر الرغامى»؛ تحت الجلد » تحت البشرة؛ داخل المفصل؛ تحت المحفظة؛ تحت العنكبوتية؛ دَاخل ‎SUR‏ الفَقَرِيّة وداخل ‎alll‏
للإيضاح؛ تعد البنيات وفقًا للكشف التي تتضمن؛ على سبيل المثال؛ الصيغة ‎(IV)‏ متصلة من إلى 73« ولسهولة وصف البنية الكلية في صورة محكمة؛ تم تضمين عدة فواصل يُطلق عليها "الفاصل أ "الفاصل ب" و'الفاصل ج". على النحو الذي يفهمهه ذو المهارة في المجال؛ على سبيل المثال» توضح كل إشارة "الفاصل أ" ‎Lan‏ لشرح البنية عند هذه النقاط. يفهم ذو المهارة أن 5 نفس الأمر ينطبق على كل مثال في "الفاصل ب" و'"الفاصل ج" في البنيات السابقة. على الرغم
من ذلك؛ لا يفهم ذو المهارة في المجال أن أي فواصل في الشرح تشير إلى انقطاع فعلي للبنية السابقة. على النحو المستخدم بهذه ‎cdl)‏ تشير مجموعة من الأقواس المستخدمة داخل صيغة بنائية إلى أن الميزة البنائية بين الأقواس مكررة. في بعض التجسيدات؛ قد تكون الأقواس المستخدمة ‎Ble‏
0 عن ل و]» وفي تجسيدات معينة؛ قد تكون الأقواس المستخدمة للإشارة إلى تكرار الميزات البنائية ‎Ble‏ عن "(” و“)". في بعض التجسيدات؛ يمثل عدد تكرارات السمات البنائية بين الأقواس العدد المشار ‎ad)‏ خارج الأقواس ‎Jie‏ 2؛ 3 4؛ 5؛ 6؛ 7 وهكذا. في تجسيدات متنوعة؛ يتم الإشارة إلى عدد تكرارات الميزة البنائية بين الأقواس من خلال المتغير المشار ‎ad)‏ خارج الأقواس ‎ie‏ ‎“Zz‏
على النحو المستخدم بهذه الوثيقة؛ تشير الرابطة المستقيمة أو المتعرجة المرسومة على ذرة كريون أو فوسفور استقطابية داخل الصيغة البنائية إلى أن الكيمياء الفراغية لذرة الكربون أو الفوسفور الاستقطابية غير محددة ‎dally‏ بها تضمين جميع صور المركز الاستقطابي. تم وصف أمثلة لهذه الإيضاحات فيما بعد.
— 0 3 — ‎Nu‏ 0 ‎N‏ ‏ ‎O=—P——N(CH3), N‏ ‎eae‏ ‎NC ™‏ ‎N‏ ‏—_— ‎Bh‏ ‏> ‏17710 ‏0 تعنى العبارة 'مقبول ‎"Wasa‏ أنه يتحتم أن تكون المادة أو التركيبة متوافقة؛ كيميائيًا و/أو على نحو سام؛ مع المكونات الأخرى المشتملة على صيغة؛ و/أو الخاضع للعلاج الذي يتم علاجه بها.
تعنى العبارة 'مادة حاملة مقبولة صيدليًا" كما يُستخدم هنا مادة صلبة غير سامة خاملة؛ ‎sale‏ مالئة شبه صلبة أو سائلة؛ مادة مخففة؛ مادة ممحفظة أو مادة مساعدة للصياغة من أي نوع. تتمثل بعض الأمثلة الخاصة بالمواد التى يمكن أن تعمل كمواد حاملة مقبولة صيدليًا فى مواد سكرية مثل لاكتوز» جلوكوز وسكروز؛ يمكن أيضًا أن توجد أنواع النشا مثل ‎Las‏ الذرة ونشا البطاطس؛ السيليلوز ومشتقاته مثل صوديوم كربوكسي ميثيل سيليلوز؛ إيثيل سيليلوز وسيليلوز أسيتات؛ صمغ
0 كثيراء في صورة مسحوق؛ الشعير؛ الجيلاتين؛ التالك؛ السواغات مثل زيدة الكاكاو وأنواع شمع التحاميل؛ الزيوت مثل زبت الفول السوداني؛ ‎cw‏ بذر القطن؛ زبت العُصْفُر؛ زبت السمسم؛ ‎Cu)‏ ‏الزيتون؛ زيت الذرة وزيت فول الصويا؛ مركبات جليكول؛ ‎Jie‏ بروبيلين جليكول؛ إسترات مثل إيثيل أوليات وإيثيل لورات؛ آجار؛ عوامل منظمة ‎Jie‏ مجنسيوم هيدروكسيد وألومينيوم هيدروكسيد؛ حمض ألجينيك؛ ماء خالي من مولد حمى؛ محلول ملحي متساوي التوتر؛ محلول ‎(Ringer‏ كحول 5 لإيثيلي؛ محاليل منظمة بالفوسفات؛ المزلقات المتوافقة غير السامة مثل صوديوم لوربل سلفات ومجنسيوم ستيارات ¢ العوامل الملونة؛ عوامل ‎J‏ لإطلاق 6 عوامل التغليف ¢ عوامل التحلية؛ إكساب النكهة والتعطير؛ المواد الحافظة ومضادات الأكسدة؛ وفقًا لقرار القائم بالصياغة.
— 1 3 — يشير المصطلح "استعادة” تخليق أو إنتاج الديستروفين بصفة عامة إلى إنتاج بروتين ديستروفين متضمن صور مقتطعة من الديستروفين في مريض يعاني من ‎(Lisl BAN‏ بعد العلاج باستخدام مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ كما يوصف هنا. في بعض التجسيدات؛ نتائج العلاج في زيادة في إنتاج ديستروفين جديد في مريض بمقدار %1 كفك %10 %20 %30 م9 9650؛ 9660 9670 9680؛ 9690 أو 96100 (متضمنة كل الأعداد الصحيحة ‎Lad‏ بينها).
في بعض التجسيدات؛ يزيد العلاج من عدد ألياف الديستروفين الإيجابية وصولاً إلى على الأقل حوالى %20 حوالى 9630؛ حوالى 9640 حوالى 9650؛ حوالى 9660»؛ حوالى 9670» حوالى 0 حوالي 90 96 أو حوالي 9695 إلى 96100 من الطبيعي في الخاضع للعلاج. في تجسيدات أخرى؛ يزيد العلاج من عدد ألياف الديستروفين الإيجابية وصولاً إلى نسبة من حوالي
0 1620 إلى حوالي 9660؛ أو حوالي 9630 إلى حوالي 9650 من الطبيعي في الخاضع للعلاج. يمكن تحديد النسبة الخاصة بألياف الديستروفين الإيجابية في مريض بعد العلاج بواسطة عينة فحص عضلية باستخدام تقنيات معروفة. على سبيل المثال؛ قد يتم أخذ عينة فحص عضلية من عضلة ملائمة؛ ‎Jie‏ العضلة ذات الرأسين العضدية فى مريض. قد يتم تنفيذ تحليل النسبة المئوية لألياف الديستروفين الإيجابية قبل العلاج و/أو بعد العلاج أو عند
نقاط زمنية خلال سياق العلاج . في بعض التجسيدات ¢ يتم أخذ عينة فحص بعد العلاج من عضلة الجانب المقابل من عينة الفحص قبل العلاج. قد يتم إجراء تحليل التعبير عن الديستروفين قبل وبعد العلاج باستخدام أية تجرية ملائمة للديستروفين. في بعض التجسيدات؛ يتم تنفيذ ‎CRASH‏ ‏الكيميائي الهيستولوجي المناعي على قطاعات نسيجية من ‎die‏ فحص العضلة باستخدام جسم مضاد يمثل علامة محددة للديستروفين» مثل جسم مضاد أحادي النسيلة أو متعدد النسائل. على
سبيل المثال؛ يمكن استخدام الجسم المضاد ‎MANDYS106‏ الذي يعتبر علامة محددة عالية الحساسية للديستروفين. قد يتم استخدام أي جسم مضاد ثانوي ملائم. في بعض التجسيدات؛ يتم حساب النسبة المئوية لألياف الديستروفين الإيجابية عن طريق قسمة عدد الألياف الإيجابية على إجمالي الألياف التى تم عدها. تشتمل عينات العضلة الطبيعية على 0 من ألياف الديستروفين الإيجابية. لهذاء يمكن التعبير عن النسبة المئوية ‎GLY‏
5 الايستروفين الإيجابية باعتبارها نسبة مئوية للألياف الطبيعية. للتحكم في وجود مستويات ضئيلة
من الديستروفين في العضلة قبل العلاج إضافة إلى الألياف المعكوسة يمكن ضبط قيمة قاعدية باستخدام قطاعات من العضلات قبل العلاج من كل مريض عند عد ألياف الديستروفين الإيجابية في العضلات بعد العلاج. قد يتم استخدام هذا كقيمة حدية لعد ألياف الديستروفين الإيجابية في قطاعات من العضلة بعد العلاج في ذلك المريض. في تجسيدات ‎cal‏ يمكن ‎Lal‏ استخدام قطاعات نسيجية ملونة بالجسم المضاد لتحديد كم الديستروفين باستخدام برنامج تحليل الصورة
‎Image Analysis Corporation, Nashville, TN) Bioquant‏ 81000801). يمكن إيضاح إجمالي شدة إشارة فلورة الديستروفين كنسبة مئوية للطبيعي. بالإضافة إلى ذلك؛ يمكن استخدام تحليل لطخة ويسترن باستخدام أجسام مضادة أحادية النسيلة أو متعددة النسائل مضادة للديستروفين لتحديد النسبة المئوية لألياف الديستروفين الإيجابية. على سبيل المثال؛ قد يتم
‏0 استخدام الجسم المضاد الذي يكون مضادًا للديستروفين ‎NCL-Dys1‏ من ‎Leica‏ ‎Sa (Biosystems‏ أيضًا تحليل النسبة المئوية لألياف الديستروفين الإيجابية عن طريق تحديد التعبير الوراثي عن مكونات معقد ساركوجليكان ‎(O00)‏ و/أو ‎NOS‏ للخلايا العصبية. في بعض التجسيدات؛ يؤدي العلاج باستخدام مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف إلى إبطاء أو تقليل الخلل الوظيفي و/أو الإخفاق في عضلة الجهاز النفسي المتقدم في
‏5 المرضى الذين يعانون من ‎DMD‏ الذي سيكون متوقعًا من دون العلاج. في بعض التجسيدات؛ قد يُقلل العلاج باستخدام مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف من أو يُزيل الحاجة لمساعدة في التنفس التي قد تكون متوقعة بدون العلاج. في بعض التجسيدات؛ تتضمن قياسات الوظيفة التنفسية لتتبع مسار المرض»؛ إضافة إلى تقييم التدخلال العلاجية المحتملة الضَّغْط الشّهِيقِيَ الأقصى ‎Jai all (MIP)‏ الزَّفِيرِيٌ الأقصى ‎(MEP)‏ والسعة الحيوية القسرية (1/0).
‏0 يقيس ‎MIP‏ و ‎MEP‏ مستوى الضغط الذي يمكن لشخص إنتاجه أثناء الشهيق ‎ills‏ على التوالي؛ وتعتبر قياسات حساسة لقوة العضلة التنفسية. يمثل ‎MIP‏ قيامًا لضعف عضلة الحجاب الحاجز. في بعض التجسيدات؛ قد يتراجع ‎MEP‏ قبل التغييرات في اختبارات الوظيفة الرئوية الأخرى؛ متضمنة ‎.FVC 5 MIP‏ في تجسيدات معينة؛ قد يمثل ‎MEP‏ مؤشرًا مبكرًا على خلل وظيفي
‏5 تنفسي. في تجسيدات معينة؛ قد يتم استخدام ‎FVC‏ لقياس إجمالي حجم الهواء المخرج أثناء الزفير
القسري بعد عملية شهيق قصوى. في المرضى الذين يعانون من ‎(DMD‏ تزداد ‎FVC‏ على نحو مصاحب للنمو الفيزيائي حتى بدايات المراهقة. بالرغم من ذلك؛ عند تباطء النمو أو عندما تتم إعاقته بتفاقم المرض» وتفاقم ضعف العضلات؛ تدخل السعة الحيوية طورًا تنازليًا وتتراجع بمعدل متوسط يبلغ من حوالي 8 إلى 8,5 بالمائة في العام بعد من 10 إلى 12 سنة من العمر. في تجسيدات معينة؛ يعتبر ‎MIP‏ بالمائة ‎Lia)‏ به ‎MIP)‏ المضبوط للوزن)؛ ‎MEP‏ بالمائة المتنبأ به ‎MEP)‏ المضبوط للعمر) 5 ‎FVC‏ بالمائة المتنباً به ‎FVC)‏ المضبوط للعمر والطول) تحليلات داعمة. يتضمن المصطلحان "خاضع للعلاج" و'مريض"؛ كما يُستخدم هناء أي حيوان يُظهر عرضًاء أو يكون على خطر أن يُظهر عرضًاء؛ يمكن علاجه باستخدام مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ 0 خاص بالكشف؛ ‎Jie‏ خاضع للعلاج (أو مريض) يعاني من أو على خطر أن يعاني من ‎DMD‏ ‏أو ‎BMD‏ أو أي من الأعراض المصاحبة لهذه الحالات (على سبيل المثال؛ فقد الألياف العضلية). يتضمن الخاضعون للعلاج الملائمون (أو المرضى) الحيوانات المعملية (مثل ‎Ol‏ ‏الجرذء الأرنب؛ أو خنزير ‎(Lie‏ حيوانات المزارع؛ والحيوانات الداجنة أو الحيوانات الأليفة ‎Jie)‏ ‏قط أو كلب). يتم تضمين الحيوانات الرئيسة غير البشرية؛ وُفضل؛ المرضى (أو الخاضعون ‎(FD 5‏ من البشر. كذلك يتم تضمين طرق لإنتاج الديستروفين في خاضع للعلاج (أو مريض) لديه طفرة في جين الديستروفين الذي يكون مُعرْضًا لتخطي الإكسون ‎ST‏ ‏تعني العبارات "الإعطاء المجموعي" ‎aed‏ على نحو مجموعي" 'الإعطاء الطرفي” واعطى على نحو طرفي" كما يُستخدم هنا إعطاء مركب؛ عقار أو ‎(gal sale‏ بخلاف ذلك على نحو مباشر في الجهاز العصبي المركزي؛ بحيث تدخل إلى جهاز المريض وء بالتالي؛ تكون معرضة 0 للأيض والعمليات الأخرى المشابهة؛ على سبيل المثال؛ الإعطاء تحت الجلد. يشير العبارة 'متوالية استهداف" إلى متوالية قواعد نووية أوليجومر متممة لمتوالية نوكليوتيدات في ‎MRNA‏ أولي مستهدف. في بعض التجسيدات وفقًا للكشف؛ تمثل متوالية النوكليوتيدات في ‎MRNA‏ الأولي المستهدف موقع تلدين الإكسون 51 في ديستروفين ‎MRNA‏ الأولي الذي يُطلق عليه (66+95+)1518.
يمثل "علاج” خاضع للعلاج (على سبيل المثال؛ كائن ثديي؛ ‎Jie‏ إنسان) أو خلية أي نوع من التدخل المستخدم في محاولة لتغيير السياق الطبيعي للخاضع للعلاج أو الخلية. يتضمن العلاج؛ إلا أن الأمر ليس قاصرًا على؛ إعطاء أوليجومر أو تركيبة صيدلية منه؛ وقد يتم التنفيذ إما على نحو وقائي أو لاحق لبدء حدث مسبب للمرض أو التلامس مع عَامِل سَبَبِي. يتضمن العلاج أي تأثير مطلوب على الأعراض أو مسببات الأمراض الخاصة بمرض أو حالة مصاحبة لبروتين الديستروفين» كما في صور معينة من ‎BAY‏ العَضَلِي؛ وقد تتضمن؛ على سبيل المثال؛ التغييرات أو التحسينات الدنيا في واحد أو أكثر من العلامات القابلة للقياس الخاصة بالمرض الذي يتم علاجه أو الحالية التي يتم علاجها. كذلك يتم تضمين علاجات ‎CASES‏ يمكن توجيهها إلى ‎JE‏ ‏معدل تقدم المرض الذي يتم علاجه أو الحالة التي يتم علاجهاء تأخير بدء ظهور ذلك المرض أو 0 تك الحالة؛ أو تقليل حدة بدء ظهوره/ظهورها. ليس بالضرورة أن يشير "العلاج” أو "الوقاية" إلى استئصال تام؛ علاج؛ أو منع المرض أو الحالة؛ أو الأعراض المصاحبة لها. في بعض التجسيدات؛ يزيد العلاج باستخدام مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف من إنتاج ديستروفين جديد؛ يؤخر تقدم المرض؛ يُبطئ أو يقلل من فقد السيرء يُقلل من التهاب العضلات؛ يُقلل من تلف العضلات؛ يُحسن من وظيفة العضلات؛ يُقلل من فقد الوظيفة الرئوية؛ 5 و/أو يُعزز من تجدد العضلات الذي سيكون متوقعًا بدون علاج. في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على؛ يؤخرء أو يُبطئ تقدم المرض. في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على السير أو يُقلل من فقد السير. في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على الوظيفة الرثوية أو يُقلل من فقد الوظيفة الرئوية. في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على أو يُزيد مسافة سير على الأقدام ثابتة في مريض؛ كما هو مُقاس بواسطة؛ على سبيل المثال؛ اختبار السير ‎saad‏ 6 دقائق ‎(OMWT)‏ ‏0 في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على أو يُقلل من الزمن إلى السير/الجري 10 أمتار (أي؛ اختبار السير/الجري 10 أمتار). في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على أو يُقلل من الزمن إلى الوقوف من الاستلقاء (أي؛ اختبار الزمن إلى الوقوف). في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على أو يُقلل من الزمن إلى ارتقاء ‎af‏ درجات من درجات السلّم التقليدية (أي؛ اختبار ارتقاء أربع درجات من السلّم). في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على أو يُقلل من التهاب العضلات في 5 المربض؛ كما هو مُقاس بواسطة؛ على سبيل المثال؛ ‎MRI‏ (على سبيل المثال؛ ‎MRI‏ لعضلات
الساق). في بعض التجسيدات؛ يقوم ‎MRI‏ بقياس 12 و/أو جزءِ الدهون لتحديد ضمور العضلات. يمكن أن يُحدد ‎MRI‏ التغييرات في بنية العضلات والتركيبة الناتجة بواسطة الالتهاب؛ الاستسقاء؛ تلف العضلات وارتشاح الدهون. في بعض التجسيدات؛ يزيد العلاج باستخدام مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف من إنتاج ديستروفين جديد ويُبطئ أو يُقلل من فقد السير الذي سيكون متوقعًا بدون العلاج. على سبيل ‎(Jal‏ قد يؤدي العلاج إلى تثبيت؛ الحفاظ على؛ تحسين أو زيادة القدرة على المشي (على سبيل المثال؛ تثبيت السير) في الخاضع للعلاج. في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على أو يُزِيد مسافة سير على الأقدام ثابتة في مريض؛ كما هو مُقاس بواسطة؛ على سبيل المثال؛ اختبار السير لمدة 6 دقائق (61/1//1)؛ الموصوف بواسطة ‎Muscle Nerve, ) .McDonald, et al‏ 0 42:966-74 ;2010( المتضمن هنا كمرجع). قد يتم التعبير عن تغير في مسافة السير لمدة 6 دقائق (61///00) في صورة قيمة مطلقة؛ تغير بنسبة مئوية أو تغير في 96 للقيمة المتنباً بها في بعض التجسيدات؛ يحافظ العلاج على أو يُحسّن من مسافة سير على الأقدام ثابتة في ‎OMWT‏ ‏من عجز بنسبة 9620 في الخاضع للعلاج بالنسبة لنظير مُعافى. يمكن تحديد ‎shal‏ مريض ‎DMD‏ ‏في ‎GMWT‏ بالنسبة إلى الأداء النمطي لنظير مُعافى عن طريق حساب 96 لقيمة ‎Lite‏ بها. على سببيل المثال؛ قد يتم حساب 96 ل ‎GMWD‏ المتنباً به باستخدام المعادلة التالية للذكور: 196,72 ‎x 39,81) +‏ العمر) - (1,36 ‎X‏ العمر2) + (132,28 ‎x‏ الارتفاع بالأمتار). للإناث؛ قد يتم حساب 96 ل ‎GMWD‏ المتنباً به باستخدام المعادلة التالية: 188,61 + (51,50 ‎x‏ العمر) - ‎x 86,10) + (2 all x 1,86)‏ الارتفاع بالأمتار) ( ‎Henricson et al.
PLoS Curr.,‏ ‎version 2‏ ,2012« المتضمن هنا كمرجع). في بعض التجسيدات؛ يزيد العلاج باستخدام 0 أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ من مسافة السير على الأقدام الثابتة في المريض من ‎dad‏ قاعدية إلى أكبر من 3 5» 6» 7. 8» 9< 10 15 20» 25 30 أو 0 متر (بما في ذلك كل الأعداد الصحيحة فيما بينها). قد يحدث فقد وظيفة العضلات في المرضى الذين يعانون من ‎DMD‏ ضد الخلفية الخاصة بالنمو والتطور الطبيعي في الطفولة. بالفعل؛ قد يُظهر الأطفال الأصغر ‎Gas‏ الذين يعانون من ‎DMD‏ ‏5 زادة في المسافة التي يتم سيرها أثناء 61///1 على مدار حوالي 1 عام بالرغم من ضعف
العضلات المتقدم. في بعض التجسيدات؛ تتم مقارنة 10//ا61 من المرضى الذين يعانون من ‎DMD‏ بالخاضعين للعلاج من عينة المقارنة المتطورة نمطيًا وبالبيانات المعيارية الموجودة من الخاضعين للعلاج متطابقي العمر والجنس. في بعض التجسيدات؛ يمكن تفسير النمو والتطور الطبيعيين باستخدام معادلة معتمدة على العمر والارتفاع المتواءمة مع البيانات المعيارية. يمكن استخدام هذه المعادلة لتحويل 61/10/10 إلى ‎dad‏ بالنسبة ‎saad)‏ )%( متنباً بها في الخاضعين للعلاج الذين يعانون من ‎DMD‏ في تجسيدات معينة؛ يقدم تحليل بيانات ‎MWD‏ بالنسبة المئوية المتنباً بها طريقة لتفسير النمو والتطور الطبيعيين؛ وقد يُظهر هذا أن قيم الكسب في الوظيفة عند الأعمار المبكرة (على سبيل المثال؛ أقل من أو يساوي العمر 7) تمثل قدرات ثابتة بدلاً من كونها محسنة في المرضى الذين يعانون من ‎Henricson et al.
PLoS Curr., 2012, ( DMD‏ ‎version 2 0‏ المتضمن هنا كمرجع). تم اقتراح نظام تسمية جزيء مضاد لاتجاه النسخ ونشره للتمييز فيما بين الجزيئات المضادة لاتجاه النسخ النمختلفة (انظر 644-654 ,4 ‎(Mann ©] al., (2002) J Gen Med‏ تصبح هذه التسمية ذات صلة بخاصة عند اختبار العديد من الجزيئات المضادة لاتجاه النسخ المختلفة بشكل طفيف؛ الموجهة كلها لنفس المنطقة المستهدفة؛ كما يُعرض فيما يلي: ‎H#AD(x:y) 5‏ يُدلل الحرف الأول على النوع (على سبيل المثال» ‎tH‏ إنسان» ‎LM‏ ©: كلب). '#' يُدلل على عدد الإكسون للديستروفين المستهدف. ‎"AD"‏ تشير إلى موقع جدل مستقبل أو مانح عند بداية ونهاية الإكسون؛ على التوالي. ‎(XY)‏ تمثل إحداثيات التلدين حيث "-” أو "+" يشيرا إلى متواليات الإنترون والإكسون على التوالي. على سبيل المثال؛ سيشير (6+18-)8 إلى ‎AT‏ 6 قواعد من 0 الإنترون التي تسبق الإكسون المستهدف وأول 18 قاعدة من الإكسون المستهدف. سيكون موقع الجدل الأقرب هو المستقبل بحيث تكون هذه الإحداثيات ب ‎SAT‏ يمكن أن يكون وصف إحداثيات التلدين عند موقع جدل المانح هو ‎D(+2-18)‏ حيث آخر 2 قاعدة من القواعد الخاصة بالإكسون وأول 18 قاعدة من قواعد الإنترون تناظر موقع التلدين للجزيء المضاد لاتجاه النسخ. إحداثيات التلدين الخاصة بالإكسون بالكامل التي سيتم تمثيلها بواسطة (65+85+)8؛ أي الموقع فيما بين 5 النوكليوتيد 65 والنوكليوتيد 85 من بداية ذلك الإكسون.
— 7 3 — 2- الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ أ) مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ المصممة للحث على تخطي الإكسون 51 في تجسيدات معينة؛ تعد مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ ‎Gy‏ للكشف متممة لمنطقة الإكسون 51 المستهدفة لجين الديستروفين وتعمل على حث تخطي الإكسون 51. على نحو محدد؛ يتعلق الكشف بمترافقات أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ متمم منطقة الإكسون 51 المستهدفة
للديستروفين ‎MRNA‏ الأولي الذي يُطلق عليه موقع تلدين. في بعض التجسيدات؛ يكون موقع التلدين عبارةً عن (66+95+)151/8. تستهدف مترافقات أوليجومر مضادة لاتجاه النسخ وفقًا للكشف ديستروفين ‎MRNA‏ الأولي وتستحث ‎ads‏ الإكسون 51؛ لذا يتم استبعاده أو تخطيه من نسخة ‎MRNA‏ الناضجة المجدولة.
0 من خلال تخطي الإكسون 51؛ يتم استعادة إطار القراءة الممزق إلى طفرة إطارية داخلية. في حين أن ‎DMD‏ يتألف من عدة أنماط فرعية جينية؛ تم خصيصًا تصميم مترافقات أوليجومر مضادة لاتجاه النسخ وفقًا للكشف لتخطي الإكسون 51 لديستروفين ‎MRNA‏ الأولي. تتألف طفرات ‎DMD‏ ‏التي تكون مُعرّضًا لتخطي الإكسون 51 من مجموعة فرعية من مرضى ‎DMD‏ (9613). تم تصميم متوالية قاعدة نووية مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ يستحث تخطي الإكسون 51
5 بحيث تكون متممة لمستهدف متوالية محدد داخل الإكسون 51 لديستروفين ‎MRNA‏ الأولي. في بعض التجسيدات؛ يكون الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ لمترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ ‎Bile‏ عن ‎PMO‏ حيث يتم ريط كل حلقة مورفولينو في 1/10 بقاعدة نووية تتضمن؛ على سبيل المثال» قواعد نووية موجودة في ‎DNA‏ (أدينين» سيتوزين؛ جوانين؛ وثايمين). ب) السمات المميزة لكيمياء الأوليجومر
0 يمكن أن تستخدم مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بالكشف مجموعة متنوعة من الكيمياء المضادة لاتجاه النسخ. تتضمن الأمثلة على كيمياء الأوليجومر؛ دون تحديد؛ أوليجومرات من مورفولينو» أوليجومرات معدلة من فوسفورو ثيوات؛ أوليجومرات معدلة من 02”- ميثيل حمض نووي لببتيد ‎(PNA)‏ حمض نووي مقفل ‎(LNA)‏ أوليجومرات من فوسفورو ثيوات؛ أوليجومرات معدلة من ‎(MOE="02‏ أوليجومر معدل ب 2”-فلورو» الأحماض النووية المجسرة ب
— 8 3 — ‎C4: 2‏ '-إيثيلين ‎«(ENAs)‏ تراي سيكلر ‎«DNAs-‏ وحدات تراي سكلر ‎DNA-‏ فوسفورو ثيوات ‎cde i‏ أوليجومرات معدلة من 0-2-[2- (ل!-ميثيل كربامويل)إيثيل] متضمنة توليفات من أي مما سبق. يمكن دمج الكيمياء المعدلة بفوسفورو ثيوات 5 ‎Me-0-"2‏ للحصول على مكؤن 02”- 6-فوسفورو ثيوات رئيسي. انظرء على سبيل المثال؛ نشرات الطلبات الدولية أرقام ‎(WO/2009/008725 10/0©/2013/112053 5‏ التي يتم تضمينها هنا كمرجع بأكملها. يتم بشكل إضافى وصف التجسيدات النموذجية الخاصة بكيمياء الأوليجومر الخاصة بالكشف فيما 1( الأحماض النووية لببتيد ‎(PNAS)‏ ‏تعتبر الأحماض النووية لببتيد ‎(PNAS)‏ نظائر ل ‎DNA‏ حيث يكون المكون الرئيسي ‎Walaa‏ ‏0 هيكليًا مع مكون رئيسي من ديوكسي رببوز؛ متكون من وحدات ل١1-(2-أمينو‏ إيثيل) جليسين يتم إلحاق قواعد بيريميدين أو بيورين بها. ‎PNAS (agi‏ المحتوية على قواعد بيربميدين وبيورين الطبيعية الأوليجومرات المتممة الخاضعة لأحكام ازدواج القواعد واطسون-كربك؛ وتحاكي ‎DNA‏ ‎Lad‏ يتعلق بالتعرف على زوج القواعد )1993 ‎a1. (Egholm, Buchardt et al.‏ تكوين المكون الرئيسي من ‎PNAS‏ بواسطة روابط ببتيد بدلاً من روابط فوسفو داي إستر؛ مما يجعلها ملائمة جٍيدًا للتطبيقات المضادة لاتجاه النسخ (انظر الصيغة البنائية التالية). يكون المكون الرئيسي بدون شحنة؛ مما يؤدي إلى مضاعفات ‎PNA/DNA‏ أو ‎PNA/RNA‏ التى تُظهر ‎BU‏ حراريًا أكبر من الثبات الحراري الطبيعي. لا يتم التعرف على ‎PNAS‏ بواسطة إنزيمات نيوكلياز أو إنزيمات بروتياز. يتم ‎Lad‏ يلي إيضاح مثال غير حصري على ‎PNA‏ ‏ال ‎LJ‏ ‎i,‏ ‎he .‏ ‎Loo‏ وحدة تكرار ] ‎CBR‏ ‎No‏ ‎JS‏ ‎BH‏
بالرغم من تغير هيكلي جذري في الصيغة البنائية الطبيعية» تكون ‎PNAS‏ قادرة على ارتباط متوالية نوعي في صورة حلزونية ب 01/8 أو ‎.RNA‏ تتضمن السمات المميزة ل ‎PNAS‏ ألفة ريط عالية ب ‎DNA‏ أو ‎RNA‏ متمم؛ تأثير عدم ثبات ناتج بواسطة عدم توافق قاعدة فردية»؛ مقاومة إنزيمات نيوكلياز وإنزيمات ‎«lig pn‏ التهجين باستخدام ‎DNA‏ أو ‎RNA‏ المستقلة عن تركيز الملح والتكوين الثلاثي باستخدام ‎DNA‏ بيورين متجانس. لقد طورت ‎PANAGENE™‏ مونومرات 815 ‎PNA‏ المملوكة لها (815؛ ‎de sane‏ بنزو ثيازول-2-سلفونيل) وعملية التحويل إلى أوليجومر المسجلة لها. تتكون عملية تحويل ‎PNA‏ إلى أوليجومر باستخدام مونومرات ‎PNA‏ 815 من دورات متكررة من نزع الحماية؛ الإقران والتغطية. يمكن إنتاج ‎PNAS‏ تخليقيًا باستخدام أية تقنية معروفة في المجال. انظرء على سبيل المثال» طلبات براءات الاختراع الأمريكية أرقام 6,969,766؛ 0 7,211,668« 7,022,851 7,125,994 7,145,006 و7,179,896. انظر ‎Wad‏ طلبات براءات الاختراع الأمريكية أرقام 5,539,082؛ ¢5,714,331 5 5,719,262 لتحضير ‎PNAS‏ ‏يمكن إيجاد التعاليم الإضافية الخاصة بمركبات ‎PNA‏ في ‎Nielsen et al., Science,‏ 1 ,254:1497-1500. تم تضمين كل مما سبق كمرجع بأكمله. 2( الأحماض النووية المقفلة ‎(LNAS)‏ 5 قد تحتوي مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ أيضًا على وحدات فرعية من "حمض نووي مقفل" ‎.(LNAS)‏ تمثل "8لا" عددًا من فئة تعديلات يُطلق عليها حمض نووي مجسر ‎(BNA)‏ ‏يتم تمييز ‎BNA‏ بواسطة رابط تساهمي يقفل هيئة حلقة الرببوز في تجعية سكر 030-إندو (شمالي). ل ‎(LNA‏ يتم تكوين الجسر من ميثيلين فيما بين الموضعين 0-72 و04-”. يعزز ‎LNA‏ من التنظيم المسبق للمكون الرئيسي وتراص القواعد لزيادة التهجين والثبات الحراري.
Wengel, et al., ‏على سبيل المثال» في‎ LNAs ‏إيجاد الصيغ البنائية الخاصة ب‎ (Sa 0
Chemical Communications (1998) 455; Koshkin et al., Tetrahedron (1998) 54:3607; Jesper Wengel, Accounts of Chem. Research (1999) 32:301; Obika, et al., Tetrahedron Letters (1997) 38:8735; Obika, et al.,
Obika, et al., Bioorganic ‏و‎ ¢Tetrahedron Letters (1998) 39:5401
— 0 4 — ‎«Medicinal Chemistry (2008) 16:9230‏ التي تم تضمينها هنا كمرجع بأكملها. يتم فيما ‎eo)‏ ‎i. —‏ ‎iQ‏ 5 مسف ‎ol‏ سل ب ملسن ‎oof‏ ‎X ~b‏ ‎ENA‏ ‏قد تتضمن مترافقات أوليجومر مضادة لاتجاه النسخ وفقًا للكشف واحدًا أو أكثر من 85ل ا؛ في بعض الحالات؛ قد تكون مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ مكونة بالكامل من ‎NAS‏
يتم وصف الطرق لتخليق الوحدات الفرعية ل ‎LNA‏ نوكليوزيد الفردية وتضمينها في الأوليجومرات؛ على سبيل المثال» في طلبات براءات الاختراع الأمريكية أرقام 1,572,582« 7,569,575 85 7,060,609 7,053,207 71,034,133( 6,794,499« 5 6,670,461« التي تم تضمين كل منها كمرجع بأكملها. تتضمن روابط الوحدة الفرعية الداخلية النمطية أشطار
0 فوسفو ‎gh‏ إستر وفوسفورو ثيوات؛ على نحو بديل؛ قد يتم استخدام روابط غير محتوية على فوسفور. تتضمن تجسيدات إضافية مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ محتوي على ‎Cun LNA‏ يتم فصل كل وحدة ‎LNA‏ فرعية بواسطة وحدة ‎DNA‏ فرعية . يتم تكوين مترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ معينة من وحدات ‎DNA 5 LNA‏ فرعية متعاقبة حيث يكون رابط الوحدة الفرعية الداخلية هو فوسفورو ثيوات.
5 تمثل الأحماض النووية المجسرة ب 02 ‎C4‏ '-إيثيلين ‎(ENAS)‏ عضوًا ‎al‏ من فئة ‎.BNAs‏ يتم فيما يلي إيضاح مثال غير حصري:
— 1 4 — قاعدة ‎Se.‏ ‏اساسا ‎i‏ ‏وس لس ‎ENA‏ : يتم وصف أوليجومرات ‎ENA‏ وتحضيرها في )1997( ‎Obika et al., Tetrahedron Lett‏ 8735 :)50( 38 التي تم تضمينها هنا كمرجع بأكملها. قد تتضمن مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بالكشف واحدة أو أكثر من وحدات ‎ENA‏ الفرعية. 3.حمض نووي مفترح ‎(UNA)‏ ‏كما يمكن أن تحتوي مترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ على وحدات حمض نووي مفتوح ‎(UNA)‏ فرعية. تعد أوليجومرات ‎UNA 5 UNAS‏ نظيرًا ل ‎RNA‏ يتم فيها شطر رابطة ‎C2'-C3'‏ ‏للوحدة الفرعية. في حين يتم تقييد ‎LNA‏ تشاكليًا (بالنسبة ل ‎«(RNA 5 DNA‏ يكون ‎UNA‏ شديد المرونة. يتم الكشف عن ‎(UNAS‏ على سبيل المثال» في 070166/2016 . ورد أدناه وصف 0 غير حصري ل ‎UNA‏ ‎dass‏ ِ: ‎Ow !‏ يع ‎OH‏ ان ‎Oxf a‏ ‎ERIN)‏ بيت ال ‎Os |‏ © ‎OH‏ 1 ‎Ox 81‏ 0 ‎rch .‏ تتضمن روابط الوحدات الفرعية الداخلية النمطية أشطار فوسفو داي إستر وفوسفورو ثيوات؛ ‎Va‏ ‏من ذلك؛ يمكن استخدام روابط محتوية على غير الفوسفور.
3. مركبات فوسفورو ثيوات تعتبر 'مركبات فوسفورو ثيوات" (أو 905ا5-0) صورة مغايرة من ‎DNA‏ طبيعي حيث يتم استبدال واحدة من ذرات الأكسجين غير المجسرة بذرى سلفر. يتم فيما يلي إيضاح مثال غير حصري على فوسفورو ثيوات: قاعدة ‎or Bh‏ ‎=o‏ ‎Te‏ ‏بيبا 8 ٍ
تقلل معالجة روابط النوكليوتيد الداخلي بالسلفر من تأثير إنزيمات النيوكلياز الداخلية والخارجية المضتمنة من 5 "إلى 3 "ومن 3” إلى 5 إنزيم نيوكلياز خارجي 1 ‎DONA POL‏ إنزيمات نيوكلياز 51 ‎(RNases (P1‏ إنزيمات نيوكلياز المصل وفوسفو داي إسترياز سم الحية. يتم تكوين مركبات فوسفورو ثيوات بواسطة اثنتين من الطرق الأساسية: بواسطة تأثير محلول من سلفر
0 عنصري في كربون داي سلفيد على هيدروجين فوسفونات» أو بواسطة طريقة سلفرة فوسفيت تراي إسترات باستخدام إما تترا إيثيل ثيورام داي سلفيد ‎(TETD)‏ أو 1-311 2-بنزو داي ثيول-3-أون 1« 1-داي أكسيد ‎(BDTD)‏ (انظرء على سبيل المثال» ,55 ‎lyer et al., J.
Org.
Chem.‏ 0 ,4693-4699؛ التي تم تضمينها هنا كمرجع بأكملها). تتجنب الطرق الأخيرة مشكلة عدم ثبات السلفر العنصري في معظم المذيبات العضوية ‎Anadis‏ كريون ‎(gla‏ سلفيد. تُنتج أيضًا
5 طرق ‎TETD‏ و8010 مركبات فوسفورو ثيوات عالية النقاء. 5. وحدات فرعية من تراي سليكلو ‎DNAS‏ وتراي سيكلو -فوسفورو ثيوات نوكليوتيدات ‎Jia‏ مركبات تراي سيكلو-0118 ‎(tc-DNA)‏ فئة من نظائر ‎DNA‏ مقيدة حيث يتم تعديل كل نوكليوتيد عن طريق إدخال ‎dala‏ سيكلو برويان لتقييد المرونة الهيئية الخاصة بالمكون الرئيسي وللوصول بالشكل الهندسي للمكون الرئيسي الخاص بزاوية اللي 7 إلى المستوى الأمثل. تقترن
‎Tc-DNAs 0‏ المحتوية على أدنين وثايمين القاعدية المتجانسة من قاعدة ‎AT‏ الثابتة على نحو استثنائي ب ‎RNAS‏ متممة. يتم وصف مركبات تراي سيكلو -01085 وتخليقها في نشرة الطلب
الدولي رقم 115993/2010 ؛ التي تم تضمينها هنا كمرجع بأكملها. قد تتضمن مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف واحدًا أو أكثر من وحدات ‎DNA‏ فرعية ثلاثية الحلقات؛ في بعض الحالات؛ قد تكون مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ مكونة بالكامل من وحدات ‎DNA‏ فرعية ثلاثية الحلقات.
تكون وحدات التراي سيكلو-فوسفورو ثيوات الفرعية عبارة عن وحدات تراي سيكلو ‎DNA‏ فرعية بروابط ‎Bang‏ فرعية داخلية من فوسفورو ثيوات. يتم وصف وحدات تراي سيكلو -فوسفورو ثيوات فرعية وتخليقها في نشرة الطلب الدولي رقم 053928/2013 ؛ التي تم تضمينها هنا كمرجع بأكملها. قد تتضمن مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف واحدًا أو أكثر من وحدات ‎DNA‏ فرعية ثلاثية الحلقات؛ في بعض الحالات؛ قد تكون مترافقات الأوليجومرات
0 المضادة لاتجاه النسخ مكونة بالكامل من وحدات ‎DNA‏ فرعية ثلاثية الحلقات. يتم فيما يلي إيضاح مثال غير حصري على وحدة ‎DNA‏ فرعية ثلاثية الحلقات/فوسفورو ثيوات ثلاثي الحلقات: ‎oda.‏ ‎y re QL‏ قاعدة = ‎Nd‏ ‏تراي ‎PNAS‏ ‏6. أوليجومرات 02”-ميثيل ‎(MOE-"02‏ و2:-ح تحمل جزيئات "أوليجومر 2:-6/-0" مجموعة ميثيل عند الوحدة البنائية 01-2 من جزيء 5 الرببوز. يُظهر ‎Me~RNAS-0-"2‏ نفس السلوك ‎of)‏ السلوك المشابه) الخاص ب ‎(DNA‏ ولكنها تكون محمية ضد تحلل إنزيم نيوكلياز. ‎Lad (Sar‏ دمج ‎ME-RNAS—0—"2‏ مع أوليجومرات من فوسفورو ثيوات ‎(PTOS)‏ للتثبيت بشكل إضافي. يمكن تخليق أوليجومرات 146-702 (فوسفو داي إستر أو فوسفو ثيوات) وفقًا للتقنيات الروتينية في المجال (انظر؛ على سبيل ‎Yoo «Jbl‏ ‎cet al., Nucleic Acids Res. 32:2008-16, 4‏ التي تم تضمينها هنا كمرجع 0 بأكملها). يتم فيما يلي إيضاح مثال غير حصري على أوليجومر 46-702ا:
— 4 4 — 4 ‎a FB‏ ع 7 1 ب" . ‎AO‏ ‏+ ال ‎a A‏ 8 ‎CY‏ ‏ما ‎DOH,‏ 5 ‎Me-> O2‏ تحمل أوليجومرات 2 "-ميثوكسي إيثيل ‎(O MOE-"2)‏ مجموعة ميثوكسي إيثيل عند الوحدة ‎dali)‏ 011-72 من جزيء الريبوز وتتم مناقشتها في ‎Martin et al., Helv.
Chim.
Acta,‏ 1995 ,486-504 ,78( التي تم تضمينها هنا كمرجع بأكملها. يتم ‎Lad‏ يلي إيضاح مثال غير حصري على وحدة 02 ‎MOE-’‏ فرعية: $ ‎B‏ 0 ‎N 7 i‏ ‎Oome‏ ? ‎MOE‏ ‏تتضمن أوليجومرات 2”-فلورو (2”-) شق فلورو عند الموضع 2” بدلًا من 2701. تم أدناه وصف مثال غير حصري لأوليجومر 2”-]. 8 1 ‎Ow‏ ‏ع« ‏0 ‎B‏ ‎TY |‏ ‎o F‏ 9 ‎Om‏ ‏10 9 ‎F-"2‏
— 5 4 — تم ‎Lind‏ وصف 2”-فلورو أوليجومرات في 2004/043977 ‎(WO‏ والذي أدرج بالكامل ضمن مراجع هذه الوثيقة. كما تشتمل أوليجومرات 02”-ميثيل» 02 ‎F725 (MOE="‏ على واحدة أو ‎ST‏ من وصلات الفوسفورو ثيوات ‎(PS)‏ على النحو الموصوف أدناه. : ال ا ‎F 0 O 0 OCH,‏ 0 مدن ‎~"ock,‏ يدن مد لبا كا ا ‎OL 0 OCH,‏ 0 !0 ‎S OCH, 5 ° 5 5‏ 5 5 02 -ميثيل ‎F PS-"2 MOE 08-02 PS‏ بشكل إضافى؛ قد تشتمل أوليجومرات 02”-ميثيل» ‎(MOE="02‏ و2”-] على روابط ‎PS‏ وحدة فرعية داخلية خلال الأوليجومر؛ على سبيل المثال» كما في درايسابرسين من أوليجومر 02”- ميثيل ‎PS‏ الموضح فيما يلي:
2 Bd 0 8 ‏لان بلط‎ ٍ LON a 8! 0" ‏م د ا لان‎ £08 ‏ااا ا مي نذا‎ 3 Ho aon Le ‏وكيا‎ 5 SN N 8 ‏ا‎ i nN ‏لمحق‎ Ena Bega ‏ب‎ CR ‏دق‎ FE ae GN 1 YY on i 28 L > 0 ‏ا‎ i» 7 ‏قا‎ ُِ 5 4 Hy an ie fe ‏أب حرا‎ ‏اق 7 وان‎ TE ‏وان‎ The 0 pes 0 Ld 8 5 8 i 3 A
N 8 8 ‏ض‎ ‎: 8 8 I)
Noob ‏ال ٍ ل‎
Sa 3 ~H HN i MN N ‏بحي 3 إن ل م‎ MN MN i i i ‏وخ‎ - hele SR ne SH SEs met 8 2 8 > % oi r ‏ل‎ 0 os N H 0 2 =. 8 ‏ل‎ 8 8 x, 0 0 ‏للم‎ i ¥ ” [ 8 Sa 3 “ion eX ¥ J Gol ke don ~~ ‏ا‎ ‎8 NN + iN 3 a NG 8 ‏حب اح ص ا حب‎ = ax aa ‏ل © 9 ال © 9 ال‎ a 0 R a BM he 3 8 1 8 Boa : N 1 TN Se ALN a 3
Tom wy we ‏يوذ .ل‎
Cea - 2 a : ‏لأحيخن‎ ١ ‏ونوا 0 ابه‎ ‏ل‎ Sole A oF Oey ] AE : 8 Se ‏ل ول‎ a Le Fan d © 30 on YY oy 0 {on 18 ne ny i TN — Le _ Lge les ‏ب‎ i
A A 5 1 5 8 ‏اليد‎ 5 0 Ln
Ld
LJ 1 2 Z ‏ل‎ ANG f= i] fo By ‏م 0 ب‎ \ : 4 ْ Sy Sh RM HE 4 : { WI 4 4 En, 4 Ge 1 7 0 “i ‏ا 077 ال‎ : 8 3 £N Wd 8 8 ‏ا ا‎ 3 8 i = 8 8 ‏اموا‎ 8 8 SE a 0 1 =r ‏احا‎ | 8 oo . are ‏حا‎ L Yi on ‏لال 9 لإ كد “ا لقبم“ 9 ابي ف‎ oS SR = ‏سك سب‎ -90 -9 5 8 Nh > 7 > CO) - i ne .
PS ‏على روابط‎ F 2 ‏و/أو‎ {MOE 02 ‘ ‏على نحو بديل » قد تشتمل اوليجومرات 02 ميثيل‎ ‏عند نهايات الأوليجومر كما يوضح فيما يلي:‎
‎RO 1‏ ‎Nr‏ ‎Fan :‏ ‎OF OR :‏ ا " ااا ‎Soe dx‏ 2 با ‎oO 3‏ : ام ‎Een ٍ‏ من "هه الوا # 1 مل ‎WA‏ ‏5 8 ا ‎i “sh ¥‏ ‎a7‏ ‎“Or‏ ‎d :‏ 5 ‎Sug, :‏ ; : : م : . اخ لبك ‎wd ber |‏ ‎L Jz‏ حيث: تكون ‎Bile R‏ عن 0112011206113 (ميثوكسي ‎Ji)‏ أو ‎¢(MOE‏ و ‎Xun‏ لاء و2 إلى عدد من النوكليوتيدات المتضمنة داخل واحدة مما يُطلق عليه مناطق الجناح 5اء والفجوة المركزية؛ والجناح 3؛ على الترتيب. يمكن أن تدمج مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ وفقًا للكشف واحدة أو أكثر من وحدات ‎(MOE 02 (Jin 2‏ و2”-ح الفرعية ويمكن أن تستخدم أي من وصلات الوحدات الفرعية المتداخلة التي ورد وصفها بهذه الوثيقة. في بعض الأمثلة؛ يمكن أن يتألف مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ وفقًا للكشف ‎LIS‏ من وحدات 02”-ميثيل» 02 ‎(MOE="‏ أو ‎F220 0‏ الفرعية. ‎Cally‏ أحد تجسيدات مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ وفقًا للكشف ‎LIS‏ من وحدات 02" -ميثيل الفرعية. 7. أوليجومرات 0-2-[2-(1١-ميثيل‏ كريامويل)إيثيل ] ‎(MCEs)‏
— 8 4 — تعتبر ‎MCEs‏ مثالاً آخر على رببونوكليوزيدات معدلة ب 02” مفيدة في مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف. هناء يتم اشتقاق ‎"OH2‏ لشطر 2-(10-ميثيل كربامويل)إيثيل لزيادة مقاومة إنزيم النيوكلياز. يتم ‎lad‏ يلي إيضاح مثال غير حصري على أوليجومر ‎:MCE‏ ‏0 ‏:0 ‎Ro‏ ‎HOS 0 |‏ ‎Onn HEH,‏ 0 8 ‎i 0 74‏ ‎Cy‏ ‎ome Sno‏ ‎Ton 0 |‏ / ىن 011055 رخص 9 )0 ee 0 An
Tp 10 L As
Te N 0
QHD NHCH,
IRS
MCE
Yamada et al., J. Org. Chem. (2011) ‏وتخليقها في‎ MCES ‏يتم وصف‎ ‏التي تم تضمينها هنا كمرجع بأكملها. قد تتضمن مترافقات الأوليجومر‎ (76(9):3042-53 ‏الفرعية.‎ MCE ‏من وحدات‎ SST ‏المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف واحدة أو‎ ‏الأوليجومرات النوعية الفراغية‎ .8 0 ‏تعتبر الأوليجومرات النوعية الفراغية هي تلك التي يتم تثبيت الكيمياء الفراغية الخاصة بكل رابط‎ ‏محتوي على فوسفور بواسطة طريقة تخليق بحيث يتم إنتاج أوليجومر فراغي نقي إلى حدٍ كبير. يتم‎ ‏فيما يلي إيضاح مثال غير حصري على أوليجومر نوعي فراغي:‎
— 9 4 — ‎B‏ ‏0 ‎R‏ ‏2° ,\ > 8 > 00 0 = ‎n‏ ‏في المثال السابق؛ يكون لكل فوسفور خاص بالأوليجومر نفس التشكيل الفراغي. تتضمن الأمثلة الإضافية الأوليجومرات الموصوفة ‎Lad‏ سبق. على سبيل ‎(Jl‏ يمكن تحضير الأوليجومرات التي أساسها ‎(LNAS‏ قطلاع؛ مركبات تراي سيكلرو-ملات ‎(MCEs‏ 02 ”ميقل ‎(MOE-"02‏
2-2 ومورفولينو باستخدام روابط نوكليوزيد داخلي محتوية فوسفور نوعي فراغي مثل؛ على سبيل المثال؛ فوسفورو ثيوات؛ فوسفو داي إسترء فوسفورواميدات؛ فوسفورو داي أميدات؛ أو روابط التوكليوزيد الداخلية المحتوية على الفوسفور الأخرى. يتم ذكر الأوليجومرات النوعية الفراغية» طرق التحضير تخليق استقطابي متحكم فيه؛ تصميم استقطابي؛ ومواد مساعدة استقطابية للاستخدام في تحضير هذه الأوليجومرات بالتفصيل؛ على سبيل المثال؛ في البراءات الدولية :
2017192664 « 2017192679 « 2017062862 « 2017015575 « 2017015555 « 2015107425 « 2015108048 « 2015108046 « 2015108047« 2012039448 2010064146« 2011034072 2014010250« 2014012081« 8 و 2011005761 « التي تم تضمين كل منها هنا كمرجع بأكملها. قد يكون للأوليجومرات النوعية الفراغية وصلات نوكليوتيد داخلي محتوية على فوسفور في تشكيلة 5 4 أو ‎SP‏ تعد الوصلات الاستقطابية المحتوية على فوسفور التي يتم فيها مقارنة التشكلية الفراغية للوصلات 'نقية فراغيًا؛ في حين أن الوصلات الاستقطابية المحتوية على فوسفور التي لا يتم فيها مقارنة التشكلية الفراغية للوصلات يُطلق عليها "عشوائية فراغيًا". في تجسيدات معينة؛
تشتمل الأوليجومرات وفقًا للكشف على مجموعة من الوصلات النقية والعشوائية ‎(Gals‏ بحيث يكون للأوليجومر الناتج وحدات فرعية تقية فراغيًا عند المواضع المحددة مسبقًا من الأوليجومر. وقد ورد مثال لموقع الوحدات الفرعية النقية فراغيًا في نشرة طلب البراءة الدولية 062862/2017 في الشكلين 17 و7ب. في أحد التجسيدات؛ تعد جميع الوصلات الاستقطابية المحتوية على فوسفور في الأوليجومر عشوائية فراغيًا. في أحد التجسيدات؛ تكون جميع الوصلات الاستقطابية المحتوية على فوسفور في الأوليجومر نقية ‎ahd‏ ‏في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎N‏ ‏رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو ‎(OS‏ تكون كل ‎٠‏ في الوصلات الاستقطابية المحتوية على فوسفور في الأوليجومر عشوائية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية 0 على فوسفور (حيث تكون ‎n‏ رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ تكون كل ‎٠‏ في الوصلات الاستقطابية المحتوية على فوسفور في الأوليجومر نقية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات 0 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎Nn‏ رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ تكون على الأقل 9610 (إلى أقرب رقم صحيح) لوصلات ‎N‏ المحتوية على فوسفور في الأوليجومر نقية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎٠‏ استقطابية محتوية على 5 فوسفور (حيث تكون 0 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ تكون على الأقل 1620 (إلى أقرب رقم صحيح) لوصلات « المحتوية على فوسفور في الأوليجومر نقية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات 1 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 7 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ تكون على الأقل 9630 ‎J)‏ أقرب رقم صحيح) لوصلات ‎ginal nN‏ على فوسفور في الأوليجومر نقية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية 0 على فوسفور (حيث تكون 0 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ تكون على الأقل 1640 ‎J)‏ أقرب رقم صحيح) لوصلات ‎nN‏ المحتوية على فوسفور في الأوليجومر نقية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات 1 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 7 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ تكون على الأقل 9650 ‎J)‏ أقرب رقم صحيح) لوصلات ‎Nn‏ المحتوية على فوسفور في الأوليجومر نقية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية 5 على فوسفور (حيث تكون ‎n‏ رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ تكون على الأقل 1660 ‎J)‏ أقرب
رقم صحيح) لوصلات ‎nN‏ المحتوية على فوسفور في الأوليجومر نقية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات 1 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 7 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ تكون على الأقل 9670 ‎J)‏ أقرب رقم صحيح) لوصلات ‎ginal nN‏ على فوسفور في الأوليجومر نقية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 0 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ تكون على الأقل 9680 (إلى أقرب رقم صحيح) لوصلات ‎nN‏ المحتوية على فوسفور في الأوليجومر نقية فراغيًا. في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات 1 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 7 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ تكون على الأقل 9690 ‎J)‏ أقرب رقم صحيح) لوصلات ‎ginal nN‏ على فوسفور في الأوليجومر نقية فاغيًا.
0 في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎N‏ ‏رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو ‎(LST‏ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 2 وصلات متجاورة نقية ‎Gali‏ ‏محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من 50 أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات 1 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 7 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 3 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على
5 فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات 0 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎WN‏ صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 4 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎nN‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎Nn‏ رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على
0 الأقل 5 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ ‏أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎Wyn‏ صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 6 وصلات متجاورة نقية ‎Geld‏ محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎Nn‏ رقمًا
5 صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)» يحتوي الأوليجومر على على الأقل 7 وصلات متجاورة نقية ‎Gal‏
محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات 1 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 7 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 8 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات « استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 0 ‎Ud)‏ صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)» يحتوي الأوليجومر على على الأقل 9 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎nN‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎Nn‏ رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 10 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ ‏0 أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 0 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 11 وصلات متجاورة نقية ‎Geld‏ محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎Nn‏ رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)» يحتوي الأوليجومر على على الأقل 12 وصلات متجاورة نقية ‎Gah‏ ‏5 محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من 50 أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات 1 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 7 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 13 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات 0 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎WN‏ صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي 0 الأوليجومر على على الأقل 14 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎(RP SP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎nN‏ ‏استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎Nn‏ رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 15 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على 5 فوسفور (حيث تكون # رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 16 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏
— 3 5 — فى أحد تجسيدات ‎١‏ لأوليجومر ‎All‏ لها وصلات ‎N‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎Nn‏ ‏رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو ‎(LST‏ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 17 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه ‎abil‏ (أي من 50 أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات # استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون 7 رقمًا صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)» يحتوي الأوليجومر على على الأقل 18 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات ‎n‏ استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎ad) n‏ صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر) 3 يحتوي الأوليجومر على على الأقل 19 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه ‎alll‏ (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ في أحد تجسيدات الأوليجومر التي لها وصلات 7 0 استقطابية محتوية على فوسفور (حيث تكون ‎Wd) Nn‏ صحيحًا يبلغ 1 أو أكبر)؛ يحتوي الأوليجومر على على الأقل 20 وصلات متجاورة نقية فراغيًا محتوية على فوسفور لها نفس الاتجاه الفراغي (أي من ‎SP‏ أو ‎(RP‏ ‏9.أوليجومر مورفولينو ات تتعلق التجسيدات النموذجية للكشف بأوليجومر فوسفورو داي أميدات مورفولينو ات له الصيغة 5 البنائية التالية: ‎TT‏ . ‎N‏ ‎H,;C_ |‏ ‎NTP=0‏ ‏ل 3.6 ‎ey"‏ ‎N‏ ‎WS‏ يوصف فى الشكل 12 ‎Summerton, J., et al., Antisense & Nucleic Acid‏ ‎Drug Development, 7: 187-195 (1997)‏ يُقصد أن تُغطي مركبات المورفولينو كما
يوصف هنا كل الأيزومرات الفراغية والمماثئلات الكيميائية الخاصة بالصيغة البنائية العامة السابقة. يتم ذكر السمات المميزة للتخليق؛ الصيغ البنائية؛ والريط الخاصة بالأوليجومرات من المورفولينو بالتفصيل في طلبات براءات الاختراع الأمريكية أرقام 5,698,685 3,217,866« 7 034.506,ي ¢5,166,315 5,521,063 ¢5,506,337 8,076,476« و8,299,206؛ التي يتم تضمينها كلها هنا كمراجع. في تجسيدات معينة؛ يتم ترافق مورفولينو عند الطرف 5 ”أو الطرف 3 "من الأوليجومر مع شطر ‎"LY‏ لزيادة ثباته و/أو قابليته للذويان. تتضمن الأذناب النموذجية: ‎hp‏ ‎HO 3‏ ‎N‏ ‎J‏ hor, ¢ oY ‏صورة‎ 0 NH,
J
0 en ‏صورة ب ؛و‎
OH
0 صورة 0
_— 5 5 _— في تجسيدات متنوعة؛ يكون يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ وفقًا للكشف وفمًا للصيغة )1( ‎T‏ ‎Ne 0 Y Nu‏ ‎N(CH3),‏ ©" 0 ‎Y Nu 5‏ ّ :أ ‎O=—P——N(CHj3),‏ ‏28 ‎J‏ ‎N‏ ‎A‏ ‎HN 0‏ ‎HoN N‏ ‎NH‏ 1 2 ' صورة 0 0(
— 6 5 — أو ملح مقبول ‎Wana‏ منه؛ حيث: تكون كل نالا ‎Ble‏ عن قاعدة نووية يتم أخذها لتكوين متوالية استهداف؛ تكون 1 ‎Ble‏ عن شق يتم اختياره من: 0 0 ‎NH, HO‏ 0 3 ‎N‏ ‏1ج ‎Sy‏ ‎N‏ ‎O=—=P——N(CHj), |‏ ‎O=——=P——N(CH3),‏ ‎OH |‏ ‎J‏ ‏صورة ‎oY‏ ¢ صورة ‎oY‏ ¢ وصورة ¢ تكون ‎R1‏ عبارةً عن ‎C1-C6‏ ألكيل؛ ‎Cun‏ تكون متوالية الاستهداف ‎Lacie‏ لموقع تلدين الإكسون 51 في ديستروفين ‎MRNA‏ الأولي الذي يُطلق عليه ‎H5TA(+66+95)‏ ‎hr‏ ‎HO‏ ‏3 ‏0 ‏ ‎Te‏ ‏0 ‏في تجسيدات متنوعة؛ تكون 1 عبارةً عن صورة ‎oY‏ . فى تجسيدات متنوعة؛ تكون ‎RI‏ عبارةً عن ميثيل» ‎«Jin «CF2CI «CFCI2 0013 (CF3‏ ‎«CF2CF3 » 1203 10‏ بروبيل؛ أيزو بروييل؛ ‎(ign‏ أيزو بيوتيل؛ سيك- بيوتيل؛ ‎-T‏ بيوتيل؛ بنتيل؛ أيزو بنتيل؛ نيو بنتيل؛ هكسيل؛ أيزو هكسيل؛ 3-ميثيل بنتيل؛ 2« 2-داي ‎ine‏ بيوتيل؛ أو 2 3-داي ميثيل بيوتيل.
— 7 5 — في بعض التجسيدات؛ يكون مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ له الصيغة )1( ‎Ble‏ عن حمض ‎HCI‏ (هيدروكلوربك) أو ملح منه. في تجسيدات معينة؛ يكون ملح ‎Ble HO‏ عن ملح ‎.6HCI‏ ‏فى بعض التجسيدات؛ يتم اختيار كل ‎Nu‏ على حدة من سيتوزين ‎«(C)‏ جوانين ‎«(G)‏ ثايمين ‎«(T)‏ ‏5 أدينين ‎o(A)‏ 5-ميثيل سيتوزين ‎(SMC)‏ يوراسيل (لا)؛ وهيبوكسانثين )1( في بعض التجسيدات»؛ تكون متوالية الاستهداف هي المتوالية رقم: 1 (-5 ‎((CTCCAACATCAAGGAAGATGGCATTTCTAG-3’‏ حيث تكون كل ثايمين ‎(T)‏ ‎Ble‏ عن اختياريًا يوراسيل (لا). ‎HO‏ ‏3 ‎N‏ ‏)0 ‎A‏ ‏ ‏0 ‏في تجسيدات متنوعة؛ تكون ‎pace ble T‏ 7# ؛» وتكون متوالية 0 الاستهداف هي المتوالية رقم:1 (-5 ‎((CTCCAACATCAAGGAAGATGGCATTTCTAG-3’‏ حيث تكون كل ثايمين ‎(T)‏ ‎Ble‏ عن اختياريًا يوراسيل (لا). ‎HO‏ ‏3 ‎N‏ ‏0 ‏يواه ‏ ‏0 ‏في تجسيدات متنوعة؛ تكون ‎pace ble T‏ 7# ؛» وتكون متوالية الاستهداف هي المتوالية رقم:1 (-:5 ‎.(CTCCAACATCAAGGAAGATGGCATTTCTAG-3" 5‏
— 5 8 —
في يعض التجسيدات؛ بما في ذلك على سبيل المثال؛ يعض التجسيدات التي لها الصيغة 10 يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ وفقًا للكشف وفقًا للصيغة (اا): صورة
> 3! HN NH, HN NH, HN NH,
‎Nu Nu SH I 1‏ 0 ‎Ur oN oN @ nw £9 | J, 1 J.‏ 5 98 2 1 0 !1 0 الت ‎Ne 5 You Ny Nn‏ و ‎HO‏ ‏0 0 0 0 وجا ‎HC”‏ ال ‎CH,4 3‏ 3 ‎HN HN HN‏ 29 ‎aS EW NS‏ ‎(nh 5‏ أو ملح مقبول ‎Wana‏ منه؛ حيث: تكون كل ‎Ble NU‏ عن قاعدة نووية يتم أخذها لتكوين متوالية استهداف متممة لموقع تلدين الإكسون 51 في ديستروفين ‎MRNA‏ الأولي الذي يُطلق عليه (66+95+)151/8. في بعض التجسيدات؛ يتم اختيار كل ‎Nu‏ على حدة من سيتوزين ‎«(C)‏ جوانين ‎«(G)‏ ثايمين ‎«(T)‏ ‏0 أدينين ‎«(A)‏ 5-ميثيل سيتوزين ‎(SMC)‏ يوراسيل (لا)؛ وهيبوكسانثين )1( في تجسيدات متنوعة؛ تكون كل ‎NU‏ من 1 إلى 30 و5" إلى 73 ‎Ble‏ عن (المتوالية رقم:1): ‎١ 0106[١ [0]0104]| [0]0102]| ]0١ ]099[ [O| [097]‏ 0] |]0108 ]0[ 98 10 |[ 10 |[ 10 |[ 10 |[ 10
‏رقم [ ارقم ]1 ]3 ]5 ]7 ]9 الموض الموض رقم رقم رقم رقم
‏ع5 ‎N|‏ اع ‎١ N‏ الموض ‎١ N|‏ الموض ‎N|‏ | الموض ‎N| ١‏ | الموض ‎١‏ لا
‏إلى ‎ul 5 ul 5 ul 5 u ul’3‏ 5 آنا
‎< < < <1 "| o100] ‏إلى‎
‏إلى 3 إلى 3 إلى 3 إلى 3
_— 9 5 _— إلى 3 [0|0120]| [0]|0118]| ]0 0116[ ]0 0114[ ‏[0110ا0] [0112 ا0]‎ 12 ] ١ 1 ] ١ 1 ] ١ 1 [11 [11 [ 1] 9] 7] 5] 3] 1] 26 21 16 11 6 1
X G A A A 0
[0]0132]| [0(0130]| ]0 ١ 0128[ [0|0126]| [0|0124]| [0]0122] 13 [| 13 [| 12 [| 12 [| 12 [| 12 [ 3] 1] 9] 7] 5] 3] 27 22 17 12 7 2 0 0 G A 0
[0]0144]| ]0 ١ 0142[ ١ ]0 ١ 01401١ [0|0138]| [0|0136]| ‏([0134ا0]‎ ‎14 [| 14 [| 14 [| 13 [13 [| 13 [ 5] 3] 1] 9] 7] 5] 28 23 18 13 8 3
X A A G A 0 ]0 ١ 0156١ [0|0154]| 0 ١ ‏حا‎ 10١ 0150١ [0|0148]| ]0١ 0146] ]١ 15 ]١ 15 ] ١ 15 [| 14 [| 14 [ 7] 5] 3] 1] 9] 7] 29 24 19 14 9 4
A X X G X 0
[0]0168]| [0|0166]| [0|0164]| [0|0162]| [0|0160]| ]0١ 015 16 [| 16 [| 16 [| 16 [| 16 [| 15 [
— 0 6 — ‎ol‏ ]1 ]3 ]5 ]7 ]9
م 0 ‎G X G A‏ ‎NH, HN‏ ‎=N‏ ‎SN N‏ ‎C fo‏ ‎No 4 N‏ حيث تكون ‎le A‏ عن صورة ‎mhe‏ ؛ تكون © ‎Ble‏ عن صورة ‎br‏ ؛ تكون 6 ‎Ble‏ ‏9 0 0 ل ‎HN NH N‏ ‎A | | A { 1 PN,‏ ‎N‏ 7م 0 ل 0 عن صورة سأ ؛ وتكون ‎Ble X‏ عن صورة أو صورة سل ...في 0 ‎H‏ .ا ‎No‏ ‏تجسيد ات معينة؛ تكون ‎XK‏ عبارة عن صورة ‎wl.‏ على حدة.
5 في بعض التجسيدات؛ يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة )11( يكون ‎Bile‏ عن حمض ‎HCI‏ (هيدروكلوربك) أو ملح منه. في تجسيدات معينة؛ يكون ملح ‎Sle HOI‏ عن ملح ‎6HCI‏ ‏فى يعض التجسيدات؛ بما فى ‎eld‏ على سبيل المتال؛ يعض التجسيدات التى لها الصيغة ) ‎ol‏ ‏يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ ‎Gay‏ للكشف ‎By‏ للصيغة (هاا):
10 صورة ‎ny my ny‏ !3 > 5 ‎Nu Nu‏ 0 ‎Jo ’ Pp‏ ل ب 0 0 0 ‎Ura‏ ‎NA N_ A‏ ملا ‎HO.
No Nap N‏ ‎.6HCI‏ خض 7 ‎H nN pe 7 oy‏ ‎CH, CH;‏ 3 ‎HN HN HN‏ 29 ‎WN NS NS‏
_— 1 6- ‎(IIA)‏ ‏حيث تكون كل ‎Ble NU‏ عن قاعدة نووية يتم أخذها لتكوين متوالية استهداف متممة لموقع تلدين الإكسون 51 في ديستروفين ‎MRNA‏ الأولي الذي يُطلق عليه ‎H51IA(+66+95)‏ ‏في بعض التجسيدات؛ يتم اختيار كل ‎Nu‏ على حدة من سيتوزين ‎«(C)‏ جوانين ‎«(G)‏ ثايمين ‎«(T)‏ ‏5 أدينين ‎o(A)‏ 5-ميثيل سيتوزين ‎(SMC)‏ يوراسيل (لا)؛ وهيبوكسانثين )1( في تجسيدات متنوعة؛ تكون كل ‎NU‏ من 1 إلى 30 و5 إلى 3" ‎Ble‏ عن (المتوالية رقم:1): ‎]0١ 0180[١ [0|0178]| [0]|0176]| [0|0174]1| [0|0172]| [0] 0170]‏ [ 17 |[ 17 |[ 17 |[ 17 |[ 17 |[ 18 ]1 ]3 ]5 ]7 ]9 ]1 رقم رقم رقم رقم رقم رقم الموض ‎١‏ ل | الموض | ل ‎١‏ الموض ‎١‏ ل | الموض ! لا | الموض !| ‎١ NJ‏ الموض | لا ‎S5¢‏ انا اع5' انا اع5 ان اع5 ان ‎'Sg|‏ ان اع5 ‎ul‏ ‏إلى 3" إلى 3" إلى 3" إلى 3" إلى 3 إلى 3 ‎]010192[١ [0]0190]| [0]0188]| [0|0186]| [0|0184]| ]0١ 0182]‏ [ 18 |[ 18 |[ 18|[ 18 |[ 19 |[ 19 ]3 ]5 ]7 ]9 ]1 ]3 1 6 11 16 21 26 ‎X G A A A C‏ ‎١ 02041١ [0]0202]| [0]0200]| [0]0198]| [0]0196]| [0] 0194]‏ 0] [ 19 |[ 19 |[ 19 |[ 20 |[ 20 |[ 20 ]3 ]7 ]9 ]1 ]3 ]5 2 7 12 17 22 27 ‎C C G A C X‏
— 6 2 —
[0] 0216] | [0|0214]| [0]0212]| [0] 0210]| [O|0208]| [0 | 0206] 21 [| 21 [| 21 [| 21 [| 20 [| 20 [ 7] 5] 3] 1] 9 7] 28 23 18 13 8 3
X A A G A 0
[0] 0228] | ]0|0226[ ]0 0224[ [0]0222]| [0|0220]| [O| 0218] 22 [| 22 [| 22 [| 22 [| 22 [| 21 [ 9] 7] 5] 3] 1] ol 29 24 19 14 9 4
A X X G X 0 ]0 | 0240[١ [0|0238]| ]0 0236[ ‏ا[0234ا0]‎ [0|0232]| ]0| 0230[ 24 [| 23 [| 23 [| 23 [| 23 [| 23 [ 1] 9] 7] 5] 3] 1] 25 20 15 10 5
G X G A 0 ‏م‎
— 3 6 — ‎NH, HN‏ ‎N 5.‏ . 0 / ‎N‏ 5 ملس حيث تكون ‎Ble A‏ عن صورة ‎mn‏ ؛ تكون © ‎Ble‏ عن صورة ‎me‏ ؛ تكون ‎Ble G‏ 9 0 0 ‎HN 8 NH N je‏ دم \ / ‎N ’‏ 5 ولس دض عن صورة سل , وتكون ‎Ble X‏ عن صورة سل أو صورة سام .في 0 ‎H‏ .ا ‎No‏
تجسيدات معينة؛ تكون كل ‎te Ble X‏ سل .
فى بعض التجسيدات بما فى ذلك؛ على سبيل المثال» تجسيدات مترافقات الأوليجومرات المضادة الاتجاه النسخ والتي لها الصيغة ‎(Il)‏ والصيغة (هاا)» تكون متوالية الاستهداف هي المتوالية رقم:1
‎Cua (5° ~-CTCCAACATCAAGGAAGATGGCATTTCTAG-3’)‏ تكون كل ثايمين
‎le (T)‏ عن اختياريًا يوراسيل (لا). في تجسيدات متنوعة بما في ذلك؛ على سبيل المثال»
‏تجسيدات مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ والتي لها الصيغة ‎(I)‏ والصيغة (هاا)؛
‏تكون متوالية الاستهداف هي المتوالية رقم:1 (-:5
‎.(CTCCAACATCAAGGAAGATGGCATTTCTAG-3’ 0
‏فى بعض التجسيدات؛ بما فى ذلك؛ على سبيل ‎(JU‏ تجسيدات مترافقات الأوليجومرات المضادة
‏لاتجاه النسخ والتي لها الصيغة (ا)؛ يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ وفقًا للكشف
‏وفقًا للصيغة (١ا١):‏
— 4 6 — ‎TN gy‏ ألا ري ‎a‏ : : الفاصل ‎a‏ الفاصل ب الفاصل ‎i‏ م ‎ddr‏ اام ل وس ال اعم الب ‎adm TR eA +‏ 7 لاه ‎PL‏ الخ 0 ل 127 1 7 لاا : 0 ‎A ’ dg «8 ed a es a wb wn *‏ . ‎ORE TR Tier Te‏ ب ‎Uy LA LE‏ وو رض رالا ‎TY‏ سس اذ عم الل ‎AR Plates, Cet ye he‏ »> ‎Lod ey Se ha‏ لمن ‎i J ¥ Ld‏ 3 ب ‎hed Ry & 7 hy‏ 1 با حي ‎ed‏ + للق“ خخ ا لبا ا ‎ES 3 i do F‏ | + امك ‎wy CEN = I wv He‏ تل :0 ‎Sa:‏ ا الأجم ‎“dng‏ ‏بن ‎He Soret > Tl YR He, FR‏ لسك # عد لال »الك اي انك ‎LDR‏ لا ا ا مساق ‎Cy CTLs Try‏ ما حيصا > ‎EE 0 AL we, “ey pho‏ ل ‎ny‏ ‎Chery 1‏ ايا ِ رحبا ‎i Lo‏ 1 2خ : ‎be‏ ‏ا 271 2 ب 0 ‎ie Ea Tey‏ ‎or > SEY +L ry‏ ! ‎Nan” 37 + . et : ٍ‏ ب م ٍ وحوح ا ل حا ب 0 ‎Ti‏ ‏اي يدا ليه دلا 257 0 ‎SS‏ 1 ري ‎Try LTRS‏ صور 0 الفاصل = الفاصل ب الفاصل 1 )1( ‎i‏ 2 “ أو ملح مقبول صيدليًا ‎Ada‏ ‏0 ب - 0 ‎wl oe‏ 1 . اي * .> - 2 في يعض التجسيدات ‘ يكون مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ له الصيغة ) ‎Ji‏ { عبارة عن ‎pd - 1 -‏ - ب 2 ‎HCI 5‏ (حمض الهيدروكلوريك) أو ملح منه. في تجسيدات معينة؛ يكون ملح ‎HCI‏ عبارة عن ملح ‎.6HCI‏ ‎٠ . -‏ 5 £ فى بعض التجسيدات » ‎La‏ فى ‎eld‏ على سبيل المتال؛ تجسيدات مترافقات ‎J‏ لأوليجومر المضادة اج - - - .و - - حي ًُ ‎٠‏ اج - - ‎x‏ 2 لاتجاه النسخ والتي لها الصيغة ) ‎Il‏ { ¢ يكون مترافق | لأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ ‎Lad‏ للكشف ‎Ug‏ للصيغة ‎(INIA)‏
— 5 6 — صورة ‎Faget Fae .‏ الفاصل ‎a‏ الفاصل ب الفاصل ‎i‏ 1 © ‎Fr i - A - 4 bs‏ ‎ia © 7 0‏ 08 ب ‎iin . pr > i ey ٍ 3 3 he‏ ل مي يو ضيح الا ال ‎Li 0 oY‏ ايم ‎i Lobe” 5‏ يا جاب ار اشح ‎at TN‏ م الا 7 وو ال ‎eh me whe WN‏ ‎Fe A THR asd 4‏ يا ارا ل للب ‎Ther Saas‏ الاج ‎Ne‏ ‎Ra Hes‏ 3 3 الك ‎i‏ ‎te why Ey “yy TE Ey Po oy‏ يا : كيام ل" > ‎CEA ot FON‏ كني الاج ‎OG‏ صن ال 3 { ‎fon,‏ : 3 : ب ا 7 ‎Hees‏ . رح حمق 8 881 > ‎“i pl ie‏ . من ا ‎Lar [ERC Ce‏ ومح ‎TXT Ay HH‏ بام ‎ee‏ الحا يا لم 0 الاي ‎Sey EN 4 0‏ : اللا يا : عطي 0 ‎i Lo‏ ‎oF‏ 1 , العم ب ‎Ne‏ ليا ‎Ww oo yr SE Hae‏ > ريام حب انيدهي بحاي ‎yr TE‏ يداني ا اب ها ¥ ‎FE ad‏ ‎UX CS Lid‏ 1 حلم ‎hr Ww‏ م ام ‎i‏ 4 > ار 2 ‎ps‏ ‎UL a te‏ اا : ال ال 71 ب طاح ‎YE‏ ‎rs on‏ ا اا 1 3 ‎NR Ral‏ 4 اجر ‎“UR pg WIRY‏ ااا ايا ‎RE EE 7 Ay A‏ ‎TY Lyd [SR‏ ا : ‎i‏ ‏الفاصل ب الفاصل ب الفاصل ‎i‏ ‎(IIIA)‏ ‎os Za - “ a‏ . . . ع فى بعض التجسيد ات ‎Lo cass lad‏ فى ذلك لس الا ات مترافقات | لأوليجومر المضادة ع لاتجاه النسخ والتي لها الصيغة )1( وتجسيدات مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ والتي .م ‎٠‏ هي و : - ‎x - - a‏ 2 لها الصيغة ) ‎Il‏ ( 3 يكون مترافق ‎J‏ لأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ وفقا للصيغة ‎(IV)‏ :
صورة : وي صر الام محص اليج الفاصل = القاصل ب الفاصل أ م ملل 0 الك حك هد اي 0 اي يداني : اال ا ار * اك ام ’ اللا 31 ," ا ا ب ! 0 ل ‎sp‏ ‎NG tn Tw Sw‏ حب للخم مركا ا 3 ‎A ae ٠‏ با د الما ات ا أ انا ل ‎Cr LT‏ ‎ee TRL SE‏ الا ‎Nl ni WAY em‏ 071 اث لامي ا ‎Tet‏ ماني ‎SEAN A PA‏ ‎od‏ اكيبا ‎To‏ الي ‎ag A : ht i, a 7‏ ان ‎oy Fa‏ ل 3 * ما ال ‎iE‏ ع ااا ايم بح ب اا ‎Pet A Sa TR‏ ‎few” Cr 1 pee Hs‏ 4 ب 3 11 اك ‎Fh - oe‏ . يحب راك : ‎NY‏ جد ‎ok SF‏ ‎al > 7 ag ~ 7 i oF et i‏ ب بك ّ ‎fle 8 ion wenn KL‏ 8 " ايحا ال - 0 ) 27 ‎EE i Is RH SUEY . ha‏ ييح ‎eng wl‏ ارتب ‎NYE TY‏ الحا ‎i Sn a ES Hang Ae‏ . 3 ب . 5 . ‎١‏ > ‎i An Se 2h se TRY FF AD ;‏ ‎i * Ea‏ لب تب : مي 0 ‎LAE re Ao‏ 8 ,أ يخ ‎ry Crs‏ ‎i =:‏ : 5 3 ) 3 ‎EY oY‏ حا ‎NUE‏ الم ‎REE‏ ‎oat PN ST ph eT‏ 7 ‎Nore cr‏ ‎og :‏ ب ا 3 ‎y oy‏ ا ب ‎ge‏ الم 0 4 - ‎PUA a‏ ال ماني ف اف 7 ‎NYY Sat Cr‏ ‎ay‏ £ 8 : : الفاصل جب الفاصل ب الفاصل 1 ‎(V)‏ ‏£ - 0 أو ملح مقبول صيدليًا منه. 0 ب - 0 ‎wl oe‏ 1 . ايم * 0 - 2 في ‎an‏ التجسيدات ‘ يكون مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ له الصيغة ‎(IV)‏ عبارة عن 1 * اج 2 . 5 . - - . . 0 ‎HCI‏ (حمض الهيدروكلوريك) أو ملح منه. في تجسيدات معينة؛ يكون ملح ‎HCI‏ عبارة عن ملح ‎.6HCI‏ ‎٠ . ٠‏ - £ فى بعض التجسيد ات؛ ‎Lo‏ فى ‎eld‏ على سبيل المتال؛ تجسيدات مترافقات ‎J‏ لأوليجومرات المضادة اج - - - .و - - حي ًُ ‎٠‏ اج - - ‎x‏ 2 لاتجاه النسخ والتى لها الصيغة ‎(IV)‏ ¢ يكون مترافق | لأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ ‎Lad‏ للكشف ‎Gy 0‏ للصيغة ‎(IVA)‏
— 7 6 — صورة : الفاصل = !ٍ الفاصل ب الفاصل ! ا مج ‎TE‏ كارن لبا اص الب ‎xo i A ' 0‏ ب ‎ss OY‏ ‎Te‏ الاين اانا ليت ‎a Fol rtd Tet Fp 78‏ 34 ‎pt hy - 0‏ اد ف« ب تخي ا 01 * أن لاد م 1 ّ| ليشي م أ عش الا + 71 ‎i 0"‏ 8 اليد ٍ ليبا 8 ‎HE “ord‏ ليربا ‎RRS‏ للم حي حم امن 8 م 8 ‎wn‏ § ‎IE‏ ارا هوت اسح ‎EL‏ ‏6 لأس ألا نج 8 ا حب 2 ‎i Sey TE Ne‏ ‎“ot oh > why wr‏ جد الكت لب > تين 1 ~ ميل + ‎f‏ + ب ‎Sd 3 ti i‏ 15 راربا ا لاس اا ال ا ليم ) ‎i‏ ب ‎TNE Try‏ اح ْْ ‎NEE ye‏ ا م وب يم ‎don‏ ‎Lory Eas Nr‏ " الفاصل ج الفاصل ب الفاصل 1 ‎(IVA)‏ ‏0. تعديلات واستبدالات القاعدة النووية في تجسيدات معينة؛ يتم تكوين مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بالكشف من قواعد نووية ل ‎RNA‏ وقواعد نووية ل ‎DNA‏ (غالبًا ما تتم الإشارة إليها في المجال على نحو مبسط باعتبارها 'قاعدة"). تُعرف قواعد ‎RNA‏ على نحو شائع باعتبارها أدنين ()؛ يوراسيل (لا)؛ سيتوزين ‎(C)‏ وجوانين (©). تعرف قواعد ‎DNA‏ على نحو شائع باعتبارها أدنين ‎(A)‏ تايمين ‎«(T)‏ سيتوزين ‎(C)‏ وجوانين (©). في تجسيدات متنوعة؛ تتألف مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ ‎FEE‏ للكشف من سيتوزين ‎(C)‏ ¢ جوانين ‎(G)‏ ¢ ثايمين ‎(T)‏ ‘ أدينين ‎(A)‏ ¢ 5-ميفل سيتوزين ‎«(SMC)‏ يوراسيل (لا)؛ وهيبوكسانثين )1( في تجسيدات معينة؛ قد يتم تعديل واحدة أو ‎SST‏ من قواعد ‎RNA‏ أو قواعد ‎DNA‏ فى أوليجومر أو استبدالها بقاعدة بخلاف قاعدة ‎RNA‏ أو قاعدة ‎DNA‏ تتضمن الأوليجومرات المحتودة على
— 8 6 — 520 معدلة أو مستبدلة الأوليجومرات حيث يتم استبدال واحدة أو أكثر من قواعد البيورين أو البيريميدين الموجودة على الأغلب في الأحماض النووية بقواعد أقل شيوعًا أو غير طبيعية. تشتمل القواعد من البيورين على حلقة بيريميدين مدمجة مع حلقة إيميد ازول ‎٠‏ كما يوصف بواسطة الصيغة العامة التالية: ‎HNC‏ ‏ل 8 الام اج ‎SN TNs‏ ‎H 5‏ 3 يعتبر الأدنين والجوانين هما اثنين من قواعد البيورين النووية الموجودة على النحو الأكثر شيوعًا في الأحماض النووية. تتضمن مركبات البيورين طبيعية الحدوث الأخرى؛ دون قصر الأمر على؛ 6-ميثيل أدنين» 12-ميثيل جوانين» هيبوكسانثين» و7-ميثيل جوانين. 0 تشتمل القواعد من البيربميدين على حلقة بيريميدين مكونة من ست ذرات كما يوصف بواسطة الصيغة العامة التالية: ‎H‏ ‎_C.‏ ٍ 4 1 5 ‎Ca oC‏ ‎“Sh‏ م ‎(HT‏ ‎Jia‏ سيتوزين؛ يوراسيل؛ وثايمين قواعد من البيريميدين موجودة على النحو الأكثر شيوعًا في الأحماض النووية. تتضمن مركبات البيريميدين طبيعية الحدوث الأخرى؛ دون قصر الأمر على؛ 5-ميثيل سيتوزين» 5-هيدروكسي ميثيل سيتوزين» يوراسيل ‎cil)‏ و4-ثيو يوراسيل. في أحد التجسيدات»؛ تحتوي الأوليجومرات الموصوفة هنا على قواعد من الثايمين بدلاً من يوراسيل.
تتضمن القواعد الأخرى المناسبة؛ إلا أنها ليست قاصرة ‎(lo‏ 2 6-داي أمينو بيورين» حمض أوروتيك؛ أجماتيدين؛ ليزبدين» 2- ثيو بيريميدين (على سبيل المثال» 2-ثيو يوراسيل» 2-ثيو ثايمين)؛ ‎G-Clamp‏ ومشتقاتهاء 5-بيريميدين به استبدال (على سبيل ‎(Jal‏ 5-هالو يوراسيل؛ 5-بروبينيل يوراسيل» 5-بروبينيل سيتوزين» 5-أمينو ميثيل يوراسيل» 5-هيدروكسي ميثيل يوراسيل» 5-أمينو ‎dine‏ سيتوزين» 5-هيدروكسي ميثيل سيتوزين» ‎«(Super T‏ 7-دي ‎BI‏
جوانين» 7-دي آزا أدنين» 7-آزا-2» 6-داي أمينو بيورين» 8-آزا-7-دي ‎BT‏ جوانين» 8-آزا-7- دي آزا أدنين» 8-آزا-7-دي ‎BI‏ -2؛ 6-داي أمينو بيورين 6 ‎Super A (Super‏ رو4ل١-‏ إيثيل سيتوزين» أو مشتقات منها؛ 112-سيكلو بنيل جوانين ‎(cPenT-G)‏ 112-سيكلو بنيل-2- أمينو بيورين (80/-60801)؛ و2ل1-بروبيل-2- أمينو بيورين ‎«(Pr=AP)‏ يوراسيل زائف أو
0 مشتقات منها؛ وناتج الانحلال أو القواعد ‎Jie called)‏ 2 6-داي فلورو تولوين أو القواعد غير الموجودة مثل مواقع عدم القدرة على المشي (على سبيل المثال» 1-ديوكسي ‎amy‏ 1 2-داي ديوكسي رببوز» 1-ديوكسي-0-2-ميثيل ريبوز؛ أو مشتقات بيروليدين حيث قد تم استبدال أكسجين الحلقة بنيتروجين ‎(Gs BY)‏ يمكن إيجاد الأمثلة على مشتقات ‎Super G «Super A‏ و1 ‎Super‏ في البراءة الأمريكية 173 ,6,683 ‎(Epoch Biosciences)‏ التي يتم تضمينها
5 هنا كمرجع بأكملها. تم إظهار أن ‎JIE Pr-AP 5 cPenT-AP «cPenT-G‏ من التأثيرات المحفزة للمناعة عند التضمين في ‎Peacock H. et al.
J.
Am.
Chem.
Soc. ) siRNA‏ 9200 ,133 ,2011( يعتبر اليوراسيل الزائف نسخة تمت أزمرتها طبيعية الحدوث من يوراسيل؛ ب ©-جليكوزيد بدلاً من ا١-جليكوزيد‏ المعتاد كما في يوريدين. قد يكون لليوريدين الزائف المحتوي على ‎MRNA‏ تخليقي مواصفة أمان محسنة مقارنة باليوريدين المحتوي على ‎WO ( mPVNA‏
0 2009127230؛ المتضمن هنا بأكمله كمرجع). هناك قواعد نووية معينة مفيدة بشكل محدد لزيادة ألفة الارتباط الخاصة بمترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بالكشف. وهي تتضمن مركبات 5- بيريميدين به استبدال» مركبات 6-آزا بيريميدين ومركبات ‎6-N 2-N‏ و6-0 بيورين به استبدال؛ بما في ذلك 2-أمينو بروبيل أدنين» 5-بروبينيل يوراسيل و5-بروبينيل سيتوزين. لقد تم إظهار أن مجموعات استبدال 5-ميثيل
5 سيتوزين تزيد من ثبات مضاعف الحمض النووي بمقدار 1,2-0,6 درجة مئوية وتعتبر ‎Ulla‏
مجموعات استبدال القواعد المفضلة؛ على نحو أكثر تحديدًا عند الدمج مع مجموعات تعديل السكر 0-2-ميثوكسي إيثيل. تتضمن القواعد النووية التوضيحية الإضافية المعدلة تلك التي يتم فيها استبدال ذرة هيدروجين واحدة على الأقل من القاعدة النووية بذرة فلور. 1. أملاح مقبولة صيدليًا من مترافقات أوليجومر مضادة لاتجاه النسخ قد تحتوي تجسيدات معينة خاصة بمترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والموصوفة بهذه
الوثيقة على مجموعة وظيفية قاعدية؛ مثل أمينو أو ألكيل أمينو» وبالتالي؛ تكون قادرة على تكوين أملاح مقبولة صيدليًا باستخدام أحماض مقبولة صيدليًا. يشير المصطلح "أملاح مقبولة ‎"Wasa‏ ‏في هذا الصدد؛ إلى أملاح إضافة الحمض العضوي وغير العضوية غير السامة نسبيًا من مترافقات أوليجومر مضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف الحالي. يمكن تحضير هذه الأملاح في
0 الموقع في مادة الإعطاء الناقلة أو عملية تصنيع صورة الجرعة؛ أو عن طريق تفاعل على نحو منفصل مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ منقى خاص بالكشف في صورة القاعدة الحرة منه مع حمض عضوي أو غير عضوي ملائم؛ وعزل الملح المتكون أثناء عملية التنقية اللاحقة. تتضمن الأملاح التوضيحية أملاح الهيدرو بروميد؛ هيدرو كلوريد» سلفات» مترافقات أوليجومرات مضادة لاتجاه النسخ لاكتات؛ توسيلات؛ سيترات؛ ماليات؛ فيومارات» سكسينات؛ طرطرات؛
5 تافثيلات؛ مسيلات؛ ‎Sola‏ هبتونات»؛ لاكتوييونات؛ ولوريل سلفونات وما شابه. (انظرء على سبيل المتال» —66:1 ‎Berge et al. (1977) "Pharmaceutical Salts’, J.
Pharm.
Sci.‏ 19( تتضمن الأملاح المقبولة ‎Wana‏ الخاصة بمترافقات أوليجومر مضادة لاتجاه النسخ موضوع الطلب الأملاح غير السامة التقليدية أو أملاح الأمونيوم الرباعية من مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه
0 النسخ؛ على سبيل المثال؛ من الأحماض العضوية أو غير العضوية غير السامة. على سبيل المثال» تتضمن هذه الأملاح غير السامة التقليدية تلك المشتقة من الأحماض غير العضوية مثل هيدرو كلوريد؛ هيدرو بروميك؛ سلفريك؛ سلفاميك؛ فوسفوريك؛ نيتربك؛ وما شابه؛ والأملاح التي تم تحضيرها من الأحماض العضوية ‎Jie‏ أسيتيك؛ بروبيونيك؛ سكسينيك» جليكوليك؛ ستياربك؛ لاكتيك» ‎celle‏ طرطريك؛ سيتربك؛ أسكوربيك؛ بالميتيك؛ مالييك؛ هيدروكسي مالييك؛ فنيل أسيتيك؛
جلوتاميك؛ بنزويك» ساليسيليك؛ سلفانيليك» 2-أسيتوكسي بنزوبك؛ فيوماريك؛ تولوين سلفونيك؛ ميثان سلفونيك. إيثان ‎(gla‏ سلفونيك؛ أوكساليك؛ أيزو ثيونيك؛ وما شابه. في تجسيدات معينة؛ قد تحتوي مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف الحالي على واحدة أو أكثر من المجموعات الوظيفية الحمضية وء بالتالي؛ تكون قادرة على تكوين أملاح مقبولة صيدليًا باستخدام قواعد مقبولة صيدليًا. يشير المصطلح 'أملاح مقبولة صيدليًا" في هذه الحالات إلى أملاح إضافة القاعدة غير السامة نسبيًا غير العضوية والعضوية من مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف الحالي. يمكن بالمثل تحضير هذه الأملاح في الموقع في مادة الإعطاء الناقلة أو عملية تصنيع صورة الجرعة؛ أو عن طريق تفاعل على نحو منفصل مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والمنقى في صورة الحمض ‎all‏ الخاصة به 0 مع قاعدة ملائمة؛ مثل الهيدروكسيد؛ الكربونات أو البيكريونات من كاتيون فلز مقبول ‎Wasa‏ مع أمونياء أو مع أمين رئيسي؛ ثانوي أو ثلاثي عضوي مقبول صيدليًا. تتضمن الأملاح القلوية أو القلوية الأرضية التوضيحية أملاح الليثيوم»؛ الصوديوم, البوتاسيوم؛ الكالسيوم؛ المجنسيوم؛ والألومينيوم وما شابه. تتضمن مركبات الأمين العضوية التوضيحية المفيدة لتكوين أملاح إضافة القاعدة إيثيل أمين؛ داي إيثيل أمين؛ داي إيثيلين ‎(gla‏ أمين؛ إيثانول أمين؛ داي إيثانول أمين» 5 بيبرازين وما شابه. ‎ail)‏ ¢ على سبيل المثال؛ ‎Berge et al‏ المذكور فيما سبق). 3- الصيغ وأنماط الإعطاء في تجسيدات معينة؛ يوفر الكشف الحالي ‎bua‏ أو تركيبات صيدلية ملائمة للتوصيل العلاجي لمترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ المضادة ‎slat‏ النسخ؛ كما يوصف هنا. ومن ثم؛ في تجسيدات معينة؛ يوفر الكشف الحالي تركيبات مقبولة صيدليًا تشتمل على مقدار فعال ‎Bade‏ من 0 واحد أو أكثر من مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ الموصوفة ‎(la‏ مصاعًا مع واحدة أو أكثر من المواد الحاملة المقبولة صيدليًا (مواد الإضافة) و/أو المواد المخففة. بينما يكون من الممكن إعطاء مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف الحالي بمفرده؛ يُفضل إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ في صورة صيغة صيدلية (تركيبة). في أحد التجسيدات؛ يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ بالصيغة ‎(I)‏
يتم وصف طرق توصيل جزيئات الحمض النوويء ‎ly‏ يمكن تطبيقها على مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ ‎By‏ للكشف الحالي؛ على سبيل المثال» في ]6 ‎Akhtar‏ al., 1992, Trends Cell Bio., 2:139; Delivery Strategies for Antisense
Oligonucleotide Therapeutics, ed. Akhtar, 1995, CRC Press; and Sullivan ‏يمكن استخدام هذه البروتوكولات وغيرها لتوصيل أي جزيء‎ wet al, PCT WO 94/02595 5 حمض نووي ‎Bled‏ مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ وفقًا للكشف الحالي. قد تتم صياغة التركيبات الصيدلية الخاصة بالكشف الحالي بشكل خاص للإعطاء في صورة صلبة أو سائلة؛ متضمنة تلك المكيفة لما يلي: (1) الإعطاء عن طريق الفم؛ على سبيل ‎(Jaa‏ جرعات (محاليل أو معلقات مائية أو غير مائية)؛ أقراص؛ تلك المخصصة للشدق؛ تحت اللسان؛ 0 والامتصاص الجهازي؛ الجرعات الكبيرة؛ المساحيق؛ الحبيبات؛ المعاجين للاستخدام على اللسان؛ (2) الإعطاء بالحقن غير المعوي؛ على سبيل ‎«Ja‏ بواسطة الحقن تحت الجلد؛ في العضل؛ داخل الوريد أو فوق الجافية في صورة؛ على سبيل المثال؛ محلول أو معلق معقم؛ أو صيغة بإطلاق مستديم؛ (3) التطبيق الموضعي؛ على سبيل المثال» في صورة ‎pS‏ مرهم؛ أو لاصقة بإطلاق متحكم فيه أو إسبراي يتم استخدامه على الجلد؛ (4) مهبليًا أو عبر المستقيم؛ على سبيل ‎JB 5‏ في صورة فرزجة؛ كريم أو رغوة؛ (5) تحت اللسان؛ (6) عبر العين؛ (7) عبر الأدمة؛ أو (8) عبر الأنف. تتضمن بعض الأمثلة الخاصة بالمواد التي يمكنها أن تعمل كمواد حاملة مقبولة صيدليًا؛ دون تحديد: )1( مواد سكرية؛ مثل لاكتوز» جلوكوز وسكروز؛ (2) أنواع النشاء ‎Jie‏ نشا الذرة ونشا البطاطس؛ (3) سيليلوز» ومشتقاتهاء ‎fio‏ صوديوم كريوكسي ميثيل سيليلوز» إيثيل سيليلوز ‏0 وسيليلوز أسيتات؛ (4) صمغ كثيراء في صورة مسحوق؛ (5) الشعير؛ (6) الجيلاتين؛ (7) التالك؛ )8( السواغات؛ مثل زيدة الكاكاو وأنواع شمع التحاميل؛ (9) ‎Jie cigs)‏ زيت الفول السوداني؛ زيت بذر القطن؛ زيت العُصْفُر؛ زيت السمسم؛ زيت الزيتون» زيت الذرة وزيت فول الصويا؛ (10) مركبات جليكول؛ مثل بروبيلين جليكول؛ (11) مركبات بولي ‎dsl‏ مثل جليسيرين» سوربيتول» مانيتول ويولي إيثيلين جليكول؛ )12( إسترات» مثل إيثيل أوليات وإيثيل لورات؛ )13( آجار؛ (14) ‏5 عوامل منظمة؛ مثل مجنسيوم هيدروكسيد وألومينيوم هيدروكسيد؛ (15) حمض ألجينيك؛ (16) ماء
خالي من مولد حمى؛ )17( محلول ملحي متساوي التوتر؛ )18( محلول ‎«Ringer‏ (19) كحول إيثيلي؛ (20) محاليل منظمة للرقم الهيدروجيني؛ (21) بولي إسترات؛ مركبات بولي كربونات و/أو مركبات بولي أنهيدريد؛ و(22) المواد المتوافقة غير السامة الأخرى المستخدمة في الصيغ الصيدلية. تتضمن الأمثلة غير الحصرية الإضافية على العوامل الملائمة للصياغة مع مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف الحالي: الأحماض النووية المترافقة مع ‎PEG‏ الأحماض النووية المترافقة مع الشحم الفوسفوري؛ الأحماض النووية المحتوية على أشطار آلفة للشحم؛ مركبات فوسفورو ثيوات؛ متبطات ا-جليكو بروتين (مثل ‎(Pluronic PBS‏ التي يمكنها تعزيز دخول العقاقير في الأنسجة المتنوعة؛ البوليمرات القابلة للتحلل بيولوجيًا؛ مثل كريات دقيقة من 0 بولي (ا,00-لاكتيد -جليكوليد مشترك) للتوصيل بالإطلاق المستديم بعد الغرس | 0 ‎(Emerich,‏ ‎al., 1999, Cell Transplant, 8, 47-58) Alkermes, Inc. Cambridge, Mass‏ آ6.؛ وجسيمات بحجم النانو محملة؛ مثل تلك المكونة من بولي بيوتيل سيانو أكريلات؛ التي يمكنها توصيل العقاقير عبر الحائل النَّمَوِي ‎Ld‏ ويمكنها تغيير آليات الامتصاص الخاصة بالخلايا العصبية )1999 ,941-949 ,23 ‎.(Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry,‏ 5 يُظهر الكشف ‎Wal‏ استخدام التركيبة المشتملة على جسيمات شحمية معدلة السطح محتوية على شحوم من بولي (إيثيلين جليكول) ‎(PEG)‏ (معدلة ب ‎(PEG‏ متفرعة وغير متفرعة أو توليفات من ذلك؛ أو جسيمات شحمية دوّارة طويلة أو جسيمات شحمية انسلالية). يمكن أيضًا أن تشتمل مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف على جزيئات ‎PEG‏ ملحقة تساهميًا بأوزان جزيئية متنوعة. توفر هذه الصيغ طريقة لزيادة تراكم العقاقير في الأنسجة المستهدفة. تقاوم 0 هذه الفئة من المواد الحاملة للعقاقير الطهايّة والإزالة بواسطة ‎Zed‏ البَلْعَمِيّات والوحيدات ‎MPS)‏ أو ‎«(RES‏ وبالتالي تسمح بأزمنة دورة دموية أطول وتعرض نسيج محسن للعقار المغلف ( ‎Lasic‏ ‎et al. Chem. Rev. 1995, 95, 2601-2627: Ishiwata et al., Chem. Pharm.‏ ‎(Bull. 1995, 43, 1005-1011‏ لقد تم إظهار أن بعضًا من الجسيمات الشحمية يتراكم انتقائيًا في الأورام» من المفترض عن طريق التَسَرُّب والاحتجاز في الأنسجة المستهدفة حديثة
Lasic et al., Science 1995, 267, 1275-1276; Oku et al., 1995, ( ‏التوعي‎ 25
‎(Biochim.
Biophys.
Acta, 1238, 86-90‏ تُعزز الجسيمات الشحمية الدؤارة الطويلة من الحركيات الدوائية والحركيات الديناميكية الخاصة ب ‎(RNA § DNA‏ مقارنة تحديدًا بالجسيمات الشحمية الكاتيونية التقليدية المعروفة بالتراكم في أنسجة ‎Liu et al., J.
Biol.
Chem. ) MPS‏ ‎Choi et al‏ :24864-24870 ,42 ,1995. نشرة الطلب الدولي رقم 96/10391 ‎‘WO‏ ‎Ansell etal 5‏ نشرة الطلب الدولي رقم 96/10390 ‎«Holland et al {WO‏ نشرة الطلب الدولي رقم 96/103932 0//ا). من المحتمل ‎Waal‏ أن تحمي الجسيمات الشحمية الدؤارة الطويلة العقاقير من تحلل إنزيم نيوكلياز إلى حدٍ أكبر مقارنة بالجسيمات الشحمية الكاتيونية؛ اعتمادًا على قدرتها على تجنب التراكم في أنسجة ‎MPS‏ العدوانية أيضيًا ‎Jie‏ الكبد والطحال. في تجسيد إضافي»؛ يتضمن الكشف الحالي أوليجومر تركيبات صيدلية من مترافقات أوليجومرات 0 مضادة لاتجاه النسخ تم تحضيرها للتوصيل كما وصف في طلبات براءات الاختراع الأمريكية أرقام 1 )؛ 7,163,695 و7,070,807. في هذا الصدد؛ في أحد التجسيدات؛ يوفر الكشف الحالي مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف الحالي في تركيبة مشتملة على بوليمرات مشتركة من ليزين وهيستيدين ‎WS) (HK)‏ وصف في طلبات براءات الاختراع الأمريكية أرقام 7,163,695 5¢7,070,807 6,692,911( إما بمفردها أو في توليفة مع ‎PEG‏ (على 15 سبيل ‎PEG (Jal‏ متفرع أو غير متفرع أو خليط من كلاهما)؛ في توليفة مع ‎PEG‏ وشطر استهداف أو أي مما سبق في توليفة مع عامل مرتبط تبادليًا. في تجسيدات معينة؛ يوفر الكشف الحالي مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ في تركيبات صيدلية مشتملة على بولي هيستيدين معدل بحمض جلوكونيك أو بولي هيستيدين/ترانسفيرين-بولي ليزين معالج بجلوكونيل. سيدرك أحد ذوي المهارة في المجال أنه قد يتم استبدال الأحماض الأمينية بالخصائص المشابهة ل ‎His 20‏ وكلاا داخل التركيبة. يمكن أيضًا أن توجد عوامل الترطيب؛ المستحلبات والمزلقات»)مثل صوديوم لوريل سلفات ومجنسيوم ستيارات)؛ إضافة إلى العوامل الملونة؛ عوامل الإطلاق؛ عوامل التغليف؛ عوامل التحلية؛ إكساب النكهة والتعطير» المواد الحافظة ومضادات الأكسدة في التركيبات. تتضمن الأمثلة على مضادات الأكسدة المقبولة صيدليًا: (1) مضادات الأكسدة القابلة للذويان في الماء؛ مثل حمض أسكوربيك؛ سيستيين هيدرو ‎cS‏ صوديوم ‎«lila‏ صوديوم ميتا بيسلفيت؛
صوديوم سلفيت وما شابه؛ (2) مضادات الأكسدة القابلة للذويان في الزيت؛ ‎Jia‏ أسكورييل بالميتات؛ هيدروكسي أنيزول معالج بالبيوتيل ‎(BHA)‏ هيدروكسي تولوين معالج بالبيوتيل (8117)؛ ليستين؛ بروبيل جالات؛ ألفا-توكوفيرول»؛ وما شابه؛ و(3) العوامل الخلابية الفلزية؛. مثل حمض سيتربك» حمض داي إيثيلين داي أمين تترا أسيتيك ‎(EDTA)‏ سوربيتول» حمض
طرطريك؛ حمض فوسفوريك؛ وما شابه. تتضمن الصيغ الخاصة بالكشف الحالي تلك الملائمة للإعطاء عن طريق الفم؛ الأنف؛ موضييًا (بما في ذلك الشدق وتحت اللسان)؛ المستقيم؛ المهبل و/أو الإعطاء بالحقن غير المعوي. قد يتم تقديم الصيغ على نحوملائم في صورة وحدة جرعة وقد يتم تحضيرها بواسطة أية طرق معروفة جيدًا في مجال الصيدلة. سيتنوع مقدار المكون الفعال الذي يمكن دمجه مع مادة حاملة لإنتاج
0 صورة جرعة فردية اعتمادًا على الخاضع للعلاج الذي يتم علاجه؛ نمط الإعطاء المحدد. سيكون مقدار المكون الفعال الذي يمكن دمجه مع مادة حاملة لإنتاج صورة جرعة فردية بصفة عامة هو مقدار المكون الفعال الذي يُنتج تأثيرًا علاجيًا. بصفة عامة؛ سيتراوح هذا المقدار من حوالي 0,1 بالماثة إلى ‎Moa‏ تسع وتسعين بالمائة من المكون الفعال؛ يُفضل من حوالي 5 ‎BLL‏ حوالي 0 بالمائة؛ الأكثر تفضيلاً من حوالي 10 بالمائة إلى حوالي 30 بالمائة.
5 في تجسيدات معينة؛ تشتمل صيغة خاصة بالكشف الحالي على سواغ مختار من مركبات سيكلو ديكسترين؛ مركبات سيليلوز» جسيمات شحمية؛ عوامل مكونة للمذيلة؛ على سبيل المثال؛ الأحماض الصفراوية؛ والمواد الحاملة البوليمرية؛ على سبيل المثال؛ بولي إسترات ومركبات بولي أنهيدريد؛ ومترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف الحالي. في أحد التجسيدات؛ يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ بالصيغة (!اا). في تجسيدات معينة؛ تؤدي الصيغة
0 السابقة إلى الحصول على مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ وفقًا للكشف الحالي يكون متاحًا بيولوجيًّا عن طريق الفم. تتضمن طرق تحضير هذه الصيغ أو التركيبات الصيدلية خطوة تضمين مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎hy‏ للكشف الحالي مع المادة الحاملة و؛ اختياريًا؛ واحد أو ‎AST‏ من المكونات الإضافية. بشكل عام؛ يتم تحضير الصيغ عن طريق تضمين مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه
النسخ وفقًا للكشف الحالي على نحو منتظم ووثيق مع المواد الحاملة السائلة؛ أو المواد الحاملة
الصلبة المقسمة على نحو دقيق؛ أو كلاهما؛ ثم؛ إذا لزم الأمرء تشكيل المنتج.
قد تكون الصيغ الخاصة بالكشف الملائمة للإعطاء عن طريق الفم في صورة كبسولات؛ برشام؛
حبوب»؛ ‎«all‏ أقراص للمص (باستخدام قاعدة ذات نكهة؛ ‎Bale‏ ما تكون سكروز وسنط أو صمغ الكثيراء)؛ مساحيق؛ حبيبات؛ أو كمحلول أو معلق في مستحلب سائل مائي أو غير مائي؛ أو
مستحلب سائل زيت في ماء أو ماء في ‎ecu)‏ أو في صورة إكسير أو شراب»؛ أو في صورة أقراص
محلاة للمص (باستخدام قاعدة خاملة؛ ‎Jie‏ الجيلاتين وجليسيرين؛ أو سكروز والسنط) و/أو في
صورة محاليل غسول للفم وما شابه؛ كل يحتوي على مقدار محدد مسبقًا من مترافق أوليجومر
مضاد لاتجاه النسخ ‎Gy‏ للكشف الحالي في صورة مكون فعال. قد يتم أيضًا إعطاء مترافق
0 أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ وفقًا للكشف الحالي في صورة جرعة كبيرة؛ ‎Boal‏ أو معجون. في صور الجرعة الصلبة من الكشف للإعطاء عن طريق الفم ‎abil (gas)‏ حبوب؛ حبوب مسكرة؛ مساحيق» حبيبات؛ أقراص استحلاب وما شابه)؛ قد يتم خلط المكون الفعال مع واحدة أو أكثر من المواد الحاملة المقبولة صيدليًا؛ مثل صوديوم سيترات أو داي كالسيوم فوسفات؛ و/أو أي مما يلي: )1( مواد مالئة أو مواد باسطة؛ مثل أنواع النشاء اللاكتوز؛ السكروز؛ الجلوكوز؛
5 المانيتول؛ و/أو حمض سيليسيك؛ (2) عوامل ربط مثل؛ على سبيل المثال» كريوكسي ميثيل سيليلوز؛ مركبات ألجينات؛ جيلاتين؛ بولي فينيل بيروليدون» سكروز و/أو سنط؛ )3( مواد مرطبة؛ مثل جليسرول؛ )4( عوامل تفكيك؛ ‎Jie‏ آجار-آجارء كالسيوم كربونات؛ نشا البطاطس أو التابيوكاء حمض ألجينيك؛ مركبات سيليكات معينة؛ وصوديوم كربيونات؛ (5) ‎alge‏ تأخير للمحلول» ‎die‏ بارافين؛ )6( عوامل تعجيل الامتصاص؛ مثل مركبات أمونيوم رياعي وعوامل
0 خافضة للتوتر السطحي؛ ‎Jie‏ بولوكسامير وصوديوم لوريل سلفات؛ )7( عوامل ترطيب؛ مثل؛ على سبيل المثال؛ كحول سيتيل؛ جليسرول مونو ستيارات؛ وعوامل خافضة للتوتر السطحي غير أيونية؛ )8( مواد ماصة؛ ‎Jie‏ كاولين ‎diag‏ بنتونيت؛ )9( مزلقات؛ مثل التالك؛ كالسيوم ستيارات؛ مجنسيوم ستيارات؛ مركبات بولي إيثيلين جليكول صلبة؛ صوديوم لوريل سلفات؛ زنك ستيارات؛ صوديوم ‎clin‏ حمض ستياربك؛ وخلائط من ذلك؛ )10( عوامل ملونة؛ و(11) عوامل بإطلاق
متحكم فيه مثل كروس بوفيدون أو إيثيل سيليلوز. في ‎Ala‏ الكبسولات؛ الأقراص والحبوب؛ قد
تشتمل التركيبات الصيدلية ‎Lad‏ على عوامل منظمة. قد يتم ‎Lal‏ استخدام التركيبات الصيدلية الصلبة ذات النوع المشابه في صورة مواد مالئة في كبسولات بغلاف من الجيلاتين اللين والصلب باستخدام هذه السواغات مثل اللاكتوز أو مواد سكر اللبن؛ إضافة إلى مركبات بولي إيثيلين جليكول ذات الوزن الجزيئي العالي وما شابه.
قد يتم إعداد قرص عن طريق الضغط أو القولبة؛ اختياريًا باستخدام واحد أو أكثر من المكونات الإضافية. قد يتم تحضير الأقراص المضغوطة باستخدام مادة ربط (على سبيل ‎(JB)‏ جيلاتين أو هيدروكسي بروبيل ميثيل سيليلوز)» مزلق؛ ‎Bale‏ مخففة خاملة؛ مادة حافظة؛ مادة مفككة (على سبيل المثال» صوديوم جليكولات النشا أو صوديوم كربوكسي ميثيل سيليلوز مرتبط ‎(Wali‏ عامل نشط السطح أو مشتت. قد يتم إعداد أقراص مقولبة عن طريق قولبة خليط من المركب في صورة
0 المسحوق المرطب باستخدام مادة مخففة سائلة خاملة في آلة ملائمة. قد يتم اختياريًا تحزيز الأقراص» وصور الجرعة الصلبة ‎GAY)‏ من التركيبات الصيدلية الخاصة بالكشف الحالي؛ مثل حبوب مسكرة؛ كبسولات؛ حبوب والحبيبات؛ أو تحضيرها باستخدام طلاءات ‎dite]‏ مثل الأغلفة المعوية والأغلفة الأخرى المعروفة جيدًا في مجال الصياغة الصيدلية. قد تتم ‎Lia‏ صياغتها بحيث يتم توفير المكون الفعال ذي الإطلاق البطيء أو المتحكم فيه فيها
5 باستخدام؛ على سبيل المثال؛ هيدروكسي بروبيل ميثيل سيليلوز بنسب متغيرة لتوفير مواصفة الإطلاق المطلوية؛ قوالب البوليمر ‎(GAY)‏ الجسيمات الشحمية و/أو الكريات الدقيقة. قد تتم صياغتها ‎BUD‏ السريع؛ على سبيل المثال؛ التجفيف بالتجميد. قد يتم تعقيمها بواسطة؛ على سبيل المثال؛ الترشيح من خلال مرشح محتجز للبكتيرياء أو عن طريق تضمين عوامل تعقيم في صورة تركيبات صيدلية صلبة معقمة يمكن إذابتها في ماء معقم؛ أو وسط آخر قابل للحقن معقم
قبل الاستخدام مباشرة. قد تحتوي أيضًا هذه التركيبات الصيدلية اختياريًا على عوامل إعتام وقد تكون بتركيبة تُطلق المكون الفعال(المكونات الفعالة) فقط أو على نحو مميز؛ في جزءِ معين من القناة المعدية المعوية؛ اختياريًا؛ بطريقة متأخرة. تتضمن الأمثلة على تضمين تركيبات يمكن استخدامها مواد بوليمرية وأنواع شمع. يمكن أيضًا أن يكون المكون الفعال في صورة مغلفة على نحو دقيق؛ إن كان الأمر ‎(Ele‏ باستخدام واحد أو أكثر من السواغات الموصوفة فيما سبق.
تتضمن صور الجرعة السائلة لإعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف عن طريق الفم مستحلبات مقبول ‎(Wana‏ مستحلبات دقيقة؛ محاليل؛ معلقات؛ أنواع شراب وأكاسير. بالإضافة إلى المكون الفعال» قد تحتوي صور الجرعة السائلة على مواد مخففة خاملة مستخدمة على نحو شائع في المجال؛ مثل؛ على سبيل المثال؛ الماء أو المذيبات الأخرى؛ العوامل القابلة للذوبان والمستحلبات؛ ‎Jie‏ كحول إيثيلي؛ كحول أيزو بروبيل» إيثيل كربونات؛ إيثيل أسيتات؛ كحول بنزيل؛ بنزيل بنزوات؛ بروبيلين جليكول؛ 1؛ 3-بيوتيلين جليكول؛ زيوت (بشكل محدد؛ بذور القطن؛ المكسرات المجروشة؛ الذرة؛ جنين القمح؛ الزبتون؛ زيوت الخروع والسمسم)؛ جليسرول؛ كحول تترا هيدرو فيوريل؛ مركبات بولي إيثيلين جليكول وإسترات حمض دهني من سوربيتان» وخلائط من ذلك.
0 إلى جانب المواد المخففة الخاملة؛ يمكن أيضًا أن تتضمن التركيبات الصيدلية الفموية مواد مساعدة ‎alse Jie‏ ترطيب؛ عوامل استحلاب وتعليق؛ عوامل تحلية؛ إكساب نكهة؛ تلوين» تعطير وعوامل حافظة. قد تحتوي المعلقات؛ بالإضافة إلى المركبات الفعالة؛ على عوامل تعليق مثل؛ على سبيل المثال؛ مركبات كحول أيزو ستياريل معالجة بالإيثوكسيل» بولي أوكسي إيثيلين سوربيتول وسوربيتان
5 بإسترات؛ سيليلوز دقيق التبلّرء ألومينيوم ميتا هيدروكسيد؛ بنتونيت؛ آجار-آجار وصمغ الكثيراء؛ وخلائط من ذلك. قد يتم تقديم الصيغ للإعطاء عن طريق المستقيم أو المهبل في صورة قمع؛ قد يتم تحضيره عن طريق خلط واحد أو أكثر من مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف مع واحد أو أكثر من السواغات غير المهيجة الملائمة أو المواد الحاملة المشتملة على؛ على سبيل
0 المثالء زيدة الكاكاو؛ بولي إيثيلين جليكول؛ شمع لقمع أو ساليسيلات؛ ‎Ally‏ تكون صلبة عند درجة حرارة الغرفة؛ ولكنها سائلة عند درجة حرارة الجسم ‎cy‏ لهذاء ستنصهر في المستقيم أو تجويف المهبل وتُطلق المركب الفعال. تتضمن الصيغ أو صور الجرعة لإعطاء أوليجومر موضعيًا أو عبر الأدمة كما يتوفر هنا مساحيق؛ أنواع إسبراي» ‎cathe‏ معاجين؛ كريمات؛ أنواع ‎(gud‏ أنواع هلام؛ محاليل؛ رقع لاصقة
ومستنشقات. قد يتم خلط مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ النشطة في ظل ظروف معقمة مع مادة حاملة مقبولة صيدليًا؛ ومع أية مواد حافظة؛ محاليل منظمة؛ أو مواد دفع قد تكون مطلوية. قد تحتوي المراهم؛ المعاجين؛ الكريمات وأنواع الهلام على» بالإضافة إلى مركب فعال خاص بهذا الكشف» سواغات» مثل الدهون الحيوانية والنباتية؛ الزيوت؛ أنواع الشمعء البارافينات؛ النشاء صمغ الكثيراء؛ مشتقات السيليلوز؛ مركبات بولي إيثيلين جليكول؛ مركبات سيليكون؛ مركبات بنتونيت» حمض سيليسيك؛ التالك وأكسيد الزنك؛ أو خلائط من ذلك. يمكن أن تحتوي المساحيق وأنواع الإسبراي على بالإضافة إلى مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف الحالي؛ سواغات ‎Jie‏ لاكتوز؛ تالك؛ حمض سيليسيك؛ ألومينيوم هيدروكسيد؛ مركبات كالسيوم سيليكات ومسحوق بولي أميد؛ أو خلائط من هذه المواد. يمكن أن 0 تحتوي أنواع الإسبراي بشكل إضافي على مواد الدفع المعتادة؛. ‎Jie‏ مركبات كلورو فلورو هيدرو كربون ومركبات الهيدرو كريون التي ليس بها استبدال الطيّارة» ‎die‏ بيوتان ويرويان. يكون للرقع اللاصقة عبر الأدمة الفائدة المضافة الخاصة بتوفير توصيل متحكم فيه لمترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف الحالي إلى الجسم. يمكن إعداد صور الجرعة هذه عن طريق إذابة أو تشتيت الأوليجومر في الوسط الملائم. يمكن أيضًا استخدام معززات 5 الامتصاص لزيادة دفق العامل عبر الجلد. يمكن التحكم في معدل هذا الدفق إما عن طريق توفير معدل تحكم في الغشاء أو تشتيت العامل في قالب بوليمر أو هلام؛ من بين الطرق الأخرى المعروفة في المجال. قد تشتمل التركيبات الصيدلية الملائمة للإعطاء بالحقن غير المعوي على واحد أو أكثر من مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بالكشف في توليفة مع واحد أو أكثر من 0 المحاليل المائية أو غير المائية متساوية التوتر المعقمة المقبولة صيدليًا؛ المشتتات؛ المعلقات أو المستحلبات؛ أو المساحيق المعقمة اليت قد تتم ‎sale)‏ تكوينها في في محاليل أو مشتتات قابلة للحقن معقمة قبل الاستخدام مباشرة؛ قد تحتوي على مواد سكرية؛ مواد كحولية؛ مضادات أكسدة؛ محاليل منظمة؛ مواد كابحة للبكتيريا؛ مواد مذابة تجعل الصيغة متساوية التوتر مع دم المتلقي المقصود أو عوامل التعليق أو إكساب الثخانة. تتضمن الأمثلة على المواد الحاملة المائية وغير 5 المائية الملائمة التي قد يتم استخدامها في التركيبات الصيدلية الخاصة بالكشف الماء؛ ‎(Jl)‏
مركبات بولي أول (مثل ‎«Jy mls‏ بروبيلين جليكول؛ بولي إيثيلين جليكول؛ وما شابه)؛ وخلائط ملائمة من ذلك؛ زيوت نباتية؛ ‎Jie‏ زيت الزبتون» وإسترات عضوية ‎ALE‏ للحقن؛ مثل إيثيل أوليات. يمكن الحفاظ على الميوعة ‎(dad)‏ على سبيل المثال» عن طريق استخدام مواد مغلفة؛ ‎Jie‏ ‏ليستين» عن طريق الحفاظ على حجم الجسيم المطلوب في ‎dla‏ المشتتات؛ وعن طريق استخدام عوامل خافضة للتوتر السطحي. في أحد التجسيدات؛ يكون مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ للتركيبة الصيدلية بالصيغة ‎(I)‏ ‏قد تحتوي أيضًاً هذه التركيبات الصيدلية على مواد مساعدة مثل المواد الحافظة؛ عوامل ‎cuba ill‏ عوامل الاستحلاب وعوامل التشتيت. قد يتم ضمان منع تأثير الكائنات الحية الدقيقة على مترافقات الأوليجومر موضوع الطلب عن طريق تضمين عوامل مضادة للبكتيريا ومضادة للفطريات متنوعة؛ 0 على سبيل المثال؛ بارابين؛ كلورو بيوتانول؛ حمض فينول سورييك؛ وما شابه. قد يكون من المطلوب ‎Load‏ تضمين عوامل متساوية التوتر» ‎die‏ مواد سكرية؛ صوديوم كلوريد؛ وما شابه في التركيبات. بالإضافة إلى ذلك؛ قد يتم تحقيق الامتصاص المطوّل للصورة الصيدلية القابلة للحقن عن طريق تضمين العوامل التي تؤخر الامتصاص مثل ألومينيوم مونو ستيارات والجيلاتين. في بعض الحالات؛ من أجل إطالة تأثير عقار؛ يكون من المطلوب إبطاء امتصاص العقار من 5 الحقن تحت الجلد أو في العضل. قد يتم إتمام هذا عن طريق استخدام معلق سائل من مادة متبارة أو غير ‎pla‏ لها ‎ALG‏ للذويان في الماء ضعيفة؛ من بين الطرق الأخرى المعروفة في المجال. بعد ذلك يعتمد معدل امتصاص العقار على معدل ذويانه الذي؛ بدوره؛ قد يعتمد على حجم البلورة والصورة المتبلرة. على نحو بديل؛ يتم تنفيذ الامتصاص المتأخر لصورة عقار معطاة بطريق الحقن غير المعوي عن طريق إذابة أو تعليق العقار في مادة ناقلة ‎Ain)‏ ‏0 قد يتم إعداد الصور المدخرة القابلة للحقن عن طريق تكوين قوالب تضمين دقيق من مترافقات الأوليجومر موضوع الطلب في بوليمرات قابلة للتحلل بيولوجيًا ‎Jie‏ بولي لاكتيد-بولي جليكوليد. اعتمادًا على نسبة الأوليجومر إلى البوليمر؛ وطبيعة البوليمر المحدد المستخدم؛ يمكن التحكم في معدل إطلاق الأوليجومر. تتضمن الأمثلة على البوليمرات الأخرى القابلة للتحلل بيولوجيًا بولي (أورثو إسترات) ويولي (أنهيدريدات). قد يتم ‎Lal‏ تحضير الصيغ المدخرة القابلة للحقن عن طريق 5 احتجاز العقار في جسيمات شحمية أو مستحلبات دقيقة تكون متوافقة مع أنسجة الجسم.
عندما يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف الحالي في صورة مواد صيدلية؛ إلى الإنسان والحيوانات» يمكن إعطائها في حد ذاتها أو كتركيبة صيدلية تحوي؛ على سبيل المثال» من 0,1 إلأّى 9699 (الأفضل»؛ من 10 إلى %30( من مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ في توليفة مع ‎sale‏ حاملة مقبولة صيدليًا. قد يتم إعطاء صيغ أو مستحضرات من الكشف الحالي عن طريق الفم؛ بطريق الحقن غير
المعوي؛ موضعيًا؛ أو عبر المستقيم. يتم إعطائها نمطيًا في صور ملائمة لكل طريقة إعطاء. على سبيل ‎(Jha)‏ يتم إعطائها في صورة أقراص أو كبسولات؛ بالحقن؛ الاستنشاق؛ غسول للعين؛ مرهم؛ ‎aad‏ التسريب؛ أو موضعيًا بواسطة غسول أو مرهم؛ وعن طريق المستقيم بواسطة أقماع. بغض النظر عن طريقة الإعطاء المختارة؛ قد تتم صياغة مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه
0 النسخ الخاصة بالكشف الحالي؛ التي قد يتم استخدامها في صورة مميأة ‎dale‏ و/أو التركيبات الصيدلية الخاصة بالكشف الحالي؛ في صور جرعة مقبولة صيدليًا بواسطة الطرق التقليدية المعروفة لهؤلاء من ذوي المهارة في المجال. قد تتنوع مستويات الجرعة الفعلية من المكونات الفعالة في التركيبات الصيدلية الخاصة بهذا الكشف بحيث يتم الحصول على مقدار من المكون الفعال يكون فعالاً لتحقيق الاستجابة العلاجية المطلوية لمربيض بعينه؛ تركيبة؛ ونمط إعطاء؛ دون
5 أن تكون سامة على نحو غير مقبول للمريض. سيعتمد مستوى الجرعة المختار على مجموعة متنوعة من العوامل متضمنة نشاط مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ المحدد الخاص بالكشف الحالي المستخدم؛ أو الإسترء الملح أو الأميد ‎ie‏ ‏طريقة الإعطاء؛ توقيت الإعطاء؛ معدل الإفراز أو أيض الأوليجومر المحدد الذي يتم استخدامه؛ معدل ومدى الامتصاص؛ مدة العلاج؛ العقاقير ‎(GAY)‏ المركبات و/أو المواد المستخدمة في
0 توليفة مع الأوليجومر المحدد المستخدم؛ العمر؛ الجنسء الوزن الحالة؛ الصحة العامة والتاريخ الطبي السابق للمريض الذي يتم علاجه؛ والعوامل المشابهة المعروفة جيدًا في المجالات الطبية. يمكن لطبيب بشري أو طبيب بيطري يتمتع بمهارة عادية في المجال أن يُحدد بسهولة ويصف المقدار الفعال من التركيبة الصيدلية المطلوب. على سبيل ‎(JE‏ يمكن أن يبدا الطبيب البشري أو الطبيب البيطري بجرعات من مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف
المستخدمة في التركيبة الصيدلية عند مستويات أقل من تلك المطلوية من أجل تحقيق التأثير العلاجي المطلوب ويزيد تدريجيًا من الجرعة حتى يتم تحقيق التأثير المطلوب. بشكل عام؛ يتكون جرعة يومية ملائمة من مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف هي ذلك المقدار من مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ الذي يمثل الجرعة الأقل الفعالة لإنتاج تأثير علاجي.
ستكون هذه الجرعة الفعالة معتمدة بصفة عامة على العوامل الموصوفة بهذه الوثيقة. بصفة عامة؛ ستتراوح الجرعات الفموية؛ داخل الوريد؛ داخل بطين المخ وتحت الجلد من مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بهذا الكشف لمريض؛ عند الاستخدام للتأثيرات الموضحة؛ من حوالي 0,0001 إلى حوالي 100 مجم لكل كجم من وزن الجسم في اليوم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ وفقًا للكشف الحالي
0 بجرعات تبلغ ‎ele‏ حوالي 160-10 مجم/كجم أو 160-20 مجم/كجم. في بعض الحالات؛ قد تكون الجرعات التي تتجاوز 160 مجم/كجم ضرورية. في بعض التجسيدات؛ تتراوح الجرعات التي تعطى داخل الوريد من حوالي 0.5 مجم إلى 160 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ بجرعات تبلغ حوالي 0.5 مجم/كجم؛ 1 مجم/كجم؛ 2 مجم/كجم؛ 3 مجم/كجم؛ 4 مجم/كجم؛ 5 مجم/كجم؛ 6 مجم/كجم؛ 7 مجم/كجم؛ 8 مجم/كجم؛ 9
5 مجم/كجم؛ أو 10 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومرات المضادة ‎olay‏ النسخ بجرعات تبلغ حوالي 10 مجم/كجم؛ 11 مجم/كجم» 12 مجم/كجم؛ 15 مجم/كجم 8 مجم/كجم؛ 20 مجم/كجم؛ 21 مجم/كجم؛ 25 مجم/كجم؛ 26 مجم/كجم؛ 27 مجم/كجم؛ 28 مجم/كجم؛ 29 مجم/كجم؛ 30 مجم/كجم؛ 31 مجم/كجم؛ 32 مجم/كجم؛ 33 مجم/كجم؛ 34 مجم/كجم؛ 35 مجم/كجم؛ 36 مجم/كجم؛ 37 مجم/كجم؛ 38 مجم/كجم؛ 39 مجم/كجم؛ 40
0 _ مجم/كجم؛ 41 مجم/كجم؛ 42 مجم/كجم؛ 43 مجم/كجم؛ 44 مجم/كجم؛ 45 مجم/كجم؛ 46 مجم/كجم؛ 47 مجم/كجم؛ 48 مجم/كجم؛ 49 مجم/كجم 50 مجم/كجم؛ ‎ST‏ مجم/كجم؛ 52 مجم/كجم؛ 53 مجم/كجم؛ 54 مجم/كجم؛ 55 مجم/كجم؛ 56 مجم/كجم؛ ‎ST‏ مجم/كجم؛ 58 مجم/كجم؛ 59 مجم/كجم؛ 60 مجم/كجم؛ 65 مجم/كجم؛ 70 مجم/كجم؛ 75 مجم/كجم؛ 80 مجم/كجم؛ 85 مجم/كجم؛ 90 مجم/كجم؛ 95 مجم/كجم؛ 100 مجم/كجم؛ 105 مجم/كجم؛ 110
5 . مجم/كجم؛ 115 مجم/كجم؛ 120 مجم/كجم؛ 125 مجم/كجم؛ 130 مجم/كجم؛ 135 مجم/كجم؛
0 مجم/كجم؛ 145 مجم/كجم؛ 150 مجم/كجم؛ 155 مجم/كجم؛ 160 مجم/كجم؛ بما في ذلك جميع الأرقام الصحيحة التي بينها. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء الأوليجومر عند 10 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء الأوليجومر عند 20 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء الأوليجومر عند 30 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء
الأوليجومر عند 40 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء الأوليجومر عند 60 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء الأوليجومر عند 80 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء الأوليجومر عند 160 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء الأوليجومر عند 50 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة )111(
0 بجرعات تبلغ ‎dale‏ حوالي 160-10 مجم/كجم أو 160-20 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ تتراوح جرعات مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ لها الصيغة )11( للإعطاء داخل الوريد من حوالي 0.5 مجم إلى 160 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة ‎(I)‏ بجرعات تبلغ حوالي 0.5 مجم/كجم؛ 1 مجم/كجم؛ 2 مجم/كجم؛ 3 مجم/كجم؛ 4 مجم/كجم؛ 5 مجم/كجم؛ 6 مجم/كجم؛ 7 مجم/كجم؛ 8 مجم/كجم؛ 9
5 مجم/كجم؛ أو 10 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة (!!ا) بجرعات تبلغ حوالي 10 مجم/كجم؛ 11 مجم/كجم؛ 12 مجم/كجم؛ 5 مجم/كجم؛ 18 مجم/كجم؛ 20 مجم/كجم؛ 21 مجم/كجم؛ 25 مجم/كجم؛ 26 مجم/كجم؛ 27 مجم/كجم؛ 28 مجم/كجم؛ 29 مجم/كجم؛ 30 مجم/كجم؛ 31 مجم/كجم؛ 32 مجم/كجم؛ 33 مجم/كجم؛ 34 مجم/كجم؛ 35 مجم/كجم؛ 36 مجم/كجم؛ 37 مجم/كجم؛ 38 مجم/كجم 39
0 _ مجم/كجم؛ 40 مجم/كجم؛ 41 مجم/كجم؛ 42 مجم/كجم؛ 43 مجم/كجم؛ 44 مجم/كجم؛ 45 مجم/كجم؛ 46 مجم/كجم؛ 47 مجم/كجم؛ 48 مجم/كجم؛ 49 مجم/كجم 50 مجم/كجم؛ 51 مجم/كجم؛ 52 مجم/كجم؛ 53 مجم/كجم؛ 54 مجم/كجم؛ 55 مجم/كجم؛ 56 مجم/كجم؛ ‎ST‏ ‏مجم/كجم؛ 58 مجم/كجم؛ 59 مجم/كجم؛ 60 مجم/كجم؛ 65 مجم/كجم؛ 70 مجم/كجم؛ 75 مجم/كجم؛ 80 مجم/كجم؛ 85 مجم/كجم؛ 90 مجم/كجم؛ 95 مجم/كجم؛ 100 مجم/كجم؛ 105
5 . مجم/كجم؛ 110 مجم/كجم؛ 115 مجم/كجم؛ 120 مجم/كجم؛ 125 مجم/كجم؛ 130 مجم/كجم؛
مجمإ/كجم» 140 مجم/كجم» 145 مجم/كجم» 150 مجم/كجم» 155 مجم/كجم» 160 مجم/كجم؛ بما في ذلك جميع الأرقام الصحيحة التي بينها. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة ‎(Hl)‏ عند 10 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة ‎(Ill)‏ عند 20 5 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة )11( عند 30 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة )111( عند 40 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة ‎(Ill)‏ عند 60 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة )111( عند 80 0 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة ‎(I)‏ عند 160 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والذي له الصيغة ‎(Il)‏ عند 50 مجم/كجم. إن كان ‎(Glas‏ قد يتم إعطاء الجرعة اليومية الفعالة من المركب الفعال في صورة اثنتين؛ ثلاث؛ أريع» خمس» ست أو أكثر من الجرعات الفرعية المعطاة على نحو منفصل عند فواصل ملائمة 5 خلال اليوم» اختياريًا» في صور ‎Bang‏ جرعة. في مواقف بعينهاء تمثل الجرعة مرة إعطاء واحدة في اليوم. في تجسيدات معينة؛ تمثل الجرعة واحدة أو أكثر من مرات الإعطاء كل 2؛ 3 4؛ 5؛ 6؛ 7 9 10 12011 13ل 14 بي أمكل 30301 4« 5< 6« ت 8 ق 10 12:11 أسبوع؛ أو كل ¢1 2» 3 4» 5 6» 7« 8« 9 10 11 12 شهرء حسب الحاجة؛ للحفاظ على التعبير المطلوب عن بروتين ديستروفين وظيفي. في تجسيدات معينة؛ يتم تحديد الجرعات مرة أو 0 أكثر كل أسبوعين. في بعض التجسيدات؛ يتم تحديد الجرعات مرة كل أسبوعين. في تجسيدات متنوعة؛ يتم تحديد الجرعات مرة أو أكثر كل شهر. في تجسيدات معينة؛ يتم تحديد الجرعات مرة كل شهر. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ أسبوعيًا عند 10 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ أسبوعيًا 5 عند 20 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ
أسبوعيًا عند 30 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة
لاتجاه النسخ أسبوعيًا عند 40 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر
المضادة لاتجاه النسخ أسبوعيًا عند 60 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات
الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ أسبوعيًا عند 80 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ أسبوعيًا عند 100 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛
يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ أسبوعيًا عند 160 مجم/كجم. على النحو
المستخدم بهذه الوثيقة؛ معنى أسبوعيًا كل أسبوع وفقًا لما هو معروف في المجال.
في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل أسبوعين عند
0 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل
0 أسبوعين عند 20 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل أسبوعين عند 30 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل أسبوعين عند 40 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل أسبوعين عند 60 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل أسبوعين عند 80
5 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل أسبوعين عند 100 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل أسبوعين عند 160 مجم/كجم. على النحو المستخدم بهذه الوثيقة. معنى كل أسبوعين ‎lg‏ لما هو معروف في المجال. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل ثلاثة أسابيع عند
0 10 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل ثلاثة أسابيع عند 20 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل ثلاثة أسابيع عند 30 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل ثلاثة أسابيع عند 40 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل ثلاثة أسابيع عند 60 مجم/كجم. في بعض
5 التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل ثلاثة أسابيع عند 80
مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل ثلاثة أسابيع عند 100 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ كل ثلاثة أسابيع عند 160 مجم/كجم. على النحو المستخدم بهذه الوثيقة» معنى كل ثلاثة أسابيع ‎Bre‏ كل ثلاثة أسابيع حسبما هو معروف في المجال.
في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ شهريًا عند 10 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ شهريًا عند 20 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ شهريًا عند 30 مجم/كجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ شهريًا عند 40 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة
0 الاتجاه النسخ شهريًا عند 60 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ شهريًا عند 80 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ شهريًا عند 100 مجم/كجم. في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ شهريًا عند 160 مجم/كجم. على النحو المستخدم بهذه الوثيقة معنى ‎Bed‏ كل شهر حسبما هو معروف في المجال.
5 حسبما هو مفهوم في المجال؛ يتم الإعطاء أسبوعيًا؛ كل أسبوعين؛ كل ثلاثة أسابيع؛ أو شهريًا من جرعة أو أكثر أو جرعات مقسمة ورد شرحها بهذه الوثيقة. يمكن إعطاء جزيئات الحمض النووي ومترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والموصوفة بهذه الوثيقة للخلايا بواسطة مجموعة متنوعة من الطرق المعروفة لهؤلاء من المتآلفين مع المجال؛ بما في ذلك؛ دون تقييد؛ التغليف في جسيمات شحمية؛ عن طريق ‎JAY‏ الأيوني؛ أو عن طريق
0 التضمين في مواد ناقلة أخرى؛ ‎Jie‏ أنواع الهلام المائتي؛ مركبات سيكلو ديكسترين؛ كبسولات بحجم النانو قابلة للتحلل بيولوجيًا؛ وكريات دقيقة قابلة للالتصاق بيولوجيًا؛ كما يوصف هنا ومعروف في المجال. في تجسيدات معينة؛ قد يتم استخدام تقنية الاستحلاب الدقيق لتحسين الإتاحة الحيوية للعوامل الصيدلية الآلفة للشحم (غير القابلة للذويان في الماء). تتضمن الأمثلة ترايمترين ‎Dordunoo, 5. K., et al., Drug Development and Industrial Pharmacy, )‏
17(12), 1685-1713, 1991 and REV 5901 (Sheen, ©. C., etal., J Pharm 5
‎(Sci 80(7), 712-714, 1991‏ من بين فوائد ‎gal‏ يوفر الاستحلاب الدقيق إتاحة ‎Liga‏ ‏معززة عن طريق توجيه الامتصاص على نحو مميز إلى الجهاز اللمفاوي بدلاً من الجهاز الدوري؛ الذي بالتالي يتجاوز ‎ASH‏ ويمنع تلف المركبات في الدورة ‎Ball‏ الصُفْراوثَة. في أحد جوانب الكشف؛ تحتوي الصيغ على مذيلات متكونة من أوليجومر كما يتوفر هنا ومادة حاملة مزدوجة الألفة واحدة على الأقل؛ حيث يكون للمذيلات متوسط قطر يبلغ أقل من حوالي
0 نانو متر. توفر التجسيدات الأكثر تفضيلاً مذيلات لها متوسط قطر أقل من حوالي 50 نانو مترء وتوفر التجسيدات الأكثر تفضيلاً ‎Waal‏ مذيلات لها متوسط قطر أقل من حوالي 30 نانو مترء أو حتى أقل من حوالي 20 نانو متر. بينما تتم دراسة كل المواد الحاملة مزدوجة الألفة الملائمة؛ تكون المواد الحاملة المفضلة حاليًا
0 بصفة عامة هي تلك التي لها بصفة عامة ‎Generally-Recognized-as—Safe dla‏ ‎(GRAS)‏ والتي يمكن أن تذيب مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والخاص بالكشف الحالي وتُجري استحلابًا دقيقًا له عند مرحلة لاحقة عندما يتلامس المحلول مع طور ماء معقد (مثل طور موجود في القناة المعدية المعوية البشرية). عادةً؛ يكون للمكونات مزدوجة الألفة التي تفي بهذه المتطلبات قيم ‎HLB‏ (توازن ألفة للماء إلى ألفة للشحم) تبلغ 20-2؛ وتحتوي الهياكل
5 الخاصة بها على شقوق أليفاتية بسلسلة مستقيمة في النطاق البالغ من 0-6 إلى 0-20. تتضمن الأمثلة مركبات جليسيريد دهنية معالجة ببولي إيثيلين-جليكول ومركبات بولي إيثيلين جليكول. تتضمن الأمثلة على المواد الحاملة مزدوجة الألفة مركبات جليسيريد دهنية معالجة ببولي إيثيلين جليكول مشبعة أو أحادية غير مشبعة؛ مثل تلك التي تم الحصول عليها من الزيوت النباتية المتنوعة المهدرجة بشكل كلي أو جزئي. قد تتكون هذه الزيوت على نحو مفيد من مركبات
0 جليسيريد لحمض تراي-»؛ داي-؛ وإسترات مونو - دهني وداي- ومونو-بولي (إيثيلين جليكول) من الأحماض الدهنية المناظرة؛ مع تفضيل تحديدًا تركيبة حمض دهني متضمنة حمض كابريك 4- 0 حمض كابريك 969-3؛ حمض لوريك 9650-40 حمض ‎diye‏ 9624-14 حمض بالميتيك 9614-4 وحمض ستياربك 9615-5. تتضمن فئة أخرى مفيدة من المواد الحاملة مزدوجة الألفة سوربيتان و/أو سوربيتول تمت أسترته ‎(hs‏ باستخدام أحماض دهنية مشبعة أو أحادية غير
5 مشبعة (سلسلة ‎(SPAN‏ أو نظائر ‎dallas‏ بإيثوكسيل مناظرة (سلسلة ‎(TWEEN‏
قد تكون المواد الحاملة مزدوجة الألفة المتاحة ‎Glad‏ مفيدة تحديدًاء متضمنة سلسلة ‎«Gelucire‏ ‎<Labrasol Labrafil‏ أو ‎Lauroglycol‏ (المصنعة والموزعة كلها بواسطة 81610556 ‎(Corporation, Saint Priest, France‏ 06 -مونو-أوليات» 06 -داي -أوليات؛ 6 -مونو-لورات وداي-لورات؛ ليستين» بولي سوريات 80؛ إلى غير ذلك (المنتجة والموزعة بواسطة عدد من الشركات في الولايات المتحدة الأمريكية وفي كل أنحاء العالم). في تجسيدات معينة؛ قد يحدث التوصيل عن طريق استخدام جسيمات شحمية؛ كبسولات بحجم النانوء جسيمات دقيقة؛ كريات دقيقة؛ جسيمات شحمية؛ حويصلات؛ وما شابه؛ لإدخال التركيبات الصيدلية الخاصة بالكشف الحالي في خلايا العائل الملائمة. بشكل محدد؛ قد تتم صياغة التركيبات الصيدلية الخاصة بالكشف الحالي للتوصيل إما مغلفة في جسيم دهني؛ جسيم شحمي؛ 0 حوبصلة؛ كربة بحجم النانو؛ جسيم بحجم النانو أو ما شابه. قد يتم إجراء صياغة واستخدام المواد الناقلة المستخدمة للنقل هذه باستخدام التقنيات المعروفة والتقليدية. تعتبر البوليمرات الآلفة للماء الملائمة للاستخدام في الكشف الحالي هي تلك التي تكون قابلة للذويان في الماء بسهولة؛ يمكن إلحاقها تساهميًا بشحم مكون لحويصلة؛ وتكون محتملة في جسم الكائن ‎al)‏ بدون تأثيرات سامة (أي؛ تكون متوافقة بيولوجيًا). تتضمن البوليمرات الملائمة بولي 5 (بثيلين جليكول) ‎(PEG)‏ بولي لاكتيك (يُطلق عليه أيضًا بولي لاكتيد). حمض بولي جليكوليك (يُطلق عليه أيضًا بولي جليكوليد)؛ بوليمر مشترك من حمض بولي لاكتيك-بولي جليكوليك؛ وكحول بولي فينيل. في تجسيدات معينة؛ يكون للبوليمرات متوسط وزن جزيئي يبلغ من حوالي 0 أو 120 دالتون حتى حوالي 5,000 أو 10,000 دالتون؛ أو من حوالي 300 دالتون إلى حوالي 5,000 دالتون. في تجسيدات ‎al‏ يكون البوليمر هو بولي (إيثيلين جليكول) له وزن 0 جزيئي متوسط يبلغ من حوالي 100 إلى حوالي 5,000 دالتون» أو له وزن جزيئي يبلغ من حوالي 0 إلى حوالي 5,000 دالتون. في تجسيدات معينة؛ يكون البوليمر هو بولي (إيثيلين جليكول) له وزن جزيئي متوسط يبلغ حوالي 750 دالتون (على سبيل المثال ‎(PEG(750)‏ قد يتم تحديد البوليمرات ‎Waal‏ بواسطة عدد المونومرات فيها؛ يستخدم تجسيد مفضل خاص بالكشف الحالي بوليمرات من حوالي ثلاث مونومرات على الأقل؛ ‎Jie‏ بوليمرات ‎PEG‏ المتكونة من ثلاث 5 مونومرات (يبلغ وزنها الجزيئي المتوسط تقريبًا 132 دالتون).
تتضمن البوليمرات الأخرى الآلفة للماء التي قد تكون ملائمة للاستخدام في الكشف الحالي بولي فينيل بيروليدون؛ بولي ميثوكسازولين؛ بولي إيثيل أوكسازولين؛ بولي هيدروكسي بروييل ميثاكريلاميد؛ بولي ميثاكريلاميد؛ بولي داي ميثيل أكريلاميد؛ ومركبات سيليلوز مشتقة ‎ie‏ ‏هيدروكسي ميثيل سيليلوز أو هيدروكسي إيثيل سيليلوز.
في تجسيدات معينة؛ تشتمل صيغة خاصة بالكشف الحالي على بوليمر متوافق بيولوجيًا مختار من المجموعة المكونة من مركبات بولي ‎canal‏ مركبات بولي كربونات؛ مركبات بولي ألكيلين» بوليمرات من أكربليك وميثاكريليك إسترات؛ بوليمرات بولي فينيل؛ مركبات بولي جليكوليد؛ مركبات بولي سيلوكسان؛ مركبات بولي ‎lym‏ وبوليمرات مشتركة منهاء مركبات سيليلوز؛ بولي بروبيلين؛ مركبات بولي إيثيلين؛ بولي ستايرين؛ بوليمرات من حمض لاكتيك وحمض ‎(sila‏ مركبات
0 بولي أنهيدريد؛ بولي (أورثو)إسترات؛ بولي (حمض بيوتيك)؛ بولي (حمض فاليريك)؛ بولي (لاكتيد-كابرولاكتون مشترك)؛ مركبات بولي سكاريد؛ بروتينات؛ أحماض بولي هيالورونيك؛ مركبات بولي سيانو ‎DST‏ ومزائج؛ خلائط أو بوليمرات مشتركة منها. تكون مركبات سيكلو ديكسترين عبارة عن مركبات أوليجو سكاريد حلقية؛ تتكون من 6؛ 7 أو 8 ‎clang‏ جلوكوز؛ يتم التدليل ‎Lede‏ بواسطة الحرف اليوناني ‎eB ear‏ أو ‎oy‏ على التوالي. يتم ريط
5 وحدات الجلوكوز بواسطة روابط 1-0 4-جلوكوزيديك. كتسلسل من هيئة المقعد الخاصة بوحدات السكر؛ يتم وضع كل مجموعات الهيدروكسيل الثانوية (عند 0-2 0-3) على جانب واحد من الحلقة؛ بينما يتم وضع كل مجموعات الهيدروكسيل الرئيسية عند 0-6 على الجانب الآخر. كنتيجة؛ تكون الأسطح الخارجية آلفة للماء؛ مما يجعل مركبات سيكلو ديكسترين قابلة للذويان في الماء. على النقيض» تكون التجاويف الخاصة بمركبات سيكلو ديكسترين غير آلفة للماء؛ ‎Cum‏
0 إنها تكون مرتبطة بواسطة الهيدروجين الخاص بذرات 6-3 و0-5؛ وبواسطة ذرات أكسجين تشبه الإيثر. تسمح هذه القوالب بالتعقيد باستخدام مجموعة متنوعة من المركبات غير الآلفة للماء ‎Gans‏ ‏متضمنة؛ على سبيل المثال؛ المركبات الستيرويدية ‎Jie‏ 017-إيستراديول (انظر؛ على سبيل المثال» )1994( 38:1-3-113 ‎.(van Uden et al.
Plant Cell Tiss.
Org.
Cult.‏ يحدث التعقيد بواسطة تفاعلات ‎Van der Waals‏ وعن طريق تكوين رابطة هيدروجين.
لاستعراض عام لكيمياء مركبات سيكلو ديكسترين؛ انظنء ‎Wenz Wenz, Agnew.
Chem.‏ ‎Int.
Ed.
Engl., 33:803-822 (1994)‏ تعتمد الخصائص الفيزيائية-الكيميائية لمشتفات السيكلو ديكسترين بقوة على نوع ودرجة الاستبدال. على سبيل المثال؛ قابليتها للذويان في نطاقات الماء من غير قابلة للذوبان (على سبيل ‎(Jaa‏
تراي أسيتيل-بيتا -سيكلو ديكسترين) إلى قابلة للذويان بنسبة 96147 (وزن/حجم) (6©-2-بيتا- سيكلو ديكسترين). بالإضافة إلى ذلك؛ فإنها تكون ‎ALE‏ للذويان في العديد من المذيبات العضوية. تسمح خصائص مركبات السيكلو ديكسترين بالتحكم في القابلية للذويان الخاصة بمكونات الصيغة المتتوعة عن طريق زيادة أو تقليل قابليتها للذويان. لقد تم وصف العديد من مركبات سيكلو ديكسترين وطرق لتحضيرها. على سبيل ‎Chay (Jbl‏
‎(Parmeter (I), etal 0‏ (ابراءة الاختراع الأمريكية رقم 3,453,259) 5 ‎et al‏ ,618071818 . (براءة الاختراع الأمريكية رقم 3,459,731) مركبات سيكلو ديكسترين كهروطبيعية. تتضمن المشتقات الأخرى مركبات سيكلو ديكسترين ذات الخصائص الكاتيونية ‎Parmeter]‏ (!ا)؛ براءة الاختراع الأمريكية رقم 3,453,257]؛ مركبات سيكلو ديكسترين المرتبطة تبادليًا غير ‎ALG‏ للذوبان (501005؛ براءة الاختراع الأمريكية رقم 3,420,788)؛ ومركبات سيكلو ديكسترين ذات
‏5 الخصائص الأنيونية ‎(Hl) Parmeter]‏ براءة الاختراع الأمريكية رقم 3,426,011]. من بين مشتقات السيكلو ديكسترين ذات الخصائص الأنيونية؛ الأحماض الكربوكسيلية؛ أحماض الفسوفورء أحماض الفوسفين» أحماض فوسفونيك؛ أحماض فوسفوريك؛ أحماض ثيو فوسفونيك؛ أحماض ثيو سلفينيك» وأحماض سلفونيك قد تم إلحاقها بالسيكلو ديكسترين الرئيسي [انظن ‎Parmeter‏ (اا)؛ فيما سبق]. علاوة على ذلك؛ فقد تم وصف مشتقات سلفو ألكيل إيثر سيكلو ديكسترين بواسطة
‎etal 0‏ ,8اا518. (براءة الاختراع الأمريكية رقم 5,134,127). تتكون الجسيمات الشحمية من غشاء شحمي ثنائي الطبقات واحد على الأقل يُغلف حجيرة داخلية مائية. قد يتم تمييز الجسيمات الشحمية بنوع الغشاء وبالحجم. تشتمل حويصلات صغيرة أحادية الصفائح ‎(SUVS)‏ على غشاء فردي ونمطيًا بقطر يتراوح فيما بين 0,02 و0,05 ميكرو متر؛ تكون الحويصلات الكبيرة أحادية الصفائح ‎(LUVS)‏ أكبر نمطيًا من 0,05 ميكرو متر. تشتمل
‏5 الحويصلات الكبيرة قليلة الصفائح والحويصلات متعددة الصفائح على طبقات غشاء متعددة؛ ‎Bale‏
ما تكون متحدة المركز وتكون نمطيًا أكبر من 0,1 ميكرو متر. يُطلق على الجسيمات الشحمية ذات الأغشية المتعددة غير متحدة المركزء أي؛ الحويصلات الأصغر المتعددة المتضمنة في حوصيلة أكبر؛ مسمى حوبصلات متعددة الحويصلات. يتعلق أحد جوانب الكشف الحالي بالصيغ المشتملة على الجسيمات الشحمية المحتوية على مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف الحالي؛ حيث تتم صياغة غشاء الجسيم الشحمي لتوفير جسيم شحمي بسعة حمل متزايدة. على نحو بديل أو بالإضافة إلى ذلك؛ قد يتم تضمين مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والخاص بالكشف الحالي في» أو امتزازه على؛ الطبقة الثنائية للجسيم الشحمي الخاصة بالجسيم الشحمي. قد يتكتل مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ خاص بالكشف الحالي مع عامل خافض للتوتر السطحي شحمي وبتم ‎ales‏ داخل الحيز الداخلي 0 للجسيم الشحمي؛ في هذه الحالات؛ تتم صياغة غشاء الجسيم الشحمي لمقاومة التأثيرات التمزيقية الخاصة بتكتل العامل الفعال-العامل الخافض للتوتر السطحي. وففًا لأحد تجسيدات الكشف الحالي؛ تحتوي الطبقة الثنائية للجسيم الشحمي الخاصة بجسيم شحمي على شحوم مشتقة باستخدام بولي (إيثيلين جليكول) ‎(PEG)‏ بحيث تمتد سلاسل ‎PEG‏ ‏من السطح الداخلي للطبقة الثنائية للجسيم الشحمي إلى الحيز الداخلي المغلف بواسطة الجسيم 5 الشحمي؛ وتمتد من الجزء الخارجي للطبقة الثنائية للجسيم الشحمي إلى البيئة المحيطة. تكون العوامل الفعالة المتضمنة داخل الجسيمات الشحمية الخاصة بالكشف الحالي في صورة مذابة. قد يتم احتجاز تكتلات من العامل الخافض للتوتر السطحي والعامل الفعال (مثل المستحلبات أو المذيلات المحتوية على العامل الفعال محل الاهتمام) داخل الحيز الداخلي من الجسيمات الشحمية وفقًا للكشف الحالي. يعمل عامل خافض للتوتر السطحي لتشتيت وإذابة 0 العامل الفعال؛ وقد يتم اختياره من أي عامل خافض للتوتر السطحي أليفاتي؛ أليفاتي حلقي أو عطري ملائم؛ بما في ذلك دون قصر الأمر على مركبات ليزوفوسفاتيديل كولين متوافقة بيولوجيًا ‎(LPGs)‏ بأطوال سلسلة متنوعة (على سبيل المثال؛ من حوالي 614 إلى حوالي 020). قد يتم استخدام شحوم مشتقة من البوليمر مثل شحوم ‎PEG‏ لتكوين ‎Al‏ إذ أنها ستعمل لتثبيط اندماج المذيلة/الغشاء؛ وحيث إن إضافة بوليمر إلى العامل الخافض للتوتر السطحي جزيئات ‎JIE‏ من ‎CMC 5‏ الخاص بالعامل الخافض للتوتر السطحي وتساعد في تكوين ‎ALU‏ يتم تفضيل عوامل
خافضة للتوتر السطحي لها ‎CMOs‏ في نطاق الميكرو مولار؛ قد يتم استخدام عوامل خافضة للتوتر السطحي ب ‎CMC‏ أعلى لتحضير مذيلات محتجزة داخل الجسيمات الشحمية الخاصة بالكشف الحالي. قد يتم تحضير الجسيمات الشحمية وفقًا للكشف الحالي بواسطة أي من مجموعة متنوعة من التقنيات المعروفة في المجال. انظرء على سبيل ‎(Jal)‏ براءة الاختراع الأمريكية رقم
New RRC, WO 96/14057 ‏طلبات الطلب الدولي المنشورة‎ 1
Liposomes: A practical approach, IRL Press, Oxford (1990), pages 33- 104; Lasic DD, Liposomes from physics to applications, Elsevier Science ‏قد يتم تحضير الجسيمات‎ «Jd! ‏على سبيل‎ Publishers BV, Amsterdam, 1993 0 الشحمية الخاصة بالكشف الحالي عن طريق نشر شحم مشتق باستخدام بوليمر آلف للماء في جسيمات شحمية مشكلة مسبقًاء مثل عن طريق تعريض جسيمات شحمية مشكلة مسبقًا إلى مذيلات مكونة من بوليمرات مطعمة بالشحم» بتركيزات شحم تناظر النسبة المئوية بالمول النهائية للشحم المشتق الذي يكون مطلويًا في الجسيم الشحمي. يمكن أيضًا تكوين الجسيمات الشحمية المحتوية على بوليمر آلف للماء عن طريق التجانس؛ تميه مجال الشحم؛ أو تقنيات البثق؛ كما 5 يُعرف في المجال. في إجراء صياغة توضيحي آخرء يتم أولاً تشتيت العامل الفعال بواسطة المعالجة بالموجات الصوتية في ليزوفوسفاتيديل كولين أو عامل خافض للتوتر السطحي ‎AT‏ منخفض ‎CMC‏ (بما في ذلك الشحوم المطعمة ببوليمر) يذيب بالفعل الجزيئات غير الآلفة للماء. يتم بعد ذلك استخدام المعلق الناتج من المذيلات الخاص بالعامل الفعال لإعادة تميه عينة شحم مجففة تحتوي على نسبة مئوية بالمول ملائمة من شحم مطعم ‎apn‏ أو كوليسترول. ثم يتم تشكيل المعلق من الشحم والعامل الفعال في جسيمات شحمية باستخدام تقنيات البثق كما يُعرف في المجال؛ والجسيمات الشحمية الناتجة المفصولة عن المحلول غير الممحفظ عن طريق فصل العمود القياسي. في أحد جوانب الكشف الحالي؛ يتم تحضير الجسيمات الشحمية ليكون لها أحجام متجانسة إلى حدٍ 5 كبير في نطاق حجم مختار. تنطوي إحدى طرق تشكيل الحجم الفعالة على بثق معلق مائي من
الجسيمات الشحمية خلال سلسلة من أغشية البولي كريونات التي لها حجم مسام منتظم مختار؛ سيناظر حجم المسام الخاص بالغشاء بالتقريب أحجام الجسيمات الشحمية الأكبر المنتجة عن طريق البثق من خلال ذلك الغشاء . انظر على سبيل المثال» براءة الاختراع الأمريكية رقم 3 (12 أبريلء 1988). في تجسيدات معينة؛ قد يتم استخدام مواد كاشفة مثل ‎DharmaFECT® 5‏ و ‎Lipofectamine®‏ لإدخال البولي نوكليوتيدات أو البروتينات في الخلايا.
تعتمد السمات المميزة للإطلاق لصيغة خاصة بالكشف الحالي على المادة الممحفظة؛ تركيز العقار الممحفظ» ووجود عوامل معدلة للإطلاق. على سبيل المثال» يمكن معالجة الإطلاق ليكون معتمدًا على الرقم الهيدروجيني؛ على سبيل المثال؛ باستخدام غلاف حساس للرقم الهيدروجيني يُطلق فقط عند رقم هيدروجيني منخفض؛ كما في المعدة؛ أو رقم هيدروجيني أعلى؛ كما في
0 الأمعاء. يمكن استخدام غلاف معوي لمنع حدوث الإطلاق حتى بعد المرور خلال المعدة. يمكن استخدام أغلفة أو خلائط متعددة من سياناميد ممحفظة في مواد مختلفة للحصول على إطلاق أولي في المعدة؛ متبوعًا بإطلاق لاحق في الأمعاء. يمكن معالجة الإطلاق ‎Lal‏ عن طريق تضمين أملاح أو عوامل مكونة للمسام؛ يمكنها زيادة امتصاص الماء أو إطلاق العقار عن طريق الانتشار من الكبسولة. يمكن ‎Lal‏ استخدام السواغات التي تُعدل القابلية للذويان الخاصة بالعقار للتحكم في
معدل الإطلاق. يمكن ‎Load‏ تضمين العوامل التي تعزز من انحلال القالب أو الإطلاق من القالب. يمكن إضافتها إلى العقار» إضافتها في صورة طور منفصل (أي؛ في صورة جسيمات دقائقية)؛ أو يمكن إذابتها على نحو مشترك في طور البوليمر اعتمادًا على المركب. في غالبية الحالات ينبغي أن يبلغ المقدار فيما بين 0,1 وثلاثين بالمائة (وزن/وزن من البوليمر). تتضمن أنواع العوامل المعززة للانحلال الأملاح غير العضوية ‎(ie‏ أمونيوم سلفات وأمونيوم كلوريد؛ الأحماض العضوية
مثل حمض سيتريك؛ حمض بنزويك؛ ‎(many‏ أسكوربيك؛ القواعد غير العضوية ‎ie‏ صوديوم كربونات؛ البوتاسيوم كريونات؛ كالسيوم كربونات؛ زنك كربونات؛ وزنك هيدروكسيد؛ والقواعد العضوية مثل بروتامين سلفات؛ سبيرمين؛ كولين؛ إيثانول أمين» داي إيثانول أمين» وتراي إيثانول أمين وعوامل خافضة للتوتر السطحي ‎Tween® (ie‏ و ‎.Pluronic®‏ تتم إضافة عوامل مكونة للمسام ‎Canal‏ بنية دقيقة إلى القوالب ‎ol)‏ المركبات القابلة للذوبان في الماء مثل الأملاح غير
العضوية والمواد السكرية) في صورة جسيمات دقائقية. يكون النطاق نمطيًا فيما بين واحد بالمائة وثلاثين بالمائة (وزن/وزن بوليمر). يمكن ‎Wail‏ معالجة الامتصاص عن ‎Gob‏ تغيير زمن البقاء الخاص بالجسيمات في المعي. يمكن تحقيق هذاء على سبيل ‎(Jal)‏ عن طريق تغليف الجسيم باستخدام» أو اختياره باعتباره المادة الممحفظة؛ بوليمر لاصق مخاطي. تتضمن الأمثلة غالبية البوليمرات ذات مجموعات الكريوكسيل الحرة؛ ‎Jia‏ كيتوزان» مركبات سيليلوز» وبخاصة مركبات بولي أكريلات (كما يُستخدم هناء تشير مركبات بولي أكريلات إلى بوليمرات تتضمن مجموعات أكريلات ومجموعات أكريلات معدلة ‎ie‏ ‏مركبات سيانو أكريلات ومركيات ميثاكريلات). قد تتم صياغة مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ليكون متضمئًا داخل؛ أو؛ متكيفًا للإطلاق 0 بواسطة جهاز جراحي أو طبي أو غرس. في جوانب معينة؛ قد يتم تغليف أو معالجة غرس باستخدام مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ. على سبيل المثال؛ قد يتم استخدام أنواع الهلام المائي؛ أو البوليمرات الأخرى» ‎Jie‏ البوليمرات المتوافقة بيولوجيًا و/أو القابلة للتحلل بيولوجيًا؛ لتغليف غرس بالتركيبات الصيدلية الخاصة بالكشف الحالي (أي؛ قد يتم تكييف التركيبة للاستخدام مع جهاز طبي عن طريق استخدام هلام مائي أو بوليمر آخر). تكون البوليمرات والبوليمرات 5 المشتركة لتغليف الأجهزة الطبية باستخدام عامل معروفة جيدًا في المجال. تتضمن الأمثلة على أنواع الغرس» إلا أنها ليست قاصرة ‎(lo‏ واقيات طعم؛ واقيات طعم لفصل العقار ‎Sf als‏ ‎ll‏ قساطر وعائية؛ قساطر ‎halls‏ طعوم ‎(Ailey‏ صمامات قلب ترقيعية؛ أجهزة ضبط نبضات ‎(lal‏ مزيلات الرجفان القابلة للزرع» إبر الاستخدام داخل الوريد؛ أجهزة لتنضيد وتكوين العظام؛ مثل المسامير؛ المسامير الملولبة؛ الصفائح» والأجهزة الأخرى» وقوالب النسيج الصناعية ‎AY‏ ‏0 الجروح. بالإضافة إلى الطرق المتوفرة هناء قد تتم صياغة مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ للاستخدام ‎By‏ للكشف للإعطاء بأية طريقة ملائمة للاستخدام في الطب البشري أو البيطري؛ عن طريق التناظر مع المواد الصيدلية الأخرى. قد يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ والصيغ المناظرة الخاصة بها بمفردها أو في توليفة مع استراتيجيات هلاجية أخرى في علاج 5 الحَثَل العَضَلِي؛ ‎Jie‏ زرع أرومة عضلية؛ العلاجات بالخلايا الجذعية؛ إعطاء مضادات حيوية من
أمينو جليكوزيد؛ مثبطات البروتيزوم؛ والعلاجات بالتنظيم التصاعدي(على سبيل المثال؛ التنظيم التصاعدي للأوتروفين؛ نظير بارا للصبغ الجسدي خاص بالديستروفين). في بعض التجسيدات؛ قد يتم إعطاء العامل العلاجي الإضافي قبل؛ على نحو متزامن مع؛ أو على نحو تالي لإعطاء مترافق الأوليجومر المضاد لاتجاه النسخ والخاص بالكشف الحالي. على سبيل المثال؛ قد يتم إعطاء مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ في توليفة مع ستيرويد و/أو مضاد حيوي. في تجسيدات بعينها؛ يتم ‎sla)‏ مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ لمربض بركيزة ذات علاقة بالستيرويد (على سبيل ‎(Jal‏ العلاج بالستيرويد ذي الركيزة المتقطعة أو المزمنة/المستمرة. على سبيل المثال» في بعض التجسيدات تم علاج المريض باستخدام كورتيكوستيرويد قبل إعطاء أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ويستمر في تلقي العلاج بالستيرويد. في 0 بعض التجسيدات؛ يكون الستيرويد هو كورتيكويد سكري أو بربدنيزون. تكون طرق الإعطاء الموصوفة مخصصة فقط كدليل حيث سيكون أحد الممارسين من ذوي المهارة قادرًا على تحديد طريقة الإعطاء المثلى وأية جرعة أي حيوان محدد وحالة محددة بسهولة. لقد تمت محاولة أساليب متعددة لإدخال مادة جينية جديدة وظيفية في ‎(LIAN‏ في المعمل وفي جسم الكائن الحي (244:1275-1280 ‎(Friedmann (1989) Science,‏ تتضمن هذه الأساليب تكامل 5 الجين الذي سيتم التعبير عنه في فَيْرْوْسَات £238 معدلة ) ‎Friedmann (1989) supra;‏ ‎¢(Rosenberg (1991) Cancer Research 51(18), suppl.: 5074S-5079S‏ التكامل في نواقل لغير القَيْرُوْسَات ‎pagal)‏ (على سبيل المثال؛ نواقل فيروسية مصاحبة للفيروس الغدي) ( ‎Rosenfeld, et al. (1992) Cell, 68:143-155; Rosenfeld, et al.‏ ‎Science, 252:431-434‏ (1991))؛ أو توصيل جين محؤّر مرتبط بعنصر معزز-محسن 0 غير متجانس عبر الجسيمات الشحمية ((1989) ‎(Friedmann‏ المذكور ‎Lad‏ سبق؛ ‎Brigham, et al. (1989) Am.
J.
Med.
Sci., 298:278-281; Nabel, et al.‏ ‎Science, 249:1285-1288; Hazinski, et al. (1991) Am.
J.
Resp.‏ )1990( ‎Wang and Huang (1987) Proc.
Natl. 4 «Cell Molec.
Biol., 4:206-209‏ ‎(Acad.
Sci. (USA), 84:7851-7855‏ مقترن بنظم نقل معتمدة على كاتيون نوعية لمركب 5 ترابطي )263:14621-14624 ‎(Wu and Wu (1988) J.
Biol.
Chem.,‏ أو استخدام
‎DNA‏ مجرد؛ نواقل ‎suai‏ وراثي ((1990) ‎et al.‏ ا268ل8؛ المذكور فيما سبق)؛ ‎Wolff et al.‏ ‎Science, 247:1465-1468‏ (1990)). ينتج الحقن المباشر للجينات المحورة في النسيج تعبيرًا وراثيًا موضعيًا فقط ((1992) ‎Rosenfeld‏ المذكور ‎Lud‏ سبق)؛ ‎Rosenfeld et al.‏ )1991( المذكور ‎Lad‏ سبق؛ )1989( ‎Brigham et al.‏ المذكور فيما سبق؛ )1990( ‎Nabel‏ ‏5 المذكور ‎lad‏ سبق؛ 5 )1991( ‎Hazinski et al.‏ المذكور فيما سبق). أوضحت ‎de gana‏ ‎Am.
J.
Med.
Sci. (1989) 298:278-281 and Clinical ) .Brigham et al‏ ‎Research (1991) 39‏ (الملخص)) نقل العدوى في جسم الكائن الحي فقط لرئتي افئران بعد إما إعطاء معقد من جسيم شحمي ل ‎DNA‏ داخل الوريد أو داخل القصبة. يكمن مثال على مقالة مراجعة لإجراءات العلاج الجيني البشري في: -256:508 )1992( ‎Anderson, Science‏ 0 813. في تجسيد إضافي؛ يمكن أن تشتمل التركيبات الصيدلية ‎Uy‏ للكشف؛ إضافة إلى ذلك؛ على كريوهيدرات على النحو الوارد في )2016( 10981 ,7 ‎et al., Nat.
Comms.‏ 1180 والذي أدرج بالكامل ضمن مراجع هذه الوثيقة. في بعض التجسيدات؛ يمكن أن تشتمل التركيبات الصيدلية ‎UE,‏ للكشف على 965 هكسوز كريوهيدرات. على سبيل المثال؛ يمكن أن تشتمل التركيبة الصيدلية ‎Ey 5‏ للكشف على 965 جلوكوز؛ 965 فركتوز؛ أو 965 مانوز. في تجسيدات معينة؛ يمكن أن تشتمل التركيبات الصيدلية وفقًا للكشف على 962.5 جلوكوز و962.5 فركتوز. في بعض التجسيدات؛ يمكن أن تشتمل التركيبات الصيدلية وفقًا للكشف على كريوهيدرات يتم اختياره من: أربينوزن يوجد بكمية تبلغ 965 بالحجم» جلوكوز يوجد بكمية تبلغ 965 بالحجم؛ سوربيتول يوجد بكمية تبلغ 965 بالحجم؛ جالاكتوز يوجد بكمية تبلغ 965 بالحجم؛ فركتوز يوجد بكمية تبلغ 965 0 بالحجم؛ زيليتول يوجد بكمية تبلغ 965 بالحجم؛ مانوز يوجد بكمية تبلغ 965 بالحجم؛ توليفة من جلوكوز وفركتوز يوجد كل منهما بكمية تبلغ 962.5 بالحجم؛ وتوليفة من جلوكوز يوجد بكمية تبلغ 7 بالحجم؛ فركتوز يوجد بكمية تبلغ 902.86 بالحجم؛ وزيليتول يوجد بكمية تبلغ 961.4 بالحجم. 4 طرق الاستخدام -_ استعادة إطار قراءة الديستروفين باستخدام تخطي الإكسون
يتم اقتراح أسلوب علاجي محتمل لعلاج ‎DMD‏ الناتج بواسطة طفرات خارج الإطار في جين الديستروفين بواسطة الصورة الأخف من أمراض الحثل العضلي المعروفة باعتبارها ‎BMD‏ التي تكون ناتجة بواسطة الطفرات داخل الإطار. ستؤدي القدرة على تحويل طفرة خارج الإطار إلى طفرة داخل الإطار افتراضيًا إلى الحفاظ على إطار قراءة ‎MRNA‏ وإنتاج بروتين ديستروفين
مقصر داخليًا ولكنه وظيفي. تم تصميم مترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بالكشف ‎ala‏ هذا. يتداخل تهجين ‎PMO‏ باستخدام متوالية ‎MRNA‏ الأولي المستهدف مع تكوين معقد جدل ‎MRNA‏ ‏الأولي ويحذف الإكسون 51 من ‎MRNA‏ الناضج. ‎mans‏ الصيغة البنائية والهيئة الخاصتان بمترافقات الأوليجومر المضادة لاتجاه النسخ الخاصة بالكشف بازدواج القواعد النوعي للمتوالية مع
0 المتوالية المتممة. بواسطة آلية مشابهة؛ يسمح إيتيبليرسين» على سبيل المثال؛ الذي يعتبر ‎PMO‏ ‏تم تصميمه لتخطي الإكسون 51 من ‎MRNA‏ الأولي للديستروفين بازدواج القواعد النوعي للمتوالية مع المتوالية المتممة المتضمنة في الإكسون 51 من ‎MRNA‏ الأولي للديستروفين. سينتج ‎MRNA‏ الديستروفين الطبيعي المحتوي على كل 79 إكسونات بروتين ديستروفين طبيعي. يوضح الرسم البياني في الشكل 1 قطاعًا صغيرًا من ‎MRNA‏ الأولي للديستروفين 5 ‎MRNA‏
5 الناضج؛ من الإكسون 47 إلى الإكسون 53. يوضح شكل كل ‎gu)‏ كيفية تقسيم الروامز ‎Lad‏ ‏بين الإكسونات؛ جدير بالملاحظة؛ تتكون رامزة واحدة من ثلاثة نوكليوتيدات. تبداً الإكسونات المشكلة على شكل مستطيل وتنتهي بروامز كاملة. ‎Tas‏ الإكسونات المشكلة على شكل سهم برامزة كاملة ولكن تنتهي برامزة مقسمة؛ محتوية فقط على نوكليوتيد 1# من الرامزة. يتم تضمين النوكليوتيدين 2# و3# من هذه الرامزة في الإكسون التالي الذي سيبداً بشكل شيفرون.
0 يؤدي ‎MRNA‏ الديستروفين المفتقر إلى إكسونات كاملة من جين الديستروفين نمطيًا إلى ‎DMD‏ ‏يبين الرسم البياني في الشكل 2 نوعًا من الطفرة الجينية (حذف الإكسون 50) المعروفة بأنها تتسبب ‎DMD‏ حيث إن الإكسون 49 ينتهي برامزة كاملة ‎Tang‏ الإكسون 51 بالنوكليوتيد الثاني من رامزة»؛ تتم إزاحة إطار القراءة بعد الإكسون 49؛ مما يؤدي إلى إطار قراءة ‎MRNA‏ ‏خارج الإطار وتضمين الأحماض الأمينية غير الصحيحة بعد الطفرة. يؤدي الغياب التالي لنطاق
5 ربط ديستروجليكان وظيفي عند الطرف © إلى إنتاج بروتين ديستروفين غير ثابت.
يتخطي الإيتيبليرسين الإكسون 51 لاستعادة إطار قراءة ‎MRNA‏ حيث إن الإكسون 49 ينتهي برامزة كاملة والإكسون 52 يبداً بالنوكليوتيد الأول من رامزة؛ يؤدي حذف الإكسون 51 إلى استعادة إطار القراءة؛ مما يؤدي إلى إنتاج بروتين ديستروفين تم تقصيره داخليًا بموقع ريط ديستروجليكان سليم؛ مشابه لطفرة ‎BMD‏ 'في الإطار” (الشكل 3).
يتم دعم جدوى تحسين النمط الظاهري ل ‎DMD‏ باستخدام تخطي الإكسون لاستعادة إطار القراءة المفتوح ل ‎MRNA‏ الديستروفين بواسطة البحث غير الإكلينيكي. لقد أظهرت العديد من الدراسات في النماذج الحيوانية المتعلقة بالخثل العضلي ل ‎DMD‏ أن استعادة الديستروفين بواسطة تخطي الإكسون تؤدي إلى تحسينات يمكن الوثوق بها في قوة ووظيفة العضلات ( ;2011 ‎Sharp‏ ‎Yokota 2009; Wu 2008; Wu 2011; Barton—-Davis 1999; Goyenvalle 2004;‏
‎Gregorevic 2006; Yue 2006; Welch 2007; Kawano 2008; Reay 2008; van 0‏ ‎Lay (Putten 2012‏ مثال إجباري على هذا من دراسة حيث تمت مقارنة مستويات الديستروفين بعد العلاج بتخطي الإكسون (باستخدام ‎(PMO‏ بوظيفة العضلات في النفس النسيج. في فأر 7 خاص بالحثل؛ حافظت العضلات الْظْتبُوبِيَّة ‎(TA) dale)‏ المعالجة باستخدام ‎PMO‏ ‏نوعي ‎Jl‏ على -9675 من سعة القدرة القصوى لها بعد الانقباضات الحاثة على الإجهاد؛ بينما 5 حافظت عضلات ‎TA‏ للجانب المقابل فقط على ~%25 من سعة القدرة القصوى لها ‎Pp)‏ > 0,05( )2011 50810). في دراسة أخرى؛ تلقى 3 من كلاب ‎CXMD‏ ذات الحثل؛ عند عمر يبلغ 5-2 شهور» العلاج بتخطي الإكسون باستخدام ‎PMO‏ نوعي للطفرة الجينية الخاصة بها مرة في الأسبوع لمدة من 5 إلى 7 أسابيع أو أسبوع بعد الآخر لمدة 22 أسبوع. بعد العلاج بتخطي الإكسون؛ أظهر كل الكلاب الثلاثة تعبير وراثي شامل في كل أنحاء الجسم عن الديستروفين في 0 العضلة الهيكلية؛ إضافة إلى الحفاظ على أو تحسين السير (اختبار الجري لمسافة 15 متر) بالنسبة إلى القيمة القاعدية. على النقيض» أظهرت كلاب ‎CXMD‏ من نفس العمر غير المعالجة انخفاضًا ملحوظًا في السير على مدار الدراسة )2009 70/6018). تم إظهار أن 01/05 لها نشاط تخطي للإكسون أكثر عند تركيزات متساوية المولية من مركبات فوسفورو ثيوات في كل من فثران ‎MAX‏ وفي نموذج الفأر ل ‎DMD‏ المتوافق مع البشر ‎«(hDMD)‏ ‏5 التي تعبر عن كامل نسخة ‎DMD‏ البشرية )2009 ‎(Heemskirk‏ في التجارب المعملية يؤدي
استخدام تفاعل سلسلة بوليميراز للنسخ العكسي ‎(RT-PCR)‏ ولطخة ‎Western‏ (1//8) في خلايا العضلات الهيكلية البشرية العادية أو خلايا العضلات من مرضى ‎DMD‏ بطفرات مختلفة مُعرْضًا لتخطي الإكسون 51 إلى تحديد الإيتيبليرسين ‎(PMO)‏ كعامل حاث فعال لتخطي الإكسون 51. لقد تم تأكيد تخطي الإكسون 51 المستحث بالإيتيبليرسين في جسم الكائن الحي في نموذج الفأر ل ‎.(Arechavala-Gomeza 2007) hDMD‏ تتضمن النتائج الإكلينيكية لتحليل تأثير مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ يكون متممًا لمنطقة مستهدفة من الإكسون 51 الخاصة ب ‎MRNA‏ الأولي للديستروفين البشري وبحث على تخطي الإكسون 51: نسبة مئوية من الألياف الإيجابية للديستروفين ‎((PDPF)‏ اختبار السير لمدة ست دقائق ‎((6MWT)‏ فقد السير (ذنما) ‎«(NSAA) North Star Ambulatory Assessment‏ اختبارات الوظيفة الرئوية ‎(PFT)‏ القدرة على النهوض (من وضع استلقاء) بدون دعم خارجي؛ إنتاج الديستروفين الجديد والقياسات الوظيفية الأخرى. في بعض التجسيدات؛ يوفر الكشف الحالي ‎Bh‏ لإنتاج الديستروفين في خاضع للعلاج لديه طفرة في جين الديستروفين الذي يكون ‎Lajas‏ لتخطي الإكسون 51؛ تشتمل الطريقة على إعطاء الخاضع للعلاج مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ؛ أو ملح مقبول ‎Wana‏ منه؛ كما يوصف 5 هنا. في تجسيدات معينة؛ يوفر الكشف الحالي ‎Bla‏ لاستعادة إطار قراءة ‎MRNA‏ للحث على إنتاج بروتين ديستروفين في خاضع للعلاج يعاني من الحَثّل العَضَلِيَ لدوشين ‎(DMD)‏ لديه طفرة جين الديستروفين الذي يكون مُعرْضًا لتخطي الإكسون 51. يمكن قياس إنتاج البروتين عن طريق تفاعل سلسلة بوليميراز للنسخ العكسي ‎(RT-PCR)‏ تحليل لطخة ‎(Western‏ أو الكيثياء الهيستولوجية ‎(IHC) Lao lal)‏ في بعض التجسيدات؛ يوفر الكشف الحالي طرقًا لعلاج ‎DMD‏ في خاضع للعلاج في حاجة لذلك؛ حيث يكون لدى الخاضع للعلاج طفرة لجين الديستروفين الذي يكون مُعرْضًا لتخطي الإكسون 51 تشتمل الطريقة على إعطاء الخاضع للعلاج مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ؛ أو ملح مقبول ‎Baa‏ منه؛ كما يوصف هنا. في تجسيدات متنوعة؛ يتم قياس علاج الخاضع للعلاج بواسطة تأخير تقدم المرض. في بعض التجسيدات؛ يتم قياس علاج الخاضع للعلاج عن طريق 5 الحفاظ على السير في الخاضع للعلاج أو خفض فقد السير في الخاضع للعلاج. في بعض
التجسيدات؛ يتم قياس السير باستخدام اختبار السير ‎saad‏ 6 دقائق (61/1//1). في تجسيدات ‎das‏ يتم قياس السير باستخدام ‎.(NSAA) North Start Ambulatory Assessment‏ في تجسيدات متنوعة؛ يوفر الكشف ‎Jal)‏ طرقًا للحفاظ على الوظيفة الرئوية أو تقليل فقد الوظيفة الرئوية في خاضع للعلاج يعاني من ‎(DMD‏ حيث يكون لدى الخاضع للعلاج طفرة ‎DMD (pal‏ يكون مُعرْضًا لتخطي الإكسون ‎ST‏ تشتمل الطريقة على إعطاء الخاضع للعلاج مترافق أوليجومر ‎alias‏ لاتجاه النسخ؛ أو ملح مقبول ‎die Wana‏ كما يوصف هنا. في بعض التجسيدات؛ يتم قياس الوظيفة الرئوية باعتبارها ‎bball‏ 583( الأقصى ‎(MEP)‏ في تجسيدات معينة؛ يتم قياس الوظيفة الرئوية باعتبارها الضَّغْط ‎cig il)‏ الأقصى ‎(MIP)‏ في بعض التجسيدات؛ يتم قياس الوظيفة الرئوية باعتبارها السعة الحيوية القسرية ‎(FVC)‏
0 في تجسيد إضافي؛ ‎(Sa‏ إعطاء التركيبات الصيدلية ‎Ey‏ للكشف مع كربوهيدرات في طرق الكشف؛ إما في نفس الصيغة أو صيغة منفصلة؛ على النحو الوارد في ‎Han et al., Nat.‏ ‎«Comms. 7, 10981 (2016)‏ والذي أدرج بالكامل ضمن مراجع هذه الوثيقة. في بعض التجسيدات؛ يمكن إعطاء التركيبات الصيدلية الخاصة بالكشف مع 965 هكسوز كريوهيدرات. على سبيل المثال» يمكن إعطاء التركيبات الصيدلية الخاصة بالكشف مع 965 جلوكوز» 965 فركتوز؛
5 أو 965 مانوز. في تجسيدات معينة؛ يمكن إعطاء التركيبات الصيدلية الخاصة بالكشف مع 5 جلوكوز و962.5 فركتوز. في بعض التجسيدات؛ يمكن إعطاء التركيبة الصيدلية الخاصة بالكشف مع كربوهيدرات يتم اختياره من: أربينوز يوجد بكمية تبلغ 965 بالحجم؛ جلوكوز يوجد بكمية تبلغ 765 بالحجم؛ سوربيتول يوجد بكمية تبلغ 7065 بالحجم؛ جالاكتوز يوجد بكمية تبلغ 7065 بالحجم؛ فركتوز يوجد بكمية تبلغ 765 بالحجم؛ زبليتول يوجد بكمية تبلغ 7065 بالحجم؛ مانوز يوجد
0 بكمية تبلغ 7065 بالحجم؛ توليفة من جلوكوز وفركتوز يوجد كل منهما بكمية تبلغ 702.5 بالحجم؛ وتوليفة من جلوكوز يوجد بكمية تبلغ 765.7 بالحجم؛ فركتوز يوجد بكمية تبلغ 7062.86 بالحجم؛ وزبليتول يوجد بكمية تبلغ 701.4 بالحجم. في تجسيدات متنوعة؛ يتم إعطاء مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ ‎By‏ للكشف مع كمية فعالة ‎Ladle‏ من مركب غير ‎(ug in‏ مضاد للالتهاب. في بعض التجسيدات؛ يكون المركب غير
5 السترويدي المضاد للالتهاب عبارةً عن مثبط ‎NF-KB‏ على سبيل المثال؛ في بعض التجسيدات؛
قد يكون مثبط ‎Ble NF-KB‏ عن 07-1004 أو ملح مقبول صيدليًا منه. في تجسيدات متنوعة؛ قد يكون متبط ‎NF-KB‏ عبارةً عن مترافق من ساليسيلات و18انا. في بعض التجسيدات؛ يكون مثبط ‎lke NF-KB‏ عن 087-1041 أو ملح مقبول صيدليًا منه. في تجسيدات معينة؛ يكون متبط ‎Ble NF-KB‏ عن مترافق من ساليسيلات و0/5. في تجسيدات متنوعة؛ يكون مثبط ‎NF-KB‏ عبارةً عن ‎H‏ 0 بص رضن حي ‎H‏ ‏> > > 0 : ‎OH‏ ؛ أو ملح مقبول صيدليًا منه. في بعض التجسيدات؛ يكون المركب غير السترويدي المضاد للالتهاب عبارةً عن مثبط ‎TGF-b‏ ‏على سبيل ‎JE‏ فى تجسيدات معينة؛ يكون متبط ‎TGF-b‏ عبارة عن ‎HT-100‏ ‏0 في تجسيدات معينة؛ تم وصف مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ على النحو الموصوف والوارد بهذه الوثيقة لاستخدامه للعلاج. في تجسيدات معينة؛ تم وصف مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ على النحو الموصوف بهذه الوثيقة لاستخدامه في علاج ‎Jal‏ العَضَلِيَ لدوشين. في تجسيدات معينة؛ تم وصف مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ على النحو الموصوف بهذه الوثيقة لاستخدامه في تصنيع دواء لاستخدامه في العلاج. في تجسيدات ‎dime‏ تم وصف مترافق 5 أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ على النحو الموصوف بهذه الوثيقة لاستخدامه في تصنيع علاج لعلاج ‎(a)‏ العَصَّلِيَ لدوشين. 5. الأطقم يوفر الكشف ‎aka Lad‏ لعلاج مريض يعاني من مرض جيني يشتمل الطقم على جزيء مضاد لاتجاه النسخ على الأقل (على سبيل المثال» مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ يشتمل على مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ موضح في المتوالية رقم :1 ( معبأ في حاوية ملائمة؛ مع تعلميات لاستخدامه. قد تحتوي ‎١‏ لأطقم أيضًا على مواد كاشفة طرفية ‎Jie‏ محاليل منظمة؛ مثبتاتء إلى غير ذلك. ينبغي أن يدرك هؤلاء من ذوي المهارة في المجال أن التطبيقات الخاصة بالطريقة
السابقة لها استخدام واسع النطاق لتحديد الجزيئات المضادة لاتجاه النسخ الملائمة للاستخدام في علاج العديد من الأمراض الأخرى. في أحد التجسيدات؛ يشتمل الطقم على مترافق أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ وفقًا للصيغة (!!!). الأمثلة بالرغم من أنه قد تم وصف الكشف السابق ببعض من التفصيل على سبيل الإيضاح وإفراد أمثلة
لأغراض تتعلق بوضوح الاستيعاب؛ سيتضح بالفعل لأحد ذوي المهارة العادية في المجال في ضوء تعاليم هذا الكشف أنه قد يتم إجراء تغييرات وتعديلات معينة عليها دون الخروج عن فحوى ونطاق عناصر الحماية الملحقة. يتم توفير الأمثلة التالية على سبيل الإيضاح فقط وليس على سبيل التحديد. سيدرك هؤلاء من ذوي المهارة في المجال بسهولة مجموعة متنوعة من المتغيرات غير
0 المهمة التي يمكن تغييرها أو تعديلها للحصول على نتائج متشابهة بشكل أساسي. المواد والطرق ظروف معالجة الخلايا ومزارع النسيج تم استخدام ‎WIA‏ عضلية بشرية متمايزة ‎Inc)‏ ,260810.) لقياس تخطي الإكسونات. على نحو محدد؛ تم زراعة أرومات عضلية ‎(ZenBio, Inc., SKB-F)‏ إلى تجمع 9690-80 عند 37
5 درجة مئوية و65 002 في أوساط نمو ‎ZenBio, Inc)‏ :/5148-1.). تم بدء التمايز باستبدال أوساط النمو أوساط تمايز ‎Inc)‏ ,280810 :4-00/ل4ا5.). لاختبار تخطي الإكسون 51؛ تم وضع ‎x 1‏ 104 خلية متمايزة في أطباق بها 24 ‎Ge‏ و1 ملليلتر أوساط تمايز ( ‎SKM-D; ZenBio,‏ 6ا.) تحتوي على تركيزات مختلفة من ‎PMO‏ أو تم إضافة ‎PPMO‏ إلى كل عين وحضانتها لمدة 96 ساعة.
0 تحليل بقعة وسترن ‎Lah‏ يتعلق بتحليل بقعة وبسترن؛ تم مجانسة النسيج محلول مجانسة منظم (964 ‎(SDS‏ 4 مولار يوريا « 125 مللي مولار تريس ‎HCl‏ (برقم هيدروجيني 8 .6(( بنسبة 9 إلى 8 ‎x‏ 20-ميكرو متر من قطاعات من النسيج بقطر يبلغ ‎Ls‏ 5 مم في 133 ميكرو لتر محلول منظم. تم تجميع
ناتج التحلل المناظر وإخضاعه احتساب كمية البروتين باستخدام طقم تجرية بروتين ‎RC DC‏ وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة )500-0122 ‎(BioRad Cat.‏ تم تخفيف عينات النسيج المستخلصة بنسبة 10:1 باستخدام محلول مجانسة منظم بحيث تبلغ نطاق منحنى ‎BSA‏ القياسي. تم تحضير العينات بحيث يحتوي 35 ميكرو لتر من العينة على المقدار المطلوب من البروتين باستخدام 25 ميكرو لتر من بروتين ناتج ‎eat‏ 7 ميكرو لتر من محلول ‎NUPAGE LDS due‏ منظم ‎«(Life Technologies Cat.
NPO0O0OS8, Carlsbad, California, USA)‏ و3 ميكرو لتر من عامل ‎NUPAGE‏ مختزل (مركز 10 مرات) ‎.(Life Technologies Cat.
NPO0O4)‏ بعد تسخين عينات البروتين لمدة 5 دقائق عند 95 درجة مثوية؛ تم طرد العينات مركزيًا وتحميل المادة الطافية على عين 10 ‎(NUPAGE Novex‏ 1 مم؛ ميني 9068-3 جل بولي أكريل أميد 0 تريس-أسيتات ‎(Life Technologies Cat.
EAQ375)‏ عند حد أقصى يبلغ 50 ميكرو جرام من حمل البروتين الكلي لكل جزء. تم تدوير الجل عند 150 فولت عند درجة حرارة الغرفة إلى أن نضحت واجهة الصبغ من الجل. تم نقل جلات البروتين الناتجة إلى أغشية ‎Life ( PVDF‏ ‎(Technologies Cat.
LC2007‏ لمدة 75 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة عند 30 فولت باستخدام محلول نقل ‎NUPAGE‏ منظم ‎«(Life Technologies NPOO6-1)‏ 9610 ميثانول 5 %0.15 مضاد أكسدة ‎.(Life Technologies NPOO0O5) NuPAGE‏ بعد نقل البروتين» تم غمر أغشية ‎PVDF‏ في محلول ‎TTBS‏ منظم ‎TBS)‏ مركز ‎Bye‏ واحدة ‎((Amresco Cat.
J640-4L)‏ 960.1 (حجم/حجم) 004/660-20). تم نقل الأغشية إلى محلول إعاقة منظم )%5 (وزن/حجم) حليب ‎Gils‏ ليس به دهون ) ‎Lab Scientific Cat.‏ 1 ) في 1185) ونقعها طوال الليل عند 4 درجة مئوية مع الرج الخفيف. بعد الإعاقة؛ تم 0 خضانة الأغشية إما لمدة 60 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة في 0751 ‎Leica Cat.
NCL-)‏ 1) مخفف بنسبة 20:1 باستخدام محلول إعاقة منظم» أو 20 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة في جسم ألفا-أكتينين مضاد ‎(Sigma-Aldrich Cat.
NA931V)‏ مخفف بنسبة 100000:1 باستخدام محلول إعاقة منظم؛ متبوعًا بالغسل ست مرات (خمس دقائق لكل منها مع ‎(TTBS‏ تم تخفيف مترافق 96ا فأري مضاد مع بيروكسيداز الجرجار الحار ( ‎GE Healthcare Cat.‏ ‎(NA93LV 5‏ بنسبة 40000:1 باستخدام محلول إعاقة منظم وإضافته إلى الأغشية لمدة 45 دقيقة
(0751) أو 15 دقيقة (ل]-أكتينين)؛ متبوعًا بالغسل ست مرات. باستخدام طقم اكتشاف ‎ECL‏ ‎(GE Healthcare Cat.
RPN2232) Prime Western‏ تم تعريض الطبقة الغشائية للجل وتحميضها وفقًا لذلك. تم فحص الطبقة الغشائية المحمضة وتحليلها باستخدام برنامج صورة ‎ImageQuant TL Plus‏ (الإصدار 8.1( وإجراء تحليل بالتقهقر الخطي باستخدام برنامج ‎.Graphpad 5‏ يتضمن كل جل بقعة وسترن منحنى ديستروفين قياسي مكون من 4 أو 5 يتم تحضيره باستخدام البروتين الكلي المستخلص من نسيج ‎(gale‏ (عضلة الفأر رباعية الرؤوس» الحجاب الحاجزء أو القلب) مخفف؛ على سبيل ‎(Jal‏ إلى %64 9616 964؛ 961؛ و960.25 (انظر. على سبيل المثال. الأشكال 15 و5ب) وزيادته إلى نسيج ‎DMD‏ (على سبيل المثال» خلاصة عضلة الفأر 0 رباعية الرؤوس ‎amdX‏ الحجاب الحاجزء أو القلب؛ أو عضلة رباعية الرؤوس 0110 الحجاب ‎ala‏ أو العضلة الملساء (ا6)). تم معالجة عينات المتحنى القياسي على النحو الموصوف أعلاه. تم تحديد مستويات بروتين الديستروفين بالنسبة المئوية للديستروفين من النوع غير المعالج (1//196) من خلال مقارنة قيم شدة نطاق الديستروفين إلى منحنى الجل القياسي. تحليل ‎RT-PCR‏ ‏5 فيما يتعلق تحليل ‎(RT-PCR‏ تم عزل ‎RNA‏ من الخلايا باستخدام طقم تدوير ‎llustra GE‏ باتباع بروتوكول الشركة المصنعة. تم تحديد تركيز ونقاء ‎RNA‏ باستخدام ‎.NanoDrop‏ تم قياس ‎ass‏ الإكسون 51 من خلال ‎RT-PCR‏ له مادة بادئة أمامية تربط إكسون 49 المتوالية رقم:5 ‎(5°~CCAGCCACTCAGCCAGTGAAG-3’)‏ ومادة بادئة خلفية تربط إكسون 52 المتوالية رقم:6 (:611611018666-3 0611006181 -:5). وقد أدى الإكسون 51 0 المتخطى إلى أمبليكون 246 زوج قاعدة وقد أدى الإكسون 51 غير المتخطى إلى أمبليكون 478 زوج قاعدة. تم قياس تخطي الإكسون الفأري 23 باستخدام ‎RT-PCR‏ له بادئة أمامية-المتوالية رقم:7 (-5 ‎(CACATCTTTGATGGTGTGAGG-3’‏ وبادئة خلفية المتوالية رقم:8 ( -:5 ‎.(CAACTTCAGCCATCCATTTCTG -3’‏
بعد إخضاع ‎RNA‏ ل ‎(RT-PCR‏ تم تحليل العينات باستخدام ماكينة ‎(Caliper‏ استخدمت رحلان الجل الشعري الكهربي. تم احتساب النسبة المئوية لتخطى الإكسونات بالمعادلة التالية: (المساحة ‎Jad‏ منحنى النطاقات المتخطاة)/(إجمالي المساحة أسفل منحنى النطاقات المتخطاة وغير المتخطاة)*«100. الكيمياء الهيستولوجية المناعية: تبقيع الديستروفين: تم استخدام 10 ميكرون من القطاعات المجمدة من نسيج عضلة الفأر ‎Lely‏ الرؤوس لاكتشاف ديستروفين بواسطة ديستروفين جسم مضاد أولي (تخفيف 1: 250 ‎Abcam « yl‏ رقم الكتالوج 7 ) في %10 مصل ماعز + %1 ‎BSA‏ في ‎PBS‏ وجسم مضاد ثانوي 1678/-فلورو 8 مضاد مشتق من أرنب وماعز (نسبة التخفيف 1000:1) في 9610 مصل ماعز + 961 ‎.BSA 10‏ تحضير وحدات مورفولينو فرعية ‎MeOH 1‏ .1010 (ماني) ‎Yow‏ ايها 0 ل 1 | ‎ne OY ha sss J Hid‏ .م : 5 , بورأن-تراي إيثيل أمين ‎Non‏ © 1 8 40-7 حمض ميثانوليك ‎A.‏ ‎١ {HCI s p-TsOH} 2‏ صورة 0 0 م ل كلاب ‎Oo. _B =f N =X‏ ‎HO 0 0‏ ‎MeOH (aq) 900 TJ 4‏ ‎Ho 0|088 N Oo. _B‏ ,0, ‎O40 — UJ‏ ذا حب ‎triethylamine PN N‏ ‎lic acid H “H © 3 8)‏ ‎or HCI)‏ 1 2 ‎J‏ ‏5 ‏المخطط 1: طريقة التخليق العامة لوحدات ‎PMO‏ الفرعية
بالإشارة إلى المخطط 1؛ حيث 8 تمثل شطر ازدواج القاعدة؛ قد يتم تحضير وحدات المورفولينو الفرعية من الرببونوكليوزيد المناظر (1) كما يُعرض. قد تتم حماية وحدة المورفولينو الفرعية )2( اختياريًا بواسطة التفاعل مع مادة منتجة لمجموعة حماية ملائمة؛ على سبيل المثال ترايتيل كلوريد. تتم إزالة مجموعة الحماية عند الموضع 3 ‎dale dba’‏ أثناء تخليق الأوليجومر في الحالة الصلبة كما يوصف بمزيد من التفصيل ‎Lad‏ يلي. قد تتم على نحو ملائم حماية شطر ازدواج القاعدة لتخليق الأوليجومر في الحالة الصلبة. تتضمن مجموعات الحماية الملائمة بنزويل لأدنين وسيتوزين» فنيل أسيتيل لجوانين» وبيفالويل أوكسي ميثيل لهيبوكسانثين (ا). يمكن إدخال مجموعة البيفالويل أوكسي ميثيل على الموضع ‎NT‏ من قاعدة الهيبوكسانثين الحلقية غير المتجانسة. بالرغم من أنه قد يتم استخدام وحدة هيبوكسانثين فرعية غير محمية؛ فإن حصائل تفاعلات التنشيط تكون 0 فائقة للغاية عندما تكون القاعدة محمية. تتضمن مجموعات الحماية الملائمة الأخرى تلك التي تم الكشف عنها في براءة الاختراع الأمريكية رقم 8,076,476؛ التي تم تضمينها هنا كمرجع بأكملها. يؤدي تفاعل 3 مع مركب الفوسفور المنشط 4 إلى وحدات مورفولينو فرعية بها شطر الرابط المطلوب 5. يمكن تحضير المركبات بالصيغة البنائية 4 باستخدام أي عدد من الطرق المعروفة لهؤلاء من ذوي 5 المهارة في المجال. ثم يستمر الإقران بشطر المورفولينو كما هو موضح فيما سبق. يمكن استخدام المركبات بالصيغة البنائية 5 في تخليق الأوليجومر في الحالة الصلبة لتحضير الأوليجومرات المشتملة على روابط الوحدة الفرعية الداخلية. تكون هذه الطرق معروفة جيدًا في المجال. باختصار؛ قد يتم تعديل مركب بالصيغة البنائية 5 عند الطرف 5 "ليحتوي على رابط بمادة حاملة صلبة. بمجرد تحميلها؛ تتم إزالة المجموعة المحمية الخاصة ب 5 (على سبيل المثال؛ 0 ترايتيل عند الطرف 3”)) ويتم تفاعل الأمين الحر مع شطر فوسفور منشط لمركب ثان بالصيغة البنائية 5. يتم تكرار هذه المتوالية حتى يتم الحصول على طول الأوليجو المطلوب. قد تتم إما إزالة المجموعة المحمية في الطرف النهائي 3 ”أو تركها إذا كانت هناك رغبة في حدوث تعديل عند الطرف 3 يمكن إزالة الأوليجو من المادة الحاملة الصلبة باستخدام أي عدد من الطرق؛ أو العلاج النموذجي باستخدام قاعدة لشطر الرابط بالمادة الحاملة الصلبة.
يتم وصف تحضير الأوليجومرات من المورفولينو بشكل عام والأوليجومرات من المورفولينو النوعية الخاصة بالكشف بمزيد من التفصيل في الأمثلة. تحضير أوليجومرات من مورفولينو يتم تنفيذ تحضير مترافقات الأوليجومرات المضادة لاتجاه النسخ والخاصة بالكشف باستخدام البروتوكول التالي وفقًا للمخطط 2: ليلو © غيل ‎[rr‏ ا ‎a‏ تراي إيتيلين ‎Gf‏ الما 0 ‎WN THRLLO‏ ‎tO‏ ا “ناب << - لدان" ‎a 5‏ + كيني أتبيدر بد ‎DMAD‏ , عه دوجة ملوية ‎TEL‏ ‏© ِ مح ‎TN 4%‏ & 3 ‎FO {2‏ عغبده ‎x ESR‏ 3 ‎a‏ 4 0 اتات سه ‎H jo‏ . 3 و درجة حر اوه الإرجاع مه ‎=i‏ ‏8 أجل § ‎a Ta‏ المخطط 2: تحضير حمض ‎Ad‏ منشط تحضير ترايتيل بيبرازين فنيل كريامات 35: إلى معلق مبرد من المركب 11 في داي كلورو ميثان )6 ملليلتر/جم 11 ( تمت إضافة محلول من بوتاسيوم كريونات )2 3 مكافئ) في ماء (4
0 مليلتر/جم بوتاسيوم كربونات). إلى هذا الخليط ثنائي الأطوار تمت ببطء إضافة محلول من فنيل كلورو فورمات (1,03 مكافئ) في داي كلورو ميثان (2 جم/جم فنيل كلورو فورمات). تمت تدفئة خليط التفاعل وصولاً إلى 20 درجة مئوية. عند إتمام التفاعل (2-1 ساعة)؛ تم فصل الطبقات. تم غسيل الطبقة العضوية باستخدام الماء ؛ وتجفيفه على بوتاسيوم كريونات لامائية . تم عزل المنتج 5 عن طريق التبلر من أسيتو نيتريل.
5 تحضير كحول كربامات 36: تم تعليق صوديوم هيدريد )1,2 مكافئ) في 1-ميثيل-2- بيروليدينون (32 ملليلتر/,جم صوديوم هيدريد). إلى هذا المعلق تمت إضافة تراي إيثيلين جليكول )10,0 مكافئ) والمركب 35 )1,0 مكافئ). تم تسخين الملاط الناتج وصولاً إلى 95 درجة مئوية.
عند إتمام التفاعل (2-1 ساعة)؛ تم تبريد الخليط وصولاً إلى 20 درجة مئوية. إلى هذا الخليط تمت إضافة 9630 من داي كلورو ميثان/ميثيل 1-بيوتيل إيثر (حجم:حجم) والماء. تم غسيل الطبقة العضوية المحتوية على المنتج تتابعيًا باستخدام ‎ole NaOH‏ حمض سكسينيك مائي؛ وصوديوم كلوريد مائي مشبع. تم عزل المنتج 36 عن طريق التبلّر عن داي كلورو ميثان/ميثيل ‎١ 5‏ -بيوتيل إيثر /هبتان.
تحضير الحمض الذيلي 37: إلى محلول من المركب 36 في تترا هيدرو فيوران (7 ‎pa] Alle‏ 36( تمت إضافة سكسينيك أنهيدريد (2,0 مكافئ) و ‎DMAP‏ )0,5 مكافئ). تم تسخين الخليط وصولاً إلى 50 درجة ‎Logie‏ عند إتمام التفاعل (5 ساعات)؛ تم تبريد الخليط وصولاً إلى 20 درجة مئوية وضبطه على الرقم الهيدروجيني 8,5 باستخدام 11811003 مائية. تمت إضافة ميثيل
0 7؟1-بيوتيل إيثر؛ وتم استخلاص المنتج في الطبقة المائية. تمت إضافة داي كلورو ميثان؛ وتم ضبط الخليط على الرقم الهيدروجيني 3 باستخدام حمض سيتربيك مائي. تم غسيل الطبقة العضوية المحتوية على المنتج باستخدام خليط من محلول منظم بسيترات وصوديوم كلوريد مائي مشبع برقم هيدروجيني = 3. تم استخدام محلول الداي كلورو ميثان هذا الخاص ب 37 بدون عزل في تحضير المركب 38
تحضير 38: إلى المحلول من المركب 37 تمت إضافة إيميد حمض ل١-هيدروكسي‏ -5- نوربورنين-2؛ 3- ثنائي الكريوكسيل ‎(HONBY)‏ (1,02 مكافئ)؛ 4-داي ميثيل أمينو بيريدين ‎(DMAP)‏ )0,34 مكافئ)؛ ثم 1-(3-داي ميثيل أمينو بروييل)-ل!”-إيثيل كربو داي إيميد هيدرو كلوريد ‎(EDC)‏ (1,1 مكافئ). تم تسخين الخليط وصولاً إلى 55 درجة مئوية. عند إتمام التفاعل (5-4 ساعات)؛ تم تبريد الخليط وصولاً إلى 20 درجة مئوية وغسيله تتابعًا باستخدام 1:
0 0.21 مولار من حمض سيتربك/براين وبراين. خضع محلول الداي كلورو ميثان لتبادل المذيب مع أسيتون ثم مع لا ‎(gla N‏ ميثيل فورماميد» وتم عزل المنتج عن طريق الترسيب من أسيتون/ لا ا١-داي‏ ميثيل فورماميد في صوديوم كلوريد مائي مشبع. تم تحويل المنتج الخام إلى ملاط ‎sae‏ ‏مرات في الماء لإزالة ‎GN‏ ١١-داي‏ ميثيل فورماميد المتبقي والأملاح. طربقة تخليق ‎PMO‏ أ: استخدام مثبت داي سلفيد
تم تنفيذ إدخال ”"حمض ذيلي" منشط على الراتنج المحمل على مثبت في داي ‎dive‏ إيميدازوليدينون ‎(DMI)‏ بواسطة الإجراء المستخدم لتضمين الوحدات الفرعية أثناء تخليق الطور الصلب. ص ‎We I‏ مسقي ٍ م @ ‎ty UO‏ @ ‎es Noy‏ مدع 1 عد ‎GL‏ ‎Sn Lak‏ ‎G7‏ = با ‎١‏ . ‎Ta‏ 3 3 جل ا م ‎Arg‏ )3 ‎CTO‏ ‎Sp 1 1‏ المخطط 3: تحضير المادة الحاملة الصلبة لتخليق أوليجومرات من مورفولينو تم تنفيذ هذا الإجراء في وعاء ببتيد مغلف معالج بالسيلان ‎(ChemGlass, NJ, USA)‏ بوسيلة تقليب علوية من فريت زجاجي بمسامية خشنة )60-40 ميكرو متر)؛ ومحبس ثلاثي الاتجاهات من التيفلون للسماح بإدخال فقاعات من ‎N2‏ لأعلى خلال الفريت أو استخلاص خوائي. تتكون خطوات معالجة الراتنج/الغسيل في الإجراء التالي من اثنتين من العمليات الأساسية: تميع الراتنج أو مفاعل بطبقة تقليب واستخلاص للمذيب/المحلول. لتميع الراتنج؛ تم وضع المحبس 0 السماح بتدفق ‎N2‏ لأعلى خلال الفريت وتمت إضافة محلول معالجة/غسيل ‎mull‏ المخصص إلى المفاعل والسماح بإنفاذ وترطيب الراتنج بشكل تام. ثم تم بدء الخلط وتم خلط ملاط الراتنج للمدة الزمنية المحددة. لاستخلاص للمذيب/المحلول؛ تم إيقاف الخلط وتدفق ‎N2‏ وتم بدء تشغيل المضخة الخوائية ثم تم وضع المحبس للسماح بتفريغ محلول معالجة/غسيل الراتنج في المخلفات. بلغت كل أحجام محلول معالجة/غسيل الراتنج 15 ملليلتر/جم من الراتنج ما لم يُذكر ما يُخالف 5 ذلك. إلى راتنج من أمينو ميثيل بولي ستايرين (200-100 مش؛ حمل ~1,0 مللي مول/جم معتمد على مجموعة استبدال بالنيتروجين؛ 75 ‎an‏ 1 مكانئ -81464 ‎Polymer Labs, UK, part‏ 59) في وعاء ببتيد مغلف معالج بالسيلان تمت إضافة 1-ميثيل-2-بيروليدينون ‎NMP)‏ 20
ملليلتر/جم من الراتنج) وتم السناح بانتفاخ الراتنج باستخدام الخلط لمدة 2-1 ساعة. بعد تفريغ المذيب المنتفخ» تم غسيل الراتنج باستخدام داي كلورو ميثان )2 ‎X‏ 2-1 دقيقة)» 965 من داي أيزو بروبيل إيثيل أمين في 9625 من أيزو برويانول/داي كلورو ميثان )2 ‎X‏ 4-3 دقائق) وداي كلورو ميثان )2 ‎X‏ 2-1 دقيقة). بعد تفريغ محلول الغسيل الأخير» تمت معالجة الراتنج باستخدام محلول من مثبت من داي سلفيد 34 في 1-ميثيل-2-بيروليدينون )0,17 مولار؛ 15 ملليلتر/جم من الراتنج» -2,5 مكافئ) وتم تسخين خليط الراتنج/المادة الكاشفة عند 45 درجة مئوية لمدة 60 ساعة. عند ‎ala)‏ التفاعل؛ تم إيقاف التسخين وتم تفريغ محلول المثبت وغسيل الراتنج باستخدام 1-ميثيل-2-بيروليدينون (4 ‎X‏ 4-3 دقائق) وداي كلورو ميثان )6 ‎X‏ 2-1 دقيقة). تمت معالجة الراتنج باستخدام محلول من 7010 (حجم/حجم) من داي إيثيل داي كربونات في داي كلورو ميثان 0 (16 ملليلتر/جم؛ 2 ‎X‏ 6-5 دقائق) ثم غسيله باستخدام داي كلورو ميثان (6 ‎X‏ 2-1 دقيقة). تم تجفيف الراتنج 39 في ظل تيار من ‎N2‏ لمدة 3-1 ساعات ثم في وسط مفرغ وصولاً إلى وزن ثابت )+ 962). الحصيلة: %150-110 من وزن الراتنج الأصلي. تحديد حمل الراتنج من أمينو ميثيل بولي ستايرين-داي سلفيد: يتم تحديد حمل الراتنج (عدد المواقع المتفاعلة المتاحة على نحو محتمل) بواسطة تجرية قياس طيف لعدد من مجموعات تراي فنيل 5 ميثيل (ترايتيل) لكل جرام من الراتنج. يتم نقل وزن معروف من راتنج مجفف (25 + 3 مجم) إلى قارورة حجمية سعة 25 ملليلتر ‎dallas‏ بسيلان وتتم إضافة -5 ملليلتر من 962 (حجم/,حجم) حمض تراي فلورو أسيتيك في داي كلورو ميثان. يتم خلط المحتويات عن طريق التدويم المعتدل ثم السماح باستقرارها لمدة 30 دقيقة. يتم توصيل الحجم إلى 25 ملليلتر باستخدام %2 (حجم/حجم) إضافية من حمض تراي فلورو 0 أسيتيك في داي كلورو ميثان وخلط المحتويات بشكل تام. باستخدام ماصة إزاحة إيجابية؛ يتم نقل جزء متساوي من المحلول المحتوي على ترايتيل )500 ميكرو لتر) إلى قارورة حجمية سعة 10 ملليلتر ويتم توصيل الحجم إلى 10 ملليلتر باستخدام حمض ميثان سلفونيك. يتم قياس محتوى كاتيون الترايتيل في المحلول النهائي بواسطة الامتصاص بالأشعة فوق البنفسجية عند 431,7 نانو متر وحمل الراتنج المحسوب في مجموعات الترايتيل لكل ‎aba‏ من الراتنج
(ميكرو مول/جم) باستخدام الأحجام الملائمة؛ عمليات تخفيف. مُعامل الانطفاء (©: 41 ميكرو مول-1 سم-1) ووزن الراتنج. يتم تنفيذ التجرية ثلاث مرات وحساب متوسط الحمل. سيوفر إجراء تحميل الراتنج في هذا المثال راتنج بتحميل يبلغ تقريبًا 500 ميكرو مول/جم. تم الحصول على حمل يبلغ 400-300 في ميكرو مول/جم إذا تم تنفيذ خطوة تضمين المثبت من داي سلفيد لمدة 24 ساعة عند درجة حرارة الغرفة.
الحمل الذيلي: باستخدام نفس الإعداد والأحجام ‎Jie‏ تحضير الراتنج من أمينو ميثيل بولي ستايرين-داي سلفيد؛ يمكن إدخال الحمل الذيلي في المادة الحاملة الصلبة. تم أولاً نزع الحماية من الراتنج المحمل بالمثبت في ظل ظروف حمضية ومعادلة المادة الناتجة قبل الإقران. لخطوة الإقران؛ تم استخدام محلول من 38 )0,2 مولار) في ‎DMI‏ محتوي على 4-إيثيل مورفولين
‎(NEM) 0‏ 0,4 مولار) بدلاً من محلول المثبت من داي سلفيد. بعد 2 ساعة عند 45 درجة مئوية؛ تم غسيل الراتنج 39 مرتين باستخدام 965 من داي أيزو ‎did dug‏ أمين في 9625 من أيزو برويانول/داي كلورو ميثان ومرة باستخدام ‎DCM‏ إلى الراتنج تمت إضافة محلول من بنزويك أنهيدريد (0,4 مولار) 5 ‎NEM‏ )0,4 مولار). بعد 25 دقيقة؛ تم تبريد ‎CDE‏ المفاعل وصولاً إلى درجة حرارة الغرفة؛ وغسيل الراتنج مرتين باستخدام 965 من داي أيزو بروبيل إيثيل أمين في
‏5 9625 من أيزو برويانول/داي كلورو ميثان وثمان مرات باستخدام ‎DCM‏ تم ترشيح ‎Zul‏ 40 وتجفيفه في وسط عالي التفريغ. تم تحديد الحمل للراتتج 40 ليكون حمل الراتنج الأصلي من أمينو ميثيل بولي ستايرين-داي سلفيد 39 المستخدم في الحمل الذيلي. تخليق الطور الصلب: تم تحضير الأوليجومرات من المورفولينو على 81/15-422 ‎Gilson‏ ‎Automated Peptide Synthesizer‏ في أعمدة تفاعل بولي بروبيلين من نوع ‎Gilson‏ سعة 2
‏20 مليلتر )3980270 # ‎(Part‏ .2 وضع كتلة ألومينيوم بقنوات لتدفق الماء حول الأعمدة عند ارتكازها على وحدة التخليق. سيضيف ‎AMS-422‏ على نحو بديل المادة الكاشفة/محاليل الغسيل» الحفاظ عليها بفترة زمنية محددة؛ وتفريغ الأعمدة باستخدام وسط خوائي. للأوليجومرات في النطاق بالطول الذي يصل حتى حوالي 25 من الوحدات الفرعية؛ يتم تفضيل راتنج من أمينو ميثيل بولي ستايرين-داي سلفيد بحمل يُقارب 500 ميكرو مول/جم من الراتنج.
للأوليجومرات الأكبرء يتم تفضيل راتنج من أمينو ميثيل بولي ستايرين-داي سلفيد بحمل يبلغ 400-300 ميكرو مول/جم من الراتنج. إذا كان جزيء بحمل ذيلي عند الطرف 5” مطلييًا؛ يتم اختيار الراتنج الذي تم تحميله بحمل ذيلي باستخدام نفس إرشادات التحميل. تم تحضير محائيل المادة الكاشفة التالية: ل محلول نزع الترايتيل: 9610 من حمض سيانو أسيتيك (وزن/حجم) في 4: 1 داي كلورو ميثان/أسيتو نيتريل؛ 1 محلول المعادلة: 965 من داي أيزو بروبيل إيثيل أمين في 3: 1 داي كلورو ميثان/أيزو برويانول؛ و 1 محلول الإقران: 0,18 مولار (أو 0,24 مولار للأوليجومرات التي نمت لما يزيد عن طول 0 من 20 وحدة فرعية) من ‎Sang‏ مورفولينو فرعية منشطة بالقاعدة ونوع الرابط المطلويين و0,4 مولار من لا إيثيل مورفولين» في 1 3-داي ميثيل إيميدازوليدينون. تم استخدام داي كلورو ميثان ‎(DCM)‏ كمحلول غسيل انتقالي يفصل نواتج غسيل محلول المادة الكاشفة المختلفة. على وحدة التخليق؛ مع ضبط الكتلة على 42 درجة مئوية؛ إلى كل عمود محتوي على 30 مجم من راتنج من أمينو ميثيل بولي ستايرين-داي سلفيد (أو الراتنج ‎(LA‏ تمت إضافة 2 ملليلتر من 1-ميثيل-2-بيروليدينون والسماح بالترسيب عند درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. بعد الغسيل 2 مرة باستخدام 2 ملليلتر من داي كلورو ميثان؛ تم استخدام دورة التخليق التالية: الخطوة الحجم التوصيل زمن الاحتجاز نزع الترايتيل 5 ملليلتر مُشعب 5 ثانية 0 نزع الترايتيل 5 ملليلتر مُشعب 5 ثانية نزع الترايتيل 5 ملليلتر مُشعب 5 ثانية نزع الترايتيل 5 ملليلتر مُشعب 5 ثانية
نزع الترايتيل 5 ملليلتر مُشعب 5 ثانية
نزع الترايتيل 5 ملليلتر مُشعب 5 ثانية
نزع الترايتيل 5 ملليلتر مُشعب 5 ثانية ‎DCM‏ 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية
معادلة 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية معادلة 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية معادلة 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية معادلة 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية معادلة 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية
0 معادلة 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية ‎DCM‏ 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية
الإقران 500-0 ميكرو لتر محقنة 40 دقيقة
‎DCM‏ 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية
‏معادلة 5 ملليلتر مُشعب 30 ‎aut‏
‏5 معادلة 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية ‎DCM‏ 5 ملليلتر مُشعب 0 ثانية
‎aut 30 ‏ملليلتر مُشعب‎ 5 DCM
‎aut 30 ‏ملليلتر مُشعب‎ 5 DCM
تمت برمجة متواليات الأوليجومرات الفردية في وحدة التخليق بحيث يستقبل كل عمود محلول الإقران الملاتم (ا,8,0,5,1) في المتوالية الملائمة. عندما يُتم الأوليجومر الموجود في عمود تضمين الوحدة الفرعية النهائية الخاصة ‎ed‏ تمت إزالة من العمود الكتلة وتنفيذ دورة نهائية ‎Bg‏ ‏باستخدام محلول إقران مُكوّن من 4-ميثوكسي تراي فنيل ميثيل كلوريد )0,32 مولار في ‎(DMI‏ ‏5 محتوي على 0,59 مولار 4-إيثيل مورفولين.
الانشطار عن الراتنج وإزالة القواعد ومجموعات الحماية الأساسية: بعد المعالجة بميثوكسي ترايتيل؛ تم غسيل الراتنج 8 مرات باستخدام 2 ملليلتر من 1-ميثيل-2-بيروليدينون. تمت إضافة واحد ملليلتر من محلول انشطار متكون من 0,1 مولار 1؛ 4-داي ثيو ثريتول ‎(DTT)‏ و0,73 مولار تراي إيثيل أمين في 1-ميثيل-2-بيروليدينون» تمت تغطية العمود؛ والسماح له بالاستقرار عند
0 درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك الوقت؛ تم تصريف المحلول في قنينة ‎Wheaton‏ ‏سعة 12 ملليلتر. تم غسل الراتنج المنكمش بصورة كبيرة مرتين باستخدام 300 ميكرو لتر من محلول الانشطار. إلى المحلول تمت إضافة 4,0 ملليلتر من أمونيا مائية مركزة (مخزنة عند -20 درجة ‎(Ligh‏ تمت تغطية القنينة بإحكام (باستخدام غطاء ملولب مبطن بالتيفلون)؛ وتم تدويم الخليط لمزج المحلول. تم وضع القنينة في فرن عند 45 درجة ‎gia‏ لمدة 24-16 ساعة لتفيعل
انشطار القاعدة ومجموعات الحماية الأساسية. تنقية المنتج الخام: تمت إزالة محلول التفكيك بإقحام الأمونيا المعباً في قنينات من الفرن والسماح له بالتبريد وصولاً إلى درجة حرارة الغرفة. تم تخفيف المحلول باستخدام 20 ملليلتر من 960,28 أمونيا مائية وتمريره من خلال عمود 2,5 ‎X‏ 10 سم محتوي على راتنج ‎Macroprep HQ‏ ‎(BioRad)‏ تم استخدام تدرج ملح ‎:A)‏ 160,28 أمونيا مع 8: 1 مولار صوديوم كلوريد في
0 960,28 أمونيا؛ صفر-96100 8 في 60 دقيقة) لفصل الذروة المحتوية على ميثوكسي ترايتيل تتابعيًا. تم تبريد الأجزاء المدمجة ومعالجتها بشكل إضافي اعتمادًا على المنتج المطلوب. عملية نزع ميثوكسي ترايتيل لأوليجومرات من مورفولينو: تمت معالجة الأجزاء المجمعة من عملية التنقية ‎Macroprep‏ باستخدام 1 مولار ‎H3PO4‏ لخفض الرقم الهيدروجيني وصولاً إلى 2,5. بعد الخلط الأولي؛ تم وضع العينات عند درجة حرارة الغرفة لمدة 4 دقائق؛ في ذلك الوقت تمت
معادلتها وصولاً للرقم الهيدروجيني 11-10 باستخدام 962,8 أمونيا/الماء. تمت تنقية المنتجات تعبئة وتكييف عمود ‎:SPE‏ تتم تعبئة ‎Rohm) Amberchrome CG-300M‏ و1885 ؛ ‎(PA «Philadelphia‏ )3 ملليلتر) فى أعمدة من الفريت سعة 20 ملليلتر ‎BioRad Econo-)‏ ‎(Pac Chromatography Columns (732-1011) 5‏ وشطف الراتنج باستخدام 3 ملليلتر مما يلي: 960,28 من ‎%80/NHAOH‏ من أسيتو نيتريل؛ 0,5 مولار ‎%20/NaOH‏ من إيثانول؛ الماء؛ 50 مللي مولار ‎%80H3PO4/‏ من أسيتو نيتريل؛ الماء؛ 0,5 من ‎%20/NaOH‏ من إيثانول؛ الماء؛ 960,28 من ‎NH4O0H‏ ‏تنقية ‎:SPE‏ تم تحميل المحلول من خطوة نزع ميثوكسي ترايتيل على العمود وشطف الراتنج ثلاث 0 مرات باستخدام 6-3 ملليلتر من 960,28 أمونيا مائية. تم وضع قنينة ‎Wheaton‏ )12 ملليلتر) تحت العمود وفصل المنتج تتابعيًا بواسطة مرتي غسيل باستخدام 2 ملليلتر من 1645 أسيتو نيتريل في 960,28 أمونيا مائية. أبيض خفيف. تمت إذابة العينات في الماء؛ ترشيحها من خلال مرشح 0,22 ميكرون ( ‎Pall‏ ‎Sciences 5‏ #آناء مرشح بمحقنة سعة 25 ‎(Ale‏ مولار من نوع ‎AcCrodisC‏ بغشاء 0,2 ميكرون ضوئي بالأشعة فوق البنفسجية لتحديد وحدات ‎OD‏ للأوليجومر الموجود؛ إضافة إلى عينة توزيع للتحليل. ثم تم وضع المحاليل مرة أخرى في قنينات ‎Wheaton‏ للتجفيف بالتبريد. تحليل الأوليجومرات من المورفولينو بواسطة ‎:MALDI‏ تم استخدام قياس الطيف الكتلي ‎MALDI-‏ ‎TOF 0‏ لتحديد تركيبة الأجزاء في عمليات التنقية إضافة إلى توفير دليل لتحديد (الوزن الجزيئي) الأوليجومرات ‎٠‏ تم تشغيل العينات بعد التخفيف باستخدام محلول من حمض 3( 5-داي مينوكسي- 4-هيدروكسي سيناميك (حمض سينابينيك)» 3( 4؛ 5-تراي هيدروكسي أسيتوفينون ‎(THAP)‏ أو حمض ألفا-سيانو-4-هيدروكسي سيناميك ‎(HCCA)‏ كقوالب. الطريقة ب لتخليق ‎:PMO‏ استخدام مثبت ‎NCP2‏
تخليق مثبت ‎:NCP2‏ ‏1. تحضير ميثيل 4-فلورو -3-نيترو بنزوات )1( ‎OOH 06‏ — ‎ON O,N‏ ‎F F‏ صورة 1 إلى دورق 100 ملليلتر تم شحن 12.7 كجم حمض 4-فلورو -3-نيترو بنزويك وإضافة 40
كجم ميثانول و2.82 كجم حمض سلفوريك مركز. تم تقليب الخليط عند الارتجاع (65 درجة متوية) لمدة 36 ساعة. تم تبريد خليط التفاعل إلى صفر درجة ‎Adie‏ تم احتجاز البلورات المتكونة عند 38 درجة مئوية. تم بعد ذلك ترشيح الخليط عند صفر درجة ‎sad Ligh‏ 4 ساعات في جو من الإنتروجين. تم غسل دورق 100 لتر وغسل عجينة الترشيح ب 10 كجم ميثانول تم تبريده إلى صفر ‎day)‏ مئوية. تم تجفيف عجينة الترشيح الصلبة على القمع لمدة 1 ‎dela‏ ونقلها إلى
0 صينيات؛ وتجفيفها في فرن تفريغ عند درجة حرارة الغرفة إلى وزن ثابت يبلغ 13.695 كجم ميثيل 4-فلورو -3-نيترو بنزوات )%100 حصيلة؛ ‎HPLC‏ 1699). 2 . تحضير ‎aan‏ 3-نيترو -4-(2-أوكسو بروبيل) بنزوبك 0 (2)-ميثيل 4-(3-هيدروكسي -1-ميثوكسي -1-أوكسو بت-2-ين-2-يل)-3-نيترو بنزوات (2) ‎Os_OMe‏ ‎OMe‏ 0 ‎ON‏ > ‎=z Oo‏ لاون ‎F OH O‏ 1 5 1 صورة 2
إلى دورق 100 ملليلتر تم شحن 3.98 كجم ميثيل 4-فلورو -3-نيترو بنزوات (1) من الخطوة السابقة 9.8 كجم ‎(DMF‏ 2.81 كجم ميثيل أسيتو أسيتات. تم تقليب الخليط وتبربده إلى صفر درجة مئوية. إلى ذلك تم إضافة 3.66 كجم ‎DBU‏ لمدة حوالي 4 ساعات مع الإبقاء على درجة الحرارة عند 5 درجة مئوية أو أقل. تم تقليب الخليط لمدة 1 ساعة إضافية. إلى دورق التفاعل تم إضافة محلول من 8.15 كجم حمض سيتربك في 37.5 كجم ماء نقي مع الإبقاء على درجة حرارة التفاعل عند 15 درجة مئوية أو أقل. بعد الإضافة؛ تم تقليب خليط التفاعل ‎sad‏ 30 دقيقة إضافية ثم ترشحه في جو من الإنتروجين. تم إعادة عجينة الترشيح الرطبة إلى دورق 100 لتر مع 8 كجم ماء نقي. تم تقليب الملاط لمدة 10 دقائق ثم ترشيحه. تم ‎Bre‏ أخرى إعادة العجينة الرطبة إلى دورق 100 لترء وتمليطها مع 14.8 كجم ماء نقي لمدة 10 دقائق»؛ وترشيحها إلى 0 (2)-ميثيل 4-(3-هيدروكسي -1-ميثوكسي -1-أوكسو بت-2-ين-2-يل)-3-نيترو بنزوات خام. 8. حمض 3-نيترو -4-(2- أوكسو بروبيل) بنزويك
Os OMe O. _OH ‏و0‎ O,N 0
OH O 0 صورة 3 2 تم شحن (2)-ميثيل 4-(3-هيدروكسي -1-ميثوكسي -1-أوكسو بت-2-ين-2-يل)-3-نيترو 5 بنزوات خام إلى دورق تفاعل 100 لتر في جو من الإنتروجين. إلى ذلك تم إضافة 14.2 كجم 1. 4-دايوكسان ثم تمليطه. إلى الخليط تم إضافة محلول من 16.655 كجم ‎HCI‏ مركز و13.33 كجم ماء نقي (6 مولار ا10!) على مدار ساعتين في حين أن درجة حرارة خليط ‎deli)‏ تم الإبقاء عليها أقل من 15 درجة مئوية. عند اكتمال الإضافة؛ تم تسخين خليط التفاعل عند الارتجاع )80 درجة مئوية) لمدة 24 ساعة؛ وتبريده إلى درجة حرارة الغرفة؛ وترشيحه في جو من 0 الإنتروجين. تم معالجة عجينة الترشيح الصلبة بتربتيوم مع 14.8 كجم ماء نقي؛ وترشيحهاء
ومعالجتها بتريتيوم ‎Bre‏ أخرى مع 14.8 كجم ماء نقي؛ وترشيحها. تم إعادة المادة الصلبة إلى الدورق 100 لتر مع 39.9 كجم ‎DCM‏ وإرجاعها بالتقليب لمدة 1 ساعة. تم إضافة 1.5 كجم ماء نقي لإذابة المواد الصلبة المتبقية. تم شطر الطبقة العضوية المترسبة إلى دورق 72 لتر مسخن ‎clase‏ ثم إعادتها إلى دورق نظيف ‎Gils‏ 100 لتر. تم تبريد المحلول إلى صفر درجة مثوية؛ والإبقاء عليه لمدة 1 ساعة؛ ثم ترشيحه ‎٠‏ تم غسل عجينة الترشيح الصلبة مرتين كل مرة بمحلول 9.8 كجم ‎DCM‏ و5 كجم هبتان؛ ثم تجفيفها على القمع. تم نقل المادة الصلبة إلى صينيات وتجفيفها إلى وب ثابت يبلغ 855 . 1 كجم ‎aan‏ 3-نيترو -4-(2-أوكسو ‎(Ja‏ ‏بنزوبك. الحصيلة الكلية 9642 من مركب 1. ‎HPLC‏ 9699.45. 3. تحضير لا-تربتيل بيبرازين سكسينات ‎(NTP)‏ ‎NH,"‏ ‏نرج ‎J‏ ‏خض »وى ‎on YT‏ ل ل ‎H‏ ‏10 صن ‎O‏ ‏إلى دورق مبطن سعته 72 لتر تم شحنه في جو من الإنتروجين 1.805 كجم بتراي فينيل ميثيل كلوريد و8.3 كجم تولوين (محلول ‎(TPC‏ تم تقليب الخليط حتى ذوبان المواد الصلبة. إلى دورق التفاعل المبطن الذي سعته 100 لتر تم إضافة في جو من الإنتروجين 5.61 كجم بيبرازين؛ 9 9 1 كجم تولوين ¢ و72. 3 كجم ميثانول ‎٠‏ تم تقليب الخليط وتبريده إلى صفر درجة مثوية. إلى ذلك تم وببطء إضافة أجزاء من محلول ‎TPC‏ على مدار 4 ساعات مع الإبقاء على درجة ‎Sha‏ ‏التفاعل عند أو أقل من 10 درجة مئوية. تم تقليب الخليط لمدة 1.5 ساعة عند 10 درجة ‎gic‏ ‏ثم السماح بتدفئته إلى 14 درجة مثوية. تم شحن 32.6 كجم ماء نقي إلى دورق 72 لترء ثم 448 إلى الدورق 100 لتر إلى أن تم المحافظة على درجة حرارة الدفعة الداخلية عند 20 /+- 5 درجة مئوية. تم السماح بتقسيم الطبقات وفصل الطبقة المائية السفلية وتخزينها. تم استخلاص الطبقة 0 العضوية ثلاث مرات كل مرة ب 32 كجم ماء نقي؛ وفصل الطبقات المائية وتجمعها مع المحلول المائى المخزن.
تم تبريد الطبقة العضوية المتبقية إلى 18 درجة مئوية وإضافة محلول 547 جم من حمض سكسينيك في 10.87 كجم ماء نقي ببطء في أجزاء إلى الطبقة العضوية. تم تقليب الخليط لمدة ساعة عند 20 /+- 5 درجة مئوية. تم ترشيح الخليط» وغسل المواد الصلبة ب 2 كجم ‎TBME‏ و2 كجم أسيتون ثم تجفيفها على القمع . تم طحن عجينة الترشيح مرتين ب 5.7 كجم » كل
5 مرة بأسيتون وترشيحها وغسلها ب 1 كجم أسيتون بين مرات الطحن. تم تجفيف المادة الصلبة على القمع؛ ثم نقلها إلى صينيات وتجفيفها في فرن مفرغ عند درجة حرارة الغرفة إلى وزن ثابت يبلغ 2 كجم ‎NTP‏ حصيلة 9680. 4 تحضير (4-(2-هيدروكسي بروبيل)-3-نيترو فينيل)(4-تريتيل بيبرازين -1-يل) ميثانون أ. تحضير 1-(2-نيترو -4(4-تريتيل بيبرازين -1-كربونيل) فينيل) بروبان -2- أون
‎NON 0‏ 0 ناملي0 ٍ ِ هج ‎O,N ON‏ 0 0 0 صورة 4 3 إلى دورق مبطن سعته 100 لتر تم شحن في جو من الإنتروجين 2 كجم بحمض 3-نيترو -4- (2-أوكسو ‎(Jug pn‏ بنزوبك (3)؛ 18.3 كجم ‎(DCM‏ و1.845 كجم ل١١-(3-داي‏ ميثيل أمينو بروبيل)-'!١-إيثيل‏ كربو داي إيميد هيدرو كلوريد (ا60©0.110). تم تقليب المحلول إلى أن تكوّن خليط متجانس. تم إضافة 3.048 كجم ‎NTP‏ على مدار 30 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة وتقليبه 5 المدة 8 ساعات. تم إضافة 5.44 كجم ماء نقي إلى خليط التفاعل وتقليبه لمدة 30 دقيقة. تم السماح يفصل الطبقات وتفريغ الطبقة العضوية السغلية المحتوية على المنتج وتخزينها . تم استخلاص الطبقة المائية مرتين ب 5.65 كجم ‎.DCM‏ تم غسل الطبقات العضوية المجمعة بمحلول من 1.08 كجم صوديوم كلوريد في 4.08 كجم ماء نقي. تم تجفيف الطبقات العضوية فوق 1.068 كجم صوديوم سلفات وترشيحها . تم غسل الصوديوم سلفات 2 1.3 كجم ‎.DCM‏ تم
تمليط الطبقات العضوية المجمعة ب 252 جم سيليكا جل وترشيحها من خلال قمع ترشيح له طبقة 2 جم جل سيليكا. تم ‎Jud‏ طبقة جل السيليكا ب 2 كجم ‎DCM‏ تم تبخير الطبقات العضوية المجمعة على مبخر دوار. تم إضافة 4.8 كجم ‎THF‏ إلى الوحدة البنائية ثم تبخيرها على المبخر الدوار إلى أن تم الحصول على 2.5 حجم من 1-(2-نيترو -4(4-تريتيل بيبرازين -1-كريونيل) فينيل) برويان -2-أون الخام في ‎THF‏ ‏ب. تحضير (4-(2- هيدروكسي بروبيل)-3- نيترو فينيل)(4- تريتيل بيبرازين 1-7 يل) ميثانون 5 ‎O 0‏ ‎OG NTN ~ ON NN 00.‏ ن -«- - 0 ‎ON O,N‏ ‎OH‏ 1 صورة 5 4 إلى دورق مبطن سعته 100 لتر تم شحن في جو من الإنتروجين 3600 جم 4 من الخطوة 0 السابقة و9800 جم ‎THF‏ تم تبريد المحلول ‎lial‏ إلى أكبر من أو يساوي 5 درجة مثوية. تم تخفيف المحلول = 525 1 1 جم إيثانول وإضافة94 1 جم صوديوم بورو هيدريد على مدار حوالي ساعتين عند أكبر من أو يساوي 5 درجة مئوية. تم تقليب خليط التفاعل ساعتين إضافيتين عند أكبر من أو يساوي 5 درجة مئوية. تم إخماد التفاعل بمحلول به حوالي 1.1 كجم أمونيوم كلوريد في حوالي 3 كجم ماء مع الإضافة البطيئة للإبقاء على درجة الحرارة عند أكبر من أو يساوي 10 5 درجة مئوية. تم تقليب خليط التفاعل 30 دقيقة إضافية؛ وترشيحه لإزالة المواد غير العضوية؛ وشحنها إلى دورق مبطن سعته 100 لتر واستخلاصها ب 23 كجم ‎DCM‏ تم فصل الطبقة العضوية واستخلاص الطقة المائية مرتين أخربين كل مرة ب 4.7 كجم ‎DCM‏ تم غسل الطبقات العضوية المجمعة بمحلول به حوالي 800 جم صوديوم كلوريد في حوالي 3 كجم ماء؛ ثم تجفيفها فوق 2.7 كجم صوديوم سلفات. تم ترشيح المعلق وغسل عجينة الترشيح = 2 كجم ‎.DCM‏ تم
تركيز نواتج الترشيح المجمعة إلى 2.0 ‎cana‏ وتجفيفها بحوالي 360 جم إيثيل أسيتات»؛ وتبخيرها. تم شحن المنتج الخام على حجم جل سيليكا و4 كجم سيليكا مغلف . ‎DCM‏ في جو من الإنتروجين وتصفيته تتابعيًا ب 2.3 كجم إيثيل أسيتات في 7.2 كجم ‎DOM‏ تم تبخير الأجزاء المجمعة واستهلاك المتبقي في 11.7 كجم تولوين. تم ترشيح محلول تولوين وغسل عجينة الترشيح مرتين كل مرة ب 2 كجم تولوين. تم تجفيف عجينة الترشيح إلى وزن ثابت 2.275 كجم من المركب 5 )%46 حصيلة من مركب 3( ‎HPLC‏ 1696.99. 5. تحضير 2 5-داي أوكسو بيروليدين-1-يل(1-(2-نيترو -4-(4-تراي فينيل ميثيل بيبرازين -1 كريونيل) فينيل) برويان -2-يل) كريونات (مثبت ‎(NCP2‏ ‏صورة ‎poi” Q Spm, Py A‏ ‎A‏ ان ‎Dy Mm py CLF‏ 3 | بي ‎nT 1 wh yg‏ 1 . أ ‎oe A A . Po‏ ‎ONT‏ الول ] { ‎ONT YT YT 3‏ ‎PPA‏ ~~ ‎{iH Oe‏ ‎oF‏ ‏مثبت ‎NCP2‏ ?
إلى دورق مبطن سعته 100 لتر تم شحن في جو من الإنتروجين 4.3 كجم مركب 5 (تم ضبط الوزن بناءً على التولوين المتبقي بواسطة ‎NMR‏ 11؛ تم تقشير جميع المواد الكاشفة ‎Lod‏ بعد وففًا لذلك) و12.7 كجم بيريدين. إلى ذلك تم شحن 3.160 كجم ‎DSC‏ )78.91 وزن % بواسطة ‎(HL NMR‏ مع الإبقاء على درجة الحرارة الداخلية عند أكبر من أو يساوي 35 درجة مئوية. تم 5 تعحتيق خليط التفاعل ‎sad‏ حوالي 22 ساعة عند درجة حرارة الغرفة ثم ترشيحه. تم غسل عجينة الترشيح ب 200 جم بيربدين. في دفعتين تشتمل كل منهما على نصف حجم الترشيح» وشحن ناتج غسل الترشيح ببطء إلى دورق مبطن سعته 100 لتر به محلول من حوالي 11 كجم حمض سيتربك في حوالي 50 كجم ماء وتقليبه لمدة 30 دقيقة للسماح بترسيب المواد الصلبة. تم تجميع
المادة الصلبة باستخدام قمع ترشيح؛ وغسلها مرتين ب 4.3 كجم ماء لكل غسلة وتجفيفها على قمع الترشيح في جو من التفريغ. وغسلها بمحلول من 900 جم بوتاسيوم كريونات في 4.3 كجم ماء. بعد 1 ساعة ؛ تم السماح بفصل الطبقات وإزالة الطبقة المائية. تم غسل الطبقة العضوية ب 10 كجم ‎cole‏ وفصلهاء وتجفيفها
فوق 5 .3 كجم صوديوم سلفات. تم ترشيح ‎«DCM‏ وتبخيره ¢ وتجفيفه مع التفريغ إلى 6.6 كجم مثبت ‎NCP2‏ )%114 حصيلة). ‎Gals‏ راتنج محمل بمثبت ‎NCP2‏ ‏إلى 75 لتر تم شحن مفاعل تخليق في الطور الصلب له سدادة تيفلون بحوالي 52 لتر ‎NMP‏
0 و2300 جم راتنج أمينو ميثيل بولي ستيرين. تم تقليب الراتنج في ‎NMP‏ لنفخه لمدة حوالي ساعتين ثم نزحه. تم غسل الراتنج مرتين بحوالي 4 لتر /001] لكل غسلة؛ ثم مرتين ب 39 لتر محلول تعادل لكل غسلة؛ ثم مرتين ب 39 لتر 061/4 لكل غسلة. تم ‎shag‏ إضافة محلول مثبت 102 إلى محلول الراتنج المقلب ¢ وتقليبه لمدة 24 ساعة عند درجة حرارة ‎(dd yall‏ ونزحه. تم غسل الراتنج أريع مرات ب 39 لتر ‎JSINMP‏ غسلة؛ وست مرات ب 39 لتر 001 لكل غسلة.
5 1 ثم معالجة الراتتج وتقليبه 2/1 محلول سدادة ‎sad DEDC‏ 30 دقيقة؛ ‎dag‏ ومعالجته وتقليبه بالنصف الثاني من 2/1 محلول سدادة ‎DEDC‏ لمدة 30 دقيقة ونزحه. تم غسل الراتنج ست مرات ب 39 لتر ‎JSIDCM‏ غسلة ثم تجفيفه في فرن إلى وزن ثابت يبلغ 3573.71 جم راتنج محمل تحضير أوليجومر مورفولينو باستخدام مثبت ‎NCP2‏
0 50 لتر تخليق الإيتيبليرسين في الطور الصلب ‎PMO)‏ رقم 1) ‎sale‏ عقار خام 1. المواد الجدول 2: المواد البادئة
]0242 | ]0243[ الاسم الكيميائي | ]0244[ ]0245[ [0246 [ رقم الصيغة [ ‎CAS‏ الكيميائية اسم الوزن المادة ‎ad‏ ‏]0247 | ]0248[ إستر حمض ]0249[ ]0250[ ]0251 [ فوسفوراميدوكلوريديك» لا ‎C38H37 11 GN‏ |[ ميثيل = [6-[6-(بنزويل أمينو)- | 55373- | ‎CINTO4P‏ ‏وحدة ‎G5) =d-[dr9-Cysr OH | A‏ 0-30 722.2 الفرعية | فينيل ميثيل)-2- مورفولينيل]ميثيل المنشطة ]0252 | [0253] إستر حمض ]0254[ [0255] [0256 [ فوسفوراميدوكلوريديك» لا ‎C37TH37 11 GN‏ |[ ميثيل = [6-[4-(بنزويل أمينو)- | 55373= 06115050 وحدة © | 2- أوكسو -211(1)-بيريميدينيل]- | 1-31 698.2 الفرعية | 4-(تراي فينيل ميثيل)-2- المنشطة | مورفولينيل]ميثيل ]0257 | ]0258[ إستر حمض ]0259[ ]0260[ ]0261 [ بروياتويك» 2< 2-داي ميثيل -؛ 11 ‎C51H53‏ |[ 91-4-[6- [[[كلورو (داي ميثيل ا55309- | ‎CINTOTP‏ ‏وحدة .| أمينو)فوسفينيل]أوكسي ‎Jind‏ ]- | 9-89 942.2 06 | 4-تراي فينيل ميثيل)-2- الفرعية | مورفولينيل]-2-[(2- فينيل المنشطة
أسيتيل)أمينو ‎OH]‏ بيورين-6- يل]أوكسي ]ميثيل ] فينيل ]0262 | ]0263[ إستر حمض ]0264[ ]0265[ ]0266 [ فوسفوراميدوكلوريديك؛ ‎C31H34 11 ياد-١١ «N‏ [ ميثيل -» ]3)—6 4-داي هيدرو | 55373- 01014050 وحدة 7 | -5-ميثيل 2 4-داي أوكسو - | 4-34 609.1 الفرعية | 211(1)-بيريميدينيل)]-4- (تراي المنشطة | فينيل ميثيل)-2- مورفولينيل]ميثيل ]0267 | ]0268[ إستر حمض ]0269[ ]0270[ [0271 [ بيوتان ‎C43H47 13 «4S 3aR]-1 «ala‏ |[ كا 785)-1 3 83 4« 7< |80600- | ‎N3O10‏ ‏ذيل ‎LSa-al|‏ هيدرو -1ء 3-داي ‏ |5-06 765.9 63 أوكسو -4 7-ميثانو ‎—2H-‏ أيزو المنشط | إندول-2-يل] 4-[2-[2[1-2- [4- (تراي فينيل ميثيل)-1- بيبرازين الاإكربونيل ]أوكسي ] إيثوكسي ] إيثوكسي ‎dtl]‏ ] البنيات الكيميائية للمواد البادئة: أ. ذيل 63ح ‎Lid‏
0 0 ‎H‏ ‎N‏ اس سرس رجه ‎N 0‏ ‎(J Tr‏ ‎J i.‏ ب. وحدة © الفرعية المنشطة ‎yuzaaill)‏ ¢ انظر البراءة الأمريكية رقم 8,067,571( ب“ ‎Ne No‏ ‎=z‏ ‎S$ ©»‏ بد" 0 ‎J :‏ صورة ج. وحدة ‎A‏ الفرعية المنشطة (للتحضير؛ انظر البراءة الأمريكية رقم 8,067,571) ‎“١‏ ‎N—h=0‏ ‎H 0‏ = 0 / ‎a‏ ب ا ] ‎N=/‏ ‎TE OO‏ صورة د. وحدة 066 الفرعية المنشطة (للتحضير؛ انظر الطلب الدولي 2009/064471 ‎(WO‏
0 0 ب ‎T‏ \ ‎N—P=0‏ ‏م لح ‎a‏ ‎a‏ 0 لما ]ل ىر ‎X‏ " ى © ه. وحدة ‎T‏ الفرعية المنشطة (للتحضير؛ انظر الطلب الدولي 2013/082551 ‎(WO‏ ‏7 \ ‎N—P=0‏ ‏محم 3 / الاي ب ل صورة ض و. راتنج محمل على مثبت 0 ‎o 0‏ ‎N‏ ‏@ 0 ‎J C‏ 9 ‎Pn H‏ من ب ‎Cum‏ تكون ‎Ble RL‏ عن حامل-وسط. الجدول 3: وصف محاليل لتخليق أوليجومرات في الطور الثابت لمادة عقار إيتيبليرسين خام
]0272[ اسم | [0273] تركيبة المحلول المحلول ‎NMP 3137.5 [0275] [0274]‏ و1292 جم مثبت ‎NCP2‏ ‏محلول مثبت ‎NCP2‏ ‏]0276[ ]0277[ 6 لتر داي إيثيل داي كريونات ‎«((DEDC)‏ ‏محلول انسداد | 3.64 لتر ‎NEM‏ و33.8 لتر ‎DCM‏ ‎DEDC‏ ‏]0278[ ]0279[ 2 كجم 4-سيانو بيريدين» 158 لتر ‎DCM‏ ‏محلول 2 لتر ‎(TFA‏ 39 لتر ‎TFE‏ و2 لتر ماء نقي ‎CYTFA‏ ‎(IPA 135.3 [0281] [0280]‏ 7.5 لتر داي ‎(PEA‏ و106.5 لتر محلول تعادل | ‎DCM‏ ‏]0282[ ]0283[ 1 4 جم ‎DTT‏ 6.96 لتر ‎(NMP‏ 2.985 محلول لتر ‎DBU‏ ‏انشطار ‏2. تخليق مادة عقار إيتيبليرسين خام أ. انتفاخ الراتنج تم شحن 750 جم راتنج محمل على مثبت و10.5 لتر ‎NMP‏ إلى مفاعل معالج بسيلان 50 لتر وتقليبه ‎sad‏ 3 ساعات. تم نزح ‎NMP‏ وتم غسل الراتنج المحمل على مثبت مرتين كل مرة ب 5.5 لتر ‎DCM‏ ومرتين ب 5.5 لتر كل 9630 ‎.TFE/DCM‏
ب. الدورة صفر: إقران ‎EG3 Jud‏ تم غسل ‎itll‏ المحمل على مثبت ثلاث مرات كل مرة ب 5.5 لتر 9630 ‎TFE/DCM‏ ونزحه؛ وغسله ب 5.5 لتر محلول ‎CYFTA‏ لمدة 15 دقيقة ونزحه»؛ وغسله ‎pe‏ أخرى ب 5.5 لتر محلول ‎CYTFA‏ لمدة 15 دقيقة دون نزح مع شحن 122 ملليلتر 1:1 ‎NEM/DCM‏ وتقليب المعلق لمدة دقيقتين ونزحه. تم غسل الراتنج مرتين ب 5.5 لتر محلول تعادل لمدة 5 دقائق ونزحه؛ ثم
مرتين ب 5.5 لتر كل ‎DOM‏ ونزحه. تم شحن محلول من 706.2 جم ذيل 563 المنشّط (الوزن الجزبئي 765.85) و234 ملليلتر ‎NEM‏ في 3 لتر ‎DMI‏ إلى الراتنج وتقليبه لمدة 3 ساعات عند درجة حرارة الغرفة ونزحه. تم غسل الراتنج مرتين مرة ب 5.5 لتر محلول تعادل لمدة 5 دقائق لكل غسله؛ ومرة ب 5.5 لتر ‎DCM‏ ونزحه. تم شحن محلول من 374.8 جم بنزوبك أنهيدريد و195
0 ملليلتر ‎NEM‏ في 2680 ملليلتر ‎NMP‏ وتقليبه لمدة 15 دقيقة ونزحه. تم تقليب الراتنج ب 5.5 لتر محلول تعادل لمدة 5 دقائق؛ ثم غسله مرةً ب 5.5 لتر ‎DCM‏ ومرتين ب 5.5 لتر 9630 ‎TFE/DCM‏ . تم تعليق ‎mull‏ في 5.5 لتر 9630 ‎TFE/DCM‏ واحتجازه لمدة 14 ساعة. ج. دورات إقران الوحدة الفرعية 30-1 1. علاجات الإقران المسبةٍ
5 قبل كل دورة إقران على النحو الموصوف في الشكل 23؛ تم ‎dus‏ الراتنج: 1) ب %30 ‎¢TFE/DCM‏ 2) أ) معالجته بمحلول ‎CYTFA‏ لمدة 15 دقيقة ونزحه؛ وب) معالجته بمحلول ‎CYTFA‏ لمدة 15 دقيقة واليه تم إضافة 1:1 ‎(NEM/DCM‏ وتقليبه؛ ونزحه؛ 3) تقليبه ثلاث مرات بمحلول تعادل؛ و4) غسله مرتين ب ‎.DCM‏ انظر الشكل 23. 2. علاجات الإقران البعدية
0 بعد نزح كل محلول وحدة فرعية على النحو الموصوف في الشكل 23؛ تم غسل الراتنج: 1) ب /004؛ و2) غسله مرتين ب 9630 /15/0001. إذا تم احتجاز الراتنج لفترة زمنية قبل دورة الإقران التالية؛ لم يتم نزح محلول غسل ‎TFE/DCM‏ الثاني واحتجاز الراتنج في محلول غسل ‎TFE/DCM‏ المذكور. انظر الشكل 23.
3. دورات إقران الوحدة الفرعية المنشطة تم إجراء دورات الإقران على النحو الموصوف في الشكل 23. 4 محلول ‎IPA Jue‏ النهائي بعد خطوة الإقران النهائية على النحو الموصوف في الشكل 23؛ تم غسل الراتنج 8 مرات ب 19.5 لتر كل ‎[IPA‏ وتجفيفه تحت التفريغ عند درجة حرارة الغرفة لمدة حوالي 63.5 ساعة إلى وزن مجفف يبلغ 5579.8 جم. ج. الانشطار تم تقسيم مادة عقار إيتيبليسين خام مرتبط بالراتنج السابق إلى دفعتين» ومعالجة كل دفعة على النحو التالي. تم تقليب الدفعة 2( 789.9 جم راتنج: 0 ب 10 لتر ‎sad NMP‏ ساعتين» ثم نزح ‎«NMP 0‏ 2( غسله ثلاث مرات ب 10 لتر %30 ‎¢TFE/DCM‏ 3) معالجته ب 10 لتر محلول ‎CYTFA‏ لمدة 15 دقيقة؛ و4) 10 لتر محلول ‎CYTFA‏ لمدة 15 دقيقة تم إليه إضافة 130 ‎NEM/DCM 1:1 phil‏ وتقليبه لمدة دقيقتين ونزحه. تم معالجة الراتنج ثلاث مرات ب 10 لتر محلول تعادل؛ وغسله ست مرات = 10 لتر ‎«DCM‏ وثمان مرات = 10 لتر ‎.NMP‏ تم معالجة ‎mull‏ بمحلول انشطار 1530.4 جم ‎DTT‏ و2980 ‎DBU‏ في 6.96 لتر ‎NMP‏ ‎sd 5‏ ساعتين لفصل ‎sale‏ عقار الإيتيبليرسين الخام عن الراتنج. تم نزح محلول الانشطار واحتجازه في وعاء منفصل. تم غسل المفاعل والراتنج ب 4.97 لتر ‎NMP‏ تم دمجه مع محلول الانشطار. د. إزالة الحماية تم نقل محلول الاتشطار المدمج وغسول ‎NMP‏ إلى وعاء مضغوط تم إليه إضافة 39.6 لتر ‎(NH3H20) NH40H‏ تم تبريده إلى درجة حرارة -10 درجة ‎Agia‏ إلى -25 درجة ‎Asie‏ ‎dana 20‏ تم منع تسريب وعاء الضغط وتسخينه إلى 45 درجة مثئوية لمدة 16 ‎dela‏ ثم السماح بتبريده إلى 25 درجة مثوية. تم تخفيف محلول إزالة الحماية هذا والمحتوي على مادة عقار الإيتيبليرسين الخام ب 1:3 ماء نقي وضبط رقمه الهيدروجيني إلى 3.0 ب 2 مولار حمض فوسفوربك؛ ثم إلى رقم هيدروجيني 8.03 ب ‎(C18) HPLC .NHAOH‏ 1674-73.
تنقية مادة عقار الإيتيبليرسين ‎PMO)‏ رقم 1) الخام تم تحميل محلول إزالة الحماية من ‎hall‏ د السابق؛ والمحتوي على ‎sale‏ عقار الإيتيبليرسين الخام على عمود راتنج تبادل أنيوني 5 ‎(Tosoh Bioscience) ToyoPearl Super-Q‏ وتصفيته تتابعيًا بتدرج 35-0 ب فوق حجم عمود 17 (محلول منظم أ: 10 مللي مولار 55 صوديوم هيدروكسيد؛ محلول منظم ب: 1 مولار صوديوم كلوريد في 10 مللي مولار صوديوم هيدروكسيد) وتجميع أجزاء ذات نقاء مقبول ‎(SCX HPLC 5 C18)‏ إلى محلول منتج ‎lie‏ نقي. ‎(SCX) %94.58 (C18) %97.74 :HPLC‏ تم إزالة الملح من محلول مادة العقار النقي وتجفيده إلى 1959 جم مادة عقار إيتيبليرسين النقي. حصيلة ¢%61.4 ‎(SCX) %94.6 (C18) 997.7 :HPLC‏ الجدول 5 الاختصارات ]0284[ الاختصار ]0285[ الاسم ‎DBU [0286]‏ ]0287[ 1 8-داي أزا بيسيكلو أنديك-7-ين ‎DCM [0288]‏ ]0289[ داي كلورو ميثان ‎N [0291] DIPEA [0290]‏ ا١-داي‏ أيزو بروبيل إيثيل أمين ‎DMI [0292]‏ ]0293[ 1. 3-داي ميثيل -2- إيميدازوليدانون ‎DTT [0294]‏ ]0295[ داي ثيو ثريتول ‎IPA [0296]‏ ]0297[ كحول أيزو بروييل ‎MW [0298]‏ ]0299[ الوزن الجزئيي
‎NEM [0300]‏ [0301] ل١-إيثئيل‏ ‎din N [0303] NMP [0302]‏ -2-بيروليدون ‎RT [0304]‏ ]0305[ درجة حرارة الغرفة ‎TFA [0306]‏ ]0307[ حمض 2 2 2-تراي فلورو أسيتيك ‎TFE [0308]‏ ]0309[ 2 ؛ 2-تراي فلورو إيثانول ترافق ‎CPP‏ ‏صورة ‏ل الا ا ‎sey‏ الأب ال الام القن ‎a,‏ ‎I A‏ باحك ‎gy‏ اا ‎HEE‏ ‏سير ‎STFS‏ لعج ا لطع 1 ل ‎TRS PME‏ معصضيع 0 ووم ‎o Ey &‏ & ‎Ae _aban iB‏ تيا انا م 10-0 ‎N ¢ 1 Bs‏ ل ‎ph OE‏ ‎f § SoH.
Se‏ ‎A - Ed‏ = محم ‎Sa‏ ‏د ‎Asay‏ باع يل ‎pH‏ ‎SHC‏ تن صمي 2 3. ترفيح ‎IWOX‏ ‎SPE‏ من خلال استبدال أيونات الكلوريد الإجراءات التحليلية: تم تسجيل أطياف كتلة زمن الانتقال بالتأين والمج بالليزر المساعّد على مصفوفة ‎(MALDI-TOF-MS)‏ على جهاز ‎«Bruker AutoflexTM Speed‏ باستخدام مصفوفة حمض سيتابينيك (5/8). تم إجراء ‎SCX-HPLC‏ على جهاز ‎Thermo Dionex‏ ‎UltiMate 3000‏ مزود بكاشف مصفوفات 3000 دايود وعمود 507-20 ‎ProPacTM‏ ‎(ae 4 x 250)‏ بمعدل تدفق 1.0 ملليلتر/دقيقة (برقم هيدروجيني = 2؛ درجة حرارة العمود 30
درجة مئوية). الأطوار المتحركة أ (9625 أسيتو نيتريل في ماء يحتوي على 24 مللي مولار ‎(H3PO4‏ وب )%25 أسيتو نيتريل في ماء يحتوي على 1 مولار ‎KCl‏ و24 ‎Ma‏ مولار 4))). تم استخدام التصفية التتابعية للتدرج: صفر ‎(diy‏ 9635 ب؛ 2 ‎dads‏ 9635 ب؛ 2 دقيقة» 9680 ب؛ 25 ‎did‏ 9680 ب؛ 25.1 ‎dais‏ 9635 ب؛ 30 ‎dads‏ 90635 ب.
إلى خليط ‎PMO‏ رقم 1 (1.82 ‎Me 0.177 cpa‏ مول؛ مجفف خامًا بالتجفيد لمدة يومين)؛ ‎Luss OH-Gly-Arg-L-Arg-L-Arg-L-Arg-L-Arg-L-Arg-L-Ac‏ تراي فلورو أسيتات )614.7 ‎Ae 0.354 cane‏ مول)؛ و1-[بيس (داي ميثيل أمينو)ميثيلين ]-1-111؛ 2؛ 3-تريازولو ]4 0-5]بيريدينيوم 3-أكسيد هكسا فلورو فوسفات ‎cane 134.4 (HATU)‏ 0.354 ‎Ae‏ مول) تم إضافة داي ميثيل سلفوكسيد ‎(DMSO)‏ 20 ملليلتر). تم تقليب الخليط عند درجة
0 حرارة الغرفة لمدة 3 دقائق» ثم إضافة ‎(N‏ ل١-داي‏ أيزو بروبيل إيثيل أمين ‎(DIPEA)‏ 68.5 مجم؛ 0.530 مللي مول). بعد 5 دقائق؛ أصبح الخليط المغبر محلولًا شفافًا. تم مراقبة التفاعل بواسطة ‎.SCX-HPLC‏ بعد ساعتين؛ تم إضافة 20 ملليلتر 9610 أمونيوم هيدروكسيد محلول ‎.(NH3 962.8(‏ تم تقليب الخليط عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين إضافيتين. تم إنهاء التفاعل بإضافة 400 ملليلتر ماء. تم إضافة تراي فلورو إيثانول (2.0 ‎(Lille‏ إلى المحلول.
5 تتم تقسيم المحلول إلى جزئين وتنقية كل جزء بواسطة عمود ‎WOX‏ )10 جم راتنج لكل عمود). تم ‎Yl‏ غسل كل عمود ‎WCX‏ ب 9620 أسيتو نيتريل في ‎ele‏ (حجم/حجم) لإزالة مادة ‎PMO‏ البادئة رقم 1. تم إيقاف عمليات الغسل (225 ملليلتر لكل عمود) عندما أظهر تحليل ‎Cada‏ كتلة ‎MALDI-TOF‏ غياب إشارة ‎PMO‏ رقم 1. تم بعد ذلك غسل كل عمود بماء )100 ملليلتر لكل عمود). تم تصفية المنتج المطلوب» 001/0 رقم 1, تتابعيًا بواسطة 2.0 مولار جواندين ‎HCI‏
0 (140 ملليلتر لكل عمود). تم تجميع محاليل ‎PPMO‏ رقم 1 المجمعة ‎Be‏ ثم تقسيمها إلى جزئين وإزالة الملح منهما بواسطة عمود ‎SPE‏ (10 جم راتنج لكل عمود). تم ‎Yi‏ غسل عمود ‎SPE‏ ب 1.0 مولار محلول ‎NaCl‏ مائي )100 ملليلتر لكل عمود) لتوليد ملح هكسا هيدرو كلوريد من ‎PPMO‏ رقم 1. تم بعد ذلك غسل كل عمود ‎SPE‏ بماء )200 ملليلتر لكل عمود). تم تصفية ‎PPMO‏ رقم 1 النهائي الذي تم إزالة الملح منه بواسطة %50 أسيتو
5 تيتريل في ماء (حجم/حجم؛ 150 ملليلتر لكل عمود). تم إزالة الأسيتو نيتريل بالتفريغ عند درجة
حرارة منخفضة. تم تجفيد المحلول المائي الناتج للحصول على مترافق هكسا هيدرو كلوريد ‎PPMO‏ رقم 1 الناتج (93. 1 جم؛ %94.5 حصيلة). ‎PMO :1 Jul‏ رقم 1 باستخدام الطريقة ب لتخليق بروتوكول ‎PMO‏ الموصوف أعلاه؛ تم تخليق ‎PMO‏ رقم 1: 31[ ]5[ ‎Nu Nu‏ 0 ب | اض ‎AN‏ ‎wo] J 8 CL _O N_ © NH‏ ‎A / No‏ 3 ‎LN © He‏ ‎HC” op, CH,‏ 29 صورة 1 ‏رقم‎ PMO ‏حيث تكون كل نلا من 1 إلى 30 و5 إلى 3" عبارةً عن:‎ ]0 0320[١ ]0١0318[ ‏ا[0|0316]‎ [0|0314]| [0]0312]| ]0| 0310[ 32 [| 31 [| 31 [| 31 [| 31 [| 31 [ ]1 ]3 ]5 ]7 ]9 ]1 الموض الموض الموض الموض الموض الموض عرقم الا ‎beg) Niobe Niobe)‏ الا ‎١8| eg]‏ اعرقم ‎NI‏ ‎uf 0S‏ |5 إلى ان |5 إلى ان |5'إلى ان |5" إلى ان |5 إلى ‎ul‏ ‏3 3 3 3 3 3 ‎ 0332[ ]0١0330[ [0]0328]| ]0 0326[ [0]0324]| ]0|0322[‏ 0] [ 32 |[ 32 |[ 32 |[ 32 |[ 33 |[ 33 3] 1] 9] 7] 5] 3] 26 21 16 11 6 1
T G A A A C
[0] 03441 [0|0342]1| 1003401 [0]0338]| [0]0336]| ]0١ 0340 34 [| 34 [| 34 [| 33 [| 33 [| 33 ١ 5] 3] 1] 9] 7] 5] 27 22 17 12 7 2 0 0 6 ‏م‎ 0 T
[0] 0356] | [0|0354]1| 1003521 10| 03501 [0] 0348]| [00346] 35 [| 35 [| 35 [| 35 [| 34 [| 34 [ 7] 5] 3] 1] 9] 7] 28 23 18 13 8 3
T A A G A 0
[0] 0368[ [0|0366]| 10١ 03641 10| 03621١ [0]0360]| ]0١ 058 36 [| 36 [| 36 [| 36 [| 36 [| 5 ١ 9] 7] 5] 3] 1] 9 29 24 19 14 9 4
A T T G T 0 [0|03801| [0|0378]1| [0]|0376]| [0|03741| [0]0372]| ]0١ 0870 38 [| 37 [| 37 [| 37 [| 37 [| 37 ١ 1[ 9] 7] 5] 3] 1] 25 20 15 10 5
G T G A 0 ‏م‎
‎NH, HN‏ م 0 ‎N‏ 5 ملس حيث تكون ‎Ble A‏ عن صورة ‎mbe‏ ؛ تكون © ‎Ble‏ عن صورة ‎br‏ ؛ تكون 6 ‎Ble‏ ‏0 0 ساي ل ‎NTN‏ وحصي عن صورة سل , وتكون 7 ‎Ble‏ عن صورة لم . ‎.(SCX) 1694.6 (C18) 1697.7 :HPLC‏ المثال 2: ‎PPMO‏ رقم 1 باستخدام البروتوكول الموصوف أعلاه؛ تم تخليق ‎PPMO‏ رقم 1 من ‎PMO‏ رقم 1: صورة ‎HN NH2 HNGUNH, HN NH,‏ 3 — 5 ‎T.‏ م و ‎Nu Nu‏ 0 ول ,ور , ل ل . الا ال ‎U0‏ ‎N N z N 8 3‏ 110 0 ِ ‎eS‏ حي ‎SA RY‏ إل ‎CH;‏ 3 ا“ ‎H;C™‏ ‎CH, 2 6HCI‏ ‎HN HN HN‏ ‎NN nS Sa‏
1 ‏رقم‎ PPMO ‏عن:‎ Ble "3 ‏من 1 إلى 30 و5" إلى‎ NU ‏حيث تكون كل‎ ]0١0392[١ [0]0390]1| [0|0388]| [0|0386]| [0|0384]| ]0١ 082 39 [| 39 [| 38 [| 38 [| 38 [| 38 [
]3 ]5 ]7 ]9 ]1 ]3 الموض الموض الموض الموض الموض الموض عرقم الا ‎beg) Niobe Niobe)‏ الا ‎١8| eg]‏ اعرقم ‎NI‏ u u u u u u
إلى 5" إلى 5" إلى 5 إلى 5 إلى 5 إلى 3 3 3 3 3 3 0941 |10 |]0|0396[ [0398 10 |]0]0400[ |04021 ]0[ | ]0404 ]0[ [ 39 |[ 39 |[ 39 |[ 40 |[ 40 |[ 40 5] 3] 1] 9 7] 5] 26 21 16 11 6 1
T G A A A 0
[0] 0416] | [0|0414]| 0104121١ 10 04101 [0|0408]| م١‎ 061 41 [| 41 [| 41 [| 41 [| 40 [| 40 [ 7] 5] 3] 1] 9 7] 27 22 17 12 7 2 0 0 6 ‏م‎ 0 T
[0] 0428] | [0|0426]| [0] 04241] [0]0422]| [0|0420]| [0] 0418] 42 [| 42 [| 42 [| 42 [| 42 [| 41 [ 9 7] 5] 3] 1] 9 28 23 18 13 8 3
T A A G A 0
[0] 0440] | [0 |0438]| 1010436 10١ 04341 [0|0432]| [0] 01 44 [| 43 [| 43 [| 43 [| 43 [| 43 [ 1] 9 7] 5] 3] 1] 29 24 19 14 9 4
A T T G T 0
[0] 0452١ [0|0450]| [0]0448]| 10 | 0446١ [0|0444]| ]0١ 0442] [| 5 [| 4 [| 44 [| 44 [| 44 [
]3 ]5 ]7 ]9 ]1 ]3
م 0 ‎G T G A‏ ‎NH, HN‏ )م 0 ‎No 4G N‏ حيث تكون ‎ble A‏ عن صورة ‎mh‏ ؛ تكون © ‎Ble‏ عن صورة ‎whe‏ ؛ تكون 6 ‎Ble‏ ‏0 0 ‎N je‏ مك بم \ / ‎No 5 N *‏ عن صورة سل , وتكون 7 ‎Ble‏ عن صورة ‏ سلس . يوضح تحليل ‎SCX-HPLC‏ أن النقاء بلغ 9693.3 من خلال دمج القمة الأساسية 5 %99.69 من خلال دمج ‎PPMO‏ الكلي رقم 1. طيف كتلة ‎:MALDI-TOF‏ 10/2 المحسوب ل ‎M] C404H647N2020130P30 5‏ + 1]:+ 11342.25؛ موجودة: 11342.12. المثال 3: تخطي الإكسون 51 في المعمل (الخلايا العضلية) تم تقييم مركبين يستهدفان ديستروفين الإكسون 51 البشري على النحو الموصوف في الجدول التالي؛ ‎PMO‏ رقم 1 ‎PPMO‏ رقم 1 وقد تم تجميع كل منهما في نفس المتوالية؛ لتحديد قدرتهما ]045 | ]0455[ متوالية استهداف ‎041١ [0456] (TS)‏ | ]0458[ 4[ ر ]57[ قم متوالية 3 الاسم ‎TS‏ 5 045[ | ]0460[ ]0461[ | 04] | [0463] ‎CTCCAACATCAAGGAAGATGG 9]‏ 1 6211 ‎H CATTTCTAG‏
‎EG PM‏ © رقم 3 1 046[ | ]0465[ ]0466[ | 04[ | ]0468[ ‎CTCCAACATCAAGGAAGATGG 4]‏ 1 ]67 ‎-G-R6 CATTTCTAG‏ ‎EG PPM‏ © رقم 3 1 على نحو محدد؛ تم استخدام خلايا عضلية بشرية متمايزة لتحديد قدرة المركبات السابقة على حث تخطي ا لإكسون 51 عند تركيزات مختلفة (أي « 40 ميكرو متر « 20 ميكرو متر « 10 ميكرو مترء؛ ميكرو متر + 2.5 ميكرو مترء؛ و25. 1 ميكرو متر) ‎٠.‏ بعد التمايزء تم حضانة الخلايا مع 5 المركبات لمدة ست وتسعين ساعة متبوعة بعزل ‎RNA‏ وقياس تخطي ا لإكسون 1 5 بواسطة ‎RT-‏ ‎PCR‏ على النحو الموصوف أعلاه. تم عرض النتائج» التي توضح أن ‎PPMO‏ رقم 1 يعمل كبيرة على زيادة تخطي الإكسون 51 مقارنة ب ‎PMO‏ رقم 1؛ في الجدول التالي والشكل 4: ]0469[ ]0470[ النسبة المثوية لتخطي الإكسونات ]0471[ الجرعة | ]0472[ | ]0473[ | ]0474[ | ]0475[ | ]0476[ | ]0477[ (ميكرو متر) 20 10 5 2.5 1.25 ‎١ [0480] | [0479]‏ [0481] | ]0482[ | ]0483[ | ]0484[ ]0478[ المركب
‎١ [0490] | ]0489[ | ]0488[ | 104871١ [0486]‏ [0491] ‎PMO [0485]‏ رقم 1 41.93 34.56 |22.23 |15.3 |12.8 4.16 ‎١ [0493]‏ [0494] | ]0495[ | ]0496[ [0497] | ]0498[ ]0492[ ‎PPMO‏ رقم 1 | 68.03 |58.9 |56.76 |37.46 |23.53 | 12.13 المثال 4: دراسة فأر ‎MDX‏ ‏يعد فأر ‎MAX‏ نموذجًا مقبولًا من الحيوانات ومعروف جيدًا بإصابته ‎all‏ العَضَلِيَ لدوشين ‎(DMD) (Duchene)‏ ويحتوي على طفرة في إكسون 23 بجين الديستروفين. من المعروف أن متوالية ‎M23D‏ المضادة لاتجاه النسخ (المتوالية رقم :2( تقوم بحث تخطي إكسون 23 وتستعيد تعبير الديستروفين الوظيفي. تم إعطاء فئران ‎MDX‏ عمرها 7-6 أسابيع ‎dia‏ واحدة في وريد الذيل من ‎PPMO4225‏ أو 01004225 وفقًا للجدول التالي عند جرعة 40 مجم/كجم؛ أو مع محلول ملحي مركز. ]0499[ ]0500[ متوالية الاستهداف ‎0[١ 051] 0501] (TS)‏ الاسم [ 02[ | 50 3[ رقم 5 9 متوالية 3
‎]0١ [05] 0506] [0505] [0504]‏ ‎GGCCAAACCTCGGCTTACCT PMO42‏ |[ 071 50 ‎GAAAT 25‏ ]8
‎EG‏ ‎H| 3 2‏ ]0509[ ]0510[ ]0511 ]05[ ]0[ ‎GGCCAAACCTCGGCTTACCT PPMO4‏ | [ ]12 51 ‎GAAAT 225‏ ]3 ‎EG 2‏ 3 = ‎G‏ ‎R6‏ ‏تم تحضير كل من ‎PPMO4225 s PMO4225‏ بالطريقة ‎PMO‏ | وطرق ‎CPP ily‏ الموصوفة ‎٠ Del‏ تم ‎z=‏ الفئران المعالجة عند بعد 7 30 60 و90 ‎Lg‏ من إعطاء ‎Aes‏ واحدة ‎nj‏ = 6 لكل مجموعة). تم معالجة الحجاب الحاجز؛ القلب والعضلة ‎duel)‏ الرؤوس اليمنى لتحليل ‎dads‏ ويسترن لقياس إنتاج بروتين ديستروفين ودرجة حرارة الغرفة من خلال تحليل ‎RT-PCR‏ لقياس النسبة ‎gill‏ 4 لتخطى الإكسونات؛ ومعالجة العضلة رباعية الرؤوس اليسرى لتحديد الكيمياء الهيستولوجية المناعية وتبقيع ‎H/E‏ على النحو الموصوف أعلاه . تم احتساب كمية استعادة بروتين الديستروفين ببقعة ويسترن؛ وقياس النسبة المئوية لتخطي إكسون 0 23 من خلال ‎RT-PCR‏ على النحو الموصوف ‎lel‏ ‏تم عرض نتائج ‎RT-PCR‏ في الأشكال 10-5ب وفي الجداول التالية. على نحو مدهش؛ أدى 005 إلى حث مستويات ‎of‏ ومستدامة على نحو دال إحصائيًا من استعادة الديستروفين وتخطي ا لإكسون 23 مقارنة 2 04225 ‎PM‏ ؛ مع وجود أعلى المستويات بعد 30 يومًا من الحقن. والمدهش أكثر أن ‎PPMO4225‏ قد أدى إلى زيادة مستويات الديستروفين فى
القلب بينما لم يؤدي ‎PMO4225‏ إلى ذلك؛ لم يلاحظ الديستروفين وتخطي الإكسونات في القلب ] ]0515[ كمية بروتين ديستروفين باعتباره النسبة المئوية للبروتين غير المعالج ‎(WT%) 0‏ ببقعة وسترن
‎PPMO4225 [0518] | PMO4225 [0517] [0516]‏ 1 المركب 4 ‎ 052[ ١ 05231 ١ 05241 ١ 052] [0519] 1‏ [0524 05251 | ]0526 | ]052 اليوم 0[ 1[ 2[ 3[ [ [ [ 7[ 7 30 60 ,90 7 30 60 90 ]0528[ 052[ | 053[ | 053[ | 053[ | 0533[ | 0534[ | 0535[ | 053[ النسيج ]9 ]0 ]1 ]2 ] ] ] ]6 ‎١ 0543] | 0542[ ١ 054[ ١ 0541 ١ 053] | 053] [0537]‏ [0544 | ]054 العضلة 8[ 9 0[ 1[ [ [ [ 5[ ‎dsl‏ الرؤوس 1 2.3456 1.66 |0.7 20.7 28.1 |20.8 8.21 ‎١ 054 ١ 054] | 054] [0546]‏ ذذ | [0551 | ]0552 از3دذة | ]055 الحجاب 7 ]8[ 9[ 0[ |[ [ [ 4[ الحاجز 4 1.96 |1.3 ]0.6 14.5 ]15.2 9.8 2.3 ‎١ 0561[١ 0560] | 055] | 055] | 055] | 055] [0555]‏ [0562 | ]056 القلب 6[ 7[ 8[ 9 [ [ [ 3[
RT-PCR ‏النسبة المئوية لتخطي الإكسونات حسب قياس‎ ]0565[ | [0
PPMO4225 [0568] [0567] [0566] 6
PM0O4225 ‏المركب‎ ‎4[ ‎051١ 0571 | 10575[ [05741] 051 051 051 057] [0569] [77 [6 [73 | [72] 71] ]0 ‏اليوم‎ ‎30 7 90١ 60 90١ 60| 30| 7 [05 | [058 | [0584] | [0583]| ]05 | [05 | ]05 | ]057 | gua [0578] 86-١ 5 82[١ 811 801| 9 051١ 059] | 10593[ | 10592[ 051] 051] 05]| 058] | ‏العضلة‎ [0587] [o5| [4 01] 90] 89] [8 ‏رباعية الرؤوس‎ 42.02| 5 6.9 28.8 2.817.955 2 06[١ 060] | [0602] | [0601] | 06[ | 051] 051١ 059]| ‏الحجاب‎ [0596] 04 8 [00| 99 [98 | 7 ‏الحاجز‎ ‎36.76| 6 0 5 00.5 2.6 59
]0605[ القلب ]060 |]06 ‎06[١ 061[١]0611[١]0610[١ 061١ 06١‏ 6[ 07[ ]08[ | 09[ 2[ 13[ 13.15 | 2.64 ‎Of 0] 0 0‏ 0 0 تم عرض تتائج الكيمياء الهيستولوجية المناعية في الشكل 11 ‎cla‏ أدى ‎PPMO4225‏ إلى استعادة الديستروفين في العضلة رباعية الرؤوس؛ في حين أن 4225 أدى إلى إنتاج نمط تعبير مرقع. يشير التوزيع المنتظم للديستروفين من خلال علاج ‎PPMO4225‏ إلى انتشار استهداف العضلة الهيكلية. وقد ‎PPMO4225 (oof‏ وبدرجة كبيرة إلى تحسين الإعطاء ‎jie‏ 01/104225 في الخلية الحية. المثال 5: ‎ads‏ الإكسون 51 في ‎NHP‏ ‏لإيضاح فاعلية تخطي إكسونات أوليجومرات ‎PPMO‏ المضادة لاتجاه النسخ؛ تم استخدام أوليات غير بشرية . على نحو محدد؛ تم حفن قرود رياح ذات أنسجة عضلية سليمة؛ ب ‎PPMO‏ رقم 1 0 ©0100 رقم 1 (من المثال 2(¢ أو محلول ملحي مركز وفقًا لجدول الإعطاء في الجدول التالي: جدول إعطاء الرياح الجرعة قم كل المجموعة المركب استراتيجية الإعطاء ‎(pe)‏ مجموعة ‎PPMO‏ رقم 1 20 3 1 ‎PPMO‏ رقم 2 40 3 1 1
‎PPMO‏ رقم ‎BE‏ ‏1 ‏3 ‎PPMO‏ رقم 4 160 3 4 1 ‎SAC‏ ‎Hem 8‏ 3 الأسابيع ‎Saline‏ 2 ‎5s‏ أسبوعيًا؛ بإجمالي 4 جرعات ذبح الحيوانات بعد 48 ساعة من اخر ‎(dea‏ في اليوم 22 1 ‎SAC‏ ‎PPMO‏ رقم 30 ‎Ls‏ ‏7 40 2 1
‎de >‏ واحدة في اليوم 1 مع الاستعادة لمدة 4 أسابيع 1 60 يومًا ‎SAC‏ ‎PPMO‏ رقم 40 2 1 ‎de >‏ واحدة في اليوم 1 مع الاستعادة لمدة 8 أسابيع تحملت الحيوانات في المجموعات 1 -5 جميع الجرعات 4 عند 20 40 و50 مجم/كجم . لم تتحمل الحيوانات 160 مجم/كجم بعد الجرعة الثالثة؛ مما أدى إلى تخدير حيوانين يوم إعطاء الجرعات وتخدير حيوان واحد في اليوم التالي. أظهرت هذه الحيوانات انخفاضًا في وزن الجسم. في كل مرة تشريح؛ أو تخدير وقت الاحتضار مجدولة؛ تم تجميع قطاعات من الحجاب الحاجزء العضلة الملساء للإثنا عشرء المَريء؛ والأووطى» العضلة رباعية الرؤوس»؛ العضلة الدالية؛ العضلة ذات الرأسين؛ والقلب وتجميدها في الحال. تم تحديد النسبة المئوية لتخطي الإكسون 51 باستخدام ‎RT-PCR‏ على النحو الموصوف أعلاه. تم عرض النتائج في الأشكال 15-12؛ وفي الجدول التالى. ]0614[ ]0615[ النسبة المئوية لتخطي الإكسونات
‎5,PPMO [0617]‏ 1 ]0618[ ‎PM‏ ‏]0616[ © رقم الع بضلة ]0619[ 106201 ]06211[ 62211 |]0623[ 80 160 40 مجم/كجم ‏ |مجم/كجم ‏ |مجم/كجم | |مجم/كجم | مجم/كجم ‎ ]0628[: [06271| [0626]| [0625]| [0624]‏ |]0629[ عض 5.2 .43 .92 ‎nd‏ 0.0 لة رباعية 8 4 الرؤوس ‎]0631[١ [0630]‏ 106321 1063311 ا 412دوم] |]0635[ الحجا .30 .80 .94 100 0.0 ب الحاجز 2 5 9 .0 ‎ [0640]| [0639]| 1063802 1063771 [0636]‏ |]0641[ ذات 4.4 .30 .65 .90 0.0 الرأسين 2 7 6 ‎]0646١ [0645]| 0644121 [0643]| [0642]‏ |]0647[ الع 6.8 .36 .78 .95 0.0 ضلة الدالية 4 2 0 ‎ [0649]| [0648]‏ ]06501[ 065111 65221] |]0653[ القلب 0.0 2.6 .60 .98 0.0 7 5
]0654[ ]0655[ ]0656[ ]0657[ ]0658[ ]0659[ الإثنا .14 .17 .61 .71 0.0 عشر 9 0 0 4 ]0660[ ]0661[ ]0662[ ]0663[ ]0664[ ]0665[ ‎Al‏ 4.1 .22 .66 .97 0.0 يء 4 6 4 ]0666[ ]0667[ ]0668[ ]0669[ ]0670[ ]0671[ الأور .26 .40 .60 ‎nd‏ 4.8 طى 1 8 1 0 = غير محدد على نحو مدهش» أدى ‎PPMO‏ رقم 1 إلى إنتاج مستويات عميقة لتخطي الإكسونات في الأنسجة السليمة المختبرة مقارنة ب ‎PMO‏ رقم 1. على نحو محدد؛ في حين أن إعطاء ‎PMO‏ رقم 1 لم يؤدي أي تخطي ملاحظط في أي من الأنسجة المجمعة؛ فقد أدى ‎PPMO‏ رقم 1 إلى تخطي الإكسونات؛ على سبيل المثال» بزيادة 9690 في عضلة رباعية الرؤوس والحجاب الحاجز ويزيادة 9660 ا لإثنا عشر عند مستوى جرعات 80 مجم/كجم . وما يد هش على نحو خاص مستوى تخطي الإكسونات الذي تحقق ‎(gal‏ القلب عند؛ على سبيل ‎(Jl)‏ 80 مجم/كجم في حين أن تخطي الإكسونات تم لكن بزيادة 9660. دون الرغبة في التقيد بنظرية بعينها؛ قد أدى الإعطاء الجهازي وإيصال 001/0 رقم 1 إلى نسيج عضلة ‎NHP‏ غير الحثلية السليمة إلى تخطي الإكسون 51 0 بينما لم تتوقع درجة ‎PPMO‏ رقم 1 على نحو محدد في عضلة القلب من فأر ‎mdx‏ السابق في المثال 4. ‎Yay‏ من ذلك؛ فقد اختلف الإعطاء لنسيج صحيح ‎NHP (is‏ عن الإعطاء لنسيج فيما يتعلق بالمجموعتين 7 و8؛ تم تحديد النسبة المئوية لتخطي الإكسون 51 باستخدام -1] ‎PCR‏ على النحو الموصوف أعلاه. تم عرض النتائج في الشكل 22؛ وفي الجدول التالي.
]0673[ النسبة المئوية لتخطي الإكسونات ‎PPMO [0674]‏ رقم 1 ]0672[ العضلة ‎Lg 60 [0676] 30 [0675]‏ ‎Gs‏ ‏]0677[ العضلة رباعية | ]0678[ 13.7 | ]0679[ 4.6 الرؤوس ]0680[ الحجاب الحاجز | ]0681[ 62.4 | ]0682[ 49.1 ]0683[ القلب ]0684[ 3.1 ]0685[ 0 ]0686[ الجهاز المّعدي | ]0687[ 1.25 | ]0688[ 0 على النحو الملاحظ من النتائج؛ كان تخطي الإكسونات أعلى عند 30 ‎Lag‏ مقارنة ب 60 يومًا في كل عضلة تم تحليلهاء مما يوضح زيادة فاعلية تخطي الإكسونات على مدار الوقت بعد إعطاء جرعة واحدة . المثال 6: دراسة استجابة ‎MDX‏ للجرعات تم إعطاء فتران ‎MDX‏ عمرها 7-6 أسابيع حقنة واحدة في وربد الذيل من ‎PPMO4225‏ أو 5 الموصوف أعلاه عند جرعة 40 مجم/كجم؛ 80 مجم/كجم؛ أو 120 مجم/كجم ‎N)‏ ‏= 6 لكل مجموعة) . تم ذبح الحيوانات المعالجة عند 30 يومًا من الحقن. تم معالجة الحجاب الحاجز؛ العضلة رباعية 0 الرؤوس؛ والقلب لتحليل بقعة ويسترن لقياس إنتاج بروتين الديستروفين بناءً على بروتوكول بقعة وبسترن السابق وصفه (المستخدم؛ على سبيل المثال؛ في المثال 4( مع التعديلات التالية:
]0689[ المؤثر [0690] بروتوكول ‎]0691[١‏ تعديلات بقعة ويسترن في المثال 4 بروتوكول بقعة ويسترن ]0692[ حساب ]0693[ تجرية طقم ]0694[ طريقة ‎BCA‏ ‏البروتين بروتين ‎RC DC‏ ]0695[ خطوة ]0696[ طوال الليل ]0697[ 1 ساعة عند الإيقاف عند 4 درجة مئوية درجة حرارة الغرفة ]0698[ حضانة ]0699[ 1 ساعة عند | ]0700[ طوال الليل الجسم المضاد الأولي درجة حرارة الغرفة عند 4 درجة حرارة الغرفة ]0701[ تركيز الجسم | [0702] 20:1 [0703] 00:1 المضاد الأولي تم عرض استعادة بروتين ديستروفين بالنسبة المئوية للنوع غير المعالج 76 في الجدول التالي وفي الأشكال 19-16.
‎]0705[١ [0704]‏ احتساب بروتين الديستروفين بالنسبة المثئوية للبروتين غير
‏المعالج ‎(WT)‏ ببقعة ويسترن
‎[0708] [0707] [0706]
‏المركب ‎PPMO4225 PM0O4225‏ ]0709[ ]0710 [0711 [0712 [07 ]0714[ [0715] الجرعة |[ [ [ 13[ (مجم/كجم) 80 )120 40 80 120 +40
[0716] النسيج 7 أ0718] | 0719[ ]07[ [0721] | ]0722[ ] ] ] ]20
[0723] الحجاب الحاجز ]07 ]0724 | ]0725 | ]0726 27[ ]0728[ | ]0729[ [ [ [ 8.0 | 26.03 |42.77 0.80 0.97 1.83 2
[0730] القلب ]07 ]0731 | ]0732 [0733 4 | ]0735[ | ]0736[ [ [ [ 6 |6.34 19.48 0.13 0.24 0.34 1 ]0737[ العضلة ‎deb‏ | ]0738 | ]0739 |07401 ]071 ]0742[ | ]0743[ الرؤوس [ [ [ 41[ 90 144 3.5 26 3.0 43 على نحو مدهش»؛ توضح البيانات أن ‎deja‏ واحدة من 001/04225 قد أدت إلى زيادة مستويات الديستروفين بصورة معتمدة على الجرعة في فثران ‎mdx‏ إلى مدى أكبر بكثر على نحو ‎Ja‏ ‏5 المثال 7: دراسة ‎IHC‏ للحجاب الحاجز والقلب لدى فتئران ‎MDX‏
تم إعطاء فئران ‎MDX‏ عمرها 7-6 أسابيع حقنة واحدة في وريد ذيل ‎PPMO4225‏ تبلغ 80 مجم/كجم أو محلول ملحي مركز؛ وإعطاء ‎oi‏ غير معالجة عمرها 7-6 أسابيع حقنة من محلول ملحي مركز . تم ذبح ‎mdX Gh‏ غير المعالجة»؛ ‎MAX Gy‏ تم إعطاؤها ‎deja‏ واحدة محلول ملحي مركز؛ وفتران غير معالجة بعد 30 يومًا ‎N)‏ = 4 لكل مجموعة). تم إيضاح نتائج الكيمياء الهيستولوجية المناعية في الشكل 24. هناء توضح النتائج ‎Bab)‏ منتظمة في الديستروفين في الأنسجة المرتبطة بالمرض والوفاة فى ‎DMD‏ فى فتران ‎mdx‏ المعالجة ب ‎PPMO4225‏ ‎ads :8 JU‏ الإكسون 51 في المعمل (الأرومات العضلية) تم تقييم مترافقي أوليجومر مضادين لاتجاه النسخ يستهدفان ديستروفين ‎(DMD)‏ الإكسون 51 البشري على النحو الموصوف في الجدول التالي؛ ‎PMO‏ رقم 1 ‎PPMO‏ رقم 1 يحتوي كل 0 منهما على نفس المتوالية؛ لتحديد تخطي الإكسون ‎DMD‏ 51 في أرومات عضلية بشرية متواليات ‎PMO‏ رقم 1 و ‎PPMO‏ رقم 1 لإكسون ‎DMD‏ 51 البشري. ]0744 | [0745] متوالية الاستهداف ‎0[١ 07]| 074] (TS)‏ [ 6[ 47[ 74 8[ ‎J‏ لاسم رقم 5’ متوالي 3 ’ ة ‎TS‏ ‏0749[ | ]0750[ [075 07[ ]0[ ‎CTCCAACATCAAGGAAGATGGCATTT ]‏ |1[ |]52 |75 ‎CTAG‏ ]3 ‎EG 1 PMO‏ رقم 1 3 ‎H‏
0754[ | ]0755[ [075 ]07[ ]0[ ‎CTCCAACATCAAGGAAGATGGCATTT ]‏ |6[ ]57 | 75 ‎CTAG‏ ]8 ‎EG 1 PPM‏ © رقم 3 - 1 6 ‎R‏ ‏6 ‏على نحو محدد؛ تم وضع أرومات عضلية بشرية صحيحة (الممر 6-5( ‎SKB-F-SL‏ يباع لدى ‎Inc‏ ,260-810.) على أطباق عند تجمع ~%40 عند معالجتها ب ‎PMO‏ رقم 1 أو ‎PPMO‏ رقم 1 بتركيزات متنوعة (أي؛ 40 ميكرو ‎«ie‏ 20 ميكرو ‎«jie‏ 10 ميكرو ‎sie‏ ¢ 5
ميكرو ‎jie‏ ¢ 2.5 ميكرو مترء و1.25 ميكرو متر) في أوساط ‎.(-Zen-Bio, Inc) SKM-M‏ بعد ست وتسعين ساعة من الحضانة»؛ تم غسل الأرومات العضلية ب ‎PBS‏ وتحليلها بواسطة محلول ‎RAL‏ منظم في طقم 96 ‎lllustra GE RNAspin‏ (رقم الكتالوج 75-055-25( ‎GE‏ ‎(Healthcare 810-45‏ تم ‎SIRNA Jie‏ وفقًا لتوصيات الشركة المصنعة؛ باستثناء استخدام 40 ميكرو لتر ماء خالٍ من ‎RNase‏ لتصفية ‎RNA‏ تتابعيًا .
0 لتحديد ‎ads‏ الإكسون 51 بواسطة كلا المركبين» تم إجراء ‎RT-PCR‏ عند النقطة الأخيرة والمكون من خطوتين. على نحو محددء تم ‎Yol‏ نسخ أحد عشر ميكرو لتر من ‎SIRNA‏ نسحًا عكسيًا إلى ‎cDNA‏ بواسطة طقم تخليق جدائل ‎SuperScript IV‏ أول (رقم الكتالوج ‎(Invitrogen 090‏ باستخدام وحدات الهكسامير العشوائية ‎Bg‏ لتعليمات الشركة المصنعة. تم إجراء ‎PCR‏ بإضافة 9 ميكرى لتر ‎PCR Supermix High Fidelity cDNA‏
5 ليوليميراز ‎Platinum Taq DNA‏ (رقم الكتالوج 12532024( ‎(Invitrogen‏ ببادثئات استهدفت إكسوني ‎DMD‏ البشريين 49 و52 [بادئة أمامية (المتوالية رقم:5) :
0860086166 00/600801 ؛ بادئة عكسية (المتوالية رقم:6) : ‎[CGATCCGTAATGATTGTTCTAGCC‏ تم إجراء تضخيم ‎PCR‏ باستخدام برنامج دوران حراري في الزمن الفعلي من نوع 077496 ‎BioRad‏ باستخدام البرنامج الموضح في الجدول التالي. تم تقييم تعبير منتجات ‎POR‏ المتخطاة وغير المتخطاة بتحميل 32 ميكرو لتر من منتج ‎PCR 5‏ على جهاز ‎LabChip GX‏ باستخدام طتم ‎DNA High Sensitivity Reagent‏ ‎Perkin Elmer)‏ ,015760672). تم احتساب النسبة المئوية تخطي الإكسون ‎DMD‏ 51 بالنسبة المئوية للمولارية ‎sb)‏ مولا ر/لتر) لنطاق ا لإكسون 51 المتخطى (246 زوج قاعدة) مقارنة بالمولارية الكلية للنطاقات المتخطاة (246 زوج قاعدة) وغير المتخطاة (475 زوج قاعدة) . تم استخدام اختبار ؟ للطلاب غير مقرون ثنائي الأطراف (متجانس التباين) لتقييم ما إذا كان 0 متوسط المجموعتين يختلف إحصائيًا عن بعضهما البعض عند كل جرعة. تم اعتبار القيمة © أقل من 0.05 42 إحصائيًا. برنامج الدوران الحراري المستخدم لتضخيم أمليكونات ‎DMD‏ مع أو بدون تخطي الإكسون 51. ]0759[ الخطوة ]0760[ درجة الحرارة | [0761] الزمن ]0762[ 1.نزع الخواص ]0763[ 4 درجة ]0764[ 2 دقيقة الطبيعية مئوية ]0765[ 2.نزع الخواص ]0766[ 4 درجة ]0767[ 30 الطبيعية ‎Lge‏ ثانية ]0768[ 3.التلدين ]0769[ 5 درجة ]0770[ 30 منوية ثانية
[0771] 4.التمديد ]0772[ 8 درجة [0773] | دقيقة مئوية
[0774] 5.خطوة التكرار ]0775[ 4 دورة 4-2
[0776] 6.التمديد ‎Sd‏ |[0777] 8 درجة ]0778[ 5 دقيقة مئوية ]0779[ 7.التخزين ]0780[ 4 درجة ]0781[ 0 مئوية تم عرض النتائج في الجدول التالي وفي الشكل 25. النسبة المئوية تخطي الإكسون ‎DMD‏ 51 بواسطة ‎PMO‏ رقم 1 و051/0 رقم 1 في أرومات عضلية بشرية. ]0783[ النسبة المئوية لتخطي الإكسونات (المتوسط ‎SD‏ +( ]0782[ المركب/الجر ]0784[ | ]0785[ | ]0786[ |]0787[ |]0788[ | ]0789[ َ 2 4 عة (ميكرو متر) 1.25 2.5 5 10 0 0 ]0791[ | ]0792[ [0793] | ]0794[ ]0790[ ]0795[ | ]0796[ ‎PMO‏ رقم |0.66 |1.49 |2.76 2.63 5 8 1 + + + + .29 + .46 + 0.76 7 | 1.69 0.48 | 1.36 1.83 ]0802[ | ]0803[ ]0797[ 1 2 ‎PPMO‏ رقم ]0798[ | ]0799[ | ]0800[ | ]0801[ 8.92 + | 9.24 + 1 0.73 1.64 0 2.92 6.28 8.71
+ + + + 0.09 0.69 0.14 1.26 توضح النتائج المعملية هذه أن ‎PPMO‏ رقم 1 قد أدى على نحو دال ‎Glas)‏ إلى زيادة تخطي إكسون ‎DMD‏ 51 مقارنة ب ‎PMO‏ رقم 1 في أرومات عضلية بشرية. المثال 9: تخطي الإكسون 51 في المعمل (نبيبات) تم تقييم مترافقي أوليجومر مضادة لاتجاه النسخ يستهدفان إكسون الديستروفين ‎(DMD)‏ البشري ‎PMO (51‏ رقم 1 ‎PPMO‏ رقم 1 يحتوي كل منهما على نفس المتوالية؛ لتخطي ‎DMD (us)‏ 1 في نبيبات بشرية صحيحة. 0[١ 081| 080] (TS) ‏متوالية الاستهدف‎ [0805] | 0804] 80 | [07 [6 [ [8 الاسم رقم 50 متوالي 3 نَْ
TS ‏ة‎
[0] ‏ا08]‎ 081] [0810] | [0809 81| 12]| [1 | CTCCAACATCAAGGAAGATGGCATTT ] 3] CTAG
EG 1 PMO
H 3 1 ‏رقم‎ ‎[0] ‏ا08]‎ 081] [0815] | [0814 81| 171| [6| CTCCAACATCAAGGAAGATGGCATTT ] 8] CTAG
‎EG PPM‏ 0 رقم 1 3 = ‎G 1‏ ‎R‏ ‏6 ‏على نحو محدد؛ تم استزراع أرومات عضلية بشرية صحيحة (الممر 6-5« ‎SKB-F-SL‏ يباع لدى ‎Inc‏ ,260-810.) للوصول إلى تجمع 9690-80 في أوساط ‎SKM-M‏ قبل بدء التمايز من خلال الحضانة في أوساط مصلية منخفضة ‎Inc)‏ ,280-810 ,4-10/ل4ا5).). بعد خمسة ‎abl‏ من التمايزء تم حضانة النبيبات الناضجة مع ‎PMO‏ رقم 1 أو ‎PPMO‏ رقم 1 بتركيزات متنوعة (أي؛ 0 ميكرو مترء 20 ميكرو مترء؛ 10 ميكرو مترء؛ 5 ميكرو مترء 2.5 ميكرو مترء و1.25 ميكرو متر). بعد ست وتسعين ساعة من الحضانة؛ تم غسل النبيبات ب ‎PBS‏ وتحليلها بمحلول تحليل ‎RAL‏ منظم في طقم 96 ‎lllustra GE RNAspin‏ (رقم الكتالوج 75-055-25 ‎GE‏ ‎.(Healthcare 810-5060065‏ تم ‎RNA Jie‏ الكلى ‎Bay‏ لتوصيات الشركة المصنعة؛ 0 باستثناء استخدام 40 ميكرو لتر ماء خالٍ من ‎RNase‏ لتصفية ‎RNA‏ تتابعيًا. لتحديد ‎DMD‏ تخطي الإكسون 51 بواسطة ‎PMO‏ رقم 1 أو ‎PPMO‏ رقم 1؛ تم إجراء ‎RT-‏ ‎PCR‏ عند النقطة الأخيرة والمكون من خطوتين. على نحو ‎came‏ تم ‎Vol‏ نسخ أحد عشر ميكرو لتر من ‎RNA‏ الكلى نسحًا عكسيًا إلى ‎cDNA‏ بواسطة ‎ath‏ تخليق جدائل ‎SuperScript IV‏ أول (رقم الكتالوج 18091200« ‎(Invitrogen‏ باستخدام وحدات الهكسامير العشوائية ‎dy‏ لتعليمات 5 الشركة المصنعة. تم إجراء ‎PCR‏ بإضافة 9 ميكرو لتر ‎cDNA‏ في ‎PCR Supermix High‏ ‎Fidelity‏ لبوليميراز ‎Platinum Tag DNA‏ (رقم الكتالوج 12532024( ‎(Invitrogen‏ ببادئات استهدفت إكسوني 01/10 البشريين 49 و52 [بادئة أمامية (المتوالية رقم:5) : 65 08600861 008600801 ؛ بادئة عكسية (المتوالية رقم:6) : ‎[CGATCCGTAATGATTGTTCTAGCC‏ تم إجراء تضخيم ‎PCR‏ باستخدام برنامج دوران
حراري في الزمن الفعلي من نوع 0177496 ‎BioRad‏ باستخدام البرنامج الموضح في الجدول التالي. تم تقييم تعبير منتجات ‎POR‏ المتخطاة وغير المتخطاة بتحميل 32 ميكرو لتر من منتج ‎PCR‏ على جهاز ‎LabChip GX‏ باستخدام طتم ‎DNA High Sensitivity Reagent‏ ‎Perkin Elmer)‏ ,015760672). تم احتساب النسبة المئوية تخطي الإكسون ‎DMD‏ 51
بالنسبة المئوية للمولارية (نانو مولار/لتر) لنطاق الإكسون 51 المتخطى (246 زوج قاعدة) مقارنة مقارنة بالمولارية الكلية للنطاقات المتخطاة (246 زوج قاعدة) وغير المتخطاة )478 زوج قاعدة) . تم استخدام اختبار ؟ للطلاب غير مقرون ثنائي الأطراف (متجانس التباين) لتقييم ما إذا كان متوسط المجموعتين يختلف إحصائيًا عن بعضهما البعض عند كل جرعة. تم اعتبار القيمة © أقل من 0.05 42 إحصائيًا.
0 برنامج الدوران الحراري المستخدم لتضخيم أمليكونات ‎DMD‏ مع أو بدون تخطي الإكسون 51. ]0819[ الخطوة ]0820[ درجة الحرارة | [0821] الزمن ]0822[ 8.نزع الخواص | ]0823[ 4 درجة ]0824[ 2 دقيقة الطبيعية مئوية ]0825[ 9.نزع الخواص | [0826] 4 درجة ]0827[ 0 ثانية الطبيعية مئوية ]0828[ 0.التلدين ]0829[ 55 درجة ]0830[ 30 ثانية
مئوية ]0831[ 1 .التمديد ]0832[ 8 درجة ]0833[ 1 دقيقة مئوية ]0834[ 2 .خطوة ]0835[ 4دورة التكرار 4-2
]0836[ 3 .التمديد ]0837[ 8 درجة ]0838[ 5 دقيقة النهائي ‎sie‏ ‏]0839[ 4.التخزين ]0840[ 4 درجة ]0841[ 0 مئوية تم عرض النتائج التي توضح أن ‎PPMO‏ رقم 1 قد أدى وعلى نحو دال إحصائيًا إلى زيادة ‎ads‏ إكسون ‎DMD‏ 51 مقارنة ب ‎PMO‏ رقم 1؛ في الجدول التالي وفي الشكل 26. النسبة المئوية لتخطي إكسون ‎DMD‏ 51 بواسطة ‎PMO‏ رقم 1 ‎PPMO‏ رقم 1 في نبيبات بشرية. ]0843[ النسبة المئوية ‎adil‏ الإكسونات (متوسط ‎SD‏ +) ]0842[ المركب/الجر ]0844[ | ]0845[ | ]0846[ | ]0847[ | ]0848[ | ]0849[ َ 2 4 عة (ميكرو متر) 1.25 2.5 5 10 0 0 ]0851[ | ]0852[ | ]0853[ | ]0854[ ]0855[ | ]0856[ ]0850[ 4 | 0.70 1.23 2.11 2 5 ‎PMO‏ رقم 1 + + + + .85 + .68 + 0.84 0.08 ]0.49 0.88 1.06 1.83 ]0862[ | ]0863[ ]0857[ 1 2 ‎PPMO‏ رقم ]0858[ | ]0859[ | ]0860[ | ]0861[ 6.08 + |7.79 + 1 1.90 4.04 1.61 2.80 5.71 8.18
+ + + + 2.94 2.19 0.98 1.16
Hod de de dd dk de dk de de de dk od ok dod 333 ‏يتم هنا تضمين كل النشرات وطلبات البراءات المذكورة في هذه المواصفة كمرجع كما لو أنه تم‎ ‏نحو متفرد ليتم تضمينها|إتضمينه‎ og ‏إيضاح كل نشرة فردية أو طلب براءة فردي بشكل خاص‎ ‏كمرجع.‎ ‏المراجع‎ 5
Aartsma—Rus, A., A. A. Janson, et al. (2004). "Antisense—induced multiexon skipping for Duchenne muscular dystrophy makes more sense.’
Am J Hum Genet 74(1): 83-92.
Abes, R., et al. (2008). "Arginine-rich cell penetrating peptides: design, structure—activity, and applications to alter pre-mRNA splicing by steric 10 .block oligonucleotides." J Pept. Sci. 14: 455-460
Alter, J., et al. (2000). "Systemic delivery of morpholino oligonucleotide restores dystrophin expression bodywide and improves dystrophic .pathology.” Nat. Med. 12(2): 175-177
Bestas, B., et al. (2014). "Splice-Correcting ligonucleotides restore BTK 5 function in X-linked agammaglobulinemia model." J. Clin. Invest
Cirak, S., V. Arechavala—Gomeza, et al. (201 1). "Exon skipping and dystrophin restoration in patients with Duchenne muscular dystrophy after systemic phosphorodiamidate morpholino oligomer treatment: an open— label, phase 2, dose-escalation study." Lancet 378(9791): 595-605 0
Dunckley, M. G., ٠١ C. Eperon, et al. (1997). "Modulation of splicing in the
DMD gene by antisense oligoribonucleotides." Nucleosides & Nucleotides 1668-1665 :(9-7)16
Dunckley, M. G., M. Manoharan, et al. (1998). "Modification of splicing in the dystrophin gene in cultured Mdx muscle cells by antisense 5 .oligoribonucleotides.” Hum Mol Genet 7(7): 1083-90
Errington, S. J., C. J. Mann, et al. (2003). "Target selection for antisense oligonucleotide induced exon skipping in the dystrophin gene.” J Gene
Med 5(6): 518-27
Goemans, N. M., M. Tulinius, et al. (201 1). "Systemic Administration of 0 .PROQ51 in Duchenne's Muscular Dystrophy." N Engl J Med
Jearawiriyapaisarn, N., H. M. Moulton, et al. (2008). "Sustained
Dystrophin Expression Induced by Peptide—Conjugated Morpholino .Oligomers in the Muscles of mdx Mice." Mol Ther
Jearawiriyapaisarn, N., et al. (2010). "Long-term improvement in mdx 5 cardiomyopathy after therapy with peptide—Conjugated morpholino .oligomers." Cardiovascular Research 85: 444-453
Kinali, M., V. Arechavala—Gomeza, et al. (2009). "Local restoration of dystrophin expression with the morpholino oligomer AVI-4658 in
Duchenne muscular dystrophy: a single-blind, placebo-Controlled, dose- 20 .escalation, proof-of-Concept study.” Lancet Neurol 8(10): 918-28
Leblue, B., et al. (2008). "Cell penetrating peptide conjugates of steric .block oligonucleotides." Adv. Drug Deliv. Rev. 60: 517-529
Lu, Q. L., C. J. Mann, et al. (2003). "Functional amounts of dystrophin produced by skipping the mutated exon in the mdx dystrophic mouse." Nat .Med 9(8): 1009-14
Mann, C. J., K. Honeyman, et al. (2002). "Improved antisense oligonucleotide induced exon skipping in the mdx mouse model of 5 .muscular dystrophy." J Gene Med 4(6): 644-54
Marshall, N. B., S. K. Oda, et al. (2007). "Arginine-rich cell-penetrating peptides facilitate delivery of antisense oligomers into murine leukocytes and alter pre-mRNA splicing." Journal of Immunological Methods 325)1- 126-114 :)2 0
Matsuo, M., ٠١ Masumura, et al. (1991). "Exon skipping during splicing of dystrophin mRNA precursor due to an intraexon deletion in the dystrophin gene of Duchenne muscular dystrophy kobe." J Clin Invest 87(6): 2127- 31
McClory, G., et al. (2006). "Antisense oligonucleotide-induced exon 5 skipping restored dystrophin expression in vitro in a canine model of .DMD." Gene Therapy 13: 1373-1381
Monaco, A. P., C. J. Bertelson, et al. (1988). "An explanation for the phenotypic differences between patients bearing partial deletions of the .DMD locus." Genomics 2(1): 90-5 0
Moulton, H.M., (2007). "Cell-penetrating peptide-morpholino conjugates alter pre-mRNA splicing of DMD (Duchenne muscular dystrophy) and inhibit murine coronavirus replication in vivo." Biochem. Society Trans .828-826 :(4)35
Pramono, 2. A., Y. Takeshima, et al. (1996). "Induction of exon skipping of the dystrophin transcript in lymphoblastoid cells by transfecting an antisense oligodeoxynucleotide complementary to an exon recognition sequence.’ Biochem Biophys Res Commun 226(2): 445-9.
Sazani, P., R. Kole, et al. (2007). Splice switching oligomers for the TNF 5 superfamily receptors and their use in treatment of disease. PCT
WO2007058894, University of North Carolina
Sierakowska, H., M. J. Sambade, et al. (1996). "Repair of thalassemic human beta-globin mRNA in mammalian cells by antisense .oligonucleotides." Proc Natl Acad Sci ‏ل‎ S A 93(23): 12840-4 0
Summerton, J. and ‏.نا‎ Weller (1997). "Morpholino antisense oligomers: design, preparation, and properties." Antisense Nucleic Acid Drug Dev 95-187 :(3)7
Takeshima, Y., H. Nishio, et al. (1995). "Modulation of in vitro splicing of the upstream intron by modifying an intra—exon sequence which is deleted 15 from the dystrophin gene in dystrophin Kobe." J Clin Invest 95(2): 515- .20 van Deutekom, J. C., M. Bremmer—Bout, et al. (2001). "Antisense— induced exon skipping restores dystrophin expression in DMD patient .derived muscle cells." Hum Mol Genet 10(15): 1547-54 0 van Deutekom, J. C., A. A. Janson, et al. (2007). "Local dystrophin restoration with antisense oligonucleotide 040051. N Engl J Med 86-2677 :(26)357
Wilton, 5. D., A. M. Fall, et al. (2007). "Antisense oligonucleotide— induced exon skipping across the human dystrophin gene transcript." Mol
Ther 15(7): 1288-96
Wilton, S. D., F. Lloyd, et al. (1999). "Specific removal of the nonsense mutation from the mdx dystrophin mRNA using antisense 5 .oligonucleotides." Neuromuscul Disord 9(5): 330-8
Wu, B., H. M. Moulton, et al. (2008). "Effective rescue of dystrophin improves cardiac function in dystrophin—deficient mice by a modified .morpholino oligomer." Proc Natl Acad Sci U S A 105(39): 14814-9
Wu, B., et al. (2012). "Long-term rescue of dystrophin expression and 0 improvement in muscle pathology and function in dystrophic mdx mice by .peptide-Conjugated morpholino." The Am. J. Pathol. 181(2): 392-400
Wu, P., et al. (2007) "Cell-penetrating peptides as transporters for morpholino oligomers: effects of amino acid composition on intracellular .delivery and cytotoxicity." Nucleic Acids Research 35(15): 5182-5191 5
Yin, H., H. M. Moulton, et al. (2008). "Cell-penetrating peptide—
Conjugated antisense oligonucleotides restore systemic muscle and cardiac dystrophin expression and function." Hum Mol Genet 17(24): 18-3909
Yin, H., et al. (2011). "Pip5 transduction peptides direct high efficiency 20 oligonucleotide—mediated dystrophin exon skipping in heart and -phenotypic correction in mdx mice." Mol. Ther 19(7): 1295-1303
‎Youngblood, D., et al. (2006). "Stability of cell-penetrating peptide‏ ‎morpholino oligomer conjugates in human serum and in cells.” Am.
Chem.‏ ‎.Soc‏ ‏قائمة المتواليات متوالية 5" إلى 3 أو الطرف لا إلى الطرف ‎C‏ المتوالية رقم ‎CTCCAACATCAAGGAAGATGGCATTTCT | 9+66+)HS1A‏ |1 ‎AG (5‏ ‎GGCCAAACCTCGGCTTACCTGAAAT | mdx4225‏ بادئة ربط أمامية بشري ‎CCAGCCACTCAGCCAGTGAAG‏ ‏بادئة ربط عكسية لإكسون 52 بشري ‎CGATCCGTAATGATTGTTCTAGCC‏ ‏بادئة ربط أمامية 7 لإكسون 23 فأري ‎CACATCTTTGATGGTGTGAGG‏ ‏بادئة ربط عكسية لإكسون 23 فأري ‎CAACTTCAGCCATCCATTTCTG‏ ‏5 قائمة المتواليات
<110> SAREPTA THERAPEUTICS, INC. (hand) Fall ‏<120>مترافقات أوليجومرات تخطي الإكسون‎ <130> AVN-026PC <140> PCT/US2017/066222 <141> 2017-12-13 5 <150> US 62/436,182 <151> 2016-12-19 <150> US 62/443,476 <151> 2017-01-06 <150> US 62/479,173 0 <151> 2017-03-30 <150> US 62/562,080 <151> 2017-09-22 <160> 8 <170> Patentln version 3.5 15 <210> 1 <211> 30 <212> DNA ‏<213>المتوالية الاصطناعية‎
<220>
<223> Synthetic: H51A(+66+95)
<400> 1 ctccaacatc aaggaagatg gcatttctag 30 <210> 2 5
<211> 25
<212> DNA
<213>المتوالية الاصطناعية
<220> <223> Synthetic: mdx4225 10
<400> 2 ggccaaacct cggcttacct gaaat 25
<210> 3
<211> 6 <212> PRT 15
<213>المتوالية الاصطناعية
<220>
<223> Synthetic: R6
<400> 3
Arg Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 <210> 4 <211> 17 <212> PRT 5 ‏<213>المتوالية الاصطناعية‎ <220> <223> Synthetic: R6-G <400> 4
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Gly 0 1 5 <210> 5 <211> 21 <212> DNA 15 <213>المتوالية الاصطناعية >220< ‎Synthetic: Human exon 49 binding forward primer‏ >223< >400< ‎ccagccactc agccagtgaa g 21‏
<210> 6 <211> 4 <212> DNA ‏<213>المتوالية الاصطناعية‎ <220> 5 <223> Synthetic: Human exon 52 binding reverse primer <400> 6 cgatccgtaa tgattgttct agcc 24 <210> 17 <211> 21 10 <212> DNA ‏<213>المتوالية الاصطناعية‎ <220> <223> Synthetic: Mouse exon 23 binding forward primer <400> 7 15 cacatctttg atggtgtgag g 21 <210> 8 <211> 22 <212> DNA
‏<213>المتوالية الاصطناعية‎ <220> <223> Synthetic: Mouse exon 23 binding reverse primer <400> 8 caacttcagc catccatttc tg 22 5

Claims (3)

  1. عناصر الحماية 1- متقارن قليل الوحدات/أوليجومر مضاد لاتجاه النسخ له الصيغة ‎(IV)‏ ‏سر ‎QW‏ ‎oy oh wo‏ | بكرا 4 ‎o‏ ‎Rott As Tere has‏ ‎Rog hore Rog Roar‏ ‎oa omg mar Ae‏ لمعك "رم م نك ا ارات اللي ‎eae‏ يفي هي
    ‎LET‏ ليت عشي موي اتجريةة ‎he‏ جم
    ‎Teg est‏ عي
    ‎Foie Be Tuo
    ‏لم الله الله ‎(IV)‏ ‏أو ملح مقبول صيدلانيًا منه.
    ‏5 ‏2- المتقارن قليل الوحدات/أوليجومر المضاد لاتجاه النسخ ‎Uy‏ لعنصر الحماية 1؛ في صورة ملح مقبول صيدلانيًا. 3- المتقارن قليل الوحدات/أوليجومر المضاد لاتجاه النسخ ‎Why‏ لعنصر الحماية 2 في صورة ملح 0 مقبول صيدلانيًا له الصيغة (8/ا):
    OO NON on 0 Break A Break B Break C N 3 NH ~ 0 ~ A NGO oe ‏“يا‎ reer rh. LX
    [5] ry ‏ل م‎ Cr T J 1 wi ‏مد‎ These ius | ‏بشنت‎ ‎Nr TR TRE Te NH; “xo ‏لاحم‎ “vo oe Sef =N ‏م‎ ' She ‏ال«‎ RLU TLL Bo 39 No To Tot od wooo Tulse ‏“جلي‎ “Ao ٠ 6HCI err CY Le Cr T ‏مسال‎ 0" arb ‏الاح‎ NH Sie 2 0 Shy FN, ’ 2.
  2. 2 I rie xr Le 0 rp I 1 ‏همل الل ا ام الب‎ BTR ‏لاحم ما‎ NH, ‏يلالا .0 0 ا‎ Id on Ne tm ‏ميب‎ ‎| Ores Xr 4 Cr T mL by
    0. uN ON 1 Ory Or (> xy 1 ‏ر‎ ‏ولب‎ =N_ NH, “Niro ‏م احم‎ “No 7° or ‏يعي‎ Te “by ‏وس ملم‎ 1 ° NH, “rh . ox I erty ! Cr ‏ب‎ Cr 1 Br A Break B Break 0 ‏(/ا).‎ ‏لعنصر الحماية 1 أو ملح مقبول‎ Gg ‏المتقارن قليل الوحدات/أوليجومر المضاد لاتجاه النسخ‎ -4 . ‏على مادة حاملة مقبولة صيد لانيًا‎ Wal ‏صيد لانيًا منه؛ يشتمل‎ 5 ‏المتقارن قليل الوحدات/أوليجومر المضاد لاتجاه النسخ وفقًا لعنصر الحماية 2 في صورة ملح‎ -5 ‏يشتمل أيضًا على مادة حاملة مقبولة صيدلانيًا.‎ (GV ana ‏مقبول‎ ‏المتقارن قليل الوحدات/أوليجومر المضاد لاتجاه النسخ وفقًا لعنصر الحماية 3 في صورة ملح‎ -6 0 ‏مقبول صيدلانيًا له الصيغة (8//ا)؛ يشتمل أيضًا على مادة حاملة مقبولة صيدلانيًا.‎
    ‎A | £5‏ ‎mRNA‏ ديستروفين ‎gual‏ عادي أ) ‎mRNA‏ ديستروفين اولي عادي ‎TT‏ اتيتنموب ‎ey‏ يم م لم يي م مام ‎Yor n 3‏ م ‎Ch‏ ) 6 40ج | ‎av tay | ay} oT he et | EA‏ | ا ةا ‎EY‏ % ناد بالالالالا ‎Cy‏ ! بالالالا
    ديستروفين غير مستقر غير وظيفي. ‎al) ila {ip‏ 0 يعمل على تمزيق إطان القراءة بسي ميم و ايديم سم بم :ْ ‎ay n‏ 1 كم ملحن د لذي امم ‎le | Yay lav 0 a‏ لدي ‎WEY)‏ ‏الا ‎fied fm bod EFM i i Rennie‏ سا ‎eed‏
    ‎vv | 5 er‏ ديستروفين محذوف داخليًا ج) تخطي الإكسون 81 يعمل على استعادة إطار ‎Sel A‏ مح ا اح ب 7 - ‎i : : ETT XK | ee ee‏ م مج مج ‎or ln‏ ل ‎mel \ | 0 | ne‏ ا ل 4 | ‎MEY Eh‏
    بالنلالاننا 7 الا يذ الال
    ال ond
    المصد: متوافق مع .2012 ‎Kole‏ i F, ‏حداف ل‎ ¥ ١ 3 ‏دس‎ ‎: 9 1 A Tao #8 3 ew ins So 4 PI a NER ee ‏ااا الور ا ا عد‎ : ‏ا 1 : ا‎ ‏ب ليما اي مي 5“ & ي الي‎ PP MOET pry 4 ‏د ال‎ pres Bia : 4 aE 3 : ‏ناد يبي وبي‎ dap : ‏ا‎ pe momma #8 ‏ا ا‎ ia
    3 o. LL | ay ‏وجي‎ ‎5 SER 1 ‏ا‎ ne EEA i + LL 0 0 ‏م‎ oe 7 ‏ا شه‎ EES Ra 8 ‏ل ا ا‎ Pon 0 ‏ا انها‎ ٍ - 1 ‏ا ا‎ aaa deo " 4 Sho IE SAN 3 Sa Sy WN EB 1 ‏جر ايد‎ 7 a Lo ‏ال‎ hd LE ee 1 Lada aia - CL i I peel = ‏ل ا ا تسوب ا‎ = Ye esd ‏اله‎ LL hy ee a= Toh aa Pa . roa | ‏م‎ ‎= i HOH TRIE HE HI ‏ا السو ا ل لقا اا ا‎ a : ‏يي‎ 4 Boni Fes oui SRE ROE ‏ل ل‎ as a ‏اا‎ aE B= A444 = ‏اا‎ ae 3 ol ‏اليا ابا‎ ‏باس اا ا ا الل اتلد‎ : ‏ال‎ a A ER wy . ‏ا 0 ا‎ ‏ميكرق مولار‎ 56 Mae ‏؟ميكرو‎ . Yaa ‏أميكرو‎ + Vas ‏ميكرو‎ Mage goad 0 Ne وركيم١‎ Y 9 0 ‏ال‎ ‎SE 4 ‏المتوسط‎ fe { & ‏ثاب 2 لبا‎ ‏با ا‎ * : 2 7 2 ّ 8 : aly! ‏ما ب‎ ge Seo ‏ض‎ 1 ‏ها اله‎ ١ : : ) ie 1 . . : } ; Call atoll ! 33 94) ‏لمعياري‎ bo pina! | : : { a 38 5 } = 5 3 : i ‏]لخم نهم‎ © : i 1 of ‏"م ا 0 1 “دي‎ : - | 0 : 2 0 i gy EL x bouts, Xref 3 i : : : :: oo y + FE MO tx AAO : VE YT ‏؛‎ ١ 52١ PMO PPMO. Se YY At PMD | PPVIO 3 £ : 3 5 * 3 o& ® A TEER 1 * LE phe ‏ل ا ا ا‎ ‏ا‎ 1 Ld +. 2 I. iid shen Snes dn Uli Sie EEE Shee ‏الست ل‎ SE ‏ل‎ 0 Ei ‏ل‎ mR FENN EEE ‏ا‎ ER ENE ER ERR SR ‏ا‎ EER SR SERED FR RE Ee ea SEER Ee Sef Se EE SRT Re smi ea ‏ل و ل ل ا ا‎ ta sg ‏ا‎ 0 Nay ‏ا ا الم ل ل ا ل ل‎ 0 a TLE ARN TE ‏ا‎ NR ‏ال ا ا ل ال ا ا‎ SINR ‏ا‎ EEN EAN SEAR CREEL I ESR IEEE ‏إن‎ SER ‏ل‎ SEE SERA SE IE Cop sn a 0 ‏اا ل‎ Sa Bed CEERI UNE TN SERIO REE ‏د و ل‎ PE ‏ا‎ FER SE RR I RE ‏ل ا‎ a 0 : 2 ‏ا‎ Sm Tn IS Ba it ‏ا‎ ERR ‏ا هد‎ gS Re 0 ‏ا‎ AAT SEER SEN 5 ‏ل‎ ASE CR ER RR ER Baha pa 8 : 5 ‏ا‎ SER La TEEN 3 ‏سس‎ ‏ا ال ا‎ a ee rr ARE RT nc Re SRR EE ON Sen Se Yay 0 foe a ST DOA A SRR SS Bs A BARR Ra IR TEIN CAE EMR ‏ا‎ CORRE ee Ei ‏لا‎ SO SER Ee 0 ‏ا‎ ‏ا ل ا ا ل ا‎ EEE RRS ‏ل ا‎ he Ee Cn TERRE ‏ا ال‎ a ‏ا م ا ا ا‎ EEE = SNE fae a ‏ل 0 ا الي ل ا الا ا‎ ‏ا ال ل ل ا اا لا ا ا‎ SU ‏ا‎ CEN RAN ‏ا ار‎ SEER ‏ا الت ا ل‎ SER SRNR CATERERS SE eR RET CEE Seam e ‏ل‎ REET EEN ee rE ERR ha EEN SEER ‏د‎ i SENSE Ma Sl SN nL ERAN SEEN EEE NRA SR NN 3 ThE RES a a Sy TERE SR SRE ‏ت ا‎ : ‏ل 0 ا‎ a ERE ‏ال ا ا اا يي جا ع ا ل ل ا‎ ‏ل ل‎ ّ 0 3 . UR an ee a CaN am SER ed EA Ee ‏ا‎ RR nL ‏ا‎ SR EN NA 0 ar NR SN aE Ee Thane on CELE es Bd ‏ا‎ a a ‏ا‎ = Cen pei SER SC Ee EEE Soe EE SRL a a Go ‏ا م ا ل ل ا‎ ST 1 ‏اا ل ا ل ا‎ CoRR NR A RR ‏ا‎ ‎RN ‏ل‎ SEE EE SEE ‏ا ا‎ 7 RR I RE SERRE SENN CI RI Ry Sm Sn I ‏ا شا‎ a NA SSRN RN CIR SL Saw a SR SR TR SERN SEI RR EEE 0 SESE THR ae Ee a Ei en Sai ERE aE Bee TRI Loa a 0 ‏اتا ااا‎ EE Som RRR ‏م‎ LE I Dena Een a CA a a 5 ‏م د‎ SRR ‏ل ا ا‎ nh ‏ل ل ا ا 0 ا ا ا ا ل‎ CIE ‏يي الح ال ا‎ SERRE bi SRN a A A RN Soria SEAR EE as CEC SERN SERA A ERS A a SE ‏ا‎ IN 2 AE NE ER ‏ال اا الا ات ااا ا‎ SRR ‏ا ا‎ a 0 : 8 ‏ا ل ا ا ل‎ 0 TT ‏ا‎ RRR ERR ER RR ‏ل‎ HE Sa A 8 i CRN ‏ال 0 ا ل ال‎ NERS ER NE ‏ا‎ RINNE ees Ye EN ‏الم ا ا الا ا‎ SRA TTR YT iw NE ..._ = Bi tig: SEE DR GR ‏دا ا ال ا‎ SHERRI Eh RE EER Ee 5 ‏ا ل ا ا ا ل ل‎ EIN DN Sa a Slane ‏ل‎ a ‏ال اما ااي ا ا اال ا‎ REAR RR ‏ل ا ال ل‎ EN EA EE ea CNET SERENE : EEN ERR TE RG EE A A A Shey SAR RR 5 ‏ا ا ل ا ا ا ا ا ا‎ ANN TR RI RT A SEE EON RARER RE SSE Ee SE RR PoE CrEiin aE a a RAN SEI RE ‏امم‎ RT ‏ا لي ال اا ا‎ SR Ree AR RB Sai Cela REE TEN ‏ل‎ Sa ‏ال ال ا ا ا اا ا‎ a ‏ل ل‎ Ci ‏ا‎ 0 EER 0 ‏ا ل ان‎ ; SEERA LE Lp CEE EE EERE ER Sn AR AEE SERN RN ‏ا ب‎ ‏ل‎ ed ‏يس 1 ا ل‎ a SRE CoE RR eS LRT 3 SERRE ‏ال لي ل ا ا ل ال ا‎ 0 TR ‏ل‎ ST INET EL id A sr Sy Ee ‏ا ل ل ل‎ SRNR : 2 ٍ A ed Eira ann Re i A SRE 0 ‏ا تا ل ا ا‎ ae ‏ا و ا ا‎ 2 ‏ل ا ب‎ eR ‏ا اا 0 ا ا‎ AY RR 1 NR ‏الا ل‎ AUER SEMEL EERE ‏ا ات ال ا‎ A SS ‏ال ل ا لي م ال ل ل‎ A SE Ue NR Re ERE ROS ‏ا ال ا ا امش ا ا ا ال‎ RE a ‏ال ل اوتاه ا ل ل ا‎ I ‏ا‎ A Soma I a a CoRR ‏ا اا‎ ER ‏ا‎ ER NE GE ER SENHA ‏ل‎ Na ‏ا‎ 0 ER rE He 3 ‏اا‎ Ln ‏ا ا ا‎ a A IA Se EERE pe REE NI snd ‏ل ا ا ل‎ A ‏شا ل 0 ا ام ا‎ TR ‏اد‎ SIRI ‏ال ا ال ا حي ا ال‎ ‏ا‎ A RE ‏ا ا ل ا‎ ER ‏ا ا ا‎ A ‏ا‎ ER ae 0 ‏ا ل ا الا تلا ااا ل ل ا م ال ا الج‎ Ly RR Tn ‏ل‎ hE A i ‏ا ل‎ iE A ‏ا‎ SER 1 ‏ا‎ 0 ‏ما ل ا الا‎ Ra a RRS 1 ‏ا‎ ‏ا أ ا‎ Eri Phra a TRAN ‏ا‎ ty andes SAAR oN SRY TE ‏ا‎ ERR EI ER BR Cat ‏ات ا‎ NN CERN EAR EE EIR 5 MER Noe Seale ‏ا‎ ERE CR on DT ERS 0 SE a TY ET SE Epa EEE CEE ee eR a SHEER Naa a CERES SEER Srna SER: TA nN A RE PECAN pose NESE re ‏ل‎ A SI CR Sa Ins a an SRR asim o si aa i AER I BR 0 ERR TEA loEERI EE SEER RR SONNE RES EER SEER ‏ا ا ا ل ا ا اد ل‎ San He ‏ا‎ SUE Ree A Renae EO ‏ل ل ا ا‎ a. ‏ال ا‎ EARNER SRE EE a SRR 0 I rT TR NRE A NA RE ‏ل ا ا‎ ATR ‏اا ل ا ا‎ IR RR ER FESR RE RR SEES I FRET ee A ‏ل‎ RR A RE ‏ل‎ ‏ا ا ال‎ i SERRE URNA SANNTERNRE I EE Re RRR A SL A SRN 0 A 0 i ea RE ey CRANES SERRE = TERRI ‏لمي‎ an na . Nee ‏ل ا أ الا‎ CRA I REET ‏آ: 3 5 ا‎ ‏ا‎ SEE
    A r=3 . a ‏هد ادي‎ 3 i { : ‏لمتحنى المعياري ين‎ ' {ols Y% } ‏ل المتحلى المغياري‎ ٍ : ّ PR ‏عل ا # ماد‎ 3 = 3 3 0 © ‏الث‎ i : Lin FOF i “ Poa 0 ; PB 3 0 ( fA 0 1 / ‏ل‎ ْ: Ph 8 : : : ‏ل‎ i a. 275 ‏بل‎ Rs LR 3 - 3 1 ‏ل 4 الى‎ a x : L : a - 3 ¥ & i ) : ‏بن‎ ‎2 8 0 5 8 : o 0 A 8 * i = t y » ‏ل ا‎ ‏ا‎ i oe ‏ال 2 ايلا‎ 3 Pp 2 i 3 : LL hn CREE
    ‏ض . | ؛ ذ‎ ْ P 0 . SEE I PE 1: 0 4 0 : > = RR ‏ل‎ a EE 0 SE TREE ‏ال اا‎ ' | | " 8 i ENE ee SERRA ERREER SEER EA Srna 1 : Xo 3 rn CEs SEE EERE EEE rae ed RE Soman : 1 E % ‏ا‎ 3 esi Ete TT HIE mR Ee a RR : ¥ ! Lr 0 0 ‏ا ا‎ : ٍ! 8 ‏ا‎ 0 SRR Rai CAR Se ERE ETS J AE De KSA ana) ‏ااا‎ 0 TANCE Ce TR EER iE STINE STR NaN EER 0 Ce SER may HEEL SERA CERN SANE A ER wl ‏ا اا‎ AR ‏ل جا‎ SEAR hE ‏ا 0 ا ال ا ب ل اا‎ a ‏ع ا‎ ST SE EE EE RR FA EERE RE RNR LEER Gaal ho Rn ati ‏ل ا‎ ‏ا‎ TORRE ASE ‏امي ا ا ا‎ A Cr Saar LR TEER BN a ER OYA nr RA TENE SR 0 SEPT RN rd AI SN TR EE Em RUA SEAR NEY ST RA mE SiR : : EERE RA So EARL EN FATA 0 ES ERE SE CEERI EAE ON Zoom ‏ا‎ 0 RN EON 3 Be Ee ENE ON Saat Loonie Slain am ‏ا ال‎ RE RE ‏ا ل‎ SRR RR Toa SEE RE SRTEEENL ES TINE SE ERE CRE 1 ‏ل‎ 7 SC SEER ERE 20 Cin conta En SE PREY OER TET SETS SR SEER ‏الخ‎ BS oY = BS enn SRE RR Sar aN Lilie ‏ا‎ ee oa hig bt Bas = ‏ا‎ 5 ae CSE gE RR ON Sone RE SERRE Hh ‏و‎ bo FN SEERA SEER SECA EE SEEN ECON Serle ‏ا‎ 0 ‏ال ا‎ UE Se FR Lo Rea BERN oS ERR ie Lee SR nv Co ERR ERR AR 0 0 ‏ا‎ ARNE 1 ‏ل ل ا‎ 0 TR CEASE a RAAT AE RRR hE EER EE a RRR. EN RRR RR ene SEN Nav 0 ‏ا ا ا ا ال‎ 0 Sm 0 NEES SNR RE ‏لو‎ £3 A EEE 1 TT SE CREE 2 AR RE CARERS Ra SEE : : a Fog 0 ‏ال ا 0 ل‎ A RRR a a Sn as SRE i ; a x SNE TE I I Ny SE RR RR HER Nie Na Nh aa He os i RE pa Sein pre La SRNR ‏الح‎ A Se we SERENE 2 ‏ا ل الا لاا‎ ns SR a Ean a ‏اا‎ ‎Real ian EEE Rt en aia Ea an IEE a CSI Hr RRR he ‏اتا اا‎ ERR We hE Chenin SEE IRE ‏ل ا‎ 0 nd Naas seis ed Cwm SEER SEER ‏ل‎ ‎SE SRE SER EERE EER i Sanaa Chm an ‏ا اا‎ Ease RR 1 St ne SEER 2 ‏للا ل ا‎ LE Se 8 wr SEEN Cane ‏ل ل‎ SRR ERR SER SNR CRITE Re SEER CON Se aa Tn 4 Gan Ce WEEE TERRY ann ENN ET Te SEERA AEN : ‏ل ا اا الي‎ Sethe... SR da IE SEERA SA EER = SEE ARNE JERR ‏ا‎ HERE A LR RS SE RR STR RTE Iran SR Ce RL are ERAN TARR RR TN ER nA 1 ‏ا ا ا‎ SS RE oN RRR ROR HOI I ‏ال‎ ‏ل ل ل ل ا ا‎ SE BN Ne SONNET Ee a i RR a AR Cran EER OR ry AAS TR TE ‏ب‎ Rr EMRE a ‏ا‎ Lo ‏ل 0 ا‎ 0 RAR) RR LR ‏ا‎ SBS 0 NR RR ‏الا ا‎ A 1 RR ARR Sn IER I AEN ‏ا‎ RN 5 ‏ا‎ Be TRE RARE ‏بتر ب المي ات ا اا‎ AEE NE NR 0 ‏ل‎ REA 1 ‏ا ال‎ NR 58 RAN A RA SRI SERENA ‏ااا‎ a 0 SUNN AR Ta SERRA re NA SET ‏ا ا‎ 8 0 A AR ast RII En ‏الزن الا ا ري‎ ‏ا‎ Ae CER CR SER ‏ا‎ SNE coh SERN ERR NEE Sodan EE HE Rie Na RRR aa A NEN ae So EE EEE ana Rs Pa SERA ENR ER 0 0 CAR RRO A ERR EER A Be SER Eagan Eo Ca a ‏ب‎ ‎1 SR Se The aE SN EA ERR RE pe TRE 1 ‏ا‎ SE a a Coa LL Oo a EN SEAT SERRATE wd 8 Re Tn CER SEE RRL Als : RE RR 0 ‏ا‎ TERRE 0 CA ‏ال‎ EI ARRAY ‏ال ااا‎ Ea 3 ‏ا‎ _ RA NNR NER Patil SEER Sma nd Nagas SRE a a fo Th ae SUES EE Em ERE Na ee CEEERR AY ‏لا‎ ee FE dh Hi En Re rm LT CER ERI SEERA jo NRE Nd Sha RE ‏ب ا ب‎ 0 8 0 ARIE RT : ‏ال ل م ا ا‎ RI SEE BE a NHI Soma Te ICC PO ‏الت‎ ‏ا ا‎ : Ce GEER ER IL Si ‏اا‎ ee EEE SE Se CEE CERNE Ee 8 ‏ا ا ل ا رحس ل ا‎ Tl EAN a Ss EE A a Be SR REA EER in SERRE SR LE Se HE AR YR ee Sn SARS RR LT Seen WE ER SEAN SEN TE SRR . ERE ER SEER Li RIT RA oN SRN ER RO SE WIRE SI ho ‏ل‎ Saad 8 ‏ا اي ل‎ 0 ‏ل ا‎ aa 0 0 ‏ا 0 ا ل‎ ER NI Ee TRAGER EE CoE aE ERAT SEE ni Cie rrEEN eh > ‏ا‎ 0 cod ae Sha . Sa : on : Coan GEER ERG ‏ل ل تا 0 ا 3 ل ل‎ sam EER
    Sh . E ‏ا‎ aR asa ‏وين‎ 0... CBR ey an Se REA SEER LEE a CRANE CUT Be A RAR Sa aE 0 SEERA RR CURRAN ‏ا‎ RRA TY BRR IER RR RT Ba 4 ESR Na ny Le ty Ca PAN RA RE A Sn CS Rt RISO YE ‏ال‎ a\ ‏ا‎ er a RR CN Se ER SEERA Na ANSE SC FTE rR NE A ‏ال ارا الما‎ Eh ‏ال‎ i aa Se NR SRI RT CREE pn Sra LOAN A A: aN a SEN Loa i. ‏ا ا اي‎ EE 3 REC ‏الما ا‎ FEN EN AES SEEN ‏ا ل‎ ‏ا‎ 0 RE CARE DR BRE Ea ARUN AA Sl TTR a pill y Sa SE Ea TERE NERC CNN ERNE a a Fy Dalia ‏ا ا - - ل‎ SEA = = CTR ‏ل ا‎ RY 00 RRR 0 1 Minny RRS ‏ل ا ا ا 0 ل 0 ل ا‎ RUSE RRR SA RR ATA ‏ا‎ 8 ‏ا 0 ا ل ب ع‎ 0 SRI Ne BE ٠٠٠.٠٠٠. ‏عا‎ SRR 0 Ra Sa a oe 2 ‏ا‎ EOE NR A ER A RN rR PORN RR Sa REE enti SR ERE 0 ‏ااا ا‎ ‏ل 0 اا ا 2 ا كي‎ 0 ‏ل ا ال ا‎ SR 5 ‏ا‎ RR UR Sr Sn Lm SEER SE ERRN = Lo 0 ‏اا ا ل ا‎ EN Bee ERR ERR ER AREAL : a aa RN SE ERNE NRE pean SRE CRRA TE Aad RRR ANN 0 SLE EER A RNR ‏ا ا ا‎ a RL 0 Ra a Ties we SE SER RR 1 EE ANNES ANNEEY SCREEN AREER SERN EE Shodan a SERRE SEE PR Vigra a SLE TEATS ‏ا‎
    * ٍ Poa E i" ‏قا‎ 2 od ( 5 ‏ل‎ ‎0 ‏ب‎ *® \ ‏بقع ويسترن‎ RT-PCR 4 * 1 A Roky i 7 j i 3 oA 3 =p q i ¥ ® 5 T * ‏دا‎ NYE 3 3 soon ES EY y 4 NN =p 5 Va ‏مسا‎ ‎Perri 1 13 Food we RE ) 0 Wh ‏مزه« تحن‎ ~ ¥ * 4 o AN 3 ‏وا‎ Te a 1 4 : ML ‏لا‎ 4 ugh + 0-0 1 . > 1 Pv rorie=p ! ‏من + ا = عت ان‎ ‏م ~ ؟‎ vel 7 ‏اش‎ ‎4 ™N 1 x ER a 1 3 4 & Tig Lag ; > ‏هد‎ EN 4 ni ne = Fy 4 ‏بي 8 ا ا سا الماش ته اليد‎ 4 Tes = ein, ‏ا‎ ‎3 ‏ساقي الس واس 6سا‎ & ep ppp Rs Yue fe 2s Ne Ye Aw ‏بة‎ ro be Xa Fe Es ‏ءا بخ ب‎ Ae + Jad ‏بعد الحثن يوما بعد‎ Lay 44-4225566 ‏خوط‎ ‎4-4225 00
    & B . 3
    En 1 5 i gi)
    iV es 5 3 J 8
    ب 8 9 ‎f‏ ‎i Li‏ اع ‎ro‏ يأم ب بل هأ
    ‎gg 1‏ اا + ‎x 3 i‏ ين ‎LL‏ . ل : . ‎ne ; : aN 1 5 : }‏ ; 3 ا : ٍ ; , المعياري (96 وزن) ٍ المنحل, المعيارى )35% ‎A i ’ TRE a ou hei : i :‏ له ‎ad‏ يي ‎add 8 Fo‏ : 3 3 = 7 < ‎a a :‏ ¥ ا ‎Co Co $ © 2: ar 3 2 5 ¥ Fr + 0 : 3 a‏ ‎ PMIO PPMD‏ .| ؛ + ‎TY 5 ١ ٠ PMO PEMD YY ١١‏ ‎SER thi Ln ns wr, He Ll Lo La TR Sn al‏ ا ‎LL . RENE SERN‏ ‎ne‏ ا ل ل ل ا ا ل ل ا ل ‎DS‏ ا ا ا ا ا ‎ST‏ لا لا الا لش ا لاي ا يا ‎II en‏ ل ا ا ل ا اا ا ا اا ل ا ا اي ‎SEE‏ ال ل رز ‎RL‏ ا ال ل 8 الجتتا ا ال ا ام ا :1 م لي ا ل ل ا اا ال ليا ا ااا ا حا الي لي ااا ا ‎FR IR‏ ل 0 ال ل ا ل ا ا ال ا ا تا ل يا ال ا ‎Pi‏ ل ال الا ال ل م ل ا ا ا ا ال ا ال ا ا ل ل ا ل ل ل ا ا 0 ‎SRE ca‏ ل ا ل ل 3 ٍ ا ل ا ا ‎RT‏ اا الا ا : ا ا ا ا ل ا ال ا اا اش ا ‎SE‏ الا ع ال ان ‎SEE Be oN Wee Rae La R 1 BRR 7‏ ا : : 8 ‎FRA: 3 x SE SRE ha any je a Son on 0 5 5 i‏ - 3 ل ا لا عا ما ا و ل ‎a 34 hi Be RO‏ ل ال ل ا ا الا ا ل ا ‎Rea‏ ال اا ل ‎IE Le EO Bare‏ ا ا ال لا ا ا ‎AR A Ue ER nn I i I INN‏ ل ا ا ل ا ل ا مي ل ب تق وا ا ‎EE I a‏ ل ‎I‏ ل ا ل الم ا ا ا ا ‎A‏ ‎Re i Li a‏ ا ل ‎Le BRR‏ ل ‎a‏ ا ا ا ل ا ‎BT‏ ا ل ا ا ا ا ا ا ال ل اجا الت ا ا ا وت ا اكه ال لا ااا اا لجا الا ل اا ل الاي ا ال ا ات ال يات تت ميت المي م ل ‎tin, hed‏ ل ا ا ا ا و ا ات ‎Se‏ ا ا | ‎Ei‏ ا ا ات ا الات ل ااا ل ات ‎IN‏ ل ا ا ا ‎a tl‏ ا اا ا ا ا ا اا ا ا ا ا الا ا ‎TS ee ne i‏ ل ل ل ل ل ل ل ل ‎a TR RT I Re a A Sr ee‏ ‎SET SER ER dah ER CER DEER RR EE SNR DR TE I SS EN SO‏ ‎a eh ey CONSE EE‏ ا ‎TE‏ ‎en Tn aT i Nee MU Re‏ ا ‎a SE‏ ل ‎NN‏ ل ‎RR PE En DE STE TR EER EU RR EE RE‏ ا ا ا ل ل ل 3 ‎pe a‏ ا الي ‎ERR‏ ‏1 ل : 3 ا ‎aR TT‏ ا ‎ROU‏ ‏م ‎ES 3 RVR i NR Re EE A ES‏ ل ‎NR RR NE PA SR SR ne SR I RN RR‏ ا ‎RY‏ ا ا لا ا ا ا ال ا ل ا ل ‎NUE oy Earnie‏ ‎NI en De a eR 1 i BR SR ER‏ ل ‎eC a RR‏ ل ل ل ل ‎A‏ ‎RR ST TA Sena A ee ne ne‏ لت ات = ‎Sn ST I Rn PERE REA nn Dn a‏ ال ‎RT‏ اا الت ا ‎a I IR RN‏ ا ‎SR SE‏ لا ا ا ‎a SR‏ الا اا لاا ‎A‏ تش اتا الا الت ‎RRR RRR RT SR‏ ل ‎i 8 i i :‏ 3 اا لوي ا الال ‎Se Le hn 0 0 Cn‏ ا ‎RE Ln he CT sana pa RARE OR Te oa LE‏ ‎nn‏ ا ا ا ا ال اا اا ا ل اللا اا اااي ا اس ا ا ‎SARI‏ ا ل ‎nS‏ ‏ا ا ‎en‏ ا ا ا اا زا ا ا ا لس ا ا لاا ا ‎ie‏ ل ل ل ل ا اللا ا ل ل ا ل ا ا لج ل ا ا ا ا ا الت ا الا اا الات ا ا اام ا ااا ل ا ال ا اا ‎A A EE EY‏ ا ل ال ل ا ا ا ‎I‏ ل ا ‎A he‏ ل ا ‎I‏ ل ل ل ا ل ات ا ا ا ‎UL Re SRR Sa‏ ل ا ل ل ل ل ‎EG RR‏ الا ال ا ا ‎RRR NEA NR RE A‏ ا ااا ال ‎SERRE ANA en A Nok‏ ل ‎RAR‏ 1 ا ار ا أن ل الم شإ أ ‎nC Re aN BE: J‏ ا ل ا ا من ‎SIR‏ ‎ER‏ ا ا ‎DERN‏ ا ا لل ا ات ا ال ‎A‏ ا ‎RN‏ ‏لخ ‎a aN mS‏ ا ل ‎a‏ ا ل ا ا ا لاا ال ان ا ا ا ‎RA AR‏ ا ‎A RW‏ ا ا ا ‎SE‏ ‏ا ‎A RR‏ ل ل ل ا و ل ا ا ا ال ل ‎EE Se BE A‏ ل ‎a‏ ل ل
    = 0: 2 # + + ‏الا‎ 4 . - ‘ : it bok i : 1 ‎i 8 5 3 aE 3 oo i : ¢ i‏ _ $$ الاج : : : ٍ ا 1 ‎J‏ : : © 1 3 3 1 3+ ‎bl ne 3 i E :‏ الال : : : م 0 ‎CoE‏ ‎i‏ : : احج : 1 : 3 :#8 1 ا 3 را ‎Rats‏ ‎A w B } 1% 0 : 3 § NO :‏ £ 4 أ ‎i‏ 0 تخ 5 1 1 ‎A * : i 8 8 i‏ £ \ 3 : 3 ‎“a a 3 ph ‏ا ا ا ا باج اماي اا‎ hE ‏ا 0 ا ال جه ا ا ل ا ا ا ا ا رايا تا حا‎ I EN Sire +: ‏ا ا د كت جه ا ا زر د الاو مد لكايه اج تا م د اط ار ل‎ ny ‏ل‎ ‏ع ا ل ا ال لات‎ ER ‏ل‎ i a an i a en A Nn HT Lp Re ee ney EE a a a a SR EA AR A ey TEN Ie ‏ل ل ل ا الما ا‎ a a J RA ‏ا‎ ‎a Ea a EE RE IEE Re Er ay A ‏ل‎ BI i a ‏ا‎ i LL I Th nd a A a SE EI So a i a oe dr a eb ey ‏ل ل‎ NR a Tete ant SRE Te ea aa ‏ا ا ا‎ A ‏ل امات اا ا الام ولحاي يه جع الات شو جه ل ا لوو لاحي ريد لالم م ده‎ ERR ‏ا‎ ‏ل‎ i a Re ‏ا‎ 2 ‏م ل‎ ER ES a TE es ‏ال لت ا‎ TE RE Pe Sr ER a a EA SER as I I SERN CIE ‏ل ل‎ A I IYI LE ‏ل‎ EU a nd SESE ‏ل ا ل ا الت ا ا ا‎ a EEE I TT a a a Ee SEENTIE RC SR i ‏ع ل ل‎ To i i a a ‏التي ال‎ Rn ‏ل ل‎ i 8 a 7 ‏تي لا اع ات اميا ا جا م و سج د ا لا ا الت ا ال ا الا‎ RE Enna Td RA ‏ا ا ل ا ل ل ا ا ل م‎ 3 a RE Sa ‏ا ا ل‎ ee Er RE a RRS i de ST EE a EE ‏ل‎ ‎: BREE: ARMED Po a RE I ‏ل‎ EE Fe ER 8 0 ‏ل‎ TE If 3 ‏ا ا‎ XR RR FS CR TANI SY ny ‏ل ا‎ EE Hn a ERR a RIN ‏ل‎ I SR ne Be nn Sere EE I ‏ات‎ albania a ee ‏ا‎ ER AE ‏مي ا ا ا ا ا ا‎ a ‏الت‎ ‏ل أ لت امت ل‎ Us SERIE Le ‏ل ل‎ a A EA a a CARR Re RR Se FEI Sg NS ee ae a RETIN ‏ا‎ NN ‏ال‎ a RY dn a oe ee EE NR ae a ‏ل ا‎ a i I ON Sn a A a NN A rr a ERR a ee a ‏ا‎ RR TI ‏ا ا‎ eH ‏ا تاي اك ا‎ 0 ‏ا ا تا ل تالاه دجي ا جه ل ل‎ nT ‏ا ل ا اي جا مجح احج حا م‎ 0 SEAR ‏ا ل ا ل المت ل د ا‎ ER wn ger SERRE a a ‏ا ل ل ا الا جا ا‎ So in i a ‏هخ‎ ‏ا ل ل‎ RS ‏ا ا ل ال جل ل‎ ‏ا ل ا الس ا تاد ا ا‎ IR ‏م ل ل ل ا‎ ‏ل‎ rm a ERE Ee eR ee na ST I ‏ل ل ل‎ Ll Ia ‏ال ا ل‎ ‏ا ا ا ا ا ل ا ل اج تج أي جا ام الا ااا‎ SEEN 1 : 3 ir nr AS A te Ee ‎A I ‏را اما‎ ST LT Ln Lr ee se pe EE 0 ‏ل‎ eee ‏ل‎ Re ns ‏ل‎ a iy I RS sr en I ra es ey I nn on Pies ER Re eR EE a es ol ET ay SEN ‏الالح ل ا امتح ل ا م وجا لمجا ل ا ا مدت ع الو‎ 0 my ‏ل‎ ‏ل ا ال ا العامة ا‎ RR a ‏اع ا ل ل م ا‎ a ‏ل‎ A Te ‏ا م‎ ‏ل‎ ET Be) HSE a Hmm UO ee a 1 3 ‏ل ا ا حا ا‎ i a ‏ل ل‎ ‏لحا أ ل اك لاي ا جو ا يي ا ال أ ا تا الا ا و ا‎ RR ‏ا ا ا اا ل ا ا ع ا ل ا الع‎ snd FEIT 1 Oe AR A I Ea NR NR Ye a gy Sinha err ‏ل‎ a i BE LR SRE SR a a ne aa ‏ل‎ ER SERRE A a ‏ا‎ ‏ل ا‎ a A EE SHR 8 5 ‏ل‎ Re ‏ل‎ i A tr ER i ge 4 ‏ا ا ا ال تي ا ل ل‎ ‏للج ا ل ات‎ Bt ah SNE EE HOYER EE Se ‏ل‎ ‎TAREE CER 1 ‏ا‎ A A TRAIAN ‏اج جا وو‎ AN Ln vr tr Er ee A SN St ION SE 7a a eT es ‏ا ا‎ A EE Te LE NN Es ee IR fr 3 0 CN RN an a id
    NE. a RETA EE a TR RE 3 IN ‏ا د د ا ا‎ ES a ns pe ‏ا لح ل‎ Mate RR ‏ل‎ oh a ea Sri A en ae ‏ل ل ل‎ A RN NR ‏ا ل‎ NR a ay ‏جا ل‎ I TR ‏ل‎ ‏ل‎ ae a I ‏ل‎ eT I en Cea SesRaERR RR ET DO i EE I LT Tay EE RR ‏ل‎ an RE RE a I EH i Ea Sn mi SEER Ee RE ‏تع‎ i ‏ا‎ DE hn SLL Se I TR a EE Rn a eT SR I Eh To ER EE a RR ERE 8: ‏اتا ا ا‎ CES eT ERE ‘ EEE : : ‎; : id 3 5 ‏ا‎ ee Pd ‎= : ‏ل ا‎ a SR A A a RN i nd Sm ‏ا‎ ‎EE ‏د ومسا ا ات ا‎ RRA TE ST Se ‏ال ا ل م لح م ا ا ا مج ل‎ ‏ل ا ل ا تيه الو ا ا مم ا ا ا‎ Re ss ee a eR EE A a I RN i rey TE i a ‏ا ا ا ا ا‎ rn a NR Se ‏ل جم‎ ‏ل ل‎ EE I ny A ER Sr rH IR ‏ل‎ I A no I I A Re 1 I SR A en ‏ص ا ا ا ا ل‎ 0 ‏ا ام ل الح ل ل ل ا ص‎ A i a Rat ‏ل‎ LR ‏ا‎ ‏ا ا ا ل‎ a A ER ‏ات ل م ل ا‎ RE ny REI RARE RE Smeal al EE En SEE a De a SEERA ARR ha RI 0 ‏الم‎ A ‏ا‎ SE IER A ER a ‏ا ا ل ل اه ا ا ره ا تو ا لو ا ا ‎i RE ER a‏ لا ا ‎RE RR‏ ل ل ا ‎in‏ 0 ا ‎WE EE‏ جا اا ا سح ‎ET‏ ل ا ا ا ‎RL Hes IR es‏ ل ا ‎pe‏ ا ‎RCL ASR Lc‏ ال ا ‎I TR ns x: SES‏ ا ‎RS‏ ات م ا ل ا ‎fhe IN Re a RE RI Li a nn RA‏ ل ا ‎IRR RR‏ ل ا ل ا ‎fe SOUR‏ ‎Eo SON a I Re ean SERENE NR EE NN i ar Raw‏ ‎A a NM A 1‏ ا 3 ‎mi rn ne TAN A A NR‏ ا اجا الا :اا ا ‎IN AN SL EE CEERI NE EO NE‏ 1 5 ا ‎ee HET SEY‏ ا ‎Eien amine le dr i ee i fon‏ اا ‎SEG‏ ‎hn aad‏ ل ‎ne nd‏ ا ا ل لج ااا لل ماس ل ا ا ا لج اج ا ا ا ل حا ‎He‏ لمح لج ‎En‏ لح ا م 8 م ‎RE ee a‏ ل ا ا أ ا ا ‎Cr IR‏ ا ا ل م ل ده الج ا ‎I Te ERT RE I i ne RE‏ ‎A pe IRE‏ ل ‎ge ATER‏ ا لوعي ا ‎A RR i‏ ‎na 0 en rina a‏ ل ا ‎Ee en ae‏ ل ‎I‏ ‎Ld ee RE Sa‏ ا ‎I I ee Ce TR i ER a ii‏ ‎A a ST OR hg SRNL‏ جا ا ل ل ‎ER TT‏ اج جا ال ‎A‏ ‎ETRE - 3 : :‏ > ا ا ا ا ا ل ايد ل لل أل ‎TE‏ tA ted ‏شكاء م‎ { A AS fad £ % * ‏بقع 8 ترا‎ RT-PCR
    إٍْ 5 ! = & ¥ 1 8 a : # ‏ل‎ ts aq em i pe y >p LAER sp 1 ٍ ‏ب‎ PF % 1 = fie 3 2 ٍ ‏ا‎ ‎3 0 - ‏بحثة ب * & 3 3 0 باساب‎ : et v r =P BB one rT] ‏لد‎ ‎Se 2 io : Testy Xx J Tate Ta ‏يل ال‎ » i Ta Br ¥ ol 8 ‏ا الما‎ 1 Se ‏رض ما‎ 3 4 NG ha el Ld 1 7 he TN ee FA 3 Grimms Pimms ram 3 ‏عيبا‎ : a, = - ‏و‎ ‎* ‏كو‎ pgp pa re % a preppy BE ‏ون‎ ‎obs Fe Fe fe ‏يخ *لك‎ We Ax ‏بق‎ vob e #2 Po ofr ee ‏يخ‎ Wa Ae J 3 2 1 dig ‏يما‎ Sad) ‏يوما بع‎ ‏عط‎ 4225-56 (PPMO} ‏كروي‎ (PMO)
    1 ٍ :| . @ ‎a 5 ¥‏ & 5 أ 4 أ ‎i‏ .= ‎a SY‏ بأ ‎Lf‏ ‎i 3 . - i Po ; i 5‏ . ‎hi : t =‏ ال الو : ‎Rp 4 9 i ¥ mw i 3 Av REY oi‏ 7 : المشكتي ‎٠‏ رى )9% ‎Cie‏ : المتجحل : المعيد.» ‎Ste BLY‏ ‎pont J : :‏ 3 : : : 0 ا 4 1 1 مد ‎hei‏ جاتحي ‎a * A i‏ 5 :0 ِ الال 1 الصميعام | ضعيم + د« ‎Mf ١‏ وتم ضيعم ‎Ye ١‏ + .5 ل« ‎THEY FOR i‏ ® 3 كباب ‎i‏ لماع = 4 3 ا ‎RR EE Ue PS Ee EE he ee EE‏ ‎RE I ng‏ دا لم ان انا اماع ري اا الس ‎SER I nT RR I Rn SO TL pny dm RNR‏ ‎a I CL RR RAE RL I RR A nny‏ ل ل ‎I I a iy‏ ل ‎CT i i i‏ ‎RI EE 1‏ ا ‎SR I a a I tT SERRE NUE I A BT Ei‏ ا ا ‎SRC‏ ‎ae ea‏ ا ‎ER nn EE NI EI I RR‏ جا ‎A I ee‏ ا ‎a A Ne‏ ال يلي لاي لي الا ري وي د اا ‎a‏ الو ا ‎Te TY nT ns‏ الو ا 0 ‎RENO‏ ‎Teh‏ 0 ل ا ا ا ا ا ا ا ا ا ال ل ا ا الات ا الإ را ‎Tl‏ الا ا ات ‎sR‏ ال ‎RE Ey‏ ا ‎RRS a) ERA‏ الا يديم يا لمج اي بو الل ا ا ا ا الي د ‎A‏ 3 8 ‎EY‏ ات ال ات لا اه الج ا ا ل ا ا ا ممع ‎SEE‏ ا ‎Te‏ ل ‎ARTES 3 a RN‏ ا ات ل ل ل ا ل ا ا ال ا ا ‎TONE‏ ‎RL I LR ASE‏ 0 2 1 ا مع ا ات لات ا لات ل تيه الا ااا ري اا جح ال ات د ‎FARR A BE i REE LE i See‏ ا ‎A ET‏ ا ا ‎SEER TT TT RR Te‏ ا ‎A Lt RL I I‏ ا الا ا ‎SRI,‏ ا ‎SEN EEE‏ ا ا ا اا ا ‎RL‏ ا ا ا ا ا ‎SI I I‏ الا ا اا لت ا ‎Re ER Le I CL RE i‏ ا ل ‎Si ee‏ ا ‎a a, I AT‏ ‎TL a Nn A nn‏ الاي يي ا ا ‎Rn‏ ‎ART I a i‏ ا ‎TRI‏ ل ا ل ‎RI LT RI I LL RI I a ARNE ET‏ ا ا ‎SERRE RN‏ ل ‎ar ne‏ د ل ‎ET ER RR Cn BOR Ni eT‏ ل ا اتا ‎I SL I a Rn BI I eae‏ ا ا اا ا ا ل ل ‎Rr‏ ا ل ‎SEER RR‏ ‎nd‏ ا ا ا ا الي ا ا تا ا ال ا لت ال ا ا را ‎TR‏ اح ل ل ل الج لي ا امم ا ل لا ا ‎RE AE‏ ا ل ل م لا ا ا نات ‎RR RI nS ny‏ اا ‎TR GE 5 Bm‏ اه ال اي ا ‎A‏ ا ‎LE‏ ل ل ‎RN TR a‏ ‎ee a a a a ey‏ ا ل ا ل ا ل ا ل ا ا ‎Ey‏ لاج دا ‎RS a RR RS‏ ا ‎a EE ERA a‏ ل ‎a Er ee‏ ل ا اي ا ا ار ل ا م ل ‎I‏ لي ال ا ‎AA‏ ‏ل ل ل ل ‎Th‏ ل ل ‎ER ea SRST‏ ا ال اا ا ‎RR Sonn a SEI I‏ ل ا ا ا ا ا ا اا ار ا ‎ME‏ ال راان اليا اخ ا ‎LP PT nh nN Nl‏ ل ا ل اج د اج ‎Cn A SE I ST A a Ey 3 ea‏ و جا ا ‎BAR‏ ‎SR en pS i Re‏ يا ال ال ‎TS LE ER : Ri‏ ا اي ات لت ل لا ال ا ‎I SD EET i eel LO en, Ce‏ ا ا ا ا لاه ‎A ED i Pe ey A‏ ‎RE a LS RR IN RS‏ د تت ا 5 ‎SN A TL AN ed‏ ا ل ‎ee ee Ra ee a I LE ee I ee ie‏ 0 ‎Li‏ ا ا ا ا ا ‎DS Il ls Te I‏ ا اي ل ل ات ا ا ‎EATER CL ST : fe a EU rR I‏ ا ‎ee Sh aah : 3 : :‏ ‎i Sn SEE end ot tian edie 20 Aa Te hed ent LE‏ ا ‎SRR Tn CE‏ ا ‎SR‏ ا ات ‎Lr SR‏ ا ا تا ا ‎TE nn RE RR LR pL IS‏ لاي ‎IIT a Se, 1 TI et NN SRR A pn Pn CRI‏ ‎a ET aT a aa Er a Tn I RR ed‏ ا يي ل ل ا م ‎BE‏ ‏ا ‎SE En A‏ لي 1 ا اليه وجا رج اا م اااي اليه ل ا م ا ‎a RT RE SR‏ او الا ب ‎NI Rr‏ اجا ات ‎ny‏ ا ا ا ا ا ا لا ا ا ‎I‏ ا ا ا ل ا ا ل ا ا 2 اي لي ‎EY‏ ا ات الات ا ل ا ا أي الج اللا ا ل ل ‎i ii a‏ ا از الت ‎RA a‏ تي ا الى از ات ا ار ا ا اير ‎GR‏ ا ‎ae‏ ل ا ا وا ا لط ا ل اا ا ا الت لم الت ل ا ل ا ل ا ا ا الل ا ا تحط ل ا ا ‎TE hn‏ ا ل اا ا ا ا ‎IL‏ ل ل ل د ل م ا اا ا ل الا اي از وج ا لمق ا اح د ا ل ور جح ل ا ‎ET ha Ah‏ اا ادا ميم مه الاي الات ا ا ا ا ا 1 ‎NR‏ لي ا م ا ب ا ا ا ا ا 1 ا ‎i er Ty‏ لو جات جر ا دا دز ‎i Lh ene i eat a I‏ او الا ا ا ‎ERR‏ ‏ا ل ا ا ايا رد لسري ايه اا ا ا ا ا ا ل ا ا الاو لت ال ا د الا ا ا الا ا ا ‎SRE‏ 8 ‎DR Lo‏ ا ل ل ل ل ل ل ا ‎Fan‏ ‎nT A SS‏ ل ‎SR SR Te SEE DT EI TR‏ ال ‎PERN‏ ‎NR I UR A Rn‏ ل تجار أي ارا ‎Em AR EE I I SR Ey SER‏ ‎I SI RS nL Ln‏ اي لات الما د اد ا ا ‎ny SERRE IE‏ ا ل ال ا ‎RE‏ ‎CHEN SNES RI I LT eR I ER‏ ا ‎TI‏ تخ ‎hn‏ ا ا ا ا ‎RT‏ ا اا ا ل ‎EIN‏ ا اا ‎a‏ ا ا ا ا ا ا ااا الا ا ا ا ‎pe Ee Dn Tel in RS‏ الا ا ا اا ا اتا اا اا
    ‎q a‏ & ض ب = ا - ¥ { ‎q ®‏ . ب 33
    ‎a EE | Ne 2 1 8‏ . ٍ ا 03 . ٍ : المنحنى المعياري )% وزن) 'ْ المنحنى المعياري (96 وزن) 3 3 الج ]لج ‎Te‏ 1 تيه : م 0 ‎Sd R‏ : \ ‎X El 8 FS Eat : : : . He 3 bef - i wn : 3‏ ‎Sd na Cy 1 : 4 ٍْ : :‏ : ا الضمعون ا ضعيم + ‎١ LYE‏ !0 ا 1 ‎PMD‏ + ١ل‏ 04 ع او ‎LL, PMO PRMD ١ PMO 00‏ ‎on : : : i 3 1# 0 5 RIN‏ 1 ا ا ‎a = nn sin SE Ra ra nr Ah Te i 0 8‏ ا ‎eR‏ ل الا ا ا ا ‎RRR ps ne RN a bite ad pe‏ ل ل ‎I SR SR TE NR ei NA‏ ‎Ba IE‏ ا ‎ER ER‏ ا ل ا ا ا ل ته ال لاا ميا ا ل ا لا ‎a‏ اش ا ان بر ا ‎IR EARN TRANS‏ ‎a a eS ri ER‏ ال ا ال ل ‎Sh ERA ER i‏ ‎A RA Rei‏ ا ا ا م ا أت ل ا الا ال ا ا ل ا ا لدان ائبع م ا اج ا ل ‎SRE‏ ل ا اا ا ا ا ا ا ا ال ‎NE EEE SOUTER ERR RES Sli a‏ ‎AE CEES ee CERNE‏ ا ا ا ا ا ا ‎a a‏ ل ا ل المت ‎een‏ ل ا ل لحت ااا ‎TL‏ لت ا ‎nn‏ ا ا ا ل ا ا ا ا ا ‎SE‏ اا مر امت الج ا ا ‎SR TR TI SIL I CENA CREE a‏ ال ا ا ‎AR‏ ‏م ‎en a‏ ا ال ا ال ا 3 ‎EEE ENE‏ م ا ا ‎ESN EET ee‏ ا ا ‎HERE Et Sa hE‏ ا ‎RARER. ee EL EE‏ ‎el Se nh ORE SRE Oise SE ha‏ ل ‎PE‏ ‏ا ل ا ل ا اا م ا ل اا اا ا ا ات ال ‎on‏ أ ‎Ba BN‏ اا ‎a‏ ا ‎Nr I MN AAR RR‏ ا ا ‎ERS‏ ا ا ل ‎ey a EEE‏ ل أ ل ل ا ‎SESE Se ee Te fn ETE Ona Ea RT Ee‏ ‎a‏ ا الا ا ا ا ل ا ا ‎SR nn Hn EIN RRO Rs‏ ا ال ال ‎EE 0 RR‏ ل ا ا ل ل ا ل ا ا ا ل ته ‎EE‏ ا ا ‎Ee I TE Te rn IRR pe SR NEA a‏ ا ا ‎i Sn ee i i a RR‏ ل ا اتا ا ‎I‏ كا ا اا م لا ماما ا ا ل اام لاي ا ا ا ال ا ا ا ا لا ل تا ا تت ا ‎a en Se A RE TR aR he‏ ا ا ‎STE ee ER EN SRE‏ ل ‎TE SETA‏ 3 : * ‎LE . oo 3 { 3‏ 8 ا ا ا الت رت ا ا الا ‎DUT wm en Te ee TR ee FRIAR CoRR RS SE De se Ce ee‏ ل ال ل ا ل ا ا ا ل ا ل ل ا اال لمجي ‎RI‏ الا ا ااا ل ا ل ا ا مح 0 جه الج ل ان ا م الا الا اا لك ا را ا ا م ا ل ‎ET‏ كاري ‎be ER‏ ل ا ا لا تا ا المي اا ا ا ا الا ‎i‏ ا ‎LR nn Le Le Tee‏ ‎I LL ee CNN ENE‏ ا ل ل ا ل ا ا ا ل ا ‎CEA ERR‏ ا ‎RR En‏ ا ل ‎ERR ER EEE SE CUTER‏ الات ‎BNE CEERI‏ 3 ‎Ry‏ ل ا ل ل ‎EAE‏ امج ‎A RI‏ ا ا ل أ ‎BE‏ ‏ا ‎Re‏ ا ‎Te ee ey ERAN NN‏ ا ‎NR RR‏ ا ا ‎SNE WE‏ ا ‎SRR Re NEI RE SRR‏ 2 ع 8 ام ا ‎EE SEE ER‏ 0 ا ‎UR RR Ty‏ ل ا ‎Rag Ln‏ ا ‎SE‏ ا ا ‎WT PS ee 0 AEN i PEA Wa Sd‏ ل ‎Roose Si Men SENN REA ey a a :‏ امي دا ل ا ا ا دا ‎RR‏ ا ا ل ما ال ل ‎i Je‏ ال ا ا الا اي اا اا ‎A I‏ 5 ل الي و ا ا ا ‎ER‏ وه ان و يا ا ا ا ‎Sar Rae ANSE EE SE SE a Ga‏ م الت ا 1 ‎RT A ER‏ ل ا ال 0 ‎ATURE EEE Ee ee US‏ ل ‎Py‏ الا عد ل ا ‎TREE‏ ‏ل ل ‎FEEL SE Ee nd EERE ER‏ ا ‎EEE SE EA ER‏ ا ا ‎NN‏ ل ‎SR‏ ا ا ا ‎I‏ ل ل ل الت ل الي الا ا ا ا ‎en 0‏ ا ا 1 ‎RE ea as‏ ا ال ا ا ا ا ا ل ا ل ل ‎SER EE EE hy‏ ا ‎NR I‏ 1 2 ااي الا نلعتل ‎Ba‏ ال ا ا ل ‎MI‏ اا 8 5 1 الي لاا يل تا اي ماد ايا ‎sh ny‏ ل ‎Cl ER I A i Ty‏ ‎ee Ee :‏ ل ل ا ل ل حي ا ا ا او الا ا ل و ات الا ل ل ل ‎a‏ ا اتا جا لأا للم اي اا ال ‎he‏ ل ‎RT‏ ا ا وا ال تا ا ا ‎a EEE TT HEI SENECA AR‏ ا ا ا اا ليا اا ل ا ل ال ا اا ا تع ا اس لاي ‎LE rr ECA‏ تي ‎TU‏ ام ا ‎RE a EL Re A Tt REL‏ ‎A LRTI I EEL RES RE To Br py‏ ل ‎ET SEN Sn SETA NE‏ ا ا ل ا ‎wn‏ : ل ل ‎I ey‏ ا ‎ee Se SR Re‏ ل ل ‎ime SEER EE ERE a ey EL LR a‏ : ا ‎RR A RET‏ ا ‎FER‏ ا ل ا ‎ne DER ey‏ ل ا ا ا ‎RR‏ ا ا ل ‎Sn A i a SRT‏ ا ال ‎Fe‏ ‏ل ‎A ee pos CERIN ee EEE I‏ توا لما ‎FRASER NE‏ ‎TE RN a NS EE NE aay‏ ب ‎TY Se‏ 3 ‎CEE a‏ ا ل ل ل الت لوا اه ال ا اال ‎fn I‏ 0 ا ا ا 0 الي ‎SR‏ الا ال ل ا ا ا ال اد الا ‎I‏ الاش 2 ‎TERR‏ ‎Er prs‏ ال يا ار ‎SEE‏ ا ا الا ااي لت ات ل ل ‎TE‏ ا ‎RI‏ ل ‎Seen NW ey‏ الا ا ‎SE‏ ا لا ا ا ا ا ا ا 525 ل ‎ae‏ ل ا ا ‎LB I i BE LER ne EL‏ لس ا ا ا ا ا ا ‎tasty RRR‏ ا لا الو اج ال يج ا اج ال امات ‎En EI RSE ELT‏ ل 0 0 1 ا ا ل ا ل ل ال ل اا اج الم اليا ا ‎hn ARE Rr‏ ا م ا ا ‎a‏ ل الت ل ا اتا ‎ER‏ اا ال ات جا ل ‎RR‏ ال ا ا ا ‎SE Re Se CEERI‏ ا الا ال ‎I a EN eT FRE PI GEE EE TE ER SERRE‏ ‎ah SE A I‏ ل ا ال ا ا ا 80 ‎RR ET EL BE Sh I ERE‏ ا ‎I RI SR‏ لاا ال ل ال ا ا ‎EE i‏ x ) ; ١ be » iY | ‏شكل أب شك‎ y ‏ب‎ 2 ‏بقع ويسترن‎ RT-PCR > 1 X “1 31 4 4 ‏ب‎ imp E 2 5 ‏لوا‎ ‎St daa aanp o Im 3 10h ‏ىي‎ ١ oR ‏.لو كك‎ + ‏رذ‎ 1 I ‏عدا‎ v ] \ 3 IN ‏مسب‎ 5 0 0“ —— § + Seng 3 & ] XN 1 oN £ TN, 3 4 ‏ولا‎ ‎4 wd ‏انس‎ | oA 3 1 i.
    Tun ‏بيه‎ Grp pei = Ne Yo ae Ee Be Ns Wa A ٠. Ry Ye 0 #. ©»! fe «. ‏يخ‎ Vi Ae ‏بعد الحقن‎ Gg ‏بعد الحقن‎ Lag 40-4225-5566 )10[( > 4225 {PMO
    ُ : 0 by Co i k alt ¥ ‏يوما‎ Ts Lest + bt gt Ros i= ha J ana aa ERE SE CN REPS ET SE 8 Ea i 7 5 go RE ERE: 3 REN ESSE REE DEE 3 Tend ‏ل ا ل ا ا‎ Ee pine doen ST ‏د ا ا اد للش لشي الحا ادح أي اش عا يا ا ا‎ ‏ل ل ا م ا ا ل ا ا ا ا‎ HOR ER ‏ا ل‎ ‏ل ا ا‎ a ‏ل ل ل ا د ا‎ ‏ل امم ا لج متو ا ل و اد لمح مسي م ل 1 حي ل م ل ا ل ا‎ Te BY Bea aaa te Pols baa Ee a ee Re es eR Fa ee Se ERR TIN ER pe at ‏أل‎ a a Bat a Ea da da a he oh ea BR ds a ‏ل ل‎ BE ‏ا ل ل ا ا ل ا‎ Sey ‏ل ل ال‎ SR ‏ال لج ا ل‎ Ro ‏ال ااا ال ل حا اا اليا مح اد ا ا ا ا ل ل دا ارش ا‎ ‏ل‎ a 0 ‏ل ل ا ا ا ل ا ا ما ال ارت ان الج ما ااا‎ ‏ل ل ا يا ا‎ a ‏اعت ا‎ Ea Pe a Lae a eae SE alae ‏ل‎ FEN eR A Ret ee a aE Hirani Salata I ‏ا‎ UE Sa ee a a Lo ‏ل‎ A ‏ا ا ا‎ EB a REN ‏ا ا ا ل‎ : ‏ال‎ m2 ps a a SERRA : 2 a a : 8 1 ‏ال اا وود وي‎ Se Cn 7 ‏ا ل ل‎ a : fel Svcd ‏ا‎ 5 EN FET a ‏ا‎ ‎eps ‏لئاول‎ EB Siding ‏ل ا ل ل ل ل ا‎ ah ll Bei iat ‏ا اسح أ سس‎ WBE ‏ل‎ a Toot te a ea em ee Ee EE EEE ‏ل‎ Re ‏ل ل ل‎ RE ss Es SEE ‏لإ‎ ee ey ‏ا دا‎ ls ee meal ee ‏ا‎ a. ‏ا ا‎ ‏ل ل ل لد ل لا ا ا اا‎ ERE Ne aa eae Ea Ne ‏ل ل‎ Pl Be ‏ا ال ل‎ ‏ا ل ل ل اا‎ a ‏ل ا ا ا ا اند ا أ الا لح ا‎ es IR a i nen Ra Ea -. _ : _ Le ‏ا‎ es
    ٠١ ‏شكل‎ ‎Cy ‏العضلة رباعية الرؤوس‎ ‏رباعية الرؤوس الحجاب الحاجز‎ ‏قا ان ال ا‎ 0 2 ‏اممو بي حي سه‎ ٍُ 3 a 1" ‏م‎ 1" 3 FF 3 1 5 ‏د‎ ‎- ‏ناوا‎ : = Yel : x ‏ب‎ & 3 FEE Sa. ‏ص 1 & با‎ iL] i. : 0 ٍ ‏ا‎ 2 i 3 o@ « / oy Ea A PT > y - 2 ‏ا‎ 4 2 * 3 i & i A < vel F = vol / © ٠٠ J ® 4 i 3 SEE ‏م‎ ‎2 ‏ا ل ة‎ 2 & Bb sgh sg pi 2 “+ A Seatac ce tig dist igri iy # $s Hos $Y.
    Ya ¥ as ¥ a A ¥¥ I Xo. ‏الجرعة (مجم/كجم) الجرعة (مجم/كجم)‎ a 001 ‏ا‎
    شكل ‎١“‏ ‏الجهاز الهضمي - ‎LEY!‏ عشر (الدقيقة) القلب (قلبي) ‎gtr Pe vq YY‏ 20007 "1 ‎yan 0 1‏ الي م هالا 5 #لس ا { 4 اام من ‎wp‏ > ال ا إٍْ ل ٍ ] 3 ‎wv : i 2‏ : 3 1 ‎A 2 a 1‏ دده 3 مر : = / 1 0 ‎i 3 a 2 J‏ 8 م 7 ‎i si‏ اي المح ‎RT‏ م ‎TH‏ امج ‎wm 1 ATT‏ / 3ك م 0 3 ‎Erm rp‏ « 2 سسا ‎Bt‏ % 2 ‎x 6 Ax LR Ms | JP 8 iw Aor iY.
    YM ¥.‏ الجرعة (مجم/كجم) الجرعة (مجم/كجم) 01 لله 1 جد لي
    Ve ‏شكل‎ ‎- 8 ‏الي ا ل‎ Eg Sg Ji ‏العضصلة الدالية العضلة دات الراسين‎ 1 3 3 y 3 ‏ا بحي‎ pO 4. PR oo 8 1 ek ‏لهب‎ BMG oF A 3 me ‏سهد‎ ‎vel Es : LE = Vow ee i "85 1 ‏اله‎ ne a i CF : oa A 3 ‏ل"‎ ٍ 1 ‏ض 1 سم‎ 08 i ‏رمن‎ 3 3 7 ‏ااا‎ ‏ا بي‎ A ‏مايا لي‎ 1 > 1 ‏ير‎ ‎sry ¥ 3 = nn wy 3 : ‏م‎ ‎© ‏ا‎ od ‏حي‎ Co a i ‘ B= U3 4 ٠ ‏ب : م 7 ا ا‎ 2 pret a3 + fs - a Yow : ‏رج‎ a, 3 kx 0 b+ ‏ليخ عم‎ Ae Age ‏كا‎ ‎“oat 0 AE ‏ا 1 تيد‎ ; ‏(مجم/كجم). الجرعة (مجم/تجم)‎ wo ad
    Yeo ‏شكل‎ ‏المرئ‎ ht
    الأورطظى * ٍْ 3
    * 3 : RRR i & 4 Yow 3 ‏جه "م‎ PERG q Youu i FR.
    ‎wig a1 Ay To F sees‏ لتحي ٍ 4 الج وي *» ‎Ae eT PMR om Ad‏ احج
    ‎ْ: , 3 3 5 i
    ‎3 Tr A 3 Me A
    ‎+ 3 ‏م‎ | 3 a
    ‎: i : a aH
    ‎= ted ‏الم م‎ faa 8 3 rd & . 1 ;
    ‏3 4 ا ‎ges‏ ¥ 3 ا جع ا 5° 3 ‎od‏ : =
    ‏ججح يت ا ا ع * 2 ‎EE ey‏ يا ا تج لاا ا الي 9 1 =
    ‎<3 x $x Fa Xa Ar Lee be TE yu oF * 7. te he ‏مك‎ Ya va Ai FY ng? 1 ‏ا‎ : 0 Neg - - ‏ا 7 ب‎
    ‎ae al‏ (مجم/كجم) الجرعة (مجد/كجم)
    & . 2 ا ‎A‏ يبا ‎a‏ % \ * 1 ‎Ry 5 Sd 3‏ ‎PIO wl PRO‏ القلب ‎on : or i 5 ay‏ .: ًِ اللاي لم ‎Nyaa de‏ ‎same a‏ ا 1 #مجلاتجة ‎akon Ty fet gd call‏ لايع + ‎foi Wh iad? dal! He‏ ‎frre Ree i‏ بم مقي 0 : ماسم يسم مسي اك ‎Tr Naw‏ ‎tn i aa a‏ الس ‎SL RRR, Tr‏ ل ا ا ‎TR‏ ال ‎TERE SR a Se nS BE Rn i‏ ‎a i hd‏ يي ب ا اث ‎TERRE LEE RE EE NORE REY I a REIN UE RR A i‏ ل ‎a Te SIT‏ ا ا ‎I A ee‏ ا ا الت ا ا ا :الا وا لحم وس يم وجول اد ‎Se a a‏ ا ا ا ‎PERS‏ ا ‎RO,‏ ل ‎im‏ ل ا ل ‎aR‏ نجلا جا ‎hLDA Rs ee‏ رار ‎BI I SAAN ele el‏ ل ‎eS IG SI Tl Sl‏ : ل الا ‎Se ER SRR RN a‏ اا ا ‎Rae ERR 2 ER EEE RR A‏ ا ا اا ا ا ا ا ل ا .
    ٠١7 ‏شكل‎ ‎1 1 Wo ‏ل‎ 4 PAD ‏بويع‎ ‎Tl ‏مسسسسمس لبمسسسسه‎ Fi ¢ 4 J nig oy 4 : > 1d a. ‏جح اا ب‎ 2 ‏د‎ ‏ا 4 . ا‎ ‏القلب‎ & 3 2 * = 1 aa 1 ue on Yad Na ei i DUE a 4 ‏ا ا‎ ‏ب‎ a ‏ااا‎ ‎Wu Na 8 i dL Bd chiara SEAR RRR, SERRE FRR ~ $a As As fox Ha 33 3 0 ‏بي‎ so . 0 ‏الجرعه (مجم/كجم)‎
    جم ‎TE‏ { . ; § شكل ‎A A Je & ad 3 A‏ = ل“ ‎TEE‏ 5 ‎Ee vad al vi 8‏ الحجاب الحاجل « ‎PRIMO‏ ا الحجاب الاجر « ‎FRED‏ ‎BEE‏ 3 بجي جا ما الاح اع الات لمات ‎RN‏ ‏ا اتوي المي 2 تي المي ال : 2 لمجا الحو 1 ‎EU‏ المج ‎Tey FENN‏ يدسج دسج ديع : : 3 ‎Lo 3 on‏ 8 : ل > ‎RT ~% 3% 1 AY & 8 2 gk‏ ا ا لكان لهاو اج # اللراية > ‎tea oii‏ 0 ‎i Paras ER Se‏ ل 0 اح ا اا دو ا ل ل ل ل ل ل لس ا هه ‎ON‏ ل ‎NN A NT EE‏ ا ‎En eS OT EER‏
    \ q Is ol % PMO PPMO : ‏ل>جبجبببجببجبببببجببجببببجبجببجببجببجبببجببجببجببجبجبجبجببجببجبجبجبجبجبجببجببجججبججبججبجججم. بجببجببجبببببجبجبجببجببجببجبجببجببجببجبجبجبججبجببجببججببجبجببججبجبجبجببججبجججبججبججج+ب:‎ 3 < x : 1 T 3 3 ‏د‎ >< * T 7 ٍ > * ed Pa *al a 4 3 a Jalal ‏الحجاب‎ - uy CREE 8 : LE : a cone: SA I Ye BB 3 ho ‏ااا‎ ‎3 0 1 = BF TT: BB a. Bb % 0 iy ‏ال‎ AN aN Sa i 5 ‏ل‎ Ye ‏ف‎ As YE {; * $s * } ’ = ne 1
    ٠؟‎ ٠ ‏شكل‎ Yr ‏شكل‎ ‎5 f PPMO - ‏العضلة رباعية الرؤوس‎ MO ‏العضلة رياعية الرؤ‎ 3 a : CDE ‏ب‎ 8 8 : 4 % : 1 \ HEE A PMO - ‏وس‎ Ed FE Er I ‏شعني‎ 0 » rR Sa ‏الميري كيني‎ Sit ‏لوكي + م اتج ال‎ RHE BR :
    TE ‏5ح ؟؟‎ OA ‏سر سس سس 8 ا‎ pss OA FO es ‏ملم مضا‎ pre RS ‏ا ال ا 1 ا ل‎ ET BE ‏اش ل ا ل ا لا اع‎ ‏ا ل‎ i ey ‏ل‎ Lr a ‏ل ا ا‎ i ‏ل‎ PR i EERIE EEL ‏ا ل ل ل‎ PE LS ER SERRA Bn Sam SR ‏ا ل ل ا ا لي ا‎ EN RN So nT 5 = 1 ‏ا ل ل ل ا‎ EL ‏ا ا ل‎ ‏ا ا ا ا‎ BOER Rr na ao aT ‏الا و‎ NEN ee ER Re ‏ل ل ل ب لد ست الا‎ ER aN Ee Ee I I Weds FE ‏الت‎ a ‏ل ل ل‎ ‏ل لاا ل ال ا ل ا‎ EO a a a TERRES TES nem AE ni 1 0 ‏ا ال ا ا ال‎ SER ‏ات ل ا‎ a HE a 2 Tn SEE EERE ‏تا‎
    YY ‏شكل‎ ‎PMO PPMO Youu i : 4 A fal OAS i pies. ila 4 0| ‏و‎ ‏ا ل( العضلة رباعية الرؤوس‎ ; t 1 ‏يي‎ Yr ‏ا اح‎ = ] ‏ال‎ ‎= | | ‏ف"‎ ‏ب‎ i Na Sa ‏كت‎ sad ‏انم ا‎ A 1 ‏انم ال‎ 3 WO Na aw 1 ‏اا ا ا‎ + homie assess ‏اا‎ BEML SUL fa de 1% fa A Ya ‏الجرعة (مجم/كجم)‎
    YY J ‏انناب الحاجز العشلة رياعية‎ wilt ‏الجهاز انيشمي‎ ‏ال ال : ا‎ ‏(هيكني) الرؤوس ( فيكتي‎ fe) fet) 0 Ek vj 4 + 4 J 1, ; ove EE i " : a ْ ‏ا‎ ‎= ‏ل‎ 2 a ‏ع‎ bi PI ] CL - } oR 1 Sans - NE Jae Ys Pad fans ‏ا المع‎ : EIA eA ‏مسي ف‎ Lona Se Ee Nia 3 a SEAR : ER | ‏ا‎ ‎§ RAN ZANE jo IRAE ADEN ie spc on 1 Te ‏اك‎ Fe ‏بلا‎ Ta Ra ¥4 ‏ةق‎ ‎= ams ‏الدج‎ Ls Baal g AS sag ‏يعد الحفن‎ Lage rE \ - ‏عاجوا‎ ‎VA pr I \ senses ‏لمعم ا و ا‎ ‏ا ا 3 ا ا"‎ 0 Ag bs Sh ‏ليسي فيل‎ ‏ا ا‎ mmm Rt 0 ِ ‏لمعي‎ ‏ا‎ i % pr oR fk 1 ‏حو‎ ‎i ‏سلطا الوحدة‎ | FUT ad — Lig a | a FTE boa Dhar Vig dl | { ‏ببسل‎ eee} ‏الأقران‎ a ‏ا‎ ‎| ll | REE ‏ميتي‎ Poa ps ‏دور ال‎ ad ‏ملي‎ ‎| | Seat ‏ترون‎ i ‏يست‎ rnin : Es A ORE ‏ا‎ ‏ا‎ > a 1 ‏ا‎ > mma ap: 1. . = su) | ‏ووو‎ ١ ‏فعضا‎ ١ andy IR ‏اس‎ AON ! ‏العلاج يعد‎ ‏ع || خخ 0 | ا‎ i | ‏سس‎ TTT ‏الا ا ب‎ FY | 1 ‏مسرل جوو‎ IRE ‏قري‎ isd ally TRI ‏ا‎ ] aad { rnd i 3 + i i a ‏لي‎ SHAY ‏ا 58 من‎ ¥ 7 \ | Sea ‏ممعي را نكت‎ {oa TE te \ Log Re i Lio | as Salen | . ‏ا‎ ١ ‏ل‎ x = meme sins : \ pw ca ESR Rha 3 = oy a Lal msg? Poe ‏م ا شاع 104 | لي‎ Apes) BF see \ | nap | awit mes { ‏أ‎ A : Site 4 + Pose ‏اع‎ i ‏ا‎ 3 oof ‏أ | 8ر8 لقنا‎ | {Terie i i [EY tl 3 ~ } ‏ماما‎ i i i { { Lagat ¥ Hd i { i ‏لمي‎ i { . ‏ا‎ : i FS ia abun ‏الع‎ i ‏ليا‎ pe Yo : | ome Poe nme EEE | | ْ ‏الا‎ Lee ae wd 3 TTT 3 TH RETA 0 ‏مان‎ 3 ‏ا الل‎ i {ome | Awl { | ‏سس‎ 3 jes a i i i i Voki i smn i 1 i 1 i ‏مل‎ § i 2 fe \ i | i i i Voie Poo Wig ‏م‎ FINA rte i 1 1 i \ i i WN | 3 is ‏ال اج وال‎ | | i FEW i i to i | i { i { FE i i { Poe ta: : i ‏إٍْ امل‎ i Ua PE Ye ee i | | EA i | ‏كت‎ i Vol Frees i ‏أ \ سا‎ 1 i Lame | ‏اليو بت أ‎ ‏امس سي‎ 1 { i i ‏ا‎ ve i joa CR i i 3: een i i 3 1 + ‏زو‎ i 1 i BT poo © ١ ‏ال‎ | 1 i |e : \ 1 ‏ا‎ ‎1 | xt ‏ل‎ i 5 1 DAYLE i 1 i 1 Po 8| ‏للد‎ i | ME i i HE ‏تم معد مع مل‎ 3 i i i i \ ‏ا‎ Pasa! 1 ِ ‏ب‎ | 1 | 1 ! {ag 1 Aker freee \ 1 ‏ا‎ 1 ‏ا ا"‎ i i : ‏اتا سدس ب‎ \ \ {LAA fe 1 1 ‏عا لت‎ rm 1 \ i \ ‏أ‎ \ Vivi 1 Ee 5 ‏أ مؤي‎ ! \ L ‏الل‎ i Ue | CYSTS CEE ! : i Po PETE STE = dann 5 an i \ 1 i mmm. ‏ا‎ ‎| aC pt : | oA ‏ا لسر‎ ‏ل ا ا‎ 1 : {noone 1 ‏ا‎ PA ‏الاين‎ ‏اسم ااا ا ا‎ : 1 em \ | ge : |p 1 | i { i { | i ‏ا‎ i oS g | sen rene] i | i \ \ Varad 1 ‏لخي‎ AEX ‏سسا ا‎ ! \ ! \ af Ax ‏اتا‎ 1 i 3 i : \ i mani 1 i ‏ا‎ ‎ُ \ \ 1 i Io HEE VOY mapa: i 3 fe | | ated | i | Test {ve ¥& | noon i i 0 \ 3 i iN i i 2 ‏امم‎ 1 {Ea { ‏المسسسييي‎ i : Ue ne ; Poss PL ed boos ‏الا‎ i i | TNE i | Poo Roy { i ‏م | 03 ؟‎ ُ NR i { i ? = ‏لات‎ i ‏ب‎ 1 | i i 3 3 i ‏ل‎ : \ 0 i 1 i 1 { i Post cn HE EE i 0 i i i ! ‏قن‎ {hea ‏ا 1 ا 1 ا ا‎ ‏ا أ ا‎ ho vo aad ex FT | ‏ا‎ 1 wf i : ‏و‎ SR i { Pal de {out i i i fre i | i i PA AE : las | ‏جا‎ TUE ‏ا أ ليت‎ i | omen k ‏ا سا و‎ ‏ا‎ AS | : {stot | ALE ros 1 pH mn: 1 : 1 or LE 1 * Pook mn POR prs ; : } ma | | fuk vend 1 i | EA EE i Poe 1 i i i i i Via i TTT i i i i i i bol 1 Po boo ey | 1 i i i yo 5 boy fr 1 i 3 i Igy i FETE { { fon Be fi : : HE te { : \ 1 | Vp ‏ال‎ : 1 HI \ i \ ‏ا‎ \ nh LT : \ a ‏ل‎ i ada" TY i i i 1 5 ‏ا لل‎ UT ‏سأ سيم‎ | | ; Lamon | : Cane a Vo ‏ري | الشف‎ 1 i RN i ESE LE Piz nner i 3 Ua ‏ورا‎ 1 i | Hinge | | AR PRA i i {oo FREE 1 i {seg Pi i i «7 \ i VoL 2 if presses i | Are i i 0 { \ ‏ص ل اح ل أ‎ i | ! ‏ا أ‎ \ \ 5 ‏ا 1 أ ا مس ا‎ ‏اما‎ REET AER ‏مسي ا‎ ened pom 1 ‏ا أ ! ال ا لا ب‎ \ eed ida ¥ i Pad 3# Y ‏ا‎ | i i ler : 5 ‏ا 1 سس م‎ ee : { in i PA eee i ‏ا‎ ‏ال‎ i Udi sy i Ys } rrr \ reread | HEA ree | \ ERY ‏م‎ \ ‏اس‎ 1 { ١ [| ‏ال لل‎ MET BE i | oA Vie ¥ ERAIDCE ‏اح نا‎ 031 ] < i ¥ 2 ‏لاي‎ i i ‏يوم‎ 4 sh plaka ‏إ اعت د هاا هج شير إلى‎ FEE [: ‏الح ذا الس‎ a ‏ل‎ i ‏ا‎ \ Hy Baad 5 lA pa ‏يشور إلى‎ dat JS ‏أت‎ ‏بق‎ sag 25 md = F xi a 2 ‏ا ْ ٍ نر‎ . ‏لد‎ § glad a FE ‏رانتج‎ * Eas ‏يد‎ ‏جل علد هد يوم‎ + 3 ٠ ade ‏تدر‎ ‏كا ال‎ is 5 a 5 ‏راج‎ + ‏تر‎ « add ‏تجز عند‎ - JR, ‏اع ا كذ‎ ‏؛ راتنج محتدٍ‎
    Vd 1 wl EE EG eed ER (NI Pond EY a da Bi ‏أ بق إ‎ SA ‏يعد الإكزان : مور الإهران : العاتج قبل‎ Zot : EY 3 ‏الست + امس د ما ممما ا انها تالالا الما لاا لاا اااي ال ته ااا ال ا ا مل‎ ‏اا ا‎ i i : ‏د‎ : x 3 § § ١ ‏ل‎ ‏اا لاي الا اا ل : : 1 | اه ا راف ا‎ i ‏ا الوخدة ا‎ seem foo) 50 Span ‏لايل : ارم الإقران‎ URS A ot 351 ‏ا ا الول ارج مجان | عردو اسيل 00 الا 1 يلد‎ UT | ‏لاد | امود‎ 1 DORE ‏زميج ور‎ | fee SA ; TERCAE {8 ui} 1 | i i Por | : i ! FE: Sache i i i i i | i i i I T | 1 : ese | : : 3 i ‏ا‎ i i i i co | i i 0 ‏إ أ إٍْ‎ : i ] ‏المع‎ : : CR TTR TT EE Davai feed PEER | 45 ‏"م‎ ‎| i Pt i * : 7 : i 3 BEY i \ 1 ‏لكوت ا‎ . : fb sre any) i #7 1 ١ ‏ب لي إ‎ i Ae EYL gee | i i i \ ! ‏ا‎ i i Ea | i i ! ‏مل إٍْ إٍْ‎ #5 : : Cd : : ‏ا‎ i i i i i | i i i Frit ‏»تا ا‎ fon ‏م‎ >» fans, GT bas i 9 i i 1 ‏لاا‎ iE wi % i PAR ep ‏الم‎ 1 er | Ere ‏**#ا 0 ةلش‎ i i ‏ل 4 ؟ نشي‎ i x¥ i ‏جل‎ : } 3 i 4 ‏ا‎ ‎i i PY Sov FS ‏جد بي‎ RR, x) x in A Ry. & i ' Vo ‏اه ال‎ FR ‏ما عن‎ Le ‏ال دعا‎ x Boo 5 i \ 1 | ad 1h {4 J LXE H ‏ما سد 1 ا لش‎ i : i i i i i i i ons i | i i 1 ‏سكالا‎ i i ١ : : : : Jemma ements ements ‏ا‎ No 5 i i .
  3. 3 Co 3 [I : ‏الروك‎ HY i EY esd wr Pow ‏:ةا‎ AT :# ‏إٍْ‎ ‎| i ‏ب نت ا‎ i da ‏أ مج‎ i ee i i | i SAVY i Ey 3 “EW at } 3 : ‏م‎ 7 1 ١ | PTT EE RY bmi | i : i 1 i i i EE i i 1 i 1 ] لقاسل‎ i i i i i ْ ١ ‏إٍْ‎ ; : : ١ : 1 1 i i i i 1 ; ‏سبلل ” ”” لس الللل[ا”6ظالإنادالت ياست يط‎ Vols pile | 0 i i : If ya Pare: ox 1 ‏ماع 33 ليرا 1 :07ل"‎ Pox Pot i i 1 ‏ا‎ i i - i v Io i 1 : i 1 i LAY hal : J TE Tar i 1 ‏كان‎ 1 ‏ا‎ | sre ‏الا ا‎ i i ; EAL 2 ‏إٍْ الس‎ : ! : : | : : {Lap Ars | ‏أ‎ : : | ogyg ‏["الار]‎ #30 8 ‏انق‎ aft BY Pog | ‏اح 0*0 | ملام‎ \ ‏كلخ ا‎ redial ‏الل ا ا‎ : : i Pe ‏ب‎ {= Poe DRE ye | i ; \ 1 Pode) i : ‏ابا‎ i i : \ 1 Pon i i i ! i ; 1 i 1 1 i i i i i i 430090 | ‏تر ارا | ال ا | لحر‎ bo ‏خالا | #كة‎ Dovey ‏ا‎ i : ‏امك‎ 4 {¢ : 3 : AIA 0: = : i a i \ 1 ‏لق ار مل‎ 10 a i 10 ‏مم‎ i ْ ‏اله 9 إٍْ‎ : tore ٍ : 1 Pos 5 i : 0 Una i i ْ ]ٍ PT : ٍِْ ْ ٍِْ : i ; : : : : Vo PATE RT A XE ‏جا | تعب : #خ» د‎ Ng Ea LAER > ‏مودس‎ | 1] ge | 8 : ‏ا‎ ‎| 1 | SEE 1 ّ i " ‏اليس‎ i i eb Shh} w ‏هي‎ vad i - SRY x. + A ‏ان‎ 2 no 5 ry i Em YE aad ‏راج محتجز عند هذه الفركلة‎ tO 4 ‏شكز‎ ‎¥ wh A Jeg oh ‏جر ار ب‎ - ad ly baad a sad ‏عند هده‎ ada ‏راتتنج‎ ١ ‏اا ا الا‎ | x ws od LE BY ‏يوم‎ * 2 Baad ‏رالتج محتجل عند هده المرحلة‎ a ‏الوا‎ BEE By ooh x XW Art d ‏لمدة 1 + يوم‎ dda all ‏راتنج مختجز عند هذه‎ *
    :777070 77777777/777777777/77نالااناتتان تت تت ااا ‎Pog, | 1 ag EN. FR 0"‏ العلاج بعد ‎ol‏ دورة ‎CAN‏ العلاج قبل الإقران ‎I‏ ‎Cd SARE | i < i § |‏ اا ممه جم جيه جه جع م عه عه جه م جع ع عه عه عم كمه م جه عه جه جع عمو عه جه جع جع جه وام جع عه عه مجه عه جه عه جع عه ل عه عا رع عع عع ع لجع 8 ‎Porgy‏ ‎od ida : + ¥ + : = 1 8 7 1‏ ‎i 3 i ¥ i * ik i { i % i x }‏ لدو ‎i‏ ‏ال ل ‎eee‏ ل ل ‎i Bremmmme nme eee ene‏ ‎i }‏ لحي الاق ‎Pos IS i i { i Cd‏
    ‎re. !‏ دمن الإقران د الية برق ‎{fad‏ | ممق هل : . ‎od‏ | الؤجدة ! ‎oc G wn quae ar » "1‏ 2 7 ا ا . عب :2 0 ‎he 1 ot 0 HAS 8 A " p‏ : 1 ‎TER‏ سول ومع ابجة ‎ae | Ris‏ سات اي ل اس ا 8 ل قل : ‎Fl‏ ميت ‎i 1 HE. i‏ نكا ا ارق ‎fret]‏ \ وفع تن ‎LYRA TOR Sane ! i‏ 0 لطاع ‎i * SC‏ ‎i ® ed 2 $ i i‏ : :0 ; ‎{su : | : | : 1 |‏ ‎i } : i } i 1 8 TTT TET |‏ ‎H i‏ ملالا التبس'طابل 13 ‎i : : ; Pon : : ;‏ 1 ا : 0 ‎i i i x i‏ ‎i | Popa | i i i‏ 1 إْ إٍْ ‎eed‏ ا ور د ‎DEERE py i‏ ميج | ‎i i‏ لد مون | كاش | شك ] ‎i i }‏ . ا د الجر ‎EERE‏ + أ 1 ‎i‏ ! ; } 1 ‎md‏ اج وعم ‎i‏ : } جل 22 ‎i : Pllc dl { nT‏ ‎i 2 fd 5 SSUES : 3 1 5‏ : ‎fo 1# it yes | gps sl 00958 : Po‏ : : ‎i } i ww G oe Poot wit } : i i‏ ; ٍ ْ ا إ ا إ ‎١‏ ‎i : i { 1 :‏ ‎i i : : i i i : ES i‏ ‎i i : i‏ 8 : : ‎red‏ اا ‎wr)‏ | مجة ] ‎POORER RRR sd 1 i i vf‏ ‎i } Ls Td BY } we i i = i i ] }‏ ‎Poo a ; DoS‏ 0 ل ‎i i‏ ‎ated mee Lee Tae ٍْ 1 ١‏ : ‎i sa i i i‏ | ا م ‎i‏ : ْ : : | : ْ 3884 إٍْ ‎i i : i 1 i i : i i‏ ‎bp ed‏ ا ا ل أ جو أ ‎{i i a‏ . | كافش 07 م70 ] ‎io B i‏ : ا 1 ‎Cod Pog RE i i‏ : ‎TRE ary A : 2 AE i‏ في ‎i‏ جاو : ‎i i‏ ‎as age eri REI { : i }‏ : : ‎ea | : i > i‏ عنم 7 ‎i i Poe A {rs ; EE | EY‏ ‎i i Poe 0 | i Sl : Z i‏ ‎i Post ; Poa i |‏ : ‎i 1 1 i i i i : i |‏ ; 1 ٍ إٍْ 1 ; : ‎١ ١‏ إٍْ ‎En vm bar‏ عات ‎I: PLANER aye ag dt od i VU ee im i “i. 1‏ ا 53 ‎ATE‏ اوري سس انهو ا : ‎FCA REE‏ ا 1 ‎eee : io A‏ وات ‎i * i‏ اج :0 ا ُ : } حم ‎Bh‏ : 1 رع اراق : ا : : ا ْ | ‎EN airs ae‏ إْ ْ ‎i i i a i Poe : i i‏ إٍْ 1 | ا ا لضن : ‎i‏ ! ‎i : i i } i { i io }‏ ‎i i : : i i i : ES i‏ ل ل ل سس ل للس سل لل لسلللل ل لس سسلسيس سكس ‎Poy ogre Vem wd } i 1 5 Vien. wd }‏ ‎PORE ER Ra | : boars ERs‏ ‎i i i 0 i Sie TT raed vv Sh : i x i‏ } 2 : ال عي ما ¥ ‎i i ogra w Lil wot | w‏ ‎LAAs RT Voom a Eee Poe‏ ‎i |‏ : | الهج زر | لد 1 رضي ا : ‎i‏ ‎i |‏ | : | الم اهل 1 ‎i i i i i i 1 i i i‏ ‎i 1 1 i i i | : i i‏ ااا اا قا لاا ات اتات ات ا اا احا حأ حم اح ‎i‏ ‏© موحي : 1 ا 3 ‎PE‏ : ا وخ ‎Fe‏ ل إن ‎i‏ 2 7 انل : & 8 4 ‎i‏ 3 حل ‎iQ x i‏ 8{ 3 وا 7 لبن ‎i SOE i‏ ‎oat RA 1 3 i : 5‏ : ‎wt‏ : ٍْ ال د ا : ا ا إٍْ 1 لبور : ‎i‏ الموج رض للش | لالش ا إٍْ 1 ا الج ‎i i : i i . i i i : i‏ ‎i ;‏ | «ة 1 : ‎i Pode‏ إْ ‎i : i i 1 i \ : i !‏ ‎i i : i } i i : i }‏ المسسسأاللسسللللللسساسلللللللس لل لل ساسا امح ‎i K 1 : ae 8 1‏ 3 + ول ‎evar‏ : الصو ا ‎oases | £0 YY wt |‏ ها 1 ‎Laan SY 0 i wr‏ 215 ] ‎i i fi Sv |‏ بع 10 ‎i : board es 8 ass one‏ ‎AT fe SEY PoE pam : i ANY‏ ‎i } : i i } i = { i 3 }‏ شكل ‎(a ) Ty‏ #4 اضرع ‎Ew‏ عا لولاا ا ‎ER‏ § ب 0 ‎mit‏ محتجل عند هذه المرجلة ‎bad‏ ايوم ‎Re aa eed‏ حا ‎al‏ اك حا رالتج محتجز عبد هده ‎ad‏ جلة ‎Ade 3 baad‏ ‎BY‏ ا لوم ا ‎Fn‏ 3 21 ا ‎lif‏ محتجز عند هذ ‎ag or baa Ada salt‏
    1 اماع موق ‎Fok‏ اتح ‎CUE x a o oe RD RE] 3‏ 3 ٍٍ ب ل ع2 ‎EEE a FEAR Re‏ ل ذا ‎SEE‏ الخ ل ‎i‏ ا 8 ا 8 7 الا ا 8 ص لمي ‎i‏ 4 الاق تا ‎RE REE aR Rk. i‏ ص ‎i t ern 3‏ لحم جح 2 الع جد ‎Se Sal‏ ا ‎OT‏ ‎smal 3‏ 2 3 ححا لا جل مط الاك ا ‎TOT : AE‏ ‎Fasten 8 3‏ 1 محم جج ممح اليا © ‎Fo 3 A‏ ‎sara 5 3 ren 2 Bi fp 3‏ 4 ايخ : 8 : اا حم 1 ‎RS‏ الاي ‎i 3 aaa wo ann ¥ Sod;‏ 5 1 ‎NN i‏ سول 2 ‎ay i a 3 ENR. HNN tad Std SE‏ : اجرخ ‎WT‏ الما ا ا ا م ‎Ty EEE Agee‏ ل 3 ‎Po A501 sp‏ ‎i‏ ميا : ‎PoE 3 & = 4 i ¥ rennin i ved MEAs PSE SRR A‏ ‎Pe 3 ER 3 dE Si: Eo ROT 5 SRT wl SAR i i‏ ‎i i‏ ارية ‎1a‏ قي )5 لمر ‎SERRE‏ شاو لفل : ‎i Frans i‏ ‎LE 3 ps 3‏ ا ‎SRE 8 oN‏ 3 : م ايج ‎Po‏ ‏سس 8 ‎EOE i‏ © اله مسرل أ : الوجدة : 3 ا : 7 ‎RS 3 FDR wp i i‏ المح ‎PR I‏ ‎i‏ ل 1 : 2 وض : ‎io ca‏ بون : » ‎i‏ ‏3 © عدم 3 ‎i‏ 2 الم 1 ‎LSE RS‏ : ‎i i 3‏ مممد ليدم = 2 3 : ‎PX = dt ToL FEES‏ ‎Sede | 5 i i‏ لق ا ‎oR ITER } i‏ الح 8 ‎fs‏ 1 لت هت اس ات 3 ‎i‏ 3 } 1 : ‎i 3 3 AVERSA 1‏ 2 ا ا ¥ 0 : ‎N AERA 3 3‏ 8 2 للحم ‎El‏ :1 5 : ‎i‏ يو لج ‎i {5 i renee fs i i Po RW PgR‏ ‎EE 8 i 2 Ee EIR EE Ee i‏ ‎i‏ مد ‎Eta‏ 8 ا : ‎i i } 3 ree‏ ‎i‏ مج 3 ‎od‏ 3 ا 5 جح تق جا : 3 : ‎i i‏ : ل المي 1 ا ا 2 اي 1 ‎i i Sashes‏ ‎OEE Es See | 3 B i‏ . 3 الي تيج ا !0 اا ‎i‏ ‎ERIC a 53 CHER ERIE ih 3 i i‏ وا المح ا ‎PAE aay RANE FN i i i i i i‏ ‎ES 3 Ad oN wa = i 3 * ps 3‏ : ‎i i 8 1 i 3 ; : :‏ ‎i i I)‏ 3 يد 2 ‎Pos eed‏ 3 : ‎i PETES hed i : { : a,‏ : له ‎i A i i i‏ ‎i‏ جا لي اسه ‎i i Flee $¥ 3 2 i oo‏ 3 ال ‎SG PRs‏ ااا اااي 8 2 ‎i ad ol‏ : : ‎i i i : 3 i enn nn ous : SEE i‏ ‎i i SEW RL‏ ا اا عع عا م ‎i i i i‏ ‎i i MTN R 3‏ 1 8 ال 3 ‎i‏ : : ‎i i ha 3‏ 1 8 #ار 2 ا ‎i‏ 3 : ‎i 3 3 i 3‏ ا :8 ا 3 : ‎i i FP 3 + i i Cos 3 : i‏ ‎Ed 2 8‏ ل ا ‎SR +: x = Bi FER‏ 3 ‎Ss TER Rasa, 3 3 p i‏ ااا ة: ® ‎io enna anaes TE 1 i‏ 8 2 اوتا ‎SL‏ 1 ل 2 ‎PU W‏ : : ل : 77 ‎i i 3‏ لا ا مدا ‎Veg 3 bE } 3 ZY qa‏ ‎i‏ : ; لد ‎Poa ow bane fll ag Sd‏ ‎Pam TELAT 5 2 ٍ َ 1 fs ¥ 3‏ 3 3 ‎i cored‏ 3 3 ات ‎Fa cu = i‏ 3 : ‎i he 3 I hee 1‏ = الا الا ا : : 8 ا ‎Aa 3 2 3 i‏ ا : : ا 8 ا ‎Lod > i i‏ 3 :
    ‎a. ¥ i i i EO Downy i A i‏ يا ا ‎i i‏ ‎SAE 1‏ :ا ةا اما ‎i i {oad‏ ‎i : : ide & i‏ ا 3 ‎i i’‏ : 3 ع ‎i 3 i Creer Poe 3 3 3 i‏ ‎i Se EE : i : 3‏ : ¥ ال 3 : ‎i we i Toe TI gE i 3 8 i‏ خلج ‎i Loe‏ ‎i i i‏ ل ‎TEM‏ الوا ة : 3 ‎ey‏ ل ‎recs 1 SE} TA Sas iOS NEE ١ 3 i i‏ ‎id i i i i i‏ مح 4ك ‎PT SEEN‏ ‎i 3 id 3‏ يخ 3 ‎i i i i‏
    ‎I. 3 2 4 oS 1 2 Ri nas‏ : : : الخ ‎a bs * - RRA‏ ا : “8 5 ‎v‏ ‏1 ا 1 ‎i i‏ فاق ‎i i‏ ‎i x 3 2 8 1 1 i 3‏ 3 : ‎i nada: ES LYRE 3‏ 2 © الج اج يج دج 3 3 3 الكل ا : ‎i Yo i‏ ‎foals + : 2 i : 0 8 0: SRR a % 3‏ 3 : : الك 49# سس ا 34م ‎i 3 RRR > 8 + fs i : 3 3‏ : : ‎i‏ ع & ‎i i ARERR SERA 3 8 i % i‏ : ‎saa 3 2 0 i onl 8 I i : 3‏ : : ‎EN 3 3 i i‏ لد تج عل ‎i cd or iow‏ ل : ‎REET RAT wil 3 3 i SE as ١ 5 i 1‏ ‎i‏ 8 ا ‎Tg‏ لمكي 2 81 ال ‎PORT‏ ‎i i i‏ 1 فى ] ‎FESR 3 SRI ToS Ie‏ بن 3 ‎Sw‏ ‎on 3 HY 5 3 0 = 2 3‏ 3 : . 3 ‎BRAIN i i BRN 1 i B: mmm‏ § ما ‎Po‏ 3 : ‎i 3 Froese 1‏ 3 2 تا ا : ‎i‏ : ‎i‏ يه ‎i i boa 3 i i i‏ ‎a § 3 = i 3 er = i § 3‏ 3 3 3 ‎i‏ الوا 1 أيه 3 : #خالية.. ‎i i‏ ‎i‏ > ا ي: «جج 1 ااا 2 ‎i i | asd s i‏ ‎i 3 SRE SE 3 i 8 pS 3 3‏ : : ‎a i { Ta i i cnn a +‏ ص 3 ‎i‏ 3 : ‎i‏ م ‎i 1 5: origins‏ 5 ل 8 ‎i i‏ ‎i cinta % i a ¥ 3‏ اج« 2 3 ‎eee‏ : : ‎i id‏ الل ة 5 . 3 ‎i coven‏ ‎i TERR i Eo i‏ مج 3 ‎i‏ ف : ‎i 3‏ ٍ : لام ‎IE‏ 3 اكلا 1 2 ‎de i‏ : الا وض 1 اللعكم ‎OWT‏ ‎HI Ha RR FR SUR 8 Las hag ia | i i i‏ ‎FEAR i Poa i ; RR‏ ا ‎i‏ ! ‎i‏ ااا لات 5 ‎i i { AAR Rt 3 i i‏ ‎SAS i 3‏ ا ‎wn o‏ 3 2 7 ب : : ‎is cad © 3 i Foose : 8 FA‏ 3 : ‎i‏ : ا ا ل : 5 ‎i‏ ما ‎i i‏ : ‎i } Doteasy 3 i i ee TT SOE 5 ® i‏ ‎i RRR 8‏ 5 ااي 2 تا : : : ‎i HE i ree 1 7# gg ; i‏ : ‎i 3 8 8 3‏ 3 ا اا 3 ‎i‏ : : ‎Fi 3 3 i Mrs oe i‏ ® 3 تح ‎i‏ 3 : ‎i SERRE pS i 3‏ اع 2 © 3 الت اا 3 3 ‎aggre? i i i i‏ ل عي 2 :2# ‎i vende 1 i‏ ‎Sd * i 3‏ ا : = 0 ‎co‏ : اج ةا : جم ‎Te i 5 ٍ i‏ اجر تل ‎PIE a [WL ss & 4 i a‏ ‎i 3 i i‏ 5 قر ‎ToS Lo REAR 3 BARR‏ ا ا ‎a wn o ae pe i 3‏ ا 8 ا 3 ‎v‏ ‎HE 5 i BE i 3 : resend‏ الا ا 8 ‎i i‏ لجسي سي ‎i PAS fa i 1 8# ! i‏ : ‎i‏ 1“ ا ا { ‎i 3 8 i 5 i‏ ‎i i Lonnie FO @, i‏ 3 ا + ‎i i‏ ‎aR i‏ ل : ا 2 ‎Yo‏ يا ‎i‏ : 3 : ين :© 3# : ا - 3 ؟ لمعي : : : ‎Enea Rg i‏ ا ‎i i Pow i snd: PEL‏ ‎i i 8 3 AAR CoE 3 B SEE‏ ‎Poms E cag 3 i = i‏ بحا ااا 3 § ‎i‏ : ‎SY 4 & i i‏ ا مج 2 اا ال ‎HN‏ 3 : لاي ل ‎i i eed AT io.‏ لمتحا دده ‎SR To 2 3 HER i i‏ { ا ا : ‎i i‏ 3 حي ‎WE‏ 1 ارا ‎CUR 1 SY a‏ ا ‎IW 3 SAR da a 3 a‏ : لمت 2 ‎i = 5 fie 3 WB‏ + 3 :28 : ال ا ‎i i HE‏ ‎i 3 i ce i‏ ا ‎i i fo, : i‏ ‎i i Loaded fh yo‏ ‎i i dedi 1 0" 8“ +‏ : ‎RL‏ ب الام مسي ليا ‎Soda 5 :‏ 0 ري اا كا ع معط ‎er‏ ‎Re‏ تب امسر ل : ‎a ad >‏ كد ال ‎cad i So‏ ‎a, YF‏ رجه ‎ERE hed‏ ‎Se LE‏ § محتية ‎av‏ الا 1 ‎FR‏ ‏: © محتجا عد هذه المرجلة ‎Saad‏ 5 ‎x NE‏ : ل لدي + + لكاي راضخ ‎Sadie‏ اسان كد ل مك ليع مج حي عدو ال ‎Efe) Ake‏ ‎a Pr PE‏ $3 ال ‎eo‏ قاد ‎aR FR‏ ‎Fate‏ د ‎hE‏ ألم ‎a Se‏ ; 538 الم 35 ‎cy‏ ‎IEE‏ مد ‎oF‏ عت ‎SF,‏ i 5 i REI ‏لبها ا‎ i nh & YS ‏و :د‎ iia 5 : ‏انعا‎ ‏اا‎ CHAN ‏العلاج قبل‎ CORY Eee ORY ‏العلاج بعد‎ Poems iu : : : ‏ماقا ااا" لاا لاا ات أل ل‎ peed] i > } i i ¥ } r i § i i i 8 2 0 } i ‏المسمتتتتتتا نت سق تتا م ل أ الس لا الس تتأ ا‎ ‏ل ا ا‎ 1 i : 3 ba en ‏ا‎ ¥ i Preah ‏ا‎ eda | do) St Sie LAY ‏حضون ا رمن‎ Dias Si | set 705000. ‏امول‎ ne 00568 ‏:سرك‎ pape | Se ‏كول وج برجة‎ STU MT PEA ‏ريون فر 0 غات | لاومو‎ | EEE 1 0080# ‏ا 1 | ا | لا‎ : i 3 3 1 i i \ = i i i } i } i 3 i 1 8 i { i 1 i i : Poem i : 1 1 ‏ا‎ i | i Powe i 3 1 ‏للللاالللللسال ساي ات‎ nnd i vf) i 5 i ow ‏و‎ 8 3 \ Lo : 2 RvA © ‏ا 7 ا‎ ‏33ت ا 8 ا‎ ang i CE | oaYe 1 vo 5 i } 3 } ne i a i eis 3 5 “a } i ! ‏امات ا‎ BP PoE ‏ين ا‎ i ‏اج ا‎ i | PAu ea Log | ose : io Sh Bl > ‏ب 3 ب‎ on : ‏لمعلا‎ | 3 34: ١ ١ i 1 {ons | i : ‏00م‎ | i i ! i i 3 { i i ‏ا‎ : i 2 i | i | i i i i : i BR fd {RODE ds bane : = {ogre ays omy i i oes wid *¥ EE ELAN ‏حن يو‎ i i ign i i {ge 15: fuss oo i MT Ee i @ Re) aad i i i 7 ‏الام الوق 1 # ال‎ ARH i po = ‏ب‎ ‎i } 3 oe.
    By ‏الع 0 لماي‎ : 1 \ 3 5 } ١ ١ poate ; Loa : ; ١ ‏أ إٍْ إٍْ‎ ١ i : : ; i | i i i i i i i i El rmdir bi sb sa ed we Ry fr b ‏ب (يتبع)‎ 5 x Yet MF hs
    ا ‎Es‏ ‎RN AAR 5‏ ‎Hg a‏ ‎ey RR A RAEN PRR‏ 8 ا 8 ‎an 0 RNa ea RAR a‏ لس ا ‎ay 0 8 faa‏ ا ‎aR‏ ‎aaa Raa Ny TONE Naa‏ = ‎a‏ 5 ا 5 ‎East poe } Sian‏ ‎La : LL 3 Le‏ ‎RE ESE RRR NR a No NRA Sas ENR ER‏ ‎Nae Sand NA Sa SNE 0‏ ‎SN Rnd ROE: Naa RNR Sa 3 AREY EE NN‏ ‎SAR Mate SR RT eo‏ احج ‎SNe RN NEN ge BS AY‏ ‎PERN RYAN EERE Shaan OR SERRE RN SERA‏ ‎EE SEAL REO RENN RO Ne RRR‏ ‎Boas Na bo Sasa SAN a Sea SERNA Nae SRE‏ ‎Ra Be AN BOONES Fn & ZION Phan RS‏ ل 0 ‎a aaa FRE ENG RNG‏ 01 ‎TR SEE Ny PERRY FORA AN‏ ‎Ne aa EON SEN SE aR SONNE‏ ل ل ل 5 ‎I Le a :‏ ] ‎a RN Ea Eats Re Ne Se‏ اد ا ‎P33 Lenn EK BAGO SAN‏ ‎LEARN RR RG FONE REN Ne‏ ا لا اتا 2 ‎BR EN ps a 3 ae‏ ‎aE Sh Sy OO Ete Ne ANY EEN‏ 5 ‎eda i Lee 3 Sa Wa‏ ‎EEE REAR SRN INR RY pre:‏ ‎BR: SEN Beta Naa FARES, Aa‏ ‎RR a Nu ZOU a aE‏ ‎a a ; BN RYN ay ER a‏ ‎man BRE LS‏ ‎ane ] Ta‏ | و ‎RR‏ ‎REIS BRR EDSON GR RR HEAR RS REN RRO SEAN FR ES WO‏ ‎Ba a RR: Ry AS Bg BRENNER:‏ | حكن ‎Rs EN‏ ‎EEN EAGER SNR: | Cima RA area SEER Se‏ ‎ay Cs ; ae pa‏ ا ا ا ا ‎TNR Banaue San HE‏ ‎RR SER REESE SEAN EN Eo NT‏ ‎Ve 7: EN aa SR fatale i RES Fe a‏ ‎as RR Ri RRA REO Ra Rats Be FR‏ 2 ا 0 ‎FR Rtn SIONS‏ ل ‎Peas Pa EAS Sa‏ ا 1 ‎Re Ea Flee le‏ 1 ‎Son ROBE SR ORR RRR RR a RRR 0‏ ا 1 ا أ ا ااا ال 1 : ا لا : ااا ل لح ‎i 0 a as = Lana 3 PoE as‏ ‎Ra Rn RRL EARN ENR a a‏ 0 ا 1 ‎oy‏ ‎Re Sa‏ ا ‎j > ER ERS og Ea rae‏ 8 ا لا ا اد 8 ‎Ree 1 Soa‏ تت ا 1 + ‎ENN RS CONE ER PERRI) BIR SR 0 2‏ ل ‎i ER ea Rs BL‏ ااا ‎ES i‏ 0 5 ا ‎SSRIS‏ اا الا ‎NN Sa BE‏ ا ا ل ‎Beas EE Na‏ ‎a En aE JON ENE Nae‏ ‎ERE esd Choa : ea‏ اا ال اح ‎SEIN BER Re‏ ‎BS a -‏ مح ‎CE Ee LL Lae‏ ‎CE Eh fan BERS NR SSE ee ENS‏ ا : ا ا 8 ‎Sea‏ ‎Lae‏ د 5 ‎Beet Boe a‏ ‎Ra aL ae‏ ل ‎naa‏ ‏اا : ا 0 ل + و اا ا 5 ‎ER a 0 Cae‏ ا ‎PE Lo ae Cy‏ : ‎RR 0 RNR: Rr aN NN NR‏ ‎ag SR HE Bo RY: EAR RRR SRY SEAN‏ ا : ‎Sey Bae gd‏ 78« ‎a Celene : Sh ey‏ 0 ‎REE EE Bn : Codie‏ حي ‎yy‏ ‎ae Re‏ 9 ا ل ‎EE‏ : ‎a, Ea Se Sn Naa‏ ‎Ls EER ERE 10 Aidan Naa‏ ‎SN TR SE FRY DS SERRE SEN wr‏ ‎BR fe pn Loe he‏ + ‎Sh iin SEN :‏ ‎BREE SRNR‏ ا 0 ‎+R SEE "| J Posi 3‏ بان 1 : 1 0 : | » ‎gq a = 9 3‏ د ‎x‏ ! ىو ‎KE‏ 5 £3 ‎RR‏ - = = 1 يا ‎dn aa 3:‏ ل ‎Ry gure i: 8 Se‏ 8 اد ‎NB HE Lae‏ . د ا ‎SENNA Re Nein‏ ل 1 ‎pa ea % aaa‏ 3 ‎Rs a RR NS EAR Nas‏ ‎Ea a Tua SN Bars Nan‏ ‎SENN‏ ا ‎SERRE at Dae aa Ea‏ ‎EE Ee SB Swan i fee‏ . ‎ar Na SR RRR RENE‏ بج 00 ‎Bas‏ 8 ‎NEN BOE SR‏ ا اللا ‎BNR CHEE SES‏ ال ل ا > ‎Soap ENR Ra) as NR ae‏ ‎a Fo Pa‏ ا ‎Be Ea Sa‏ ‎SR fans a‏ :2 0 ا ‎Sn EAR:‏ ‎Ea ERA 8 RE NNN‏ و ‎RR‏ ا ‎RR‏ . ‎od Reade ER SNR Soon 3 SEEN Res‏ ‎SRE RRR Sa BR Re So EN‏ ا + ‎oF aa PR SH aN‏ ال ‎Me Hs a‏ ال ‎EER‏ ‎SESE SRN BE RS RRR SAE RY i SRN‏ 8 ا ‎A CEE : RAEN BES: Nee‏ ‎oh A Rt PRB Nowa RE a‏ ا ‎Sa‏ ا ‎Eade Pa‏ ا ا ال ااي ا ‎REE‏ 0 ال ‎ad BEE NRE‏ : ل : ل : ‎SEE Ep SR ANE RR a Sage‏ ا ا ا سس 5 ‎Ba na SNES‏ ‎Sistas ESR 8 naman : Sano i‏ 5% ‎BR soy :‏ 5 ا ب ‎IO Co‏ ‎Nan ERE 8 to‏ ا ‎ee REE‏ ‎ER EY ERR eR: Eas Es BE Loam‏ 8 ‎SPE SEE PASE 28 py REO AR phen RR SEE‏ ‎ws SEEN SA EER RR Rat Seat SR‏ الا ا ا 5 اتا 8 ‎Sa Nea‏ هد ‎leg Ba Ce Lana SS‏ : ‎na HER SR Re RN gor 3 SER NESE‏ ل : : ‎uy SNS Ba as Gm oer‏ . ع ا ا ‎wr No i Co sl‏ ; ‎EN aa‏ 3 ااا لاد ‎a‏ 1 ‎Ba Fa SARE ea BY pa :‏ ‎SNE ERR NE FE a ERS BRE‏ ل“ 3 ‎Sh Raa Rr a ee 0 Rta as‏ ا 8 ‎pe‏ ‎ie + I at fd FEDS Rpt Sa SE a‏ ‎BER SHE Re Ee Er Ra EN‏ : = ‎x SR SRR Ee Ra Ee Pa aa‏ ٍ ا ‎Bann fi LEE Bd STE ee‏ ‎i SHEET Gelding B SoG EREs RR‏ ل ل ا * متمد ا ‎SEE ST 03 BEEN Ra BOs Er‏ 4 ا 5 ‎a‏ ا 5 ل ‎a‏ ا 5+ ‎ER St BS YY EAN Sa‏ ا ‎Rr RRR pay pebs SEEN >‏ 5 ‎ete Ree SEER 0‏ 0 ل ‎gen ea‏ ا ا اا ل 0 ‎SET Se PEE‏ ا 8 0 حت ‎EIR SR ESR SSR Te SRN 0 SNA‏ مس ‎BE‏ ‎pa RRR BN RY‏ 0 ايا 0 ‎RISEN‏ ا 0 ‎Bn Ea Ra oe so Na‏ ‎ER BS ERNE ed a Ne‏ ‎Baa He Ng ae SN i AER :‏ ‎Dea: Fa Se SBR Aug BRED Es aE Bro‏ ل 0 ‎ER‏ ‎fs RG A REN SE ENR 6‏ ‎EN Ry‏ ل ا ا 0 ‎BR PD REE RE ae So‏ داج ‎BRR SER: Eta. 2 RA Re‏ : ‎EARNER SEH‏ م ‎Sp Ss Sa‏ ا ‎ER‏ 5 ‎ERR SR RE Ee Sa a aay‏ ‎i Shad :‏ اا ‎+B El Coad LE ae‏ ‎Sam Panto He ae‏ 1 ا : ‎or En Gn Ee‏ ‎fe a Ea REE Sa 2 Sas Taner‏ 3 ‎He SE Nia Jee Rm :‏ ‎PASO SER ER AR SRR ERR‏ ا ل ل اهنا ‎Sn EE Wenn ER a‏ ل 0 ‎Sm RR Nae : Baas REE‏ > ‎RL EEE Ene Be Ee BE‏ ا ل > ‎Ea‏ ل ا 8 ‎RR SRO RR a‏ 0 *
    Yo ‏شكل‎ ‎Yoo rn ‏الآ أ‎ 3 £3 PMO# 4 As PPMO# 1 LR 3 © ‏سس‎ ‎= £ Fare 2 ¥ A Co ee wr 2 AE + shine SE eel] ‏ال‎
    ‎5 . Yo ¥ 0 & 8 Ye ¥ ge ‏التركيز (ميكرو مولار)‎
    ١ ‏شكل‎ ‎Lo Yeas ‏ض‎ > £3 1 4 a PPMO#1 1 nes 3 2 fd saad A 2 81 . ps 5 3 Sk > Ya Cay mrt om I COGENT I - »» BY a | ‏نام‎ + ‏ال اا‎ 7 J 1 RS bl ay SR ‏*ه؟ )ا‎ Yo Yo Ye En ‏التركيز (ميكزو مولار)‎
    الحاضهة الهيلة السعودية الملضية الفكرية ‎Swed Authority for intallentual Property pW‏ ‎RE‏ .¥ + \ ا 0 § ام 5 + < ‎Ne‏ ‎ge‏ ”بن اج > عي كي الج دا لي ايام ‎TEE‏ ‏ببح ةا ‎Nase eg‏ + ‎Ed - 2 -‏ 3 .++ .* وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها ‎of‏ سقوطها لمخالفتها ع لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف ع النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية. »> صادرة عن + ب ب ‎٠.‏ ب الهيئة السعودية للملكية الفكرية > > > ”+ ص ب ‎101١‏ .| لريا ‎1*١ uo‏ ؛ المملكة | لعربية | لسعودية ‎SAIP@SAIP.GOV.SA‏
SA519402154A 2016-12-19 2019-06-17 مترافقات أوليجومرات تخطي الإكسون للحَثَل العَضَلِيّ SA519402154B1 (ar)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662436182P 2016-12-19 2016-12-19
US201762443476P 2017-01-06 2017-01-06
US201762479173P 2017-03-30 2017-03-30
US201762562080P 2017-09-22 2017-09-22

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA519402154B1 true SA519402154B1 (ar) 2022-12-19

Family

ID=61006315

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA519402154A SA519402154B1 (ar) 2016-12-19 2019-06-17 مترافقات أوليجومرات تخطي الإكسون للحَثَل العَضَلِيّ

Country Status (27)

Country Link
US (4) US10888578B2 (ar)
EP (1) EP3554553B1 (ar)
JP (3) JP7118063B2 (ar)
KR (2) KR102552428B1 (ar)
CN (1) CN110290812B (ar)
AU (1) AU2017382723A1 (ar)
BR (1) BR112019012647A2 (ar)
CA (1) CA3046793A1 (ar)
CO (1) CO2019007397A2 (ar)
DK (1) DK3554553T3 (ar)
ES (1) ES2927079T3 (ar)
HR (1) HRP20220943T1 (ar)
HU (1) HUE059843T2 (ar)
IL (2) IL267244B (ar)
LT (1) LT3554553T (ar)
MD (1) MD3554553T2 (ar)
MX (1) MX2019006882A (ar)
MY (1) MY195801A (ar)
NZ (1) NZ755416A (ar)
PL (1) PL3554553T3 (ar)
PT (1) PT3554553T (ar)
RS (1) RS63610B1 (ar)
SA (1) SA519402154B1 (ar)
SG (1) SG10202012839TA (ar)
TW (1) TWI760402B (ar)
WO (1) WO2018118599A1 (ar)
ZA (1) ZA201904092B (ar)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI541024B (zh) 2010-09-01 2016-07-11 日本新藥股份有限公司 反義核酸
CN109563114B (zh) 2016-05-24 2022-08-12 萨勒普塔医疗公司 用于制备寡聚物的方法
CN109311920B (zh) 2016-05-24 2021-11-09 萨勒普塔医疗公司 制备磷酸二酰胺吗啉代寡聚物的方法
BR112019012647A2 (pt) * 2016-12-19 2019-11-19 Sarepta Therapeutics Inc conjugados de oligômero de salto de éxon para distrofia muscular
WO2018118627A1 (en) 2016-12-19 2018-06-28 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
AU2017382773A1 (en) * 2016-12-19 2019-08-01 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
GB201711809D0 (en) * 2017-07-21 2017-09-06 Governors Of The Univ Of Alberta Antisense oligonucleotide
GB201821269D0 (en) 2018-12-28 2019-02-13 Nippon Shinyaku Co Ltd Myostatin signal inhibitor
WO2020214763A1 (en) * 2019-04-18 2020-10-22 Sarepta Therapeutics, Inc. Compositions for treating muscular dystrophy
WO2020257489A1 (en) * 2019-06-19 2020-12-24 Sarepta Therapeutics, Inc. Methods for treating muscular dystrophy
KR20220122673A (ko) 2019-12-26 2022-09-02 니뽄 신야쿠 가부시키가이샤 엑손 50의 스키핑을 유도하는 안티센스 핵산
JPWO2021172498A1 (ar) 2020-02-28 2021-09-02
EP4330395A1 (en) 2021-04-30 2024-03-06 Sarepta Therapeutics, Inc. Treatment methods for muscular dystrophy
TW202307208A (zh) 2021-06-23 2023-02-16 日商日本新藥股份有限公司 反義寡聚物之組合
AU2022306820A1 (en) 2021-07-08 2024-01-04 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Nephrotoxicity reducing agent
WO2023282346A1 (ja) 2021-07-08 2023-01-12 日本新薬株式会社 析出抑制剤
TW202308664A (zh) 2021-07-08 2023-03-01 日商日本新藥股份有限公司 腎毒性減輕劑
WO2023178230A1 (en) 2022-03-17 2023-09-21 Sarepta Therapeutics, Inc. Phosphorodiamidate morpholino oligomer conjugates

Family Cites Families (177)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH445129A (fr) 1964-04-29 1967-10-15 Nestle Sa Procédé pour la préparation de composés d'inclusion à poids moléculaire élevé
US3459731A (en) 1966-12-16 1969-08-05 Corn Products Co Cyclodextrin polyethers and their production
US3426011A (en) 1967-02-13 1969-02-04 Corn Products Co Cyclodextrins with anionic properties
US3453257A (en) 1967-02-13 1969-07-01 Corn Products Co Cyclodextrin with cationic properties
US3453259A (en) 1967-03-22 1969-07-01 Corn Products Co Cyclodextrin polyol ethers and their oxidation products
US4235871A (en) 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
US5217866A (en) 1985-03-15 1993-06-08 Anti-Gene Development Group Polynucleotide assay reagent and method
US5521063A (en) 1985-03-15 1996-05-28 Antivirals Inc. Polynucleotide reagent containing chiral subunits and methods of use
US5506337A (en) 1985-03-15 1996-04-09 Antivirals Inc. Morpholino-subunit combinatorial library and method
EP0215942B1 (en) 1985-03-15 1995-07-12 Antivirals Inc. Polynucleotide assay reagent and method
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US4737323A (en) 1986-02-13 1988-04-12 Liposome Technology, Inc. Liposome extrusion method
US5525465A (en) 1987-10-28 1996-06-11 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Oligonucleotide-polyamide conjugates and methods of production and applications of the same
US5087617A (en) 1989-02-15 1992-02-11 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for treatment of cancer using oligonucleotides
US5670617A (en) 1989-12-21 1997-09-23 Biogen Inc Nucleic acid conjugates of tat-derived transport polypeptides
KR0166088B1 (ko) 1990-01-23 1999-01-15 . 수용해도가 증가된 시클로덱스트린 유도체 및 이의 용도
US5714331A (en) 1991-05-24 1998-02-03 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility
US5719262A (en) 1993-11-22 1998-02-17 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having amino acid side chains
US5539082A (en) 1993-04-26 1996-07-23 Nielsen; Peter E. Peptide nucleic acids
GB9209032D0 (en) 1992-04-25 1992-06-10 Ciba Geigy Ag New peptide derivatives
EP0786522A2 (en) 1992-07-17 1997-07-30 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic RNA molecules for treatment of stenotic conditions
JP2702285B2 (ja) 1992-08-21 1998-01-21 バイオジェン，インコーポレイテッド Ｔａｔ由来の輸送ポリペプチド
KR100316205B1 (ko) 1993-01-07 2002-04-24 아브람 엠. 골드핑거 평활근세포의증식을조절하기위한c-myc의안티센스억제
EP0698092B1 (en) 1993-05-11 2007-07-25 The University Of North Carolina At Chapel Hill Antisense oligonucleotides which combat aberrant splicing and methods of using the same
US5820873A (en) 1994-09-30 1998-10-13 The University Of British Columbia Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof
US5885613A (en) 1994-09-30 1999-03-23 The University Of British Columbia Bilayer stabilizing components and their use in forming programmable fusogenic liposomes
US5753613A (en) 1994-09-30 1998-05-19 Inex Pharmaceuticals Corporation Compositions for the introduction of polyanionic materials into cells
IL115849A0 (en) 1994-11-03 1996-01-31 Merz & Co Gmbh & Co Tangential filtration preparation of liposomal drugs and liposome product thereof
US5849727A (en) 1996-06-28 1998-12-15 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Compositions and methods for altering the biodistribution of biological agents
ATE251913T1 (de) 1997-05-21 2003-11-15 Univ Leland Stanford Junior Zusammensetzung und verfahren zur verzögerung des transports durch biologische membranen
US6329501B1 (en) 1997-05-29 2001-12-11 Auburn University Methods and compositions for targeting compounds to muscle
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US7572582B2 (en) 1997-09-12 2009-08-11 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
WO1999042091A2 (en) 1998-02-19 1999-08-26 Massachusetts Institute Of Technology Use of polycations as endosomolytic agents
US6683173B2 (en) 1998-04-03 2004-01-27 Epoch Biosciences, Inc. Tm leveling methods
CA2340884A1 (en) 1998-08-25 2000-03-02 Human Genome Sciences, Inc. 49 human secreted proteins
US6210892B1 (en) 1998-10-07 2001-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Alteration of cellular behavior by antisense modulation of mRNA processing
JP2000125448A (ja) 1998-10-14 2000-04-28 Yazaki Corp 電気接続箱
JP2002535015A (ja) 1999-01-29 2002-10-22 エイブイアイ バイオファーマ， インコーポレイテッド 標的ｒｎａを検出するための非侵襲性方法
JP2000256547A (ja) 1999-03-10 2000-09-19 Sumitomo Dow Ltd 耐熱性プラスチックカード用樹脂組成物
US7084125B2 (en) 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
KR20020013519A (ko) 1999-04-08 2002-02-20 추후제출 보편적 및/또는 축퇴성 염기를 포함하는 안티센스올리고뉴클레오티드
KR100782896B1 (ko) 1999-05-04 2007-12-06 엑시콘 에이/에스 Ｌ-리보-ｌｎａ 유사체
JP2000325085A (ja) 1999-05-21 2000-11-28 Masafumi Matsuo デュシェンヌ型筋ジストロフィー治療剤
CA2374499A1 (en) 1999-05-24 2000-11-30 Avi Biopharma, Inc. Antisense to c-myc for treatment of polycystic kidney disease
US6303573B1 (en) 1999-06-07 2001-10-16 The Burnham Institute Heart homing peptides and methods of using same
US6669951B2 (en) 1999-08-24 2003-12-30 Cellgate, Inc. Compositions and methods for enhancing drug delivery across and into epithelial tissues
US7229961B2 (en) 1999-08-24 2007-06-12 Cellgate, Inc. Compositions and methods for enhancing drug delivery across and into ocular tissues
AU769315B2 (en) 1999-08-24 2004-01-22 Cellgate, Inc. Enhancing drug delivery across and into epithelial tissues using oligo arginine moieties
US20030104622A1 (en) 1999-09-01 2003-06-05 Robbins Paul D. Identification of peptides that facilitate uptake and cytoplasmic and/or nuclear transport of proteins, DNA and viruses
US7070807B2 (en) 1999-12-29 2006-07-04 Mixson A James Branched histidine copolymers and methods for using same
WO2001047496A1 (en) 1999-12-29 2001-07-05 Mixson A James Histidine copolymer and methods for using same
US20020009491A1 (en) 2000-02-14 2002-01-24 Rothbard Jonathan B. Compositions and methods for enhancing drug delivery across biological membranes and tissues
US6653467B1 (en) 2000-04-26 2003-11-25 Jcr Pharmaceutical Co., Ltd. Medicament for treatment of Duchenne muscular dystrophy
US6727355B2 (en) 2000-08-25 2004-04-27 Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. Pharmaceutical composition for treatment of Duchenne muscular dystrophy
US6559279B1 (en) 2000-09-08 2003-05-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Process for preparing peptide derivatized oligomeric compounds
US20040170955A1 (en) 2000-09-08 2004-09-02 Wadih Arap Human and mouse targeting peptides identified by phage display
EP1191097A1 (en) 2000-09-21 2002-03-27 Leids Universitair Medisch Centrum Induction of exon skipping in eukaryotic cells
US20040171109A1 (en) 2000-11-10 2004-09-02 Dominik Haudenschild IL-17 receptor-like protein, uses thereof, and modulation of catabolic activity of il-17 cytokines on bone and cartilage
WO2002063280A1 (en) 2001-02-06 2002-08-15 Auburn University Ligand sensor devices and uses thereof
WO2002062989A2 (en) 2001-02-08 2002-08-15 Sequitur, Inc. Methods of light activated release 0f ligands from endosomes
US7585834B2 (en) 2001-02-16 2009-09-08 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Transporters comprising spaced arginine moieties
US7456146B2 (en) 2001-05-09 2008-11-25 Ghc Research Development Corporation Lytic peptide prodrugs
CA2447052A1 (en) 2001-05-17 2002-11-21 Avi Biopharma, Inc. Combined approach to treatment of cancer using a c-myc antisense oligomer
JP3735292B2 (ja) 2001-07-26 2006-01-18 三菱重工業株式会社 ダイエット効果のある健康食品および製剤
US6645974B2 (en) 2001-07-31 2003-11-11 Merck & Co., Inc. Androgen receptor modulators and methods for use thereof
US20090075377A1 (en) 2001-08-03 2009-03-19 Arbor Vita Corporation Molecular interactions in cells
EP1446412B1 (en) 2001-09-04 2012-03-07 Exiqon A/S Novel lna compositions and uses thereof
MXPA04005611A (es) 2001-12-11 2005-04-19 Cellgate Inc Reactivos y conjugados de transporte de guanidinio.
KR100464261B1 (ko) 2002-01-24 2005-01-03 주식회사 파나진 Ｐｎａ 올리고머를 합성하기 위한 신규한 단량체 및 그의제조방법
KR20030084444A (ko) 2002-04-26 2003-11-01 주식회사 파나진 Ｐｎａ 올리고머를 합성하기 위한 신규한 단량체 및 그의제조방법
US7569575B2 (en) 2002-05-08 2009-08-04 Santaris Pharma A/S Synthesis of locked nucleic acid derivatives
WO2004043977A2 (en) 2002-11-05 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2’-fluoro substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations
CA2507125C (en) 2002-11-25 2014-04-22 Masafumi Matsuo Ena nucleic acid pharmaceuticals capable of modifying splicing of mrna precursors
US7482016B2 (en) 2003-03-19 2009-01-27 The J. David Gladstone Institutes Immunogenic compositions comprising HIV-1 acetylated Tat polypeptides
CA2524255C (en) 2003-03-21 2014-02-11 Academisch Ziekenhuis Leiden Modulation of exon recognition in pre-mrna by interfering with the secondary rna structure
CA2523672C (en) 2003-04-29 2012-07-17 Avi Biopharma, Inc. Compositions for enhancing transport of molecules into cells
SI1641822T1 (sl) 2003-07-08 2013-08-30 Genentech, Inc. IL-17 A/F heterologni polipeptidi in njihove terapevtske uporabe
US7211668B2 (en) 2003-07-28 2007-05-01 Panagene, Inc. PNA monomer and precursor
US20050203041A1 (en) 2003-09-23 2005-09-15 Mourich Dan V. Antisense compound and method for selectively killing activated T cells
US20050222068A1 (en) 2003-10-23 2005-10-06 Mourich Dan V Method and antisense composition for selective inhibition of HIV infection in hematopoietic cells
US7786151B2 (en) 2004-01-09 2010-08-31 Kinopharma, Inc. Therapeutic composition of treating abnormal splicing caused by the excessive kinase induction
WO2005072527A2 (en) 2004-01-23 2005-08-11 Avi Biopharma, Inc. Antisense oligomers and methods for inducing immune tolerance and immunosuppression
US20060078542A1 (en) 2004-02-10 2006-04-13 Mah Cathryn S Gel-based delivery of recombinant adeno-associated virus vectors
US7402574B2 (en) 2004-03-12 2008-07-22 Avi Biopharma, Inc. Antisense composition and method for treating cancer
US20050288246A1 (en) 2004-05-24 2005-12-29 Iversen Patrick L Peptide conjugated, inosine-substituted antisense oligomer compound and method
WO2005117992A2 (en) 2004-05-30 2005-12-15 Cemines, Inc. Controlled delivery of therapeutic compounds
EP4272748A3 (en) 2004-06-28 2024-03-27 The University Of Western Australia Antisense oligonucleotides for inducing exon skipping and methods of use thereof
EP1789553B1 (en) 2004-06-30 2014-03-26 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Oligonucleotides comprising a non-phosphate backbone linkage
EP2801366A3 (en) 2004-09-02 2015-04-29 Cognosci, Inc. Improved apo E analogs and methods for their use
WO2006031996A2 (en) 2004-09-14 2006-03-23 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Targeting viruses using a modified sindbis glycoprotein
US8129352B2 (en) 2004-09-16 2012-03-06 Avi Biopharma, Inc. Antisense antiviral compound and method for treating ssRNA viral infection
US8357664B2 (en) 2004-10-26 2013-01-22 Avi Biopharma, Inc. Antisense antiviral compound and method for treating influenza viral infection
US7524829B2 (en) 2004-11-01 2009-04-28 Avi Biopharma, Inc. Antisense antiviral compounds and methods for treating a filovirus infection
NZ538097A (en) 2005-02-07 2006-07-28 Ovita Ltd Method and compositions for improving wound healing
CA2596506C (en) 2005-02-09 2021-04-06 Avi Biopharma, Inc. Antisense composition and method for treating muscle atrophy
AU2006214473A1 (en) 2005-02-14 2006-08-24 Wyeth Interleukin-17F antibodies and other IL-17F signaling antagonists and uses therefor
AU2006237727B2 (en) 2005-04-22 2012-06-28 Academisch Ziekenhuis Leiden Modulation of exon recognition in pre-mRNA by interfering with the binding of SR proteins and by interfering with secondary RNA structure.
EP1874800A4 (en) 2005-04-26 2009-11-18 Karyon Ctt Ltd DIAGNOSTIC AND THERAPEUTIC AGENTS
US7790694B2 (en) 2005-07-13 2010-09-07 Avi Biopharma Inc. Antisense antibacterial method and compound
US8067571B2 (en) 2005-07-13 2011-11-29 Avi Biopharma, Inc. Antibacterial antisense oligonucleotide and method
AU2006267051B2 (en) 2005-07-13 2013-03-07 Sarepta Therapeutics, Inc. Antisense antibacterial method and compound
WO2007030691A2 (en) 2005-09-08 2007-03-15 Avi Biopharma, Inc. Antisense antiviral compound and method for treating picornavirus infection
EP1937278B1 (en) 2005-09-08 2012-07-25 AVI BioPharma, Inc. Antisense antiviral compound and method for treating picornavirus infection
AU2006297304B2 (en) 2005-09-29 2012-05-17 Medimmune, Llc Method of identifying membrane LG specific antibodies and use thereof for targeting immunoglobulin-producing precursor cells
US8501704B2 (en) 2005-11-08 2013-08-06 Sarepta Therapeutics, Inc. Immunosuppression compound and treatment method
WO2007056466A2 (en) 2005-11-08 2007-05-18 Avi Biopharma, Inc. Immunosuppression compound and treatment method
KR101789603B1 (ko) 2005-11-10 2017-11-21 더 유니버시티 오브 노쓰 캐롤라이나 엣 채플 힐 Ｔｎｆ 수퍼패밀리 수용체에 대한 스플라이스 스위칭올리고머 및 염증성 질환 치료용 약제학적 조성물
ATE467688T1 (de) 2006-03-07 2010-05-15 Avi Biopharma Inc Antivirale antisense-verbindung und verfahren zur behandlung von arenavirus-infektion
JP2010505741A (ja) 2006-05-10 2010-02-25 エイブイアイ バイオファーマ， インコーポレイテッド カチオン性のサブユニット間結合を有するオリゴヌクレオチドアナログ
US8785407B2 (en) 2006-05-10 2014-07-22 Sarepta Therapeutics, Inc. Antisense antiviral agent and method for treating ssRNA viral infection
WO2007133105A1 (en) 2006-05-17 2007-11-22 Svetlana Anatolevna Sokolova Transport means
EP2124968A4 (en) 2006-06-30 2013-10-23 Lakewood Amedex Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF MUSCLE ATROPHY
DK2049664T3 (da) 2006-08-11 2012-01-02 Prosensa Technologies Bv Enkeltstrengede oligonukleotider, som er komplementære til repetitive elementer, til behandling af med DNA-repetitiv-ustabilitet associerede lidelser
US20080199961A1 (en) 2006-08-25 2008-08-21 Avi Biopharma, Inc. ANTISENSE COMPOSITION AND METHOD FOR INHIBITION OF miRNA BIOGENESIS
US20080267978A1 (en) 2006-08-28 2008-10-30 Mary Zutter Anti-angiogenic targets for cancer therapy
JP5926475B2 (ja) 2006-09-21 2016-05-25 ユニバーシティー オブ ロチェスター 筋緊張性ジストロフィーのためのタンパク質置換治療に関する組成物および方法
FR2908999B1 (fr) 2006-11-29 2012-04-27 Biomerieux Sa Nouveau medicament destine a l'inhibition, la prevention ou le traitement de la polyarthrite rhumatoide.
EP1938802A1 (en) 2006-12-22 2008-07-02 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Interfering RNAs targeting pro-inflammatory cytokines
US20100016215A1 (en) 2007-06-29 2010-01-21 Avi Biopharma, Inc. Compound and method for treating myotonic dystrophy
ES2694726T3 (es) 2007-06-29 2018-12-26 Sarepta Therapeutics, Inc. Conjugados peptídicos específicos de tejido y métodos
JP2010533170A (ja) 2007-07-12 2010-10-21 プロセンサ テクノロジーズ ビー．ブイ． 化合物を種々の選択された臓器、組織又は腫瘍細胞に標的化するための分子
US20110300154A1 (en) 2007-08-21 2011-12-08 Children's Medical Center Corporation Treatment of airway hyperreactivity
EP2203173B1 (en) 2007-10-26 2015-12-23 Academisch Ziekenhuis Leiden Means and methods for counteracting muscle disorders
WO2009064471A1 (en) 2007-11-15 2009-05-22 Avi Biopharma, Inc. Method of synthesis of morpholino oligomers
US8299206B2 (en) 2007-11-15 2012-10-30 Avi Biopharma, Inc. Method of synthesis of morpholino oligomers
US8076476B2 (en) 2007-11-15 2011-12-13 Avi Biopharma, Inc. Synthesis of morpholino oligomers using doubly protected guanine morpholino subunits
AU2008345033B2 (en) 2007-12-28 2014-04-03 Sarepta Therapeutics, Inc. Immunomodulatory agents and methods of use
WO2009127230A1 (en) 2008-04-16 2009-10-22 Curevac Gmbh MODIFIED (m)RNA FOR SUPPRESSING OR AVOIDING AN IMMUNOSTIMULATORY RESPONSE AND IMMUNOSUPPRESSIVE COMPOSITION
EP2119783A1 (en) 2008-05-14 2009-11-18 Prosensa Technologies B.V. Method for efficient exon (44) skipping in Duchenne Muscular Dystrophy and associated means
US20110130346A1 (en) 2008-05-30 2011-06-02 Isis Innovation Limited Peptide conjugates for delvery of biologically active compounds
US8084601B2 (en) 2008-09-11 2011-12-27 Royal Holloway And Bedford New College Royal Holloway, University Of London Oligomers
JP5864257B2 (ja) 2008-10-24 2016-02-17 サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｄｍｄのための複数のエキソンスキッピング組成物
ES2532634T5 (es) 2008-10-27 2018-04-30 Biomarin Technologies B.V. Procedimientos y medios para el salto eficiente del exón 45 en el pre-ARNm de la distrofia muscular de Duchenne
KR101881596B1 (ko) 2008-12-02 2018-07-24 웨이브 라이프 사이언시스 재팬 인코포레이티드 인 원자 변형된 핵산의 합성 방법
CA2746508A1 (en) 2008-12-17 2010-07-15 Avi Biopharma, Inc. Antisense compositions and methods for modulating contact hypersensitivity or contact dermatitis
JP2012523225A (ja) 2009-04-10 2012-10-04 アソシアシオン・アンスティテュ・ドゥ・ミオロジー 疾患の処置のためのトリシクロ−ｄｎａアンチセンスオリゴヌクレオチド、組成物及び方法
US20120046342A1 (en) 2009-04-24 2012-02-23 Prosensa Technologies B.V. Oligonucleotide comprising an inosine for treating dmd
US20110269665A1 (en) 2009-06-26 2011-11-03 Avi Biopharma, Inc. Compound and method for treating myotonic dystrophy
SG177564A1 (en) 2009-07-06 2012-02-28 Ontorii Inc Novel nucleic acid prodrugs and methods of use thereof
US8470987B2 (en) 2009-09-16 2013-06-25 Chiralgen, Ltd. Protective group for synthesis of RNA and derivative
CN105838714B (zh) 2009-11-12 2020-07-17 西澳大利亚大学 反义分子和治疗疾病的方法
CA3090304A1 (en) 2010-05-13 2011-11-17 Sarepta Therapeutics, Inc. Antisense modulation of interleukins 17 and 23 signaling
AU2011257980B2 (en) 2010-05-28 2016-06-30 Sarepta Therapeutics, Inc. Oligonucleotide analogues having modified intersubunit linkages and/or terminal groups
TWI541024B (zh) 2010-09-01 2016-07-11 日本新藥股份有限公司 反義核酸
WO2012039448A1 (ja) 2010-09-24 2012-03-29 株式会社キラルジェン 不斉補助基
JP2014507143A (ja) 2011-02-08 2014-03-27 ザ シャーロット−メクレンバーグ ホスピタル オーソリティ ドゥーイング／ビジネス／アズ キャロライナズ ヘルスケア システム アンチセンスオリゴヌクレオチド
US9161948B2 (en) * 2011-05-05 2015-10-20 Sarepta Therapeutics, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
KR102339196B1 (ko) * 2011-05-05 2021-12-15 사렙타 쎄러퓨틱스, 인코퍼레이티드 펩타이드 올리고뉴클레오타이드 접합체
US9607308B2 (en) 2011-06-29 2017-03-28 American Express Travel Related Services Company, Inc. Spend based digital ad targeting and measurement
DK2581448T3 (en) 2011-10-13 2015-04-27 Ass Inst De Myologie Tricyclo-DNA phosphorothioate
AU2012345638C1 (en) 2011-11-30 2018-10-18 Sarepta Therapeutics, Inc. Induced exon inclusion in spinal muscle atrophy
CA2861247C (en) 2011-12-28 2021-11-16 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Antisense nucleic acids
CN104203289B (zh) 2012-01-27 2020-11-03 比奥马林技术公司 用于治疗杜兴型肌营养不良症和贝克型肌营养不良症的具有改善特性的rna调节性寡核苷酸
DE102012101676A1 (de) 2012-02-29 2013-08-29 Klaus-Dieter Rösler Verfahren und Vorrichtung zum Bearbeiten von Formularen mit einer Datenverarbeitungsanlage
AU2013285698A1 (en) * 2012-07-03 2015-02-19 Biomarin Technologies B.V. Oligonucleotide for the treatment of muscular dystrophy patients
EP2872485B1 (en) 2012-07-13 2020-12-16 Wave Life Sciences Ltd. Asymmetric auxiliary group
KR102213609B1 (ko) 2012-07-13 2021-02-08 웨이브 라이프 사이언시스 리미티드 키랄 제어
KR20200143739A (ko) 2012-12-20 2020-12-24 사렙타 쎄러퓨틱스 인코퍼레이티드 근위축증을 치료하기 위한 개선된 엑손 스키핑 조성물
EA035882B1 (ru) 2013-03-14 2020-08-27 Сарепта Терапьютикс, Инк. Антисмысловые олигонуклеотиды, обеспечивающие пропуск экзонов, для лечения мышечной дистрофии
DK2970964T3 (en) 2013-03-14 2019-04-01 Sarepta Therapeutics Inc EXON SKIPPING COMPOSITIONS FOR TREATMENT OF MUSCLE DYROPHY
BR112015022998A2 (pt) * 2013-03-15 2017-11-14 Sarepta Therapeutics Inc composições melhoradas para o tratamento de distrofia muscular
US20150197534A1 (en) * 2013-09-05 2015-07-16 Sarepta Therapeutics, Inc. Antisense-induced exon2 inclusion in acid alpha-glucosidase
JPWO2015108048A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤
JPWO2015108046A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 抗アレルギー作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗アレルギー剤
WO2015108047A1 (ja) 2014-01-15 2015-07-23 株式会社新日本科学 免疫誘導活性を有するキラル核酸アジュバンド及び免疫誘導活性剤
AU2015207773B2 (en) 2014-01-16 2021-06-17 Wave Life Sciences Ltd. Chiral design
RU2730681C2 (ru) 2014-03-12 2020-08-24 Ниппон Синяку Ко., Лтд. Антисмысловые нуклеиновые кислоты
US9840706B2 (en) 2014-06-17 2017-12-12 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Antisense nucleic acids
WO2016070166A2 (en) 2014-11-02 2016-05-06 Arcturus Therapeutics, Inc. Messenger una molecules and uses thereof
MA43072A (fr) 2015-07-22 2018-05-30 Wave Life Sciences Ltd Compositions d'oligonucléotides et procédés associés
CR20180233A (es) 2015-10-09 2018-05-25 Wave Life Sciences Ltd Composiciones oligonucleotídicas y sus métodos
JP2018530560A (ja) * 2015-10-09 2018-10-18 サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド デュシェンヌ型筋ジストロフィーおよび関連障害の処置のための組成物および方法
MA45290A (fr) 2016-05-04 2019-03-13 Wave Life Sciences Ltd Procédés et compositions d'agents biologiquement actifs
MA45270A (fr) 2016-05-04 2017-11-09 Wave Life Sciences Ltd Compositions d'oligonucléotides et procédés associés
BR112019012647A2 (pt) * 2016-12-19 2019-11-19 Sarepta Therapeutics Inc conjugados de oligômero de salto de éxon para distrofia muscular

Also Published As

Publication number Publication date
BR112019012647A2 (pt) 2019-11-19
JP2023156512A (ja) 2023-10-24
MY195801A (en) 2023-02-22
ZA201904092B (en) 2022-01-26
TW201828996A (zh) 2018-08-16
CO2019007397A2 (es) 2019-10-09
ES2927079T3 (es) 2022-11-02
KR102552428B1 (ko) 2023-07-06
CA3046793A1 (en) 2018-06-28
CN110290812A (zh) 2019-09-27
HUE059843T2 (hu) 2023-01-28
PT3554553T (pt) 2022-08-04
KR20230110811A (ko) 2023-07-25
DK3554553T3 (da) 2022-09-19
IL267244B (en) 2021-10-31
US20180177814A1 (en) 2018-06-28
JP2021045160A (ja) 2021-03-25
LT3554553T (lt) 2022-08-25
US20220280546A1 (en) 2022-09-08
KR20190099237A (ko) 2019-08-26
SG10202012839TA (en) 2021-01-28
CN110290812B (zh) 2023-06-02
JP2020503009A (ja) 2020-01-30
US11642364B2 (en) 2023-05-09
PL3554553T3 (pl) 2022-11-07
HRP20220943T1 (hr) 2022-10-28
TWI760402B (zh) 2022-04-11
MX2019006882A (es) 2019-08-16
MD3554553T2 (ro) 2022-10-31
EP3554553A1 (en) 2019-10-23
IL267244A (en) 2019-08-29
NZ755416A (en) 2023-05-26
US20230381216A1 (en) 2023-11-30
IL287047A (en) 2021-12-01
WO2018118599A1 (en) 2018-06-28
EP3554553B1 (en) 2022-07-20
RS63610B1 (sr) 2022-10-31
JP7118063B2 (ja) 2022-08-15
US20210169919A1 (en) 2021-06-10
AU2017382723A1 (en) 2019-08-01
US10888578B2 (en) 2021-01-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA519402154B1 (ar) مترافقات أوليجومرات تخطي الإكسون للحَثَل العَضَلِيّ
SA519402226B1 (ar) مترافقات أوليجومرات تخطي الإكسون للحَثَل العَضَلِيّ
CN109804070B (zh) 具有改进的细胞渗透性的肽核酸复合物和包含其的药物组合物
TWI647235B (zh) 微型ｒｎａ（ｍｉｃｒｏｒｎａ）化合物及調節ｍｉｒ－２１活性之方法
CN103620035B (zh) 用于调节mir-21活性的微rna化合物以及方法
JP2023011614A (ja) 筋萎縮症と筋緊張性ジストロフィーを処置するための組成物および方法
SA515361121B1 (ar) تركيبات تخطي للأكسون خاصة بمعالجة الحَثَل العَضَلِيّ
SA515361125B1 (ar) تركيبــــات تخطي للأكسون خاصة بمعالجة الحثل العضلي
CN109757108A (zh) 具有治疗遗传疾病的改善特征的包含双环支架部分的前体mRNA剪接转换或调节寡核苷酸
CN110337308A (zh) 用于肌肉萎缩症的外显子跳跃寡聚体缀合物
JP2017519766A (ja) イントロン保持の減少
US10183977B2 (en) Stabilized STAT3 decoy oligonucleotides and uses therefor
US10023862B2 (en) Organic compositions to treat beta-catenin-related diseases
TW202300647A (zh) 用於治療多囊腎病之組成物
US20190071675A1 (en) Inhibitors of dek protein and related methods
KR20190093207A (ko) 다낭성 신장 질환의 치료 방법
JP2022513111A (ja) Ａｎｇｐｔｌ８を阻害するための新規のｒｎａ組成物および方法
CN116004623B (zh) 一种靶向沉默LRP1基因表达的shRNA序列、其制备方法和应用
SA521421104B1 (ar) أوليجومرات تجاوز إكسون للحثل العضلي
AU2023210550A1 (en) METHOD FOR REDUCING THE RISK OF A CARDIOVASCULAR EVENT WITH CONJUGATED ANTISENSE COMPOUNDS TARGETING APO(a)
NZ751385A (en) Complement component c5 irna compositions and methods of use thereof